UA117910C2 - Молекула анти-gcc антитіла і її використання для тестування на чутливість до gcc-націленої терапії - Google Patents

Молекула анти-gcc антитіла і її використання для тестування на чутливість до gcc-націленої терапії Download PDF

Info

Publication number
UA117910C2
UA117910C2 UAA201412715A UAA201412715A UA117910C2 UA 117910 C2 UA117910 C2 UA 117910C2 UA A201412715 A UAA201412715 A UA A201412715A UA A201412715 A UAA201412715 A UA A201412715A UA 117910 C2 UA117910 C2 UA 117910C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
cancer
molecule
antigen
antibody molecule
Prior art date
Application number
UAA201412715A
Other languages
English (en)
Inventor
Хелєн Елісон Френк
Еліс А. МакДональд
Тереза Л. О'Кіф
Original Assignee
Мілленніум Фармасьютікалз, Інк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Мілленніум Фармасьютікалз, Інк. filed Critical Мілленніум Фармасьютікалз, Інк.
Publication of UA117910C2 publication Critical patent/UA117910C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/988—Lyases (4.), e.g. aldolases, heparinase, enolases, fumarase

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)

Abstract

Винахід стосується молекули антитіла до GCC або її антигензв’язувального фрагмента, виділеної послідовності нуклеїнової кислоти, яка кодує таке антитіло, вектора експресії, виділеної клітини, що містить таку нуклеїнову кислоту, способу отримання молекули антитіла до GCC, способу виявлення молекули антитіла до GCC, набору, що містить молекулу антитіла до GCC або її антигензв’язувальний фрагмент, способу визначення чутливості ракових клітин до GCC-націленої терапії, застосування такої молекули антитіла до GCC, реакційної суміші, яка містить біологічний зразок та молекулу антитіла до GCC, та способу створення персоніфікованого протоколу лікування із застосуванням молекули антитіла до GCC.

Description

Винахід стосується молекули антитіла до ОСС або її антигензв'язувального фрагмента, виділеної послідовності нуклеїнової кислоти, яка кодує таке антитіло, вектора експресії, виділеної клітини, що містить таку нуклеїнову кислоту, способу отримання молекули антитіла до СС, способу виявлення молекули антитіла до СС, набору, що містить молекулу антитіла до ОСС або її антигензв'язувальний фрагмент, способу визначення чутливості ракових клітин до оСсС-націленої терапії, застосування такої молекули антитіла до ССС, реакційної суміші, яка містить біологічний зразок та молекулу антитіла до СС, та способу створення персоніфікованого протоколу лікування із застосуванням молекули антитіла до СС.
СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ
Дана заявка заявляє переваги і пріоритет попередньої заявки США Моб1/639376, поданої 27 квітня 2012 року. Повний зміст попередньої заявки США Моб1/639376 включено в даний документ за допомогою посилання.
ОБЛАСТЬ ТЕХНІКИ
Винахід належить до молекул антитіл, які зв'язують СС, і способів їх використання для відбору пацієнтів для лікування із застосуванням (зСС-націленої терапії, такої як із застосуванням імунокон'югата, що містить молекулу анти-сСС антитіла або її фрагмент, кон'юговані до речовини яка є терапевтичною.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
Гуанілілциклаза С ("СС") є рецептором поверхні трансмембранних клітин, який виконує функцію підтримки кишкової рідини, електролітного гомеостазу і клітинної проліферації, дивись, наприклад, Сагтівтегз5 еї а!., Ргос. Маї!. Асад. Зсі. ОБА 100: 3018-3020 (2003). СС експресується в клітинах слизової оболонки, що вистилають тонку кишку, товсту кишку і пряму кишку (Сатішегв єї аїЇ., Оів Сооп Весішт 39: 171-181 (1996)). Експресія ССС підтримується при неопластичній трансформації кишкових епітеліальних клітин з експресією у всіх первинних і метастатичних пухлинах товстої і прямої кишки (Сагйпег»5 еї а!І., Сів Соїоп Весішт 39: 171-181 (1996); Вис вї а). Єикг У Сапсег 41: 1618- 1627 (2005); Сатіїнегз єї а!., СавігоепіегоЇоаду 107: 1653- 1661 (1994)).
СУТЬ ВИНАХОДУ
Опис базується, щонайменше частково, на відкритті нових анти-осСс антитіл. Відповідно, в одному аспекті, винахід описує молекулу анти-зСс антитіла, як розкрито в даному документі.
Молекули анти-зСС антитіл придатні в якості "голих" молекул антитіл і в якості компонентів імунокон'югатів. Відповідно, в іншому аспекті, винахід описує імунокон'югати, що містять молекулу анти-ССС антитіла, описаного в даному документі, і терапевтичну речовину або мітку.
Винахід також описує способи використання молекули анти-зСсС антитіл і імунокон'югатів, описаних в даному документі, наприклад, для визначення (СС і клітин або тканин, які експресують СС. Такі методи придатні, іпіег аїйа, для діагностування, прогнозування, візуалізації або визначення стадії зСС-опосередкованого захворювання. Відповідно, в деяких
Зо аспектах, винахід описує способи ідентифікації суб'єкта для лікування зСС-націленою терапією, наприклад, терапією анти-ССС антитілом, наприклад, імунокон'югатом, що містить анти-аСС антитіло, кон'юговане з терапевтичною речовиною. Винахід також описує спосіб іп міго або іп мімо визначення суб'єкта, котрий страждає раком, що є потенційним кандидатом для СС- націленої терапії, наприклад, СОСС-націленої терапії, описаної в даному документі.
Анти-ОСС антитіла, наприклад, анти-сСс антитіла, що описані в даному документі, також придатні, наприклад, для модулювання активності або функції білка СС; і для лікування 5СС- опосередкованого захворювання, як описано в даному документі. В деяких аспектах лікування включає придбання знань і/або оцінювання зразка або суб'єкта для визначення рівнів експресії
ССС і відносно того, чи експресує суб'єкт СС, коли отримує СОСС-націлену терапію, наприклад, сСбб-націлену терапію, описану в даному документі В інших аспектах спосіб описує персоналізований протокол лікування, наприклад, протокол СС-націленого лікування, шляхом отримання зразка від суб'єкта і визначення рівнів експресії СС, наприклад, за допомогою способу визначення, описаного в даному документі, наприклад, з використанням анти-аСС антитіла, описаного в даному документі, і виходячи з визначення, вибору протоколу націленого лікування для суб'єкта.
В іншому аспекті винахід також описує виділені і/або рекомбінантні нуклеїнові кислоти, що кодують амінокислотні послідовності молекули анти-ссСс антитіла, а також вектори їі клітини- господарі, що містять такі нуклеїнові кислоти, і способи продукування молекул анти-40О антитіл. Також в даному документі описані реакційні суміші та набори, що містять анти-аСО антитіла, наприклад, імунокон'югат, описаний в даному документі, а також аналізи іп міїго, наприклад, що включають анти-зСС антитіло, описане в даному документі, для виявлення експресії ССС.
Всі публікації, патентні заявки, патенти та інші посилання, згадані в даному документі, включені в даний документ за допомогою посилань у всій своїй повноті.
Інші характерні особливості, об'єкти та переваги винаходу(-ів), розкритого в цьому документі, будуть зрозумілими з опису і креслень, а також з формули винаходу.
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
На Фігурі 1 зображено кільцеву карту експресуючого білок вектора, що використовують для отримання злитого білка людського СС (пОСС) позаклітинного домену (ЕСО) мишачого Ес (510) (тЕс) (пПпаСС-ЕСО-теЕс) згідно винаходу.
На Фігурі 2А-20 представлені гістограми, що узагальнюють об'єднані/загальні (апікальні і цитоплазматичні) Н-оцінки розподілу експресії (СС за типами пухлин для пацієнтів зі злоякісним новоутворенням, відібраних для зарахування у дослідження С26001, Фази клінічного випробування ССС-націленого імунокон'югата. На Фігурі 2А проілюстровано об'єднаний загальний розподіл Н-оцінок за відібраними пацієнтами з раком товстої і прямої кишки; на Фігурі 28 представлено об'єднаний загальний розподіл Н-оцінок за відібраними пацієнтами з раком шлунку; на Фігурі 2С представлено об'єднаний загальний розподіл Н-оцінок за відібраними пацієнтами з раком підшлункової залози; на Фігурі 20 представлено об'єднаний загальний розподіл Н-оцінок за відібраними пацієнтами з раком стравоходу.
На Фігурах ЗА-3С представлені гістограми, що узагальнюють об'єднані/загальні (апікальні і цитоплазматичні) Н-оцінки розподілу експресії (СС опо різним опухолеспецифічним мікроматрицям, які були відібрані. На Фігурі ЗА проілюстровано об'єднаний/загальний розподіл
Н-оцінок за зразками на різних мікроматрицях пухлин товстої і прямої кишки, відібраних для експресії СС; на Фігурі ЗВ проілюстровано об'єднаний/загальний розподіл Н-оцінок за зразками на мікроматриці пухлини шлунку для експресії СС; на Фігурі ЗС представлено об'єднаний/загальний розподіл Н-оцінок за зразками на різних мікроматрицях пухлини підшлункової залози, відібраних для експресії СС.
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС
Гуанілілциклаза С (СС) (також відома як 5ТАК, рецептор 5Т, 50020 їі БИСУ2С) є рецептором поверхні трансмембранних клітин, який функціонує у підтримці кишкової рідини, електролітного гомеостазу та клітинної проліферації (Саггійтегв еї а!., Ргос Май Асай 5сі ОБА 100: 3018 -3020 (2003); Мапп есеї а!., Віоспет Віорпуз Ве5 Соттип 239: 463-466 (1997); Ріаїі єї а!І., Ргос Маї! Асай 5сі ОБА 100: 2695-2699 (2003)); СепВапкК Ассеззіоп Мо. МІМ 004963, кожна з яких включена в цей документ за допомогою посилань у всій своїй повноті). Ця функція є опосередкованою за рахунок зв'язування гуаніліну (УМедапа еї а. РЕВЗ Гей. 311: 150-154 (1992)). СС також є рецептором для термостійкого ентеротоксину (57, наприклад, що має амінокислотну послідовність МІЕМССЕ! ССМРАСАССУ, ЗЕБЕО ІЮО Мо 1), який є пептидом, що продукується БЕ. соїї, а також іншими інфекційними організмами (Као, М.С. Сівба Еоипа. Зутр. 112: 74- 93 (1985); Кпоор Б.С. апа Омжмепв, М.9У. Рпаптасої. Тохісої. Меїноадз 28: 67-72 (1992)).
Зв'язування ЗІ з (СС активує сигнальний каскад, який викликає кишкове захворювання, наприклад, діарею.
Нуклеотидна послідовність людської ЗСС (СЗепВапкК Ассеззіоп Мо. МІМ 004963; 5ЕО ІЮ Мо 2): 1 дассададад аадсащдодда аададідддс щадаодасіс сасіададас ідіссаїсід 61 дайсссідс сісссіадда дсссаасада дсааадсаад юдасасаад дачіаай 121 сіаасдщдаї! юадоддісаїд аадасойнос юноддасії дасшщоща їсасдсісі 181 Іссадсссду діддсідієс Шадносс аддщдацдіса даасідссас ааїддсадсі 241 адаааїсаяд сдіссідаїд аддасаасі садссшщдс ададссссід ааааасіїда 301 аадаюсоді даададада сюдааагад Ідададдасо ісідсааааї дсюдссіаа 361 адтдасюї даасдсіасі псащіаїї содагдісі дайсаїаас іІсаддсдасі 421 дссддадіад сассюідаа ддссісдасс їасісаддаа аашсаааї дсасаасдда 481 їддаосіо і ссісаїадод сссісаїдіа саїасіссас сіссадаю їассидаса 541 садаайдад сіассссаїд аїсісадсід даадішнодао айадісащі дасіаїааад 601 ааасснаас саддсідац ісіссадсіа дааадноаї аїасісно9 днааснії 661 ддаааассаа содаїсідссс їсаааасії айссіддад саснсдаї дЯшШасаада 721 аддіасада аасідаддас ше асснаащс ісіддадасі аасашесі 781 ашсіссса сдаасісддс Шааддща Наадаса адаїааддад Шсадодаїа 841 Існааюда ссасаасадд аааадсаацд Щайацйаї дідідааї ссададнсс 901 іІстасааадсі даадддщдас сдадсадідд сідаадасаї щісанаї! сіадіддаїс 961 Шсаающюа ссадіасіїї даддасаад ісасадсссс ідасіаїаю аааааїдісс 1021 пойпсідас дсідісіссії дддаанссс Неїаааїад сісшсісс аддааїсіаї 1081 сассаасааа асдадасіїї дсісндссії ашодааща ааїссідсіс Шодасаїа 1141 дсдаадаї ашіснодаа аа(ддадааа айацассас ссссаааїйй дсісаїдсн 1201 ісаддааїсі сасшдаа доааадасо діссадідас снддадас юдадоадаїд 1261 Пдасадіас сашаїдсії сідїаїассі сюіддасас саадаааїас аадднені 1321 дассіаюа їасссасадіа ааіаадассі аїссщідда їаїдадсссс асайсасії 1381 ддаадаасіс їааасійссі ааїдагацна саддссддда сссісадаїс сідаданд 1441 садіснсас ссісасідда дсідщаїос гдсіссідсі сдісдсісіс сідагсіса 1501 дааааіаіад аааадайцаї дааснсдіс адаааааа!цо дісссасаї! ссіссідааа бо 1561 азіаісшсс ісддадасс ааїдадасса аїсаднад ссісаадаїс дадаюдаса
1621 ааадасдада іасааїіссад адасіасдас адідсааага сдасааааад сдадіщдайс 1681 іІсааадаїсі саадсасааї даюдіаай ісасідаааа асадаадаїа даандааса 1741 аднпдснса дайдасіаї їасаассіда ссаадисіа сддсасадід ааасндаїа 1801 ссаїдаїсії сддадюаїа дааїасщію адададодаїс ссіссдддааа дішааа 1861 асасаашс сіасссідаї ддсасайса юданодда днаадагс ісідіснаї 1921 аїдасанос їІаадддаа ісаїаїсідс асіссадіаа дасадаацдіс садаїсаїс 1981 даааїсіас саасідсаїа дюдасадіа даащдащдаї даадаїсасії даншдасі 2041 дсаанссаї Шассісса аааааддасс діддасадс Іссададсас сіссдссаад 2101 ссаасаїсіс ісадааадда дадююіаса дсіаддодаї саїсдсасад дадаїсаїсс 2161 дсддааада аассійсіас асшодадсі аісдддассу даададаад ашісадад 2221 їіддаааайс сааддааю ааасссісс дсссадай айснддаа асадсадачад 2281 ааааададсі адаадідїас сіасідіаа аааасіднд ддаддаадаї ссадаааада 2341 дассадаці сааааааай дадасіасас Ндссаадаї ашодасії Шсаїдасс 2401 ааааааащда аадсіаїаю даїасснда іссдасаїсі асадсіаза! ісісдааасс 2461 ддаасаїсі ддіададдаа аддасасадс щіасааддс адададддас аддасідаса 2521 даснааси їаїойосії ссааддсіад дадіаааціє Іс4ааддад аааддсешд 2581 ддадссдда асіаїадад дааднасаа ісіасісад дасайнціа ддшсасіа 2641 сіаісідсаа аїасадсасс сссаюдаад щдаїддасаї дснаащдас аїсіаїаада 2701 дішдасса сацойоаї саїсаюа!ц ісіасаадді ддааассаїс дадаїдсаі 2761 асаюдоас їадіддщшо ссіаададаа аддсааїсд дсадсааїа дасандсса 2821 адашдассії ддаааїссіс адснсаща ддассшода асіддадсаї снссіддсс 2881 іІсссааїаю дансосаїї ддаднсасі сіддісссід асюсюда днаїдааа 2941 іІісаададсс Ісонацої сташддад агасддісаа сасадссісї аддаюдааї 3001 ссасіддссї ссснщдада айсасадїда дідасіссас саїадссаїс сюаададаа 3061 сідадідсса сйпссщШаї дааддадад дадааасаїа спааадода ададдааат 3121 адасіассіа сіддсідасі дддаюдаадо ассадаааї! саассідсса ассссіссіа 3181 сідіддадаа Ісаасадсої пасаадсад аашісада саїданодсс аасісшас
З241 адаааадаса ддсадсадда аїаадаадсс ааааасссад асдддіадсс адсіаїаааа 3301 ааддсасісї ддааїасцо садсідааіа ссасадасаа ддададсасс їайШааа
Амінокислотна послідовність людської ССС ((зепРері Ассезвзіоп Мо. МР 004954; 5ЕО ІО Мо 3): 1 пкиїаа! меІтдарам віз5дуздпс ппдзувівмі ттдпзаїаєр ІКпівдаупе 61 аІеімгапа падіпміупа Нтузадіїй п5дасгввіс едіаПиків падптасмії 121 дрзсетузна туїаїеівур тізадвідів саукеши тз5раКітуї ІмплУКкІпа 181 ріктуємуві5 умукпдіеїе астмупа!е азузуївпеї дікумігдак егдайтант 241 /"К5пміїтса дрепукіко агамаєдімі іманпаду тедпміарау тКпмімнів 301 рапвіїпвевії зпізрікга Таїіау!пді! ТАтіки епдепінрк Тана 361 едудармна дждамавітм ПуївмаКкК укмітуат микіурмате5 рійм/ки5кі 421 рпайдгора йПтіамий даммІШма Птіжутка увітаккмй іррепіїріе 481 ІпеїппмвіК іаадактайі дикдекуак КиІкаіки падппекак івїпКіїдіа 541 уупіктуаі уКідїтіїдм іеусеговіг еміпатізур дднтамеїк ізміудіакд 601 тзуїн55Ке упапкбіпс умавзитумкі агдспоіїр ркКамларе Пігдапізак 661 дамузудіїа деїййКеїй уйбстгагте Киїуепопа ткКрітраїї ехавеКеїєм 721 умКпсмее арекКгтраїкк іешакітд падКкпезу тата! узгпіеніме 781 епдіукаєг агадпиті Ірпмук5ік екдімереїу еемпуїзаї матісКув 841 їртеуматіп аіукотанім аппамукмеї іддаутмазад ІрКтдпта ідіаКта!еї 901 ІсттопНеїе Пірдіріміг ідииздрсаа дуудіктргу сігдаімпіа зитезідірі 961 гпіпм5двіа ІКкпесоії уемгдеуІк агапенум/! гаткадкті ріррімепда 1021 "давїзаті апзідКидаа дікзаКріту азукКаїеу ІдіпнакКез туї
Білок ОСС має кілька загальнопоширених доменів, кожен з яких вносить окрему функцію в молекулу СС. Ділянки СС включають сигнальну послідовність (для наведення білка до клітинної поверхні) від амінокислотного залишку 1 до приблизно залишку 23, або від залишку 1 до приблизно залишку 21 в 5ЕО ІО Мо З (вирізані для дозрівання з отриманням функціонального зрілого білка із залишків амінокислот від 22 або 24 до 1073 в 5ЕО ІЮО Мо 3), екстрацелюлярний домен для ліганда, наприклад, гуанілін або 5Т, зв'язуючий від приблизно залишку 24 до приблизно залишку 420 або від приблизно залишку 54 до приблизно залишку 384 в 5ЕО ІЮ Мо 3, трансмембранний домен від приблизно амінокислотного залишку 431 до приблизно залишку 454 або від приблизно залишку 436 до приблизно залишку 452 в 5ЕБЕО ІЮО Мо 3, кіназний гомологічний домен, імовірно має тирозинкіназну активність від приблизно амінокислотного 60 залишку 489 до приблизно залишку 749 або від приблизно залишку 508 до приблизно залишку
745 в 5БЕО І Мо З і гуанілінциклазокаталітичний домен від приблизно залишку 750 до приблизно залишку 1007 або від приблизно залишку 816 до приблизно залишку 1002 в 5ЕО ІО Мо 3.
В нормальних людських тканинах СС експресується в клітинах слизової оболонки, наприклад, в апікальних мембранах щіточної облямівки, що вистилають тонку кишку, товсту кишку ії пряму кишку (Саїтіїпег5 еї аї., Оі5 Сооп Кесішт 39: 171-181 (1996)). Експресія СОССС підтримується при неопластичній трансформації кишкових епітеліальних клітин з експресією у всіх первинних і метастатичних пухлинах товстої і прямої кишки (Сагіївпеге еї аї., бі5 Сооп
Весішт 39: 171-181 (1996); Вис еї аі. Еиг ) Сапсег 41: 1618- 1627 (2005); Сапіїнегв еї аї.,
Савзігоепієгоіоду 107: 1653-1661 (1994)). Неопластичні клітини зі шлунку, стравоходу і шлунково- стравохідного з'єднання також експресують СС (див., наприклад, Патент США Мо 6,767,704;
Рергиупе єї аї. Савігоєпіегоіоду 130: 1191-1206 (2006)). Тканиноспецифічна експресія і зв'язок з раком, наприклад, шлунково-кишкового походження, (наприклад, рак товстої і прямої кишки, рак шлунку, рак стравоходу або рак тонкої кишки), можуть бути застосовані для використання СС в якості діагностичного маркера для цього захворювання (Са!тіїпегз5 еї а!., Сі Соїоп Кесішт 39: 171-181 (1996); Вис єї а. Єик ) Сапсег 41: 1618-1627 (2005)). Крім того, як продемонстровано в
Прикладах даного документа, кілька різних типів раку не шлунково-кишкового походження, як було показано, експресували СС, включаючи рак підшлункової залози, рак легень, саркоми м'яких тканин (наприклад, лейоміосаркома і рабдоміосаркома), шлунково-кишкові або бронхолегеневі нейроендокринні пухлини і нейроектодермальні пухлини, але не обмежуючись ними.
Як білок клітинної поверхні СС також може слугувати як діагностична або терапевтична мішень для рецептор-зв'язуючих білків, таких як антитіла або ліганди. У нормальній кишковій тканині зСС експресується на верхній стороні щільних з'єднань епітеліальних клітин, які утворюють непроникний бар'єр між просвітним середовищем і судинним компартментом (АІтепої еї а!., Мо! Містобріо! 8: 865-873); Спагіпо єї аї., Оід рів 5сі 32: 1017-1026 (1987)). Само по собі системне внутрішньовенне введення зСсС-зв'язуючого білкового терапевтичного засобу буде мати мінімальний вплив на кишкові рецептори ОСС, незважаючи на доступ до неопластичних клітин шлунково-кишкової системи, включаючи клітини інвазійного або метастатичного раку товстої кишки, поза кишкових або метастатичних пухлин товстої кишки,
Зо пухлин стравоходу або пухлин шлунку, аденокарциноми в шлунково-стравоходному з'єднанні.
Крім того, СС інтерналізується через рецептор, опосередковуючий ендоцитоз під час зв'язування ліганду (Вис еї а). Єиг У Сапсег 41: 1618-1627 (2005); ОїбапзкКі єї а!., Віоспет Віорпу5
Асіа 1245: 29-36 (1995)).
Поліклональні антитіла, викликані проти позаклітинного домену СС (Мапа еї аї. Ргоїевіп
Ехрг. Ритії. 8: 151-159 (1996)), були здатні пригнічувати зв'язування пептиду 571 з людським та щурячим ОСС і інгібувати 5Т-опосередковане продукування СОМР людської СС.
ОСС характеризується як білок, зв'язаний зі злоякісними пухлинами, включаючи рак товстої кишки. Дивись також Сагтіїнегз5 еї а!., Сі5 Соїоп Кесішт 39: 171-181 (1996); Вис єї а). Єиг У Сапсег 41: 1618-1627 (2005); Сатптіїйегв єї аї!., Ссавзітоеєпієгоїоду 107: 1653-1661 (1994); Отбапекі еї аї.,
Віоспет Віорпуз Асіа 1245: 29-36 (1995). Таким чином, молекули антитіл, спрямованих на ССС, можуть бути використані самостійно в незв'язаній формі для інгібування ракових клітин, що експресують ОСС. Крім того, молекули антитіл, спрямованих на СС, можуть бути використані "голими" або в міченій формі для виявлення ракових клітин, що експресують СС. Молекули анти--СС антитіл згідно винаходу можуть зв'язувати людський СС. В деяких варіантах реалізації винаходу молекула анти-ССС антитіла згідно винаходу може інгібувати зв'язування ліганду, наприклад, гуаніліну або термостійкого ентеротоксину, з СС. В інших варіантах реалізації винаходу молекула анти-ссСсС антитіла згідно винаходу не пригнічує зв'язування ліганду, наприклад, гуаніліну або термостійкого ентеротоксину, з ССС.
Моноклональні антитіла, специфічні до СС, включають СС: В10 (Мапа еї аї., 9. Сеї.
Віоспет. 66: 500-511 (1997)), СС: 407 (Міауаснапанга еї а. Віоспетівігу 39: 16075-16083 (2000)) і ОСС: С8 (ВакКге єї аІ. Єшиг. У. Віоспет. 267: 179-187 (2000)). ОСС: В10 має каппа легкий ланцюг і ізотип Їдс2а і перехресно реагує з щурячою, свинячою і мавпячою (СС. (СС: В10 пов'язує перші 63 амінокислоти внутрішньоклітинного домену СС специфічно до залишків 470-480 в
ЗЕО ІО Мо З (Мапа еї аї. Ргоївїп 5сі. 7: 2175-2183 (1998)). ОСС: 407 пов'язує кіназогомологічний домен в межах залишків 491-568 в ССС (Впапаагі еї а. Віоспетівігу 40: 9196-9206 (2001)). СС:
С8 пов'язує протеїн-кіназоподібний домен в цитоплазматичній частині ССС.
Визначення
Якщо в даному документі не вказано інше, то наукові та технічні терміни, використані разом з даним винаходом, мають ті ж значення, які зазвичай вживаються фахівцем у даній галузі бо техніки. Як правило, номенклатура, використана разом з методами, культурою клітин і тканин,
молекулярною біологією і хімією білка і оліго- або полінуклеотидів і гібридизацією, описаних в даному документі, є тією, яка відома в даній області. Інвентарні номери СепВапкК або СепрРері і корисні послідовності нуклеїнових кислот і пептидів можна знайти на веб-сайті Національного центру біотехнологічної інформації, ВеїШезда Ма. Для рекомбінантної ДНК, синтезу олігонуклеотидів і культури тканин і трансформації і трансфекції використовуються стандартні методи (наприклад, електропорація, ліпофекція). Ферментні реакції і способи очищення здійснюють відповідно до вимог виробника або як зазвичай досягається в даній галузі чи як описано в даному документі. Згадані вище методи і процедури, як правило, виконуються у відповідності зі способами, відомими в даній галузі, наприклад, як описано в різних загальних і більш конкретних посиланнях, які цитуються і обговорюються в даному описі. Дивись, наприклад, Ззатюогоок еї аІ. МоїІесшаг Сіопіпд: А ІГарогаїогу Мапиаї (Зга еа., Соїй Зргіпд Нагброг
І арогайогу Рге55, Со Зргіпд Нагброг, ММ (2000)) або дивись Нагіомж, Е. апа Гапе, 0. (1988)
Апіїродієв: А І арогаїюгу Мапиаї, Соїй 5рііпд Нагбог Іарогаїогу Ргезв5, Соїд 5рігіпд Нагбог, М.М.
Терміни, які використовуються в методиках і методах лабораторних досліджень, що описані в даному документі, є відомими в даній області. Крім того, якщо інше не передбачене контекстом, то форма однини повинна включати множину, і терміни у множині включають терміни в однині.
У контексті даного винаходу термін "молекула антитіла" відноситься до антитіла, білка (-ів) антитіла або імуноглобуліну, або антигензв'язуючого фрагменту будь-чого зі згаданого вище, наприклад, антитіла. Молекули антитіл включають одноланцюгові молекули антитіл, наприклад, 5СЕм, дивись, наприклад, Віга еї аї. (1988) Зсіепсе 242: 423-426; і Нивюоп еї аї. (1988) Ргос. Май.
Асад. сі. ОБА 85: 5879-5883), і однодоменні молекули антитіл, дивись, наприклад, УМО9404678.
Хоча і не в межах терміну "молекули антитіл", винахід також включає "аналог(-и) антитіла", інші немолекулярні антитільні структури, що базуються на білках, наприклад, злиті білки та/або імунокон'югати, які використовують СОМ для забезпечення специфічного антигенного зв'язування. "Молекула анти-зСС антитіла" відноситься до молекули антитіла (тобто, антитіла, антигензв'язуючого фрагмента антитіла або аналога антитіла), яка взаємодіє з або розпізнає, наприклад, пов'язує (наприклад, специфічно зв'язує) ОСС, наприклад, людську ОСС.
Прикладами молекул анти-ОСС антитіл є ті, які представлені в Таблицях 1 і 2.
Зо У контексті цього винаходу терміни "антитіло", "білок(-и) антитіла" або "імуноглобулін" відносяться до одноланцюгових, дволанцюгових і багатоланцюгових білків і глікопротеїнів.
Термін "антитіло" включає поліклональні, моноклональні, химерні, СОМ -щеплені та людські або гуманізовані антитіла. Всі вони більш детально будуть розглянуті в іншому розділі даного документа. Також даним терміном охоплюються верблюжі антитіла, дивись, наприклад,
О052005/0037421, і нанотіла, наприклад, ІЮДМАК»5 (акулячі антитіла), дивись, наприклад,
ММО03/014161. Термін "антитіло" також включає синтетичні та генетично сконструйовані антитіла.
У контексті даного винаходу термін "фрагмент антитіла" або "антигензв'язуючий фрагмент" антитіла відноситься, наприклад, до фрагментів Раб, Раб", Е(аб')» і Ем, одноланцюгових антитіл, функціональних важко ланцюгових антитіл (нанотілу, а також частини антитіла, що має специфічність до, щонайменше, одного епітопу, який конкурує з інтактним антитілом за специфічне зв'язування (наприклад, фрагмент, що має послідовності СОК і має достатньо послідовностей каркаса, щоб специфічно пов'язати епітоп). Наприклад, антигензв'язуючий фрагмент може конкурувати за зв'язування епітопу, який зв'язується антитілом, з якого був отриманий фрагмент. Отриманий фрагмент, як використано в цьому і подібних контекстах, що не передбачає будь-який конкретний метод або процес отримання, але може відноситися просто до подібності послідовностей. Антигензв'язуючі фрагменти можуть бути отримані за допомогою рекомбінантних технологій або шляхом ферментного або хімічного розщеплення інтактного антитіла. Термін "антигензв'язуючий фрагмент" при використанні з одиничним ланцюгом, наприклад, важким ланцюгом антитіла, що має важкий і легкий ланцюг, означає, що фрагмент ланцюга є достатнім, таким, що коли утворює пару з повною варіабельною ділянкою іншого ланцюга, наприклад, легкого ланцюга, він дозволяє пов'язувати, щонайменше 25, 50, 75, 85 або 9095 видимого, з цілою важкою і легкою варіабельною областю.
Терміни "антигензв'язуюча група СОК" або "кількість СОК, достатня для зв'язування" (Її подібні визначення) в контексті даного винаходу відноситься до достатніх СОК-ів ланцюга, наприклад, важкого ланцюга, таким, що коли розміщуються в каркасі і утворюють пару з повною варіабельною ділянкою іншого ланцюга або з частиною варіабельної ділянки іншого ланцюга подібної довжини і має таку ж кількість СОК, наприклад, легкий ланцюг, то дозволяють пов'язувати, наприклад, щонайменше, 25, 50, 75, 85 або 9095 видимого, з цілою важкою і легкою 60 варіабельною областю.
У контексті даного винаходу термін "гуманізоване антитіло" відноситься до антитіла, яке отримано з нелюдського антитіла, наприклад, кролячого, гризунів (наприклад, мишачого), овечого або козячого, яке зберегло чи в основному зберегло антигензв'язуючі властивості батьківського антитіла, але менш імуногенне для людей. Термін "гуманізувати"в контексті даного винаходу призначений включати деїімунізовані антитіла. Зазвичай, гуманізовані антитіла включають нелюдські СОК і людські або отримані з людських каркас і константні області.
