KR100360831B1

KR100360831B1 - 시클로펩티드유도체및이의제조방법

Info

Publication number: KR100360831B1
Application number: KR1019950010234A
Authority: KR
Inventors: 알프레트용시크; 귄터횔제만; 시몬구드만; 호르스트케슬러; 롤란트하우브너; 요헨베르무쓰
Original assignee: 메르크 파텐트 게엠베하
Priority date: 1994-04-30
Filing date: 1995-04-28
Publication date: 2003-01-24
Also published as: DK0683173T3; JP3711154B2; EP0683173A1; UA46699C2; ES2137394T3; AU697614B2; ATE183199T1; CN1161374C; NO311892B1; RU2151776C1; SK55895A3; HU9501253D0; KR950032275A; NO951645D0; US5693612A; HUT75057A; GR3031696T3; AU1772495A; NO951645L; PL181272B1

Abstract

본 발명은 다음 일반식( I )의 새로운 시클로펩티드 및 이의 염을 제공한다.

시클로-(Arg-A-Asp-R¹-R²) ( I )

(단, 상기 식에서,

A는 Gly 또는 Ala이고,

R¹은 2-카르복시-8-아미노-4-티아피페롤리딘-9-온(Btd), o-아미노메틸-o'-카르복시비페닐(Biph), 2-아미노메틸-5-카르복시메틸티오펜(Act) 또는 6-아미노헥산산라디칼(Aha) 또는 2-(1,7-디아자스피로-[4,4]노난-7-일)-4-메틸펜탄산((S,S)스피로-Pro-Leu) 또는 2-(3-아미노-1-피롤리드-2-온일)-4-메틸-펜탄산 라디칼((S)Gly[ANC-2]-Leu 또는 (R)Gly[ANC-2]-Leu 라디칼)이고, 각 경우에 라디칼은 펩티드 결합을 통해 결합되고, 그리고

R²는 존재하지 않거나 있는 경우에는 Val이다.)

본 발명의 화합물은 인테그린 억제제로서 작용하고 순환계 질환의 예방과 치료 및 뼈, 종양 치료에 사용할 수 있으며, 항균성 및 항바이러스성 활성 화합물로서 사용할 수 있다.

Description

시클로펩티드 유도체 및 이의 제조방법

본 발명은 다음 일반식( I )의 신규한 시클로펩티드 및 이의 생리학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.

시클로-(Arg-A-Asp-R¹-R²) ( I )

(상기 식에서,

A는 Gly 또는 Ala이고,

R¹은 2-카르복시-8-아미노-4-티아피페롤리딘-9-온(Btd), o-아미노메틸-o'-카르복시비페닐(Biph), 2-아미노메틸-5-카르복시메틸티오펜(Act) 또는 6-아미노헥산산라디칼(Aha) 또는 2-(1,7-디아자스피로-[4,4]노난-7-일)-4-메틸펜탄산((s,s)스피로-Pro-Leu) 또는 2-(3-아미노-1-피롤리드-2-온일)-4-메틸-펜탄산 라디칼((S)Gly[ANC-2]-Leu 또는 (R)Gly[ANC-2]-Leu)이고, 각 경우에 라디칼은 펩티드 결합을 통해 결합되고, 그리고

R²는 존재하지 않거나 있는 경우에는 Val이다.)

유사한 화합물들은 문헌[Pharmazie, 40 (8), 532-5, (1985)]에 공지되어 있다.

본 발명의 목적은 유용한 특성을 갖는 화합물, 특히, 약물의 제조에 사용할 수 있는 새로운 화합물을 찾아내는데 있다.

본 발명자들은 일반식( I )의 화합물 및 이의 염이 유용한 특성을 가진다는 것을 알게 되었다. 특히, 이들 화합물은 리간드와 β₃- 또는 β₅-인테그린 수용체의 상호 작용을 억제하는 인테그린 억제제로서 작용한다. 이들 화합물은 인테그린 αvβ₁, αvβ₃, αvβ₅, αvβ₆, 및 α_IIbβ₃인 경우에 특히 효과적이다. 이와 같은 작용효과는 예를 들면, 문헌(J. W. Smith 등, J. Biol, Chem, 265, 12267-12271(1990))에 기술된 방법으로 입증할 수 있다. 부가해서, 이러한 화합물은 항-염증 효과도 갖고 있다. 이러한 모든 작용효과는 문헌에 공지되어 있는 방법으로 입증할 수 있다.

본 발명의 화합물은 의약품 및 동물 약품에 있어서 특히 순환계질환, 혈전증, 심근경색증, 동맥경화증, 염증, 졸중, 협심증, 종양질환, 용골성 질환, 특히 골다공증, 혈관 성형수술 후의 혈관형성증 및 재발협착증의 예방과 치료를 위한 약제학적 활성 화합물로서 사용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 상처의 치유를 촉진시키는데에도 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물은 예를 들면 세균, 진균, 효모균 또는 바이러스등에 의한 감염을 방지하는 항균성 선 항바이러스성 활성 화합물로서도 적합하다. 따라서, 상기 물질은 생합성물질, 이식물, 카테터 또는 인공심박 조율기 등과 같은 외인성물질을 유기체에 사용할 경우에, 병용하는 항균성 활성화합물로 바람직하게 사용된다. 따라서, 상기 물질은 방부제로서도 작용한다.

상기 및 하기에서 언급한 아미노산 라디칼의 약어는 다음과 같은 아미노산 라디칼을 의미한다.

