UA125632C2 - Інсектицидний білок - Google Patents

Інсектицидний білок Download PDF

Info

Publication number
UA125632C2
UA125632C2 UAA201908337A UAA201908337A UA125632C2 UA 125632 C2 UA125632 C2 UA 125632C2 UA A201908337 A UAA201908337 A UA A201908337A UA A201908337 A UAA201908337 A UA A201908337A UA 125632 C2 UA125632 C2 UA 125632C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
plant
amino acid
zeo
nucleic acid
insecticidal
Prior art date
Application number
UAA201908337A
Other languages
English (en)
Inventor
Кларенс Майкл РЕЙНОЛДС
Крістофер Флємінг
Кристофер ФЛЕМИНГ
Марк Грір Монтгомері
Марк Грир МОНТГОМЕРИ
Original Assignee
Сінгента Партісіпейшнс Аг
Сингента Партисипейшнс Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Сінгента Партісіпейшнс Аг, Сингента Партисипейшнс Аг filed Critical Сінгента Партісіпейшнс Аг
Publication of UA125632C2 publication Critical patent/UA125632C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/44—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a nitrogen atom attached to the same carbon skeleton by a single or double bond, this nitrogen atom not being a member of a derivative or of a thio analogue of a carboxylic group, e.g. amino-carboxylic acids
    • A01N37/46—N-acyl derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/46—Gramineae or Poaceae, e.g. ryegrass, rice, wheat or maize
    • A01H6/4684—Zea mays [maize]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Винахід стосується інсектицидних білків, що характеризуються токсичністю проти твердокрилих та/або лускокрилих комах-шкідників, також молекул нуклеїнових кислот, що кодують інсектицидні білки, а також способів одержання інсектицидних білків і способів застосування інсектицидних білків і нуклеїнових кислот, що кодують інсектицидні білки, у трансгенних рослинах для забезпечення захисту від шкоди, спричиненої комахами. 1