Термін "модифіковане" антитіло в контексті даного винаходу відноситься до антитіл, які отримані, експресовані, створені або виділені за допомогою рекомбінантних засобів, таких як антитіла, експресовані з використанням рекомбінантних експресуючих векторів, трансфекованих в клітину-господар, антитіла, виділені з рекомбінантної, комбінаторної бібліотеки антитіл, антитіла, виділені з нелюдського тваринного (наприклад, кролика, миші, щура, вівці або кози), які є трансгенними для імуноглобулінових генів, або антитіла, отримані, експресовані, створені або виділені будь-якими іншими способами, які включають сплайсинг послідовності людських імуноглобулінових генів з іншими послідовностями ДНК. Такі модифіковані антитіла включають гуманізовані, СОК-щеплені (наприклад, антитіло, яке має
СОК з першого антитіла і каркасну область з іншого джерела, наприклад, іншого антитіла або консенсусного каркаса), химерні, отримані іп міго (наприклад, за допомогою фагового дисплея), антитіла і необов'язково можуть включати варіабельні або константні області, отримані з людських зародкових імуноглобулінових або людських імуноглобулінових генів або антитіл, які приготовлені, експресовані, створені або виділені за допомогою будь-яких інших способів, які включають сплайсинг послідовностей людських імуноглобулінових генів з альтернативними імуноглобуліновими послідовностями. У варіантах реалізації винаходу модифікована молекула антитіла включає молекулу антитіла, що має послідовність, що відрізняється від контрольного антитіла.
Термін "моноспецифічне антитіло" відноситься до антитіла або препарату антитіла, який демонструє одиничну зв'язуючу специфічність і афінність для певного епітопу. Цей термін включає "моноклональне антитіло" або "композицію моноклональних антитіл".
Термін "біспецифічне антитіло" або "біфункціональне антитіло" відноситься до антитіла, яке демонструє подвійну зв'язуючу специфічність для двох епітопів, де кожен сайт зв'язування
Зо розрізняє і розпізнає інший епітоп.
Терміни "не кон'юговане антитіло" і "голе антитіло" використовуються взаємозаміняємо для позначення молекули антитіла, що не кон'югована з не антитільним фрагментом, наприклад, речовиною або міткою.
Кожен з термінів "імунокон'югат", "кон'югат антитіло-лікарська речовина" і "кон'югат антитіла" є взаємозамінними і позначають антитіло, яке кон'юговано з не антитільним фрагментом, наприклад, речовиною або міткою. Термін "речовина" використаний в даному документі для позначення хімічної сполуки, суміші хімічних сполук, біологічної макромолекули і екстракту, отриманого з біологічних матеріалів. Термін "терапевтична речовина" відноситься до речовини, яка має терапевтичну активність. Прикладами терапевтичних речовин є хіміотерапевтичні речовини.
Термін "протиракова речовина" або "хіміотерапевтична речовина" використовується в даному документі для позначення речовин, які мають функціональну властивість інгібувати розвиток і прогресування новоутворення у людини, особливо злоякісного (ракового) пошкодження, такого як карцинома, саркома, лімфома або лейкемія. Інгібування метастазів або ангіогенезу найчастіше є властивістю протиракових або хіміотерапевтичних речовин.
Хіміотерапевтична речовина може бути цитотоксичною або цитостатичною речовиною. Термін "цитостатична речовина" відноситься до речовини, яка інгібує або пригноблює ріст клітин і/або розмноження клітин.
Термін "цитотоксичні речовини" відноситься до сполук, які, в першу чергу, викликають загибель клітин шляхом безпосереднього втручання у функціонування клітини, і включають алкілуючі агенти, інгібітори фактора некрозу пухлини, інтеркалятори, інгібітори мікротрубочок, кіназні інгібітори, протеасомні інгібітори і топоїзомеразні інгібітори, але не обмежуються ними. "Навантаження токсином", в контексті даного винаходу, відноситься до достатньої кількості цитотоксичного агента, який після доставки в клітину призводить до загибелі клітин. Доставка токсичного навантаження може бути досягнута шляхом введення достатньої кількості імунокон'югата, що містить антитіло або антигензв'язуючий фрагмент згідно винаходу і цитотоксичний агент. Також доставка токсичного навантаження може бути досягнута шляхом введення достатньої кількості імунокон'югата, що містить цитотоксичний агент, де імунокон'югат містить інше антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент, які розпізнають і зв'язують антитіло бо або антигензв'язуючий фрагмент згідно винаходу.
У контексті даного винаходу визначення послідовність, "отримана з" або "специфічні для зазначеної послідовності" відноситься до послідовності, яка містить безперервну послідовність, щонайменше, приблизно з б нуклеотидів або, щонайменше, 2 амінокислот, щонайменше, приблизно 9 нуклеотидів або, щонайменше, З амінокислот, щонайменше, приблизно 10-12 нуклеотидів або 4 амінокислот або, щонайменше, приблизно 15-21 нуклеотидів або 5-7 амінокислот, відповідних, тобто, ідентичних або комплементарних, наприклад, безперервній області із позначеної послідовності. В деяких варіантах реалізації винаходу послідовність включає всі позначені послідовності нуклеотидів або амінокислот. Послідовність може бути комплементарна (у разі полінуклеотидної послідовності) або збігатися з областю послідовності, яка є унікальною в певній послідовності, як визначено за допомогою способів, відомих в даній галузі техніки. Області, з яких послідовності можуть бути отримані, включають області, які кодують специфічні епітопи, області, які кодують СОМ, області, які кодують каркасні послідовності, області, які кодують константні області домену, області, які кодують варіабельні області домену, а також нетрансльовані і/або нетранскрибуємі області, але не обмежуються ними. Отримана послідовність не обов'язково буде отримана фізично із представляючої інтерес послідовності при дослідженні, але може бути отримана будь-яким способом, включаючи хімічний синтез, реплікацію, зворотну транскрипцію або транскрипцію, виходячи з інформації, наданої послідовністю підстав в області (-ях), з якої одержано полінуклеотид, але не обмежуючись ними. У цьому зв'язку вона може являти собою або смислову або антисмислову орієнтацію вихідного полінуклеотида. Крім того, комбінації областей, відповідні тим, що у зазначеній послідовності, можуть бути змінені або об'єднані способами, відомими в даній галузі техніки, щоб бути сумісними з передбачуваним використанням. Наприклад, послідовність може містити дві або більше суміжних послідовностей, які містять частину зазначеної послідовності і розімкнуті областю, яка не ідентична зазначеній послідовності, але призначена представляти послідовність, отриману із зазначеної послідовності. Що стосується молекул антитіл, "отримані з неї" включають молекулу антитіла, яка функціонально або структурно пов'язана з антитілом порівняння, наприклад, "отримані з неї" включають молекулу антитіла, що має аналогічну або, по суті, ту ж послідовність або структуру, наприклад, мають ті ж або схожі СОК, каркас або варіабельні області. "Отримані з них" по відношенню до антитіл також включають залишки,
Ко) наприклад, один або декілька, наприклад, 2, 3, 4, 5, 6 або більше залишків, які можуть або не можуть бути суміжними, але які визначені або ідентифіковані у відповідності зі схемою нумерації або гомологією із загальною структурою антитіла або тривимірної просторової близькості, тобто, в межах СОК або каркасної області, послідовності порівняння. Термін "отримане з нього" не обмежується фізично одержуваними з нього, але включає отримання будь-яким способом, наприклад, шляхом використання інформації про послідовність з антитіла порівняння для розробки іншого антитіла.
У контексті даного винаходу визначення "кодується" відноситься до послідовності нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептидну послідовність, де послідовність поліпептиду або його частина містить амінокислотну послідовність, щонайменше, з 3-5 амінокислот, щонайменше, з 8-10 амінокислот або, щонайменше, з 15-20 амінокислот з поліпептида, кодованого послідовністю нуклеїнової кислоти.
У контексті даного винаходу термін "рак товстої і прямої кишки", також загальновідомий як рак товстої кишки або колоректальний рак, відноситься до раку від неконтрольованого росту клітин в товстій або прямій кишці (частини товстої кишки) або в апендиксі.
Терміни "рак шлунку" або "шлунковий рак" використовуються в даному документі взаємозамінно.
Обчислення "гомології" між двома послідовностями можуть бути виконані таким чином.
Послідовності вирівнюють з метою оптимального порівняння (наприклад, можуть бути введені прогалини в одну або обидві, першу і другу, амінокислотні або нуклеїновокислотні послідовності для оптимального вирівнювання, а негомологічними послідовностями для цілей порівняння можна знехтувати). Довжина референсної послідовності, вирівняної з метою порівняння, становить, щонайменше, 3095, 4095 або 5095, щонайменше, 6095 або, щонайменше, 7095, 8090, 9095, 9595, 10095 від довжини вихідної послідовності. Потім порівнюють амінокислотні залишки або нуклеотиди у відповідних амінокислотних положеннях або нуклеотидних положеннях. Коли положення в першій послідовності займають ті ж амінокислотні залишки або нуклеотиди, що й у відповідному положенні в другій послідовності, то молекули ідентичні в цьому положенні (як використано в даному документі "їдентичність" амінокислоти або нуклеїнової кислоти еквівалентна "гомології" амінокислоти або нуклеїнової кислоти). Відсоток ідентичності між двома послідовностями є функцію кількості ідентичних положень, загальних для бо послідовностей, зважаючи на кількість прогалин і довжину кожного розриву, які повинні бути введені для оптимального вирівнювання двох послідовностей.
Порівняння послідовностей та визначення відсотка гомології між двома послідовностями може бути досягнуто з використанням математичного алгоритму. Відсоток гомології між двома амінокислотними послідовностями може бути визначений за допомогою будь-якого способу, відомого в даній області. Наприклад, Меедієтап апа Ууип5сй, У. Мої. Віої. 48: 444-453 (19790), алгоритм, який був включений в програму САР в пакеті програм СО з використанням матриксу
Віоззит 62 або матриксу РАМ250О і штрафу за відкриття гепа, що становить 16, 14, 12, 10, 8, 6 або 4, та штрафу за продовження гепа, що становить 1, 2, 3, 4, 5 або 6. Відсоток гомології між двома нуклеїновокислотними послідовностями також може бути визначений за допомогою програми САР в пакеті програм СО (Ассеїегуз, Іпс. зап Оіедо, Саїї.) з використанням матриксу
МУузЗдарапа.СМР і штрафу за відкриття гепа, що становить 40, 50, 60, 70 або 80, і штрафу за продовження гепа, що становить 1, 2, 3, 4, 5 або 6. Прикладом набору параметрів для визначення гомології є оцінна матриця Віоз5ит 62 зі штрафом за пропуск в послідовності 12, штрафом за продовження делеції 4 і штрафом за пропуск в зрушенні рамки зчитування 5.
У контексті цього винаходу термін "гібридизується в жорстких умовах" описує умови гібридизації і промивання. Керівництво для виконання реакцій гібридизації можна знайти в
Ситепі Ргоїюсої!5 іп МоІесшаг Віоіоду, Чопйп Ууйеу 4 Боп5, МУ (1989), 6.3.1-6.3.6. Можуть бути використані водні та неводні методи, згадані в цьому документі. Специфічні умови гібридизації, згадані в цьому документі, є наступними: 1) гібридизація в умовах зниженої жорсткості - в 6Х хлориді натрію/цитраті натрію (550) при температурі приблизно 45 "С з подальшими двома промиваннями в 0,2Х 55С, 0,196 505 щонайменше при 50 "С (температура промивання може бути підвищена до 55 "С в умовах зниженої жорсткості); 2) гібридизація в умовах помірної жорсткості - в 6Х 55С при температурі приблизно 45 "С з подальшими одним або більше промиваннями в 0,2Х 55С, 0,195 505 при 60 "С; 3) гібридизація в умовах підвищеної жорсткості - в 6Х 55Х при температурі приблизно 45 "С з подальшими одним або більше промиваннями в 02х 55С, 0,195 505 при 65 "С; і 4) гібридизація в умовах дуже високої жорсткості - в 0,5М фосфаті натрію, 795 505 при 65 "С з подальшими одним або більше промиваннями в 0,2 Х
ЗзЗС, 195 505 при 65 "С. Умови дуже високої жорсткості (4) часто є переважними умовами, і вони, якщо не вказано інше, повинні бути використані.
Зо Зрозуміло, що антитіла і їх антигензв'язуючі фрагменти згідно винаходу можуть мати додаткові консервативні або замінні амінокислотні заміщення, які не мають істотного впливу на поліпептидні функції. Чи буде конкретне заміщення толерантним чи ні, тобто, не буде негативно впливати на бажані біологічні властивості, такі як зв'язуюча активність, можна визначити, як описано у Воуле, УШ еї а. Зсіепсе 247: 1306-1310 (1990) або Радіап еї аІ. РАЗЕВ .). 9: 133-139 (1995). "Консервативне амінокислотне заміщення" є тим, при якому амінокислотний залишок заміщають на амінокислотний залишок, що має подібний бічний ланцюг. Групи амінокислотних залишків, що мають подібні бічні ланцюги, були визначені в галузі техніки. Ці групи включають амінокислоти з основними бічними ланцюгами (наприклад, лізин, аргінін, гістидин), кислотними бічними ланцюгами (наприклад, аспарагінова кислота, глутамінова кислота), незарядженими полярними бічними ланцюгами (наприклад, аспарагін, глутамін, серин, треонін, тирозин, цистеїн), неполярними бічними ланцюгами (наприклад, гліцин, аланін, валін, лейцин, ізолейцин, пролін, фенілаланін, метіонін, триптофан), бета-розгалудженими бічними ланцюгами (наприклад, треонін, валін, ізолейцин) та ароматичними бічними ланцюгами (наприклад, тирозин, фенілаланін, триптофан, гістидин). "Замінним" амінокислотним залишком є залишок, який може бути замінений в послідовності дикого типу зв'язуючої речовини, наприклад, антитіла, не скасовуючи або без істотної зміни біологічної активності, в той час як "незамінний" амінокислотний залишок призводить до такої зміни. В антитілі незамінний амінокислотний залишок може бути залишком, що визначає специфічність (ЗОК).
У контексті даного винаходу термін "виділений" відноситься до матеріалу, який видаляється із свого первісного середовища (наприклад, природне середовище, якщо воно природного походження). Наприклад, в природі полінуклеотид або поліпептид присутній в живому організмі тварини не ізольовано, але той же самий полінуклеотид, або поліпептид, або ДНК, відділений від деяких або всіх співіснуючих матеріалів у природній системі, ізольований. Такий полінуклеотид або поліпептид може бути частиною вектора і/або частиною композиції, наприклад, суміші, розчину або суспензії, або включаючи виділену клітину або культивовану клітину, яка містить полінуклеотид або поліпептид, і продовжувати бути виділеним, оскільки вектор або композиція не є частиною його природного середовища.
У контексті даного винаходу термін "реплікон" відноситься до будь-якого генетичного 60 елементу, такого як плазміда, хромосома або вірус, який виступає як автономна одиниця полінуклеотидної реплікації в клітині.
У контексті даного винаходу термін "функціонально зв'язаний" відноситься до ситуації, коли описані компоненти знаходяться у взаємозв'язку, що дозволяє їм функціонувати призначеним їм способом. Таким чином, наприклад, керуюча послідовність, "функціонально пов'язана" з кодуючою послідовністю, лігована таким чином, що експресія кодуючої послідовності досягається в умовах, сумісних з керуючою послідовністю.
У контексті даного винаходу термін "вектор" відноситься до реплікону, в якому другий полінуклеотидний сегмент приєднаний, наприклад, щоб викликати реплікацію та/або експресію приєднаного сегмента.
У контексті цього винаходу термін "керуюча послідовність" відноситься до полінуклеотидної послідовності, яка необхідна для здійснення експресії кодуючої послідовності, до якої вона лігована. Природа таких керуючих послідовностей відрізняється в залежності від організму- господаря. У прокаріотів такі керуючі послідовності, як правило, містять промотор, сайт зв'язування рибосом і термінатори, і, в деяких випадках, енхансери. Таким чином, термін "керуюча послідовність" призначений охоплювати, як мінімум, всі компоненти, присутність яких необхідна для експресії і може також включати додаткові компоненти, присутність яких є бажаною, наприклад, лідерні послідовності.
У контексті даного винаходу термін "очищений продукт" відноситься до одержання продукту, який був виділений з клітинних складових, з якими продукт зазвичай пов'язаний, та/або від інших типів клітин, які можуть бути присутніми в зразку, що досліджується.
У контексті даного винаходу термін "епітоп" відноситься до білка, який визначає здатність специфічно зв'язуватися з антитілом. Епітопні детермінанти зазвичай складаються з хімічно активних поверхневих угруповань молекул, таких як амінокислоти або бічні ланцюги цукрів, і, як правило, мають специфічні тривимірні структурні характеристики, а також специфічні характеристики зарядів. Деякі епітопи є лінійними епітопами, тоді як інші є конформаційними епітопами. Лінійний оепітоп є епітопом, в якому безперервна вихідна амінокислотна послідовність включає розпізнаваний епітоп. Лінійний епітоп, як правило, містить, щонайменше,
З і зазвичай, щонайменше, 5, наприклад, приблизно від 8 до приблизно 10 суміжних амінокислот. Конформаційний епітоп може виникати в результаті, щонайменше, двох ситуацій, таких як: а) лінійна послідовність, яка піддається впливу тільки зв'язуванню антитіл в деяких білкових конформаціях, наприклад, в залежності від зв'язування ліганда або залежно від модифікації (наприклад, фосфорилювання) за допомогою сигнальних молекул; або б) поєднання структурних особливостей з більш ніж однієї частини білка або в мультисубодиничних білках з більш ніж однієї субодиниці, в яких конструктивні компоненти знаходяться досить близько в З-вимірному просторі, щоб брати участь у зв'язуванні.
У контексті даного винаходу термін "ізотип" відноситься до класу антитіл (наприклад, І9М,
ІЧДА, ІЗЕ або Ідс), які кодуються генами константної області важкого ланцюга.
У контексті даного винаходу терміни "агент, що визначають", "мітка" або "мічений" використовуються для позначення включення маркера, що визначають, в поліпептид або глікопротеїн. Різні способи мічення поліпептидів і глікопротеїнів відомі в даній галузі техніки і можуть бути використані. Приклади міток для поліпептидів включають наступні: радіоізотопи або радіонукліди (наприклад, індію (п), йоду (1 або "25І), ітрію (У), лютецію (77 у), актинію (225Ас), вісмуту (22Ві або 2'ЗВІі), сірки (355), вуглецю (7С), тритію (ЗН), родію (88), технецію (тс), празеодиму або фосфору (ЗР) або позитрон-випромінюючі радіонукліди, наприклад, вуглець-11 (7), калій-40 ("9К), азот-13 (ЗМ), кисень-15 (150)5, фтор-18 (8Е), галій-68 (9864) і йод-121 (127І)), флуоресцентні мітки (наприклад, РІТС, родамін, люмінофори на основі комплексів лантанідів), ферментні мітки (наприклад, пероксидаза хрону, бета-галактозидази, люциферази, лужна фосфатаза), хемілюмінесценти, біотінільні групи (які можуть бути виявлені за допомогою міченого авідина, наприклад, молекули, що містить стрептавідиновий фрагмент і флуоресцентний маркер або ферментативну активність, що може бути виявлено за допомогою оптичних або калориметричних методів) і попередньо певні поліпептидні епітопи, розпізнавані вторинним репортером (наприклад, пари послідовностей лейцинової "блискавки", сайти зв'язування вторинних антитіл, метал-зв'язуючі домени, епітопної мітки), але не обмежуються ними. В деяких варіантах реалізації винаходу, мітки прикріплені за допомогою спейсерних ніжок різної довжини для зниження потенційної стеричної невідповідності.
У контексті даного винаходу терміни "специфічне зв'язування", "пов'язані специфічно" або "специфічність зв'язування" означають для молекули анти-сСс антитіла, що молекула антитіла зв'язує СС, наприклад, людський білок СС з більшою афінністю, ніж вона зв'язує не-аСбо білок, наприклад, В5А. Зазвичай анти-сСС молекула має Ка для не-ССС білка, наприклад, 60 В5А, яка більше ніж в 2 рази, більше ніж в 10 разів, більше ніж в 100 разів, більше ніж в 1000 разів, більше, ніж в 102 разів, більше ніж в 10»разів або більше ніж в 105 разів ніж її Ко для ССС, наприклад, біль»а ЗСС людини. При визначенні Ка, К Ка для ОСС і не-сСсС білка, наприклад,
В5А, повинно бути зроблено за однакових умов.
Термін "афінність" або "афінність зв'язування" відноситься до умовної константи асоціації або Ка. Ка являє собою зворотну величину константи дисоціації (Ка). Антитіло може, наприклад, мати афінність зв'язування, щонайменше, 105, 106, 107, 1089, 109, 10190 ї 1011 М"для конкретної молекули-мішені. Більш висока афінність зв'язування антитіла з першою мішенню в порівнянні з другою мішенню може вказувати на більше значення КА (або менше числове значення Кб) для зв'язування першої мішені, ніж Ка (або числове значення Кб) для зв'язування другої мішені. В таких випадках антитіло має специфічність для першої мішені (наприклад, білка в першій конформації або її імітації) в порівнянні з другою мішенню (наприклад, тим же білком в другій конформації або її імітацією, або іншим білком). Відмінності в афінності зв'язування (наприклад, щодо специфічності або інших порівнянь) може становити щонайменше 1.5, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 37.5, 50, 70,80, 91, 100, 500, 1000 або 105 разів.
Афінність зв'язування може бути визначена за допомогою різних методів, в тому числі методами рівноважного діалізу, рівноважного зв'язування, гель-фільтрації, ІФА, поверхневого плазмонного 19 акт см резонансу або спектроскопії (наприклад, за допомогою флуоресцентного аналізу). Наприклад, відносна афінність молекули анти-зСсС антитіла може бути виміряна методом ІФА відносно білка ССС (наприклад, імуногена, що використовується для підняття молекул анти-5СС антитіл), за результатами вимірів БАС5 з клітинами, експресуючими СС.
Приклади умов для оцінки афінності зв'язування представлені в ТЕІ5-буфері (50 мМ ТКЇ5, 150 мМ Масі, 5 мм Сасіг при рН 7.5). Дані методи можуть бути використані для вимірювання концентрації зв'язаного і вільного зв'язуючого білка в залежності від концентрації зв'язуючого білка (або мішені). Концентрація зв'язаного зв'язуючого білка (ІЗв'язаний|) залежить від концентрації вільного зв'язуючого білка (ІВільний!) і концентрацією сайтів зв'язування зв'язуючого білка на мішені, де (М) являє собою кількість сайтів зв'язування на кожну мішень- молекулу відповідно до наступного рівняння:
ІЗв'язаний) - М - |Вільний|((1/Ка) ІЗв'язаний!|).
Не завжди потрібно точне визначення КА, хоча іноді достатньо отримати кількісний вимір афінності, наприклад, визначеній методом ІФА або ГАС5, яка пропорційна Ка ії, таким чином, може бути використана для порівнянь, наприклад, для визначення того, чи більш висока афінність, наприклад, вища в 2 рази, з метою отримання якісного виміру афінності або для отримання висновку про афінність, наприклад, по активності у функціональному аналізі, наприклад, в аналізі іп міго або іп мімо. Афінність молекул анти-зСсС антитіл також може бути виміряна з використанням технологій, таких як аналіз біомолекулярної взаємодії в режимі реального часу (ВІА) (дивись, наприклад, 5іоіападег, 5 апа Ограпіс:Ку, С., 1991, АпаІ. Спет. 63: 2338- 2345 і 52абро еї аї!., 1995, Си. Оріп. 5ігисі. ВіоїЇ. 5: 699-705). У контексті даного винаходу терміни "ВІА" або "поверхневий плазмонний резонанс" позначають технологію для вивчення біспецифічних взаємодій в режимі реального часу, без маркування якого або з взаємодіючих компонентів (наприклад, ВІАСОКЕ"М). Зміни маси поверхні зв'язування (що вказує на факт зв'язування) призводять до змін показника заломлення світла поблизу поверхні (оптичне явище поверхневого плазмонного резонансу (З5РК)), результатом чого є сигнал, який визначають и який може бути використаний як вказівки реального часу реакції між біологічними молекулами.
Вимірювання афінності молекул анти-зСС антитіл з використанням системи ВІАСОКЕ "М
Т100 (СЕ Неайсаге, Різсаїаумау, МУ) описується в прикладі 1 заявки на патент США Мо 2011/0110936, зміст якої включено в даний документ за допомогою посилання в повному обсязі.
Коротко, антитіла анти-с4СС (Ргер А) розбавляють до відповідної концентрації (наприклад, 20 мкг/мл) 10 мМ ацетату натрію, рН 4,0, а референсне/контрольне антитіло (Ргер В) розбавляють до відповідної концентрації (наприклад, 10 мкг/мл) в 10 мМ ацетату натрію, рН 4,0. Кожне антитіло ковалентно іммобілізують на декількох чипах СМ4 ВІАСОКЕ з використанням стандартного для зв'язування аміну. Для кожного підготовленого чипа СМА іммобілізують антитіло Ргер А удвох проточних вимірювальних кюветах в межах 75-100 КИ, а антитіло Ргер В іммобілізують в одній проточній лунці в межах 70-80 КО. Четверта проточна лунка кожного чипа
СМА, який залишився, використовується як еталонна проточна лунка. Концентрація білка ОСС може бути визначена з використанням методів, описаних Расе еї аї. іп Ргоївіп 5сіепсе, 4: 2411 (1995) і Расе апа Сгітвієу іп Сигтгепі Ргоїосої5 іп Ргоївіп Зсіепсе 3.1.1-3.1.9 (2003). Для кожного підготовленого чипасма4 білок СС вводять протягом 2 хвилин в діапазоні концентрацій 202 нм -1,6 нМ (2-х серійне розведення) з подальшою 7-хвилинною дисоціацією. Зразки випадковим бо чином вводять в трьох повторностях з декількома циклами буферних ін'єкцій упереміж для подвійного контролю. Для отримання більш значних даних зниження швидкості дисоціації три додаткових ін'єкції білка СС по 101 нМ їі три додаткові ін'єкції буфера виконуються з 2- хвилинною ін'єкцією і 4-годинним часом дисоціації. Швидкість потоку в 100 мкл/хв використовується для всіх експериментів, і всі поверхні відновлюють 20-секундним витісненням мМ гліцину-НСІ (рН 2,0). Всі зразки отримують в рухомому буфері (наприклад, ГЕПЕС- забуференому фізіологічному розчині, 0,00595 полісорбату 20, рН 7,4 (НВ5-Р)) з доданими 100 мкг/мл В5А. Всі дані сенсограм (залежність поверхневого плазмонного резонансу від часу) можуть бути оброблені за допомогою програмного забезпечення Зсгибрег 2.0 (Віої одіс
БЗоймаге, СатррбеїЇ, А!йвігаійа) і глобально підходять до моделі взаємодії 111, включаючи час 10 константи переносу маси Кт з використанням програмного забезпечення СІ АМР'М (Муз2Ка апа
Могпоп Ттепаз Віоспет. сі. 23:149-150 (1998)).
У контексті даного винаходу термін "лікувати" або "лікування" визначається як введення молекули анти-ССС антитіла суб'єкту, наприклад, пацієнту, або введення, наприклад, шляхом застосування в ізольованій тканині або клітині від суб'єкта, які повертаються суб'єкту. Молекула анти-ССС антитіла може бути введена окремо або в комбінації з іншим агентом. Лікування може бути виліковуванням, загоєнням, полегшенням, зменшенням, зміною, тимчасовим полегшенням, поліпшенням, пом'якшенням, поліпшенням або впливом на розлад, симптоми розладу або схильність до розладів, наприклад, раку. Без прив'язки до теорії, лікування, як вважають, викликає гальмування, абляції або знищення клітини іп мйго або іп мімо або іншим шляхом знижує потенціал клітини, наприклад, аномальної клітини, яка опосередковує порушення, наприклад, порушення, як описано в даному документі (наприклад, рак).
У контексті даного винаходу термін "суб'єкт" призначений для охоплення ссавців, приматів, людей та інших тварин. Наприклад, суб'єкт може бути пацієнтом (наприклад, пацієнтом- людиною або ветеринарним пацієнтом), які страждають від раку, при якому, щонайменше, деякі з клітин експресують СС, такий як рак шлунково-кишкового походження (наприклад, рак товстої і прямої кишки, рак шлунку, рак тонкої кишки або рак стравоходу), рак підшлункової залози, рак легень (наприклад, плоско-клітинна карцинома, аденосквамозна карцинома, аденокарцинома), саркома м'яких тканин (наприклад, лейоміосаркома або рабдоміосаркома), нейроендокринні пухлини (наприклад, шлунково-кишкові або бронхолегеневі) або
Зо нейроектодермальні пухлини; симптом такого експресує СС раку; або схильність до таких експресуючих ССС раковим хворобам. Як інший приклад, суб'єкт може бути пацієнтом, який має шлунково-кишкове порушення, при якому, щонайменше, деякі з клітин шлунково-кишкового тракту експресують ОСС, такі як синдром запаленого кишківника, хвороба Крона і закріп. В якості ще одного прикладу, суб'єктом може бути пацієнт, який має неврологічні порушення, при яких, щонайменше, деякі нейрони центральної нервової системи пацієнта експресують СС, такі як хвороба Паркінсона. Термін "інші тварини" згідно винаходу включає всіх нелюдських хребетних, наприклад, інших ссавців і не ссавців, таких як примати, вівці, собаки, корови, кури, амфібії, рептилії, миші, щури, кролі або кози і т.д., якщо не вказано інше. У варіанті реалізації винаходу, термін "суб'єкт" виключає одного або більше або всіх мишей, щурів, кролів або кіз.
У контексті даного винаходу кількість молекули анти-ссСс антитіла терміни "ефективна" або "достатня для лікування розладу" або "терапевтично ефективну ефективна кількість" або "терапевтично достатня кількість" відносяться до кількості молекули антитіла, яка є ефективною при одноразовому або багаторазовому введенні дози пацієнту при лікуванні клітини, наприклад, ракової клітини (наприклад, зСС-експресуючих пухлинних клітин) або у продовженні одужання, пом'якшення, полегшення або поліпшення стану суб'єкта з порушенням, як описано в даному документі, крім того, що очікується у відсутності такого лікування. У контексті даного винаходу термін "інгібування росту" пухлини або раку відноситься до уповільнення, переривання, затримки або зупинки її росту і/або метастазів і не обов'язково вказує на повну ліквідацію росту пухлини.
У контексті даного винаходу білок "зЗСС" також відомий як "ЗТАК", "з0С2С", "ЗОСУ2с" або "рецептор 5" відноситься до білка 5СС ссавця, переважно людського білка СС. Людська оСсС відноситься до білка, показаного в ЗЕО ІЮ Мо 3, ії його алельних білкових варіантах природного походження. Аллель в 5ЕБО ІЮ Мо 2 може кодуватися нуклеїновокислотною послідовністю СС, показаної в ЗЕО ІЮО Мо 2. Інші варіанти відомі з рівня техніки. Дивись, наприклад, номер доступу ЕпзхрО000261170, Епзетбі Оагаразе, Еигореап Віоіптогтаїййсз5 Іпвзійше і
Умеїсоте Тгиві Запдег Іпзійше, у якого залишок лейцину знаходиться в положенні 281; 5ЕО ІЮ
Мо 14 в патентній публікації США Мо 20060035852; або СепВапк номер доступу ААВ 19934. Як правило, в природі алельний варіант має амінокислотну послідовність, щонайменше, на 95905, 9795 або 9995 ідентичну послідовності (СС з ЗЕО ІЮ Мо 3. Транскрипт кодує білковий продукт з бо 1073 амінокислот і описаний в СепВапк номер доступу; ММ 004963. Білок СС характеризується як білок поверхневих рецепторів трансмембранних клітин і, як вважають, відіграє важливу роль у підтримці кишкової рідини, електролітного гомеостазу та проліферації клітин.