또한 하기한 약어는 다음과 같은 의미를 갖는다:

만약 상기한 아미노산이 몇개의 거울상 이성질체 형태로 존재할 경우, 상기및 하기에서 기술한 이들 모든 형태와 이의 혼합물(예를 들어, DL형)이 예를 들어, 일반식( I )의 화합물의 성분으로 포함된다. 또한, 아미노산에 예를 들어, 일반식( I )의 화합물의 성분으로서, 공지된 그 자체의 적합한 보호기를 제공할 수 있다.

또한, 본 발명은 특허청구의범위 제 1항에 따른 일반식( I )의 화합물 또는 이의 염중의 하나를 제조하는 방법에 있어서, 가용매분해제 또는 가수소분해제로 처리하여 이의 작용성 유도체중의 하나로부터 유리시키거나, 또는 하기 일반식(II)의 펩티드 또는 이러한 펩티드의 반응성 유도체를 환화제로 처리하거나,

(상기 식에서,

Z는

이다) 및/또는 일반식( I )의 염기성 또는 산성 화합물을 산 또는 염기로 처리함으로써 이의 염중의 하나로 전환시키는 것을 특징으로 하는 제조방법에 관한 것이다.

상기 및 하기한 라디칼 A, R¹, R²및 Z는 달리 언급되지 않는한 상기 일반식( I ) 및 (II)에서 정의한 바와 같다.

라디칼 (S,S)스피로-Pro-Leu는 2-(1,7-디아자스피로[4,4]-6-옥소노난-7-일)-4-메틸펜탄산 라디칼이고, 다음 구조식을 갖는다:

한편, 라디칼 (S)Gly[ANC-2]-Leu 또는 (R)Gly[ANC-2]-Leu는 3(S)- 또는 3(R)-2-(3-아미노-1-피롤리드-2-온일)-4-메틸펜탄산 라디칼이고, 다음 구조식을 갖는다:

Biph는 o-아미노메틸비페닐-o'-카르복실산 라디칼이고, Biph 1 및 Biph 2는 가능한 아트로프이성질체이다.

라디칼 R¹에 대해서도 라디칼 R²에서와 같이, 상기에서 주어진 모든 정의가 똑같이 바람직하다. 따라서 본 발명은 동등하게 환형 펜타펩티드 뿐만 아니라 테트라펩티드에 관한 것이다.

A는 Gly가 바람직하지만, Ala, 특히 DAla도 바람직하다. 또한, 일반식( I )의 화합물 및 이를 제조하기 위한 출발물질은 문헌[예를 들어, Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie (Methods of Org. Chem.), Georg-Thieme-Verlag,Stuttgart와 같은 표준작업서]에 기술된 바와 같은 공지된 방법을 사용하여 특히 상기 반응에 적합하고, 공지되어 있는 반응 조건하에서 제조된다. 또한, 이 문헌에 좀더 상세히 기술되지 않았으나, 공지된 변형방법을 사용할 수도 있다.

펩티드 성분, (R)- 및 (S)-형 Gly[ANC-2]-Leu는 문헌[J. Org Chem, 47, 104(1982)]에 기술된 알. 엠 프레이딩거씨 등의 방법으로 제조될 수 있다. 성분 스피로-Pro-Leu는 예를 들면 문헌[P. Ward et al., J. Med. Chem. 33, 1848 ff. (1990)]에 기술된 방법과 유사하게 제조될 수 있으며, 한편으로, Btd의 합성은 문헌[U. Nagai et al., Tetrahedron 49, 3577-3592(1993)]에 기술된 방법으로 제조될 수 있다.

또한, 출발물질은 요망될 경우에는, 반응 혼합물에서 분리하지 않고, 즉시 계속 반응시켜 일반식( I )의 화합물이 생성되도록 동일반응계에서 형성시킬 수도 있다.

일반식( I )의 화합물은 가용매분해, 특히 가수분해, 또는 가수소분해에 의해 이의 작용성 유도체로부터 유리시켜 얻을 수 있다.

가용매분해 또는 가수소분해를 실시하기에 적합한 출발물질로는 하나 이상의 유리 아미노 및/또는 히드록시기 대신에 적당히 보호된 아미노 및/또는 히드록시기를 함유하는 것이고, N원자에 결합된 수소원자 대신에 아미노보호기를 함유하는 출발물질, 예를 들어 일반식( I )에 상응하지만, NH₂기 대신에 NHR'기(여기서, R'는 아미노 보호기, 예를 들어 BOC또는 CBZ이다)를 함유하는 출발물질이 바람직하다.

또한, 히드록시기의 수소원자 대신에 히드록시 보호기를 함유하는 출발물질, 예를 들어, 일반식( I )에 상응하되, 히드록시페닐기 대신에 R"O-페닐기(여기서 R"는 히드록시 보호기이다)를 함유하는 출발물질이 바람직하다.

출발물질의 분자내에는 동일하거나 상이한 여러개의 보호 아미노 및/또는 히드록시기가 존재할 수 있다. 존재하는 보호기가 서로 상이할 경우에는 대부분 이들 보호기는 선택적으로 제거될 수 있다.