Description

(54) ІНСЕКТИЦИДНИЙ БІЛОК (57) Реферат:
Винахід стосується інсектицидних білків, що характеризуються токсичністю проти твердокрилих та/або лускокрилих комах-шкідників, також молекул нуклегсових кислот, що кодують інсектицидні білки, а також способів одержання інсектицидних білків і способів застосування інсектицидних білків і нуклеїнових кислот, що кодують інсектицидні білки, у трансгенних рослинах для забезпечення захисту від шкоди, спричиненої комахами.
СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ
Дана заявка заявляє пріоритет за попередньою заявкою Мо 62/445429, поданою 12 січня 2017 року та включеною в даний документ за допомогою посилання в усій своїй повноті.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
Перелік послідовностей у текстовому форматі АЗСІЇ, наданий відповідно до 5 1.821 37
С.Р.К., під назвою "81158 РСТ Т25.4х, розміром 305 кілобайт, створений 28 листопада 2017 року і поданий за допомогою ЕЕ5-УМер, представлений замість паперової копії. Цей перелік послідовностей у такий спосіб включено за допомогою посилання в опис даного документа для його розкриття.
ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ, ДО ЯКОЇ НАЛЕЖИТЬ ВИНАХІД
Даний винахід стосується галузей білкової інженерії, молекулярної біології рослин і контролю шкідників. Конкретніше даний винахід стосується нового білку і його варіантів, що характеризуються інсектицидною активністю, нуклеїнових кислот, експресія яких зумовлює утворення інсектицидних білків, а також способів одержання і способів застосування інсектицидних білків і відповідних нуклеїнових кислот для контролю комах.
ПЕРЕДУМОВИ ВИНАХОДУ
Комахи-шкідники є головною причиною втрат урожаю. Лише у США щорічні втрати, спричинені зараженням різними видами комах, становлять мільярди доларів. Додатково до втрат врожаю польових культур, комахи-шкідники також є негативним фактором для плантаторів, які вирощують овочі та фрукти, фахівців із вирощування декоративних квітів, і вони є неприємністю для садівників і домовласників.
Найбільш згубними шкідниками кукурудзи вважаються різні види кукурудзяного кореневого жука. У Сполучених Штатах трьома важливими видами є Оіабгоїсса мігдітега мігдіїега, західний кукурудзяний кореневий жук, 0. Іопдісогпів Брагїбеті, північний кукурудзяний кореневий жук, і 0. ипдесітрипсіаїа ПпПомжагаі, південний кукурудзяний кореневий жук. Основними шкідниками кукурудзи у кукурудзяному поясі США вважаються лише західний і північний кукурудзяні кореневі жуки. Додатково важливим кореневим жуком-шкідником кукурудзи в південних штатах
США є мексиканський кукурудзяний кореневий жук Оіабгоїїса мігуітега 7еае. Найбільш істотну шкоду рослині спричиняють личинки кукурудзяного кореневого жука, оскільки вони поїдають
Зо фактично лише корені кукурудзи. Це ураження виражається у збільшенні вилягання рослин, зниженні врожаю зерна і рослинної маси, а також у зміні вмісту поживних речовин у зерні.
Поїдання личинками також опосередковано впливає на кукурудзу через те, що в результаті в коренях відкриваються ходи для заражень бактеріями та грибами, що призводить до захворювань, які виражаються у гнитті кореня й стебла. Дорослі особини кукурудзяного кореневого жука активні на кукурудзяних полях пізно влітку, коли вони поїдають качани, рильця і пилок, що заважає нормальному запиленню.
Кукурудзяних кореневих жуків контролюють здебільшого шляхом посиленого застосування хімічних пестицидів, які проявляють активність, пригнічуючи ріст комах, запобігаючи поїданню комахами або їх розмноженню або спричиняючи загибель. Таким чином можна досягти належного контролю кукурудзяного кореневого жука, однак іноді ці хімічні речовини також можуть впливати й на інші, корисні організми. Іншою проблемою, що виникає в результаті широкого застосування хімічних пестицидів, є виникнення стійких видів комах. Ще одна проблема спричинена тим фактом, що личинки кукурудзяного кореневого жука харчуються під землею, що ускладнює нанесення "рятувальних" обробок інсектицидами. Через це нанесення інсектицидів здебільшого здійснюється профілактично під час посіву. Результатом такої практики є велике навантаження на навколишнє середовище. Частково це навантаження послаблюють завдяки застосуванню різних способів ведення фермерського господарства, однак існує зростаюча потреба в альтернативних механізмах контролю шкідників.
Біологічні засоби для контролю шкідників, такі як штами Васійи5 ІпПигіпдіеєпвів (ВО, що експресують пестицидні токсини, як, наприклад, б-ендотоксини (дельта-ендотоксини; які також називають кристалічними токсинами або білками Сгу), були застосовані до сільськогосподарських культур із задовільними результатами щодо комах-шкідників. б- ендотоксини являють собою білки, що містяться у кристалічній матриці, які, як відомо, характеризуються інсектицидною активністю під час поглинання деякими комахами. Декілька нативних білків Сту із Васійи5 (игіпдіепбзі5 або сконструйованих білків Сту було експресовано у трансгенних сільськогосподарських культурах і використовувалося з комерційною метою для контролю певних лускокрилих і твердокрилих комах-шкідників. Наприклад, починаючи з 2003 року, У США комерційно доступні трансгенні гібриди кукурудзи, які контролюють кукурудзяного кореневого жука за допомогою експресії білка СтузВЬ1, Сту3з4АБ1Т/Стуз5АБІ або модифікованого 60 білка СгуЗзА (тСгузА) або СтузАБЬ (еСтуЗ.1АБ).
Хоча було показано, що використання трансгенних рослин, що експресують білки Стгу, є надзвичайно ефективним, відомі комахи-шкідники, які тепер характеризуються стійкістю до білків Сгу, що експресуються у деяких трансгенних рослинах. Отже, і надалі існує необхідність в ідентифікації нових і ефективних засобів для контролю шкідників, які забезпечують економічну вигоду фермерам і є екологічно прийнятними. Особливо необхідними є білки, які токсичні щодо видів Юіабгоїїса, головного шкідника кукурудзи, спосіб дії яких відрізняється від наявних продуктів для контролю комах як засобів для ослаблення розвитку стійкості. Крім того, необхідна доставка засобів для контролю комах за допомогою продуктів, які мінімізують навантаження на навколишнє середовище, як і за допомогою трансгенних рослин. стислии опис
З огляду на ці потреби даний винахід передбачає нові інсектицидні білки, а саме
УмМоса5СЕМУ, і білки, які в значній мірі ідентичні МУуосазсСкКуУмМ і його варіантам. Білки за даним винаходом характеризуються токсичністю щодо кукурудзяного кореневого жука (Оіаргоїїса 5рр).
Білки за даним винаходом також можуть характеризуватися токсичністю щодо інших твердокрилих і/або лускокрилих. Даний винахід додатково стосується молекул нуклеїнової кислоти, які кодують УМооа5СЕМУ або його варіанти, комплементарних їм послідовностей або молекул, які значною мірою ідентичні Ууосазсктму і його варіантам.
Даний винахід також передбачає вектори, що містять такі рекомбінантні (або комплементарні їм) нуклеїнові кислоти; рослину або мікроорганізм, які містять і забезпечують експресію таких нуклеїнових кислот; рослини, трансформовані такими нуклеїновими кислотами, наприклад трансгенні рослини кукурудзи; потомство таких рослин, яке містить нуклеїнові кислоти, стабільно вбудовані і успадковувані за менделівським принципом, і/або насіння таких рослин і такого потомства. Даний винахід також передбачає способи селекції для введення трансгена, що містить молекулу нуклеїнової кислоти за даним винаходом, у потомство рослини і у різні зародкові плазми.
Даний винахід також передбачає композиції та склади, що містять М/осазСтКУМ або його варіанти, які можуть пригнічувати здатність комах-шкідників виживати, рости і/або розмножуватись або обмежувати пов'язані з комахами шкоду або втрату врожаю сільськогосподарських культур, наприклад, застосовуючи М/ооазСКУМ або його варіанти як
Зо частину композицій або складів щодо заражених комахами зон або рослин або для профілактичної обробки чутливих до комах зон або рослин для забезпечення захисту від комах- шкідників.
Даний винахід додатково стосується способу одержання УуосазСКУМ або його варіантів і способів застосування нуклеїнових кислот, наприклад, у мікроорганізмах для контролю комах або в трансгенних рослинах для забезпечення захисту від шкоди, якої завдають комахи.
Описані в даному документі нові білюи є активними щодо комах. Наприклад, у варіантах здійснення білки за даним винаходом можуть застосовуватись для контролю економічно важливих комах-шкідників, зокрема твердокрилих комах, таких як західний кукурудзяний кореневий жук (М/СЕК), північний кукурудзяний кореневий жук (МСЕК), південний кукурудзяний кореневий жук (5СК) і/або мексиканський кукурудзяний кореневий жук (О. мігуйїега 7еає).
Інсектицидні білки за даним винаходом можуть застосовуватись окремо або у комбінації з іншими стратегіями для контролю комах, щоб забезпечити підвищену ефективність контролю шкідників проти тих самих комах-шкідників і/або розширити спектр цільових комах із мінімальним впливом на навколишнє середовище.
Інші аспекти і переваги за даним винаходом стануть очевидними для фахівців у даній галузі в результаті розгляду наступного опису даного винаходу і необмежувальних прикладів.
СТИСЛИЙ ОПИС ПОСЛІДОВНОСТЕЙ У ПЕРЕЛІКУ ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
ЗЕО ІЮ МО: 1 являє собою амінокислотну послідовність УМосазстму.
ЗЕО ІЮ МО: 2 являє собою оптимізовану для Е. соїї нуклеотидну послідовність М/ооа5СЕМУ.
ЗЕО ІЮ МО: З являє собою нативну нуклеотидну послідовність МУосазсткму.
ЗЕО ІЮ МО: 4 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С4855 УуосазсСЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 5 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С4355 УуосазсСЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 6 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С3985 УМосазсСЕмУ.
ЗЕО І МО: 7 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С3835 УуосазсСЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 8 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С3135 УуосазсСЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 9 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта У194Уу Муосазсему.
ЗЕО ІЮ МО: 10 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта У194Е Ууоод5СЕУУ.
ЗЕО ІЮ МО: 11 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С3835/с4855 УМосазсему.
ЗЕО ІЮ МО: 12 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С4355/Сс4855 УМосазсСеЕмуУ. бо ЗЕО ІЮ МО: 13 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С3985/С4355 УМосазстму.
ЗЕО ІЮ МО: 14 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С3985/с4855 УМосазсему.
ЗБО ІЮО МО: 15 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С3835/С4355/С4855
МуосазСсвМу.
ЗЕО ІО МО: 16 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта б31357/63835/С3985/04355/04855 МосазСсВАМу.
ЗЕО ІЮ МО: 17 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта КЗ396Ї МуосазсЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 18 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта К4А06Ї МуосазсЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 19 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта СЗВЗА/С485А УМосазстму.
ЗЕО ІЮ МО: 20 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта СЗОВА/С485А УМосазсему.
ЗЕО ІЮ МО: 21 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта СЗ83І МуосазстмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 22 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С398І МуосазСВМУ.
ЗЕО ІЮ МО: 23 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта 1771 /83І /98Е Мосазсткуу.
ЗБО ІЮ МО: 24 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта У248Е/2641 //277Е
МуосазСсвМу.
ЗБО ІЮ МО: 25 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта У326РЕ/1340І /І3511.
МуосазСсвМу.
ЗБО ІО МО: 26 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта 1209І/у223Е/Л2281
МуосазСсвМу.
ЗБО ІО МО: 27 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта 14471 /у464Е/4691.
МуосазСсвМу.
ЗЕО ІЮ МО: 28 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С435І. М/осазСВМУ.
ЗЕО ІЮ МО: 29 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С4851. МуосазсЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 30 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта І4031 /4041. Ууооа5СЕМУ.
ЗЕО ІЮ МО: 31 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта М399І МуосазсЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 32 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта МУ399Е Муосазсткуу.
ЗЕО ІЮ МО: 33 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта СЗО8Е УуосазсСЕму.
ЗЕО ІЮ МО: 34 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С398У Ууоса5СЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 35 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С3981І УуосазсЕтмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 36 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта СЗ98М УмосазсеЕму.
Зо ЗЕО ІЮ МО: 37 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С4855 УуосазсСЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 38 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С4355 МуосазсЕму.
ЗЕО ІЮ МО: 39 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С3985 УуосазсСЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 40 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С3835 УуосазсСЕму.
ЗЕО ІЮ МО: 41 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С3135 УуосазсСвМу.
ЗЕО ІЮ МО: 42 являє собою амінокислотну послідовність варіанта У194Уу МуосазсСЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 43 являє собою амінокислотну послідовність варіанта У194Е МуосазсЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 44 являє собою амінокислотну послідовність варіанта К396!. Ууоод5СЕмУ.
ЗЕО І МО: 45 являє собою амінокислотну послідовність варіанта К406І. Ууоод5СЕмУ.
ЗБО ІО МО: 46 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С3835/Сс4855
МуосазСсвМу.
ЗБО ІО МО: 47 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С4355/С4855
МуосазСсвМу.
ЗБО ІО МО: 48 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С3985/С4355
МуосазСсвМу.
ЗБО ІО МО: 49 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С3985/С4855
МуосазСсвМу.
ЗЕБЕО ІЮ МО: 50 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С3835/С4355/С4855
МуосазСсвМу.
ЗЕО ІО МО: 51 являє собою амінокислотну послідовність варіанта
Бо 0 б31357023835/03985/С4355/04855 МовавзсСВАМУ.
ЗБО ІО МО: 52 являє собою амінокислотну послідовність варіанта СЗ383А/С485А
МуосазСсвМу.
ЗБО ІО МО: 53 являє собою амінокислотну послідовність варіанта СЗ98А/С485А
МуосазсВвМУ.
ЗЕО ІЮ МО: 54 являє собою амінокислотну послідовність варіанта СЗ383І Муосазстму.
ЗЕО ІЮ МО: 55 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С3981І МуосазсЕмуУ.
ЗБО 10 МО: 56 являє собою амінокислотну послідовність варіанта 1771/1831 /98Е
МуосазСсвМу.
ЗЕБЕО ІО МО: 57 являє собою амінокислотну послідовність варіанта У248Е/Л2641 /у277Е бо МуосазСсвМу.
ЗБЕО ІЮ МО: 58 являє собою амінокислотну послідовність варіанта У326Е/1340І /3511.
МуосазСсвМу.
ЗБО ІЮ МО: 59 являє собою амінокислотну послідовність варіанта 12091 /у223Е/Л2281
МуосазСсвМу.
ЗБО ІЮ МО: 60 являє собою амінокислотну послідовність варіанта 14471 /у464Е/4691.
МуосазСсвМу.
ЗЕО ІЮ МО: 61 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С4351. МуосазсЕмуУ.
ЗЕО ІЮ МО: 62 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С4851. Муосаз САМУ.
ЗЕО ІЮ МО: 63 являє собою амінокислотну послідовність варіанта І403І /4041. УуосазсСЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 64 являє собою амінокислотну послідовність варіанта У3991І. Муосд5СЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 65 являє собою амінокислотну послідовність варіанта У399Е Муосазстму.
ЗЕО І МО: 66 являє собою амінокислотну послідовність варіанта СЗО8Е Муосазсему.
ЗЕО ІЮ МО: 67 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С398У УмосазсСЕму.
ЗЕО ІЮ МО: 68 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С398І УуосазсСЕмУ.
ЗЕО ІЮ МО: 69 являє собою амінокислотну послідовність варіанта СЗО8М Ууосазсткуму.
ЗЕО ІЮ МО: 70 і 71 являють собою амінокислотні послідовності фрагментів МУосазсему.
ЗЕО ІЮО МО: 72 являє собою амінокислотну послідовність М/ооа5СЕМУ, де "Х" може бути будь-якою амінокислотою.
ЗБО ІЮО МО: 73 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта 0397-І ец-Ї еи-С398 умосазсСЕМу, що містить два вставлені лейцинові залишки.
ЗБО ІЮ МО: 74 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С398-Ї ецш-Ї еєи-У399 умосазсСЕМу, що містить два вставлені лейцинові залишки.
ЗБЕО ІО МО: 75 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта 0397-ІЇ ей-С398-І єи умосазсСЕМу, що містить два вставлені лейцинові залишки.
ЗЕО ІЮ МО: 76 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта Х436Е Муосазсткму.
ЗЕО ІЮ МО: 77 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта 0397-І еи-С398 М/осазСвМ, що містить один вставлений лейциновий залишок.
ЗЕО ІЮ МО: 78 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С398-І єи-У399 М/оса5зСвМ, що містить один вставлений лейциновий залишок.
Ко) ЗЕО ІЮ МО: 79 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта І 382-ІЇ еи-С383 М/осазСвМ, що містить один вставлений лейциновий залишок.
ЗЕО І МО: 80 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С383-І єи-У384 М/оса5зСвМ, що містить один вставлений лейциновий залишок.
ЗЕО ІЮ МО: 81 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта І 434-І еєи-С435 М/оса5СвМ, що містить один вставлений лейциновий залишок.
ЗЕО ІЮО МО: 82 являє собою нуклеотидну послідовність варіанта С435-І єи-У436 М/оса5зСвМ, що містить один вставлений лейциновий залишок.
ЗЕО ІЮ МО: 83 являє собою нуклеотидну послідовність химерної молекули Рій1415-Муоод5.
ЗЕО ІЮ МО: 84 являє собою нуклеотидну послідовність химерної молекули Ууосаз-РіІш1415.
ЗЕО ІЮ МО: 85 являє собою амінокислотну послідовність білка Ріш1415.
ЗЕБЕО ІЮ МО: 86 являє собою амінокислотну послідовність варіанта 0397-ІЇ ец-Ї еи-С398 умосазсСЕМу, що містить два вставлені лейцинові залишки.
ЗБЕО ІО МО: 87 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С398-Ї ец-Ї еєи-У399 умосазсСЕМу, що містить два вставлені лейцинові залишки.
ЗЕБЕО ІЮ МО: 88 являє собою амінокислотну послідовність варіанта 0397-ІЇ ей-С398-І єи умосазсСЕМу, що містить два вставлені лейцинові залишки.
ЗЕО ІЮ МО: 89 являє собою амінокислотну послідовність варіанта У436Е Муосазстму.
ЗБО ІО МО: 90 являє собою амінокислотну послідовність варіанта 0397-Ї еи-С398 умосазсСЕМУ, що містить один вставлений лейциновий залишок.
ЗБО І МО: 91 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С398-ІЇ єи-М399 умосазсСЕМУ, що містить один вставлений лейциновий залишок.
ЗБО ОО МО: 92 являє собою амінокислотну послідовність варіанта 1382-Ї еи-С383 умосазсСЕМУ, що містить один вставлений лейциновий залишок.
ЗБО ІО МО: 93 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С383-Ї єи-У384 умосазсСЕМУ, що містить один вставлений лейциновий залишок.
ЗБО І МО: 94 являє собою амінокислотну послідовність варіанта 1434-Ї еи-С435 умосазсСЕМУ, що містить один вставлений лейциновий залишок.
ЗБО І МО: 95 являє собою амінокислотну послідовність варіанта С435-ІЇ єи-У436 умосазсСЕМУ, що містить один вставлений лейциновий залишок. бо ЗЕБЕО ІЮ МО: 96 являє собою амінокислотну послідовність химерної молекули Ріи1415-
Мооаі5.
ЗБО І МО: 97 являє собою амінокислотну послідовність химерної молекули УмМосав5-
РіІй1415.
ЗЕО ІЮ МО: 98 являє собою амінокислотну послідовність білка Ріш1415.
ЗБЕО ІО МО: 99 являє собою нуклеотидну послідовність С-кінцевого домену ДВ-призми
УмосазСУМ (амінокислоти 347-490).
ЗЕО ІЮО МО: 100 являє собою амінокислотну послідовність С-кінцевого домену Д-призми
УмосазСУМ (амінокислоти 347-490).
ВИЗНАЧЕННЯ
Для ясності певні терміни, застосовувані в даному описі, визначено й представлено, як указано далі. "Активність" інсектицидних білків за даним винаходом означає, що інсектицидні білки функціонують як активні під час перорального поглинання засоби для контролю комах, характеризуються токсичним ефектом і/або здатні порушувати або стримувати поїдання комахами, що може спричиняти або не спричиняти смерть комахи. У разі, якщо інсектицидний білок за даним винаходом доставляється в організм комахи, то результатом зазвичай є загибель комахи або ж комаха не поїдає джерело, яке робить інсектицидний білок доступним для комахи. "Пестицидною" називається токсична біологічна активність, здатна здійснювати контроль шкідника, такого як комаха, нематода, гриб, бактерії або вірус, переважно шляхом їхнього знищення або руйнування. "Інсектицидною" називають токсичну біологічну активність, здатну до контролю комах, переважно шляхом їхнього знищення. "Пестицидний засіб" являє собою засіб, який характеризується пестицидною активністю. "Інсектицидний засіб" являє собою засіб, який характеризується інсектицидною активністю.
Термін "асоційована з/функціонально пов'язана" стосується двох нуклеїнових кислот, які пов'язані фізично або функціонально. Наприклад, говорять, що промотор або регуляторна послідовність ДНК "асоційовані з" послідовністю ДНК, яка кодує РНК або білок, якщо ці дві послідовності функціонально пов'язані або розташовані таким чином, що регуляторна послідовність ДНК буде впливати на рівень експресії кодувальної або структурної послідовності
ДНК. "Кодувальна послідовність" являє собою послідовність нуклеїнової кислоти, яка транскрибується в РНК, таку як тЕМА, геЕМА, їКМА, 5пЕМА, сенсова РНК або антисенсова РНК.
Переважно РНК потім транслюється в організмі з продукуванням білка. "Контролювати" комах означає пригнічувати за допомогою токсичного ефекту здатність комах-шкідників до виживання, росту, поїдання і/або розмноження або обмежувати пов'язані з комахами шкоду або втрату врожаю сільськогосподарських культур. "Контроль" комах може означати або може не означати знищення комах, хоча переважно означає знищення комах. "Доставляти" інсектицидний білок означає, що інсектицидний білок вступає в контакт із комахою, що зумовлює токсичний ефект і контроль комахи. Інсектицидний білок може бути доставлений багатьма відомими шляхами, наприклад, за допомогою трансгенної рослини, що експресує інсектицидний білок, складеної(-их) композиції(-й) з білком, розпилюваної(-их) композиції(-й) з білюом, матриці з приманкою або за допомогою будь-якої іншої відомої з рівня техніки системи для доставки токсину. "Ефективна для контролю комах кількість" означає концентрацію інсектицидного білка, яка пригнічує за допомогою токсичного ефекту здатність комах виживати, рости, поїдати і/або розмножуватись або обмежує пов'язані з комахами шкоду або втрату врожаю сільськогосподарських культур. "Ефективна для контролю комах кількість" може означати або може не означати знищення комах, хоча переважно воно означає знищення комах. "Касета експресії", використовувана у даному документі, означає послідовність нуклеїнової кислоти, здатну спрямовувати експресію конкретної нуклеотидної послідовності у відповідну клітину-хазяїна, що містить промотор, функціонально пов'язаний із нуклеотидною послідовністю, що становить інтерес, яка функціонально пов'язана із сигналами термінації.
Вона також зазвичай містить послідовності, необхідні для правильної трансляції нуклеотидної послідовності. Щонайменше один із компонентів касети експресії, що містить нуклеотидну послідовність, яка становить інтерес, може бути гетерологічним щодо щонайменше одного з інших її компонентів. Касета експресії може також являти собою послідовність, яка існує в природі, але була одержана в рекомбінантній формі, придатній для гетерологічної експресії.
Однак зазвичай касета експресії є гетерологічною щодо хазяїна, тобто конкретна послідовність нуклеїнової кислоти в касеті експресії не наявна в клітині-хазяїні в природі, та її необхідно було ввести в клітину-хазяїна або предка клітини-хазяїна за допомогою події трансформації. бо Експресія нуклеотидної послідовності у касеті експресії може перебувати під контролем конститутивного промотора або індуковного промотора, який індукує транскрипцію лише тоді, коли клітина-хазяїн зазнає впливу деякого певного зовнішнього стимулу. У випадку багатоклітинного організму, такого як рослина, промотор також може бути специфічним щодо конкретної тканини, або органа, або стадії розвитку.
Касета експресії, яка містить нуклеотидну послідовність, що становить інтерес, може бути химерною, а це означає те, що принаймні один з її компонентів є гетерологічним щодо щонайменше одного з інших її компонентів. Касета експресії також може являти собою таку, яка містить нативний промотор, що керує її нативним геном, однак вона була одержана в рекомбінантній формі, застосовній для гетерологічної експресії. Таке використання касети експресії забезпечує те, що вона не трапляється в природі в клітині, в яку була введена.
Касета експресії також може необов'язково містити ділянку термінації транскрипції та/або трансляції (тобто ділянку термінації), що функціонує у рослин. Різноманітні термінатори транскрипції доступні для застосування в касетах експресії, і вони відповідають за термінацію транскрипції за межами гетерологічної нуклеотидної послідовності, що становить інтерес, і правильне поліаденілювання тЕМА. Ділянка термінації може бути нативною щодо ділянки ініціації транскрипції може бути нативною щодо функціонально пов'язаної нуклеотидної послідовності, що становить інтерес, може бути нативною щодо рослини-хазяїна або може бути одержаною від іншого джерела (тобто бути чужорідною або гетерологічною щодо промотора, нуклеотидної послідовності, що становить інтерес, рослини-хазяїна або будь-якої їх комбінації).
Відповідні термінатори транскрипції включають без обмеження термінатор 355 Саму, термінатор гена іті, термінатор гена нопалінсинтази і/або термінатор гена гос5-Е9 гороху. Їх можна застосовувати як в однодольних, так і у дводольних рослин. Додатково можна застосовувати нативний термінатор транскрипції кодувальної послідовності. У контексті даного винаходу може застосовуватись будь-який доступний термінатор, щодо якого відомо, що він функціонує у рослинах.
Термін "експресія" у разі використання із посиланням на полінуклеотид, такий як ген, ОКЕ або її частину або трансген у рослинах, стосується процесу перетворення генетичної інформації, кодованої геном, на РНК (наприклад, теМА, геМА, їЕМА або 5пеЕМА) за допомогою "транскрипції" гена (тобто завдяки ферментативній дії РНК-полімерази) і на білок, якщо це
Зо застосовується (наприклад, якщо ген кодує білок), за допомогою "трансляції" тЕМА. Експресія гена може регулюватися на багатьох стадіях під час цього процесу. Наприклад, у випадку антисенсових конструкцій або конструкцій а5КМА відповідно, експресія може стосуватися транскрипції лише антисенсової РНК або лише а5КМА. У варіантах здійснення "експресія" стосується транскрипції та стабільного нагромадження сенсової (ПЕМА) або функціональної
РНК. "Експресія" може також стосуватися продукування білка. "Ген" являє собою певну ділянку, яка локалізована всередині геному і містить кодувальну послідовність нуклеїнової кислоти і зазвичай також містить інші, передусім регуляторні, нуклеїнові кислоти, відповідальні за контроль експресії, інакше кажучи транскрипції і трансляції, кодувальної частини. Ген може також містити інші 5- і 3'-нетрансльовані послідовності й послідовності термінації. Додатковими елементами, які можуть бути наявними, є, наприклад, інтрони. Регуляторна послідовність нуклеїнової кислоти гена в нормі може не бути функціонально пов'язаною з асоційованою послідовністю нуклеїнової кислоти, як це трапляється в природі, й у такому разі ген буде химерним геном. "Ген, що становить інтерес" стосується будь-якої молекули нуклеїнової кислоти, яка у разі переносу в рослину надає рослині необхідної ознаки, такої як стійкість до антибіотиків, стійкість до вірусів, стійкість до комах, стійкість до захворювань або стійкість до інших шкідників, толерантність до гербіцидів, толерантність до абіотичного стресу, чоловіча стерильність, модифікований метаболізм жирних кислот, модифікований метаболізм вуглеводів, поліпшена харчова цінність, поліпшені характеристики щодо промислового способу або змінена репродуктивна здатність. "Ген, що становить інтерес" також може бути таким, який переносять у рослини для одержання комерційно цінних ферментів або метаболітів у рослині. "Гетерологічна" послідовність нуклеїнової кислоти або молекула нуклеїнової кислоти являє собою послідовність нуклеїнової кислоти або молекулу нуклеїнової кислоти, яка в природі не асоційована з клітиною-хазяїном, у яку її вводять, зокрема множинні копії, що не існують у природі, послідовності нуклеїнової кислоти, що існує в природі. Гетерологічна послідовність нуклеїнової кислоти або молекула нуклеїнової кислоти може містити химерну послідовність, таку як химерна касета експресії, де промотор і кодувальна ділянка одержані з декількох вихідних організмів. Послідовність промотора може являти собою послідовність конститутивного промотора, послідовність тканиноспецифічного промотора, послідовність бо хімічно індуковного промотора, послідовність індуковного ушкодженням промотора, (с;
послідовність індуковного стресом промотора або послідовність специфічного для стадії розвитку промотора. "Гомологічна" послідовність нуклеїнової кислоти являє собою послідовність нуклеїнової кислоти, у природних умовах пов'язану з клітиною-хазяїном, в яку її вводять. "Гомологічна рекомбінація" являє собою взаємний обмін фрагментами нуклеїнової кислоти між гомологічними молекулами нуклеїнової кислоти. "Ідентичність" або "відсоток ідентичності" стосується ступеня подібності між двома послідовностями нуклеїнових кислот або послідовностями білка. Під час порівняння послідовностей одна послідовність зазвичай виступає як еталонна послідовність, з якою порівнюють тестовані послідовності. Під час використання алгоритму порівняння послідовностей тестовану і еталонну послідовності вводять у комп'ютер, за необхідності задають координати підпослідовності і задають програмні параметри алгоритму порівняння послідовностей. Потім за допомогою алгоритму порівняння послідовностей на основі заданих програмних параметрів обчислюють відсоткову ідентичність послідовностей для тестованої(-их) послідовності(-ей) щодо еталонної послідовності. Фраза "значною мірою ідентичні" у контексті двох послідовностей нуклеїнових кислот або двох амінокислотних послідовностей стосується двох або більше послідовностей або підпослідовностей, які характеризуються щонайменше приблизно 5095 ідентичністю за нуклеотидами або амінокислотними залишками під час порівняння та вирівнювання для максимальної відповідності, що визначають із застосуванням одного з наступних алгоритмів порівняння послідовностей або шляхом візуального огляду. У певних варіантах здійснення значною мірою ідентичні послідовності характеризуються щонайменше приблизно 60 95, або щонайменше приблизно 70 95, або щонайменше приблизно 80 956, або щонайменше приблизно 85 95, або навіть щонайменше приблизно 90 95 або 95 95 ідентичністю за нуклеотидами або амінокислотними залишками. У певних варіантах здійснення значний ступінь ідентичності наявний у межах ділянки послідовностей, довжина якої становить щонайменше приблизно 50 залишків, або в межах ділянки, що складається із щонайменше приблизно 100 залишків, або послідовності значною мірою ідентичні в межах щонайменше приблизно 150 залишків. У додаткових варіантах здійснення послідовності є значною мірою ідентичними, якщо вони ідентичні по всій довжині кодувальних ділянок.
Оптимальне вирівнювання послідовностей для порівняння можна проводити, наприклад, за допомогою алгоритму пошуку локальної гомології із Зтіїй 4 Уаїептап, Адм. Аррі. Май. 2: 482 (1981), за допомогою алгоритму вирівнювання ділянок гомології з Меедіеєтап 85 М/йп5сп, «). Мої.
Віої!. 48: 443 (1970), за допомогою способу пошуку подібності з Реагзоп 8 ІГіртап, Ргос. Ммагі.
Асад. 5сі. ОСОБА 85: 2444 (1988), за допомогою програмної реалізації цих алгоритмів (САР,
ВЕ5ТРЕЇТ, ЕА5ТА ії ТЕА5ТА із УмМізсопзіп Сепеїіс5 Зопйумаге РасКаде, Сепеїййс5 Сотршег сгоир, 575 Зсієпсе Ог., Медісон, Вісконсин, США) або за допомогою візуального огляду (див. загалом
А!йзибеї ет аЇ. нижче).
Одним із прикладів алгоритму, придатного для визначення відсоткової ідентичності послідовностей і подібності послідовностей, є алгоритм ВГ А5Т, описаний у АїЇї5спи! еї аї., У. Мої.
Віої. 215: 403-410 (1990). Програмне забезпечення для проведення аналізів ВІА5ЗТ загальнодоступне через Національний центр біотехнологічної інформації (пер:/Лумли.побі.піт.пій.дом/). Даний алгоритм передбачає спочатку ідентифікацію пар послідовностей із високим показником подібності (НОР) шляхом ідентифікації коротких "слів" довжиною МУ у запитуваній послідовності, які або збігаються, або задовольняють деякий позитивний граничний показник Т під час вирівнювання зі "словом" такої ж довжини в послідовності з бази даних. Т називається граничним значенням показника сусіднього "слова" (Ай5спиц! еї аї., 1990). Ці первинні збіги сусідніх "слів" слугують як затравка, щоб ініціювати пошуки для виявлення Н5оР більшої довжини, які їх містять. Збіги "слів" потім продовжуються в обох напрямках уздовж кожної послідовності настільки, наскільки може бути збільшений сукупний показник вирівнювання. Сукупні показники розраховують із застосуванням для нуклеотидних послідовностей параметрів М (бал-нагорода, що нараховують за пару залишків, які збігаються; завжди »0) і М (штрафний бал, що нараховують за залишки, які не збігаються; завжди «0). Для амінокислотних послідовностей для розрахунків сукупного показника використовують матрицю замін. Продовження збігів "слів" у кожному напрямку припиняється, якщо сукупний показник вирівнювання знижується на величину Х від свого максимального досягнутого значення, при цьому сукупний показник падає до нуля або нижче внаслідок накопичення одного або декількох вирівнювань залишків із від'ємними показниками або в разі досягнення кінця однієї з послідовностей. Параметри алгоритму ВГА5Т УУ, Т і Х визначають чутливість і швидкість вирівнювання. Програма ВГАЗТМ (для нуклеотидних послідовностей) бо стандартно використовує довжину "слова" (МУ), що становить 11, очікуване значення (Е), що становить 10, граничне значення, що становить 100, М-5, М- -4, а також порівняння обох ниток.
Для амінокислотних послідовностей програма ВІАБЗТР використовує за замовчуванням довжину "слова" (МУ), що становить З, очікуване значення (Е), що становить 10, а також матрицю замін ВГОЗИОМБб2 (див. Непікої 8. Непікої, Ргос Маї! Асад. сі ОБА 89: 10915 (1989)).
Додатково до розрахунків відсоткової ідентичності послідовності алгоритм ВІ АБ5Т також виконує статистичний аналіз подібності між двома послідовностями (див., наприклад, Кагіїп 8.
АйвБспи!, Ргос. Магі. Асад. Осі. ОБА 90: 5873-5787 (1993)). Одним показником подібності, наданим алгоритмом ВІ А5Т, є найменша сумарна ймовірність (Р(М)), яка передбачає показник імовірності, згідно з яким збіги між двома нуклеотидними або амінокислотними послідовностями будуть спостерігатися випадковим чином. Наприклад, тестована послідовність нуклеїнової кислоти вважається подібною до еталонної послідовності, якщо найменша сумарна ймовірність у разі порівняння тестованої послідовності нуклеїнової кислоти з еталонною послідовністю нуклеїнової кислоти становить менше від приблизно 0,1, більш переважно менше від приблизно 0,01 і найбільш переважно менше від приблизно 0,001.
Іншою широко використовуваною і поширеною комп'ютерною програмою для виконання вирівнювань послідовностей є СГОЗТАЇ МУ м1.6 (Тпотрзоп, єї аї. Мис. Асіа5 Нев., 22: 4673-4680, 1994). Кількість основ, які збігаються, або амінокислот ділять на загальну кількість основ або амінокислот і множать на 100 з одержанням відсотка ідентичності. Наприклад, якщо б дві послідовності із 580 пар основ збігалися на 145 основ, тоді вони були б ідентичними на 25 відсотків. Якщо дві порівнювані послідовності мають різну довжину, тоді число збігів ділять на більш коротку з двох довжин. Наприклад, якщо було 100 амінокислот, що збігаються, у білках із 200 ї 400 амінокислот, тоді вони ідентичні на 50 відсотків щодо більш короткої послідовності.
Якщо довжина більш короткої послідовності становить менше від 150 основ або 50 амінокислот, тоді число збігів ділять на 150 (у разі нуклеїнових основ) або 50 (у разі амінокислот) і множать на 100 з одержанням відсотка ідентичності.
Іншим показником того, що дві нуклеїнові кислоти є значною мірою ідентичними, слугує те, що ці дві молекули гібридизуються одна з одною у жорстких умовах. Фраза "гібридизується специфічно з" стосується зв'язування, утворення дуплекса або гібридизації молекули лише з певною нуклеотидною послідовністю у жорстких умовах, коли така послідовність наявна у
Зо складній суміші (наприклад, спільних клітинних) ДНК або РНК. "Значною мірою зв'язується" стосується комплементарної гібридизації між нуклестовою кислотою-зондом і цільовою нуклеїновою кислотою і охоплює незначні розбіжності, які можуть бути виправлені завдяки зниженню жорсткості середовища для гібридизації, щоб домогтися необхідного виявлення цільової послідовності нуклеїнової кислоти. "Жорсткі умови гібридизації" і "жорсткі умови відмивання під час гібридизації" у контексті експериментів із гібридизації нуклеїнових кислот, таких як саузерн- і нозерн-гібридизації, залежать від послідовності і відрізняються за різних параметрів навколишнього середовища.
Довші послідовності специфічно гібридизуються за вищих температур. Докладний посібник із гібридизації нуклеїнових кислот можна знайти в Тіїзб5еп (1993) І арогаїогу Тесппідоев5 іп
Віоспетівігу апа Моїіесшіаг Віоіоду-Нубгіаіланоп м/йй Мисієїс Асій Ргоре5 частина І, глава 2 "Омегмієм ої рііпсірієз ої пубгідігайноп апа Ше вігаіеду ої писієїс асіа ргобе аззауз" ЕІбемівг, Мем/
Уогк. Зазвичай умови гібридизації і відмивання високої жорсткості вибирають таким чином, щоб температура була приблизно на 5"С нижче від точки плавлення (Тт) для конкретної послідовності за визначеної іонної сили та значення рн. Зазвичай за "жорстких умов" зонд буде гібридизуватись зі своєю цільовою послідовністю, але не буде з жодними іншими послідовностями.
Значення Тт являє собою температуру (за визначеної іонної сили та значення рнН), за якої 95 цільової послідовності гібридизується із зондом, що абсолютно збігається. Для дуже жорстких умов вибирають температуру, рівну Тят для конкретного зонда. Прикладом жорстких 50 умов гібридизації для гібридизації комплементарних нуклеїнових кислот, які мають більш ніж 100 комплементарних залишків на фільтрі у саузерн- або нозерн-блоті, є 50 95 формамід з 1 мг гепарину за 42"С, при чому гібридизація проводиться протягом ночі. Прикладом умов відмивання високої жорсткості є 0,15 М Масі за 72"С протягом приблизно 15 хвилин.
Прикладом жорстких умов відмивання є відмивання за допомогою 0,2х 55С2 за 65 "С протягом 15 хвилин (див. ЗатргоокК нижче щодо опису буфера 550). Часто для позбавлення від фонового сигналу зонда відмиванню за умов високої жорсткості передує відмивання за умов низької жорсткості. Прикладом умов відмивання середньої жорсткості для дуплекса, наприклад, із більш ніж 100 нуклеотидами є їх 55С за 45 "С протягом 15 хвилин. Прикладом умов відмивання низької жорсткості для дуплекса, наприклад, із більш ніж 100 нуклеотидами є 4-6бх 60 5БЗС за 40 "С протягом 15 хвилин. Для коротких зондів (наприклад, довжиною від приблизно 10 до 50 нуклеотидів) жорсткі умови зазвичай передбачають концентрації солей, що становлять менш ніж приблизно 1,0 М іонів Ма, зазвичай концентрацію, що становить приблизно 0,01-1,0 М іонів Ма (або інших солей), за рН 7,0-8,3, а також температуру, що зазвичай становить щонайменше приблизно 30 "С. Жорсткі умови також можуть бути досягнуті з додаванням дестабілізуючих засобів, таких як формамід. Загалом співвідношення сигнал-шум, що у 2 (або більше) рази перевищує спостережуване для незв'язаного зонда під час конкретного гібридизаційного аналізу, вказує на виявлення специфічної гібридизації. Нуклеїнові кислоти, які не гібридизуються одна з одною у жорстких умовах, усе ще є значною мірою ідентичними, якщо білки, які вони кодують, значною мірою ідентичні. Наприклад, це відбувається в тому випадку, коли копію нуклеїнової кислоти створюють із застосуванням максимальної виродженості кодонів, що допускається генетичним кодом.
Приклади наборів умов гібридизації/відмивання, які можна застосовувати для клонування гомологічних нуклеотидних послідовностей, що значною мірою ідентичні еталонним нуклеотидним послідовностям за даним винаходом, є наступними: еталонна нуклеотидна послідовність переважно гібридизується з еталонною нуклеотидною послідовністю в 7 95 додецилсульфаті натрію (505), 0,5 М МаРоОх, 1 мм ЕОТА за 50 "С із відмиванням у 2Х 55С, 0,196 505 за 50 "С, більш бажано в 7 95 додецилсульфаті натрію (505), 0,5 М МарРох, 1 мМ
ЕОТА за 50"С із відмиванням у 1Х 55С, 0,195 5ЮО5 за 50 С, ще більш бажано в 7 95 додецилсульфаті натрію (505), 0,5 М МаРоО», 1 мМ ЕОТА за 50 "С із відмиванням у 0,5Х 555, 0,1 956 505 за 50 "С, переважно в 7 956 додецилсульфаті натрію (505), 0,5 М МаРох, 1 мМ ЕОТА за 50"С із відмиванням в 0,1Х 55С, 0,195 505 за 50"С, більш переважно в 795 додецилсульфаті натрію (505), 0,5 М МаРоОх, 1 мМ ЕОТА за 50 "С із відмиванням в 0,1хХ 555, 0,1 96 505 за 65 70.
Додатковим свідченням того, що дві нуклеїнові кислоти або два білки є значною мірою ідентичними, є те, що білок, кодований першою нуклеїновою кислотою, є імунологічно перехресно реактивним із білком, закодованим другою нуклеїновою кислотою, або специфічно зв'язується з ним. Отже, білок зазвичай є значною мірою ідентичним другому білку, наприклад, якщо два білки відрізняються лише консервативними замінами.
Послідовність нуклеїнової кислоти є "Іізокодонною 3" еталонною послідовністю нуклеїнової
Зо кислоти, якщо послідовність нуклеїнової кислоти кодує поліпептид, що має таку ж амінокислотну послідовність, як і поліпептид, що кодує еталонна послідовність нуклеїнової кислоти. "Виділена" молекула нуклеїнової кислоти або виділений токсин являють собою молекулу нуклеїнової кислоти або токсин, які, коли є одержаними людиною, існують незалежно від свого природного середовища, а отже, не є природним продуктом. Виділені молекула нуклеїнової кислоти або токсин можуть існувати в очищеній формі або можуть існувати у неприродному середовищі, наприклад, без обмеження такому як рекомбінантна мікробна клітина, рослинна клітина, рослинна тканина або рослина. "Молекула нуклеїнової кислоти" або "послідовність нуклеїнової кислоти" являє собою сегмент одно- або двониткової ДНК або РНК, який може бути виділений із будь-якого джерела.
У контексті даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти зазвичай являє собою сегмент ДНК.
У деяких варіантах здійснення молекули нуклеїнової кислоти за даним винаходом являють собою виділені молекули нуклеїнової кислоти.
Терміни "білок", "пептид" і "поліпептид" використовуються у даному документі взаємозамінно.
Використовуваний у даному документі вираз "кодон-оптимізована" послідовність означає нуклеотидну послідовність рекомбінантного, трансгенного або синтетичного полінуклеотиду, у якому кодони вибрані таким чином, щоб відображати схильність до певних кодонів, яка може спостерігатись у клітині-хазяїні. Це виконується таким чином, щоб зберегти амінокислотну послідовність поліпептиду, кодованого кодон-оптимізованим полінуклеотидом. У деяких варіантах здійснення нуклеотидна послідовність рекомбінантної ДНК-конструкції містить послідовність, яка була кодон-оптимізованою для клітини (наприклад, клітини тварини, рослини або гриба), у якій конструкція буде експресуватись. Наприклад, у конструкції, яка буде експресуватись у рослинній клітині, можуть бути кодон-оптимізовані для експресії в рослині вся послідовність або її частини (наприклад, перший елемент для супресії гена або елемент для експресії гена). Див., наприклад, патент США Мо 6121014, включений у даний документ за допомогою посилання. "Рослина" являє собою будь-яку рослину на будь-якій стадії розвитку, зокрема насіннєву рослину. "Рослинна клітина" являє собою структурну й фізіологічну одиницю рослини, що містить бо протопласт і клітинну стінку. Рослинна клітина може перебувати у формі виділеної окремої клітини, або культивованої клітини, або як частина більш високоорганізованої одиниці, такої як, наприклад, рослинна тканина, орган рослини або ціла рослина. "Культура рослинних клітин" означає культури одиниць рослини, такі як, наприклад, протопласти, клітини в клітинній культурі, клітини в рослинних тканинах, пилок, пилкові трубки, насіннєві зачатки, зародкові мішки, зиготи й зародки на різних стадіях розвитку. "Рослинний матеріал" стосується листя, стебел, коренів, квітів або частин квітів, плодів, пилку, яйцеклітин, зигот, насіння, живців, клітинних або тканинних культур або будь-яких інших частин або продуктів рослини. "Орган рослини" являє собою окрему та візуально структуровану та диференційовану частину рослини, таку як корінь, стебло, листок, квіткова брунька або зародок. "Рослинна тканина", використовувана в даному документі, означає групу рослинних клітин, організованих у структурну й функціональну одиницю. Включена будь-яка тканина рослини іп ріапіа або в культурі. Даний термін включає без обмеження цілі рослини, органи рослин, насіння рослин, тканинну культуру та будь-які групи рослинних клітин, організовані у структурні та/або функціональні одиниці. Використання даного терміна разом із будь-яким специфічним типом рослинної тканини, наведеним вище або іншим чином охопленим даним визначенням, або без нього не призначене для виключення будь-якого іншого типу рослинної тканини. "Промотор" являє собою нетрансльовану послідовність ДНК вище від кодувальної ділянки, яка містить сайт зв'язування для РНК-полімерази і індукує транскрипцію ДНК. Промоторна ділянка може також містити інші елементи, які виступають як регулятори експресії генів. "Регуляторні елементи" стосуються послідовностей, залучених до контролю експресії нуклеотидної послідовності. Регуляторні елементи передбачають промотор, функціонально пов'язаний із нуклеотидною послідовністю, що становить інтерес, і сигнали термінації. Зазвичай вони охоплюють також послідовності, необхідні для належної трансляції нуклеотидної послідовності. "Трансформація" являє собою процес уведення гетерологічної нуклеїнової кислоти в клітину- або організм-хазяїна. У конкретних варіантах здійснення "трансформація" означає стабільну інтеграцію молекули ДНК у геном (ядерний або пластиди) організму, що становить інтерес.
Зо "Трансформований/трансгенний/рекомбінантний" стосується організму-хазяїна, такого як бактерія або рослина, в який було введено гетерологічну молекулу нуклеїнової кислоти.
Молекулу нуклеїнової кислоти можна стабільно інтегрувати в геном хазяїна, або ж молекула нуклеїнової кислоти також може бути наявною як позахромосомна молекула. Така позахромосомна молекула може бути такою, що аутореплікується. Передбачається, що трансформовані клітини, тканини або рослини охоплюють не тільки кінцевий продукт процесу трансформації, але також і їхнє трансгенне потомство. "Нетрансформований", "нетрансгенний" або "нерекомбінантний" хазяїн стосується організму дикого типу, наприклад бактерії або рослини, які не містять гетерологічну молекулу нуклеїнової кислоти.
Нуклеотиди позначені за їхніми основами за допомогою наступних стандартних скорочень: аденін (А), цитозин (С), тимін (Т) ї гуанін (б). Аналогічним чином амінокислоти позначені за допомогою наступних стандартних скорочень: аланін (Аїа; А), аргінін (Аго; К), аспарагін (Авп; М), аспарагінова кислота (Азр; 0), цистеїн (Сув; С), глутамін (СіІп; 0), глутамінова кислота (Си; Е), гліцин (Су; б), гістидин (Ні; Н), ізолейцин (Пе; 1), лейцин (І еи; І), лізин (І ув; К), метіонін (мес;
М), фенілаланін (Ре; Е), пролін (Рго; Р), серин (5ег; 5), треонін (Тйг; Т), триптофан (Тгр; М), тирозин (Туг; ХУ) і валін (маї; М).
ДОКЛАДНИЙ ОПИС
Даний винахід стосується нових інсектицидних білків, які характеризуються активністю проти твердокрилих, наприклад Оіабгоїїса мігдітега мігуітега (західного кукурудзяного кореневого жука;
МУСР), Оіабгоїїса Багрегі (північного кукурудзяного кореневого жука; МСЕ) і/або бБіабгоїїса ипдесітрипсіага Ппоугагаї (південного кукурудзяного кореневого жука; СК) і/або інших видів
Оіабгоїїса, зокрема Оіабгоїїса мігаїега 7еае (мексиканського кукурудзяного кореневого жука), іМабо колорадського жука. У варіантах здійснення новий інсектицидний білок за даним винаходом може характеризуватися активністю щодо видів лускокрилих. Даний винахід також стосується нуклеїнових кислот, експресія яких зумовлює утворення інсектицидних білків за даним винаходом, а також одержання і застосування інсектицидних білків для контролю комах- шкідників. У варіантах здійснення експресія нуклеїнових кислот зумовлює утворення інсектицидних білків, які можуть застосовуватись для контролю твердокрилих комах, таких як західний, північний і/або південний кукурудзяний кореневий жук, зокрема у випадку експресії у трансгенній рослині, такій як трансгенна рослина кукурудзи. бо Даний винахід додатково охоплює молекулу нуклеїнової кислоти, що містить нуклеотидну послідовність, яка кодує інсектицидний білок за даним винаходом. Нуклеотидна послідовність може бути оптимізована для експресії в бактеріях, таких як Езспегіспіа соїї, або для експресії у рослині, такій як 2еа тауб5. Нуклеотидна послідовність, оптимізована для експресії у гетерологічному організмі, такому як види бактерій, відмінні від тих, з яких вона одержана, або рослина, не існує в природі. В одному аспекті даного варіанта здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить нуклеотидну послідовність під 5ЕО ІЮ МО: 2, 5ЕО ІЮ МО: 4-36, 5ЕО І МО: 73- 83 та/або 5ЕО І МО: 99. Зокрема, ілюстративні рекомендації щодо способів одержання молекул нуклеїнової кислоти, які кодують інсектицидні білки за даним винаходом, можуть бути знайдені у прикладах даної заявки. Фахівцям у даній галузі буде зрозуміло, що в ілюстративних способах одержання інсектицидних білків, охоплених даним винаходом, можуть бути виконані модифікації.
Фахівцеві в даній галузі буде зрозуміло, що трансген для комерційного застосування, такий як молекула нуклеїнової кислоти, яка містить будь-яку із ЗЕО ІЮ МО: 2-36, 5ЕО ІЮ МО: 73-83 або
ЗБО І МО: 99, може характеризуватися відносно незначними модифікаціями щодо послідовності нуклеїнової кислоти для відповідності вимогам державних регулятивних норм.
Такі модифікації не будуть впливати на функцію одержаної молекули, яка буде значною мірою ідентичною 5ЕО ІЮ МО: 2-36, 5ЕО ІО МО: 73-83 та/або 5ЕО ІЮ МО: 99. Фахівцю у даній галузі буде зрозуміло, що модифікована молекула нуклеїнової кислоти буде фактично такою ж, які вихідна молекула, і охоплена даним винаходом.
Даний винахід також охоплює молекулу нуклеїнової кислоти, яка містить (а) нуклеотидну послідовність під будь-яким із 5ЕО ІЮ МО: 2-36, 5БО І МО: 73-83 або 5ЕБО ІЮО МО: 99; (Б) нуклеотидну послідовність, яка являє собою послідовність, на щонайменше 45 95 ідентичну, щонайменше 5095 ідентичну, щонайменше 5595, щонайменше 6095, щонайменше 65 95, щонайменше 70 95, щонайменше 7595, щонайменше 80 95, щонайменше 85 95, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 9295, щонайменше 9395, щонайменше 94 95, щонайменше 95 906, щонайменше 96 96, щонайменше 97 96, щонайменше 98905, щонайменше 99 95 або на 100 95 ідентичну будь-якій із нуклеотидних послідовностей під ЗЕО ІЮ МО: 2-36,
ЗЕО ІЮ МО: 73-83 або 5ЕО ІЮ МО: 99; (с) нуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид, де амінокислотна послідовність поліпептиду містить ЗЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІО МО: 37-69 або 5ЕО ІОЮ
Зо МО: 86-96 і характеризується активністю щодо контролю комах; (4) нуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид, де амінокислотна послідовність поліпептиду на щонайменше 45 95 ідентична, щонайменше 50 95 ідентична, щонайменше 55 9565, щонайменше 60 9565, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 8095, щонайменше 85 95, щонайменше 90 95, щонайменше 91 95, щонайменше 92 95, щонайменше 93 9565, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 9795, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 або на 100 95 ідентична будь-якій із амінокислотних послідовностей під ЗЕО
ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 37-72, 5БО 10 МО: 86-96 або 5ЕО ІО МО: 100; або (є) нуклеотидну послідовність яка є комплементарною нуклеотидній послідовності будь-якого з (а) - (4), наведених вище.
Даний винахід додатково охоплює касету експресії, що містить промотор, функціонально пов'язаний із гетерологічною нуклеотидною послідовністю, яка містить: (а) нуклеотидну послідовність під будь-яким із 5ЕО ІЮ МО: 2-36, 5БО І МО: 73-83 або 5ЕБО ІЮО МО: 99; (Б) нуклеотидну послідовність, яка на щонайменше 45 95 ідентична, щонайменше 50 95 ідентична, щонайменше 55 95, щонайменше 60 95, щонайменше 65 95, щонайменше 70 95, щонайменше 7595, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 91 95, щонайменше 92 95, щонайменше 93 95, щонайменше 94 95, щонайменше 95 95, щонайменше 96956, щонайменше 97 95, щонайменше 9895, щонайменше 9995 або на 100 95 ідентична нуклеотидній послідовності під будь-яким із ЗЕО ІЮ МО: 2-36, 5ЕО ІЮО МО: 73-83 або 5ЕО ІО МО: 99; (с) нуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид, де амінокислотна послідовність
БО поліпептиду містить 5ЕО ІО МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 37-72, 5БЕО 10 МО: 86-96 або 5ЕО ІЮ МО: 100 і характеризується активністю щодо контролю комах; (4) нуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид, де амінокислотна послідовність поліпептиду на щонайменше 4595 ідентична, щонайменше 5095 ідентична, щонайменше 5595, щонайменше 6095, щонайменше 65 965, щонайменше 70 95, щонайменше 75 95, щонайменше 80 95, щонайменше 85 95, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 9295, щонайменше 9395, щонайменше 94 95, щонайменше 95 95, щонайменше 96 956, щонайменше 97 95, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 або на 100 95 ідентична амінокислотній послідовності під будь-яким із ЗЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО
ІО МО: 37-72, 5ЕО ІЮ МО: 86-96 або 5ЕО ІЮ МО: 100; або (є) нуклеотидну послідовність, яка є комплементарною нуклеотидній послідовності будь-якого з (а) - (4), наведених вище. У деяких бо варіантах здійснення даний винахід охоплює касету експресії, що містить гетерологічну молекулу нуклеїнової кислоти, яка містить нуклеотидну послідовність, що кодує поліпептид, при цьому амінокислотна послідовність поліпептиду на щонайменше 93 95 ідентична амінокислотній послідовності під зЕО ІЮ МО: 55, 5ЕО ІЮО МО: 67 або 5ЕО ІЮО МО: 86-91. Касета експресії містить промотор, який є функціонально пов'язаним із гетерологічною нуклеотидною послідовністю і який не існує в природі.
У деяких варіантах здійснення гетерологічна молекула нуклеїнової кислоти в касеті експресії містить нуклеотидну послідовність, що кодує поліпептид, де амінокислотна послідовність поліпептиду являє собою амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮО МО: 72, і де амінокислотний залишок "Х" може являти собою будь-який амінокислотний залишок. У деяких варіантах здійснення гетерологічна молекула нуклеїнової кислоти в касеті експресії містить нуклеотидну послідовність, що кодує поліпептид, на щонайменше 9395 ідентичний амінокислотній послідовності під «ЕО ІЮ МО: 100.
Даний винахід також охоплює рекомбінантні вектори або конструкції, які також можуть називатись векторами або конструкціями, що містять касети експресії і/або молекули нуклеїнової кислоти за даним винаходом. У таких векторах нуклеїнові кислоти переважно знаходяться в касетах експресії, що містять регуляторні елементи для експресії нуклеотидних молекул у клітині-хазяїні, що здатна експресувати нуклеотидні молекули. Такі регуляторні елементи зазвичай містять промотор і сигнали термінації і переважно також містять елементи, що надають можливість виконувати ефективну трансляцію поліпептидів, кодованих нуклеїновими кислотами за даним винаходом. Вектори, що містять нуклеїнові кислоти, можуть бути здатні до реплікації у конкретних клітинах-хазяїнах, переважно як позахромосомні молекули, і таким чином використовуються для ампліфікації нуклеїнових кислот за даним винаходом у клітинах-хазяїнах. Даний винахід також охоплює клітину-хазяїна, яка містить касету експресії або молекулу нуклеїнової кислоти за даним винаходом. В одному варіанті здійснення клітинами-хазяїнами для таких векторів є мікроорганізми, такі як бактерії, зокрема Васйив5
Іигіпдієпвіз або Е. сої, або такі як гриби, як, наприклад, дріжджі. В іншому варіанті здійснення клітини-хазяїни для таких рекомбінантних векторів являють собою ендофіти або епіфіти. У ще одному варіанті здійснення такі вектори є вірусними векторами і застосовуються для реплікації нуклеотидних послідовностей у конкретних клітинах-хазяїнах, наприклад у клітинах комах або
Зо рослинних клітинах. Рекомбінантні вектори також використовуються для трансформації нуклеотидних молекул за даним винаходом у клітини-хазяїни, внаслідок чого нуклеотидні молекули стабільно інтегруються в ДНК трансгенного хазяїна. В одному варіанті здійснення трансгенним хазяїном є рослина, наприклад однодольна рослина, така як рослина кукурудзи або рослина пшениці. У варіантах здійснення трансгенна рослина-хазяїн являє собою дводольну рослину, таку як рослина сої або рослина бавовнику.
В іншому варіанті здійснення щонайменше одна з нуклеїнових кислот за даним винаходом вводиться у відповідну касету експресії, що містить промотор і сигнал термінації. Експресія нуклеїнової кислоти може бути конститутивною, або може застосовуватись індуцибельний промотор, що відповідає на різні типи стимулів для ініціації транскрипції. В іншому варіанті здійснення клітина, у якій експресується інсектицидний білок за даним винаходом, являє собою мікроорганізм, такий як вірус, бактерії або гриб. У ще одному варіанті здійснення вірус, такий як бакуловірус, містить у своєму геномі нуклеїнову кислоту за даним винаходом і експресує великі кількості відповідного інсектицидного білка після зараження відповідних еукаріотичних клітин, які придатні для реплікації вірусу і експресії нуклеїнової кислоти. Одержаний таким чином інсектицидний білок застосовується як інсектицидний засіб. Альтернативно бакуловіруси, сконструйовані з можливістю містити нуклеїнову кислоту, застосовуються для інфікування комах іп мімо, і вони знищують їх або за допомогою експресії інсектицидного токсину, або за допомогою комбінації вірусної інфекції і експресії інсектицидного токсину. У додатковому варіанті здійснення даний винахід також охоплює спосіб одержання поліпептиду з інсектицидною активністю, який включає культивування клітини-хазяїна за умов, за яких експресується молекула нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид.
Бактеріальні клітини також є клітинами-хазяїнами для експресії нуклеїнових кислот за даним винаходом. В одному варіанті здійснення застосовуються непатогенні симбіотичні бактерії, здатні жити і розмножуватись у рослинних тканинах, так звані ендофіти, або непатогенні симбіотичні бактерії, здатні колонізувати філосферу або ризосферу, так звані епіфіти. Такі бактерії включають бактерії родів Адгобасієгійт, АїІсаїїдепев, Агозрійит, Агоїобасієг, Васійшв,
Сіамібасієї, Епіегобасієг, Егміпіа, Ріамобасієг, КіІебзієІа, Реепдотопа5, ВПі2гобійт, 5етаїйа, зігеріотусев і Хапіпотопа5. Симбіотичні гриби, такі як Т/ісподепта і Сійосіадійт, також є можливими хазяїнами для експресії нуклеїнових кислот за даним винаходом для тієї ж мети. бо Методики для цих генетичних маніпуляцій є спеціальними для різних доступних хазяїнів і відомі з рівня техніки. Наприклад, вектори експресії ркК223-3 і ркКК223-2 можуть використовуватись для експресії гетерологічних генів у Е. соїї або у транскрипційному, або трансляційному злитті під дією промотора їас або ігсо. Для експресії оперонів, що кодують декілька ОКЕ, найпростішою процедурою є введення оперона у вектор, такий як рКК223-3, у вигляді транскрипційного злиття, що дає можливість застосовувати когнатний сайт зв'язування рибосом гетерологічних генів. Методики для надмірної експресії у грампозитивних видів, таких як Васіїїн5, також відомі з рівня техніки і можуть використовуватись у контексті даного винаходу (Омах еї аї. в Іпаивігіа! Місгоогдапізт5: Вазіс апа Арріїєй МоїІесшаг Сепеїіс5, Ед». Вакя еї аї.,
Атегісап Зосіеїу тог Місгобіоїоду, УМазпіпдіюп (1993)). Альтернативні системи надмірної експресії базуються, наприклад, на дріжджових векторах і включають використання Ріспіа, засспаготусеб5 і Кісумеготусев5 (Згеекгізппа в Іпаивігіаи тісгоогдапієт»е5: Брабтіс апа арріїєй тоїесшіаг депеїїсв, Вай;, Недетап, апа БЗКаїга ейв., Атегісап Босієїу ог Місгобіоіоду,
Ммазпіпдатоп (1993); ЮОедиіп 4 Ваїте, Віоїесппоїоду 12:173-177 (1994); мап деп Вегу есеї аї,
ВіотесппоЇоду 8:135-139 (1990)).
Деякі інсектицидні білюи вже експресували в рослинах, і насіння таких рослин щорічно продається фермерам для застосування в здійсненні контролю різних комах-шкідників. Такі самозахищені інсектицидні продукти розглядаються та реєструються різними регулювальними органами, включаючи наприклад Агентство з охорони навколишнього середовища США (ЕРА).
Вплив при надходженні з їжею є основним шляхом, яким люди можуть піддаватися впливу інсектицидних білків, що експресуються трансгенними рослинами. Гостра пероральна токсичність для ссавців і перетравлюваність білка є кінцевими точками оцінки ризику для здоров'я людини, що визначаються ЕРА. Додатковим науковим свідченням безпеки інсектицидних білків є те, що вони, як було показано, швидко розщеплюються іп міїго під дією штучного шлункового соку. Наприклад, результати семи аналізів іп міо, проведених з ілюстративними білками Сту!, Сту2 і Сгу3, показали, що білки швидко розщеплюються, як правило, протягом 30 секунд. Ці результати підтверджують більш широкий висновок про те, що представники цих груп білків Сгу (які мають значну ідентичність амінокислотних послідовностей), імовірно, швидко розщеплюються після вживання людиною. Подібні тести проводять для кожного трансгенного білка, експресованого в рослинах. Інша сфера розгляду
Зо полягає у визначенні того, чи можуть інсектицидні білки спричиняти алергічну реакцію.
Продемонстроване швидке розщеплення трансгенного інсектицидного білка іп міго має зводити до мінімуму можливість такого явища. Для порівняння, харчові алергени зазвичай піддаються розпаду в іп міго моделі шлунково-кишкового тракту, тоді як звичайні білки їжі, для яких не показана алергенність, швидко розщеплюються у штучному шлунковому соку (Меїсаї ге еї аї., 1996).
За допомогою аналізу з використанням штучного шлункового соку (ЗОРЕ) вимірюють іп міго перетравлюваність тестованого білка у жорстко контрольованих умовах, характерних для верхнього відділу травного тракту ссавців. Наприклад, одержаний у бактеріях тестований білок
Сгу (в концентрації 0,5-5 мг/мл) піддавали впливу ферменту пепсину (зі слизової оболонки шлунка свині, розчиненого в 2 мг/мл Масі, рН 1,2) у співвідношенні 10 одиниць активності пепсину/мкг тестованого білка протягом періоду часу, що становить одна година, при 37 "с.
Зразки відбирали в моменти часу 1, 2, 5, 10, 30 ї 60 хвилин, і відразу ж блокували шляхом додавання попередньо нагрітого (957С - 2 хвилини) стоп-буфера (6595 0,5 М бікарбонату натрію, рН 11, 35 95 трициновий завантажувальний буфер) для негайної інактивації пепсину, і знову нагрівали протягом додаткових 5 хвилин. Після закінчення аналізу зразки, взяті у певні моменти часу, і контролі (тільки тестований білок, тільки пепсин) досліджували за допомогою
ЗО5-РАСЕ в гелі з 10-20 95 трис-гліцину (при цьому пептиди були візуально помітні аж до 1 кДа) для відстеження кінетики й рівня перетравлювання, здійснюваного пепсином. Якщо тестований білок або значний поліпептидний фрагмент тестованого білка є візуально помітним, наприклад у моменти часу 5 та/або 10 хвилин, то він є неперетравлюваним або не повністю перетравлюваним в аналізі з використанням 5ОЕ і може бути якісно оцінений як "ні" або "неперетравлюваний". Якщо тестований білок і будь-який значний поліпептидний фрагмент не є візуально помітним, наприклад у момент часу 5 хвилин, то він є перетравлюваним в аналізі з використанням 5ОЕ і може бути якісно оцінений як "так" або "перетравлюваний".
Даний винахід також охоплює поліпептид, що містить амінокислотну послідовність, на щонайменше 45 95 ідентичну, щонайменше 50 95 ідентичну, щонайменше 55 95, щонайменше 6096, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 80 95, щонайменше 85 95, щонайменше 90 95, щонайменше 92 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 965, щонайменше 99 95 ідентичну або на 100 95 ідентичну будь-якій із 560 ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ 60 МО: 37-72, 5ЕБЕО І МО: 86-96 або 5ЕБО ІЮО МО: 100 і яка додатково містить уведений сайт розщеплення протеазою. Уведений сайт розщеплення протеазою не зустрічається у природі й вводиться у поліпептидну послідовність у результаті мутації за типом заміни або в результаті мутації за типом вставки або делеції. Уведений сайт розщеплення протеазою може бути введений шляхом вставки щонайменше одного лейцинового залишку в поліпептидну послідовність, що містить будь-яку із БЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮО МО: 37-72, 5ЕО ІЮ МО: 86-96 або
ЗЕО ІЮО МО: 100. Введена мутація може дестабілізувати поліпептид таким чином, що протеаза може одержувати доступ до сайту розщеплення, до якого вона раніше не мала доступу внаслідок щільної й/або стабільної укладки білка або стеричної невідповідності. Введений сайт розщеплення протеазою може являти собою введену мутацію у поліпептидній послідовності, яка розпізнається протеазою, такою як хімотрипсин, трипсин або пепсин, як сайт протеолітичного розщеплення. У деяких варіантах здійснення введений сайт розщеплення протеазою може змінювати існуючий сайт розщеплення протеазою таким чином, що він розпізнається іншою протеазою. Сайти розщеплення протеазою для хімотрипсину, трипсину й пепсину широко відомі з рівня техніки. Хімотрипсин переважно розщеплює пептидні амідні зв'язки, у яких із карбоксильної сторони амідного зв'язку (у положенні Р1) розташована велика гідрофобна амінокислота (тирозин, триптофан і фенілаланін). Трипсин розщеплює пептидні ланцюги головним чином із карбоксильної сторони амінокислот лізину або аргініну, за винятком випадків, коли після якої-небудь із них розташований пролін. Пепсин є найбільш ефективним при розщепленні пептидних зв'язків між огідрофобними і переважно ароматичними амінокислотами, такими як фенілаланін, триптофан і тирозин. Ці сайти розщеплення є переважними сайтами розщеплення і не передбачають усі сайти розщеплення, розпізнавані хімотрипсином, трипсином або пепсином, і, крім того, не передбачають усі сайти розщеплення для всіх протеаз.
Прикладом поліпептиду, сконструйованого таким чином, що він містить уведений сайт розщеплення протеазою, є варіант С398І. МуосазсткУм (ЗЕО ІЮО МО: 55). У результаті цієї мутації за типом заміни мотив змінюється з "МКОСМУ5" на "МКОІ М5". Цей уведений сайт розщеплення протеазою може розпізнаватися пепсином та/або хімотрипсином і відсутній у послідовності білка МуМоод5СЕМУ дикого типу. У деяких варіантах здійснення введений сайт розщеплення протеазою може знаходитися в сайті мутації або поруч із ним, наприклад у залишках 388-408
Зо поліпептиду. З рівня техніки добре відомо, що цистеїнові залишки в білках часто ковалентно зв'язані з іншими цистеїновими залишками з утворенням дисульфідних зв'язків. Дисульфідні зв'язки відіграють важливу роль в укладці й стабільності деяких білків. Отже, варіант С398І.
УмМосд5СКУУ може мати змінену або менш стабільну третинну структуру порівняно із М/осазсСткум дикого типу. У деяких варіантах здійснення введений сайт розщеплення протеазою може бути розташований дистально щодо введеної мутації. Наприклад, уведена мутація С398Ї може "послабляти" тривимірну укладку поліпептиду УУооа5СЕМУ, роблячи тим самим сайт розщеплення протеазою, який раніше був недоступним (а отже не розщеплювався), доступним для протеази. Це приводить до того, що в результаті введення мутації вводиться сайт розщеплення протеазою, який не існував у незміненому поліпептиді. У деяких варіантах здійснення введена мутація та/"або введений сайт розщеплення протеазою розташовані між амінокислотними залишками 1-490 у будь-якій із 5ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 37-69, 5ЕО ІЮО МО: 72 або 5ЕО ІЮ МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введена мутація та/або введений сайт розщеплення протеазою розташовані між амінокислотними залишками 100-490 у будь-якій із 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮО МО: 37-69, 5ЕО ІЮ МО: 72 або 5ЕО ІЮ МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введена мутація та/або введений сайт розщеплення протеазою розташовані між амінокислотними залишками 190-490 у будь-якій із ФЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 37-69, 5БО ІЮ МО: 72 або 5ЕБЕО І МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введена мутація та/або введений сайт розщеплення протеазою розташовані між амінокислотними залишками 190-310 у будь-якій із «ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 37-69, 5ЕО ІЮ МО: 72 або 5ЕО ІО
МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введена мутація та/або введений сайт розщеплення протеазою розташовані між амінокислотними залишками 190-210 у будь-якій із
ЗЕО ІЮ МО: 1, БО ІО МО: 37-69, 5ЕО ІО МО: 72 або 5ЕО ІО МО: 86-96. В інших варіантах здійснення введена мутація розташована між амінокислотними залишками 300-490 у будь-якій із 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІО МО: 37-69, 5ЕО ІЮ МО: 72 або 5ЕО ІЮ МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введена мутація та/або введений сайт розщеплення протеазою розташовані між амінокислотними залишками 300-400 у будь-якій із ФЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 37-69, ЗЕО ІЮ МО: 72 або 5ЕО І МО: 86-96.
Уведений сайт розщеплення протеазою може змінювати специфічність щодо протеази в цьому сайті, наприклад, він може змінювати сайт протеолітичного розщеплення трипсином на бо сайт протеолітичного розщеплення хімотрипсином. Наприклад, у варіанті К406Ї УуМосазсСтфМУу
(ЗБЕО І МО: 45) сайт розщеплення трипсином може змінюватися на сайт розщеплення хімотрипсином або пепсином. У деяких варіантах здійснення введений сайт розщеплення протеазою розташований між амінокислотними залишками 1-490 у будь-якій із «ЕО ІЮО МО: 1,
ЗЕО ІЮО МО: 37-69, 5ЕО ІЮО МО: 72 або 5ЕО ІЮО МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введений сайт розщеплення протеазою розташований між амінокислотними залишками 100-490 у будь-якій із БЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО ІЮ МО: 37-69, 5ЕО ІЮ МО: 72 або 5ЕО ІЮ МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введений сайт розщеплення протеазою розташований між амінокислотними залишками 190-490 у будь-якій із «ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 37-69, 5ЕО І МО: 72 або 5ЕО ІО МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введений сайт розщеплення протеазою розташований між амінокислотними залишками 190-400 у будь-якій із «ЕО ІЮ МО: 1,
ЗЕО ІЮО МО: 37-69, 5ЕО ІЮО МО: 72 або 5ЕО ІЮО МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введений сайт розщеплення протеазою розташований між амінокислотними залишками 190-310 у будь-якій із БЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО ІЮ МО: 37-69, 5ЕО ІЮ МО: 72 або 5ЕО ІЮ МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введений сайт розщеплення протеазою розташований між амінокислотними залишками 190-210 у будь-якій із «ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 37-69, 5ЕО І МО: 72 або 5ЕО ІЮ МО: 86-96. В інших варіантах здійснення введений сайт розщеплення протеазою розташований між амінокислотними залишками 300-490 у будь-якій із ЗЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО ІЮ МО: 37-69, 5ЕО ІЮ МО: 72 або 5ЕО ІЮ МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введений сайт розщеплення протеазою розташований між амінокислотними залишками 300-400 у будь-якій із
ЗЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 37-69, 5ЕО ІЮО МО: 72 або 5ЕО ІЮ МО: 86-96. У додатковому варіанті здійснення введений сайт розщеплення протеазою, який змінює специфічність щодо протеази, може бути розташовано між відповідними амінокислотними залишками 313-490 у будь-якій із
ЗЕО ІО МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 37-69 або 5ЕО ІЮ МО: 86-96.
Даний винахід також охоплює поліпептид, що містить амінокислотну послідовність, на щонайменше 45 95 ідентичну, щонайменше 50 95 ідентичну, щонайменше 55 95, щонайменше 6096, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 80 95, щонайменше 85 95, щонайменше 90 95, щонайменше 92 95, щонайменше 95 95, щонайменше 98 965, щонайменше 99 95 ідентичну або на 100 95 ідентичну будь-якій із 560 ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ
МО: 37-69 або 5ЕО ІЮ МО: 86-96, і яка додатково містить введену мутацію, яка поліпшує
Зо перетравлюваність в аналізі з використанням 5ОЕ порівняно із поліпептидом, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮО МО: 1. Мутація може являти собою мутацію за типом заміни, вставку або делецію. Мутація може являти собою вставку щонайменше одного лейцинового залишку.
Даний винахід також включає спосіб поліпшення перетравлюваності поліпептиду, на щонайменше 4595 ідентичного, щонайменше 5095 ідентичного, щонайменше 55 965, щонайменше 60 о, щонайменше 65 96, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 80956, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9295, щонайменше 95 95, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 ідентичного або на 100 95 ідентичного будь-якій із «»ЕО
ІО МО: 1, 5ЕО ІО МО: 37-69 або 5ЕО ІО МО: 86-96, що включає введення щонайменше однієї мутації в амінокислотну послідовність поліпептиду. У варіантах здійснення ця введена мутація поліпшує перетравлюваність поліпептиду в аналізі з використанням 50. Мутація може поліпшувати перетравлюваність завдяки введенню сайту розщеплення протеазою. В інших варіантах здійснення мутація може поліпшувати перетравлюваність завдяки зміні специфічності щодо протеази в цьому сайті. Наприклад, таким чином те, що могло бути сайтом для хімотрипсину або трипсину, зазнає мутації з утворенням сайту для пепсину. В інших варіантах здійснення мутація може дестабілізувати білок таким чином, що сайт стає доступним для розщеплення протеазою. Сайт, що стає доступним для протеази, може розташовуватися дистально щодо введеної мутації. У переважних варіантах здійснення мутація не змінює або у значній мірі не змінює активність або інсектицидну активність поліпептиду. У деяких варіантах здійснення поліпептид з уведеною мутацією характеризується щонайменше 50 96, щонайменше 5595, щонайменше 6095, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 75 95, щонайменше 80 95, щонайменше 85 95, щонайменше 90 95, щонайменше 92 9565, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 97 95, щонайменше 9895 або щонайменше 99 95 від інсектицидної активності УМооа5СКУУ. Даний спосіб пояснений у прикладах даного опису, де наприклад було виявлено, що варіанти С3981, с398У ї 0397-І еш-Ї еи-С398 УумосазсСтМу характеризуються поліпшеною перетравлюваністю в аналізі з використанням 5СОБЕ. Вони також зберігали дуже високу інсектицидну активність.
У деяких варіантах здійснення способу, описаного вище, введена(-ні) мутація(-ї) може(-уть) бути розташованас(-ї) між амінокислотними залишками 1-490 у будь-якій із ФЕО ІЮО МО: 1, ЗЕО І 60 МО: 37-69, 5ЕО ІЮО МО: 72 або 5ЕО ІЮО МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введена(-
ні) мутація(-ї) може(-уть) бути розташована(-ї) між амінокислотними залишками 100-490 у будь- якій із БЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО ІЮ МО: 37-69, 5ЕО ІЮ МО: 72 або 5ЕО ІО МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введена(-ні) мутація(-ї) може(-уть) бути розташована(-ї) між амінокислотними залишками 190-490 у будь-якій із «ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 37-69, 5ЕО І МО: 72 або 5ЕО ІЮ МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введена(-ні) мутація(-ї) може(-уть) бути розташована(-ї) між амінокислотними залишками 190-400 у будь-якій із «ЕО ІО МО: 1, 5БЕО
ІЮ МО: 37-69, 5ЕБЕО ІЮО МО: 72 або 5ЕО ІО МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введена(с-ні) мутація(-ї) може(-уть) бути розташована(-ї) між амінокислотними залишками 190- 310 у будь-якій із зЗЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 37-69, 5ЕО ІЮ МО: 72 або 5ЕО ІЮ МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введена(-ні) мутація(-ї) може(-уть) бути розташована(-ї) між амінокислотними залишками 190-210 у будь-якій із «ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 37-69, 5ЕО І МО: 72 або 5БЕО ІЮ МО: 86-96. В інших варіантах здійснення введена(-ні) мутація(-ї) може(-уть) бути розташованас-ї) між амінокислотними залишками 300-490 у будь-якій із ЗЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮ
МО: 37-69, 5ЕО ІЮО МО: 72 або 5ЕО ІЮО МО: 86-96. У додаткових варіантах здійснення введена(- ні) мутація(-ї) може(-уть) бути розташованас(-ї) між амінокислотними залишками 300-400 у будь- якій із БЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО ІЮ МО: 37-69, ЗЕО ІЮО МО: 72 або 5ЕО ІЮ МО: 86-96. У додатковому варіанті здійснення введена(-ні) мутація(-ї) може(-уть) бути розташована(-ї) між відповідними амінокислотними залишками 313-490 у будь-якій із ЗЕО ІО МО: 1 або 5ЕО ІО МО: 37-69. В інших варіантах здійснення мутація(-ї) може(-уть) бути введена(-ї) між амінокислотними послідовність 313-490 у БЕО ІЮ МО: 1.
В інших варіантах здійснення мутація може бути введена щодо або поряд із С398 у ЗЕО ІЮ
МО: 1. У додаткових варіантах здійснення мутація може являти собою С3981, С398І, СЗО98М,
Сс3980, С398А, С398Е, СЗ398М, С3985, СЗ398ММ або С398У. В інших варіантах здійснення мутація може являти собою вставку або делецію амінокислотного залишку, таку як, наприклад, вставка щонайменше одного лейцинового залишку. Цей(ці) залишок(-шки) може(-уть) бути прилягаючим(-и) до С398 або сусіднім(-и) щодо нього у 5ЕО ІЮ МО: 1, як, наприклад, у варіантах Ю397-ІЇ еи-С398, 0397-І еи-І еи-С398, С398-І еи-М399, С398-І єи-І еи-М399 або 0397-
Ї еи-С398-І. Муосазстму, для всіх із яких було виявлено, що вони характеризуються поліпшеною перетравлюваністю в аналізі з використанням 5. Вони також зберігали дуже високу
Зо інсектицидну активність (див. приклади). Лейцинові залишки також можуть бути вставлені проксимально щодо С398, де "проксимально" може означати на відстані щонайменше 1, щонайменше 2, щонайменше 4, щонайменше б, щонайменше 8, щонайменше 10 або щонайменше 20 амінокислот від С398.
Інсектицидні білки за даним винаходом характеризуються активністю щодо контролю комах під час тестування проти комах-шкідників у біоаналізах В одному варіанті здійснення інсектицидні білки за даним винаходом активні проти твердокрилих і/або лускокрилих комах.
Фахівцеві в даній галузі буде зрозуміло, що білок за даним винаходом може характеризуватися іншим діапазоном інсектицидної активності порівняно з іншими білками за даним винаходом. У деяких варіантах здійснення мутантний варіант УмМооазСКМУ може характеризуватися інсектицидною активністю щодо більш широкого діапазону комах-шкідників, як наприклад щодо більшої кількості видів твердокрилих або лускокрилих порівняно з іншими варіантами
УмМосазСтМУ. В інших варіантах здійснення варіант Му/осазСКУУ може характеризуватися інсектицидною активністю щодо видів лускокрилих, але не щодо видів твердокрилих. У деяких варіантах здійснення варіант УУосахСКМу може характеризуватися активністю, що являє собою більш широкий діапазон інсектицидної активності щодо видів твердокрилих або лускокрилих порівняно із немодифікованим УуосазсСЕмМУ (ЗЕО ІО МО: 1).
Комахи ряду І ерідорієга включають без обмеження будь-яку відому нині або ідентифіковану пізніше комаху, яка класифікується як лускокрила, зокрема ті види комах, які віднесені до підрядів 7еидіоріега, Сіоб5б5айа і Неїегораїйтіпа і будь-яких їх комбінацій. Ілюстративні лускокрилі комахи включають без обмеження Озігіпіа 5рр., такий як О. пибіїайй5 (вогнівка кукурудзяна); Рішеїйа 5рр., такий як Р. хуїозієПа (капустяна міль); зродоріега 5рр., такий як 5. їгидірегча (совка трав'яна), 5. огпіподаїїї (совка смугаста жовта), 5. ргаеїйса (західна совка смугаста жовта), 5. егідапіа (південна совка) і 5. ехідца (совка мала); Адгоїї 5рр., такий як А. ірзіюп (совка-іпсилон), А. зедешт (озима совка звичайна), А. діадіагіа (озима совка роду Адгоїїі5) і А. огподопіа (совка прямокутна); Зігіасоєіа 5рр., такий як 5. аірісовіа (західна бобова совка);
Неїїсомегра 5рр., такий як Н. леа (совка кукурудзяна), Н. рипсіїдега (совка бавовникова австралійська), 5. ІШогаїїх (совка бавовнику єгипетського) і Н. аптідега (совка бавовникова);
Неїіоїпіз 5рр., такий як Н. мігезсеп5 (тютюнова листокрутка); Оіайаєа 5рр., такий як 0. дгапаїозеїіа (вогнівка кукурудзяна південно-західна) і О. засспагаїї5 (точильник стебел цукрової бо тростини); Тгіспоріизіа 5рр., такий як Т. пі (совка капустяна); 5езатіа зрр., такий як 5.
попадгоїдеє (метелик кукурудзяний середземноморський); Ресіпорпога 5рр., такий як Р. до5зурієїа (рожевий коробковий хробак); Соспуїїє в5рр., такий як С. Ппозре5 (смугаста соняшникова міль); Мапаиса 5рр., такий як М. зехіа (тютюновий бражник) і М. дпиіпдиетасшаа (бражник п'ятикрапковий); ЕіІазхтораїриз 5рр., такий як Е. ІдпозейПиз5 (точильник стебел кукурудзи малий); Рзешчаоріизіа 5рр., такий як Р. іпсішдеп5 (соєва совка); Апіїсагзіа 5рр., такий як А. деттаїгаїїє (совка оксамитових бобів); Ріаїйурепа 5рр., такий як Р. 5сабга (совка конюшинова);
Ріегіє 5рр., такий як Р. Бргаззісає (білянка капустяна), Рараірета 5рр., такий як Р. пебгі5 (точильник Рараїірета пербгіз); Рзецдаїейа 5рр., такий як Р. ипірипсіа (совка лугова звичайна);
Регідгота 5рр., такий як Р. заийсіа (совка стокроткова); Кеїїегіа 5рр., такий як К. ІусорегвісейПа (томатна гостриця); Аподеїа 5рр., такий як А. гарає (білянка ріпна); Рітогітаєа 5рр., такий як Р. орегсціейа (картопляна міль); Стутодез 5рр., такий як С. демазіаг (скляниця); Реїба 5рр., такий як РЕ. дисеп5 (гусінь совки Рейа 5!йбБодоїйіса), і будь-яку комбінацію вищевказаних. В одному аспекті даного варіанта здійснення інсектицидні білки за даним винаходом активні проти совки- іпсилон, вогнівки цукрової тростини і/або вогнівки кукурудзяної південно-західної.
Комахи ряду СоіІеорієга включають без обмеження будь-яку твердокрилу комаху, яка відома на сьогодні або яка буде ідентифікована пізніше, зокрема комах із підрядів Агспо5іетага,
Мухорпада, Адерпада і Роїурпада, а також будь-якої їх комбінації.
В одному аспекті даного варіанта здійснення інсектицидні білки за даним винаходом активні проти Оіабгоїїса 5рр. Ріабгоїїса являє собою рід жуків ряду СоіІеорієга, що зазвичай називається "кукурудзяними кореневими жуками" або "огірковими жуками". Типові види Ріабгоїїса включають без обмеження Оіабгоїїса Багбегі (північного кукурудзяного кореневого жука), 0. мігдітега мігдітега (західного кукурудзяного кореневого жука), 0. ипаесітрипсіаїа Ппоулагаїй (південного кукурудзяного кореневого жука), Ю. ранйеага (жука-блішку облямованого), Ю. ипаесітрипсіаїа ипаесітрипсіага (жука-блішку одинадцятикрапкового), О. 5ідпітісага (З-крапкового листоїда), 0. зресіоза (діабротику особливу), Ю. мігуїега 7леае (мексиканського кукурудзяного кореневого жука), 0. репіепві5, Ю. сгієтага, О. сигміріиєїаіага, О. аї5бітійв5, О. еІедапіціа, ОЮО. етогейапв, 0. дгатіпеа, 0. пізрапіоє, 0. Іетпівсаїа, 0. Іпвіеуї, О. тіПегі, О. питтиіагів, Ю. оссіизаї, О. ротесеа, р. зсшіеїйІата, О. кібіаїї5, О. ігавсіага і 0. мігідиа і будь-яку їх комбінацію.
Інші необмежувальні приклади твердокрилих комах-шкідників відповідно до даного винаходу
Зо включають І ерііпоїагза 5рр., такий як ГІ... десетіїпеада (колорадський жук); Спгузотеїа 5рр., такий як С. зсогіріа (листоїд тополевий); НуроїШепетивз 5рр., такий як Н. патреї (жук кавовий); зпорпйи5 5рр., такий як 5. 7еатаїй5 (маїсовий довгоносик); Еріїгіх 5рр., такий як Е. Пігпіреппів (жук-блішка шорстка) і Е. сиситегі5 (блішка картопляна); Рпуїоїгеїа 5рр., такий як Р. сгисітегає (блішка хрестоцвітна) і Р. ризійа (західна чорна блішка); Апіпопотих 5рр., такий як А. ецдепії (перцевий довгоносик); Нептісгеріди5 5рр., такий як Н. тетпопіиз (дротяники); Меїапоїш5 5рр., такий як М. соттипів (дротяник); Сешогпуспиз 5рр., такий як С. азвітіїї5 (ріпаковий насіннєвий скритнохоботник); РпуПоїгеїа 5рр., такий як Р. сгисітегає (блішка хрестоцвітна); Аеои5 5рр., такий як А. теїїШив (дротяник); АеоЇй5 5рр., такий як А. тапси5 (пшеничний дротяник); Ногібіопоїш5 5рр., такий як Н. ипіегії (піщаний дротяник); Зрпепорпогиз 5рр., такий як 5. таїйді5 (довгоносик маїсовий), 5. 7еає (довгоносик тимофіївський), 5. рагишив5 (довгоносик тонконогу лучного) і 5. сайовзив (довгоносик бульбочковий еспарцетовий); РПуПорпада 5рр. (личинки хрущів);
Спаеїоспета 5рр., такий як С. риїїсагіа (блішка стеблова хлібна); Роріййіа 5рр., такий як Р. аропіса (японський жук); Еріасппа 5рр., такий як Е. магімевії5 (мексиканський бобовий жук);
Сегоїота 5рр., такий як С. ігіїигсафїє (жук-листоїд); Ерісаша 5рр., такий як Е. ревійега і Е.
Іетпізсаїа (наривники), і будь-яку комбінацію вищевказаних.
Інсектицидні білки за даним винаходом також можуть бути активними проти напівтвердокрилих, двокрилих, Іуди» 5рр. і/або інших колючих і сисних комах, наприклад із ряду
Огіпоріега або Тпузапоріега. Комахи у ряді ЮОіріега включають без обмеження будь-яку двокрилу комаху, відому нині або ідентифіковану пізніше, зокрема без обмеження ГГ іпіотуа 5рр., такий як Г. їгтоїїї (листовий мінер) і Г. займає (листовий мінер овочів); ЗсгобіраІршіа 5рр., такий як 5. архоЇша (листовий мінер томатів); Оеїїа 5рр., такий як 0. ріайшга (личинка росткової мухи), 0. Бгаззісає (личинка весняної капустяної мухи) і О. гадісчт (муха капустяна весняна);
Рзісйа 5рр., такий як Р. гозає (муха морквяна); Тейапорз5 5рр., такий як Т. туораейтгптів (личинка попелиці бурякової), і будь-яку комбінацію вищевказаних.
Комахи у ряді Опіпоріега включають без обмеження будь-яку відому нині або ідентифіковану пізніше прямокрилу комаху, зокрема без обмеження Меїапоріи5 5рр., такий як М. айегепіаїї5 (кобилка відмітна), М. Тетитибгит (кобилка червононога), М. ріміНайшв5 (кобилка двосмугова) і будь-яку їх комбінацію.
Комахи у ряді Тпузапоріеєга включають без обмеження будь-яку відому нині або 60 ідентифіковану пізніше бахромчатокрилу комаху, зокрема без обмеження Ргапкіїпіва 5рр.,
такий як РЕ. оссідепіаїїє (західний квітковий трипс) і Е. Тиса (тютюновий трипс); і ТНгір5 5рр., такий як Т. їарасі (цибулевий трипс), Т. раїті (пальмовий трипс), і будь-яку комбінацію вищевказаних.
Інсектицидні білюим за даним винаходом також можуть бути активними проти нематод.
Використовуваний у даному документі термін "нематода" охоплює будь-який відомий нині або ідентифікований пізніше організм, який класифікований у царстві тварин, тип нематоди, зокрема без обмеження нематоди у межах класу Адепорпогеа (зокрема, наприклад, ряди Епоріїда,
ІбоЇайтіда, Мопопспіда, Оогуїаіїтіда, Тиіспосернаїйда, Мептіїйіда, Мигзрісеїда, Агаєоїіаітіда,
Спготадогіда, Оезтоз5соїесіда, Оехітодогіда і Моппузіегіда) і/або класу Зесегпепієа (зокрема, наприклад, ряди КПпарайа, Зігопдуїїда, Абвсагідіда, Зрігигіда, Сатайапіда, Оіріода:єіегіда,
Туіепспіда і АрпеІепспіда).
Нематоди включають без обмеження паразитичні нематоди, такі як бульбочкові нематоди, цистоутворюючі нематоди і/або ранячі нематоди. Ілюстративні роди нематод відповідно до даного винаходу включають без обмеження МеїПІоідодупе (бульбочкові нематоди), Неїегодега (цистоутворюючі нематоди), СіоБродега (цистоутворюючі нематоди), Кадорпоїи5 (риючі нематоди), Коїуїепспшіи5 (брунькоподібні нематоди), РгаїуїФепспиє (ранячі нематоди),
АрпеїІепспоїдез (нематоди листові), Неїїсоїуїюепспих (нематоди спіральні), НоріоЇайїтив (ланцетоподібні нематоди), Рагаїгісподогих5 (нематоди, що спричиняють тупокінцевість коренів),
Гопдідогих, Масоббри5 (несправжні бульбочкові нематоди), Зибапдиіпа, ВеїІопіайтиє5 (жалячі нематоди), СтісопетейПа, Стісопетоїде5 (кільцеві нематоди), ЮОйуепспив5, Ооїїсподогив,
Нетістісопетоїіде5, Нептісусіорпога, НігзсПптапієїїа, Нурзорегіпе, Масгорозіпопіа, Меїпіцв,
Рипсіодега, ОиіпізциЇсіи5, ЗсщейПопета, Хірпіпета (кинджальні нематоди), Туепспогпупспив5 (карликові нематоди), Туіепспиіи5, ВигзарпеІепспиє5 (круглі кишкові черви) і будь-яку їх комбінацію.
Типові паразитичні нематоди рослин відповідно до даного винаходу включають без обмеження Веїопоїайтиє дгасіїє, Веїопоїайтиє5 Іопдісацдай5, Вигхарпеіепспи5 хуїорпйи5 (нематоду деревини хвойних порід), Стісопетоїде5 огпайа, Ойуіепспи5 аевзігисіог (нематоду коренів картоплі), ЮОйуїепспиє аїрзасі (стеблову і цибулеву нематоду), Сіободега раїїда (картопляну цистоутворюючу нематоду), Сіородега го5іоспіепзіз (золотисту картопляну
Зо нематоду), Неїегодега діусіпез (соєву цистоутворюючу нематоду), Неїегодега зспасптції (цистоутворюючу нематоду цукрового буряка); Неїегодега 7еае (кукурудзяну цистоутворюючу нематоду), Неїегодега амепає (цистоутворюючу нематоду злакових культур), Неїегодега сагогає,
Неїегодега ної, Норіоїайтиє соїштбрив, НоріоїІайтив даїєайшв, Норіоіаїти5 тадпівіушв,
Гопдідогиє Бгеміаппшціацв5, Меїіоідодупе агепагіа, МеїпІоідодупе спймжооді, Меїіоідодупе Паріа,
Меїоідодупе іпсодпіта, Меїоідодупе |амапіса, Мезосгіісопета хепоріах, Масорри5 аБбе!їтапв,
Массорив аогзаїї5, Рагайнісподоги5 спгівіїєї, Рагайісподогиб5 тіпог, Ргаїуєєпспив Бгаспуигив,
Ргагуіепспив степаїшв5, Ргаїуепспи5 Пехіпсівив, Ргаїуепспив5 педіесіи5, Ргауепспив5 репеїгапв,
Ргагуіепспив рго|есіи5, РгаїуІепспив зсегпірпеті, РгаїуІепспив їепиїсацдаїив5, Ргаїуепспив огпеї,
Ргаїуіеєпснпив 7є6ає, Рипсіодега спассоепвів, Опціпізцісіи5 асшив, Вадорпоизв вітіїв, ВоїуЇепспиШ5 гепіогтів, Ту'епсопогпупспиз аибіиз5, Туіепспши5 зетірепеїгап5 (цитрусову нематоду), 5ірпіпета атегісапит, Х. Меадіегтапешт і будь-яку комбінацію вищевказаних.
В іншому варіанті здійснення даний винахід охоплює спосіб одержання інсектицидного білка, який є активним проти комах, що включає: (а) одержання клітини-хазяїна, що містить ген, який сам містить касету експресії ілиабо молекулу нуклеїнової кислоти за даним винаходом; і (Б) вирощування трансгенної клітини-хазяїна таким чином, щоб експресувати інсектицидний білок, який є активним проти комах.
У ще одному додатковому варіанті здійснення даний винахід охоплює спосіб здійснення контролю комах, який включає доставку комахам ефективної для контролю комах кількості інсектицидного білка за даним винаходом.
В одному варіанті здійснення щонайменше один з інсектицидних білків за даним винаходом експресується у вищому організмі, такому як рослина. У даному випадку трансгенні рослини експресують ефективні для контролю комах кількості інсектицидного білка для самозахисту від комах-шкідників. У разі, якщо комаха починає поїдати таку трансгенну рослину, вона також поглинає експресований інсектицидний білок. Це буде стримувати комаху від подальшого вгризання у рослинну тканину і/або навіть може спричиняти шкоду комасі або знищувати Її.
Нуклеїнова кислота за даним винаходом вводиться в касету експресії, яка потім може бути стабільно інтегрована в геном рослини. В іншому варіанті здійснення нуклеїнову кислоту включають у непатогенний вірус, що самореплікується. Рослини, трансформовані відповідно до даного винаходу, можуть бути однодольними або дводольними і включають без обмеження 60 кукурудзу, пшеницю, овес, газонні трави, пасовищні трави, льон, ячмінь, жито, солодку картоплю, квасолю, горох, цикорій, салат-латук, капусту, цвітну капусту, броколі, ріпу, редьку, шпинат, спаржу, цибулю, часник, перець, селеру, гарбуз великоплідний, гарбуз, коноплі, цукіні, яблуню, грушеве дерево, айву, диню, сливове дерево, вишню, персикове дерево, нектарин, абрикосове дерево, полуницю, виноград, малину, ожину, ананас, авокадо, папаю, манго, бананове дерево, сою, томат, сорго, цукрову тростину, цукровий буряк, соняшник, ріпак, конюшину, тютюн, моркву, бавовник, люцерну, рис, картоплю, баклажан, огірок, арабідопсис і деревні рослини, такі як хвойні і листяні дерева.
В іншому варіанті здійснення даний винахід охоплює спосіб одержання рослини або частини рослини з підвищеною стійкістю до комах порівняно з контрольними рослиною або частиною рослини, що включає: (а) введення молекули нуклеїнової кислоти, що містить касету експресії за даним винаходом; і (Б) вирощування частини рослини з одержанням рослини, яка експресує гетерологічну молекулу нуклеїнової кислоти касети експресії і яка характеризується підвищеною стійкістю до комах порівняно з контрольними рослиною або частиною рослини, які не були трансформовані молекулою нуклеїнової кислоти, що містить касету експресії. У переважному варіанті здійснення касета експресії може кодувати поліпептид, що містить амінокислотну послідовність, яка на щонайменше 45 95, щонайменше 50 95, щонайменше 55 96, щонайменше 6096, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 80 95, щонайменше 85 9о, щонайменше 90 96, щонайменше 91 956, щонайменше 92 95, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 97 95, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 або на 100 95 ідентична або подібна 5ЕО ІО МО: 1, ЗЕО
ІО МО: 37-72, БЕО ІЮ МО: 86-96 або 5ЕО ІЮ МО: 100. У переважному варіанті здійснення касета експресії може кодувати поліпептид, що містить амінокислотну послідовність, яка на щонайменше 60 95 ідентична ЗЕО ІЮ МО: 4. "Підвищена" стійкість до комах може бути виміряна як збільшення інсектицидної активності. Підвищена стійкість до комах може бути більшою за 0 96, на щонайменше 1 95, на щонайменше 2 95, на щонайменше З 95, на щонайменше 4 95, на щонайменше 595, на щонайменше 1095, на щонайменше 1595, на щонайменше 20 95, на щонайменше 2595, на щонайменше 30 956, на щонайменше 40 95, на щонайменше 50 95, на щонайменше 60 956, на щонайменше 70 95, на щонайменше 80 95, на щонайменше 90 95, на щонайменше 100 95, на щонайменше 125 95, на щонайменше 150 95, на щонайменше 200 95, на щонайменше 300 95, на щонайменше 400 95, на щонайменше 500 95, на щонайменше 600 95, на щонайменше 70095, на щонайменше 800 95, на щонайменше 90095 або на щонайменше 1000 95 більшою від інсектицидної активності порівняно з контрольною рослиною. Рослина або частина рослини, що характеризуються підвищеною стійкістю до комах порівняно з контрольними рослиною або частиною рослини, можуть бути одержані за допомогою способів трансформації рослини, культивування рослинної тканини або селекції. Рослина або частина рослини можуть бути одержані за допомогою способів статевого або безстатевого розмноження. Можуть використовуватись будь-які придатні контрольні рослина або частина рослини, наприклад рослина з таким самим або аналогічним генетичним фоном, вирощена в тому самому середовищі. У варіантах здійснення контрольні рослина або частина рослини мають той самий генетичний фон і ростуть у тому самому середовищі, що й описана рослина, однак вони не містять молекулу за даним винаходом, водночас описана рослина містить молекулу за даним винаходом.
В іншому варіанті здійснення даний винахід охоплює спосіб підвищення стійкості до комах у рослини або частини рослини порівняно з контрольною рослиною або частиною рослини, який включає забезпечення експресії в рослині або частині рослини молекули нуклеїнової кислоти або касети експресії за даним винаходом, де експресія гетерологічної нуклеїнової кислоти касети експресії зумовлює підвищену стійкість до комах у рослини або частини рослини порівняно з контрольною рослиною або частиною рослини. У варіантах здійснення касета експресії або молекула нуклеїнової кислоти містить промотор, функціонально пов'язаний із гетерологічною молекулою нуклеїнової кислоти, що містить нуклеотидну послідовність, яка містить: (а) нуклеотидну послідовність під будь-яким із ЗЕО ІЮ МО: 2-36, 5ЕО І МО: 73-83 або
ЗЕО ІО МО: 99; (Б) нуклеотидну послідовність, яка на щонайменше 45 956, щонайменше 50 95, щонайменше 55 95, щонайменше 60 95, щонайменше 65 95, щонайменше 70 95, щонайменше 7595, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 91 95, щонайменше 92 9о, щонайменше 93 96, щонайменше 94 956, щонайменше 95 9565, щонайменше 96956, щонайменше 97 95, щонайменше 9895, щонайменше 9995 або на 100 95 ідентична нуклеотидній послідовності під будь-якою із зФЕО ІЮ МО: 2-36, 5ЕО ІЮО МО: 73-83 або 5ЕО ІО МО: 99; (с) нуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид, де амінокислотна послідовність поліпептиду містить 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 37-72, 5БЕО 10 МО: 86-96 або 5ЕО ІЮ МО: 100 і бо характеризується активністю щодо контролю комах; (4) нуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид, де амінокислотна послідовність поліпептиду на щонайменше 45 95, щонайменше 50956, щонайменше 5595, щонайменше 6095, щонайменше 6595, щонайменше 70 95, щонайменше 7595, щонайменше 80 95, щонайменше 85 95, щонайменше 90 9565, щонайменше 9195, щонайменше 9295, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 95 95, щонайменше 96 95, щонайменше 97 956, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 або на 100 95 ідентична амінокислотній послідовності під ЗЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО ІЮ МО: 37-72, 5ЕО І МО: 86-96 або ЗЕО ІЮО МО: 100; або (е) нуклеотидну послідовність, яка є комплементарною нуклеотидній послідовності будь-якого з (а) - (4), наведених вище. Молекула нуклеїнової кислоти або касета експресії може бути введена в рослину. У деяких варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти або касета експресії може бути введена в частину рослини, і при цьому рослина, що містить молекулу нуклеїнової кислоти або касету експресії, може бути одержана з частини рослини.
В іншому варіанті здійснення даний винахід охоплює спосіб одержання рослини з підвищеною стійкістю до комах порівняно з контрольною рослиною, який включає виявлення в частині рослини гетерологічної нуклеїнової кислоти, що передбачає молекулу нуклеїнової кислоти або касету експресії за даним винаходом, і одержання рослини з частини рослини, завдяки чому забезпечується одержання рослини з підвищеною стійкістю до комах порівняно з контрольною рослиною. У додатковому варіанті здійснення даний винахід охоплює спосіб ідентифікації рослини або частини рослини, що характеризується підвищеною стійкістю до комах порівняно з контрольною рослиною або частиною рослини, який включає виявлення в рослині або частині рослини молекули нуклеїнової кислоти або касети експресії за даним винаходом, завдяки чому забезпечується ідентифікація рослини або частини рослини з підвищеною стійкістю до комах. У додатковому варіанті здійснення касету експресії або її діагностичний фрагмент виявляють у продукті ампліфікації зі зразка нуклеїнової кислоти з рослини або частини рослини. Діагностичний фрагмент може являти собою молекулу нуклеїнової кислоти довжиною щонайменше 10 суміжних нуклеотидів, яка є унікальною для касети експресії за даним винаходом.
У ще одному варіанті здійснення даний винахід охоплює спосіб одержання рослини, що характеризується підвищеною стійкістю до комах порівняно з контрольною рослиною або
Зо частиною рослини, що включає схрещування першої батьківської рослини з другою батьківською рослиною, де щонайменше перша батьківська рослина містить у своєму геномі гетерологічну нуклеїнову кислоту, яка передбачає молекулу нуклеїнової кислоти або касету експресії за даним винаходом, і одержання покоління потомства, де покоління потомства містить щонайменше одну рослину, яка містить гетерологічну нуклеїнову кислоту у своєму геномі і яка проявляє підвищену стійкість до комах порівняно з контрольною рослиною.
У переважних варіантах здійснення способи за даним винаходом надають підвищеної стійкості до комах рослині або частині рослини проти твердокрилої і/або лускокрилої комахи- шкідника. Контроль комах як лускокрилих, так і твердокрилих комах-шкідників продемонстровано у прикладах. У додаткових варіантах здійснення способи за даним винаходом надають підвищеної стійкості до комах рослині або частині рослини проти видів
Оіабгоїїса, зокрема Оіаргоїїса мігдітега мігдітега, Оіабгоїїса Багбегі, Оіабгоїйса ипдесітрипсіаїа поуагаї, Оіабгоїса мігдітега 7еає і/або Ріаргоїйса з5ресіоза і/або споріднених видів.
У переважних варіантах здійснення способи за даним винаходом надають підвищеної стійкості до комах однодольній рослині.
Даний винахід додатково охоплює трансгенну рослину, що містить гетерологічну молекулу нуклеїнової кислоти або касету експресії за даним винаходом, яка під час транскрибування і трансляції надає підвищеної стійкості до комах. У переважних варіантах здійснення гетерологічна молекула нуклеїнової кислоти містить послідовність, на щонайменше 45 95, щонайменше 50 95, щонайменше 55 95, щонайменше 60 95, щонайменше 65 9565, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 90 95, щонайменше 91 95, щонайменше 92 95, щонайменше 93 95, щонайменше 94 9565, щонайменше 95 965, щонайменше 96 95, щонайменше 97 956, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 або 100 95 ідентичну будь-якій із 5ЕО ІЮ МО: 2-36, 5ЕО ІО МО: 73-83 або 5ЕО ІЮ МО: 99. У додатковому варіанті здійснення трансгенна рослина містить гетерологічну молекулу нуклеїнової кислоти, що містить послідовність, на щонайменше 4595, щонайменше 5095, щонайменше 55 965, щонайменше 60 95, щонайменше 65 95, щонайменше 70 95, щонайменше 7595, щонайменше 80956, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 92 95, щонайменше 93 95, щонайменше 94 95, щонайменше 95 95, щонайменше 96 9565, щонайменше 97 965, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 або 100 95 ідентичну ЗЕО ІЮ МО: 2-36, 5ЕО ІЮ МО: 60 73-83 або 5ЕО ІЮО МО: 99. У варіантах здійснення трансгенна рослина являє собою дводольну рослину. У переважних варіантах здійснення трансгенна рослина являє собою однодольну рослину. У додаткових варіантах здійснення трансгенна рослина являє собою люцерну, кріп, яблуню, абрикосове дерево, артишок, руколу, спаржу, авокадо, бананове дерево, бобові, буряк, ожину, чорницю, броколі, брюссельську капусту, качанну капусту, канолу, мускусну диню, моркву, касаву, цвітну капусту, селеру, вишню, кінзу, цитрусову рослину, клементин, кавове дерево, кукурудзу, бавовник, огірок, Дугласову ялицю, баклажан, цикорій салатний, салат ескаріоль, евкаліпт, фенхель, різновиди фігового дерева, пляшковий гарбуз, виноград, грейпфрут, диню мускатну білу, хікаму, ківі, салат-латук, різновиди цибулі-порею, лимон, лайм, сосну ладанну, мангове дерево, диню, гриб, горіх, окру, цибулю, апельсин, декоративну рослину, папаю, петрушку, горох, персикове дерево, земляний горіх, грушеве дерево, перець, хурму, сосну, ананас, плантайн, сливове дерево, гранатове дерево, тополю, картоплю, гарбуз, айву, сосну променисту, радікіо, редис, малину, рис, жито, сорго, південну сосну, сою, шпинат, гарбуз великий столовий, полуницю, цукровий буряк, соняшник, солодку картоплю, ліквідамбар, танжерин, чай, тютюн, томат, газонну траву, виноград культурний, кавун, ямс або цукіні. У переважних варіантах здійснення трансгенна рослина являє собою просо, просо лозоподібне, маїс, сорго, пшеницю, овес, газонну траву, пасовищну траву, льон, рис, цукрову тростину, олійний ріпак або ячмінь.
У ще одному варіанті здійснення трансгенна рослина за даним винаходом містить гетерологічну молекулу нуклеїнової кислоти, що містить послідовність промотора. У ще одному варіанті здійснення трансгенна рослина за даним винаходом може містити гетерологічну молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує щонайменше одну додаткову необхідну ознаку.
Додаткова ознака може бути закодована у тій самій гетерологічній молекулі нуклеїнової кислоти, що і молекула за даним винаходом, або вона може бути закодована у другій гетерологічній молекулі нуклеїнової кислоти. Додаткова необхідна ознака може надавати стійкості до комах стосовно другої комахи-шкідника, стійкості до комах стосовно тієї ж комахи- шкідника, толерантності до абіотичного стресу, чоловічої стерильності, стійкості до гербіцидів, стійкості до бактеріальних захворювань, стійкості до грибкових захворювань, стійкості до вірусних захворювань, стійкості до нематод, модифікованого метаболізму жирних кислот, модифікованого метаболізму вуглеводів, поліпшеної харчової цінності, поліпшених
Зо характеристик щодо промислового способу або зміненої репродуктивної здатності. Додаткова необхідна ознака також може стимулювати продукування в рослині цінного з комерційного погляду ферменту або метаболіту.
У варіантах здійснення необхідна додаткова ознака являє собою другий пестицидний засіб.
Другий пестицидний засіб може бути активним щодо будь-якого шкідника рослини, який включає комах, нематод, гриби, віруси або бактерії. Приклади комах-шкідників рослин включають без обмеження Міїарагмага 5рр. (наприклад, М. Ішдеп5 (буру рисову цикадку));
І аодеїрпах 5рр. (наприклад, 1/. вігіаєейи5 (малу буру рисову цикадку)); Мерпоїеніх 5рр. (наприклад, М. мігех5сеп5 або М. сіпсіїсер5 (зелену цикадку) або М.підгорісіи5 (рисову цикадку));
БЗодаїеНа 5рр. (наприклад, 5. Тшгсіїега (цикадку білоспинну)); Віїє5и5 5рр. (наприклад, В.
Іеисорієги5 Іеисорієги5 (клопа постільного)); зЗсоїйпорпога 5рр. (наприклад, 5. мептійшіаїе (рисового довгоносика)); Асго5іегпит зрр. (наприклад, А. Пйаге (зеленого жука-смердюка));
Рагпага 5рр. (наприклад, Р. диЧайа (рисову товстоголовку)); Спі 5рр. (наприклад, С. зирргеззаїї5 (рисового смугастого стеблоїда), С. ашйгісійш5 (золотавого стеблоїда) або С. роїуспгузи5 (чорноголового стеблоїда)); СпПйоїгаєа 5рр. (наприклад, С. роїуспгуза (рисового стеблоїда)); 5езатіа 5рр. (наприклад, 5. іпГТегеп5 (рожевого рисового точильника)); Тгурогуга 5рр. (наприклад, Т. іппоїайа (білого рисового точильника) або Т. іпсегпішав (жовтого рисового точильника)); Спарпа|посгосів 5рр. (наприклад, С. теадіпаїї5 (листовертку рисову)); Адготуа 5рр. (наприклад, А. огулає (листяного мінера) або А. рагмісогпіз (кукурудзяного точкового листяного мінера)); Оіаїйгаєа 5рр. (наприклад, О. з5засспагай5 (точильника цукрового очерету) або 0. дгапаїозеїйа (вогнівку кукурудзяну південно-західну)); Магпада 5рр. (наприклад, М. аєпезсепз5 (зелену рисову гусінь)); Хапіподе5 5рр. (наприклад, Х. Ігапомегза (зелену гусінь)); Зродорієега 5рр. (наприклад, 5. їїидірегда (совку трав'яну), 5. ехідча (совку малу), 5. ІШогаїї5 (єгипетську бавовняну совку) або 5. ргаєїйса (гусінь західної молі з жовтими смугами)); Муїпітпа 5рр. (наприклад, Мувптпа (Рзецдаейа) зерегаїа (гусінь)); Неїїсомегра 5рр. (наприклад, Н. 7єа (совку кукурудзяну)); СоїЇазрі5 5рр. (наприклад, С. ргиппеа (листоїда виноградного)); Гізвотпорігиз 5рр. (наприклад, Г. огу7орпійи5 (довгоносика рисового водяного)); Еспіпоспетиз 5рр. (наприклад, Е. здцатов (довгоносика рослин рису)); Оісіодієра 5рр. (наприклад, О. аптідега (рисову шипоноску)); Ошета 5рр. (наприклад, О. огулає (листогриза); Зйорпйи5 5рр. (наприклад, 5. огулає (рисового довгоносика)); Распуаїріозіз 5рр. (наприклад, Р. огулає (рисову галлицю)); бо Нуагеїйа 5рр. (наприклад, Н. дгізеоіа (малого рисового листяного мінера) або Н. зазакії (личинку,
що поїдає рисові стебла)); Спіогор5 5рр. (наприклад, С. огулає (личинку, що поїдає стебла));
Оіабгоїїса 5рр. (наприклад, О. мігдіїтега мігдіїтега (західного кукурудзяного кореневого жука), 0.
Брагрегі (північного кукурудзяного кореневого жука), О. ипаесітрипсіаїа Ппоугагаді (південного кукурудзяного кореневого жука), О. мігуїега 7еає (мексиканського кукурудзяного кореневого жука); О. ракеага (жука-блішку облямовану)); Об5ігіпіа 5рр. (наприклад, О. пибіїаїй5 (вогнівку кукурудзяну)); Адгоїї5 5рр. (наприклад, А.ірзіоп (совку-іпсилон)); ЕІ(азтораїриз 5рр. (наприклад,
Е. Імдпозейи5 (малого точильника кукурудзяного стебла)); Меїапоїш5 з5рр. (дротяників);
Сусіосерпаіа 5рр. (наприклад, С. Брогеаїї5 (північного хруща) або С. іттасшцшіага (південного хруща)); Роріййа взрр. (наприклад, Р. іаропіса (хрущика японського)); Спаєїоспета 5рр. (наприклад, С. риїїсагіа (кукурудзяного жука-блішку)); Зрпепорпогих5 5рр. (наприклад, 5. таїйдів (довгоносика маїсового)); Кпораіозірпит 5рр. (наприклад, К. таїйді5 (тлю кукурудзяну листяну));
Апигарпіх 5рр. (наприклад, А. таїйдігадісєіє (тлю кукурудзяну кореневу)); Меїапоріи5 5рр. (наприклад, М. Тетиггибгит (кобилку червононогу), М. айегепіа|йє (кобилку відмітну) або М. запдиіпіре5 (мігруючу кобилку)); Нуіетуа 5рр. (наприклад, Н. ріайта (личинку мухи паросткової)); Апарпоїпгір5 5рр. (наприклад, А. орзсгиги5 (трипса злакового)); ЗоІепорвів 5рр. (наприклад, 5. тіїезїа (мураху-злодія)); або 5рр. (наприклад, Т. игісає (звичайного павутинного кліща), Т. сіппабагіпих (червоного павутинного кліща); Неїїсомегра 5рр. (наприклад, Н. 7єа (коробкового хробака) або Н. аптідега (совку бавовняну)); Ресіїпорпога 5рр. (наприклад, Р. до55уріейа (рожевого коробкового хробака)); Еагіаз 5рр. (наприклад, Е. міцеМПйа (крапкового коробкового хробака бавовни)); Неїїоїпі5 5рр. (наприклад, Н. мігезсеп5 (тютюнову листокрутку));
Апіпопоти5 5рр. (наприклад, А. дгапаї5 (довгоносика бавовняного)); Рзейдаютозсеїїв 5рр. (наприклад, Р. 5егіаїше (марокканську кобилку)); ТпаІеигоде5 5рр. (наприклад, Т. арбшйопеийв5 (білокрилку зі смугами на крилах), Т. марогагіогит (білокрилку тепличну)); Ветівіа 5рр. (наприклад, В. агдепійоїйї (білокрилку срібнокрилу)); Арпі5 5рр. (наприклад, А. дозв5урії (тлю бавовняну)); Іуди 5рр. (наприклад, Г. Іпеоїагі5 (клопа польового) або І. пезреги5 (західного клопа лугового)); Еизспібти5 5рр. (наприклад, Е. соп5регзи5 (жука-смердюка, що маскується));
Спіогоспгоа 5рр. (наприклад, С. зауії (жука-смердюка Зау)); Ме7ага 5рр. (наприклад, М. мігаша (південного зеленого жука-смердюка)); ТПгір5 5рр. (наприклад, Т. їаврасі (трипса цибулевого));
ЕгапкіїпіеНа 5рр. (наприклад, Р. їи5са (трипса тютюнового) або Р. оссідепіаїї5 (західного трипса
Зо звичайного)); І ерііпоїагза 5рр. (наприклад, Г. десетіїпеаїа (жука колорадського картопляного),
Г. їдпсіа (хибного картопляного жука) або 1. їехапа (техаського хибного картопляного жука)); ета зрр. (наприклад, !. ійїпеаїйа (картопляного жука із трьома смугами)); Ерійгіх 5рр. (наприклад, Е. сиситегі5 (картопляного жука-блішку), Е. Ппігпіреппі5 (жуків-блішок) або Е. їшрегіб5 (жука-блішку бульбочкову)); Ерісаша 5рр. (наприклад, Е. міЧага (шпанку смугасту)); Рпаєдоп рр. (наприклад, Р. сосПпієагає гірчичного листогриза)); Еріасппа 5рр. (наприклад, Е. маїпмеїїв (мексиканського жука бобового)); Аспеїа 5рр. (наприклад, А. дотевзіїси5 (цвіркуна домового));
Етроавзса 5рр. (наприклад, Е. Ттабає (цикадку картопляну)); Му7и5 5рр. (наприклад, М. регвзісає (попелицю персикову зелену)); Рагайіола з5рр. (наприклад, Р. соскКегеїЇї (листоблішку));
Соподеги5 5рр. (наприклад, С. Тай (південного картопляного дротяника) або С. мезрегііпи5 (тютюнового дротяника)); Рінпогітаєа з5рр. (наприклад, Р. орегошеїйа (личинку виїмчастокрилої молі)); Масгозірпит 5рр. (наприклад, М. епрпогріає (попелицю картопляну звичайну)); Тпуапіа 5рр. (наприклад, Т. раїїїдомігеп5 (червоноплечого жука-смердюка)); Ріїпогітавєа 5рр. (наприклад,
Р. орегсшіейа (личинку виїмчастокрилої молі)); Неїїсомегра 5рр. (наприклад, Н. 7єеа (совку томатну); Кеїйепа зрр. (наприклад, К. Іусорегзісейа (гострицю томатну)); Гітопіи5 5рр. (дротяників); Мапаиса 5рр. (наприклад, М. зехіа (тютюнового бражника) або М. диіпдиетасшіага (томатного бражника)); Гіпотула 5рр. (наприклад, |. займає, |. їгйойй або |. пиїдобгепві5 (листкового мінера)); ОгозорпйШа 5рр. (наприклад, 0. теїаподавзіег, О. уакиба, 0. рзепдоорзсига або 0. вітшіапв); Сагаби5 5рр. (наприклад, С. дгапша(в5); СПпігопоти5 5рр. (наприклад, С.
ІТепіапи5); Сіепосерпаїйдез 5рр. (наприклад, С. Теїї5 (блоху котячу)); Оіаргерез 5рр. (наприклад, 0. арргеміаєие5 (скосаря люцернового)); Ір5 5рр. (наприклад, І. ріпі (короїда соснового)); Тгіроїйчт 5рр. (наприклад, Т. саєтапешт (хрущака малого булавовусого)); Сіоз5зіпа 5рр. (наприклад, 0. тогзйапз (муху цеце)); Апорпеіе5 зрр. (наприклад, А. датбріає (комара малярійного));
Неїїсомегра 5рр. (наприклад, Н. аптідега (африканську совку бавовникову)); Асугіпозірпоп 5рр. (наприклад, А. різвит (попелицю горохову)); Аріз5 5рр. (наприклад, А. теїйега (медоносну бджолу)); Нотаїодізса 5рр. (наприклад, Н. соадціаїє (цикадку із дзеркальними крильцями));
Аедез 5рр. (наприклад, Ае. аедурії (жховтолихоманкового комара)); Вотбух 5рр. (наприклад, В. тогі ((шовковичного хробака)); ІГосиєїа 5рр. (наприклад, Ї. птідгаюгтіа (мігруючу сарану));
Воорпйиз 5рр. (наприклад, В. тісгоріи5 (кліща кільчастого)); Асапіпоз5сигтіа 5рр. (наприклад, А. дотезіапа (рудого шоколадного птахоїда)); Оіріоріега зрр. (наприклад, 0. рипсіаїа бо (тихоокеанського жука-таргана)); Неїїсопіи5 5рр. (наприклад, Н. егаїо (червоного метелика-
листоношу) або Н. теїІротепе (метелика-листоношу)); Сигсцшйо 5рр. (наприклад, С. діапаіййт (плодожила дубового)); РіІшеїа 5рр. (наприклад, Р. хуїозівїЇІа (міль капустяну)); Атбіуотта 5рр. (наприклад, А. магіедайшт (кліща кільчастого)); Апієгаєа 5рр. (наприклад, А. уататаї (шовкопряда)) і Агтідегез 5рр. (наприклад, А. зибраїрагив).
Інсектицидні білюи за даним винаходом можуть використовуватись у комбінації з іншими пестицидними засобами (наприклад, більюьами Сту ВО) з розширенням цільового діапазону шкідників. Крім того, застосування інсектицидних білків за даним винаходом у комбінації з інсектицидним засобом, який характеризується відмінним механізмом дії або цілеспрямовано впливає на інший рецептор у кишківнику комахи, характеризується особливою корисністю щодо запобігання появі стійкості у комах і/або керування нею.
Другий пестицидний засіб може являти собою інсектицидний білок, одержаний із Васійн5
Іигіпдіепві5. Інсектицидний білок В. (пигіпдіепбіз може являти собою будь-який із декількох інсектицидних білків, зокрема без обмеження білок Сгуї, білок СгуЗ, білок Стгу7, білок Стгув8, білок
Сту11, білок Сгу22, білок Сту23, білок СтгуЗб, білок Сгу37, білок Сту34 разом із білком Стгуз35, бінарний інсектицидний білок СгуЕєТ33 і СтуЕєТ34, бінарний інсектицидний білок ТІС100 ї ТІС1О1, бінарний інсектицидний білок РЗ149В1, МІР (вегетативний інсектицидний білок, розкритий у патентах США 5849870 ії 5877012, включених у даний документ за допомогою посилання),
ТІС900 або споріднений білок, ТІС901, ТІС1201, ТІС407, ТІС417, модифікований білок СтузА або гібридні білки або химери, одержані з будь-яких вищевказаних інсектицидних білків. В інших варіантах здійснення інсектицидний білок В. (Ппигіпдіепзіз вибраний із групи, що складається з
СтуЗзвВЬ1, Стуз4АБІ1 разом із СтуЗз5АБІ, тСтгузА (патент США Ме 7276583, включений у даний документ за допомогою посилання), еСтуЗз.Т1АБ (патент США Мо 8309516, включений у даний документ за допомогою посилання) і білки МірзА, зокрема МірзАа (патент США Мо 6137033, включений у даний документ за допомогою посилання).
В інших варіантах здійснення трансгенна рослина за даним винаходом може містити другий пестицидний засіб, який може бути одержаний із джерел, відмінних від В. (пигіпдіепві5. Другий інсектицидний засіб може являти собою засіб, вибраний із групи, що складається з а-амілази, пероксидази, холестеролоксидази, пататину, протеази, інгібітора протеази, уреази, інгібітора альфа-амілази, пороутворювального білка, хітинази, лектину, сконструйованих антитіла або
Зо фрагмента антитіла, інсектицидного білка Васіїїш5 сегец5, інсектицидного білка Хепогппарацз 5рр. (такого як Х. петаїйорпійа або Х. ромієпії), інсектицидного білка Ріпоїогпаради» 5рр. (такого як Р.
Імтіпезсеп5 або Р. азуторБбіоїіса), інсектицидного білка Вгемірасійи5 рр. (такого як В.
Іатегозрогоц5), інсектицидного білка І узіпірасійи5 5рр. (такого як Г. 5рпеагісив5), інсектицидного білка Спготобрасіегішт 5рр. (такого як С. 5,иБрізидає або С. різсіпає), інсектицидного білка
Уегвіпіа 5рр. (такого як У. епіоторпада), інсектицидного білка Раепірасійи5 5рр. (такого як Р. ргоруїаєа), інсектицидного білка Сіовігідішт 5рр. (такого як С. рітегптепіап5), Рзейдотопах 5рр. (такого як Р. Пиогезсепв) і лігніну. В інших варіантах здійснення другий засіб може являти собою щонайменше один інсектицидний білок, одержаний з інсектицидного токсинового комплексу (Тс) з Рпоїотараив5, Хепогпарив, 5еїтайа або Уегзіпіа. В інших варіантах здійснення інсектицидний білок може являти собою АОР-рибозилтрансферазу, одержану з інсектицидних бактерій, таких як Рпоїоптпарац» 55р. У ще інших варіантах здійснення інсектицидний білок може являти собою
Ахті205 або бути одержаний з Ахіті205 (патент США Мо 8575425 і Мо 9394345, кожний включений у даний документ за допомогою посилання). В інших варіантах здійснення інсектицидний білок може являти собою МІР-білок, такий як МІР1 і/або МІР, із В. сегеи5. У ще одних варіантах здійснення інсектицидний білок може являти собою бінарний токсин, одержаний з інсектицидних бактерій, такий як ІРА і ІЗРІ2А з В. Іагегозрогоцз або ВіпА і ВіпВ з
І. врпаегісих. У ще одних варіантах здійснення інсектицидний білок може бути сконструйованим, або може бути гібридним, або химерою з будь-яких попередніх інсектицидних білків.
У деяких варіантах здійснення трансгенна рослина за даним винаходом може містити та/або експресувати щонайменше другий пестицидний засіб, який є відмінним від молекул білкової природи. У деяких варіантах здійснення другий пестицидний засіб може бути присутнім на поверхні рослини, наприклад як засіб для місцевого застосування. У переважних варіантах здійснення другий пестицидний засіб являє собою молекулу інтерферувальної РНК. Зазвичай інтерферувальна РНК містить щонайменше фрагмент РНК, що відповідає цільовому гену, спейсерну послідовність і другий фрагмент РНК, який є комплементарним першому, завдяки чому може утворюватись двониткова структура РНК. РНК-інтерференція (ЕМАЇї) відбувається тоді, коли організм розпізнає молекули двониткової РНК (а5КМА) і гідролізує їх. Одержані продукти гідролізу являють собою невеликі фрагменти РНК довжиною приблизно 19-24 бо нуклеотидів, що називаються малими інтерферувальними РНК (5ікМА). Потім 5ікМА поширюються або розносяться по всьому організму, зокрема через клітинні мембрани, де вони гібридизуються з теМА (або іншими РНК) і спричинюють гідроліз РНК. Інтерферувальні РНК розпізнаються комплексом сайленсингу РНК-інтерференції (КІЗС), в який уводиться ефекторна нитка (або "спрямовувальна нитка") РНК. Ця спрямовувальна нитка діє як матриця для розпізнавання й руйнування дуплексних послідовностей. Цей процес повторюється щоразу, коли 5іЕМА гібридизується з комплементарною їй цільовою РНК, ефективно запобігаючи трансляції таких тЕеМА, і в такий спосіб "сайленсингу" зазнає експресія специфічних генів, з яких були транскрибовані теМА. Інтерферувальні РНК відомі з рівня техніки як застосовувані для контролю комах (див., наприклад, публікацію УМО 2013/192256, включену у даний документ за допомогою посилання). Інтерферувальна РНК, призначена для застосування у контролі комах, забезпечує одержання двониткової РНК, що не існує в природі, яка користується нативними шляхами КМАїі у комахи для запуску знижуючої регуляції цільових генів, що може зумовлювати припинення поїдання і/або росту і може зумовлювати загибель комахи-шкідника.
Молекула інтерферувальної РНК може надавати стійкості до комах проти того самого цільового шкідника, що і білок за даним винаходом, або може цілеспрямовано впливати на іншого шкідника. Цільова комаха-шкідник рослини може живитися шляхом жування, смоктання або проколювання. Інтерферувальні РНК відомі з рівня техніки як застосовні для контролю комах. У варіантах здійснення а5ЕМА, придатна для контролю комах, описана в заявках на патенти згідно з РСТ МоМо РСТ/О517/044825; РСТ/О517/044831; РСТ/О517/044832, включених у даний документ за допомогою посилання. У варіантах здійснення 45КМА, придатна для контролю комах, описана у патентах США МоМо 92388223, 9340797 або 8946510, включених у даний документ за допомогою посилання. У варіантах здійснення а5КМА, придатна для контролю комах, описана в заявках на патенти США МеоМео 12/868994, 13/831230, 14/207313 або 14/207318, включених у даний документ за допомогою посилання. В інших варіантах здійснення інтерферувальна РНК може надавати стійкості проти шкідника рослин, відмінного від комахи, такого як нематода-шкідник або вірус-шкідник.
Спільна експресія більш ніж одного пестицидного засобу в одній трансгенній рослині може бути досягнута шляхом одержання одинарного рекомбінантного вектора, що містить кодувальні послідовності більш ніж одного пестицидного засобу у так званому молекулярному стеку, і
Зо генетичного конструювання рослини, яка б містила і експресувала всі ці пестицидні засоби у трансгенній рослині. Такі молекулярні стеки також можуть бути одержані із застосуванням міні- хромосом, які описані, наприклад, у патенті США 7235716. Альтернативно трансгенна рослина, яка містить одну нуклеїнову кислоту, яка кодує перший пестицидний засіб, може бути повторно трансформована за допомогою іншої нуклеїнової кислоти, що кодує другий пестицидний засіб, тощо. Альтернативно рослина, батьківська форма 1, може бути одержана за допомогою способів генної інженерії для експресії генів за даним винаходом. Друга рослина, батьківська форма 2, може бути одержана за допомогою способів генної інженерії для експресії другого пестицидного засобу. Шляхом схрещування батьківської форми 1 із батьківською формою 2 одержують рослини-потомки, які експресують усі гени, введені у батьківські форми 1 і 2.
Трансгенні рослини або насінина, що містять та/або експресують інсектицидний білок за даним винаходом, також можуть бути оброблені інсектицидом або інсектицидним покриттям для насіння, яке описано в патентах США МоМо 5849320 і 5876739, включених у даний документ за допомогою посилання. У варіантах здійснення, де як інсектицид або інсектицидне покриття для насіння, так і трансгенна рослина або насінина за даним винаходом активні щодо однієї цільової комахи, наприклад твердокрилого шкідника або цільового шкідника Оіабгоїїса, ця комбінація застосовна (ї) у способі додаткового посилення активності композиції за даним винаходом щодо цільової комахи, та/або (ії) у способі попередження розвитку стійкості до композиції за даним винаходом шляхом забезпечення ще одного механізму дії проти цільової комахи. Таким чином, у варіантах здійснення даний винахід передбачений спосіб підвищення контролю популяції комах Оіаргоїїса, який включає одержання трансгенної рослини або насінини згідно з даним винаходом і застосування щодо рослини або насінини інсектициду або інсектицидного покриття для насіння щодо трансгенної рослини або насінини згідно з даним винаходом.
Навіть у тому випадку, якщо інсектицид або інсектицидне покриття для насіння є активними щодо іншої комахи, інсектицид або інсектицидне покриття для насіння придатні для розширення діапазону контролю комах, наприклад, за допомогою додавання інсектициду або інсектицидного покриття для насіння, яке характеризується активністю щодо лускокрилих комах, до трансгенної насінини за даним винаходом, яке в деяких варіантах здійснення характеризується активністю щодо твердокрилих і деяких лускокрилих комах, при цьому одержана покрита трансгенна бо насінина забезпечує контроль як лускокрилих, так і твердокрилих комах-шкідників.
Приклади таких інсектицидів та/або інсектицидних покриттів для насіння включають без обмеження карбамат, піретроїд, фосфорорганічну сполуку, фрипрол, неонікотиноїд, хлорорганічну сполуку, нереїстоксин або їх комбінацію. В іншому варіанті здійснення інсектицид або інсектицидне покриття для насіння вибрані з групи, що складається з карбофурану, карбарилу, метомілу, біфентрину, тефлутрину, перметрину, цифлутрину, лямбда-цигалотрину, циперметрину, дельтаметрину, хлорпірифосу, хлоретоксифосу, диметоату, етопрофосу, малатіону, метил-паратіону, форату, тербуфосу, тебупіриміфосу, фіпронілу, ацетаміприду, імідаклоприду, тіаклоприду, тіаметоксаму, ендосульфану, бенсултапу та їх комбінації.
Комерційні продукти, що містять такі інсектициди й інсектицидні покриття для насіння, включають без обмеження ЕРигадапФ (карбофуран), І апагет (мезоміл, метоміл, месоміл), бЗеміпФ (карбарил), Таїєстакю (біфентрин), БРогсе??ж |(тефлутрин), АттоФфФ (циперметрин),
Сутри5пФ (циперметрин), Оейа СоїдФф (дельтаметрин), Кагагет (лямбда-цигалотрин), АтривпФ (перметрин), РошпсеФ (перметрин), ВгідадетФ (біфентрин), Саріиге?Ф (біфентрин), Ргозпіє|дФ (тефлутрин), УМагтіог (лямбда-цигалотрин), бБигерапФ (хлорпірифос), Еопігеб55Ф (хлоретоксифос), Мосарф (етопроп), Тпітекю (форат), Аазіагю (форат, флуцитинат), Катрагвю (форат), Соипіекю (тербуфос), СудопФ (диметоат), Оісарійоп, КедепіФф (фіпроніл), Стиїбвеге (тіаметоксам), СайспофФ (імідаклоприд), РгезсгірефФ (імідаклоприд), РопспоФ (клотіанідин) і
Адесф (цифлутрин, тебупіримфос).
Даний винахід також охоплює композицію, що містить ефективну для контролю комах кількість інсектицидного білка відповідно до даного винаходу. У додаткових варіантах здійснення композиція містить придатний сільськогосподарський носій і поліпептид за даним винаходом з інсектицидною активністю. Сільськогосподарський носій може передбачати допоміжні речовини, речовини, що полегшують змішування, підсилювальні засоби і т. д., доцільні для застосування активного інгредієнта, такого як поліпептид за даним винаходом, у тому числі поліпептид, що містить амінокислотну послідовність, яка на щонайменше 60 965, щонайменше 65 95, щонайменше 70 95, щонайменше 75 95, щонайменше 80 95, щонайменше 85 965, щонайменше 90 95, щонайменше 95 95 або 100 95 ідентична будь-якій із БЕО ІЮ МО: 1,
ЗЕО ІЮ МО: 37-72, 5ЕБЕО ІЮО МО: 86-96 або 5ЕО ІЮ МО: 100. Придатні носії не повинні бути фітотоксичними щодо цінних культур, зокрема за концентрацій, використовуваних для
Зо застосування композицій за наявності культур, і не повинні вступати у хімічну реакцію зі сполуками активного інгредієнта, описаного у даному документі, а саме поліпептидом за даним винаходом або іншими інгредієнтами композиції. Такі суміші можуть бути розроблені для безпосереднього застосування щодо культур або можуть являти собою концентрати або склади, які зазвичай розводять додатковими носіями й допоміжними засобами перед застосуванням. Вони можуть включати інертні або активні компоненти і можуть являти собою тверді речовини, такі як, наприклад, дусти, порошки, гранули, дисперговні у воді гранули або змочувані порошки, або рідини, такі як, наприклад, здатні до емульгування концентрати, розчини, емульсії або суспензії. Придатні сільськогосподарські носії можуть включати рідкі носії, наприклад воду, толуол, ксилол, лігроїн, рослинну олію, ацетон, метилетилкетон, циклогексанон, трихлоретилен, перхлоретилен, етилацетат, амілацетат, бутилацетат, монометиловий етер пропіленгліколю та монометиловий етер діетиленгліколю, метанол, етанол, ізопропанол, аміловий спирт, етиленгліколь, пропіленгліколь, гліцерин тощо. Загалом вода є переважним носієм для розведення концентратів. Придатні тверді носії можуть включати тальк, пірофілітову глину, кремнезем, атапульгітову глину, кізельгур, крейду, діатомову землю, вапно, карбонат кальцію, бентонітову глину, фулерову землю, лушпиння насіння бавовнику, пшеничне борошно, соєве борошно, пемзу, деревне борошно, борошно зі шкаралупи волоського горіха, лігнін тощо. В іншому варіанті здійснення поліпептид за даним винаходом може бути інкапсульованим у синтетичній матриці, такій як полімер, і нанесеним на поверхню хазяїна, такого як рослина. Поїдання комахою клітин-хазяїв забезпечує доставку у комаху засобів для контролю комах і зумовлює токсичний ефект у комахи-шкідника.
У додаткових варіантах здійснення композиція за даним винаходом може являти собою порошок, дуст, пелету, гранулу, рідину для розпилення, емульсію, колоїдну речовину або розчин. Композиція за даним винаходом може бути одержана шляхом зневоднення, ліофілізації, гомогенізації, екстракції, фільтрації, центрифугування, осадження або концентрації культури бактеріальних клітин. Композиція за даним винаходом може містити щонайменше 1 95, щонайменше 595, щонайменше 1095, щонайменше 20 95, щонайменше 2595, щонайменше 3096, щонайменше 3595, щонайменше 4095, щонайменше 5095, щонайменше 60 95, щонайменше 70 95, щонайменше 80 95, щонайменше 90 95, щонайменше 95 95, щонайменше 97 95 або щонайменше 99 95 за вагою поліпептиду за даним винаходом. бо У варіантах здійснення композиція за даним винаходом може містити щонайменше другий пестицидний засіб (наприклад, який може бути експресований трансгенним шляхом із рослини та/або включений у композицію), який може бути інсектицидним, нематоцидним, фунгіцидним або бактерицидним. Щонайменше другий пестицидний засіб може бути інсектицидним щодо тієї ж комахи, що і поліпептид за даним винаходом, або щодо іншої комахи. Другий пестицидний
Б засіб може являти собою поліпептид. Пестицидний засіб може являти собою інтерферувальну
РНК (наприклад, а85ЕхМА). Другий пестицидний засіб може являти собою мікроорганізм, такий як бактерії, який містить молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує пестицидний засіб, і/або містить пестицидний засіб, такий як поліпептид або інтерферувальна РНК. Мікроорганізм може бути атенуйованим, інактивованим нагріванням або ліофілізованим. Мікроорганізм може бути мертвим або не здатним до відтворення. Другий пестицидний засіб може являти собою інсектицид, наприклад карбофуран, карбарил, метоміл, біфентрин, тефлутрин, перметрин, цифлутрин, лямбда-цигалотрин, циперметрин, дельтаметрин, хлорпірифос, хлоретоксифос, клотіанідин, диметоат, етопрофос, малатіон, метил-паратіон, форат, тербуфос, тебупіриміфос, фіпроніл, ацетаміприд, імідаклоприд, тіаклоприд, тіаметоксам, ендосульфан, бенсултап або їх комбінацію або комерційний продукт, що містить такі інсектициди та інсектицидне покриття для насіння, як описані вище.
Композиція за даним винаходом, наприклад композиція, що містить поліпептид за даним винаходом і прийнятний із погляду сільського господарства носій, може застосовуватись у традиційних агротехнічних способах. Прийнятний із погляду сільського господарства носій являє собою склад, застосовний для нанесення на рослину або насінину композиції, що містить поліпептид за даним винаходом. Наприклад, композиції за даним винаходом можна змішувати з водою та/або добривами і можна застосовувати щодо бажаного місця зростання/існування до появи сходів та/або після появи сходів будь-яким способом, як, наприклад, за допомогою розпилювальних баків літаків, зрошувального обладнання, розпилювального обладнання безпосереднього впорскування, ранцевих розпилювальних баків, бочок для купання худоби, фермерського обладнання, застосовуваного в наземному розпиленні (наприклад, штангові розпилювачі, ручні розпилювачі), тощо. Бажане місце зростання/снування може являти собою грунт, рослини тощо.
Композицію за даним винаходом можна застосовувати щодо насінини або частини рослини
Зо для вегетативного розмноження в будь-якому фізіологічному стані у будь-який час між збиранням насінини й посівом насінини, під час або після посіву і/або після проростання.
Переважно, щоб насінина або частина рослини для вегетативного розмноження перебували в достатньо стійкому стані, щоб у процесі обробки вони не зазнавали або зазнавали мінімального ушкодження, зокрема фізичного ушкодження або біологічного ушкодження. Склад можна застосовувати щодо насіння або частин рослини для вегетативного розмноження із застосуванням традиційних методик і пристроїв для нанесення покриття, таких як методики з використанням псевдозрідженого шару, спосіб із використанням вальцьового млина, ротостатичні протравлювачі насіння і барабани для нанесення покриттів.
Даний винахід також включає спосіб контролю популяції лускокрилих та/або твердокрилих шкідників, який передбачає приведення вказаної популяції в контакт з ефективною для здійснення контролю комах кількістю поліпептгиду за даним винаходом з інсектицидною активністю, де поліпептид на щонайменше 4595, щонайменше 5095, щонайменше 55 95, щонайменше 60 95, щонайменше 65 95, щонайменше 70 95, щонайменше 7595, щонайменше 80956, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 92 95, щонайменше 93 о, щонайменше 94 956, щонайменше 95 95, щонайменше 96 9065, щонайменше 97 96, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 або на 100 95 ідентичний 5ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО І
МО: 37-72, ЗЕБЕО 10 МО: 86-96 або 5ЕБО І МО: 100. Приведення в контакт передбачає представників популяції шкідників, що поїдають або поглинають поліпептид. Поліпептид може бути введений у раціон комахи або може експресуватись у рослинній тканині, яку комаха потім поїдає, або бути наявним на ній. У додаткових варіантах здійснення здійснення контролю популяцій лускокрилих і/або твердокрилих шкідників включає знищення комах шляхом приведення комах у контакт з ефективною для контролю комах кількістю поліпептиду за даним винаходом.
Даний винахід також передбачає спосіб захисту рослини від комахи-шкідника, що включає експресування у рослині або рослинній клітині нуклеотидної послідовності або касети експресії, яка кодує інсектицидний поліпептид за даним винаходом. У варіантах здійснення нуклеотидна послідовність на щонайменше 45 95, щонайменше 50 95, щонайменше 55 95, щонайменше 60 95, щонайменше 65 95, щонайменше 70 95, щонайменше 75 95, щонайменше 80 95, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 9295, щонайменше 93 95, бо щонайменше 94 96, щонайменше 95 956, щонайменше 96 956, щонайменше 97 906, щонайменше
98 965, щонайменше 99 95 або на 100 95 ідентична нуклеотидній послідовності під зЗЕО ІЮО МО: 2- 36 або кодує поліпептид, що містить амінокислотну послідовність, яка на щонайменше 45 95, щонайменше 50 95, щонайменше 55 95, щонайменше 60 95, щонайменше 65 9565, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 90 95, щонайменше 91 9о, щонайменше 92 96, щонайменше 93 956, щонайменше 94 95, щонайменше 95965, щонайменше 96 95, щонайменше 97 95, щонайменше 9895, щонайменше 99 95 або на 100 95 ідентична 5ЕО ІЮО МО: 1, ЗЕО ІЮ МО: 37-72, 5ЕО ІЮ МО: 86-96 або 5ЕО ІЮ МО: 100. У додаткових варіантах здійснення рослина або рослинна клітина продукують інсектицидний поліпептид з інсектицидною активністю проти лускокрилого і/або твердокрилого шкідника.
Даний винахід також передбачає спосіб підвищення врожайності у рослини, який включає вирощування в полі рослини або її насінини, що містять стабільно вбудовану у її геном молекулу нуклеїнової кислоти касети експресії за даним винаходом, і де вказане поле інфіковане шкідником, проти якого вказаний поліпептид характеризується інсектицидною активністю.
Після того як необхідна нуклеїнова кислота трансформована у конкретний вид рослини, вона може поширюватись у цьому виді або переходити в інші сорти цього ж виду за допомогою традиційних технологій розведення, особливо, зокрема, комерційно важливі сорти.
У варіантах здійснення нуклеїтнова кислота за даним винаходом експресується в трансгенних рослинах, зумовлюючи таким чином біосинтез відповідного інсектицидного білка у трансгенних рослинах. Таким чином створюються трансгенні рослини з підвищеною стійкістю до комах, зокрема кукурудзяного кореневого жука. Для їх експресії у трансгенних рослинах нуклеїнові кислоти за даним винаходом необов'язково можуть бути модифіковані та оптимізовані. Хоча у багатьох випадках гени з мікробних організмів можуть експресуватись у рослинах на високих рівнях без модифікації, у трансгенних рослинах може відбуватися низька експресія мікробних нуклеїнових кислот, що містять кодони, які не є переважними у рослинах. Із рівня техніки відомо, що всі організми мають специфічні переваги щодо використання кодонів, і при цьому кодони нуклеїнових кислот, описаних у даному винаході, можуть бути змінені відповідно до характерних для рослин переваг з одночасним збереженням кодованих ними амінокислот. Крім того, високий рівень експресії в рослинах найліпше досягається у випадку кодувальних послідовностей із вмістом СС, що становить щонайменше приблизно 35 95, переважно більш ніж приблизно 45 95, більш переважно більш ніж приблизно 50 95 і найбільш переважно більш ніж приблизно 60 95. Мікробні нуклеїнові кислоти, які характеризуються низьким умістом С, можуть експресуватись у рослинах на недостатньому рівні внаслідок наявності мотивів АТТТА, які можуть дестабілізувати транскрипти, і мотивів ААТААА, які можуть спричиняти неналежне поліаденілювання. У варіантах здійснення послідовності можуть бути модифіковані з урахуванням конкретних переваг щодо кодонів і переваг щодо вмісту С однодольних або дводольних рослин, оскільки було показано, що ці переваги відрізняються (Митау еї аї. Мисі. Асіа5 Нев. 17:477-498 (1989)). Крім того, здійснюється скринінг нуклеїнових кислот щодо наявності нестандартних сайтів сплайсингу, які можуть спричиняти усічення транскрипту. Усі зміни, які необхідно виконати всередині нуклеїнових кислот, такі як описані вище, можуть бути виконані із застосуванням широко відомих методик сайт-спрямованого мутагенезу, ПЛР і конструювання синтетичних генів, наприклад, із застосуванням способів, описаних в опублікованих патентних заявках ЕР 0385962, ЕР 0359472 і УМО 93/07278.
В одному варіанті здійснення даного винаходу кодувальна послідовність інсектицидного білка за даним винаходом одержана відповідно до процедури, розкритої у патенті США 5625136, включеному у даний документ за допомогою посилання. У цій процедурі застосовують переважні для маїсу кодони, тобто один кодон, який найчастіше кодує дану амінокислоту у маїсі. Переважний для маїсу кодон для конкретної амінокислоти може бути одержаний, наприклад, із відомої генної послідовності маїсу. Частота використання кодонів для маїсу для 28 генів рослин маїсу наявна у Миггау еї а!ї., Мисівїс Асід5 Кезеагсй 17:477-498 (1989), розкриття якого включене у даний документ за допомогою посилання.
Так само нуклеотидні послідовності можуть бути оптимізовані для експресії в будь-якій рослині. Зрозуміло, що вся послідовність гена або будь-яка її частина можуть бути оптимізованими або синтетичними. Тобто також можуть застосовуватись синтетичні або частково оптимізовані послідовності.
Для більш ефективної ініціації трансляції можна модифікувати послідовності, які прилягають до ініціювального метіоніну. Наприклад, вони можуть бути модифіковані шляхом включення послідовностей, які, як відомо, є ефективними в рослинах. до5Ппі запропонував придатну консенсусну послідовність для рослин (МАК 15:6643-6653 (1987)), а Сіопіеспй пропонує бо додаткову консенсусну послідовність, яка є ініціатором трансляції (каталог 1993/1994, с. 210). Ці консенсусні послідовності придатні для використання з нуклеїновими кислотами за даним винаходом. У варіантах здійснення послідовності вбудовані у конструкції, що містять нуклеїнові кислоти, аж до АТО і включно (при цьому друга амінокислота залишається немодифікованою) або в альтернативному варіанті - аж до СТС, наступної за АТО (із можливістю модифікування другої амінокислоти даного трансгена), і включно.
Експресія нуклеїнових кислот у трансгенних рослинах керується промоторами, які функціонують у рослинах. Вибір промотора буде змінюватись залежно від часових і просторових вимог для експресії, а також залежно від цільового виду. Таким чином переважною є експресія нуклеїнових кислот за даним винаходом у листі, стеблах або стовбурах, у качанах, у суцвіттях (наприклад, у шипах, мітлицях, кісточках тощо), у коренях і/або саджанцях. Однак у багатьох випадках потрібен захист від більш ніж одного типу комахи-шкідника, і, відповідно, бажаною є експресія в декількох тканинах. Хоча, як було показано, багато промоторів із дводольних рослин функціонують в однодольних рослинах, і навпаки, у міру можливості промотори дводольних вибирають для експресії у дводольних рослинах, а промотори однодольних вибирають для експресії в однодольних рослинах. Однак не існує яких-небудь обмежень щодо походження вибраних промоторів; достатньо, щоб вони ефективно керували експресією нуклеїнових кислот у необхідній клітині.
В одному варіанті здійснення застосовуються промотори з конститутивною експресією, зокрема актин або убіквітин, або промотори СМР, або промотори Самм 355 і 195. Нуклеїнові кислоти за даним винаходом також можуть експресуватись під контролем промоторів, які регулюються хімічним шляхом. Переважна технологія для хімічної індукції експресії генів докладно викладена в опублікованій заявці ЕР 0332104 (Сіра-Сеїду) і патенті США Мо 5614395.
Переважним промотором для хімічної індукції є промотор тютюну РЕ-та.
В іншому варіанті здійснення може застосовуватись категорія промоторів, індуковних ушкодженням. Були описані численні промотори, які експресуються у ділянках поранення, а також у ділянках інфікування фітопатогеном. Оптимально такий промотор повинен бути активним лише локально у місцях інфекції, і таким чином інсектицидні білки за даним винаходом накопичуються лише у клітинах, в яких необхідно синтезувати білки для знищення інвазивних комах-шкідників. Переважні промотори цього типу включають описані 5іапіога еї а).
Коо) Мої. Сеп. Сепеї. 215:200-208 (1989), Хи єї аї. Ріапі Моїес. Віої!. 22:573-588 (1993), одетапп еї а).
Ріапі СеїІ 1:151-158 (1989), Вопгтвеїіег 4. І епіє, Ріапі Моїес. Вісі. 22:783-792 (1993), Рігек еї аї.
Ріапі Моїес. Віої. 22:129-142 (1993) і УМагпег еї а). Ріапі 9. 3:191-201 (1993).
Тканиноспецифічними або переважними для тканини промоторами, застосовними для експресії генів, що кодують інсектицидні білюи за даним винаходом у рослинах, зокрема кукурудзі, є промотори, які керують експресією в корені, серцевині, листі або пилку, зокрема в корені. Такі промотори, наприклад виділені з РЕРС або ігрА, розкриті у патенті США Мо 5625136, або МТ, розкритого у патенті США Мо 5466785. Обидва патенти США включені у даний документ за допомогою посилання у повному своєму обсязі.
Окрім того, можна застосовувати промотори, що функціонують у пластидах.
Необмежувальні приклади таких промоторів включають промотор 5'-/ТЕ гена 9 бактеріофага
ТЗ ї інші промотори, розкриті у патенті США Мо 7579516. Інші промотори, придатні відповідно до даного винаходу, включають без обмеження промотор малої субодиниці 5-Е9 ВиврР- карбоксилази і промотор гена інгібітора трипсину Кунітца (КІЗ).
У додаткових аспектах нуклеотидні послідовності за даним винаходом можуть бути функціонально пов'язані з промотором, індуковним завданням пошкодження або індуковним інфікуванням шкідниками або патогенами (наприклад, комахою- або нематодою-шкідником рослини). Були описані численні промотори, які забезпечують експресію у місцях пошкодження іМабо у ділянках нападу шкідників (наприклад, у місцях живлення комах/нематод) або фітопатогенної інфекції. Оптимально такий промотор повинен бути активним лише локально у ділянках нападу або поряд із ними, і таким чином експресія нуклеотидних послідовностей за даним винаходом буде зосереджена на клітинах, які зазнають проникнення в них або поїдання їх. Такі промотори включають без обмеження такі, що описані у 5іапіога еї аї!., Мої. Сеп. Сепеї. 215:200-208 (1989), Хи єї аї. Ріапі Моїес. Віої!. 22:573-588 (1993), | одетапп вї а. Ріапі Сеї! 1:151- 158 (1989), НоПпгитеїег апа І епіє, Ріапі Моїес. Віої!. 22:783-792 (1993), Нігек евї аї. Ріапі Моїес. Віо|. 22:129-142 (1993), Магпег еї аї. Ріапі 9. 3:191-201 (1993), патенті США Мо 5750386, патенті США
Мо 5955646, патенті США Мо 6262344, патенті США Мо 6395963, патенті США Мо 6703541, патенті
США Мо 7078589, патенті США Мо 7196247, патенті США Мо 7223901 і публікації заявки на видачу патенту США 2010043102.
У деяких варіантах здійснення даного винаходу застосовують "мінімальний промотор" або бо "основний промотор". Мінімальний промотор може залучати та зв'язувати комплекс РНК-
полімерази ІЇ та її допоміжних білків для забезпечення ініціації транскрипції й елонгації. У деяких варіантах здійснення мінімальний промотор конструюють таким чином, що він містить лише нуклеотиди/нуклеотидні послідовності з вибраного промотора, які потрібні для зв'язування транскрипційних факторів і для транскрипції нуклеотидної послідовності, що становить інтерес, яка функціонально пов'язана з мінімальним промотором, зокрема без обмеження послідовностей ТАТА-боксу. В інших варіантах здійснення в мінімальному промоторі відсутні послідовності, що діють у цис-положенні, які залучають і зв'язують транскрипційні фактори, що модулюють транскрипцію (наприклад, підсилюють, пригнічують, надають тканиноспецифічності, надають здатності до індукування або здатності до пригнічення). Мінімальний промотор, як правило, розташовуються вище (тобто в напрямку 5) від нуклеотидної послідовності, що підлягає експресії. Отже, для застосування як мінімального промотора можна вибирати нуклеотиди/нуклеотидні послідовності з будь-якого промотора, який можна застосовувати відповідно до даного винаходу.
В описані в даному винаході касети експресії можна вбудовувати багато інших послідовностей. Вони передбачають послідовності, які, як показано, посилюють експресію, як, наприклад, інтронні послідовності (наприклад, з АапІ і Бгоп7еї) і вірусні лідерні послідовності (наприклад, із ТММ, МСММ і АММ).
Може бути переважним спрямовувати експресію нуклеїнових кислот за даним винаходом у різні клітинні локалізації в рослині. У деяких випадках може бути бажаною локалізація у цитозолі, тоді як в інших випадках переважною може бути локалізація в певній субклітинній органелі. Субклітинна локалізація ферментів, кодованих трансгеном, виконується за допомогою методик, добре відомих із рівня техніки. Зазвичай ДНК, що кодує цільовий пептид із відомого продукту гена, спрямованого на органелу, обробляють і піддають злиттю вище від нуклеїнової кислоти. Більшість таких цільових послідовностей відомі для хлоропласта, і було показано їх функціонування у гетерологічних конструкціях. Експресія нуклеїнових кислот за даним винаходом також спрямована в ендоплазматичний ретикулум або у вакуолі клітин-хазяїв.
Методики для досягнення цього добре відомі з рівня техніки.
Вектори, придатні для трансформації рослин, широко відомі з рівня техніки. Для опосередкованої Адгобасіегішт трансформації придатні бінарні вектори або вектори, що несуть
Зо щонайменше одну Т-ДНК граничну послідовність, тоді як для прямого переносу генів придатний будь-який вектор, і переважною може бути лінійна ДНК, що містить лише конструкцію, що становить інтерес. У разі прямого перенесення генів можна застосовувати трансформацію за допомогою одного виду ДНК або спільну трансформацію (5споснег еї аї. Віоїєсппоіоду 4:1093- 1096 (1986)). Як у разі прямого перенесення генів, так і в разі опосередкованого Адгобасіегійт перенесення трансформацію зазвичай (але не обов'язково) здійснюють із селектовним маркером, який може забезпечувати стійкість до антибіотика (канаміцину, гігроміцину або метотрексату) або гербіциду (баста). Вектори трансформації рослин, що містять молекули нуклеїнової кислоти за даним винаходом, можуть також містити гени (наприклад, ізомеразу фосфоманози; РМІ), що забезпечують позитивну селекцію трансгенних рослин, як описано у патентах США 5767378 і 5994629, включених у даний документ за допомогою посилання. Вибір селективного маркера не є, однак, визначальним для даного винаходу.
У варіантах здійснення нуклеїнова кислота може бути трансформована у ядерний геном. В іншому варіанті здійснення нуклеїнова кислота за даним винаходом безпосередньо трансформується у геном пластид. Великою перевагою трансформації пластид є те, що пластиди зазвичай здатні до експресії бактеріальних генів без суттєвої оптимізації кодонів, і при цьому пластиди здатні до експресії множинних відкритих рамок зчитування під контролем одного промотора. Технологія трансформації пластид докладно описана в патентах США МоМо 5451513, 5545817 і 5545818, у заявці згідно з РСТ Мо УМО 95/16783 і в МеВгіде еї а!. (1994) Ргос.
Маїї. Асад. сі. ОБА 91, 7301-7305. Основна методика трансформації хлоропластів передбачає введення ділянок клонованої пластидної ДНК, що фланкують селектовний маркер, разом із геном, що становить інтерес, у придатну цільову тканину, наприклад, із застосуванням біолістики або трансформації протопластів (наприклад, трансформації, опосередкованої хлоридом кальцію або РЕС). Фланкувальні ділянки розміром 1-1,5 т.о., які називаються націлювальними послідовностями, сприяють гомологічній рекомбінації з геномом пластид і таким чином забезпечують заміщення або модифікацію специфічних ділянок пластому.
Спочатку як селектовні маркери для трансформації використовують точкові мутації в 165 геЕМА і генах гр512 хлоропластів, що надають стійкості до спектиноміцину і/або стрептоміцину (Змаб, 72.,
На|дикієміс, Р., апа Маїїда, Р. (1990) Ргос. Маїї. Асад. сі. ОБА 87, 8526-8530; тацйб, .. М., апа
Маїїда, Р. (1992) Ріапі Се 4, 39-453. Це зумовило одержання стабільних гомоплазмічних бо трансформантів із частотою, що становить приблизно одна трансформація на 100 бомбардувань цільових листів. Наявність сайтів клонування між даними маркерами забезпечило можливість створення вектора, що націлюється на пластиди, для введення чужорідних генів (егаиб, у. М., апа Маїїда, Р. (1993) ЕМВО .). 12, 601-606). Суттєвого підвищення частоти трансформації досягали шляхом заміщення рецесивних генів ТЕМА або г-білка, що забезпечують стійкість до антибіотиків, на домінантний селектовний маркер, бактеріальний ген аадА, що кодує фермент аміноглікозид-3'-аденілтрансферазу, що знешкоджує спектиноміцин (Змар, 7., апа Маїїда, Р. (1993) Ргос. Майї). Асад. сі. ОБА 90, 913-917). Раніше цей маркер успішно застосовувався для трансформації пластидного геному зеленої водорості
Спіатудотопазх геіппагайії із високою частотою (соїд5сптіаї-СіІвнтопі, М. (1991) Мисі. Асіаз Везв. 19:4083-4089). Інші селектовні маркери, які використовують для трансформації пластид, відомі з рівня техніки, і вони включені в обсяг даного винаходу. Як правило, для досягнення гомопластидного стану необхідно близько 15-20 циклів поділу клітин після трансформації. Під час експресії в пластидах, за якої за допомогою гомологічної рекомбінації гени вбудовані в усі декілька тисяч копій кільцевого геному пластид, наявних у кожній рослинній клітині, застосовують перевагу великої кількості копій порівняно з генами, що експресуються в ядрі, із забезпеченням рівнів експресії, які легко можуть перевищувати 10 95 від загальної кількості розчинного рослинного білка. У переважному варіанті здійснення нуклеїнову кислоту за даним винаходом вводять у спрямований на пластиди вектор, і при цьому вона трансформується у геном пластид необхідної рослини-хазяїна. Одержують рослини, гомопластичні щодо геномів пластид, що містять нуклеїнову кислоту за даним винаходом, і при цьому вони переважно здатні до високої експресії нуклеїнової кислоти.
ПРИКЛАДИ
Даний винахід далі буде описаний за допомогою посилання на наступні докладні приклади.
Ці приклади надані лише для ілюстрації та не призначені для обмеження, якщо не зазначено інше. Стандартні методики з використанням рекомбінантної ДНК і молекулярного клонування, застосовувані у даному документі, добре відомі з рівня техніки і описані У. Затюбгоок, 6ї аї.,
Моїесшіаг Сіопіпд: А ІГарогаїюту Мапиаї!ї, За Еа., Со ргіпд Натог, ММ: Соід ргіпд Нагрог
ІГарогаїогу Ргезв (2001); Т.У. 5ійНаму, М.С. Вептап, апа Г.М/. Епдиівї, Ехрегпітепів м/ййп Сепе
Еивіопв, Соїа б5ргіпу Нагбог І арогайогу, Соїа Зргіпд Нагброг, ММ (1984) і Аизибеї, Е.М. еї а!., Ситепі
Зо Ргоїосоїв іп Моїесшціаг Віоіоду, Мем Моїк, допп УМїеу апа 5опз Іпс., (1988), Вейег, єї аї!., Меїйодв іп
Агарідорзі5 Незеагсп, Умопа 5сіепійіс Ргез5 (1992), і ЗСпиКа еї а!., Ріапі МоІесшаг Віооду Мапиаї,
Кіижег Асадетіс Рибріїєпегз (1998).
Приклад 1. Ідентифікація білка з інсектицидною активністю проти західного кукурудзяного кореневого жука
Інсектицидний білок (ЗЕО ІЮ МО: 1) ідентифікували із УуосазпоЇва тагййта. Синтезували оптимізований для Е. соїї варіант цього гена (ЗЕО ІЮ МО: 2) і ген клонували у вектор рЕТ29а з утворенням конструкції рЕТ29а(Ууооа5). Конструкцію рЕТ29а(Мусод5) уводили шляхом трансформації в Е. соїї ВІ 217 (ОЕЗ) і експресію білка здійснювали в бульйоні Лурія-Бертані з індукцією під дією ІРТО при 18 "С протягом ночі. Розчинну фракцію лізатів одержували із цих культур шляхом застосування преса Френча із наступним центрифугуванням лізатів цілих клітин при 20000 х д протягом тридцяти хвилин. Потім надосадову рідину (розчинну фракцію) тестували на біологічну активність щодо західного кукурудзяного кореневого жука (МУСК).
Аналізи біологічної активності здійснювали із застосуванням способу включення в раціон.
Стисло, лізати Е. соїї ВІ 217(0ЕЗ) змішували з рівним об'ємом нагрітого штучного раціону для комах (Віозегм, Іпс., Френчтаун, Нью-Джерсі) у центрифужних пробірках об'ємом 1,5 мл, а потім вносили в невеликі чашки Петрі. Після того як суміш поживного середовища і зразка охолоджували і забезпечували можливість затвердіння, у кожний планшет додавали 12 личинок
М/СК. Планшети запечатували і витримували за умов навколишнього середовища лабораторії з урахуванням температури, освітлення і відносної вологості Як негативні контролі використовували лізати з культур Е. соїї ВІ 21" (ОЕЗ3), що несуть порожній вектор рЕТ29а.
Смертність оцінювали на 4-й день і 7-й день. У цій і всіх наступних таблицях, у яких показана інсектицидна активність щодо СЕМУУ, скорочення у стовпчику "Примітки" розшифровуються наступним чином: 5 - невелика личинка, 5т - невелика/середня личинка, т - середня личинка, ть - середня/велика личинка, б - велика личинка, мо - дуже велика личинка. Як показано у таблиці 1, лізат із культури, що експресує рЕТ29а(УмМоса5), демонстрував сильну біоактивність проти МУСЕ. Білок МУ. тапйіта був перейменований у Ууоод5СЕмУ.
Зо
Таблиця 1
