UA125491C2

UA125491C2 - Поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах

Info

Publication number: UA125491C2
Application number: UAA201706117A
Authority: UA
Inventors: Ґреґорі Дж. Бін; Грегори Дж. БИН; Девід Дж. Боуен; Дэвид Дж. Боуен; Кетрин А. Чей; Кэтрин А. Чэй; Ерлін Р. Хау; Эрлин Р. ХАУ; Джейсон С. Мілліґан; Джэйсон С. Милиган; Юн Їнь; Юн ИНЬ
Original assignee: Монсанто Текнолоджі Елелсі; МОНСАНТО ТЕКНОЛОДЖИ ЭлЭлСи
Priority date: 2014-11-20
Filing date: 2015-11-18
Publication date: 2022-04-13
Also published as: CO2017005958A2; MX2021007640A; BR112017010574B1; AR120731A2; BR122020006770B1; JP6731408B2; AR120735A2; AR120734A2; JP2017536122A; ES2861596T3; CR20170255A; WO2016081618A1; US11193138B2; UY36407A; US20200157562A1; CN107109417A; CA3216879A1; RU2740313C2; SV2017005446A; BR122020006744B1

Abstract

Винахід стосується рекомбінантної полінуклеотидної молекули, яка містить нуклеотидну послідовність, яка кодує поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, полінуклеотиду, рекомбінантного вектора, клітини-хазяїна, композиції, способу боротьби з лускокрилими видами шкідників. Винахід також стосується трансгенної рослини, насіння, способу отримання насінини, що містить вказану полінуклеотидну молекулу, що кодує поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах.

Description

ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ

У цій заявці заявляється пріоритет за попередньою заявкою на патент США Мо 62/082504, поданою 20 листопада 2014 року, яка включена у цей документ шляхом посилання у повному обсязі.

ВКЛЮЧЕННЯ ПЕРЕЛІКУ ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

Перелік послідовностей у формі, що зчитується на комп'ютері, поцей з цією заявкою шляхом електронного представлення. Перелік послідовностей, включений шляхом посилання, міститься у повному обсязі у файлі, створеному 13 листопада 2015 року, з іменем файлу

МОМЗ387УМО 5Т2541Х та розміром 114 Кбайт (як виміряно в операційній системі М5-УУіпдомив).

ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ

Цей винахід загалом відноситься до галузі білків, що мають інгібуючу активність щодо комах. У цій заявці описаний новий клас білків, що мають інгібуючу активність проти сільськогосподарських шкідників вирощуваних рослин та насіння. Зокрема, описаний клас білків має інсектицидну активність проти сільськогосподарських шкідників вирощуваних рослин та насіння, особливо лускокрилих та твердокрилих видів комах-шкідників. У винаході запропоновані рослини, частини рослин та насіння, що містять конструкт рекомбінантного полінуклеотиду, який кодує один або більше описаних токсичних білків.

РІВЕНЬ ТЕХНІКИ

Дедалі більшого значення набуває підвищення врожайності сільськогосподарських культур, включаючи, серед інших, кукурудзу, сою, цукрову тростину, рис, пшеницю, овочі та бавовник. За прогнозами, на додаток до зростаючої потреби у сільськогосподарській продукції для забезпечення їжею, одежею та забезпечення енергією зростаючого населення, кліматичних наслідків та тиску з боку зростаючого населення на використання земель несільськогосподарського призначення, зменшується кількість доступних орних земель для ведення сільського господарства. Ці фактори призвели до неоптимістичних прогнозів щодо продовольчої безпеки, особливо в умовах відсутності значних покращень у галузі біотехнології рослин та агрономічних прийомів. У світлі цих обставин, екологічно стійкі вдосконалення у галузі технологій, агротехніки та боротьби з шкідниками є життєво важливими інструментами для розширення виробництва сільськогосподарських культур на обмеженій кількості орних земель, доступних для ведення сільського господарства.

Комахи, особливо комахи у межах порядку Іерідорієга (лускокрилі) та СоіІеорієга (твердокрилі), вважаються основною причиною ушкодження польових культур, тим самим викликаючи зниження врожайності культур у заражених районах. Види шкідників-лускокрилих з несприятливим впливом на ведення сільського господарства включають, але не обмежуються ними, Неїїсомегра 2єа, Овіппіа пибіїаі5, Оіанаєа засспНагаїїв5, Оіаїгаєа дгапаїіозеїІа, Апіісагвіа деттаїаїв, б5родорієга Ігидірегаа, 5родорієга ехідна, Адгоїї5 ірвіп, Піспоріивіа пі, Снгузоадеїхів іпсійдепв, Неїйоїтів мігезсепв5, Рішеїйа хуїозівеІПа, Ресіїпорпога доззурієїІа, Неїїсомегра агтідега,

ЕІазтораїриз ІїдпозейПив5, зігіасовіа аїібрісовіа та РпуїПоспівіі5 сігеПа. Види шкідників-твердокрилих з несприятливим впливом на ведення сільського господарства включають, але не обмежуються ними, Аагіоїез5 зрр., Апіпопотив 5рр., Аютагіа Іпеагіз, Снаєїоспета ібіаів, Со5тороїйевз 5рр.,

Сигсціо врр., Оептевієвз в5рр., Оіабгоїїса в5рр., Еріаснпа в5рр., Егетпив5 5рр., Іеріїіпоїагза десетіїпеага, І ізвоторігив 5рр., МеІоіопіна 5рр., Огусаерпійи5 5рр., Отіоппупспив5 врр., Риїусіїпи5 5рр., Рорійа 5рр., РзуПодез 5рр., ВНігорепна 5рр., Зсагареіїдає, Зйорнийив5 врр., Зйоїгода 5рр.,

Тепебто 5рр., Тіроїїшт 5рр. та Гододетта 5рр., зокрема шкідником є Оіабгоїїса мікдітега мігдітега (західний кукурудзяний жук, МУСК), Оіаргоїїса Баїбегі (північний кукурудзяний жук, МОСК),

Оіабгоїїса мігудіїегта 26ає (мексиканський кукурудзяний жук, МС), Оіабргоїїса бБайеаїа (бразильський кукурудзяний жук (ВЖК), Оіабгоїїса ипаесітрипсіаїа оуагаїйї (південний кукурудзяний жук, ЗСЕ) та комплекс бразильського кукурудзяного жука (ВСЕ), що складається з видів Оіабгоїїса мігідиіа та Оіаргоїїса зресіоза).

Історично склалося так, що в якості засобу боротьби з шкідниками у сільському господарстві інтенсивно застосовували синтетичні хімічні інсектициди. Побоювання з приводу впливу на оточуюче середовище та здоров'я людини, окрім виникаючих проблем з розвитком стійкості, стимулювали дослідження та розробку біологічних пестицидів. Це дослідження привело до прогресивного відкриття та застосування різних ентомопатогенних видів мікроорганізмів, включаючи бактерії.

Парадигма біологічних методів боротьби змінилася, коли був відкритий потенціал ентомопатогенних бактерій, особливо бактерій, що відносяться до роду Васійи5, та їх застосували в якості агенту для біологічної боротьби зі шкідниками. Штами бактерії Васіїйи5

Ігіпдієпвіз (В) використовували в якості джерела білків, що проявляють пестицидну 60 активність, так як було виявлено, що штами Ві проявляють високу токсичність проти конкретних комах. Основною ознакою Ві" є продукція параспоральних тілець, що містять один або більше кристалів, які містять специфічні інсектицидні ендотоксини (білки Сгу), що діють при поглинанні чутливими комахами за участю механізму дії, утворючого пори, пошкоджуючі епітелій травного тракту комахи. Крім Ві, потенціал для боротьби з шкідниками показали інші види Васіїш5, такі як

Васійиб5 5ріпаєгтісиє, та інші види бактерій, які містять гени, що сприяють прояву ентомопатогенного фенотипу, такі як Вгемірасіи5 Іаїегозрогив.

Інсектицидні білки-токсини застосовують у різних сільськогосподарських цілях для захисту господарських цінних рослин та підвищення врожайності. Інсектицидні білки-токсини застосовують для боротьби з сільськогосподарськими шкідниками культурних рослин механізованими способами, такими як розпилення дисперсних мікробних рецептур, що містять різні штами бактерій, на поверхні рослин, та шляхом використання методів генетичної трансформації для отримання трансгенних рослин та насіння, що експресують інсектицидний білок-токсин.

Застосування трансгенних рослин, які експресують інсектицидні білки-токсини, визнано у світовому масштабі. Наприклад, у 2012 році 26,1 мільйони гектарів були засаджені трансгенними культурами, що експресують Ві-токсини (дЧате5, С., сіюора! іайй5 ої

Сотітпегсіаїїлей Віоїесп/ЗМ Сгоре:2012. Короткий зміст звіту ІЗААА (Міжнародна служба зі збирання даних про застосування біотехнологій у сільському господарстві) Мо 44). Глобальне застосування трансгенних культур, захищених від комах, та обмежена кількість комерційно доступних інсектицидних білків-токсинів створює тиск відбору на алелі, які надають стійкість до інсектицидних білків, що застосовують у теперішній час. Розвиток у цільових шкідників стійкості до інсектицидних білків-токсинів негативно відбивається на ефективності та перевагах цієї технології. Такі переваги включають збільшену урожайність сільськогосподарських культур, зниження використання хімічних пестицидів та зниження витрат та праці, пов'язаних з використанням хімічних пестицидів.

Відкриття та розробка нових форм інсектицидних білків-токсинів є центральною задачею для боротьби зі збільшенням стійкості комах до трансгенних культур, що експресують інсектицидні білки-токсини. Нові білкові токсини з підвищеною ефективністю, і які проявляють вплив на більш широкий спектр чутливих видів комах, зменшують кількість виживаючих комах, у

Зо яких можуть розвиватися резистентні алелі. Крім того, застосування в одній рослині двох або більше трансгенних токсинів, токсичних для однієї і тієї ж комахи-шкідника та демонструючих різні механізми дії, додатково знижує ймовірність виникнення стійкості у цільових видів комах.

Отже, існує нагальна необхідність у виявлені та розробці ефективних інсектицидних білків з покращеними інсектицидними властивостями, такими як підвищена ефективність проти більш широкого спектра цільових видів комах-шкідників та різні механізми дії у порівняні з білками, відомими у цій галузі техніки. У цій заявці описана нова родина білкових токсинів з Вгемібасйи5

Іаїегозрогив5 (В. Іаїегозроги5) разом з подібними білками-токсинами, варіантами білків та типовими рекомбінантними білками, що проявляють інсектицидну активність проти значимих цільових видів шкідників лускокрилих та твердокрилих, зокрема проти західного кукурудзяного жука.

КОРОТКИЙ ОПИС СУТІ ВИНАХОДУ

Описана у цьому документі нова група рекомбінантних полінуклеотидних молекул та поліпептидів, які кодуються ними (білків-токсинів), що мають інгібуючу активність щодо комах, називається у цьому документі білками типу ТІС3668, які, як показано, проявляють інгібуючу активність проти одного або більше шкідників вирощуваних рослин. Кожний з цих білків може застосовуватися окремо або у комбінації один з одним та з іншими інсектицидними білками та токсичними агентами у рецептурах та іп ріапіа (в рослині); таким чином забезпечуючи альтернативу інсектицидним білкам та хімікатам-інсектицидам, що застосовують у теперішній час у сільськогосподарських системах.

В одному аспекті у винаході представлена рекомбінантна полінуклеотидна молекула, що кодує поліпептид, який має інгібуючу активність щодо комах та містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО:25, 5ЕО ІОЮО МО:23, 5ЕО ІЮО МО:24,

ЗЕО ІЮ МО:26, БЕО І МО:27, 5ЕО ІЮ МО:28, 5ЕО ІЮ МО:29, 5ЕО ІЮО МО:30 та 5ЕО ІЮ МО:31. В одному варіанті реалізації винаходу рекомбінантна полінуклеотидна молекула кодує поліпептид, який має інгібуючу активність щодо комах та має щонайменше 35 95 ідентичності, наприклад, щонайменше 40 95, 50 95, 60 о, 7095, 7590, 760, 77 Ую, 78 У, 79 У, 80 Фо, 81 о, 82 У, 83 95, 84 Фо, 85 95, 86 о, 87 95, 88 9Уо, 89 9, 90 У, 91 Ус, 92 У, 93 Ус, 94 У, 95 Ус, 96 9, 97 У, 98 95 або 99 95 ідентичності з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО:25, ЗЕО ІЮ МО:23, 5ЕО ІЮ МО:24, 5ЕО ІЮ МО:26, 5ЕО І МО:27, 5ЕО ІЮ МО:28, 60 ЗБО І МО:29, 5БО ІЮ МО:30 та 5ЕБО ІО МО:31. В іншому варіанті реалізації винаходу рекомбінантна полінуклеотидна молекула містить нуклеотидну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО:37, 5ЕО ІЮ МО:33, 5ЕО 10 МО:35, 5ЕО ІЮ МО:39, 5ЕО ІЮ МО 41,

ЗЕО ІЮ МО:43, 5ЕО І МО 45, 5ЕО ІЮ МО:47, 5ЕО ІЮ МО:49, 5ЕО ІЮО МО:64, 5ЕО ІЮ МО:65, 5ЕО

ІО МО:66, 5ЕО ІЮ МО:67, 5ЕО ІЮ МО:68, 5ЕО І МО:69, 5ЕО ІЮО МО:70, 5ЕО ІЮО МО:71 та 5ЕО ІЮ

МО:72. У ще одному варіанті реалізації винаходу рекомбінантна полінуклеотидна молекула має щонайменше 35 95 ідентичності, наприклад, щонайменше 40 95, 50 95, 6О Зо, 70 о, 75 о, 76 У, 77 чув, 78 9, 79 У, 80 9, 81 У, 82 95, 83 У, 84 95, 85 У, 86 У, 87 У, 88 У, 89 У, 90 Ус, 91 У, 92 о, 93 95, 94 965, 95 95, 96 У, 97 У, 9895 або 99 95 ідентичності з нуклеотидною послідовністю, вибраною з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО:37, 5ЕО ІЮ МО:33, 5ЕБО ІО МО:35, 5ЕО ІО

МО:39, 5ЕО ІЮО МО:41, 5ЕО 10 МО:43, 5ЕО І МО:45, 5ЕО ІЮ МО:47, 5ЕО ІЮ МО:49, 5ЕО І

МО:64, 5ЕО ІЮО МО:65, 5ЕО 10 МО:6б, 5ЕО І МО:67, 5ЕО ІЮО МО:68, 5ЕО ІЮ МО:69, 5ЕО І

МО:70, БО ІО МО:71 та 5БО ІЮ МО:72. У додатковому варіанті реалізації винаходу рекомбінантна полінуклеотидна молекула містить послідовність, яка гібридизується зі: (і) зворотною комплементарною послідовністю цієїцієї нуклеотидної послідовності за положеннями 4-885 послідовності, вибраної з групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО:37, 5ЕО ІО МО:33, 5ЕО ІЮ

МО:35, 5ЕО ІЮО МО:39, 5ЕО 10 МО:41, 5ЕО ІЮ МО:43, 5ЕО 10 МО:45, 5ЕО ІЮ МО:47, 5ЕО ІР

МО:49, 5ЕО ІЮ МО:64, 5ЕО ІЮО МО:65, 5ЕО І МО:6б, 5ЕО 10 МО:67, 5ЕО ІЮ МО:68, 5ЕО І

МО:69, ЗЕО ІЮ МО:70, ЗЕО ІО МО:71 та 5ЕО ІЮ МО:72; або (ії) зворотною комплементарною послідовністю, вибраною з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО:52, 5ЕБЕО ІЮ МО:53, 5ЕО ІО

МО:54, 5ЕО ІЮ МО:55, 5ЕО 10 МО:56, 5ЕО ІЮ МО:57, 5ЕО ІЮО МО:58, 5ЕО ІЮ МО:59, 5ЕО І

МО:60 та 5ЕО І МО:61. В іншому варіанті реалізації винаходу умови гібридизації є жорсткими, наприклад, такі жорсткі умови можуть включати гібридизацію протягом від 4 до 12 годин у 50 95 формаміді, 1 М Масі та 1 95 505 при 37С, та промивання у 0,1 Х розчині 55Х при 600-650. У додатковому варіанті реалізації винаходу рекомбінантна полінуклеотидна молекула функціонально зв'язана з гетерологічним промотором.

В іншому аспекті у винаході представлений рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах та кодується рекомбінантною полінуклеотидною молекулою, запропонованою у цьому документі. В одному варіанті реалізації винаходу рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, містить амінокислотну послідовність,

Ко) вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО:25, 5ЕО ІЮ МО:23, 5ЕО ІЮ МО:24, 5ЕО ІЮО МО:26,

ЗЕО ІЮ МО:27, 5ЕО ІЮ МО:28, 5ЕО ІЮ МО:29, 5ЕО ІЮ МО:30 та 5ЕО ІЮО МО:31. В іншому варіанті реалізації винаходу рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, має щонайменше 35 95 ідентичності, наприклад, щонайменше 40 95, 50 95, 6О Зо, 70 о, 75 о, 76 У, 77 чув, 78 9, 79 У, 80 9, 81 У, 82 95, 83 У, 84 95, 85 У, 86 У, 87 У, 88 У, 89 У, 90 Ус, 91 У, 92 о, 93 96, 94 95, 95 96, 96 90, 97 96, 98 95 або 99 95 ідентичності з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО:25, 5ЕО ІЮ МО:23, 5ЕБЕО ІОЮО МО:24, 5ЕО І

МО:26, ЗЕО ІЮ МО:27, 5ЕО ІЮ МО:28, ЗЕО ІЮ МО:29, ЗЕО ІЮ МО:30 та ЗЕО ІЮ МО:З1.

У додатковому варіанті реалізації винаходу рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, проявляє інгібуючу активність проти видів комах з порядку СоіІеоріега, наприклад, які включають західного кукурудзяного жука, південного кукурудзяного жука, північного кукурудзяного жука, мексиканського кукурудзяного жука, бразильського кукурудзяного жука або комплексу бразильського кукурудзяного жука, що складається з видів Оіаргоїса міпдиіа та Ріаргоїїса зресіоза. У ще одному додатковому варіанті реалізації винаходу рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, проявляє інгібуючу активність проти видів комах з порядку І ерідорієга, наприклад, які включають європейського кукурудзяного метелика, південно-західного кукурудзяного метелика, совку-іпсилон, совку трав'яну, совку бавовникову та совку соєву.

У ще одному аспекті у винаході представлена клітина-господар, що містить рекомбінантну полінуклеотидну молекулу за цим винаходом, причому клітина-господар вибрана з групи, яка складається з бактеріальної клітини-господаря та рослинної клітини-господаря. У деяких варіантах реалізації винаходу бактеріальні клітини-господарі включають види Адгобасівгит,

Впі2оБішт, Васійи5 ІПигіпдіепві5, Вгемібасни5 Іасіетозроги5, Васіи5 сегеицв, Е. соїї, Реендотопав,

КІерзівЇа та Егміпіа. В інших варіантах реалізації винаходу рослинні клітини включають клітини з рослин люцерни, банану, ячменю, бобів, броколі, капусти, декоративної капусти, моркви, маніоки, рицини, кольорової капусти, селери, нуту, китайської капусти, цитрусових, кокосової пальми, кави, кукурудзи, конюшини, бавовнику, гарбуза, огірка, ялини Дугласа, баклажану, евкаліпту, льону, часнику, винограду, хмелю, цибулі-порею, салату, сосни Лоблолі, проса, дині, волоського горіху, вівса, маслини, цибулі, декоративної пальми, пасовищної трави, гороху, арахісу, перцю, хурми, голубиного гороху, сосни, гранату, тополі, картоплі, гарбуза, сосни 60 променистої, редьки, ріпаку, рису, корневищних злаків, жита, американського шафрану,

чагарнику, сорго, південної сосни, сої, шпинату, кабачку, полуниці, цукрового буряку, цукрової тростини, соняшнику, солодкої кукурудзи, амбрового дерева, солодкої картоплі, проса прутовидного, чаю, тютюну, томату, тритікале, дернової трави, кавуна та пшениці.

У додатковому аспекті у винаході представлена композиція, що має інгібуючу активність щодо комах, яка містить рекомбінантну полінуклеотидну молекулу за цим винаходом. В одному варіанті реалізації винаходу композиція, яка має інгібуючу активність щодо комах, може додатково містити нуклеотидну послідовність, яка кодуює щонайменше один пестицидний агент. У деяких варіантах реалізації винаходу щонайменше один пестицидний агент відрізняється від поліпептиду типу ТІС3668 за цим винаходом, який має інгібуючу активність щодо комах, та може вибиратися з групи, яка складається з білка, що має інгібуючу активність щодо комах, молекули дцРНК, що має інгібуючу активність щодо комах, та допоміжного білка. В інших варіантах реалізації винаходу інший пестицидний агент проявляє активність проти одного або більше видів шкідників порядків І ерідорієга, СоІеорієга та Нетірієга. У деяких варіантах реалізації винаходу інший пестицидний агент вибраний з групи, яка складається з білка СтутА,

СтутАр, СтутАс, СтутА.105, Стуї!В, Сту1С, Стут1о, Стут1Е, СТЕ, Стута, СтуїН, Ст, Стуту,

Стук, Стуті, СтугА, СтугАБ, СтузА, СтузЗВ, Сту4В, Стуб, Сту7, Стув8, СтуЗ, Сту15, Сту34, Стуз5,

Сту4ЗА, Сту43В, СтубіАа!, ЕТ29, ЕТЗ33, ЕТ34, ЕТЗ5, ЕТб6б, ЕТ70, ТІС400, ТІС407, ТІСА17,

ТІС431, ТІСВ8О0, ТІС807, ТІС834, ТІС853, ТІС900, ТІС9О1, ТІС1201, ТІС1415, МІРЗА та МІРЗВ.

У ще одному додатковому варіанті у цьому винаході представлена композиція, яка має інгібуючу активність щодо комах, що містить рекомбінантний поліпептид за цим винаходом, який має інгібуючу активність щодо комах, такий як поліпептид типу ТІС3668, що має інгібуючу активність щодо комах, в ефективній кількості для забезпечення інгібуючої дії щодо комах.

У ще одному аспекті у винаході представлений спосіб боротьби з видами-шкідниками твердокрилих або лускокрилих та боротьби із зараженням видами-шкідниками твердокрилих або лускокрилих рослин, наприклад, рослин сільськогосподарських культур, причому спосіб включає приведення у контакт шкідника з кількістю, яка має інгібуючу активність щодо комах, рекомбінантного поліпептиду за цим винаходом, який має інгібуючу активність щодо комах, такого як поліпептид типу ТІС3668, що має інгібуючу активність щодо комах.

У ще одному додатковому аспекті у винаході представлено насіння, що містить

Зо рекомбінантну полінуклеотидну молекулу або рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, такий як поліпептид типу ТІС3668, що має інгібуючу активність щодо комах, за цим винаходом.

В іншому аспекті у винаході представлений товарний продукт, який містить кількість, що виявляється, рекомбінантної полінуклеотидної молекули або рекомбінантного поліпептиду, який має інгібуючу активність щодо комах, такого як поліпептид типу ТІС3668, що має інгібуючу активність щодо комах, за цим винаходом. У додатковому аспекті винаходу товарний продукт за цим винаходом може містити клітину-господаря, яка включає рекомбінантну полінуклеотидну молекулу за цим винаходом, причому товарний продукт містить кількість, що виявляється рекомбінантної полінуклеотидної молекули або рекомбінантного поліпептиду, який має інгібуючу активність щодо комах та який кодується цим рекомбінантним полінуклеотидом. У деяких варіантах реалізації винаходу товарні продукти включають товарне зерно кукурудзи, упаковане у мішки дозатором для зерна, кукурудзяні пластівці, кукурудзяну макуху, кукурудзяну муку, кукурудзяну крупу, кукурудзяний сироп, кукурудзяну олію, кукурудзяний силос, кукурудзяний крохмаль, кукурудзяне зерно тощо, та відповідні товарні продукти соєвих бобів, рису, пшениці, сорго, голубиного гороху, арахісу, фруктів, дині та овочів, включаючи, якщо застосовно, соки, концентрати, варення, желе, мармелади та подібні їстівні форми таких товарних продуктів, які містять кількості, що виявляються, таких полінуклеотидів та поліпептидів цієї заявки.

У ще одному аспекті у винаході представлений спосіб отримання насінини, що містить рекомбінантний полінуклеотид за цим винаходом, причому спосіб включає: (а) висаджування щонайменше однієї насінини, яка містить рекомбінантну полінуклеотидну молекулу; (Б) вирощування рослин з насінини та (с) збір насіння з рослин, при цьому зібране насіння містить рекомбінантну полінуклеотидну молекулу.

У додатковому аспекті у винаході представлений рекомбінантний вектор, що містить рекомбінантну полінуклеотидну молекулу за цим винаходом. В одному варіанті реалізації винаходу рекомбінантний вектор вибраний з групи, яка складається з плазміди, бакміди, фагміди та косміди.

В іншому аспекті у винаході представлена рослина, стійка до зараження комахами, причому клітини указаної рослини містять рекомбінантну полінуклеотидну молекулу або рекомбінантний 60 поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, за цим винаходом.

КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ

На Фіг. 1 ілюструється вирівнювання складеного білка ТІС4260 з п'яти типових білків типу

ТІСЗ3668. Положення відмінностей послідовностей в результаті цього вирівнювання послідовностей виділені сірим затіненням.

На Фіг. 2 ілюструється інгібуюча активність іп ріапіа щодо західного кукурудзяного метелика (МУСК) типових націлених на хлоропласти та ненацілених білків зрілої довжини типу ТІС3668.

На Фіг. З ілюструється інгібуюча активность іп ріапіа М/СК типових націлених на хлоропласти та ненацілених білків зрілої довжини типу ТІС-3668.

КОРОТКИЙ ОПИС ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

ЗЕО ІЮО МО:1 являє собою рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, отриману з виду

Вгемірасійи5 Іаїегозрогих, що кодує білок ТІС3668 з відкритої рамки зчитування у положенні нуклеотидів 1-951 та кодон термінації трансляції.

ЗБО ІЮО МО:2 являє собою амінокислотну послідовність трансляції білка-попередника

ТІСЗ3668 з відкритої рамки зчитування, як указано в 5ЕО ІЮ МО:1.

ЗЕО ІЮО МО:3 являє собою рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, отриману з виду

Вгемірасійи5 Іаїєтозрогих, що кодує білок ТІС3669 з відкритої рамки зчитування у положенні нуклеотидів 1-951 та кодон термінації трансляції.

ЗЕО ІЮ МО:4 являє собою амінокислотну послідовність трансляції білка ТІС3669 з відкритої рамки зчитування, як указано в 5ЕО ІЮ МО:3.

ЗЕО ІЮО МО:5 являє собою рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, отриману з виду

Вгемірасійи5 Іаїегозрогих, що кодує білок ТІС3670 з відкритої рамки зчитування у положенні нуклеотидів 1-951 та кодон термінації трансляції.

ЗЕБЕО ІЮО МО:б являє собою амінокислотну послідовність трансляції білка- попередника

ТІСЗ3670 з відкритої рамки зчитування, як указано в 5ЕО ІЮ МО:5.

ЗЕО ІЮО МО:7 являє собою рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, отриману з виду

Вгемірасійи5 Іаїегозрогих, що кодує білок ТІС4076 з відкритої рамки зчитування у положенні нуклеотидів 1-951 та кодон термінації трансляції.

ЗБЕО ІЮО МО:8 являє собою амінокислотну послідовність трансляції білка- попередника

ТІС4076 з відкритої рамки зчитування, як указано в 5ЕО ІЮ МО:7.

Зо ЗЕО ІЮО МО:9 являє собою рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, отриману з виду

Вгемірасійи5 Іаїегозрогих, що кодує білок ТІС4078 з відкритої рамки зчитування у положенні нуклеотидів 1-951 та кодон термінації трансляції.

ЗБЕО ІЮО МО:10 являє собою амінокислотну послідовність трансляції білка- попередника

ТІС4078 з відкритої рамки зчитування, як указано в ЗЕО ІЮ МО:9.

ЗЕО ІЮО МО:11 являє собою рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, отриману з виду

Вгемірасійи5 Іаїегозрогих, що кодує білок ТІС4260 з відкритої рамки зчитування у положенні нуклеотидів 1-951 та кодон термінації трансляції, створений шляхом комбінування сегментів

ДНК з кожної з кодуючих послідовностей, указаних в ЗЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮО МО:3, 5ЕО ІЮО МО:5,

ЗБО ІЮ МО:7 та 5ЗЕО ІЮ МО:9 всередині рамки зчитування так, щоб включати варіації послідовностей з цих п'яти різних відкритих рамок зчитування.

ЗБЕО ІЮ МО:12 являє собою амінокислотну послідовність трансляції складеного білка- попередника ТІС4260 з відкритої рамки зчитування, як указано в ЗЕО ІЮ МО:11.

ЗЕО ІЮО МО:13 являє собою рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, отриману з виду

Вгемірасійи5 Іаїегозроги5, що кодує білок ТІС4346 з відкритої рамки зчитування у положенні нуклеотидів 1-951 та кодон термінації трансляції.

ЗЕБЕО ІЮО МО:14 являє собою амінокислотну послідовність трансляції з відкритої рамки зчитування, як указано в 5ЕО ІЮ МО:13.

ЗЕО ІЮ МО:15 являє собою рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, отриману з виду

Вгемірасійи5 Іаїегозроги5, що кодує білок ТІС4826 з відкритої рамки зчитування у положенні нуклеотидів 1-951 та кодон термінації трансляції.

ЗЕБЕО ІЮО МО:16 являє собою амінокислотну послідовність трансляції з відкритої рамки зчитування, як указано в 5ЕО ІЮ МО:15.

ЗЕО ІЮ МО:17 являє собою рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, отриману з виду

Вгемірасійи5 Іаїетозрогих, що кодує білок ТІС4861 з відкритої рамки зчитування у положенні нуклеотидів 1-918 та кодон термінації трансляції.

ЗЕБЕО ІЮО МО:18 являє собою амінокислотну послідовність трансляції з відкритої рамки зчитування, як указано в 5ЕО ІЮ МО:17.

ЗЕО ІЮО МО:19 являє собою рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, отриману з виду

Вгемірасійи5 Іаїегозрогих, що кодує білок ТІС4862 з відкритої рамки зчитування у положенні бо нуклеотидів 1-945 та кодон термінації трансляції.

ЗБО ІЮО МО:20 являє собою амінокислотну послідовність трансляції з відкритої рамки зчитування, як указано в 5ЕО ІЮ МО:19.

ЗЕО ІЮО МО:21 являє собою рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, отриману з виду

Вгемірасійи5 Іаїегозрогих, що кодує білок ТІС4863 з відкритої рамки зчитування у положенні нуклеотидів 1-951 та кодон термінації трансляції.

ЗБО ІЮО МО:22 являє собою амінокислотну послідовність трансляції з відкритої рамки зчитування, як указано в 5ЕО ІЮ МО:21.

ЗЕО ІЮ МО:23 являє собою амінокислотну послідовність зрілого білка ТІС3668, тТІС3668.

ЗЕО ІЮ МО:24 являє собою амінокислотну послідовність зрілого білка ТІС3669, ттТІС3669.

ЗЕО ІЮ МО:25 являє собою амінокислотну послідовність зрілого білка ТІС3670, ттТІС3670.

ЗЕО ІЮ МО:26 являє собою амінокислотну послідовність зрілого білка ТІС4076, тТІС4076.

ЗЕО ІЮ МО:27 являє собою амінокислотну послідовність зрілого білка ТІС4078, тТІС4078.

ЗЕО ІЮ МО:28 являє собою амінокислотну послідовність зрілого білка ТІС4260, тТІС4260.

ЗЕО ІЮ МО:29 являє собою амінокислотну послідовність зрілого білка ТІС4346, ттТІС4346.

ЗЕО ІЮ МО:30 являє собою амінокислотну послідовність зрілого білка ТІС4826, ттТІС4826.

ЗЕО ІЮ МО:31 являє собою амінокислотну послідовність зрілого білка ТІС4861, ттТІС4861.

ЗЕО ІЮ МО:32 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує білок ТІС3668, призначену для експресії у рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:33 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІСЗ3668, тТІС3668, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:34 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує білок ТІС3669, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:35 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІСЗ3669, тТІС3669, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:36 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує білок ТІС3670, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:37 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІСЗ3670, ттТІС3670, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:38 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує білок ТІС4076,

Зо призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:39 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІС4076, ттТІС4076, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:40 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує білок ТІС4078, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:41 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІС4078, тТІС4078, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:42 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує білок ТІС4260, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:43 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІС4260, тТІС4260, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:44 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує білок ТІС4346, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:45 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІС4346, ттТІС4346, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:46 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує білок ТІС4826, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:47 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІС4826, тТІС4826, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:48 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує білок ТІС4861, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:49 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІС4861 (тТтІС4861), зрілий білок ТІС4862 (тТІС4862) та зрілий білок ТІС4863 (ттТІС4863), призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:50 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує білок ТІС4682, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:51 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує білок ТІС4863, призначену для експресії в рослинах.

ЗЕО ІЮ МО:52 є нуклеотидною послідовністю, яка являє собою синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (-у-ланцюгом ДНК, що кодує описаний у цій заявці білок, та відповідній 60 положенням від 1 до 36 5ЕО ІО МО:1 (прямий праймер ТІСЗ3668).

ЗЕО ІЮ МО:53 є нуклеотидною послідовністю, яка являє собою синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (ї)-ланцюгом ДНК, що кодує описаний у цій заявці білок, та відповідній положенням від 920 до 954 5ЕО ІЮ МО:1 (зворотний праймер ТІС3668).

ЗЕО ІЮ МО:54 є нуклеотидною послідовністю, яка являє собою синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (-у-ланцюгом ДНК, що кодує описаний у цій заявці білок, та відповідній положенням від 1 до 41 5ЕО ІО МО:З (прямий праймер ТІСЗ3669).

ЗЕО ІЮ МО:55 є нуклеотидною послідовністю, яка являє собою синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (ї)-ланцюгом ДНК, що кодує описаний у цій заявці білок, та відповідній положенням від 920 до 954 5ЕО ІЮ МО:З (зворотний праймер ТІС3669).

ЗЕО ІЮ МО:56 є нуклеотидною послідовністю, яка являє собою синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (-у-ланцюгом ДНК, що кодує описаний у цій заявці білок, та відповідній положенням від 1 до 36 5ЕО ІО МО:5 (прямий праймер ТІСЗ3670).

ЗЕО ІЮ МО:57 є нуклеотидною послідовністю, яка являє собою синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (ї)-ланцюгом ДНК, що кодує описаний у цій заявці білок, та відповідній положенням від 920 до 954 5ЕО ІЮ МО:5 (зворотний праймер ТІС3670).

ЗЕО ІЮ МО:58 є нуклеотидною послідовністю, яка являє собою синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (-у-ланцюгом ДНК, що кодує описаний у цій заявці білок, та відповідній положенням від 1 до 41 5ЕО ІО МО:7 (прямий праймер ТІС4076).

ЗЕО ІЮ МО:59 є нуклеотидною послідовністю, яка являє собою синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (ї)-ланцюгом ДНК, що кодує описаний у цій заявці білок, та відповідній положенням від 920 до 954 5ЕО ІЮ МО:7 (зворотний праймер ТІС4076).

ЗЕО ІЮ МО:60 є нуклеотидною послідовністю, яка являє собою синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (-у-ланцюгом ДНК, що кодує описаний у цій заявці білок, та відповідній положенням від 1 до 36 5ЕО ІО МО:9 (прямий праймер ТІС4078).

ЗЕО ІЮ МО:61 є нуклеотидною послідовністю, яка являє собою синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (ї)-ланцюгом ДНК, що кодує описаний у цій заявці білок, та відповідній положенням від 920 до 954 5ЕО ІЮ МО:9 (прямий праймер ТІС4078).