Анти-ОСС антитіла
Описані в цьому документі молекули анти-зСС антитіл корисні іпіег айа для виявлення експресії 3зСС. Молекули анти-аСс антитіл, наприклад, корисні для виявлення СС, можуть містити молекулу нелюдських анти-зСсС антитіл (наприклад, молекули не людських і не мишачих антитіл), які специфічно зв'язують (СС, наприклад, з афінністю зв'язування, щонайменше, 103, 102, 105, 106, 107108, 109, 1010 ї 1011 М" для СС. Молекула анти-СО антитіла може бути молекулою не людського, не мишачого і не щурячого антитіла, наприклад, молекулою кролячого анти-зСс антитіла, наприклад, як описано в даному документі.
В деяких аспектах винахід відноситься до молекул анти-осСс антитіл, які містять характерні особливості, такі як ті, що узагальнені в Таблицях 1 і 2. В інших аспектах винахід відноситься до молекул анти-сСсС антитіл, які містять характерні особливості, такі як ті, що узагальнені в
Таблицях 3, 4, 5 і/або 6.
У варіанті реалізації винаходу молекула анти-зСС антитіла є кролячим гібридомним антитілом і являє собою одне з антитіл МІ! -44-148-2 або МІ! -44-67-4. У варіанті реалізації винаходу молекула анти-сСС антитіла отримана з антитіла МІ! -44-148-2 або МІ -44-67-4.
У варіанті реалізації винаходу молекула анти-зСС антитіла матиме афінність до СС, наприклад, як виміряно за допомогою аналізів прямого зв'язування або конкурентного зв'язування. У варіанті реалізації винаходу молекула анти-ЗСс антитіла має Ка менше ніж 1х10- 6 М, менше ніж 1х10- М, менше ніж 1х108 М, менше ніж 1х109 М, менше ніж 1 х10-79 М, менше ніж 1х10-7 М, менше ніж 1х10-2 М або менше ніж 1х10-3 М. У варіанті реалізації винаходу молекула антитіла є (ДС або антигензв'язуючим фрагментом і має Ка менше ніж 1х10- М, менше ніж 1х10-7 М, менше ніж 1х108 М, менше ніж 1х109 М. У варіанті реалізації винаходу молекула анти-ССС антитіла, наприклад, антитіло МІ -44-148-2 або антитіло, отримане з нього, має Ка від приблизно 80 до приблизно 200 пМ, переважно від приблизно 100 до приблизно 150
ПМ або приблизно 120 пМ. У варіанті реалізації винаходу молекула анти-ссСсС антитіла, наприклад, антитіло МІ -44-148-2 або антитіло, отримане з нього, має Ка від приблизно 0,9 до приблизно 1,25х105 М" с", переважно приблизно 1,1х105 М" с". У варіанті реалізації винаходу молекула антитіла являє собою 5сЕм і має Ка менше ніж 1х105 М, менше ніж 1х10-7 М, менше ніж 1х108 М, менше ніж 1х107 М, менше ніж 1х1079 М, менше ніж 1х10-! М, менше ніж 1 х1072 М або менше ніж 1 х10-3 М.
В варіантах реалізації винаходу молекули антитіл не є імунокон'югатами, тобто, являють собою "голі" антитіла і у варіантах реалізації винаходу викликають клітинну реакцію при зв'язуванні з СС. В споріднених варіантах реалізації винаходу клітинна реакція здійснюється сбб-експресуючою клітиною, з якою зв'язується антитіло. Така клітинна реакція може бути сигнальною трансдукцією, опосередкованої ЗСС, наприклад, якщо молекула антитіла є агоністом ССС (дивись, наприклад, публікацію патентної заявки США Мо. 20040258687). В інших варіантах реалізації винаходу клітинна реакція здійснюється іншою клітиною, наприклад, імунною ефекторною клітиною (наприклад, природними клітинами-кілерами), яка розпізнає молекулу антитіла, пов'язаного з (зЗСС на першій клітині. В деяких варіантах реалізації винаходу контрольні молекули, наприклад, комплементарні молекули, контактують з зСС-пов'язаною молекулою антитіла до клітинної реакції. Клітинні реакції в цих варіантах можуть викликати загибель СС-експресуючої клітини.
У додаткових варіантах реалізації винаходу молекули антитіл, які є імунокон'югатами, можуть викликати клітинну реакцію при зв'язуванні з зЗСС і інтерналізовувати для доставки агента до зСС-експресуючої клітини, з якою він зв'язується.
В деяких варіантах реалізації винаходу молекула анти-ссСс антитіла згідно винаходу може блокувати зв'язування ліганда з ССС.
У варіанті реалізації винаходу молекула антитіла не є ССС:В10, 5СС:407 або ССС:С8. В іншому варіанті реалізації винаходу молекула анти-й2СС антитіла не зв'язується з внутрішньоклітинним доменом СС біля амінокислотного залишку в положеннях від 455 до 1073 з 5ЕО ІЮО Мо 3. Наприклад, в цьому варіанті реалізації винаходу молекула анти-аСС антитіла не пов'язує домен кіназної гомологічності або домен гуанілілциклази в СС.
Структурна одиниця природного антитіла ссавця є типовим представником тетрамера.
Кожен тетрамер складається з двох пар поліпептидних ланцюгів, кожна пара має один "легкий" (приблизно 25 кДа) і один "важкий" ланцюг (приблизно 50-70 кДа). Аміно-кінцева частина кожного ланцюга містить варіабельну область від приблизно 100 до 110 або більше бо амінокислот, які спочатку відповідають за розпізнавання антигена. Карбокси-кінцева частина кожного ланцюга визначає константну область, відповідальну, головним чином, за ефекторну функцію. Людські легкі ланцюги можуть бути класифіковані як каппа і лямбда легкі ланцюги.
Важкі ланцюги можуть бути класифіковані як мю, дельта, гамма, альфа або епсилон і визначають ізотип антитіла як ІДМ, дО, Іде, ІдА і ЧЕ, відповідно. В легких і важких ланцюгах варіабельні і константні області з'єднані ")" областю з приблизно 12 або більше амінокислот, з важким ланцюгом, також включає область "0" з приблизно 10 або більше амінокислот.
Дивитися, особливо, Рипдатепіа! Іттипоіоду Спи. 7 (Раш, М/., ед., 2па ей. Вамеп Ргевзв5, МУ (1989)). Варіабельні області кожної пари легких/важких ланцюгів утворюють сайт зв'язування антитіла. Переважними ізотипами для молекул анти-зСсС антитіл є дО імуноглобуліни, які можна розділити на чотири підкласи, Ідс1, Ідс2, ІдсЗ і Ідс4, що мають різні гамма важкі ланцюги. Більшість терапевтичних антитіл є людськими, химерними або гуманізованими антитілами ізотипа Ідс1. У конкретному варіанті здійснення молекула анти-ссСс антитіла являє собою антитіло Їдс кролика.
Варіабельні області кожної пари важкого і легкого ланцюга утворюють сайт зв'язування антигену. Таким чином, інтактне до антитіло має два зв'язуючих сайта, які є однаковими. Тим не менш, біфункціональні або біспецифічні антитіла являють собою штучні гібридні конструкції, які мають дві різні пари важких/легких ланцюгів, що дають два різних сайта зв'язування.
Всі ланцюги мають однакову загальну структуру щодо консервативних каркасних областей (ЕК), з'єднаних трьома гіперваріабельними областями, які також називаються визначальними комплементарними областями або СОК (-ами). СОР (-и) з двох ланцюгів кожної пари вирівняні каркасними областями, даючи можливість зв'язуватися зі специфічним епітопом. Від М-кінця до
С-кінця як легкі, так і важкі ланцюги містять домени ЕК!Т, СОКІ, ЕК2, СОК2, ЕКЗ, СОКЗ і ЕКА4.
Приписування амінокислот до кожного домену здійснюється відповідно до визначень послідовностей Кабраї білків, що представляють імунологічний інтерес (Маїййопа! Іпбійшев ої
Неані, Веїпезаа, Ма. (1987 і 1991)) або Споїіа 8. І е5К У. Мої. Віої. 196: 901-917 (1987); Споїтіа еї а!. Маїште 342: 878-883 (1989). У контексті даного винаходу, СОК відносяться як до важкого ланцюга (НСОК1, НСОК2, НОСОК), так і до легкого ланцюга (СОК1, СОК2, І СО).
Молекула анти-сСсС антитіла може містити всі або антигензв'язуючу підмножину СОК (-ів) однієї або обох, як важкого, так і легкого ланцюга, одного з вищезазначених антитіл кролика.
Амінокислотні послідовності гібридомного кролячого антитіла, включаючи варіабельні області та СОК, можна знайти в Таблиці З і Таблиці 5.
Таким чином, у варіанті реалізації винаходу молекула антитіла містить одне або обидва з наступного: (а) одна, дві, три або антигензв'язуюча кількість СОК (-ів) легкого ланцюга (СОР, І СОК2 або Ї/СОКЗ) одного з вищезазначених гібридомних антитіл кролика. В варіантах реалізації винаходу СОК (-и) можуть містити амінокислотні послідовності однієї або декількох або всіх
ЇСОВ1-3 наступним чином: ЇСОМК1 або модифікована ГСОКІ, в якій від однієї до семи амінокислот консервативно замінені; Ї СОК2 або модифікована І СОК2, в якій від однієї до двох амінокислот консервативно замінені; або Ї/СОКЗ або модифікована І СОКЗ, в якій від однієї до двох амінокислот консервативно замінені; і (Б) одна, дві, три або антигензв'язуюча кількість СОК важкого ланцюга (НСОКІ1, НОСОК і/або
НОСОК) одного з вищезазначених гібридомних антитіл кролика. В варіантах реалізації винаходу
СОВ (-и) може містити амінокислотні послідовності однієї або декількох або всіх НСОМК1-3 наступним чином: НСОКІ або модифікована НСОМК'І, в якій від однієї до двох амінокислот консервативно замінені; НСОК2 або модифікована НСОМК2, в якій від однієї до чотирьох амінокислот консервативно замінені; або НСОКЗ або модифікована НСОКЗ, в якій від однієї до двох амінокислот консервативно замінені.
Корисні імуногени для отримання молекул анти-зСсС антитіл включають СС, наприклад,
СсСС-експресуючі клітини людини (наприклад, пухлинні клітинні лінії, наприклад, клітини Т84 або свіжі або заморожені клітини раку товстої кишки, рекомбінантні клітини, які експресують ССС); мембранні фракції зСС-експресуючих клітин (наприклад, клітинна лінія пухлини товстої кишки, наприклад, клітини Т84) або свіжі або заморожені товстокишкові пухлинні клітини; рекомбінантні клітини, які експресують СС; виділену або очищену СС, наприклад, білок СС людини (наприклад, біохімічно виділена СС, наприклад, виділена з шлунково-кишкових пухлинних клітин або рекомбінантної клітини, експресуючий ОСС або її варіант) або її частина (наприклад, позаклітинний домен (СС, область кіназної гомології ССС або каталітичний домен гуанілатциклази ССС або пептид, відповідний його частині, наприклад, містить, щонайменше, приблизно 8, 10, 12, 14, 16, 20, 24, 28 або 32 амінокислотні залишки 5ЕО ІЮ Мо 3); або імуноген, що включає 5ЕО ІЮ Мо 46, або містить його зрілу частину без сигнальні послідовності (тобто, 60 без амінокислотних залишків від 1 до приблизно 21 або 23 з 5БЕО ІО Мо 46), наприклад, зрілого білка пОСС (ЕС) -тідсг2а ЕсВА г1-тШ (також згадується в цьому документі як "рі КТОК108"),
ЗЕО ІЮ Мо 48.
Імуногени можуть бути злитими з гетерологічними послідовностями, щоб допомогти в біохімічних маніпуляціях очистки, імунізації або вимірювання титру антитіла. Такі імуногени можуть містити частину ОСС, наприклад, позаклітинний домен і частина, що містить не-аСбС поліпептид. Існує багато варіантів для побудови злитих білків для полегшення очищення або іммобілізації на твердому носії, наприклад, афінній колонці або планшеті для мікро-титрування або іншому придатному аналітичному субстраті/чипі. Наприклад, злитий фрагмент може додати домен, наприклад, глутатіон-5-трансферази/кінази (5), який може зв'язувати глутатіон; Ес- область імуноглобуліну, яка може зв'язуватися з білком А чи білком б; амінокислотні залишки, наприклад, два, три, чотири, п'ять, переважно шість залишків гістидину, які можуть зв'язуватися з нікелем або кобальтом на афінній колонці; епітопну мітку, наприклад, частина онкогенна с-тус (тус-маркер), маркер ЕГАС (патент США Ме 4703004), маркер гемаглютиніну (НА), маркер 10 гена Т7, маркер М5, маркер НЗМ або маркер М5М-б, який може зв'язати маркер специфічне антитіло; або кофактор, наприклад, біотин, який може зв'язати стрептавідину.
Імуногени, які містять частину Ес імуноглобуліну, можуть тримати СС або в розчині, або прикріпленою до клітини в конфігурації, яка робить можливим структурний доступ до епітопів
ОСС приймаючими компонентами імунного нагляду для ефективної генерації антитіл. Тому що важкі ланцюги імуноглобуліну, що містять області Ес, зв'язуються в димери за допомогою між ланцюгових дисульфідних зв'язків, імуногени, отримані в результаті злиття з областями Ес, є димерами. Валентність злитих білків може відображати тип привнесеної імуноглобулінової області Ес. Наприклад, злиття з більеьами ДС можуть дати димери, (ДА злиття можуть дати тетрамерні імуногени, а ІДМ злиття можуть дати декамерні імуногени, два останніх сприяють ко- трансфекції з у-ланцюгом. Прикладом імуноглобуліну для злитого білка Ес є ІдДС1. Зазвичай використовувана частина, як правило, має 1 шарнір (901, домени СН2 ї СНЗ, які кодуються одним екзоном. Оскільки цей екзон також має частину області СНІ, яка має цистеїн, орієнтований на дисульфідний зв'язок з цистеїном в легкому ланцюгу, корисною модифікацією є мутування цистеїну СНІ, наприклад, в серин, щоб гарантувати відсутність неспареного цистеїну в злитім білку. Така мутація також збільшує гнучкість шарніра.
Частина Ес, отримана з видів-не господарів, наприклад, області Ес людського Ід, для сплавлення в імуноген для імунізації видів-господарів, наприклад, мишей, щурів, кроликів, кіз, виступає як допоміжний засіб. Ця ад'ювантна функція може викликати специфічні антитіла проти Ес і епітопів (СС. Ес-реактивні антитіла можуть бути ідентифіковані і відкинуті при скринінгу. Частина Ес може мати послідовність дикого типу або послідовність, яку мутували для зміни ефекторної функції. Наприклад, мутантна константна область (варіант) може бути включена у вигляді злитого білка, щоб мінімізувати зв'язування з Ес-рецепторами і/або здатність до фіксації комплементу (дивись, наприклад, У/іпієг єї аі, СВ 2,209,757 В; Могтізоп єї а!., УМО 89/07142; Могдап еї аїІ., ММО 94/29351). У переважному прикладі, лізин 235 і гліцин 237, пронумеровані у відповідності зі стандартами області Ес, мутують, наприклад, в аланін.
Імуноген/злитий білок з Ес-мутованим дб можуть знизити взаємодію з рецепторами Ес у господаря. Переважним розчинним імуногенним злитим білком (після дозрівання розщеплює сигнальний пептид і секреціюу є пеСС (ЕСО)- тідбега БсА Іі-тпшШ (ріКтТоОКт108), який складається з амінокислотних залишків від 24 до 430 з 5ЕО ІО Мо 3, злитих з мутованим імуноглобуліновим Ес мишачого Ідсга (разом ЗЕО ІЮО Мо 48).
Щоб отримати експресуючий клітини імуноген, імуноглобулінова частина може бути побудована таким чином, щоб імітувати імуноглобулінову частину В-клітинного рецептора.
Наприклад, Ес-область імуноглобуліну може бути додатково злитою з поліпептидом, що містить трансмембранну область імунного рецептора, такого як рецептори Есу, рецептори Еса, Еса/н- рецептор або рецептори Есє. Належна орієнтація такого Ес-рецептора клітинно зв'язаного імуногенна з відповідним місцем розташування на клітинній поверхні може бути поліпшена, якщо клітина, експресуюча злитий імуногенний білок, додатково містить додаткові компоненти рецепторного комплексу антигену, наприклад, В-клітинний рецептор І(9М або рецептор Ідо.
Придатні компоненти комплексу включають імуноглобулінові (Ід) білки зовнішньої оболонки, такі як МВ-1 і 829 (СО79А і СО79В; Нотбрасі еї аїЇ. Еиг. 9. Іттипої. 20: 2795-2799 (1990) для рецептора Ід9М), які утворюють гетеродимер. Білки зовнішньої оболонки Ід можуть бути надані ендогенно шляхом трансфекції клітини, наприклад, при трансфекції В-клітинної лімфомної клітинної лінії або шляхом ко-трансфекції імуногена оболонковими білками, наприклад, в окремому векторі або в тому ж векторі.
Корисні епітопи, наприклад, референсні епітопи молекули ССС, з якими молекули анти-аСС 60 антитіл, наприклад, кролячі моноклональні антитіла або їх гуманізовані версії, як описано в даному документі, можуть зв'язуватися, можна знайти на позаклітинній частині СС. Такі епітопи ЗСС можуть зв'язувати молекули антитіл на поверхні клітин, наприклад, на зовнішній частині клітини.
Наприклад, епітоп для молекули анти-зСС антитіла може знаходитися в межах або включати залишки 1-50 з 5ЕО ІОМео З або її фрагмента, який пов'язує молекулу анти-аСС антитіла згідно винаходу, наприклад, його МІ -44-148-2-зв'язуючий фрагмент. Такі фрагменти можуть містити залишки 1-25, 5-30, 10-35, 15-40, 20-45, 25-50, 5-45, 10-40, 15-35, 20-30 або 33- 50 з 5ЕБО ІО Мо 3. В деяких варіантах реалізації винаходу епітоп для молекули анти-аСС антитіла, наприклад, антитіла МІГ -44-148-2, являє собою конформаційний епітоп, додатково містить один або кілька додаткових амінокислотних залишків в послідовності амінокислот ОСС за межами залишку 50, тобто вибраного з від приблизно залишку 50 до залишку 1073 в ЗЕО ІЮ
Мо 3.
Антитіла, отримані проти таких епітопів або позаклітинного домену, наприклад, епітопів, які знаходяться в межах або включають залишок (-ки) з амінокислотних залишків від 24 до 420 з
ЗЕО ІО Мо З або її референсної частини, наприклад, залишки від 24 до 75, від 75 до 150, від 150 до 225, від 225 до 300, від 300 до 375 або від 375 до 420 з СС або молекули антитіл, отриманих з неї, можуть бути корисні в якості терапевтичних чи діагностичних антитіл, як описано в даному документі.
У варіанті реалізації винаходу молекула анти-сСС антитіла має одну або більше з наступних властивостей: а) вона конкурує за зв'язування, наприклад, зв'язування з СС клітинної поверхні або очищеної СС, з одної з перерахованих вище молекул анти-сСС антитіл, узагальнених в
Таблицях 1 і 2, наприклад, кролячого гібридомного антитіла (наприклад, МІ! -44-148-2);
Б) вона пов'язується з тим же або по суті таким же епітопом на ОСС як і одна з вищезазначених молекул анти-сССС антитіл, узагальнених в Таблицях 1 і 2, наприклад, кролячого гібридомного антитіла (наприклад, МІ! -44-148-2). У варіанті реалізації винаходу антитіло зв'язується з тим же епітопом, як визначено за допомогою одного або більше з масиву пептидних аналізів або шляхом зв'язування з усіченими мутантами, химерами або точковими мутантами, експресованими на клітинній поверхні, або мембранними препаратами, наприклад, як ті аналізи, описані в цьому документі; с) вона зв'язується з епітопом, який має, щонайменше, 1, 2, 3, 4, 5, 8, 10, 15 або 20 суміжних амінокислотних залишків, спільних з епітопом однією з вищезазначених молекул анти-аСС антитіл, узагальнених в Таблицях 1 і 2, наприклад, кролячого гібридомного антитіла (наприклад,
МІ -44-148-2); а) вона пов'язує область людської ЗСС, яка пов'язана з анти-сСС антитілом згідно винаходу, в якому область наприклад, позаклітинна або цитоплазматична область, становить 10-15, 10-20, 20-30 або 20-40 залишків в довжину, а зв'язування визначається, наприклад, шляхом зв'язування з усіченими мутантами; у варіанті реалізації винаходу молекула анти-с40О антитіла пов'язує позаклітинну область людської ССС. У варіанті реалізації винаходу молекула анти-ССС антитіла може пов'язувати частину позаклітинного домену людської ССС, визначену амінокислотними залишками 24-420 в 5ЕО ІО Мо 3. У варіанті реалізації винаходу молекула анти-СсС антитіла може пов'язувати іменний сайт гуанілілциклази у амінокислотних залишків 931-954 в ЗЕО ІЮ Мо 3; або е) вона пов'язує референсний епітоп, описаний в даному документі.
У варіанті реалізації винаходу молекула анти-зСсС антитіла пов'язує послідовність ССС
ІГСМОГЕМООМЕЕОММТАРОЮОММКММІ МІ ТІ 5 (ЗЕО ІЮ Мо 8).
У варіанті реалізації винаходу молекула анти-зСсС антитіла пов'язує послідовність ССС
ЕАНАЕВАВМІТЕЕСМООаРМУТІ ОДЮМУСОМ (ЗЕО ІО Мо 9).
У варіанті реалізації винаходу молекула антитіла пов'язує конформаційний епітоп. В інших варіантах реалізації винаходу молекула антитіла пов'язує лінійний епітоп.
Молекули анти-сСС антитіл можуть бути поліклональними антитілами, моноклональними антитілами, моноспецифічними антитілами, химерними антитілами (дивись патент США Мо 6020153) або гуманізованими антитілами або фрагментами антитіл або їх похідними.
Синтетичні або генетично сконструйовані варіанти (див. патент США Мо 6331415) будь-якого з вищезазначених антитіл також охоплюються даним винаходом. Моноклональні антитіла можуть бути отримані за допомогою різних методик, включаючи звичайну методику мишачих моноклональних антитіл (наприклад, стандартну методику гібридизації соматичних клітин по
Копіег апа Міїєсеїп, Маїиге 256: 495 (1975); дивись, Нагіому, Е. апа І апе, 0. (1988) Апіїродіеє5: А
ІГарогаїогу Мапиаї, Соїй Зргіпд Нагброг ІГарогаїогу Рге55, Соїй Зргіпд Нагрог, МУ) і методику бо кролячих моноклональних антитіл і обслуговування, забезпечене Ерйотіс5 (Випіпдате, СА),
який виробляє на замовлення кролячі моноклональні антитіла (КармМАБр5Ф) з використанням кролик-кролячих гібридів, що генеруються шляхом злиття ізольованих В-клітин з імунізованого кролика з власної партнерської клітинної лінії сплавляння Ерітіс5, як описано в патентах США
Мо 7,402,409, 7,429,487, 7,462,697, 7,575,896, 7,732,168 та 8,062,867, які включені в даний документ шляхом посилання у всій їх повноті.
Імунізацію білком, наприклад, ССС або розчинною частиною, або злитим білком, що містить частину ОСС (наприклад, пНОСС (ЕСО)-тіІдсга ЕсАрі-тш (рі КТОКТ108), або клітинами або їх мембранними фракціями, наприклад, клітинами, експресуючими ССС, що знаходиться на поверхні, або її частини (наприклад, продукт ріКТОК4), можна проводити з імуногеном, приготованим для ін'єкції таким чином, щоб індукувати відповідь, наприклад, з ад'ювантом, наприклад, повним ад'ювантом Фрейнда. Інші придатні ад'юванти включають ад'ювант Тіегтах со (СУТЕХ Согрогаїйоп, І о5 Апдеїе5, Саїїї.) і галун. Невеликі пептидні імуногени можуть бути приєднані до більшої молекули, такої як гемоцианін лімфи равлика. Ін'єкції мишам і кролям можна здійснювати різними способами, наприклад, підшкірно, внутрішньовенно або внутрішньом'язово в ряді місць, наприклад, в черевину (і.р.), основу хвоста або подушку ступні, або комбінуючи місця введення, наприклад, і.р. ії основу хвоста (ВІР). Активні імунізації можуть включати один і той же або інший імуноген і можуть додатково включати ад'ювант, наприклад, неповний ад'ювант Фрейнда. Імунізацію ДНК, наприклад, ДНК, що кодує ОСС або її частину, або злитий білок, що містить ССС або її частину (наприклад, кодує ПпОСС (ЕСО) -тідсбга ЕсвВрбг- ти), можна здійснити за допомогою генної гармати. Наприклад, ДНК завантажують в мікроскопічні частинки золота і ін'єктують мишам або кролям з частими інтервалами протягом короткого періоду часу.
Зазвичай, коли бажаними є моноклональні антитіла, то гібрид отримують шляхом злиття підходящої клітини з безсмертної лінії клітин (наприклад, лінії мієломних клітин, таких як 5Р2/0,
РЗХб3ЗА98.653 або гетеромієломних) з антитілопродукуючими клітинами. Антитілопродукуючі клітини можуть бути отримані з периферичної крові, переважно з селезінки або лімфатичних вузлів, людини, трансгенних тварин щодо людських антитіл або інших придатних тварин (наприклад, кролів), імунізованих відповідним антигеном. Клітини, які продукують антитіла людського походження (наприклад, людські антитіла), можуть бути отримані з використанням придатних методів, наприклад, злиттям продукуючої людське антитіло клітини і гетеромієломи або тріоми або іморталізацією активованої В-клітини людини через інфікування вірусом
Епштейна-Барра. (Дивись, наприклад, патент США Мо 6,197,582 (Ттакп); Міеабаїа еї аї.,
Нубгідота, 17: 299-304 (1998); 7апеїПа еї аї., У Іттипої! Меїнодв, 156: 205-215 (1992); Сивіаїв5оп еї а. Нит Апіїродієз Нубгідотав, 2: 26-32 (1991)). Злиті або іморталізовані клітини, що продукують антитіла (гібридоми), можуть бути виділені з використанням селективних умов культивування і клонуватися шляхом лімітуючого розведення. Клітини, які продукують антитіла з необхідною специфічністю, можуть бути ідентифіковані за допомогою відповідного аналізу (наприклад, ІФА (наприклад, з імуногенном, наприклад, пОСС (ЕСО)-тідсбга ЕсВБг-тиіЇ, іммобілізованим в лунці мікротитрувального планшету) або за допомогою ЕАСЗ на клітині, яка експресує ССС або її частину, наприклад, клітині, яка експресує продукт рі КТОК4). Наприклад, якщо ССсС-імуноген включає злитий фрагмент, який представляє собою афінний реагент, то ця частина може забезпечувати злитий білок, що включає ОСС або її частину, для зв'язування з матрицею, наприклад, мікропланшетами або аналітичними чипами, покритими білком 5, стрептавідином, похідними глутатіону або антитілами, які потім комбінують з імунною сироваткою або кондиціонованим середовищем з гібридоми або рекомбінантною клітиною, експресуючою антитіло, а суміш інкубують в умовах, сприятливих для утворення комплексу (наприклад, при фізіологічних умовах для солі і рН). Після інкубації лунки мікротитраційного планшета або лунки чипа промивають для видалення незв'язаних компонентів і вимірюють зв'язування анти-ссСс антитіла.
В варіантах реалізації винаходу для терапевтичного застосування антитіла відповідно до даного винаходу являють собою гуманізовані антитіла. Перевагою гуманізованих антитіл є те, що вони потенційно зменшують або усувають імуногенність антитіла у реципієнта-господаря, тим самим забезпечуючи підвищення біодоступності і зниження можливості несприятливої імунної реакції, таким чином, потенційно дозволяючи вводити кілька антитіл.
Модифіковані антитіла включають гуманізовані, химерні або СОК-щеплені антитіла.
Відповіді на людське анти-мишаче антитіло (НАМА) привели до розвитку химерних або іншим чином гуманізованих антитіл. Незважаючи на те, що химерні антитіла мають людську константну область і нелюдську варіабельну область, можна очікувати, що будуть спостерігатися реакції на певні людські анти-химерні антитіла (НАСА), особливо при постійних 60 або багатодозових використаннях антитіла. Наявність таких нелюдських (наприклад, миші,
щури, кролика, вівці або кози) отриманих білків може привести до швидкого виведення антитіл або може привести до генерації імунної відповіді проти антитіла пацієнтом. Для того щоб уникнути використання нелюдських отриманих антитіл, гуманізовані антитіла, де послідовності внесені в послідовності антитіла, щоб зробити його ближче до послідовності людського антитіла, або повністю людські антитіла, отримані шляхом введення функції людського антитіла в нелюдські види, такі як миші, щури, кролі, вівці або кози, були розроблені таким чином, що нелюдські види вироблятимуть антитіла, що мають повністю людські послідовності. Людські антитіла дозволяють уникнути деяких проблем, пов'язаних з антитілами, які мають варіабельні та/або константні області кролів, гризунів, овець або кіз.
Гуманізація і дисплейні технології і модифікації антитіл
Гуманізовані молекули антитіл можуть мінімізувати імуногенні або алергічні реакції, властиві нелюдським або похідним від нелюдських тАБ, і тим самим підвищувати ефективність і безпеку антитіл, що вводяться. Використання гуманізованих молекул антитіла може забезпечити значну перевагу при лікуванні хронічних і рекурентних хвороб людини, таких як запалення, аутоімунні захворювання і рак, які вимагають повторних введень антитіл.
Отримання гуманізованих антитіл зі зниженою імуногенністю може бути здійснено у зв'язку з методами гуманізації та дисплейними технологіями з використанням відповідних бібліотек. Слід розуміти, що антитіла від нелюдських видів, таких як миші, пацюки, кролики, вівці, кози і т.д., можна гуманізувати або приматизувати, використовуючи методи, відомі в даній області. Дивись, наприклад, Уміпіег апа Наїгїтіз Іттипої Тодау 14: 43-46 (1993) ії МУгпідні еї аїЇ. Стй. Кеміем/у5 іп
Іттипої. 12125-168 (1992). Досліджуване антитіло може бути сконструйоване за допомогою методів рекомбінантної ДНК, щоб замінити СНІ, СН2, СНЗ, шарнірні домени і/або каркасний домен відповідної послідовності людини (дивись УМО 92/02190 та патенти США Мо 5,530,101, 5,585,089, 5,693,761, 5,693,792, 5,714,350 та 5,777,085). Також з рівня техніки відоме використання кКДНК Ід для конструювання химерних імуноглобулінових генів (Гм еї аІ. Ргос Маїї
Асай Зсі ОБА. 84: 3439 (1987) і 9У. Іттипої. 139: 3521 (1987)). Матричну РНК виділяють з гібридоми або іншої клітини, продукуючої антитіло, і використовують для отримання кДНК.
Представляюча інтерес кКДНК може бути посилена за допомогою полімеразної ланцюгової реакції з використанням специфічних праймерів (Патенти США Мо 4,683,195 та 4,683,202).
Альтернативно, методика фагового дисплея (див., наприклад, МсСайепу еї аї, Маїшиге, 348: 552-553 (1990)) може бути використана для отримання людських антитіл або антитіл від інших видів, а також фрагментів антитіл іп міго, з генів варіабельних доменів (М) імуноглобулінів, наприклад, з набору від імунізованих донорів. Згідно з цією методикою гени домену М антитіла клонують в рамці зчитування в ген основного чи меншого білка оболонки ниткоподібного бактеріофага, такого як М13 або їй, і відображають в якості функціональних фрагментів антитіл на поверхні фагових частинок. Оскільки ниткоподібна частинка містить одноланцюгову копію
ДНК фагового генома, селекція на основі функціональних властивостей антитіла також призводить до селекції гена, що кодує антитіло, що проявляє ці властивості. Таким чином, фаг імітує деякі властивості В-клітин. Фаговий дисплей можна здійснювати в різних форматах, для їх огляду дивись, наприклад, ЧУопп5оп апа СпізугеїЇ, Сигтепі Оріпіоп іп Бігисіига! Віоїоду, 3: 564-571 (1993). Для фагового дисплея можна використовувати кілька джерел М-генних сегментів.