Інсектицидна активність проти західного кукурудзяного кореневого жука 00освюва 000 Лель р одартност ЧИТЬ смертюст Патяти о смертності о смертності | Примітки мертвих мертвих 5ОмММкРІ,рН7О,5омММ Мас 0 | 70 | 2 | 17 | ть /
ВІ21рЕТ2За(порожній)ї 1 | 8 | 2 | 17 | ть / вігірЕТ2За(уусоїв) | 10 | 83 | 712 | л00 | щ
Білок М/осазСЕМУ у препараті на основі лізату визначали кількісно за допомогою Ехрегіоп від
Віо-Кай і аналізу білків з використанням ВСА і повторно тестували в діапазоні концентрацій проти 12 личинок М/СЕК у біологічному аналізі із включенням у раціон (таблиця 2). МУосазсСему продемонстрував сильну біологічну активність щодо УУСК у тестованому діапазоні концентрацій.
Таблиця 2
Інсектицидна активність лізату УУМосазСтКУМ проти МСЕК мюоовотноними Міст Ж КАТ зрометнюся понти . о смертності Примітки мертвих смертності | мертвих 25077777777711111111111111110 Ї71183171711112 17111100 Її лоб 11111116 11831112 1111100 Її 50111119 Ї11175 17.12 1100 | щ Ф 2577111111111111117111111716 11150 1.111192 | т 50111110 Ї11110 12 1 717 | ть
ВІ21УрЕТ2За(порожній)!ї 0 | 0 / 0 її 0 | в (
ЕЕінаініолоіс ННИСЛНІ НОСИН НОСІ КОКОН НОЯ
Масі
Приклад 2. Очищений УмМооазСКУМ характеризується інсектицидною активністю щодо західного кукурудзяного кореневого жука
Конструкцію рЕТ-6НіЗ-5БОМО, що містить 5ЕО ІО МО: 2, одержували для УмМооазстУУ.
Конструкцію рЕТ-6НіЗ-ФОМО-УМоод5СЕУМ уводили шляхом трансформації в Е. соїї ВІ 217ОЕЗ) для продукування білка. Білок, мічений БОМО, очищували за допомогою стандартних методик для Ніб-міченого білка, і згодом розщеплювали за допомогою протеази ЗОМО з вивільненням білка ММоса5СЕМУ, що не містив мітку. Потім розщеплений білок вносили на колонку НізТгарЕЕ для ЕРІ С і збирали елюат з колонки. Фракції елюату аналізували на чистоту за допомогою 505-
РАСЕ (очікувана МУУ М/осразСКМУ становила 54,1 кДа). Потім очищений УУосазхСКМУ піддавали діалізу в 1ТХ РВ5 протягом ночі при 4 "С, а потім концентрували до 13 мг/мл. Потім чистий білок тестували в діапазоні концентрацій проти 12 личинок МУСЕ у способі включення в раціон, описаному у прикладі 1. Як показано в таблиці 3, М/осазСКУМ є дуже ефективним проти МСЕ; умосазсСЕМУ при 6 мкг/мл викликав 83 95 смертність на 6-й день.
Таблиця З
Інсектицидна активність очищеного М/осазсткмМу проти УМУСК оон кл омертюст Принт | РЕ смертності пеяніти о смертності! Примітки ую смертності | Примітки мертвих мертвих
ХР ЇЇ 0 Її 0 1 ющЩщ (! 0 1 0 116 лоб 77711111 Ї117177 111158. | в | 12 | л00 50777771 Ї11719 1 75. | щв8 | 11 | 92 | в 25.71.1177 | 58 | щ в | 12 | л00 63 77777777 11711 11 8 ЇЇ 8 | 710 | 83 | т
ЗИ 77777770 10 | вт | 3 | 25 | ть
Приклад 3. Му/ооа5зСКМуУ характеризується інсектицидною активністю щодо північного кукурудзяного кореневого жука
УмМоосазСКУМ очищали, як у прикладі 2, і тестували на ефективність проти 12 личинок північного кукурудзяного кореневого жука (МСК) в аналізі із включенням у раціон, здійснюваному фактично як описано у прикладі 1, за винятком того, що смертність оцінювали на 3-й день і 7-й день. М/осазСтКМУ тестували в концентраціях 0,2 мг/мл і 0,1 мг/мл. Негативний контроль містив лише їх РВ5. Як показано в таблиці 4, Моса5СЕМ/ демонструє інсектицидну активність проти МОСК.
Таблиця 4
Інсектицидна активність УМосазСАКМУМ проти МСЕК мертвих мертвих лхРВ5 77777777 11171011 096 | 0 | 09 | щ 6 НК"
Приклад 4. УмМосазСКУУ характеризується інсектицидною активністю проти західного кукурудзяного кореневого жука, стійкого до Сту
Щоб визначити, чи реалізується токсичність УМосазСКМуУ за допомогою способу дії, не пов'язаного з білками, спорідненими з СтуЗ3, УМосазСКУМ очищували, як у прикладі 2, і тестували на ефективність проти лінії М/СК, яка є стійкою до токсину тСгузА (тсСгузА-К), і проти лінії
МС, яка є стійкою до токсину еСтгу3З.1Ар (еСту3.1Ар-К). Аналізи із включенням у раціон здійснювали фактично як описано у прикладі 1, за винятком того, що смертність оцінювали на 4- й день і 6-й день. Очищений УуосазСкУУ тестували у двох різних концентраціях, 0,2 мг/мл і 0,075 мг/мл. Негативний контроль містив лише їх РВ5. Також аналізували МУ/СК, який не був стійким до тСгузА або еСту3.1АБ (5и5 - сприйнятливий). Кожний аналіз здійснювали з 12 личинками М/С. Як показано в таблиці 5, ММоод5СЕМУ демонструє інсектицидну активність проти ліній УУСЕК, стійких до Сгу.
Таблиця 5
Інсектицидна активність УУооса5СЕУМ проти Сту-АВ МСА
Примітки І Примітки мертвих | смертності мертвих | смертності вив,бам/мл 777 | 12 | лоб | | 72 | 10096 17711 вив, їх РВЗ 77777 | 10 | 096 | ї2то | 17 | 895 | Пт отсузА-,бам/имл | 9 | 7596 | Зт | 72 | 10095 отСтузА-ВК,0075мимл | 6 | 50 | бт | 70 | 8395 | гт отсузА-в,їхРВ5 | 0 | 095 | ї2ть | З | 2595 | Отр есСтузлАрБ-В,баму/мл | 10 | 8396 | свт | 72 | 10095 | Крх есСтузлАр-В,0,075му/имл. | 9 | 7596 | Зт | 71 | 9296 | тт есСтузлАБ-Н,ІхРВ5 | 0 | 095 | ї2ть | 0 | 095 | ї2ть
Приклад 5. УМосазСтМуУ не характеризується інсектицидною активністю проти лускокрилих
Лізати бактеріальних культур, що експресують УуосазсСтУМ (ЗЕО ІО МО: 2), тестували на біологічну активність щодо панелі лускокрилих комах-шкідників за допомогою біологічних аналізів із нашаровуванням на раціон. Кожну з вогнівки кукурудзяної (ЕСВ), совки-іпсилон (ВСУ), а також совки кукурудзяної (СЕМ) і совки трав'яної (ГАМУ) тестували на інсектицидну активність УМосазСКУМ за допомогою аналізу із включенням у раціон, аналогічного такому із прикладу 1. У кожному експерименті тестували 12 личинок Ї/1 із використанням лізатів бактеріальних культур ВІ, 217 (ОЕЗ), що несуть ген, який кодує МУооазСАМУ (З5ЕО ІЮО МО: г).
Позитивний контрольний зразок ВСМУ, СЕМУ і ЕАМУ складався з личинок, підданих впливу лізатів
Е. соїї ВІ217 (ОЕЗ3), що експресують МірЗзЗА (патент США Ме 5877012, включений у даний документ за допомогою посилання). 1Х РВЗ окремо і лізати бактеріальних культур ВІ 217 (ОЕЗ), що несуть порожній вектор рЕТ29, застосовували як негативні контролі. Смертність оцінювали на 7-й день. Щодо личинок, які досягали стадії І 3, обробка не чинила значного впливу. Якщо личинки досягали тільки стадії І 2, то можливо, що обробка спричиняла пригнічення росту. Якщо личинки залишалися на стадії І 1 протягом усієї обробки, то відбувалося пригнічення росту. Це також може вважатися "ефективною смертністю", оскільки личинки не будуть розвиватися після стадії 11, навіть якщо вони залишаються живими. УуосазСкКУу не був активним щодо тестованих лускокрилих комах-шкідників у цих експериментальних умовах (таблиця 6).
Таблиця 6
Інсектицидна активність УМобазСЕМУ проти лускокрилих жне| ою 00 Же шен пен . Примітки мертвих | смертності
СЕМ |ВІ21УрЕТ2ба(порожній)ї 77771110 11096111 123
СЕМ |ВІ2ТЛМосСаВСВМ 77777770 11961111 123
СЕМ |ВІ21У/рЕТ2ЗамрЗАу 77777779 17536111 З
СЕМ |50мММкКРІрНТЯ0,5ОмММ Мас! 7777/1710 10961711 123
СВ |ВІ21УрЕТ2ба(порожній)ї 77771110 11096111 123
ПЕ ої: ЗИ ГЕРХ БТ Ето т ПН КОН: ТОННИ НОНННО :ТчЯ НОНН КР ТиЕ УДИН
СВ |ВІ21У/рЕТ2Зад(мірЗА) 77777770 16111111 123
СВ |50мММкКРІрНТЯ0,5ОмММ Мас! 7777/1710 10961771 123
ВСУ |ВІ21УрЕТ2ба(порожній)ї 77777110 11096111 123
ПЕТоТЛИ ГТ Б етет Ето т ПН КОКО: ПОН НОНННИС ТчНЯ НОН КР ТиЕ: ЗД
ВСУ |ВІ21У/рЕТ2ЗадмрЗАу 77777772 | лоб 11111111
ВСУ |50мММкКРІрНТЯ0,5ОмММ Мас! 7777/1710 10961771 123
ЕАМУ/ |ВІ21УрЕТ2ба(порожній)ї 77771110 11096177 2210130 (РАМУ |вігглусосавСВМу 77777777 1011096 | пгтиз
Таблиця 6
Інсектицидна активність УМобазСЕМУ проти лускокрилих ее) 000оовюва 0 кит т пити . Примітки мертвих | смертності
ЕАМУ |ВІ21УрЕТ2ЗамрЗАу 77777778 1 битв Я
ЕАМУ |50мММкКРЬІрН7О,5ОмММ Мас! 7777/1770 096177 12і3 1-1-а личинкова стадія, І 2-2-а личинкова стадія, І 3-3-я личинкова стадія
Приклад 6. Варіанти УуосазСкКуУуУ характеризуються інсектицидною активністю проти М/СЕК
У Мосді5СЕМУ уводили мутації та аналізували стабільність білків та інсектицидну активність бактеріальних лізатів, що містили мутантний варіант Муоса5СЕМУ, та/або очищеного білка, що являв собою мутантний варіант УуУоод5СЕУУ. Мутації включають зміни цистеїнових амінокислотних залишків, а також вставку лейцинових залишків, що прилягають до цистеїнових залишків. Ці мутації вводили для визначення того, чи можна розробити мутантний варіант
УМосд5СЕМУ, який зберігав би інсектицидну активність, але був би перетравлюваним в аналізі з використанням штучного шлункового соку (ЗО). Такий варіант УусоазСКУУ може мати комерційне значення, наприклад, для надання інсектицидних властивостей рослині за допомогою трансгенної експресії в рослині.
Інсектицидну активність визначали за допомогою аналізів із включенням у раціон, здійснюваних фактично як описано у прикладі 1, з використанням 12 личинок МУСК у кожному експериментальному аналізі. Результати показано в таблицях 7-19. 5ЕО ІО МО відповідають амінокислотній послідовності варіанта. Мутантні варіанти, показані в таблицях 14-16 і 19, містять вставлені лейцинові залишки в заданих положеннях, на що вказує "-ІЇ еи-" або "-|-".
Кожний бактеріальний лізат із таблиці 14 тестували в розбавленнях 1:20. У таблицях 151 16 розбавлення лізатів показані як частина опису обробки. У таблицях 17-19 кількості використовуваного очищеного білка показані як частина опису обробки. Більшість мутантних варіантів УМосазСКУУ демонструють інсектицидну активність. Однак, далеко не всі демонструють перетравлюваність під дією ЗО.
Приклад 7. Тестування впливу штучного шлункового соку на препарати на основі лізатів Е. сої
У даному прикладі описується аналіз, здійснюваний для визначення перетравлюваності під дією ЗОРЕ. Бактеріальні лізати в 50 мМ фосфату калію, рН 7,0, 50 мМ хлориду натрію розбавляли до 3 мг/мл (концентрація загального вмісту білка) для аналізу перетравлюваності.
Реакцію перетравлювання ініціювали шляхом додавання 15 мкл лізату до 285 мкл штучного шлункового соку (10 одиниць пепсину/мкг білка або приблизно 1579 одиниць пепсину/мл у розчині -Соп (2 мг/мл хлориду натрію, рН 1,2)) при 37 "С. Через 5 або 10 хвилин відбирали 100
Зо мкл реакційної суміші лізат-5ОЕ і шляхом додавання її до 100 мкл попередньо нагрітого (95 "С) стоп-розчину, що містив 65 95 трицинового завантажувального буфера (Віо-гад, 2х трициновий завантажувальний буфер із 10 95 рД-меркаптоетанолу) і 35 95 500 мМ бікарбонату натрію, рн 11,0, реакцію припиняли. Зразок у нульовий момент часу (ТО) одержували шляхом додавання 5 мкл тестованого лізату до 100 мкл попередньо нагрітого (95 "С) стоп-розчину і 95 мкл штучного шлункового соку. Усі зразки нагрівали при 95 "С протягом 5 хвилин, а потім зберігали на льоду до проведення аналізу із застосуванням 505-РАСЕ. Тридцять мікролітрів кожної реакційної суміші завантажували у 10-20 95 трис-трициновий гель для пептидів перед здійсненням стандартного гель-електрофорезу білків. Трис-трициновий гель фіксували протягом 20 хвилин за допомогою суміші 4095 метанолу: 1095 оцтової кислоти безпосередньо після електрофорезу. Потім гель забарвлювали за допомогою барвника для білків беІСоде Віне протягом 1 години за кімнатної температури. Через 1 годину поліакриламідний гель знебарвлювали за допомогою дистильованої води протягом щонайменше 12 годин. Якісні результати показано в таблицях 7-19 у стовпчику "ЗОЕ". Мутантні варіанти М/оосй5СЕММ з таблиці 20 також тестували на перетравлюваність. "Ні" (М) означає, що інтактний варіант білка
УмМосазСЕМУ піддавався виявленню за допомогою барвника для білків СеІСоде Віце після гель- електрофорезу, що вказує на те, що білок не був повністю перетравлюваним в аналізі з використанням ЗО. "Так" (У) означає, що інтактний варіант білка М/осазСКУМ не піддавався виявленню, що вказує на те, що варіант білка УуоосазСКУМ був перетравлюваним в аналізі з використанням ЗОРЕ. Якщо у стовпчику "ЗОЕ" у таблицях 7-19 не міститься ні "М", ні "У", то це вказує на те, що білок не тестували на перетравлюваність.
Таблиця 7
Інсектицидна активність мутантних варіантів УУосазСКУМ проти М/СК
ФЕО мертвих! смертності мертвих) смертності
ВІ 217УрЕТ29 о о сюрожію 01909 ть | оо» в
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о,
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о,
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о,
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о,
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о,
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о,
ВІ 21 ЛУосазсСАу о о,
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о,
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о,
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о,
Таблиця 8
Інсектицидна активність мутантних варіантів УУосазСКУМ проти УУСК
ФЕО мертвих | смертності мертвих | смертності
ВІ 217УрЕТ2За о о сюроюію 001116 рт
ВІ217ЛуоодвСНМ М! у 7595 | в/т те 92 95 в 50 мкг/мл
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о,
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о,
ВІ 21 ЛМосазСАМУ
С3835/С4855, 50 37 50 95 5 12 100 Фо М мкг/мл
ВІ 21 ЛМосазСАМУ
С4355/04855, З8 4 З 9о 5 (2т) 11 92 96 т М 50 мкг/мл
ВІ 21 ЛМосазСАМУ
С3985/С4355, 39 З 25 90 в/т 5 42 96 т М 50 мкг/мл
ВІ 21 ЛМосазСАМУ
С3985/04855, 40 5 42 96 5 67 9о 5 М 50 мкг/мл
Таблиця 9
Інсектицидна активність мутантного варіанта УуосазхСКУУ проти УУСК 5ЕОІЮН--- я -- о мертвих| смертності мертвих смертності
ВІ21рЕТ29а(порожній| | 0 | 095 | ть | 0 | 09 | 6
ВІ-217ЛмосавСНМ м, і Е 92 95 18 12 100 96 мкг/мл
ВІ 21 ЛМосазСАМУ
С3135 23835 03985 42 1 8 90 тр 1 8 90 тр
С4355 С4855, 29 мкг/мл
ВІ 21 ЛМосазсСтму
С3135 23835 03985 42 0 бо тр 0 бо тр
С4355 С4855, 58 мкг/мл
ВІ 21 ЛМосазСАМУ
С3135 23835 023985 о о
С4355 С4855, 145 42 1 8 90 тр 1 8 90 тр мкг/мл
ВІ 21 ЛМосазСАМУ
С3135 23835 023985 о о
С4355 С4855, 580 42 4 ЗЗ до т 4 ЗЗ до тр мкг/мл
Таблиця 10
Інсектицидна активність мутантних варіантів УУосазСКУМ проти УУСК : . - римітки мертвих | смертності! мертвих | смертності
Ві21/ре2о (порожній) | | 0 | 095 | З | 259 | 6 мкг/мл
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о
ВІ 217/МосазСсАМІ о о
ВІ 21 ЛМосазСАМУ
Сз3835 04355 04855, 50 41 2 17 Фо 5 42 до мкг/мл
ВІ 21"ЛМосазсВвмМу 1771. о о
ВІ 21 ЛУосазСАУу
УгАВЕ 12641 У277Е, 50 48 50 95 10 83 90 т мкг/мл
ВІ 21 ЛМосазСАМУ
УЗ26Б ІЗ40І. ІЗ, 50 43 5 42 до 11 92 96 5 мкг/мл
Таблиця 11
Інсектицидна активність мутантного варіанта УуосазхСКУУ проти УУСК
ЗЕО
МО: мертвих смертності римітки мертвих | смертності римітки
ВІ21рРЕТ29(порожній) || З | 2595 | т | 5 | 4295 | ть
ВІ-21"ЛМоойзСВМУ 12091-
Зб у223гіг2волемоім. | ЇЇ 77771171
Таблиця 12
Інсектицидна активність мутантного варіанта УуосазхСКУУ проти УУСК
ЗЕ ло 4йдень//////// | //////// б'ійдень///З
МО:| мертвих смертності мертвих смертності
ВІ21рРЕТ29(порожній) | | 2 | 1796 | тр / 4 | 9395 | то | /
ВІ 21"ЛМосазсВАМУ І4471 о о
УА64Е І469І., 181 мкг/мл Ше 01» 00 зе ШІ
ВІ 21"ЛМосазсВвМУ 14471. о о
Таблиця 13
Інсектицидна активність мутантних варіантів УУосазСКУМ проти М/СК 5ЕО
МО: мертвих смертності мертвих | смертності
Ві21/ре29 (порожній)! | 1 | 896 | ть | 1 | 89 | 6
ВІ 21 ЛМосазСАМУ
СЗ8ЗА С485А, 245 37 7590 5 12 100 95 М мкг/мл
ВІ 21 ЛМосазСАМУ
СЗ8ЗА С485А, 49 37 7 58 95 зт 11 92 96 т М мкг/мл
ВІ 21 ЛМосазСАМУ
СЗ98А С485А, 213 44 11 92 96 зт 12 100 95 М мкг/мл
ВІ 21 ЛУосазСАУу
СЗ98А С485А, 43 44 З 25 90 5 7590 т М мкг/мл
ВІ 217/МосазСсАМІ о о
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о,
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о
ВІ 21 ЛМосазСАМУ о о,
Таблиця 14
Інсектицидна активність мутантних варіантів УМосазСКУМ проти М/СК
ЗЕО
Гени НОЙ СТИ НОЗІ НОСИ ПОЕТ ПОС ЗИ МС НІ зд |в ою | вж 05/01 певлісюстюв (5000 в3ж 050201
Пес СЯ НС НИХ ЗНИ МОВИ МОН ПОС ЗИ МСННИ НІ савани (88011 вж вв іамісьсв (99001060 сізвісютазв (851 5 | ж то) по) веж | т
Таблиця 15
Інсектицидна активність мутантних варіантів УМосазСКУМ проти М/СК - ш мертвих | смертності мертвих | смертності реве || 0 о» | вв зазввто|09 | 9 ж вит) ою зів 00690805 ати) 2 юю! заз 09) 8 вжи) о важ ть твиозвито 0 5 аж те) 2 ою твпозвито 0 8 ов те) по веж твою 0 2 ж т) по вею в твиуввиво | 5 аж то) а ою тиви 5) 2 и т) в юю в тиви 15 1 в» т) в юю в тивною 5 | 2 || в | є | з» в
Таблиця 16
Інсектицидна активність мутантних варіантів УУосазСКУМ проти М/СК мертвих | смертності мертвих | смертності
ПЕН сс чн НС ШК НЕСТИ НИ МОУ НСС И НОМ ВС
Пен сс чн НЕ ШАНИ МУЗ НОСИ МОУ НАУКИ НОМ ВС
ПЕАНьсс чн НЯ НОСТІ НИЗ НОСИ НО НАУ МОСС В
Песни НАЙ НОСІ МЕС ЗВ НОСИ НИ НУ МОСС ВС
Песни НАЙ НОСІ НСС НОСИ НУ НАУКИ НОМ ВС твпосовтсиувевитоо 63561 твпосовтсиувевитво 60 0 т) 2 7 ту ев ВСЯ НИВИ Я МЕМ ПЕС Я
Ї еи-С398-Ї еи-М399, 88 1 8 96 ть З 25 90 ть У 1200 сет 015600 в3ж 52 ою сет 01550 ж от) 2 ою свита. 00155 07 вет) в жу тет 11 |в т) | вв
Таблиця 17
Інсектицидна активність очищеного варіанта С398І УуосазСтКУМ проти УМУСК мертвих смертності мертвих смертності саавиобомими 556 | во | то пою свв лоомими 550 | ож | т / тю / ж т саввивомеми 5501 ож | т / є / ж т ху саввисвмеми 5501 ож | т я / ж вх саввитаямшни 5118 | то 2 жк свв лоомими 550 | ож | т / в / ж т
Саввівомеми | 55 | 0 | ож | т | «є | ж т
Таблиця 17
Інсектицидна активність очищеного варіанта С398І УуосазСтКУМ проти УМУСК 5ЕО ІА Я - с --- т мертвих смертності мертвих смертності
МосазСАМ о о
МосазСАМ о о 1Х РВ5 710 | 09 | то | 0 | 095 | ь 1Х РВ5 710 | 09 | то | 1 | 895 | ь
Таблиця 18
Інсектицидна активність очищеного варіанта С398У УуосазСКУМ проти М/С
ФЕО
7 мертвих | смертності Р мертвих смертності
УМооа5СНМ СЗ98У, | 67 5 42 95 зт 67 95 т | хм 200 мкг/мл
УМооа5СНМ СЗ98У, | 67 4 33 95 т 10 83 95 ть | У 100 мкг/мл
УМооазСНМУ СЗ98У, | 67 і 8 95 ть 7 58 95 ть | У 50 мкг/мл
УМооазСНМУ СЗ98У, | 67 і 8 95 ть З 259 у мкг/мл
УМооа5СНМ СЗ98У, | 67 і 8 95 ть і 8 96 у 12,5 мкг/мл
УМооа5СНМ СЗ98У, | 67 4 33 95 т 10 83 95 т | х 200 мкг/мл
УМооа5СНМ СЗ98У, | 67 4 33 95 ть 5О 95 ть | У 100 мкг/мл
УМооазСНМУ СЗ98У, | 67 БО 9 ть 7 58 95 ть | У мкг/мл
УМооазСНМУ СЗ98У, | 67 З 25 95 ть те 92 95 в |У 25 мкг/мл
УМооа5СНМ СЗ98У, | 67 0 96 ть 2 1795 ть | У 12,5 мкг/мл 1Х РВ5 0 1 09 | ть | 1 | 835 | ь 1Х РВ5 | о0 1 09 | ть | 0 | оз» | ь
Таблиця 19
Інсектицидна активність очищеного варіанта 0397-І еш-І еи-С398 ММосазскУМ проти МС
ФЕО
7 мертвих |) смертності р мертвих | смертності р
МуосазСсАМ 0397-
Ї ен-І еи-С398, 200 11 92 96 5 12 100 95 У мкг/мл
МуосазСсАМ 0397-
Ї ен-І еи-С398, 200 75 90 вт 12 100 95 У мкг/мл
МуосазСсАМ 0397-
Ї ен-І еи-С398, 100 75 90 вт 12 100 95 У мкг/мл
Таблиця 19
Інсектицидна активність очищеного варіанта 0397-І еш-І еи-С398 ММосазскУМ проти МС
ФЕО мертвих І смертності мертвих смертності
МуосазСсАМ 0397-
Ї ен-І еи-С398, 100 67 9о вт 12 100 95 У мкг/мл
МуосазСсАМ 0397-
Ї еи-Геи-С398, 50 7 58 95 т 12 100 95 У мкг/мл
МуосазСсАМ 0397-
Ї еи-Геи-С398, 50 7 58 95 т 12 100 95 У мкг/мл
МуосазСсАМ 0397-
Ї ен-І еи-С398, 25 67 96 т 12 100 95 У мкг/мл
МосазсАМ 0397-
Ї ен-І еи-С398, 25 50 96 т 11 92 96 т У мкг/мл
МуосазСсАМ 0397-
Ї ен-І еи-С398, 12,5 4 ЗЗ о т 50 о т У мкг/мл
МуосазСсАМ 0397-
Ї ен-І еи-С398, 12,5 4 ЗЗ о т 7590 т У мкг/мл
ЛХРВЗ ЇЇ 0 | о | ть | 0 | 09 | в
ХР ЇЇ 1 | 89» | ть | 1 | 89» | 6
Таблиця 20
Перетравлювання мутантних варіантів УУосазсСктмУ в аналізі з використанням ЗО зеВЕ77111111111111111111111111111111111111661111111 М
ВІ 1111111111111111111117168111111111 МС зем 11111116 М
Як показано в таблиці 9, мутантний варіант С3135/с3835/23985/С4355/С4855 ММосазСеуу (ЗЕО ІО МО: 42) характеризується дуже низькою інсектицидною активністю, при цьому рівень смертності у випадку застосування 580 мкг/мл білка становить 33 95 на момент 6-го дня. У таблиці 10 показано, що варіант С3835/С4355/С4855 УМосазСКУМ (ЗЕБЕО ІЮО МО: 41) також характеризується низькою інсектицидною активністю, при цьому рівень смертності у випадку застосування 50 мкг/мл білка становить 42 95 на момент 6-го дня. Крім того, у таблиці 8 показано, що варіанти С3985/С4355 (5БО ІЮО МО: 39) ії С3985/04855 (5БО І МО: 40)
Умоса5СЕМУ характеризуються зниженою інсектицидною активністю. У таблиці 7 також показано, що варіанти С4355 (5ЕБО ІО МО: 29) ії 3835 (5ЕБО ІЮ МО: 31) МуосазскМуУу характеризуються деяким рівнем зниженої інсектицидної активності. Ці результати вказують на те, що щонайменше один із модифікованих цистеїнових залишків та/"або комбінація зі щонайменше двох модифікованих цистеїнових залишків відіграють важливу роль в інсектицидній активності
УМоса5СтУУ. Ці результати також указують на те, що білковий домен від приблизно амінокислоти 313 до приблизно амінокислоти 485 є суттєво важливим для інсектицидної активності УМосазстму.
Як показано в таблицях 14-16 і 19, вставки лейцинових залишків поблизу положення С398 забезпечують збереження відносно високої інсектицидної активності та є перетравлюваними під дією 5ОР. Крім того, мутація за типом заміни С398 на І або У також приводить до утворення мутантного варіанта УуосазСтКУМ з відносно високою інсектицидною активністю проти УСЕ і перетравлюваністю під дією ЗОЕ (таблиці 17 і 18).
Приклад 8. Варіанти С398І ії С398Уу УуосазсСтМуУ є інсектицидними проти М/СК, стійкого до
Стуз
Для визначення того, чи зберігають мутантні варіанти С398Ї і С398м УМосазсСкУу інсектицидну активність щодо МУСК, стійкого до білків, споріднених із СтуЗ3, ці два варіанти аналізували на активність щодо М/СЕК, стійкого до еСтуЗ.1АБ. Аналізи зі включенням у раціон із використанням очищених білків С398Ї або С398у УмМоойа5зСтКУУ здійснювали аналогічно способам, описаним у прикладі 4. Результати представлено в таблиці 21. Концентрації очищеного білка включені в опис обробки. Результати вказують на те, що мутантні варіанти
С398І і с398у УуосазСКМУ характеризуються інсектицидною активністю проти лінії М/СЕК, стійкої до Сгуз.
Таблиця 21
Інсектицидна активність очищених мутантних варіантів М/осазсткУум проти МУСК, стійких до еСгуЗзлАБр
Соробка ЗО о Ко: й мкг/мл мкг/мл
Мооа5СВУМС398І, 50 мк/мл| 55 | 4 | 3395 | 6 | х
МмооазСВУМ с398І, 25 мк/мл| 55 | 4 | 3395 | 6 мкг/мл мкг/мл
МмооазСВМу с398У,5О мк/мл| 67 | З | 2595 | 6 | х
МмооазСвУу с398У,25 мк/мл| 67 | 2 | 1795 | 6 1Х РВ5 11771111 4 11711335 | 6 | ( 1Х РВ5 11171113 1255 | 6
Приклад 9. УУосазСКМУ має домен, суттєво важливий для інсектицидної активності
Була розшифрована кристалічна структура УуооазСтКУУ, і було виявлено, що він характеризується значною структурною подібністю з Рійи1415, білком бактерії Рпоїогпарадив5
Імтіпезсепв, кристалічна структура якого описана у Козадо еї а!., 2007 (Зсіепсе 317: 1548-1551).
Подібно Ріи1415, УуосазСКУМ складається з М-кінцевого домену МАСРЕ і С-кінцевого домену р- призми. Бактеріальні лізати, що містять Ріи1415, аналізували на інсектицидну активність після застосування способу біологічного аналізу із включенням у раціон, описаного у прикладі 1, з використанням 12 личинок МСЕ. Результати представлено в таблиці 22. Цікаво, що Рій1415 не характеризується інсектицидною активністю проти М/СЕК.
Таблиця 22
Інсектицидна активність бактеріальних лізатів, що містять Рій1415, проти М/С 8ЗЕО
Обробка ІО Кількість Фо . Кількість Фо .
МО: ме А Примітки | Примітки : ртвих смертності мертвих | смертності
ВІ 217рЕТ2За о о юр 6 |в вігі/РІШШЯТ5 98, щ 0 | 095 | | ло | 095 | 6 /
Дві кристалічні структури використовували для одержання химерного білка для визначення того, який(які) доменс-и) відповідав(-ли) за інсектицидну активність МУосазСтКУМ щодо М/СЕК. На підставі порівняння структур двох білків одержували два взаємодоповнюючі злиті білки.
Химерна молекула Ріи1415-МУоосазСтфМу містить М-кінцевий домен МАСРЕ із Ріи1415 (амінокислоти 1-362) і С-кінцевий домен ДрВ-призму із Му/осазсСкУУ (амінокислоти 363-506).
Аналогічно, химерна молекула М/осд5СЕМУ-Рій1415 містить М-кінневий домен МАСРЕ із умосазсСтфМУ (амінокислоти 1-346) і С-кінцевий домен рВ-призму із Ріи1415 (амінокислоти 347- 494). Химерні молекули аналізували на інсектицидну активність щодо М/СЕК із використанням 12 личинок і після застосування способу біологічного аналізу із включенням у раціон, описаного у прикладі 1. Результати представлені в таблицях 23 та 24. Цікаво, що химерна молекула
Ріи1415-Муооа5 характеризується інсектицидною активністю проти УУСК, однак химерна молекула Ууооаз-Рій1415 нею не характеризується. Ці дані вказують на те, що С-кінцевий домен В-призма УМоод5СКУМ є необхідним і потрібним для інсектицидної активності і може надавати інсектицидну активність проти М/СЕК, будучи злитим із доменом МАСРЕ у химерній конструкції.
Таблиця 23
Інсектицидна активність химерної молекули Рій1415-Ууосаз проти МУСК
ЗЕО
Обробка ІО Кількість Фо п . Кількість Фо п .
МО: мертвих | смертності римітки мертвих смертності римітки
ВІ21рЕТ2ба(порожній) | | 1 | 89 | ть | 1 | 895 | б
ВІ217/химерна молекула емо | я | 3» | п | 0 |в» т
Таблиця 24
Інсектицидна активність химерної молекули Ууосаз5-РіІи1415 проти УУСК
ЗЕО
Обробка в) Кількість Фо п . Кількість Фо п .
МО: мертвих смертності римітки мертвих смертності римітки
ВігірЕТ2ба(порожній) | | 0 | 09 | р | 0 | 09 | ь
ВІ217Ухимерна молекула о о тости | 0 | ох || о | ох
Приклад 10. Трансформація маїсу за допомогою варіантів СЗ98І ії СЗ98У Му/осазсСькму
Одержували бінарні векторні конструкції, що підходять для опосередкованої Адгобасіегійт трансформації варіантами С398Ї і С398у УМооазСеМУ. Кожний із бінарних векторів містить послідовність, що кодує або оптимізований для маїсу варіант С398ІЇ УмосазСкКУМ, або оптимізований для маїсу варіант 398 УуосазСтУУ, функціонально пов'язану на 5'-кінці із промотором, що підходить для управління експресією в рослинах, і функціонально пов'язану на
З'-кінці із послідовністю термінатора. Оптимізацію кодонів для маїсу здійснювали, наприклад, із застосуванням способів, описаних у патенті США Мо 6320100 (включеному у даний документ за допомогою посилання). Конструкції вводили шляхом трансформації в Адгобасієегічт їшптетасіепо із застосуванням стандартних методик молекулярної біології, відомих фахівцям у даній галузі.
Для одержання агробактерій для трансформації клітини культивували у рідкому середовищі
МРС за 280 і 220 об/хв. протягом ночі. Опосередковану Адгорасієгішт трансформацію
Зо незрілих зародків маїсу здійснювали фактично, як описано в Медгойцо еї аї., 2000 (Ріапі СеїЇ
Верогів 19: 798-803). У випадку даного прикладу всі компоненти середовищ являли собою компоненти, переважно описані в МедгоНо еї а. вище. Однак їх можна заміняти різними компонентами раціону, відомими з рівня техніки.
Після трансформації, відбору й регенерації рослини аналізували на присутність гена РМІ і послідовності, що кодує варіанти С398І або С398У М/осазСЕМУ, кодон-оптимізованої для маїсу, за допомогою аналізу ТадМапФ. Рослини також тестували на наявність остова вектора.
Рослини, негативні щодо кістяка вектора та які містять одну копію трансгена, переносили в теплицю й аналізували на стійкість до ушкодження, заподіяного М/СЕК.
Приклад 11 Рослини маїсу, що експресують варіанти УмМосазсСтУМУ, характеризуються інсектицидною активністю проти МУСК
Присутність варіанта М/обазСКМУ виявляли за допомогою ЕГІ5ЗА у нг/мг загального вмісту розчинного білка (Т5Р) у тканині листка або кореня від кожного трансформанта. Інсектицидну активність визначали за допомогою біологічного аналізу сегментів коренів. Стисло, зразки тканини кореня маїсу відбирали в кожного трансформанта, коли трансформанти маїсу, що експресують варіант М/осазСЕМУ, досягали стадії М3-М4. Тканину кореня маїсу поміщали в чашку Петрі, а потім інфікували за допомогою 12 личинок МСЕ у біологічному аналізі сегментів коренів. Два зразки тканини кореня (повторність 1 і повторність 2) оцінювали щодо отворів, що утворюються при поїданні (ЕН), і ушкоджень у вигляді рубців на 3-й день. Тканина кореня з нетрансформованого (нульового) маїсу слугувала як негативний контроль. Дані з таблиць 25 і 26 показують, що трансгенна експресія варіанта УмМосазСтМУУ, про який відомо, що він характеризується інсектицидною активністю щодо СЕУМУ, забезпечувала захист від СЕМУ/ у тканині кореня із трансгенним УМуооазСфМуУ порівняно з нульовим зразком тканини кореня (таблиці 25 і 26).
Таблиця 25
Інсектицидна активність маїсу із трансгенним варіантом С398! МуосазСКУМ проти МУСК 3486, | 945 | 45888. 11 т 9 щЩ | - 3487 | нав | 13500 15 77 т 0 щЩ | - 3492 | 407 | 20534 8 |. т 3493... | 696 | 28808827 | т 3496. | 772 | 230,98. 19 1.77 пл 3500 77/77 ново 1979501 13 1777777 ит Її 35057719 225,34 18 111111717111ит 35067777 777 ново | 188684. 23 77 т 0 | 2 - 3509 7777 ново | 2829 1/6 17777171 мит
ЗБ10 77777777 ново Я85Мї 115 17777777 т (Нульоввий.//// | (ЇЇ 777777777777171717/717171161711111111т ЇЇ (Нульоввий.//// | (ГГ 7777717171717/7171719 11777111 Її (Нульоввий.//// | (С Ї777777771717171717171717171712111111111т Її (нульввий.//// | (20 ЇЇ 77777771 22 1111111 Її
Н. В. - не виявлено; ЕН - отвори, що утворюються при поїданні; І - слабке рубцювання; М - середнє рубцювання; Н - сильне рубцювання; - - об'єкт із дуже гарною ефективністю; ж/- - об'єкт з гарною ефективністю; - - об'єкт з низькою ефективністю
Таблиця 26
Інсектицидна активність маїсу із трансгенним варіантом СЗ98У М/осазскУу проти УУСТК 71572. 17777177 НВ 1 27 1 8 | щ -тм'/бЩ | кт 1576...ЙЙ.ї17771717171717173. 1527 1 8 | щ(- М |! - 71579... нов | 584.1ЙЮД18 | Б М ЇЇ - 21587. 17771712 1113 1124 Їм 1 - 71589,.7.Й.Й.Й.Й.Й.Й.Й.ї.7.Ю75...... | 665 | 6 | щ 4 | т 7592 17777717117121111 1114 111 ЇМ 11 715939,.7.Й.Й.Й.4.. Її. .юЮюЮюЮюЙК«КМь19 | 266 | 8 | м 9 Щ | кт 71595..Й.ЙЙ.Й.Й.Й.Ї.ЮЙЮ7Ю7Ю7ю932 | 625 | 6 | м 9 Щ | кт 71596... 17171713 1 1528 1 6 | щЩщ БВ 7 | я 59877777 177777171717129177777 | 81 1 8 | щ тм 9 | кт
Таблиця 26
Інсектицидна активність маїсу із трансгенним варіантом СЗ98У М/осазскУу проти УУСТК 71604777 17771111 нав | 517 1721 Їм її лво6 7777777 177111111112 | 111 1115 Їм 1-0 71607777 17777171 нав 1 21 11119 Їм 1-0 71609777 17777171 нав 1 30 1 8 | щ тм б Щ | кт віз 17717171 нав | 298 1 6 | м 9 Щ | кт 61677711 1115611 ЇМ Її лвї 77777 17771711 Нв 1 17 11716 | тм бЩ | кт лвг2/ 1777111 Нв 1 411117 Їм її! лвге3/ 17777171 Нв | 25 1 8 | щ м бЩ | в (Нульоввий.у///-/-/ | 77777777 Ї177777171717171793 1111 нН11 Її (Нульоввий.у///-/-/ | 77777771 Ї1711171717117111930 1111 н11 Її (Нульоввий.д///-/-/|7777777777777771117Ї1111171711711717125 ЇЇ НС Її (Ннульоввий.//// | (хо ЇЇ 7/1 124. ЇЇ но 1 -
Н. В. - не виявлено; ЕН - отвори, що утворюються при поїданні; Її - слабке рубцювання; М - середнє рубцювання; Н - сильне рубцювання; ї- - об'єкт із дуже гарною ефективністю; ж/- - об'єкт з гарною ефективністю; - - об'єкт з низькою ефективністю
Приклад 12 Муоод5СЕКМуУ у комбінації з інтерферувальною РНК характеризується інсектицидною активністю проти УУСЕК
УМоса5СЕМУ та/або варіант УуУовсразСКУМ очищували, як у прикладі 2. Одержували а5ЕКМА, що націлюється на суттєво важливу мішень і, як відомо, характеризується інсектицидною активністю. У необмежувальних прикладах азКЕМА може націлюватися на ген, що кодує вакуолярну АТФ-синтазу, бета-тубулін, 265 протеосомну субодиницю білка р28, ЕРТа 480, тропонін І, тетраспанін, гамма-коатомер, бета-коатомер та/або епоксидгідролазу ювенільного гормону (попередні заявки на патенти США МоМо 62/371259, 62/371261 і 62/371262; патент США
Мо 7812219; кожний включений у даний документ за допомогою посилання). азКМА і очищений білок тестували на ефективність проти М/СЕ. в аналізі із включенням у раціон, здійснюваному фактично як описано у прикладі 1.
Слід розуміти, що приклади і варіанти здійснення, описані в даному документі, наведено лише для ілюстративної мети і що різні модифікації або змінювання з урахуванням цього опису будуть передбачатися фахівцями в даній галузі техніки та підлягають включенню до суті та вмісту даної заявки й обсягу доданої формули винаходу.
Усі публікації та патентні заявки, згадані в даному описі, показують рівень компетентності фахівців у галузі техніки, до якої належить даний винахід. Усі публікації і патентні заявки включені у даний документ за допомогою посилання такою ж мірою, як якби кожна окрема публікація або патентна заявка була конкретно і окремо включена за допомогою посилання.
ТНЕРЕДІК ПОСЛІДОВНОСТЕИ
«ЗО» бЗулдетта Рагтісірасівне, аб йеупо й5, Є. ВісВває!
Ківвіпб, СпгІ5соОрнеє маптцовену, МАК 5. «150» ІНЄЕКТИЦИДНІ БІЛЕ «0» В1І158 но аЕотОовее «1505 бугая «ії ЯМА «Б СНЮ «ЗО» баїейстн версія 3.5 «ее «іі а «алже Білок. шк «ії» МОоб5пеівга щагіткіта «ек
Мек су Баг іжи аяр нів чаї віж Ні бій дей сен іо аБи біо его ї 5 зо 15
Чве Мія ні ух бег аяи ївг губ ія йіз ев Меб ага ія бів бів
В я5 За дев Мем Уяі іш ага тук сце бко біУ Уві біб Уа 116 бі віз бу ї5 СІ Е5
Тут дщи Бго Ре сіу ма! Тук аїї Бек їнг азр бек уд таг жа бів 5а 55 що
Кей ре аїр оїтробій Зег Аа Рго бек біб его Уа! Те ве ах бго та 73 5 дир отут їі віз рго уз аЇа мі Бек узі бій бів ази ях ств АВ
З ща ах вага тує твР да чаї Баг ші бух ТАКЕ З15 аби ТК РИ ІЙ рух дев це Б 10
Бпе Зег ів бух УМ! ТВг Уві віз бїу Зеб Тук ав бу вне бек ОТу 115 о 5 «ав узі бак аба бій вна беб хаб бег Є1б ТВР аву ап АТЯ СТО Ав 130 135 140 сіш бе зек аго (16 бів бів зег Кіе агу Уа тго Зег вен аг ео
КЕ Її 155 ЗИ аа ТУ Тнг аб Зег бен Ага біо Туг їв уз вів а5р уві го Аяо ї65 То 75
Тут Хі А5р о бак гів сій бек о ахв о Аіа біп утво Бі» їі ів ВВ; дев яв) 155 о де тут сія чек нів пе цву так сіу уаї мі мех щу сту віз ала т в НЕ
Же мес віз бек ет тТВг о веп бує МБ біо маї вер мів Те тТук ОТ
ЛВ 2ї5 2 дп ім їнк Її! аз бує Аїз жесту сть аїя меб їве обіу сів хе 530 Я 40
Звгоаїз Бій тВеов'а Аїйа вух Тугб АгО ОТ беб Ме баб бек вне Заг ав 250 55
Зій аа заг ар тів нія вуб5 її8 Уа! ма бік Ту ав боту уд! Аа
БО 5 айв «У Аа уз ча! Тук зег біУ Ар бух Аїя ар Бе дво АЇЗ Тер Аа 275 28) 85 дев тнг уд! біу Твг обег вго дев Бе Уаї Аква Бе чаї бек бег ді ше 295 зо го Меє іви б1У їв тРр осів бе суб Суб Абе АБО діа бій АЇа вує 305 ЕК с З В аб у Мет щіб а5р тує Тук аж аби Те Тгр аз БгОо агО вує баб гжх 3-5 З 335
Зі аїа біп їі Туг віз А5ротуг тів ар ай уві бій ма! 16 Те
Зо 5 що
Бег дахи бог бек бі уаї го Бгто бе бак біу Туб Таб орує Хі Авв
Б 360 їв5 туг дев ів ап уз Бі аТа бік сіу ар ТУК тів Туг сво Сух Тут
Зк 75 ко
МНіз суб йіз Аг тТук ек ТЯ Тук ЗБК бІШ Аба ух АЗО Суб Ма Яег
З 90 95 я вки вен ків їі сів куб Єїу ахн Єїу аїа го Аїа РКО Зше біу тує 405 ще ях
ТНе вуз Кі6 а5р Узі АБ веб ахва бін а5р аа біх ТУ су Тук ев що 5 3
ТУ ву Сук ТУР іх вує Бій БОР тує Аве да УВІ біз аа її гу5 0 ч45
«1у їси аїа Ма? Ууді бі біу йо асп Звс нія тТвгс о вге від его туг "50 455 о піу туб Ага АгО Хе або те дров! Ап отв бі АТ оту біЖ би «65 я из янО тує ЖІ Ту ЖХіЄ Сує ТУг его б ту Аа
АВ» С «як г «Мі 3473 «ій ДНЕ І «ії» штучна послідовність «М чай ес поїоа жагісіва «ад з зіцЧавзвасст тозассасз сУстєвісво засттаєтов абаааставс тезссСакава 5 досяатвссв вдосоосоаєх озбососсає сафназакс сеуссрвасе статстоєсе 150 сс їзовов сЗаскзовос вопсваєтає сссвксодсо мтасосуєс саєєваєєса Іво шссастосяс вастстттов ссдосазаоєс осоассатсва зассодесає кесгсазссеє ай пастасяєта стссузазУє сесоєсадеа свасзааако зедазаєсся згатасува: ЗО дЕсаасуося азасаатсз) єасшестсвя зазаасттск сссєваваої хассеа Бе шоассстита ассїВтїтао соті зосзагоаах ссзосзасза сдавасєтове Яд дасовслоних всозастіва ссосассаЗ сессії сс скаає охо що жетасасюв ат сссо сезататеїв заанеоовсо гтеосозга гассозсяо: в акжсватсап агососаоає Єдіааєтст сссоВесОї: зсообїсаєа гтЄсЕхасє 5 пом оа задо зосос восаасєсато осоБсстсоа ссзаєаавоє асздагцн вк сасвасасу яозасузаає сассоссаао оссаостазсо заоссеєває сооосзовс ТУ тсжоДстовоя стосОастаа акаїсвссза зосасуюсає сактсвсссв дазекесове Во асжасзаца ткшсоотсво содозовсооа сесосоке созвааома таосотозе 5 заесцуакх ксчасОсіто одстцасаєс чгоодасеє сбссвоветї готова о
ЧчесацеВмие ккссатау соояаессо даасеусося задатовсоє зеводсоаа о запасвозай яссастакав саатасЗО Чесссосода зааосазача абсосаааке 199 хкасодстваке аєщесуасяс зОссуаааКо акссвуаВка ЗЕ саа Час ОБО сссацтзоає акасцанняє боОзЕкасєоас сесзатсаааа осуссаов засо ї-що тасстоссс ассатвавос ссоттатаюс осетастєве зазасязаца єеосоєесеє 1200 созіттзяєта ска ааоюо ззасодався сососсссой псеосттатає дзазаттовх що щшеозасссєста все кнсус зоотозаяза сасстатасо катОстасва дадосСаанах 15О тасраєзато базоєлат свадозасєти ссоотавісо бгоохозсая ттсасаєасе що сстостссої асооктассд ксесаттоєс ассдаєокса асовводоуеє єдоавосоза зо тасвтстата ссіЗккастс савосооуєє аа 1473 «ЩО» 3. «еіїж ЯЙЇ «ків НЕ «813» основа пасів каб» З атозаавєс саопзтсвсат достсзесза застав зчкиєсає ссассаєава Бо тссаатассв авоссоєтст датасассає саароааєє соскзоаасю статтваєся о одібстовао Бтассдевас поста таає есткутросо гітатоєєте застає що чізасдукїс вастасесЗа стоусаЧіса зсассозато зассізЕсах ства О
Частасассо суссвавадє сдскадсоєє саосасвасо асуааососю сситассває то сис стаоюа аласваєсаа сасстттсяя азозахкека ссказаває саєсоєссосо 460 ясена аїттактетє Зоасестаха бсавзатцаає хесевесмес говазссє о антрсвоваа зоуааІккес Есакаєтсяо савкстзкеє дсвкаковтє сесвсоєа о чсестасаесєце асссзстосо баачсаксо вадосацасє сосоозста тва о атсєзаісца зсасосюоає єдазажеста сесодесуїх зас аса ссесЕтазеє 50о
Чососсоєся соусочаас сосовісаєо дсстсаесоа ссаасваає ссзаоєсовс БО сагасЄстато зсаагазоає частоссвай оссзастато яссктйає скюсвоЗЕє го засосодаза ссоссосода атаєсоссва сосаевтссвз остістсяся завстстозе 7 зєссасавоа свісогодЯ спдсвактоВє посуєкозоє ссавоотстя хаос о вадосєтант стдасоссто зостоасасс сібдосасак свссодатїї тота пов щстЕстТстТа жЕсСВаТаЄЄ дадсаєєтов завстаєма зацаєсатає ссазассваа НА заваснкюмою азстастатза таасасєюоє псоссосота аохсаааада зостсавата 1020 їакєсдасєт згаткаасю дассЗасоєє асесаааоєа асаостєтоє сосссоссся Мо ссцісаани атассяавваат єпастсасовї сеснасяняо всосспосою бдассасаєє що такстактаст зтсатававс спостакаоє осстатацто зааасаваоВ сс ся 1500
Застсзасса сзассзаоЗа саахоасосв сасссе своустасає саваассоа Іо ітонтттза агодвааваєю доссобоваа бсатстстаеє Бої татяа заааєдазоує їмо
Таєдаєзата єбоваосаає сзаводстто псоцссоес отодсоатаз сссасатася іо ссошпсассатї зсшастасав ососаєсває асацасоєса зборвадатоє сопсовсна АЮ хахакстата кстустастє азавудсоєє єда ща «яю «Кіз 3473 «ей» дик «її» штучна послідаанієть «гц
«223» осів ноїва масіківа «ню Я І звхдазавост сатсасох дмастсаїсао застбастоз асдваєстає ссассатаай 50 васлпастаесса асосовсест засос єсас сзуоаавзаєс сок совасе стаєскоссо ї8о чеасисчеаза сояІковеЄє аопудстасаас Єєсттесзюєо асасещіс састцаєтея їв цтастастас заст їца сеоосвавоє осуєсатсзоа зассоотєає стае 240 частасаєто стссовааос сотоєсауєва сзасваааєо зідазаєєто атакасоває ЗО пгтвоасоЗса ззасааісєвза сасоКсЕсСаа зазааасессЕ сєссвавяої сассоїсєса БО пзассстатяа асттаєттаз созіаосУсс зосаасцазе ссаосвесач соааасесоє 420 аатпсвозая сова ссесасссва садаосяксє сеї сКа сс сассе 50 псосзсзсо асссЄстосо козасасста завососасо сісосова сатевасаоє що вктсаассза асосиацат созавстсто сстовісЯїх зсоЗзотєвса стека БОЮ посотостаз сооссдосос аосзассасо ососссєсов ссзаєзавоє зсадосооає БО сасзсатаєз зааасоазас сагтзссаав дессзасваса заоссєтаде ксозєзоае 720 тстостозов стосдостаа абаїтсоссва яасатуєсеє собстстсєся даастссца є тво акбсасаааа томи соо содаозсва вісосповсо сдазаотївта таосостоає вів заачесоцзаєсє тсдасостта овстоасвсє всооцовсає стесзоаеєє хотовасттЕ БІВ остарсваосо стсстатоєе зоадаасссі завссотося язовсодов осзовсоааа БІ заоз'вазо естастзтаз сзасвсуєювю сссссоса зззасадада оапсссвазте 10950 татастоазтє атаксозсоє адтсозаасо зсссадаєта зе соду оосесоссся чО8о сесацеззає акассазаях Едаїтасєває єтсватвазо шеассоютою оба аакє мо тасетокцев аксасзавис сєсаттакзає шежтастеЗа знадасзаания тік теє 1200 чаїїгазкта єсахсзавю заасодався срсоссссва псооітасяє ваза ссови 00 есочасскоя абовоЧатос асоїоозава Тассбобаєє бТабоствсвя оааЗсазах іо засчасаато соолаоєзах сзасваасто зсовсацето зсовтвасва сососвЕаєс 1350 сстостссоє асусттассо ссозастзає ассозтоїтта зсозодчоцнеає свозаосозо 1440 тасаєсєтатєа зсссекастс Сазаоодаєт тав 1473 «а: 5 «м ДЯ «іо» НЕ «ії» штучна послідовність «вен «223» женні бкітіна
Не 5 Що зсоззавост субаєсасох состсаєсяй васттастоа асовассрає ссассатана БО зосаазкнсся зн еОсеєї затосоассає єзодааансс Седсбозасєо стасстаєсв 120
Ффиозозада соаїсовдоєс адек сасзає ссттєсросо саїзсосоєс сасєзастса 150
ЧЕтастакос засссттктаз стоссаан зсоссаєсао зассодтсає стаз 40 чаттаєзксІ скссовавОє сусуєсвеєа Саасвавасе зковзауєсся зтасисцває о сссвосооса азасазеєаа сасвіттсаа ааадястесЕ ссстоваяцє сассоссоєа зва взассстакв асстатеєза собтлосотс зддсзатоват ссадсвосав сдазаєстсає ад загасадава асоаасєстав ссасатссваа сзбаосаєеє есте стосвесЕс «ВО че авсаисоуз аіхєстосо созатаккта зазособасо стсосовета татспакаце КЕ віїсватсва зкзсосвцах стпазавсєска стос асоооісяса тЕтссткасе що часекааєа соостодсоє адсаатсаса чебЕсєсєда ссазсзавниї асавогоає во сасасатаєв адзатоваас састоссвао оссадетасо задсєсттває собосаоаєс 220 тстостозаа стосоостах асаесоссаа заасакаєсоє сугтсєссса застосо То астсасазаз стзтодісоо содзоасода птсосодосо сбазаотоєа свосвосдає о вацдасоцчаст ссдасостте достоасаєс ятосодасує стссвуасеє тоховастхх а сгсзасвоса сесстаєої Фооваєссою осзассуєтуса вацасшасоє осадосозаа здо зачатчцпаво аеїастатна КаавбасЗїна зссссопа завосвзада зосссвавех оо хатостозкх акаисозсоє аотсозаєто асссзозоага зеесстовод вот есосося 1Оо8о сксацсвоас асасцаванї сдаттаєдрає стоватсавад ддсоссодкод додастататє ця тасєтасвтє зксаєаазоє ссустатзес остсаєссво зазаєвазов стосоКссх 1200 пассЕзатса статтаз заззсспезося сесоссссоз осоосеакає вааааееоах 1253
Фкодасссда асовгодатос зоотооаана Сасстутасєт саїсстасна давосавааах 1320 басраслато Єуджабсяає сСзеооооєто осоотавтто отострасяв сесосасасе 1350 сстастессЯЄ асосєтаєса ссодсаттрає ассозтоєта асозоуююоє содадотова 1-О їасасктата сек каєтс сазасооосю са 147 «кій» б «її» ат «іо» ДНК «Ії» штучна поспідовність кдд» «ВО» вюснісвоїва шаетківа «8 в асцезвазост сен сясої тостезтсво засттастоз зедансснає бсвесзеваа 5 воасаатаєса зВосросост даїосоїсає саповзаваєс сосітозасо стаєстоссо 328 си окодаоз ховзбкоороє адаїттасває сесссово сасасоєтеє свесвастся ї8а остассотоє застєтїттоа стодсазадс одсоссаєсаю зассопдтсяк сттбвасссс 280 чаттасаєко стєсрзаваос кт сзата сзасзазато зісбззоуєсса дтасасозає 300 чесосаока азасваксая сасоктєсва вазгвассесх сессдававх сассисоса ЗО
ФаЕсстаєв асттасктао судсаасекс зосзатоаає ссаосвгосво созвастеоє ага заєдсвозаа всозакєсадй ссосатссва садацсаєсє зсуєстдатє стос ЗВО псогасаєзда аиїссстосо совасакка завосаозсу сесСоусуаєся тассовтвоє що зитсззссва втососааає тозаатеста сові асодоєсвса їссесСєкаєє щ0Ю жо: зни зосос восзаєсясо Зсуєстісоз сбватазадх зсадоєоває БО свсератасо аозасовнає саке зсказссасЯ вабссьєває сбодусаоає то ст товоз стесестзяа вгаїсоссза аосакотсої соїтскосса дзастссовх УВО абесзєзазва ссохооїсвреа соовозсчва чісосоВасо созазохуїа саосоосоаЄ йо ваша ссвасоєтте оостоасясєс осозодасо стссаоасіь тесодастх що пстаоснсо Єксстатотє? одозатсттою озастестоса заратвясос зсядосодая че зезаєзавао ассастатва сзатесоЄою сссссосюоз зазпслааов досссазаке що сасостодаєс атаєсвзаєює азссбааотя асссзовєа астсжтсоєвю посесасссх Зоо ссосвостооаї зтасзвлаае хозаКсасоЯвє сбеавтвацо сососсоо золот атасе що їассекує аіслЕЗВННИЮ ссожвакноє осстастсВо ззавезаню ТСН мод зЗакжезаст: зіаттазобо азасозаосз сосОссссоз осзаетасає здаавасеоає 1550 черв тОа асоззвасоє збобвовалаа свестосвкє сабоєтняа Фааосж 1320 тасрасвато сЗоваоснає сзапвноєта зсубсаоєко ссодсвеая соя 1350 сстресесат зсобєтаєсо ссадаєєрає зесдаєсоєта зсдавенюоє свозоогозо їй
Хасзжеваєв ет таєжє базавоуасх аа 1473 «цу «з Я єиіїях ОДНЕ «РЯ» вигична пестідевністі «ЕЕ «ЙЯх мобо5воїва вата «Я» асулазацет суювесесуї зуссйїсза аастіастоя зсозаєсодає сСсассавава Б аосаатасєса абосоосост баїососсят саооззавсс бота авсо став о
Зеасаснноой село воазссасває сосссзаса гасавєосеєс састовесеса ї86 гтаскОосоЄ наскстетоа ттозсаваас псоссаєсав засссоєсає текста асесс 2480
Ччастасакто сбссоаааоє свт садеа саасаззато збовзососо псатасоаас щЮ чшіщсЧася азасватсза сасосттсаа азадаєттсх ссстдазаЗї гас а ЗО пуаясстата асттаттсза содсаосасє засзатувах ссавкадее созааєєсє 30 засосааааз зсодабетао ссосасссва садавоєвсеє суттє соте Б фогзсзєа агтосстсо телататкта зазоесооасо сесосозста сзксвакває АЙ асісватсва ас осадає сезааеесто стесдесвїє асадоєсасв Тесс асє ОД часотдосаз кодосоосоє зосавесато осусссссоа ссаатнявоє зсадотооає е часасзгасо зозаизазає сзЕтоуссвняу дссвоєтвсо задссттнає саЗоасадакє я тсвастцаса стасоцеєтаа азкатєоссве оса соЄ сегтстесся давстесцає "о аітсзсаава ста ЇсЯо сбозоавнна зксоєниа совзачва си ає кяй дасосодате тссабостто дострасаєє отодовасох ссссаваєєє собдаєсееє ж десвосадсу сссстатоєс досааєттуд уаасстотуса задатовзсяєс дсвозсдава БО засасозсава зстастаєза свасасюа оссссбсооа звавосанадя оосесажатєе ТО; чахассцаєе зкатсозсас засгсозаото азкссзозока зЕсссісода бассеуєсюе їщо сссацсаиї зсасовазає сузссасоас сксвасваяо чусессусоа аассане що засстоткс ассятяааоєс ссугттатаує осттастсад зааасааада сТасЄСсе 120 зиск ааще ссатєзавюю ззасюуаоєя сасоссєсдВ осопстакає плазакецах 1260 ісдеєстоВ агозодаєос вопотодаваз тасстосає: батостаєва дазосвазоє щео тїасонсаате сосразоєває сазоддоєтіа осодсаосто осооєдасав ессосакаєс ї138О сстоастесус асасттассо генна зесозккея зсдасосооєЄ сазан що тасатстстата сетоттасте славою т каз ве «20 В «ті» и «ій» дНЕ «їз штучна послідовність хаєОх «как» ее ноїва вагітна «00 В зимнаадст тосзісасаї тостеєзесаЗ вазсттассяз асоваєсває сезссаваяа що восазтаєся зоосоосось саєрвсоїсах садозаваєє собі созаєо стаєєтуєсе що чани сдеза совісовоює вот асвас сстіїсдосу сатасосцеє гас йо чесзсєтастас заст оа Фтобссааеє осуссаїсзоа аасєоуїсак сестзасссє 240 чаїтосасєтЯ сптсувавоє кесоїсаока сзасазаако здазоссся чеасасцає з пссвастІсі аааслатсяа сасотттсваа зазавстте ссстоданох сассесоса БО чазгсстаса зсттакітає сдотаосоєс зосваона? ссзбсзосад соазаєтсоє ай затосадааа асозаєїство ссоусавскаа саовесатсс псстовіє сестосоєске ЯБо псотасасос аессостосз тозататтта завособасо стсосоатта сагсвасвоєс за зкесавісзо зкОсосацяк сеззаєсєто сетоВісоКї асонисаса стос касє 50. зосубвасєча сопоссос авсзассвей осот са ссвзасазаак зсадасодає БО тасзсатасо аузатозаває састеєсзав осслостися азоссткавєс соадесауВє ЕКО стос стосоосіяа асатсоссав восатцосує соікстссса час ссоВю ЩО зсссасваяа себе судадаееня бісосовосо созааотеся гзасостоає Ва заннксоцВасЕ ксоастосстсто сесіоасаєє бсоодовсає ссссммаисє сгасовастх чо десзасався сссстасаєє додаєсков охаетутека яздасовсає осздесолааа во задахораяо ассассатаа сватаєсоєюю дссссосода азассвазюа досссвавтх 03020 тасостоаес атасодасос зоєсрваоєо атесабадея всестесою постсасссх КО сссвздєюає атасозааає тоастаєоас сссзаакавао ососсодтою обаткаваєс що тассідкуєс атсасвааує ссуєтаєвоє дессаєтсво вазасвавов сезсасЕЕсе ню пахттавтта стаїтсаацюс ваасораося сососкссюа дсоєхскатас бзаваєтовх тво птосасссца зкозодатос зоосдозааа сасссоцаєє стасистасаа цазосаааує що тасдасаано бодазосває савовеацсто осудсачєк вкоссоасав Єссосатаес зво сстдетсєує асвоєтаєсю ссроаєєрає ассратутся зсозодаоос содеюютова СНО табатетата сссоскастс сзааодооєє тай М «Ох «а Ї14йї «еїйж ДНК «Ії» штучна йпоспідовність «РО» «й» мовної ва ваг єна асолаааиси кодассвсУЄ кастсвосаз застсаєтова акавссзвс ссяссахнах Бо зоасаатаєса зодесоососі батососєсат саволаваєс говттоваси спаєсбоссв що дотохосадо созссоовєс аростясаас ссттєсдюсю сатасдсдтс састдаєтся що зісастухос застої стоосвааує дсоссаісву ааосудісає скктаасссє що дагтасаїто стссбвааоує тоббІсаоїа сааслахато згозаосссо тзтасоває що
Чесадсоося завсаатссва сасдеттсза зааваєттєї ссстозаває састаєсосо. ЗО зоасестахя асттаєттав спзхаосотс зосааїєоває бсаосавсво созавстоде я загоасадаза асан стВоО ссосаєссва саавосаєсс Ясотстовтс сскосоєсє че
Чсутасасою абтєсстосо баатакєта ваздсюдасю тесосдаєта сатовасадеє яю вттсваєсво атососацат суаватісто стевраєсокт одоооссаса ссессктасс БО
Фосотозтох содогозсоє посааесате осотєтесва ссайвтаазоє асадосодає БО сасасатасіа зозаєдааас сажтсссвзад вссадєтасо завссстзає содосвааєс и хесостдада скдсодстаз ататсоссва зосатоссоє сдтхєсссса засос: і згтсасавав гтосдоссод содадасюда стсосодюсо сузазатота стадсовтовс во ладосозаєс ссузкосессо дуссдасаєс єсдоудасак сессадаєть сфсоаасвєсе ко фебафсадоу ттсстаєстт содаатству даастцтюса задахуасує дсаросонах че зазатозаау зскаскаєва таатаєстою дссссосода аваоєсвазої постсаваєє 03020
ТакесєцаєЄ астаєсуасоє зудксоваєте абссадеєта асссттсдаа сосесдкееє Мо сссадтцчає асасуванає коаствасває сксваказво сосок зоаєсаєвес їмо свестоїскї ассабаваує сезствізає ост аєссзЗ яваасвановз сова ктєх чо петсжавтта ста бвавує зазсозоаося сесуєсссюв состава дзаааєєвах 1253 стобастїра ЗсОНюєЄ воОтоараава тТасстокаєт тагостаєза вазоєванеє ро ззсваезата саоааєзат сааесоосто осо зассу осоотоасяа сисасаїас 3850 сстостосає асоцітассо сс сєзає ассдасостя асуаоповос содавоходо М Ю тасатстеаіа стає таєєє свзавоодаст та ї473 «в Ю «вії З хиіе» ДНЕ «а1ї» штучна поснідовність «да «иа МОВИ вОоїев щагтЕ ва «а 3 абопвадауєт сват сасає сгостсатсво засстаєтов збодасєває ссассвсвяа 5 адсаатаєка зас еск дао сає саосавааєс суп ачасо ска 2 часи оцивоЗ євастаоооє аачЄєзсвас секстсвосз сасасовсаке саскцдаєкев М цетастотоє аск ксвя скоса ває соссассво зассовзессає сегтаасссє я
Заствсаста сіссуаацє сотоксяата сдясазаато абоузаасссо дтатасоває зов псхзвассоєа зазсавісав сасаєтєза ваазасттеї ссстовазає бтастаєсаєв з сдассскака асткаттсад соотазсціс зоснатовах ссаослоєво сразастсоє В аазсжацааа зссзасттав ссосатссяа сяЧаосаїсс осозсковс сс ссте Б;
Чедсвсасво аіжссссвсо созатаєстся азаосодаса сссесозеса саксозсвоє 5 астснаєсаєд зтосоєзоат сзаасксто сесватсосє теодутсаса сеоссстаєс 56 посекостов гаоосоосає аосватсато осотсттєдя ссваєвавоє асзодеюає во сасаситаєю зчаніоввас саїбтосєсаво дссвастасо задссттває созосвовее та тстостцаов СтОосвосєав зкассСоссвя язосатосєсох сосссвсєса дааскосоях ТВО зкЕсаєззваи Стос свІ сЄОовасоЗа оссосодосо созааасоєа баса ай звозсвазІї седатосєса Заскозсасс біЗдоовсяє ссссаваєьу суто БІ читзасзосо стестатат зов чаастотася заватазсУє зсадосоаяа оо запасоолає зіїастакяай гвакасотою дссссеснюа зазасазяча ЗОстсалае 1050 таїосстоатх зтаєсовзи заісозаУуса акссядадіа актсеєсвоц бУсссоєеКх Око сссвасоЗає зтасоляваах свастаєдає стсзактааао осуссвачю чдастатакс жо сзсєветахЕ зЕсатаазас ссосезсзає зссіасгісав зайовсазаза сеосекекех 139 цдатттзавта скастазсеє заасоцзоса сусоассссва зсвастасає здаазакесає зо зсшщассоа зтозоасатас воасоваааа тасствсатс татостасва дзаосзааих ї32О тасчаєзатсо тОозаесаат саацодосто дсоутаакто зсоотзасяа сгедсатаєє Мо сетасієстує аспоссасси ксозастцає зссдастакта азсоводозоє соц а асист аса тсждстаєтс сазаоооєк та 1473 «М я ЗИ хеї?ю Ди . «ЕК» штжчна послідов Єть «Я» «гаї» основа шатієіяа «щюх 3ї о атвазазаст неви сясає хестсассяо васстастовз атдаассває ссассатияа БО звсаасзсса засос осї озтосотсаї сзооасє п савасе єтасссоссо а чатосзовао тозітовоос заоїтаснес сестЕтсовся тгатвсусаєс састозвстса 180 спетастосос азстїт:єоз сбоосзазоє ососсаісзо зассорісає сествасосс а абтасатко сессдаавос касоєсаотя сязсаавато зсааадєссо чеасасаанає 3 четаасооса азасзажесаа сасасетсяа вазаавісх ссстоааан саствеесо ЗБ паатсстасєа асстаєстзо соскаосоїтс засзатоває тсадсзосад созаасссяє 428 затосавдаат асдваххтає ссосаєссвя саовосатсс осасстодкє сстоасоссее «во осотасаєдо аттссстосо гозасатета зазосрозео сесосозіса татсдатадє що заіткзатсяв зїоасасазає геававкєті сСстозесаЕї асообссаса ЕСессттасе 5ОВ часакаскчя сеекозсоє зусаатсата соска ссзатааноє зсавасосає БО твсасдізса зосасдазаєс сахтоссвао оссаастасо забссттває сосна ке тт
Жетоскозуа стосоостза атассоссва засакексає секс тссса звастосцає БЕ астсвсваза стат сзо суноасоое песусочцасу сразаодсота свосочеває «о зааасочаї ссоасастює постовсвес отусодасех ссссацасеЕ ес ще петзасаосо сесссасотї пеосзаєстов озастососа задасаасає осаоасозаа 50 задатаснач вітастакаа саасзсоєоо сосна зазосвадоя оБстсязате Ого таснтоа вас вс аксон зсссядаціа акесктсовю соте що сесаасачає зізсззазає гост аєває стозаєадо зсозєсавоз зу акає ї53О тасстотсст атсатаваусє ссостахаоє сттастєоя яваясаазца стоасосетех ї200 патттааєса ссасгтзацас засос сососєскоай сопе тас созазаєтоає 300
ФЧсочас каз асоайозкає зудеовзааа сазєстувахх хатаєсзсах дазасвгалоє їі їзсовсаасо Сооасєосває савозоостя осоотаосто зсоосоасав сесосасаєе їз сЕКНЦКІссО асоуттасеч саке цає зсецаосєта зсозуовє сан са ЕЕ тагатттака Тежсітаєстс саавосаех тай 143 ки «її» 473 ие» ДНК «іі» йучна леслідовність «ех й «кої» мосізпотеа тагіт нава «ЯН» Же зідзааяност содассасус сасьсассва азексассоз зкозассзас кевссаїава 5 нзаквєса аодсоососі засос: савдазавсс содссувасо ссажсТексв -о песесвасй зва тоозас зооссасавс ссссесоусо сетасоєоєє састозеа 150
Четасєїдс застесіїва ссодсзавзає осцссассво азесоуєсає фтжтявссеє а цаїсатто ссссцвавос стосуєЄсвоасе саасаааннто абованссю дсатасоває Б) пісзосодса зазсазтсва сасцєгісСаз зайдастіст єсстдяваоє тастотсосо Зо поазссстата азстезстива сбоказсуєс засваєває зсзосзосао созаастсоє ЯЗ засосааааз ясозасттяая ссосвіссва Саовосаєсє зсасстовес тека ЩО пеозмсасой асіссстоєо товатастеа зазосоозсо скоса сатсояєвоє чо зкссватсвоа зізсасвзваї сбзвакессю сскОвесосс всовоцеєаса сЕжесттасє БО зведе зе соє зосоанієяКа остео ссзахзазає асодеоєодає БО сасасаїтасо зоаатовнас свіїоссазо дссавстаєт аззосєтеває совосвозЕє то сіє нюй стосодства абассоссва зба сртстосса Заастекоає то агєсасацва сфе сод содаозсося обсосшно созаадтеса саосоотозе йо вадосоуонтї Есодасасєте бостозсаєє дОюшазасоє ссссвоаює сртозасееє м сттвеєзосо сесстатаєє опозаєсссво озассмоса вабасоасує освадсоваа о ааозкодало зктаєстактаа тазтасоатоо ассссосоаза зазосавзої достевавее Но часосстваак: асзссЗисає зуссдавосо зсссвазаса вссстеєЗоє ог еесї зп сссапіодяс атасовазвї тозїсвасзає сссантзазо соссооход созткатаєс мав жасствтцех ассаєзазасє сет таєає асттастсяє вавасавала тЕВсаТІсх 00 чахткватта ктассзаоЗо3 заасобаоса сососсссоз осуоєтатає ЗазаастозвЕ ТО
Зкчсакі соя аіосозавоє аз аазаз сасєстетаєє свісттеєаа Завусаваоє МО тасозсвато Спа освиє сазабовосто осодтаоєта ободтовсаз созкатаєє 1350 сстдстєсоє асосцттаєсі їсодастозє зссдатаєта асозшуоооєс содадатове зо їзгасстата тсісттастс саваабоовсє баз ні «ай «й1ї» 47 «ко НЕ: «йІ13» штучна послідовність «и» «вої» осо лпоїва магісзва зкЕцдаваноєт сооассасех состєвусно васктассов з'здавосває ссассвівав що адсзатасся адбсодсоєє дасосоєсає сводвавнаєє Содбстовасю стажетесса шо спокотобаєд сватєвоЯає адастисває сстсесвуєєю тасасоєеє сєассоасвся що зікастоєоє засткстсоз стодсаанос ососсатсаю аассодксає кескласссс та заєтасатто стссозаадс Косуєсвова сазсазаато ятдззоєссю обзкгасозає Я чсаосооса зайсавесза сасеєсссва зававсессю сєссоаоавеє тес 156 деазтєстаса зсссаєткво соотавсохо аосзатозає гсвасвосаю сдзазстсоє чо затосвозаа асозатттсво ссосаєєсвй садлосатсс особстодтє стехосоєсе шо дсотасасод ассссстосо совахсаєстса яааосорасо стсосовасса таєсоатадє мо астсавісво дсасуєаває сдадастско сссозесутЕ асодоєсаса Єбесскеасе ще
Чесотодеца тозусзсоє адсваєсясо дсосесссЗа ссавхзавує асаозсудає Бо сасасасяся аовакцяаає сессоссвею шссвостаси авдссккаає судесадаєє 720 тсрустваоа стосудстяя зкаєсосстя зосасаєсаї сессстссся даастесовє ко асосасаана ссотоотсво свозоасюоа дбсосююєю созаяоєотя абсодтоає во задчсоЗасє ксзасосека Зоссдасаєє чедцодаасУЄ стссзоВКеЄ сус жо детаосвасо сесстасоєт допяасккою дааскасося зауасозсоє осаодсовва зо задо юаао ястассаках Єаетасоєюь песо вазосажауа оодсссаваке 1020 татостдатє акахефеоє зоссдааото асссадаока яєескюсодю покесосесє Мово сессадтодає асасоаават соаскасоає стсаатваво зсоссоцод соастатаєс по тасстутоєс агсатаааюс ссостатадс осстасесао аваасназоз стстоєстст 0031200 спасссзатеа статсааосо ззасдозусєв соасуєссссяа зсоассасас бзазастоах 171650
Чеодаєстюв агузодасоє асуєдевани сасскуваєє бассткасав даєш тво тассоасаато собазосаяї садообоста бсоєгавете деботозсна єесосатасс що сесесссах асоотевссе тсаЗзастуає зесов'яєта асозацвоє єуавоомозо то тасасстаса сстостаєтс сазадооост тав 1473 «Я а. «вії ЛЗ «ефе ДНК ; «шій» штучна песлідевність «ее із йоїеа макіківа «Нюх а Е йсдаазацст тодаєсясої тустсатсяо засттаєтоа зтозассвас єсассасвай що досазажЕзееся зодеоЯкаст часа сазан сеакканакє ска ско о єюсоєодзоє Єрасто99ос абоссзсаає ссєсєсвоєо сасаєдсоєє састовеєса о цітассотос засссєстуа Стдусаваос Зсуєсаксаю вассоюєсає ткксавссеє й частасаєсо сксєваєаос серсцесадса саасавнаєю зсрваюєссю зсакаєрває Мо цЕкВосодся дазсватсаа сасоєтксСяЗ зпайасттєх состовааах састовсосв ЗБ очасссіава аск каЗ соцсаосусЄс зосвзабоває свосаисао сдавастєвє що зпатосадана асспаасстао ссосасосаЯ сацасатсс осоєстооє сс яко песезгзсасод астсескасо сгозасаєска ззазсозасе меСосоатев таке аоє 540 зксвиїсвВа зкосуєзаех зоззаскств сіїоессає аспосксясв жкеесксасє БМ жасотовсоя твбоусуосос зесааєсасе ЗсеЄтЕсда ссватєвазоє ясаоотечає 5 сасзсасасу возаззсозаає састоссва зссаостасу заоссставс єодооасидате ТО їстостоної стосодстаа зеассвссая засаїоссоє сасестсєса оаастесоаЕ ТЯ вкєсасавай тТтосоотсово себадесєоа оісосовасо сдвааотаса тадсоведає що ааоядсодас: со со нестовсасс асннщасеох єси тека чай пітядсвояса тесстажцєє осозаєссою заассосвся азатеняює осзоосцана Бо ааозЕнозаз астастатаз Таатасаков ясессососа зазасвазах застав КЕ таїасідаєтї атаксвасос зассСовато зсссвовота асо вочаех ТО сесвасаї зсаснаазає Сбастасає стсяаказад дсуссоутою доза що тасстокаих зібасазаоє ссоссзтавє чека сссзо зазасєзаноз сЕсСТаєсЕсЕ що четссааста стаствацво заасавауєя сесдссссва ясцостатає оваваєсцяє 1260 отебастспяа зі венатос апсоована сасстокасєх сизнтаєна дазоєсазавє 0 їасозсазВ сойзадєває сазоооуста зсузсзеєту біоосдасаа Єбсасаваєє ЗО єстстєєдї асодстаєсо ссодассдає зєсоабоста зсозодовос содзодєоао іно тасвітсатя Єсисстастє сазаюоост тая 1473 «ків 45 «гаї ЯЗ «кі ДНК «вії» штумна послідовність «ве «бай» Жннізйоїса пагістта «НИ 5 чкозаззосї содзссасевЕ сесссаєсзо засссастов зіозаєсває вСассвЕзаз о воспатаєсе адосоюсоєє патосаєсає сводаааасс свостоанса ссахстосса 120
Чахтатосаоо спасе зедссасаяс сестсзвосю сасасесото сасстовстса їх пстастотоє аассстітоа стос ас всоссатсло вассодісає кесстазесссс 40 чЧессасаскт ссосваваоєс сотоїсзоса свясназату зсузадсссу огатасузає що ссзосоося зансяаєсаа сасоттксяа вайваєтісх ссстозазак бастетсоєо що спзааїсстаха асттакктаз сботаосоєс восзаєзлдає ссзосзосад созаастсоє я2О чатослолаа асдазтіттао ссосанная сасласаксс осоЕстаоЕс стос зо чсстасасоо вЕбссстоса совататста заазвсодвасу сгбсосовіва бБатсоатвоє 540 акісвассза зібєенкабає Тбззаїїстю секоассеЄє зсцаосЄсаєй ТЕКСТ Є ва веососоадтува содотовсоє зосавісако состав ссзаказачє засво кодає Ей сасасатасо лоззсоввяє сасстоссаао сссазоєсасо авоссстаає оса 72 ктскзстозаа стЗсКоостай аївосвссла зпсаєпцесоє сосссєссса даастсєдає УВО астсзсвана гіосацесна соововсоса зесосодоса сруазаосета вас вай задаосоюате єсохтосЄ досбеасясє окозодаєює ссесБатеє готове тьє щю шіносацка біта к заччактко оз кося аааакежає псевосеаая що заоассоцийз згас таисаа тяятасотою оссссесвоа дазосзааов пустив зей таїнтозеє втзесозсос добсозадев зессаовота асссттсодо заст сосесе МО сссааточає жіасозаааї козесасуає сосаажнаво дсассуавсєюо здаскакаєє що твсстоєсес вссесвавис ссотатаоє зсттасссяо азвазсазяца сгсіосасгісе ЗОВ: пасктазста тат сайоно заасоодаса сососсссоа зе кУтасє плаває ЗВО зедозіттоз асолосатос зоососааая сасстотаїх таїсстасза дадоспаває 1329 тасозсвВати ток саацевесто Ясвотевсве штосковеваа кс Є їз семнїєстої асаоктаєєє ссрозутовс ассовтуєта асузедоцеє соозопеояа 1440 тасатжтата тежежетастс сзазаюоасєї тах 3493 «М їй «21їз 14 «вісь ДНК хаїї» штучна послідовнієть клеї» шовівнеіїва масті ша «ее їв асоаавяоск їодвесвоце тостсяєсво зассттвссов аговассавс ксассагаява 5О абсзацасса зодссесаєтх часосоксає сафозазаєє скетазасо стае Тай зосасозада соте с зоспстасавс сСеКСесозсо касасосвєс састоасєв 15 дітастосуЄ васттєсвоа тІбдсвавоє дсоссатсво заєсодесає ттксавевсює 240 даттаєсвесу стссеназоє срідтсєаота сзаслазаєне асцавеєссо обатасоває З чіїзосвса заасаатсаа свсовссїсва азазасбісє ссссовваає састесеосЗ зва пвоасєстита всгтаєсєво свосаосоєє збсавтуває ссаусвосно соваястсує БІ чатосвозав асозатскаю ссясясссяа свозосаєсс дсесссваєє сссосюс 58 псдезсасво аесссстасоа сбазтаєста зазосодясо тесзсовеєз сабо є 540 атсжсавтсва асзсозевеає сеазаееа как асан саєа ее щ- чЧасасоосоя поооіоосес зосвесав сот сов ссаасваазоє асасосооє ВО гакисаисїтиса зоватдаває састасєсаво вссзасктясо дача содосацаке тей тстостоаоВ стусєоєтяа атассоссва жцсатоаєсоє сессстссса оваскссоае тва зктсвсавай тххвідатово «ацпазасоаа Збсосозозс созаватова кезесчаєоае 849 вадосоват: їсрасвеєтто оосовасаєс дсдововсох стссадаєсє тотоваєттх зо петаюсаюсо ТесетасОє ообааєстою озастоїста авратовсоє псаоосодаа во задаєуааа астастасаа твасвсоєве оссссосуда зааосавада досесаваєє як хасцежковке згасає зсазано есссвоаота асссттоеюе зе сссе що сесаоїас агаспазанах козстасєпаєс сссзатаазоа псоссоокоз доза 1140 жхасєстосстт ассатаанн єства чсттасссво занасвааца Меса о овгттаатта тгатєааооє заасодаоса сосдєсссва осооєстасас овазаєтоах БО перодсстюз асозодзтос адаховаваа зсскотаєє сатсттасав завосаваюя Т5тю таспасяато сецяядсває сСаадовоєто осодсваєто осодедасва бесесасасє цю сстостєєює аедеєвтасся сбоастоаає ассозтеєта зсозододоє соововєвао во басаєстаса сстсткасєс Сазасодаєт Бай ме «еще «ВІЇ» 473 «ей ДНК «Іі штучна послідовність
БЕ . «ейїх Жосієпо ва магієтша «ж 17 акдавааоєт то9аєсасох сустсаєсвю васттаєсов відваєсоас тсассаєтава що восаатаєса зсдсовсост дасосвєсат сабовавасс госєтовасо стаєстаєссо о путесодадо трассдовує аодктаєзає сеткксдосо сабасосоєє саєтдастса чо естастотоє йастстетоз стросавиос дсоссаєсво зассорєсак ссссвассся шві шессасаєта сесодааяоє сотоєсяоса сеясявнаєо зхднаоєссю отатаєсовас яю
Фшесаосооса зазсааїсяа сасуєетсяа ззазастьсє сестонавОє таскотеуєв я дуакєстаса астсатєсву содсвосусс адсаатозат тсарсадсва срааасєсоє в заїсвоаая ясоаасстад ссосатєсав свувусатоє дсубсєсоює кокс шо пепсасаєдо віїсествсе тозасатесз зазусоваса геєцсваєта сексваевоє 5 агїсааксад атососарак сралатксте сстуваесоє: асодотсаса сессстсаєє БОЮ посоєоштое содотоосос аосваєсаєр осоєссюсоа ссаатвазоє асадотодас 560 сасасатасо адааковнас сасєтоссазо оссаостасо зарссткаас Єрросараєє я «стостоздх стосудсєва згаксоссва зосасоссої саєвеєссса овастєсоає тю акгжасанай Скшсоцісоу содацаєво: оссусодоєсо суааавтата таосоЗецає що задосдовкт єсозтостса доссрасасє осоподасоє стссадаєтсє тукодасте оо
Фетадсаюєд стсстатеєт одоваєттою дааєсососа задатрасоє осадосоаза що аадесрозау встаєтатай сзатасусня весссосуча ввадсазаця дасссаамх ме в2 татастцдаєє атассвасес зватсдовасо ажссвозаса веесктсвов пост евесся за сссацчідозї зіасовзгаває кчестасуає сесавтааае чсСессотЯю одастатате 55 тасстетаст вісасзаває ссестаавє осттастсао завасєтсвда тав 1290 дакттавсс: гтастазова заасоовоєа сЯсоссссов осочетатає озазаєсває 1258 зкоЗзас за зіозосатас аоосасвааа сасстотаєї сасостасва дазосзаає зо тасоасваса гоозлаосват сааооооста чсоосвос стобоасяаа стсаосвятаеє ізо сстстссаЄ зсоозттассо своє зссоатєєв асозодоває сода їмо тасасттята ссцстастс свазецюст са 1475 «КА» ЛЕ «ії 1473 «вій» дДНЕ , «іїх штучна послідовність «ее жнаї» шосізноївга вагіт сіюа «Нік ТВ віозазачст сова сасе косссзксво заствастах зсдзассоас їсассвтнай БО авсзатасся ззасопцсвес Ззатасоєсах савозазаєє хоспітазаса ссатстоєса о озон нюоє Смітоосрос аоустаєває сссстсоосв бабаессоєс свстоастся що чехастЗКус засто гтоосзазес зсссвтсзо зассовкак тегтезассес 240 паттасатто стссоаавоє сосуссзота сзасвазато зтоваоссся охатасоває То потацсдоса зазсзассяа сасоттссза зазаасттст сестдзааає таскотсас ї5 зазссетата асстясттза соатносесс зосзатозає сслосзосад соззастсоє хо вамназвай есозасстна сезсесссна саазосасє сої сеаа сстососсЕе ЗНО ссотасаєдо ассстоасо созатасста зайособасо гесосраєа гзесозтаоє АЮ астсазесяо зкососазаї Сбазаїтссто бссоассесЄ асоваєсаса сс сКІВОЄ 0 сошосота: сосотоосяс восавісато осо стісов ссавтлаво: зсаботецає БО сасасатяисо внаїоанас састассаве зссацсєтасо застава миша Тв теєтастадаоВЗ стасоостза аївесассав адсасаєсвє согбсєсссз озасєссоах ВО агтсазсвянав Сі соО сова соба зісосодасо созаацкота саосзотоає щао згзаасозЗасх ссЗатосета достасасс отододасох стсбаздаєее ботодасєї в петзосвоєа стсстатаїх восозатетоо ззастоєєз ззазїсасає асвовсваза ЗО засасоозав аїтастаєна бзасаєотоє зссссосооз зазосазаца состсзааєх 1050 тасзскоаЕх зтівтсовсес зобсоаввзкоа асссвезока аеескесаса Зак есвксех їоБо сесеУутоорах зтасозазат срижасаас сусзатазад ссоссою Зпаттатаїє Та тасССЕоКОКЕ звісатаазас ссоствтвас Ясстасісво вваасаваоз стос лю
Чцасставета ттатісїсоо вааспвозоса сопсоасєссвв осодсєатає озаваєтову 1-60 сптапасстов асзадаатс вадтоданазв тасесакате тасоєтасва сзадсзяноє 1320 жаспасаато созааосзає сазосодсто осозсвоєто освоєзаєва кессосатаєсс що ссістссоє асодєтассз ссвпатіває вссвасоєса всоааюооєЄ содзшоєоаво зо їдснЕттата ксіоссастс Єва Чех саВ 473 «05 19. ча 1/1 «МР» ДНК І «їй штучна нпосатдовність «гц» «віх оон ва пагін «005 а зсзазавасі сузвесасоє састсассзу засіївсказ аеасєс бсаесакааа що чзасзятаєса азоососасє сатосессаї саозазанес сЗассозасо ссахстоссо о спогптоваою созЕхобоюс зобттасзає сстттсоосо сабасосоєє саєкоаєтса 150 оссассотос засшжесов ссоосвавоє ясоссвЕсая чассздєсви: КЄсевасссс Я
Чагтаситта стссцваацє Босогевова сзеесвазаво згдазосссо віза о пісаосоося азасааєєва сасосєссва заавасттсх сссспазаях касову ЗО вчагсссита застав соосааеєеєк аосзаєзняє ссзоасвосо сдачасьсує ща забосадаза зсозактоєво ссосаєссва сапибсвієс осетстоокє стос БО шсотасасод асісостасе тозасаєека зааосоодаєз сесосузива сатсозсаде -о ажктсаитсзо атососадає сдазастсту сдаєсоєє асоовссаєа тЕКесасс БО посасютов сб оєЄ весааєсато осот ссазатаааох зсаудкочає Бо сасвсвсвсо здаатуааас састоссзав пссаастасо заестїзає соасосвцекє тай тстостннод стеосоостаа агатсоссєвза асо с согтесссса зазсееєцах "КО асісвасзача соч есоЗ сода оссесоосо суаавуроса свосовцяє 540 аавосодате ссоасосткто достдасаєс Ффодсозасоє стссваасєєє сутодастть жк дббадсвоєи сеЕсстаКеОєЄ єзуаасстоу застає заоасдасоє осадуєоняа зо аадакоозай аєтассзїах саатасоєою чесссосода зааосазавя доста 2 таємних ахгзтсовсос асісогаєта абссвцаота асссттсодо погесокося 105 сссаоєоов: абасолаває Сражєтасюає сксваєжаао ососовсою одаскаваєс 150 тасстцусак ассаїззаос ссубтатаус щсттастсао зазасзаадя сеасОКетея ї300 чаикїзаста гіастазодо зазсоЗаоса сосвссссоз сова сає дзазаєстовх ча чіпа віза аЗзасодвава їасєстоататєст їзвісстаєва овазсвавОох 135 касозсзасо тосоєеосва: савооочсто особтао осоокоасва сесоКатасє 13що сстоасєтЕКаоЄ акоабскяссо ссодаєтчас аседакаеєх засос садово ї-на тасанєтата ксосатаєтс сязаоооосе аа 14573
«ей 0 хе За київ ДНЕ «аІі3» штучна пОосліденНЕсть: а , «же» Моодапотех шастенна «а о асозввавоасї Єоуавісзасеє сосксаєсво застсассюв зббвассоає бсассаєааа що адсазсасса запсзосост цетосоєсає сазана аєс содстовасо стаєстосоу 120 пкотосзоо застосо зоба сває сстттєооса сабасосаєє сасівастса ї5О чссастистоує застої сСтросзавас здсоєсатсад зассоуссат тКесавсске ай часи сіссазаає стосоєсаоха свасвавато абовзасссо бгатасцває зо «їзоссоса ззаєзаєєаа сасессесяа зааззасткс ссстозааух састексосо зва паєсстата асттатктаа суатаосотє авсазрозаї тсаослоєзва созаяеєссоє а васусазаая зсеасекао ссосактюсняа свзавсассс сота зескосуєєке 5 псотасасда зіїссстаса козасатєа заадсодасо сессоаіта сзесврасєвоє Ба згтсазісзо асососзоаї гозалієєто тсбозссоїї зсооотсвся Сгссссвасе БО сщеотоотза три оОсоє зосваєсято обсоїсттсоя ссазтанацєе асаоусооає оо какасатасй збаасоваасє саІтоссявО пссдеостаса ааасстіває стодосавяє го тєтаствава стосЗастяа згатсосєза засатоссос сек есса овасессдах тво астснисваза ЄтОтооксві сддацеєоюя бссуєооосо созааоєеюа садсоєсває до заоспсопатт тсорасастто дастозсасє отосоцасає сесєвааєЕЄ сосна що вдтсзосвсв сесстатоЕ водавссєвва сззстатаса вазасуасвє ссзаесвааа МІ зацаєоваяо аттастатає сзасасосов оссссосоца завасяааца цостсааате мо каси тозве збаїсвасує зУукедааото аессабадка асЕссЕсСодюО оусесосксє мо ссезасоцах зізсуоаах оз тасоає сісваєвааЗ ососсЗоса Заєсасае їн касєсецІцІї ассатааадє ссобстаєвос остіасісвО зазасаааних сосок 1300 озхтавтса ттасєтазадо заасодзоса сосоаєсесов дсвастатає зааваткаяе зе секта зішаоситос абосодаааз тасстдтах тасостесав одазосвавех ї2о
ЕВсовсвзаса топаазосаах садобоосто ссоосавсто осоотоаєаа сЕсСосаТасе 1350 сстасєнває асєдцастасся ссодаєтвдає яеєватаєта всозоаоаає созадцатово їла тасатіката сещесзївссє сазааонисєю аа ї1473 «и ві «ві ЛЯ «ій» ДНК «її» штучна песлідовність «вах
«ей зннізноїва вагіна «і» жі вівавазчсє счазксасЗї бостсатсєзо засттастоа зсзаасссас ссассатаза 5 засазтасся з«часпвсасІ Затосаєсаї сзодаазасє создстозасоа ство що дани озадо сассоє зобссаєзає сстттсодсо сатасосоєс саєтезсеса ї8о
Зсіастекос зассксскоя СКсоукзааеє зсосєсассає зассочесв сссвассоєс о
Чаїссасаста сессалазоас гоксваса саасяззасо атозаосссо дтагасоває БЕН чесзосоосі заасазссза сасастксаз заазааскісю ссстозааоє асо о позксстаса асттасстао собтзосасс зосєзасвзах їсвосаусво созаасссоє що заїзєвозва асоаабттао ссесатссва садавсатсє ососстовіє єстасассте яво здевгзсасцю агтссстуєє єуаабассва завосодасю тесасуаєтя таксоаєвоє 58 астсвпаїсва асососацвї созаасєєсто сесдВісоїє зсодоїсаєся ЄсссСЕКасс БО часова сооогаосає зосваєсато асасстісЯа ссватдлагах асаозковає БО сасасасасо зовзасчазаєс сасстоссваю зссвастасв задесеєває тадосадцате ТО теєтастцацча стЯсцастаа зкаїсоєсаа зосаксаЯх секс аасЕссоах тн аЕїсаслява Ссоїпассов спдзаасоюва десасопосо сдизадтова таоасосає вав забосозчасї їссатесіїо дестзасвесє чідоозасує сіссаовас кабодасх Зо віївесвасо сссестасвсї заозассю озасчноса забатанес осавосораза За ззозсодазо зстастаєсай сазгасвсоо ссссозсоаа ззавсаваов оостеззате З09О0 щасті асазтсвасЯс зуксзанте зСссаоаа асістссо сок ко сссзвиксвоаї акасозазах коластасцаєЄ стсзатазає дсоссоотоЯ часта МО тасстчітаї сбсзсавевс ссуєтасадє зсссастсза зайнасвазаи ЄеаСаКСЄ 1206 чаїттавтта гтатсававо зазсецвоса сесоссссоа осЄообттатає оавзаттааХ ие псосасссва агозозаєос зоосопазаа сасстохаєє сассхасєва дазосазадє 10 їасзасзвакао своззасааї саадооосто состав то сіодсоасаа ттсовсатвеє ЗВО «етстссої зсозстаєсо ссобастовс аеєдакоста зсовевюшає собподетозу 40 тасвіттата стат тастс сазаоцодсї за 1473 «ВШ ай «вії ЛЯ «гі8- ДЕК «Вії» штучна послідовність ие О» «газ Мосіхвотва вагів «В00йх 8 о асспезаваст спозссасої косесаєсяо засєсаєтов зсбзассзає ссвссвктайя 5О аосватасся адосососї закасеєсак саодвазаєс боостаасв стасесоссо що спотосозоо спатсоодоє зооєсзоває состессоусюв сасасс сасртцасюся 186
Зехаекчссс звектжеттоз ссдосвзазаЄ дсеассасаа васєдесає ета ай застасассо сессозаеас сососсвоса свасвавнако абовадеєса обатасоває юю
Чпітавсспуєа заасвассвя сасоітссав завзаєсттсє сссіоаааде єзстоссво ї50 позссстата зеттасткво соцсзосоісє зосаЗтозає їслосєзосаа соззастеце зо звкцдсвсава зкузаєтсац ссосажссви свузасвієєс ЗсЗЕсКаНЕє есасассе 455 зсобасасво зстссстасо тодасастта зазосорасо сесоасозіта сассдатвос ща зкісзассву зстососздах сзвзакксто скасує зсоудоксаса кижестасє БО
Чесоатозсва содтозсес засаассак зсессеесоЗ ссзатазазєх асвадтзоає Бо сасасатасо зоааїоааас сагтоссани зссаостаса заассктавс синє 720 шетостоаса стесцстаз зтассассва аВсатаєсвх сОсЕссоєса часа є ТВО зітсясазея СПИ сой срозозсода ассосососо соааавя сЄвосоутоає КН авозсецатї тсодзїстта дастосасаєс усодосвеЗх сессвовеЄ токдовсесе З
Чдсїадсвосо сссстасУЄс дозаасєстов чвасіососа забваєдаєзс осаооєдчаза ще ззозтбазай абсзстатза сзатасесво ассессоєцоз зазасзазов постах що катастоааії зб ссзасас зассозавїЗ зессадавя азбЕстксвОЮ баках іо8о секавясзщас: зіасопзаває соестазсВас стсавіІзаВО ЯсоссвикОоВ зак що тасстотоєє агсаіванас ссогтатаос пасттасесво занасаааов саке 1лю заїїтаясса стзЄтвапоо ззясорауся сососсєсоз асдохтатає ззазасещає 1250 чзтечаєттдза зсоззонкос зоосоцавна сасстакаєє бабоствсаа бавосазачю 1320 тасрасааса Змавосзає савосоосто пса стоотоасва сера тасє Мо сстасессоЕ асапеєзска ссооаксовс зсесозбсоеєз зсвавоноє сопзоусова 1448 тасатттата сєстовтастєс сзазоовУсю тав 15973 «Ще 2 «ей 153 «ек ДЕК «13» штучна послідовність схе «ої» Восіснеїва шаг ення «Я» З зепазвазост соозтсасої тостсахсяо ласттастов акозаассцає ссассатаза ко засзатасєса апосочосасе дасосоїсах саддзеваєєс кої товасо статті 120 жатесодцасе хозссодоаос заосівсзаєс сстутсєоесеЯ тавасосоїє састоааеюся їщ0 зітастосос азстстстоа стдооєвазос ососсаксяо вассовеєст сктаассос тб застаєстсо стссозааос сотоссаата сазсгадаате заз стстасоває Зо
Чдетзасбаса заасавтсла сасоєжєсаз зззаасеЕсе ссстозазоє тастотевсо ЗО заатсстата зЕжтвеству соцсвосоїс зусаЗіваакх ссаесвоасая «кова 320 затасаоаниа асозактева ссасвієсва сааааснеєс сага Есє секасоссеє Зо псотасасюю віїссстоєа созатаєєсв азвоссоовсо сосни таксоаєвоє чо асіслатсво агасосарає тбавастсто ссебатеціх аснтсаса сессттаєє БНО постотя стос зобяВссаке сс тсоз сСсаасєзаваах зсаозмиає ББО чтасасатясо заз чавас са тоссває зсесаоссасв авассстває сопосвовіє о зстастаноз стосоостаа асатєнсва зосакатсах сасістєсса аастссоди ВО зтхсасзааа ттозоотсоу созизасоба дссосодосо солазоатуюа сосок цає о зауовсочаст ссзаисостто Засквасаєс зкосочасає стссаваєєє госцааєстх З
Якїзоєвосо стсстатуєт однастсоо озаєтовюоса зацвтїчасос садова Бо звспатодава астаєтатаяа хазсзсокав дссссосоца заадсаазаяа состава 1020 тибдстцат: аїаєсрпаєвс абісозаота асеєвовіса зі оца досЕсосесх ТОВ сесзосазас візсдцазавнс трастаєсдас сссзамннаєо асоссоокою освстатаєє Іо тасстоакастТ ассеслааавс се снівас ста ссаа зазазсавава кос тео
Ччатттаатта стат саздай ваассоазаса сососсссв зсозккагас чаазаеах 1250 пЕдсаєттов зсоздозсас зоососдазаа тасствЕВих хатостаєза зааасвазе 1390 тасуасвати тодлвосаас савосозссЯ усодбавєсо осоотоасва Зесосатасє І38О ссІасЕсСсОі сок таєси сов твас зссцотта зсозоедозеас соцаоосвай тав їасакткака сСсІвстасвс сСзааоодаєк ва У «ей» а «її 1473 «йій ДНК ! І «Ії». штучна посвідавність
СУК
«кеіз МнніЗпОоТеа астма «ах Я аіпалазосі спот сзсес тосссатсно засттастав асуавссєбає ссассятава БО чзчєзаєаска зозкочсвсг асосоткВе своузанеє оз тозасе сво о ей зт тсозда ссаісдовос азот асвяє сссттсоОсо сесасосає састозеєса що чІтаєтвнає застссттоз сеадсазаце ссоссассво аассдоссат іст авсесе о часта єс цмавоє шпиоссвагя сааєзазаю зсдааєєси обасвсоаає щю пісна зазасдлассня сасаБетеВа зааааєттеє єкстдаааях састакедке їзБО зопзісєстата зсстаеттав свасзасокє засваїозаї сеаосзосає сразастсоє 2 часа асан сс ссав Сяесеазсаєсє остов етос Кеве ав осотасасод зісссстосо сшавтаєста заадсодасю Єтсосоаєєз тахсватвоє З зетсаціса агососацат саааектссо гост асоботсзка трест еє Я чесчісосє собогозсос зоасавссвте зсеїссов ссазеааває «сасозозає що сасасаїаєдй заазіазає саттоєсаво десзассасо ззассєєаає созасвае т2о їстоєсдаов схосоостаа асстсоссза адсатеєсає сижсвсса заассссоВх ТО агісвсааас сСОоЗіоотсем соодаспасзея оссоСозосо соазавос саосовосояє що засесечатєь єсоасЯстєо десецасвеє згода васвх сессзаасее Хесовас 00 чітаєсвоса сбсститаєх часова се саасєсасвся звозвевасає чевзвсоаза «о ласбасшааоа зстастаїза сватасесо ссссосопа аваосаяава состсваас 1020 їазтшссЗат: зас ясес апссавоаєо всссзшааса сс оцО есе ОВО сосавівшах зіасуааааї ра сзаєс стсзасзазе зсессвоко оояксасатс 10 засстос аіссаїзавос сс атавс сі тастєза зазасанаоа сісае КЕ саєставістз стат лзазо зазсоваоса созсоссссзв осзассасає завити Б
Фішатсще ебсуашоавос аодсоднява касстотасї сатестасва ачзадсададх Та тасдасаато тдовзаосзає сазоюодєто осодтауеко зевоасза бесдсатаєс і сстоєсссяє зсусхсзссо ссезастозас зссуаеєк: зсузоооЗоє содою 1440 тагаттїзів тео тасте сазязовщнєт аа 33 са ях «ка ЗУ «вій ДНК «Ії» штучна ПОСЛІДОВНІСТЬ ех «кої» месміБноїея ящагіт иа «ше Я акцазаайсє садабсасєте стосссаїсав засттаєтов зеваєсцяє ссассабана Б восзахассв зоосЧесОосї даїозсеєсве саудаваасєє тоостовасєа стасстоєсо що росзкадаою созітодеос аоуктасває сстсссосо звгасовасс сассовстся 80
ЗЕтзстЗтає заст тоа стсаосазан осаєсассво заєсошевах ее васееЄ ве
Фнитивсаєта суссовадяс гсассвота спдсзайата зсоаашеєссо осзсаєвиас ЗО пісаоєсвя ввасавтсва сасасстсваа зазавасссст ссстоваває сасоєсосо БЕ печекетата асстастєза сообзосоєє аобзажеааає ссзоєзосяю совазевсє «30 вацкадаза асозасєтно ссосСаєссаа сабдазсаєсс чек хоскусоссе що псутасасою зссссстосо суаататтта зазосодасо сссасоаєта табсозкаоє в аігсзасжва зісосацах козацстеско сстЗатеЯКе асдвотсаєв сеесекеасс ва пеосесодєда сота сос зосзагсасе зсосстєсоа ссзатазаці зсзодосоває во сасасатасєв яоаатоанас саттоссвав зссвостасо задссттняє содосаоВє ко сеграстозоа сЄкосоостяа зкассосєсаз засакатсях сотсстоссз даастєковя То аисасааза ТОНИ сєвЗа соаадасозоз оссусодасе козаветута тадсодеває ай взапсовзатє ссдасоссво здассвхєасє зсадозєає сбссаюаеЕх стековасее щО четадсаесо ктсстаток: одазессцо озескосуса задаковсоє дсаросвана зво задатодано агтасктева кватаєсдкою оссссосоюв акадсаваса досксвасте 1020 татостяєх всзісєсасос воссвазека сетссдозога асо сао їоно сєсасотасаї зезсозазаї сбасстаєзас сесзаєззає влессоовоє доза їНо часів зксвЕдавцс ссотасаос зессеасєсве взаасадаов гм ЗА чим ета гас сзаооо звасоувоси сососсссда дсоуєтаваєс база оа є ще зсоозекказ зсоздозсас зв3соозаза сасстєаєк тахосевсвя дааасазаує що таспасваса тодавосває сааваЧоссо асоосвоссо косого асаа сісвсатасє їО секуєтссде асодттяссЯ ссопаєтозе ассожсеєта асоадаюає сбозаотозо 3440 тасатєтата зскотсастс свазодсосе са 1473 «Я б «І» 1473 «аа ДНК і «ії» штучна посвідоннієть «а хиаї» мебйноез жає кіна «00 В | Що ще ! зіааннеї іЧавосасеє состсаксхо засттастов зідвассоас ссСяссатаза Бо зосзатаєся водсасасє дасбноїсвх смюданасєс со сдаасоа сеатстоєсе о спєвс юшаою коассєсюооюс аобітасайс сстеєсвосо сабасдевєс бастоастся Б,
ЧІтастотос здастттствз піоосзазос ососсаесзо засєсщисах ст аасесє ее пагасаіть стссозавас гасу сзоква сазслазато асозаоєссо зезсасдаає З