"아미노 보호기"란 일반적으로 공지되어 있고, 화학 반응에서 아미노기를 보호(차단)하는데 적합하나, 목적하는 화학반응이 분자내 다른 위치에서 수행된 후에는 용이하게 제거될 수 있는 기를 말한다. 이러한 형태의 대표적인 보호기로는, 특히 비치환되거나 치환된 아실, 아릴, 아르알콕시메틸 또는 아르알킬기를 들 수 있다. 아미노보호기는 목적하는 반응(또는 일련 반응)이 진행된 후에 제거되기 때문에, 보호기 특성 및 크기는 그다지 중요하지 않지만, 탄소수 1 내지 20, 특히 1 내지 8을 갖는 것이 바람직하다. "아실기"란 본 발명의 방법과 관련하여 넓은 의미로 이해되어져야 한다. 이러한 아실기로는 지방족, 방향성 지방족, 방향족 또는 헤테로시클릭 카르복실산 또는 술폰산으로부터 유도된 아실기를 포함하고, 특히 알콕시카르보닐, 아릴옥시카르보닐기를 포함하며, 더욱이 아르알콕시카르보닐기를 포함한다. 이러한 형태의 아실기로는 아세틸, 프로피오닐 또는 부티릴과 같은 알칸오일; 페닐아세틸과 같은 아르알칸오일; 벤조일 또는 톨루일과 같은 아로일; POA와 같은 아릴옥시알칸오일, 메톡시카르보닐, 에톡시카르보닐, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐, BOC, 2-요오도에톡시카르보닐과 같은 알콕시카르보닐; CBZ("카르보벤족시"),4-메톡시벤질옥시카르보닐, FMOC와 같은 아르알킬옥시카르보닐; 및 Mtr과 같은 아릴술포닐을 들 수 있다. 바람직한 아미노 보호기로는 BOC 및 Mtr이고, 또한 CBZ, FMOC, 벤질 및 아세틸이 있다.

"히드록시 보호기"란 일반적으로 공지되어 있으며, 화학반응에서 히드록시기를 보호하는데 적합하나, 목적하는 화학반응이 분자내의 다른 위치에서 수행된 후에는 용이하게 제거될 수 있는 기를 말한다. 이러한 형태의 대표적인 보호기로는 상기한 비치환되거나 치환된 아릴, 아르알킬 또는 아실기를 들 수 있고, 또한 알킬기를 들 수 있다. 히드록시 보호기는 목적하는 화학반응 또는 일련 반응이 진행된 후에 제거되기 때문에, 보호기의 특성 및 크기는 그다지 중요하지 않지만, 탄소수 1 내지 20, 특히 1 내지 10을 갖는 것이 바람직하다. 히드록시 보호기의 예로는, 벤질, p-니트로벤조일, p-톨루엔술포닐, t-부틸 및 아세틸이 그중 바람직하고, 벤질 및 t-부틸이 특히 바람직하다. 아스파르트산 및 글루탐산중의 COOH기는 이의 t-부틸 에스테르(예를 들어, Asp(OBut))의 형태로 보호하는 것이 바람직하다.

출발물질로 사용되는 일반식( I )의 화합물의 작용성 유도체는 예를 들어, 상기한 표준작업서 및 특허출원에 기술된 바와 같은 아미노산 및 펩티드 합성의 통상적인 방법에 의해 제조할 수 있고, 또한 예를 들어 메리필드 고상법(참조, B. F. Gysin and R. B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 94, 3102 이하(1972))에 의해 제조할 수도 있다. 문헌[A. Jonczyk and J. Meienhofer, Peptides, Proc. 8th Am. Pept Symp. 73-77(1983)(Eds. V. J. Hruby and D. H. Rich), Pierce Co., Rockford]에 기술된 유동 반응기내에서의 FMOC 방법에 의한 합성이 특히 유익하다.

일반식( I )의 화합물을 이의 작용성 유도체로부터 유리시키는 방법은 사용된 보호기에 따라, 예를 들면, 바람직하기는 TFA 또는 과염소산과 같은 강산을 사용하여, 수행하거나, 또한 염산 또는 황산과 같은 다른 강무기산 또는 트리클로로아세트산과 같은 강 유기 카르복실산 또는 벤젠- 또는 p-톨루엔술폰산과 같은 술폰산을 사용하여 수행한다. 추가로, 불활성 용매가 상기 반응에 존재하게 할 수 있지만, 반드시 필요한 것만은 아니다. 적합한 불활성 용매로는 유기용매가 바람직한데 예를 들어, 아세트산과 같은 카르복실산, 테트라히드로푸란 또는 디옥산과 같은 에테르, DMF와 같은 아미드, 디클로로메탄과 같은 할로겐화 탄화수소를 들 수 있고, 또한 메탄올, 에탄올 또는 이소프로판올과 같은 알코올 및 물을 들 수 있다.

또한, 상기한 용매의 혼합용매를 사용하는 것도 적합하다. TFA는 다른 용매를 첨가하지 않고 과량으로 사용하는 것이 바람직하며, 과염소산은 아세트산과 70% 과염소산 9:1 비율의 혼합용매 형태로 사용하는 것이 바람직하다. 분해를 위한 반응온도는 약 0 내지 약 50℃이고, 바람직하게는 15 내지 30℃(실온)이다.

BOC, OBut 및 Mtr기는 예를 들어, 바람직하기는 디클로로메탄중 TFA를 사용하여 제거할 수 있거나 디옥산 중 약 3 내지 5N HCl을 15 내지 30℃에서 사용하여 제거할 수 있고, FMOC기는 DMF중 디메틸아민, 디에틸아민 또는 피페리딘과 같은 이차 아민 약 5 내지 50%용액을 15 내지 30℃에서 사용하여 제거할 수 있다.