Сіасквоп єї аї., Маштє, 352: 624-628 (1991) виділили різнотипний спектр анти-оксазолонових антитіл з невеликої випадкової комбінаторної бібліотеки генів М, отриманих з селезінки імунізованих мишей. Може бути сконструйований набір генів М від неімунізованих людей- донорів, а антитіла до ряду різнотипних антигенів (включаючи аутоантигени) можуть бути виділені, в основному виходячи з методів, описаних Магкз еї аї., У. Мої. Віої., 222: 581-597 (1991) або сСгіййН єї аі, ЕМВО .., 12: 725-734 (1993). Дивись також патенти США Мо 5,565,332 та 5,573,905. Дисплейні бібліотеки можуть містити антитіла або антигензв'язуючі фрагменти антитіл, які містять штучні амінокислотні послідовності. Наприклад, бібліотека може містити фрагменти Раб, які містять штучні СОК (-и) (наприклад, випадкові амінокислотні послідовності) і каркасні області людини. (Дивись, наприклад, патент США Мо 6,300,064 (Кпаррік, еї аї.)).
Послідовності генів константних областей людини можуть бути знайдені у Кабаї єї а!. (1991)
Зедиєпсев ої Ргоївїп5 ої Іттипоіодіса! Іпіегеві, МІН рибіїсайоп по. 91-3242. Гени С-областей людини легко доступні з відомих клонів. Вибір ізотипа грунтується на бажаних ефекторних функціях, таких як реакція зв'язування комплементу або участь в антитілозв'язаній клітинній цитотоксичності. ІзЗотипами можуть бути ІдсС1, ІдсС2, ІдСЗ або ІдсС4. В окремих варіантах реалізації винаходу молекули антитіл згідно винаходу являють собою Ідс1 і Їд52. Можуть бути використані константні області каппа або лямбда легких ланцюгів. Химерні або гуманізовані антитіла потім експресуються за допомогою традиційних методів. бо В деяких варіантах реалізації винаходу молекула анти-ССС антитіла згідно винаходу може спричинити антитілозалежну клітинну цитотоксичність (АЮСС) до клітини, експресуючої СС, наприклад, пухлинної клітини. Антитіла з ізотипів ЇДО1 і (93 корисні для виявлення ефекторної функції в антитілозалежному цитотоксичному навантаженні внаслідок їх здатності зв'язувати рецептор Ес. Антитіла з ізотипів Іде2 і Ід4 корисні для зведення до мінімуму відповіді АОСС з причини їхньої низької здатності зв'язувати рецептор Ес. В пов'язаних варіантах реалізації винаходу заміщення в області Ес або зміни в складі глікозилювання антитіла, наприклад, шляхом зростання в модифікованій еукаріотичній клітинній лінії, можуть бути здійснені для підвищення здатності рецепторів Ес розпізнавати, зв'язувати та/або опосередковувати цитотоксичність клітин, з якими анти-ссСс антитіла зв'язуються (див., наприклад, Патенти США
Мо 7,317,091, 5,624,821 та публікації, включаючи УМО 00/42072, ЗПіеїд5, еї аї. 9. ВіоЇ. Спет. 276: 6591-6604 (2001), І агаг єї аї. Ргос. Маї!. Асад. бсі. ОБА 103: 4005-4010 (2006), Заюн еї а. Ехреїп
Оріп Віої. Тег. 6: 1161-1173 (2006)). В деяких варіантах реалізації винаходу антитіло або антигензв'язуючий фрагмент (наприклад, антитіло людського походження, людське антитіло) може включати амінокислотні послідовності або заміни, які змінюють або підлаштовують функцію (наприклад, ефекторну функцію). Наприклад, константна область людського походження (наприклад, константна область у, константна область у2) може бути розроблена для зниження активації комплементу і/або зв'язування рецептора Ес. (Дивись, наприклад, патенти США Мо 5,648,260 (У/іпієег еї аїІ.), 5,624,821 (Уміпієг еї аї.) ії 5,834,597 (Т50 еї аї.), зміст яких повністю включено в даний опис за допомогою посилання). Переважно, амінокислотна послідовність константної області людського походження, яка містить такі амінокислотні послідовності або заміни, щонайменше, приблизно на 9595 ідентична по всій довжині амінокислотної послідовності незміненій константній області людського походження, більш переважно, щонайменше, приблизно на 9995 ідентична по всій довжині амінокислотної послідовності незміненій константній області людського походження.
У ще одному варіанті реалізації винаходу ефекторні функції також можуть бути змінені шляхом модулювання структури глікозилювання антитіла. Під зміною мається на увазі видалення однієї або декількох вуглеводних груп, що знаходяться в антитілі, та/або додавання одного або декількох сайтів глікозилювання, які не присутні в антитілі. Наприклад, антитіла з підвищеною активністю АОС зі зрілою вуглеводної структурою, які відчувають нестачу фукози,
Зо приєднаної до Ес-області антитіла, описані в патентній публікації США Мо 2003/0157108 (Ргевіа).
Дивись також патентну публікацію США Мо 2004/0093621 (Куосула Накко Кодуо Со., ЦЯ). сіусоїї також розробила клітинні лінії дріжджів, здатні отримати конкретні глікоформи антитіл.
Додатково або як альтернатива антитіла можуть бути зроблені таким чином, щоб мати змінений тип глікозилювання, такі як гіпофукозиліруванні антитіла, що мають зменшені кількості фукозильних залишків, або антитіла, що мають збільшені бісекторні структури СісМас. Такі змінені структури глікозилювання, як було показано, підвищують АОСС-здатність антитіл. Такі модифікації вуглеводів можуть бути досягнуті шляхом, наприклад, експресування антитіла в клітині- господарі із зміненим механізмом глікозилювання. Клітини із зміненим механізмом глікозилювання були описані в даній галузі техніки і можуть бути використані в якості клітин- господарів, які сконструйовані для експресії рекомбінантних антитіл згідно винаходу таким чином, щоб справити антитіла із зміненим глюкозування. Наприклад, ЕР 1176195 (Напа еї аї.) описує клітинну лінію з функціонально зруйнованим геном БИОТ8, який кодує фукозилтрансферази, так що антитіла, що експресуються в такій клітинній лінії, демонструють гіпофукозилювання. Публікація РСТ Мо М/О 03/035835 (Ргевіа) описує варіант клітинної лінії
СНО, клітини Гес13, зі зниженою здатністю приєднувати фукозу до Азп (297) -зв'язаних вуглеводів теж в результаті гіпофукозилювання антитіл, які експресуються в такій клітині- господарі (дивись також Зпіеїйд5, КІ. єї а!., 2002 9. ВіоІ. Спет. 277: 26733-26740). Публікація РСТ
Мо УМО 99/54342 (тапа еї аїЇ.) Описує клітинні лінії, сконструйовані для експресування глікопротеїнмодифікованих глікозилтрансфераз (наприклад, бета (1,4) -М ацетилглюкозамінілтрансферази ПІ (Сп ТІ)) так, що антитіла, які експресуються сконструйованими клітинними лініями, демонструють підвищені бісекціонні структури СісМас, які призводять до підвищеної АЮСсС-активності антитіл (дивись також Штапа еї аї., 1999 Маї.
Віоїесн. 17: 176-180).
Гуманізовані антитіла також можуть бути отримані з використанням підходу щеплених СОК.
Методики отримання таких гуманізованих антитіл відомі з рівня техніки. Як правило, гуманізовані антитіла виробляють шляхом отримання нуклеїновокислотних послідовностей, які кодують варіабельні послідовності важких і легких ланцюгів антитіла, яке пов'язує СС, ідентифікуючи визначальну компліментарність область або "СОМ" в варіабельних послідовностях важких і легких ланцюгів, і прищеплюючи нуклеїновокислотні послідовності СОК бо на каркасну нуклеїновокислотну послідовність людини. (Див., наприклад, патенти США Мо
4,816,567 та 5,225,539). Місце розташування СОК і каркасних залишків можна визначити; дивись, Кабаї, Е. А., еї а. (1991) Зедиепсез ої Ргоїеїп5 ої Іттипоїодісаї Іпіегеві, БІйп Еайоп, О5
Рераптепі ої Неайй апа Нитап 5егмісе5, МІН Рибіїсайоп Мо. 91-3242 і Споїпіа, С. еї аї. 9. Мої.
Вісі. 196: 901-917 (1987)). Молекули анти-ССС антитіл, описані в цьому документі, мають амінокислотні послідовності СОЖК і нуклеїновокислотні послідовності, що кодують СОК, перераховані в Таблицях 5 та 6. В деяких варіантах реалізації винаходу послідовності з
Таблиць 5 і 6 можуть бути вставлені в молекули, які розпізнають СС, для використання в способах лікування або діагностики, описаних в цьому документі. Обраний людський каркас є придатними для введення іп мімо, що означає, що він не володіє імуногенністю. Наприклад, таке визначення може бути зроблено за допомогою попереднього досвіду з використанням іп мімо таких антитіл і досліджень подібності амінокислот. Придатна каркасна область може бути вибрана з антитіла людського походження, що має, щонайменше, приблизно 6595 ідентичності амінокислотної послідовності і переважно, щонайменше, приблизно 7095, 8095, 9095 або 9595 ідентичності амінокислотної послідовності по всій довжині в каркасної області в межах амінокислотної послідовності еквівалентної частини (наприклад, каркасної області) донорного антитіла, наприклад, молекули анти-зСС антитіла (наприклад, 301). Амінокислотну ідентичність можна визначити з використанням відповідного алгоритму вирівнювання амінокислотних послідовностей, такого як СГО5БТАЇ МУ, використовуючи параметри за замовчуванням. (ТПпотрзоп 9О еї аї., Мисієїс Асіа5 Кев5. 22: 4673-4680 (1994).)
Після того як СОМ ії ЕК (-и) клонованого тіла, яке буде гуманізуватися, визначені, ідентифікують амінокислотні послідовності кодованого СОК (-ів), і відповідні нуклеїновокислотні послідовності прищеплюють на вибрані людські ЕК (-и). Це можна здійснити, використовуючи відомі праймери і лінкери, вибір яких відомий з рівня техніки. Всі СОК конкретного людського антитіла можуть бути замінені, щонайменше, частиною нелюдською СОК або тільки деякі СОК можуть бути замінені нелюдськими СОК. Необхідно тільки замінити СОР. (-и), необхідний для зв'язування гуманізованого антитіла з попередньо визначеним антигеном. Після того як СОК (- и) прищеплюють на вибрані людські ЕЕ (-и), отримані "гуманізовані" варіабельні послідовності важких і легких ланцюгів експресуються для отримання гуманізованого Ем або гуманізованого антитіла, які пов'язують із ЗСС. Переважно, СОН-прищеплене (наприклад, гуманізоване) антитіло пов'язує білок СС з афінністю, схожою з білком з афінністю, аналогічною, по суті, такій же або кращій, ніж у донорного антитіла. Як правило, гуманізовані варіабельні послідовності важких і легких ланцюгів послідовності експресують у вигляді злитого білка з послідовностями константних доменів людини, так що виходить інтактне антитіло, яке зв'язується з ОСС. Тим не менш, може бути отримано гуманізоване антитіло Ем, яке не містить константні послідовності.
Також в обсяг винаходу входять гуманізовані антитіла, в яких конкретні амінокислоти були замінені, видалені або додані. Зокрема, гуманізовані антитіла можуть мати амінокислотні заміни в каркасній області, наприклад, для поліпшення зв'язування з антигеном. Наприклад, вибрана невелика кількість акцепторних каркасних залишків гуманізованого ланцюга імуноглобуліну може бути замінена відповідними амінокислотами донора. Місця замін включають амінокислотні залишки, прилеглі до СОК або які здатні взаємодіяти з СОК (дивись, наприклад, патент США Мо 5,585,089 або 5,859,205). Акцепторний каркас може бути каркасною послідовністю зрілого людського антитіла або консенсусною послідовністю. У контексті даного винаходу термін "консенсусна послідовність" відноситься до послідовності, яка визначається найбільш часто або розроблена з найбільш поширеними залишками в кожному положенні в послідовності в ділянці серед споріднених членів сім'ї. Доступний ряд консенсусних послідовностей людських антитіл, в тому числі консенсусних послідовностей для різних підгруп людських варіабельних областей (дивись, Кабаї, ЕА, еї аїЇ., Зедиепсе5 ої Ргоїеіп5 ої Іттипоїодіса! Іпіегеб5і, БШЩИ Еайіоп, О5
Оераптепі ої Неайй апа Нитап Зегмісе5, 5 (бомегптепі Ргіпіїпуд ОйПісе (1991)). База даних
Караї і її додатки є у вільному доступі опіїпе, наприклад за допомогою ІЗВІА5Т в
Національному центрі біотехнологічної інформації, Веїпезда, Ма. (також дивись, доппзоп, о. апа Ми, Т.Т., Мисівїс Асід5 Незеагсі 29: 205-206 (2001)).
Інші способи гуманізації антитіл описані в Радіап еї аІ. ЕР 519596 АТ, опублікованому 23 грудня 1992.
Молекула анти-ССС антитіла включає інші гуманізовані антитіла, які також можуть бути модифіковані шляхом делеції певних епітопів Т-клітин людини, або "деімунізації" за допомогою способів, описаних в публікаціях РСТ Мо МО 98/52976 і МО 00/34317, зміст яких включено в даний документ за допомогою посилання. Коротко, кролячі або інші нелюдські види, варіабельні області важких і легких ланцюгів анти-зСС антитіла можуть бути проаналізовані на наявність 60 пептидів, які зв'язуються з класом ІЇ МНС. Ці пептиди представляють собою потенційні Т-
клітинні епітопи. Для виявлення потенційних епітопів Т-клітин можна використовувати підхід комп'ютерного моделювання, названий "пептидним протягуванням", і на додаток до бази даних людського класу ЇЇ МНС можна підшукати зв'язуючі пептиди для мотивів, присутніх в послідовностях кролячих УН і МІ,, як описано в публікаціях РСТ Мо МО 98/52976 і УМО 00/34317.
Ці мотиви зв'язуються з будь-яким з 18 основних ЮОК-аллотипів класу ЇЇ МНС і тим самим утворюють потенційні Т-клітинні епітопи. Виявлені потенційні Т-клітинні епітопи можуть бути усунені шляхом заміни невеликих кількостей амінокислотних залишків в варіабельних областях або, переважно, шляхом одиничних амінокислотних заміщень. Наскільки це можливо, здійснюють консервативні заміщення, часто, але не обов'язково, може бути використана амінокислота, загальноприйнята в цьому положенні в послідовностях антитіл зародкової лінії людини. Послідовності зародкової лінії людини розкриті у Тотіїпз5оп, І.А. еї аї., У. Мої. Віої. 227: 776-798 (1992); Соок, а. Р. евї аї!., Іттипої. Тодау Мої. 16 (5): 237-242 (1995); Споїніа, 0. єї аї.,..
Мої. Віо. 227: 799-817 (1992). Директорія М Каталог ВАБЕ надає повний каталог людських варіабельних областей імуноглобуліну (складений Тотіїпзоп, І.А. еї аЇї. МКС Сепіге ог Ргоївїп
Епдіпеегіпд, Сатюгідде, ОК). Після деїімунізації МН і МІ анти-6СС антитіла конструюють за допомогою мутагенезу генів кролячих МН і МІ, мутувавша варіабельна послідовність може, при необхідності, зливатися з людською константною областю, наприклад, (39051 людини або К (каппа) константними областями.
В інших варіантах реалізації винаходу зниження імуногенної реакції за допомогою СОК- прищепленого антитіла може досягатися шляхом змін, наприклад, делецій, заміщень амінокислотних залишків в СОК (Казптігі еї аі. МеїШоа5з 36: 25-34 (2005), патент США Мо 6,818,749, Тап еї аї. 9. Іттипої. 169: 1119-1125 (2006)). Наприклад, залишки в положеннях, що беруть участь в контакті з антигеном, переважно не будуть змінюватися. Як правило, такі залишки, залишки, що визначають специфічність (ЗОК (-и)), знаходяться в положеннях, які показують високі рівні мінливості серед антитіл. Консенсусні послідовності, отримані, наприклад, за допомогою методу Сішизаї! (Ніддіп5 О.С. єї аІ., Мей. Епгутої. 266: 383-402 (1996)), з молекул анти-ссСс антитіл, наприклад, з антитіл, описаних в даному документі, допомагають в ідентифікації БОК (-ів). В молекулах анти-сСсС антитіл, описаних в даному документі, ЗОК є наступними, щонайменше, першим залишком або в деяких варіантах здійснення, першими чотирма залишками з СОКІ важкого ланцюга; щонайменше, М-кінцевою ділянкою, наприклад, першими 7, 10 або 13 залишками з СОК2 важкого ланцюга; майже всієї СОКЗ важкого ланцюга;
С-кінцевою ділянкою, наприклад, після залишку 6, 8 чи 9 з СОМК1 легкого ланцюга; близько першого, середнього та/або останнього залишку СОК2 легкого ланцюга; і більшістю з СОКЗ легкого ланцюга або, щонайменше, після залишку два або три. Відповідно, для підтримання зв'язування з білюом ОСС після гуманізації або модифікації молекули анти-ССсС антитіла, такі залишки 5ОК в СОК (-ах) з молекул анти-зСс антитіл менше піддаються змінам, наприклад, з кролячих залишків в консенсусні людські рештки, ніж залишки в інших залишках СОК або каркасних областей. Навпаки, це може бути вигідно для зміни залишків в нелюдських, наприклад, кролячих СОК в залишки, ідентифіковані як консенсусні в людських СОК, наприклад, СОК (-и) молекул анти-сСсС антитіл, описаних в опублікованій патентній заявці США
Мо 20110110936, зміст якої включено в даний документ шляхом посилання у всій його повноті.
Анти-ЗСС антитіла, які не є інтактними антитілами, також придатні згідно з даним винаходом. Такі тіла можуть бути отримані з будь-якого антитіла, описаного вище. Придатні молекули антитіл даного типу включають () фрагмент Бар, моновалентний фрагмент, що складається з доменів МІ, УН, СІ. ї СНІ; (ії) фрагмент К(аб)2, бівалентний фрагмент, що містить два фрагмента Раб, з'єднаних дисульфідним містком в шарнірній області; (ії) фрагмент Га, що складається з доменів МН і СНІ; (ім) фрагмент Ем, що складається з фрагментів МІ. ї МН одного плеча антитіла, (м) фрагмент ЯАБ (Умага еї аї., Майшге 341: 544-546 (1989)), що складається з домену МН; (мії) однодоменне функціональне важколанцюгове антитіло, яке складається з домену МНН (відомого як нанотіло), дивись, наприклад, Согіе7:-Неїато?7о, єї а!., Сапсег Нев. 64: 2853-2857 (2004) і посилання, зазначені в цьому документі; і (мії) виділений СОК, наприклад, один або більше виділених СОЖК (-ів) разом з достатнім каркасом для забезпечення антигензв'язуючого фрагмента. Крім того, хоча два домена фрагмента Ем, Мі. їі МН, кодуються окремими генами, вони можуть бути об'єднані з використанням рекомбінантних методів за допомогою синтетичного лінкера, який дозволяє отримати їх у вигляді єдиного білкового ланцюга, в якому області МІ ії МН з'єднуються в пару для утворення моновалентних молекул (відомих як одноланцюговий Ем (5сЕм); дивись, наприклад, Віга еї аі). Зсіепсе 242: 423-426 (1988); та Нивіоп еї аЇ. Ргос. Майї). Асад. 5сі. ОБА 85: 5879-5883 (1988). Такі одноланцюгові антитіла також задумані бути охопленими терміном "антигензв'язуючий фрагмент" антитіла. Ці бо фрагменти антитіл отримують з використанням традиційних методів, відомих фахівцям в даній області, і фрагменти відбирають по корисності таким же способом, що і інтактні антитіла.
Фрагменти антитіл, такі як Ем, Е(аб)»2 і Бар, можуть бути отримані шляхом розщеплення інтактного білка, наприклад шляхом протеазного або хімічного розщеплення.
У варіантах реалізації винаходу декілька або всі послідовності СОК (-ів) одного або обох важкого і легсого ланцюга можуть бути використані в іншій молекулі антитіла, наприклад, в
СОВ-прищепленої, гуманізованої або химерної молекулі антитіла.
Варіанти реалізації винаходу включають молекулу антитіла, яка містить достатні СОК (-и), наприклад, всі шість СОР (-ів) з одного кролячого гібридомного антитіла, описаного в цьому документі, для забезпечення зв'язування з СС клітинної поверхні.
У варіанті реалізації винаходу СОК (-и), наприклад, всі НСОК або всі ЇСОК (-и), або всі шість, вставлені в людську каркасну область або в каркасну область, отриману з людської.
Приклади людських каркасних областей включають людські зародкові каркасні послідовності, людські зародкові послідовності, які були піддані дозріванню афінності (будь-якому іп мімо або іп міго), або синтетичні людські послідовності, наприклад, консенсусні послідовності. У варіанті реалізації винаходу важко ланцюговий каркас являє собою каркас Ідс1і або Ідс2. У варіанті реалізації винаходу легко ланцюговий каркас являє собою каппа-каркас.
У варіанті реалізації винаходу молекула анти-сСсС антитіла, наприклад, СОК-прищеплена або гуманізована молекула антитіла, містить достатні СОК (-и), наприклад, всі шість СОК (-ів) з одного антитіла, описаного в цьому документі, наприклад, послідовності, перераховані в
Таблиці 5, для забезпечення зв'язування з (СС (приклади нуклеїновокислотних послідовностей, які кодують амінокислотні послідовності СОК, перераховані в Таблиці 5, представлені в Таблиці б в даному документі). У окремих варіантах реалізації винаходу молекула анти-ССС антитіла може містити СОК (-и) з МІ -44-148-2 або МІІ -44-67-4.
Фрагменти антитіл для іп мімо терапевтичного або діагностичного використання можуть отримувати користь з модифікацій, які покращують їх час напівжиття в сироватці. Придатні органічні фрагменти, призначені підвищити час напівжиття в сироватці іп мімо антитіла, можуть включати один, два або більше нерозгалужених або розгалужених фрагмента, вибраних з гідрофільної полімерної групи (наприклад, не розгалуженого або розгалуженого полімеру (наприклад, поліалкангліколь, такого як поліетиленгліколь, монометоксиполіетиленгліколь |і
Зо подібні), карбогідратів (наприклад, декстрану, целюлози, полісахариду і подібного), полімеру гідрофільної амінокислоти (наприклад, полілізина, поліаспартат і подібного), поліалканоксида і полівінілпіролідону), жирнокислотної групи (наприклад, монокарбоксильної кислоти або дікарбоксильної кислоти), жирнокислотної естерної групи, ліпідної групи (наприклад, діацилгліцерольної групи, сфінголіпідної групи (наприклад, церамиділ) або фосфоліпідної групи (наприклад, фосфатиділетаноламіно групи). Переважно, органічний фрагмент зв'язується з попередньо визначеним сайтом, причому органічний фрагмент не погіршує функцію (наприклад, знижує антигензв'язуючу афінність) отриманого імунокон'югата в порівнянні з не кон'югованим фрагментом антитіла. Органічний фрагмент може мати молекулярну вагу від приблизно 500 Да до приблизно 50 000 Да, переважно приблизно 2000, 5000, 10000 або 20000 Да. Приклади і методи модифікації поліпептидів, наприклад, антитіл, органічними фрагментами можна знайти, наприклад, в патенті США Мо 4,179,337 та 5,612,460, публікації РСТ Мо УМО 95/06058 і УМО 00/26256 і патентної публікації США Мо 20030026805.
Молекула анти-оСС антитіла може містити всі або антигензв'язуючий фрагмент варіабельної області одного або обох важкого або легкого ланцюга одного із зазначених вище гібридом кролячих антитіл.
У варіанті реалізації винаходу амінокислотна послідовність легкого ланцюга (а) може відрізнятися від однієї з референтною амінокислотною послідовністю (-ей), згаданих в (а) (І-ї), 1, 2, 3, 4, 5, 10 або 15 залишками. В варіантах реалізації винаходу відмінності являють собою консервативні заміщення. В варіантах реалізації винаходу відмінності знаходяться в каркасних областях. У варіанті реалізації винаходу послідовність важкого ланцюга (Б) може відрізнятися від однієї з референсних амінокислотних послідовностей, згаданих в (б) (і-ії) 1, 2, З, 4, 5, 10 або 15 залишками. В варіантах реалізації винаходу відмінності являють собою консервативні заміщення. В варіантах реалізації винаходу відмінності знаходяться в каркасних областях.
У варіанті реалізації винаходу молекула анти-сСсС антитіла містить одну або обидві: (а) всі амінокислотні послідовності легкого ланцюга або антигензв'язуючий фрагмент (Її) амінокислотної послідовності варіабельної області легкого ланцюга з Таблиці 3, наприклад,
ЗБЕО ІЮ Мо13 або (ії) амінокислотної послідовності варіабельної області легкого ланцюга, кодуючою нуклеотидною послідовністю з Таблиці 4, наприклад, 5ЕО ІЮ Ме12; і (Б) всі амінокислотні послідовності важкого ланцюга або антигензв'язуючий фрагмент (Її) 60 амінокислотної послідовності варіабельної області з Таблиці 3, наприклад, 5ЕО ІЮ Мо11 або (ії)
амінокислотної послідовності важкого ланцюга, кодуючою нуклеотидною послідовністю з
Таблиці 4, наприклад, 5ЕО ІЮ Ме10.
У варіанті реалізації винаходу молекула анти-сСсС антитіла містить одну або більше: а) варіабельну область легкого ланцюга або її антигензв'язуючий фрагмент, що має, щонайменше, 85, 90, 95, 97 або 9995 гомологію з варіабельною областю легкого ланцюга молекули анти-сСсС антитіла згідно винаходу; і (Б) варіабельну область важкого ланцюга або її антигензв'язуючий фрагмент, що має, щонайменше, 85, 90, 95, 97 або 9995 гомологію з варіабельною областю важкого ланцюга молекули анти-ССсС антитіла згідно винаходу.
Амінокислотні послідовності варіабельних областей анти-сСС антитіла згідно винаходу можуть бути знайдені в Таблиці 3.
В одному підході, консенсусні послідовності, що кодують У-області важкого і легкого ланцюгів можуть бути використані для конструювання олігонуклеотидів для застосування як праймерів для введення корисних сайтів рестрикції в У-область для послідовного приєднання сегментів області М до сегментів людської області С. С-область КДНК можна модифікувати за допомогою сайт-спрямованого мутагенезу в точці локалізації сайту рестрикції в аналогічному положенні в людській послідовності.
Вектори експресії включають плазміди, ретровіруси, косміди, епісоми, отримані з ХАС, ЕВМ і подібне. Придатний вектор є вектором, який кодує функціонально укомплектовану імуноглобулінову послідовність людських СН або Сі з прийнятними сайтами рестрикції, сконструйованими таким чином, щоб будь-яку послідовність МН або Мі можна було легко вставити і експресувати. В таких векторах сплайсинг зазвичай відбувається між донорним сайтом сплайсингу у вставленій .)-області та акцепгорним сайтом сплайсингу, попереднім людської С-області, а також в сплайсингових областях, що знаходяться в межах екзонів людської СН. Придатні вектори експресії можуть містити ряд компонентів, наприклад, початок реплікації, ген селектуємого маркера, один або більше контролюючих експресію елементів (наприклад, промотор, енхансер, термінатор) та/"або один або більше сигналів трансляції, сигнальну послідовність або лідерну послідовність і подібне. Поліаденіляція і термінування транскрипції відбувається в нативних хромосомальних сайтах праворуч, нижче кодуючих
Зо областей. Отримане химерне антитіло може з'єднуватися з будь-яким сильним промотором.
Приклади придатних векторів, які можуть бути використані, включають ті, які підходять для господарів-ссавців і засновані на вірусних системах реплікації, таких як мавпячий вірус 40 (5М40), вірус саркоми Рауса (КМ), аденовірус 2, коров'ячий папіломавірус (ВРМ), паповавірусний ВК мутант (ВКМ) або мишачий або людський цитомегаловірус (СММ) і вірус мишачого лейкозу Молоні (ММІМ), нативні промотори Ід і т.п. Безліч придатних векторів відомі з рівня техніки, включаючи вектори, які підтримуються в єдиній копії або безлічі копій, або які інтегруються в хромосому клітини-господаря, наприклад, через ІТК (-и) або штучні хромосоми, сконструйовані з мультиплетними інтеграційними сайтами (Гіпдепрашт еї аїЇ. Мисієїс Асіаз Нев. 32: е172 (2004), Кеппага еї аї. Віоїесппо!ї. Віоепуд. Опіїпе Мау 20, 2009). Додаткові приклади придатних векторів перераховані нижче.
Таким чином, винахід передбачає вектор експресії, що містить нуклеїнову кислоту, що кодує антитіло, антигензв'язуючий фрагмент антитіла (наприклад, гуманізованого, химерного антитіла або антигензв'язуючий фрагмент будь-якого із згаданих вище), ланцюг антитіла (наприклад, важкий ланцюг, легкий ланцюг) або антигензв'язуюча частина ланцюга антитіла, яка пов'язує білок ОСС.
Експресія в еукаріотичних клітинах-господарях є корисною, тому що такі клітини є більш подібними, ніж прокаріотичні клітини, для збірки і секретування належним чином складеного і імунологічно активного антитіла. Однак, будь-яке антитіло, отримане як неактивне через неналежну збірку, може бути ренатуріровано згідно відомим методам (Кіт апа ВаїЇдм/іп, "Зресійс
Іптептедіагтез іп Шїе Роїідіпд Неасійопв ої Зтаї! Ргоївіп5 апа Те Меснапівт ої Ргоївїп Роїдіпд", Апп.
Вех. Віоспет. 51, рр. 459-89 (1982)). Можливо, клітини-господарі будуть отримати частини інтактних антитіл, такі як димери легких ланцюгів або димери важких ланцюгів, які також є гомологами антитіл відповідно до даного винаходу.
Крім того, як описано в даному документі, антитіла або антитіла від людських або нелюдських видів можуть бути отримані за допомогою дисплейних технологій, включаючи, без обмеження, фаговий дисплей, ретровірусний дисплей, рибосомальний дисплей і інші методи, які використовують технології, добре відомі з рівня техніки і призводять до утворення молекул, які можуть бути піддані додатковому дозріванню, такому як дозрівання афінності; самі по собі технології відомі з рівня техніки. У/піег апа Наїті5 Іттипої Тодау 14: 43-46 (1993) і Мугідні еї аї. бо Ст. Веміємув іп Іттипої. 12125-168 (1992), Напез апа Рінисійаш РМАБ ОА 94: 4937-4942 (1997)
(рибосомальний дисплей), Рагтієу апа тій Сепе 73: 305-318 (1988) (фагів дисплей), Зсой
ТІВ 17: 241-245 (1992), См/іпа єї аї. Ргос Маї! Асай 5сі ОА 87: 6378-6382 (1990), Визвзеї еї аї.
Мисі. Асід5 Незеагсі 21: 1081-1085 (1993), Нодапроот еї а. Іттипої!. Неміємв 130: 43-68 (1992),
СНівмєїЇ апа МеСапйену ТІВТЕСН 10: 80-84 (1992) і патент США Мо 5,733,743. Якщо для отримання антитіл, які не є людськими, використовують дисплейні технології, то такі антитіла можна гуманізувати як описано вище.
Слід розуміти, що антитіла, які створюються спочатку, не повинні мати конкретний бажаний ізотип, але, скоріше, антитіло як генеруєме, може бути будь-якого ізотипа. Наприклад, антитіло, що продукується гібридомою кролика МІ -44-148-2 має ізотип Ід. Ізотип антитіла може бути включений після цього, наприклад, в їдс52 або ІдсС3, щоб викликати реакцію АЮСС, коли антитіло зв'язується з СС на клітини, з використанням звичайних методів, які відомі в даній області. Такі методики включають використання прямих рекомбінантних методів (дивись, наприклад, патент США Мо 4,816,397), методи злиття клітин (див., наприклад, патент США Мо 5,916,771) та інші. В методах злиття клітин отримують мієломну або інші клітинні лінії, які мають важкий ланцюг з будь-яким бажаним ізотипом, і отримують іншу мієломну або інші клітинні лінії, які мають легкий ланцюг. Такі клітини згодом можуть зливатися, і може бути виділена клітинна лінія, експресуюча інтактне антитіло.