Четасксвоса заваазсвассяз сасокстсня ззавастесх сессазвазах Сас 50 шрісстати заст еттає соогаосуєс зосзатоват ксаодсауєаа сазастсВє о заесасвузаа зсозасітаа ссосатесаа сзозасатсє осбістовЕє сеБацсВееЄ 480 пдсотасасов асесссто соваїаієка зазоєссорасе сссосовета сатсдатаоє За агтсааісзу атососацає тозаасеско стос ворот саса тебест Нє БО
Чесаєоцтода тофосооусоє зосаєтевту осессессов сезатазноє зезозтове ой сасзсассєо зуаатозавс сєжєвессано дссаостасо ааоссккзає судосвовЕє о їлаоємиа стосастяа асаїсассва загс со стєссв овастесоах тва чс(басзава стоїш ссой сооаоаюа зісосооосо соаластата блосаоає Бе задосєуоаес ссоавосєто дессовсвсе зтсодосасої ссссаоаєтт сободаєееї по дЧісннавуа тесетатуєє дедчнаєссоє днассокоєв звдаєовсеє дез ана Зо варЗатолцино ат єстикаа Си ясосОв Зесссвеюа звзусзаава Чпостсзааах ї102о татастааєї асзтсзаєає зоссуваато всссзваута асесбесвоє апттсоєкеє нщо скссаотодат атасозлазих сбатстасає стсвасзазо всоссооєоє здаєте лав жасстосаке ассзєзайвоє состав с сіє заавсзааоа стосу 1200 частсттавіїв стабсзацоз вазсозааєв сесессссва ссуостатає саавакткуає БО акодаксєтоа зкоашоасос адагодаава сассстаєї тагостасаз сазосзааце 120 тасдаєсвато топазосаає сазаодцасто осоутаоєко осдабоасєва сісосасаєє І3во сстастссуї всопттассо єсВоасає вссувіоєтз асовадодеє суда оао та
Жасатесата тссоєтаєтс савасщось аа ТЗ «й и? ха ЯЗ «їй ДНК «Ії» штучна песнідавність хх «аа ні Веоїсв татка «МК У ахбазазоєт тодзссяасат состсаєсво засттастоз атозассозе гсассатаза БО зудкааєзссі зевсецсеосЕ часосоєсяє сзоувааасє кобссозасо стае ксе 126 спдкоораою созктеоодс лодттасзас ссттксоосо сатасрсвтє састоветсв що петаєтатос засіттста сОюсахаєос ссоссаєсво зассутсзЕ стае 240 застасятєто сессуаавас сосомсауса сзасзавасо здавав бтатясдазе Зоо шасосооса азасзассваа сасоєтесаа зазванстсє ссстпнаної састессосо з65о
Ччузісстата асттаєтстац содізоасоус зосаатонає сСсзосадсає сдпаваєтеде о заатчєвавах всозасєткає ссосатссаа сСадвосатес осотстовеє ета ссее ЗВО яесабвсаєою ассссстаса созататеса зазосоовсо стсосозста гахсватаде ЗО аттєзакеаа аснесаааї созааттсто сотозссоїх зсодоїсвся ТеТссстасЄ БОЮ песотоатоя со9отоосос восзассаса осассссва ссвасзааах зсадасодає 25о сасасатасо зсаесанас састоссзав чссвостасе ввессстааєЄ сапосааке ай кстостцаув стусоастаа акаїсосєсаз зосасоїсеє сеоссстеєса паяскесояє тво віїсясаава ІОВ соозоясуця сс сазана саосоюєає БО заошсацяє: їсдатаско босіасвсс оабодовасаї сіссаоВе сосшас жа чЕтаасносО сіІсстатеє: вовасгісо баастстося задатовсос обнюєава ай аапатопазо вітає саа їзасасогтоє осессосоза зазослазоа пастсазаєє То татастуаеЄ зтзтсоасос засєсоззава зессзовака азсІсЕтецеЗ часте ТО сссвуївзоа: зізсозанає сейаствсзас сесавіааво зсоссодугою доаккасатс що тасстосвіт ассатаазос ссоттатавс осктасєсао завзасваавва тост 1200 загетзаєта ттаїтзавод заасооавнна сасассссда осодєтакає даааатковзу ТБ екодакеєза зкозозатас заасзозааа сасскуїЗЕх Смостзєза базасвавої 1320 їаєцеєсвако тоудавасасс сааосуоєта осоусвессо отоосааєва сісосакасс зво сетастссицх ССОшстасс3 сце єссузе ассуВсуЕта асовводцає соозвосуз5 а тасасєттати сток таєтс сазасонсх аа. у «а «ії» 3473 «ік» ДНЕ «15 штучна послідовність ке» І ! «ааїх зниенієноїва агітєтна «Ян 88 асдаванесу сруатсасоє кастсассво зассеастов асваєсцає єсассакаав Бо аввслатаєса ядасоюосЯєх чатосвєсає снозаааєс со ваасо статечКев 120 соукосЗоаоз соаттовоос зооітасзас сссстсоосо сабасосдес састонсєка 18о пітастатас застстетва сен лаває зсоссассза зассоатсаї тЕстаасоєЄ я пзгтасаіто стссаааєс собоїсвоса свасвазато атовазосссо огакасдаає за ск аососса аавасаатсва сасуТіїсав заавастст ссбтраааоє гасне ЗБ повссстати вестаєттзо соотзосоєс зосзасозат ссзосаосай созааєтевє ща вабтшевозаа асозакство ссоєвтссва сабвусаксс осуєстдатс сссоусоссеє ящо
Осохасасюю втссжстрсо сраяхаєсса зааосровсю сісосовста тассовізоє а агтсзатєвВа асососацдат сОззасеско сстоВісВії вс сасв сте БО посотодтої сооосоцеоє зосзассато сао ссзасвазає зсаувеає 5ОО сасасаєзс) зозасоавлас саїтоссааоу зссаостаєсо засссттває содосвоаеє о їсентовоа стосодстяа асаїсоссаа зосакотсої собтстсссз даастссває УВИ зттсасаваа тедтуотева спадасода Зесосодсо сдавадтата садепохоае ща вашосчаає ссрасуєстя доссцасаєс зепузаасяє сіскаЧаКех сСободаєсеє що шссвосавсв сесссатвх ооозаессвю дазєсоєвся задасовсвє дсадосоваа око аадакооззо астасєтасва таатасакюо дссссосоа зааодсвазов достсазаєє що жасостоаєє асасєсраєус воссовооєу зтссабадєз атестєсовоо оосесосссх тощо са нщаї затасозяаат рі таєдає ссозатаазо ососсоувкоЗ одастаєаеє 15 тасстосдєт аксасвааює ссдітаєвоє дстсасєсво зазасаавов ктосоєєкех 1200 датетзааїха ттзітаноюо азасдазоса сасоссссча осудєтатає оааазкєоах АБО
Строоаттіов аговодатоє водтооаяаа сасстотаєє састутасав дазосзавої ї:о тасазсаато кЧпхаосват савоооєто зсоосвоєсо ссютозсва стесосатаєє ї38о сстостосує зевоссасся ссзовг дає зседатоєта псозововос содзавосеоза ївно тасабжтата тстоєтастє сзазободст тва 1473 «іх В «її» 1473
«вій ДНК «її» штучна послідовність. хе ао» -ви3» имієве ва пабів «00 99 зсазанниї созісасУє сустсассвО заестастоа акозасеоає їсассасаяа БО здсзатасся зарсозсась дасуєдкссаї сазудаанасє дрдішнасюя єс ст9єся 120
За отаєшщо совстеює зопстасаає ссестєдюосо татасосовє састовстся ї5а песастетає аасстттсоа стодсзазоєЄ чсдєсаєсво зассоцдісає ссстазессе Яй даїтасасто стссеаааоє смс євасалаяко асзваауєссо осасасоває яю чесаоасоаз звасзатссаа сасоїкєсаа зазааежесє есстоваац асо ЗБ чзавсстата азсттасстзоа суосзососє зосаатозає ссзоасаосяо созаасссоє 490 затцсаоахаз зсчааетсяа седсаєссза сздзосазоє децістовеє старе БІ ссотасасоє зжсссстося тозатаєа зазосовасо сісосовіка сатсовтяоє що зсісяевісво асюосвоя: соазастстю ттковжесеєЄ асоддєсасєв ккжесттаєє ОО жеасоакозтаа сот засос ззсзаесае зсасОВ ссватавац зсацвЧЄ БО сасасатасо зоазівадаас сассоєсава чесвосєсзса зарсєстітаає содосаанеє то
Іст цада стпншєєза асвесуєсяа адсатосоуЄ содсістсска часте то аксяєзааа Сто соднесода соєю созааотока засо на зашшсннни: ссрвиоссто пострасаєс дтововасує скссаавтех гучно що пстзоасаасе стостасаУєЄє додав сою паастотося забатодасоє дсавоєсвная Зо занаснюавасй атбсаставва тзагаєстов десссесода заабсянада чсесааае 1028 татастоаатт зкзесвасос зоссоваоіо аіссараота аЕссттсоО загс 308 ссбаотодає атасоваває повттасоає сесавтвано дсоссоотою ораттаєае ма таєстоктоєтї атсатанавс ссостасзоє пеетаєтсво зазасазяуя аск есЄ 500 зассстваїїа ссвсстазовБо заасоозаса сосюссссра осоцеєасасє заявках 1280 чісзассіЗза зічаезоагос зуоссоозава гасстоваке гасостасва са савво хо тасозсзата соозаосаає сзазаодоєто Ясодтадіко дсоомоаєаа сесосасКе 135 с«скосссоє ясооісвасєа ссодассаас засос зсозодевас содаозсово Та тасаттстаса тсттятаскс сядасопоєх та І473 «в «ів Я «іс» ДНЕ «еіі» штучна поспідовнієть «лях шк «їх чОосі5плоїва мабзтва ех ЛО асваяанаст тодассасЯс зусксасєсао застосо зсохасеяяє ссвєсясаая 5 аоєзатассв зпосодкУєє дасосовсає синюнісс сзостоваєз стассвосса зей часов ав хаос воріт исаае сс хоцзсв затасвсвис сассувсюсв ВО чЕтастотує зактссттох: сСсоосзааес ссаєсатсао зассодікає ст бваєсоє о чаїсвсаєта сЕссодазацє косцесвуєа сазжсазазкя абодавесса зсакасулає 300 пствосовка Зазкавісва сасоїкєсаа йпаввастєсє ссссоаВаає саствтсосю іо здятсстаса зсттатітай состзосоїс адсаатшаає тезасвзосно созаасесоє йо затослозва асцайсстза ссосзессва Євозусакеє Зсиссідхс сстдєЗєсе яко зсосасаєце ассєсстОсО сузасасєеа завосорасЯ гісосзаєта гассаякоє 540 аітсзаксво арасадат тоаважтсско ЄСТВО аскшщієвра верес ще часасєнмоа Бої нсос адсваєката осо сов ссаатазавє асавосодає БО сасмиакасі зо шаваас сасстоссяза зссвастасо заосстаис сосна ке жстостозаз ссрсодетал ага соссаа авкасатсої саттссєссз дзастссовх 785о агсзсваа сСорошесує судвоасеця дісосецесо созаацека тадсоокеае й завшеоракс ехо опстдясаєс дЄбнювасох секс соток є о пстадсвоєо сєссстатаєє допзаєстоє Чазссоєуєз задатевсос осаддєовай зво заазктовчяо яітаєтатаа тзатасосою оссссоєдоя завосалаяоа зосссаваєе їОохо таїЧстцаки асазєцзакас зе евоко асссаовота зсесЕЕсОва ес за сссаотоуак атасовазає Созксасоувс стсавіваво дсоссообоєя зоаставае 340 тасстотосє зісаєалазос ссостатадс ддсітаєтеза зазасазаца Стесае 1200 жасстасіо: сазіїзаодоо звасоовоса сусоссскоа деооктаєсає зааазкє БО сптодассєоа зксовозасас зЗзабсодааая Тата сатостасва двазсававх о тасдавсяяко ТОоззосааї Саародосто осоосвоєте отооссасва стсосятасс Зк сскустесЯЄ ЗеЯцЕтаєсу тсадаєкЗає зссуаїчЕта асозосовоєЄ сооачосуаа 1440 тасатісака сстоітастє сазадовсост хав ща «Біб. 3 «і» ЯЗ жеідз НЕ «иіїх Втучна песлідовність ворони «йаЗ» Модне їв вагісняа «М» З зічанноист сені свсЕс сесссаєсно засттастов зтоааєсрає ссассаєааа о внавтасєса вс ООсаст озтасоєскаї свполяваєс гаостоолаєа ставесса ТЯ посакодаєю болт коувоє зодетаєзає сежжеєдося гзкасосатє сассонетея 150 чЧссасннмос аастсєттаЗ сЄсоосзавес псессаесяо авссовссає сЕсеаєсеє 440 часївсато сессоааєвис сотосєсяцта саасаазваєо асоааосссо зтакасаяяс щюЮ пттаосовса зазвсзяатсза сасобстсаа ззааасттсх сестовзнаоє таєтаєсосо 160 доцассстзіа ВСстнЕтхаз соотаосоєс зодсанеравії ссадсвосає соваастсоє ша азідсвозаа асозаєству ссосаєссяа саозосаксс осока сстосессс «Во
Зсотасзсою зіїссстосю козататеєка ааадсоваєд сесдєдаєта катєдаєвоє зе асісааісвао абсососвовс созвастсто сетовссеє асозесаса Кесссткасє що часатозіоав состоосос адсавссасо осексттсоа ссватаваює асаротоває бБо сасзсатхасв здазкоззає састоссазо зсоезостасо заоссккаає суоосаоє "о тстасідаой сіфсоудетаа атаєсоєєва аосаєоссої соїєсєсєса давстесцає 789 атксясваза ссотовісоз собдабасова обсоєодосю созаяотота гаосодтоае во зааФосоднтє тсдатостта достдасаєс дбодюсаєоє сТессабакеє сесбоастх кю чосавєзвосо кссстасЗсс доунасстов озастоєуєя заовсоасоє дусаводсоава Зо «асан зссастатаз єзатасасоо чссесосода завосаваох дасесзаах 100 татастоазтї зівїсоасує воассозачто агссададта зіжестою досесоєсся 1059 сссаптодваї зсзсдазвах сові тасЗає стсзаатавав зсоссветоа пзататае мав тасстакаст ассаснявос ссостасває дсстастсво азазсввадя сСтеєттакст об чаїсттазтїа ссвісазозо заасооаосі сососсссза дсоогтасає давааттдає о стодахссоя етозовратос зодсодаяза сасстотаєє сакускаєва дзарсаааюї 1379 тасозсвасо тоданослає свуюоєте зсоуєюеека зсоосбасая стсвсасасє 138о сєтастссох ясодетассо ссораєтоас ассдасоєса асозооодає содадцюєово 1440 тїасатетата сстоєтаєте сзавеюєт таз Ал «ЦЕ 5 «жаї» 4473 «212» ДНК «У1ї» штучна послідовність кад» с.
Феї» ВробенОотев тагієїна «Я00х о : атозвавост тобатсасоє тестова застстастоа зховаєсове севссакаая щі адфсватаєся зфосуюсоєт дасосуєсає сафулавасс сооктовасю статсєоєсо що дототодаюю тоаттоюоус зодітаєзає сстттсооса катасоєдіє састдастса тво пстаєтутас васткжттдя стрюсяваоє ососсяєсву зассодтсак стставсосее 40 даттасаттд ссссдаааюс сотексвютя сзасаваако агозадєссю дхасасоває сиві пстзосозса ззасватсаз сасоїсісла вавааасттсю ссостодавеє тастоєсосо 460 удатестата асттатттад свосаососс зосаатовак ссзосадюво соззастсос о шасдсвдааа асозаєттно ссосатссай свозогатсє дсфестоютє хесосоєсе чо
Чедтасясво атссестосо срзаєзттта зазособасо стсусоатта саксовтадє зо аїїсваїсла ЗЕвсосаЧах сцизабтєва стаз есуєє зебоуїсаса кессссваєє що чесзсомтоз сої ексес асан сако дсцестесоВ ссаатазавї засво ща сзсасатаєу зов3їдааас саттоссаво Оссвостзсо адоссєєває хобоєсзовте 7 чен жешаоа стосуоства зсассоссва ЗОсатексаЄ соїзєтссса звяссссовх 78 асісасяаєя ТтОтОдтсоу собеднсюоа Оксосорюсо сувааютуюа садсодтове що задососраєт ксоасоскта Застозсасс дешововсоє стесзовесе тома що
Фісаосзусо тссстатаке добазстсау озаєтотеса задаєовсоє дсзодсоваа: 985 звозтооаас аттастясва тайжсасотоо зссесюсдюоя заалосаааоя оосссазаєє що тайпетодтіт асвтєдасюс впісозавто зЕссаовота агтстієвво затїсосссх 1086 сссавтцоаї зкасоваває сойстаєдає сесваєаааи зсоссоєоо дозстатаєє мав тасстотчсє: ассасзааос сеоїсасзос дсстаєссао заазсвазча сеосссє ї800 цагттаатта сгтатсаадоя заасодаоса сососсссов ссоостаєає даазактове 1950 чтддакссоі ахолобатос зОободваза сзсстогаєє сзбоєтаєва даздсававї іо тасваєзаєо тодакосаві саядозоаєто осообаасто охообсдасав сСбсдсасасе ме сстастссЯє зсооктассе тсодассцає зссоатоєта асоавовопоє соозоЗесве їлю їзсатттаса їскостастс саааоводст ав не жеі» ай же ДНК ; «1їз штучна послідевність «еед» «еаїз зернова тасікіта «Ох 33 . ; зіазвавост сцаїсяасо: тосесассзо зассбасєтов асоваєєцає Сас тааа БО восвитаєса зоусосост датосуєсат саддазаасє содкковасо стаєстоссо їм спі домхос сдаскоозоєс авзчаєсаєвас сссттєсоюєю табасосоює састоастсв ї8О шстастотос васхктссца Ісдосаваос дсоссаєсвю зассорєсає ссстаассоє Зо
Чассасатто стссозавоє сусуссваса сзаєзавасо зідзаюсссю осаєасває о пеососєх ааасваєсва сакоссєсва ваннасеєсє єсстовавоє састоєсцсю Зо сФипсстата ясстасттво созтнасаєє засто ссаосаосво сова теоє 430 зватшсаовза асоваєксно ссосасссва бададсаєсє дсокссовє хесдеоссюе яо пехасасую «ктосстосо Ковасакєткея зазосввсо сссосцаєта таксоатаює 540 астесважснвВ акусосасеї соаватеста КкссомеЗї асобпєсасв ТЕКССЕтасЄ о посотовтоя тоостоосоє апсватсзка осоєсттсда сєзатаааої аслодтоває во євсвсатасю адзатпааає сзткуєсаза дссзодстасо заассеєзає сопдсзвате 730 тссдствада стосоостаз атгаєсоссаа аусакоксює собтстссса даастєєдає то звгсасззаз се шесво соозозлоююа гсоємно созазтатя сзасватоае що авсосойпаує ссбатостто достозсвсс Отосюраєах стссваа: согоовеееє жо ага сесстагакє содзакссУ озассмеса азаасозсоє чсаоосоааа Бо задатодлво зктастатаз тзатасоєро дссссосоюа зазосазада достезаня 1020 хагоссдає: асассоасос аоссоваюєю асссацаюка ахсстсвоє васесусюєє. ОБО сссаоточаї зтасдазан: созктасцдає сісазізазо ссуссооєаює воза мав твсстасоєє згсабаввос ссстзузос ЧсітастсяЗ азазслазоа СЕКС що пасстзаєтя Єсаттааооо аласдовеся сосососсов усоостатає заазаєсоає 160 пквдаксєоз зкозодатос зудосюзаяаа сасстекаєє єзіостасая давобсзазох век тасозсвако ЄЗпазосває сааозобоста зсЗзасачіто пстовсвасва сесосакасс 18 сстастссої зсросізссв ссодаееєоає зе асовоаводає созаоссао 1-0 тасатєїата кстрєсвзстє сазаовоост таз лаз «ак а «вк ЇИ5 «ій» ДНК ! «кії» штучна послідовність кое ще «аеЯ» ееніяво ва щабівіва «бю За Щ зідпазазосє сопе сасос оссслесВо засттаєтой зсодассоас ссассасана ВО чзосзатасєся зЧесвасосст датосаєсає Сабспачняєє содбстовасо стяєстоссо Не
Ффнсозадо созітавоос зооєгасазе сс еюсо сабасоєвіє саєбазсеса чо схсастутнс засттсїсо: Єсоуєзваос псоєсассво заєспосєсат гхксаасссє «о
Фагтасаєто скссдзааає собохсвоєа сазсаазаєю зтбазосссо отакасозає 300 дісзососса зааєзаєсяз сассісісва зазавсттсу ссстузазої сзстуєсе ЗБ зпозассстата асстасккзо суцівсос аусаатаах ссзосаєсад суаавсхсоє що засдснцава зсоаасттау ссусаєссав свозосаєсє псосствціє сескКосстє я шесгасасою зесссстосу сбавкакевта вазасодасю сссбсоаєта стахсовевоє 540 акжсазісай зкосусада: тозааЕЕсктеа кто звеюессасєа вссссттасє що
Ччесесоосов косоєосас аосвассато усеєстюсюв ссяаіааває асваенес БО сасвсатясо здаакзааас састоссааз зссзоастаєо заосстізає сосасацагє ей тстастовоз ссзсзаства асажсодссва адсасоєкоє сагтссссса данстссцах ТВО вттсасааах стотодтсоє содадаєдох оссосоюуєю созааютуха свдсовсвис вою аащесопаїх ссоасцєско поєтвасвсє огоВсЯє ЄСтссаоаее тосоозеЕЕ що пісасадса стсстатдех овозаестов озасєтетоса заоаічасос дсаасовая ЗБ задакацнао астастасаа твзасасцкау зссссосуон зазусаавая застсвааее МО чтасостозкх ажаєссасос авесозадтівї зсесасаута атжсстсвю зосссоєссе ово сссвоїорає агасозаває Сдасстасювс сссаатааао осоєссооєою здвехатаєс о їасстотост атсатазацс ссцттатаос ссітаєтсво зазасаваоя стасотеесх 1200 ваттслатеа жсаттваови ззасоззасєз сусуєсесоа чечостасає дзазатуоає 1250 мом ва зтоєоратос аооєодаааяа саестотаєх сатостасва оаарсваацх 3320
Тдсозгсвато тоозайсзах сазоодосто осоокаосто осрособасва сесосатаєє 1380 «стостссцє псддттаєсо ссоцаєтозс ассдатеєта ясдавоєюде сровостозо та тасаїїтата Єссрітасєс савадоювост гай мл «вій» 35 ке 93 «і» дик ; «У штУчна песлідовВність кла» «3» Мосісно ва шагіїіна сх їх аоазазасє соозксасює хостсзтсав васстаєтоз зезаассовзс Есвесатаза 0 зпдслатяєса зоосодеоєє дасаєдєсях сеодаанаєє седсюваасо скаєскеєсо що сф атвовою спастодчес зпостасзає сстстсобсо сатасосотє саскавксса То чітаєтатос застїєсєєва Кервсавадс ссессаєсав зассосісвї Кг азассеє Ки затсасатте сстссозазоє сосоїсаоста сєзасвазаєо зтозаосссо охасасоває 390 петадсодса зазсааїсза саєдтстсяв вазаасстст сестдаваух састоєсосо яко поузтсєєтата асссасттао соб зудсаасдває бсадсадсяо сдазасєтсоє 420 затусаваав асозасстай ссусаієсва саовосавсс ясаесводіє сстосоєсє че
Чеотасасюю асессссоєі созатаєстя зааосюасо кососваєта сассоваєвоє о астсваєсзо зтососадає сзазасєстО сктаассосї асодотсаса сккесттвес що
Ффосотодтоз свосоасос зосавтсако осотсттсоВ ссветаваоє асадотоцає о «всасатаєд аодзатданає сагтосєзаа ссвостасі ааоссстсває собосаонє 720 ссоссвлов сеосдистаз ататсоассяа восасовсає сасестссса овастссовх "во аасзааа сфе ссво собдазчасоза сассоусооосо солааотока саосовсрає З заодсоратх ссовсостто дастозсаєс оборовасиє стосаюаєте тосдасте 90о фетарезасю тссссатОВЕ додлажєвв) Заастовуєа ззозкозсос дсзавеваза Зо ааоаторано агтиєтатна саасасотою оОссссосода вавосаааоя ооскснваєх 10хо хатоствикт асаїспасас зодссовассо асссвовоса асссттсвоз застсвсосяе Он єссзцкоплах атасразнає тозестасозс сссзатзазо ососсоотоо дозктасе ї1хао тасстосаїс зїсаїзавос ссостаєвос зосєсастсзо зааасвавоа сВЕсОТеех ща соаіттааєта статтаводо яаасдовася содсоссєсва осодсєтатає давааткоах 126О втрозтєтов асоведатос аротодаваа саєстктатх катоєтаєва дгзксвавоє хо тасрасвако соогадсяає саздооюсто дсодсаотєто осрюєовсва сесосатаєє о сетостссує асобстаєся єсоовстоає зседатоєся асозовочоє соозоотозо іо їаєвіжката зсеутаскс сзааооваст ва 1473 «105 36 «ії» 1473 «ел ДНК ; «еїї» штучна послідовність «ЕЕ» «Я» Меєнійоїва шагіківа «з 36 зтоззааистї тодаїсясої босесажсво засттаєтаов атозассдас іїсассятааа що зесазжвсса збе сост засосвесає садолзаасс сооссваса стаЕстоссо хо що довою сраітоооЯс зодесасвяє ссесєсроєю татасесутє састожса що цутастатеє застєєттоз ссодезааоє зсоссаєсво аассодссат тттхзасссе 240 зас асЗІс сессозааос спртоссауки савсвазатв віоваосссо зевтасожає зо піїносооса асзсватсяя сасоттїсна ааваасттст состовавоє састоєсосо 45 соФатеєстата асттаєетло содбзосоєс абсзатозає ссвосзосяо сонзасссоє 2о звідсасваа асогаєстао ссосаєссва садаосассє осукєтовеє кскосоєсіє 450 ссохвсасоц яксссстосо тозататета завосодасо сососоаєса тагсазезоє 5 аттсазвссяво актссадає туазастско сстозесдех зсодоєсася сстсссевоє Бо
Фасоїпоїоз соостоесоєс зосзассатоа зсестксоз ссавтнаває зсвоотає 5бО сасасзтасу зозатоанає сястоссаао дссаоєтасо задсоскеває тодосацаєс 720 тетосєвача стосоостаа ататсоссзи аосзкоєсої согтстесса пзасеєсвах тво зссасзава ссозоуієвЗ єдозваасоза зессоцсо сцааастота саосецеаає ай ааодпсодатї Ззсоатосєто достоасаєє пкодосасої стісєсаовкєє тобтоваєтех З детацдеєваси тісстатаєє дова знаєтвтоса задаєцаєос ссвоосозна зай авояїооаво ассзстатаз таатасотоо пссссососа аааославва досссаватє 2 їатоссоаєт ататсоасос яцісозадсо аїссаовота абссстсовюо бостсОсося 1О6о
Ксеня «Таспаавах сзаттасває стовасваво зсоссозсва зозстатає 140 тассжуєцет атсятазадс ссвттатвос дсуєастсво зазасаваца хе еЕ ї120о чЧчекттаатта гтзісааодо заасодвоса сососсссов осот акає оз товх Бо птодаєктоя атоводзатає зозтосвава таєстуєатх татостаєяя двазеваззє ї3хо таспасвата тодзаосваї сзаороосто осот єто огобтпасяя сесосатає що ссіцесссЄ лес тасся тсодастонс ассовієта зедайсоЗзас сао сово зо
Хасаїттата сстсетаєєс сазасодзасєх за ОУЖІ ев ІНД «Дії» о «ій» БІЛО | І «їїз втУЧчНа ПОСЛІДОВНІ ЄТЬ чикох м шо «ййЗ» вена не ва шавтеїщма «в У
Ме сує его ев а45о Ні Узі Ав ні бій ай іо Сеу аа бі его ї З чо 5
Те ще Ні ух Заг дви ТВг губ дій АВ ев Меє аг нія бій біо ре зх 30 я5а іби за! 515 Ага ту свв его ТУ Ма! Бім Уві хів біж ав Фу 15 а щ
ТуУуг Ава рго Не біб Ма! Тут АТа бег ТВг одер век уві Те оУаї бів 5 із вне да тгробій зго дід вго ес біз вго УВ: їв вве Аа Рг 55 МЕ У о
Аа оту" 112 Аіїз Рго уз йїа ма! Зек уві бів бій АБ вро бів іа й За 5
Акд туго тАР Ах ма! Заг с1уУ губ те їїе дБА Тег Бе сія ух дев 109 це 1 вна ек іеу ух Уа! Те тУаї зіа йіу баг ТуР Авп і ву вне бек бу з що 123
Баг чаї чес дей біб РМе бег Зак Баг бів ТК АРО Аєт АТ бід дей ї3о в 1 сі РБе бег ака тів бій бій б5ег її до Уяі Те оЗек бе дго їв 145 5 155 160 ів тус таг ахо Зег ве Ага бів Тут цу був яаїва Аз ж зго вар і145 17 з
Туг їі АБр чег тіе бій бек Ар Аа сій Ті бін іє сею Ре АБЮ
ЗО 185 ї98а
Ага ТУ бі. вег Ні5 РйЕ Кен тег б» жа! маї Меї біє сїу аїя я 195 що 205 її. ме кїа бек бЗег ТВг ахи зує УЇ сій Узі яжр Ні Те тує єї 21їо 215 220 8о дай Бін їйг її дія вух вій 5аЄ Тугб БНАТа Бе те Ту Бій тів з Кк 235 З ек Ата сїц Тс АТ АТа Бу ТУК вагу сії Зек Ме ЗЕ баб РН бер ях 250 255 бін йхп бек ало Хі ні бує тів жа! та Є біу ав сту У! Ав 700 «0 А чіт Аїа ух уві ТУук баг бі» 5 же Аза ар Бе вав АТЗ ткв Аа ва 5 ав не ма! Фіу тигоЗег вго АБО ОРАе уаі бр Ра мя аб овев Ущі 9 25 300
Бго мес ви Зі їі тер бів бе Суз цу5 ази Азо аа віп аа су 5 зай 315 За іч Мек бій АБО Тук Ту" АхвВ Ази Таб о Тгр АЛІ го Ага Був бек ух 325 330 Ба бів Аїа біп хів туг Аїз дер туг хів дер А1я Уа! бі уз! хіє бів з 345 350
Зег аа Зег баг Бі Уа! Аг его го Зееб біу ТУК Тнг озух тіж аз у 50 365
ТуУуг дв Беца зуб бі аі3 бі бу яв ТУ діє Туб рев Су тТук ї7О се ЗВО
Мія ух аіз вагу Тув зер АЗїя тує бек сів да мує жі Су Уві Бак 385 о зо5 я аероієн ті Тів їТі6 3у5 бі Аби біу вів Ага А РО Бек обім тує
Я А ща тйг рух ів Ар Уа! ар ев АБИ бід АВ Аа сім СТУ фу ту їв ау що БА
Тук їво Сує Туг цуб їух бів Явг тую Ар йхи Ма бів АВ хв мує «15 ЗО дах 5іу зей аїа чаї Узі біж біу АЕр о Ажи Бек нія ТВГ Бго Аа РгО туг 450 55 або
Зі туг аг го Сіє або тТвг дар Уа! аз б1ь біу ат бі Ф1У ців 5 я уз я тую лів тує хів его отут вер іух Бі АВ
В що хе ЗВ «ід НИЙ «ай вінЮк І «ії» штучна послідовність «веї» ШЩюосі«воіза щасіштна
Меї ух зве бе аеро нія Уа! Аїа ніх бій ахй цен ей Аа бій го ї 5 40 їй
ТвеРбоніз Ні5 рух бек АБАаА Твг суб аа Аа бер Мет асо нів бій бів 2 5 за аяп ви узі бів ага те се вро біу Узі бів уві хе Ту вів с1у 35 о ах
Тут АБП РгО РНе біУ уд! Тук Аїа 56 ТВг о аАБр обег ув! Твг Уві бів що 55 и
Бей ве Або ТР Вів ек аїа би его жіз Рг Маї ся Бе аа го то їх о
Ар тує Х16 АЇВ го буз аїв Ууді бек Уа) ій бій ай АВ бін вів 5 Б 5
АГО ТУБ Те дев Уа! Бек Є» фує твб тів аа ТР ОРНе стАй 1»в Ав що 105 що вне Бе ішиу вує Ущі тп Уві дів біу бек о тук ахп сви ва ще У
М 120 не «ве Уві Берг вазі бБіц вне Зег бер чего бів ТВе зе ап під бі ай о ну Ж бій бе его ага Ті біп бін Бек хів або Уя! Тир обеє сво ака его ї50 і-5 160 ія Ту та АкроБег це Аго іо ту їв суз аїа ах чаї аку ар 1655 що 175 тую тіє аби бек гів біп зег о а5р аа бів їі бій 016 бе) ве дер
ЗВО ве ЩО дга ук біУ бек ніж РВе ів ївк о ЄТУу Уві «ча ще бі оту діа дій 1 Зав ЗА тів мет аій 5ег ек ТВг АБ бує за! бій У ар нія ТВе тує 1
ІВ -ї5 ж дей цію Те о ї1е 813 бує АЇЗ Бег Ту бів біз Бей ТНК обі біл їв ве о 5 ЕВ ек АТа шію ТР АТ АТа Був Тук Ага бій Зєк Меї ЗБК БеЄ РНе дек заз 25 жа сів ай бек вер гів Мі гу« їі уві маї бі» й1У зр бі» Уві 813
БО 55 код
Є1х АТа гу Уві тує бак су вав У5 Аїа де Ре ав Аїа Те Аа
ТЕХ АТ 25 азр тт УЗ БіуУ ТВг обер Риб Азо Ра Уа! ахр РБе ма! Зег зек Ма о ах БІ
РО ек сви сіу 118 те бів вес бує кує Ахр яр Аа ів АВ вує
Зо 315 120 їУує Мах дії Або Ту Тук аАчи аха ТВ тр жій ро ага цу Бек бух 325 що іх си аїз бів Її Тук Аїв Ябе тує їіє хв аїз жа?! бін Уві щіє СТВ ї80 345 550 ег ап бек Баг бі уаї Аго Рго бо Бек о бїу Те те бує Ті ар
У БІ 305
ТУР а5Ю Бл: За ув біу йїд біУ сім д5р тує 116 тук ву Сує Ту
Зо РЕ 380 нів Був ат АНУ тує бек й ТУР Бак бі аби гу аа Суб Узі Бе 385 ше Зх я веровен тів їТ6 118 уз оіу Аби біу Аїа го Аа го Вер пу Ей
Ох що ІЗ
Тне цує Те йхор Уа? аБо ме аши бо дер ліз Е1у біб бух Ту еВ 320 Я2у СН
Тут іву Зег Туг ух ух бій чего тук др оахи чаї бій АЇа Те бух ги ящ- 445 біх жо Аіз Уа Уа! ої СТУ абр Аби его нів тве о Рго Аа го тує й 5 «50 біу ТУк аку Ако їі або Ти Ахв Узі Ам від бі Аз бік бу бів 465 ях 75 ще тТуг ще тує ї1те сСує туг хек іуб сту АТа
Я КО
«М» За «і БЮ
«кій» БіДОК Й І «війж штучна послі девВнІЄєть «ие шк М «аа3» Воно їай вам єцта «Я 38
Мет уз Баг ів а5рвонів УВІ дів нії бій аа іеб їв аа бів Рго їх жо 10 | Ка
Же ніх Ніз цу зве аби ТБ бух аз аа во Меб дра ніх б!» бі 20 25 30
Аа ге ча! біз гу тТуК во ре СТУ Ма! біб У! їі бі діа бу «а 45
Туг ап РгОо РНе б1у Уаї туго аїа Зек ТВ аБроег уУді те Уві іп хо 55 що іви вве азв Тер бів зев Аїй БгОо ее біз го Узі її БНЄ азп его 655 70 75 1)
Акротук лів Аа Рга бує АТЗ УЗ Зек Уві СТ бі" Ахв аєр ою АТа 85 зо св вга тує Те одеа уві Зеб оєту ух так о їте ази Так Рне бів був аз що І 195 це
НЕ Берг іен о їуб УЗ! ТВг о УЗіІ Аів сіу Бегб тує ажп Бец Ве Зег СТУ 115 КИ 125 бек уаі Зек Аза сіб Ре бек бег бег обі тВе ака аби АТа 51 Ав 335 МО бів вве зег ага їі біа бій Зеєе кіє або ча! Тгрозев сво аго цей
К 150 ння Ба аїа туК тв ар Баг сви Ага оіц тУК Бен вух Аїш АБроУаі Аго Ар 365 КЕ 175
Тут те або бег їв бій бЗег яхв дта бій їі бі 116 їм РНе Ар 180 Зах 330
Ага Тук піу бег ні Ре без твг сію Уа! Уві мех сім біу яЗа дів 155 зо зх їїе мет аїї бБбг бек Тнг Аха мує Ма? «ін Уа! Азр нта ТР ОтТуР Бін «о га Ой ах бій їнЕ 31 аз Су Ав бек тук БІ із вн оте біу бів Те 255 238 735 зай заго ай піс тТвгб олія Аз зуб Туг Ася бін бег Меб бек явг РВЕ бе в | 50 а бів дахи бек дер тіє нія і Ті6 Уущі Уві сб1уУ бу дев бі ма! ліз зво 65 У біт Ай Був уві Туг 5ег Фіу зр цух йяіа Яр Ре Аз Аїв тер Аа що Ве
Ав Те Узі біу тве бек Бко ар БНО Уа! Ав Бе Узі беє баг Уа 250 в 303
Бго Мет без біу Те НА ЄЇо сен Су» вух Або ар аа бів АТа сух в ЗІ 315 39 їуз Мет БІ Азр о туг тує АБА дБА ТИР о тгр о Аїв вго го Мух зег обу» яко КТ З бів Аїа бій їв Тук діа або тус тів ахо Аа Уа? бів Уаї їв бів о 345 ке
Бак ахн БЕ бек біу ма! Ага РРО БКО бек С1у Туг ТР Суб ХВ дер 155 360 165
Туг Абр це Абпоцує бін Аа б1У Ф1У ахо тую ЗІ Туг ев Суб тук мВ і 35 іа нНіз куз ліз ага тТуг заг дія Туг Зек біц дал вух дер век жа! Заг 385 39 з що
Авр цен лі ті лів суб БіУу а5п біу йіа аго вій вго Баг ТУ туг ях Я 5 їВг бух 16 ахр уві ар озсев аша бів азр Аа бі су фує ТуК веу що й СЕ
Тут іви Є Тук рує 1у5 бів чего тує ар ахя Уа! бів аа їв ув 415 лао 445 біт би ав Ма! Узі бБіх бір ар або Заг ні Тиг Бо Аїв бро тер
БІ, 455 БО бі Тук го аго їів або» їТвговзв Уа! ап бів бу АТа б1у бі у ях ато 475 «во
Тут хів туг Хі Суз тТук пек уз біж Ай
ЗВ Я
«аю «еаїв Ж «ке Білок . І «ВА» штучна послідовність ам ще : ке жхнізноЇїва мвагіхіва ен Я
МЕЖ Бу Бе ее ар оНіх УЗі їв ні біб аа Бе) се аби Об око ї у ій їх тнк нія нів вух Зег ден ТТГ 1к5 дід діа іви Меб ага ні бів щу я зх Зо деп кеи уаі сії ага туб кеш РРО біу уаі сів за? Кі б1у Аза їх 35 чо 4
Тк дей Бео РНе бі чаї ТУ аїВ чего так ав зв" Ма! Тве улі БВ
БІ їх іе їви ве дв їко бів бег Аїв бго 5егобій го уд)! Ї1е Рае д5п о рго 55 7 КБ Бо ар тує тів аїа РО ух АТ Уа! бек уаії сіб бій ап й5р сть дів 85 ще 5 ага тТуг Тег ап ма! бе 5іу хв тве Хе ап їйге Бе сів ух Аби щю що мо
Бе баг іви вме Уві Твг Узі АТ сТу бек тує Аа іво Ре бек ШУ 315 це 125
Зек уві его ащи 01 Ре бег 5Бе БВг б ТМг део аба АТЯ ОТ ай ї55 о піц вне 5ег Ага їі1в бій бій 5ег її Агд узі Тер оЗек сву АГРО сво 145 150 155 160
А1з ту Твг дев бее бе йга Бій тує сви їує аз вер У АгО Ар їБ55 170 175
Тук хів Ар бог їв бів бег аба Аїа бів 11 ів Ті рев біб дер ї8о ис ве
АгРО тує бБіж его ні: ве се тТнгоєту я! хаї мес біж біу Аза дів ї955 0 2 їів мек дій -вг Бак ТНе ай сух ЗІ бів Уві й НІ тТВРОТук СТИ а 215 М ачп бін тк Жхіе Аа вуз йій бЗег тУК бін аЇз цво Тв єїУ вія те ха КАТ в 290 ет АїВ Бій ТР оваіа АТВ Ух ТУуг АаКе вів Зек мої 5ег бо» ва Бек 74 25 дв сів адхн сег др ті ніх вує хів уз! узі су сіру двросту чаї Аа 2650 «5 и піу іа суб ув! Туг бег біу Ар обу Аа ав рве веб Аїа те АТ
КК «КО 85
Ар тАг Уа) біу тик БЕК вге азр вне Уві Бр рн ма Бек баг ув ше Щ що ню
Рг МеЄ ім біУу 16 тро біб ев о сСух іуз Азов яв Аа сів АТа вуз в що 5 Зо уже Ме біш АБ тує Тук йев АБа ТАК отгте аз Бге Агу був Бек бух 339 335 біз Аа бій їі тує Аїа дер отук Те Яр Аа уві сш Уа жів ов
Бе 345 350 бегоаза Зег зок бік Узі год бго вго зер обію тег тТагоцух хте ар
З о 365
Тут Ахв це Аж був сіє Ав бу біу аБй о Тук і Тук це) бас тук 37о яУх ЗНО ні Су Аїв аг Тук чего дія Туг бЗек бів йхо бу ах Су У! бек
З 390 5 ще вер сен її їіє тів бух б1У дян біу вії ага Аа РГО 5 Сію Ту
М що ч
ТНг Сез Тіє яз Уа! ав ішв аа біб аав вів іх біж їж тб Бей ей Б, я тут цей суб тує суб ув бів Бек тує дв ап Ма! бів аза же вух 435 я 545 бу ви лів УЗ! Уві СТУ бу Ар АБИ его Міа ТИ РРО ДІВ РКО Тут 4во біу туг аго АГО Хі ар о Твг дер ув! ха бів бік Аава сту сіу бів чо 470 5 «ВО тук тіє туг ІЗ Суз тТуг Баг вуз (ТУ Аа 55 кое «ше 81 «чЕві» 5 «вішк Білок . «13 втучна веслідовність «ех
«ааїх жевознеіївв чат ща «0» Я
МЕЖ (ух бек іє; йжо нія Ма! Аїд нів бів дев ів сен аей 1 Рг їі 5 16 ї5
Те ні ні рух Бе АБИ ТВг вух АТ авіа сви МЕб аго Ні бів 615 2 5 Б й«п їво уві бій Ага тує Свообго бу Уві біо Уді Тіз біж Аза у 15 о | а
Тут азп ВгО вне Бу ма! Тує дій его тб дяр о зеє ді ПР Оу ів 0 55 що ем вне ав тгр бів Зег АЇВ кго бек б'ю Бге чні ті6 Ре Аяв Бго та ЕІ І акр тує їі Аїд реє іже Аїд Уаї бег баї бій сій Аба ар отв йіа 85 о а аго Туг Твйг о дяв Маї бег сту Бує Твг іє ап тне Ре бій бує ащи 1 195 це вве 5ек веи уз Ууді ТВ Уа! дія бу бек Тук аяй цеу Ре Зег от,» 415 138 435 цщек уві бак аби би ве бег бек вт бію ТБР агуо а Аза ія Ази 130 1 о
Єіш вне хег Ако хів бів бій беє тів акб ма)! тер озек без Аг ву 145 ще 155 ЗБ
Аа тує таг о абробег гео Ако бів тТУК Бен огує із АВ мВ го дар 1655 1 в
Тут Іїе ар зег їі сій Бе дзв аїда вів її бін Хе ви вве ахр 180 з 190
Аго тує Сі бек Ні бе бе тк біу Уаї ма! чех бі чу аа Кіа 195 к аа
Ї1е мет аїв бек боб тТйУ жан гУх Уа! бів Узі вев ні їйг тує в 2130 ті жо ази бій ївг тів АїВ му Аа заг тжг Бі авіа сво те бі бів 16 аз 3 25 40 аг АТа бій тТве о Аіа АТа бує Тук ага бій бек Мег чер Бег Ве бат
КО м я пів ай Зек дя їів Нія ух їі баї Уді С1у 615 дер іх УЖ Аа -60 5 Кей ов аа УЗ УВІ ТУ ЗВГ бі вв су Ай АБО гне др АТа тер від 275 ЗО тн
Азр отВе УВІ біу Тйг обег рге АбБ ре ув) Ав о Рйе узі бек бек Уві ща 255 ЗО вго Меї гей Бі їі ТР о бїв без бек оїуУу5 зр ар діа бів Аа вує
З що 5 320 муз Меї бід а5р тує ТУуг Ап ази ТАК їго іа го агу бух сег ж 325 ЗО 335
Зів аїа бій їі тТуг АТа яАшр тує 318 АБО АВ ма бів Уа? Х1е сів я 85 КК
Бек АБИ Зег 5ег Ох Уа! АгО Бго РРО бЗег бу Ту Тнгоїух Щ1Є Ар 355 вІ 305
Тук ав во аби Ух біу ід Сію Сію Абротуг іє тує бен Сух тТув
ЗО 375 ЗБЕ
Мі5 ух іа АБО їмг Берг вій ТУг бЗег біб д5п губ яр Сує уяі бер 55 0 ж ай дере хів їі діє суб; діу дай бі ід аге АТЕ во Зег бі тує в ше З15
ТНК гує їі Ав» Уаї Ав бе Аби бів А5р аїа бу біУу ух Тук де ко цех Аза
Туг йви Суб Туг Бук бує бій вк тує Акродяи Узі бів АТа жів вух 435 440 45 сіу гео аіз ат Уа) бі біж Або Ал Зег НЯ ТВе оБго Аа РгО Тут 50 95 Я650 іт ТУР Ак АгО її Аве ТР АБо УТ вчи бів сім а1а Є1уУ віє бів о «УЗ «во тує жіє тжЕ жів Сух Туг бек ух біу дів 5 | 490 «яв Яд «із щю «дв БІЛОК еїї» штучна зебпідевнієсть «ей» Ве ВОїєа пабі
«ке Й
Меї ух ек іви Ар Ні Узі АТ ніє ІЙ Ап іен ів Яка біш вго
Її З 10 15
Твг щія Ні З Бек йди ТТГ губ Аїд Аа Сер мет ага Ні бів ст
Ко 25 зо
Авпобем щі Біб Ага тТук бер орго бвіу мі 5іш Уві хів сі вій єїу
Св 55
Тук ах РРО РНе Сіу Уаї Тут віз бек ТР оАО баг оуді ТАК оУДІ бій ке ВО івиц Ре дза То вів зЗек діа Бге Зек вів РО Уві їі впе дека вго щ 7 75 во дер тує Її Аїз РКО уз АЇа Узі бек уз! сій бій Аши Ав б. АТа
В БІВ 5 ага ТУЄ ТВ два Узі бвг обі бує ТВе Ті аха Твг о вБе бів рух дей що цк ЕЕ;
Ме баг це вух УВІ ТВг Уа! аїа бу 5ег Туг а5поіву вне зок бу 115 120 25
Бек Уді бег вай сій РБЄ бек бек бЗег іч ТНг оАго абха аа бій дв 130 М М
Зі РЕе чек зго Хі бів біп бек їТе го ба! їТгробек рен АГРО ви 145 150 155 160 кій тує ТВг авр о Зег ев аго ід їуг Бей уз АЛ1Я ар ув! аго ар і655 ув ї75
Тук Зв Аєр бюг уфе бів бер ахв ата бій їіе СТ Те ве» Ре дор і56 155 їз
Ага тер обіу чек ніє« Ре ви тик бу ма! Уві мех віх ші ата аїа 495 00 «Ох тів мес аіз бе бег тВг ами ув уаі біп чаї АєЮ Ні Є тТук Фр 210 Ії 270 ап сів їв ув АТа зу Аа бек Туг 916 аз се Ве біу бій їв ях іо 835 ай ек із бів твг о Аїа Аа г ує Туг йго бій бег Ве бег баг БВ: Бек ах 50 255 бБіп ап Заг аз Її ніх ся її уді уві Ст Ту дер у чаї діа «БО 205 ЖЕ
«і аа ту уві Тк бак СіУ в3ю їуб5 Аа ав вне Ач АЇВ Тгв Аа 75 28 ЯЗ ар їиг о Уаі сіу їве зев Бго ах ве узі Аяр ба У бек чек уд! юО 295 зо рго мех сем 1» Те МВ Є їеу Су цу АБО АЗр АТа вій Аа ух 305 З в Ем іт меж Сі: яр о тук тує дя ях Те тео вій вго ака уз зав ув 325 Зо 55 сів яв Бій Хі тує дія абр тує їв Ар одіз ув! б ма! Хе св
КЕ 435 ї50
Заг дп бок Бег бі Уа! АкпорРко вро 5ег бі тук тне бух ЇТе АБ 355 яв З
Тут Азов ів Аєп же біУу віз біу біж Або Тут ї1а Тук дво Суя ТУ шк 35 З ніх цух АЇв Агу Туг аг АТ. Тук баг бів Аза пух ар осСує чаї бег
З Зау шк дерівн лів ті Хі Куб біж АБа Сіб АїЗ Ага АЇЗ РРО Бак Бім тує кВ 416 5
Тиг іуз Хіе а5р о маї а5р беу ха бів а5р Аа сіу бік буя Тук бей
ЗО Як «30 тик цем сук тує їуУук вує бів Бег Тут ахр аяп Уві біб АЇз її вух 435 що 445 оіу їеи Аа Уаі чаї біуУ бі Ахр аби ет Ні тнг бго АТа вто тує 450 «55 Бо
О1У Туг аго Ага її а5р о їнК йбр Уа! Аза сій бу Ааїа біу Ту бі «55 БО ал «50
Ту ЖіЄ тТУуг ТІЄ Суб Тує БЕК Муз сїу АТа а що се ШЕ ВІ «аії» Я хиїки БІЛОК і й «ії» штучна послідовність «вах хакі» ОО ноїва мит нва «В» Я меє вує хег вес) ар нія маї Аа вів бій ай іо фу деп бів еко 1 і у 16 15
Тк ніз ні5 вує Зег азп їйу цух діа АТХ Бе мМеє Або Мні5 ія 15 аа 25 30
Аби цей уді біб аку їуб ву Бгто біу Уаї бів Уа?! 118 пі віз віх ї5 40 45 тТуг ази рго ре ЄТу ув! тТуг аїя Зег Твт ар озек баї ТР Ома! Її що 55 що сей РНе ар ТРе бів Жеб АТ. РРО чек бів бго баї Ті вне аби его 53 7 Тй во
Ахр Туг їів їй РО вуз віз маї 5ег уаї 5іп бів а5и др іш аа чи ч5 вага тує те аа Уві бег біу уз тВг о ї1е дей Те РНЄ бів Був АЗА
І 00 5 КК бе Бек рев ме Уа! тТвК ма? Ав бу баг тує яп ву Ве Беє сію зо 125
Зег чаї его аАбБя ОТО Ре Заг 5ег баг сів Те аг Ах діа ств ахи 130 135 1
Фіш вНе бек Аго 16 бів бів бБеб се Ат чаї ївробеє беу Агу ев 145 що 5 168
АЇш тує тк др бек гео АКБ Обі Тук іо зуб Аа ак м а Ав 165 170 їй
Тук її ар озек їжте сія бег дяр діа бій їі 16 тів ву Ба Абе
ЗО І85 Му
Ага ва боту Зек нів пе сво тТйг обі Уаі узі мех ох сії іа вів 195 200 205 їі мМеє іа бег бак ТИ АБИ ух Уа! бій Уа дор Ні тв тує СТВ 210 Ії КМ ази бі: ве її аа де іа бек ту Тв аа без о твнгРобїУ їн Зв «5 Ка «5 240
Зак аїа бів ТК АТя Аа вуз Тук вка вій Бек меж Бек Зак вве ЗЕк о 255 біп ай чего аее хів нів вує Ті узі ба! ім ср ав оту Уві вата я зх 270
Піх Аїд бух УВІ тТуб ее бту дей був аїї а5р рве Аср ліз тв Аз
ЕБЯ 2 285 ар Ве маї біб їйг его вго яхо Бе уаі а5р вве уд! бек жає ма шо 295 що вго мех їви біу Жіє Тк біш ев суб Куз Азр азр Аїа піз АТ Ск 105 1 їх 50 мук МОЖ Сію ар Туг ТУг Ал аАчп тТВе ткройіз БгРо АКо бує Баг гук 325 30 335 сім вів бів їі тує Аа Ар о Туг ті дер Аз Уа! біб Уа! Се бів
Зо 345 З
Заг ахй заг йег Ту Уа АКУ БО РРО Бег Є Туг ТНК буз 16 дяр 355 за 165 тує ар іш ази Куб діу АТа с1у біу аеро тує дів туб бви Су тук
ЗА 475 З нія їух Вів аб Тук баг іа Туг бег бу й5п цу Ахр бує чУці бос 385 390 395 що дарів іє ї16 їі бух бу дей сі дія Аг АЇВ РгОо бе СТУ Тук
Ох а щї5
ТВг Куб Ж1є АЗр ма! АБО Сеу Аза сій Ар оАїа бо1у БІ Ух Туг ву
БО 25 ря
Жук ви сСуз ТУР іїж5 рух бів бек тук дар ай Уа! іш лів І18 мо
З35 о ч45
СТУ гео Аа Уж! Уа б1у бі дер дав бек Ні Тве бо Аїа ВР ТУР 455 455 БО бу туб дго го ті йо тТпг о дзр уві ай бід бі Аза бі бу 1 485 37 Ка яко
Туг Жіе Туг їі Суб Тук бек гу іх Аа з 950 «ах я «ії» 0 «ай» БІНоК й «її» штучна песліданнтіств «220х ! «ййїх ово їеа щагтсїна кі» ай
Меї сує бак цец яр нія Уа! Аза ні біп АБ їеи йо Ап о бі6 вро 1 З 16 15
Тне ніз ніх уз бек ах Тит вуз віз АВ Бей меє агш нів бів ЄЮ то 5 з асп ви чаї Є) ага тує ев бе бі Уві Є1в Маї їі8 бі Аа Ту 35 ча ях
Тук аби ко РНе біУ Ма! туго дії Зек тТВК Ажробег ма! твгоУві! бів жо іжи Ре ав ото Зіп о Заг вів го бЗеб ТВ вгО УВІ ї1є ве аха вго 655 ТО йх ща ар тує їв а13 бро мує АЇЯ чаї бек уві ов Є1й ал вв Сів Аа й За 5
Ага тує ТНг ап Уві бек дію же Твг о фІіЄ аа ке о Рпе бій бух Аа
НЕ 15 зо
Ре Зег ін ії узі таб оуа! дів 5іх Зег тує дха ве) РНе ес Му 1 120 15 бег иа! бек ах" бі) РВЕ Бек хек вве бі ТР Аге Ап Аз бій АБ 130 135 1 бій Рие бее аг їте бій бій бек їі ака о Ууаі Тер о бег без аку во
ТЯ о ау 150 іа тує Таб де Щек цео АГРО СІШ ТУК рев ух йїа дв тат Аго АВ 185 170 5 тк їїе зо ее ЩТє сій Зег ахр аа бів 316 б1у 318 бу Бе АБ
Ко їз МО
Ага тує сі бає Ні Ре соц Тв обію уз! Уаї ме сі ші Аа віз 5 ОО ОКХ їТ1е Моє дія бек обег ТВг одяв бух Уа! біб жа? ар вів ТВготує в
Ка Кк ага ажп Фін Тве ЇХ АТ бух Ав Звг Тюр о ЄЇЬ вій без Твгобіу ба те ех зі їх рт
Зег аїа біз Тв" віз Аїд сує ук аку біб бег Мек бек 5ек Ре баг «85 що 255 біп'ази зек ар їі ніх уз Хі Уучі жа! біу біу ар обїу ув Аа 260 зв ий ет Ав. гук таї тут хан сіу аАжросує Аз аеро бін дко аа тв Ах вк го 285 дев Тиг жаї бі ТК Зек вка во спе Уаї а5в ве Уві Бак бак ді
З 25 за го меж їез біу Те Тїтв бію Без Суб фує зр Ар АЇа бій АЇВ у 05 З 315 ЗО уз меє їн а5р о тУк тТуг деп дп тйг тев аа Рг Аго цуб аб ув 325 З 335
Сію аїа ств сіє тує дів йазр о тТУук тів ах Ат жа! б шві їі сів
За 345 50 кг Авлп бег бег біу Уаї йго рке бео бег бту Тек отвг гує 318 яр 355 ї60 ІБ
Тугє йо це айви їж БіУ діа БУ Бі Ав тує тів тТук ви Суб Тук 370 195 ще
Ні: же Аа Ако тТук бег аіа тує бек бій Акп мен ар Су Уа! бек
З щю 5 КВ дер ви Те їі їв гук б1у ай бі АТа Ага дів вто ес бію Тур
Я05 Ся 15
ТТН вує Її АБО Уа або бер ай біз Ав аїа біт БУ був тТук зве 480 425 43
Тут сен Сух ту куя сув бів беб Туг ач Ай Уві біб Аїа їі сує я ОО й сіу їви АТа Узі Узі б1у ві ли Аа бог ніє Твговко їй ко тує яко 455 450 бі Тжг Ага Аг їв аАхр те йо У! яв бі Біб аїа бі оту бі 865 47 аТ5 «во
Жук Хі ТуР ЖТ6 Суя Тує ек Суб Ту Аа чаї чо «І» 45 «в» 90 «ік» віпек . й «8135 штучна послідовність «аа «ейі» Мові ноїва жагігіна «ай» 45 меб бух его гео дев нів чаї АТ нія бів дяки сер оїец ап бів еко ї в! їв їз тТвг нів Мія ув Бег а ці іп су
Ж ЕоЯ х ази їв Уа! біб аго тб се бго о1у жа! бів Уа лів бі віз с'оїу
Кі о я тут вай ве вне сіє Уа? тує АТа яае ТР Аве бег чаї те ув сти
ЩО зе вве Або То сій зег діа Бго 5еб Бі Рго Уві ХВ Ре АХА рт ва я М во аз тує їі аАїа ве гує АТа Уа беє Уві о1в бій азп а5р бів аа 55 БІВ СЕ
Аго ТУ ТВг два МИ бег БІУ Був Те діє два ТвеовнНе ба виб аа 0 105 Мо вйе заго їви бує узі Те о УЯ аія сі ЗР отує аяИ се) Ве бек БУ 315 а 125 щег уУуді Бег аци ОіШ Рв чего Баг бек ото тТАг ага Ап аа ів ай кВ 35 КВІЯ бін ре бек ака хів сій бій бек їТе АКо Узі Тер обегє цеу Ако ї ев 145 | 1538 5 ї6о
Аїв тує тАг Абр Зег сви АРО ОБ ТУК бен бух Аза вро! Аго дЗв 165 лев т тує тів азр Бе ків Бій Баг АБ АТа іп ті бів Ї1е Ббеу вне ахр 18 їв ї1о ага тут сім бек Ніх Рне сем те біу Узі У! Мет бїх 15 вата Аа 1955 700 205
Хі меї Аїа чег бек Те йби бує Уа! бін Уяа! азроніх тТйг тує бів 2 815 еко ап сін тб оті аїа зу да ЗевБ отубє ої аТа без Те єї й Ле ке юю «35 Ра его аїй сім тс вів Ав бух Туг ага бій ес мех Заг Зак вве 5ет ей | | я 255
Сів асп Бе? аб Те мія бу тів мат Уві су бі» Або бу Уаї йта
Бе ва ий
ЗіУу АВ вух У! тТуг бег бі дер іх Ай а5р Ре а5в бів їгр ав
Б 25 ях ар тнг уві бі» так хек реб дер вве ма! ахр ве уді 5еє как уві ва Коее за
Ре мет вер біж Хто то ст веб суб у або хр аа бів йія 5 05 зі З15 БУКВІ кує Мей бін дю Туг Туг Аєйп дпа Так оте аз бго вагову бат ує 35 з3а 315 ів аа біп лі тук а хр отук Гі ар ові ма біб жа жів пін
З 45 БЕ цер ажа Бег вт бі Узі Аг го бго бЗев су їж ТВК бує Те дяв ї33 їБо З65
ЧТук Аво се дей був біу АЇа ві б1у АБр о Тке ЖІ1е Тук вен о Сух Тук 320 395 З8о із уз аїяа дк ТУуК бек Аїа же бек 01 Аа Суб ав Кує УЗ! бог зв ЗО 55 ЩЕ яви жи жів жів тів сеу біу лей т» Аїа йго Аа Рг ваг сту тУг
СІ: о 15 тнг Кух їТе азр ув! Ар ер Аа сів йзр АТа ім б1у су Тут ев о 25 «3 тТУК це су Туг суб гію бій бек Туг ар ах Узі іш Аїа їі Бу
Ж а іх бі іви дів Узі Уа! БІ біу яр оахй заг нія їйг вто АТа вго туг
Я ше яка біу Тук го ак тіє АБротнк АБВ УЖ! АБа бін 51у Аїа бу БЖ БВ о що ж чо ту жів ТУ Кі Сує тук бак гсу« С1уУ АТ «МЕ Яй «ее 90 «ія» БІЛОК й Ї «13» штучна послідовність «кві» оса поіва тагістяа нюх 45 мес с ує зак ів ар нів узі із нія бїз аби ев без Аа ІВ ВгО ї 5 чо ї5 те нів ні буз бек ач тео їуз Аза Аїд Бей Меб го нія бів сої ко 5 зо дха сви Уа! сів або Ту єв Бе біу Узі біб Уа! ї1Те бї» Аїа у 35 о 45
Тув дя вго Ре сію у! тук діа бе ТЕГ яв бек узі те Уві ст 50 55 її іву пе ар тго бій 5ег діз го ЗВГ оо орто жаі її Не аа го 55 т НЕ що
АвзротТув Хі6 Аа бго їу5 аїв Уві Кег уві бій бів аа йзрв бів іа к5 що 5 ага тук те аа Уді чек бі вух ТР їТе лай Те вне ста ух Ан що 305 мо
НЕ бек се) уз хаї тйг Уві аТа оту его тує дл сво бе зег шу 115 о 125
Бек У! Щек Ав бі РВЕ Бек Бек бак пт тек вс вка іа Ві ви 130 135 135 іш РН ЗвР ака тів Бій бій бег тів ака жа! ТО его ака сво 45 150 455 ї65а із тує Тнг кв чег сей до ст тує сен кує аа ар ота! аг Ар 165 175 15
Тук Хі вав бег хів сія бег або АТ бій ї1е бів тів ву Рвйе вяр 15 485 130 ага Тук біу Бак нів рве реу їВг обі мат Уа! Ме бі бі» АТя Аа 195 аю 205 її мех кі Зве его тйг й вує ма цій Уа дев нія Те тує ст 2ї5 Р
Аа сів те іє жів вує Її бек тує БІБ ліва йо тв ТУ 1 тів
І 230 КЕ я
С ек Аа ОТ) Те 51З Аа вує ТУуЄ АгО біб бег ет чек баг ве Бак 245 230 255 сів ази Зег ав зів міх ух Жів ма! Узі бі біу вав бі Уві АТя
ЗВ 255 зл ої АТЗ рух Уа! Туг Зак бі ар ку Аа АВ вне лавр вів Тр а
ЖК 2850 «85 дзр їнк чаї бу тве бек Бго Ахв Ре ма! акр Бе Ууді баб баг Уві
БО ше що во вес зем оіу їі Тер біс вен суб вух АБ вер ав йіп аля су 05 БЕК 35 320
Буз МОХ сію Ахо тує ТЖжг дей дБА їйк тро АЇа РРО Ага Був Бак гук
ЗА Зо БІ іш аза бів їі туг аа й5р о Туг їв АЗр АВ Ма бів узі жів бів зо 35 в) его азп Бек его сію Уві ко вго го ес бір Туг Твгеогує 016 вер 55 о Я
Туг йєв іні ап уз бі йіз 5іУ Біб я55р о тТУуК 316 ТУуК ву бек тує
Б З 5 ніх су5 АЇВ АгУ Тук бег ай Тур 5ег біо дл був ав Сух Увї бек ї85 Б зх ЕЕ дер меч їі їїТе ї15 ух біу А5п обі Аа АгО АВ РГО Жак обу ту
БІБ о | 5
Тйг ву їі в5о Уа Ар оіви ав сі во АТЯ О1У БУ гу Ту ву 420 425 чо
Тут ви Суз Туг вуз ух біп бЗег тук ар азп уві бін Аїз іє ух 435 | я 45
Фі бе АТа тУаї УВІ іЖ бі Або дев бек нів їВг рго Ааїв го тер я5о 455 450 бі тут Ага АК 118 Ав ТР Аяй Узі Ай ТВ СТУ аїа у СТУ ТЬ 4655 СК 475 Зако
Туг Щі Туг її 5ег Тук 5ег цує бу дів ч45 о «аю» У «ай» 90 «вій» БІЛОК й І «й» штучна песвідсвність «веб» І й «иаї» Мообавоїеа вагіна «ще У
Мет Еш Зег осв дяв Ні УЗ! АЇЗ нія іп Аа гео бе дев оБію ге ї 5 10 15
ТвР о нів Ніб фує бЗег АБИ Тйг уз Ааїя Аїа мес мех Ако ніх бів б1ц зо ан їв Уві бір ко тує сей вро сіб УВІ біз Узі ів бі Аїя іх ї5 40 5 туг АБИ РКО РВЕ сте та! Тук АТа бек о тиг ойахр Бак Уві Твг о УВї Ля з ха я івеу вве ащ Тер обіва 5еб АТ вро Зее Біб вго узі їі Ре Ази бго 55 то тя Зо акй ТУ" її аіз вто су Аа жаї Беб оуді ба бія й во 1 Аа о 5 дра тує тат дув Уві его ст Був тие сів дев тТве вва іп вже ей що ВЕ ЕК
РНе зе сви уз маї ТВР жа! вів б1у Зег тує ахй сво Не Зег в1у ня: 120 125 бек ма! бЗае ан бій Рв баб бек бек Бій ТйР Ага ай АТа би АХА 5 140
ЄіЧ ейе бак Ак тів бін бій бек її ака ув! Тер бек сео Ага во їх ії ї55 1650
Віз тує ТР Ах ер сви Аго БІ ТУ Бе бує від йбр чаї Ага яр їв мий 75 тує їі взр черг їі бій бЗег азе йіз бій Кв бін жів їв Ве Ар
ЗО 15 ЕІ йга тжг обі бег нії Ре ви Тег обі УТ Узі мМеб бї» БіУ із аа 5 200 Ба ті має АЇя Зак бек Тв йап був уді сів У! аеро ні так тує єн за 5 а ап ОТ ТВе сіє аа вуз аїа 5ег те бів а! гео таб бу бій 16 зах 230 ії --О «аг Аа єї ТВ Аа АТаА Су ТуК ве бів Зак Меж чек бек Рів Зеє га5 30 а
ЗіпоА5и Бек ази ї1е о ніб вуз х1іе уаі Уаї Щ1у бі Азро бу жаї аа з ТБ Ж «У АТа ух Маї тує бек бїу вер бух Аа АВ вне а5в Аїд ТРИ Аа й о Б дев'Тве Узі бі Таг щеб рто дер о бйе УДі Ар ове Уа Бег Бек чаї що 5 ЗО
Без Меї іви бі іє тв осо ев Субх бух азр азв аа бій іа І Е
ЗО о 315 32 їує мех бі аАхр Тук Туг аз АБА ТАК ТрРО Ааїя вБРО дво був Баг Ку 30 35 іш аіа іп сіє тує вів Азротує їі аз АТ Уа! ої ма! те бий
Б 345 356 ак аши Заг дев бію уд ага во вго бек Є1у Тук Тк гра жа ЖеВ 35 з 365
Ху аж во єв сив біУу віз біУ бім АБИ Туг тів Ту ва Суб Тур зле 375 ЗВО ніз уз А1я аг їуг бЗег віз тує Зве ші аза вух азросСує Уаї ек зх 590 395 що даероьни жхіє ті ті бує Єіу щи сі віз агу аів Бге его бі тет 05 БИ 15
Те ух їТе або уаії дер сви А біз аз аа бі бу бу туб ви 420 5 мо
Ту ів бек Туг суб су БІВ б5ег Туг аа ва УЗІ СіІ Та тт фу 435 440 4: сЗіу бе: аїв уд ві бік біу йзроаяп Бег омів твгокеє Та вто Тур 50 455 чо ді ТУ ага аг сіє 45о ТНР АБО УВІ Аби вів РУ аа бу ТУ сь
Я а с ЗМ 45
Ту жі тує Х16 Зег о туб Чеб гу сію й 485 о «вай ЯК «Ріів Ой «ії» Біо . й «ії» штучна послідовність «ЖЯї» зееб5ноїез вагіт «во» В
Мет вує БЕК без дя нів Уві Аїа нів біп ай во ей аа бі во ї 5 30 ЖЕ
Тнг нів нів ще зег ди їНгосух а1а АТа Бен о меї дго міх свй 19 2 5 За ва вен уаї ів Ага Туг вва БР бі Уа! біб та тіє ТК АТ Оу | ча 45 тТуг ап орга вве сім Уві тугоаід Зег о твг о абБр зве жа! ве мя бів в що іви не а:о тго бій Зег аіа Ре бак бів Ро Уві Же ве аби во 5 ТО 5 во ар тУг тів ів вБгОо Су5 АТа чаї Звг оУаї вів біз Аба вн о БіЗ аа я що СВ ага тує тк аби ді бек бТу цує ТР тів а5й тнг о вве бій бе дяв 106 15 ча
Не бек іво сцуБ Уві те Уві Аз єТу Бек Тук а5в ви ве баб сту її135 о 325 ет уаї Зек АБ бі РНЄ Бек бер ек сію твгоаго аб АТа біб ап 136 ча 140
Фі вне чего ака лів бів бій Зег хі АР Уа! тТеробек ве; аго се 345 35 АХ КЕ іа тує Тк аБрозек ге) АгУ Зі тує сей буб5 аа а5р Узі го ар 155 170 їх
Тут її або бБег ів Бій бег аєв із бів гів біб (16 сви іні ар 150 15 з дра ТУук бі век ніх бе гей тТиР обі маї Уаї меб ої ТУ вія Аа 195 ри, 205
Ків Мої ді его Зеє тнгоавия уз УЗ! ой Узі або нів Те тує 1 кати 15 ве
Аа бів тег оїіє аїз вує Аа бек ту бі: Аза без тв Ту вій же
З ки КІ ве чек авіа бі Тнг о аїа Аа бує Тук аго бів чер має бег бак вве бок ях «50 я55 зЗіп ази бек ар щі нія вух лів Уа! а б1у Бу аяв сту жаї АВ я 5 лі
ОІЖ АВ цу фаі Ту Бек СТУ ар бух аа а бе дев АтТа тТРр АТа
ВЕТО вк, ав Тиг Узі сік тагобеє РгОо АхЮ Ве уві Абв вве Уа! Заг ее Узі ща Кох щЮ бго мес ме бБіж ЇЇс Теробів ем Суб їуз аз Абр АТа са із Був по КК 335 КН їу5 меж біб Абротує Туб аа Аа ТВк тер оаїа РКО АР Бу Бак рух 355 З 35 біз Аїз Бім 16 Тук ій Аяр Туг її хр аз чаї бів ма! Же бів 340 з45 Зо зег ди заг о5еє Бі чаї ага РК бго Зеб об1У тує Ве був 16 а5о
Б 365
Туг Аяр цем аби уз бік АТа бі1ж Фу зр тує Ії Туг цем Кув Тук 30 75 зно
Ні ук АТЯ АР ТУР бег АТ Тук бег бів аа гу а5р баг маї Бог
КВ о ї955 щю а5в іви хІїе Ті їв зуб іх дб біу аїа ага яїва Вга бЗвк обі тує ве с ж СД | Зх
Таг бух тів Азо ха! або Бец яви біб азроаїв бік біу руб тує во що чаї а
Тут ів Зегк Тук вух руб біп Зегк о тТуг а5р ай У! сів аіа тів їжз я 40 445
Єіу ви аа Уві Уаї сі біб ар дяк бак мі ТвБ бво Аїд б тую о 455 Я
Сі тує ага Аг їв ах ве Аве жав ви біб сту АтТа У віх сів 55 СВ їх ЯКО
Ту Гута тТук Її Су Туг Бег Су сіу дів 48х що ам Я «вів ЧО «212» БІЛОК й І «ії» штучна песлідевність «ве ще ! квеї» щоб щас ав «в 45 мех уз Зег сви йзр нів маї Ага нія бій ай ей сеї пз бій бго ї 5 1 ї5
Те нія ія фу бек йза їВк су аїа Та гер веб ага нія Бія б
Кк за
Ахп іви ма? біш аву ук сви Рго б1у уві бів Узі хів су вів Ту 315 ча 45
Тук аяи Рг ве бу Уа! Туг АТЗ бек ТР дер дек Уа тТнК У ота 50 за ї
Мви НЕ дер Тгр бів Зег Аїа вгб бек бін го ба! пре пе аби его ї5б То т Що азр Тугк їіє АЇа Рг Суб АТа чаї Зак заї бій» бів ап АБО т вів ях БІВ Зк ага тує тег о ахй Уа! Жег обі вух ївг її ази ТР овве бів вк дей ще їх що вне ак сен буз Уаі їйг Уа Аза сту Зеб тує дп їв вва бат щу 1-0 125
Зег Уа ек а їв вБВе бек бек Баеб бі твг ода ази аз бі аа ї30 135 135 бій ве бек Аго 112 бій бій бек ї1іє Ага ува! тТго бек сви АгРО Сей 145 що на ї6о
АЇв туг Те дар бек бен АКО іш Туг цею був Аїа Ар Угі Ага кер а ТО 175 тТук їі Або Бек 118 бій зег ав діа Є 118 бів Тіє ев Ріе дев 188 385 190 ага тук біу бек Ні Раб сен тн б1ж уві Уві мех бі біж дія віз 135 ОВ З ті: мех Аїа чек Бак ТВ Ах У УЖ бій за! ав ніє Те Тк оБтй 210 215 220 ай бів те жів Ааїв Кук Аїа чес оту 01» аїа вен о тве бтУ БІ гів ах 30 «35 ча
Зег бів бій тйг АТЗ аа уз Туг Агу бій бек Меї бег Бек рве 5ег 245 Ж жу сій ан ес вав 11е ніх кує Хв Уа ма! Ту Ту авробту ма! Аа «ЩО тах ет сі Аів су УЯІ тує єв ОКУ вхр гу Аа ар вве зв? АївВ те аа.
ЕВ «8 вся ве ійг уві оїу гг озвг кто аа Ре Узі аб вне мі зек зе жд а а З0ю вгО Ме сао бі ків тт бів ев Суб су вв йазо аа бів АВ уз 305 Зо Зх 320 іуб Мей бій А5ротує Тук деп ап так тер жі еко деа БУ веб бух 35 ЗО 335 бів аів ців ків тує віх ар тує іє ахр Аїа та! бів жа! ків бів 34 ща 350
Зак ази чек бек біу ча! Ага Бкео Бгто бек біу Тук Тве ух Її дев 355 ЗО 365
ТУуг дер іен яп ух бі йаіз бі біу ав ТУ Ті туго сей Сує тує
БЖ у і ЗВО ніх бує Аїа ака тує бег Аа Тук бек бів аби цує дбр бек уаї 5ег
Зх ше 35 чав дв вен ї12 ЖІЄ 116 уз сі А5а біу Аза ага ад Бко ве діє тує ях ща 5
ТНг іл ї1е ар Уа! Ар сен аби бів др аа бію о1у вує Тут ву 4-й с а
Тут ай суб туго губ фу бій Бек ТуК др аши уд! бів Ааїз 51 Кує ач 445 су без аїн узі та! б1у бі а5роабп ес нія те оРго Аїа Рго тує
ОТО 535 ню сіу Туг ага Аг Її хо Тег ав уві Аза іш бі Аа оту су 6 465 «7 Я. а8о тує жів Ту хів бак Тук ак зу Бі Аа
Ян5 що ша З. «ем «вах БІЛЮК «135 штучна послідовність «кто» иа ще «сеї ОВО іва пагтітща «Ох що
Мет мех Зег без азроніз уві Аа нів бій а кео мен ах шін РгО ї Я їз 15
ТвЕ нів ніх кує зак ай Твг осух АТа аа їео меє ака ні б ОТ я 25 за ап ем Уа! бі аАко Тугб ів вто біж уві б» уаї дте біу вата у я | 45
Туг ан Бго ве сію Уві туг аів щак тТйкК або зЗегб у тат Уа ств
Ба Б 5 вен РМе або Тр обі бек ід Ро бек дію вго Уді Щі пе вай Ко во в ї5 Бо ав ТУ" іє Аа РРО БУ5 АТа Уа ек Уа! Бій вія зи дей їн Аа 85 що щ
АБУ туго їз аби та 5еб бік рух тег жів ахи ТР вве вій ух Ах 00 м а вне Бек івю Суз Уа! Те чаї Аїа СТУ бек тТуг АБа їв) РНе Бек Фу
Же їх ке квг омаї бег да бій РВе бек бек бек бі) Тк ака аби аа СТО Ах 1 ще 40 бі ке бЗег аго їТе біп бій зес тів АгО Уа тео бер бе ага ви їх 150 Ма що дій тує їнт абб Заг ів Ага бів ТУР ев Без ав ав У 208 кар їБ5 ЕЖ ке
Туг Ків ар бек їів бій Зак дво Аїз бів лів бів тів геб вве ар
ЕН їй5 19 аг тус б1іу черг Ніє вне ген тниго сію уУаі Узі мех бі Ту аа Аїд 1 ІК 205 їі мет АЇЗ баг бек тТнг одн суб Уві бів чаї взронів те отує бю
Ів їх -О ве ім ТАК Оті аїз вуз АТ бег тук бів аз ви тк обіу Бій ще 225 я 235 248 чег АТа бір ТБ АТа а1а цує Туг алго бій Бех Ммеє баб зЗеє вве ес 250 в сів Ази бег Азов І Ні суб Її6 Ма! Ві бі біу яв с1У заї Аа
БО -3 то сі Аїя бук ді Ту бек бу йср гу Аїв АФ) Вб а5в Аа Тева Тя ях зай з ай ВР Уві бі ВК бек РКО аз Бе узі зв гне уаї зек бек чаї 290 9 ще
Бго Ммеб сво Оу ЇтТе теробїь вен Суб тує або Ав ад бів дія Був 305 зо 315 ЕІ уз Мет біб ажо Туг їТуг жа ап Те їге вія ве АгРО вух Зв ж 325 о Зах сі аїа бів жіє туг Аія Азротує тів а5р одіж маі бів уві їіє бів
ЗО 45 тю бек Аа чек бе г Бі. Уві аг го Рео Чек БІК Тує ТНК був Хі ав 55 ЗО 355 тує ар сво АБИ уз сту Аа сту сту йар тує іє Туг вен век тук
ЗО 375 що
Між був АТа йго тТуг бег АТа тує бек бів Ав Суб йзросСує тд век 3855 ЗО 355 що ва мезц хів тів ї1Є Куб бі ах Ср Ата Аг ад вро баб обі тує ча5 41 415
Тне Був іє д5о уд! дхр Бей йха бін й5в Аа 1 СТУ їу5 ТУР ви
БЖ 525 338 їуг ев баг Туг сує уз бій зег туг або ази Уа! ої: АТа те гу 35 Бек 45 сіу ви аїв Ууаії Уа! біу бу хв ап Бег Ні тв его ява во тТук
Я Я сім Тук ага ака сів Або вк оахо чаї ав бів у аа обі бі би ав5 50 Я 80
Тут те тує Кі бат тУК бек бух біу АТа щ 490 «ж ЛЕ «ее 9 «їй» БІЛОК й «йКае штучна посада єть «ев» «веж МООСеЙОіва вагітна «Не 5
Ме кує дек їжи АБр нія Уві Аа Ні вія Аха ії ви да бів БО ї 5 їй 15
ТНг ніб Нія св бег акп ТНгоїуз діа Аїй сви бек аг мі бій б го Я БІ вай ев зи! біб Ага Туб вн бо ої Ууді бТЮ У 316 ТУ аа віх «О ЕЯ
Туг аби вге Бе біу Уаі тТуг Аїа щек те дер бег Уді тТвгРоУаЕ св 5 о ій Ре дев ТрРр осів ев ата го 5еР іо го шаї хів Вб вяй его 55 7 75 че дБ Тут їіЄє Аїя Рго ух йіа ді бек Уа! бій бів два ар о дія
Я І 5 аг отже твйг ази Бі бег біу вже твг о ЖТЄ а ТНг о Рйе Оп уз Ай
ЕІ КІ 10
Рве 5ев ів бух Узі тТве УБЕ дів СТУ 5еб о тТук дев ба) Ре зак шу
МК ко ЖЕ чег уді бек ап бів Ре зег бек бек Бі їНг Аго ази АТа 1) дей 130 15 16
Бі бе бе Ага їі бій бів бек ІТ йга ча? Ткровек веб ага ев 145 ї5О 155 КЕ
Вій Туг так ахр Зек се Ако би Тег гей си Авя Аев Уа вро АВ
ТУР їїе або ЗаБ їі бій бег яр о аїа б фе бів їі бво ве й5р що 185 що
Аго тУг бі ВГ Ні РЕ рен тн бі ма? УшІ МеЄ Єсту БРуУ Аїа хів 195 м М
ІТє меж 818 бег цег так азп суб Уві бій ма або мія тТвк тує 516
ОО ка жк дан бів так хів Та іде Аа хаб ту шій аз аб тк біб бій хте
ЕК ше 2 | я -ег АЇа бішШ тпговіз АТа Ку Ту дгО бій Зег мес бегб беє вне бет в «50 5 бів ап бек аор діє ніз (уз лів Уа! УЗ їх Біб Аж бі жа Аа 25 а 77о
У Аа у ма! тує бер біУу аср був АТа АФ Ра. Асв Аїд ТРО ДІВ
Кк ВО Мас дер о твпг Уа! ші тік бак обго АБО» Бе уаї Ашщо Ріо маї бБег Бек Уді 295 ЗО
Рг меж ем с1У 516 їтр Бій см Бек уз ав мав ай сів Аїд вух
КІ ЗО З ії20 уз Мет бі) Аз Тук Туг аби яви ТВ ТР дія Рго аго Бу Бек Був ях З 315 ів АЇа сій лів туб ліз я ТУуК гів зр Аа Уа вів маї їіє бій о 345 з5О бБег азп о Зес беє Фіу та! Ага кро Бго Зегобіу туго так вуз Те дер
Т55 Зо 155
Тук в5в ів дян уз Сіу діз сіу сію йбр тує ї1е Туг ву баг тує кВ 375. ЕН ніх іже Аа го тує баб аа Ту" Зег бій дев суб дяр бек ма хев зав нин за5 В дев іви ї1е Хі5 їїе бу5 біу Аа О1У Аа Ако Аїа Бгто бек біюк ту ко ЧІ
Твг бух Кі аз УЯі яр обею авя сіз бр оаза біу ТУ ву туго ев я Б
Туг ів бек Туг був ух бін бег Ту" Ар Ай Уві бів Аїа тів ух
Бе в
Зіу ев аа Узі у! бі бі йхр да бегонії Твг о вго Аз вва тує 450 455 Я
Сі тує заго ага лів Або Тк дер узі ази Бі Бі Ата б1У У Є 405 а щ5 я тує ЖІ ТУуг Хе бег о Туг бег рух Зіу вів
ВУ ща «а и, «ін 490 кейс» БІЛОК І «А» штучна послідовність «2205 . ще каййх Мосізноїва вага «во 5
Меї іу5 баг оієй або ні ма! Аз Ні й ай сСео бен ди б го ї 5 їй 15
Тег нів ні іуя бек Ач тб обу АТя аій реви Мек аг нів ій бі що 5 о
АБ вен УВІ СІВ агу тук без ге сі Уві сти Уа! ї12 їх Аз су 5 аа йо
Туг ав вро РВе біу уд! тек дії чек Тахо бек уді Те жа! бій з 55 БИ ів Рре Ар Ттробій бог Ав вко бег бів бо уві тів бе Абпорго то мк во авр тук жів Аів РгО ух АТа Ма! Бек жа! бів сій аа Азр її АТ ях | що з5 аг тує ТК аби Уді баг біу бух тВкЕ тів аж тБг о РНе бій Бук ахи ще Зх МО вве бет іву Су Узі їйг Уа! дія бію бЗеготТук абп о бво пе Зег Оу 115 30 125
Заг уд! Зег Ази біз Ре Заг бек бег б! тТЕг аг АБИ АТ Оіш Аж 30 155 180 сіб ввйе заг ага їі сій біп бек хів Аг ча! тт Бек рем Аго ки 165 155 155 160 аїа тТук ТВг а5р чех їву АКО біч Туг бен суб АЇЯ Ар Узі ага Ар 470 155
Тує ів або хег їі бій 5еб дк аз вій тів єї: ї1е бец рве ар
ЗВО ї85 ЕВ
Ага тУуК діу бек мія Ре беу тик обі Уві чаї мес су Ффіж аїз аа 195 ЦО «5
Хі мет ліз бек бак Твг дев бує Уаї Бі Узі дер ом ТВ тує Св 210 215 тей дей бів ТВ їіє Аїа су аїа ег тк Бій ай цен те оту бій хе 245 30 235 230
Заг аа бій таб оаїа дія зуб Туг ага бій бЗеб мет бег бек ває Баг 245 250 235 бів язп Зак й5р їі ні уз Хі уяі ві бік сію аз сіж Щі Ала
ЗБ 255 27а су Аїа гук Уа! Туг бек сіу йер іт Аа Ар о Рне ар АЇЗ тер вів 275 ай 285 ар тнг УВІ Оу твгоЗев го ахроБйе уві дяр пе УВІ Зег ЕК Уа 290 що БО веб має се) бтУ 15 тре бів ев сСув ув авр лав АТ сів АТ вух 305 Ея ЕВ її З ке Ме 10 Ар ТУ ТуУуг дк АБА ТНК оТгтв Аз ВРУ АКО був бБет вже зах З Й З бів тн біп їіє тує 8із бро ту ї1е а5р аа Уві бів Уві ті6 бів зав 345 356 бек ахп бег бег біу Уа! Аго вго го 5ег сіу Туг ТНговув їТе яр 355 Зо 3655
Туг др це Ап бух Бі Аіз бі бі йБр о тТуУуг їі Туг бе Аа тТУг
ЗУ 375 ЗВО ніх їм аіз аго ту зак А ТУ Бек Біб йБи Бу бр осух маї Зак 385 юю З що дер мен тів їі Зі ух бі Або су Аа Аго АТа РгОо Заг ді Тук 05 що 415 твгобуз Се лЕв Уі Ар сво ап бів Ар аа оту бі вує тТук Се 42 ав що
Туг ми Сує Туг о Буб руб біп зер тує дер ап уд! бів Аїа її ух іх щ-о ях сіу ев йаіа чаї Уа! бі біу дер аєп бег Ні ТВгоБео Аїд Рг тує 0 455 як біб Тук Ага Аго З16 Ар ТР яр Уві ав сів біУ ія ТУ Б1У я65 47 а25 480
Тже ТТе Туг Тіє від тк Бек ку зіж дз 485 щЮ «ій» 53 «гії» 495 «32» БІЛОК «33» шщтучна послідовність «ТВО» ше с, «ееі» жоОой5поев щатіктта «нюх 33
МеЄ бух бек іву АВ Ні УЯі йід Ні бій 650 ев сей ан ой реа 4 5 10 ї5 їйге ніх Мія бух баг аби твг обу іа дів цео Меї ага нів бій оо о 5 зе дзп бен Узі іш аку ТУР осв Рго бу Уві 5Т) Уа! ті бу АТа бу в 4
Ту дав га Ра сію Уві ТУє із бБеєб Те ве бе Уві Тк Узі Ба о 55 5 йо ве хр тер шій баг о йія го бег бій вго ма! Хі Ре дзи рга ща о 75 що азо Ту" жів вія вго уз АТа УВІ чем узі ба бій аб Авр бів Аа
Б | ща І
АгО Туг Тйг два Уа Бек су у Тек тів дп тТйР вне бій вує Аки 100 105 Мо
Ре бек ен уз уді тв Уа Аа біу бег туг ав ін вне бек пу 115 ще 3125
Бек уві Бек ан бій Ре бек бек бек бій ТйгР АР аби Ата бів ай
ЖО 135 15 біз ве Зег Ага їі бів бій бег ї18 ага ча! Тго его вен АгО ву 145 150 155 166 аїя тує твг й; Зек ве ака бій туг ев суз АТа ар а! ага яр 05 в | 5 тТуг їіе АчЮ Бег їі бів 5ег дяр аа бій ї1е бі: їТе мен вве вх 356 Ех 130
Аг ТУР сіу беконі Ре бео ївВК обі Уді ма! мех оіу біж Аїд Аа ве в Ка їЇТе Мої Аа бБег бек Твг ах був Уяі бій маї дер Ні ТЯР оту БЮ ій 2і5 р азп сїн тТвг Хіе АТї вує Аїа бБег Туг бів аїа беу тб біу бій 16 225 230 235 зай
Бек АТа Ти тве Аїа із уз тт АБО бій ек Ме ве бек РНЕ ет 5 щук біп Аби чего Або Іі Міє йУу5 їїТв Уві! чаї бі» бі ар бі Узі віз
ВО НЕ: о
ФУ Ай уз уві туг Зек біуУ а5рогуз аа ар вйе азроАЇВ тив АТа
Беж «ОЇ ях
АБротТНе уд! бі Тйг бак бо дб рве уй! Я5О бе ді Бек бак чаї
Ю 3 | ЗО
Бко мет іви біу їі Тер обію і2ги Суз у йахв аяв аїа бів Аа ув
Зах 315 315 що
Вуз Ме біо Ав о Тук Тук ви лаяв отв тер о аїв ко йге уз БЕК ув 325 Ка 335 бій АТа сів ті тує аїд А5ротує тів аеройів Уві біз ма! жів ей зо з 350
5еР а5а бек Заг бі щі Ага вро бо баг оту тує тик ів 16 ав 355 за 365 туга ів Ав іуз БІіу Аїза щіУ біу Абр о тТук тів Тук беу Сух тТук з 5 о
Міє вує аз ага тує Баг аїа Тур бек біб Ап гує ав Аа ма! зве
ТБ. 90 Зо що ав ів її її їі суб бі ах БУ діа АГРО Віа ро Бак Бі тук я ака тТнг ув тів Ар УЗ! АБ Бер азп бін азе АВ біУ Бі сух Тук беу я що я тує кечцу су тТуг су Би бів беє ТУ аАВр ав ча! бів ав 16 бух 435 40: 45 сіу сен дів ма! УВІ бу біжу Ар Ав зак М тат Бо АТа вго тує
ЯН 455 яво ві тУк ага ага хі Або тнг одер ма деп бів бі1у ма бі су ау ях СТ 575 що
Туг їі їуУуг їіе йіз Тук бак ув бу їз
Я ча «2105 БИ ак що «ей» філюж І й «Я штучна Послідовність «ва щи ШИН «йиЯ» еннієноїеа взагінния «00 Я мес вуз Заг о СбБу Азв ніх ма! від Ні бій аа бе) їву а5а Бім его
Її 5 З 15
Че онія міз ух Бак АБИ Тік був аТта Аїв це МЕЖ два Ні ТВ в ЕВ зо дсп вец узі бів ага тТук бео бро біж Уа! Єбб Уа хів біж аз сту
Кз БО 45
Туг дян го РНе є1У УВІ Туг атя бек ТНгР Аве бек удДіІ тТвК уд ів
М зх ща ей РВЕ ар тро бів ее аїа бге бек бі РРО ай ЖТ6 вне ав вто
Ге а 75 о квот Зв Аа РКО СУує йіз Уа! Заг У ОТ сів А" ар штв ві 5 БІ З
Атц оту ТНг о аже Уі Звге біж уз їВе Жіє Ябе їв Бе бій губ Аа
БЕ веб що
Бне бек цей вух чаї Тве маї Аа біу баг Тут яви сек вбе бек Фу
Кв ї2о 145 зег уві ек ап сій ве зек его ес Є твг ага аа АТа св Ай
ДЯ їхх чо бів вне бетб Ага її бій бів бек тів ака ма! Тр бек бен АРО Бен 145 156 155 аа аїа ТуК ТТ аБр баг вес аго сію Туг бецп вуз із Авроуаї Аго дер 165 Зв 175 їує у16 Абр бЗег ї1іє бів бег аз дія бів хів біб їі ву Ре або; їка 185 чо дкЯ тує Біж бег Мі5 не без пе б1у Уві Узі мМеє бі бу ата та 385 20 05 їїе меж із Зак бек Твгбодяв бує Уві бій Уаії дев ні ТВготув СТВ й п В хо ден бій тТвк їТе Аа сух АЇа чек оте" бін йів рем тне віх іп же
Кк «30 ве ай ек із бім Твк Аа Аа вує Туб аку бій баб меж бег бен ве хек 245 м 5 бін ап Зак йхр тів нії Був ле ді мі бів бу азробім уз! Аа
Ба «55 270 іт дів уз Маї Туг бег біх азр гу АТа Авр о РБе азр о АТа тев Аз ий 28 285 дер оте ма! Ту Таб бек овго аеро рНе уз! Ар РВЕ Узі Жеб чек уд! зо 295 ню вго мМеб сем б1іу 16 Тгр біо бец сСух вух азр аз АТ Бій АТ вух 305 що вив 328 ук мес сії йА5б тує Тук Аа Яви ТВ Тер АТа го агО Бу бег бух 325 3 335 сів віз бій їіє тує діх яко тує З1в Яр ат Уж! Бі Узі їі бів о Зах 350 аг аби Бег яЕг біу Уві! Аго вго РгРо его Біу Тує ТВг обу Хе АБО аа КВ 65 тук дя сен ча цуз біу Аа іу бі АзЗвВ тує ї1Є Тут бе сви тут
БІВ 35 ЗО ні їує Аїа га Тук ее аа Туг бзегб бій АБ гук дя бує ма! Заг ї85 зо 35 БЕ
Абробеи ті Ї16 ті Су5 біх ап біу ліз Аго йіа Рго заг обі тут я ЖК 5
ТВг уз 315 азв УВІ Ар о їву Авт бі Азов АТ б1У БІК Суб Тук ву
КТ 45 450 туги бух Тук рух гу бій бег тує ар аби Уа! сіб віз її ух 45 40 45
СТУ бен Аїд Уа ха) біх оЇу а5р АБИ 5ег нів Те бго Ааїа Рей отут 50 455 Бо сіу тТуг дгу АКо (18 й5р о тнг о Ахр о Уяі Аза бі бі АТа б1Уу У у
З «и 5 «80
ТУук Ії Туг КІ Суб Тук бер уз біу дід
Б ще «й4АОз 55 «ай 490 «айв БІЛОК й й «вії» штучна послідовність «Ва» що що «виЗ» убайзноїва пагін «Не 5
Мет сує бек їеи ар Ні уві ія ні бій ачй сей цез аяп бін его ї 5 10 15 тиг міх нів му: чек да тАг ух аіва аїа ве Мет аг ні сій біц й 25 вт
Авап сен уві бій о аго туУК іецу го біу Узі бів ма! 318 біх Аа У
Б 40 ах
Тут ап РРО Ве біу жа! Туг яїа бег ТигБ одер его уаі ТвгоУаї ота
Бо іо вве аз тТРО СНІ Бак від вгРао чвг о бів вго ув! їі вве аза го 55 то КУ Кк ар отує хі Аїа его Кух Аїва ма! Бек Уа! 01 біп Ав дар сів ад 85 6 5
Агу тує Тйг дп Уді бег біу уз ТиК ЇЇ дви Те РНБ бій См5 Азй
ВЕБ: 305 КЕ не бек їео вже за! Тг Оу віз бім Зеб тує дай сви РАВ зак оБіу 120 | 25 ев уві б" аБа бів РББ баб о Бег беб бій тТаР Ага АбА АТ ОВ мов 135 о сію вве хее аРо ї1і6 бій біб бек тів арго зі їбо ЗР зу го ви 45 153 155 ї5о вій Тук Тнг о йаяо ев сво аг бій ТУгб ви бух віз ах узі йго вер 1655 ТО ТУ тТук тів Ар Щек Тіе бій зег язр о аїа вій 16 бін ж1і5 ву ББе ар що 185 ЩО
Ага тут бі бек ніх ве ре ТвК обу ма! а) Меб біу 1 АТ вів ля а Б їіе Мет Аїя бег бер ТНге ат ув УВІ бів Уа! Або НіЄ Тве Тубє С» ха іх 220 дкп сім Тйг ох А1а рух Аїа беготує бій а! ви Тве б1у бій тів ий 20 215 24
Зек із біб Тнг АТ АВ БуУЗ Туг Ага бій Зег Меї За» Заг вве ев "45 «5 55 бій дємп Зек дер Ха ніє У їі Уа! Узі біу сік яр оту мві аїа
ОО Ї 2655 Ка біх Ата вуз Уві Тут 5еР оіу або бух АТа ар Рне Або дія тер вів у ЩО 25 дер їне Уа! Бі ТНК бек Бго й5р Ве Узі дер не Уді зер бек Уві
І 25 жк
Бго Мек іен сту І Тер бію цер Суб бух дБр АБр АЇЯ сів АТЯ ув 5 о 315 З іУу5 Меб бі вяр Туг ТУР Абп АБА Те отТРр о Аїа ро Аг рух Бк губ о с 5 Й
Зі ята бій дів тжг о яїа йо жує хів язроаза жаї Біб ші КТ в 340 м во
Заг дя" дек Бек біу Мат ага Бгто его бек обіу Туг Те Був 16 Абе з6а 365
Туг а5ріви ап у бі ліз СТУ б1у ав оту" ІТ тує сей сухо ту о зи зва
Ніє сує вій Ага Ту бер Аза туг бер бій АБи гує ахр сей Уа! б5ег 385 Ук 5 400 дерево гів ї1їе їі уз іх Аа Тр АТ АгУ Аїа го зе обі Тук ча5 410 415
Те ух іє Ахв Уа! ав гей хи сіб азв Аа іх Біу уз тег Бей 42 ев о
Тук івор сСує Туг КУЄ уз бів зег тує Або дай Уа! біб Аїа Сів кує
Св и 40 ях
Бім во АТа маї чаї сбіУ сію АзроАжи Беб нів Те ребо Ав го Туг 50 455 4650 «1У тур Ак ага ї1е вер тТйг АЗе Уа АбА бТВ бу АТа б1У У бу вх СВ) чу я
Яук жіє тук тів схе Тут чек вує стЖ Аа зя5 90 жі» 56 «із 490 «аїЯв БІЛОК | . хеії» штучна послідОвність «ах «й» Мові Лоїва вагіна. «Я 6
Меб уз бег ец я5в Ні Учі Аа Ні бій вп ке сви аа бі рго
Ж з КЗ, 15 твге о ні5 нія їув чЗег деп ТИР Гуз діа Аа сви мех аго нів бів бів
Кей. 5 о
Авп бен Ууаі бін Аго тук бе РгОо Є1у маї бійї чаї ХІТ СТУ АТ СУ 33 КЗ Б
Тук ап го ре сім ма! Тук дів Бек Тпг оджр бек уві Те Уві бів
БО
Кви вве Ар отгр бій бег аіа Бго бе бію Рго УЗі ев Ре Ав вро 5; 70 75 о
Авр тук ви Аїв вго цу діа Уа! Зем узі бї1в бій за Або бін дів 5 ва З5
Аго вне твге да Уві бег о біж Бу ТВ їі дв те Ре сів су дп 1 105 330 ве бег ес уз ді тйг чаї аів шіу бек туг дп ву Бе зек бі г З ї120 їй
Бекг Узї бек ап бі бле бек шег Бек сію ТВг Ага ян Аїа ої: дев 130 35 340 бід вве ча? Ак її бій бій зек бів аку Узі ттробек Се Ага ен 145 150 55 168 аіа ТУР Твг Або бек їв ага бів Ту во вуз аа йо мат Ага Або 165 То ї175
Туг ті азрозег тів бій бек Я5р Аа бів їі бів іє ве) Рве Ар і80 185 190 агш ТУ бу бег мів вве без тиє біу ма) ма! Мек біу біу ата АВ 2 205 їїе мет Аїа бег бег ТР ОА (ув узі бій ді ар ніх Твг отТук бів ій 15 220 ам бін ТВг Її аа уз Аїа бек тує бів АТ во Твг обі бів її а 230 їх ж
Зеєг аа сій твгойіяа діа вух Туг Аге сій зак Ме бек бак ре дет 250 с бій Аза Зег азр хів ніз буз Хіє ув! Уа! іх бік ахр шіу Узі 513.
ЕВ. УЕ ви сіу АТа бух Уа! Туг б5ег біу зр їу5 Аа ар вве яр Аїа Тер Аа 275 «ВО «5
Аков ТВг Уа! С1у те бек о рго Ар РВе Узі Аяр о РВе уві бегобаг уд! в 293 Зю вто меє єву СІУ же тт Бій бен сСуя вуз аяв ар ав іп АТ у 305 Б З 320 іуз МЕЄ бій вев тує Туб вн дей Тнг тео аїа РО АКо Су БК Гу 125 що 335 бі Аза бів ї1е тує аів ар тук хів аа Ав Уа! бі: ув! ї1е бів 340 345 я
Зег Ап чек бек бі уаї зго вго вго его б1у Туб Твг огух їТе вер 355 ше зК5 туг азр іеб ав зує бі Аа бу бі АВ Тук де тТуУук цей сСух тує 37 | З й БЕ:
ніє су Аа Аа Туг Заг Аїд тує чек бій деп" їбує дер о сує чаї Бег 285 З 355 що ако іви жі тів ті 5 бі Ачп біу діа ага Аа го баг бі Туг чО05 «1 415
Тиг Куб їі або Уа! аАщу се) яп бін Ар аз бі бі вух тує бен че ах 3о
Тук вн Суб Туг уз Сцуз біб беб Туг Ар о Азп Уві біб Аїа сіє бу 435 що 445 бі во Аз а! уві б1у бі дер доза бег Ні Тр вуз діа вго тТук 50 455 50 сію Тут Ага Агу її Ав: ТВгоАЗо УВІ Аза сі біх віза біу біж бів яко СУ Я 50
Туєк їїа тує Щі Сже Ту щег вує оту Віа яко 40 «МН» 57 «а» «їз» БІЛОК сеї» штучна звоаслідовність ка ШИ що «вай жОоОйаиОіва матікіта «МОЮ» 57 мес ух БОР іви а5р нів Узі ді Ніз бій аа Кен ен ав сію его ії 5 КЕ їх
Тне ніж нія ку бек АБИ ТВКогує біз АТЗ Шен меє аку ніх СТйЙ є о Кк БІ
Акпівм уві біб йго туК гец го біу Уві бїб уз! Хе ді іа бі я 4 тТук вай Рго вве біу уві ТУук аіа Бек Тк дво Зак У! тВг ма! їв
СТ 55 БО
Гей РМНЕЄ АЗОВ Тгр бій 5ег АТа Рг Зег СО го Уа! їі6 вве ах го що ха З во вер тут їїє аз Бго зуб йіз чаї 5егоуді бій бів Аби Я5р біш ліз
ВЗ За щк
Ага тут т ази Уа! зав бі гу Тек їв аз Тнг вне бій уз дяп що ТО05 ії
Бе бек іви ух Уаї те Ух! ай бі чего туг Ахп іву вБе Зег бік 115 о 15
Баг уві 5ек Аби бі РНе бБег Заг бег о бів тагоаго ази Аа бів дев 1350 35 кет бір ве чего ага 318 бій бій бег їі аРо Уві тгр Бек ви Аг во 1 150 ї55 о аЇа тує ТР ар Заг сви АгО біз Тук цеу бух віз ар Уа! зго АЖо і 55 ВО ї75
Тує тів Аби чог ї1е бій хег ав Аа сій жІТе ФІ тів ве) рве ар 180 ї85 та ага тує і зЗег нія бе св твк обу уві маї мес пІх Зі ід Аїа 195 ОО 0
Т1е мек Аа бег бек ТВ? одоо уз ат ба УЗ! дев Ні тТвк о тУР СТУ їй 15 о деп бін Тв жів аї8 вже Аа чек тек бін аз бен о тве іу сій лів 218 235 Ай
Зек Аїа біз Твг аз аТа їж Ре ява бів бег Меж бес Зб рве Зег 256 55
Сів аби бегодор Ї12 Ні бує їец туші жа сії 01іу й5р бу та! АТ ве 265 20 2іу аїа же Уа ве Звг біу Або бує АТЯ ер Ра Ав вів Тв Аїд 25 зо ЗА дер їйк УВІ бі Те Заг овгРо до РНе УЗ ав РМ Уві! баг зак ха аа 95 з00 рго меж без бБіж Х1є Тер б! Кей Суз гу ав двр Аїв сів АїВ у 305 ЕК 313 З2о
Гуз Мей БІВ Ар тУЄ Тук Аза АБИ ТВг Тр Аа Рго Ат бух бег гу 325 З5о 335
Єв Аїа дія те тек діа ав тує хе дав діа Уаї СТ ма 11 ств 330 345 350
Заг аб Зег звг обі маї вго вго кро Беговію тує Твгоїу5 іє ар
Б ЗО зах
Тук др Се дев се бі аіз бі біу а тТук Хі ТУБ рей бує Тук
КУ Зх ЗО нів су Лід АКО тує Бак діа тує бек бід яБй ух дшробув чаї зе
З85 | Зо 355 400 вер івн іє їТе їі їує біу дей сі а1а де діа Рго бек Ту тує а їй чі тТвге ув тів ар ма! дер іви Ай бін а ді бі Бі уз ТУук ей
Я Б а
Ту ви Суб5 Тугб бух їме бій Заг Туг ар А5а УЗІ бі АТ 38 же сет ча
Чі ївз Ав ма! чаї ік сі аеро ахо Зек нів тв Рго Аїщ его тує 45 55 яко бі туб агу Ако їів я5в оте др оуді аа бів є1у іа оіу Ту в
Я АТО 45 «що тує діа ту Ії Суб Тує Бак обу Бі АТ я чо «Мі 58 коіїх 90 «їй БІЛОК «кій» ВтТУчНа ПОСЛідовність «а «веї» нні ВОоїва тагісітша «ЩО» 58
Меє руз Зекг ви йзр Ніз маії АТа Ні бій Аяп о беб без дав є Рео ї 5 то КЕ
Тнг нів нія ув бег АЗИ Тит Кух Аїа АТ Мей мес ака Ні бів бі 2 25 Ко вай іви Уаі ій АгБЯ Туб ген вгРо бу чаї біб Уаї тів б1іу віз бі «0 45 тТук вала Рго вна сі базі тТуб дія бек ТВК ав баг уд таб о ств и 58 о
Ген вне азр тер сів баг АТа вка 5ек бів веб Уві т16 РВЕ Аша Рго в та ЩО дер тує тіє Аїа Бго бух АТ Уа Заг ха бів бів Аби ай З Аа 85 в о
Аг тує г оаяи УЯї ек Ту уз ТАК о ї18 АБ Тнг рве бів вує дей
ВВ: м по
РнєЄ ЗЕ Кву уз Узі ТР Уві діа сіу его тує дян сей вве Зее ту
ЩЕ що 155 ев Ма! БЗег Ах сів Не бек бек бек бін те агод Ава АТа сій Ал 13о 15 ЕТ іш Ре заг ака їв бій бій бек їїе аг МВ! Тер оба? Св; Ага бе 145 155 155 Бо
АЇа туго тТнг о абр оЗег се ага Сі Ту бе бує аіз ав узі Аго АБр 155 170 КУ тує Хі6 Ар обес Хі бів Бег айв ліз Бій ї18 сіб ів їе) вве ах зо ще ТО ака Тек обі бегонії Ве ген тт біу уаї Узі мех су віу діа та 195 м | «Ох ї1е меж Аза его зве тТнг ода бух Уві Бій Уві ар нія ТВ тТуб С; о 8і5 а аща сію те Те аїа гує АТ ее Тук ЄТу Аа їеу Те о біх бів Ів 225 а3о 55 зЯв чек аїа 01 тйг аТа ата уз Туг аго біп бегб Меб зегобег ре ет
ЗКУ ше: 5 сів дн Бек ар Те нія рух тів уз! маї бі бі Ашо біж Узі Аа о аз | ТО сіу Аа ух У! тут бег сіу дзр о суз Ааїа й5о вне ар оаїв Тгр їв 75 -5о 285 ачо ТНг оУуді бі їнг о 5ег рко яр о Рне ма! др Ре уві его ек ма ж ах що
Рга Мет ев сіу ї16 ткробів Бе сСу5 ух ар Ахр Аа бів аа гу
ЗО З45 о цуз мес 10 АБО Туг вве ази дп тв ни Аів ко го Був бег кує 125 Зм 35 сто АТа біп їв туг діз Аввр тує їів Ар аїа уві бів уві це бів
Б ча Б,
Зег ази Баг бег біу Ууді ага Ро Бго бак біу Тук Те оцуз Т16 А5р
Зо ЗБ
Тут др Бей аяп уз БіУ дія біу Біу а5р о Туг ті6 ТуР ів був тут
КО 375 КО ніх веб дів ага тТук бек аїд Ту бег біб Ахп Буб вар осСує мі бБес зх Б зах 0
АЮ їіви Її її 116 їу5 бу аа біж Аа ага АТа Бго его сі тут 405 416 415
Твг уз ЇЇЗ дер о уаі Ар оіво Аза біз аеро аів біжу ЗТ Суб Ту ев 490 425 43о
Тут мем Суб тук цу фу бів Бег Туг Авр Аа Уві Сі Аїв тів вує 435 440 445 сіу цен ліз маї Уа! бі біу АБр Ал ек нів Таб о РгОо діа Бго тут я 55 ще біу тує Аго або ті дер тнг аж чаї Аа біз бі Аа Ту оту и 465 се 475 я тує жів Тук їїє бух Туг чег 1у5 біу Ав 455 я «Ла» 55 ка» 0 «ай» БІЛОК аа» штучна посліденість же Й що яажі» чОоОйеНтва щасістниа «Не 59
Мет (уз его вв азо ні Узі аїз ніЗ біб АБИ Бен рев ака бін РО 1 5 То 15
Тк ні нія вух Баг дя ТАК цуз йТа АТЯ ев Меє ага ні ої б кВ в за деп Бво ув! бі Ага тТук іви вто сту Уяї б маї тів бі я1а оту
КБ «й 45 тує аби вгОо Ре бі узі тУг діЗ 5ег ТК дхр обег Ууді тТвг Ома їй я ЩО іво вне д5р о тгробівй зЗегодів Бго бег бів вго уд! 318 вне аа рго 55 о 75 ко
Ар о Тук їТа АТЗ РКО бух АТ УЗ! бегоуві сій сів ай" авр бів ліз 85 оо 5 ако тує тВг деп УВІ его бі вуз ВК Хв Аа тТаг РВЕ Біб бує дев цю ще 110
РЕ бег фе бує ді ТВг Уа! Аа біу Зак Тут вай бер вве баг су 120 їх
Бег узі Бег Аби бію РНЕ баг бек Зб бу ТВе Аго Аби АТ ст ах
КІ) Мих КО
Зі Бе Заг Аго її бій бів Зег хів ягу Уа! Терозег вв вагу ву ї45 їі 155 ї60
АВ Тук Тйг дер Бек веи дго під Туг о іесу гжх Аїз ар Уа го АВ 165 ї70 іа
ТУв Її5 й5в чек її бій баг ар Аїя ба їі біб І16б їв вве Ав іще їя5 о аг туг бі хек ніх Ре ве тнг обі Уаі Уа! мет сту у аа Аа 195 КІ 5 цен мес Аїз Баг бек тб да Буб У! ств Узі або нів тк вне їй 16 215 ав дя Ти ТР сви АТЯ кує дія Зек о тук ст; аТа бо тТне ві ота Ле кс «30 15 а
Зег віз її твгоАаїа АТЯ Су Ту ЯКО бій беб мех бер зЗег ре Зеб 245 ща зх бів Аба бег оазв Хе Ні ух Ті в! Уа? «у біу ахр о БіУ жаї Аа «БО 85 «и с віз ря Узі Ту бек сію Аз су АЇЗ Аа Ре дв аїя того дів
ВО «85 що г о Уві біт Те заг бко АВ рве Узі Аа РЕ УЗі бе заг уд 295 здо тго Мої сем сїжЖ ХІіЄ Тео бів се сСує су зо а5о Ав Бій Аїд су
Бін ЗО що 420 їуз Меї ів дер оТук Ту ав дя ТВКОтТеРО йі3 го Аку ру бек вує 355 330 35 сі Аа ов І16 ТУг АТа йбр оту 119 АБО Аа уд! біб уа! хів бів 5 5
Звг ази Зег ек б1іу Уа! ага го РгГо Зб обу тТуг тик ух хів Ар
СО ЗБ 5 тує дер виь Аза ся бі АТа біж б1у дер тує Хі Туб цей Суз Туе
За 35 БЕ
Ніз уз ліз дгу тує бег дії тує Бек пін дви вух азр о сух Уа хет щх кю За 400 вав ви те хіє її буб бір айва сіу іа го Аа бго бек обіу Тут щ05 41 415
ТНР був Ще Ав УЗ! Аве сео Ав біб бр Аа Оу бік у Тв ей о 5 Кк
Тук іви суб Тег обу рух б бек Туг дер ах ув! їв аїа Тв ух кН ве 45 соіу ви аїв Уші чаї бу біЖ азр ази вБе Нів таб веб Аа РГО тує
САТ 455 Б і Тук Аге Ак хв Або ТК дяв Уві! деп бів 615 яіа їх У бів як ЕКО, 475 Бо їук Хі Туб ї1Є сСуз тує чек вух бу дід 455 що «І» БО «и1їх «їй» БІНОоК І «вії» втучна послідовніств «із оміхноїва шагіста а бо
Мет їж баг іо ахо Ні Уа! Аїз Ні біб ав сем свй аБа б вко
Х З їв їх
УвБР о Ні Ні уз зе ази Тигосух діа віз ве) Мес ага Ніз Оп ти о 43 КЕ йяа цер уз! бій ака Туг беи вро су Уаї То чаї те ту та Ту
Бе. аа 45
ТУР Аха РгО Бе бю УВІ кЕ дід Бек ТнНг о аАБробеє Узі ТВе У боїв зо | 55 я ів: не азо ТК БІВ зем Аа Бо баг бів фе Уа ІТ Бе да вро 55 т 75 о дан тк ІТ ата вго су5 із ма! Зегоуді бій бів яви ав іш Аа
Іо з дго тує Твг дев жаі баб бі вуз ТВе Кі аа Тве вне бій уз аж
Ма їх що рве Баг ге цує Уші тик уві Аз Єїу 5Зег Ту Аа реу РНЕ баг бу ще 3150 15 зав ма Зег ап Оіц вве бек ек вк дію ТК о аго аа АТЯ бі сАвА що ве т бів вве бек аку лів сів біп ее ків ага Уа? Тгр оБеє се аг сво
Іо 135 160 діа тТУг Твг о Ахробег бе» Аго біш ТуУг без уз Аїз Ар Ух! АгО ар їБ55 12 75
Туг їі бр авг 236 бій 5ег ахр вій Бій Кі6 біз 516 сви Бе я5р 150 щі То гуд тже біу Бе ні Бе рев твйе дір Уаі чаї мех ту ої АТ Аа
Кх «о МИХ її мех діа баг хег Твг о ахв вух ма бів Узі дев нів Так тує БІВ 21 15 КЗ
Ап обі твгої1іе Аза ух Аа бес тук Бій Ата во тне ТК бів іє
Ки аа 2 ке
Зег іа бів Те АТ Аза уз Туг Ага бій Беб МеЄ бЗег бЗег Рае ат зав 250 255 іп ахп заг аб І1в нія бух їі узі Уаї біУу 51» АБ 1» Уді Аа
БО «З Й сі аїа мух Уа ТУ г БіуУ йо ух АТа Ахо Рав ав Аа ТТ Аа 5 2 Как дер твг Уді біу тк ек Рго дер вве уд лев кне май аг зак Узі 280 Жах Зо ба Ммеї без сім ще мВ біб йти Суб цу АБр АБр АТа бів АЇя цу 05 З Как 320 іуз меж бію й5Б тує тує дяка Аза Те ткВ аа Ре АД Ух чек ж 325 330 35 бі АТа бів бе туУуб йія Яр о туг гів Аброаїн за? сію Уа! хів ов
КЗ 345 Б бег зп бег Зек бі уні аг Бгто его 5ек обі тує тик обу 16 дер (5 БЕ 35
ТУК АБО ме а уз біу Аїда бу БУ Ачротугє ів Туг беб сСух тує 170 Ву ЗО
Ні5 цуз Аїд Акд тТтк бек оАід Тук бюг біб ап бух ббросСує Узі вет
Зах 390 ща я аАвросеи їїв 316 118 уз біт Абе біу ліз Ага а!з ко бак бу тує я 410 ща
Твг бує ЖІ заяв Уаі зр овес взп сію азр аіа ау б1у Буш Тут ев 420 525 АО
Ту веб Субє тТуг зує ух бій бек тук ахр ака Ууаї Сі АТа веб ух 2523 45 сіу вен аїз чаї узі біУ біу ар оахй Зак нія тТиг Рго Аїа рго вве 450 455 що бу Ту Ак ага сен ар о тне АзроуУумі АВ от 61 АТ У ді Ту 4 470 47 ящо
Тук ж! Тук їв бує тує бЗег бух єїу Аа 5 Ба «ЕМ» Бі «ії» а свій БЛОК І Й «ії» штучна послідовність як «03» зезйзвоїва жакієіта «Че б
Мет бух бек ів аброніє Уві АТа нії бів Аби Бей веи ай ОТ РКО
Ї 5 10 15
Тнг ОнНіВ Ні Був бек аа ТБг ж Аза дія ев меє аг нНіз бів бю 2 я Кіз: два їжу уз! бін Ако тук бен рго біу узі сш маї їі су віз біх
З я 5
Туг ака го вне сі Уа! ук йїа бЗег ТВТг АЖ баг маї ТК УВІ бій
БІ; 55 ща їев Ре азор їгровійп ек із Рго Забій Рго ма! ів вве Аза его
КЕ, т ВО
АБИ ТУуЄ Хі ад вгОо су5 аіа чаї баг узі бів бів дей йср бій Аа 85 І в
Ага тує Тве вп УВІ бек б1у рух ТВг о їів ай Тйг о бне бів бує Аи що 5 що
Тне бек ів вує щі ТК Маї ат сСіу баг Ту? Аа сви Ре бек БУ іх а З
Заг Уа хег дей бі Ве ее Бек ба? бів Твг о аго йшя Аа Бій ажи їі 135 140
«іш вмре бек до їїе сій сів бек її дго Уа! тТгробев веб Аго ву й 155 1 дій тує тб одер бек бев аг Бін Ту ев ж АВ Або Уа вся ар 165 КО 17
Тук жі Аве бек Тс бій чек ав аа бів лі бів їв ви рве дар о їх жо ага оту СУ «звгонія Ре сво тн бір Узі чаї мМеб сі єї аа АТа ї55 Ко Ж ї1е мет а! чего бег Те два гу узі ой Уві йо ні Те тує Су о Ії ай ази сів Ве їі АТа рух АТа бег тує біб аз іже тк сф» сів її кра «о 235 240
Зег аіж сів тТвгоаїз аТа вже туг ак біб Зег Меє бак дек вне як пах 250 255 бів ап баг Ар тів нів їує їв Уві Ма! оту Єіу Ав су Уві Аїд
БЕ 255 «70 су Аз їух УВІ ТуУуг 5Вг ТУ аб їух Аїа ар Ре аБр АзТа тор ота ві: 80 285 ар тйг Уа! бів ве бе го Ахр о РНе Ул! АБО Бе УВІ бер дек уд «9 95 з
Бо век вн бі» Кіе тер ошію сек сує губ дв аєв Аа Св Аа гує 305 315 315 зго і вет сі ай ТуЄ ТУ ака вки ТР тр ові вро вРОУ Бу ЗК ух
Зх 336 я сів ата сів тів тек АТа йхр оту ків Авроаїв У! бів а! же Фів
ЗО У я
Кер йша бе" дег Сі ба Ако бе бго бек обіу Туб тн ме їв Ар 355 ЗБ ЗУ
Тук веб іви АВ Су5 СіЖ дів Сію біб дев тує діа тує рен су ту
Ж Б | Б і ніх ух яїа ага тус зЗег яТа тує Зек зів ази о куз ав сСув чаї Заг
З Зо ще що взріви їі 312 ЩІ ух сту вени бі дів деш АЇЗ БгРО бег обі Тут 405 я я ун зу ї1е ж5р Уа? Ар сей аа би Ар АТа бі біб і тує ев 42 4-5 що тТуг цу їв ТУР бує губ бій зег о Туг йавр аби УВІ біВ дів їі Був я4о 445 сіу ам дів Узі Уяі бі біу ар Ан Бегонія зве вго Аїа вето тує
З 455 Не ву ТУ ага ага її ав о тйг ахроча! йхп бів Ф1У АТ оту ту бів 65 | ято 475 480
Туг хів Туг ої сСув Тут баг суб СУ Аа ян5 Я
ИН б. «віїх 490 халем ВІЛОЮ й Й кеаїх штучна пестідовність «ве» Жова5поїва тагієтїяа
Межї су Бек ін Ар нів Уві іа нів сій ази іви се йзи сти го ї 5 30 їх тТнт ні нів зуб 5ег дя Тіт Куб Аа аїв цец межє ака ніх СІ бої хо 25 30 ди їжи чаї Бін аа тук бе вк сту маї єть чаї ів бі їв 15 щ чо Я тТуг дип Рге Ре Біу Узі туг дій б5ег тн ар чего уді таке ожаї вів 5 во шви вне Аза Теробій бег АЇа Бго беб бів бго УЗ! Хе вав Аа. Рго в 70 ук во ахр о Туг їі Аа Рго цує Аїд Уа? бег о уді бій біб ай абробіш Аа 85 90 55 дге Туг Те ап уві Зеб оту губ тт їЇїє да Тнг ве бій ух Аяп ме ще що
Ре баг Бей сух узі Тйг Уві віз сіу Зег тує два Бен вйе бек оту їв ге Те5
Баг Уа! ЯР Ан бів РВе баг беБ бек 16 ТИР ва дей Атїа бі Аяв 130 135 145
Фів РМе бег Аго тів сія бів ес їїв йго Уді по 5ег ке АгО се ії ї15а То ї50
Аїа ТУ ТНК аАхо бег ів Ага бід ту їв бух Аз ар о Ууді АгО Ах ї165 їі 175 тує Хіе а5р як жів ої бек лаяв дів бій тів біб Хв без Ре Ахр іо 155 Тю ака туго біу бек нія Ре еу тВг обіу маї маї мех бі СТУ АТ АВ 20а 205 ї1е мет Ата Бек чего тйг оаза уз чаї ств У азр нів тнге тує ої
КУ -ї5 ка аа бів ТВ тів Аа ух Аа бек Тук СТИ віх іео те сту бів та але я 235 вет щ-гк Аа ій Тв Аїа АВ УЗ тук Аг ств бер мМеї бек Зак НЕ Бек
Я ЗО -53 іп аби бек дер їв нія Куб ті Уді Ууді 61У біу я5о бі узі їв