가수소분해에 의해 제거할 수 있는 보호기(예를 들어, CBZ 또는 벤질기)는 예를 들어, 촉매(예를 들어, 팔라듐, 바람직하게는 카본과 같은 담체상에 담지된 팔라듐과 같은 귀금속 촉매)존재하에 수소로 처리함으로써 제거할 수 있다. 이 경우, 적합한 용매로는 상기한 용매, 특히 메탄올 또는 에탄올과 같은 알코올, 또는 DMF와 같은 아미드를 예로 들 수 있다. 일반적으로, 가수소분해는 약 0 내지 100℃의 온도 및 약 1 내지 200바아의 압력, 바람직하게는 20 내지 30℃온도 및 1 내지 10바아의 압력에서 수행한다. CBZ기의 가수소분해는 예를 들어 메타올중 5 내지 10%의 Pd-C상에서 또는 메탄올/DMF중 Pd-C상에서 포름산암모늄(H₂대신에 사용함)을 20 내지 30℃에서 사용하여 용이하게 수행한다.

또한, 일반식( I )의 화합물은 펩티드 합성 조건하에서 일반식(II)의 화합물의 환화에 의해 얻을 수 있다. 이 경우, 상기 반응은 문헌[Houben-weyl, loc cit volume 15/II, 1 내지 806면(1974)]에 기술된 바와 같은 펩티드 합성의 통상적인 방법에 의해 수행하는 것이 바람직하다.

반응은 탈수제[예를 들어, DCCI 또는 EDCI와 같은 카르보디이미드, 또한 프로판포스폰산무수물(참조, Angew. Chem. 92, 129(1980)), 디페닐포스포릴아지드 또는 2-에톡시-N-에톡시카르보닐-1,2-디히드로퀴놀린]존재하에, 불활성 용매[예를 들어, 디클로로메탄과 같은 할로겐화탈화수소, 테트라히드로푸란 또는 디옥산과 같은 에테르, DMF 또는 디메틸아세트아미드와 같은 아미드, 아세토니트릴과 같은 니트릴], 또는 이들 용매의 혼합용매하에, 약 -10 내지 40℃, 바람직하게는 0 내지 30℃의 온도에서 수행하는 것이 바람직하다. 분자간 펩티드 결합전에 분자내 환화를 촉진하기 위해서는 희석된 용액중에서 실시하는 것이 바람직하다(희석 원리).

또한, 화합물(II) 대신에 이들 물질의 적합한 반응성 유도체, 예를 들어, 반응성기가 보호기에 의해 중간체적으로 보호된 유도체를 반응에 사용할 수도 있다. 아미노산 유도체(II)는 예를 들어, HOBt 또는 N-히드록시숙신이미드의 부가에 의해 동일 반응계 내에서 바람직하게 형성되는 이들의 활성 에스테르의 형태로 사용할 수 있다.

일반적으로, 일반식(II)의 출발물질은 신규하다. 이들 출발물질은 공지된 방법, 예를 들어, 상기한 펩티드 합성방법 및 보호기의 제거방법에 의해 제조할 수 있다.

일반적으로, 일반식 R'-Z-OR"(예를 들어, BOC-Z-OMe 또는 BOC-Z-OEt)의 보호 펜타펩티드 에스테르를 우선 합성하고, 일차 가수분해에 의해 일반식 R'-Z-OH(예를 들어, BOC-Z-OH)의 산을 얻은 후, 보호기 R'를 제거함으로써 일반식 H-Z-OH(II)의 유리 펩티드를 얻는다.

일반식( I )의 염기는 산을 사용하여 적당한 산 부가염으로 전환시킬 수 있다. 상기 반응을 위한 적합한 산은, 특히 생리학적으로 허용되는 염을 생성하는 산이다. 따라서, 사용할 수 있는 무기산으로는, 황산; 질산; 염산 또는 브롬화수소산과 같은 할로겐화수소산, 또는 오르토인산과 같은 인산; 및 술팜산을 들 수 있고, 또한 유기산, 특히 지방족, 지환족, 방향성지방족, 방향족 또는 헤테로시클릭 단일- 또는 다염기성 카르복실산, 술폰산 또는 황산, 예를 들어, 포름산, 아세트산, 프로피온산, 피발산, 디에틸아세트산, 말론산, 숙신산, 피멜산, 푸마르산, 말레산, 락트산, 타르타르산, 말산, 벤조산, 살리실산, 2- 또는 3-페닐프로피온산, 시트르산, 글루콘산, 아스코르브산, 니코틴산, 이소니코틴산, 메탄- 또는 에탄술폰산, 에탄디술폰산, 2-히드록시에탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산, 나프탈렌-모노- 및 -디술폰산, 및 라우릴황산을 들 수 있다. 생리학적으로 허용되지 않는 산과의 염(예를 들어, 피크릴산 염)은 일반식( I )의 화합물을 분리 및/또는 정제를 위해 사용할 수 있다.

반면에, 일반식( I )의 산은 염기와의 반응에 의해 생리학적으로 허용되는 금속 또는 암모늄염중의 하나로 전환시킬 수 있다. 상기한 반응에 사용하는 적합한 염으로는, 특히 나트륨염, 칼륨염, 마그네슘염, 칼슘염 및 암모늄염, 또한 치환된 암모늄염[예를 들어, 디메틸-, 디에틸- 또는 디이소프로필암모늄염, 모노에탄올-, 디에탄올- 또는 트리에탄올암모늄염, 시클로헥실- 또는 디시클로헥실암모늄염, 디벤질에틸렌디암모늄염, 또한 N-메틸-D-글루카민과의 염 또는 아르기닌 또는 리신과의 염을 예로 들 수 있다.