ЗЕО ІЮ МО:62 являє собою рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, отриману з виду

Вгемірасійи5 Іаїетозрогих, що кодує білок ТІС2462 з відкритої рамки зчитування у положенні

Зо нуклеотидів 1-951 та кодон термінації трансляції.

ЗЕБЕО ІЮО МО:63 являє собою амінокислотну послідовність трансляції з відкритої рамки зчитування, як указано в 5ЕО ІЮ МО:62.

ЗЕО ІЮ МО:64 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІСЗ3668, тТІС3668, для експресії в бактеріях.

ЗЕО ІЮ МО:65 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІСЗ3669, тТІС3669, для експресії в бактеріях.

ЗЕО ІЮ МО:6б6 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІСЗ3670, тТІС3670, для експресії в бактеріях.

ЗЕО ІЮ МО:67 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІС4076, тТІС4076, для експресії в бактеріях.

ЗЕО ІЮ МО:68 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІС4078, тТІС4078, для експресії в бактеріях.

ЗЕО ІЮ МО:69 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІС4260, тТІС4260, для експресії в бактеріях.

ЗЕО ІЮ МО:70 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІС4346, тТІС4346, для експресії в бактеріях.

ЗЕО ІЮ МО:71 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІС4826, тТІС4826, для експресії в бактеріях.

ЗЕО ІЮ МО:72 являє собою синтетичну нуклеотидну послідовність, що кодує зрілий білок

ТІС4861 (тТІС4861), ТІС4862 (тТІС4862) та ТІС4863 (тТІС4863), для експресії в бактеріях.

ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС СУТНОСТІ ВИНАХОДУ

Проблема у галузі боротьби з сільськогосподарськими шкідниками може бути охарактеризована як потреба у нових білках-токсинах, які ефективні проти цільових шкідників, проявляють токсичність широкого спектра проти цільових видів шкідників, здатні експресуватися в рослинах, не викликаючи небажаних агрономічних проблем, та забезпечують альтернативний спосіб впливу у порівняні з існуючими на теперішній день токсинами, які використовують в рослинах у комерційних цілях. У цьому документі описані нові інсектицидні білки, як приклад представлені ТІС3668, та розглянута кожна з цих потреб, зокрема, широкий спектр проти твердокрилих та лускокрилих комах-шкідників, а конкретніше проти видів-шкідників (516) кукурудзяного жука.

Посилання у цій заявці на "ТІС3668", "білок ТІС3668", "білковий токсин ТІС3668", "білки- токсини ТІС3668", "споріднені ТІС3668 токсини", "клас або родина споріднених ТІС3668 білкових токсинів", "споріднені ТІС3668 білки-токсини", "білки типу ТІС3668", "подібні ТІС3668 білки", "споріднені ТІС3668 поліпептиди-токсини", "споріднені ТІС3668 пестицидні білки" або "поліпептид типу ТІС3668, що має інгібуючу активність щодо комах" та тому подібні відноситься до будь-якого нового білка, що має інгібуючу активність щодо комах, який містить, складається из, практично гомологічний, подібний з або отриманий з будь-якої поліпептидної послідовності, що має інгібуючу активність щодо комах, ТІС3668 (5ЕО ІЮ МО:2) та її сегментів, які мають інгібуючу активність щодо комах, або їх комбінацій, які наділені активністю проти твердокрилих шкідників та лускокрилих шкідників, включаючи будь-який білок, який проявляє інгібуючу активність щодо комах, якщо вирівнювання таких білків з ТІС3668 (ЗЕО І МО:2), ТІСЗ3669 (5ЕО

ІО МО:4), ТІСЗ3670 (5ЕО І МО:6), ТІС4076 (5ЕО ІО МО:8), ТІС4078 (5ЕО 10 МО:10), ТІС4346 (ЗЕО І МО:14), ТІС4826 (5ЕО І МО:16), ТІС4861 (ЗЕО ІО МО:18), ТІС4862 (ЗЕО ІО МО:20) та

ТІС4863 (5ЕО ІЮ МО:22) приводить до ідентичності амінокислотної послідовності у будь-якій частині у відсотках від приблизно 35 95 до приблизно 100 95 відсотків. Білкові токсини типу

ТІСЗ3668, описані у цій заявці, включають ТІС3668, ТІСЗ3669, ТІСЗ3670, ТІС4076, ТІС4078,

ТІС4346, ТІС4826, ТІС4861, ТІС4862, ТІС4863 та складений білок ТІС4260 (ЗЕО ІЮ МО:12).

Передбачається, що клас білка типу ТІС3668 включає форми попередників, а також форми повної довжини цих білків.

Термін "сегмент" або "фрагмент" використовується у цій заявці для опису неперервних амінокислотних або нуклеотидних послідовностей, які коротші за повну амінокислотну або нуклеотидну послідовність, що описує білок типу ТІС3668. Сегмент або фрагмент, який проявляє інгібуючу активність щодо комах, також описаний у цій заявці, якщо вирівнювання такого сегмента або фрагмента з відповідною ділянкою білка типу ТІС3668, указаного в ЗЕО ІЮ

МО:2, приводить до ідентичності амінокислотної послідовності будь-якої частини у відсотках від близько 35 до близько 100 відсотків між цим сегментом або фрагментом та відповідною ділянкою білка типу ТІС3668.

Посилання у цій заявці на терміни "активний" або "активність", "пестицидна активність" або "Інсектицидна активність", "інгібітор щодо комах" або "інсектицидний" відносяться до

Зо ефективності токсичного агенту, такого як білок-токсин, щодо інгібування (інгібування росту, харчування, плодючість або життєздатність), пригнічення (пригнічення росту, живлення, плодючості або життєздатності), боротьби (боротьба із зараженням шкідниками, контроль активності харчування шкідників на певній сільськогосподарській культурі, що містить ефективну кількість білка типу ТІС3668) або знищення (викликає патологічні порушення, летальність або зниження плодючості) шкідника. Ці терміни призначені для охоплення результату забезпечення ефективної кількості для пестицидної дії токсичного білка на шкідника, причому вплив токсичного білка на шкідника приводить до патологічних порушень, летальності, зниженню плодючості або затримці росту. Ці терміни також включають відлякування шкідників від рослини, тканин рослини, частини рослини, насіння, рослинних клітин або від конкретного географічного розташування, у якому може вирощуватися рослина, в результаті забезпечення ефективної кількості для пестицидної дії токсичного білка в або на рослині. Загалом, пестицидна активність відноситься до здатності токсичного білка бути ефективним для інгібування росту, розвитку, життєздатності, кормової поведінки, шлюбної поведінки, плодючості або будь-якого вимірюваного зниження, викликаного несприятливими ефектами, викликаними введенням до раціону комахи цього білка, фрагмента білка, сегмента білка або полінуклеотиду, конкретному цільовому шкіднику, включи, але не обмежуючись ними, комахи порядку

Іерідорієга або СоІеоріега. Токсичний білок може продукуватися рослиною або може застосовуватися до рослини або до оточуючого середовища у тому місці, де знаходиться рослина. Терміни "біологічна активність", "ефективний", "діючий" або їх варіації також є термінами, що взаємозаміно використовуються у цій заявці, для опису впливу білків за цим винаходом на цільових комах-шкідниках.

Ефективна кількість для пестицидної дії токсичного агенту, яка забезпечується в раціоні цільового шкідника, проявляє пестицидну активність при контакті токсичного агенту з шкідником.

Токсичним агентом може бути інсектицидний білок або один або більше хімічних агентів, відомих у цій галузі техніки. Інсектицидні хімічні агенти та інсектицидні білкові агенти можна застосовувати окремо або у комбінаціях один з одним. Хімічні агенти включають, але не обмежуються ними, молекули дцРНК, націлені на специфічні гени для пригнічення у цільовому шкіднику, органічні хлориди, органічні фосфати, карбамати, піретроїди, неонікотиноїди та ріаноїди. Інсектицидні білкові агенти включають білкові токсини, представлені у цій заявці, а бо також інші білкові токсичні агенти, у тому числі такі, що націлені на види лускокрилих та твердокрилих, а також білкові токсини, які використовуються для боротьби з іншими шкідниками рослин, такі як Сту-білки, доступні у цій галузі техніки для застосування у боротьбі з видами

Нептірієгап (напівтвердокрилих) та (Ноторіегап) рівнокрилих.

Передбачається, що посилання на шкідника, зокрема шкідника сільськогосподарської рослини, означає шкідників культурних рослин, особливо тих лускокрилих, з якими боряться з допомогою класу споріднених типу ТІС3668 білкових токсинів. Однак, посилання на шкідника може також включати комах-шкідників рослин напівтвердокрилих та рівнокрилих, а також нематоди та гриби за тих же умов, коли токсичні агенти, націлені на цих шкідників, сумісно локалізуються або присутні разом з одним або більше білками класу споріднених ТІС3668 білкових токсинів.

Окремі білки, які включають клас споріднених ТІС3668 білків зв'язані загальною функцією та проявляють інсектицидну активність щодо комах-шкідників з видів комах СоіІеоріега та

І ерідоріега, включи дорослих особин, лялечок, личинок та молодих особин. Комахи порядку

І ерідоріега включають, але не обмежуються ними, малі совки, совки, п'ядуни та представники підродини Неїїоїйіпає семейства Мосіцідає, наприклад, совку трав'яну (б5родорієга пидірегаа), совку карадрину (бродорієгта ехідна), совку латукову (Матевзіга сопіїдигайа), совку-іпсилон (Адгоїї5 ірзіоп), совку ні (Т/іспоріивіа пі), соєву совку (Рзепдоріивзіа іпсішдепв), гусінь совки бархатних бобів (Апіісагзіа деттаїаїв5), гусінь-шкідника конюшини (Нурепа зсабга), тютюнову совку (Неїїоїйів мігезсеп5), совку бавовнику (Адгоїїз зибіетапеа), совку (Рзецадаїєїа ипірипсіа), совку прямокутну (Адгоїї5 опПподопіа); точильники, чохликові молі, гусені, що випускають павутиння, шкідники шишок, мермітиди та вогнівки, скелетуючі листя, з родини Ругаїйдає, наприклад, європейський кукурудзяний метелик (О5їгіпіа пибіїаїйв5), вогнівку (Атувєїоів ігапзіпеПа), вогнівку кукурудзяну (Статбривх саїїдіпозеЇйи5), луговой мотилек (Негреодгатта |Ісагзізаїів), вогнівку соняшнику (Нотоєозота еєїесівІшт), вогнівку кукурудзяну стеблову малу (Еіазтораїрив

ІдпозеїІш5); трубковійки, листовійки, шкідники насіння та шкідники фруктів з родини Тогігісідає, наприклад, яблунева плодожерка (Суадіа ротопеїІа), листовійку виноградну (Епадоріга міеапа), плодожерку східну (Старпоїйа тоїевіа), листовійку соняшника (5йціІєїта НеїЇапінапа) та багато інших економічно важливих шкідників порядку Герідаоріега, наприклад, капустяна міль (РішеїПа хуїозієІїа), бавовникова міль (Ресііпорпогта доззурієїа) та непарний шовкопряд (Гутапіга

Зо дієраг). Інші комахи шкідники порядку Герідоріега включають, наприклад, АіІабата агойасеєа (совка бавовникова американська), Агспір5 агдугозріа (листовійка плодових дерев), АгсНір5 гозапа (розанна листовійка) та інші види Агспір5, Спіо зирргеззаїїз5 (вогнівка азіатська стеблова або свердлувальник рисовий стебловий), Спарнпаостосі5 теаіпаїї5 (рисова листовійка), Статрив саїїдіпозеие (кукурудзяна вогнівка), Статрив ієїєтейив5 (вогнівка тонконогу), Оіаїгаєа дгапаіобзеМйа (вогнівка кукурудзяна південно-західна), Оіаїйаєа засспНагаї5 (американська тростинова вогнівка), Еагіаз5 іпеШапа (совка бавовникова), Еапаз уЩеїМа (совка бавовникова плямиста), Неїїсомегра аптідега (совка американська), Неїїсохегра 7еа (совка бавовникова американська або совка бавовникова), Неїїоїнпіє мігезсепе (совка тютюнова), Негреюдгатта

Ісагвізайє (лучний метелик), Горезіа роїгапа (листовійка виноградна), РПуїЇоспівіїв сйгеїа (цитрусова мінуюча міль), Рієгіз ргаззісає (капустяна білянка), Ріегіз гарає (білянка ріпна або ріпниця), Рішеїйа хуїозіва (капустяна міль), 5родорієга ехідна (совка-карадрина), бродорієга

Ійига (тютюнова совка, гусінь, що поїдає суцвіття) та Тша арзоїша (томатна мінуюча міль).

Комахи порядку СоіІеоріеєга включають види, але не обмежуються ними, Адгіоїе5 5рр.,

Апіпопотив 5рр., Аютагіа Ііпеагіх, Спавеїоспета (їріайбє, Совзтороїйе5 врр., Сигсціо врр.,

Оептевієз 5рр., Оіабгоїїса 5рр., Еріасиппа 5рр., Егетпи5 5рр., І еріїпоїагза адесетіїпеаїа,

І іввоторігив 5рр., МеІоіопіна 5рр., Огусаерпіїй5 в5рр., Сбіоптупспив 5рр., РпПусіїпив врр., Рорійа 5рр., РзуПодез 5рр., Впі2орепна з5рр., Зсагареідає, Зпорнийи5 5рр., Зйоїгода 5рр., Тепебгіо 5рр.,

Тироїїшт 5рр. та Ттододепта 5рр., зокрема шкідниками є Оіабгоїїса мігдітега мігдітега (західний кукурудзяний жук, МУСК), Оіабгоїйса Багбет/і (північний кукурудзяний жук, МОСК), Оіабгоїїса мігдітега 76ває (мексиканський кукурудзяний жук, МСЕК), Оіабгоїїса Банеага (бразильський кукурудзяний жук (ВК), Оіабгоїїса ипдесітрипсіаїа помагаїйї (південний кукурудзяний жук, БСК) та комплекс бразильського кукурудзяного жука (ВСЕ), що складається з видів Оіабгоїїса мігпдшіа та Оіаргоїїса взресіова).

Посилання у цій заявці на термін "виділена молекула ДНК", "виділена молекула полінуклеотиду" або еквівалентний термін або фразу, призначена для позначення того, що молекула ДНК являє собою молекулу ДНК, яка присутня окремо або у комбінації з іншими композиціями, але не в її природному середовищі. Наприклад, елементи нуклеїнової кислоти, такі як кодуюча послідовність, інтронна послідовність, нетранслюєма лідерна послідовність, промоторна послідовність, термінуюча послідовність транскрипції тощо, які природнім чином 60 знаходяться в ДНК геному організму, не вважаються "виділеними" до тих пір, доки такий елемент знаходиться у геномі організму та у тому місті геному, в якому він зустрічається у природі. Тем не менше, кожний з цих елементів та їх частини можуть бути "виділеними" у рамках цього розкриття за умови, що елемент не знаходиться всередині геному організму та у том місті у геномі, в якому він зустрічається у природі. Так само нуклеотидна послідовність, що кодує інсектицидний білок або будь-який інсектицидний варіант цього білка, що зустрічається у природі, буде представляти собою виділену нуклеотидну послідовність, якщо нуклеотидна послідовність не знаходиться у ДНК бактерії, в якій зустрічається у природі послідовність, що кодує цей білок. Синтетична нуклеотидна послідовність, що кодує амінокислотну послідовність інсектицидного білка природного походження, буде вважатися виділеною для цілей цього опису.

Для цілей цього опису трансгенна нуклеотидна послідовність, тобто нуклеотидна послідовність

ДНК, вставлена у геном клітин рослини або бактерії, або присутня у позахромосомному векторі, вважається виділеною нуклеотидною послідовністю незалежно від того, чи присутня вона всередині плазміди або подібної структури, що використовується для трансформації клітин, всередині геному рослини або бактерії або присутня у кількостях, що виявляються, у тканинах, потомстві, біологічних зразках або товарних продуктах, отриманих з цієї рослини або бактерії.

Як додатково описано у цій заявці відкрита рамка зчитування (ОКР) (5ЕО ІО МО:1), що кодує

ТІСЗ668 (5ЕО І МО:2), виявлена в ДНК, отриманій з штаму ЕС5552 Вгемірасійи5 Іагегозрогив.

Потім проводили скринінг інших бактеріальних геномів на наявність послідовностей, що кодують споріднений ТІС3668 білок. У цих інших бактеріальних геномах ідентифікували кілька інших відкритих рамок зчитування, кодуючих амінокислотні послідовності, що нагадують білок ТІС3668

ЕО5552, включаючи подібні ТІС3668 білки - ТІС3669, яка виявлена в ДНК, отриманій з штаму

ЕС5551 Вгемірасійив5 Іаіегозрогив (5ЕО ІЮ МО:3, що кодує ЗЕО ІО МО 4), ТІС3670, яка виявлена в ДНК, отриманій з штаму Е65553 Вгемірасійи5 Іаїеговрогих (ЗЕБО ІО МО:5, що кодує 5БЕО ІЮ

МО:6), ТІС4076, яка виявлена в ДНК, отриманій з штаму АТОС6456 Вгемірасішв Іагегозрогив5 (ЗЕБЕО ІЮО МО:7, що кодує 5ЕБЕО ІЮ МО:8), ТІС4078, яка виявлена в ДНК, отриманій з штаму

ЕСа4227 Вгемірасійив Іаїегозроги5 (ЗЕО ІЮ МО:9, що кодує ЗЕО ІЮ МО:10), ТІС4346, яка виявлена в ДНК, отриманій з штаму Еб5551 Вгемібасіїи5 Іаїєгозроги5 (ЗЕО ІЮО МО:13, що кодує ЗЕО ІЮ

МО:14), ТІС4826, яка виявлена в ДНК, отриманій з штаму АСО0О021010 Вгемібасіїи5 Іаїегозрогив5 (ЗЕО ІЮО МО:15, що кодує ЗЕО ІЮ МО:16), ТІС4861 (ЗЕО ІЮ МО:17, що кодує БЕО ІЮ МО:18),

Коо) ТІС4862 (ЗЕО ІЮ МО:19, що кодує БЕО ІЮО МО:20) та ТІС4863 (ЗЕО ІО МО:21, що кодує ЗЕО ІЮ

МО:22), яка виявлена в ДНК, отриманій з штаму ЕбС4227 Вгеємірасіййв5 Іагегозроги5. Один додатковий подібний ТІС3668 білок, ТІС4260 (5ЕО ІЮ МО:11, що кодує ЗЕО ІЮ МО:12) створений комбінуванням варіанту амінокислотної послідовності природного походження з п'яти різних нативних подібних ТІС3668 білків для отримання складеного білка.

Відповідні кодуючі послідовності клонували та експресували у мікробних клітинах- господарях для отримання рекомбінантних білків для використання у біологічних аналізах на комахах. Як додатково описано у цій заявці, показано, що ці білки проявляють біологічну активність проти видів Оіаргоїїса, включаючи західного кукурудзяного жука (МУСК, Оіабгоїїса мігайїега мігоаїега), західно-європейського кукурудзяного метелика (ЕСВ, Озійпіа пибіаївб), південно-західного кукурудзяного метелика (З5МУС, Оіаїгаєа дгападіозеїІа) та соєвої совки (ЗВІ,

Спгузодеїхів іпсійдепв).

Неочікуваною ознакою білків типу ТІС3668 є присутність М-кінцевого амінокислотного сегмента, що відповідає амінокислотним положенням від 17 до 23 для ТІСЗ668, ТІСЗ669,

ТІСЗ3670, ТІС4076, ТІС4078, ТІС4260, ТІС4346, ТІС4826, ТІС4863; від 1 до 12 для ТІС4861 та від 1 до 21 для ТІС4862. Кожний з цих М-кінцевих амінокислотних сегментів може бути видаленим з відповідного білка, та також може бути видалена полінуклеотидна послідовність, що кодує відповідний сегмент. При експресії іп ріапіа видалення цих відповідних сегментів неочікувано приводить до збільшення інсектицидної активності проти видів кукурудзяного жука, у порівняні з експресією повнорозмірного білкового токсину, що містить видалений сегмент. Сегменти білкових токсинів без М-кінцевих амінокислотних сегментів, згаданих вище, у цьому документі названі "зрілими білками-токсинами типу ТІС3668". Загалом, посилання на зрілий варіант білка типу ТІС3668 відмічена у цьому документі буквою "т" перед назвою токсину для відмінності посилання на зрілу послідовність від повнорозмірної нативної послідовності. Наприклад, зрілий варіант амінокислотної послідовності для ТІС3668 (5ЕО ІЮ МО:2) являє собою ттгІС3668 (ЗЕО

ІО МО:23). Зрілі варіанти ТІС3669 (5ЕО ІЮ МО:4), ТІС3670 (ЗЕО ІЮ МО:6), ТІС4076 (ЗЕО ІЮ

МО:8), ТІС4078 (5ЕО ІЮ МО:10), ТІС4260 (5ЕО ІЮО МО:12), ТІС4346 (5ЕО ІЮО МО:14) та ТІС4826 (ЗЕО ІОЮ МО:16) представляють собою ттгІС3669 (ЗЕО ІЮ МО:24), тТІС3670 (5ЕО ІЮО МО:25), ттІС4076 (5ЕО 10 МО:26), тТІС4078 (5ЕО 10 МО:27), ттІС4260 (5ЕО ІЮ МО:28), тТІС4346 (ЗЕО ІЮ МО:29) та ттТІС4826 (ЗЕО ІЮ МО:30), відповідно. Повнорозмірні білки ТІС4861 (5ЕО ІЮ 60 МО:18), ТІС4862 (5ЕО ІЮ МО:20) та ТІС4863 (ЗЕО ІЮ МО:22) представляють собою варіанти довжини послідовностей одна одної та відрізняються лише за довжиною свого М-кінцевого амінокислотного сегмента. Видалення М-кінцевого амінокислотного сегмента в ТІС4861,

ТІС4862 та ТІС4863 створює ідентичну зрілу амінокислотну послідовність для ттІС4861, ттІС4862 та ттІС4863. Таким чином, амінокислотні послідовності для тт/С4861, тТІС4862 та ттТІС4863 кодуються однією і тією ж полінуклеотидною послідовністю (ттІС4861, 5ЕО І

МО:31). Зрілі послідовності подібних ТІС3668 білків кодуються 5ЕО ІЮ МО:64 (кодуюча ттІС3668), ЗЕО ІЮ МО:65 (кодуюча ттТІС3669), ЗЕО ІЮ МО:66 (кодуюча ттТІС3670), 5ЕО ІЮ

МО:67 (кодуюча ттІС4076), 5БЕО ІЮ МО:68 (кодуюча тТІС4078), 5БО І МО:69 (кодуюча ттІС4260), 5ЕО ІО МО:70 (кодуюча ттІС4346), 5ЕО ІЮ МО:71 (кодуюча ттТІС4826) та 5ЕО ІЮ

МО.72 (кодуюча тТтІС4861, тТІС4862 та тТІС4863) для експресії в бактеріальних господарях.

Додаткові представники родини типу ТІС3668 можна створювати шляхом використання амінокислотних варіантів природного походження з деяких або усіх представників родини для отримання нових білків з більшим рівнем різноманіття амінокислотних послідовностей та з новими властивостями. Варіанти класу білкових токсинів типу ТІС3668 отримували шляхом вирівнювання амінокислотних послідовностей представників родини типу ТІС3668 та комбінованих відмінностей на рівні амінокислотної послідовності у новій амінокислотній послідовності та внесення відповідних змін у полінуклеотиди, що кодують такі варіанти. Одним таким прикладом є ТІС4260. 5ЕБО ІЮ МО:11 являє собою полінуклеотидну послідовність, що кодує білок ТІС4260 (ЗЕО ІЮ МО:12). Зрілий білок (тТІС4260, 5ЕО ІЮ МО:28) кодується полінуклеотидною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:43.

Фрагменти білкових токсинів типу ТІС3668 можуть бути усічених форм, в яких одна або більше амінокислот видалені з М-термінального кінця, С-термінального кінця, середини білка або їх комбінацій з інгібуючою активністю щодо комах. Ці фрагменти можуть бути природного походження або синтетичними варіантами ТІС3668, ТІС3669, ТІС3670, ТІС4260, ТІС4076,

ТІС4078, ТІС4346, ТІС4826, ТІС4861, ТІС4862 або ТІС4863, але повинні зберігати або покращувати інгібуючу активність щодо комах ТІС3668, ТІС3669, ТІС3670, ТІС4260, ТІС4076,

ТІС4078, ТІС4346, ТІС4826, ТІС4861, ТІС4862 або ТІС4863. Усічені М-кінцеві або С-кінцеві делеційні варіанти включають, але не обмежуються ними, білки ТІС3668, ТІСЗ3669, ТІСЗ3670,

ТІС4260, ТІС4076, ТІС4078, ТІС4346, ТІС4826, ТІС4861, ТІС4862 або ТІС4863, у яких відсутні

Зо амінокислотні залишки будь-якого з М-кінця та/або С-кінця. Наприклад, М-кінцеві амінокислотні залишки від 1 до 23 білка ТІС3668 можуть бути видалені з отриманням білка-токсину, що містить амінокислоти 24-317 5ЕО ІЮ МО:2. Видалення 10 або 20 амінокислот з С-кінцевого амінокислотного кінця білка ТІС3668 приводило до втрати інсектицидної активності, тоді як видалення єдиної амінокислоти не впливало на активність.

Білки класу білків типу ТІС3668 та білки, які нагадують білки класу білків типу ТІСЗ3668, можуть бути ідентифіковані шляхом порівняння один з одним з використанням різних комп'ютерних алгоритмів, відомих у цій галузі техніки (див. таблиці 1 та 2). Ідентичності амінокислотних послідовностей, про які повідомляється у цьому документі, є результатом вирівнювання програмою Сіиза! МУ з використанням таких параметрів за замовчуванням: вагова матриця: ріозит, штраф за внесення пропуску: 10,0, штраф за продовження пропуску: 0,05, гідрофільні пропуски: вкл., гідрофільні залишки: ОРОМООЕКК, штрафи за пропуски за специфічними залишками: вкл. (Тпотрзоп, єї а/!.(1994) Мисівїс Асіа5 Незеагсі, 22:4673-4680).

Відсоток ідентичності амінокислот далі розраховують у вигляді результату множення 100 95 на (ідентичність амінокислот/довжина досліджуваного білка). Інші алгоритми вирівнювання також доступні у цій галузі техніки та забезпечують результати, аналогічні результатам, отриманим з використанням вирівнювання програмою Сіиеаї МУ.

Передбачається, що білок, який проявляє інгібуючу активність проти видів лускокрилих комах являє собою представника класу білкових токсинів типу ТІС3668, якщо цей білок використовується у запиті, наприклад, при вирівнюванні у програмі Сіиеїа! МУ, та щонайменше один з білків за цим винаходом, указаний як ттІС4260, ідентифікований як співпадіння у такому вирівнюванні, при якому цей запитуваний білок проявляє щонайменше від близько 85 95 до близько 100 95 ідентичності амінокислотної послідовності по всій довжині запитуваного білка, що складає 85 95, 86 95, 87 У, 88 У, 89 95, 90 95, 91 о, 92 9, 93 о, 94 90, 95 95, 96 95, 97 90, 98 90, 99 Фо, 100 95 або будь-яку частину у відсотках у цьому діапазоні; або щонайменше один з білків за цим винаходом, указаний як ттТІС3668, ідентифікований як співпадіння у такому вирівнюванні, при якому цей запитуваний білок проявляє щонайменше від близько 89 95 до близько 100 95 ідентичності амінокислотної послідовності по всій довжині запитуваного білка, що складає 89 96, 90 9о, 91 95, 92 96, 93 У, 94 9о, 95 9о, 96 95, 97 90, 98 9, 99 90, 100 90 або будь- яку частину у відсотках у цьому діапазоні; або щонайменше один з білків за цим винаходом, бо указаний як ттТІ/С3669 та/або ттІС3670, ідентифікований як співпадіння у такому вирівнюванні,

при якому цей запитуваний білок проявляє щонайменше від близько 90 95 до близько 100 95 ідентичності амінокислотної послідовності по всій довжині запитуваного білка, що складає 90 95, 91 Фо, 92 Фо, 93 95, 94 95, 95 95, 96 У, 97 У, 98 Ус, 99 Фо, 100 95 або будь-яку частину у відсотках у цьому діапазоне; або щонайменше один з білків за цим винаходом, указаний як ттІС4826, ідентифікований як співпадіння у такому вирівнюванні, при якому цей запитуваний білок проявляє щонайменше від близько 9195 до близько 10095 ідентичності амінокислотної послідовності по всій довжині запитуваного білка, що складає 91 95, 92 95, 93 У, 94 9о, 95 Об, 96 Фо, 97 о, 98 9», 99 о, 100 95 або будь-яку частину у відсотках у цьому діапазоні.

Передбачається, що білок, який проявляє інгібуючу активність щодо комах проти видів твердокрилих комах являє собою представника класу білкових токсинів типу ТІС3668, якщо цей білок використовується у запиті, наприклад, при вирівнюванні у програмі СіиєїаІ! МУ, та щонайменше один з білків за цим винаходом, указаний як тТІС3668, тТІС3669, тТІС3670, ттІС4076, ттІС4078, ттТІС4260, тТІС4346, ттТІС4826, ттТІС4861, тТІС4862, та тТІС4863, ідентифікований як співпадіння у такому вирівнюванні, при якому цей запитуваний білок проявляє щонайменше від близько 3595 до близько 10095 ідентичності амінокислотної послідовності по всій довжині запитуваного білка, що складає 35 95, 40 95, 50 о, 60 о, 70 Об, 7590, 769, 77 У, 78 90, 79 У, 80 9, 81 в, 82 95, 83 У, 84 Ус, 85 У, 85 У, 87 У, 88 Ус, 89 У, 90 У, 91 Фо, 92 Фо, 93 95, 94 95, 95 95, 96 У, 97 У, 98 Ус, 99 Фо, 100 95 або будь-яку частину у відсотках у цьому діапазоні.

Типові білки класу білкових токсинів типу ТІС3668 вирівнювали один з одним з використанням алгоритму Сіна! МУ. Як показано у таблиці 1, для кожної пари повнорозмірних білків була створена попарна матриця відсоткових ідентичностей амінокислотних послідовностей. Як показано у таблиці 2, для кожної пари білків зрілої довжини була створена попарна матриця відсоткових ідентичностей амінокислотних послідовностей.

Таблиця 1

Попарна матриця відображає типові повнорозмірні білки. ниюніьнвяяшшотифНининининннш инші пог м | 2168 м гг тв ю| т 994|97819621|9721|931 | 956 | 96,51 97,2 | 94,3 оеофрозевв, 1515 8910) (905) (309) (295) (908) (806) (906). (28) 262 СО 99,4 98419681972193,719621972)97,81 95 оо фрозето вт) 812) 907 (309297 (905) (808) (910). 80) 256 09 97,8 | 98,4 96,81 96,8 934 | 9621 97,2 | 97,5 | 94,6 я фозеве іо ві 7907 807 296) (905). (906) 809) (300). 55 (902) 96,2 | 96,8 | 96,8 98,4 19431972 | 981 | 98,1 | 962 ов рового дю ол 8123288) 908) (811) 911) 05) 20 оо 97,21 97,2 | 96,8 | 984 94,31 972 | 98,1 1 98,7 | 96,2 оте поява дв зов (вол 12 Гев8) 90) (811) 919). 305) 297 т) 96,41 97,1 | 96,7 | 97,7 | 97,7 99,7 | 99,7 | 98,4 | 954 отв появ 095 297 (6) 290) 9579065) (805) (901). 292у| 22 26 96,2 | 96,81 96,8 | 97,8 | 97,8 | 96,8 99,7 | 98,41 95,2 ого почав 905 905) (805) (306). (306) 906) 819) (910). 00) 22 2) 96,519721972 | 981 | 98,1 | 96,2 | 991 98,7 | 95,6 ге |появв дв дв) (во) (11) (31) 05) 8120819) ов ее ою 972197,8197,51981198,7| 95 | 97,8 | 98,7 95,9 оте |псявов дв 510) (808) (11) 913) 90) (910) 813) 7 вову| оо о 943| 95 194619621|9621| 921 | 94,6 | 95,6 | 95,9 ло повотв рве 501) (800) (305). (905) 292) (900) (809) (30902620 12. ІТІС4260 962|956195,ж31|9341| 93,7 | 893 | 91,81 92,7 | 93,4 | 96,2 305) | (303) | (302) | (296) | (297) | (283) | (291) | (294) | (296) | (305

Описані таблиці: Вирівнювання Сіивіа! УМ між (Х) та (У) показано у попарній матриці. Стовбці під (М) відносяться до 5ЕО ІЮО МО. Стовбці (М) відносяться до назви білків (Мо ТІС). Відсоток ідентичності амінокислот між всіма парами розрахований та представлений першим числом у

Зо кожній комірці. Друге число у кожній комірці (у дужках) представляє кількість ідентичних амінокислот між парою.

Таблиця 2

Попарна матриця відображає типові зрілі білки. м км 98,3 98 98 96,3 | 96,9 | 96,6 | 96,3 98,3 98,6 98 97,3 | 97,3 | 96,6 | 96,3 98 98,6 98,6 | 97,3 98 97,3 | 95,9 ттІС4861 98 98 98,6 96,6 | 97,3 | 96,9 | 95,6

З1 ттІС4862 І , і , , 92,5 (273

Що тТІС4863 (289) | (289) | (291) о (285) | (287) | (286) | (282) 96,3 | 97,3 | 97,3 | 96,6 99,3 98 93,9 96,9 | 97,3 98 97,3 | 99,3 98,6 | 94,6 96, | 96,6 | 97,3 | 96,9 98 98,6 94,6 96,3 | 96,3 | 95,9 | 956 | 93,9, | 94,6 | 94,6 932 | 93,6 | 932 | 92,5 | 95,9 | 95,3 | 95,33 | 95,9

Описані таблиці: Вирівнювання Сіивіа! УМ між (Х) та (У) показано у попарній матриці. Стовбці під (М) відносяться до 5ЕО ІЮО МО. Стовбці (М) відносяться до назви білків (Мо ТІС). Відсоток ідентичності амінокислот між всіма парами розрахований та представлений першим числом у кожній комірці. Друге число у кожній комірці "(у дужках) представляє кількість ідентичних амінокислот між парою.

Повнорозмірні та зрілі білки класу білкових токсинів типу ТІС3668 також можуть бути спорідненими за первинною структурою (консервативні амінокислотні мотиви), за довжиною (близько 295 амінокислот для зрілих білків та близько 317 амінокислот для повнорозмірних білків) та за іншим властивостями. Повнорозмірні білки з цього винаходу мають виміряну масу близько 35 кДа, при аналізі в гелях для білків у денатуруючих умовах, а зрілі білюи мають виміряну масу близько 32 кДа. Властивості повнорозмірних та зрілих форм класу білкових токсинів типу ТІС3668, представлені у таблицях З та 4.

Таблиця З

Властивості повнорозмірних білків.

Кіл-ть Кіл-ть Кіл-ть .

Молеку- |Довжина : Кіл-ть во- лярна маса в аміно- Ізо- Заряд | сильно- | сильно- пдро- полярних

Білок електри- | при рН | основних |кислотних| фобних й (у кисло- й - : аміно-

Дальтонах) тах чна точка 7,0 (-) аміно- аміно- аміно- КИСЛОТ кислот кислот кислот тіс4078 | 34676,806 | 317 / 8,936 | 4,397 | 32 | 28 | 96 | по тіс4260 | 34743,98 | 317 | 9,077 | 5395 | 33 / 28 | 96 | 109

Таблиця 4

Властивості зрілих білків. й Кіл-ть й

Кіл-ть Кіл-ть .