В деяких варіантах реалізації винаходу молекула ССС антитіла є кролячим анти-аСсо да антитілом. Оскільки такі антитіла володіють бажаним зв'язуванням з молекулою ОСС, то будь- яке одне з таких антитіл може бути легко переключене з одного ізотопу в одержання іншого ізотипу, одночасно володіючи тією ж варіабельною областю (яка визначає специфічність і афінність антитіла, певною мірою). Відповідно, в якості кандидатів антитіл отримують ті, які відповідають бажаним "структурним" атрибутам, як описано вище, вони, як правило, можуть мати, щонайменше, деякі додаткові "функціональні" атрибути, які є бажаними з причини перемикання ізотипів.
У варіанті реалізації винаходу варіабельна область або її антигензв'язуючий фрагмент можуть бути з'єднані з константною областю (або її фрагментом), що відрізняється від константної області, з якою він генерується, наприклад, з константною областю (або її фрагментом) з іншого антитіла або синтетичної константної області (або її фрагментом). В
Зо варіантах реалізації винаходу константна область являє собою константну область ЇдДС1 або 3092 (або її фрагмент). Зміни в послідовностях можуть бути здійснені в варіабельній або константній областях для модифікування ефекторної активності молекули антитіла.
Конструювання та одержання інших терапевтичних засобів
Антитіла, які отримані і охарактеризовані в цьому документі відносно СС, передбачені для конструювання інших терапевтичних засобів, включаючи інші антитіла, інші антагоністи або хімічні фрагменти, відмінні від антитіл. Такі засоби включають, без обмеження, антитіла, що мають подібну зв'язуючу активність або функціональність, вдосконалені терапевтичні антитіла, такі як біспецифічні антитіла, імунокон'югати і радіо-помічені терапевтичні засоби, отримання пептидних терапевтичних засобів, зокрема інтраантитіл і невеликих молекул. Крім того, як обговорювалось вище, ефекторна функція антитіл згідно винаходу може бути змінена шляхом ізотипного перемикання до Ідс1, Ідс2, ІдсЗ, Ідся4, дО, ІдА1, ІдДА2, ІДЕ або ІдМ для різних терапевтичних використань.
У зв'язку з антитілами, біспецифічні антитіла можуть бути отримані як такі, що містяь (ї) два антитіла, одне зі специфічністю до ССС, а інше - до другої молекули, які кон'юговані разом, (ії) єдине антитіло, яке має один ланцюг, специфічний до СС, і другий ланцюг, специфічний до іншої молекули, або (ії) одноланцюгове антитіло, яке має специфічність до СС та іншої молекули. Такі біспецифічні антитіла можуть бути отримані з використанням відомих технологій.
Наприклад, біспецифічні антитіла можуть бути отримані шляхом перехресного зшивання двох або більше антитіл (одного типу чи різних типів). Придатні лінкери для перехресного зшивання включають ті, які є гетеробіфункціональними, що мають дві чітко реактивні групи, розділені прийнятним спейсером (наприклад, т-малеїімідобензоїл-М-гідроксисукцинімідний складний ефір), або гомобіфункціональними (наприклад, дисукциніміділа суберат). Такі лінкери можна придбати у Ріегсе Спетіса! Сотрапу, КосКіога, І. Дивись також, наприклад, Рапдег еї аї.
Іттипотеїйносвз5 4: 72-81 (1994) і УмМіпіег апа Наїтіз Іттипої! Тодау 14: 43-46 (1993) і УмгідНІ еї аї.
Стїї. Веміемув іп Іттипої. 12125-168 (1992) і в зв'язку з (ії) дивись, наприклад, ТгаипескКег еї аї.
Іпї. У. Сапсег (Зиррі.) 7: 51-52 (1992). 5опдвіміаі б І асптапп Сіїп. Ехр. Іттипої. 79: 315-321 (1990), Ковіє!пу єї аї. У. Іттипої. 148: 1547-1553 (1992).
Крім того, також можуть бути отримані "каппа-тіла" (І. еї аї. "Оезідп апа сопзігисійоп ої а пубгіа іттиподіориїйп дотаїп м/йп ргорепієвз ої роїй пеаму апа дні спаїп магіаріє гедіопв" Ргоївїп 60 Епа 10: 949-57 (1997)), "мінітіла" (Магійп ег а ЕМВО 4. 13: 5303-9 (1994), патент США Мо
5,837,821), "діатіла" (Ноїїїдег еї аіІ. Ргос Май! Асай сі ОБ5А 90: 6444-6448 (1993)) або "дволикі "(ТташпесКег єї аі. ЕМВО 3. 10: 3655-3659 (1991) і Тгаипескег еї аї. Іпї у) Сапсег Зиррі 7: 51-52 (1992)).
Нуклеїнові кислоти і поліпептиди
В іншому варіанті реалізації винаходу цей винахід відноситься до полінуклеотид них або поліпептиднихпослідовностей, які кодують або презентують молекули антитіл, описаних в даному документі. Такі полінуклеотиди кодують варіабельні і константні області як важкого, такі легкого ланцюга, хоча інші комбінації також передбачаються цим винаходом у зв'язку з композиціями, описаними в даному документі. Даний винахід також припускає олігонуклеотидні фрагменти, отримані з розкритих полінуклеотидів і нуклеїновокислотних послідовностей, комплементарних цим полінуклеотидам.
Полінуклеотиди можуть бути у вигляді РНК або ДНК. Полінуклеотиди у вигляді ДНК, кДНК, геномної ДНК, нуклеїновокислотних аналогів і синтетичних ДНК знаходяться в обсязі відповідно до даного винаходу. ДНК може бути дволанцюговою або одноланцюговою, а якщо одноланцюговою, то може бути кодуючим (смисловим) ланцюгом або не кодуючим (антисмисловим) ланцюгом. Кодуюча послідовність, яка кодує поліпептид, може бути ідентична кодуючій послідовності, представленої в даному документі, або може бути іншою кодуючою послідовністю, яка кодує послідовності, яка в результаті надмірності або виродженості генетичного коду кодує поліпептид також, як і ДНК, представлена в даному документі.
У передбачених варіантах реалізації винаходу полінуклеотиди кодують щонайменшеодну варіабельну область важкого ланцюга і щонайменше одну варіабельну область легкого ланцюга відповідно до цього винаходу, наприклад, як показано в Таблиці 4.
Даний винахід також включає варіантні полінуклеотиди, щомістять такі модифікації як полінуклеотидні делеції, заміщення або добавки, і будь-яку полінуклеотидну модифікацію, отриману з варіантної полінуклеотидної послідовності. Полінуклеотид відповідно до даного винаходу може також мати кодуючу послідовність, яка є варіантом кодуючої послідовності, передбаченої даним документом. Наприклад, варіантний полінуклеотид може мати щонайменше 5095, бо, 7095, 7595, 8095, 8595, 9095, 9595 або 9795 ідентичності з полінуклеотидами, переліченими в Таблиці 4. В варіантах реалізації винаходу варіантний
Зо полінуклеотид кодує молекулу анти-сСс антитіла.
Даний винахід додатково стосується поліпептидів, які представляють собою антитіла відповідно до даного винаходу, а також фрагменти, аналоги і похідні таких поліпептидів.
Поліпептиди відповідно до даного винаходу можуть бути рекомбінантними поліпептидами, поліпептидами природного походження або синтетичними поліпептидами. Фрагмент, похідні або аналоги поліпептидів відповідно до даного винаходу можуть бути тими, у яких один або більше з амінокислотних залишків замінені консервативним або неконсервативний залишком (переважно консервативним амінокислотним залишком), і такий заміщений амінокислотний залишок може або не може бути залишком, який кодуються генетичним кодом; або він може бути тим, в якому один або більше з амінокислотних залишків містить замінюючу групу; або він може бути тим, в якому поліпептид злитий з іншим з'єднанням, таким як з'єднання для збільшення часу напівжиття поліпептиду (наприклад, поліетиленгліколем); або він може бути тим, в якому додаткові амінокислоти злиті з поліпептидом, наприклад в якості лідера або секреторної послідовності або послідовності, яка використовується для очищення поліпептидної або протеїнової послідовності. Такі фрагменти, похідні і аналоги знаходяться в межах обсягу відповідно до даного винаходу. У різних аспектах поліпептиди згідно винаходу можуть бути частково очищеним або очищеним продуктом.
Поліпептид відповідно до даного винаходу може мати амінокислотну послідовність, яка ідентична послідовностям антитіл, описаним в цьому документі, наприклад, представленим в
Таблицях 2 або 3, або яка відрізняється за незначними варіаціями внаслідок одного або більше амінокислотних заміщень. Зміна може бути "консервативною заміною", як правило, в діапазоні приблизно від 1 до 5 амінокислот, в якому заміщена амінокислота має аналогічні структурні або хімічні властивості, наприклад, заміна лейцину на ізолейцин або треоніну на серин; заміна лізину аргініном або гістидіном. На відміну від цього, варіанти можуть включати не консервативні зміни, наприклад, заміну гліцину триптофаном. Подібні незначні зміни можуть також включати делеції амінокислот або інсерції або те й інше. Керівництво щодо визначенні того, які і скільки амінокислотних залишків можуть бути заміщені, вставлені або видалені без зміни біологічної або імунологічної активності, можуть бути знайдені за допомогою комп'ютерних програм, відомих в даній галузі техніки, наприклад, програмного забезпечення
ОМА5БТАВ (ОМА5ЗТАНВ, Іпс., Мадізоп, МУ/ів.). бо В іншому аспекті винахід передбачає виділені і/або розпізнані нуклеїнові кислоти, що кодують молекули анти-зСС антитіл. В варіантах реалізації винаходу нуклеїнові кислоти кодують одну або більше молекул антитіл, важких ланцюгів, легких ланцюгів, варіабельних областей легкого ланцюга, варіабельних областей важкого ланцюга, частин важких ланцюгів і легких ланцюгів молекули антитіл, описаних в даному документі (наприклад, фрагмент варіабельної області легкого ланцюга, який в парі з повнорозмірною варіабельною областю важкого ланцюга є антигензв'язуючий, або фрагмент варіабельної області важкого ланцюга, який, коли в парі з повнорозмірною варіабельною областю легкого ланцюга, є антигензв'язуючий) і СОК (-и). Варіанти реалізації винаходу включають такі нуклеїнові кислоти, розташовані в векторах, наприклад, експресуючих векторах. Більш того, даний винахід охоплює молекули антитіл, що продукуються клітинами-господарями, наприклад, експресуючими молекули антитіл, що кодуються такими плазмідами.
У варіанті реалізації винаходу передбачений вектор, наприклад, експресуючий вектор, що містить одну або обидві з: послідовностей, що кодують варіабельну область легкого ланцюга, наприклад, варіабельну область легкого ланцюга, описану в Таблиці 3, наприклад, послідовність, представлену в
Таблиці 4, її антигензв'язуючий фрагмент або одну, дві або три СОК легкого ланцюга (їі необов'язково каркасну область), описані в даному документі, наприклад, СОК, описані в
Таблиці 5, наприклад, СОК, кодовану послідовністю в Таблиці 6; і послідовностей, що кодують варіабельну область важкого ланцюга, наприклад, варіабельну область важкого ланцюга, описану в Таблиці 3, наприклад, послідовність, представлену в
Таблиці 4, її антигензв'язуючий фрагмент або одну, дві або три СОК важкого ланцюга (їі необов'язково каркасну область), описані в даному документі, наприклад, СОК, описані в
Таблиці 5, наприклад, СОК, кодовану послідовністю в Таблиці 6.
В варіантах реалізації винаходу передбачені полінуклеотиди, що кодують щонайменше одну варіабельну область важкого ланцюга, або щонайменше одну варіабельну область легкого ланцюга антитіл відповідно до даного винаходу. В варіантах реалізації винаходу передбачені полінуклеотиди, які можуть кодувати, щонайменше, одну варіабельну область важкого ланцюга і одну варіабельну область легкого ланцюга антитіл відповідно до даного винаходу.
У варіанті реалізації винаходу молекула анти-сСсС антитіла містить одну або обидві:
Зо (а) варіабельну область легкого ланцюга або її антигензв'язуючий фрагмент, що кодуються нуклеїновою кислотою, яка гібридизує в обраних жорстких умовах з (ї) нуклетновокислотною послідовністю, яка кодує комплемент молекули анти-зСС антитіла, описаного в даному документі, наприклад, в Таблиці 4 або (ії) будь-якою нуклеїновокислотною послідовністю, яка кодує легкий ланцюг молекули анти-зСС антитіла згідно винаходу, наприклад, одного з вищевказаних кролячих антитіл, представлених в Таблицях 1 і2; і (б) варіабельну область важкого ланцюга або її антигензв'язуючий фрагмент, що кодуються нуклеїнової кислотою, яка гібридизує в обраних умовах жорсткості з (ї) нуклетїновокислотною послідовністю, яка кодує комплемент молекули анти-зСС антитіла, описаного в даному документі, наприклад, в Таблиці 4, або (її) будь якою нуклеїновокислотною послідовністю, яка кодує важкий ланцюг молекули анти-зСсС антитіла згідно винаходу, наприклад, одного з вищевказаних кролячих антитіл, представлених в Таблицях 1 і 2.
У варіанті реалізації винаходу вибраними умовами жорсткості є умови високої жорсткості або дуже високої жорсткості, наприклад, як ті умови, які описані в даному документі.
Даний винахід також передбачає вектори, які містять полінуклеотиди відповідно до даного винаходу, клітини-господарі, отримані за допомогою генної інженерії з векторами відповідно до даного винаходу, і отримання антитіл відповідно до даного винаходу за допомогою рекомбінантних технологій.
Віповідна послідовність ДНК може бути вбудована в вектор за допомогою різних процедур.
Загалом, послідовність ДНК вставляється у відповідні ендонуклеазні сайти рестрикції за допомогою процедур, відомих в даній області. Полінуклеотидна послідовність в експресуючому векторі функціонально пов'язана з відповідною послідовністю контролю експресії (тобто промотором) для прямого синтезу МРНК. Приклади таких промоторів включають ІТК віруси саркоми Рауса або ранній або пізній промотор 5М40, Е. соїї Іас або ігр, промотор Рі фага- лямбда та інші промотори, відомі для управління експресією генів у прокаріотичних (наприклад,
Іас, промотори Т3, Т7 для Е. соїї) або еукаріотичних (наприклад, цитомегаловірусний промотор, аденовірусний пізній промотор, промотор ЕЕ-Та) клітин або їх вірусів, але не обмежуються ними. Експресуючий вектор також містить рибосомо-зв'язуючий сайт для ініціації трансляції та термінування транскрипції. Вектор також може містити відповідні послідовності для ампліфікації експресії. Наприклад, вектор може містити енхансери, які є послідовностями ДНК вірусного бо походження, стимулюючими транскрипцію, такими як ті, які були отримані з вірусу мавп, такого як 5М40, вірусу поліоми, цитомегаловірусу, вірусу папіломи великої рогатої худоби або вірусу саркоми Молоні, або геномного походження. Вектор переважно також містить точку початку реплікації. Вектор може бути сконструйований таким чином, щоб утримувати екзогенну точку початку реплікації, або така точка початку реплікації може бути отримана з 5М40 або іншого вірусного джерела або за допомогою механізму хромосомної реплікації клітини-господоря.
Крім того, вектор необов'язково може містити маркерний ген для вибору трансфекованих клітин-господарів, такий як маркерні гени дигідрофолатредуктази, щоб зробити можливим відбір за допомогою метотрексату серед безлічі господарів або антибіотиків, такий як ген бета- лактамазин (стійкість до ампіциліну), ген Теї (стійкість до тетрацикліну), використовувані в прокаріотичних клітинах, або неоміцин, (ЗА418 (генетіцин, похідне неоміцина), орі (мікофенольна кислота), гени стійкості до ампіциліну або гігроміціну або гени, які доповнюють генетичне пошкодження клітин-господарів, таке як відсутність тимідинкінази, гіпоксантинфосфорибозілтрансферази, дигідрофолатредуктази і т.д. Гени, що кодують генний продукт ауксотрофності маркерів господаря (наприклад, ЇЕБШО2, ОКАЗ, НІБЗЗ), часто використовують як селективні маркери в дріжджах.
З метою отримання антитіл відповідно до даного винаходу, одну або більше полінуклеотидних послідовностей, які кодують варіабельні області легкого і важкого ланцюгів і константні області легкого і важкого ланцюгів антитіл відповідно до даного винаходу, вводять в вектор. Полінуклеотидні послідовності, що кодують легкий і важкий ланцюги антитіл відповідно до даного винаходу можуть бути введені в один або безліч векторів, а потім вводитися в клітини-господарі.
Відповідні експресуючі вектори для експресії в клітинах ссавців включають, наприклад, рСОМ8, реОМАТ.1/атр, рсоМАЗ.1, рАс/А5МУ, рЕБ-1 (Іпміткодеп І їе Тесппоіодієв, Сагізбаєй, Саїїї.), рРОМУ-СВІРТ, рЕВ, раб, рХтТ1 (5ігаїадепе, Га доїа, Саїї.), РСОЕЕЗ (Соідтап, Г.А., еї аї.,
Віотесппіднев, 21: 1013-1015 (1996)), РАОМ5РОНТ (СІВСО адімівіоп ої Іпмігодеп І їе Тесппо!одієв,
Сапврає, Саїї.), рЕЕ- Воз (Міг2и5Нпіта, 5., єї аї., Мисієїс Асіаз Вев., 18: 5322 (1990)), Вісівігопіс
СРЕХ? Реїгомесіог (Саіа Віоїтесп, Мідаєеюп, УМі5.) і подібні. Експресуючі вектори, які підходять для використання в різних експресуючих господарях, таких як прокаріотичні клітини (Е. сої), клітини комах (Огозорпйа Зсппіедег 52 клітини, 519) і дріжджів (Р. теїПапоїїса, Р. равіогів5, 5.
Зо сегемізіає), також доступні. Прикладом векторів є рі КТОКЗБ8 (послідовність Ес дикого типу ІДО1) і рЕКТоОкК5Б9 (послідовність Ес мутованого Ідс1) (дивись публікацію патентної заявки США Мо 20060147445).
Як буде зрозуміло, антитіла відповідно до даного винаходу можуть експресуватися в клітинних лініях, відмінних від гібридомних клітинних ліній. Послідовності, що кодують КДНК або геномні клони для конкретного антитіла, можуть бути використані для відповідних клітин- господарів ссавців або не ссавців. Трансформування може бути здійснене за допомогою будь- якого відомого методу для введення полінуклеотидів в клітину-господар, включаючи, наприклад, упаковку полінуклеотида в вірус (або в вірусний вектор) і трансдукування клітини- господаря вірусом (або вектором), або за допомогою процедур трансфекції, відомих з рівня техніки, для введення гетерогенних полінуклеотидів в клітини ссавців, наприклад, опосередкована декстраном трансфекція, кальцій-фосфатна преципітація, опосередкована полібреном трансфекція, протопластне злиття, електропорація, інкапсуляція полінуклеотида (- ів)у в ліпосоми і прямі мікроіїн'єкції в молекулу ДНК. Використовувана трансформаційна процедура залежить від господаря, який буде трансформуватися. Способи введення гетерогенних полінуклеотидів в клітини ссавців відомі з рівня техніки і включають опосередковану декстраном трансфекцію, кальцій-фосфатну преципітацію, опосередковану полібреном трансфекцію, протопластне злиття, електропорацію, бомбардування частинками, інкапсуляцію полінуклеотида (-ів) в ліпосоми і прямі мікроін'єкції ДНК в ядро, але не обмежуються ними.
В іншому аспекті винахід передбачає клітину-господаря, що містить нуклеїнову кислоту, описану в даному документі. В варіантах реалізації винаходу клітина експресує молекулу антитіла або її компонент, описані в цьому документі. Ще додатковий варіант реалізації винаходу передбачає спосіб отримання молекули анти-сСС антитіла, описаний в даному документі, наприклад молекули кролячого антитіла або його гуманізовану версію, що включає підтримку клітини-господаря в умовах, придатних для експресії тим самим експресуючи імуноглобулінові ланцюги і отримуючи молекулу антитіла. Додатковий варіант реалізації винаходу передбачає клітину-господаря, що містить вищезгадані експресуючі вектори, які кодують послідовності легкого і важкого ланцюгів антитіла. Клітина-господар може бути еукаріотичною клітиною, наприклад, клітиною ссавця, клітиною комах, дріжджовою клітиною або бо прокаріотичною клітиною, наприклад, ЕЕ. сої. Наприклад, клітина ссавця може бути культивована клітиною або клітинною лінією. Приклади клітин ссавця включають лімфоцитні клітинні лінії (наприклад, М50О), оваріальні клітини китайського хом'ячка (СНО), клітини СО5. У окремому варіанті реалізації винаходу культивованої клітиною-господарем є клітина СНО, що містить нуклеїновокислотні послідовності, що кодують молекулу антитіла Мі! -44-148-2. В іншому варіанті реалізації винаходу клітиною-господарем є гібридома МІ -44-148-2 (РТА-8132).
Додатково клітини включають овоцитні клітини і клітини від трансгенних тварин, наприклад, епітеліальні клітини ссавця. Наприклад, нуклеїнові кислоти, що кодують молекулу антитіла, описаного в цьому документі, можуть експресуватися в трансгенному нелюдському тваринному.
Клітинні лінії ссавці, придатні в якості господарів для експресії, відомі з рівня техніки і включають багато іморталізованних ліній клітин, доступні з Американської колекції типових культур (АТСС), включаючи оваріальні клітини китайського хом'ячка (СНО), клітини М5О, клітини Неї а, клітини нирки новонародженого хом'яка (ВНК), клітини нирки мавпи (СО5), клітини гепатоцелюлярної карциноми людини (наприклад, Нер 02) і ряд інших клітинних ліній, але не обмежуючись ними. Також для експресування рекомбінантних антитіл можуть бути використані клітини не ссавців, включаючи бактеріальні, дріжджові клітини, клітини комах і рослин, але не обмежуючись ними. Сайт-спрямований мутагенез домену СН2 антитіла для видалення глікозилювання може бути здійснено з метою попередження змін до імуногенності, фармакокінетиці та/або ефекторних функцій в результаті нелюдського глікозилювання. Методи експресії вибирають для визначення того, яка система генерує підвищені рівні експресії і продукує антитіла з конститутивними ССС-зв'язуючими властивостями.
Ще додатковий варіант реалізації винаходу передбачає спосіб отримання молекули анти-
ОСС антитіла, наприклад, молекули кролячого антитіла або його гуманізованої версії, що включає підтримку клітини-господаря, яка містить нуклеїнові кислоти, описані в даному документі, наприклад, одну або більше нуклеїновокислотних послідовностей, перерахованих у
Таблиці 4 або б, в умовах, придатних для експресування імуноглобуліну, тим самим експресуючи ланцюги імуноглобуліну і продукуючи молекулу антитіла, наприклад, молекулу кролячого антитіла або його гуманізовану версію, які пов'язують СС або її фрагмент або варіант. Наприклад, способи експресування молекули антитіл включають використання клітин- господарів, де перша молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує молекулу антитіла, наприклад,
Зо легкий ланцюг кролячого антитіла або його гуманізовані версії, і друга молекула рекомбінантної нуклеїнової кислоти, яка кодує молекулу антитіла, наприклад, важкий ланцюг кролячого антитіла або його гуманізовані версії, містяться в одному експресуючому векторі. В інших варіантах реалізації винаходу вони знаходяться в окремих векторах. Спосіб може додатково включати етап виділення або відновлення антитіла, антигензв'язуючого фрагмента антитіла, ланцюга антитіла або антигензв'язуючого фрагмента ланцюга антитіла, якщо це бажано.
Наприклад, молекулу нуклеїнової кислоти (тобто, одну або більше нуклеїновокислотних молекул), що кодує важкий і легсий ланцюги кролячого (або гуманізованого) антитіла, яке пов'язує білок СС, або експресуючий конструкт (тобто, один або більше конструктів), що містить таку нуклеїновокислотну молекулу (-и), можна вводити в придатну клітину-господар для створення рекомбінантної клітини-господаря з використанням будь-якого методу, придатного для вибраної клітини-господаря (наприклад, трансформування, трансфекція, електропорація, інфікування) так, що нуклеїновокислотна молекула (-и) функціонально зв'язується з одним або більше елементами, керуючими експресією (наприклад, у векторі, в конструкті, створеному за допомогою процесів в клітині, інтегрованих в геном клітини-господаря). Отриману клітину- господар можна підтримувати в умовах, придатних для експресії (наприклад, в присутності індуктора, в підходящому нелюдському тваринному, в підходящої культуральному середовищі, доповненої прийнятними солями, факторами росту, антибіотиками, харчовими добавками і т.д.), тим самим продукуючи кодуючі поліпептиди. За необхідності кодуючий білок можна виділити або відновити (наприклад, з тваринного, клітини-господаря, середовища, молока). Цей процес охоплює експресію в клітині-господарі трансгенної нелюдської тварини (див., наприклад, УМО 92/03918, СепРнНагт Іпіегпайіопаї) або рослини.
Крім того, експресію антитіл згідно винаходу (або інших їх фрагментів) із продукуючих клітинних ліній можна збільшити, використовуючи ряд відомих методик. Наприклад, глутамін- синтетаза і генна експресуюча система ОНЕК є загальноприйнятими підходами для підвищення експресії в певних умовах. Високоекспресуючі клітинні клони можна ідентифікувати, використовуючи звичайні методики, такі як обмежене розбавлене клонування, мікрокраплинна технологія чи будь-які інші методи, відомі з рівня техніки. Система 55 обговорюється в цілому або частково у зв'язку з європейськими патентами Мо 0216846, 0256055 та 0323997 та європейською патентною заявкою Мо 89303964.4. 60 В приблизній системі для рекомбінантної експресії модифікованого антитіла або його антигензв'язуючої частини, згідно винаходу, рекомбінантний експресуючий вектор, що кодує як важкий ланцюг антитіла, так і легкий ланцюг антитіла, вводять в клітини 4пї-СНО за допомогою опосередкованої фосфатом кальцію трансфекції. В рекомбінантному експресуючому векторі гени важкого і легкого ланцюгів антитіла функціонально пов'язані З енхансерними/промоторними регуляторними елементами (наприклад, отриманими з 5М40,
СМУ, аденовірусу і т.п., такими як регуляторний елемент енхансер СММ/промотор АаміІ Р або регуляторний елемент енхансер 5М40/промотор АаМІ Р) для приведення в дію високих рівнів транскрипції генів. Рекомбінантний експресуючий вектор також несе ген ОНЕК, який дозволяє відібрати клітини СНО, які були трансфековані вектором з використанням метотрексатної селекції/ампліфікації. Обрані трансформовані клітини-господарі культивують для забезпечення експресії важких і легких ланцюгів антитіла, а інтактне антитіло витягують з культурального середовища. Стандартні методи молекулярної біології використовуються для отримання рекомбінантного експресуючого вектора, трансфекції клітин-господарів, вибору трансформантів, культури клітин-господарів і вилучення антитіла з культурального середовища.
Антитіла згідно винаходу можуть бути також отримані трансгенно генерацією ссавця або рослини, які є трансгенними по імуноглобуліновим послідовностям важкого і легкого ланцюгів, що представляють інтерес, і шляхом виробництва антитіл в їх відновній формі. У зв'язку з трансгенним виробництвом у ссавців, антитіла можуть бути отримані в або витягнуті з молока кіз, корів або інших ссавців. Дивись, наприклад, патенти США Мо 5,827,690, 5,756,687, 5.750,172 та 5,741,957.
Антитіла, антигензв'язуючі фрагменти антитіл, ланцюги та їх антигензв'язуючі ділянки, описані в даному документі, можуть бути також отримані в підходящих експресуючих системах іп мійго, за допомогою хімічного синтезу або за допомогою будь-якого іншого відповідного методу.
Злиті білки і імунокон'югати
Анти-СС антитіла, описані в даному документі, можуть функціонально приєднуватися за допомогою будь-якого придатного методу (наприклад, хімічного зв'язування, генетичного злиття, нековалентного зв'язування або іншим способом) до однієї або більше неантитільної молекулярної одиниці.
Зо Можуть бути отримані злиті білки, в яких молекула анти-ССС антитіла, як описано в даному документі, і неантитільний фрагмент є компонентами одного безперервного поліпептидного ланцюга. Неантитільний фрагмент може знаходитися у М-кінця, С-кінця або всередині щодо фрагмента антитіла. Наприклад, деякі варіанти реалізації винаходу можуть бути отримані за допомогою вставки нуклеїнової кислоти, яка кодує імуноглобулінові послідовності, в придатний експресуючий вектор, такий як вектор рЕТ (наприклад, рЕТ-1560, Момадеп), фагів вектор (наприклад, РСМАТАВ 5 Е, РІагтасіа) або інший вектор, наприклад, рКІТ2Т-білок А злитий вектор, РПагтасіа). Отриманий конструкт може експресуватися для отримання ланцюгів антитіла, які містять неантитільний фрагмент (наприклад, гістидинова мітка, Е-мітка або зв'язуючий домен білка А Ідс). Злиті білки можуть бути виділені або витягнуті з використанням придатних методик, таких як хроматографія з використанням відповідних матриксів афінності (див., наприклад, Ситепі Ргоїосої!5 іп Моїесшаг Віоіоду (А!,зибреї, Е.М. еї аї., ред., том 2, доп. 26, со. 16.4.1-16.7.8 (1991)).
Винахід передбачає молекули анти-ОСс антитіл, які спрямовані на і, в варіантах реалізації винаходу, інтерналізовані в клітини. Вони здатні доставляти терапевтичні речовини або речовини, що визначають, в клітини або до них, експресуючі (зСС, але не до клітин або в клітини, в яких ціль не експресується. Таким чином, винахід також передбачає анти-аСо імунокон'югати, що містять молекулу анти-сСсС антитіла, як описано в даному документі, яка кон'югована з терапевтичною речовиною або речовиною, що визначають. В варіантах реалізації винаходу афінність ССС анти-ЗСС імунокон'югата становить, щонайменше, 10, 25, 50, 75, 80, 90 або 9595 від афінності не кон'югованого антитіла. Це можна визначити, використовуючи ССС поверхні клітин або виділену ОСС. У варіанті реалізації винаходу молекула анти-сСс антитіла, наприклад, імунокон'югат, має ГО50, як визначено в аналізі, описаному в цьому документі, що становить менше ніж 1000, 500, 250, 100 або 50 пМ.
Молекула анти-зСС антитіла може модифікуватися, щоб діяти як імунокон'югат, з використанням методик, відомих з рівня техніки. Дивись, наприклад, Мена Іттипої! Тодау 14: 252 (1993). Дивись також патент США Мо 5,194,594. Приготування радіомічених антитіл також можна легко здійснити, використовуючи методики, які відомі з рівня техніки. Дивись, наприклад,
Уипдвпапз еї аїЇ. в Сапсег Спетоїпегару апа Віо(шегару 655-686 (24 еєдйоп, СНаїпег апа ГІ оподо, еаз., ПІрріпсоїї Камеп (1996)). Дивись також патенти США Мо 4,681,581, 4,735,210, 5,101,827, 60 5,102,990 (05 Ве. Раї. Мо. 35,500), 5,648,471 та 5,697,902.
В деяких варіантах реалізації винаходу молекула антитіла і неантитільний фрагмент з'єднуються за допомогою лінкера. В таких варіантах реалізації винаходу імунокон'югат представлений формулою (1):
АВ-Х-А7)и де
АБ являє собою молекулу анти-ССсС антитіла, описану в даному документі;
Х являє собою функціональний фрагмент, який з'єднує АБ і 7, наприклад, залишок лінкера, описаного в даному документі, після ковалентного зв'язування з одним або обома АБ і 7; 7 являє собою терапевтичну речовину або мітку; і т варіює від приблизно 1 до приблизно 15.