일반식( I )의 새로운 화합물 및 이의 생리학적으로 허용되는 염은 1종 이상의 부형제 또는 보조제와 함께, 필요시 1종 이상의 다른 활성 화합물(들)과 함께 적합한 투여 형태로 전환시킴으로써 약제학적 제형의 제조에 사용할 수 있다. 따라서, 수득된 제형은 인간 또는 동물의 약물로서 사용할 수 있다. 적합한 부형제 물질로는 장내(예를 들어, 경구 또는 직장 투여), 비경구적(예를 들어, 정맥주사) 또는 국부(예를 들어, 국소, 피부, 눈 또는 코)투여 또는 흡입식 분무형태로 투여하기에 적합하고 새로운 화합물과 반응하지 않는 유기 또는 무기물질인데, 예를 들어 물 또는 수성 등장성 염수용액, 저급 알코올, 식물성유, 벤질 알코올, 폴리에틸렌글리콜, 글리세롤트리아세테이트 및 다른 지방산 글리세리드, 젤라틴, 소야 레시틴, 락토오스 또는 전분과 같은 탄수화물, 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 셀룰로오스 및 와셀린을 들 수 있다. 경구 투여에는 특히 정제, 제피정, 캅셀제, 시럽제, 액제 또는 드롭제가 사용되고; 막 정제 및 위액 저항 제피물 또는 캅셀 외피를 갖는 캅셀제가 특히 유익하다. 좌제는 직장 투여에 사용되고, 비경구투여에는 액제, 바람직하게는 유성 또는 수성용액, 그리고 이외에 현탁액, 에멀젼 또는 이식제가 사용된다. 액제는 예를 들어, 점안제의 형태로 사용할 수 있고, 이외에, 현탁액, 에멀젼, 유제, 연고제 또는 정제는 국소 투여용으로 적합하다. 흡입식 분무제로서 투여하기 위해서는 추진제 가스 또는 추진제 가스 혼합물(예를 들어, CO₂또는 클로로플루오로탄화수소)중에 용해 또는 현탁된 활성화합물을 함유하는 분무제를 사용할 수 있다. 여기에서 활성 화합물은 미세분말 형태로 사용하는 것이 바람직하며, 1종이상의 생리학적으로 허용되는 용매, 예를 들어 에탄올을 추가로 함유시킬 수 있다. 흡입식 액제는 통상적인 흡입기를 이용하여 투여할 수 있다. 또한, 본 발명의 새로운 화합물은 동결 건조할 수도 있으며, 얻어진 동결 건조물은 예를 들어 주사용 제제의 제조에 사용할 수 있다. 상기 주사용 제제는 순간주입 또는 점적주입(예를 들어, 정맥내, 근육내, 피하 또는 척추강내)로서 투여할 수 있다. 상기한 제제는 멸균되거나 및/또는 보존제, 안정제 및/또는 습윤제, 에멀젼제, 삼투압에 영향을 주는 염, 완충물질, 착색제 및/또는 향미제와 같은 보조제를 함유할 수 있다. 필요시, 이들 제제는 1종이상의 다른 활성 화합물, 예를 들어 1종이상의 비타민을 함유할 수도 있다.

본 발명에 따른 물질은 일반적으로 다른 공지된 시판 펩티드와 유사하게 투여할 수 있지만, 특히 미합중국 특허 US-A-4,472,305에 기술된 화합물과 유사하게, 바람직하게는 투여용량 단위당 약 0.05 내지 500mg, 특히 0.5 내지 100mg으로 투여할 수 있다. 1일 투여량은 바람직하기는 약 0.01 내지 2mg/kg체중이다. 그러나 각 의도된 환자에 대한 특정 투여량은 다양한 요인, 예를 들면 사용된 특정 화합물의 활성, 나이, 체중, 일반적인 건강상태, 성별, 식이요법, 투여시간 및 경로 및 배설률, 약물병용 및 치료할 질병의 심각도에 따라 달라진다. 비경구 투여가 바람직하다.

또한, 일반식( I )의 새로운 화합물은, 순수한 형태의 인테그린을 제조하기 위한 친화 크로마토그래피용 칼럼의 제조시 인테그린 배위자로서 사용할 수 있다.

배위자, 즉 일반식( I )의 펩티드 유도체는 이 경우에 앵커 작용기를 통해 중합체 지지체에 공유적으로 커플링된다.

적합한 중합체 지지 물질은 펩티드 화학분야에서 공지되어 있는 바람직하게는 친수성 성질을 갖는, 중합체 고체상으로, 예를 들면 셀룰로오스, 세파로스 또는 세파덱스와 같은 가교결합된 다당류, 아크릴아미드, 폴리에틸렌글리콜계 중합체 또는 텐타켈 중합체^(R)가 있다.

중합체 지지체에 결합되는 적합한 앵커 작용기는, 한쪽 말단이 중합체에 직접 결합되고, 다른쪽 말단이 예를 들어 히드록시, 아미노, 메르캅토, 말레이미도 또는 -COOH와 같은 작용기를 가지며, 각 펩티드의 작용성 측쇄에 결합되기에 적합한 탄소수가 2-12인 선형 알킬렌쇄가 바람직하다.

이 경우에, 펩티드는 중합체의 앵커에 직접 결합하거나 또는 제 2 앵커 작용기를 경유하여 결합하는 것도 가능하다.

더욱이, 일반식( I )의 펩티드의 성분인 어떤 아미노산 라디칼은, 예를 들면 SH, OH, NH₂또는 COOH기를 경유하여 중합체의 앵커와 결합할 수 있도록 이들의 측쇄에서 변형시킬 수 있다.