Молеку- |Довжина сильно- : Кіл-ть во-

Білок електри- | при рН |основ-них фобних й (у кисло- . них : аміно- чна точка 7,0 (-) аміно- й аміно-

Дальтонах)| тах аміно- кислот кислот кислот кислот

ШЕ» знеи се вюеозю нн кою ттІС4862 | 32182,81 295 8,436 2,066 З1 23 81 106 тт С4863

Білки, описаного класу білкових токсинів типу ТІС3668, представляють новий клас інсектицидних білків. На основі таблиці 5 всі числа вище діагональної лінії, яка відповідає 100 95 ідентичності, представляють кількість амінокислот, що відрізняються, між відповідними білками, яких порівнювали, на перетині конкретного рядка та стовбця. Числа нижче діагональної лінії, яка відповідає 100 95 ідентичності, представляють відсоток ідентичності відповідних білків, яких порівнювали, на перетині конкретного рядка та стовбця. Представники цього класу білків зрілої довжини проявляють не більше 90,54 95 ідентичності амінокислот до будь-якого іншого інсектицидного білка, відомого у цій галузі техніки, як показано у таблиці 5. Інсектицидний білок, що проявляє найбільшу ідентичність з будь-якими білками зрілої довжини за цим винаходом, являє собою ЗЕО ІЮО МО:50 у публікації заявки на патент номер 20110030093 (АХМІ-209) з 90,5 95 ідентичності послідовності до тТІС4076, ттІС4346, тТІС4826 та ттІС4863. У цьому описі представлена активність лише проти І ерідорієга, тоді як типові білки за цим винаходом демонструють активність проти СоІеоріеєга НОШОООЗ ВКЕГА, Б7/ТМРБб ВКЕГА (та 0О4М/5О1 ВКЕГА представляють собою неанотовані білкові послідовності, передбачені за відкритою рамкою зчитування у геномних послідовностях, про яких повідомляли як про отриманих з В. Іаїєгозрогои5. Для цих білків не повідомлялося про інсектицидну активність.

Таблиця 5

Вирівнювання білків ТІС3886 зрілої довжини з білками попереднього рівня техніки. 11213145 16| 7 | 8 | 9 | ю || тт | 12 ттісзб68| 1 |т7100| 6 | 2 | 11 | 18 12 8 | 8 / 10 | З6 | Зе | з2 | 33 ттісзбв9| 2 |980|100| 4 | 10 | 16 / 14 | 10 | 8 / 9 | 935) зе | з2| з2 сттісз670| з /993|986|7100| 9 | 16 14 | 8 | 6 / 8 | 34 | 30 | зо | з сттіс4076| 4 |96,3|966197,0|100| 11 / 20 | 5 | 6 | 6 | 30 | 28 | зо | 295 оттіс4260| 6 /95,9|95,3195,3|9321|959 100 19 | 20 / 22 | 48 | 44 | 44 | 43 оттіс4з46| 7 197,3|96,6197,3|98,3|96,393,61|100| 4 | 6 | 30 | 26 | 28 | 29 сттіс48в26| 8 197,3|97,3198,0198,0|95,9 9321986|100 4 | 30 | 24 | 24 | 25 ттіс4863| 9 196,6197,0197,3|98,0| 95,6 92519801 98,6 100 30 | 28 | 28 | 27

АХМІ 209 | 10 | 88,6 | 89,0 | 89,3 | 90,5 | 88,3 84,9190,5190,5904| 100) 6 | 8 | 7 ноОроз

ОМ И1 ви зве в юг| вовна вва ов ет оте нта ни то

Білки ТІС3668, описані у цій заявці, у біологічних аналізах впливу раціону проявляють активність проти СоІеоріега включаючи М/СК. У деяких випадках також спостерігається активність щодо лускокрилих.

Як описано додатково у прикладах цієї заявки, були сконструйовані полінуклеотидні послідовності, що кодують білки-токсини ТІС3668, для застосування у рослинах. Типові полінуклеотиди, які сконструйовані для експресії в рослинах та кодують повнорозмірні білки

ТІСЗ3668, ТІСЗ3669, ТІСЗ3670, ТІС4260, ТІС4076, ТІС4078, ТІС4346, ТІС4826, ТІС4861, ТІС4862 та

ТІС4863, що мають інгібуючу активність щодо комах, указані в ЗЕО ІЮ МО:32, 5ЕО ІЮО МО:34,

ЗЕО ІЮ МО:36, 5ЕО ІО МО:38, 5ЕО 10 МО:40, 5ЕО 10 МО:42, 5ЕО ІЮО МО:44, 5ЕО 10 МО:46, 5ЕО

І МО:48, 5ЕБЕО ІЮО МО:50 та 5ЕО ІЮО МО:51. Типові полінуклеотиди, які сконструйовані для експресії в рослинах та кодують зрілу форму білків тТІС3668, тТІС3669, тТІС3670, ттТІС4260, ттІС4076, ттТІС4078, ттТІС4346, тТІС4826, ттТІС4861, тТІС4862 та ттТІС4863, що мають інгібуючу активність щодо комах, указані в БЕО ІЮ МО:33, 5ЕО ІЮ МО:35, 5ЕО ІЮ МО:37, 5ЕО ІЮ

МО:39, БЕО І МО:41, 5ЕО ІЮ МО:43, 5ЕО ІЮ МО:45, БЕО ІЮ МО:47 та 5ЕО ІЮО МО:49.

Експресійні касети та вектори, що містять ці полінуклеотидні послідовності, конструювали та вводили до клітин рослин кукурудзи у відповідності зі способами та методиками трансформації, які відомі у цій галузі техніки. Трансформовані клітини регенерували у трансформовані рослини, які як було виявлено, експресували білки-токсини ТІС3668. Для перевірки пестицидної активності, проводили біологічні аналізи у присутності личинок лускокрилих або твердокрилих шкідників з використанням дисків листків рослин, отриманих з трансформованих рослин.

Інгібуюча активність щодо комах типових представників класу білкових токсинів типу

ТІС3668 детальніше описана у прикладах. Типові білки зв'язані загальною функцією та проявляють інсектицидну активність щодо видів комах СоіІеоріега та І ерідоріега, включаючи дорослих особин, лялечок, личинок та молодих особин.

Мають на увазі полінуклеотидні композиції, що кодують білки типу ТІС3668. Наприклад, білки типу ТІС3668 можуть експресуватися конструктами рекомбінантної ДНК, в яких

Зо полінуклеотидна молекула з ОКЕ, що кодує такий білок, функціонально зв'язана з генетичними експресійними елементами, такими як промотор та будь-яким іншим регуляторним елементом, необхідним для експресії в системі, для якої призначений цей конструкт. Необмежуючі приклади включають функціональний промотор рослин, функціонально зв'язаний з послідовностями, що кодують білки типу ТІС3668, для експресії цього білка в рослинах, або Ві-функціональний промотор, функціонально зв'язаний з послідовністю, кодуючою білок типу ТІС3668, для експресії білка в Ві-бактерії або в іншому виді Васійшє. Інші елементи можуть бути функціонально зв'язані з послідовностями, що кодують білки типу ТІС3668, які включають, але обмежуються ними, енхансери, інтрони, нетранслюємі лідери, кодовані білкові мітки для іммобілізації (НІ5-мітка), пептиди для транслокації (тобто транзитні пептиди пластид, сигнальні пептиди), поліпептидні послідовності для посттрансляційних модифікуючих ферментів, сайти зв'язування рибосом та сайти-мішені для РНКІ. Типові рекомбінантні полінуклеотидні молекули, запропоновані у цьому документі, включають, але не обмежуються ними, гетерологічним промотором, функціонально зв'язаним з полінуклеотидом, таким як ЗЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮО МОЗ,

ЗЕО ІЮ МО:5, 5ЕО ІЮ МО:7, 5ЕО ІЮ МО:9, 5ЕО І МО:11, 5ЕО І МО 13, 5ЕО ІЮ МО-:15, 5ЕО І

МО:17, 5ЕО ІЮО МО:19 та 5ЕО ІЮО МО:21, який кодує відповідні поліпептиди або білки, що мають амінокислотну послідовність, як указано в 5ЕО ІЮ МО:2, 5ЕО І МО:4, 5ЕО І МО:6, 5ЕО І

МО:8, 5ЕО ІО МО:10, 5ЕО ІЮ МО:12, 5ЕО ІЮ МО:14, 5ЕО ІЮ МО:16, 5ЕО ІЮ МО 18, 5ЕО ІЮ МОс:20 та 5ЕО ІЮ МО:22. Кодони рекомбінантної полінуклеотидної молекули, що кодують білки, описані у цьому документі, можуть бути замінені синонімічними кодонами (відомими у цій галузі техніки як заміни, що мовчать). Необмежуючі приклади модифікованих полінуклеотидів, кодуючих будь- який з білків типу ТІС3668, описаних у цій заявці, указані в ЗЕО ІЮ МО:32, 5ЕО ІЮ МО :34, 5ЕО ІЮ

МО:36, 5ЕО ІО МО:38, 5ЕО 0 МО:40, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО І МО: 44, 5ЕО ІЮ МО 46, 5ЕО Ір

МО:48, 5БЕО ІЮ МО:50 та 5ЕО ІО МО:51 для послідовностей повнорозмірних білків та ЗЕО ІЮ

МО:33, 5ЕО ІО МО:35, 5ЕО ІЮ МО:37, 5ЕО ІЮ МО:39, 5ЕО І МОС41, 5ЕО ІО МО 43, 5ЕО Ір

МО:45, 5ЕО ІЮ МО:47 та 5ЕО І МО 49 для послідовностей зрілих білків.

Конструкт рекомбінантної ДНК, що містить послідовності, що кодують білки типу ТІС3668, може додатково містити ділянку ДНК, яка кодує один або більше агентів, що мають інгібуючу активність щодо комах, які можуть бути сконструйовані для одночасної експресії або коекспресії з послідовністю ДНК, кодуючою білок типу ТІСЗ3668, білок відмінний від білка типу ТІС3668, молекулу ддРНК, що має інгібуючу активність щодо комах, або допоміжний білок. Допоміжні білки включають, але не обмежуються ними, кофактори, ферменти, партнери за зв'язуванням або інші агенти, які сприяють підвищенню ефективності агенту, що має інгібуючу активність щодо комах, наприклад, сприяючи його експресії, впливаючи на його стабільність у рослинах, оптимізуючи вільну енергію олігомеризації, збільшуючи його токсичність та збільшуючи спектр його активності. Допоміжний білок може полегшувати засвоєння, наприклад, одного або більше агентів, що мають інгібуючу активність щодо комах, або посилювати токсичний вплив цього токсичного агенту.

Конструкт рекомбінантної ДНК можна збирати так, щоби всі білки або молекули ддРНК

Зо експресувалися від одного промотора, або кожний білок або молекула ддРНК експресувалися під контролем окремого промотора або певної їх комбінації. Білюи за цим винаходом можуть експресуватися з мультигенної експресуючої системи, в якій один або більше білків ТІС3668 експресуються із загального нуклеотидного сегмента, який також містить інші відкриті рамки зчитування та промотори, в залежності від вибраного типу експресуючої системи. Наприклад, в бактеріальній мультигенній експресуючій системі може використовуватися єдиний промотор для управління експресією багатьох зв'язаних/тандемних відкритих рамок зчитування, що знаходяться в одному опероні (тобто поліцистронна експресія). В іншому прикладі в рослинній мультигеній експресуючій системі можуть використовуватися багато незв'язаних експресійних касет, кожна з яких експресує білок або інший агент, що відрізняється, такий як одна або більше молекул дцРНК.

Рекомбінантні полінуклеотиди або конструкти рекомбінантної ДНК, що містять послідовність, що кодує білок типу ТІС3668, можуть бути доставлені в клітини-господарі векторами, наприклад, плазмідою, бакуловірусом, синтетичною хромосомою, віріоном, космідою, фагмідою, фагом або вірусним вектором. Такі вектори можуть бути використані для досягнення стабільної або транзієнтної експресії послідовності, кодуючої білок типу ТІС3668, в клітині-господарі, або більш пізньої експресії поліпептиду, що кодується. Екзогенний рекомбінантний полінуклеотид або конструкт рекомбінантної ДНК, який містить послідовність, що кодує білок типу ТІС3668, та яка вводиться в клітину-господаря, згадується у цьому документі як "трансген".

У цьому документі запропоновані трансгені бактерії, трансгені рослинні клітини, трансгені рослини та частини трансгенних рослин, які містять рекомбінантний полінуклеотид, який експресує будь-яку одну або більше послідовностей, кодуючих білки типу ТІС3668. Термін "бактеріальна клітина" або "бактерія" може включати, але не обмежується клітиною

Адгобрасієгішт, Васійи5, ЕвсПегіспіа, ЗаІтопеїЇІа, Реенидотопаз або Впі2обійт. Термін "рослинна клітина" або "рослина" може включати, але не обмежується, рослинною клітиною або рослиною однодольного, дводольного, люцерни, банану, ячменю, бобів, броколі, капусти, моркви, маніоку, рицини, кольорової капусти, селери, нуту, китайської капусти, цитрусових, кокосової пальми, конюшини, бавовника, гарбуза, огірка, ялини Дугласа, баклажану, евкаліпту, льону, часнику, винограду, хмелю, цибулі-порею, салату, сосни Лоблолі, проса, дині, волоського горіху, вівсу, гороху, арахісу, перцю, голубиного гороху, сосни, картоплі, тополя, гарбуза, сосни променистої, 60 редьки, рапсу, рису, злаку, жита, американського шафрану, чагарника, сорго, південної сосни,

сої, шпинату, кабачку, полуниці, цукрового буряка, цукрової тростини, соняшнику, солодкої кукурудзи, амбрового дерева, солодкої картоплі, проса, чаю, тютюну, томату, тритікале, дернової трави, кавуна, пшениці. У деяких варіантах реалізації винаходу представлені трансгенні рослини та частини трансгенних рослин, які регенерували з трансгенної рослинної клітини. У деяких варіантах реалізації винаходу трансгенні рослини можуть бути отримані з трансгенної насінини шляхом розрізання, зривання, подрібнення або іншого відділення частини від рослини. У деяких варіантах реалізації винаходу частина рослини може бути насіниною, коробочкою, листом, квіткою, стеблом, коренем або будь-якою його частиною або частиною трансгенної частини рослини, що не регенерується. Як використовується у цьому контексті, частина трансгенної частини рослини, "що не регенерується" являє собою частину, яка не може бути індукована на утворення цілої рослини або яка не може бути індукована на утворенні цілої рослини, здатної до статевого та/або безстатевого розмноження. У деяких варіантах реалізації винаходу частина, що не регенерується, частини рослини, яку відбирають, являє собою частину трансгенної насінини, коробочки, листа, квітки, стебла або кореня.

Наведені способи отримання трансгенних рослин, які містять інгібуючі щодо комах

СоІеорієга та І ерідорієга кількості білків типу ТІС3668. Такі рослини можуть бути отримані шляхом введення рекомбінантного полінуклеотиду, який кодує будь-який з білків типу ТІС3668, представлених у цій заявці, в рослинну клітину та відбором рослини, отриманої зі вказаної рослинної клітини, яка експресує інгібуючу щодо комах СоіІеорієга або І ерідорієга кількість білків типу ТІС3668. Рослини можуть бути отримані з рослинних клітин шляхом регенерації насіння, пилку або меристеми, отриманих методиками трансформації. Способи трансформації рослин відомі у цій галузі техніки.

У цій заявці також описані перероблені рослинні продукти, причому такі перероблені продукти містять кількість, яка виявляється, білка типу ТІС3668, його сегмент та фрагмент, що має інгібуючу активність щодо комах, або його будь-яку частину, яка відрізняється. У деяких варіантах реалізації винаходу перероблений продукт вибирають з групи, яка складається з частин рослин, біомаси рослин, рослинної олії, крупи, цукру, корму для тварин, борошна, пластівців, висівок, волокон, лузги, насіння та переробленого насіння. В певних варіантах реалізації винаходу перероблений продукт не здатний до регенерації. Рослинний продукт може

Зо включати товар або інші комерційні продукти, отримані з трансгенної рослини або частини трансгенної рослини, причому товар або інші продукти можна відстежувати шляхом виявлення нуклеотидних сегментів або експресованої РНК або білків, які кодують або містять частини, що відрізняються, білка типу ТІС3668.

Рослини, експресуючі білки ТІС3668, можна схрещувати шляхом селекції з трансгенними об'єктами, експресуючими інші білки-токсини та/або експресуючими інші трансгенні ознаки, такі як гени стійкості до гербіцидів, гени, які підвищують урожайність, або ознаки, що забезпечують стійкість до стресу, тощо, або такі ознаки можуть бути об'єднані в один вектор, так що всі ознаки будуть зв'язані між собою.

Послідовності, що кодують білки типу ТІС3668, та послідовності, які мають значну відсоткову ідентичність з послідовностями, що кодують білки типу ТІС3668, можна ідентифікувати з використанням способів, відомих середньому фахівцю у цій галузі техніки, таких як полімеразна ланцюгова реакція (ПЦР), термічна ампліфікація та гібридизація. Наприклад, білки класу білкових токсинів типу ТІС3668 можуть бути використані для отримання антитіл, які специфічно зв'язуються з цим класом білків, та можуть бути використані для скринінгу та пошуку інших представників білків цього класу.

Додатково, нуклеотидні послідовності, що кодують клас білкових токсинів типу ТІС3668 (та зворотні комплементарні послідовності), можуть бути використані у якості зондів та праймерів для скринінгу та ідентифікації інших представників цього класу з використанням способів термоциклічної або ізотермічної ампліфікації та гібридизації. Конкретно, олігонуклеотиди,

БО отримані з послідовностей, указаних у будь-якій з 5ЕО ІЮ МО: від 52 до 61, можуть бути використані для визначення наявності або відсутності трансгена типу ТІС3668 у зразку дезоксирибонуклеїнової кислоти, отриманої з товарного продукту. Враховуючи чутливість певних методів виявлення нуклеїнових кислот, в яких використовуються олігонуклеотиди, передбачається, що олігонуклеотиди, отримані з послідовностей, указаних у будь-якій з ЗЕО ІЮ

МО:52, 5ЕО ІО МО:53, 5ЕО ІО МО:54, 5ЕО ІЮ МО:55, 5ЕО І МО:56, 5ЕО ІО МОС57, 5ЕО І

МО:58, 5ЕО 10 МО:59, ЕС ІЮ МО:60 та 5ЕО ІО МО:61, можуть бути використані для виявлення трансгена ТІС3668, ТІС3669, ТІС3670, ТІС4076, ТІС4078 або ТІС4260 в товарних продуктах, отриманих з об'єднаних джерел, де лише частина товарного продукту отримана з трансгенної рослини, що містить будь-яку з БЕО ІЮ МО:52, 5ЕО ІЮ МО:53, 5ЕО ІЮ МО:54, 5ЕО ІЮ МО:55, (510) ЗЕО ІО МО:56, 5ЕО ІЮ МО:57, 5ЕО ІЮ МО:58, 5ЕО ІЮ МО:59, 5ЕО ІО МО:60 та 5ЕО ІО МО:61.

Додатково приймається до уваги, що такі олігонуклеотиди можуть застосовуватися для введення варіанту нуклеотидної послідовності у кожну з БЕО ІЮ МО:52, 5ЕО І МО:53, 5ЕО І

МО:54, 5ЕО ІО МО:55, 5ЕО ІО МО:56, 5ЕО ІЮ МО:57, 5ЕО І МО:58, 5ЕО ІО МО:59, 5ЕО І

МО:60 та 5ЕО ІО МО:61. Такі олігонуклеотиди "мутагенезу" придатні для ідентифікації ТІС3668,

ТІСЗ3669, ТІС3670, ТІС4076, ТІС4078 або ТІС4260, варіантів амінокислотних послідовностей, що проявляють діапазон інгібуючої активності щодо комах або різну експресію в трансгенних рослинних клітинах-господарях.

Гомологи нуклеотидних послідовностей, наприклад, інсектицидні білки, що кодуються нуклеотидними послідовностями, які гібридизуються з кожною або будь-якою з описаних у цій заявці послідовностей у жорстких умовах гібридизації, також являються варіантом реалізації цього винаходу. У цьому винаході також запропонований спосіб виявлення першої нуклеотидної послідовності, яка гібридизується з другою нуклеотидною послідовністю, причому перша нуклеотидна послідовність (або її зворотна комплементарна послідовність) кодує інсектицидний білок або його інсектицидний фрагмент та гібридизується у жорстких умовах гібридизації з другою нуклеотидною послідовністю. У такому випадку друга нуклеотидна послідовність може бути однією з нуклеотидних послідовностей, описаних у класі білкових токсинів типу ТІС3668, що проходять гібридизацію у жорстких умовах. Кодуючі нуклеотиди послідовності гібридизуються одна з одною у відповідних умовах гібридизації, а білки, які кодуються цими нуклеотидними послідовностями, перехресно реагують з антисироваткою, отриманою проти будь-якого з інших білків. Жорсткі умови гібридизації відомі у цій галузі техніки та можуть змінюватися у відповідності з потрібним застосуванням та результатом і можуть охоплювати багато реактивів та умов. Наприклад, промивання при більш високих температурах є складовою частиною більш жорстких умов. У деяких варіантах реалізації винаходу умови гібридизації за цим винаходом можуть включать щонайменше гібридизацію при 42 "С з наступними двома промиваннями, кожне протягом п'яти хвилин, при кімнатній температурі за допомогою 2Х 555, 01 96 505, з наступними двома промиваннями, кожне протягом тридцяти хвилин, при 65 "С в 0БХ 550, 0,1 95 505; або гібридизацію при 68 "С з наступним промиванням при 68 "С, в 2Х

З5С, що містить 0,1 956 505; або гібридизацію від 4 до 12 годин у 50 956 формаміді, 1 М Масі та 1 95 505 при 37С та промивання у 0,1 Х 55ХС при 600-650.

Зо Фахівець у цій галузі техніки зрозуміє, що через надлишковість генетичного коду багато інших послідовностей зці кодувати такі споріднені білки та такі послідовності до тієї міри, в якій вони функціонують для забезпечення експресії інсектицидних білків, або в штамах Васійс5, або в рослинних клітинах, які представляють собою варіанти реалізації цього винаходу, звісно розуміючи, що багато таких надлишкових кодуючих послідовностей не будуть гібридизуватися у цих умовах з нативними послідовностями Васійй5, що кодують ТІС3668. Цим застосуванням мається на увазі використання цих та інших методів ідентифікації, відомих середнім фахівцям у цій галузі техніки, для ідентифікації послідовностей, кодуючих білки типу ТІС3668, та послідовностей, що мають значну відсоткову ідентичність з послідовностями, що кодують білки типу ТІСЗ3668.

У цьому описі також мається на увазі використання молекулярних методів, відомих у цій галузі технікию, для конструювання та клонування корисних для комерційного застосування білків, що містять химери білків з пестицидних білків; наприклад, химери можуть бути зібрані з сегментів білків типу ТІС3668 для отримання додаткових корисних варіантів реалізації винаходу, які включають збирання сегментів білків типу ТІС3668 з сегментами різних білків, відмінних від ТІС3668 та споріднених білків. Клас білків типу ТІС3668 може піддаватися вирівнюванню один з одним та з іншими пестицидними білками Васіїши5 (на предмет наявності між ними близької або віддаленої філогенетичної спорідненості) та можна ідентифікувати сегменти кожного з таких білків, що корисно для встановлення замін між вирівнюваними білками, в результаті отримуючи конструкцію химерних білків. Такі химерні білки можна піддавати біологічному аналізу на шкідниках та характеризувати їх на наявність або відсутність збільшеної біологічної активності талабо розширеного спектра щодо цільового шкідника у порівняні з вихідними білками, з яких отриманий кожний сегмент у цій химері. Пестицидна активність поліпептидів може додатково конструюватися для отримання активності щодо конкретного шкідника або більше широкого спектра шкідників шляхом обміну доменів або сегментів з іншими білками або шляхом використання методів направленої еволюції, відомих у цій галузі техніки.

У цій заявці також описані способи боротьби з комахами, зокрема, зараженнями культурних рослин комахами Герідорієга або СоіІеорієега, за допомогою класу білків-токсинів ТІС3668. Такі способи можуть включати вирощування рослини, що містить інгібуючу щодо комах СоіІеоріега 60 або І ерідоріега кількість білка класу білків-токсинів ТІС3668. У деяких варіантах реалізації винаходу такі способи можуть додатково включати один або більше з етапів: (І) нанесення будь- якої композиції, що містить або кодує білок класу білкових токсинів типу ТІС3668, на рослині або насіння, яке дає початок рослині; та (І) трансформації рослини або рослинної клітини, яка дає початок рослині, полінуклеотидом, що кодує білок класу білкових токсинів типу ТІСЗ3668.

Загалом, передбачається, що у композиції може бути представлений будь-який білок у класі білкових токсинів типу ТІС3668, який надається мікроорганізмом або надається трансгенною рослиною, щоб забезпечити інгібуючу активність проти лускокрилих та твердокрилих комах.

У деяких варіантах реалізації винаходу рекомбінантний поліпептид класу білкових токсинів типу ТІС3668 являється інсектицидно активним інгредієнтом композиції, що має інгібуючу активність щодо комах, отриману культивуванням рекомбінантної Васійи5 або будь-якої іншої рекомбінантної бактеріальної клітини, трансформованої для експресії білкового токсину типу

ТІСЗ3668 в умовах, що підходять для експресії та продукції білків класу білкових токсинів типу

ТІСЗ3668. Така композиція може бути отримана шляхом висушування, ліофілізації, гомогенізації, екстракції, фільтрації, центрифугування, седиментації або концентрування культури таких рекомбінантних клітин, експресуючих/продукуючих указаний рекомбінантний поліпептид. Такий процес може приводити до отримання клітинного екстракту, клітинної суспензії, клітинного гомогенату, клітинного лізату, клітинного супернатанту, клітинного фільтрату або клітинного осаду з Васійш5 або інших ентомопатогенних бактерій. Отриманням цих рекомбінантних поліпептидів таким чином створюють композицію, яка включає рекомбінантні поліпептиди, що можуть містити бактеріальні клітини, бактеріальні спори, а також параспоральні тільця- включення, та композиція може бути приготовлена для різних застосувань, включаючи сільськогосподарські продукти-спреї, що мають інгібуючу активність щодо комах, або рецептури, що мають інгібуючу активність щодо комах, для біологічних аналізів впливу раціону.

В одному варіанті реалізації винаходу для зниження ймовірності розвитку резистентності композиція, яка має інгібуючу активнвсть щодо комах, що містить один або більше білків з класу білкових токсинів типу ТІС3668, може додатково містити щонайменше один додатковий поліпептид, який проявляє інгібуючу активність проти тих самих видів лускокрилих та твердокрилих комах, але який відрізняється від білкового токсину типу ТІС3668. Можливі додаткові поліпептиди для такої композиції містять білок, що має інгібуючу активність щодо

Зо комах, та молекулу дцРНК, яка має інгібуючу активність щодо комах. Один приклад використання таких рибонуклеотидних послідовностей для боротьби з комахами-шкідниками описаний у Вацйт, еї аї. (публікація патенту США 2006/0021087 Ат). Такий додатковий поліпептид для боротьби з лускокрилими-шкідниками може бути вибраний з групи, яка складається з білка, що має інгібуючу активність щодо комах, такого як, без обмежень, СтутА (патент США Мо 5880275), СтутАр, Стгу1тАс, СтгутА.105, СтгуїАє, Стгу!В (публікація патенту

США Мо 10/525318), Сту!С (патент США Мо 6033874), Сту10, Сту!ба та їх варіанти, химери

СтУуТЕ, СтуїЕ та СтутА/Е (патенти США Мо 7070982; 6962705 та 6713063), химери Сгту1їб, СтуінН,

СтуУТІ, Стуту, СтуїК, Стуті,, типу Стгу!, такі як, без обмежень, ТІС836, ТІС860, ТІС867, ТІС869 та

ТІС1100, Сгуг2А, Стгу2АБ (патент США Мо 7064249), Сту2гАє, Сту4В, Стуб, Сту7, Сту8, Сту9, Сту15,

Сту4ЗА, Сту43В, СтубіАа!, ЕТб6б, ТІС400, ТІС400, ТІС80О0, ТІС834, ТІС1415, МірзА, МІРЗАБ,

МІРЗВ, АХМІ-184, АХМІ-196, 0БІС-3, 0-4, 0ІС-5, 0ІС-11, АЯР-1А та їх похідні (публікація патенту 2014-0033361 АТ), АПР-1В та його похідні (публікація патенту 2014-0033361 АТ), РІР-

ТАРІР-18 (публікація патенту 2014-0007292 АТ), РЗЕЕМЗ3174 (публікація патенту 2014-0007292

АТ), АЕСЕГО-592740 (публікація патенту 2014-0007292 АТ), Рриї 1063 (публікація патенту 2014- 0007292 Ат), Рршї 1064 (публікація патенту 2014-0007292 Ат) (055-135 та його похідні (публікація патенту 2012-0233726 АТ), 55153 та його похідні (публікація патенту 2012-0192310

А1), 55154 та його похідні (публікація патенту 2012-0192310 АТ), 55155 та його похідні (публікація патенту 2012-0192310 АТ), ЗЕО ІО МО:2 та її похідні, як описано в публікації патенту 2012-0167259 АТ, 5ЕО ІО МО2 та її похідні, як описано в публікації патенту 2012-0047606 А,

БО ЗЕО ІО МО:2 та її похідні, як описано в публікації патенту 2011-0154536 А1Т, 5ЕО ІЮ МО2 та її похідні, як описано в публікації патенту 2011-0112013 АТ, 5ЕО ІО МО:2 та її похідні, як описано в публікації патенту 2010-0192256 А1Т, 5ЕО ІО МО:2 та її похідні, як описано в публікації патенту 2010-0077507 АТ, 5ЕО ІО МО2 та її похідні, як описано в публікації патенту 2010-0077508 А,

ЗЕО ІЮ МО:2 та її похідні, як описано в публікації патенту 2009-0313721 АТ, 5ЕО ІЮ МО:2 або 4, або її похідні, як описано в публікації патенту 2010-0269221 АТ, 5ЕО ІО МО:2 та її похідні, як описано в патенте США Мо 7772465 (82), СЕ161 0085 та його похідні, як описано в

ММО2014/008054 А2, токсичні для лускокрилих білки та їх похідні, як описано у публікаціях патентів США Ш52008-0172762 АТ, О052011-0055968 А1 та 052012-0117690 А1; ЗЕО ІЮО МО2 та їх похідні, як описано в ШЗ7510878(82), ЗЕО ІО МО:2 та їх похідні, як описано у патенті США бо Мо 7812129(В1) та інші білки, що мають інгібуючу активність щодо лускокрилих, відомі середнім фахівцям у цій галузі техніки. Такий додатковий поліпептид для боротьби з твердокрилими- шкідниками може бути вибраний з групи, яка складається з білка, який має інгібуючу активність щодо комах, такого як, без обмежень, СгуЗзВоЬ (патент США Мо 6501009), варіанти Сгуї1сС, варіанти СгузЗА, СтуЗ3, СтуЗВ, Сту34/35, 5307, Ахіті184, Ахті205, Ахтік!1, ТІС407, ТІС417, ТІС431,

ТІС807, ТІС853, ТІСОО1, ТІС1201, ТІСЗ3131, 0ІС-10, еНІР5 (публікація заявки на патент США

Мо 2010/0017914) та інші білки, що мають інгібуючу активність щодо твердокрилих, відомі середнім фахівцям у цій галузі техніки.

В інших варіантах реалізації винаходу така композиція/рецептура може додатково містити щонайменше один додатковий поліпептид, який проявляє інгібуючу активність щодо комах, причому на комаху не здійснюють інгібуючого впливу інші білки, що мають інгібуючу активність щодо комах, за цим винаходом, з тим щоб розширити спектр інгібуючої активності щодо комах.

Наприклад, для боротьби з напівтвердокрилими шкідниками можна використовувати комбінації білків, що мають інгібуючу активність щодо комах, за цим винаходом з білками, активними щодо напівтвердокрилих, такими як ТІС1415 (публікація заявки на патент США Мо 2013/0097735),

ТІС807 (патент США Мо 8609936), ТІС834 (публікація заявки на патент США Мо 2013/0269060) та інші білки, що мають інгібуючу активність щодо напівтвердокрилих, відомі середнім фахівцям у цій галузі техніки. Додаткові поліпептиди для боротьби з твердокрилими, лускокрилими та напівтвердокрилими комахами-шкідниками можна знайти на веб-сайті номенклатури токсинів

Васійи5 ШТигіпдіепбіз, який підтримує Ніл Крикмор (у всесвітній мережі за адресою Біпотепсіайшге.іпіо).

У цій галузі техніки задокументувана можливість розвитку стійкості до певних інсектицидів у комах. Однією стратегією боротьби зі стійкістю комах є впровадження трансгенних сільськогосподарських культур, які експресують два різних агенти, що мають інгібуючу активність щодо комах, які діють за участі різних механізмів дії. Тому з будь-якими комахами зі стійкістю до будь-якого з агентів, що мають інгібуючу активність щодо комах, можна боротися іншим агентом, який має інгібуючу активність щодо комах. В іншій стратегії боротьби зі стійкістю комах використовується застосування рослин, які не захищені від цільових видів-шкідників твердокрилих або лускокрилих, для забезпечення екологічної ніші з таких незахищених рослин.

Конкретний приклад описаний у патенті США Мо 6551962, який включений до цього документа у

Зо повному обсязі шляхом посилання.

Інші варіанти реалізації винаходу, такі як місцеве нанесення хімікатів-пестицидів, які призначені для боротьби зі шкідниками, з якими також борються білками, описаними у цьому документі щодо застосування білків при обробці насіння, розпилення, просочування або нанесення тонким шаром, рецептури можна застосовувати безпосередньо на грунті (промочування грунту), наносити на ростучі рослини, експресуючі білки, описані у цьому документі, або готувати рецептури, які застосовують для насіння, що містить один або більше трансгенів, кодуючих один або більше описаних білків. Такі рецептури для використання при обробках насіння можна застосовувати з різними клейкими речовинами та агентами, які надають липкість, відомими у цій галузі техніки. Такі рецептури можуть містити пестициди, які за способом дії є синергічними з описаними білками таким чином, що рецептури пестицидів діють за участю іншого механізму дії на тих самих або подібних шкідників, з якими можна боротися описаними білками, або що такі пестициди діють на контрольованих шкідників з більш широким діапазоном хазяїв або видів шкідників рослин, з якими не ефективно бореться клас білкових токсинів типу ТІС3668.

Вищезгадана композиція/рецептура може додатково містити прийнятний /- для сільськогосподарського застосування носій, такий як приманка, порошок, пил, таблетки, гранули, спреї, емульсія, колоїдна суспензія, водний розчин, препарат спор/кристалів Васіїив5, оброблене насіння, рекомбінантну бактеріальну клітину/рослинну тканину/насінину/рослину, трансформовані для експресії одного або більше білків, або бактерію, трансформовану для експресії одного або більше білків. У залежності від рівня інгібування щодо комах або інсектицидного інгібування, притаманного рекомбінантному поліпептиду, та рівня рецептури, який повинен застосовуватися до рослини або при аналізі впливу раціону, композиція/рецептура можуть містити різні масові кількості рекомбінантного поліпептиду, наприклад, від 0,0001 95 до 0,001 95, до 0,01 95, до 1 95, до 99 95 від маси рекомбінантного поліпептиду.

ПРИКЛАДИ

Виходячи зі сказаного вище, фахівцям у цій галузі техніки повинно бути зрозумілим, що у конкретних аспектах винаходу можуть бути зроблені зміни, які описані та ще можуть бути отримані у вигляді схожого або подібного результату, без відходження від суті та об'єму бо винаходу. Таким чином, конкретні структурні та функціональні деталі, описані у цьому документі, не повинні інтерпретуватися як обмежуючі. Слід розуміти, що повний опис кожного посилання, яке цитується у цьому документі, включено у цей опис цієї заявки.