Змінна т являє собою кількість фрагментів --Х--2 на молекулу антитіла в імунокон'югаті формули (І). У різних варіантах реалізації винаходу т варіює від 1 до 15, від 1 до 10, від 1 до 9, від 1 до 8, від 1 до 7, від 1 до 6, від 1 до 5, від 1 до 4, від 1 до З або від 1 до 2. В деяких варіантах реалізації винаходу т варіює від 2 до 10, від 2 до 9, від2 до 8, від2 до 7, від2 до 6, від 2 до 5, від 2 до 4 або від 2 до 3. В інших варіантах реалізації винаходу т являє собою 1, 2, 3, 4, 5 або 6. В композиціях, що містять безліч імунокон'югатів формули (І), т являє собою середню кількість фрагментів --Х--2 на АБ, також іменоване як середній вміст лікарської речовини. Середній вміст лікарської речовини може варіювати від 1 до приблизно 15 фрагментів -Х--2 на АБ. В деяких варіантах реалізації винаходу, коли т являє собою середній вміст лікарської речовини, т становить приблизно 1, приблизно 2, приблизно 3, приблизно 4, приблизно 5, приблизно б, приблизно 7 або приблизно 8. В примірних варіантах реалізації винаходу т становить від приблизно 2 до приблизно 8. В одному варіанті реалізації винаходу т становить приблизно 8. В іншому варіанті реалізації винаходу т становить приблизно 4. В іншому варіанті реалізації винаходу т становить приблизно 2.
Середня кількість фрагментів --Х--2 на АБ може бути охарактеризована за допомогою звичайних засобів, таких як мас-спектроскопія, ІФА і ВЕРХ. Кількісний розподіл імунокон'югатів щодо т також можна визначити. В деяких випадках поділ, очищення та характеристики гомогенних імунокон'югатів, коли т має певне значення, на відміну від імунокон'югатів з іншими змістами лікарського засобу, може досягатися за допомогою засобів, таких як зворотньофазова
Зо ВЕРХ або електрофорез.
Імунокон'югати формули (І) можуть існувати у вигляді сумішей, в яких кожен компонент суміші має відмінне значення т. Наприклад, імунокон'югат формули (І) може існувати у вигляді суміші двох окремих імунокон'югатних компонентів: одного імунокон'югатного компонента, у якого т становить 7, та іншого імунокон'югатного компонента, у якого т становить 8.
В одному варіанті реалізації винаходу імунокон'югат формули (І) існує у вигляді суміші трьох окремих імунокон'югатів, у яких т становить 1, 2 і З, відповідно; 3, 4 і 5, відповідно; 5, 6 і 7, відповідно; 7, 8 і 9, відповідно; 9, 10 та 11, відповідно; 11, 12 і 13, відповідно; або 13, 14 і 15, відповідно.
З рівня техніки відомо безліч придатних лінкерів (наприклад, гетеробіфункціональних реагентів для з'єднання молекули антитіла з терапевтичною речовиною або міткою) і способів отримання імунокон'югатів. (Див., наприклад, Спагі еї аІ., Сапсег Кезеагсп 52: 127-131 (1992).).
Лінкер може бути розщепляємим, наприклад, в фізіологічних умовах, наприклад, у внутрішньоклітинних умовах, таким як розщеплення лінкера, що вивільняє лікарський засіб (тобто, терапевтична речовина або мітка) у внутрішньоклітинне середовище. В інших варіантах реалізації винаходу лінкер не є розщеплюваним, а лікарський засіб вивільняється, наприклад, шляхом розпаду антитіла.
Лінкер може зв'язуватися з хімічно реактивною групою на фрагменті антитіла, наприклад, з вільною аміно, іміно, гідроксильною, тіольною або карбоксильною групою (наприклад, з М- або
С-кінцями, з епсилон- аміногрупою на одному або більше лізинових залишках, вільною карбоксильною групою на одному або більше залишків глутамінової кислоти або аспарагінової кислоти або з сульфгідрильною групою на одному або більше цистеїнілових залишках). Сайт, до якого приєднується лінкер, може бути природним залишком в амінокислотній послідовності антитільного фрагмента або він може вводитися в антитільний фрагмент, наприклад, за допомогою технології рекомбінантних ДНК (наприклад, шляхом введення цистеїну або протеазно розщеплюємого сайту в амінокислотну послідовність) або за допомогою білкової біохімії (наприклад, відновленням, регулюванням рН або протеолізом).
Одним з найбільш часто використовуваних неспецифічних методів ковалентного приєднання є карбодиімідна реакція для приєднання карбоксигрупи (або аміногрупи) сполуки до аміногруп (або карбоксигруп) молекули антитіла. Крім того, біфункціональні агенти, такі як диальдегіди або імідоефіри, можуть бути використані для з'єднання аміногрупи сполуки з аміногрупами молекули антитіла. Також придатною для приєднання лікарського засобу (тобто, терапевтичної речовини або мітки) до молекул антитіл є реакція основи Шиффа. Даний метод включає періодатне окислення лікарського засобу, який містить гліколь або гідроксигрупи, тим самим утворюючи альдегід, який потім реагує з молекулою антитіла. Приєднання відбувається через утворення основи Шиффа з аміногрупами молекули антитіла. Ізотіоцианати також можуть бути використані в якості сполучних агентів для ковалентного приєднання лікарських засобів до молекули антитіла. Інші методики відомі з рівня техніки фахівцеві в даній галузі техніки і знаходяться в сфері розгляду відповідно до даного винаходу.
В деяких варіантах реалізації винаходу проміжна сполука, яка є попередником лінкера (Х), реагує з лікарським засобом (7) в прийнятних умовах. В деяких варіантах реалізації винаходу використовуються реактивні групи на лікарському засобі та/або проміжній сполуці. Продукт реакції між лікарським засобом (тобто, терапевтичною речовиною або міткою) і проміжною сполукою або дериватизованим лікарським засобом потім реагує з молекулою антитіла в прийнятних умовах.
Імунокон'югати можна очистити від реагуючих речовин шляхом використання методологій, добре відомих фахівцям в даній області техніки, наприклад, колонковою хроматографією (наприклад, афінною хроматографією, іонообмінною хроматографією, гель-хроматографією, хроматографією з гідрофобною взаємодією), діалізом, діафільтрацією або преципітацією.
Імунокон'югати можна оцінити шляхом використання методологій, добре відомих фахівцям в даній області техніки, наприклад, 505-РАСЕ, мас-спектроскопією або методом капілярного електрофорезу.
В деяких варіантах реалізації винаходу лінкер розщеплюється за допомогою розщеплюючої речовини, яка міститься у внутрішньоклітинному середовищі (наприклад, в лізосомах або ендосомах, або ямках). Лінкером може бути, наприклад, пептидільний лінкер, який розщеплюється внутрішньоклітинною пептидазою або протеазним ферментом, включаючи лізосомальну або ендосомальну протеазу, але не обмежуючись ними. В деяких варіантах реалізації винаходу пептидільний лінкер в довжину складає, щонайменше, дві амінокислоти або, щонайменше, три амінокислоти. Розщеплюючі речовини можуть включати катепсини Вір і плазмін, всі вони відомі для гідролізу похідних дипептидних лікарських засобів, що призводить до вивільнення активного лікарського засобу (тобто, терапевтичної речовини або мітки) всередині клітин-мішеней (дивись, наприклад, бибомспік апа УмаїКег, 1999, Рпагт. Тпегарешісв 83: 67-123). Більш типовими є пептидільні лінкери, які розщеплюються ферментами, які присутні в сСС-експресуючих клітинах. Наприклад, може бути використаний пептидільний лінкер, який розщеплюється тіолзалежною протеазою катепсином-В, який у високому ступені експресується в ракових тканинах (наприклад, лінкер Рпе-Іеи або лінкер СІу-РНе-І еи-Сіу (ЗЕО ІЮ Мо 319)).
Інші приклади таких лінкерів описані, наприклад, в патенті США Мо 6214345, включеному в даний документ шляхом посилання в усій повноті і для всіх цілей. В окремому варіанті реалізації винаходу пептидільним лінкером, який розщеплюється внутрішньоклітинною протеазою, є лінкер МаІ-Сїї або лінкер Рпе-Гу5 (дивись, наприклад, патент США Мо 6214345, який описує синтез доксорубіцину з лінкером маІ-сі). Одна перевага використання внутрішньоклітинного протеолітичного вивільнення лікарського засобу (тобто, терапевтичної речовини або мітки) полягає в тому, що лікарський засіб, як правило, розчиняється при кон'югації, і стабільність кон'югатів в сироватці, як правило, вище.
В інших варіантах реалізації винаходу розщеплюваний лінкер є рН-чутливим, тобто, чутливим до гідролізу при певних значеннях рН. Зазвичай, рН-чутливий лінкер в кислому середовищі гідролізуєься. Наприклад, можна використовувати кислотнолабільний лінкер, який гідролізується в лізосомах (наприклад, гідразон, семікарбазон, тіосемікарбазон, цис-аконітамід, ортоефір, ацеталь, кеталь або подібні). (Дивись, наприклад, патент США Мо 5,122,368; 5,824,805; 5,622,929; ВБиромеспік апа УаїКег, 1999, Рпапт. Пнегарешісв 83: 67-123; МеміШе еї аї., 1989, Віої. Снет. 264: 14653- 14661). Такі лінкери відносно стабільні в умовах нейтрального рн, такого як в крові, але нестабільні при рН нижче 5,5 або 5,0 (середнє рН лізосоми). В деяких варіантах реалізації винаходу лінкером, що гідролізується, є тіоефірний лінкер (такий як, наприклад, тіоефір, приєднаний до терапевтичної речовині через ацилгідразонний зв'язок (дивись, наприклад, патент США Мо 5,622,929).
У ще інших варіантах реалізації винаходу лінкер розщеплюється в умовах відновлення (наприклад, дисульфідний лінкер). Безліч дисульфідних лінкерів відомо з рівня техніки, бо включаючи, наприклад, ті, які можуть бути отримані з використанням 5АТА (М-сукцинімідил-5-
Зо ацетилтіоацетат), 5РОР (М-сукцинімідил-3-(2-піридилдитіо) пропіонат), 5РОВ (М-сукцинімідил-3- (2-піридилдитіо)бутират) і ЗМРТ (М-сукцинімідил-оксикарбоніл-альфа-метил-альфа-(2- піридилдитіо)толуол), 5РОВ і МРТ (див., наприклад, Тпогре еї аї., 1987, Сапсег Кев5. 47: 5924- 5931; Мамлтгупслак еї аї., іп Іттипосопійдаїев: Апіїроду Сопійдаїез іп Радіоітадегу апа Тнегару ої Сапсег (СМ Модеї, ред., Охіога М. Ргез5, 1987. Див. також патент США Мо 4.880,935).
У ще інших специфічних варіантах реалізації винаходу лінкером є малонатний лінкер (Чонпзоп еї а!., 1995, Апіісапсег ВНез. 15: 1387-93), малеімідобензоїльний лінкер (І аи еї аї., 1995,
Віоогд Мед. Спет. З (10): 1299 -1304) або аналог 3'-М-аміду (І ам еї а!., 1995, Віоога-Мед-Снет. З (10): 1305-12).
У ще інших варіантах реалізації винаходу лінкерне з'єднання не розщеплюється і лікарський засіб (тобто терапевтична речовина або мітка) вивільняється шляхом розпаду антитіла. (Дивись, наприклад, патентну публікацію США Мо 20050238649, включену шляхом посилання у цей документ у всій своїй повноті і для всіх цілей).
Як правило, лінкер по суті не є чутливим до позаклітинного середовища. У контексті цього винаходу "по суті не є чутливим до позаклітинного середовища", в контексті лінкера означає, що не більше ніж приблизно 2095, зазвичай не більше ніж приблизно 1595, найбільш часто не більше ніж приблизно 1095 і ще більш часто не більше ніж приблизно 595, не більше ніж приблизно 395 або не більше ніж приблизно 195 лінкерів в зразку імунокон'югата розщеплюється, коли імунокон'югат присутній в позаклітинному середовищі (наприклад, в плазмі). Чи є лінкер нечутливим до зовнішньо-клітинного середовища можна визначити, наприклад, шляхом інкубування імунокон'югата з плазмою протягом попередньо визначеного часу (наприклад, 2, 4, 8, 16 або 24 годин) і наступного кількісного визначення вільного лікарського засобу, наявного в плазмі.
В інших не взаємовиключаючих варіантах реалізації винаходу лінкер сприяє клітинній інтерналізації. В деяких варіантах реалізації винаходу лінкер сприяє клітинній інтерналізації, коли кон'югований з терапевтичною речовиною або міткою (7). У ще інших варіантах реалізації винаходу лінкер сприяє клітинній інтерналізації при кон'югованні з фрагментом 2 і молекулою анти-ОСС антитіла.
Існує безліч типових лінкерів, які можуть бути використані з композиціями відповідно до даного винаходу і способами, описаними в УМО 2004-010957, публікації заявки на патент США
Мо 20060074008, публікації заявки на патент США Мо 20050238649 та публікації заявки на патент
США Мо 20060024317 (кожна з яких включена в даний опис шляхом посилання в усій їх повноті і для всіх цілей).
Приклади лінкерів, які можуть бути використані для приєднання молекули антитіла до терапевтичної речовини або мітки, включають, наприклад, малеімідокапроїл (те); малеїімідокапроїл-р-амінобензилкарбамат; малеімідокапроїл-пептид-амінобензилкарбаматні лінкери, наприклад, малеімідокапроїл-І -фенілаланін-І -лізин-р-амінобензилкарбамат і малеїімідокапроїл-і -валін-І -цитрулін-р-амінобензилкарбамат (мс); М-сукцинімідил 3-(2- піридилдитіо)пропіонат (також відомий як М-сукцинімідил 4-(2-піридилдитіо)пентаноат або 5РР); 4-сукцинімідил-оксикарбоніл-2-метил-2-(2-піридилдитіо)--олуол (ЗМРТ); М-сукцинімідил 3-(2- піридилдитіо)упропіонат (5РОР); М-сукцинімідил 4-(2-піридилдитіо)бутират (ЗРОВ); 2-імінотіолан;
З-ацетилбурштиновий ангідрид; дисульфідбензилкарбамат; карбонат; гідразинові лінкери; М- (а-малеімідоацетокси)сукцинімідний складний ефір; М-(4-(р-азидосаліциламідо)бутил|-3-(2'- піридилдитіо)пропіонамід (АМА5); М-(бета-малеімідопропілокси|сукцинімідний складний ефір (ВМРБ); ІМ-є-малеімідокапроілокси|сукцинімідний складний ефір (ЕМСЗ5); М-Їу- малеімідобутирилокси|сукцинімідний складний ефір (СМВ5); сукцинімідил-4-|М- малеїімідометилі|циклогексан-1-карбокси-Іб-амідокапроат| (І С-5МСС); сукцинімідил 6- (3-(2- піридилдитіо|-пропіонамідо) гексаноат (І С-5РОР); т-малеімідобензоїл-М-гідроксисукцинімідний складний ефір (МВ5); М-сукцинімідил (4-йодоацетил|амінобензоат (ЗІАВ); сукцинімідила-(М- малеїімідометил|циклогексан-і-карбоксилат (5МСС); М-сукцинімідил о 3-(2-піридилдитіо |- пропіонамід (5РОР); (М-є-малеімідокапроїлоксиїсульфосукцинімідний складний ефір (сульфо-
ЕМО5); М-(у-малеімідобутирилокси|Їсульфосукцинімідний складний ефір (сульфо-СМВ5); 4- сульфосукцинімідил-б-метил-а-(2-піридилдитіо)толуамідо|гексаноат) (сульфо-І С-5МРТ); сульфосукцинімідил-6-(3'-(2-піридилдитіо|-пропіонамідо)гексаноат (сульфо-І С-БРОР); т- малеімідобензоїл-М-гідрокси-сульфосукцинімідний складний ефір (сульфо-МВ5); М- сульфосукцинімідил (4-йодоацетил|іамінобензоат (сульфо-5ІАВ); сульфосукцинімідила-|(М- малеїмідометил|циклогексан-1-карбоксилат (сульфо-ЗМОСС);сульфосукцинімідил 4-Ір- малеімідофеніл|бутират (сульфо-5МРВ); етиленгліколь-біс(ібурштинової кислоти М- гідроксисукцинімідний складний ефір) (ЕСб5); дисукциніміділа тартрат (051тТ); 1,4,7,10- бо татраазаціклододекан-1,4,7,10-тетраоцтова кислота (0ОТА); діетилентриамін-пентаоцтова кислота (ОТРА); і тіосечовинні лінкери.
В деяких варіантах реалізації винаходу терапевтична речовина є цитостатичною або цитотоксичною речовиною. Приклади включають без обмеження антиметаболіти (наприклад, азатіоприн, б-меркаптопурин, б-тіогуанін, флударабін, пентостатином, кладрибин, 5- фторурацил (5ЕШ), флоксурідин (БЕООК), цитозину арабінозид (цитарабин), метотрексат, триметоприм, піриметамін, пеметрексед); алкілуючі речовини (наприклад, циклофосфамід, мехлоретамін, урамустин, мелфалан, хлорамбуцил, тіотепу/ухлорамбуцил, іфосфамід, кармустин, ломустин, стрептозоцин, бусульфан, дибромоманітол, цисплатин, карбоплатин, недаплатин, оксаліплатин, сатраплатін, триплатин тетранітрат, прокарбазин, альтретамін, дакарбазин, мітозоломід, темозоломід); антрацикліни (наприклад, даунорубіцин, доксорубіцин, епірубіцин, ідарубіцин, валрубіцин); антибіотики (наприклад, дактиноміцин, блеоміцин, мітраміцин, антраміцин, стрептозотоцин, граміцидин О, мітоміцин (наприклад, мітоміцин С), дуокарміцини (наприклад, СС-1065), каліхеміцини); антимітотичні агенти (включаючи, наприклад, майтанзиноїди, ауристатини, доластатини, криптофіцини, вінкаалкалоїди (наприклад, вінкристин, вінбластин, віндезин, винорелбин), таксани (наприклад, паклітаксел, доцетаксел або новий таксан (див., наприклад, міжнародну патентну публікацію Мо УМО 01/38318, опубліковану 31 травня 2001)) і колхіцини; інгібітори топоізомераз (наприклад, іринотекан, топотекан, амасарцин, етопозид, теніпозид, мітоксантрон); та інгібітори протеасом (наприклад, пептиди-борні кислоти).
В деяких варіантах реалізації винаходу терапевтичною речовиною є майтанзиноїд.
Майтанзиноїдні сполукиї способи їх кон'югації з антитілами описані, наприклад, у Спагі еї аї.,
Сапсег Вев., 52: 127-131 (1992); М/ідаїізоп еї аї., ). Мед. Спет. 49: 4392-4408 (2006); і патентах
США Мо 5,208,020 та 6,333,410. Приклади майтанзиноїдів включають аналоги майтанзина, що мають модифіковане ароматичне кільце (наприклад, С-19-дехлоро, С-20-деметокси, С-20- ацилокси), і ті, які мають модифікації в інших положеннях (наприклад, С-9-СН, 0-14- алкоксиметил, С-14-гідроксиметил або ацилоксиметил, С-15-гідрокси/ацилокси, С-15-метокси,
С-18-М-диметил, 4,5 -дезокси). В деяких варіантах реалізації винаходу майтанзиноїд є М.5!,р.2'- деацетил-М.5ир.2"- (4-меркапто-1-оксопентил) майтанзином (ОМ3), М.зир.2'--деацетил-М.вир. 27- (З-меркапто-1-оксопропіл)у майтанзином (ОМ) або М.5ир.2'-диацетил -М.5ир.2" - (4-меркапто-4-
Зо метил-1-оксопентил) майтанзином (ОМ).
Майтанзиноїдні сполуки, які містять сульфгідрильні групи, можуть з'єднуватися з антитілами з використанням гетеробіфункціонального лінкера, який приєднується до майтанзиноїдної сполуки шляхом утворення тіоефірного або дисульфідного зв'язку. У деяких таких варіантах реалізації винаходу лінкер з'єднується з аміногрупою на антитілі (наприклад, кінцевою аміногрупою або епсилон-аміногрупою лізинового залишку. В деяких варіантах реалізації винаходу гетеробіфункціональним лінкером, який використовують для приєднання майтанзиноїдних сполук до антитіла, є М-сукцініміділ 3- (2-піридилдитіо) пропіонат (також відомий як М-сукцініміділ 4- (2-піридилдитіо) пентаноат або РР), 4-сукцініміділоксикарбоніл-2- метил-2-(2-піридилдитіо)толуол (ЗМРТ), М-сукцініміділ 4 (|М-малеіїмідометил| циклогексан-1- карбоксилат (ЗМСОС), М-сукцініміділ 3- (2-піридилдитіо) пропіонат (ЗРОР); М-сукцініміділ 4- (2- піридилдитіо) бутират (ЗРОВ), 2-імінотіолан або 5-ацетилбурштиновий ангідрид.
В деяких інших варіантах реалізації винаходу терапевтичною речовиною є доластатин. В деяких варіантах реалізації винаходу терапевтичною речовиною є ауристатин, такий як ауристатин Е (також відомий в рівні техніки як похідне доластатину-10), або його похідні.
Ауристатинові сполуки і способи їх кон'югації з антитілами описані, наприклад, у Юогопіпа еї аї.,
Маїшге Віоїесн., 21: 778-784 (2003); Натрбіеїй єї аї, СіІп. Сапсег Нез., 10: 7063-7070 (2004); Сапег апа Бепівгї, Сапсег у9., 14 154-169 (2008); патентах США Мо 7,498,298, 7,091,186, 6,884,869; 6б,323,315; 6,239,104; 6,034,065; 5,780,588; 5,665,860; 5,663,149; 5,635,483; 5,599,902; 5,554,725; 5,530,097; 5,521,284; 5,504,191; 5,410,024; 5,138,036; 5,076,973; 4,986,988; 4,978,744; 4,879,278; 4,816,444; і 4,486,414; патентних публікаціях США Мо 20090010945, 20060074008, 20080300192, 20050009751, 20050238649 і 20030083236; і міжнародних патентних публікаціях Мо УМО 04/010957 ії УМО 02/088172, кожен з яких включений в даний опис за допомогою посилання у всій своїй повноті і для всіх цілей.
Ауристатин може бути, наприклад, складним ефіром, утвореним ауристатином Е і кетокислотою. Наприклад, ауристатин Е може реагувати з параацетилбензойною кислотою або бензоїлвалеріановою кислотою до утворення АЕВ і АЕМВ, відповідно. Інші типові ауристатини включають ауристатинфенілаланінфенілендіамін (АЕР), монометилауристатин Е (ММАЕ) і монометилауристатин Е (ММАБЄ).
В деяких варіантах реалізації винаходу терапевтичною речовиною є радіонуклід. Приклади 60 радіонуклідів, що можуть бути використані як токсини в радіаційній терапії, включають: 775с,
в7би, зоу, о9ра, 129|, 125|, 191), 186Де, 188Де, 199Ду, 211, 212рр і 2128. Інші радіонукліди, які можуть бути використані фахівцями в даній області техніки, включають: 92Р і 33рР, (зе, "7Ав, 193рр, 105ДВр, тд, 79560, 712151, 1918, Зру е1Тр, 177, 19105, ЗМІ, 797НО, всі бета- негативні і/або Оже- випромінювачі. Деякі переважні радіонукліди включають: ЗУ, 191, 211 дк і 212рр, 212ВІ.
Спеціаліст в даній галузі техніки зможе отримати кон'югат молекули анти-осСс антитіла з радіонуклідом, використовуючи добре відомі методики. Наприклад, Мадегеїасйі, М. (1991)
Апібоду Сопіпдастез Апа Маїїдпапі Оізеазе, СКС Ргез55, Воса Каїоп, Ріа.; і Вагопеї, 5.МУ. апа
Еподез, В.Н., (1983) Раадіоіїтадіпд апа Радіоїпегару, Еіземіег, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк, кожен з яких включений в даний опис шляхом посилання, стосується з'єднання різних терапевтичних та діагностичних радіонуклідів з амінокислотами антитіл. Такі реакції можна застосовувати для отримання кон'югатів радіонуклідів з молекулами анти-зСС антитіл згідно винаходу з прийнятною хелатуючою речовиною та/або лінкером.
Послідовності анти-сСс антитіл
Кролячі моноклональні анти-сСс антитіла можуть бути отримані декількома способами, як більш детально обговорено в розділі Приклади. Коротко, кролячі моноклональні антитіла МІ! - 44-148-2 і МІ -44-67-4 були отримані за допомогою традиційної технології імунізації кролів. Ці кролячі гібридоми були отримані від Ерйотісв5 (Вигіпдате, СА) шляхом злиття виділених В- клітин з імунізованих кролів з запатентованою компанією Еріютіс лінією клітин, що зливаються (див. патенти США Мо 7,402,409; 7,429.487; 7,462,697; 7,575,896; 7,732,168; та 8,062,867).
Специфічність антитіл проти ССС була перевірена методом ІФА і проточної цитометрії (ЕСМ).
Нижче в Таблиці 1 наведені кролячі моноклональні анти-оСсС антитіла згідно винаходу, створені за допомогою пОСС (ЕСО)/тіІдс2а ЕсК-тийІ імуногену.
Послідовності варіабельних областей легкого і важкого ланцюгів, визначені в Таблиці 2 нижче, є сумою 5ЕБО ІЮ МоМо варіабельних областей декількох антитіл. Амінокислотні і нуклеїновокислотні послідовності варіабельних областей кожного важкого і легкого ланцюга кролячого анти-ссСс антитіла показані в Таблицях З та 4, відповідно.
Амінокислотні і нуклеїновокислотні послідовності для кожної СОК важкого і легкого ланцюга анти-ОСС антитіла показані в таблиці 5 та 6, відповідно.
Секвенування СОК5 дозволило визначити надлишок залишків, які могли б служити в якості
Зо токсинових кон'югаційних сайтів. Наприклад, неспарений вільний цистеїн в антигензв'язуючій області може бути сайтом для кон'югації ауристатину, а лізин може бути сайтом для кон'югації майтанзіну. Токсинова кон'югація з амінокислотою СОК викличе стурбованість щодо зміни афінності зв'язування антитіла з ЗСС. Таким чином, в варіантах реалізації винаходу СОК не мають амінокислот, які можуть кон'югувати з терапевтичною речовиною.
Таблиця 1
Перелік ЗЕО ІЮ МоМео важких і легких ланцюгів анти-зСсС кролячих тАр
Нуклеїновокислотна | Амінокислотна 5ЕО ІЮ ми-44-674Нна 00 |важийї///// | 77777776 11111144
МІ -44-148-2 Н2 нуклеїновокислотна (5ЕО ІО Мо 4)
АТасСсАСАСсТОСОСсТСаеасТаасттотостастоастатТасСстоАААлса,ататоСАастатсАат сАдатТадАсаАатоСсасаааАаассСТСТСААаССААСапАТАСССТаАСАСТОСАССТасСАССа тоттТасАТТСТОССТСАаТАатТСАТАВААТаААСТОССЯ ТоСсаССАпАСТОСАсСасААлс,аасаТст ваААТапАТСИаСААТСАТТАСТСОСАТААТАСТАТСАСАТАСТАСЬССТЗАССТОСОаСОПСАААдасССаАТ
ССАССАТСАССАСАААСАССАаСааАпААСАСааТаАСТоТаААААтТаАсСАатстаАсАасСас апАСАСааССАСТТАТТоТатТасССАсСАсАсаАтТАаТтАТаССОЯСТАТТАТТТТаАСТТаТОсСаваСС
СсАадаСАСССТааТСАССАТСТОСТСА сааСААССТААдаСастТоСАТтСАаТСсТоССАСсТавасосоСстаТастассасвацвАСАСАСССАасСТ ссАсса7атадсостеасастасстааТСААА,асаатТАССстоССссавАасССсАатаАсСсатаАССтасА
АдстсасваСАСССтТСАССААТасватАСасАаєєтсссатосатоСаасАатосСтСАсасстотТА стсасСсталаСсАа,асатаатаАдаСсатаАССТСААда,асАаа,асАассСатСсАССТасСсААСсастТааСССА
СССАаССАССААСАССАААС ТасАСААсСАсСсст ТтасассстовАСАТасСсАаСААасСсССАСИатТта
СсоСАСССССТаААСТОСТОССОСааАССаТтстТатсТТСсАТСТТССССССААААСССААасАСАСС
СстТСАТаАТСТСАСОСАССсСсСсСсвАасаТСАсСАТасатаастаатасАасатадаССАсаАТалсссс сАдасТаСАатТТСсАСАТаатТАСАТАААСААСал,СсАасвсатасасСАассассовассассастТАСас сАдасАсСАатТСААСАасСсАСсадтосасатаатАасСАСССсТСССАтсаСаСАССАасАстас стадсааасСААласпАаТТСсААасТасСсАААатосСАСААСААаасАстосСсааССоССАТСИАСААА АССАТСТОСААДаССАсСАаасИ!АаСосстасласСаАдааТСстТАСАССАТОаСасСостоСссас сласластадаСАаасСсАасатовсатсАаасстаАССстТасСсАТаАТСААСаасТСстТАСССТТССаАСА тотоватосдатасаАаААаАдАдСа,асалл,асСАаАааАСААСТАСААаАссАСсассвассатас таавАСсАааСсаАСсаасТосСтТАСТТОСТСТАСАасСА5АлаСстотсАатассСсАСсасАасталатаасАаса саасаАдсатсттсАсстТастоСатаАтТасСсАСсадаасСстТаСАСААССАСТАСАСасСсАаАдаИатсс АТтСсТоСсСсСастотТоСаасТАААТИад
МІ -44-148-2 Н2 амінокислотна (5ЕО ІО Мо 42)
МЕТаг ВУЛ МАМІ КОМОСОБУКЕЗОааІ ЕКРТОТІ ТІ ТОТУБаБ5І БІНАММУУВОТРИаКаї.