БО 55 У бу дів су а! тус Зег 0іу Або рує Аїд ар Ре Ар Аїв тов Аа 275 ЩО 285 ар оте МУЗ біУ твгб о бес рей Або вне чаї аа Ме Ві баб Зак уд 290 295 щю го Мекіеи Є1у 116 ТРробіч ев суб уз ар Абр аїз бій Аа сує за Б 15 зла мує Меї біб дкЕр тує туг ди вп тТвг тер Аїд РГО АгО Був Бак вує 325 З З сій ата сій їіє туг А!З Або Тує ті др аїа ма! 61) ма! Ів св зо За 350 5ег ап яви зак бі Уа! АР орга РГО зе оіу тує так вух Те а5р 355 ЗО 365
Тук дер іву Ай бух цін йАїа біУу ТУ Або Туб ї16 Ту ев Су туг
Зо 375 з5о нія вух Яїа аку тує зер АТя тує БЕР тб ачп бух АБросСує уд век 385 90 355 «00 кеВ іеши тів ті ті6 уз біу в5и бі Аа аго іа рРгОо Заг си тус
ІВ їй с
ТВг уз її яр оуаї або їву Аза бу Ав аа Бі бу Був Тук ви яко чив | з
Тут свй сСує туго с ує вує ів 5ек тук аїр дей ми? іш Аа ЖІ ув 4 40 445 пі сей діа ма Улі су спіу а5р АБИ бак нія так вро Аїа го туг «50 455 450 бі» туг дко Агу ЇТ18 Або ОТ ажр за! Аби бі оіу Аа Ту Ііу 1 55 в В явО
Ту Хі Тут хів іву туг баг гу їх 1 45 Я «10» 83 «ії» 0 «іїз Білок , І «Ії» штучна послідовність аж» шк «га» щообапоїеа лаг ста «ой» бі
Меї (цу бег сечу ар нів та! аТа ніз бій Ап іви фев абп сів Ро ї З за 15
Тве нія нія рух бег Ап ТВг вує ді Аїд це мет аг ніє вів Є 20 25 30
Аяп Беу у! бій Аг Туг бе вго оту УВІ бів Уа Сі ст» Та бу 35 чо С
Туг а5и го РНе Сіу ма! Туг Аїа 5ег Твг др Зег ма! ТВг Ома! ота 5 іо РНЕ Ар о їкр бій бБег АТа Бго бег бін его уві їі Ре аа РКО 5 7а 75 5О
Ахр оту її Аїа го і віз Уві баг Ууді бій їв ай Ар біш іа 55 Зо зу агоа тує Тйг аби Уді бек бі ух так жів АБИ те РВЕ біз вує кп то зе що
Те Бек іс вже ма! Те маї Аза сбіу зег Тук ап Безу Ре чего ФУ
ІЗ 12 135
Бег ма! бек аа біш Ре зег бек бек боб ТК Агу АЗИ АТ бо АяИ 130 135 1 біц Рне бег Ако Те біп бій бек їіє го ма! ТеРроЗеє бео Аго ци 145 150 155 150
«із Туг тн Абробег їв) АРО СТї тТук їез бух аїя АБроУзі ага зв 165 Как ТЗ
Туг жів дев бек зів сій 5ег ар Аа бій ті іш Ше їси ве аб
ІйО 165 що вка тує бі Бек нія Рів ве: Тве бір маї Уві Меб сіу біу аіз АВ 155 вот М
Ле ме АТ бек бек Те дян цу Я) бій Уа! Або Ні ТВЕ Тук 1 ка Мк 0 дян бін ЗВе Ів Аа ув Аа его тує бів дів се) так обі бів тів 225 що 235 40
Зак оаїа біш ТБгоаїа Аїа Гуз Туг го біб бег МеєЄ Зег Зег вав Зак 245 25 55 бів АН Зег о дяр Т1е Ні кує 118 у! Уя! бім СТУ Абр обі» У Аа
БО Кт 27В біт АТа рух Уа! туго бек біу ар кух Аїа а5р вне вза Аа Тр аа еВ «КО 285 ав тнг УВІ біу ТБ бек рго а Ре Уді дер сне Уді чеб хек уві 2 Ох щю вгО Ме Бу ТУ те тро Є бе) Суб зує азв ар вт сій Аза су о З 2о іже Ме ТО Ар тує Туг Ап Ап їнРотго Аїа РРО Агу бух 5Ег ув 325 ве 315 сбіц аїа бів бів туго Аа ар тує ків ав аїа ма? їв ма! їв бій 340 35 350 ек оаби бек зЗек біу уві Яка Рго Рг 5ег Є1У тує Тйг губ тів ахр 355 ЗО 5 тТуг Абр іеи АЗИ су С1У Аз сту біу Ав туго Зі Туг ец Суя Туг з ЗВ що
Ні кує йїв аго Тук Бег дії Тук заг Бію Аза суб АЩо Су УВІ бе
Ер Бен сей і лів Бує сїу 5 о1у Аля Аго АТа РКО ве г ТЖк 05 що 15
Тик вух Се йабор ма! дер цен ав бін дер віз су Ту гу Туб ве: о «25 30
Тут зви бує туго Кує Кує бій Зег тук дяр Аа Ві бів Аа Щ1е рух і 5 ай 45 сіб ви аа Уйі Уві бі біу дер ява Бет нія твРК о рео Аїд Ро Тег що Як чо су тує лагу Ага 16 Ар ТК ар чаї аа бів бі» Аїа МУ У би 65 о 445 що
Туг жів Тк іє Суб Тук бек сух ші Аа я що «Ме» «г» «ей БІЛОК й . хаі3» штучна поспідовність «айЯ» оон їей вагітна «НОЮ» ба
Мет уз его іей вер нія уві Аза ніз бій аБи бе сем Ази бів его ї З хо 15
ТвР о ніз нів ух бег ай ТК рух АТа аія Без Меє ага Ні бій 61;
Ей: 25 за деп бен ма1ї біш Аго тТме о іев беб Бі Уві вії маї тів Бім а1в с1у
Б 40 45 тТук дк РРО Не сте еаї Туб АтТа ек тн або Зеб таї тб ма ої
КЕ 33 о
Беч вне ав їтр біп зег діа Рго его бів рго Уді їі вве чай вка
БУ о 75 0
АЕротуг Те Аїз вго ув АТа маї Берк у! бів бій Аєв АБ о сіш Аа да з
АгО тТуг нг одн чаї его біж рух твг хів ан так ве бій Суз деп що 5 їю вне Бег уви кує Ма! тТВг Ома! іа сїу бег Туг айви цев Ре Беб бі 115 ай 125 ес чаї бе" Аха сіц вне бе" Бек баг бін Тйк Аго Аби Аїа Ні два 130 їі 1 сін вве зег ато тів бій бів бег їіє Аго уві теробек ви Аго вец 145 5 155. їв
Аїа туг Те АБО Бек Мен АК біб туг сец був Аа Абр Узі Аго дер 185 170 175 тує ХІ6 дер бек їі бій бег ях діа біт Ті біб її беоб вве дер зво 185 ї90.
Ако тує бБію бегонів Бе сен Тйг обїу Уаї Уа! веє сію б1у АТя аа ї5 к 5 їі меб Дія Зег бБег ТВг два уз Уаї бій" Узі дронів тб тує 16
Как аа и деп біб тТвг їі Аа гу Аз беє тує бів АЇв ів тве бі вів тів 45 Ба 285 Бе «аг діа Бій ТвР Аа Аа Бу ТУ аг ОТ бек Мет бек зек вне Берг 5 | «55 віп ачи баг або Хі ні гу хів Уді Уві 5іУу бу ав сту маї Ааїа го 255 т су АТ ув Ма! Ту бек сі ав сує Аа йо Ре або Аа Тр Аа р | го ах
Ав Те Уа! б1у Тве беє Бко ази вве уві ее бБе уз! беб бек Уві я 895 300
Рго мех цей су їв тер обі сви Сує вух Абр Ар Аа ст АЇв вує 305 Зо 315 ЕН їуз Має бів Ар отуг Тук Абе дяв те отер Аія во АгО губ бер сух 3 ї15 535 сів Аіа бів тіє Туг віз хр тук тів вяхр йід ча! біб ува! ктів бів
МО 345 50 чек дн чек хек дію УЗ) АР овРо БТ дев обіу Туб Те бух тів дер 355 Зо 365
Туг а5р сен ай бує бі віз у Біу ар тує ТІ Ту ре був ту ї7о 5 3З8о нів ух віз Ага тує ес ід тек хек біб век бує а5В Су цею 5Єк 385 щ Б я вер іви жі їі їі іє біу ба бБіу йіз Яга А го Зев біу Тут що 10 5
Тег вух Жіє аз Уа! ар сво йха бі ар аа бі біу зує Тук ву
Б 425 аа
ТУг сеа Сує туго вух вує Біб бвг Туб дер Аби Узі бію АТа ТТ уз ча о 445 сі цен аїв маї маі сту бі ар о абп Зег Ні Те Бго діа его туг 50 455 кю
Фі Тже аг аго їіе йо ТВг ОА; Узі АБ біш біу Аіз бу БУ іш 455 470 475 зва тет Кі тус Ї116 Сух Тут бег ух ші Аа а85 420 «10» 65. «в1ї» 490 «ій» БіЛюн . І «вії» штучна послідовність якеОх що «Я» їхніх воЇїва фагів «ЦО» 5
Ммеє іує 5ег се а5р нія ча! Аа нів бій йяп ів іву Ай бів его ї 5 ій 15
Тег нів ні У Бек АБИ ТВ Бу діа Аа бе Меб ага ні бі бів
НІ 5 ЗО дав Бей уаї оц агу ту ве Бго біу чаї бів ма сів бі Ах оту 35 чо 45 ївжт ап о Рбко Не бі Уа! ТУ АТ бег о їНе йзрозек Узі те Узі вів
З 55 БО ібб РМе Або тТго бій бег аа РГО бег бів Рго чаї ЇТе Ре Ап РО 55 70 75 КО дер тує Те Аа го ух мій У! Бек ма бів бія деп ар боти Ав
За 95
Аг оте Те аа уді бег бі вух те їі8 Ай Те Бе бів бух Ай 18 305 1
Бе Заг ів бух уді Тнго узі віз бі бек Тук дп іву Ро его біу 1 1-0 125
Баг Уа! бер аяи іш Ре цег бе сег січ ТВг о дго Ази АЇа бю деп іо в 150 іш бе бек ако їі бій бій Бек лів Ага УЗ! Тер бе ву Аг їв 145 150 155 що
АТ Тук ТВг оАБр его цец аг Би ТУб їву бух іа азр Уві го а5р 155 щи 175
Ту Же во бек їі ба бег аб5р Аза сій її 51 хів цей не дБ
ММ 185 190
Ага тує біу чек нія Ре сей те обіу Ма? уді Меє сту СТУ АТ АТЗ 195 о ФІ
Ії Мет Аїа Зак баг ТВг ай Суз Маї БІй Уа йзронії твг оТук Бін
КО «ії КЕ
Ап бів ТВг о їіє йія рух Афа бек Тує б Аа ев тв осту бів тів 25 а30 235 КЕ бек Аа СТІ так Аа Аїа уз тує аг бій 5ег меє его бЗег вне Бе 25о 55 біп аби Зег ар ків Ні вує їі узі У! сі бе Ав Ту Ма ліз г50 Б о
СТУ А вуз Уа! Туг баг біу ав су Аа Або РВе дев Аа ТРр Аа 5 В «5 дер оте Уа! оіу ТВеЕ чек орго дяр Ре Узі АБО рйе ма! бек бек ма! 2 235 То
Рко Мет ви О1У жів їв обі ев Суб уз ар АБр АТа іп АТа рух
Б ЗІ 315 о іч мес бій ар тує Ту Ап аби ТР Те А бе арго ув бек Бує т М Б Б сі Ааїа біп їі Туб дів аяо ТУ бів йо Аїа ма! бів Уві їі бів
З 35 355
Звк аАхп его бак біу Уві аго ко Рго бек бу тує Твгоцує Ї1е я5р 355 ТБ5О 365
Тут жав сец ази ух біУ аїа бі» Бі йо тТУЄ ТіЄ Тут ев Сує Тут 390 395 ЗО іє руз Аа Яга Тук бак Аа тує бег бід аз су Ар Суб Ве бек
Б я 385 | ЗО ар обецй літе тієе Ії уз ту йзап Є1у лій АгРо аів Рко Бек обі тут що 10 415
ТАТ у 118 вер Маі д5в ес; ах бів йавр ав бі Біу ух тує це і Я 5; «30
Тук сви суб тує цу цує бів бБеє тує аб дяй Маі ств аа її Ку | 83 ща бі іеи віз Уа у БУ бі ажр дк бег нів ТВе вгРОо 13 ве тує я5 я
Єіу тУуг Ага Ага те дбротвкК аАхр ма! яба сів біб Аза бу біу бін
Я я Ех Б тує тів тує тіє Су тує бак рух «Ру вів 5 ща «а б. «ії» «еле БІЛОК , і «і» штучна песлпідсвнієсть
Ак «вва» Ж Боїва щабієіта «НО» Во
Меб бух Зег сви яр мія Уд' віз ні бій Аза Єву Бей хв бів вго ї 5 10 їх
Те нів нія суб 5ег дей тик вує аій аїа без Мех ага ніє Фів б о 25 30 ахп ви Уа! бів Ага туго ву КР біх Узі біз хай те бі від Ту чо ЯЗ
Туг Аха вгО рве біу мані Тукоаід чего Таб Ар обеє уві Так о маї бів 5 хз Бо вен РМе дер Тео пів ек Ата РКО БЕР біб го Узі хів бе ап еко що ха З ща ааротут тів діа вго Куб Аїа УщІ 5ег уві бів бія ап одяв бів Аа 85 Зо Б: ака туг ТВкК аа У! жек біу вує ТВ лів АБИ таб РВЕ бій фух деп чо 105 ій
Рее лег цец куб та! те Уа! Аїд су бак тує ан цец рве 5ег бу їх 30 125
Бек ма! бег Абп біз РНЄ бек обег его ти ТВг о АКо Ахп АТа б Ав о 115 140 сім Реве Зег асо хів бій сіб бег о ї1е або Уа! тго бег їен Ако це ії» ІВ 155 бо
Аїа тТук Тк а5р 5ег сем Аг сів тТуг ів ух АТ а5р У! аку дер 1655 170 їх
Тув Кі АБр б5ег їі біп Берг Азр Аїд БІВ 11 СТЬ їв ви РНЕ АВ зо 185 1
Ага туг сіу щег Ні5 Ре Бек тик ойпту уві уаї меє сі біу АїЗ АТа лю 705
ЇІїе меє дід Зек бек тагоахп бух уаі бій Уві доро нію ТВгГ отук 61 жів їй Же дам бі тик те АТа З Аїа бег тує біб Аза цео Твгобїк бі ле ах 230 35 ке
Зех Аз бій Те АТа АТа бух ук агО бій 5ег меє хек озЗає ВНе Зег зах 25 У сів ав бег во їі ні їх їі УВІ Уа бі і Ав обі ді діа й зв | 20 бу Ав вух чаї тує Бак оБіУ ар огує аїа Ан бе йбр аа тРр Аїта а «НО «Я
АБротне Уді біу Твгб оЗег вро вхо Не уд) ах Рене уді бер о бег уд! -90 ве що
Бео Мек бен ЗіЖ Ї16 Ткр бій се) сСух 1уб АБВ АБ АЇа біп 813 су 305 Зо 15 їй іх мМеє сів Ар туг туг аби аби ТНе ТРроа)їз еко аку суб Бек бує 425 330 СК сі Аа біп те тує АТа АбБротуг її бр аа уві бін Уві бе бів 340 343 350
Бег Ап Бег 5ег б1у чаї аг Ро Рго бек біу Туг Те обу ТТ Авр і Її 355 тТуг др іеци асп оіує 01У Аа сіу бу Аяр о туг 116 Туг ів Суз тує 370 375 З ні уз аїз Аг Туг 5ег Аїз Тук бек біб Аха ух ар вне аї 5ег 355 з Б що
Азр обви іє іє Хе бух сту ах Су й1а або аїй ке зве бу Тут 405 що чі5
Тнг ьує Ті жар МЕ! ахр ев АБИ бі ар Аа бу бі См Туг ец ща 45 що
Туг Бей бух Туг бух су іп зег тук до йяп Уа! ої аїа ще су я35 443 | 435 й іУу їез аз чаї Уві Сіу Біу а5р Ав Зег Ні Так обго тя Рго тує 450 255 45 сіу Тук аг вго її Ар о твк дзро уві аа бів бір АТа біж Сїу 1 465 «70 475 яво
Туг їі тує Ті Сух Туг бек бух бі АТа 3855 що «М ВИ «а1ї» 490 «жає» БІЛюЮК й «33» штучна послідовність «ее» «ай» МОозйоїва йагісіша «Ве 67
Мес ух чег оівю Азронів Уаї АТ нів бів АБИ Сем беру Аха бін РО ї 5 10 їх
Твг нів ніх суб 5ег дп Твг о цух іа АТа сви Мет ако нії бів бів 20 25 за
Ап бе ча! бій аг туго сво Рго біу уаї бів Ууаі тів б1у АТа бу чо 45 їТуг А5п рго РНе сіу а! Тує Аа бег Твк Аяробегота! тТВк ма! ой бо із вве ах то бів бегойїа РКО баг біб Бго уві Сіе Ре дсп рго 05 га 75 що
Аз) Туг жіє АТа Рго бу5 дів Уа! 5ег Уві бів сії а5п др бів діа 85 90 55
Агу Туг Твгб аб» Уа ек Біу вуз Таб же дяа ТВе вве бів Був вал цюЮ м 30 рве б5ег зву суб чаї ТвгоУаї діа біу бек Тук а5п іву Рее Зег біє щі 120 125
Бек уд! Зег я5а бі Рйе бек бек баг бір ТВг ака А5М Аа бі Аве 130 135 145 бій Рне Зег агу їі бій? біо Зег їіе аг ма! Тер оЗег цей аго ву 145 150 355 мю
Аа Тук Тк дер заг вен аго вій тує іву щує віз дб ма! Аго АБВ 165 що 5
Ту" жів бр чего тів бій Зек Абр АТа бій їТе біб ХТ6є се еАе Або 180 І85 То
Ага ту бі 5ег нів Ре всю те осТу Уа! Уа мет ту сту Аа АТа 155 200 295 їїе мет АТа бек бег ТАК дей Бу Уа! біп уз! або нія ТВ ОТУуєЄ 1 й 15 В ет св Те Хі віз бух Аїд 5ег туб бів діа сви тв об1у бі 38 зУ5 230 235 зо
Заг Аа бів тНе аа аа уз Тукб го бій баг Меї бер зак вве зег
У «З Ка сіп дяй Заг во ї1е нів же Ре узі чаї бу біЖ АВ вію Уа! АТВ
БО 255 о
Фіу йїа цух Маї Тук бег Су дзр бух Я!їй йзр ве ар АТа кр Аїа вве «ВО зх «БВ тве оузі бі твеобек рго вхо Ре Узі хв Ре уд) его бек уд «ча 295 00 вВго Мет сви бі Хе тт бів се) Су губ ахо ар Аа іп дів Бує
ЕІ що 35 ха уз мес бБіш ахр їТук ТугЄ ат Аап тТвие Тер аїа Рго Ага бує бек Бу 325 з30 ЕК сіц аа зій їі Туб АТЯ Аяр тує Ів Ахр АТА УЗ Тв Уа! жів сів ма 345 БО ее ази Заг баб біу У АР ОРгО вро Зег Бі тує Тнб рух 36 Бр 360 1655 тТуг йхрізи ап із БІЖ іа СіУ ЄЇУу ар отує Іі туб ви Сує Тут
БВ. 5 ЗО
Нія іу5 віза Аго ТУг чег АЇЯ Туг зег обід асл о гух ар оТуг Уа Заг вв жюЮ 355 я дер ре її Х16 тів гук бтТу аши о біу Аа АРо АТЗ бро бев біу тТук я 16 5 твер ує Жїе азв о маї АБО їв ав сії азр АТ ТУ Є1у вух Жук во еВ 25 410
Тур сви Суз Тугб бух бу5 бій бек о тук ахр Аж Уві ст: Аїа Те су5 415 о 5 бі го аз Уаї Узі су сіу дер да бер нії таговго Аа го туг 450 455 00 бі тук аго ага іє Абр оТве Аяв Узі АБАЯ бію б1у АТа БІ Ту бу 455 470 ять «во
Тує тів тут Ті Сух Туг бек бує СТУ дз я 8 хиі05 6. «ії 90 «ій БІНОВ чеї3» штучна послідевність
ЕКО ! : «235 мооачвоївх шагієтта «Я» Б
Межє су баг ем ар нів маї Аїда нія зів аа ев без аа 15 го ї З А ї5
Тиг нія ніб5 вує БВГ Аки ТК Суб й1а аа цею меж Ак ніх сія 1 о 7-х віє вп оїев уві бо або тує ев ре обіу узі бі уві ї1є б1У АЛа бу 35 що Я
Туг йдха го Ре бі уді Туг діз бог Таг дер о бве Уа! Тве уд бів ше 55 Б іїей Ре ар Тр бій баг Аз Бго яв бі) бго Узі її вне аа вго 55 То та дО
Аз отут Ті Аїа го Кух Аїя Уа? Заг Уві сів бій й Ар бій дів 55 в 5 ака тує так о ахи чаї ек бі Суб тик Кі а5й ТР оене бій бух а5а ії 105 1
Бе бег ен вув узі ТНг ма! віза бір ек Тук аа зец РНе бек біх 315 2 125
Зег уді бек Аза бі бе бек бег бег бів тр Ага авп аїв бій ач 5 1 біш Бе бег Ак ї1е біп бів бе їі6 аго Ма! Теробек сей Аго ев 145 150 ї55 їБО дія ТУР Твг Ар оБаег Бер го сів тУК Бош вує АЇя Ажр Узі АгОо Ажр 1655 КЕ 195
Тут іє аброзаг їі бій Зеб о азр аа бій хі біб т1е вер вне дер і180 ТЕ5 1 ага ТУР біу чего Ніз Ра сец о тве біт Уві Уві мес біу Ту Аїа вій
Ко ОВ 05 тів Меї Аїа Заг бег ТБгоазп бух Уві бів Уа! азор нів Те тує бів о 5 ЕВ дев сін ївгОожів АЇв рух дії 5Зеє Ту бів Аїа ев твг сту віп тв
Я ЕТО я о бек АТа біб їТвг о Аїа Аїш уз Туг вго бій бек Меї 5ек бек Ре Зег я Баки Кай біп Ах Бек Азр тів нів бух тів ча! У бік ої» Ар оєіу чаї Аа
Ба | 285 2 бу Аа їуз узі туг чего біу дз» іїуз йійа Азов Ре др Аїш тро аа яв «ВО Ех ав отнк Уа! бім Тйеб его вро Аво РН Маї дер РМе Уа Зак бег чаї «що ке ЗО рео мех іец б1У їі теробіч без Суз буз азр азр Аа сій АТа Ку за5 зо 315 тей іж5 Меб 16 АЮ тує Тук йшп дєв ТйЄ ТгРв о АТа бго АгО Суб баг ух 325 3 вх 5 біз аїя бів їі тТуг аіа ар Туг зів ахр Аїа чаї б уді пів бів з во що
Бег Аби Бек бег сіє Уа! Аго Бго Рго бБетг бі Туб тт був іє «зр 355 зво їх
ТУуг АБ ів ап ух іх іа бу бу Ар Ту гів Туб сей Сук ТУук
ЗО 175 Зо
Ні Су« іа ага тТук бег Аїа тТуг хаб бів Ахап бух дер Хе уві бе 385 БТ Би: щю
Азріви 12 їі (16 уз біу лев Єїу АЇа ага Аїя вго бек СУ тує
Ст 410 415
Тег ру Те АхроУяі Авр бен Аза сін аАзЗр Аїа сі О1у су Ту ев що и5 що тут івн Сує тур рух сує бій бек Туб Азв АБИ УВІ Є АТ діє вує 435 ча 45 сім цез аїа Уа? маї с1у біу А5родей Заг нія Те Рго АТа го тує
Са. паз «о сіу ту Ага аго їіе ака тнг о ахв ува! ай бів Бі Аза бі бу бів я З яи5 ЗВО тує її тут їІЕ Суб тує бек бух ту ДІВ 455 430 «ех й «їі» 490 «й Білок «3» бкучна песлідовВн СТЬ «лою «ой ес ноїеа пагієіта «з в меж ух его цез йяр нів Уа? аіа Ні сій Аа ів їеу аа бів вро ї 5 160 ни
Тве нів ніх уз беб дей ТНг рух віза АТ: веб меє дк нів Є ТИ о я 30
Ап іви ча! біз гу Туг гео гео біж Уаі біб Узі! тіе біу йіа біу 35 40 45
Туг а5п Ро Ра бі Ууаі Тук дата его твйг бер Бек чаї Твг ба бів 50 55 бо ізи Ре авр Тер бій Зег дата Ро 5ег бі) вго Уа! ЇЇ РВе ай РгО 655 75 7Е що дав тує хів АТа РРО кує АТа Узі бек уві бія бій Аза Азов бів Аїа у що 95 ага тує тиг о аза Ууаі Зег біу уз Твг о тхіє а5а те внє бій вує дя 100 105 ке
Рпе бег вен их Уа тТйг Ма! Ата біу чЗег Туг дп о бво Ре бек бі о 125
Зав Ууді ек ази бін вве чег Зег о зеб бі) тТвВг о Аго аа Аа бін Ав 130 135 140 сій Ре бек дко її бій бій беб Ті аго Узі Тетробеак сво ага ге 145 5 155 ї650
Аїа тТук тВк Азов бек ем аАго бій Туг би уз АТа азр уві аго зр 165 у ї75
Ту їів ва5р заг тів бів бег абр АЇз біп їі 60 тіб вв не дер 180 185 190 дека тує 01уУ зав Ні РБЄ у ТР обу УЧ Уа! меж б1у СТУ Аа Аа 135 200 У їїе Мет вія ес бек ТВг АБИ БУб УВІ бів Маф ажр ів тТвг отуг 51 210 її гео два Бі Тйе їв Аа руб ід бек оту біб АТя еу Тйпе обу бій її ка 5 235 вай ек аа бін твг аїа АЇВ бух Ту дгО с1й Бек Мек черг чек не чек 45 «ЗИ 255 5ій ази 5ег дев Ті Ні фу їі Уві Узі біУу сі Аз біу УЗ ліз 26 за5 270 сіу АТа їуз ма? Тук бек 1 Ар вує Ав Азр РКе Ав АТа тер Аїд 25 г зв азо твг о Уаї біу Тк Бек РРО ар РБЕ ув) йяр ве Уа бек век уд 90 295 БІ
Бга Ме сви бі їіє Тео біб цер сСу5 муз яв Авр Аа сій діва Був
ЗОЗ о 315 в уз Меє бій АБО Тує Туг абап дей Те Тер оазіа РКО Аг вже ее БУЄ
Зах 330 335 біз Аїа біп їі Тугб Аїа Або отук її Ахр Аїв уд! біб уд! Щі сів що 35 350
Бег ази зег Зег Бім Ууаї Агу РО РРО о 5ег обі Туб Тпгобуз Хе ар
Зах 360 355 тує ах Бе Ай гу бік діа біу о1У абБротук тів тує во бує тує 370 375 зви
Ні зу Аїа го Туг 5ег дія Тук Бек біб Аяи Гуз др мех Уві чек з85 390 Б о аєр ей їі Хе 516 у бу або о1у віз Агу віз РКО зег сіу Туг
ЯО5 410 5 їв: був (ів ач узі! ах се) ап іш Ав Аїя щі бу вуз ТУР ке;
Би 425 «За
Тут ще сСух Ту вух куб сої Бає Тує азроава заї бів Аїа хе уз а 445 бі? ви ді У жа Бу БУ Ащо Ап его Ні Ве РКО від во Тут 50 ті Тук Ага ага ті жов тВК о ахо Ма! Ап бій біж вія бі ЄТу 61 ох 7 с: о туг зів тТуг їі Сух тук Баг рух біу дів «55 45 «105 70 «2115 13 «ж БІЛОК що «йї3»У і поОоїеЗ швабієїйе «а У
ТУ сі ее ні вне бе тТйе бі Узі Уві ме о1у У ї 5 їв «ЕМ У. «вії» У как БІЛОК І . «Ії» штучна пюосвідовВність «тех Ще яд «ей» мні йоїва шасістшта «нюх її суз вує дар АБр Аа бій АТа Сує цує пек Фів авротує ТУг дев яян ї з І їх
Твготкроата Рго аго Бу Бек мує сім АТа бів її Тук Аа дврОотує 20 МУ ЗО
Тіе Аср Ав УВІ сів У! іє бій бве ай бев бек бір МКЇ Ав вро 35 АВ й го вес Біу Туг ТНе бує 18 до тує АБО сви ляхи гук БІ віз бу | 58 БО сіж ав тує їіе тує ви сСу5 тує нія уз віз ага тує Бекг АТа тує
БЕ Бій 75 ВО
Зегобіч Ах губ Ачі Сує Уа! бек ар обви їі їі їЇ6 уз біу вп щ що 95
Фу дів Аг і й га хат у тує тВе їв тів Агов чі Аве іви ази ще ще що бій бр аів ТУ бу бух Туг сего Тук Сен сСує Туг ух Куб бів зак 115 120 155
Ту вар дя Уа! ів АТа їі їу5 бу ей Аїа Уа! узі сіу ТУ дер ке: 5: Ж В даси бек нія ТВг оБго аіз Бео Туг біу Тут ага ага ті АБ ТВг Ахр ї45 130 ї55 150 чаї Аза ФІ бі віз ТУ СРуУу бін тує тів Тук І1в був Туг бег гу ї65 5 155 зі діа «У «і» 490 «Вій» Білок І і «2135 штУчна послідовність
Фа що «ах зоба лоїев Васі ния «У «жі» іні ознака «аййю СЯ. КТЗ І «Фй3» Хаа може бути будь-якою змінокислотою, яка Зустрічається в приводі «ай «Еї» зна ознака «ваєж ВІ). . (В | . «Ії» Хай маже бути будь-якою амінокиєслетою, яка зустрічається в природі ка «еигі» імша ознака «ейе В. С . І . «ееї» Хай може бути будь-якою змінсокислетою, яка зустрічається в природі кам «ЙйІї» їнша ознака «вай Іа, СІ І І І «фйї» Хай може бути будь-якою зиінокислотою, яка зустрічається в природі то «вті» інва ознака кави» Й. (Я І І «ттаз Хай може бути будь-якою амінокислотою, яка зустрічається в природі са «ееії» інша ознака «ай СЛАВІ НВ й й . «22ї» Хав може бути будь-якою змінокиснпотою, яка зустрічається в природі кл «вже знша ознаки кеге» Я СЯ , й й «неах Хай може бути будь-якою амінокислеотою, яка Зустрічається в природі «НЙ яке» інша ознака «доох СОБАР. СБ) ! «ейи3» Хад може бути будь-якою змінекислотою, яка зустрічається я приводі ках «ве їншЯ Ознака кайею (САЙТІВ , «223» Хай може бути Пудь-якОою змінокислотОою, яка зуєтрічається в приводі ай «ем їншШа ознака «ве СС , . . «3» Хна може бути будь-якою змінокислотою, яка зуствічається в приводі а «бак ЗМ. СО . І І «ей» Хав може бути пудьв-якОю змінскислотазе, яка зустрічається в пеироді
«раї» інша ознака «алй ЗО ОН , й «ЯЗ» ха може бути будь-якою амінокислотою, яка зустрічається в поироді «ек» «гії» інша ознака. «й 3513. КЗ5 й «айї» Хаз зоже бути будь-якою змінокисвотою, яка зустрічається в природі «аа «вії» інша озмака «ее ЗІ). «23» хХаз може бути будь-якою амінокиспеотою, яка зустрічається в природі «ем» «вві» інва ванака «жа ОБ СВО й , «3» хай може бути будь-якою амінокислотою, яка зустоічається в природі «ва «еаї» інша ознака «ай 3983. СС І й й «23» Хай може бути будь-якою зшінокиспотОою, яка зустрічається в приводі «ко» «Лк інша ознака. чекав (00). .596 й . й «паї» хХаа може бути будьеяною амінокисяотою, яка зустрічається в природі
Та Са ч«ееї» інша ознака. «ий» (435). . 435 й й «23» Хаа може бути будь-якою анінокиснотоюв, яка зустрізається в природі «ек «йеї» інша ванака «ше СЯ, ОХ , . , «їз Хаа ноже бути будь-якою амінокислотою, яка зустрічається в природі
Е. «2йІЇ» інша азнака «вай їЯБ4р. СЯ. ; я «3» Хай може бути будь-якою змінокиспеотою, яка зустрічається в природі «а «2» інша ознака «айї» хХва може бути будь-якою аміновислотою, яка зуствічається в приводі
ЛИ
«Елї» інша ознака «ей (ВБР. (85 і й «23» Хай може бути будь-якою змінокиспотою, яка зуствічається в приводі «ах 7
Мес сук бег сен ахр ніх чаї Аїда нії сів АБ веб веб АВ біб вго ї 5 18 ща тТве нів нія гує заг дп тТвг обу вів Аа іє Меб Аг Ні бів 616
КІ: 5 30 ап вер УВІ сіб Аго Туг сви Рго бі уз! біб ха! І1е біу АТа у о Я
Туб ака вго Ре сту чаї Туб АТа бек тТнг Або Бек маї їв обаї Фів
БО цен Ре Ар отгробів бек Аа го баг бів брго Уві Ха Ре аа вго 55 то а ЩО ази ТУК Хаа Аїа го рух йіа УЖ! бек уаї зів бїо ев яр бію ад 5 о 5 аго хна ТНК Аби Ууді бек біб су Те Кі Аа Тв Ре бій бує вет 300 05 ВЕК
Рне 5ег іє уз маії ТВг Уа! Аа біу бег Туг азп о їбо ей Зег 1у 5 ї2о0 5 ек ча! бек в5АаА БІО Ре Зег о бек бек біб ТВг Ага деп Аа Бін дев
Її 5 о йЗіш вне баг Агу ів біп бів 5еє їтТе ага УЗ! Твр бе свв ага бе 145 150 ї55 з кра Тук те Яр аб ів аго бід Туб їев бУб йТа дбр узі ака дев
ВЕК во Из тут Ті Ар зак хІТе бію бек захв аїз бів їі бін їіє юеу вне в5р
Я ЦЕ їз0
АгО Хаз біу Зег ніб5 вне цей Те обіу чаї уві меб біу біу їв ів 195 щЮ 205 їі мех дії бак бек те деп куз Ууаі сів Уві йо нія твг охла й а іх Ра да бів таб? Хаз із гу діа бег о туб біо Аїяа ев т о біу ій гів
Я Кв 245 Кеш век аїа бій тнг аз аз уз хХза ака біз Бек Меї Бек вав рн ес 245 о 255 ій аз Зег азр її нія вує ха ча! Уа! су б1У Ар обім чаї АЇа що 25 27О біу АВ їух Уа! Ха зег бір Ар осує віз ахр вве ахр аа та Аа и 25а 285
АБЕ ТВг ма! бБіу ТВ бек рго а5роБве уд! Абр рве ма! бЗег Зег тд мг «5 З го мет ви біу бі Ткросїб ев хай вух Ав АБО діа бій АТ Бу
В що 515 20 іїуУу5 меж БТ. ар їуг ха а5п дяп ТНг Тер дій го аг уз бек рух шк ЕКО и кН біш Аа бій хХаз Туг аа Абр оТуг ті Ар аа Уа! 613 Уа! хав с1а 340 345 яо
Зек а5пи Зег бег біу Ма Ако его РгОо бБег сію Тук Твг оку її Ява ях і БЕ 355
Тук абр ів асп бух бу Аїш бі біу аб Туг ї16 Туг рей хад тук 370 75 ЗО нія вує АТа Аг Туг Зег АТ Тук беб біб Ах Хаз АБО Хай чаї бег 345 Зоо 395 400
Ази Бе Іїа Хі ї1е ха сті аа бі» аБа ага аїд РгГО бек сту ТЖР
Се щі 815
Тит вух Ї16 дер Уа! Ар вез Ава Сі авр АВ ТУ ТУ вує Тут цед
Я Б: 430
ТУук Кей Хаа тує був іже бів Бек тТуг йвр ап" УЯВІ СТО АТ хХав Гу «45 що т45 ві сей віз Уві ша! еКіу бі Ар дя баг Ні Те оБкеа віз бко Хай щу 455 БО сіу тТУг вго Аг Хаз Аво ТВг о азр Уа! аа бій єїуУ АТа ту Ту си
Я ЩО БУ 480
Тук Хе ТУуг ІЗ Хаа тТук о бег ух о1у АТ я «Є й «Ем га «вай» ДНК Й Й «аї35 штучна послідовність «ви» моваевоїва йакітіта «Ой УЗ | Шо | Щ агпазазосї гобзесасоє бстсвісво засЕкастоз ясоОзассоас товесатяаа Бо зовсзатаєса здоасрососї дасосокюсат саддазаасє тодттувасу єтаєсвнсо 120 оєутовасо тозссоооює абогсасаас ссеттсдосо таїзсосоєє састовстся 159 остастсиус зак свна тотойсззацс всоссяесза зассадєсає ссстасссе ет цяїтасасто стссвназоє сатаскадха сазсзаааста абазадсссу всатасонає Зо зстацсоуса алаєззтсаз сзсоіттсва яававекЕсе сєсскуаавеє састцесосо 36 учаєсскатєа астїакїїао срчсзУсаєс восавідаає ссайсвоєау) єраваєссвє о затосзоаая дсозасскай ссосасссаа саозасяссс асассбюкс сстососсє «о зсзтзсзсдо астесстосо сузататтта завосодасо сссосозета кассозеаоє 540 віїєсєваєсаб зкосоасават товавтвста себовтсае асодоксаса тестя БО посотодєог тобосоюсоє зосаасєсаєо сексом ссвасазаої асводтодає БЕ сасасатасі апазіонаас саїтоссаза десзастаєю авосесєтаяє бооосвовЕе У їстостозоя стасооства атвассассаз восасаєсох собсстсссоз пластесоах во асссасзава стою сдо соозваєтов зесоасоасо соваааска кадезуєдає ко задосцовтї тсоасуєтсю Фуссовсяєс дсодозасек скесадаєьє сокодасеех во зЕїаосаося ссссаїаІ заозатЕсоо баастотося хадабовсає осадосозаа ЗБ задатодазо агтастаєза їзактасоєтою оссссосоз зазосяазаця остова що їастстоаєт ататсовсас воссдазато вессвваотв асестесвод песто зО050 сссзоатодає атасазнаах тоагтаєває сосаатвачно шсоссвогою позетатаєє що тассстосщІї зісвтававс ссостаєвоє пегтасссвзу зааасазада стосстаєа 1200 осеєстциєт тазттаєтак тавооцеває здаосасосо ссссдаосою гтатаєдава ей ассватотоз асттозаєоа зуагосаЗаї бозааатасє ста таса стасаванав 35 сазностаєЯ асаатокОоои адсзаєсано зчассвосою сеутоцеою созасзасеся їзко сасвесссєта сессвтаєза сбассоссоо зезсассо заг сзасоз побазесова То чакозасася кебатасєсте скастесаяая часта 3479 «ие та «з За «ів ДНК «213» втучна послідовність ве шк «вйї» мебаз5воїез швакткіна «005 74 щ зспазавосєт сЄодоассвсак сстєвесво засткастов зкезассває ссассакава БО звасваїтасєса зросоєсост Затоасаксаї сздозаввес саастозасо ссвестоасео че
Ччатосдаой созссдос аобстасзає єстеесозся сасвсосвхс сасівасєсв зво четастакоє заст стодсзазос ссессаксвзо зассооссєяу вестзасссє 40 заїтасатєто стєсозавос тобоїсноїа сазсаааато асоахососо обасасозває з
Ззеїзосеоса звасваїсня сасвтсксая дзаавассєсє ссссізаває Єастоєснсо 3650
Чавісстата асттаєтссво сосгзосоїс зосавіоває тсвосвоєслоу созаасксоє о затосвоааа асозаєтвад ссдсасссаз саоаосаєсс осбтстовс сетасУєсе Во осотасасод акессстосо созасаткся зазосозасо сбсодспаєтя таксдатаве 540 агксазатсаа згоасасавах тодзатестеа сетозхсуєє асоодоєсаса СетссЕТасо ЩО зосасзоасча сососвосюєс адсзассато пшсоссссода ссваєааацє асадасшає БО сасасятаси зазатойдає сабсоссзаа дссавдсєтасо ааоссєтаає годосазате 7-8 сесастцзоа сбосцоства засос аасасессВє спосте сссся озасстссцчає 7 зи сасаваа комода сеадацакозаА оса сицасе сива ка квасоецає йо ааобсоЧчатї гсозтостто оостоясаєс сгоюовсоє ссссаоаєЕє тва Зо зІсзосзаса тсстясогх обозасео озасіосса зацатзаєзе ссвавсозаа чо заантоЧаво зстастастав тантасосова оссскосоца зазоєзавов зесесазаве 190 таїостове: асатсоасос аохсоавота зіссацеота астстесо)З сотсосссх МО сесаотоЗає азгасозазає соастасває стсзавіяааза ососссооцод совка що тасєстохаєЄ агсабазнадс ссостатноє осстастсво ззаасаалоз сеосстаа 120 дестстуає: тавіїтатає тааооовває дозосасосе ссосовосую статасоааа ТаБО актсатаєза аєстозасов сопхсосаооє дохалакаєє єпрбаєєвата сбасзадааю 323 сазашіїтасо асаваготодя зосазєсяяо обостосов саоттооєао севсватсео ІЗ сатассссто стссзкасоз сСсасецтєца ассвасяєся абоєтаясвя суозассода то чЧсозутиса Єстасаксту гКастсєвай дудосеаа 1479 «а 5 «вії 3479 «ий ДНК і «ії» штучна заеснідовність «ах «йеї» шовазпоїва шасітіва: «00» 5 акразазоєт срозссасої сосссаксао засттастоз асозаєсцяє сгсяссатава БО зосватасся здосоосоєє датосоусят садовазаєс тооОттовасо стаескоссе 120 аддтотоваєюо хбассуооує аосттасаас сстттсодсо гатвсосвіє саствастев їі5о0 четвстеакос засто сеозсвзаас зсассассва аассесєвВх жежжзВсссе чо паттасзіто стссувааає ие та свасааааєв асоавеєссо са тасое за уетаосоцєя звасзассня сасатстсвя заазастост соссовааох састаєчко хо зчассстата зсстатсаО сооїзосоєс зоасазсаниє тсзосвосяо созаастодє о закосавааа зсозасттаз ссослессза садаасаєсс сосссодіє єстососссе я8о псозгасасю зітссетосоа сопла та зааосодасо стсесрцаєта ката ЗО актсннісва акососасцат тоззатїєто сттозксотх зсопптсаса ЄсТсЄЄТТВСс во посатозтая топосасосє зоасзатсата ссоїсєсєє сезатзвавеї зсвадеоає БО сасасатасс аозабзазас са ссзад пссзостасо задссстаає тобосавате тео екс овомх стос тав ВЕЖ застав Е ОК. цпавесЕссца т7щО аєсгаєдаза стос есВа соововсвоа обссуєзоосо созваоєута газсоскдає Б задаєдоаєє Есрасосєта досєдасасє дсроодасоє сєссадаєєє такое 00 дстаосзосО тесстаЕОІї сОопаЗкесою озастовоса заоаквасоє осаобовава Бо вадаточаху агсаєтасна сзатасосоо оссссосооя зааосаааов устав 102о їтатоста:ї атаїссозс зессовто асссававта всем сего ї1о80 ссесазідоас атзсозааає дассасцас сісааєзаао ососсоотоЗ одастатае мо тасстахціІї аЕсатаззас ссактавезас осесастезуа зазасааада ссстотосско щоб
ЧЕсСстоатї Євастаєтає тазвопозаас дозосясосо ссссеазесоз стасвсоааа 25 авітщшаттоа сі оаасза дозтосавеє сзааваснеє сасвЕсжака стасзавзазу що саавуєтасо аслатосода заосавссаао подстоосюю сасссютдо суасаветсо МБО скашиссст сс асой стассовєю зкдасаєсо асітевсоЯя сопеЧесоая мно песовосаса сттатаєсто стассєссвая ЗоЗосєсза 1479 «в» 76 «ем 1973 «вій» ДНК | Й «аж щтТуЧчНЯА пПОСЛІДВНІЄТЬ са | ! «й» обої ва ага зіозаавось соозесасеє состсаєсво васстасєтовз абузаєсуас ссассастава 5 яосватаєся здоспдсост датосцтсає саодзазаєс тодстовасо стаєстассо 120
Фтотодадо говстозЧас зосітасале себбгсдосо свБасоєдтс свсєастса 180 четассотос аасєттіттоа стоосваадс осуєсаєсво зассооісат тЕктазвсссе 240 даєтасатко стєсовавос кокосова саасадаато всбазоєссю остатасоває о етацдсойса заасавксва сасассссза завазесест ссєбовааує каст 360 езагсстаєз асітасссзо содіаосаіс зосяатолає ссзосадево сразастсое 430 аатосзоааа зсравісіво ссосзїєсва сзозосаєсс осутстодіє хсгососсте «о псотасасда аксссстосо бозатахста завосоцасо сссосдаєта гзесдатадс з атссааєсво агососарат тозавсссто ссЧИЄсНИХ асоцюєсаєа геесттасє 60 песотоасоз соовідосос лзесавтсасо осасссттсоа ссадізазвої зсзвотовдає що сасасахтасу ззаатовзнає састоссааа зссаоєтаєо вазссесває соодсвовіє те їстдстозов стосоостаа атассоссза зосатотевк сокссессся озассосвдає тво астсаєзава тосодтєдюо содаозовоз отсосовосє спааадтова садсоотозе во задосоцаєх єсоатостто оустрасаєс дсододасої ссссаратеє гоховаєтеє о пгхавсвосо сесстасої: добзасттоа зааєтогасз ззоаїовсоє псзбосоааа. збо аздасоацаао астаєтяєва сзатасатай осессдсаоа зааосавада досесаласе зе жхакшскозтт асатсвасис зассозадтоу зкссаовюта асссттсодо оосксосесх 1050 сесвотаває зсаєраовах Єдаєсвсуас сесзажзаад осоуссвоєво ддастаєаєе її1жо касстостс аксасвавоес ссуїєтасаує оса сзо зазасазаца сеосотессх їню датсскаакєта так: зачою заасовоса сососсссда соді татає дазаассаає БО попа сстох асвраочактос ауусечнааа гаЄстогате касоссєтяаа озадсзавоє КЯ ЕВ) тасвзсзаєо тпОазосває саздоресто дсозсзоєто ссоосоасаа кесасакнеє ЗО сстассок зсчектасси ссзозессвас зссцакокта зсдадзозає садова Я тасаїїїаїа стос тасеє єважосовст га 3473 ей «і БУВ жало» ДНЕ «13» тучна послідсовнноть «иа» ши шк «Жїх щоці поїва шагістяа «НЕ 77 аібзазацеєї тадассасаї сосесассво засгїастоз зтааассоає сассасава 5 зосавівсся аопссасаЯсх дасосоїсат садозаавес свазстовасо сезестоєсо ке зесосозаою сзассоцеас зосссасзас сс шосє саблсосатє састндсєса 150 дчетастасос засттіїтза тідосавазс ососсассву зассогсає стає ча чассасиссо сессозавис сосціснота саасазажто асдазосссо ухасасоває що
ЧЕтзасооса зазсзаїсва сасуссссза зазаастесх ссстазааує бастдесоєв БО ссассстаєв всукаєстао соогзососє зосазіванах сазсвосач созаасєтсоє 420 зазосязада зсозаєттао ссосассева саоацсатсє состав стос во псстасясод астссстосо сзатассса завосодаса певна ста сассозЕзоЄ 54 акісвассяо атососадає суваатсссто скковісеєє асоддчісася ЄтЕСесваєс ОО чосасчаказ сооотсоосяє засазісато зсоксстсов ссзасавуї зсаоосоЗає БО касаисатаєу зааасвазасє сзетоссзаО чФесзостаса заосостяає тозусацате 73 тСтостозаа стосзостаа асатсоссая зосасвє сесестесса ззастссоах ко зссасвана СаО соо сеозоясоца зссосооусо созяаотося таосцасоає ща задвсочакс ссуасоссте честасаєс Фекнвасеї стссзоВеєе тасовастих що
Чітаасвосо стсстасокс додавсссою совзассоєтося авоасдасос осадосаааа що запасообаза асбастатав сгвасасогов пссссососа вавасвзазаа дастсваві 15 їатостоас: вівссспасоєс вассозаєту акссядвука аїсссесода опстсосеех ї1о8о сссниозаї асасовааат траєтасозє сссаатааао дсоссодтво дата є що тасссдтате зесасазавє ссустагавЗе ЗсЕтаєтсво зазасааав сет усуєє Со тсждакттаз хтвнЕКастаа ОчОзаасоЗа псвесвеєєс соска тасопддавке 1380 заксосодчєс созасоаоох тосааоуєдов зайхасстоє зстарета сазданосва ї320 застасоася атохосавос зассавосоЗ стодсоутау садова савтесосяє во агссстостс сотасєдоіта сспесоЗаєє сзсасссата стзасозоаа озссеоводх 144й даутасассь зкасстутка ссссайавою ясстаа 1476 хі» УК «віз 16 «ей» ДНК Й аа» штучна посвідовні єть «год «гейх мозйеєвоїва тагісіва «МЮУ атозвавоєт сооаісасої состєвісво васєтаєтоа абозаєсоас їгассаказа БО зпезатасся додсовсесх датосогсає сеюзаааєсє сзогсзаасо стаестосса 120
Чоасосоваао годасіоопос воостасзас спосо стасасотєс састоаєтса 180 читасттоє застттксай сс ззаос Зсоссаєсво зассовтсає теттаассее о даттаситто стсспзаааос сс ка саасвавако абоавасссо остягясоває що ібїаосооса заасавісза сасаттісаа ззадастіс состозавоє тастоєсосо ЗБ ддатсстахв асжекаєстаа спосадсатс здсвакуває ссадсазсяо суваасксоє зей аакосацала ясуааксскай ссосатссяя свозасаєсс дсосстоаєс ссвосоєсее «що дсетасасов атессесусе таважаєста завусодаєсо гссосдаєса гассозеаоє 540 аітсазісац агосюмасеає тозавттсєта сттеоатсоєї асппдстсвса сесосхввоє що часова сЗосідосос звусзатссаєте зсогстссоа ссаасаваде асадатодає 6ББО сасасатаєу зозасолаає састессаао оссоностаєя заоссссває собдосзоаіє ТО «стастдада стосоуюєтав зтаєсоуєсая зосякоєсок сеї дласессдех 7 актсзсааза СОЯ есоЯ содапасода пссобсоЗося созадоатава масок е Бо зазчеюшатсе ссазкоєттао достодасаєє Феодозасає ссссздасех коговаєтее Зо чЕсаосзосу сессгасоєє ооо бдазссеєуса азозсовеоє зсазвасоваа ще ввазтодаао агтастаєяа Сзакасусод оссссосода аааосааадя оостсезває 302о татЗстовсх зтзЕссазсОс зоатссзвосо акссвозоєа зтссссцов ас 1050 сссвотодаї зтясоззяас сдаскасоас стсвакзаво зчсессоосаа одаскасасе зо тасстотаст вісатсазацє СспЕтаснос цшеттасссво зазасаваоа ЄКосстоВЕЕ ЕК їстдатткаа сСтастаєсза бддавасодя всасососєє сдаосооста тасцаянаєх 1260 вахсосоадакс созатоаооЗ хосвоосоза ззасасстах асстакоста сазоавесяа. ї32О аоскасєдаса акосоразос заксваоовбо стодсоусза схоче отоз свасесосах 380 асксссєкастс сукасооіта сс пак пасасєсозка стазсоваода воссавадає ї44О паобаєзее? ататсстаєта ссссазадав зсетах 1476 «вію В «ії» 346
«хе ДНК «ії» штучна послідацність «вЕ3» Же Воїва тагсісіта «Об» 75 зішчааацст тадЧассасоЄє состсеєсво засссастов асолассбає ссассахава що зУсавізакся засевсас часах саї сзодзааасс уставу ствестассо щей чатосоанй коасседвос збдітаєває сессссдоса стастасовс састодасеса що шЧЕтассвстос застісттоа ссдосавацє шсассзтсав зассоцісає стссаасссс я застасаєто стіссопзаязцю собогсзосв сласааватая збозадсссе зтасасоває БЕН цпЕєВОосааса азасаассва сасатттсза азазасеесє сестааазах састаєсосо 350 посатєсстата асттатттао соотаосоїє аосаатозаї ссадсвосзю созавексдє я2О засцеадааа зсозасттає сеусаєссва сацалсатоє девестоохє сстасосске БО ссотасаєто зсїсоссосо соааіастта зазосодаєю сїсосоаста свісдасвос 5-0 асссваєсво асососазовї тозавттссо тттоаісоК зсвовтсаса сегсссттасе БЮ
Часосооствв сщочеюшсоЄ восзазєсато дсессвксая селасазадє встає БО сасасатасєо зозасовазс сассоєсааи вссзоєсасй завссттаає сдавсачаєс м текостдаби стосодсевя зкаксоссяя восаєаксоє сустсосєв свастеєцає тво йгтсасзава ТЕпбовїсдю содасасода отсосовасй созазоїеса бвасоотоє 840 чосочасє ссовтоссто пассозсаєс Чтпобоасає стєсаввссЕ сусодаскех з
Зіхваєесаосо сссстатасї вобаастеоєс завссогося ваазтодасос зсадосоваа оо з2аратсоспано ассастакав сзасасоїоюо оссссосооя зазосачзаба постачає 1020 татострає: згатсрасєЯс зобсбавота віссвозуєа ЗЕсстєсоцо бвсЕсоссе 150 сссвасооне абасозават тааствевс єтсватаиао осоассаосоо сдаскатаєс що таєссоссої пссассатаа поєссасаї авсосттає сарзаляасва аоассасок їщю тсесоатттаз ссзетассзва сопазасова деасососсє сузосовіта тасозаваєї 1260 чЧчакесодатєх хтозасозоЧчя сосасобєоса заисасстої асссвтоєста саадавосай 1320 айітасодаса зтотодазоє вассазозоє ссоосодіво сгтодгоотоа сзаїтоовсах 138 аЕссстостє сотясооста ссдєсооасе дасзссвзасо ктзасоаодца пУссоозоох ле йавотасяєтк зтатссаЕва сессааайоо постава 1476 «ДО ВО «кі 1575 «ії». ДНК «аіЗ» штучна послідовність ее» «каві» Шосбхнатеа тагіє наз «НМ» ВО Що аїзазазост тодатсаЯсех тасссасво даасттасєтоя зкозассає севсситайя во васзатаєсз азоусудсеєт датосдїсаї сауодааааєс соодссозаса статсєєвосо 120 лото тозссооооє заастасвас ссткксоса тажасосотс састоветса во шктастекос застЕстсув ссбодсаваєс зсессаєсно зассегксає стскзасссе 240 паїтасаєте ссссоваадс тесоїсвоса сазсаавато аговасвсссо отатасоває 300 сстзосацся: зазасааксва сасоестсза заазазастесе сссєвазаці тзесасоКа що дзассстака асттатесво содтносоєс жосавсовах ссаоусадєзо солавеесоє 420 затаосаовав звсозатесво ссосвіссаа свозоасасоє состав сстососее «80 дсосасаєою аскссстасо созасаєстя зазосоезисо сссосоаєта єаксрасадє 540 агісззтєао зсосасадає соззесто сеховІсогх зсопоїсаса ССС сє БОС
Звсосаагоз содою єсує восааесата все сна ссзатанавї зсаовсодає БО сасасатасо здазтозває састоссазо пссвостасо заоссттаас содосеає го тстустваса стасоостаа абассосєсва зосатоссює саксстєсссв давсессове о асісасаяза сет совачасова чісодсоосо совзантота сазсоосдає ща забтсодчасєє ссдатуєсско дастозсасс дсддоавасоє сессаваєєт тогодаєтеє За пшезаосаосо ССссСкасоєє ддовасою даастогтоса забатозсоє осадосовав 9650 застава аїтастатаа сзатасзєоо оссссосоуа завесаааца оса Ох тасастуаії асаїсозсаєЄ зиссузазіо зтссадааєа Зіїсеесова посссасесх 1080 ссесайсозї атасозазає сдастасчаис сссзакаазо деоссодею дозах е їмо тасстосоаєс сортаксакав аосссЯтає адсосттіаєт сздазвасав злаках че «сіваєЄсза ттассаєваа одсдззаєдчез оасасосусєє созосоветя тасозааакх ТО сзєцієнійтх созатцзасоз тосзаотова заабсаєстої акебатаєта сваузадева 1320 ваєтасдаса ашсодЧанос захсааоово студе ютає кодсвоваяа саатісвсах зво асссстеаєтс сотасоокта ссдтсЗдатх васзеєсувтй сеЗасзавоя дассоовоВе ча даотасатсє атаєстоєта ссссазадою ства. ій «2105 ВІ «иїїз» ЗВ «ій ДНК «рії» штучна постідовність «аа хдаєї» вона їва такітіта «нюх 81 | : акдезалосєтї соозЕсзсиї тосєсатсав авсссаєстов ятозассває єсаєсаєаваа БО засзакассз ачзосооєоєт оатосассаї саодзанаєє содстовасз стасетассо зе бутатаваєю гозссодсоє асодєтасває сстттсовсо гагасосвтє сабтоассся зво пштастатос застесттоа стбосазасс ососсассао зассодтсяї сессаасесе я заттзвсасіто стссразааає батоїсааса саасвавасто асзазассса агзсасоазає що дІсаоспоса заасзаєсав сасосстова заааастксє сестдазаоє таєтоєсосо ЗБ ччаатссстата асстатетаз созєапснтс зосаатазає бсаасвосаз сваваєтсцє АВ звасосзовня авсозаєттад ссеосасесаз сацвасаєє осока секасоссєс ЗО псосасасдо вгтесстоєЯ тозаєаєста завосовасо сесосчаєта гаєсбасадє 540 асесватсво асососвоне совзассста сесассосЄ зсоооєсвса сЕЕссєВес ЩО шкосатаз судахоосос заслаєсато асо соя ссаасаяває асаоокодає вбО сасасатаєой адзатозавс састоссяяо дссаостасо язоссстлає соросвоаеє аа сстостозоз сіосддстав зак соссав засатоїсвх соїтістссса вазсієстах БО аїжсзсааяа боса ссоЗ сучасасова обсосопосо счзазататя сЄаосдахоає що вншсоюасе ссоатосето достозсаєє бсрзодасає ссссзояеєє собоовся 00 піїзосаюєз сісстасогх одозассєво дзастогоса задатоасос дсадосоваа з6о вада заао чітастатаа гаатасеатаЗ сссссосоов ззадсвавая Бостсавате Бе тасустоаєє атаксовсос вутсзазето асссаовоса зЕксетєвав оУЄоВСССЄ То «ссауєусцих асасозанає фдастазсорас стсвасєваац зсзссачеве одаесатаєс чо таєсттес зісзсавзос ссостатаос псстасссад зазасаваа стосаєтьесє чюЮ часті затсз ттзккажооЗ заасодвося сососсєсоа дсоостасас зазавеусоах нев: дкгасаєетоз абозодатос зобсодаааа сасссотаєї тзстогаста сазозацеза о аштвсдася акокодевос «аесаасцоє сбиюевсая ссосочєча саке 13 вессстустє сесасодсєта ссоссозате засаєсато сзасоаосо сдссоваЧе ве чавіватсє асакстєтя сессааноцо са ї1476 «05 й «вії» 8у6 «іже ДНК Я ї «Я» вучна послідовність ке» «Неї» мМосі5веїея та ва «ЯО0» 8 асовайвазст с ассасох састсаєсзо засттастої затозаєєває єсвесаєваа БО пшсзасаєся звдосодсоєст Засосарсає садоавааєє сс тозаса севВтстоссю ї2а дахаковоо сбаксооодс зоахтасзає сетстсваєе сатасусчеє сасєваєтся їво ціхастотоє паастетесва ссвоєваноє дсуєсвеєво зассацтсяє кежтавсссє 46 саттасаєта єтссазавос тетаїсаата сзабзааато зтваазсссЗ стасасцває Зо чЧеЕтвасвоаса авлаєзатсяа сасцетксяаа зайвнаєстех ссетудзаанеє пастохсоса зве пзассстата астєзІктав содтвосаєс восаатонаї СсзасвосяО созааєкеоє чо засдсздайя асозасєстав сєсабятксаа сапзосатєє осесеєтєниє секосЗссЕє що чеосасвосм асесСсстуєц сопватакіта зазосваса сссоєче:та баса сеоє 540 зкитсвзіїсва зсососацає гзазаєтсте Кто соЄ асо сзеЗ ЖесстКасе ща дасусдотоа сосодтодсоує здсавтсасто осоутсєтьсов ссааєзазоє асадоасодає ББО сасасятясо аовасвалає саеєтоссавя зебетасє зазссєкаас моабосацаке тей тстоєтовов ссосооєсая асятсоссяа аосасоєсої согтскссся онастесове "о зсЕсасзаза сСтесцоїсЗО содавасода оссусудосо совааотоса кадсоосовЗе щі задаєте ссратасттЗ постовсаєєс сснмнювдасає стіссвцаттх сосооавсксє юю песайсаоса кссстаєвст оудааєттов озассотоса заозоасоє Зсадосовав 960 засатодаво астасовтза таатасюкод оссссосода завосавяоя достсаваєх Мо тахвстовкї зіжесозсос авссозавта асссзавота зсссессово пого То сеєвіодає асасдазаває бовстаєдас стсаазїзаза осуссувсв бака що тассівІчх збсасзазає ссуїезтаоє осстастсва зазасвазов сЄтасо їМю часссвасєта стаставобо заасоцатся сосессссба особстатає даавастовх 1250 пібозсстоа асоводясоє аодсовавай Тасссотате гатоссттяа свабавосай 1320 афгскасласа зсутосзаоє загслаодво стоісостав сСбобовиоа сзастсасиї І3Яо аессстоссс сесасодіса себієдоВіє басвєсдата сСтаясовоюоє доссоововде ЕЕ
Ччайтасаікс атвссс я стссазаооЯ есстаа 475 хе 83 «їх 1521 «ка ДНК кеі3» штучна посвідовність «ее «8И3» есієнеїва швакієіва,. вроБоРАаВО Тнпіпевева5 «М» 853 св акоссзвасоа ясзазасооз заазааоКсси саасаодчай всвосовоасо свасасєода 5О зесосдаєє осавстаєте єсосвааєто зосесесто асовезесає свісоссоуЕ 120 псобзазіо сспотастаю стасоатото сггодсаває аствсаасої водалосєос 180 воваасацес серісвасув асотяаяакє засусоаото задясваєтт саававацесї 40 зссасцво ссзаласост севотассоа тистатаєс асецетатес мисоотозЕ а стївзатаса сдавсесаїє азвосозатс агсоаоавії зісзаєстаа сах з5о завадсєсоєа тсвазобтіая стаєстатєеє тессстассх састсвавї соахттсовх щ- асосакаосс сцеасоватїє созозатоуєє тестсєсота Єссавтисає севкоатЕКа а тататеткна засяє дозацчесстс забоуааскс сдалавадес аОтсвавасо ща
Фе обаса зве спозгас сопзадавоає атозасевсє сах кзасає стодноєсаах ОО касттсстає садосогаає частою тосососааї асаоієсава євсозатааа БО тахкассієза асствассаа їаст дає сккоассосао са соссудєее 720
ЗЕТОоКсвОї ссоссстає зоадсзастса гіізбодазо атаєбавайа асстсвсвее тво цдеаїстлаїта гЕлаовсосса сзкдатсорає зодозссссв дссосіжсоа ссоассоде що чусассассї ссбссозтса зесвЕстоєс ваадацатсо содсодссая пза9уассеЕ Зо паззазесцов ззоассзесоє аесесааасоса ссродаасєвсза созассесеє здатссває Ба ссдстаяссо асясттодвоа остов саїсокасоЄ возааосова астозааяаа чо сассісваца состоточас сссдсаоава зососдазасє схсоазатзса сасоцастає ОБО агксазсшцсво седаадечає ссзовосза: ссттсодооЯ тесосесеєє свуасоцаках Іо зсозаваєсЗ астасоаскї сзатавацас зесоцооє астатаєста сстац кає 1203 сасвазчссс Зісвтвосас ктасксаОяа засвазуаіє ососстсвоа сткаассвих 1255 агтаздоряа зсопдлосасо соссссолоє ооттабасої азассдатої позовах 155а
Здаспцаіосва пгодаваата ссідтастка состасазох восвавеєта срасаатасо 11850 зпааосваєсз зопвастасє чесаоїтеЧе зоіЗасваєс сесабаєсоє тустсскає НО поттассисє ові срасає спатостзає овосодзассо озобкраотя сасетатє їм тесаєсєса засобЗасста а її «24305 84 «а «Вій ДНК «йАЯх штжчна пОслідеВНість хо Їх кеейв жено їва шатієіща, КВекегвавова івшіпевсепх с» 8 ! ахозалпаоєї сосзссвсоє сасссвесзоа засттаєсав агозассдає гсассатава ВО зоасаатасєса зоцедосоаєє чакососсах саооузанаєє оз оаасо стажстасео 130 патетозаао созктосоЧче човттасваас ссКеЕсаасо сабасоснтЄ сасоцаскса ЗВО тасскос заст соз гптосазацє едссатсзу вассвоєсає сестзасссе зай
Заттасастз сЕЄсовазвОє стос ноха савсввзаатв збвассссо зсатвсваас БІБ пссавсооса заасвассва сасогітсяа зазнассесє ссстоаваоє тастассосо зо одатссєтаса асіттатттав соосаосоіє засвлатавяє їсвосаосво созваєтсос 420 ватосадаза зсбавксєво ссосатсєсва садаосаєсє осоєстдатє сстасоссте «ва жфеоптасасоо атсссстдсо говатакєсз зазосодасєв ссосуаєта тассваєвос 540 асссвавсаз атососазає спиааєссто ксебакссосс асоостсасе стає БО часова кочесвосає восзаксаса осохстссоя ссааізааоє асаоосвас Б тасасатаєз азаасоазає саттоссазо оссвосівсо заосєстаає тосвонее КО тетастоавоа стосоостяв втассоссва восзтоссоаХ сатієтссесв пазах тва астсзсааан стшевОесоо созабасвоз сгросСодросо соазаотота тадсодтоне во аниЕссочасу ссцакасеко достовсвеє обоЗоуасоє сесказчакоє сусоаскеє ОО
Четаосзуси сесстасУсх част коо даассаєоса зззасоасає осаовсозая БО зараза астассасла сазтасотоао пссссосоєа ваЗосазаоа бесссвзаке 1020 такоссцакт атассооцесза взаттаеєтатх оодсактаяса асассватає ассессодах 16850 чоастастакта осстозаввна сассавасах Зазваїссоз згзосазаво сваха тає що сіб аТас яїззафесза атататссо забастпата аслааоаєсо сзекаєсоза ОО схоааакста стассососз соатазаєсх ссодзавота аствоЗзїза дассссосав чо
Чататстаста сарсссова ссаосаксте саїстесаке зсстасссоє заавсасвоє 1550 зсапланаза ссзссзавоя табссадєса стасотаоса сстотосау сезсатуаєє 1380 стассасата зстасзатов тососєтоває дзасотоцто васотосааа Єосахоєсюва І цпасдасаако сосабтаєст оаїїтасаос бдсводустуда захза їі455 «210» 5 «ке 1533 «Ким ДНК що 2. ей виОосогіаоюоє пніпезсене я» 5 агдгсазасу зтзазасдос азааноєсто озасаобаза зсзосоаосі суасвісваа во акссосплаєс зсаястаєте ссопсвааєто азстсоєєто зсоасаєтаоє свусосесває зо пса соя ссостастао стасоасета сстодсави ястосватає зовавастоє ї18О відзасацесс ксттодасоз зсесзаааєс засодсозута забсасаасеї сваданачх вето асситтссзо дсзазасаєт саадокассо састакатсо віка с соссооєдає Зо сетазатаса сазасосатс воосдааеся атсолазаге атсзатстаз сассв зо зазацісока ссавасдіав стаєстоєєх сегсстассЄ састевачає сузЕсс Я асодасавоєє сдасодаЕЕє созоваєиєє сестсссова сссаоєвсає захо яко татаєсттаз аатсатссає зчааннксстс зашзвастс сазана аосславасе я зЗсаесоине: зазсодасає сєзавазачцас асоваєчасєс бУєскайасає содоосвох що саїттсЄстоає савососазеє часоЧостоєє сосососвзає асаотусЯао сасозасває бо тасаєстсваа аістдассла таОсте час бгсоктосао соосасєст сосок 720 агтошссуу ссосссотає здбсвастка тетасодзао агаставння вЕЕссостсю що
Чдеажссзака гсзазаассся сєпсоЗЕСНЯКх пбоуаєсска зесасетсов есаттсвоє 85 щсоссассі ссоссоувіса ассуєстасс задає соосрассва вас що двасяиєсозз азассаосоє ассазасоса ссооаастно соваєтесис вові сессавх о ссостовессу осасттодда ОстоутУстєо саїсотасоєЄ зобазосова астованава цео сасктстсцача спдхогодос сосовсяовза яосусчавос оссоодтася кесобаєтає НО жчепатазша сСтатсаєтод саїкзасвзає асслятассє сассавааце стасаєтова То їгззавноїтв ссазооагов аазкссзасє зогазадоза атаїєстостє згтсатосає 200 завостазяє атовссесдав саїсорасавс азадаттосяа ттассоваєт Звазтевасє 1-60 ассросачІ зсзададтсс зоаазосовє собоставва хсссосаада такстатаєє ї320 адіссбаатс воисвістоса сссостустає єтосссосза затасєсвує созааавасо во аксзазатася кесСяоЄтаєх дбостсааос сасЄдоєтсох дсатавееє асссвасово 144
Татзатдаті ссстзозКох сосна сотосзаато стасодаяєа тоасвасуєе 190 саєтатсспа гібасіссоє заозтодааа гай как «ее Я хеіїх Я «ій» БІЛОК І «Ії» штучна послідовність «ааіз Москва магтісіва «МЮ» Вб
Ме ух его іе азр нія Уа! діва Ні5 бій дп їех ів аб біЮ Бго
Х 5 10 Її
Тв онія Ні суб 5ег Ап ТВК уз мі Аа іо) МебЄ го нів віп бію в 25 Зо
Аби сви ча! Біб Аг Туб се бко бі Узі біс жа! тів єїу 13 щіу 35 о 45
ТУР дяп вто Ре біУ Уді тТук діа бер ТАК дяв бек уві ТК Уа вій
З що іви Раш ар о тго Бій бег Ав рго ек б все уві 316 Ре дхй го 70 ТЯ що дер Ту Ті Ав РРО кує ліз Уві бак Уя! бів бів ап Ав бів аа
БК Б зх
Ага тТук Тпг Ази УВІ ев СТУ був Тпг Хі ява Те бе сів вуз аз щюЮ і Зо вне бек ей вує Уяі Те мА Аа сіу чЗег Туг Аза ви РИ бек Ту 5 що 125
Бек уд! Зак АЗИ БЮ РНЕЄ бег зе ер Ти ТВ о за АТ біш АБИ 130 315 ВЕ. ст) вве бЗег Агу ї1в бів бін чек ї1е ага Уві кр зав бе аг і ви 145 150 155 150 їз тує ТР дзр его се) аке бід Туг ген се аа яр Уа Ако Ач 4655 о 175
Туг тів дбр очег тів бій ее др вія бій Кв бі; їв бе вве АЗр зо ї85 щ-ю
Ага тУуК Сіу БК Нія Бе гео; тик обі уві Уа! Меб бі» бу Аа 813 00 ЕІ
Кі мег Аїа бек обБег Твг одяп су Уч! біп Узі АБр нів Твг тує Су що 5 о доп оба тн їі Аа уз АТа бе тує Св Аїв су твР офуУ Фів ще 2и5 30 245 240
Бег АТа іш тиб аїз Аа губ ту АРО біп бе меї 5ег о 5ег ве 5еб
Я 250 5
Бій ачи Зак ав іє Мія цу їієе ма Уді Бі с1у аб сіу чаї Аа
Кс 5 ша сію вій іух УВІ ТУК Зак біу дя ух АЇз Абе вве ахв аа тер їй 5 ТЕО 85 дав Те Уві бі те Баг Бге аз вне узі ав Ре Уді бекобаг уд о 5 Я ге Мес сен біу Їіє тТгр бій бен буз уз Ахр абр Аа бій АТ вуз 305 що 315 320
КУ меж бів АєроТУуг Туг аби дея Ве ТР Аа го Аг гу Зак вух 325 з30 555
Бін АТа бін (іс ту" аіа азб о тТук лів дер аїн Уві бі ма! ж3е вів що Я 5
Заг давай Заг Бас бі Узі Ага вКОо БгОо ЗБК БіуУ Тук Тнг о Бу5 ТТ Або 355 350 655
ТУуг Аа їв ахп ух Біу Аіа бі; 1уУ дер тує тів туго ви Суб тТук ще ЕНН ЗВО нів уз із агф тує Бек діа тує зЗег бів дя гух Абр о Бен ен Су 385 330 35 о чаї Зек аеро ей тів її їі суб біу йча бі дів ака Аїя его 5ег ча 41й 45
БіУ тує Твг оту бів Бр Уві ахв іви а бів Аве із віх біу бух ло 425 43 же їер тТЖже би Сує ТУР суб іт бій ев тує аз Ан хі іш аа 5 ча | ях їі 5 бі сво Аїя ма Уа біУ у аз два бек ні ТНг оРгОо АТЕ 450 853 | я чо Ту біюж Тут ако Ага їТе вхр тує Ахв Уа! асп ов ш1Уу ад у 55 ка и 5 о бі біц тує жів туг Її Сує Туг бот зуб біу ді 455 що «а У «віх НО «ей» БіВЕЕ й , «їх штучна пропідовність о ОДНИНИ с «ай» мае поаїва йакісітша «ню 87
Мет ух Заг ву АБО ніх маї дів нів бій ахпй іви їв Аа бі РКО
Те НІ Ні ух Бек ази ТЯГ буб Мія Ай Се мес ага нів я и за 5 о йхп о вви Маї бів аго тТук сер вго бі Уві бу ма лів бу Ат Оу тТугР аші го РН бу Узі тТуг аів баг тТвг дже бек чаї тб Узі БІВ 0 3 що це РН АБр отр бій его дів го 5ег бій Ро Узі тів РНЕ АБИ Рго вх я а о аїр тТуг їїе аїа Рго цує АВ Уа! Бог Уа! бів бій аа Ар вію ав 85 ча 5 аку тує їнтг або Уаі бек ЄЇУу суб ТвЕ їв Аа те вне їв буз ази 105 405 що
Бе 5ЕГ іви бух уза! так оУузі Аїз біу Зег Ту Аза гібу Ре бег у вч 120 125 бек уд! Бек ап Є Ре ес бек Бек сі тВе згв ди дів бБіш Ай 1 що їй бін вне зег ага тів бій сій зЗекг хів ага Ущі тго зег бе аг ву
Щ45 іо ї55 зво дія тує те АкробБег сечу Аа СТО ТУ ви вух Аа АЄВ жа! АК АВ їБ55 о 175
Тук 16 азробек її піп ек оахв аїа біб пе бів тв бео вве Ар ї5о Я 190 ага тує є1у бег нів Ре іжи тн бу щі Уа ек бі СТ АТ Аа ща о 25
Хі мех ат13 Зек бек То ан бух щі сів Уаї др Мі тне Тук 01 ій 15 а деп ооіш ТвК їі Аїя су Аїя Зегоїме сш Аза іо ТР о бїУ бів їв 225 230 235 240
Заг ліз афіш ТнгоАТа Аа вуз ТУг Ага Бій зЗек МеЄ Зегв беє Рие Бек ях 230 255 бів Аби бек ар ті Ні рух Т16 Узі Узі бі бім Аяросіу Уві жів га 265 «70 ік ій су УВІ Тук зек су дер обу» віз ар Ве Азр вів тв ав ке 85 Кк ар тйг Уа! оіу тве бег Бго Ав РЕ Уа! Ар вве Ух! бег зве уд 29 95 зо
Бгто мек вви сту 16 тросів ен Сук бує або Ах аїв бій АЇВ вує 305 ца 315 А муз Мет Бі Аза тує Тут ахп АБ тб ТК Аїа вго АГРО БУ 5Бг Був 395 330 335 іш ат бій ї1є тує аїа й5р отже тів ах аїа Уа бів Уві Зв сія 340 345 50 5ег аеп 5ег зег б! Уві йго его Рго Бег Фіу тує таг вух 118 Ар 36о 65
Туг Ар їв ай бух бі із біу зіУ а5рв оТук Ті6 Ту бе Сух Туг
Зо 375 ЗО ніз ук Аїа Аго тТУуг бег Ааїйа тУуК бек бів аяй ух йвросСух сви Бенц 385 ко зр о чаї бег а ге їі ї1іе їТе уз біу аа біу діз аку аа Бго бе 405 ЯН 15 бу Туг ТК рух Те азв У! Ав ін Ява її Ар аа у Ту ух 820 425 3
Те Бе) тує сво Суб Ту вже вух Бій бЗеб тує до аа УВІ 1» Аа | | За «45 її. бж5 Є1У вео аїа Уа? ха ЄТУ 01у ав Аа Зве Ні ТВе реко Яїа о в 450
Бко Тмг Ту Туг агу Ага їі аз ТР ар Узі Ав Ов сію Аа ФУ
465 47О 475 «ко біу бро тТук ї1є Туг Хе Суб Туг его вуз Біу АТЕ я БО «0 В8. «вії» Я «аїйюк вілох й й «іїх автучна постідовнієть «ах | шк «вгЗж НН їва вага «ВО» ВЕ
Мет суч заг іеу ав ніх мя! Аїд ніх бів ви ван йо Аа інв РКО ї 5 Ів ї5
Твк нія нія вує бек ан Те Кух Аїв Аїа сен меє ага ніх бій їв о 25 3
Аєв іен уа1ї Єр аго Туг іви бро б1у уві їв Уа! їв сію аїа ЛУ 15 | що 45
Тук аза Вго вне сіу УФ Тут Аїй Бек Твб вхр бек УушіІ ТВгЕ аї бій
Бо їси Ве або Тго бій заг діа рго бек бій его Уа Же вне ай ВКО 55 то Ка во ай Тук Жі6 із Ро уз аїа маі бек чаї! бів бів дв аз іш да 85 о ще ага тує ТР деп узі Бек оту ух твгойте вай о тне вне віп уз дв цю щ що не зав фен вух УВІ ТВ Уві Аїа сіу бек о Тук ав це вне ве сію це а 5 зве Ууді щег Ай біц РВе Берг 5ег зегб ОТ ТВг Аго аа Аїд біб АБ ке 35 В
Зі че чеб дго тів бій бій б5ег їїє дво ма! тТеробзаг св ака ев 145 ЛВ. Ж Ше дів тує тТнгоАБр Звг Бей Аго сів Тукоїву вух А Авроуа! ко Ар 165 що 15
Туг їв АБр баг їв бів 5ег ар аа ба тів ТО 110 ре) бе Акр 189 іщ5 їі ага тує бі бек ні Рйе іо таб бі Уаї маі мет ту віх Аїя аа що гай 05 їі меї Аіях хвгозЗек тво дя вух чаї бів ба! азрвонів тн отуг 210 215 ай дав сій тТВРОЗТ Аа ву аа бег тує Ти вів беу Тв ЄТу вт гів
Т25 3 235 240 чего лій біз Тве АТ Аа гух туг аго біп беб Мет бег бег РНе ек
КС, 250 255 сій ап 5ег АБО Тіе ніз вух їіє Уві УВІ бу бі або біУу УВІ! аа гай 255 Ка сх аа ув уві тук бег сіу хр оїув Аа АЗОВ Ббе ахр АТЗ тер АЇа о ВУ дер тнг маі Бі ТнНе бег Бго яр ве Узі АБр бе ма! бек бек Уві 290 95 зо бе має без бу ті їго бік цес сує ух Ар аБр аа сів АТа вує 305 що 315 зо муж Мет бір Ар отує Туг дай аби ТК Отто Аа во Аа суб баг ув
ЕВ 33й 335 сів ата бів їі Туг АТ АЕр оту їі а5р аа Уа! бі уд! лів бій зав їа5 350
Заг АБИ Бек жег Фіу Уа! Ага РКО Рг Баг бі туго тагоїже 31 вхо 355 36о 365
Ту дхрв цен аха сек бу ліз сію бій Абр тує тів тує рец о Єже тує
ЗО 35 ЗВО
Ні ух Аїа аго Тук чек йїа Тут бег о дій аха вух Авр ев сСух во 185 330 395 0 узі бег абріви (1 тів жів суб бір» дача біу АТа ага Аа рКо Зак
Б о ад»
СТУ ту отв уз те Азр Уа! Ар цер Ап січ Ав Аа і ду вує 4205 Я З тут дво тУК бе) сСує тує уз їж бій бек Туг аби ап Уа! сів йата 440 445 тів кує біУу бешваїї УЗІ баї бі су др Аєв яве нія Твеовго Аїа 450 455 БО го тТуг бу тує Аго аг їїе вхо ТНК аАзе УЛ Аза зів сі АЇа Оу «55 Се 495 а щі ої ту 12 тує Її Су5 тує зак їух ві діа 485 о «и о «ій відак , . «213» штучна песлідовність «ех ; . «ВИЗ» осів лотаа пакт кіта «005
Мет іу5 бек їв д5р ні Узі АТ нів бій а5а се ви ап бів ко ї 5 то І
Твг нів нія уз бек йди ТНг бух АТ аїйа вен ме аг ніз сів їн то аз БІ
АБи їжи ма? біб Ага Тугогяу Бго біу маї 5іш уві тів Ф1у АТа 01у 35 40 45
ТК аа рео вБе сік баї Туг аїз бек Те Ар бек Уаії тТиг Уві бів нти 55 бо рен вве аб тр ооій бек Аїа бео бек отв Бео Уві Хе рН аяп о РГО 55 о 5 що ар туг діє Аа Рго був Аїа уд! бек уві біп бій ахп ахе БВ Аа 85 о 55 ага тУуг Те ди Уві бек біу уз те хв АБИ ТгР вве бій уз АБИ ще о
Риє Заг це бує Уа! таб оме! аїз бу зеб тує аби івц РНЄ бек обу ня їхо 15 аг омаї Зег аа Бій пе зве Зак щек бів тре де ав кій їн аа 118 115 з сів вне бек агц ів бів Бій бак бів АкО УЗ! ТРО беб бео Ага ев 145 їю 155 о діз тує тТИг Ачр заг іви Аг осіу туго цей їуз Аїа дер узі дго Ав 165 176 325 тТук жів Або чЗег їі бів бег аба Аа ія жі біб тів рей вне ахо їв 185 що ак тує ту как нік яйе ви ТР Обі маї маї Межє бі б1у ат Аа 105 В 205
ІТ меж аїв Зег бек тТнг о дям ух чаї БІЙ Уаї дев нія те тук вії а із 220 деп бів тає хле АТа і1ув Аа Бег Тук біш аїї бе твгобіу бій гів аз 30 мі 240.
Фег аїї бів тНгодіа із ух тує дго сій Зегб мех Бег о Зеб Ре вве 245 25 255 бів Аза Зег дер І1е нія губ тів уз! узі Ту бік Ар сіу ува! Аїа 255 ЗВ сі ай їУ5 ча) Ту 5ег соту аз бух Аа Або Ре аа Аїд тр вів 8 Ти 85 ар оте Уа біу тне бек РРО Або Бе уз! дя Рне уві бек бег чаї
КО 595 з го Мек це Біу хів теробію сви бух ух ар Ар яїа біп АТЗ Був 305 Зі 315 420
Ку має бін АБИ Туг тує два ачн ТВг тер віз Рго Аг о БУя Заг Був 325 БІВ 335
Сіш аз сій їТе тує ай АБротТує бе азр АТ за! сбіц уч! Хе бів
Зо 345 350 ет ави 5ег бек сіу Уві део го во Баг біу тує ТТ бує Хі Акр ї55 збо 365
Луг ВЕ жо Ап бує Біу діа біб бБіу деротук тів тує ве су ТУг що 375 ЗВО ніх уз Аїд ага Туг бег Аїд Туг баг біш ай вух Яр Суб Ууші бог в ЗО 95 що дей іо їі ІТє Її гує бі а5Б 1 Аїз ав аа РРО вк су Тук щ05 о 445
Тнг сух жі ар Уві дер івуи дп біш ав віз біу Біу бує тТуг ву зга 425 430 тук кер сСух Бе ух вує бів бек тує йбр Ада УВІ їн АТа жТв бує 43 ча 445 сту свои Аа Уа Узі і бі дер ай Зк НІ Твпге ге АТа Вго тує о 455 а60 сім тук до ага тіє йхр тТВе джр узі ди Сів сію аа сту бі сін 455 47о 475 ЗВО
ТуУуг їів тТуг Хіїе Су Тук баг тух біу ДІВ вх 490 кох 0 «іі» Я «ій Білок . І «ії» штучна послідовність «ввіз ВоопевОоївя шаєткіта «ах 90
Мет іух Зек ів лев нія Уа! дії ніз бій Аби ен бен ах бів ге
Її З о її
ТВ нів нія ух щаР АЛ ТНК Ух А Аїд Се) Ме АгРО і БИ ТИ та 5 30 дя" кер чаї бів АгОо тТук ва вее ЄЮ за? бій УЗ хів бі аїа бу 0 45
ТУ дей ВР вве біу чаї тує Аа баг тТаг дяр бек МАК ТР оУЗі бій 5 5 во мен Ре д5в Тгровзій Зег із Бго его бів Бгто уві ї116 Ре два вга 55 То 75 во дер тує хів Аа Бго бух АЇз Уа! баб оуді бів бій дзя Аяр ЗБ АВ вх що 95
Аго тУуК Твг одео чаї век сту бух таб Оожів абА ТВг о ВНе бій сУух яп щю ць С
Те бак ьеу губ Уві Тнг оУаї Аїа йіу Бвг ту ди бу Ре бек 1у 115 ї2о 1х5
Бег уа! бег Аза бі) Ре б5ег зек бег бію Твг о аго аа Аїа зі АБИ 130 115 140 сію Ре чек ака їі бів сти 5егоїіє дра ма! То бег їву Ага ів) 150 ї55 ї6О аїа туг Тк Ар бег во) аАко бі туго сво бух Аїя Авр ха асо да 185 17 їх тус лі ар бБег Х1е бій чего Ар аз бів їі біб бів Бе) ее дев 180 185 90
Ага Тег БІу баб нія Не іво те бі уві Узі Мет біу 61У ах Аа 195 200 205 їіе мес аїа его бег ТВ вай бух Узі бів У! АЮ Ні ТВК оту І «10 щії5 «о деп бін їВе Кіз йаїа це5 із чек тує сів аа ев отак обїу біта Та 25 230 235 жо бек АТа біб тн аіа дів Сує Тук яку бій бег Меї 5Бег Заг рне зве 245 КВ 55 сів вн бек йо їі нія Бу їТе ув! УВІ СТУ біб дав овіу Уа! АТа яБ5О Б и пі віз суз Уа! тує Бек Оіу ахр ух АТ азр РАЄ Ар Аїа тер віз 875 БО 5 дер отяг УЗ сіу ТВ бек Рго Абе Ре Уаі Ар пе узі его обег ма! з 295 цю
Ргео мех ів бі їі те бів бе) Суз ух Азов йо АТа бій Ааїв бух
Б 310 З 32 уз мес бін Азо ТУ Туг аєп Аби їйг тер Аа вро аг вух ек був 325 3 335 сі АТа бів жів тук йіа дах тук ІТ дер вів Уві біюш маї ІТ дів
НІ 345 З50 цег ак бог о Зег біу Ууді Ага вро бго его біу тує ТР оБує Кв АБО 355 З ї65 їтУк ар вен ап сив сік аа бІУ Ту ар тує ів Туб ек був тук
ЗуУй БЖ в
Ні ух АТа аг тує бек дів тує зат сі Аа бух а5Б ви су У 385 390 395 400 ваБ або їец ЇТо Т16 де рух Єву аа бі аа аго іа вго бе СУ 05 а 15
ТЖг ТВг о Бух тІіє йбр ма! йзр сен ази бі зр аа біу бу уз тує
СР Б я
Кей Тут ву Суз Туг ух ух віп дег Туг Азройзип уві і Аза Те 435 ча 45 сже Щіу вен аТа уаї уаї сбіу б!у йБроазп его ніз Тк рРго АТа вгОо 455 «50 тТук щіу Туг дга ага їі аб ТК аз Уаі Аза Сі біу із Бі оі1у 5 4/0 85 ЩО ів тує її Туг Хі Су5 Туг баг фу віх кіз 5 49
-211з ЯЗ «ей» БІЛОК й , каїї5 штучна послідовність «23» воюємо ївеа швагібттща мех ув Бек іву ар нія уаї ЗіЯЗ нія біб АБИ рено іви Ай бів го 1 5 їй її
Твгонів міх цує Зег ав тик вуз аія дія це) Меб ау нія Фів бів 20 5 30 а іем узі бій аку тує ев ргРа бі узі бів» Уа? хів 61у Аз сту
КІ БЕ 45 і
Ту Аба РРО вве сіу маї Тук Аїв бек ТВкК Ар бек жа! ТВ Оу! БВ 5 БО іїво вне аАзр о тго бів ек аїї БгОо Чек бів Ро Уа! хів вве дви вто па то 75 о аеротук жів аід го бух ія Уа! Бек уж! дій сіб ап Азр бін Аа 85 ІВ. З5
Аг тує ТР асп жа Бе об1у вує те лТе аяй тТБе вне пів бух леп
ТО 05 о те Заг іей був Уві! ТВ отУа! аа біу бЗег Туг ам Бен РНе 5ек іу 315 о 15
Багожаі зак дей пів вве бе чек ес біб тв аго кап аа бів аба
Щ5 я бі вне Баг аку їі бів бів заб ї1іе АР узі Тк бек во аку ее 155 з350 155 5
Аіа тує ТР АБЮ Заг Бей АБО біб туго рес був ата йо УЗ! дгу ху 1855 170 175 тУг жів дхр обег їіє бБіп чек дер аз бій тів сів Її рез вве ар
ЗО НВ 50 аг тує біх бег Ні Ре ів ТК обіуУу Уа! Узі Мет бі бі Аа Аа 355 200 205
Хе мех Ав черг зве тТнг ази бубз УЯі біб Уві Ав Ні ТК отук оту о о аа ази біс ТМг 16 АТа вуз ід яБе тує бів аїв ви таг щі сій ЇВ вай 230 35 240 чек Аа бі: твк о атТа АТ же Тугє ага Бі Беє меж бег Зак вве баг 45 м 55
Чіп дха Бек ахов хів нія губ ті ма Уді бі бу яко ву ма аї8
Бо 255 Й сі Аа кує уд! тує зем біу взв из Аїа АБО вве Аз АЇВ тро АЇВ й що «3
Ав ТвЕ Уа! біу Те окег о Бго ар вве УйІ дер рне Узі Заг баг чаї 20 95 КІН.
Веб Мет ей су їте тер обін ів Су5 гГу5 ав ар аа біб АЇа бух
Мо 315 за мив Мет сту Азо Туг Ту" Аяп дви ТОР тро АТО РРО АгО ух Заг о гух 325 що 335 сів аїа бів Ії6 тує АТа АБ тує тіє азроАТа маї сть ма! Те їв в що 50 его Аа аг звг оіУ Заї го его Рг Бак обБіу тТук тег вує ТВ АВ 355 во Ба
Тут АБИ іо АБ бух С1У Ааїа бу біу аББ о Тує її ту ви Суб Тут ща 375 | ЗО
Ні уз іа го Тук аг Аа Туг бек сію Аз" суб Я5В Суз ви та 385 Зоо 35 я бег а5р ів т16 тів ї15 губ б1у ахй с1у Ата аго Аза РгГО Бек 01у 805 410 ях ту ТЕЕ ГУ І11е ав УВІ а5р бу Аби бів Ар Аза зіу БІ губ тТуг що 5 40 іви Ту цец бух Ту їух ух бів бек тук аб5р ав" аї Біб із ї1е 435 ЕІ 45 ру біу сер Аїя Уа! уві піу біу Аєрв аби о 5еб ні те вго Аїд его о ОО
Туг бі Туг вго Аго ї16 Ар так д5р о уаї ази бів сію Ата су у 455 ЗА и В сів тує бів Тек хів Суб тує «ак гук бі да 5 290 «а 9
«І: Я «ей БІЛОК й й ей» штечна послідсвні єть «ей» це й «ей» кн нео ва вага «800 о
Мекх був Заг ієц аз» ніх Уві АЇа нів сій Авт бе цен Аа Зі его ці 2 40 4і5 твг нів ні уз Зек ази ТВ вух АТа АТ Бе Мек ага ніз бів вій 20 25 30
Ап Бен УВІ біб АгРЕ Ту вен бро сту Уа бів маї хів 615 АТХ РУ 35 40 45
Тук дя вка Бе бі ма! Тук да его отнк дер чек Уа! Твгомаї бів
За 53 Ів іви вне ака тв бій его аів го ес бін бге та ЩЇ1е Рве ах овго 7 їх ЩО
Ар тує її Аз бго уз АТа Узі баб оуа! бів бій Аза Аво біз Аа 85 що в
Ага Ту ТВг ах У Зак Бі Бук ТВг хів аха тТЯт Ре бій бух дей 1 305 що
ТЕ бБег іо вух та Тк Уві АТа СТУ бек тує аж Бен Ре бак су що 2 155
Бег уд! бег аяй пін бе баг зег чеє бі ТВ го йхйп аа бі да
МО й А сію вве бег агу ті біб біб бег їв дго Уа! Тер обер се) аго гео їщь 5 ї55 50 зів Ту Тк азр ее ге) АгО бі туго ввби був аїз дер Уві аг хв 165 жо 1275
Тут хіє азр о зег о тіє бій чек дер АТа сот6 жів бій Хіє ве) Бйе а5р 1 їх То ака тує біу бек нія Ве во Те бТу Уйі Уаї Мех 15 сіу аїв Аїа 195 а воїх хів Меї 813 бек яег Тег АЗИ цех УВІ бів Уві йо нів твг оТує 1 -1о0 215 22 ази Бін ТвВгоїів АТа бує Аїв бег тув бів аїш сво ТвеоЄту 16 те жах 230 35 я аг аіз біб таг від вів бух Ту» дгоа бій Заг мес баб 5вг вбЕ бе 245 ЗО 235 сіп аха Заг ар їі ніх кух їі маї Уві с15 бі а5р бі Уа АТ 80 й У сі Аа бух УЗ! тує бек СУ Або бує Аз АБО ве або Аа ТК АТа
Ви «а «55
Ар оїг Уа! о1у ТР бек кро ар пе Уді Ар впе Уві бег бек уд 29а «98 З00 во век ев боту їв ТВ сі ей Сує ух Ар Аяр Аа бів Аа щує
За З ка 32 ув меж Зіш ахр тує ту ака АБи Ти" Тгтр АТа вгОо Агу бує вет рух
Би що 335 січ Аа бів ї1е тує аз ахо тує тів ахр аАїа Учі бів маї 116 бів
Бе 345 350 ек абп заг оБес бі а! Ат го бго Баг піу туго те же те ав ї55 БО 365
Тут Агв сви дей кує сі діа Бі іу АБИ ТУб З16 тує ібн ци Су 376 ЗУ БО тУук НіЗ бух Аїа вро тує бак діа тує зек біз Аа руб Ар Сух Узі ще що 395 400 аг аз сво їі хів жів бує ТУ дей у аа аго аа вго бев бі»
ЗЕ о | Я
Тут ТвВе Гуз 116 Або мні ахроіев ай сів яв аа ТУ БУ ух тує 42 ща 3 іїей ту" ви Суз тТуб уз іш Бій бЗег ТуУг азр ані худі БіШ аз її 435 4 445
Куб біжу сен аа Уа! Уа! бі бі Абр аз Бег нії ТП вко АВа РгО 45 55 450 тук біу тук ага Агу ї12 Ар о тТнг аеро Узі АБа біб бі Аа бїу біу
Яць що 75 ко бів Тук їі тує та бує тує Звр от ує Бі а 455 що «Нв 9 «ее» БМК
«аїїх штучна послідовність «ої» ей зБоїея явив «Яке 93
Мет уз бег івги аАБр нів уві Аа нів біп Аби цео веу аха бів рго ї 5 зо їх ївтб нія нія іму 5ег деп ТВБ гу іа Аа ев мет ака нів бів 61 28 25 30
Ап іен УВІ оф Ага туб бе его сбіу чаї бі Уві тів бТу яїв є1у 35 40 45
Тс А РрО вве Сім ма) Тук Аїа бек тТве лев Зак о уді тв оУщі МИ 30 55 й іо рве яахв тго бів 5ег від во Зегб бі) вто Уві Хі6 Ре ба вго й 70 75 во дев тує ті АїВ вге кує дів уві Зає ущі бів «і» дей дер с Аа 85 за 5
АгО тує так оахн Уді чего бу ух те ї1е аа Те вве бів ух яв 105 5 о вве Бек іви бух Уаї ТР оУді віз бу баг тук ав іву рйє его біу 135 о 125 зек уза! бек дя бі) вне бег хег З6г сто ТК дго аБа Ай б АВ 13о Ії 145 бі вве бег АгОо Те бій бів 5ег їі го Узі Тер чек без Ако мо | 50 155 1
Аїа тує так ар явг ів Ага бі ТУР ішу гу АЇз Яр оуаії ака дер 3655 176 175 тує хів ар сек тів сій бек ав аа біп хі біб 16 ів РНЕ дев ї8О 155 50 ага тує Біу бек нія Вре ів те біу маї Уді Має су о1у аа Аа 135 КІ 205
Їїє ме АЇз бек бек твг ака уз Уві біп уві Ар нів твготук вію 215 ки
Аа біюш те хів аїа сСух Аїа бек ту ЄТЬ йіз сво тк єї бів ті 225 о 235 о бек ката Біб ТВР о АїВ ді ух Ту дго бів бек мес бек бек Не бек
245 з5О 255 сій Ап Зег азр хів нія вуз ІТ Уві Уві іу біу хр сїу Уа) Аа зай 5 Є
Бі Аа кує ча! тТуг 5Бг бу Ар Кух Ав йзр Ре ав Аа тгр А їв 275 ВО 285
Ащр таигоУаІ біу Тиг оЗегорго Ар вве Уві Ах рве Усі бБег Заг Узі що 25 ЗО
Бра Ме іву Бі їі6 тго біб їеу Суз рух ах Ах Аа Бій аа Ух
Зв БАКУ Зі 320 зу меж біо Ар оту Туг дай Аби твг о тРО АТЗ БгРО гу Ку бак гу 325 36 335 сіб АТа бій їіе Туг Аіа АБротуг Пе а5р о аїа чаї біз узі хів бів 340 345 ї50
Жег Ах бе бЗег бію уаї Ага вго Бго Беб біу Туг Тк бує ЇТе Ахр 355 185 365
Туг ар іїву азп вуз біу аа бі біб дер ОтТує Її тТуг це сСу5 їеи 378 ЗУ ЗО
ТУуг ніз суз аі3 АР тує зве діа тує Заг біб а5й ух ар о сСув ха 385 зо 395 00
Фег ар івц їі її ее їує біу ап біу а! ака АВ рго бек ТУ 405 40 45
Тук ТВЕ їу« Іїїе й5р уза! Ар ів ази бів Ав Аа бі іх уз ТК
Яо 25 3 цец тук іву Суб тує вує Буб біп ек Туг Аз АБ Уа! бів аа 31е 415 Бе 4 уз біу їв Аа Уві Уа! біу бі Ахр ай чего оніє тб орто аїа вко 550 5 ЩЕ
ТУг біу тТуг го ака бів АБр отак ар уві аа бів бі» ата єр шу 485 БЖ 475 а бід тук їїв тТук Хі Ск тк Бак бух біу іа «85 498 «з «ке» БІЛОК І І «вії» штучна послідевнієть
«ее | 0. «83» мора5поїва ваті сіва «НЮ
Ме бує Звк бен йо нів ма! Аїа Ні5 бій Аа еб сей ода бів Рго
Її 5 їо ї5
ТнЕ нів МІ рух Баг Аби Тк Ку Аїй Аїа меш Мек ау ніх бів Є зо 25 о дп овеи уві сів ага тує се го бу Уві бій уді 316 віх АТа оту
І я 45
Туг ден вро РНЕ СТУ ма! Туг Ай бег ТК акрозає уді тв омаї сів щі 55 БО ем Ре дер ТгО бів бек аїз вго беб бів Бго Уві Хе Бе Ая Рго 7 75 ко
Ар тує її від го уз Ав Уа Зег уві бій бів ап АЗр. бів Аа вх за 95
Ага тук ївг ав узі Зег о біж уз ТВйг жів ап Те ва ота ух дп 100 105 що бе чес ви іує ущі Тк чаї дія біу бек о туг дей во вне ек ту 315 МО 15
Бер Уві бек аа Сію Ре 5вг оба хег бів Твг АРО два аїа пі АБИ 130 135 140 бів Ре хегоагу хів біпобів бек їі Аго ма! тТгробег без Ага Без 145 150 135 їво іа тус ТвигБ вх бег їеи Аго біо тТуг ьеб сух аа азо ма! АгОо Ах ї65 178 ть
Туг хів Авр Бег 116 біп Зег авр о аїа бів їі 15 116 ве) РНе Абр й 185 ї90
Ага тТУв йіУ бек НіЗ Ре Бец Тег обі уаі уд! меє бі. сту їз Аїд 195 «ОО 205 їі мої АЇа бек заг ТМг оаєй вуз Уаї сів Узі аеро нія Тває Тук єю 21 215 28 аспобід те хте АТО вух Аїш ек о тук біб АТа їео тве боту бій Те 725 й 235 740 чего аїа бій твг о АТа Аа їує тує ага бій бег меє хек бег Ре баг 845 Ки о бів дха бег Ав Ті нів губ їів тд! маї 61 су зо бі ма! АВ
Ка. 5 то
У АТя уз уаі тук Заг БіуУу ар ув АТа Аще Рйе йо Ав то ав 275 ВО ЯЗ щи тяг Уа бі тТвК век го хр обве хв! яв вне уві зер Зег у ж т95 ЗО го Мет фе бі іє тгробїВ се Су вуз ар ар Аїа Бій АТа ув 305 310 315 Зо зв Мак бій яр тег ТуУуєб ай Аявп тег Тео Аїа Рео ака рух баг вує 330 335 сів вів сів тів тує Аїд Аа тує їв яв аїз Уа! бів Узі ті Бій
БІ шо 53 ек Ав ек бек обі ма! ако Ббе Рго его біу тує те уз її ар 355 БО а
ТУг д5ріво а5а Ух бу дів бу біу Ар отТуК Хі Ту гео Суб тує 170 375 | 380 ніх ух аа Агоа туг аг Аїа тут бек біб Ася їуб Яр бує баї баг о З95 | БІ вк іє Її (16 їі їуб5 біу дви піу із Ага АїВ РгО баб о бтУ Тур ях ЯК 5
Твг сух Ті аБромаї акр беу Ахи біш дер ліз Оу СТУ С ує Туг ев -о 25 за
Тув бен ів бух тує губ іже Бій бек тує ар ази ма! бін АТ: її 35 а 45 ії: біу іво діа уді чаї сі біу дБродби Зеконія ТВг орто Аїд о вго 450 455 0
ТУує біу Тут аго ага ї1е азр Твк о аєр узі аа бін бі Аа сту іх жо | ИЙ СЯ: шо бім тує їі тут хі Ск Туб ват зуб біу Ах 485 Я «маю «ві» 49 «ай» БИНЖ й й «ії» штучна послідовність «ее» . хижі» мосізноОоЇев щагіткіта
«0» 95 мет бує зак вяо ар нії ма АТа ніз бій Аа Беу Беца біо РКО ї з то ї5
Тв нії ніє суб бек аа тк губ діа АТа цеу Мет агу нія єї сн
Ко) в ЗО аа рем узі сто аг тує вей вго біж маї бів У! хів 1 АТа єїу її 40 45 тук авп Ро Ве біу чаї Тук АТа Зег тк дяр Бек Уа! ти УВІ бій
ЗО 55 що їез Рйе авр тео бій чого Аїя РРО Зег бів Рго Уа) ї1е вве дет го
Ба то та я
АБВ тТук їв аїа РГО Суб АТа УВІ бе уві бій бій Аби аяр Ти Аа 55 Зо з5
Ага тТук Тнголяв У! ве СТУ бує Тв хів Аа ТК вва біз цує ява 100 105 110 вне чегоіеи цу уві тиг ові аа су вес тую дя се не черг о оїу
Зх чо 5 ек уд! бек дя бій Ре бег обег бек бій ТвВг о лео ав дія бів Ап
ЦО 135 1 бів Ре зег аг біо бів сій Бек І1в Агу Узі! Тр Бек іви ага ев 145 80 їх ї6о
Аа Тук Тйг дхр 5ег цвео Ага бі) туб бви цу5 Аїа ар оуаї Аг Ар 165 о Ма
ТУує їі йзо Бег їіе бій Зег йзр о Аїа біб ї16 біб 316 ви Ве а5р що 155 90 га тує віх чек нія Ре веу тТпгобіу уаї Уа! мет бі бу АТа яАїа 195 о 5
Їїїе мет діа Зегобег тТпг одха цу Уа! бій ма? абр нії Те туг бу жо 15 о ака біш те тів аа бух Аів вк отуг біти ліз бен пак Ту бін ті кеВ «30 45 а
Зак Ата бів Тнгойів біда уз тує аго біб Зевс мес бек баг вне 5ег 250 255 бів ден Зег ай тіє Ні уз тіє УВІ Маї біу пі АБ ау мії аа тео зо5 то біж Аа вух ма! Тук бек бу ав ув іа АзЗр РЛЕ АБО Аа Тер діа
Яй «50 285
Ап ївйг Уа біу Тйг обвР РРО Абе Ре УЗ! хр пе уві бег бек Ма 230 95 Мю
РгО Меї їй бі їіЄ То біб ве) суз сух або ар Аа бів АТа (ув зах 315 315 328 муз мМеб сів дяр тує Туг дщй Аа тик о тро із РРО ага бух ев гу 325 ЗО 335 сін аів бів їі тує ія ах ТУР Хі Ав ліз УЗ! би Уді Зв їв за 345 350 бег Ав Заг бек бі узі Аг Бко Рго бегобіу ТуУБ ТВт рух Тв АВ 355 350 з
ТуУуг або ву Ай су біу Аа біу сі АБО тує тів тТук се Суб Туг зл 375 ЗВО нія ух А1З АКО тТук 5ег Аїя тук зег бу зап їубє Ар Сук чаї ев 385 що 55 ще
Азробеи тів 16 їі вує бі й СТУ АТа Аго ія вРо бек о боіу тує ях що 415 їнг ув її аАЗроуві азроїец йха сі ар аа єїу бу яе Тут кКец 2 аих 430 тує іво Сух мен тує бує цу біп б5ег Туг аБр ак ча! біш а1з ге і 440 445 іх оіу ів А1з Узі Уві бі біу ар ази баг нія ТАБ овгОо Аз РКО ящй 455 450
Тут біу Туг аку аго їі Ар ТАг ах; о уУді аа бів сту Аа бі су «055 470 75 450
Є тує їі тук ті Суб туг баг ку біу віз
Се ем 5 «231» 505 «аВї» штучна послідовність ке» «ие» осі веїва шагієіва, РеосогРВавших Зувіпевсеве «ЗО» ЗБ
Мек Баг бай а СУує ТК обіУ бух Зеб феву бі бів бі йхи бег 6 1 й 10 їх ага азо уні бі тіє вка ар ага дал о Туг Не Ага Куб ви аг Бе
КТ КЕ 30 рве аз а Тв Узі Жіе із Фі Аа іш мех Ті біу Тве ее тує 3 50 45 ахромаї вне біб був Туг сСуз ахи Уві біуУу Заг осух Ме Ах Зв Сеу 5
Ве асп сії аг Гуз хтів аєм Аїа зер о бію 555 ака Ра бує бує уд 655 7 а Бо
Те їїе ев біу гу Твг їв уз узі Бр тує Ту Хі дар КЕ ТУЄ ек ча! БіУу ар ву ух тує твг Аа Аа Зегб біу біш зеб Кі Бій що ї05 о баг тТук біп зег аБи їі ЗК хек ух Зек або КіЄ ух сію ай тує 5 2 5 іїви рРКе ре бог Аїд бег сен бує Узі дер Ре дер Тйг Ав Бак ев ще 35 що тТве АБр. Ре бі дв дій РИ Бек ага Бі бів Тук Таб отуб дев оре їх в 13 ії50
Тук Її1є ївц іуб5 б5ег бег АТа бін Аїа ей суб бій Рне їоц їу5 СВ та Та 25
Бек Уа! їуз їМг аїн сечо азр уз діа ав ТВе обі бій ар Меє деп 180 155 190 авр овен рйе ахап тб тТгробіу 5ег нія ейе ев его чУаї Уві мес 195 20а У
Єїу бік бух ія біл тує Зег Бек 5Бг г одяп гу ТУгс ТНг Зег Аби 23 245 КВ
Сец ТйК АчК баг бйе ар Уа! уаї аїа АТа аїя Зег оббе Аїа іх вве 225 230 235 280 їв Єр ай бак віз Ак Те бБію вки бак ве маж Зі АВ бів бує 245 50 255
Му РНЕ ака 5ег Аа баг ака Ї18 Куб Так ніх Аїв хів с1у біу Ар
КЕ т 20 іє) бек Аго вне дов РГРО рае бік біх Аїв так о бег ад ахр обі рго ка «8 255 его Аа отв бі їїе а1з3 а1а Аа куб бух Аа рве бів АБр о тгрогує «5 295 ще віз баг маї Ро вва аів РО б1в веб ма! Абе Ре Аа АВ его дей 05 Зі 335 зо
Рго Беи тв обі ків тер бій Сез сСух ек або АРО тв обій вуз Аа
За Зо 335 уз сен їж бух Ні Бе б1о Тве УБі їв Аза Бео ай біб бев аз 380 ЗАЗ 550 буз аго Аго Уві ніз від аз тує її дв ій Уві бів УВІ їі ів
Ка ЗО 365 зас аби ек ве біу ма! га Рео вгО 5ег бі тує ТВе бух 12 дев з | 375 ЗИ
Тук авр ве Аа іуз су Аа біУ біЖ АБв тує ше тую веб Сух тує
Бе З 5 С
Мія їує аіа Аго тТук бек АЇа Тук бег біб Аба ух АЗр бух ма! 5ег 405 41 315
Акр цбец тів їі їіе гу5 СіУ а5п єї аТа аго Аза вго Заг с1у тує 43 чея КО !
Ти вух Ті Ар Ма! ар гео аА5п ЄЇн Ахр Аїа бі б1у ух Тук сей 435 -О о
Ту іви бує Тукг вуз Був сій Зак Туг Ар ах Уві бів Аїа їв вух я 455 450 біу ев оаїя чаї Уа! бі СУ Азр о АБа Бег нів ТВе овго Аза вра Отує 465 Я 4975 Зо сі тує ага Ава її дво твг абр о уаі дз оо бі ів бі іх бів 485 БЕ р
Тує жі. ТУе її сСуз Ту 5ег кує їх АТа
КО щі «ії» 94 «ие ВІК . . «33» штучна впослідавВність «ВеЇ» нні іва шагібнаня. КВебогбавзоия івтіпезсенйх
«НЮ» 97
Мет бух бек їв дв ніх УЛ АТа ні бій АБИ сей ев ази бід вго ії 5 10 15
ТР ОНІ5 НІВ Буб5 чего АБИ Тйг бує аїш АТа во Ме ака нії СТ оту
ОО 5 30
Азп сец усі Бі) асо туго се го біу ча! бі) Уа! ї1е 51 аа бу 35 50 45 тує ап РРО вВе сіу ув туго діа жертв ар бег о жа! Ти ом от 50 Зх Бо це) вве АВ тто біп бек аїа Рта бек бій бго У! Іі Ре дей РКО бо то 7 ВО абр тує Хв АТа Рго ух АВ Узі Зеб о туаї Єїв бій зп або ств Аа а о щк
Ага теє тав два УВІ Бек обїю бу те тів аа ТВе рве бів бує Авп то 5 1
Рре зЗег се су я їйг оУаї віз бі Бек Туг ав сеу Ре виг оту
КБ 150 125 хаб ча! бак АБ Бій Ме 5еб бег бек сій ТНг дей ази АТ ОСІ Ап 130 1335 140 біш РНе бек аку тів сів бів Зег Зі6 Ага Уві ткробег веб аго сер
ЇЖУ їх МУ БО аа тук ТЕТ АБО бек іш АгО бів тУК ев бує аіх дев Уа! аг ар ке: Аз
Тук хі ав зак жів бій баг ашр оАТа сіб їі бНЬ ліЄє ви рРНЕ др 1 5 ЩО ага туК су еє Ні Бе сво ТМе сіу Уа чаї ме бі біУ АТЯ Аа ще 2 «05 її Меї АТа бек оЗек ТВЕ дп сує Узі сів УуатТ яБа нів тА тує Фо
Как 2Ії5 220
Акт бів те пів Аа туз АЇВ бег Тк бів аїа ба те обіу єї Ле ах раї 35 Я ще ав сі їне тя від МУ ТУК Агф Бін заг мет ак Зесг вна ща 245 Ка За бін Абе бег Ав їі Ні бух ЇТ6 Ми ві Є1У бі ар ді уаї АВ яв те5 270 сі АїЗ їує ма! Тує бек біт ар уз аіз Ар Ре азр о йта тер АїВ 265 | 80 285 вжи тниг Уаі бу тик Зег РгОо др вне Ууді Ар рве жав! Зви Бек уд 20 «35 ще
Рго Меє їв б1У ге тер бів без сСує суб ар оанр Аа бій АТа То
БІ зі ЗВ ЗО уз мебє бій й5р Тук Тук ап АБИ ТАг Тер АТа Рго Аго сух зе і у
ЗО що 355 сш АТа бів їі Тук аїа во ТУР Іо зр їн те тів дів біу Те
За ах 350
Ап АИ тб аа ТВгОоРКо Рго бі 01У Тук їТ2е біх ев був Чек так 360 363
Су АБ бін Аж Се жа ек вує сіу ай хтів Суб Бер оввбе Мет вія
ЗУ 35 | зо їи5 А13 їМ5 тТук азро рго дев ті дер дей 5 АБО сує їте ТБг Б; 385 що ЕВ 400 їв фуз вне Хі Твгоуа! Ако Абробує зак Рг бів Ту АБр оте ха
Бо що 5 цу ї1е Рго бій а5р ї1е Туг 116 его Рго АБИ бій Туг цей туг се
За пе я
Сух Туг іву Рго дів вух Тук бег Аа бів ух Аїя іє уз Аа ще 435 зай 445 сій сво гео бує бек Бек бує ші Бек бере меж тте бе ко тує оїу 5 455 50
Тує Аша ахр Уа! їву вер бю ага су бів аго аз аби АТа тТве су 455 о 475 С
Ах Ав АБИ УВІ нія ТУ цен ті тТуб бек Аза бу Тер ув а я «ев Б «вві кед БІО 00000000 «13» внНОохогнаввия Беіпехсена «ЩО» ов
Мех баг АБ» АБ ух ТАК ОСТУ сує бек це біз бій сій Ах" бБег бів 4 5 16 15 ага АБ УдІ біб тів Аго АБЗ АгО Яка тує вне Аг бух фей оз в 0 яа ше
Рне Ав ахр тик ма! хів АТ біу йїа сію меж її бі ТВк зе тТук 45 ча 45 а«ро уд! бе біу куб тує Су аб Уві біу бег сує Меїх ай Зак це за 55 ОО те до СТ) Аго вує тів дей Аа 5еб бі Араби Ре вк ух ма! 55 70 75 ше так жів іво Біу бук ТАК о йва цу Б во Тук тує хів лев Су туге 55 о о ек УВІ сім Азроьен гує Тут ТР Аша іа бег сіу Єіу бЗег їв 0 300 що ще
Бек Те бів бек дяк хів бек Зевсу бег аго 16 бук біу азпотуг о 125 івм вне бе хег ій бек оіви їу5 чаї до Ре 50 Тег йо баг в
Ек; 35 340
Тк Аве ве біз доп Аа пе 5ег аг ІТ ій ту тапб Тує яв еВ 5 15 55 15
Тук Хіє їеу ух щас Зег А1а Біб Аа іву кує біб вне кейо фу ТО 105 МО 15 ет уаї їуз ТВг аїз їв Азр ух діа Або тйг бій бів пов Мет дп 380 ЗА За зер івц пе ахи ТВЄ Тер о біу бак ніє Ре ее его біу уді Узі мех 5 200 в бір сту суз аїй бій тує бек баг бек тТвг о Аяп ме ТУує ТВе бек аа ка 215 Ка: вец ті ай 5ег РАБ авроуаї В АТа АТа ій бег вве Аа єїу вВе тай 230 235 КО
І1е біу меи бек аїа АгУ твгосіу ха БОГ РВа Мет Є1Ь Або ї18 цує 85 250 55 іує Ре йга баг аія бе Ах 116 бує Тнг о ніз аТа Ха с1у Ту а5о
БО ва а іви щег ака РНе яр вро вне сі біу Азіаз тТве бек дія авробів РКО
Хо 280 285
Зег Аа біш бі: Хе Аїв Аа Аза уз уз Аїа Рне бїв АЗВ тТгр. бух 2 5 щю дід Бек узі Рго Ачп віз ко біб вен маії дей вве аа Ахо бек ап 05 що зі15 20
РгОо Бен тк оту гів тер обі гер суз сем аБр ага ТНК б Гуз аа ше ЕІ 35
КУ ви вуб ку Мі РНЄ БТ Те уві тер оаїя рго аіа 1 бег діа ї4о 345 350 їз вго Ага Уа! Мі5 віз Азр тує їте ай сіб ї1е тів хтів 5іу тів 355 БЕ а
АБИ деп ТК ав тає оРго Рго бів Є1у Тут 118 бу бен Гу бек тТВе
БИ З ЗО іух авр біб Аа Кей Аза бес бух сіу бжи жів Суб во Ре мех ніх зах Зо 395 400 руч Аа вуз Туг аво Рго Аза Її! йзр ал мує Ащо Сух Те те бін
Я 515 їев ів Бе їі Тве о хУаї Аго Ахроує бек рго біб біу Аза тер ув о 425 430 уз тіє Рго бів азрв жів Туг 116 бек Рг ал бій Тк без тук ве 435 о ах
Су ТУ це го Аїа бух ТуУук бЗег АТЯ бів су Аїа хів Суб Абр її 850 435 Ж сів бен оце) Суб бек бак бух сіу Явк бегомет тів іви Рео тТук бі 465 70 их що тує Аха аброУуді сви йкр він ага Сі біз яво Аїа аБа Аїд Те бі чех 90 3535 зо ар о а5п Уа! Ні туго бем хТе тут Бег аїв бі» тгровух юю 55 в «еь 99 «еї» 3 «ії» штучна желінеовність ей с. «йеї» Момібноївяа вагітна «З щ «кспсаесова осоясссаза зсвагтстес поочекас сєсісссаЗсо пагасасцавй 5 заєтваєсає азесксаата завасоссоа або аєтає зестаєстає чісазєсатаа о вкссттстає васцсттасс саззвваасяя апа сссзасітаї Єкатаєвав їх подазаєвоя опсасусссс совасовтка сасовааатт сатоїених Козагоавов Я тосядасшоя заасасстох асетакоєта свауааосяа вустаєдцаса зсосоовадє ЗО затсашнює стос таЗ сот одта сяасесвсає всссстастс секасоацева зо сецхісоууаєе Засаєєзаєо сезаєвазов доссооаооє саусаєвтє агасстоіва я сЕссзавиЗа ее хі «ій» 3100 «іх «ай» Білок и «35 штучна послтдевнсте «ВО» «й3» жено йагікіта «че 300
Аж УВІ біц Уа! Зі іп Бег дп Бег зег о біу ат Аг го Рго баг де 5 КК За бі тує ТнНг цуз Ї1е Азр о Туг ар оцевз аз кує біу АТа біу 91У А5о 2 я 30 тук тів тТУук ви Суб ТУ Ні сує дів Ага тує 5ег Аа ТУК Бек СТИ 35 я 5 зай су др Сух Уа! бег дрів Ще Ті її вух сбіу а5а бі АВ.
БО 5 5 вага аа Рг БЕК біу тк ТАК су ТІВ Ар Уа Ар бе) ай бів ар 55 й Та що вій біу бу бу5 туго кео туго сви сСуз тук бук ув бій бек тук вар 85 щі 55 аа маї зійш аїа 112 бух БЖ ву АТ Уаї Уа! бїУ оту бр АВ Бег
М 5 40
Ніз те вго Аа вео тТув біу Туг яко ага 116 абр о тне Аяв Уа АвИ ве 195 іш Би йіа Бім бі б» Тек їі тує Ті Суб Тук «аг був бі АВ ї3О 5 її