ПРИКЛАД 1

Виявлення класу білкових токсинів споріднених білку ТІС3668

Були ідентифіковані та підготовлені для секвенування геномів з використанням методів, відомих у цій галузі техніки, бактеріальні штами, що проявлять різні властивості, наприклад, передбачаєму токсичність, протеомне різноманіття та морфологічні варіації при порівнянні один з одним. Білок ТІС3668 (5ЕО ІО МО:2), який проявляє інгібуючу активність проти твердокрилих комах у біологічних аналізах іп мійго виділили з штаму ЕСйьбб2 Вгемірасійни5 Іагегозроги5 (В. Іаїегозроги5). Виявлено, що інші штами містять білки, які нагадують ТІС3668. Клонували полінуклеотидні сегменти, які кодують ці білки, та вставляли їх у рекомбінантний штам-господар для перевірки експресії.

Конструювали праймери для термальної ампліфікації з метою ампліфікації повнорозмірної копії гена з повною геномною ДНК різних бактеріальних штамів В. Іаїегохроги5, включаючи

ЕО5552. З кожного штаму отримували окремі продукти термальної ампліфікації (амплікони) та аналізували їх на наявність відкритих рамок зчитування, які могли би кодувати споріднені

ТІСЗ3668 білки. Визначали, що кожний амплікон мав єдину відкриту рамку зчитування, що містить кодон ініціації трансляції, за яким у рамці йшла безперервна відкрита рамка зчитування, яка завершувалася кодоном термінації трансляції, який знаходився у рамці. Встановлені амінокислотні послідовності, отримані з кожного з цих додаткових різних бактеріальних штамів, указані відповідно в 5ЕО ІЮ МО:2 (ТІС3668), 5ЕО 10 МО:4 (ТІСЗ3669), 5ЕО І МО:6 (ТІСЗ3670),

ЗЕО Ір МО:8 (ТІС4076), 5ЕО 10 МО 10 (ТІС4078), 5ЕО І МО:14 (ТІС4346), 5БО І МО:16 (ТІС4826), 5ЕО ІЮ МО:18 (ТІС4861), 5ЕБО ІЮ МО:20 (ТІС4862), 5ЕО 10 МО:22 (ТІС4863).. Ці амплікони клонували в рекомбінантному плазмідному експресійному векторі Васійв5

ІШигіпдієпвіє (ВОЮ зліва від специфічного експресійного промотора споруляції та цими ампліконами трансформували неутворюючу кристали клітину-господаря Ві. Амплікони також клонували в експресійну систему Е. сої. Виявлено, що отримувані рекомбінантні штами експресують рекомбінантний білок.

ПРИКЛАД 2

Зо Активність щодо твердокрилих класу білкових токсинів споріднених білку ТІСЗ3668

У цьому прикладі ілюструється інгібуюча активність, яка проявляється подібними ТІС3668 білками, проти комах СоіІеоріега.

Препарати білків отримували з рекомбінантних бактерій, як описано в прикладі 1, повнорозмірні білки ТІС3668, ТІС3669, ТІСЗ3670, ТІС4260, ТІС4076 та ТІС2462 направляли на біологічні аналізи з додаванням до раціону комах для колорадського картопляного жука (І ерііпоїаїза десетіїпеаїа, СРВ) та для щонайменше одного виду кукурудзяного жука. Відомі представники видів кукурудзяних жуків представлені Оіаргоїїса мігойега мігдіїега (західний кукурудзяний жук, МУСК), Оіабгоїйса Багбет/і (північний кукурудзяний жук, МСЕК), Оіабгоїїса мігдітега 76ває (мексиканський кукурудзяний жук, МСЕК), Оіабгоїїса Банеага (бразильський кукурудзяний жук (ВАК), Оіаргоїїса ипаесітрипсіаїа Помжагайї (південний кукурудзяний жук, ЗСК) та комплексом бразильського кукурудзяного жука (ВСЕ), що складається з видів Оіаргоїїса міпдшиа та Оіабгоїїса з5ресіоза).

Як продемонстровано у таблиці 6, результати показують, що ТІС3668, ТІС3669, ТІСЗ3670,

ТІС4260 та ТІС4076 проявили летальність щодо кукурудзяного жука. ТІС2462 (5ЕО ІЮО МО:62, що кодує БЕО ІЮ МО:63), білок близькоспоріднений білку АХМІ-209 (у порівнянні з ТІС2462 на »99 95 ідентичний на рівні амінокислот та проявляючий відмінності лише за двома амінокислотами), не проявив летальність щодо кукурудзяного жука, таким чином показав відмінність активності класу подібних білку ТІС3668 білкових токсинів від білків, що нагадують

АХМІ-209. Неочікувано виявлено, що летальність щодо колорадського картопляного жука, виду, який звичайно використовується для тестів у біологічних аналізах в якості індикатору активності проти твердокрилих, не спостерігалося для будь-яких з протестованих білків.

Таблиця 6

Летальність, що спостерігається для типових білків щодо твердокрилих комах-шкідників. лібеява111111111-111- тісз668, ТІСЗ669,ТІСЗ67077771111111111111111111Ї11111ю1 1111-11 тіс4260,7ТІС4076.....777771111111111111111111111111Ї11111ю1 11 - тІб4078. 11111111 м1 ЇЇ т - Летальність спостерігалася. - Е Летальність не спостерігалася.

МТ - випробування не проводили.

ПРИКЛАД З

Зріла форма білкового токсину ТІС3668

У цьому прикладі ілюструється наявність перетинаючих мембрану пептидів в амінокінці нативних білків серед класу білкових токсинів ТІС3668 та виявлення активних зрілих білків- токсинів класу білкових токсинів ТІС3668.

Аналіз із застосуванням методів біоінформатики з використанням програми зЗідпаІР (Реїегзеп, єї. а! (2011), Маїшге Меїпод5, 8:785-786) трансляції амінокислотної послідовності з кодуючою ТІС3668 послідовністю (5ЕБЕО І МО:1) спрогнозував наявність перетинаючого мембрану сегмента, що відповідає М-кінцевим першим 23 амінокислотам.

Моделювали експерименти для підтвердження наявності перетинаючого мембрану сегмента всередині кожного представника класу білкових токсинів подібних ТІСЗ3668. ТІСЗ3668 клонували в клітині-господарі ВІ після неспорулюючого специфічного промотора ВІ. Отримувані культуральні супернатанти досліджували на інсектицидну активність. Форми білка, які відповідають ТІС3668, виділяли у вигляді суміші з супернатанту. Ці різні фрагменти, менші за повнорозмірний білок ТІС3668, пізніше визначали методом мас-спектрометрії та аналізом М- кінцевої послідовності на вміст в них відповідних амінокінців або амінокислоти 16, 19 або 24, як указано в 5ЕО ІЮ МО:2. У культуральному середовищі виявили лише невелику кількість цих трьох усічених форм ТІС3668. Виявлено, що найбільш поширена форма виявленого білка на своєму амінокінці містить серин у положенні 24, як указано в ЗЕО ІЮ МО:2. Концентрований та очищений білок з культурального супернатанту проявив біологічну активність проти МУСК при дослідженні у біологічному аналізі зі штучним раціоном.

Для ідентифікації найменшого пептидного сегмента для кожного білка типу ТІС3668, що проявляє інсектицидну активність, створювали різні експресійні конструкти. Ці конструкти вводили у неутворюючий кристали штам В. Іигіпдіепзіє або штам Е. соїї. Один конструкт призначався для експресії повнорозмірного білка ТІС3668, як указано в 5ЕО ІЮ МО:2 від амінокислотного положення 1 до 317, у неутворюючому кристали штамі Ві. Конструкти розробляли для експресії повнорозмірного білка ТІС3668 та різних більш коротких форм білка

Зо ТІС3668 в системі експресії Е. соїї, що має послідовность-маркер НІ5 на карбоксильному кінці (ННННАННН). Ці конструкти, призначені для експресії в Е. соїї складалися з: (1) конструкта, розробленого для експресії повнорозмірного білка ТІС3668, як указано в ЗЕО ІЮ МО:2 від амінокислотного положення 1 до 317; (2) конструкта, розробленого для експресії варіанта білка

ТІСЗ3668, що містить амінокислоти від 16 до 317, як указано в 5ЕО ІЮ МО:2; (3) конструкта, розробленого для експресії варіанта білка ТІС3668 від амінокислоти 24 до 317, як указано в

ЗБО ІЮ МО:2; (4) конструкта, розробленого для експресії варіанта білка ТІС3668 від амінокислоти 26 до амінокислоти 317, як указано ЗЕО ІЮ МО:2; (5) конструкта, розробленого для експресії варіанта білка ТІС3668 від амінокислоти 28 до 317, як указано в 5ЕО ІЮ МО:2.

Додатково в експресійній системі Е. соїї отримували білок ТІС3668 з маркером М-кінцевих 10-пів та сайтом протеази (МННННННННННОТЕТМУКЕО) ТУММ (вірусу мозаїки жилок тютюну) для продукції білка ТІС3668 з початком за залишком Мо 24, як указано в ЗЕО ІЮ МО:2.

Білок отримували з супернатанту експресійної системи Ві та піддавали аналізу методом мас-спектрометрії та аналізу М-кінцевої послідовності. В експресійній системі Ві продукували зрілий токсин ТІС3668 з кислот 24-317, як указано в 5ЕО І МО:2. Білок не спостерігали в супернатантах Е. соїї. Білок отримували з кожного з відповідних конструктів Е. соїї шляхом осмотичного шоку для вивільнення білків з периплазми. Для білків, які продукуються з конструктів, що були розроблені, щоби містити амінокислоти 16 або 24 на амінокінці білка меншого за повнорозмірний білок, підтверджено вміст цих амінокислот на відповідному амінокінці. Білок, отримуваний з конструкту, розробленого для експресії повнорозмірного

ТІС3668 та такого, що продукував білок зрілої довжини, містив на амінокінці серин у положенні 24, як указано в ЗЕО ІЮ МО:2. Кожний з білків, отриманих при використанні конструктів, розроблених так, щоб містити у вигляді М-кінцевої амінокислоти або амінокислоту 26, або амінокислоту 28, як указано в 5БО ІО МО:2, неочікувано містив у вигляді М-кінцевої амінокислоти лише амінокислоту 28, що дає підставу припустити, що процесінг, що зберігає амінокислоту номер 24 на М-кінці, як указано в 5ЕО ІЮ МО:2, може бути важливим для забезпечення стабільності токсину.

Зразки білків, отримані у таких аналізах експресійних систем, направляли на дослідження щодо личинок західного кукурудзяного жука в біологічних аналізах з додаванням до раціону, як описано у прикладі 2. Визначили, що деякі М-кінцеві усічення з цього дослідження, проявляють зменшену біологічну активність. Конкретно, спостерігали, що інсектицидна активність була значно знижена, коли кінцевою амінокислотою була 26 або 28, як указано в 5ЕО ІО МО:2. Цей факт можна екстраполювати на інших представників родини білків ТІС3668, які є усіченими на

М-кінці більше ніж зрілий білок (починаючи з амінокислотного залишку Мо 24 для ТІСЗ668,

ТІС3669, ТІС3670, ТІС4076, ТІС4078, ТІС4260, ТІС4346, ТІС4826 та ТІС4863; починаючи з амінокислоти 13 для ТІС4861 та починаючи з амінокислоти 22 для ТІС4862), які є самим коротким варіантом досліджених білків типу ТІС3668, що показують інсектицидну активність проти М/С. Всі варіанти ТІС3668 рівної довжини або більшої довжини, ніж зрілий білок, показують високу активність проти М/СЕК, навіть у відносно низьких концентраціях. Ці ці також демонструють, що процесінг Е. соїї ТІС3668 змінюється в залежності від структури конструкта.

ПРИКЛАД 4

Синтез генів, кодуючих білки типу ТІС3668, для експресії в рослинах

Були сконструйовані нуклеотидні послідовності, що кодують повнорозмірні та зрілі варіанти білка ТІС3668, білка ТІС3669, ТІС3670, ТІС4076, ТІС4078, білка ТІС4260, білка ТІС4346, білка

ТІС4826, білка ТІС4861, білка ТІС4862 та білка ТІС4863. Нуклеотидні послідовності, що кодують

ТІСЗ3668, ТІС3669 та ТІС3670, синтезували у відповідності зі способами, загалом, описаними у патенті США 5500365, уникаючи деяких непідходящих проблемних послідовностей, таких як послідовності поліаденілювання рослин, збагачені АТТТА та А/І, при збереженні амінокислотної послідовності нативного білка В. Іаієгозрегоив5. Ці нуклеотидні послідовності запропоновані у цьому документі як ХЕО ІЮ МО:32, 5ЕО ІЮ МО:34, 5ЕО ІЮ МО:36, 5ЕО 10 МО:38,

ЗЕО Ір МО:40, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО ІЮ МО:44, 5ЕО ІЮ МО: 46, 5ЕО 10 МОС:48, 5ЕО І МО:50 та

ЗЕО І МО:51 для повнорозмірних послідовностей, та 5ЗЕО ІЮ МО:33, 5ЕО ІЮ МО:35, 5ЕО ІО

МО:37, 5ЕО ІЮ МО:39, 5ЕО ІЮ МОС41, 5ЕО ІЮ МО:43, 5ЕО 10 МО:45, 5ЕО І МО 47 та 5ЕО І0

МО:49 для зрілих послідовностей.

ПРИКЛАД 5

Експресійні касети для експресії в рослинах білків типу ТІС3668

Були сконструйовані різні експресійні касети для рослин з послідовностями, указаними в

ЗЕО ІЮ МО:32, ЗЕО І МО:33, 5ЕО ІЮ МО:34, 5ЕО 10 МО:35, 5ЕО 10 МО:З6, 5ЕО ІО МО:37, 5ЕО

ІО МО:З38, 5ЕО ІЮ МО:39, 5ЕО І МО:40, 5ЕО І МО:С41, 5ЕО ІЮ МО:42, 5ЕО І МО:43, 5ЕО І

МО:44, 5ЕО ІЮ МО:45, 5ЕО 10 МО:46, 5ЕО ІЮ МО:47, 5ЕО І МОс:48, 5ЕО ІО МО 49, 5ЕО Ір

МО:50 та 5ЕО І МО:51. Такі експресійні касети придатні для транзієнтної експресії в протопластах рослин або для трансформації рослинних клітин. Типові експресійні касети були розроблені з урахуванням можливого місцезнаходження білка всередині клітини. Один набір експресійних касет був сконструйований таким чином, щоб білок транслювався з нативним М- кінцевим сегментом. Для забезпечення експресії білка без М-кінцевого сегмента (тобто, білок зрілої довжини) був сконструйований інший набір експресійних касет. Інший набір експресійних касет був сконструйований так, щоб містити транзитний пептид, що експресується у рамці зчитування та функціонально зв'язаний з білком-токсином зрілої довжини, для забезпечення націлювання на органели клітини, такі як хлоропласт або пластиду. Всі експресійні касети були сконструйовані з початком на 5'-кінці з промотором, який може складатися з багатьох послідовно зв'язаних промоторних елементів, енхансерних елементів або інших експресійних елементів, відомих середнім фахівцям у цій галузі техніки, для посилення експресії трансгена.

За промоторною послідовністю звичайно слідували безперервно одна або більше лідерних послідовностей на 3'-кінці промотора. Інтронна послідовність розташовувалася на 3'-кінці лідерної послідовності для підвищення експресії трансгена. Послідовність, що кодує токсин або бо транзитний пептид, та послідовність, що кодує токсин, розташовувалися на 3'-кінці промоторної,

лідерної та інтронної конфігурації. Послідовність 3'-НТО була представлена на 3'-кінці кодуючої послідовності для полегшення термінації транскрипції та забезпечення послідовностями, важливими для поліаденілювання отримуваного транскрипта. Все елементи, описані вище, були розташовані послідовно, часто з додатковими послідовностями, введеними для конструювання експресійної касети, такими як сайти рестрикційних ендонуклеаз або сайти лігування, незалежно від клонування.

ПРИКЛАД 6

Вектори трансформації, що містять касету експресії білка типу ТІСЗ3668

Конструювали вектори трансформації для Адгобасієгійт, щоб вони доставляли ДНК у геном рослини, які експресують білки ТІС3668, тТІС3668, ТІС3669, ттІС3669, ТІС3670 та ттІС3670.

Експресійні касети клонували у підходящих векторах між межами послідовностей Адгобасієгійт так, щоб їх можна було перенести у геном господарської рослинної клітини з допомогою господарів Аадгобрасієгішт, що містять вектори-конструкти, разом з маркерним геном, що селектується. Конкретніше, у векторі трансформації рослин Адгобасієгішт клонували фрагмент рестрикції, що містить цілу цитозольну експресійну касету, що кодує один з білків, що згадується вище. Аналогічним чином, в векторі трансформації рослини Адгобасієтгійт клонували фрагмент рестрикції, що містить цілу експресійну касету, націлену на пластиди. В Адгобрасієгійт методом електропорації або схрещуванням з використанням трьох батьків вводять вектори, що містять експресійні касети білка типу ТІС3668 (тобто, ненацілені касети або націлені касети).

Експресійні касети, що містять штучні гени, що кодують ТІС4076, ТІС4078, ТІС4260, ТІС4346,

ТІС4826, ТІС4861, ТІС4862 та ТІС4863, кожна з або без послідовностей, кодуючих М-кінцеві 23 амінокислоти, присутні в нативній відкритій рамці зчитування В. Іаїегозрегои5 (амінокислоти 1- 23, як указано в 5ЕО ІЮ МО:2), клонували у підходящих векторах між межами послідовностей

Адгорасієгійт так щоб вони переносилися у геном клітини-господаря, та проводили дослідження на експресію та біологічну активність білка, що кодується.

ПРИКЛАД 7

Активність білків типу ТІС3668 в рослинах щодо твердокрилих

У цьому прикладі показана інгібуюча активність, яка проявляється при експресії в рослинах подібними ТІС3668 білками, проти комах СоіІеоріега, таких як личинки кукурудзяного жука, та запропонованих в якості раціону для відповідних комах-шкідників.

Трансгенні рослини кукурудзи КО, експресуючі білки ТІС3668, ттТІС3668, ТІСЗ3669, ттТІсС3669, ТІС3670 та тТІС3670, отримували з використанням векторів, що містять експресійні касети, описані у прикладі 5.

Трансгенні рослини кукурудзи ЕТ вирощували з насіння, отриманого запиленням качанів нетрансформованих комерційних рослин із зародковою плазмою дикого типу пилком з трансформантів КО. Після перенесення на грунт у горщиках з огорожею рослини Е1 заражали личинками кукурудзяного жука, що вилупилися, та вирощували протягом 13 діб у контрольованих умовах. Визначали значення оцінки пошкодження коренів (КОК) з використанням шкали оцінок ОіІезоп, єї аІ. 0-3, де 0 позначає відсутність пошкодження, а З позначає наявність трьох або більше вузлів, прогризених до 1,5 дюймів всередині стебла (9.О0.ОіІезоп, У-Ї.Раж, Т.М.Моучаїгкі, У... ТоПеївоп, "Моде-Іпішгу ЗсаІе о ЕмаЇнаїє Воої Іпішгу Бу

Согп Вооїмогтв", Уоцтпаі! ої Есопотіс Епіотоіоду, 98(1):1-8, 2005). Летальність щодо комах оцінювали підрахунком кількості личинок третьої стадії линьки, що залишилися у кінці періоду вирощування.

У першому наборі експериментів рослини, які експресували повнорозмірні білки ТІСЗ3668,

ТІСЗ3669 та ТІС3670, досліджували щодо М/С. Деякі об'єкти показали статистично значиме зниження вузлових пошкоджень, у порівнянні з негативним контролем з середнім значенням пошкодження коренів (КОК) між 2 та 2,5, але значима для комерційного застосування активність для повнорозмірних білків не спостерігалася.

У другому наборі експериментів зрілі білки тТІС3668 (ЗЕО ІЮ МО:23), тТІС3669 (5ЕО ІЮ

МО:24) та ттТІС3670 (ЗЕБЕО ІЮ МО:25) з або без пептиду, який націлює на хлоропласти, експресували в рослині кукурудзи та досліджували щодо М/СЕК. Для кожного зрілого білка спостерігали значиму летальність для М/СЕК. Для кожної рослини, яка експресувала тт/ІС3668, ттТІС3669 та ттІС3670, при наявності та відсутності додаткових націлюючих послідовностей, показано статистично значиме зниження вузлового пошкодження у порівняні з негативним контролем. На фіг. 2 зображені середні значення КОК для кількох об'єктів з білками ттТІС3668 та ттІС3669, а на фіг. З зображено середнє значення КОБК для кількох об'єктів з тТІС3670, при експресії в рослинах кукурудзи ЕТ незалежно від націлювання білка в хлоропласт. "Т5" в назві об'єкта на фіг. 2 та З указує на наявність послідовності націлювання. Значима для комерційного бо застосування активність спостерігалася для багатьох з цих об'єктів, експресуючих зрілі білки ттІсС3668, тТІС3669 та ттІС3670.

Неочікувано виявлено, що видалення перетинаючого мембрану сегмента (амінокислоти 1- 23, як указано в ЗЕО ІЮО МО:2) з подібних ТІС3668 білків, збільшує ефективність проти кукурудзяного жука, при експресії в рослинах кукурудзи. При експресії в рослинах подібні

ТІС3668 білки зрілої довжини продемонстрували більш високі рівні інсектицидної активності проти твердокрилих шкідників, ніж білки.

ПРИКЛАД 8

Інсектицидна активність споріднених ТІС3668 білків, які експресуються у кукурудзі, проти стійкого до СтузВЬ1 МСЕК

В цьому прикладі проілюструвана інсектицидна активність, яка проявляється подібними

ТІСЗ3668 білками, проти різновидності західного кукурудзяного жука (М/СЕК), в якого розвилася стійкість до Ві-токсину СтузВр1. Рослини трансгенної кукурудзи ЕТ, експресуючі ттТІСз3668, ттІС3669 або ттІС3670, отримані з використанням способів, описаних у прикладі 7, заражали 2000 яєць УУСК різновидності НоркКіпоп на рослині.

Різновидність НоркКіпіоп західного кукурудзяного жука (Оіабгоїїса мігоаітега мікдітега І еСопіє) являє собою різновидність без діапаузи з набутою у польових умовах стійкістю до СгуЗзВр1, що експресується в рослинах кукурудзи. Різновидність походить від дорослих екземплярів М/СЕК, отриманих з полів, на яких вирощували кукурудзу СтузВр1 протягом семи послідовних років.

Проводили три рази зворотне схрещування популяції з різновидністю М/СЕ без діапаузи та проводили три рази відбір на стійкість до СтуЗзВЬ! (Саб5бтапп, еї аІ(2011) РГо5 ОМЕ 6(7): е22629; Саззтапп, єї а. (2012) ОМ Сторз Роса 3(3):235-244). Колонію отримували у лабораторії д-раАарона Гасмана в Університеті штату Айова та підтримували в ентомологічній групі

Мопзапіо Віоїесії у м. Честерфілд, штат Місурі.

Після зараження протягом 48 годин вилуплялися яйця різновидності М/СК-Норкіпіоп та личинки, що вилупилися, починали харчуватися на коренях. Через 24 діб корені видаляли з грунту та оцінювали пошкодження коренів кукурудзи, як описано у прикладі 7 з використанням шкали 0-3. Як показано у таблиці 7, рослини, експресуючі ттІС3668, тТІС3669 та ттІС3670 були у високій мірі ефективні у плані захисту коренів кукурудзи від пошкодження у присутності комах, що вилупилися, різновидності НорКіпіоп М/СК у порівняні з контрольними рослинами, таким чином долаючи стійкість до токсину СтуЗВр1.

Таблиця 7

Середні значення у трансгенних рослин кукурудзи, заражених стійким до СтуЗзвЬ1 УСЕ. ттпсЗб68 77777771 718177111711111111006.77777777 |7717171717171110000471щ (Негативнийконтрольд/// | (6 | (хБФ 214 | о 0242

М: кількість оцінених рослин.

ПРИКЛАД 9

Інсектицидна активність споріднених ТІС3668 білків, які експресуються в кукурудзі, проти природного зараження МСЕК у польових умовах на досліджуваних ділянках

У цьому прикладі проілюстрована ефективність щодо зменшення пошкодження коренів, проявлена трансгенними рослинами кукурудзи, що експресують подібні ТІС3668 білки проти природного зараження М/СВ на полях, що обробляються, Середнього Заходу США.

Рослини трансгенної кукурудзи Е1, експресуючі ттТІС3668, ттТІС3669 або ттіІС3670, отримані з використанням способів, описаних у прикладі 7, висаджували на п'яти територіях

Середнього Заходу США протягом кінця квітня - початку травня. У дослідженні на цих територіях покладалися на існуючі природні джерела зараження від тиску присутності кукурудзяного жука. Для оцінки пошкоджень проводили викопування коренів у кінці липня.

Пошкодження кукурудзяним жуком визначали у відповідності зі шкалою вузлових пошкоджень, як описано у прикладі 7.

Результати досліджень викопаних коренів показали, що у фактичних умовах вирощування у відкритому полі, рослини, експресуючі ттІС3668, тТІС3669 та ттІС3670 були у високій мірі ефективні у плані захисту коренів кукурудзи від пошкодження у присутності природного тиску кукурудзяного жука. У таблиці 8 показано кількість оцінених рослин (М), середні значення КОР та стандартна похибка для досліджених рослин за територіями об'єднані.

Таблиця 8

Середні значення КОК для трансгенних рослин кукурудзи, досліджених на полях, що обробляються, з природнім зараженням М/СЕК.

ПРИКЛАД 10

Активність щодо лускокрилих класу білкових токсинів, споріднених білку ТІСЗ3668

У цьому прикладі ілюструється інгібуюча активність, яка проявляється подібними ТІС3668 білками, проти комах І ерідоріега. Препарати білків, описані у прикладі 1, для повнорозмірних білків ТІС3668, ТІС3669 ТІС3670, ТІС4076 та ТІС4078 направляли на проведення біологічних аналізів із додаванням у раціон проти совки іпсилон (ВСМУ, Адгоїїв ірвіоп), західної совки бобових (МУВС, Зтпіасозіа аїрісовіа), совки бавовникової (СЕМУ, Неїїсомегра 7еа), європейських кукурудзяних метеликів (ЕСВ, Овігіпіа пибіїаі|й5), тростинової вогнівки (5СВ, Оіаїгаєа зассНагаї в), південно-західного кукурудзяного метелика (ЗММС, Оіайаєа дгапаіозеМПа), совки ні (СІМ,

Тиіспоріивіа пі), соєвої совки (ВІ, СНгузодеїхів іпсіпдев) та совки трав'яної (ЕАМУ, бродорівга їидірегаа). Протоколи та способи підготовки та виконання біологічних аналізів з інгібуючими білками відомі у цій галузі техніки.

Активність проти певних лускокрилих комах-шкідників спостерігалася для певних білків типу

ТІСЗ3668, як продемонстровано у таблиці 9.

Таблиця 9

Сповільнення росту, що спостерігалося, для типових білків щодо лускокрилих комах-шкідників. тсз3668777771 ЇЇ я | я 17 МТ Її - 1-1 - тсз36в9/ ЇЇ я Їж 17 мМТ Її - 1-1 - тсз3670 Ї я ЇЇ но 1 М Її - Її 7 - 1 тс4076. | 7-1 ЇЇ -ї1- Її 1 тс4078. | мМ | мб 1 м Її - ЇЇ - 1 в ж - Спостерігалася затримка росту. ж- - Затримка росту та летальність. - Е Летальність не спостерігалася.

МТ - випробування не проводили.

ПРИКЛАД 11

Активність в рослинах щодо лускокрилих білків типу ТІС3668

У цьому прикладі показана інгібуюча активність білків типу ТІС3668 щодо ЕСВ, 5УУС, ВСМУ,

ЕАМУ, СЕМ, ЗВІ, при експресії в рослинах, та запропонованих в якості раціону для відповідних комах-шкідників.

Біологічні аналізи щодо лускокрилих шкідників з використанням листових дисків рослин виконували за аналогією з тими, які описані у патенті США Мо 8344207, на експресуючих

ТІСЗ3668, ТІСЗ3669 та ТІСЗ3670 рослинах кукурудзи КО. Показнику пошкодження листя (ІК) присвоювали оцінку показника на основі відсотка листового диска, погризеного комахами за шкалою від 0 (з'їдено 0 95) до 11 (з'їдено більше 50 95). Рівні показника оцінки збільшуються поступально на 595. Рослини КО, які не містять інсектицидних білків, служили в якості негативних контролів. Цитозольна експресія повнорозмірного білка типу ТІС3668 знижувала пошкодження від живлення СЕМУ, БАММ та 5УУС відносно нетрансформованого контролю.

Цитозольна експресія білка ТІС3670 знижувала пошкодження від живлення 5УУС відносно нетрансформованого контролю.

ПРИКЛАД 12

Створення складеного білка ТІС4260 У цьому прикладі викладено створення нової генної послідовності на основі родини представників ТІС3668. Комбінували амінокислотний варіант з п'яти нативних білків типу ТІС3668 для створення нового складеного білка ТІС4260 (5ЕО ІО

МО:12), який проявляє відмінність за різними амінокислотними послідовностями у порівняні з білками природного походження. На Фіг. 1 зображені результати вирівнювання п'яти нативних білків типу ТІС3668 з ТІС4260. Положення відмінностей послідовностей в результаті цього вирівнювання послідовностей виділені сірим затіненням. Конструювали штучну полінуклеотидну послідовність (ЗЕО ІЮ МО:11), яка кодує білок ТІС4260. Зрілий білок ТІС4260 (тТІС4260, ЗЕО ІЮ

МО:28) кодується полінуклеотидною послідовністю, указаною в 5ЕО ІЮ МО:43.

Можна отримувати подібні вирівнювання інших білків типу ТІС3668 для створення нових білків, які проявляють токсичну активність щодо І ерідоріега та/або СоіІеоріега. Ці нові білки експресують, очищують та досліджують щодо лускокрилих та твердокрилих комах у біологічних аналізах із введенням у раціон. Створюють експресійні касети для цих нових білків та трансформують ними рослини для експресії цих білків для боротьби з лускокрилими та твердокрилими шкідниками рослин.

Всі композиції та способи, описані та заявлені у цьому документі, можуть бути виготовлені та реалізовані без надлишкового експериментування у світлі цього опису. Хоча композиції та способи цього винаходу були описані з точки зору вищевикладених ілюстративних варіантів реалізації, фахівцям у цій галузі техніки буде зрозуміло, що до композиції, описаній у цьому документі, можна застосовувати варіанти, зміни, модифікації та перестройки без відступу від концепції, суті та об'єму цього винаходу. Більш конкретно, буде очевидно, що деякі агенти, споріднені як хімічні, так і фізіологічні, можуть бути замінені агентами, описаними у цьому винаході, при цьому будуть досягнуті такі самі або подібні результати. Усі такі подібні заміни та модифікації, очевидні фахівцям у цій галузі техніки, вважаються такими, що не виходять за межі суті, об'єму та концепції цього винаходу, як визначено у формулі винаходу, що прикладається.

Фахівцям у цій галузі техніки буде зрозуміло, що ці відмінні, покращені варіанти послідовностей можна комбінувати для створення варіантів, які також знаходяться у межах

Зо обсягу цього винаходу.

Усі публікації та опубліковані патентні документи, які цитуються у цьому описі, включені у цей документ шляхом посилання у той же мірі, як якщо б кожна окрема публікація або заявка на патент була конкретно та окремо указана для включення шляхом посилання.