ЕМЛАПТНМЗІТУМАБУАКЗАЗТІТАМТЗЕМТМТІ КМТ5І ТААОТАТУРСАВЕОЗМаУУвгОрІ Марат м
ТІББОРКАРБЗМЕРІ АРССЯОТРОЗТУТ СС УКОаМІ РЕРУТУГУМЗИаті ТМЕОМАТЕРЗУНОЗВИЇ У
ЗІ БМ 5550РМ ТСММАНРАТМТКМОКТУМАРЗТОЗКРТСРРРЕГ ааРЗМУБІЕРРКРКОТІ МІЗАТ
РЕМТСУУМОУБОВОРЕМОЄТМУМІММЕОУВТАВРРІ ВЕСОЄМЗТІВМУ5ЗТІ РІАНОЮМІ ВЕКЕРКСКМ
НМКАЇ РАРІЕКТІЗКАВСОРІ ЕРКМУТМОаРРАЕЕЇ 55855551 ТСМІМСЕМРЗБОІЗМЕМЕКМОаКАЕОМУ
КТТРАМІГ ОБравзуУгРІ УЗКІ БМРТЗЕМОВООМЕТСЗУМНЕАСНМНУТОКВІЗАЗРОК
МІ -44-148-2 І 5 нуклеїновокислотна (5ЕО ІЮ Мо 5)
АтапвАСАСсалдсвсасссСсСАСсТоАсСсТастассастостастастотаастосСсАдаатассСА вАТаТаССсСтТАТаАТАТОАСССАСАСТОСАЛССССТОТатасАаастАаастатаасцсАаасСАСАСТСАС
САТСАДОТИССАасаСасСсАстоАсаАасСАТТАатААСТОЯТТАаСсСсТастАТСАССАаАААССАасаОИ
САТСТоССАДаССССтТадТСстТАСАЧИаСАТОСАСТСОТОИаСАТСТОаСОЯИатСстТСАТСЯСИаСТТСА саасосдатасАатстаасаАСАСАатТСАСТСТСАССАТСАСТОССОЯТОСсА,сСтТатассаАтаста
ССАСТТАСТАСТаТСсАаСАСАСТТАТАСТААТААТСАТСТТаАТААТОСТ ПТТОоОСОаСВОСАСОИСАСо сгастаатаатСААА сатадтосАааттасАССТАСТаТоОСТСАТСТТСССАСсСсСАастастаАтоАа,сатассСААСтТас
ААСсСАатСсАССАТСОЯТОТатТатаасСсаААТАААТАСТІ ТСССЧаАтТатосАасСса7атоасстааа дата вАТааСАССАСССАААСААСтТааСАТССАСААСАСТААААСАССасСАСпААТТСоТасСАСаАТТатА
Коо) ССТАСААССТСАаСАССАСТОТОАСАСТаАССАаСАСАСАСИТАСААСАаССАСААдАДа аа ТАСАС стасдасатадссСАаасасСАСоАсстсАатсатсСсАаАастТсААтТАаасасатадстаттАа
МІ -44-148-2 І 5 амінокислотна (5ЕО ІО Мо 43)
МОТВАРТО СІ ПЛ УМ РОАВСАМОМТОТРАБМЕМАМОССИ ТМ ТІКСОАБОБІЗМУУ АМУМООКРО
ОБРКРИМВА5ТІ АБСОМ5ЗАЕНОЗОЗИаИТОЕТІ ТІЗВОМЕСАВВААТУУСООТУТММНІ Ома гацватЕММ
УкКарРМАРТМЕРРААВОМАТатТтУТУМСМАМКУЕРОМТ УТ М ЕУрИаТттОоТтТатємМме5КкТРОМЗАОЮСТУМ 551, ТІ Т5ТОУМЗНКЕУТСВУТОСТТЗУМОЗЕМНО ОС
МІ -44-67-4 Н2 нуклеїновокислотна (ЗЕО ІЮ Мо 6)
АтаслалстасастасеастаастсотостастоастатастоСААдАасататоСсаата7атсдат ссатаздасаатосаса7аватасстаатАаСсасставаАСАССССтТаАСАСТоАССТасАСАС сстотТааАТоСаАСАТСАаТААСТАТаСААТАТСОСТОСОСТОСОЯССАСИ,аИСстТоСАсасАдасцаст ваААТТСАТССОСАТАТАТТАСТТАТасСТААААаТТАТАТАСТАСЬССС;ЛО СТО СС ССПАААС,ассаатТ
ТСассСАТСТОССААААССТоСТоаАСсСАСсватасАТТацпАААТСАССАаСТОоСаАСААССадасА
САССЯаССАССТАТТТТТИТаССсАааАсАаспАтТАатасСтТАСТТАТАаТОСТААСТТатаасасаСССАС
ССсАссстТасатсАССатстосСтТСА сааСААССтТАдаасСсТоСАТСАИТСТТоССсАСсТОСИКССССТОАСТОССИасаАСАСАСССАастТт
СсСсАсСастадссставастаєєтаатСААддасватАсстоссасвсласСсАаастадлссатадсстааА дстсавасСсАСССТоАССААТтТассватАасасасєстоссатосатоСсавСАатостАвасстотТА стсаеастадасаа,асатаастадасатаАССсТсАдаСАассаасСсСатсАССстТасСсААСЯТОаСССА
СССАасССАССААСАССАААДатТасАСсАдалссатта,асассстоаАСАТтасАааСАдасСоСАСата
СоСАСССССтТаААСстТоСстТавсаасапАССаТтстатсТСсАТСТТССССССААААСССААаалдсСАСс
СстТСАТаАТСТСАСОСАССсСсСсСсаАаатСсАСсАТтасатаатаатацАаСс,атаАяасСсСАаааАтТалсссс сАдасТаСАатТТСсАСАТаатТАСАТАААСААСал,СсАасвсатасасСАассассовассассастТАСас сАдасАсСАатТСААСАасСсАСсадтосасатаатАасСАСССсТСССАтсаСсаСАССАасвАСТас стадсааасСААласпАаТТСсААасТасСсАААатосСАСААСААаасАстосСсааССоССАТСИАСААА АССАТСТОСААдассАаадасасАаасоостасвАдассаАдАдааТСстТАСАССАТааВеСсстоСосва сласластадаСАаасСсАасатовсатсАаасстаАССстТасСсАТаАТСААСаасТСстТАСССТТССаАСА тотоватоадатасаАаААаАдАСсааААдсасАаАацпАСААСТАСААсАССсАСса,ассава7асса ас таавАСсАааСсаАСсаасТосСтТАСТТОСТСТАСАасСА5АлаСстотсАатассСсАСсасАасталатаасАаса саасаАдсатсттсАссТтастоСатаАдтТасСсАасаАааасстТасСАСААССАСТАСАСаСАаААатТос во АТСоТоССОЯаСТотТоСааватАААТаА
МІ! -44-67-4 Н2 амінокислотна (5ЕО ІО Мо 44)
МЕТа ВУЛ МАМІ КОМОСОЗМЕЕЗОаВІ МТРОТРІ ТІ ТСТАБОаЗОІЇЗМУАІЗУМУУВОАРОаКаИїгЕР
ІСМІЗМакВІММАБУАКаИаВЕАІЗКТООТ ГМО ЕІТОРТТЕОТАТУЕСАВЕОЗАТУЗРМІ МО РОТІ МТУ
СОРКАРБЗМЕРІ АРСОСОаОТРУОБЗТУТ аСІ УКаМІ РЕРУТУГУМЗОаТІ ТМСОМАТЕРЗУНОБЗИЇ БІ 55 МУ5МТ5550РУГТСММАНРАТМТКМОКТУМАРЗТОЗКРТСРРРЕ СО РЗМУБРІЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМ
ТСУУМрУБОВОРЕМОЄПГУМІММЕОМАТАВРРІ ВЕСОЕЄЕМ5ТІВУМ5ЗТІ РІАНОУ/Л ВЕКЕРКСКУНМК
АЇ РАРІЕКТІЗКАВИОРІ ЕРКУУТМОРРАЕЕЇ 558551. ТСМІМИЕМРБОІЗМЕМЕКМОаКАЄОМУКТТ
РАМ О5рав5зУРІ У5КІ БМРТЗЕМОВОаОМЕТСЗУМНЕАІЇ НМНУТОКВІЗАЗРИОК
МІ -44-67-4 | 4 нуклеїновокислотна (5ЕО ІО Ме 7)
АтапвАСАСсалдсвсасссСсСАСсТоАсСсТастассастостастастотаастосСсАдаатассСА вАТаТаССсСтТАТаАТАТОАСССАСАСТОСАЛССССТОТатасАаастАаастатаасцсАаасСАСАСТСАС
САТСАДОа ТОаССАСсасСсАаТтСАпАаТАТТААСАССТАСТТАИаССТасСТАТСАССАСАААССАСОС
САаСсатоСсСААХастостадгтстТАСсАаасаасСАТССАСТСОТЯИаСАТСТОСОаТоТСАТСОССасаттСА
АдассХдатапвАатотаааАСАаАатТсАСТСТСАССАТСоАДасвасатаслататассаАтаста
ССАСТТАСТАСТаТСААСАсСОССИТТАТАИТТАТААТААТСТТОСАТССЯТОСТ ТСаСОССС,АСИасАСС сгастаатТаатТСАСА сатадтосАааттасАССТАСТаТоОСТСАТСТТСССАСсСсСАастастаАтоАа,сатассСААСтТас
ААСсСАатСсАССАТСОЯТОТатТатаасСсаААТАААТАСТІ ТСССЧаАтТатосАасСса7атоасстааа дата вАТааСАССАСССАААСААСтТааСАТССАСААСАСТААААСАССасСАСпААТТСоТасСАСаАТТатА
ССТАСААССТСАаСАССАСТОТОАСАСТаАССАаСАСАСАСИТАСААСАаССАСААдАДа аа ТАСАС стасСсАдаИатТалдссСсАасааСАСсаАсстАстсатосСАалдастСсААтТаасасатадстаттАа
МІ! -44-67-4 | 4 амінокислотна (5ЕО ІО Мо 45)
МОТВАВАРТО СІ ПЛ УМ РОАВСАМОМТОТРАБМЕМАМОССИ ТМ ТІКСОАБОБІМТ МІ АМУМООКРОЮ
АРК МВА5ТІ АБСОІМ55АЕКазава ГЕЕТІ ТІЗИМЕСАВААТУМСООСУВУММІ ОВАгааатЕМУМ ТарРМАРТМЕРРААВОМАТатМ ТІМСМАМКУЕРОМТ УТ М ЕУрИаттОоТттатємМмо5КТРОМЗАОСТУМІ.
ЗП ТОТОУМЗНКЕУТСКУТОСТТЗУМОЗЕМНО ОС
Таблиця 2
ЗЕО ІОр варіабельних областей анти-ССС кролячих тАр нуклеїновокислотна | амінокислотна ЗЕО ІЮ
Таблиця З
Амінокислотні послідовності варіабельних областей тАБб анти-ССС кролячих тАб
МИ -4а- Й ОБУКЕЗОСИЇ ЕКРТОТ ТІ ТОТУБавг5І БІЗАНАММУМУУВКОТРИаКаї ЕУМІА 148-2 |Важкий 11. ПІТНМ5ІТУМАБУАКЗАЗТІТ АМТЗЕМТМТІ КМТ5І ТААОТАТУРСАН
ЕОоЗМаУУгрімаРаИаті Мт
МІ -4А- АМОМТОТРАБМЕМАМИааТМУТІКСОАБОБВІЗМУМ Ам 148-2 легкий 13 |КРИаОБРКРИМВААБ5бТІ АБСОМ5ЗНЕНОаЗОВИтТОвТтІ ТІЗИМЕСАВААТУУС оОоГУТММніоМагасва ТЕУМУК
МИ -4а- ОБМЕЕБЗИаСВІ МТРОТтРІ ТІ ТСТАБазрізмМмМАІВУМВОАРа 67-А важкий 15 |КаГЕРІСМІЗМаКВІУМАБУАКИаВЕАІЗКТООТ МОЇ ЕІТОЄРТТЕОТАТУБСО
АВ ЕОБАТУЗРМІ МС РСТІ МТУ
МІ -4А- Й АМОМТОТРАБМЕМАМИааТМУТІКСОАБОБІМТ МІ АМУМОС 67-4 легкий 17 |ІКРООВРКІ ПУВА5ТІ АБСОУ5ЗАЕКОаЗаЗатЕНЕТІ ТІЗаМЕСАРААТУМС
ОоОаУзУММ ОвВАгасатЕМУМТ
Зо
Таблиця 4
Нуклеїновокислотні послідовності варіабельних областей тАБб анти-ССС кролячих тАб сАатТсАатТадАа,ааАаа,атосавсаавАаассТСсТСАдасСсСААСааАТ
АСССТаАСАСТСАССТаСАСССТСоТотТасАТТСТоССтоАатАатсА тТАСААТаААСТОСОИтОоСбасСАсаАСтоСАса,асвАлда,аававастацААТОа
МІ! -44- важкий 10 САТСаСААТСАТТАСТСАТААТАСТАТСАСАТАСТАСЬЬСОАаСТИасо 148-2 СОАДААдаССаАТоСАССАТСАССАСАААСАССАа,аСсасАспААСАСваТтТ вАСТОТаААААТаАССАаТСтТаАСАасСасацпАСАСаассСАСТТАТ тпеста,атасСАаАаАаасАтТАатТАТасаатТАТТАТТтТОаАСТТаТасИся
СсСсСАааСАСССТаСТСАССАТСТОСТСА аосСтТАТаАТАТИАСССАСАСТОоСАСОССТОТО ТаСсАСИ,тТАа,СТатась вАааСАСАИТСАССАТСААСТаССАвСасСАаТтСАаАаСАТТАСТАА стааттТАдасстТааТАТСАаСАпАААССАас,СаасСАаТоТоССААаСоо
МІ! -44- пегкий 12 СстТаАТСТАСАССОаСАТССАСТСОТОИаСАТСТОСОСаТСстТоАТССЯССатТт 148-2 тсАсАсасбАа,атавАТСТаааАСАСАС,ТТСАСТСТСАССАТСАИТИасС са,атаслататасСаАтТастасСАСТТАСТАСТатСсАасСАСАСТТАТА
СТААТААТСАТСТТаАТААТССТТТоОСССсСвАсСасАсСсАсата,тТ аатСАдДА салатосатасаасвсаатоссассатсасстаатсАсасстаасАСА
ССССтТаАСАСТСАССтТасСсАСАаССтТотТапАТСОСОАСАТСАСТААСТ
АтТасСсААТАТСОСТаОСОСТОСОССАсСОаСтТоСАсСасАда,аасаастТацААТТ
МІ -4А- Й САТСсаСсСАТАТАТТАИТТАТасТААААаТАТАТАСТАСЬЯССОСА ССО СО 67-4 важкий 14 | СпАдАДсСсаССас ТТ СаССАТСТОСААААССТоаТатоаАССАСасатацА тТотТапАААТСАССАаТоСаАСААССасАаспсАСАСа,ааССАССТАТТ ТТ стасСАпАдаАдасАтТАатТастАСТТАТАИТОСТААСТТатТасааСОоС
АдаасАсоСтааТСАССатсТосСтТСА аСосСтТАТаАТАТИАСССАсСАСТОСАССССТОТИа ТасАсватАасСтатас вАааСАСАИТСАССАТСААСТаСсСАвасСАаТтСАСаАС,ТАТТААСАС
СстТАСТТАаССТааТАТСАаСАпАААССАсСасСАаСатоССААасто
МІ! -44- пегкий 16 СстТаАТСТАСАССОаСАТССАСТСОТОИаСАТСТОСОСаТСстТоАТССЯССатТт 67-4 ТсААдАпсасАаатасАтставаАСАпАатТТСАСТСТСАССАТСАС,СССА са,атаслататасСаАдтТастасСАСТТАСТАСТаТтТСААСАсСИааТТАТ датТАТААТААТСТТаАТОСОЯТОСТ ТССсОаСОассАса,асАсСа,аАаатас
ТасТСАСА
Таблиця 5
Амінокислотні послідовності СОК анти-аСС кролячих тАб
Зб
Таблиця 6
Нуклеїновокислотні послідовності СОК анти-зСсС кролячих тА
Терапевтичні використання
Молекули кролячих анти-зСс антитіл, описані в цьому документі, мають іп міїго і іп мімо корисність. Наприклад, ці молекули антитіл можуть бути введені клітинам в культурі, наприклад іп мійго або ех мімо, або бути введені суб'єкту, наприклад, іп мімо, для лікування та/або запобігання низки захворювань. В деяких варіантах терапевтичних реалізацій згідно винаходу, молекули кролячих анти-осСс антитіл згідно винаходу гуманізують з використанням одного або більше методів, описаних в даному документі вище.
Молекули антитіл, імунокон'югати і злиті білки, описані в даному документі, можуть бути використані для модулювання активності або функції білка ССС, таких як зв'язування ліганди (наприклад, зв'язування ЗІ або гуаніліну, передача (зСС-опосередкованого сигналу, збереження кишкової рідини, електролітний гомеостаз, внутріклітинне вивільнення кальцію (притока кальцію), клітинне диференціювання, клітинна проліферація або клітинна активація.
В одному аспекті винахід описує спосіб лізису клітин, інгібування або модулювання росту або перешкоджання метаболізму клітин, що експресують ССС. В одному варіанті реалізації винаходу винахід передбачає спосіб інгібування зСсС-опосередкованого клітинного сигналінгу або спосіб лізису клітини. Спосіб може бути використаний з будь-якими клітинами або тканинами, які експресують СС, такими як ракові клітини. Приклади ракових клітин, які експресують СС, включають клітини раку шлунково-кишкового походження (наприклад, рак товстої і прямої кишки, рак шлунку, рак тонкої кишки або рак стравоходу), раку підшлункової залози, раку легенів (наприклад, плоскоклітинна карцинома, аденосквамозна карцинома, аденокарцинома), саркоми м'яких тканин, таких як лейосаркома або рабдоміосаркома, шлунково-кишкові або бронхолегеневі нейроендокринні пухлини або нейроектодермальні пухлини або будь-які їх метастатичні ураження, але не обмежуються ними. Необмежені приклади сСС-експресуючих клітин включають клітини Т84 товстошлункової аденокарциноми людини, свіжі або заморожені клітини товстошлункової пухлини і клітини, що містять рекомбінантну нуклеїнову кислоту, що кодує ССС або її частину.
Способи згідно винаходу включають етапи контактування клітини з молекулою анти - СС антитіла або її імунокон'югатом, як описано в даному документі, в ефективній кількості, тобто кількості, достатній для інгібування зСС-опосередкованого клітинного сигналінгу, або кількості, достатньої для лізису клітини. Спосіб може бути використаний на клітинах в культурі, наприклад іп міго, іп мімо, ех мімо або іп 5йи. Наприклад, клітини, які експресують ССС (наприклад, клітини, зібрані за допомогою біопсії пухлини або метастатичного пошкодження; клітини з встановленої ракової клітинної лінії або рекомбінантні клітини) можуть культивуватися іп омйго в культуральному середовищі, а етап контактування може здійснюватися шляхом додавання молекули анти-ОСсС антитіла або імунокон'югата в культуральне середовище. Спосіб клітинного лізису включає використання "голої" молекули анти-(400 антитіла або імунокон'югату, що містить молекулу анти-зСС антитіла і цитотоксичну речовину. Спосіб призводить до лізису клітин, що експресують ЗСС, включаючи, зокрема, пухлинні клітини, які експресують ССС (наприклад, товстокишкові пухлинні клітини).
Згідно винаходу кролячі моноклональні антитіла або їх гуманізовані варіанти можуть бути досліджені з приводу клітинної інтерналізації після зв'язування ЗСС з використанням методів імунофлуоресцентної мікроскопії, добре відомих з рівня техніки. Такі антитіла, які підтвердили інтерналізацію, можуть бути корисними, коли об'єднуються з цитотоксичним фрагментом для терапевтичних цілей або з фрагментом для клітинної візуалізації. Антитіла, що не інтерналізуються, можуть, однак, бути використані для діагностичних цілей або в терапевтичних способах, що використовують "голе" антитіло, призначене викликати антитілозалежну клітинно- опосередковану цитотоксичну відповідь, або, можливо, для ліпосомальних способів доставки.
Молекули анти-ССС антитіл відповідно до цього винаходу зв'язують позаклітинні домени
ССС або їхчастини в клітинах, що експресують антиген. В результаті за умови застосування способів відповідно до даного винаходу для лізису, пригнічення чи виявлення ракових клітин антитіла або антигензв'язуючі фрагменти зв'язують всі такі клітини, а не тільки клітини, які зафіксовані або клітини, внутрішньоклітинні антигенні домени яких відкриті іншим способом для позаклітинного навколишнього середовища. Отже, зв'язування антитіл або антигензв'язуючих фрагментів концентрується в областях, де знаходяться клітини, які експресують ОСС, незалежно від того, зафіксовані ці клітини чи ні, життєздатні вони або некротичні. Додатково або альтернативно молекули анти-сСС антитіл зв'язуються з або інтерналізуються з СС на зв'язуючих клітинах, що експресують антиген.
Спосіб також можна застосовувати щодо клітин, присутніх у суб'єкта, як частину протоколу іп мімо. В одному варіанті реалізації винаходу суб'єкт є людиною. Альтернативно, суб'єкт може бути ссавцем, експресуючим антиген ССС, з яким молекула анти-сСсС антитіла, описаного в даному документі, перехресно реагує. Молекулу анти-сСС антитіла або його імунокон'югат можна вводити людині в терапевтичних цілях. Молекулу анти-сСс антитіла або імунокон'югат також можна вводити нелюдському ссавцеві, експресуючий ОСС-подібний антиген, з яким антитіло перехресно реагує (наприклад, примату, свині або миші), у ветеринарних цілях або як модельної тварини хвороби людини. Модельні тварини можуть бути придатними для оцінки терапевтичної ефективності антитіл згідно винаходу (наприклад, дослідження дозувань або тривалості курсів введення). Для варіантів реалізації винаходу іп мімо етап контактування здійснюється у суб'єкта і включає введення молекули анти-сСС антитіла або його імунокон'югата суб'єкту в умовах, ефективних для можливості реалізації винаходу зв'язування молекули антитіла з позаклітинним доменом СС, експресованим на клітині, і лікування клітини.
В одному варіанті реалізації винаходу передбачений спосіб лікування раку шляхом
Зо введення молекули анти-5СС антитіла або імунокон'югата, що включає введення молекули анти-ОСС антитіла і цитотоксичної речовини пацієнту, який потребує такого лікування. Спосіб може бути використаний для лікування будь-якого ракового порушення, яке включає, щонайменше, кілька клітин, які експресують антиген СС. Як використано в даному документі, термін "рак" призначений включати всі типи ракових пухлин або онкогенних процесів, метастатичних тканин або злоякісно трансформованих клітин, тканин або органів, незалежно від гістопатологічного типу або стадії інвазивності. Терміни "рак" і "пухлина" можуть використовуватися взаємозаміняємо (наприклад, коли використовуються в контексті способів лікування, "лікування раку" і "лікування пухлини" мають однакове значення).
В варіантах реалізації винаходу лікування є достатнім для зниження або інгібування росту пухлини у суб'єкта, зниження чисельності і розміру метастатичних уражень, зниження пухлинного навантаження, зниження первинного пухлинного навантаження, пролонгування часу виживання або збереження або поліпшення якості життя.
Приклади ракових порушень включають солідні пухлини, пухлини м'яких тканин і метастатичні ураження, але не обмежуються ними. Приклади солідних пухлин включають злоякісні пухлини, наприклад, саркоми, аденокарциноми і карциноми різних систем органів, такі як ті, що вражають товсту кишку. Аденокарциноми включають злоякісні пухлини, такі як недрібноклітинна карцинома легенів. Метастатичні ураження вищезазначених пухлин також можуть піддаватися лікуванню або запобіганню з використанням способів і композицій згідно винаходу.
В деяких варіантах реалізації винаходу ОСС -експресуюча пухлина, що підлягає лікуванню, є первинним або метастатичним раком шлунково-кишкового походження, таким як рак товстої і прямої кишки, рак шлунку, рак тонкої кишки або рак стравоходу. В деяких варіантах реалізації винаходу ССС-експресуючий рак, який підлягає лікуванню, є первинним або метастатичним раком підшлункової залози. В деяких варіантах реалізації винаходу зСС-експресуючий рак, який підлягає лікуванню, є первинним або метастатичним раком легенів, таким як плоскоклітинна карцинома, аденосквамозна карцинома або аденокарцинома. В деяких варіантах реалізації винаходу зСС-експресуючий рак, підлягаючий лікуванню, є саркомою, такою як лейоміосаркома або рабдоміосаркома. В деяких варіантах реалізації винаходу ССС- експресуючий рак, який підлягає лікуванню, є первинною або метастатичною бо нейроектгодермальною пухлиною, такою як феохромоцитома або парагангліома. В деяких варіантах реалізації винаходу (зСбС-експресуючий рак є первинною або метастатичною бронхолегеневою або шлунково-кишковою нейроендокринною пухлиною.
Спосіб може бути корисним при лікуванні релевантного порушення на будь-якій стадії або будь-якого підкласу. Наприклад, спосіб може бути використаний для лікування ранньої або пізньої стадії раку товстої кишки або раку товстої кишки будь-якої із стадій 0, І, ПА, ПІВ, ША, ПІВ,
ЩШС ім.
В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб лікування сСС-експресуючого раку (наприклад, раку товстої і прямої кишки, раку шлунку, раку тонкої кишки, раку стравоходу, раку підшлункової залози, раку легенів, лейоміосаркоми, рабдоміосаркоми, нейроендокринної пухлини, нейроектодермальної пухлини і так далі) включає введення пацієнту, який потребує такого лікування, "голої" молекули анти-ссСсС антитіла, описаної в даному документі. В інших варіантах реалізації винаходу спосіб включає введення імунокон'югата, що містить молекулу анти--СС антитіла, описаного в даному документі, цитотоксичну речовину, таку як майтанзиноїд або дауристатин, або їх похідні. Способи введення молекули антитіл і імунокон'югатів описані вище. Придатні дозування використовуваних молекул залежатимуть від віку і ваги суб'єкта і конкретного використовуваного з'єднання.
В деяких варіантах реалізації винаходу молекулу анти-сСС антитіла або імунокон'югат вводять в циклах лікування. "Цикл лікування" складається з періоду лікування, під час якого молекулу анти-с6СС антитіла або імунокон'югат вводять так, як описано вище, з наступним періодом відпочинку, під час якого молекулу анти-ссСс антитіла або імунокон'югат не вводять.
Цикл лікування можна повторювати по мірі необхідності до досягнення бажаного ефекту.
Анти-ССС антитіла, описані в цьому документі (наприклад, "голі" молекули анти-йСС антитіл або імунокон'югати, містять молекулу анти-сСС антитіла та терапевтичну речовину), можуть бути використані в комбінації з іншими терапіями. Наприклад, комбінована терапія може включати композицію відповідно до даного винаходу, скомбіновану з та/або вводиму спільно з одними або більше додатковими терапевтичними речовинами, наприклад, одною або більше протираковими речовинами, наприклад, цитотоксичними або цитостатичними речовинами, гормональною терапією, вакцинами та/або іншими імунотерапіями. В інших варіантах реалізації винаходу анти-сСС антитіла вводять в комбінації з іншими лікувальними, терапевтичними
Зо способами впливу, включаючи хірургію, опромінення, кріохірургію та/або термотерапію. Такі комбіновані терапії можуть виграшно застосовувати більш низькі дозування терапевтичних речовин, що вводять, тим самим уникаючи можливої токсичності або ускладнень, пов'язаних з різними монотерапіями.
Вводили "в комбінації", в контексті даного винаходу, означає, що два (або більше) різних лікування доставляли суб'єкту під час його захворювання, наприклад, два або більше лікувань доставляли після діагностування у суб'єкта захворювання і перед тим, як захворювання вилікували або усунули. В деяких варіантах реалізації винаходу доставка одного лікування все ще відбувалася, коли починалася доставка іншого, щоб відбувалося перекривання. Це іноді називається в даному документі "одночасною" або "конкурентною доставкою". В інших варіантах реалізації винаходу доставка одного лікування закінчується перед початком іншого лікування. В деяких варіантах реалізації винаходу, в будь-якому випадку, лікування є більш ефективним завдяки комбінованому введенню. Наприклад, друге лікування є більш ефективним, наприклад, еквівалентний ефект спостерігається з меншим другим лікуванням, або друге лікування знижує симптоми більшою мірою, ніж спостерігалося б, якщо б друге лікування вводилося за відсутності першого лікування, або аналогічна ситуація спостерігається з першим лікуванням. В деяких варіантах реалізації винаходу доставка є такою, що зниження симптомів або інших параметрів, пов'язаних з порушенням, є більш високим, ніж спостерігалося б при одному лікуванні, доставляємому за відсутності інших. Ефект двох лікувань може бути частково адитивним, повністю адитивним або більш ніж адитивним. Доставка може бути такою, що ефект першого доставленого лікування все ще визначається, коли доставляють друге лікування.
В деяких варіантах реалізації винаходу молекулу анти-ССсС антитіла або його імунокон'югат використовують в комбінації з хіміотерапевтичною речовиною. Необмежені приклади ушкоджуючих ДНК хіміотерапевтичних речовин включають інгібітори топоіїзомерази (наприклад, іринотекан, топотекан, кампотецин та їх аналоги і метаболіти і доксорубіцин); інгібітори топоіїзомерази ІІ (наприклад, етопозід, теніпозід і даунорубіцин); алкілуючі речовини (наприклад, мелфалан, хлорамбуцил, бусульфан, тіотепа, іфосфамід, кармустин, ломустін, семустин, стрептозоцін, дакарбазин, метотрексат, мітоміцин С і циклофосфамід); інтеркалятор
ДНК (наприклад, цисплатин, оксаліплатин і карбоплатин); інтеркалятор ДНК і генератори вільних радикалів, такі як блеомицин; та нуклеозидні міметики (наприклад, 5-фторурацил, 60 капецитабін, гемцітабін, флударабін, цитарабін, меркаптопурин, тіогуанін, пентостатин і гідроксикарбамід).
Хіміотерапевтичні речовини, які зривають клітинну реплікацію, включають: паклітаксел, доцетаксел та споріднені аналоги; вінкристин, вінбластин та споріднені аналоги; талідомід, леналідомід та споріднені аналоги (наприклад, СС-5013 і СС-4047); інгібітори протеїн-тирозин кінази (наприклад, іматинібу мезилат і гефітиніб); інгібітори протеасом (наприклад, бортезомід); інгібітори МЕ-кВ, включаючи інгібітори кінази ІкВ; антитіла, які зв'язують білки, що надекспресуються в пухлинах, і тим самим знижують клітинну реплікацію (наприклад, трастузумаб, ритуксімаб, цетуксімаб і бевацизумаб); та інші інгібітори білків або ферментів, відомих як підвищуючі, надекспресуючі або які активуються в пухлинах, інгібування яких знижує клітинну реплікацію.
Вибір терапевтичного агенту (-ів) або способу лікування, що підлягають комбінуванню з молекулою анти-СС антитіла або імунокон'югатом згідно винаходу, залежатиме від порушення, підлягаючому лікуванню. Додатковий агент(-и) або спосіб лікування можуть включати, наприклад, стандартно застосовувані терапії показань, що підлягають лікуванню.
Наприклад, якщо молекулу анти-ССС антитіла або його імунокон'югат використовують для лікування раку товстої кишки, вони можуть бути використані в комбінації, наприклад, з хірургією; радіаційною терапією; 5-фторурацилом (5-ЕУ), капецитабіном, лековоріном, іринотеканом, оксаліплатином, бевацизумабом, цетуксімабом, панітумумом або їх комбінаціями (наприклад, оксаліплатин/капецитабін (ХЕГОХ), 5-фторурацил/лековорін/оксаліплатин (БОЇ РОХ), 5- фторурацил/лековорін/ринотекан (БОЇ РІКІ), БОЇБОХ плюс бевасізумаб або РОЇ РІКІ плюс бевасізумаб).
В іншому аспекті винахід описує використання молекули анти-зСС антитіла або імунокон'югата, як описано в даному документі, у виробництві медикаменту. У варіанті реалізації винаходу медикамент призначений для лікування раку, наприклад, шлунково- кишкового раку. В деяких варіантах реалізації винаходу медикамент містить молекулу анти-
ССС антитіла, що має характерні особливості, описані в Таблицях 1-6. В деяких варіантах реалізації винаходу медикамент містить молекули антитіл МІЇ -44-148-2 або МІЇ -44-67-4, або їх гуманізовані варіанти.
Мічення і виявлення антитіл
Молекули анти-ОСС антитіл, які використовують в способах, описаних в даному документі, наприклад, у визначенні іп міго та іп мімо, наприклад, способи діагностики, фарбування або візуалізації можна прямо або опосередковано мітити речовиною, що визначають, для полегшення виявлення зв'язаної або незв'язаної зв'язуючої речовини. Придатні речовини, що визначають, включають різні біологічно активні ферменти, ліганди, простетичні групи, флуоресцентні матеріали, люмінесцентні матеріали, хемілюмінесцентні матеріали, біолюмінесцентні матеріали, хромофорні матеріали, електроннощільні матеріали, парамагнітні (наприклад, ЯМР-активні) матеріали та радіоактивні матеріали. В деяких варіантах реалізації винаходу молекула анти-зСсС антитіла з'єднується з радіоактивним іоном, наприклад, індієм (т), йодом (ЇЇ або 7251), ітрієм (У), лютецієм (77), актинієм (225Ас), вісмутом (72Ві або 21ЗВІ), сіркою (255), вуглецем (77С), тритієм ("Н), родієм (ЗК), технецієм (? тТс), празеодимом або фосфором (32Р); або позитронвипромінюючим радіонуклідом, наприклад, вуглецем-11 ("с), калієм-40 (Кк), азотом-13 (ЗМ), киснем-15 (750), фтором-18 (ЗЕ), галієм (98са) та йодом-121 (71). Додаткові радіоактивні речовини, які можуть кон'югуватися з антитілами згідно винаходу для використання в способах діагностики/виявлення іп міїго або іп мімо, описані нижче.
Приклади міток включають флуорофори, такі як рідкоземельні хелати або флюоресцеїн та його похідні, родамін та його похідні, дансил, умбеліферон, люцерифераза, наприклад, люцифераза світлячків та бактеріальна люцифераза (патент США Мо 4,737,456), люоциферин та 2,3- дигідрофталазиндіони. Інші приклади міток включають пероксидазу хрону (НЕР), лужну фосфатазу, галактозидазу, глюкоамілазу, лізоцим, сахаридоксидази, наприклад, глюкозооксидазу, галактозооксидазу і глюкозо-6-фосфатдегідрогеназу, гетероциклічні оксидази, такі як уриказа і ксантиноксидаза, зв'язані з ферментом, який використовує пероксид водню для окислення вихідного барвника, такого як НЕР, лактопероксидаза або мікропероксидаза, біотин/авідин, спінові мітки, бактеріофагові мітки, стабільні вільні радикали і подібне.