측쇄가 앵커 작용기로서 직접 사용될 수 있는 아미노산 라디칼의 예로는 Arg 또는 Asp를 들 수 있다.

유리 NH₂기를 경유해서 결합될 수 있는 앵커의 예로는

-CO-C_nH_2n-NH₂, -CO-C_nH_2n-OH, -CO-C_nH_2n-SH 또는 -CO-C_nH_2n-COOH와 같은 라디칼이고, 여기서 n은 2∼12이고, 알킬렌 쇄의 길이는 그다지 중요하지는 않고, 이들 쇄는 예를 들어 적합한 아릴 또는 알킬아릴 라디칼로 치환될 수도 있다.

유리산기에 결합될 수 있는 C-말단 앵커로는, -O-C_nH_2n-SH, -O-C_nH_2n-OH, -O-C_nH_2n-NH₂, -O-C_nH_2n-COOH, -NH-C_nH_2n-SH, -NH-C_nH_2n-OH, -NH-C_nH_2n-NH₂또는 -NH-C_nH₂n-COOH을 들 수 있고, 여기서 n 및 알킬렌 쇄는 상기에서 이미 언급된 바와 같다.

인테그린을 정제하는데 사용되는 친화성 크로마토그라피용 재료는 아미노산의 축합에 통상적이고 그 자체로 공지되어 있으며 일반식( I )의 화합물의 제조에 관련된 부분에서 이미 언급된 조건하에 제조된다.

티올 함유 앵커인 경우에는, 말레이미드 유도체에 대한 마이클 첨가 또는 중합체에 결합된 티올과의 디술피드 형성과 같은 첨가 반응이 이용된다.

상기 및 하기에서 온도는 모두 ℃로 나타낸다. 다음 실시예에서, "통상의 반응마무리"란 물을 첨가하고, 만약 필요하다면, 혼합물을 중화시키고, 에테르 또는 디클로로메탄으로 추출하고, 유기층을 분리하고, 황산나트륨상에서 건조시키고, 여과 및 증발시키며, 잔류물은 실리카겔상에서의 크로마토그래피 및/또는 결정화에 의해 정제하는 것을 뜻한다. RT는 시스템 A[리크로소르브^(R)RP 셀렉트 B(250×4; 5㎛]) 또는 시스템 B [리크로소르브^(R)RP 18(250×4; 5㎛]상에서의 HPLC에 대한 체류시간(분)이며; 여기에서, 시스템 A의 경우, 용리액으로, 0.3% TFA 수용액; 0∼80 체적%의 이소프로판올 그래디언트를 사용하여 유속 1mℓ/분으로 50분 및 215nm에서 검출한다. 또한, 시스템 B의 경우, 용리액 A: 0.1% TFA 수용액, 용리액 B: 아세토니트릴/물(9:1)중의 0.1%, TFA; 20∼90 체적%의 용리액 B의 그래디언트를 사용하여 유속 1mℓ/분으로 50분간 실시한다. M⁺는 질량 스펙트럼의 분자 피크로서 고속원자 충격법(FAB)으로 측정되고, 표시된 분자량은 계산치와 비교하여 1질량 단위가 증가된 것으로 표시된다.

실시예 1

0.42의 H-Arg(Mtr)-Gly-Asp-Btd-ONa(예를 들면, -O-Wang은 개선된 메리필드 기법에 사용되는 4-옥시메틸페녹시메틸 폴리스티렌 수지의 라디칼로서, FMOC-Arg(Mtr)-Gly-Asp-Btd-O-Wang에서 피페리딘/DMF로 FMOC기의 제거 및TFA/CH₂CH₂(1:1)로 수지의 제거에 의해 얻을 수 있다.)을 DMF 15mℓ중에 용해시킨 용액을 디클로로메탄 85mℓ로 회석하고 NaHCO₃50mg으로 처리하였다. 드라이아이스/아세톤 혼합물 중에서 냉각한 후에, 디페닐포스포릴아지드 40㎕를 첨가하였다. 실온에서 16시간 방치한 후에, 용액을 농축시켰다. 이 농축물을 여과시키고(세파덱스 G10 컬럼, 이소프로판올/물 8:2), 이어서 HPLC에 의한 통상의 방법으로 정제하여 시클로-(Arg-(Mtr)-Gly- Asp-Btd)을 얻었다.

다음 화합물은 상응하는 선형 펩티드의 환화에 의해 유사하게 얻었다:

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(S)Gly[ANC-2]-Leu);

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(R)Gly[ANC-2]-Leu);

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(S,S)스피로Pro-Leu);

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Biph1);

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Biph2);

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Act);

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Btd-Val);

시클로-(Arg(Mtr)-DAla-Asp-Btd-Val);

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Aha);

시클로-(Arg(Mtr)-DAla-Asp-Btd);

시클로-(Arg(Mtr)-DAla-Asp-(S)Gly[ANC-2]-Leu);

시클로-(Arg(Mtr)-DAla-Asp-(R)Gly[ANC-2]-Leu);

시클로-(Arg(Mtr)-DAla-Asp-(S,S)스피로Pro-Leu);

시클로-(Arg(Mtr)-DAla-Asp-Biph1);

시클로-(Arg(Mtr)-DAla-Asp-Biph2);

시클로-(Arg(Mtr)-DAla-Asp-Act);

실시예 2

0.28g의 시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Btd)[실시예 1에 따라 환화에 의해 얻어진다]를 TFA 8.4mℓ, 디클로로메탄 1.7mℓ 및 티오페놀 0.9mℓ중에 용해시킨 용액을 실온에서 4시간 방치한 다음 농축시키고 물로 희석한 후, 냉동 건조하였다. 세파덱스 G10(아세트산/물 1:1)상에서 겔 여과 및 상기한 조건하에서 예비 HPLC로 후속 정제하여 시클로-(Arg-Gly-Asp-Btd); RT=13.2; M⁺527을 얻었다.