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«1105 Мопвапсо Тесппо1оду ІЇІС «1205 НОВІ БІЛКИ, ЩО МАЮТЬ ІНГІБУЮЧУ АКТИВНІСТЮ ПО ВІДНОШЕННЮ ДО КОМАХ «1305 МОоМ5:387мо «1505 2 62/082504 «1515 2014-11-20 «1605 72 «1705 РавепсІп, версія 3.5 «2105 1 «2115 954 «2125 ДНК «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005 1 асдаааааасє Есоосаадзчесс аасссеЕсаса аазЕдесЧеєєсс гЕСсСсЕеЕсСдад басдсаассе бо дЕєСаєдсуді саєссасада єдеЕссаадаа адаєтасооду асссоддсаач адчаачаєдаа 120 дсЕддаассе Есааєдаадс агддаастасе аасессааас ссадечаєда асаасаасес 180

Зо

Есдрасадес саасеЕдаадуд аассдЕеЕсЕсс ссаасассас стаааааєдеі єассддасдаа 240 ачаачааєсс сасадсасаа адсааасаає дсаєдддсста сасвсадсада аадсссаасс

З5 300 чаадсаєсєсдуд ддасассссс авгасдсддда аааааадсдтає гадаєаасес ааааддааса

З6о агдчаєсаад адсеЕдеєтаас асссдадеЕєс аастаєасс агсасддааад сасессааає 420 асаасаассс асддаєссааа агсаддадесс аааассассд стассаєдаа аєссссдчасе 480

ЧдсЕСадддсра дсасддаадс ЄЕЕСТасеєдаа бсаєаасеЕссс ааааєссьтєс сасеєдаєсась 540 аавгассааас аадсассаса сбааавпдссса ссасааааада гсааадсасс адсаддсааа бо асстасададч ЕсСЕсСадсасба сстааастасе двчаєстарєє саддеЕдаадс Єаассеєстас бо чсаааєдеЕєд додддсастадс єЕсддадддеЕс єсассаддес аєсссааєсоод содчаддвадса 720 аавгасаддеєд срдсасессас саааєдссаа сааааадчає двоадвддчдачаєєс садааваасесе саасстадсд даачачаєдс аасрсдеєсааа ддссааддсра сЕсесаааєс єаасвтаєсддва 840 асдчассеєса Есссааааає сдаадчасаєс асадасєсаа адсвбасдааа саасаасда4дад 900 адеЕддаасстд ссдЕсСсСаада дасстааадеьс ссастааєста даастсдааає агад 354 «2105 2 «2115 317 «2125 ПРТ «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005 2

Меє пув Гпув Рпе Аїа бБет Ггец І1е Гей ТПїх бет Уаії Рпе їец РПе 5ег 1 5 19 15 бек ТПк Сіп Рбе Уаї Нів Аїа бехт бек ТПх Авр Уа1ї сСіп сій Агд Гец 20 25 30

Атд Авр Гец Аза Агд сід Авр сі Азїа С1у ТБПгІ Рпе Авп бід Аїа Тгр

Зо 35 40 45

Авп оТПтІ Авп о Рпе Гпув Рко бБет Авр бій біп біп Рпе бет Тут бБет Ркго 50 зо бо

З5

ТПкх січ с1у І1е Уа1і Рібе Ггецп ТП Рго Рго їув Авп Уаі Іїе с1у с1ц 65 70 75 80

Ат Атуд чІ1е бБет сіп Тут пув Уаі Авп Авп Аза Тгр Аїа ТПтІ Іец Уаї 85 30 35 с1у бек Рко ТПг Ссіц Аза бет с1іу ТПг Рго Гей Тут Аїа с1у Гпув Авп 1600 195 110 уаї гейш Авр Авп бБет пув сіу ТПїІ Меє Авр біп біц їец Тїец ТПг Ркго 115 120 125

Сіш Рре Авп Тугк ТПт Тут ТПг бі бБег ТПг бетг Авп Тіт І1е ТркЕ Нівз 130 135 140 с1у гейш Гув Гец с1у Маії Гпув ТПтї ТПтІ Аза ТПтх Меєсє Гуз Ріе Рго Іїє 145 150 155 160

А1їа біп с1у Бек Меє сіц Аза бет ТПї бі Тут Авп Рпе біп Авп 5бег 165 170 175 бек ТПх Авр ТПх Кпув ТПт тГув біп УМаії бБет Тук пув бек Рго бБет біп 180 185 190

Туз І1ї1е пув Уаії Рго Аїа сі1у пув ТПх Тут Агд Уаії Гецп Аїа Тук Ієц 195 200 205

Авп ОТП со1у бБег Іїе бек сіу бій Аза Авп Гей Тут Азїа Авп Уаі Щ1Уу 210 215 220 с1у Іїе Аїа Ттр Агуд Маі! бек Ркго сіу Тут Рго Авп сбіу с1у со1Уу Уаї 225 230 235 240

Авп о Іїе с1у Аїа Уаії еп ТПтї Гуз Сув біп біп ув б1у Тгр О1Уу Авр 245 250 255

Рпе Агд Авп Рпе біп Рго бекхт С1у Агуд Авр Уаії Іїе Уа1і пув сШ1у сі1п 260 265 270

Зо сіу ТПг Рпе Ппув бБет Авп Тут сіу ТПІ Авр Рпе Іїе їец пув Іїе Сс1ц 275 280 285

Авр Іїе ТПг Авр бБет пув Гей Агд Авп о Авп Авп о сіу бетг с1іу ТПтх Уаї 290 295 300 уаї б1п сб1іц Іїе Гпув УМаі Рко Ге І1е Агд ТПг біц І1е 305 310 315 «2105 З «2115 954 «2125 ДНК «213» Вгеуірасі1ї1їцв 1агеговрогиз «4005 З асдаааааас єсосаадчесс аасссеЕсасба аазЕдесЧеєєсс тЕссеЕеЕссдад басдсаастсе бо

ЧдЕЕєСсСаєдсудє саєссасада сдДдеЕссаадаа ачаєсасоаддча ассєддсаад адаадаєсдаа 120 дсЕддаассеЕ ссааєсдаадс асддаастасоі аассссааас ссадсдаєда асаасаассс 180

Зо

Есдрасадес саасеЕдаадуд аассдЕеЕсЕсс ссаасассас стаааааєдеі єассддасдаа ачаачааєсс сасадсасаа адсааасаає дсаєдддсса сасвсадаадд аадсссаасс 300 чаачдсаєсєсдд ддасассссс авгасдсддда аааааадсдтає гадаєаасес ааааддааса

З6о аєсдаєсаад адсеЕдеєсаас асссдадеЕєс адсстасасся асасддааач сасєссааає 420 асаасаассс асддаєссааа адсаддадесс аааассассд стассаєсєдаа аєссссдчасе 480

ЧдсЕСадддсра дсасддаадс СЕСТаседаа саєаасеЕєсс ааааєссьтвс сасеєдаєсась 540 аавгассааас аадсассаса сбаааввдссса ссасаааааа гсааадсасс адсадчачсааа бо асстасададч ЕсСЕсСадсасба сстааастасе двчаєстарєє саддеЕдаадс Єаассеєстас бо чдсаааєдеЕєд додддсастадс єЕсддадддеЕс єсассаддес аєсссааєсдда сддаддачта 720 аавгасаддеєд срдсасессас саааєдссаа сааааадчає двоадвддчдачаєєс садааваасесе 780

Зо саасстадсд даачачаєдс аассдеєсааа ддссааддсра сЕсесаааєс єаасвтаєсдва 840 асдчассеєса Есссааааає сдаадчасаєс асадасєсаа адсвбасдааа саасаасда4дад

З5 900 адеЕддаасстд ЕСЯСсЕСаада чдчассааадье ссассааєса дааседааає агад 354 40 «2105 4 «2115 317 «2125 ПРТ «213» Вгеуірасі1ї1їц5 Іагеговрогивз 45 «4005 4

Меє пув Гпув Рпе Аїа бБет Ггец І1е Гей І1їе бБет Уаі1ї Рпе їец РПе 5ег 1 5 19 15 50 бек ТПкг біп Рпе Уаї Нів Аїа бек бетг ТрІ Азр Уа1! с1іп сій Агд Іец 20 25 30 55

Авп оТПтІ Авп о Рпе Гпув Рко бБет Авр бій біп біп Рпе бет Тут бБет Ркго 50 55 бо

Аг Агуд ч1І1е бег Сіп Тут Ппув Уаі Авп Авп Аїа Тгр Аїа ТПтг Гец Ссіц 85 Зо 95 сіу бек Рго ТПт сіц Маії бек сіу ТПї Рго Гей Тут Аїа с1у Гув Авп 1600 195 110 уаї гейш Авр Авп бБет пув сіу ТПїІ І1ї1е Авр біп біц їец Тїец ТПтг Ркго 115 120 125

Сіш Рре бБег Тук ТПт Тут ТПкг бі бБег ТПг бет Авп ТПт ТНтг ТркЕ Нівз 130 135 140 с1у гейш Гпув Маї с1у Маії Ппув ТПтї ТПтІ Аза ТПтх Меєсє Гуз РпПпе Рго Іїє 145 150 155 160

Зо Аїа сбіп с1у бБетк Месє біц Аїа бек ТПг сіц Тут Авп Рпе сіп Авп бег 165 170 175 бек ТПх Авр ТПх Кпув ТПт тГув біп УМаії бБет Тук пув бек Рго Бех біп

З5 180 185 190

Туз І1ї1е пув Уаії Рго Аїа сі1у пув ТПх Тут Агд Уаії Гей Аїа Тук ГІец 195 200 205

Авп оТПтІ с1у бБет Іїе бБет сіу сі Аза Авп Гей Тут Аїа Авп Уаї с1У 210 215 220 с1у Іїе Аїа Ттр Агуд Маі! бек Ркго сіу Тут Рго Авп біу біу с1у Уаї 225 230 235 240

Авп о чІ1е сб1у Аїа Уаї їецп ТПї Гув Сув сіп сбіп Гув с1у Ткгр с1у Авр 245 250 255

Рпе Агд Авп Рпе біп Рго бегхт Сб1у Агд Авр Уаі І1е Уа1 Гуз сС1у сбіп 260 265 270 сіу ТПг Рпе Ппув бБет Авп Тух сіу ТПх Авр Рпе Іїе Гецп пув Іїе с1ц

275 280 285

Авр Іїе ТПІ Авр бБет пув Гец Агд Авп Авп Авп о біу бет біу ТПт Уаї 290 295 300 уаї б1п б1іцш Іїе Гпув Ма1і Рко Ге І1е Агд ТПг біц І1е 305 310 315 «2105 -Б15555 «2115 954 «2125 ДНК «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005. Ющ.5 асдаааааасє Есоосаадзчесс аасссеЕсаса аазЕдесЧеєєсс гЕСсСсЕеЕсСдад басдсаассе бо

ЧдЕЕєСсСаєдсудє саєссасада єДдеЕссаадаа ачаєсасоаддаа ассєддсаад адаадаєсдаа 120 дсЕддаассе Есааєдаадс агддаастасе аасессааас ссадечаєда асаасаасес 180

ЕсСЕваєсадес саасеЕдааду аассдЕеЕсЕсс ссаасассас стаааааєдесі бєассддасдаа 240

Зо адаадааєєсє сасадстаєаа адчсааасааєсє дсаєдддсста саєсєсадаадч аадсссаасс 300 чаадсаєсєсдуд ддасассссс авгасдсддда аааааадсдтає гадаєаасес ааааддааса

З6о

З5 асддаєсаач адссдеЕсаас асссчадеЕсеЕ аастасассо асасддааад сасессааає 420 асаасаассс асддаєссааа агсаддадесс аааассассд стассаєдаа аєєсссдчасие 480

ЧдсЕСадддсра дсасддаадс СЕСТаседаа саєаасеЕєсс ааааєссьтвс сасеєдаєсась 540 аааввстааас аадстаєссасба баааадссса ссасаааваа ссааадсасс адсаддсааа бо асстасададч ЕсСЕсСадсасба сстааастасе двчаєстарєє саддеЕдаадс Єаассеєстас бо чсааасєдеЕсЧ доадваЧдтеасадс ЕєЯдддадддеЕє ссассаддес ассссааєда соадчаддадса 720 аавгасаддеєд срдсасессас саааєдссаа сааааадчає двоадвддчдачаєєс садааваасесе 780 саасстадсд даачачаєдс аасрсдеєсааа ддссааддсра сЕсесаааєс єаасвтаєсддва 840 асдчассеєса Есссааааає сдодаадасаєс асадасєсаа адссасдааа саасаасдв9ад адеЕддаасстд ссдЕсСсСаада дасстааадеьс ссастааєста даастсдааає агад 354 «2105 6 «2115 317 «2125 ПРТ «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005 6

Авп оТПтІ Авп о Рпе Гпув Рко бБет Авр бій біп біп Рпе бет Тут бБет Ркго зо бо

Зо

ТПкх січ с1у І1е Уа1і Рібе Ггецп ТП Рго Рго їув Авп Уаі Іїе С1у б1ц 65 70 75 80

З5

Ат Атуд чІ1е бБет сіп Тут пув Уаі Авп Авп Аза Тгр Аза ТПтІ Іеєц Сс1ц 85 30 35 40 с1у бек Рко ТПг Ссіц Аза бек с1іу ТПг Ркго Гей Тут Аїа сС1у ГПУув Авп 1600 195 110 уаї гейш Авр Авп бБет пув сіу ТПїІ Меє Авр біп біц їец Тїец ТПг Ркго 45 115 120 125

Сіш Рре Авп Тугк ТПт Тут ТПг бі бБег Тік бБет Авп ТПт Трт Тпк Нівз 130 135 140 50 с1у гейш Гув Гец с1у Маії Гпув ТПтї ТПтІ Аза ТПтх Меєсє Гуз Ріе Рго Іїє 145 150 155 160

А1їа біп с1у Бек Меє сіц Аза бет ТПг бій Тут Авп Рпе біп Авп бег 165 170 175 бек ТПх Авр ТПх Кпув ТПт тГув біп УМаії бБет Тук пув бек Рго бБет біп 180 185 190

Туз І1ї1е пув Уаії Рго Аїа сі1у пув ТПтІ Тут Акд Уаї Гей Аїа Тук ГІец 195 200 205

Авп ОТП со1у бБег Іїе бек сіу бій Аза Авп Гей Тут Азїа Авп Уаі Щ1Уу 210 215 220 с1у Іїе Аїа Ттр Агд УМаі бек Рго сіу Тухк Рго Авп біу біу с1у Уаї 225 230 235 240

Рпе Агд Авп Рпе біп Рго бехт Сб1у Агуд Авр Уаі І1е Уа1 Гуз сС1у сбіп 260 265 270 сіу ТПг Рпе Ппув бБет Авп Тут сіу ТПІ Авр Рпе Іїе їец пув Іїе Сс1ц 275 280 285

Зо Авр Іїе ТПг Авр бБет пув Гей Агуд Авп о Авп Авп біу бБег с1у ТПт Уаї 290 295 300 уаї б1п сб1іц Іїе Гпув УМаі Рко Ге І1е Агд ТПг біц І1е 305 310 315 «2105 17 «2115 954 «2125 ДНК «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005 7 асдаааааас єсосаадчесс аасссеЕсасба аазЕдесЧеєєсс тЕссеЕеЕссдад басдсаастсе бо

ЧдЕЕєСсСаєдсудє саєссасада сдДдеЕссаадаа ачаєсасоаддча ассєддсаад адааааєсдаа 120 дсЕддаассс стааєсдаадс асддаастасоі аасессааас ссадсдчаєда асаасаассс 180

ЕсСЕваєсадес саасеЕдаадуд сасєдеЕсЕсс ссаасассас стаааааєдеі єассддасдаа 240 ачаачааєсс сасадсасаа адсааасаає дсаєдддсса сасвсадаадд аадсссаасс 300 чааасдссдд ддасассссс авгасдсддда аааааадсдтає гадаєаасес ааааддааса

З6о адсдчаєсаач адссдеЕсаас асссчадеЕсеЕ асстасассо асасддааад сасессааає 420 асаасаассс асддаєссааа агсаддадесс аааассассд стассаєсєдаа аєссссдчасе 480 дсЕСсСадддра дсаєддаадс ЄЕсстастдаа гасаасеЕсєс аааасєстєс састедатась 540 аавгассааас аадсассаса сбаааадссса ссасаааада гсСааадсасс адсаддсааа бо ассЕсстададч ЕсСеЕсадсасба сстааастасе двчаєстарєє саддеЕдаадс Єаассеєстас бо чсааасєдеЕсЧ доадвадеасадс сЕЧ9дЯ9дЧдЧдЯдЧЕеЕЕ ссассаддес ассссааєда соадчаддадса 720 аавгасаддеєд срдсасссас саааєдссаа сааааадчає доадвдвдачаєєсс садааасеє 780 саасстадсд даадачаєде аассдесааа ддссааддрта сЕсссасаєюс гааєтаєдадда 840 асдчассеєса Есссааааає сдаадчасаєс асадасєсаа адсвбасдааа саасаасда4дад 900

Зо адеЕддаасстд ЕСЯСсЕСаада чдчассааадье ссассааєса дааседааає агад 354

З5 «2105 8 «2115 317 «2125 ПРТ «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз 40 «4005 8

Меє пув Гпув Рпе Аїа бБет Ггец І1е Гей І1їе бБет Уаі1ї Рпе їец РПе 5ег 1 5 19 15 45 бек ТПкг біп Рпе Уаї Нів Аїа бек бетг ТрІ Авзр Уа1! с1іп бій Агд Іеєц 20 25 30 50 Аг Авр Гец Аза Акд біц Авп бі Аза сіу ТПхїх Гец Авп сід Аїа Тгр

Авп оТПтІ Авп о Рпе Гпув Рко бБет Авр бій біп біп РпПе бБет Тут бет Ркго 50 зо бо

ТПкх січ с1у І1е Уа1і Рібе Ггецп ТП Рго Рго їув Авп Уаі Іїе с1у с1ц

Зб

65 70 75 80

Ат Атуд чІ1е бБет сіп Тут пув Уаі Авп Авп Аза Ттр Аїа ТПтІ Іец сі1ц 85 30 95 сіу бек Рго ТПт сіц Меє бет сіу ТПї Рго Гей Тут Аїа с1у Гув Авп 100 105 110 уаї гейш Авр Авп бБет пув сіу ТПкг бБег Авр біп сбіц Гец їец ТПтг Ркго 115 120 125

Сіш Ре ТПт Тук ТПт Тут ТПкг бі бБег ТПкг бет Авп ТПт ТПтг ТркЕ Нівз 130 135 140 с1у пеп Ппув Гец сіу Уа1ї пув ТПг ТПг Аїа ТПт Меє пувз РПе Рго І1е 145 150 155 160

А1їа біп с1у Бек Меє сіц Аза бет ТПї бі Тут Авп Рпе біп Авп 5бег 165 170 175 бек ТПх Авр ТП пув ТПт Гув біп УМаії бБет Тук пув бек Рго бБет біп 180 185 190

Зо

Туз І1ї1е пув Уаії Рго Аїа сі1у пув ТПх Рпе Агд Уаії Гей Аїа Тук ГІец 195 200 205

З5

Авп оТПтІ с1у бБет Іїе бБет сіу сі Аза Авзп Гей Тут Аза Авп Уаї с01У 210 215 220 с1у Іїе Аїа Тгр сіу Уаії Ге Рго с1у Тук Рго Авп сбіу сіу с1у Уаї 225 230 235 240

Рпе Агд Авп Рпе біп Рго бегхт Сб1у Агд Авр Уаі І1е Уа1 Гуз сС1у сбіп 260 265 270 сіу ТПг Рпе ТПт бБетг Авп Тут сіу ТПІ Авр Рпе Іїе їец пув Іїе Сс1ц 275 280 285

Авр Іїе ТПІ Авр бБет пув Гец Агд Авп Авп Авп о біу бет біу ТПт Уаї 290 295 300 уаї б1п сб1іц Іїе Гпув УМаі Рко Ге І1е Агд ТПг біц І1е 305 310 315 «2105 13 «2115 954 «2125 ДНК «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005 1.15 асдаааааає еєЕсосаадесет аасссеЕсаса аазєЕдесЧєєсс ЕСЕ сСдад сасасаасьс бо дЕєСаєдсуді саєссасада єдеЕссаадаа адаєтасдддд асесддсаад адааааєсдаа 120 дсЕДддаассс Есааєдсадс аєддаастасе аасессааас ссадечаєда асаасаасес 180

ЕсСЕваєсадес саасеЕдаадд ЄЕЄсТавєєсєс ссаасассас стаааааєдсі єассддасдаа 240 ачаачааєсс сасаєсаєсаа адсааасаає дсаєдддсса сасвсадаадд аадсссаасс 300 чаадсаєсєсдд ддасассссс авгасдсоддда адааасачртає гадаєаасес ааааддааса

З6о

Зо асадчаєсаад адаєдессаас асссдадеЕєс ааставєасся агасддаадд сасессааає 420 асаасаассс асддаєссааа аєгсаддадесс аааассассд ссассаєдаа аєссссдчасє 480

З5

ЧдсЕСадддсра дсасддаадс СЕСТаседаа саєаасеЕєсс ааааєссьтвс сасеєдаєсась 540 аавгассааас аадсассаса сбааавпдссса ссасааааада гсааадсасс адсаддсааа бо ассЕсстададч ЕсСессадсасба сстааастасе двчаєстаєєє саддеЕдаадс Єаассеєстсас бо чсаааєдеєд додддеЕдтадс ЕсдддодадаЕс євсассаддеЕс аєсссааєсдда сдоддаддачта 720 аавгасаддеєд срдсасессас саааєдссаа сааааадчає двоадвддчдачаєєс садааваасесе 780 саасстадсд даачачаєдс аасрсдеєсааа додссааддсра сЕсесасаєс єаасвтаєсддва 840 асдчассеєса Есссааааає єдаадасаєс асадасеєсаа адсвбасдааа саасаасда4дад 900 адеЕддаасстд ЕСЯСсЕСаада чдчассааадье ссассааєса дааседааає агад 354

«2105 10 «2115 317 «2125 ПРТ «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005 10

Меєсє ув пув Рпе Аїа бет Пец Іїе Гецп ТПтї бек Уа1! Рпе Гец РПе 5ег 1 5 10 15 бек ТПкг біп Рпе Уаї Нів Аїа бек бетг ТрІ Азр Уа1! с1іп сій Агд Іец

Атд Авр Гец Аза Агд сід Авп бі Аїа Сб1іу ТПт Ге Азп Уаі Аїа Тгр 20

Авп оТПтІ Авп о Рпе Гпув Рко бБет Авр бій біп біп Рпе бет Тут бБет Ркго бо 25

ТПкх сі с1у Роре І1е Рпе Гей ТПтІ Рго Рго пув Авп Уаі І1е с1у с1ц 65 70 75 80

Зо Аг Агуд І1е бек Нів Тут Кїув Уа1і Авп Авп Аї1а Тгр Аї1а ТПІ Ієц С1ц 85 Зо 95 сіу бек Рго ТПт сіц Маї бек с1у ТПї Рго Гей Тут Аїа С1у Аг9д Авп

З5 1600 195 110 уаї гейш Авр Авп бБет пув сіу ТПїІ І1ї1е Авр біп біц Меє їец ТПг Ркго 115 120 125 40

Сіш Рре Авп Туг ТПт Тут ТПкг бі с1у ТБк бетг Авп ТПт ТПтг ТркЕ Нівз 130 135 140 45 с1у гейш Гув Гец с1у Маії Гпув ТПтї ТПтІ Аза ТПтх Меєсє Гуз Ріе Рго Іїє 145 150 155 160 50 Аїа сбіп с1у бБетк Месє біц Аїа бек ТПг сіц Тут Авп Рпе сіп Авп бег 165 170 175 бек ТПх Авр ТПх Кпув ТПт тГув біп УМаії бБет Тук пув бек Рго бБет біп 55 180 185 190

Туз І1ї1е пув Уаії Рго Аїа сі1у пув ТПх Рпе Агд Уаії Гей Аїа Тук ГІец

195 200 205

Авп оТПтІ с1у бБет Іїе бБет сіу сі Аза Авзп Гей Тут Аза Авп Уаї с01У 210 215 220 сіу Маі Аїа Ттр с1у Маії Гец Рко сіу Тут Рго Авп біу біу с1у Уаї 225 230 235 240

Рпе Агд Авп Рпе біп Рго бегхт Сб1у Агд Авр Уаі І1е Уа1 Гуз сС1у сбіп 260 265 270 с1у ТПж Рпе ТПг бБетг Авп Тут с1іу ТПг Авр Рпе Іїе їецй Гув І1е сі1ц 275 280 285

Авр Іїе ТПІ Авр бБет пув Гец Агд Авп Авп Авп о біу бет біу ТПт Уаї 290 295 300 уаї б1п сб1іц Іїе Гпув УМаі Рко Ге І1е Агд ТПг біц І1е 305 310 315

Зо «2105 11 «2115 954 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Рекомбінантна полінуклеотидна послідовність, кодуюча складений білок ТІС4260, створений комбінуванням варіанту природної послідовності з шести нативньх послідовностей з виду Вгеуірасії1їцв Т1Табегозрогив. «4005 11 асдаааааає єсосаадееє аасссеЕгаса аєдеЕдеЕссс цс сссдад сасддсаасьс бо дЕЕєСсСаєдсудє саєссасада єДдеЕссаадаа адаєсасоадуча ассєддсаад ачаачаєдаа 120 дсЕддаассе ссааєсддрадс асддчаасасо аасесссааас ссадсдчаєда асаасаассс 180

Есдрасадес саасеЕдаадд ЄЕссавєєсєєсєссаасассас стаааааєдс гассддадсдаа 240 ачаачааєсс сасаєсаєсаа адсаааєсаає дсаєдддсста саєссадсадучо аадсссаасс 300 чаадсаєссдуд ддасасссес авгасдсддда адааасдсрає сбадаєсаассс ааааддааса

З6о асддаєсаач ачасдеЕсаас асссдадеЕсеЕ адеЕвасассо асасододаадчч сассссааає 420 асаасаассс асддаєсєсааа адсаддадсс аааассассд ссассаєдаа асссссдчацєє 480 дсЕСсСаддчра дсаєддаадс Єсстастєдаа басаасЕтсєс ааааєєстєсс састсдчатасие 540 аавгассааас аадсассава баааадссса ссасааавааа Ссааадсасс адсадчачсааа бо асстасададч ЕЄСЕсСадсава сстааатасе двдаєстаєєє саддедаадс баассестсас бо чсааасдеЕсЧч додадЧдЕЧдсадс ЕєЧдддадддеЕє ссассаддес ассссааєда содадчачта 720 аавгасаддеєд срдсасссас саааєсдссаа сааааадчає дчоддачаєсєсс садааасевє 780 саасстадсд даадачаєдс аассуєсааа додссааддра сЕсссасаєс сааєсаєдавча 840 асдчассеєса Есссааааає єдаадасаєс асадасєсаа адссасдааа саасаасдв9ад 900

Зо адеЕддаасстд ЕСЯСсЕСаада даєссааадее ссассааєсєса даасеєдааає агсад 354

З5 «2105 12 «2115 317 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Амінокислотна послідовність трансляції відкритої рамки зчитування, як указано в 5БО І МО:11. «4005 12

Меє пув Гпув Рпе Аїа бБет Ггец І1е Гей ТПїх бет Уаії Рпе їец РПе 5ег 1 5 19 15 бек ТПк Сіп Рбе Уаї Нів Аїа бехт бБег І1їе Авр Уа1ії сСіп сій Агд Гец 20 25 30

Атд Авр Гец Аза Агкд сіц Авр бі Аза сб1іу ТБПг Рбпе Авп Уаі Аїа Тгр 35 40 45

Авп оТПтІ Авп о Рпе Гпув Рко бБет Авр бій біп біп Рпе бет Тут бБет Ркго

А

50 55 бо

ТПкх сі с1у Роре І1е Рбе Ггецп ТП Рго Рго їув Авп Уаі І1е С1у б1ц 65 70 75 80

Ат Агуд І1е бек Нів Тут пув Уа1і Азп Авп Аза Тгр Аїа ТПхгх Ієц Уаї1 85 Зо 95 сіу бек Рго ТПтІ сіц Аїа бет сіу ТПї Рго Гей Тут Аїа с1у Агд Авп 100 105 110 уаї гейш Авр Авп бБет пув сіу ТПїІ Меє Авр біп біц Меє Їїец ТПг Ркго 115 120 125 сі Робе бет Тук ТПт Тугк ТПг сіц с1у ТрПт бек Авп ТПг І1е ТіПг Нів 130 135 140 с1у гейш Гпув Маї с1у Маії Гпув ТПтї ТПтІ Аза ТПтх Меєсє Гуз Ріе Рго Іїє 145 150 155 160

А1їа біп с1у Бек Меє сі Аїа бек ТПг бій Тут Авп Рпе біп Авп 5бег 165 170 175

Зо бек ТПх Авр ТПх Кпув ТПт тГув біп УМаії бБет Тук пув бек Рго бБет біп 180 185 190

З5

Туз І1ї1е пув Уаі Рго Аїа Ссіу пув ТПх Тут Агд Уаії Гей Аїа Тук ГІец 195 200 205

Авп ОТП со1у бБег Іїе бек сіу бій Аза Авп Гей Тут Азїа Авп Уаі Щ1Уу 210 215 220 сіу Маі Аїа Ттр Агуд УМаії бек Ркго сіу Тут Рго Авп біу біу с1у Уаї 225 230 235 240

Авр Іїе ТПІ Авр бБет пув Гец Агд Авп Авп Авп о біу бет біу ТПт Уаї 290 295 300 уаї б1п сб1іц Іїе Гпув УМаі Рко Ге І1е Агд ТПг біц І1е 305 310 315 «2105 13 «2115 954 «2125 ДНК «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005 13 асдаааааас єсосаадчесс аасссеЕсасба аазЕдесЧеєєсс тЕссеЕеЕссдад басдсаастсе бо

ЧдЕЕєСсСаєдсудс саєссасада сдДдеЕссаадаа ачаєсасодвддча ассвадсаад адаааасдаа 120 дсЕДддаассс Есааєдаадс аєддаастасе аасеЕссааас ссадесдаєда асаасаассс 180

ЕСЕсТавадес саастдаадуд аасЕєдеЕєєєс єсаасассас стаааааєсде таєсддсдаа 240 ачаачааєсс сасадсасаа адсааасаає дсаєдддсса сасвсадаадд аадсссаасс 300

Зо чаачдстаєсєсдуд ддасассссє авгасдсоддда аааадсдртає гадаєаасес ааааддааса

З6о асддаєсаач адссдеЕсаас асссчадеЕсеЕ аастасассо асасддааад сасессааає

З5 420 асаасаассс асддаєссааа агсаддадесс аааассассд стассаєдаа аєссссдчасе 480 дсЕСсСадддра дсаєддаадс ЄЕсстастдаа гасаасеЕсєс аааасєстєс састедатась 540 аавгассааас аадсассавра баааадссса ссасаааааа гсааадсасс адсаддсааа бо ассЕсстададч ЕсСеЕсадсасба сстааастасе двчаєстарєє саддеЕдаадс Єаассеєстас бо чсааасєдеЕсЧ доадвадеасадс сЕЧ9дЯ9дЧдЧдЯдЧЕеЕЕ ссассаддес ассссааєда соадчаддадса 720 аавгасаддеєд срдсасссас саааєдссаа сааааадчає дчододдачаєсєсс садааасевє 780 саасстадсд даадачаєде аассдесааа ддссааддрта сЕсссдааєс гааєтаєдавва 840 асдчассеєса Есссааааає сдаадчасаєс асадасєсаа адсвбасдааа саасаасда4дад адеЕддаасстд ЕСЯСсЕСаада чдчассааадье ссассааєса дааседааає агад 354 «2105 14 «2115 317 «2125 ПРТ «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005 14

Меєсє ув пув Рпе Аїа бет Пец Іїе Гей Ії1е Бек Уаі1! Рпе Гец РПе 5ег 1 5 19 15 бек ТПкг біп Рпе Уаї Нів Аїа бек бетг ТПтг Авр Уаї Сіп бій Агд Іеєц 20 25 30

Атд Авр Гец Аза Агд сід Авп бі Аза Сб1у ТБПгт гец АвБп біц Аїа Тгр 35 40 45

Авп оТПтІ Авп о Рпе Гпув Ркго бБет Авр бій біп сбіп РпПе бБет Тут бБет Ркго 50 зо бо

Зо

Аг Агуд ч1І1е бег Сіп Тук Ппув Маі Авп Ап Аїа Тгр Аїа ТПтг Гец Ссіц 85 30 35 сіу бек Рго ТПт сіц Маії бек сіу ТПї Рго Гей Тут Аїа с1у Гув Авп 1600 195 110 уаї гейш Авр Авп бБет пув сіу ТПїІ Меє Авр біп біц їец Тїец ТПг Ркго 115 120 125

Аїа сбіп с1у бБетк Месє біц Аїа бек ТПг сіц Тут Авп Рпе сіп Авп бег 165 170 175 бек ТПх Авр ТПх Кпув ТПт тГув біп УМаії бБет Тук пув бек Рго бБет біп 180 185 190 пув І1е пув Уаі Рго Аїа с1у пув ТПк Рпе Агуд Уаії Гец Аїа Тук Гец 195 200 205

Авп оТПтІ с1у бБет Іїе бБет сіу сі Аза Авзп Гей Тут Аза Авп Уаї с01У 210 215 220 с1у Іїе Аїа Ттр с1у Маії Гец Рко сіу Тут Рго Авп біу біу с1у Уаї 225 230 235 240

Рпе Агд Авп Рпе біп Рго бегхт Сб1у Агд Авр Уаі І1е Уа1 Гуз сС1у сбіп 260 265 270 с1у ТПжЕ Рпе сіц бБег Авп Тут с1іу ТПг Авр Рпе Іїе їецй Гув І1е сі1ц 275 280 285

Авр Іїе ТПІ Авр бБет пув Гец Агд Авп Авп Авп о біу бет біу ТПт Уаї

Зо 290 295 300 уаї б1п сб1іц Іїе Гпув УМаі Рко Ге І1е Агд ТПг біц І1е 305 310 315

З5 «2105 15 «2115 954 «2125 ДНК «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005 15 асдаааааає еЕсосаадчест аасссеЕсаєса аазєдесдеЕєсс ЄЕСсСсеЕесссдад сасддсаасьс бо

ЧдЕЕєСсСаєдсудє саєссасада сдДдеЕссаадаа ачаєсасоаддча ассєддсаад адааааєсдаа 120

ЧдсЕДддаассс Есааєдаадс агєддаастасе аасессааас ссадечаєда асаасаасес 180

ЕсСЕваєсадесссасеЕдаадуд сасєдеЕссс ссаасассас стаааааєдеі єаєсддсдваа 240 адаадааєєє сасадстаєаа адчсааасааєсє дсаєсдддста саєсадаадд аадсссаасс 300 чаачдсаєсєсдд ддасассссс авгасдсддда аааааадсдтає гадаєаасес ааааддааса

З6о асддаєсаач адссдеЕсаас асссчадеЕсеЕ аастасассо асасддааад сасессааає 420 асаасаассс асдчдаєссааа агсаддадес аааассассд стассаєсдаа аєссссдчасе 480 дсЕСсСадддра дсаєддаадс ЄЕсстастдаа гасаасеЕсєс аааасєстєс састедатась 540 аавгассааас аадсассаса сбааавпдссса ссасааааада гсааадсасс адсаддсааа бо асстасададч ЕЄЕсСадсасба сстааастасе двчаєставає саддедаадс баассестсас бо чсааасєдеЕсЧ доадвадеасадс сЕЧ9дЯ9ддадЯдЕеЕЕ ссассаддес ассссааєда содаддааєа 720 аавгасаддеєд срдсасессас саааєдссаа сааааадчає двоадвддчдачаєєс садааваасесе 780 саасстадсд даадачаєде аассдесааа ддссааддрта сЕсссаааєс гааєтаєдадда 840 асдчассеєса Есссааааає сдаадчасаєс асадасєсаа адсвбасдааа саасаасда4дад 900

З5 «2105 16 «2115 317 «2125 ПРТ «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз 40 «4005 16

Меє пув Гпув Рпе Аїа бек Ггецп І1їе Гей Іїе бБег Уаії РПпе Гец РПе 5ег 1 5 19 15 45 бек ТПкг біп Рпе Уаї Нів Аїа бек бетг ТрІ Азр Уа1! с1іп сій Агд Іец 20 25 30 50 Аг Авр Гец Аза Акд бій Ап обі Аза сіу ТПї Гец Авп сід Аїа Тгр

65 70 75 80

Ат Атуд чІ1е бБет сіп Тут пув Уаі Авп Авп Аза Тгр Аза ТПтІ Іеєц Сс1ц 85 30 95 сіу бек Рго ТПт сіц Маії бек сіу ТПї Рго Гей Тут Аїа с1у Гув Авп 100 105 110 уаї гейш Авр Авп бБет пув сіу ТПїІ Меє Авр біп біц їец Тїец ТПг Ркго 115 120 125

Сіш Рре Авп Тугк ТПт Тут ТПг бі бБег ТПг бет Авп ТПт ТПтг ТркЕ Нівз 130 135 140 с1у пеп Ппув Гец сіу Уаії пув ТПї ТПт Аїа ТПтї Меє пувз Рпе Рго І1е 145 150 155 160

Зо

З5

Авп оТПтІ с1у бБет Іїе бБет сіу сі Аза Авзп Гей Тут Аза Авп Уаї с01У 210 215 220 с1у Іїе Аїа Тгр сіу Уаії Гец Рго с1у Тук Рго Авп сбі1у сі1у о1у І1е 225 230 235 240

Рпе Агд Авп Рпе біп Рго бегхт Сб1у Агд Авр Уаі І1е Уа1 Гуз сС1у сбіп 260 265 270 сіу ТПг Рпе Ппув бБет Авп Тут сіу ТПІ Авр Рпе Іїе їец пув Іїе Сс1ц 275 280 285

Авр Іїе ТПІ Авр бБет пув Гец Агд Авп Авп Авп о біу бет біу ТПт Уаї 290 295 300 уаї б1п сб1іц Іїе Гпув УМаі Рко Ге І1е Агд ТПг біц І1е 305 310 315 «2105 17 «2115 921 «2125 ДНК «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005 17 асгдеЕсссЕс Есссдадсас дсаасеєсдеє саєдсдесає ссасадаєдесі єсаадаасда бо

Егасдддасе сддсаадада аааєдаадсої ддаассстта аєдаадсаєд даасастаас 120

Ессааассса дсдаєдааса асаасеєссст савгадесссаа ссдааддрає єдЯеЕсеесСева 180 асассасста ааааєдессає сдодсдааача адчаассеєсас адсаєааадс ааасааєсдса 240 гдддссасає гадааддаад сСссаассддаа дсасєсоддодада сассеЕссава єдсдоддаааа 300 аасдрастад асаасссааа адддасаадс даєсаададс ЕдДдсваасасс сддадеЕєесаас

З6о

Зо тасассвтаса сддааадсас єссааасаса асаасеєсаєдд даєсааааєє аддадессааа 420 ассасрдсста ссаєдааасєє сссдаєєдсеЕ садддсадса гддаадсеЕс сасесдаасає 480

З5 аасЕсссааа арсссеЕсссас сдасастааа асрааасаад гассасаєаа аадсссаєса 540 саааавааєса аадсассадс аддсаааасс багачадеЕсс гадсасасся ааасастсдда бо

Есвтасєсссад дсдаадссаа ссЕссасодса аагассддоада дсагадсева доадддаєєсва бо ссаддеЕсаєс ссааєсддсдуа аддадсааає агаддеЕдстд сгасссассаа асдссаасаа 720 аагдчаєсддавч дачаєсссад ааассеЕссаа сстадсддаа чачаєдсаає сдсЕсаааддс 780 сааддрасеЕс єсаааєссаа сСвгаєсддаас дасессарєсє гааааасєда адасаєсаса 840 чаєєсааадеі басдааасаа сСаасддчадеЕ двдаасєдеЕсд ЕсСсСаадчадає бааадессса 900 стаасєсадаа сеЕдааасаса чдЧ 321