Claims (15)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Касета експресії, яка містить промотор, функціонально пов'язаний із гетерологічною молекулою нуклеїнової кислоти, яка містить: (а) нуклеотидну послідовність під будь-яким із БЕО ІЮ МО: 22, 34, 73, 74 або 75; (Б) нуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид, де амінокислотна послідовність містить ЗЕО ІЮ МО: 55, 67, 86, 87 або 88; (с) нуклеотидну послідовність, яка є комплементарною нуклеотидній послідовності будь-якого з
(а)-(б), наведених вище.
2. Поліпептид, що містить амінокислотну послідовність під будь-яким із БЕО ІЮО МО: 55, 67, 86, 87 або 88.
3. Вектор, що містить касету експресії за п. 1.
4. Клітина-хазяїн, яка містить касету експресії за п. 1.
5. Клітина-хазяїн за п. 4, яка являє собою бактеріальну клітину-хазяїна або рослинну клітину.
6. Спосіб підвищення стійкості до комах у рослини або частини рослини порівняно з контрольною рослиною або частиною рослини, який включає забезпечення експресії в рослині або частині рослини касети експресії за п. 1, де експресія касети експресії зумовлює підвищену стійкість до комах у рослини або частини рослини порівняно з контрольною рослиною або частиною рослини.
7. Спосіб за п. б, який додатково включає введення касети експресії в рослину.
8. Спосіб за п. б, який додатково включає введення касети експресії в частину рослини та одержання рослини з частини рослини.
9. Трансгенна рослина маїсу, яка містить молекулу нуклеїнової кислоти, яка надає підвищеної стійкості до комах, де вказана молекула нуклеїнової кислоти містить касету експресії за п. 1.
10. Трансгенна рослина за п. 9, де вказана рослина являє собою однодольну рослину.
11. Трансгенна рослина за будь-яким із пп. 9 або 10, де вказана рослина являє собою просо, просо лозоподібне, маїс, сорго, пшеницю, овес, газонні трави, пасовищні трави, льон, рис, цукрову тростину, олійний ріпак або ячмінь.
12. Трансгенна рослина за п. 9, яка крім того містить щонайменше одну додаткову молекулу нуклеїнової кислоти, яка надає ознаку, вибрану з групи, що складається зі стійкості до комах, толерантності до абіотичного стресу, чоловічої стерильності, стійкості до гербіцидів, стійкості до бактеріальних захворювань, стійкості до грибкових захворювань, стійкості до вірусних захворювань, стійкості до нематод, модифікованого метаболізму жирних кислот, модифікованого метаболізму вуглеводів, продукування цінного з комерційного погляду ферменту або метаболіту, поліпшеної харчової цінності, поліпшених характеристик щодо промислового способу і зміненої репродуктивної здатності.
13. Трансгенна рослина за п. 12, де друга ознака являє собою стійкість до комах, яку надає Зо молекула інтерферуючої РНК.
14. Композиція, що містить придатний сільськогосподарський носій і поліпептид з інсектицидною активністю, де поліпептид містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 55, 67, 86, 87 або 88.
15. Спосіб здійснення контролю популяції твердокрилих шкідників, який включає приведення вказаної популяції в контакт з ефективною для контролю комах кількістю поліпептиду з інсектицидною активністю, де поліпептид містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮО МО: 55, 67, 86, 87 або 88.
UAA201908337A 2017-01-12 2018-01-08 Інсектицидний білок UA125632C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762445429P 2017-01-12 2017-01-12
PCT/US2018/012730 WO2018132325A1 (en) 2017-01-12 2018-01-08 Insecticidal proteins