다음 화합물도 유사한 방법으로 수득하였다.

시클로-(Ars(Mtr)-Gly-Asp-(S)Gly[ANC-2]-Leu)로부터

시클로-(Arg-Gly-Asp-(S)Gly[ANC-2]-Leu); RT=4.8; M⁺525를;

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(R)Gly[ANC-2]-Leu)로부터

시클로-(Arg-Gly-Asp-(R)Gly[ANC-2]-Leu); RT=6.3; M⁺525를;

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-(S,S)스피로Pro-Leu)로부터

시클로-(Arg-Gly-Asp-(S,S)스피로Pro-Leu); RT=14.6; M⁺565를;

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Biph1)로부터

시클로-(Arg-Gly-Asp-Biph1); RT=20.7; M⁺538을;

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Biph2)로부터

시클로-(Arg-Gly-Asp-Biph2); RT=20.8; M⁺538을;

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Act)로부터

시클로-(Arg-Gly-Asp-Act); RT=14.3; M⁺547을;

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Btd-Val)로부터

시클로-(Arg-Gly-Asp-Btd-Val)을;

시클로-(Arg(Mtr)-DAla-Asp-Btd-Val)로부터

시클로-(Arg-DAla-Asp-Btd-Val)을;

시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Aha)로부터

시클로-(Arg-Gly-Asp-Aha)을 각각 수득하였다.

실시예 3

80mg의 시클로-(Arg-Gly-Asp-Btd)을 0.01M 염산으로 5 내지 6회 용해시키고 각 용해공정 후에 냉동 건조시켰다. HPLC에 의한 후속 정제를 실시하여 시클로-(Arg-Gly-Asp-Btd) xHCl을 얻었다.

다음 화합물도 유사한 방법으로 수득하였다.

시클로-(Arg-Gly-Asp-Aha)로부터

시클로-(Arg-Gly-Asp-Aha)xHCl을;

시클로-(Arg-Gly-Asp-Btd-Val)로부터

시클로-(Arg-Gly-Asp-Btd-Val)xHCl을;

시클로-(Arg-Gly-Asp-Btd-Val)로부터

시클로-(Arg-DAla-Asp-Btd-V2l)xHCl을;

시클로-(Arg-DAla-Asp-Btd-Val)로부터 아세트산의 처리에 의해

시클로-(Arg-DAla-Asp-Btd-Val)xH₃C-COOH를;

시클로-(Arg-Gly-Asp-Aha)로부터 0.01N 질산의 처리에 의해

시클로-(Arg-Gly-Asp-Aha)xHNO₃를 각각 수득하였다.

실시예 4

친화상을 제조하기 위해, Cl-(CH₂)₃-CO-NH-(CH₂)₃중합체[H₂N-(CH₂)₃중합체와 Cl-(CH₂)₃-COOH의 축합에 의해 수득할 수 있음] 0.9g을 0.1M인산나트륨 완충액(pH7) 10mℓ중에 현탁시키고 시클로-(Arg(Mtr)-Gly-Asp(ONa)- Btd 1당량을 4℃에서 부가하였다. 반응혼합물은 실온으로 동시 가열하면서 4시간 교반시키고, 고체 잔사를 여과시키고 매회 완충용액(pH 7) 10mℓ로 2회 세척하고 이어서 매회 물 10mℓ로 3회 세척하여 시클로-(Arg(Mtr)- Gly-Asp(O(CH₂)₃-CONH-(CH₂)₃-중합체)-Btd)을 얻었다.

실시예 5

실시 예 2와 유사하게, 시클로(Arg(Mtr)-Gly-Asp(-O-(CH₂)₃-CONH-(CH₂)₃-중합체)-Btd)로부터 출발하여 Mtr기를 제거하여 시클로-(Arg-Gly-Asp-(O- (CH₂)₃-CONH-(CH₂)₃-중합체)-Btd)를 얻었다.

실시예 6

실시예 4에 유사하게, 중합체-O(CH₂)₃-NH₂[상업적으로 공급됨)와 시클로-(Arg-Gly-Asp-Biph1)의 축합에 의해 시클로-(Arg-Gly-Asp-(NH-(CH₂)₃-O-중합체)-Biph1)의 중합체상을 얻었다.

또한, 시클로-(Arg-Gly-Asp-Btd-Val)과 H₂N(CH₂)₃-O-중합체의 축합에 의해 시클로-(Arg-Gly-Asp(NH-(CH₂)₃-O-중합체)-Btd-Val)을 유사하게 얻었다.

다음의 실시예는 약제학적 제형에 관한 것이다.

실시예 A : 주사용 바이알

일반식( I )의 시클로펩티드 100g 및 제 2인산나트륨 5g을 이차 증류수 3ℓ중에 용해시킨 용액을 2N 염산을 사용하여 pH 6.5로 조절하고, 멸균 여과하며, 주사약 바이알에 충전하고 멸균 조건하에 동결 건조하며, 바이알을 멸균 방법으로 밀봉하였다. 각 주사용 바이알은 활성 화합물 5mg을 함유한다.