«2105 18 «2115 306 «2125 ПРТ «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005 18

Ме Рібе Іец Ріе бет бБет ТПг Сіп Рбе Уаї Нів Аїа бег бБетг ТПг Авр 1 5 10 15 уаї б1п б1ц Агд Гец Акд Авр Гец Аїа Агд біц Авп о біц Аза с1у ТПг теп Авп сі Аза Тгр Авп ТБ Авп Рбе пув Рго бБет Авр сій сіп сіп 20

Рпе бБет Тук бек Рго ТПх біцш с1і1у Іїе Маії Рпе Гепп ТПхк Рко Рко Гуз бо 25

Авп о уаі Іїе с1у сіц Акуд Акуд І1е бек біп Ту гув Уаі Авп Авп А1а 65 70 75 80

Зо ТЕр Аїа ТПг Ггец сіц сіу Бек Рго ТПт біц Ма! Бек с1іу ТПкг Рго Гец 85 Зо 95

Тут Аїа сі1у пув Авп Уаії Ггецп Авр Авп бет Гув О1у ТПтї 5еїг Авр сіп

З5 1600 195 110 січ Гей Гей ТПтг Рго сіц Рпе Авзп Тут ТПї Тут ТПт біц бет ТПт 5бег 115 120 125 40

Авп оТПт Тпхї ТБг Нів с1у їеш Гуз їец бі1у Уаї пув ТБПтІ Трт АТа ТПг 130 135 140 45

Меє пув Рпе Рго І1ї1е Аїа сіп сі1у бек Меє біц Аза бет ТПт сіц Туг 145 150 155 160 50 Авп оРпе сіп Авп о бет бБет ТПтІ Авр ТПг Гпув ТПх пув біп Уаії бек Туг 165 170 175

Туз бБет Рко бБет біп Гуз Іїе пув Уа1 Рго Аїа с1у Гуз ТПхкг Тухк Агд 55 180 185 190 уаї гецшп Аїа Тут Гец Авп ТПтІ сСіу бБехт І1ї1е бБехт б1у біц Аїа Авп ТГец

195 200 205

Тут Аза А5п І1е сСі1іу сС1у Ічїе Аза Тгр сС1іу с1у Гецп Рго с1у Тук Рго 210 215 220

Авп о б1і1у с1у сі1у Маі Авп І1е с1у Аї1а Уаї гей ТПг гувз Сув біп сіп 225 230 235 240 туз с1у Ткр с1у Авр Рбе Агуд Авп Рпе біп Рго бБет с1у Агд Авр Уаї1 245 250 255

І1їе Маі Гпув сіу сіп с1у ТПжї Рібе Гуз бек Авп Тут б1іу ТПтї Авр РПе 260 265 270

Іїе Гецп Гпув Іїе біц Авр Іїе ТПг Авр бБетг Кув Гец Агд Авп о Авп о Авп 275 280 285 сіу бек с1у ТПт Уаії Уаі сіп сі І1е пуз Уаї Рго їец Іїе Акд ТПг 290 295 300 сі те 305

Зо «2105 19 «2115 948 «2125 ДНК «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005 19 агдеЕсЕЧдсаа ДдЕеЕсСсЯяасєсст сбасаазчЧчеЕсд ссссЕсеЕеЕсс сдадеасдса аєссдеЕссає бо чдсдЕСассса сачаєдессса адаасчаєса сдддасесдд саададчаааа Єдаадссдда 120 ассссааєсд аадсасддаа бассаасьсс ааасссадсд асдаасааса аєссеЕсттає 180 адеЕссаастд аадчртассдеЕ сеЕсссвааса ссасстаааа асдеЕваєсвєд сдааадаада 240 агєссасаде асааадсааа бааєдсаєдуа дстасаєсадд ааддаадссс аассддаадтса 300

Есддддасас сЕссасаєсдс доддаааааас дсаєсадаса асссаааадд дасаадсдас

З6о саададседеЕ гаасасссда чЧчЕсСсаастає асстасасдд ааадсасеес ааасасааса 420 асеЕсаєддає гаааассадда адссаааасс аседсстасса Едаааєсссс даєсдсссад чдабадсаєдуд аадсеЕссстас сдаасаєраас ЄсЕСяааасс сЕсссаседа бассаааась 540 аагсаадтає сасаєаааад сссассасаа аагагасєсааад бассадсадд Єаааасстає; бо ададеЕеєєстад сагасстааа бгастддаєст аєсссадддчеєд аадстаасся тасддсааає бо асєдвдвадаєра гадсеЕсдЧддад доддЕсЕсвасса ддЕсаєсссса асддсдодада адсааасаєва 720 чЧаєдсЕдвас єсассаааєуд ссаасааааа дчаєдаддад ассєсадааа сЕсссаассь 780 адеЕддаадчач асдсаассдс сбаааддссаа ддрассеєсса аасстааєта єддаасоодас 840

Ессарсєсвсаа ааасеєдаада сассасадає ссааадеєсас дааасаасаа саододачесддва 900 асЕдссдеЕєс аададчаєсаа адеЕсссаста аєстадаастд ааастасад 348 «2105 20

Зо «2115 315 «2125 ПРТ «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005 20

З5

Мес Рпе Аїа бег Гец І1їе Пецп Іїе бек Уаі Рпе Пец Рпе бБет бет ТПг 1 5 19 15 сСіп Рбе Уа1і Нів А1їа бек бетг ТПг Авр Уа1ї Сіп сС1ц Агд теп Агд Авр 20 25 30 теп Аї1а Акд сі Авп бі Аза сіу ТПг Гей Авп б1ц Аїа Тгр Авп Ток 35 40 45

Авп о Рпе Гув Рго 5Бет Авр сіц сіп сСіп Рібе бет Тут бет Рго ТПтІ с1ц зо бо 50 с1у Іїе Маії Рпе Гец ТПт Рко Рко Гуз Авп Уаі Іїе б1у біц Акд Агд 65 70 75 80

І1е Бек сіп Тут пув Уаі Авп Ап Аза Тгр Аїа ТПтІ їец сбіц с1у бБег 85 30 35

Рко ТПх бі Уа1і бек б1іу ТПг Рго Гец Тут Аїа сі1у пув Авп Уаї Іецй 100 105 110

Авр Авп обБет Гув сіу ТПт бБет Авр біп бі гей їецп ТПтІ Рго біц РПе 115 120 125

Авп о Тук ТПтІ Тук ТПтї Сі бек ТПтг бек Авп ТБПг ТПт ТБбг Нів с1Уу Ієц 130 135 140

Туз Гец сіу Уаї пуз ТПїх ТПх Аза ТПх Меє їув Рпе Рго Іїе Аїа сіп 145 150 155 160 сіу бек Месє біц Аїа бБет ТПт сі Тук Авп Рпе біп Авп бет бет ТПг 165 170 175

Авр ТПІ Гув ТПт Гпув сіп Уаї бет Тут Кпув бет Рго бБет біп Гув І1е 180 185 190 туз Маії Рко Аїа сСіу пув ТПІ Тут Агкд Уаії Ггец А1їа Тут Гей Авп Ток 195 200 205

Зо с1у бБехт Іїе Бек сіу біц Аза Авп Гей Туг Аза Авп І1е сСі1у о1Уу І1е 210 215 220

Аза Ттр с1у сі1у Гец Рго с1іу Тут Рго Авп біу біу біу Уаії Авп І1е 225 230 235 240 с1у Аїа Уаї Гецп ТПтІ Гув Сув сіп сіп Гуз б1у Тгр б1у Авр Рпе Агд 245 250 255

Авп о Рпе сбіп Рго бБет сіу Акд Авр Уаі Іїе Уаії ув сС1у біп с1у ТПЕг 260 265 270

Рпе пуз Бек Авп Тух біу ТПг Авр Рпе Іїе Гецп Гуз Ії1е сій Авр Ше 275 280 285

ТПг Авр бБег Ггув Гец Агуд Авп о Авп Авзп о біу бБет с1іу ТПтІ Уаії Уаї сіп 290 295 300 січ Іїе Ггув Маї Рго Гец Іїе Акд ТПтІ сіц І1е 305 310 315 «2105 21

«2115 954 «2125 ДНК «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз «4005 21 асдаааааас єсосаадчесс аасссеЕсасба аазЕдесЧеєєсс тЕссеЕеЕссдад басдсаастсе бо

ЧдЕЕєСсСаєдсудс саєссасада сдДдеЕссаадаа счаєсасоадча ассєддсаад адааааєсдаа 120 дсЕДддаассс Есааєдаадс аєддаастасе аасеЕссааас ссадечаєда асаасаасьсс 180

ЕСЕсТавадес саастдаадд гасєдеЕєєєс єсаасассас стаааааєсде таєсддсдваа 240 ачаачааєсс сасадсасаа адсааасаає дсаєдддсса сасвсадаадд аадсссаасс 300 чаадсаєсєсдд ддасассссс авгасдсддда аааааасдтає гадаєаасес аааадддаса

З6о адсдчаєсаач адссдеЕсаас асссчадеЕсеЕ аастасассо асасддааад сасессааає 420 асаасаассс асддаєссааа агсаддадесс аааассассд стассаєсєдаа аєссссдчасе 480

Зо дсЕСсСадддра дсаєддаадс ЄЕсстастдаа гасаасеЕсєс аааасєстєс састедатась 540 аавгассааас аадсассаса сбаааввдссса ссасаааааа Ссааадсасс адсадчачсааа бо

З5 асстасададч ЕсСЕсСадсасба сстааастасе двчаєстарєє саддеЕдаадс Єаассеєстас бо чсааасаєсч доадвадтеасадс сЕЧдЯа9ддададЕ ЄсассаддеЕс ассссааєда соадчаддадса 720 аавгасаддеєд срдсасссас саааєдссаа сааааадчає доадвддачаєтс садааваасесес 780 саасстадсд даадачаєде аассдесааа ддссааддрта сЕсссаааєс гааєтаєдадда 840 асдчассеєса Есссааааає сдаадчасаєс асадасєсаа адсвбасдааа саасаасда4дад 900 адеЕддаасстд ЕСЯСсЕСаада чдчассааадье ссассааєса дааседааає агад 354 «2105 22 «2115 317 «2125 ПРТ «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз

«4005 ЩД 22

Меє пув Гпув Рпе Аїа бБет Ггец І1е Гей І1їе бБет Уаі1ї Рпе їец РПе 5ег 1 5 19 15 бек ТПкг біп Рпе Уаї Нів Аїа бек бетг ТрІ Азр Уа1! с1іп сій Агд Іец 20 25 30

Авп оТПтІ Авп о Рпе Гпув Рко бБет Авр бій біп біп Рпе бет Тут бет Ркго 50 55 бо

ТПг сіц сі1у І1е Ма1ї Рпе Гецп ТПг Ркго Рго Пув Авп Уаі І1їе С1у сІ1ц 65 70 75 80

Ат Атуд чІ1е бБет сіп Тут пув Уаі Авп Авп Аза ТтІр Аїа ТПтІ Іец сі1ц 85 30 95 сіу бек Рго ТПт сіц Маії бек сіу ТПї Рго Гей Тут Аїа с1у Гув Авп 100 105 110

Зо уаї гейш Авр Авп бБет пув сіу ТПтї бБегт Авр біп сі Гец Гецп ТПтг Ркго 115 120 125

З5

Сіш Рре Авп Тугк ТПт Тут ТПг бі бБег ТПг бет Авп ТПт ТПтг ТркЕ Нівз 130 135 140 с1у пеп Ппув Гец сіу Уаії пув ТПг ТПг Аїа ТПт Меє Гуз РПпе Рго Ії1е 145 150 155 160

А1їа біп с1у Бек Меє сіц Аза бет ТПї бі Тут Авп Рпе біп Авп 5бег 165 170 175 бек ТПх Авр ТП пув ТПт Гув біп Ма1ії бек Тук Кпув бек Рго бБетх біп 180 185 190

Авп оТПтІ с1у бБет Іїе бек сіу сб1ц Аза Авзп Гей Тут Аза АвБп Ії1е 01Уу 210 215 220 с1у Іїе Аїа Ттр с1у сіу Гец Рко сіу Тут Рго Авп біу біу с1у Уаї 225 230 235 240

Рпе Акд Авп о Рпе сіп Рго бегт біу Агуд Авр Уаі І1ї1е Уаі пув с1у сіп 260 265 270 сіу ТПг Рпе Ппув бБет Авп Тут сіу ТПІ Авр Рпе Іїе їец пув Іїе Сс1ц 275 280 285

Авр Іїе ТПІ Авр бБет пув Гец Агд Авп Авп Авп о біу бет біу ТПт Уаї 290 295 300 уаї б1п сб1іц Іїе Гпув УМаі Рко Ге І1е Агд ТПг біц І1е 305 310 315 «2105 23 «2115 295 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» Амінокислотна послідовність зрілого белка ТІС3668. «4005 23

З5

Меє бБет бБетг ТПтІ Авр Уаі сіп сб1ц Акд Гей Агуд Авр їец Аза Агд с1ц 1 5 10 15

Авр бій Аза сіу ТПг Рпе Авп о біцп Аза Тгр Авп ТПг Авп Рпе Гув Рго 20 25 30 зек Авр бі біп біп Рбпе бек Тут бек Рго ТПтІ сі с1у І1е Уа1 РБПе 35 40 45

Те ТПт Рко Ркго Гуз Авп Уаі Іїе с1у бій Агуд Атуд чІ1е Бек сіп Тук бо 50

Туз Маі Авп Ап Аїа Тгр Аза ТПх їГец Уа1! с1іу бБет Рго ТПкг сі Аїа 65 70 75 80 55 бек б1і1у ТПх Рго Ггеп Тут Аїа с1і1у Гув Авп Уаії Гей Авр Авп бек Гуз 85 Зо 95 сіу ТпПг Мес Авр сіп сіц Гец Гецп ТПтї Рго біц Рбе Авп Тут ТПт Туг 100 105 110

ТЕ Сі бек Тіт бБег Авп ТПт І1їе ТП Нів сС1у Гц Гуз їєц СсС1у Уаї 115 120 125

Кпув ТПг ТПг Аза ТПтї Меє Гуз Рпе Рго Ії1е Аїа сіп сіу бБетк Меє с1ц 130 135 140

А1їа бБет ТПт сіц Тут Авп Рпе біп Авзп бек бет ТПтІ Авр ТПтІ Гув ТПг 145 150 155 160 туз сіп Уаї бБет Тут Кпув бек Рго бек біп Гув Іїе Гуз Уаі1і Рго Аїа 165 170 175 сіу пув ТПІ Тут Агкд Уаі Ггец Аїа Тут Гей Авп ТПтІ біу бБет Іїе 5Бег 180 185 190 сіу бій Аза Авп о Гец Тут Аза Авзп Уаі сіу с1у І1е Аїа Тгр Аг9д Уаї 195 200 205

Зо ек Рко біу Тут Рго Авп сіу біу сіу Маії Авп І1е сС1у Аїа Уаї Гец 210 215 220

ТпПк гув Сув сбіп сбіп уз б1у Тгр б1у Авр Рпе Агд Авп Рпе сіп Рго 225 230 235 240 бек б1у Агд Авр Уа1 Іїе Уаї пув с1у сіп сіу ТПкх Рпе Гуз бБекгк Авп 245 250 255

Тук сіу ТПтІ Авр РпПе І1е Гей гув Іїе бі Авр Іїе ТПІ Авр 5ет Гувг 260 265 270 теп Акуд Авп о Авп Азп біу бек біу ТПх Уаї Уаї сбіп сі Іїе Гуз Уаї1ї 275 280 285

Рго Гей І1е Агу ТПх сбіц І1е 290 295 «2105 24 «2115 295 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність

«223» Амінокислотна послідовність зрілого білка ТІС3669. «4005 24

Те ТПт Рко Ркго Гуз Авп Уаі Іїе с1у бій Агуд Атуд чІ1е Бек сіп Тук 50 55 бо туз Маі Авп Ап Аїа Тгр Аза ТПх Гей бі с1у бБет Рго ТПх сі Уаї 65 70 75 80 бек б1і1у ТПх Рго Ггеп Тут Аїа с1і1у Гув Авп Уаії Гей Авр Авп бек Гуз 85 90 95

Зо с1у ТПї Іїе Авр сСіп Сбіц Гец Гей ТПг Ркго бій Ропе бБег Тут ТПкг Туг 100 105 110

ТЕ Сі бек Тіт бБег Авп ТПт ТПт ТБ Нів с1у Гец Гуз Уа1! СсС1у Уаї 115 120 125

Туз ТПтІ ТПтІ Аїа ТПї Меє гув Рібе Рго Іїе Аїа сбіп с1у Бек Меє с1ц 130 135 140

А1їа бБет ТПт сіц Тут Авп Рпе біп Авзп бек бет ТПтІ Авр ТПтІ Гув ТПг 145 150 155 160 туз сіп Уаї бБет Тут Кпув бек Рго бек біп Гув Іїе Гуз Уаі1і Рго Аїа 165 170 175 с1у Ппув ТПк Тут Акд Уаі Пец Аїа Тук Гей Авп ТПт сіу Бек І1е 5ег 180 185 190 сіу бій Аза Авп о Гец Тут Аза Авзп Уаі сіу с1у І1е Аїа Тгр Аг9д Уаї 195 200 205 бек Рго біу Тук Рго Авп біу сб1і1у с1і1у Маі Авп І1е с1у Аїа Уаї Гей

210 215 220

ТпПк гув Сув сбіп сбіп уз б1у Тгр б1у Авр Рпе Агд Авп Рпе сіп Рго 225 230 235 240 бек б1у Агд Авр Уа1 Іїе Уаї пув с1у сіп сіу ТПкх РпПе ув бБег Авп 245 250 255

Тук сіу ТПтІ Авр РпПе І1е Гей гув Іїе бі Авр Іїе ТПІ Авр 5ет Гувг 260 265 270 теп Акуд Авп о Авп Азп біу бек біу ТПх Уаї Уаї сбіп с1п Іїе Кпувз Уаї1ї 275 280 285

Рго Гей І1е Агу ТПх сбіц І1е 290 295 «2105 25 «2115 295 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «2235» Амінокислотна послідовність зрілого білка ТІС3670. «4005 25

Меє бБет бБетг ТПтІ Авр Уаі сіп сб1ц Акд Гей Агуд Авр їец Аза Агд с1ц

З5 1 5 19 15

Авр біш Аїа с1іу ТПт Рпе Авп сід Аїа Тгр Авп о ТПтг Авп Ре Гув Ркго 20 25 30 40 зек Авр бі біп біп Рбпе бек Тут бек Рго ТПтІ сі с1у І1е Уа1 РБПе 45

Те ТПт Рко Ркго Гуз Авп Уаі Іїе с1у бій Агуд Атуд чІ1е Бек сіп Тук бо 50 пув Маі Авп Ап Аза Тгр Аїа ТПт Гец сіц сіу Бек Рго ТПг бі Аїа 65 70 75 80 бек б1і1у ТПх Рго Ггеп Тут Аїа с1і1у Гув Авп Уаії Гей Авр Авп бек Гуз 55 85 30 95 сіу ТпПг Мес Авр сіп сіц Гец Гецп ТПтї Рго біц Рбе Авп Тут ТПт Туг

100 105 110

ТЕ Сі бек Тіт бБег Авп ТПт ТПт ТБ Нів с1у Гц Гуз їєц СсС1у Уаї 115 120 125

А1їа бБет ТПт сіц Тут Авп Рпе біп Авзп бек бет ТПтІ Авр ТПтІ Гув ТПг 145 150 155 160 туз сіп Уаї бБет Тут Кпув бек Рго бек біп Гув Іїе Гуз Уаі1і Рго Аїа 165 170 175 с1у Ппув ТПк Тут Акд Уаі Пец Аїа Тук Гей Авп ТПт сіу Бек І1е 5ег 180 185 190 сіу бій Аза Авп о Гец Тут Аза Авзп Уаі сіу с1у І1е Аїа Тгр Аг9д Уаї 195 200 205 бек Рго біу Тук Рго Авп біу сб1і1у с1і1у Маі Авп І1е сіу Аїа Уаї Іец 210 215 220

Зо

ТпПк гув Сув сбіп сбіп уз б1у Тгр б1у Авр Рпе Агд Авп Рпе сіп Рго 225 230 235 240

З5 бек б1у Агд Авр Уа1 Іїе Уаї пув с1у сіп сіу ТПкх Рпе Гпув бБег Авп 245 250 255

Тук с1у ТПг Авр Рпе Іїе Гецп Гпув Ії1е Сбіц Авр Іїе ТПІ Авр бБетг Гув 260 265 270 теп Акуд Авп о Авп Азп біу бек біу ТПтІ Уаї Уаї сіп с1п Іїе Гуз Уаї1ї 275 280 285

Рго гец І1ї1е Агд ТПхкх бі Ше 290 295 «2105 26 «2115 295 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Амінокислотна послідовність зрілого білка ТІС4076.

«4005 26

Меє бБет бБетг ТПтІ Авр Уаі сіп сб1ц Акд Гей Агуд Авр їец Аза Агд с1ц 1 5 19 15

Авп бі Аїа сіу ТПт Гец Авп бі Аза Тгр Авп о ТПт Авп Ре Гув Ркго 20 25 30 зек Авр бі біп біп Рбпе бек Тут бек Рго ТПтІ сі с1у І1е Уа1 РБПе 35 40 45

Те ТПт Рко Ркго Гуз Авп Уаі Іїе с1у бій Агуд Атуд чІ1е Бек сіп Тук 50 55 бо пув Маі Авп Ап Аза Тгр Аїа ТПт Гец біц сіу Бек Рго ТПт бі Меєс 65 70 75 80 бек б1і1у ТПх Рго Ггеп Тут Аїа с1і1у Гув Авп Уаії Гей Авр Авп бек Гуз 85 30 95 сіу ТПг бБег Авр сіп сіц Гец Гецп ТПтї Рго бі Рбе ТПтІ Тут ТПтЕ Туг 100 105 110

Зо

З5

Аза бек ТПкт сі Тук Авп Рпе сбіп Авп бетг бБеїт ТПтг Авр ТПт Кпув ТП 145 150 155 160 туз сіп Уаї бБет Тут Кпув бек Рго бек біп Гув Іїе Гуз Уаі1і Рго Аїа 165 170 175 сіу пув ТПІ Рпе Агкд Уаі Ггец Аїа Тут Гей Авп ТПт сіу бБет І1е 5ег 180 185 190 сіу бій Аза Авп о Гец Тут Аза Авзп Уаі сіу с1у І1е Аїа Тгр сС1Уу Уаї 195 200 205 теп Рко сіу Тут Рго Авп біу біу біу Маі Авп І1е сС1у А1їа Уаї Іеєц 210 215 220

ТпПк гув Сув сбіп сбіп уз б1у Тгр б1у Авр Рпе Агд Авп Рпе сіп Рго 225 230 235 240 бек б1у Агд Авр Уа1 Іїе Уаї пув с1у сіп б1у ТПкх Ропе ТПг 5Бег Авп 245 250 255

Тук с1у ТПг Авр Рпе Іїе Гецп Гпув Ії1е Сбіц Авр Іїе ТПІ Авр бБетг Гув 260 265 270 теп Акуд Авп о Авп Азп біу бет біу ТПтІ Уаії Уаї сбіп с1п Ії1їе Гуз Уаї 275 280 285

Рго гец І1ї1е Агд ТПхкх бі Ше 290 295 «2105 27 «2115 295 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Амінокислотна послідовність зрілого білка ТІС4078.

Зо «4005 Щ 27

З5

Авп о біц Аїа сіу ТПт Гец Авзп Уаі Аїа Тгр Авп о ТПтг Авп РПпе Гув Ркго 20 25 30 40 ет Авр біц біп сбіп Рпе бег Тут бБет Рго ТПтІ сіц сіу Рпе І1їе РПе

Пец ТПт Ркго Рго Гуз Авзп Уаії Ії1е С1у б1п Агд Агуд І1е бек Нів Туг 45 50 55 бо туз Маі Авп Ап Аїа Тгр Аза ТПх Гей бі с1у бБет Рго ТПх сі Уаї 65 70 75 80 бек б1і1у ТПх Рго Ггеп Тут Аїа с1у Агуд Авп Уаі Гей Авр Авп бек Туз 85 Зо 95 сіу ТпПг Іїе Авр сіп сіц Меє еп ТПтІ Рго біц Рбе Авп Тут ТПт Туг 100 105 110

ТЕ сіц с1і1іу ТБг бБег Авп ТПт ТПт ТБ Нів с1у Гец Гуз Гц Сіу Уаї 115 120 125

Аза бек ТПкт сі Тук Авп Рпе сбіп Авп бетг бек ТПг Авр ТПт Кпув ТП 145 150 155 160 туз сіп Уаї бБет Тут Кпув бек Рго бек біп Гув Іїе Гуз Уаі1і Рго Аїа 165 170 175 сіу пув ТПІ Рпе Агкд Уаі Ггец Аїа Тук Гей Авп ТПт сіу бБет І1е 5ег 180 185 190 сіу бій Аза Авп о Гец Тут Аза Авзп Уаі сіу с1у Уаі Аїа Тгр сС1Уу Уаї 195 200 205 теп Рко сіу Тут Рго Авп біу біу біу Маі Авп І1е с1у А1їа Уаї Гец 210 215 220

Зо ТПг Ггув Сув біп біп Гуз с1у Тер С1у Авр Рпе Агд Авп Рпе Сіп Рго 225 230 235 240 бек б1у Агд Авр Уаії Іїе Маії Ппув с1у сіп б1у ТПкх Ропе Тіт бБег Авп

З5 245 250 255

Тук сіу ТПтІ Авр РпПе І1е Гей гув Іїе бі Авр Іїе ТПІ Авр 5ет Гувг 260 265 270 теп Акуд Авп о Авп Азп біу бек біу ТПх Уаї Уаї сбіп сі І1їе Гуз Уаї1ї 275 280 285

Рго гец І1ї1е Агд ТПхкх бі Ше 290 295 «2105 28 «2115 295 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Амінокислотна послідовність зрілого білка ТІС4260. «4005 28

Меє бБетг бБег Іїе Авр Уаі сіп сб1ц Акд Гей Агуд Авр їец Аза Агд с1ц 1 5 10 15

Авр біш Аїа сіу ТПт Рпе Азп Уаі Аїа Тгр Авп о ТПтІ Авп о РПе Гув Ркго 20 25 30 ет Авр біц біп сбіп Рпе бег Тут бБет Рго ТПтІ сіц сіу Рпе І1їе РПе 35 40 45

Пец ТПт Ркго Рго Гуз Авзп Уаії Ії1е СсС1у б1п Агд Агуд І1е бек Нів Туг 50 зо бо

Туз Маі Авп Ап Аїа Тгр Аза ТПх їГец Уа1! с1іу бБет Рго ТПкг сі Аїа 65 70 75 80 бек б1і1у ТПх Рго Ггеп Тут Аїа с1у Агуд Авп Уаії Гей Авр Авп бек Туз 85 Зо 95 сіу ТпПг Мес Авр сіп сіц Меє еп ТПтІ Рго бій Рібе бет Тут ТПтЕ Туг 100 105 110

Зо ТВІ Сіц сб1у Тбг бек Авп о ТБПг І1е ТБПг Нів сі1іу Пец Гуз Ма1! сС1у Уаї 115 120 125

А1їа бБет ТПт сіц Тут Авп Рпе сбіп Авп о бет бБетг ТПт Авр ТПтІ Гув ТПг 145 150 155 160 туз сіп Уаї бБет Тут Кпув бек Рго бек біп Гув Іїе Гуз Уаі1і Рго Аїа 165 170 175 сіу Ппув ТПІ Тут Акд Уаії ге Аїа Тук Гей Авп ТПт біу бБет Іїе 5Бег 180 185 190 с1у бі Аза Авп Гей Тут Азїа Авп Уаі1і с1у сіу Уаі Азїа Тгр Аг9д Уаї 195 200 205 бек Рго біу Тухк Рго Авп біу сбі1у с1і1у Маі Авп І1е с1у Аїа Уаї Гей 210 215 220

ТпПк гув Сув сбіп сбіп уз б1у Тгр б1у Авр Рпе Агд Авп Рпе сіп Рго

225 230 235 240 бек б1у Агд Авр Уа1 Іїе Уаї пув с1у сіп сіу ТПк Ропе ТПг бБег Авп 245 250 255

Рго гец І1ї1е Агд ТПхкх бі Ше 290 295 «2105 «29 «2115 295 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Амінокислотна послідовність зрілого білка ТІС4346. «4005 29

Зо Мес бек Бек ТПг Авр Уаі Сбіп бій Агд ГТей Агуд Авр Тей Аза Агд сій 1 5 10 15

Авп бі Аїа сіу ТПт Гец Авп бі Аза Тгр Авп о ТПг Авп Рпе Гув Ркго

З5 20 25 30 зек Авр бі біп біп Рбпе бек Тут бек Рго ТПтІ сі с1у І1е Уа1 РБПе 40

Те ТПт Рко Ркго Гуз Авп Уаі Іїе сб1у біц Акуд Акуд І1е бек біп Тук бо 45 туз Маі Авп Ап Аїа Тгр Аза ТПх Гей бі с1у бБет Рго ТПх сі Уаї 65 70 75 80 50 зек біу ТПж Рго Гей Туг Аїа сіу пув Авп Уаії Ггец Авр Авп бек Гув 85 Зо 95 сіу ТпПг Мес Авр сіп сіц Гец Гецп ТПтї Рго біц Рбе Авп Тут ТПт Туг 55 1600 195 110

ТЕ Сі бек Тіт бБег Авп ТПтІ І1їе ТПт Ніз СсС1у Гец Пуз Гц СсСіу Уаї

115 120 125

А1їа бБет ТПт сіц Тут Авп Рпе біп Авзп бек бет ТПтІ Авр ТПтІ Гув ТПг 145 150 155 160 туз сіп Уаї бБет Тут Кпув бек Рго бек біп Гув Іїе Гуз Уаі1і Рго Аїа 165 170 175 сіу пув ТПІ Рпе Агкд Уаі Ггец Аїа Тут Гей Авп ТПтІ біу бБет Іїе 5Бег 180 185 190 с1у бі Аза Авп Гей Тут Азїа Авп Уаї с1у сіу І1е Аїа Тгр о1Уу Уаї 195 200 205 теп Рко сіу Тут Рго Авп біу біу біу Уаі Авп І1їе с1у Аїа Уаї Гец 210 215 220

Зо бек б1у Агд Авр Уа1 Іїе Уаї пув с1у сіп сіу ТПкх Рпе с1іц бек Авп 245 250 255

З5

Тук сіу ТПтІ Авр РпПе І1е Гей гув Іїе бі Авр Іїе ТПІ Авр 5ет Гувг 260 265 270 теп Агд Авп о Авп Авп о сіу бек сіу ТПт Уаї Маї сіп сіц І1е пуз Уаї 275 280 285

Рго гец І1ї1е Агд ТПхкх бі Ше 290 295 «2105 30 «2115 295 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Амінокислотна послідовність зрілого білка ТІС4826. «4005 30

1 5 10 15

Авп бі Аїа сіу ТПт Гец Авп бі Аїа Тгтр Авп ТПг Авп Рпе Гув Ркго 20 25 30 зек Авр бі біп біп Рбпе бек Тут бек Рго ТПтІ сі с1у І1е Уа1 РБПе 35 40 45

Те ТПт Рко Ркго Гуз Авп Уаі Іїе бі1у бі1ц Акуд Акуд ч11е Бек сіп Тук 50 55 бо туз Маі Авп Ап Аїа Тгр Аза ТПх Гей бі с1у бБет Рго ТПх сі Уаї 65 70 75 80 зек біу ТПт Рго Гей Тут Аїа сіу пув Авп Уаії Гец Авр Авп бек Гув 85 Зо 95 сіу ТпПг Мес Авр сіп сіц Гец Гецп ТПтї Рго біц Рбе Авп Тут ТПт Туг 1600 195 110

ТЕ Сі бек ТПтг бБег Авп ТПт ТПт ТП Нів с1у Гц Гуз їєц СсС1у Уаї 115 120 125

Зо

З5

А1їа бБет ТПт сіц Тут Авп Рпе біп Авзп бек бет ТПтІ Авр ТПтІ Гув ТПг 145 150 155 160 пув сіп Уаї бБет Тут пув Бек Рго Бек біп Пув Іїе пув Уаі1ії Рго Аїа 165 170 175 сіу пув ТПІ Тут Агкд Уаі Ггец Аїа Тут Гей Авп ТПтІ біу бБет Іїе 5Бег 180 185 190 сіу бій Аза Авп о Гец Тут Аза Авзп Уаі сіу с1у І1е Аїа Тгр сС1Уу Уаї 195 200 205 теп Рко сіу Тут Рго Авп біу біу б1іу Іїе Авп Іїе с1у Аїа Уаї Гец 210 215 220

Рго гец І1ї1е Агд ТПхкх бі Ше 290 295 «2105 31 «2115 295 «2125 ПРТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Амінокислотна послідовність зрілого білка ТІС4861. «4005 31

Зо

Авп бі Аїа сіу ТПт Ге Авп обі Аза Тгтр Авп ТПг Авп Рпе Гув Ркго 20 25 30

З5 зек Авр бі біп біп Рбпе бек Тут бек Рго ТПтІ сі с1у І1е Уа1 РБПе 40 Тецп ТПг Ркго Рго Пув Авп Уаі Ії1е сС1у біц Агуд Агуд І1е бек Сіп Туг бо туз Маі Авп Ап Аїа Тгр Аза ТПх Гей бі с1у бБет Рго ТПх сі Уаї 45 65 70 75 80 бек б1і1у ТПх Рго Ггеп Тут Аїа с1і1у Гув Авп Уаії Гей Авр Авп бек Гуз 85 Зо 95 50 сіу ТПг бБег Авр сіп сіц Гец Гецп ТПтї Рго біц Рбе Авп Тут ТПт Туг 100 105 110 55

А1їа бБет ТПт сіц Тут Авп Рпе біп Авзп бек бет ТПтІ Авр ТПтІ Гув ТПг 145 150 155 160 пув сіп Уаї бБет Тут пув Бек Рго Бек біп Пув Іїе пув Уаі1ії Рго Аїа 165 170 175 сіу пув ТПІ Тут Агкд Уаі Ггец Аїа Тут Гей Авп ТПтІ біу бБет Іїе 5Бег 180 185 190 сі1у бій АТа Авп Гец Тут Аза А5п І1е сСі1іу сС1у Ілї1е Аїа Тгтр С1у 1У 195 200 205 теп Рко сіу Тут Рго Авп біу біу біу Уаі Авп І1їе с1у Аїа Уаї Гец 210 215 220

Зо зек б1у Агуд Авр Уаі І1ї1е Уаі пув сі1у біп с1у ТПжї РпПе Пув 5ег Авп 245 250 255

Рго гец І1ї1е Агд ТПхкх бі Ше 290 295 «2105 32 «2115 954 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча білок

ТІСЗ6б68. «4005 32 асдаачаадс Есодсдєссоосо дасссесасс адзсдсєдеЕєсс гдеЕеваднад сасдсадсес бо дЕссасудссо сасссасдда сдсдсаадад сдссідсддучУа асссддсдсу сдаадасчад чсдоадаасдс Есаасдаддс сСЕддаасасс аасессаадс содссодадасда дсадсаасес 180 адстасссдс сддасдодадчдч аасссдЕСЬсс ссосасдссдс сгіаадаасаядс сасєсддесдад 240 сддсдсаєсе сссадсасаа ддсдаасаає дссгдддсаа СЕСТДДЕдЯдД, сЕСсСтсссасес 300 чаддсчадсч дсасдссдсс деасдсдддс аадааєсєдтас гддасаасес даааддсаса