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA125632C2 true UA125632C2 (uk) 2022-05-04

Family

ID=62840221

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201908337A UA125632C2 (uk) 2017-01-12 2018-01-08 Інсектицидний білок

Country Status (12)

Country Link
US (1) US11180774B2 (uk)
EP (1) EP3568022B1 (uk)
CN (1) CN110167351B (uk)
AR (1) AR110881A1 (uk)
CA (1) CA3047142A1 (uk)
CL (2) CL2019001898A1 (uk)
ES (1) ES2931105T3 (uk)
MX (1) MX2019007962A (uk)
PT (1) PT3568022T (uk)
RU (1) RU2761666C2 (uk)
UA (1) UA125632C2 (uk)
WO (1) WO2018132325A1 (uk)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020092017A1 (en) * 2018-10-30 2020-05-07 Syngenta Participations Ag Insecticidal proteins
MX2021004825A (es) * 2018-10-30 2021-06-15 Syngenta Participations Ag Proteinas insecticidas.
WO2022204466A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Production of circular polyribonucleotides in a prokaryotic system
EP4314277A1 (en) 2021-03-26 2024-02-07 Flagship Pioneering Innovations VII, LLC Compositions and methods for producing circular polyribonucleotides
TW202300650A (zh) 2021-03-26 2023-01-01 美商旗艦先鋒創新有限責任（Ｖｉｉ）公司 真核系統中環狀多核糖核苷酸的產生
WO2023077118A1 (en) 2021-11-01 2023-05-04 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Polynucleotides for modifying organisms
WO2023141540A2 (en) 2022-01-20 2023-07-27 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Polynucleotides for modifying organisms

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5877012A (en) 1993-03-25 1999-03-02 Novartis Finance Corporation Class of proteins for the control of plant pests
RU2310686C2 (ru) * 1999-06-25 2007-11-20 Басф Акциенгезелльшафт Гены corynebacterium glutamicum, кодирующие белки, участвующие в метаболизме углерода и продуцировании энергии
MX2009010062A (es) * 2007-03-28 2009-10-13 Syngenta Participations Ag Proteinas insecticidas.
AR069824A1 (es) * 2007-09-14 2010-02-24 Basf Plant Science Gmbh Plantas con rasgos aumentados relacionados con el rendimiento y un metodo para producirlas
PL2449109T3 (pl) 2009-07-02 2017-04-28 Athenix Corporation Gen pestycydowy AXMI-205 i sposoby jego stosowania
US20120324605A1 (en) * 2009-12-16 2012-12-20 Dow Agrosciences Llc Insectcidal protein combinations for controlling fall armyworm and european corn borer, and methods for insect resistance management
UA111592C2 (uk) * 2010-07-07 2016-05-25 Сінгента Партісіпейшнс Аг Спосіб контролю над твердокрилими комахами-шкідниками
US9403881B2 (en) * 2013-03-14 2016-08-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods of use
WO2014150914A2 (en) * 2013-03-15 2014-09-25 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Phi-4 polypeptides and methods for their use
AR097292A1 (es) * 2013-08-09 2016-03-02 Monsanto Technology Llc Toxina pesticida activa contra insectos coleópteros y/o hemípteros
US11008585B2 (en) * 2016-05-04 2021-05-18 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Insecticidal proteins and methods for their use

Also Published As

Publication number Publication date
EP3568022A1 (en) 2019-11-20
US20190316148A1 (en) 2019-10-17
ES2931105T3 (es) 2022-12-27
US11180774B2 (en) 2021-11-23
RU2019124715A3 (uk) 2021-05-27
BR112019014369A2 (pt) 2020-02-11
CN110167351B (zh) 2023-05-05
CL2019001898A1 (es) 2019-10-04
PT3568022T (pt) 2022-08-30
CA3047142A1 (en) 2018-07-19
RU2761666C2 (ru) 2021-12-13
WO2018132325A1 (en) 2018-07-19
CL2020002529A1 (es) 2021-01-29
AR110881A1 (es) 2019-05-15
EP3568022B1 (en) 2022-06-15
MX2019007962A (es) 2019-09-04
RU2019124715A (ru) 2021-02-12
EP3568022A4 (en) 2020-07-22
CN110167351A (zh) 2019-08-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA125632C2 (uk) Інсектицидний білок
RU2382822C2 (ru) ИНСЕКТИЦИДНЫЕ БЕЛКИ, ВЫДЕЛЕННЫЕ ИЗ ВИДОВ БАКТЕРИЙ Bacillus, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
UA126906C2 (uk) Інсектицидний білок
UA112156C2 (uk) ТРАНСГЕННА РОСЛИНА, ЯКА МІСТИТЬ ДНК, ЩО КОДУЄ ІНСЕКТИЦИДНИЙ БІЛОК Сry1Ca, І ДНК, ЩО КОДУЄ ІНСЕКТИЦИДНИЙ БІЛОК Сry1Fa, ДЛЯ ВИРОБЛЕННЯ РЕЗИСТЕНТНОСТІ ДО КОМАХ
UA123480C2 (uk) Химерний інсектицидний білок, інгібіторний відносно лускокрилих шкідників
UA127526C2 (uk) Спосіб одержання рослини або частини рослини, що характеризується підвищеною стійкістю до твердокрилих комах
BRPI0810672A2 (pt) polinucleotídeo codificando uma proteína inibitória de inseto tic807, métodos para expressá-lo em uma planta, e para detectá-lo, identificá-lo ou isolá-lo assim como kit para tal, célula hospedeira transformada, métodos para controle e proteção de planta de um inseto-praga, proteína isolada, kit para sua detecção, vetor de dna recombinante para expressá-la, produto de consumo e anticorpo
UA122776C2 (uk) Композиція, що містить рекомбінантні клітини bacillus і інсектицид
AU2016228053B2 (en) Uses of insecticidal protein
CN111606984B (zh) 一种植物抗虫蛋白及其编码基因和应用
UA127408C2 (uk) Сконструйовані пестицидні білки та способи контролю шкідників рослин
UA110925C2 (uk) Сконструйований білок cry1ba, активний щодо лускокрилих комах
UA125491C2 (uk) Поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах
CN105766992B (zh) 除草剂耐受性蛋白质的用途
CN105724139B (zh) 除草剂耐受性蛋白质的用途
UA122046C2 (uk) Рекомбінантний поліпептид із інсектицидною активністю
CN104824010A (zh) 杀虫蛋白的用途
UA122475C2 (uk) Ген токсину ахмі486 та спосіб його застосування
Cao et al. Sequential transformation to pyramid two Bt genes in vegetable Indian mustard (Brassica juncea L.) and its potential for control of diamondback moth larvae
UA126327C2 (uk) Молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти, яка кодує білок, що проявляє інгібуючу активність відносно комах
JP3631492B2 (ja) 抗微生物性タンパク質
Nallathambi et al. Mechanism of seed transmission and seed infection in major agricultural crops in India
CN101161816B (zh) 双价抗虫基因的植物表达载体构建及其转基因植物获得方法
JP2020515291A (ja) 新規の昆虫阻害タンパク質
CN104886111A (zh) 杀虫蛋白的用途