실시예 B: 좌제

일반식( I )의 활성 화합물 20g을 소야 레시틴 100g 및 코코아 버터 1400g로 용융시킨 혼합물을 몰드에 붓고 냉각시켰다. 각 좌제는 활성 화합물 20mg을 함유한다.

실시예 C: 액제

일반식( I )의 활성 화합물 1g, NaH₂PO₄x2H₂O 9.38g, Na₂HPO₄x12H₂O 28.48g 및 벤즈알코늄클로라이드 0.1g의 용액을 이차 증류수 940mℓ로 제조하였다. 이 용액을 pH 6.8로 조절하고, 1ℓ로 채우고 조사에 의해 멸균하였다. 이 용액은 점안제의 형태로 사용될 수 있다.

실시예 D: 연고제

일반식( I )의 활성 화합물 500mg을 무균 조건하에 와셀린 99.5g와 혼합하여 연고제를 제조한다.

실시예 E: 정제

일반식( I )의 시클로펩티드 100g, 락토오스 1kg, 미세결정 셀룰로오스 600g, 옥수수 전분 600g, 폴리비닐피롤리돈 100g, 탈크 80g 및 스테아르산마그네슘 10g의 혼합물을 각 정제가 활성 화합물 10mg을 함유하도록 통상의 방법으로 압착하여 정제를 제조한다.

실시예 F: 제피정

실시예 E에 기술된 것과 같이 정제를 압착하고, 이어서 슈크로오스, 옥수수 전분, 탈크, 트라가간트 및 착색제로 이루어진 제피물을 사용하여 통상의 방법으로 제피한다.

실시예 G: 캅셀제

경질 젤라틴 캅셀에 일반식( I )의 활성 화합을 통상의 방법으로 충전한다. 각 캡슐은 활성 화합물 5mg을 함유한다.

실시예 H: 흡입 분무제

일반식( I )의 활성 화합물 14g을 등장성 NaCl 용액 10ℓ중에 용해시키고 이 용액을 펌프장치를 가진 상업적으로 공급되는 분무제 용기에 충전한다. 이 용액은 입 또는 코로 분무할 수 있다. 1회 분무량(약 0.1㎖)은 약 0.14mg의 용량에 상당한다.

Claims

일반식( I )의 시클로펩티드 및 이의 생리학적으로 허용되는 염:

시클로-(Arg-A-Asp-R¹-R²) ( I )

(단, 상기 식에서

A는 Gly 또는 Ala이고,

R¹은 2-카르복시-8-아미노-4-티아피페롤리딘-9-온(Btd) , o-아미노메틸-o'-카르복시비페닐(Biph), 2-아미노메틸-5-카르복시메틸-티오펜(Act) 또는 6-아미노헥산 산 라디칼(Aha) 또는 2-(1,7-디아자스피로-[4,4]노난-7-일)-4-메틸펜탄산((S,S)스피로-Pro-Leu) 또는 2-(3-아미노-1-피롤리드-2-온일)-4-메틸-펜탄산 라디칼 (S)Gly[ANC-2]-Leu 또는 (R)Gly[ANC-2]-Leu 라디칼이고, 각 경우에 라디칼은 펩티드 결합을 통해 결합되고, 그리고

R²는 존재하지 않거나 있는 경우에는 Val이다.)
제 1항에 있어서, 일반식( I )의 화합물이 하기 (a)∼(h)중의 어느 하나인 것을 특징으로 하는 시클로 펩티드 및 이의 생리학적으로 허용되는 염.

(a) 시클로-(Arg-Gly-Asp-(S)Gly[ANC-2]-Leu);

(b) 시클로-(Arg-Gly-Asp)-(R)Gly[ANC-2]-Leu);

(c) 시클로-(Arg-Gly-Asp-(S,S)스피로-Pro-Leu);

(d) 시클로-(Arg-Gly-Asp-Act);

(e) 시클로-(Arg-Gly-Asp-Btd);

(f) 시클로-(Arg-Gly-Asp-Aha);

(g) 시클로-(Arg-Gly-Asp-Btd-Val);

(h) 시클로-(Arg-DAla-Asp-Btd-Val).
제 1항에 따른 일반식( I )의 화합물의 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
제 1항에 따른 일반식( I )의 화합물 또는 이의 염중 하나를 제조하는 방법에 있어서, 이의 작용성 유도체중 하나로부터 가용매분해제 또는 가수소분해제로 처리하여 유리시키거나, 또는 하기 일반식(II)의 펩티드 또는 이러한 펩티드의 반응성 유도체를 환화제로 처리하거나 및/또는 일반식( I )의 염기성 또는 산성 화합물을 산 또는 염기로 처리함으로써 이의 염중의 하나로 전환시키는 것을 특징으로 하는 제조방법.

(단, 상기 식에서,
제 1항에 따른 일반식( I )의 화합물 및/또는 이의 생리학적으로 허용되는 염중의 하나를 1종이상의 고체, 액체 또는 반고체 부형제 또는 보조제와 함께 적합한 투여형태로 전환시킴을 특징으로 하는 약제학적 제형의 제조방법.
제 1항에 따른 일반식( I )의 화합물 1종이상 및/또는 이의 생리학적으로 허용되는 염중의 하나를 함유하는 것을 특징으로 하는 약제학적 제형.
친화성 컬럼 크로마토그래피용 고정상 리간드의 제조에 사용되는, 제 1항에 따른 일반식( I )의 화합물.
친화성 크로마토그라피에 의한 인테그린의 정제에 사용되는, 제 1항에 따른 일반식 ( I )의 화합물.