З6о асддассадч адессдсесас асссдадссс аастасассо асасддадад сасдадсаас 420 асдаєссасдс асддссісаа асссддсудєд аадассассд сдассаєсдаа дЕсССсСстаєс 480 чЧдсЕСааддсс сддасддаддс дадсассдад басаасеєссс адаассссьс сассдатсбасс 540 аачассааас аадеЕдсстевса саадессссу адссадаада стсааддеЕссс гсдсодддадсаад бо асдтассдсад гЕдссддсудса ссгдаасасс додсеЕСТтаьєсе ссддсдаддс Єаассьдсас бо

Зо чсдаасдесу дсоаддсассдс дЕддсдддаєс ссдссаддсс ассстаасояд саддсдадасЧатд 720 аасассддсд сідссстрдас саадсдссад садаадддеЕс додддсдасьс ссдсаасеєс

З5 780 садсссоссу додсодсдасдс сасєсдеєдаад ддЕСсадддса ссЕєсаадес саастасдадас 840 ассдасесса сссЕтстаадає єдаддасаєс ассдасадса адссссдсаа саасаасдадс 900

Ессдддасдд ЕСЧсасадда чассааддед ссасссарсс дсассдчадає єеда 354 «2105 33 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІСЗ3668. «4005 33 асдесаєсса сододасдсдса ададсдссвд сдддасеЕсдд содсдсдаада сддаддсдоддда бо асдеЕссаасу аддсеЕсддаа сассаасссс аадссдЕсдд асдадсадса аєссадстсас

Есдссдасудуд адддааєєдеЕ сеЕссстсасу ссдсстаада асчсєсаєсдд сдадсдасдс 180 ассеЕсссадсі асааддєдаа саасдсстодд дсаассстда ЕдддсЕссЕсСс сассддадасад 240 адсддбасдс сдссдсасдс дддсаадаає дсассддаса асссдааадд сасааєддвас 300 садчадсвєдс Есасасссда деЕсСсаастас асстасасддд ададсасдад саасасдчаєс

З6о асдсасддсс Есааасссдд сдсдаадасс ассдсдасса гдаадесссс вбассдсоссаа 420 часІсдаєсдд аддсдадсас сдадсасаасє єєссадаасо ссуссассда бассаадасс 480 аагсаадедеЕ сссасаадсс сссдаадссад аачдаєсаадд ЕсссЕдсдду саадасасас 540 саЯсдсдсеЕдЧЧ сабасстідаа сассуддсссть ассЕссддсд аддстаассоі деасдсддаас бо чЧЕСддсддса ЕСсЯдсадсЯддсоя ддЕсЕсдсса ддстаєссста асддсддсда сдедаасаєс

Зо бо часадсЕдЕССсС Едассаадсд ссадсадаад дадЕсдддоасд ассеЕссдсаа сеЕсссадссс 720

Ессдддсдсуд асдесаєсдІ даадддсєсад ддсасстсса адсссааста сддсассдас 780

Ессасєсстса адасеєдадда сассассдас адсаадсесс дсаасаасаа саддсіссд9ав9ад 840 асддеЕсдтрас аддадаєсаа ддеЕдссассс асссдсассу ачаєсеєвєда 888 «2105 34 «2115 954 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча білок

ТІСЗбб9. «4005 34 аєчаадааде ссдсдєсдсе дассстсаєс адсддеЕєсс гдЕссадіад сасдсадчеєсс бо дЕссасудссо сасссасуда сдсдсаадад сдссідсоддда ассвєддсдсд сдаадасчад чсдоадаасдс Есаасдаддс сСЕддаасасс аасессаадс содссодадасда дсадсаасес 180 адстасссдс сддасдодадчдч аасссдЕСстс сесасдессдс стаадаасадс саєсєсоаддвесдад 240 сддсдсаєсе сссадсасаа ддсдаасаає дссгдддсаа сЕСТдддаддд стістсссасс 300 чаддессадсч дсасдссдсс деасдсдддс аадааєсєдтас гддасаасес даааддсаса

З6о асадассадч адессдсесас асссчдадесс ссдхрасассо асасддадад сасдадсаас 420 асдасчдасдс асддссісаа адссддсдсєд аадассассд сдассаєсдаа дЕсССсСстаєс 480 чЧдсЕСааддсс сддасддаддс дадсассдад басаареєсєсс адаассссс сассдатсбасс 540 аачассааас аадеЕдсстевса саадессссу адссадаада стсааддеЕссс гсдсодддадсаад бо асдтассдсад гЕдссддсдва ссгдаасасс додсеЕСТтаьєсе ссддсдаддс Єаассьдсас бо

Зо чсдаасдесо дсоаддсассдс дЕддсддаєс ссдссаддсе ассстаасоадд сддсддадсаЕд 720 аасассддсд сідссстрдас саадсдссад садаадддеЕс додддсдасьс ссдсаасеєс

З5 780 садсссоіссу додсдсдасдс сасєсдеєдаад ддЕСсадддса сссссаадсс саастасдддс 840 ассдасесса сссЕтстаадає єдаддасаєс ассдасадса адссссдсаа саасаасдадс 900

Ессдддасдд ЕСЧсасадда чассааддед ссасссарсс дсассдчадає вда 354 «2105 35 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІСЗ3669. «4005 35 асдесаєсса сододасдєдса ададсдссод сдддасесдд содсдсдаада сддаддсдоддда бо асдеЕссаасу аддсеЕсддаа сассаасссс аадссдЕсдд асдадсадса аєссадстсас

Есдссдасудуд адддааєєдеЕ сеЕссстсасу ссдсстаада асчсєсаєсдд сдадсдасдс 180 ассеЕсссадс асааддєдаа саасдсстдд дсаассстдд адддсссеЕсс сассдадддЕс 240 адсддбасдс сдссдсасдс дддсаадаає дсассддаса асссдааадд сасааєадас 300 садчадсвєдс Есасасссда ЯчЕсСсСссдсрас асстасасудд ададсасдад саасасчасд

З6о асдсасддсс Есааадссдд сдсдаадасс ассдсдасса гдаадессссс вбассдсоссаа 420 часІсдаєсдд аддсдадсас сдадсасаасє єєссадаасо ссуссассда бассаадасс 480 аагсаадедеЕ сссасаадсс сссдадссад аадаєсаадд ЕсссЕдсдд саадасчасас 540 саЯсдсдсеЕдЧЧ сабасстідаа сассуддсссть ассЕссддсд аддстаассоі деасдсддаас бо чЧЕСддсддса ЕСсЯдсадсЯддсоя ддЕсссодсса додстаєсєсста асддсддсда сдсдаасаєс

Ессдддсдсуд асдесаєсдс даадддєсад ддсасстсса адсссааста сддсассдас 780

Ессасєсстса адчасеєдадда сассассдас адсаадсесс дсаасаасаа сддсЕссд9а4дад 840 асддеЕсдтрас аддадаєсаа ддеЕдссассс асссдсассу ачаєсеєвєда 888 «2105 36 «2115 954 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча білок

ТІСЗ670. «4005 36 аєчаадааде ссдсдєсдсе дассстсасс адсдрдеЕссс гдЕссаіад сасдсадчеєсс бо дЕссасудссо сасссасдда сдсдсаадад сдссідсдддчУа асссддсдсд сдаадасчад чсдоадаасдс Есаасдаддс сСЕддаасасс аасессаадс содссодадасда дсадсаасес 180 адстасссдс сддасдодадчдч аасссдЕСЬсс ссосасдссдс сгіаадаасаядс сасєсддесдад 240 сддсдсаєсе сссадсасаа ддсдаасаає дссгдддсаа сЕСТдддаддд стістсссасс 300 чаддсчадсч дсасдссдеЕс деасдсдддс аадааєсєдтас гддасаасес даааддсаса

З6о асддассадч адессдсесас асссдадссс аастасассо асасддадад сасдадсаас 420 асдасчдасдс асддссісаа асссддсудєд аадассассд сдассаєсдаа дЕсССсСстаєс 480 дсЕСааддсс сдаєсддаддс дадсассдад басаареєссс адаасссстс сассдасасс 540 аачассааас аадеЕдсстевса саадессссу адссадаада стсааддеЕссс гсдсодддадсаад бо асдтассдсад гЕдссддсудса ссгдаасасс додсеЕСТтаьєсе ссддсдаддс Єаассьдсас бо

Ессдддасдд ЕСсСЧсасадда дассааддеєд ссасссаєссс дсассчадає єеда 354 «2105 37 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІСЗ3670. «4005 37 асдесаєсса сододасдсдса ададсдссод сдддасеЕсдд содсдсдаача сдаддсовдада бо асдеЕссаасу аддсеЕсддаа сассаасссс аадссдЕсдд асдадсадса аєссадстсас

Есдссдасудуд адддааєєдеЕ сеЕссстсасу ссдсстаада асчсєсаєсдд сдадсдасдс 180 ассеЕсссадсі асааддєдаа саасдссодд дсаассстьдда адддсссеЕсс сассдадасд 240 адсддбасдс сдссдсасдс дддсаадаає дсассддаса асссдааадд сасааєддвас 300 садчадсвєдс Есасасссда деЕсСсаастас асстасасддд ададсасдад саасасдчасд

З6о асдсасддсс Есааасссдд сдсдаадасс ассдсдасса гдаадесссс вбассдсоссаа 420 часІсдаєсдд аддсдадсас сдадсасаасє єєссадаасо ссуссассда бассаадасс 480 аагсаадедеЕ сссасаадсс сссдаадссад аачдаєсаадд ЕсссЕдсдду саадасасас 540 саЯсдсдсеЕдЧЧ сабасстідаа сассуддсссть ассЕссддсд аддстаассоі деасдсддаас бо чЧЕСддсддса ЕСсЯсЯдсоЯддсЯяЯ ддЕсСссодсса доастаєсста асддсддсду садсдаасаєс

Ессасєсстса адчасеєдадда сассассдас адсаадсесс дсаасаасаа сддсЕссд9а4дад 840 асддеЕсдтрас аддадаєсаа ддеЕдссассс асссдсассу ачаєсеєвєда 888 «2105 38 «2115 954 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча білок

ТІС4076. «4005 38 аєдчаадааде ссдсдадеЕєс даєссстдаєс адусвдеЕссс ЩєсеЕсстсстс тасссадесс бо дсдсасоадсда дсадсассда сдсдсаадад сдссгсдсдад ассісдсасдд двдадаасддаа чдссддчдассо гааасчаддс сеЕддаасасе аасеЕссаадс ссіссдасда дсадсадсяс 180

Есстасадсс стаседчадудд бассдЕСЕсс сесдасодссос стаадаасс саєссодчсдад 240 сдссдсаєсса дссадсасаа ддсдаасаає дссгдддсса сдЕсддаадд аадссстасс 300 чачаєдсссу дсасдссдсс деасдссодддс аадаасдедс гадасаасес саааддсасд

З6о

Ессдассадчд адссдсссас сссададесс асеЕсасассо асассдадад басаєсааас 420 ассассассс асддсстідаа чЧсгдддсдєд аадассассод саассаєсдаа дЕссссдаєва 480 чдсссадддсс ссасддаддс дадсасадад сбасаасессс адаассссес дассдасасд 540 аачассаадс аадтаєсеєса саадесдссд ссасадаада ссааддессс гдсодддсаад бо асдеЕссаддад ЕССсддсудсба ссгдаасасс ддаєсаассо ссддсдаддс дааєсстьдсас бо

Зо

ЧдсЕааєдтадч дсддсассдс сЕЧдЧддЧдЕЯдед седссаддсс ассстаасодд єддаддсдаєва 720 аасассддад ссясдессдас даааєдссад садаадддсесс доадддсчаєєс садааасесе

З5 780 саассдадсч ддаддадчдасдс саєрєсдеЕдаад додссадддса сасєсасаєс саастасдав9ад 840 асачасеєсса сссЕдаадає сдаддасаєба ассдасадса аассдаддаа саасаасдада 900

Есдддсбасдд гадсасадда чассааадес ссдстідаєсс ддасоачадає стад 354 «2105 39 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІС4076. «4005 39 асдадсадса ссдасдєдса ададсдсствд сдддассссд сасдддадчаа сдаадссдаад бо ассеЕсааасу аддссгддаа сассаасьсс аадсссессд асдадсадса дЕссЕсстас адссстастуд адддртаєсдЕ сЕссесдасу ссісстаача асчссаєсда сдадсдссдас 180 ассадссадс асааддєдаа саасдссодд дссасдесдд ааддаадссс бассдачаєд 240

Ессддсасдс сдссдсасудс сддсаадаас дсдссадаса ассссааадд сасдеЕссдас 300 саддадседс єсасеЕссада деЕсСсСасесас асстасассуд ададсасаєс ааасассасс

З6о асссасддсс Едаадссдда сдсдаадасс аседсаасса гдаадеЕсеєсс дасадсссад 420 чддасІссаєсдда аддсдадсас ададсасаас єЕссадаасо ссІсдассда сасдаачасс 480 аадсаадтає сссасаадсс дссодссасад аадаєсаадд ЕСсстЕдсдд саадасчдеєс 540 адддЕсстду сдбасстідаа сассддаєса ассЕссддсд аддсдааєст деасдстаає бо чеЕаддеєддса ЕсоЯсстоддодд ЄдЕдсЕДдсса додстассста асддеЕддадда сдсааасаєс

Зо бо ччадссдЕдЕ Едасдаааєсд ссадсадаад додсгдддоасд ассеєсадааа сеЕсссаассд 720 адсодвдвчаддд асдесаєєдеІ даадддссад ддсасаєсса сасссааста сдодадасадас 780

Ессасєсстда адчасєсдадда сасаассдас адсааасрда ддаасааєсаа сдвдаєсдададвЧе 840 асддсадвас аддадаєсаа адеЕсссдстд асссодасчча ачаєсєствад 888 «2105 40 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча білок

ТІС4078. «4005 40 асдадсадса ссдасдєдса ададсдсствд сдддассссд сасдддадчаа сдаадссдаад бо ассеЕсааасу аддссгддаа сассаасьсс аадсссессд асдадсадса дЕссЕсстас адссстастд аддчрассдс сЕссстедасд ссЕССТаада асдесаєсдда Єдадсдссдас 180 ассадссадс асааддєдаа саасдссодд дссасдесдд ааддаадссс бассдачаєд 240

Ессддрасдс сдЕєдстасдс сддсаадаас деЕдстадаса асгссааадд сасдсссдас 300 саддадседс єсасеЕссада деЕсСсасесас асстасассуд ададсасаєс ааасассасс

З6о асссасддсс Едаадссдда сдсдаадасс аседсаасса гдаадеЕсеєсс дасадсссад 420 часеЕссаєду аддсдадсас ададсасаас ссссадаасо ссссдассда сасдаадасс 480 аадсаадтає сссасаадсс дссдссасад аадаєсаадд ЕСссЕдсдда саадасЧчесс 540 адддсєсстдд сдбтасстдаа сассддаєса аєсгссддсуд аддсдаассе дсасдстаає бо чеЕаддеєддса ЕсоЯсстоддодд ЄдЕдсЕДдсса додстассста асддеЕддадда сдсааасаєс бо

Зо ччадссдЕдЕ Едасдаааєсд ссадсадаад додсгдддоасд ассеєсадааа сеЕсссаассд 720 адсдоадвчаддадч асчссаєсдс даадддссад ддсасаєєсса саєсссааста сдвддасадас

З5 780

Ессасєсстда адчасєсдадда сасаассдас адсааасрда ддаасааєсаа сдвдаєсдададвЧе 840 асддсадстас аддадаєсаа адссссдсесвєд аєссддасдуа адаєсстад 888 «2105 141 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІС4078. «4005 41 асдадсссса ссдасдеєсса ддадсдссоіс содддасеєдда саадачадаа ЄдаддсдааддвЧеЕ бо асдсеісаасд ЕСсСодсстдддаа сассаасссс аадссдессд асдаасадса дЕссссстас 120 гсСЕССТасоод аадддессає сеЕссстрдаса ссдсссаада асдесаєсдда сдадсддасдс аєсадссаєє асааддесаа сааєдсуєда дстасдссду адддсадссс дассдаччаєд 240 адсддсассс сассстасудс сдодададааас дсЕссссдаса ассссааддда сассаєсдас 300 садчачаєдеЕ єдасдссода чЧчеЕссаастас асдрасассд адддсассес гаасассасс

З6о асеЕсаєддсесс ЕСаадсссда сдсдаадаса аседсдасаа єдаадесесс саєссдсссаа 420 часадсаєд аддссісдас ддадсасаас ссссадааса дсадсассда сассаадасс 480 аачдсаадсдеЕ сстасаадад єссаєсасад аадаєсааад Ссссоддссодд саадасаєсс 540 счадсдсвдуд сдбасстааа сассдддадусд ассеЕсдддсд аддссаассе Егасдссаає бо чЧчЕдддсддсЯ ЕСЯдсасдоддоа сдсдсЕдссс додстасссда асддаддсда сдсдаасаєс бо часадсЕдЕдсС єсассаадсд ссаасадаад двчаєдоаддасд асссссдсаа сеЕсссаассс

Зо 720

Ессддсаддадч асчссасадс даадддссад ддсасЧдеЕєса сасєстааста сдоаддасдоодас 780

ЕЕєСасассса адаєсдадда сассасадає адсаадссса ддаасаасаа сдддіссоддс 840 ассдсдеЕсс аддадаєсаа ддЕСССЯєЄтд ассаддасаа ачаєсевєда 888 «2105 42 «2115 954 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча білок

ТІСЯ4260. «4005 42 асдаачаадес Есдсстсасе дасрссьрасс ссудеЕсеЕсс г9ФЕЕСссСЕС сасесадесес бо дЕдсасдсса дсеЕссагада сдсссаддад сддсісадад асеЕсоддсдсоа ддаддчасвад 120 дссддсассе Есаасдсддс сеЕддаасас аасеЕссаадс ссЕссадасда дсадсадсяс

Есстасадсс стаседчаддд сеЕссаєсьсеЕ седассссдс сааачааєді дассддсдаа 240 аддсодчаєса дссассасаа адсдаасаас дсЕєдддсса содсЕсдсддад сеЕСасссасд 300 чаадсдеЕсад ддасдссеЕст стасдссддІі аддаасєдс гдчдаєсаассс саадддадсас

З6о асддассадчдч ачасдсєдас дсссдадссс адстасассс асасададдд сасдеЕссаас 420 асдаєссасас асдддсссаа чддгдоддЕдссС аадассассдд стассаєсдаа деЕссссдаєс 480 чЧдсЕСадддсс ссасддаадс дадсасадад басаасеЕєсс адаасссес дасддасасд 540 аадассаадс аадсеЕсссста саададссст адссадаачдза ссааддесссс єдсдддасаад бо асчтассдсд ЄЕСЕДДдсста ЕєСгсдаасасс ддсіссасаа дсоддсдаддс даасстдтас бо

ЧдсЕаасдчеЕдч дЕдодсдссдс сЕДЯдсодсЧЯєсС адЕССЯддЕ Є асссдаасоа саддсоавасЧатд 720

Зо аасассддсд ссЯасбдессаас саадсдссад садаадддсс доадддсдасес садааваассес 780 садссесссу дссодддасдс сасєсдеєдаад ддссадддса ссЕєсассес ааасвасда4дад

З5 840 асачассеєса Ессстраадає сдаддасаєс ассдасадса адсеЕссдааа саасаасддас 900

Ессддсассд ссдеЕдсаада дасстааддес ссудсесаєста ддасддачає стаа 354 «2105 43 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІС4260. «4005 43 асдадсссса гадасдссса ддадсддссс адддасеЕсдда сосддададда сдзаддссдадс бо ассЕссаасо Еддсстддаа сасчаасьсе аадсссесад асдадсадса дЕссЕсСстас 120 адссстастд адддсеєссаєс сЕсссьдасе ссдссааадча асдедаєссда сдаааддсдад аєсадесасе асааадєсдаа саасдсесдуа дссасдсссу бдддсесасс сасдвдаадсд 240

Есадддасдс сіссстасудс сддсаддаас дЕдссддаса ассссаадда басдаєддввас 300 садчачаєдс Едасдсссда деЕсСсадстстас асеЕсасасад адддсасдес саасасдчаєс

З6о асасаєбдддс єСсааддсдда сдЕсЕсаадасс ассдстасса гдаадессссс даєссдсосад 420 часеЕссаєдуд аадсдадсас ададсасаас СЄсЕСсСадаасоі сеЕссдасдда сасдаадасс 480 аадсаадеЕсєє сстасаадад ссстадссад аачаєсаадд сссстдсддаа саачасччтас 540 сЯсдсЕсСвдуа сстаєстсдаа сассддсссс асаадсддсд аддсдаассе деасдстаає бо чЧчЕдЧдЧЯдєдЯдсЯ ЕСЯСЕсЯддсЯ сдссадсссд ддЕсасссдда асддсддсда сдедаасаєс бо часдссЧдгдасє гаастаадсд ссадсадаад дасеЕддддадсд ассєсадааа ЄЕЕсссадссь

Зо 720

Ессддссодда асчссассудс даадддссад ддсассесса ссісаааста сдвддасадас 780

Еєтассстса адаєсдадда сассассдас адсаадсссс дааасаасаа содадссссдадс 840 ассдесдеЕдс аачадчаєсаа ддЕСССсСдссС ассаддасача адчаєсстваа 888 «2105 44 «2115 954 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча білок

ТІСЯ346. «4005 44 асдаачааде ЕсодсдадеЕссльтчасссьдаєс адзЕдедеЕрсс цєссеЕссссвсС гасссадеес бо дЕдсасдсдЕ ссеЕссассда сдсдсаадад аддсеєдаддч асеЕсддсссд ададаасчад 120 чдссдддассс гдаасдаддс деЕддаасас аарсссаадс сеЕсссддаєда дсаасадсес

Есстасадсс стассдаадуч чдассдеЕдсес сесасдесос ссаадаасас дассддсдвад 240 садассдсаєсс содсадсасаа ддсдаасаас дссгдддсда содсеЕсдаддд сеЕсасссасс 300 чаддЕсеЕсдд дсасуссдс дгіасдссддс аадаасдссс сЕдасаасіс саадддаасс

З6о асддаєсаач адссассдас дссоодадссс аастасасудс асассдадад сассадсаас 420 асдаєссасас асддсссісаа дстаддсудєд аадасчассд сдасаасдаа деЕссссдаєс 480 чсасадддсс сддасддаддс садсасддад басаасессс адаасссдеЕс сассдасасд 540 аадассаадс аадсдссаса саадссьссс ссасадаача гаааддсдсс ддадассддсаад бо асчаєссдсд сссЕДДдссСтТа стсааасасу ддеЕсссаєта дсддєдаддс саассестає бо чсдааєдеЕда дсоадаассдс дЕЧддддсадЕс сідсссддає асссдаасддд сддсддасдЕс 720

Зо аасассддсд ссяасдессдас даааєдссад садаадддсс доадддсчавєвс ссдаєаасьс 780 садссдсссу дссодсдасдс дасадедаад ддасаддчдаа сдсєсдадес ааастасдадас

З5 840 асачассєса ЕСсСссааадчає сдаачдчасасба асадасесда адсеєдсдсаа саасаасддас 900

Есаддсасдд ЄсдЯдЕсСсСадда дастааддед ссусссаєссс ддасадачає стад 354 «2105 45 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІС4346. «4005 45 асдеЕссссса ссдасдєдса адачаддссд аддчдасесдд сссдададаа сдаддссд9а4дд бо асссідаасуч аддсдсддаа сасчаарссс аадссоссда асдадсааса дЕсСсЕСсСстас 120 адссстассу аачдчассдеЕ деЕссСсЕСсСасдд ссЕССсСсаада асдедаєссда сдадсдссдас аєсссдсадсі асааддеєдаа саасдсстдудд дсдасдсосу адддсесасс сассддадччіс 240

Есдддсассіс содссдсасудс сддсаадаас дЕссссдаса ассссаадда аассаєддває 300 саачадстає єдасдссдудда деЕссаассас асдрасассд ададсассад саасасдчаєс

З6о асасасддсс Есаадссадд сдсдаадасд асеєдсдасаа єдаадессссс дассдсасад 420 часЕСЧаєдд аддссадсас ддадсасаас ссссадаасо сдсссассда сасдаадасе 480 аадсаадсдеЕ сагасаадес єсссеЕСасад аадаєсааадд єдссддассодуд саадасаєєєс 540 сЯсдссстду сстасссааа сасдддеЕссс асвгадсдаєд аддссаасс стаєсдсдаає бо чЧчЕдддсоддаа ЕсЯсЧЯЇсЯддоад сдЕссвЕдссс ддасрасссда асддсддсда сдссаасаєс бо часдссдгдЕ Едасдаааєд сСсадсадаад доасгЕдддоадасд ассеЕссдваа сЕсссадссод

Зо 720

Ессддссодсу асчсдасадс даадддасад двдаасдессд адссаааста сддсасадас 780

ЕЕєСаєстєсаа адаєсдаада сасаасадас ссдаадссдс дсаасаасаа сддстІсадддс 840 асддасєсдеЕсс аддадаєссаа ддЕдссЕССсС асссодасадд ачасствад 888 «2105 46 «2115 954 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча білок

ТІС4826. «4005 46 асдаачааде ЕсодсдадеЕссльтчасссьдаєс адзЕдедеЕрсс цєссеЕссссвсС гасссадеес бо дЕдсасдсда дсеЕсдасдда сдсссаддаа сддсеЕссдвдуа ассусдсдсд садаасчад 120 чдссддчасдс гдаасдаддс сеЕддаасасс аасессааас сддадсдасда дсадсадсяс адстассссс ссасддаддда сасадеЕсьсс ссосасдссос ссаадаасас дассддсдвад 240 аддсдсаєсе сссадсасаа ддсдаасаас дсстдддсда ссеЕгддаддадд сЕССсссасд 300 чадчдєдеЕссуд дсасуіссдсо стасдссддс аадаасдссо гадасаасад саааддчасс

З6о асдчдаєсадчдч адссассдас дссоодадессс ааєтасасудсє асассдааад басаадсаає 420 асдассассс асддсстідаа дсесддсдєд аадассасад саасаасдаа дЕЄсСссаєсєе 480 чдсссааддд счдасддаддс сеЕСдассдад басаасеєссс адаасссстіс аасадасасуі 540 аадассааас аддсдссдса саачдадссст адссадаада ссааадсссс ддассддсаад бо асстасаддд ЄдсЕддсдеа ссусаасасс ддсеЕстаєсі сдддсдаддс даассестас бо чсдаасчдеда дсоаддаєссодс аєддодаЧчдеЕдесд стассрддес асссдаасдда аддсддсасє:с 720

Зо аасассддса соддсдссдас ааадсдссад садаадддеЕс додвддсдасьс єЕсдсаасес 780 садссдадсо ддачадасдс сассдеєдаад ддссадддса сссєсаадад саасвсасдддас

З5 840 асдчассеєса Ессссаачає сдаачасаєс ассдасадса адсеєдсдааа Єаасаасда4дад 900

Есдддсассд ссдЕССсСадда чассааадьд ссдсесаєссс ддассдачає стад 354 «2105 47 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІС4826. «4005 47 асдадсссда соддасдссса ддаасддсЕс сдддассосд содсдсдадаа сддаддсс9а4дд бо асдеЕсдаасу аддссоіддаа сассаасссс ааассдадсд асдадсадса деЕссадстсас 120 гЕсСЕССсССсСасоод адддсасадс сеЕсссьсасдд ссЕСсСсаада асдедаєссдда сдададдсдс аєсссссадеі асааддеєдаа саасдсстдудд дсдасстсду адддсеЕсссс сасодчачаєд 240

Ессддсассіс содссстасудс сддсаадаас дгЕсЕсадаса асадсааадд дассаєддває 300 садчдадстає єдасдссдудда чЧчеЕсСсаарсас асдрасассд ааадтасаад Єаасасдасс

З6о асеЕсаєддсс Едаадсссодда сдсдаадасе асадсаасаа єдаадесвєсс саєсдосссаа 420 чадЕСЧчаєда аддссісдас сдадсасаає ссссадаасо ссссаасада сассаадасс 480 ааасаддсдеЕ сдрасаадад ссстадссад аадаєсааад ссссддассдуа саадчасстас 540 ачддєдстда сдабассісаа сассуддсость ассЕсдддсд аддсдаассо стасдсддаас бо чЧчЕдддсоддда Есодсасдодда ЄдЕдсвассе ддЕсасссдда асддаддсдуУа сассаасаєс бо часдсоддЕдсС Едасааадсд ссадсадаад чавдЕсдддоасд асЕвЕсдсаа сЕсссадссод

Зо 720 адсддчадач асчссассдс даадддссад ддсассесса ададсааєта сддсасдадас 780

ЕЕєСаєсстса адаєсдаада сассассдас адсаадссдс дааасаасаа сддадІсавддас 840 ассдісдЕсс аддадаєсаа адедссдссс асссододассу адчасствад 888 «2105 148 «2115 921 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча білок

ТІСЯ861. «4005 48 асгдеЕссстдЕуЮ єсЕСсСдадсас ссадесеЕсдєд сасдсдеЕсст ссасодоадчаєдесі дсаададсдад бо сЕССЯДсдасс гадсссдсда даасдаддссї ддсасассда асчаддсєд даасасдаас 120

Ессаадссда дсдасдадса дсадееЕсьсс стасесдссда ссдадддсаєс; сдассеЕєссвд асдссіссса адаасдсаас сддсдадсдд аддаєсадсс адсасаадді даасаасдсд 240 гдддсаасдс ЕСЧчаддадсад сссаассддад дсЕсЕсСсддса содссдссста сдадсдддааад 300 аасдссстдд асааєсєсссаа дддсассадс дассаддадс гдсеЕсасдсесс ддадеЕссаає

З6о тасасссаса сачадссдас сеЕсдаасасд асаасасасд дссЕБгаадсе ддаддсдЕсСаад 420 асаасддсда счаєдаадес ссссарсдсс садддсєєсдчда гддаадсеЕс єасдодадсас 480 аасЕсссада асссдадсас адасасааад асдаадсаад ЕДдЕссстасаа дадссстадс 540 садаачаєсаа аддссссодс сддсаадаса басадддеЕсс гадсдсбассо саасассддс бо

Есдаєсєсеєсад дададдссаа ссудсасодсс аасаєсєсддсу дчаєссоассто дддеЕддссіс бо ссдддссасс стаасддсда сддаєдЕдаас ассддсдсессд ЕССсСЕЯДасдаа аєдссадсад 720

Зо ааагддчесддвч дсчасьсссо ааассеєссад ссдадсдддс дсдасдєвтає сдеЕсаадддвде 780 садддсасес єсаадсссаа Свгасддаасс даєєссаєєс єдчаачаєсдда ддавасаєсасс

З5 840 чаєадсаадс ЕСссддаасаа саасддсадс дадвасадеЕсд ЕССадддадає сааддеЕсссь 900 сєдасасдаа сачзачаєсєсдч а 321 «2105 149 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІС4861, зрілий білок ТІС4862 та зрілий білок ТІС4863. «4005 149 асдеЕссссса содочаєдсдса ададсддссс содсдасстад сссдсдадаа сддаддсоддас бо асассдаасуд аддсдсддаа сасчаасссс аадссдадсд асдадсадса дЕссссстас 120

Есдссдассд адддсассдс сеЕсссьдасдд ссЕССсССсаада асдеєаассдда сдадсддвадд аєсадесадеі асааддеєдаа сааєдсудєда дсаасдсосу адддсадссс аассддадччіс 240

Ессддсасдс содссстасудс дддааадаас діЕсстддаса ассссаадда сассадсдас 300 саддадсеЕдс Есасдссоуда дчЕсСсаарсас асстасасад адссдассес даасасддаса

З6о асасасддсс Есаадссдда сдеЕсаадаса асддсчдасча гдаадесвєсс саєсдсссад 420 дчаЕЕєСЯЧаєда аадсеЕссстас ддадсасаас ссЕСсСадаасоі сдадсасада сасааадасд 480 аадсаадсдеЕ сстасаадад ссстадссад аадасааадд сссстдссдуа саадасатас 540 адчдддеЕсстад сдбассісаа сассддсосд ассесаддад аддссаассо деасдссаас бо ассддсддда ЕсЯсстдддд бдодссЕссса додстассста асддсддсдаа Єдсдаасаєс бо часадсЕдЕССсС Едасдаааєд ссадсадааа доадеЕддддасд асссссдааа сЕсСссадссд

Зо 720 адсддадсдс асчстаєсєсудс саадддесад ддсассеєєса адсстааєвта сдвдаассдасє 780

ЕЕєСаєєстда адаєсдадда саєстассдає адсаадсссс ддаасаасаа сддсадсаде 840 асддаєсдеЕсСс аддадаєсаа ддЕССсСсСЕСТд асасдаасадд ачаєсєвєда 888 «2105 50 «2115 948 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча білок

ТІС4682. «4005 50 асдеЕссСсудсує сдсссаєєссть дасссссуєд ЄєсЕСЕСЕсСЕ сдасєсдассса дЕсСЯдЕДдсас бо дсЯдсссЕсСса сдддаєсдесдса ададсддсіс содсдасссад сссодсдадаа сддаддстіддс 120 асассдаасуд аддсдсддаа сасчаасссс аадссдадсд асдадсадса дЕссЕсстас

Есдссдассд адддсассдс сеЕсссьдасдд ссЕССсССсаада асдеєаассдда сдадсддвадд 240 асвєадессадеі асааддєдаа саасдсдєда дсаасоядсесд адддеадссс аассдаддіс 300

Ессддсасдс сдсЕСТтасдс додадааадаас дЕССтддаса арсссааддда сассадсдас

З6о саддадсеЕдс Есасдссоуда дчЕсСсаарсас асстасасад адссдассес даасасддаса 420 асасасддсс Есаадссдда сдеЕсаадаса асддсчдасча гдаадесвєсс саєсдсссад 480 дчаЕЕєСЯЧаєда аадсеЕссстас ддадсасаас ссЕСсСадаасоі сдадсасада сасааадасд 540 аадсаадедЕ ссграсаадад ссстадссад аадасааадд Ессстрдссда саадасасас бо адддЕсеЕстад сдртассесаа сассддсесуд аєсссаддад аддссаасст дсасдссаас бо ассддсддда ЕсЯсстодддд бдодссЕсссда ддстассста асддсддсд єЄдсдаасаєс 720

Зо часЯдсЕдЕССсС Едасдаааєуд ссадсадааа доддеЕдддоасд ассЕссдааа сеЕсссадссд 780 адсддадсдс асчстаєсєсудс саадддесад ддсассеєєса адсстааєвта сдвдаассдасє

З5 840

Ессассєсьда адчасєсдадда саєсассдає адсаадсесс ддаасаасаа сддсадсо9ддиі 900 асчдЕєдссс аддадаєсаа ддссссЕсСвд аєсасдаасадд адаєсєвєда 348 «2105 51 «2115 954 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична полінуклеотидна послідовність, кодуюча білок

ТІСЯ863. «4005 51 асдаачаадес ЕсодсдадеЕеЕссвасссьтдаєс адзЕдедесс пуссеЕссссвсС васссадеес бо чЕдсасдсде ссіссасуда сдсдсаадад сддсіссдсд ассвадсссу сдадаасдчад 120

ЧдсЕддсасас гдаасдаддс деЕддаасас аасессаадс сддадсдасда дсадсадсяс

Есстасесдс сдастдаддуд сассдЕсьеєс стдасудсесоіс ссаачаасчє аассодсдвад 240 сададччаєса дссадсасаа ддсдаасаає дсдедддсаа сдсЕсдаддд бадсссаасс 300 чаддессссу дсасдссусс стасдсддда аадаасдесс гддасааєес саадддсасс

З6о адсдассадчд адссдсессас дссоодадеЕсЕ ааєтасассо асасададеЕс дассеєсдаає 420 асдасаасас асддссесаа дсеЕдддсдсЕ аадасаасдд счасчаєдаа дЕЄсСссаєсєе 480 дсссадддєє сддаєддаадс Есстасуддад гасаасессс адаасесдад сасадасаса 540 аадасчаадс аадсдсссса саададссст адссадаада гаааддесссс гєдссддсаад бо асасасаддд ЕСЕвадсдвна ссісаасасс додсесдчаєсі саддачаддс саассьдсас бо дссаасаєсу дсоаддассдс сЕддддЕддс сЕсссодддсе ассстаасоадд саддсдаддсдЕд

Зо 720 аасассддсд сідссстрдас даааєдссад садаааддді доадддсдасьс ссдааасеєс 780 садссдадсд ддсдсдасдс бассдісаад ддісадддса сЕсссаадес сааєссасода 840 ассчаєсеєса єсссдаадчає сдаддасасєе ассдасадса адсеЕссддаа саасаасддас 900 адсдадбрасдд ЕсЯЧсссадда чассааддес ссЕСТсдЧаврас даасачадає вда 354 «2105 «52 «2115 36 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність, представляюча синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (-)-ланцюгом ДНК, кодуючим білок, описаний у даній заявці та відповідаючим положенням від 1 до 36 5БЕО І МО:1 (прямий праймер ТІСЗ3668). «4005 щД 52 асдааавлаає ЕсосаадзсеЕє аасстваса адедвід

Зб

«2105 53 «2115 34 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність, представляюча синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (н)-ланцюгом ДНК, кодуючим білок, описаний у даній заявці та відповідаючим положенням від 920 до 954 5ЕО ІВ МО:1 (зворотний праймер ТІСЗ3668). «4005 05053 ссасасссса деЕєссааєса дсддаасеве ааєс 34 «2105 54 «2115 41 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність, представляюча синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (-)-ланцюгом ДНК, кодуючим білок, описаний у даній заявці та відповідаючим положенням від 1 до 41 5ЕО І МО:3 (прямий праймер ТІСЗ3669). «4005 54 асдаааавааає єЕсосаадзсеЕє ааєссеваса адчедеЕдеЕссс с 41 «2105 -Я55 «2115 34 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність, представляюча синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (н)-ланцюгом ДНК, кодуючим білок, описаний у даній заявці та відповідаючим положенням від 920 до 954 5ЕО ІЮ МО:3 (зворотний праймер ТІС3669).

«4005. Н.Б-.55 ставгаєсеєса дЯдеЕсстЕааєта деЕддаасеюсе ааєс 34

«2105 56 «2115 36 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

«2205 «223» Нуклеотидна послідовність, представляюча синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (-)-ланцюгом ДНК, кодуючим білок, описаний у даній заявці та відповідаючим положенням від 1 до 41 5ЕО І МО:5 (прямий праймер ТІСЗ3670). «4005 56 аєдааааває ссдсаачесаасссттаса ачЧчсаєд 36 «2105 57 «2115 34 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність, представляюча синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (н)-ланцюгом ДНК, кодуючим білок, описаний у даній заявці та відповідаючим положенням від 920 до 954 5ЕО ІВ МО:5 (зворотний праймер ТІС3670). «4005 657 ставгаєсеєса дЯдеЕсстЕааєта деЕддаасеюсе ааєс 34 «2105 58 «2115 41 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність, представляюча синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (-)-ланцюгом ДНК, кодуючим білок, описаний у даній заявці та відповідаючим положенням від 1 до 41 5ЕО І МО:7 (прямий праймер ТІС4076).

«4005 58 асдаааавааає єЕсосаадзсеЕє ааєссеваса адчедеЕдеЕссс с 41

«2105 159 «2115 34 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

«2205 «223» Нуклеотидна послідовність, представляюча синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (н)-ланцюгом ДНК, кодуючим білок, описаний у даній заявці та відповідаючим положенням від 920 до 954 5БО І МО:7 (зворотний праймер ТІС4076). «4005 59 ставгаєсеєса дЯдеЕсстЕааєта деЕддаасеюсе ааєс 34

«2105 60 «2115 36

«2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність, представляюча синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (-)-ланцюгом ДНК, кодуючим білок, описаний у даній заявці та відповідаючим положенням від 1 до 36 5ЕО І МО:9 (прямий праймер ТІС4078). «4005 60 асдааавлаає ЕсосаадзсеЕє аасстваса адедвід

Зб «2105 6561 «2115 34 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Нуклеотидна послідовність, представляюча синтетичний олігонуклеотид для гібридизації з (н)-ланцюгом ДНК, кодуючим білок, описаний у даній заявці та відповідаючим положенням від 920 до 954 5ЕО ІВ МО:9 (зворотний праймер ТІС4078). «4005 61 ставгаєсеса деЕсстЕааєса дчеЕддаасесе ааєс 34

Зо «2105 62 «2115 954 «2125 ДНК «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогивз

З5 «4005 62 асдаааааас єсосаадчесс аасссеЕсасба аазЕдесЧеєєсс тЕссеЕеЕссдад басдсаастсе бо дЕєСаєдсудЕ саєссавада єдеЕссаадаа адаєтасдддд асесддсаад адааааєсдаа 120

ЕсСЕваєсадес саасеЕдаадд сассдеЕссєс ссаасассас стаааааєдесі єассоддсдаа 240 ачаачааєсс сасадсасаа адсааасаає дсаєдддсса сасвсадаадд аадсссаасс 300 чаачдсаєсєсдд ддасассссс авгасдсддда аааааадсдтає гадаєаасес ааааддааса

З6о адсчаєсаад адсеЕдеєваас асссдадеЕєс аастаєасст агасддааад сасесссааає 420 асаасаассс асддаєссааа агсаддадесс аааассассд стассаєсєдаа аєссссдчасе

ЧдсЕСадддсра дсасддаадс СЕСТаседаа саєаасеЕєсс аадчаєєсствс сасеєдаєсась 540 асаассаааа садсассаса сбааавладссса ссасаааада гсааадсасс адсаддсааа бо ассстадад ЄсеЕсадсата сстааастасі ддаєстаєєс саддєдаадс саассеєтас бо чсааасєдеЕсЧ доададеасадс сЕЧ9дЯддддадеЕє ссассаддес ассссааєда соадчаддадса 720 аавгасаддеєд срдсасессас саааєдссаа сааааадчає двоадвддчдачаєєс садааваасесе 780 саасстадсд даачачаєде аасрсдеЕсааа ддссааддса сЕсесаааєс єааєсєтаєддва 840 асдчассеєса Есссааааає сдаадчасаєс асадасєсаа адсвбасдааа саасаасда4дад 900 адеЕддаасстд ссдЕсСсСаада дасстааадеьс ссастааєста даастсдааає агад 354 «2105 63

Зо «2115 317 «2125 ПРТ «213» Вгеуірасі1ї1ц5 Іагеговрогиз «4005 63

З5

Меє пув Гпув Рпе Аїа бБет Ггец І1е Гей І1їе бБет Уаі1ї Рпе їец РПе 5ег 1 5 19 15 бек ТПк Сіп Рбе Уаї Нів Аїа бехт бБег І1їе Авр Уа1ії сСіп сій Агд Гец 20 25 30

Авп оТПтІ Авп о Рпе Гпув Рко бБет Авр бій біп біп Рпе бет Тут бБет Ркго зо бо 50

Ат Атуд чІ1е бБет сіп Тут пув Уаі Авп Авп Аза Тгр Аза ТПтІ Іеєц Сс1ц 85 90 35 сіу бек Рго ТПт сіц Маії бек сіу ТПї Рго Гей Тут Аїа с1у Гув Авп 100 105 110 уаї гейш Авр Авп бБет пув сіу ТПтї бБегт Авр біп біц їец Тїец ТПтг Ркго 115 120 125 сі Рбе Авп Тук ТПт Тугк ТПг Сі бек ТПтг бег Авп ТПг ТПг ТБбг Нів 130 135 140 с1у гейш Гув Гец с1у Маії Гпув ТПтї ТПтІ Аза ТПтх Меєсє Гуз Ріе Рго Іїє 145 150 155 160

А1їа біп с1у Бек Меє сіц Аза бет ТПї бі Тут Авп Рпе сбіп Авр 5ег 165 170 175 бек ТПхї Авр ТПх ТПх ТПг Гув ТПт Уаї бБет Тук пув бек Рго бБет біп 180 185 190

Зо Авп ОТП со1у бБег Іїе бек сіу бій Аза Авп Гей Тут Азїа Авп Уаі ШУ 210 215 220 с1у Іїе Аїа Ттр с1у Маії Гец Рко сіу Тут Рго Авп біу біу с1у Уаї 225 230 235 240

Авп о Іїе с1у Аїа Уаії еп ТПтї ув Сув біп біп ув б1у Ткгр с1у Авр 245 250 255

Рпе Агд Авп Рпе біп Рго бегхт Сб1у Агд Авр Уаі І1е Уа1 Гуз сС1у сбіп 260 265 270 сіу ТПг Рпе Ппув бБет Авп Тут сіу ТПІ Авр Рпе Іїе Гецп Гув Ії1е с1ц 275 280 285

Авр Іїе ТПг Авр бБет пув Гей Агуд Авп о Авп Авп біу бБег с1у ТПт Уаї 290 295 300 уаї б1п сбі1ц Іїе Гпув УМаі Рко Ге І1е Агуду ТПтІ с1ц І1е 305 310 315 «2105 564

«2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична нуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІС3668. «4005 64 аєдссаєсса садаєсдеєса адааадаєса сдддасссду саадачаача сдаадстддва бо ассЕссааєсд аадсасддаа бассаасссс ааасссадсд асдаасааса ассссесатає 120 адеЕссаастд ааччаассдЕ єеЕссесвааса ссасстаааа асдеЕсаєвду сдааадаачда 180 ареєєсасадеі асааадсааа баасдсаєсдда дсвасаєсад саддаадеЕсс аассдаадса 240

Есддддасас сЕссасаєсєдс дддаааааас дсаєсадаса асссаааадчч аасааєсддваєс 300 саададстдеЕ саасасссда дчЕссаастає асстасасудд ааадсасссс ааасасаатса

З6о асеЕсаєддає гаааассаддда адссаааасс аседссасса Єдааассссс дассдсссад 420

Зо

Чдабадсаєду аадсеЕссстас єдаасаєаас ЄсСЕСсСаааасс сесссасеєда сассаааась 480 аагсаадтає сасаєаааад сссассасаа аааассааад бассадсадч сСаааасстає

З5 540 ачадеЕсєстад сасасстааа сассддаєсе асеєєсадаєд аадссаассо ссасдасааає бо

ЧЕєЧддддЧата гадсеЕсддад ддЕсссасса ддстаєсссса асддсоададоа адчсааатсаєса бо чЧаєдсЕдвас еєсассаааєд ссаасааааа ддаєддддад ассєсадааа сЕсссаассь 720 адеЕддаадчач асдсаассдс баааддссаа ддеассеєсса аасстааєста єдддаасоодас 780

Ессарсєсвсаа ааасеєдаада сассасадає ссааадеЕсас дааасаасаа соаододачсддва 840 асЕдссдеєсєс аадчадаєсаа адеЕсссаста ассадаасьд ааасаєад 888 «2105 65 «2115 888 «2125 ДНК

«213» Штучна послідовність «223» Синтетична нуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІСЗ3669. «4005 65 асдесаєсса сачаєдессса адааачаєса сдддасесдд саадачаача єЄдаадссддвда бо ассЕссааєсд аадсасддаа бассаасссс ааасссадсд асдаасааса ассссесатає 120 адеЕссаастд ааччаассдЕ єеЕссесвааса ссасстаааа асдеЕсаєвду сдааадаачда 180 ареєєсасадеі асааадсааа баасдсаєсдда дсвасаєсад ааддаадеЕсс аассдаачдта 240

Есддддасас сеЕєсасаєдс дддаааааас чіаєссадаса асссааааддч аасааєссдває 300 саададседеЕ гаасасссда дядЕссадеЕсає асстасасудд ааадсасеЕсс ааасасааса

З6о асеЕсаєддає гаааадсаддд адссаааасс аседссасса Єдааассссс дассдсссад 420

Чдабадсаєду аадсеЕссстас єдаасаєаас ЄсСЕСсСаааасс сесссасеєда сассаааась

Зо 480 аагсаадтає сасаєаааад сссассасаа аааассааад бассадсадч сСаааасстає 540 ададеЕеЕєстад сагасстааа бастддчаєст ассссадчєд аадссаассо ссасосааає бо

ЧдЕєЧдЯдддодЧдвса гадсеЕсоодад ддЕсссасса ддЕсаєсссса асддсоодадч адсааасата бо чЧаєдсЕдвас еєсассаааєд ссаасааааа ддаєддддад ассєсадааа сЕсссаассь 720 адеЕддаадчач асдсаассдс баааддссаа ддеассеєсса аасстааєста єдддаасоодас 780

Ессарсєсвсаа ааасеєдаада сассасадає ссааадеЕсас дааасаасаа соаододачсддва 840 асЕдссдеЕєс аададчаєсаа адеЕсссаста аєстадаастд ааастасад 888 «2105 566 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

«223» Синтетична нуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІС3670. «4005 66 асдесаєсса сачаєдессса адааачаєса сдддасесдд саадачаача єЄдаадссддвда бо ассЕссааєсд аадсаєсддаа бассаасссс ааасссадсд асдаасааса ассссесттає 120 адеЕссаастд ааччаассдЕ єеЕссесвааса ссасстаааа асдеЕсаєвду сдааадаачда 180 агєссасаде асааадсааа сааєсдсаєдаЩ дстасаєсадд ааддаадссс аассддаадса 240

Есддддасас сЕссасаєсєдс дддаааааас дсаєсадаса асссаааадчч аасааєсддваєс 300 саададседс гаасасссда дядеЕссаастає асстасасуддд ааадсасеЕсс ааасасааса

З6о асссаєбддає гаааассадда адссаааасс аседссасса Єдааассссс дассдсссад 420

Чдабадсаєду аадсеЕссстас єдаасаєаас ЄсСЕСсСаааасс сесссасеєда сассаааась 480

Зо аа9аасаадстає сабгасаааад сссаєссасаа аагаєсааад бассадсадд саааасстає 540 ачадеЕсєстад сасасстааа сассддаєсе асеєєсадаєд аадссаассо ссасдасааає бо

З5

ЕЕСаєєєтсаа аааєсдаада сассасачаєс ссааадссас дааасаасаа содоаддачедва 840 асЕдссдеєсєс аадчадаєсаа адеЕсссаста ассадаасьд ааасаєад 888 «2105 67 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична нуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІС4076. «4005 67 асдесаєсса сачаєдессса адааачаєса сдддасесдд саададчаааа Єдаадссддва бо ассссааєсд аадсасддаа бассаасссс ааасссадсд асдаасааса ассссесттає 120 адсссаастуд ааддтаєєдеЕ0 ЄсссеЕсааса ссасстаааа асдссаєсоод сооааадаача 180 ареєєсасадеі асааадсааа баасдсаєсдда дсвасаєсад ааддаадеЕсс аассдаааєд 240

Есддддасас сЕссасаєсєдс дддаааааас дсаєсадаса асссаааадч аасаадсчаєс 300 саададседс гаасасссда дЕссасстає асстасасудд ааадсасеЕсс ааасасааса

З6о асеЕсаєддає гаааассадд адссаааасс аседссасса Єдааассссс дассдсссад 420 дабадсаєдуда аадсеЕсстас сдаасаєсаас ЄЕссааааєє сеЕсссастда састсаааась 480 аагсаадтає сасаєаааад сссассасаа аадаєсааад бассадсадч Саааассевуе 540

Зо ачадеЕсєстад сасасстааа сассддаєсе асеєєсадаєд аадссаассо ссасдасааає бо

ЧдЕєЧдЯдЧдодЧдвса гадсеЕсдЧодда ддЕссвасса ддЕсаєссса асддсоодад адсааасата

З5 бо чЧаєдсЕдвас еєсассаааєд ссаасааааа ддаєддддад ассєсадааа сЕсссаассь 720 адсддаачад асдеааєсдс саааддссаа ддстасеЕссса саєссааєса содаасоаодас 780

Ессарсєсвсаа ааасеєдаада сассасадає ссааадеЕсас дааасаасаа соаододачсддва 840 асЕдссдеєсєс аадчадаєсаа адеЕсссаста ассадаасьд ааасаєад 888 «2105 168 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична нуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІС4078.

«4005 Ф68 асдесаєсса сачаєдессса адааачаєса сдддасесдд саададчаааа Єдаадссддва бо асссттааєд сгадсаєддаа бассаасссс ааасссадсд асдаасааса асссессттає 120 адеЕссаасту аадчЧдеЕсссасє єеЕссевааса ссасстаааа асдеЕсаєвду сдааадаачда 180 ареєєсасаєє асааадсааа бєаасдсаєсдда дсвасаєсад ааддаадеЕсс аассдаачдта 240

Есддддасас сЕссасаєдс додадаадааас дсаєсадаса асссаааадч аасаасадаєс 300 саачачаєде гаасасссда дядЕссаастає асстасасудд ааддсасеЕсс ааасасааса

З6о асесаєддає саааасстадуд адссааагасс астдсстасса Єдчааасєсссс даєтсосссад 420

Чдабадсаєду аадсеЕссстас єдаасаєаас ЄсСЕСсСаааасс сесссасеєда сассаааась 480 аагсаадтає сасаєаааад сссассасаа аааассааад бассадсадча Саааассеве 540 ачадеЕсєстад сасасстааа сассддаєсе асеєєсадаєд аадссаассо ссасдасааає

Зо бо чЕгЧЄЯдЧодЧдвсЯ гадчсеЕсоЧдда ддЕссвасса ддЕсаєссса асддсоодад адсааасата бо

ЧдаЕдсЕДдстас стассаааєсд ссаасааааа чдаєсдодвдчдад ассссадааа сСЕсссаасся 720 адеЕддаачач асдсаассдс баааддссаа ддеассеєсса сасєстааєста єдддаасоодас 780

Ессарсєсвсаа ааасеєдаада сассасадає ссааадеЕсас дааасаасаа соаододачсддва 840 асЕдссдеєсєс аадчадаєсаа адеЕсссаста ассадаасьд ааасаєад 888 «2105 169 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична нуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІС4260. «4005 69 асдесаєсса гачаєдессса адааачаєса сдддасесдд саадачаача єЄдаадссддвда бо ассЕссааєсдд гадсаєсддаа сассаасссс ааасссадсд асдаасааса ассссесатає 120 адеЕссаасту аадчЧдеЕсссасє єеЕссевааса ссасстаааа асдеЕсаєвду сдааадаачда 180 аЕгєссасаєє асааадсааа сааєсдсаєдаЩ дстасаєсадд саддаадссс аассддаадса 240

Есддддасас сЕссасаєсєдс додадаадааас дсаєсадаса асссаааадчч аасааєсддваєс 300 саачачаєде гаасасссда дядЕссадеЕсає асстасасддд ааддсасеЕєсс ааасасаата

Чдабадсаєду аадсеЕссстас єдаасаєаас ЄсСЕСсСаааасс сесссасеєда сассаааась 480 аа9аасаадстає сабгасаааад сссаєссасаа аагаєсааад бассадсадд саааасстає 540 ачадеЕсєстад сасасстааа сассддаєсе асеєєсадаєд аадссаассо ссасдасааає бо

Зо чЕєЧдЯдЧодЧдсЯ гадсеЕсоодад ддЕсссасса ддЕсаєсссса асддсоодадч адсааасата бо чЧаєдсЕдвас еєсассаааєд ссаасааааа ддаєддддад ассєсадааа сЕсссаассь

З5 720 адеЕддаачач асдсаассдс баааддссаа ддеассеєсса сасєстааєста єдддаасоодас 780

ЕЕСаєєєтсаа аааєсдаада сассасачаєс ссааадссас дааасаасаа содоаддачедва 840 асЕдссдеєсєс аадчадаєсаа адеЕсссаста ассадаасьд ааасаєад 888 «2105 70 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична нуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІС4346. «4005 мН70 асдесаєсса сачаєдессса адааачаєса сдддасеєсад саадачаааа Єдаадссддвда бо ассссааєсд аадсасддаа бассаасссс ааасссадсд асдаасааса ассссесттає адсссаастд ааддаасєдеЕ ЄЄссСЕсааса ссасстаааа асдсєсаєсоод сооааадаача 180 ареєєсасадеі асааадсааа баасдсаєсдда дсвасаєсад ааддаадеЕсс аассдаачдта 240

Есддддасас сЕссасаєсєдс дддаааааас дсаєсадаса асссаааадчч аасааєсддваєс 300 саададседс гаасасссда дядЕссаастає асстасасудд ааадсасеЕєсс ааасасаата

З6о асеЕсаєддає гаааассаддда адссаааасс аседссасса Єдааассссс дассдсссад 420 дабадсаєдуда аадсеЕсстас сдаасаєсаас ЄЕссааааєє сеЕсссастда састсаааась 480 аагсаадтає сасаєаааад сссассасаа аааассааад бассадсадча Саааассеве 540 ачадеЕсєстад сасасстааа сассддаєсе асеєєсадаєд аадссаассо ссасдасааає бо

Зо бо чЧаєдсЕдвас еєсассаааєд ссаасааааа ддаєддддад ассєсадааа сЕсссаассь 720 адсддаачад асдеааєсдс саааддссаа ддтасЕсссу аасссааєсса содаасоаодас 780

Ессарсєсвсаа ааасеєдаада сассасадає ссааадеЕсас дааасаасаа соаододачсддва 840 асЕдссдеєсєс аадчадаєсаа адеЕсссаста ассадаасьд ааасаєад 888 «2105 71 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична нуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІС4826. «4005 Д Л71 аєдссаєсса садаєсдеєса адааадаєса сдддасссду саададчааааАи а сдаадстдва бо ассссааєсд аадсасддаа бассаасссс ааасссадсд асдаасааса ассссесттає адеЕсссастуд аадчтассдеЕу еЕссесвааса ссасстаааа асдеЕсаєвду сдааадаачда 180 ареєєсасадеі асааадсааа баасдсаєсдда дсвасаєсад ааддаадеЕсс аассдаачдта 240

Есддддасас сеЕєсасаєдс дддаааааас чіаєссадаса асссааааддч аасаасддває 300 саададседс гаасасссда дядеЕссаастає асстасасуддд ааадсасеЕсс ааасасааса

Чдабадсаєду аадсеЕссстас єдаасаєаас ЄсСЕСсСаааасс сесссасеєда сассаааась 480 аагсаадтає сасаєаааад сссассасаа аааассааад бассадсадч сСаааасстає 540 ададеЕеЕєстад сагасстааа бастдчдаєст асаєсєсаддчєд аадссаассо ссасосааає бо

ЧдЕєЧдЯдЧдодЧдвса гадсеЕсдЧодда ддЕссвасса ддЕсаєсссса асддсододаду аасааасата бо

Зо чЧаєдсЕдвас еєсассаааєд ссаасааааа ддаєддддад ассєсадааа сЕсссаассь 720 адеЕддаадчач асдсаассдс баааддссаа ддеассеєсса аасстааєста єдддаасоодас

З5 780

Ессарсєсвсаа ааасеєдаада сассасадає ссааадеЕсас дааасаасаа соаододачсддва 840 асЕдссдеЕєс аададчаєсаа адеЕсссаста аєстадаастд ааастасад 888 «2105 «72 «2115 888 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» Синтетична нуклеотидна послідовність, кодуюча зрілий білок ТІС4861, зрілий білок ТІС4862 та зрілий білок

ТІСЯ863. «4005 щД Л72 аєдссаєсса садаєсдеєса адаасчаєса сдддасссду саададчаааа а сдаадстдвва бо ассссааєсд аадсасддаа бассаасссс ааасссадсд асдаасааса ассссесттає адеЕссаастд аадчртассдеЕ сеЕсссвааса ссасстаааа асдеЕваєсвєд сдааадаада 180 ареєєсасадеі асааадсааа сСааєсдсаєсдда дсвасаєстад ааддаадесс аассдаадса 240

Есддддасас сеЕєсастаєдс дддаааааас чріаєссадаса асссаааадд дасаадсчаєс 300 саададседеЕ гаасасссда чЧчЕсСсаастає асстасасдд ааадсасеес ааасасааса

З6о асеЕсаєддає гаааассадда адссаааасс аседссасса Едааасєсссс дассдсссад 420

Чдабадсаєдд аадсеЕссстас сдаасаєаас ЄЕЕСааааєєт сссссасеєда сассаааась 480 аагсаадтає сасаєаааад сссассасаа аагагасєсааад бассадсадд Єаааасстає; 540 ададеЕеєєстад сагасстааа бгастддаєст аєсссадддчеєд аадстаасся тасддсааає бо асєддвадатра гадсеЕсдЧоддда доддЕсвасса ддеЕсаєссса асддсодадада адсааасаєва бо

Зо чЧаєдсЕдвас єсассаааєуд ссаасааааа дчаєдаддад ассєсадааа сЕсссаассь 720 адеЕддаадчач асдсаассдс сбаааддссаа ддрассеєсса аасстааєта єддаасоодас

З5 780

Ессарєсвсаа ааасеєдаада сассасадає ссааадеєсас дааасааєсаа содвоадвдадсдда 840 асЕдссдеЕєс аададчаєсаа адссссаста асстадаастуд ааастасад

Claims

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Рекомбінантна полінуклеотидна молекула, яка містить нуклеотидну послідовність, причому нуклеотидна послідовність кодує поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, який містить: (а) амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 25 або (Б) амінокислотну послідовність, яка має щонайменше 98 905 ідентичності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮО МО: 25.

2. Рекомбінантна полінуклеотидна молекула за п. 1, яка містить: (а) нуклеотидну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 37; (б) нуклеотидну послідовність, яка має щонайменше 9095 ідентичності з нуклеотидною послідовністю ЗЕО ІО МО: 37; або (с) нуклеотидну послідовність, яка гібридизується у жорстких умовах з: () полінуклеотидною молекулою, яка містить зворотну комплементарну послідовність у положенні 4-885 нуклеотидної послідовності БЕО ІЮО МО: 37; або

(її полінуклеотидною молекулою, яка містить зворотну комплементарну послідовність нуклеотидної послідовності, вибраної з групи, яка складається з ЗЕО ІЮО МО: 56 і 5ЕО ІЮ МО: 57; де зазначені жорсткі умови включають гібридизацію протягом від 4 до 12 годин у 50 95 формаміді, 1 М Масі ї 1 96 505 при 37 "С, і промивання у 0,1 Х розчині 55(С при 60-65 70.

3. Рекомбінантна полінуклеотидна молекула за п. 1, функціонально зв'язана з гетерологічним промотором.

4. Рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, який кодується рекомбінантною полінуклеотидною молекулою за п. 1.

5. Рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, за п. 4, де зазначений рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, містить: (а) амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 25 або (Б) амінокислотну послідовність, яка має щонайменше 98 95 ідентичності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮО МО: 25.

6. Рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, за п. 4, де зазначений рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, проявляє інгібуючу активність проти видів комах ряду Со/еоріега.

7. Рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність проти комах, за п. 6, де зазначені види комах з ряду Со/еорієга являють собою західного кукурудзяного жука, південного кукурудзяного жука, північного кукурудзяного жука, мексиканського кукурудзяного жука, бразильського кукурудзяного жука або комплекс бразильського кукурудзяного жука, який складається з видів Юіабгоїса мігіди!а і Фіаргоїса 5ресіоза.

8. Рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, за п. 4, де зазначений рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, проявляє інгібуючу активність проти видів комах ряду / еріаоріега.

9. Рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, за п. 8, де зазначені види з ряду /ерійорієга вибрані з групи, яка складається з європейського кукурудзяного метелика, південно-західного кукурудзяного метелика, совки-іпсилон, совки трав'яної, совки бавовникової і совки соєвої.

10. Клітина-хазяїн для інгібування комах, причому клітина-хазяїн містить рекомбінантну Зо полінуклеотидну молекулу за п. 1, де зазначена клітина-хазяїн вибрана з групи, яка складається з бактеріальної клітини-хазяїна і рослинної клітини-хазяїна.

11. Композиція, яка має інгібуючу активність щодо комах, що містить рекомбінантну полінуклеотидну молекулу за п. 1.

12. Композиція, яка має інгібуючу активність щодо комах, за п. 11, що додатково містить нуклеотидну послідовність, яка кодує щонайменше один інший пестицидний агент, який відрізняється від зазначеного поліпептиду, який має інгібуючу активність щодо комах.

13. Композиція, яка має інгібуючу активність щодо комах, за п. 12, де зазначений щонайменше один інший пестицидний агент вибраний із групи, яка складається з білка, що має інгібуючу активність щодо комах, молекули а5РНК, що має інгібуючу активність щодо комах, і допоміжного білка, що сприяє ефективності пестицидного агента.

14. Композиція, яка має інгібуючу активність щодо комах, за п. 13, де зазначений щонайменше один інший пестицидний агент проявляє активність проти одного або більше видів шкідників рядів / ерійоріега, СоІеорієга або Нетіріега.

15. Композиція, яка має інгібуючу активність щодо комах, за п. 14, де зазначений щонайменше один інший пестицидний агент вибраний із групи, яка складається з білка СтутА, СтутАбБ, СтутАс, СтутА.105, Сту1В, Сту1С, Стут1о, СтутЕ, СтутТЕ, Стута, СтутН, Ст, Стуту, Стук, СТУ, СтугА, СтугАБ, СтузА, СтуЗВ, Сту4В, Стуб, Сту7, Стув8, Сту9, Сту15, Сту34, СтуЗ35, Сту4ЗА, Сту4ЗВ, СтубіАа!, ЕТ29, ЕТЗ33, ЕТ34, ЕТЗ5, ЕТ6б, ЕТ70, ТІС400, ТІС407, ТІС417, ТІС431, ТІС8О0, ТІС807, ТІС834, ТІС853, ТІС900, ТІС9О1, ТІС1201, ТІС1415, МІРЗА і МІРЗВ.

16. Композиція, яка має інгібуючу активність щодо комах, що містить рекомбінантний поліпептид, який має інгібуючу активність щодо комах, за п. 4 в ефективній кількості для забезпечення інгібуючої дії проти комах.

17. Спосіб боротьби з лускокрилими видами шкідників, який включає годування зазначеного шкідника інгібуючою для комахи кількістю рекомбінантного поліпептиду, що має інгібуючу активність щодо комах, за п. 4.

18. Насіння для інгібування комах, яке містить рекомбінантну поліпептидну молекулу за п. 1 або рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, за п. 4.

19. Товарний продукт, який містить клітину-хазяїна за п. 10, причому зазначений товарний продукт містить кількість, яка виявляється, зазначеного рекомбінантного полінуклеотиду і рекомбінантного поліпептиду, що має інгібуючу активність щодо комах і кодується зазначеним рекомбінантним полінуклеотидом.

20. Спосіб отримання насінини, що містить рекомбінантну полінуклеотидну молекулу за п. 1, причому зазначений спосіб включає: (а) введення молекули рекомбінантного полінуклеотиду за п. 1 у рослини; (Б) вирощування рослин і (с) збирання насіння із зазначених рослин, де зазначене зібране насіння містить зазначену рекомбінантну полінуклеотидну молекулу.

21. Рекомбінантний вектор для інгібування комах, причому зазначений рекомбінантний вектор містить рекомбінантну полінуклеотидну молекулу за п. 3.

22. Рекомбінантний вектор за п. 21, де зазначений вектор вибраний з групи, яка складається з плазміди, бакміди, фагміди і косміди.

23. Трансгенна рослина для інгібування комах, причому трансгенна рослина є стійкою до зараження комахами, де клітини зазначеної трансгенної рослини містять рекомбінантну полінуклеотидну молекулу за п. 1 або рекомбінантний поліпептид, що має інгібуючу активність щодо комах, за п. 4.

йа со ка шсасгсо с кс реф рю оо АА Во ккя очи чо ма ва с се: Я лева а ж лень ек ж ем кі сич ес приз т їм ра тю во в віянь ою випив мивнимн мене вже І х ї і : їк т шви М че реб в в кими ді В як Ж ДОБ дО КО в) й бю зе 2 ЕМ кни нк МИЕМММ кою ве пЕМВЕВ вна то віз Ми мюбмЕ мне фі щт «а или хі нене В між ПОЕМ е КН ЕК Дод: Ве бо де наван тризо»» вреьврерие свреввх Я зах ДВІ ОБ МЕ хе ОБО БЕ ВАК еЕ б о КУ во в о, з ре аб а - е що ее ешененьі о сив сх сх вени 915 ІВ во ах Ме Бо й бе хо їх Ж ОК ЕКО о ре ре чойвоя БОС ее Бевьвеві вим ВН БЕН їх рр дер дб Шут о Бер Ва ря я Фі -й ; й -жшщи щи с-м мМмиМм --юФіІВІЗов 55385 ЕЙ В насе ШЕ Че баян 055 - г й і КОЛО гла кл ше ж, пава БМВ вів ві ЕЕВКК С Я вва ОО ЩЕ о мм м ве В ав аканя б 53 Я УЗО морю - м мк а зе Ана ИН що сл о Бо бу бо в Фу НеАЕА ді ух о Шк о варвава вима Коси ой поні вив -вшізва м фіз іїміісїв мара свт ЕНЕЕЕЕ вищ О ТЕБЕ спдадева ЖЖ Й: до» бе їк 0» йк ті БРОВИ ВОЮ що. СБ вптневщмЕе аа ове кт мя ее Як ме «У нн моз В м шина БАЧОК ВБББЕБ спроб знозво пен ШАНСОН ВБЕК се ол К ЗЖКОЯМКЛУуЄ КИ ВУ Кк ке о ен в КЕ вЕрививи -щю лева мм юю пев п: 13855 ооо ших щі КЕ В вд що Ж ЦО Коко ко як хх - до «кийкю вже БеБКЬЕ би ре веве ее паля м Мкжикх ВЕЖ ов ее енен вро Мі І У АН па Сас Ва 35 : жа т мі сх. «атротя Я й ШОВ кер ший ше "ВЕББВЯ ТЕЗУ ВОБУВО ЕКЕБЕВ -ввшав ММ Мм мими ра ПМ ЕЛЕН 55225 55585 - мови БЕК жа Ер Ех Бе де Бе В ев х-ав ЗБЕ сани 56. ї У й на з е У, З ЯЛЕВйй ще Бики бе й: ло фе о в вх ве ва до БИОМО шим секс сх «яма шнМм -евнинвав ен "вені УБТОбСтТ вВавешаи реевАВ що ож ж ж вом 15 0 в й о пк о ре ох р до фо в ж до ія мов ЩО Бі 3 0 БЕ Що дк; бе б Ко й щЮ ф п ОВК БК КІ Ю пава ОАЩЕЕЯ БЕ. Бе -- СЛ як т - Ь; е СО5ЕБО дстав вн во шошю шини я ШИМИ істо ївїгІ -- КІН -- шок ре р оре --ВБ воша - Ос ся три БЕВЕСЕ иБине ово якості певні ях о 3 со 5 а о 5 МО евиси Мини Ккя ЕВ НЕННЕВ щ щи Се ЕЕ БЕ - ща жа чн ча А Ям ФУ о 5 Й конк сб и я Мимимм шшажшое заз вен Е ВЕЕЕКЕ БЕМКНЕ шик МЕЖ Ж Е ук со стька о оо соска зп о тк с м ше: ма де фе її о здох ге ща їх Фут жом чо с га то ча ма У о с м и да с Ко КМ мачо с с - подо пцпоао ово оба «і мовне ввкчрач нов нан ване Ві З мивинмаи нмаинМим вими вв рев м Ба п очи св кр м ою с тч жо с тч ех що ух с сх них тс т «ек ет

Фіг. 7