Мічені фрлуорофором або хромофором молекули антитіл можна приготувати із стандартних частин, відомих з рівня техніки. Оскільки антитіла та інші білки абсорбують світло з довжиною хвилі аж до приблизно 310 нм, флуоресцентні фрагменти слід вибирати з тих, які поглинають світло з довжиною хвилі вище 310 нм і переважно вище 400 нм. Безліч придатних флуоресцентних сполук і хромофорів описано 5ігуег Зсіепсе, 162: 526 (1968) і Вгапа, І. еї аї.
Аппиа! Неміем/ ої Віоспетівігу, 41: 843-868 (1972). Антитіла можна мітити флуоресцентними бо хромофорними групами за допомогою звичайних процедур, таких як ті, що розкриті в патентах
США Мо 3,940.475, 4.289.747 та 4.376.110.
Одну групу люмінофорів, що мають ряд бажаних властивостей, описаних вище, представляють ксантенові барвники, які включають флуоресцеїни, отримані з 3,б-дигідрокси-9- генілксантгідролу, і ресаміни та родаміни, отримані з 3,6б-діаміно-9-фенілксантідролу, і ліссамін родамін В. Родамінові і флуоресцеїнові похідні 9-о-карбоксифенілксантгідролу мають 9-о- карбоксифенільну групу. Флуоресцеїнові сполуки, що мають реактивні приєднані групи, такі як аміно та ізоціанатні групи, такі як флуоресцеїну ізоціанат і флуоресцамін, легко доступні. Іншу групу флуоресцентних сполук представляють нафтіламіни, що мають аміногрупу в « або р положенні.
Мічені молекули антитіл можна використовувати, наприклад, діагностично та/або експериментально в ряді ситуацій, включаючи (ї) для виділення попередньо визначеного антигену за допомогою стандартних методів, таких як афінна хроматографія або імунопреципітація; (ії) для виявлення попередньо визначеного антигену (наприклад, в клітинному лізаті або клітинному супернатанті) з метою оцінки відносного змісту і характеру експресії білка; (ії) для моніторингу рівнів білка в тканинах в якості частини клінічного дослідження, наприклад, для визначення ефективності заданої схеми лікування.
Діагностика іп міго
Анти-ССС антитіла і імунокон'югати, описані в цьому документі, можуть бути використані для виявлення наявності або відсутності зСС, наприклад, для виявлення наявності або відсутності (СС в біологічному зразку ех мімо, отриманому від суб'єкта (тобто, виявлення іп міго), або для виявлення наявності або розповсюдження, або відсутності СС у суб'єкта (тобто, виявлення іп мімо). Такі способи виявлення корисні для визначення або діагнозу ряду захворювань або для проведення вибору терапії. Термін "визначення", в контексті даного винаходу охоплює кількісне або якісне визначення. Визначення СС або білка ОСС, як використано в даному документі, означає виявлення інтактного білка зСС або виявлення частини білка ССС, яка містить епітоп, з яким зв'язується молекула анти-ССсС антитіла.
Таким чином, в іншому аспекті винахід описує спосіб виявлення експресії СС в біологічному зразку, такому як клітина або тканина, наприклад, пухлинна клітина або пухлина, що має одну або більше клітин, які експресують СС. Спосіб включає: контактування
Зо біологічного зразка з молекулою анти-сСС антитіла, описаного в даному документі (наприклад,
МІ -44-1448-2 або МІ -44-67-4), в умовах, які дозволяють утворити комплекс між молекулою анти-ССС антитіла і білююм ОСС; і виявлення утворення комплексу між молекулою анти-40О антитіла та білююом ССС, тим самим визначаючи наявність білка ССС, наприклад, визначаючи клітину або пухлину, які експресують ССС.
У варіанті реалізації винаходу молекула анти-ССсС антитіла є імунокон'югатом, що містить мітку, що визначають. Мітка, яку визначають, може бути радіоактивною речовиною.
Альтернативно, мітка, яку визначають, може бути нерадіоактивною речовиною (наприклад флуорофором або хромофором, як описано вище).
В деяких варіантах реалізації винаходу біологічний зразок включає нормальні та/або ракові клітини або тканини, які експресують СС. Приклади нормальних клітин або тканин, які експресують ОСС, включають клітини або тканини шлунково-кишкового походження, особливо клітини або тканини товстої і прямої кишки, але не обмежуються ними. Приклади ракових клітин або тканин, які експресують ОСС, включають: рак шлунково-кишкового походження, такий як рак товстої та прямої кишки, рак шлунку, рак тонкої кишки та рак стравоходу; рак підшлункової залози; рак легенів, такий як плоскоклітинна карцинома, аденосквамозна карцинома і аденокарцинома; саркоми м'яких тканин, такі як лейоміосаркома і рабдоміосаркома; шлунково- кишкові та бронхолегеневі нейроендокринні пухлини; і нейроектодермальні пухлини, але не обмежуються ними. У окремих варіантах реалізації винаходу нормальні та/або ракові клітини або тканини можуть експресувати СС при високих рівнях у порівнянні з іншими тканинами, наприклад такими як В-клітини і/або тканини, пов'язані з В-клітинами.
Способи виявлення, описані в даному документі, іп міго або іп ммо, можуть бути використані для оцінки захворювання у суб'єкта. В деяких варіантах реалізації винаходу захворювання є клітинно проліферативним захворюванням, таким як рак або пухлина, наприклад, рак товстої та прямої кишки, рак шлунку або рак підшлункової залози.
В одному аспекті винахід передбачає спосіб виявлення наявності або відсутності білка ССС в біологічному зразку іп міго (наприклад, в клітинній або тканинній біопсії, отриманої від суб'єкта). Спосіб включає: (ї) контактування біологічного зразка, отриманого від суб'єкта, з молекулою анти-сСС антитіла або її імунокон'югатом і (її) виявлення утворення комплексу між молекулою анти-соСсС антитіла і білюоюм СС. Утворення комплексу вказує на наявність або бо рівень білка ССС в біологічному зразку, в той час як відсутність утворення комплексу вказує на відсутність білка ССС в біологічному зразку.
Приклади біологічних зразків для способів, описаних в даному документі, включають клітину, клітини, тканину або рідину організму, таку як запальний ексудат, кров, сироватка, кишкова рідина, зразок калу. У окремих варіантах реалізації винаходу біологічний зразок включає ракові клітини або тканину. Наприклад, зразком може бути пухлинна біопсія, наприклад, біопсія пухлини товстої та прямої кишки, пухлини шлунку, пухлини стравоходу, пухлини тонкої кишки, пухлини легень, саркоми м'яких тканин, нейроендокринні пухлини, нейроектодермальні пухлини або з тканинного зразка з будь-якого їх метастатичного сайту. В інших варіантах реалізації винаходу біологічним зразком може бути кров або інша рідина, що містить ракову клітину. Біологічний зразок можна отримати з використанням будь-якого з ряду способів рівня техніки. Крім того, біологічний зразок можна обробити фіксатором, таким як формальдегід, або покрити парафіном і зробити зрізи для використання. Альтернативно, можна використовувати свіжу або заморожену тканину. В інших варіантах реалізації винаходу можна використовувати тонкоголкові аспірати.
В деяких варіантах реалізації винаходу досліджувану клітину або тканину отримують від індивідуума з підозрою на наявність захворювання, пов'язаного з експресією СС. В деяких варіантах реалізації винаходу досліджувану клітину або тканину отримують від індивідуума з підозрою на наявність захворювання, пов'язаного з експресією СС в місці розташування, відмінному від апікальної поверхні кишкових епітеліальних клітин (наприклад, цитоплазматична експресія ССС в кишкових епітеліальних клітинах), або захворювання, пов'язаного з експресією
ССС в не шлункових клітинах або тканинах, таких як панкреатичні, легеневі, м'якотканинні, або тканинах нейроендокринного або нейроектодермального походження. В деяких варіантах реалізації винаходу досліджувану клітину або тканину отримують від індивідуума з підозрою на наявність захворювання, пов'язаного з підвищеною експресією СС.
У варіанті реалізації винаходу рівень ССС в зразку від суб'єкта або у суб'єкта порівнюють з контрольним рівнем, наприклад, рівнем СС в контрольному матеріалі, наприклад, нормальної клітини того ж тканинного походження, що і клітина суб'єкта, і клітині, що має рівні СС, порівняні з такими в нормальній клітині. Спосіб може включати, наприклад, відповідь на певний рівень СС, забезпечуючи діагноз, прогноз і оцінку ефективності лікування або стадіювання
Зо захворювання. Підвищений рівень СС в зразку або у суб'єкта в порівнянні з контрольним матеріалом свідчить про наявність захворювання, пов'язаного з підвищеною експресією СС.
Підвищений рівень СС в зразку або у суб'єкта в порівнянні з контрольним матеріалом також свідчить про відносну недостатність ефективності лікування, про відносно поганий прогноз або пізню стадію захворювання. Рівень СС можна також використовувати для оцінки або вибору майбутнього лікування, наприклад, необхідності більш-менш агресивного лікування або необхідності перемикання з однієї схеми лікування на іншу. В деяких варіантах реалізації винаходу способи додатково включають вибір (сСС-націленої терапії, наприклад, СС- націленої терапії, описаної в даному документі, виходячи з, щонайменше частково, визначення рівнів ОСС і необов'язково введення вибраної ССС-націленої терапії суб'єкту.
Утворення комплексу між молекулою анти-зСС антитіла і СС може бути визначено шляхом вимірювання або візуалізації антитіла (або фрагмента антитіла), зв'язаного з антигеном
ССС, або незв'язаної молекули антитіла. Спеціаліст в даній галузі легко оцінить безліч шляхів для виявлення зв'язування анти-зСС антитіла з СС. Такі способи включають аналізи антигенного зв'язування, відомі з рівня техніки, такі як вестерн-блотінг, радіоїмуноаналіз, ІФА (твердофазний імуноферментний аналіз), "сендвіч" імуноаналіз, імунопреципітаційний аналіз, флуоресцентний імуноаналіз, імуноаналіз з білком А та імуногістохімію (ІНС), але не обмежуються ними.
В окремому варіанті реалізації винаходу СС визначають або вимірюють за допомогою імуногістохімії з використанням анти-зСсС антитіла згідно винаходу. Імуногістохімічні методології можуть бути використані для ідентифікації і по суті для фарбування клітин, які експресують СС. Таке "фарбування" дозволяє досліджувати міграцію метастазів. Анти-аСО антитіла, такі як описані в даному документі, контактують з фіксованими клітинами, і СС, присутня в клітинах, реагує з антитілами. Антитіла являються визначаємо міченими або їх визначають з використанням мічення іншого антитіла або білка А для фарбування клітин. В одному окремому варіанті реалізації винаходу антитіло МІ -44-148-2 використовують в аналізі
ІНС для виявлення або вимірювання експресії СС в біологічному зразку.
Можуть бути використані інші традиційні способи виявлення, наприклад, вестерн-блотінг, радіоїмуноаналіз, ІФА (твердофазний імуноферментний аналіз), "сендвіч" імуноаналіз, імунопреципітаційний аналіз, флуоресцентний імуноаналіз, імуноаналіз з білком А та бо імуногістохімія (ІНС) або радіоїмуноаналіз (КА).
Альтернативно міченню молекули анти-ссСс антитіла, наявність СС може бути оцінено в зразку за допомогою конкурентного імуноаналізу, що використовує стандарти, мічені речовиною, що визначають, і немічену молекулу анти-осСс антитіла. У цьому аналізі біологічний зразок, мічені стандарти і зв'язуючу СС речовину об'єднують і визначають кількість міченого стандарту, пов'язаного з неміченим антитілом. Кількість (СС в зразку обернено пропорційна кількості міченого стандарту, зв'язаного з речовиною, що зв'язує зСС.
Крім того, можна безпосередньо виявити утворення комплексу ОСС з молекулою анти-аСо антитіла без додаткової обробки або мічення якогось із компонентів (3СбС або молекули антитіла), наприклад, шляхом використання методики перенесення енергії флуоресценції (ЕТ, див., наприклад, І аКом/іс еї аІ., патент США Мо 5,631,169; Єампіапороціо», еї аІ., патент США Мо 4,868,103). Флуорофорну мітку на першій "донорній" молекулі вибирають таким чином, щоб при порушенні падаючим світлом відповідної довжини хвилі її випромінювана флуоресцентна енергія поглиналася б флуоресцентною міткою на другій "акцепторній" молекулі, яка, в свою чергу, здатна флуоресціювати завдяки поглиненій енергії. Альтернативно, "донорна" білкова молекула може подібним чином використовувати природну енергію флуоресценції триптофанових залишків. Вибирають такі мітки, які випромінюють різні довжини хвиль світла, наприклад, так, щоб мітку на молекулі "акцептора" можна було відрізнити від мітки на "донорі".
Оскільки ефективність передачі енергії між мітками пов'язана з відстанню, що розділяє молекули, то можуть бути оцінені просторові відносини між молекулами. У ситуації, в якій відбувається зв'язування між молекулами, флуоресцентне випромінювання мітки молекули "акцептора" в аналізі має бути максимальним. Результат зв'язування РЕТ можна легко виміряти за допомогою стандартного флуорометричного виявлення способами, добре відомими в даній галузі (наприклад, з використанням флуорометра).
В іншому прикладі визначення здатності молекули антитіла розпізнавати СС може бути оцінено без мічення якогось із компонентів (З3СбС або молекули антитіла) з використанням методики, такої як аналіз взаємодії біомолекул в режимі реального часу (ВІА) (див., наприклад, зіоїапаег, 5 і Ограпіс:Ку, С., 1991, АпаїЇ. Спет. 63: 2338-2345 та 57абро еї а!ї., 1995, Сигг. Оріп. зЗігисі. Віоії. 5: 699-705). У контексті даного винаходу "ВІА" або "поверхневий плазмонний резонанс" представляє собою метод для вивчення біоспецифічних взаємодій в режимі
Зо реального часу без мічення якогось із взаємодіючих компонентів (наприклад, ВІАСОВЕ М).
Зміни маси біля поверхні зв'язування (вказує на факт зв'язування) призводять до змін показника заломлення світла поблизу поверхні (оптичний феномен поверхневого плазмонного резонансу (ЗРЕ)), в результаті чого отримують сигнал, що визначають, який може бути використаний як індикатор в режимі реального часу реакції між біологічними молекулами.
В деяких аспектах опис пропонує реакційну суміш, яка містить молекулу антитіла, описану в даному документі (наприклад, імунокон'югат, який містить молекулу антитіла, описану в даному документі, та, наприклад, мітку), і біологічний зразок, наприклад, біологічний зразок, описаний в даному документі. В інших варіантах реалізації винаходу реакційна суміш може містити молекулу антитіла, описану в даному документі (наприклад, імунокон'югат, який містить молекулу антитіла, описану в даному документі, та, наприклад, мітку) і СС, отриману з біологічного зразка, наприклад, біологічного зразка, описаного в даному документі.
В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб, такий як описаний вище, включає виявлення зв'язування анти-осСс антитіла з ССС, експресованої на поверхні клітини або в мембранному препараті, отриманому з клітини, експресуючої 5СС на своїй поверхні. В деяких варіантах реалізації винаходу спосіб включає контактування клітини з анти-ЗСС антитілом в умовах, що дозволяють анти-осСс антитілу зв'язуватися з ССС, і виявлення того, чи утворюється комплекс між анти-Я4СС антитілом і СС на клітинній поверхні. Прикладом аналізу для виявлення зв'язування анти-ссСс антитіла з ССС, експресованої на поверхні клітини, є аналіз "ГАС 5".
Діагностика іп мімо
У ще іншому варіанті реалізації винаходу винахід передбачає спосіб виявлення наявності або відсутності (зСС-експресуючих клітин або тканин іп мімо. Спосіб включає (ї) введення суб'єкту (наприклад, пацієнту, який має рак) молекули анти-сСС антитіла згідно винаходу (тобто, МІ -44-148-2 або МІ -44-67-4) або його антигензв'язуючого фрагмента, переважно антитіла або його антигензв'язуючого фрагмента, кон'югованого з виявленою міткою або маркером; (ії) піддавання суб'єкта під вплив засобів для виявлення зазначеної мітки або маркера на сСС- експресуючих тканинах або клітинах. Такі методи іп мімо можуть використовуватися для оцінки, діагностування, стадіювання та/або прогнозування пацієнта, який страждає захворюванням, таким як рак. Спосіб включає: (ї) введення суб'єкту молекули анти-сСС антитіла або його імунокон'югата; і (ії) виявлення утворення комплексу між бо молекулою анти-ССС антитіла і білююом ССС. Утворення комплексу свідчить про наявність рівня
ОСС у суб'єкта, тоді як відсутність комплексу свідчить про відсутність ОСС у суб'єкта.
Такі індивідууми можуть бути діагностовані як страждаючі від метастазів СС- експресуючого раку, а метастази СС-експресуючих пухлинних клітин можуть бути виявлені введенням індивідууму, переважно шляхом внутрішньовенного введення, фармацевтичної композиції, що містить фармацевтично прийнятний носій або розріджувач і кон'юговану сполуку, яка містить молекулу анти-антитіла СС і активний фрагмент, причому активний фрагмент являє собою радіоактивний агент, і виявлення наявності локалізованого накопичення або агрегації радіоактивності, що вказує на наявність клітини, що експресує СС. В деяких варіантах реалізації винаходу відповідно до даного винаходу фармацевтична композиція містить фармацевтично прийнятний носій або розріджувач і кон'юговану сполуку, яка містить молекулу анти-ССС антитіла і активний фрагмент, причому активний фрагмент є радіоактивною речовиною, а молекула анти-сСсС антитіла є антитілом МІ! -44- 148-2, описаним в даному документі, або його фрагментами або похідними.
В одному окремому варіанті реалізації винаходу радіонукліди можуть кон'югувати з молекулою анти-5СС антитіла згідно винаходу для використання в якості барвника в процедурах фарбування іп мімо. Барвники корисні в діагностичних методах, а також методах, що використовують для ідентифікації локалізації метастазованих клітин. Наприклад, індивідууми можуть бути діагностуванні як страждаючі від метастатичного раку товстої і прямої кишки, а клітини метастатичного раку товстої і прямої кишки можуть бути виявлені за допомогою введення індивідууму, переважно шляхом внутрішньовенного введення, фармацевтичної композиції, що містить фармацевтично прийнятний носій або розріджувач, і кон'югованої сполуки, яка містить молекулу анти-сСс антитіла згідно винаходу і активний фрагмент, в якому активний фрагмент являє собою радіонуклід, і виявлення присутності локалізованого накопичення або агрегації радіоактивності, що вказує на присутність клітин, які експресують асо.
Фарбування можна здійснювати за допомогою багатьох методів, добре відомих фахівцю в даній області, а прийнятні барвники, корисні в таких методах, можуть кон'югувати з молекулою анти-ССС антитіла згідно винаходу за допомогою добре відомих засобів. Прикладами міток, корисних для діагностичного фарбування відповідно до даного винаходу, являються зо радіопозначки, такі як З2Р, ЗН, С, 188ДН, ЗК, 52Ее, 57Со, 67, 67(За, б8(за, 77Вг, 8'ВЬ, 8'МКу, 87М5у, зате, Чи, "ЗМ п, 129|, 125|, 127058, 129058, 191, 192І, 197На, 203ррь і2058Ві і 213Ві; флуоресцентні мітки, такі як родамін; ЯМР-активні мітки; позитронно-активні ізотопи кисню, азоту, заліза, вуглецю або галію (наприклад, 58С:а, "8Е), виявлені з допомогою детектора для емісійної комп'ютерної томографії ("ЗРЕСТ") або сканера позитрон-емісійної томографії (РЕТ"); хіміолюмінесцентні речовини, такі як люциферин; і ферментні маркери, такі як пероксидаза або фосфатаза. Також можуть бути використані генератори слабо проникаючого випромінювання, такі як ізотопи, які визначають за допомогою детекторних зондів малої дістальності, таких як трансректальний зонд. Фарбування також можна здійснювати за допомогою, наприклад, радіо-сцинтиграфії, ядерної магнітно-резонансної томографії (МЕ) або комп'ютерної томографії (скануюча СТ). При фарбуванні за допомогою скануючої СТ може використовуватися важкий метал, такий як хелати заліза. При МАК можуть використовуватися хелати гадолінія або марганцю.
Антитіла можна мітити такими реагентами, використовуючи методики, відомі з рівня техніки.
Наприклад, Мадегеїадйі, М. (1991) Апіїроду Сопішдагех Апа Маїїдпапі Оізеазе, СКС Ргез5, Воса
Каюп, Ріа; і Вагопеї, 5.МУ. апа Кподезв, В.Н., (1983) Кадіоїтадіпуд апа Кадіомшегару, ЕІземіег, Нью-
Йорк, штат Нью-Йорк, кожен з яких включено в даний документ шляхом посилання, стосуються кон'югування різних терапевтичних та діагностичних радіонуклідів з амінокислотами антитіл.
Такі реакції можуть використовуватися для кон'югування радіонуклідів з молекулами анти-а4Со антитіл згідно винаходу з прийнятним хелатуючим агентом та/або лінкером. Див. також Ууепзеї апа Меагез (1983) Радйіоіїттипоіїтадіпд апа Радіоіттипоїйегару, ЕІбеміег, Нью-Йорк, для методик, що стосуються радіо-мічення антитіл. Див. також О. СоїЇспег еї аіІ. Ме. Епгутої. 121: 802-816 (1986).
У разі радіоактивно міченого антитіла, антитіло вводять пацієнтові, воно локалізується в пухлині, яка несе антиген, з яким антитіло реагує, і визначають або "відображають" іп мімо з використанням відомих методів, таких як радіоіїзотопне сканування з використанням, наприклад, гамма камери або емісійної томографії, або комп'ютерної томографії. Див., наприклад, А.К.
Вгадуеї! еї а!., "Оемеіортепів іп Апіїбоду Ітадіпа", Мопосіопа! Апіїбодієв тог Сапсег ЮОеїесійп апа
Тпегару, К.М/. Ваїдм/іп еї аї., (ред.), сс. 65-85 (Асадетіс Ргез55 1985). Альтернативно, коли радіопозначка випромінює позитрони (наприклад, "С, "8Е, 7150 і "ЗМ, 58(за), може бути використаний сканер для позитрон-випромінюючої трансаксіальної томографії, такий як бо спеціально призначений Реї МІ з Брукхейвенської національної лабораторії.
В інших варіантах реалізації винахід передбачає способи визначення дози, наприклад, радіаційної дози, впливу якої піддаються різні тканини, якщо суб'єкту, наприклад, людині, вводять молекулу анти-ссСс антитіла, кон'югованого з радіоактивним ізотопом. Спосіб включає: () введення молекули анти-ОСс антитіла, як описано в даному документі, наприклад, молекули анти-ОСС антитіла, міченого радіоактивним ізотопом, суб'єкту; (ії) вимір кількості радіоактивного ізотопу, що знаходиться в різних тканинах, наприклад, пухлині або крові, в різні моменти часу, поки частина або весь радіоактивний ізотоп не буде виведений з організму суб'єкта; і (іїї) розрахунок загальної дози радіації, отриманою кожною аналізованою тканиною. Вимірювання можуть проводитися в задані моменти часу, наприклад, дні 1, 2, 3, 5, 7 і 12, після введення (день 0) радіоактивно міченої молекули анти-зСсС антитіла суб'єкту. Концентрація ізотопу, присутнього в даній тканині, інтегрована за часом і помножена на специфічну активність радіоїзотопа, може бути використана для розрахунку дози, яку отримує дана тканина.
Фармакологічна інформація, отримана за допомогою молекули анти-зсСсС антитіла, міченого радіоактивним ізотопом, наприклад, гамма-випромінювачем, наприклад, "п, може бути використана для розрахунку очікуваної дози, яку та ж тканина отримає від іншого радіоактивного ізотопу, яку не можна легко виміряти, наприклад, бета-випромінювача, наприклад, Оу.
Додаткова діагностика для зСсС-націленої терапії
Діагностичні способи іп міїго і іп мімо, описані в цьому документі, можуть бути використані для інформування пацієнта, який страждає від проліферативного захворювання, такого як рак, або шлунково-кишкового розладу, такого як синдром запаленого кишківника, хвороба Крона або закріп, або що підлягає лікуванню СС -націленою терапією або іншою терапією, що виходить з наявності або відсутності, відповідно, експресії (СС на поверхні або всередині клітини або тканини пацієнта. Пацієнт, який має одну або більше клітин, які експресують ОСС на клітинній поверхні або всередині клітини, є кандидатом на лікування СС-націленою терапією.
В деяких аспектах винахід передбачає спосіб визначення чутливості пацієнта з підозрою на сбб-експресуюче захворювання або порушення до СсСС-націленої терапії, що включає наступні етапи: (ї) контактування біологічного зразка, отриманого від суб'єкта, з молекулою анти-СсС антитіла згідно винаходу; (ії) виявлення утворення комплексу між молекулою анти-
Зо ССС антитіла і білюом ССС; де утворення комплексу свідчить про наявність рівня білка ССС в біологічному зразку, а відсутність утворення комплексу свідчить про відсутність білка СС в біологічному зразку, тим самим визначаючи чутливість пацієнта до сСсС-націленої терапії. В окремому варіанті реалізації винаходу утворення комплексу між молекулою анти-сСсС антитіла і білком СС в біологічному зразку визначають за допомогою імуногістохімії з використанням молекули антитіла, описаної в даному документі, наприклад, антитіла МІ -44-1482, описаного в даному документі.
Приклади біологічних зразків можуть містити клітину, клітини, тканину або рідину організму, таку як запальний ексудат, кров, сироватку, кишкову рідину, зразок калу. В окремих варіантах реалізації винаходу біологічний зразок містить ракову клітину (-и) або тканину. Наприклад, зразком може бути пухлинна біопсія, наприклад, біопсія пухлини товстої та прямої кишки, пухлини шлунку, пухлини стравоходу, пухлини тонкої кишки, пухлини легень, саркоми м'яких тканин, нейроендокринні пухлини, нейроектодермальні пухлини або зі зразка тканини з будь- якого їх метастазного сайту. В інших варіантах реалізації винаходу біологічним зразком може бути кров або інша рідина, що містить ракову клітину. Біологічний зразок можна отримати, використовуючи будь-який з ряду відомих з рівня техніки методів. Крім того, біологічний зразок можна обробити фіксатором, таким як формальдегід, залити парафіном і зробити зрізи для використання. Альтернативно, можуть бути використані свіжі або заморожені тканини. В інших варіантах реалізації винаходу можуть бути використані аспірати, взяті за допомогою тонкої голки.
Приклади захворювань/порушень, які можуть оцінюватися (наприклад, діагностуватися) і лікуватися з використанням додаткових діагностичних методів, описаних в даному документі, включають проліферативні порушення, в тому числі рак товстої та прямої кишки, рак шлунку, рак тонкої кишки, рак стравоходу, рак підшлункової залози, рак легенів (наприклад, плоскоклітинна карцинома, аденосквамозна карцинома, аденокарцинома), саркому м'яких тканин, таку як лейоміосаркома і рабдоміосаркома, шлунково-кишкові та бронхолегеневі нейроендокринні пухлини і нейроектодермальні пухлини, шлунково-кишкові порушення, такі як синдром запаленого кишківника, хвороба Крона і закріп, і нейрологічні порушення, такі як хвороба Паркінсона, але не обмежуються ними.
Способи згідно винаходу проводять відповідно до рішення лікаря про лікування пацієнта 60 ССбС-націленою терапією. Способи, передбачені в даному документі, дозволяють також отримати персоналізований звіт про лікування, наприклад, персоналізований звіт про лікування раку, наприклад, ОСС-націленою терапією, описаною в даному документі. сбб-націлена терапія являє собою терапевтичну речовину, яка лікує або запобігає ССС- експресуюче захворювання або (зСС-опосередковане захворювання, наприклад, сосс- експресуюче захворювання або сССС-опосередковане захворювання, описане в даному документі. В деяких аспектах згідно винаходу, СС-націлена терапія являє собою Сс-ліганд, такий як молекула анти-сСС антитіла або пептидний ліганд (наприклад, пептид 51), кон'югований з речовиною, такою як терапевтична речовина. Приклади сосс-лігандів, кон'югованих з терапевтичними речовинами (тобто, імунокон'югатів), описані, наприклад, у публікації патентної заявки США Мо 20110110936, зміст якої включено в даний документ шляхом посилання у повному обсязі В окремому варіанті реалізації винаходу оСС-націленою терапевтичною речовиною є анти-53СбС моноклональне антитіло ЇД01 людини, кон'юговане з цитотоксичною речовиною, де тАб містить варіабельну область легкого ланцюга (МІ), що має три області легкого ланцюга, які визначають компліментарність (СОМК1, СОМК2 і СОМ), і варіабельну область важкого ланцюга (УН), що має три визначальні компліментарність області важкого ланцюга (СОКІ, СОК2 і СОКЗ), перелічені в таблиці 7 (амінокислотні послідовності) та 8 (відповідні нуклеїновокислотні послідовності) нижче, і варіабельну область важкого ланцюга і варіабельну область легкого ланцюга, перелічені в таблицях 9 (амінокислотні послідовності) і 10 (відповідні нуклеїновокислотні послідовності) нижче.
Таблиця 7
Амінокислотна послідовність СОК МІ. Її СО УНН
УН сові ЗЕО ІЮ Ме 67 УМ
УН сово ЗЕО ІЮ Ме 68 ЕІМНАОМТМОМРБІ К5
УН сов ЗЕО ІЮ Ме 69 ЕнОУТУСМЕОН
МІ сові ЗЕО ІЮ Мо 70 ВАБОБУЗАМІ А
МІ сово ЗЕО ІЮ Мо 71 САБЗТВАТ
МІ сов ЗЕО ІЮ Ме 72 ООУКТУРАТ
Таблиця 8
Нуклеїновокислотна послідовність СОК МІ ії СОК УНН
СОві | 8ЕО 0 Ме 73 |ССТТАСТАСТОСАСС
СОно | ЗЕО 0 Ме 74 | СААДАТСААТСАТОСТОСАААСАССААССАСААССССТОССТСААС
СОнз ЗЕ Ме 75 | СААССТОСАТАСАССТАТОСТААСТТТСАССАС бОві о ЗЕО 0 Ме 76 |АССОССАСТСАСАСТОТТАССАСАААСТТАССС бно | ЗЕО 0 Ме 77 |ССТОСАТССАССАСОСОСАСТ бОнз | ЗЕО 0 Ме 78 |САССАСТАТААААССТОСССТоссАСо
Таблиця 9
Амінокислотна послідовність варіабельної області тАб
Важкий ОМОГ ОСМ САС І КРОЗЕТІ ІІ ТСАМРаааБЕБИаУУМУМІВОРРОКаИїЇ ЕМО ланцюг ЗЕО І Ме 79. ІЄІМНАЕМТМОМРБІ КЗАМТІЗМОТЗКМОГАЇ КІ 554 ТААОТАМУМСАВЕНОЯ
УтхамеорнУмаоатіУтУ55 де евеютю ТВЕР ВОЕОВ ЕТ ОБ ВРИУОВ МеНтНв
ЗЕО ІЮО Ме 80. | АБТВАТОа РАНЕЗИаЗОаЗатТЕНЕТІ ТБ О5ЕОБАУУМСООУКПТУРАТРСО ланцюг ОТММЕїК
Таблиця 10
Нуклеїновокислотна послідовність варіабельної області тАБ
СсАса,атасАдасСстТАсАаа,асАаатасааС,аАа,ааАстаТаттадАасстооца
АвАсостТатоостсАсстасасєтатстта,7стаестостсАа,атаат тТАСТАСТОСАССТОСаАТоСОаССАаСоССССАсСасАда,асса!стасАатТ
Важкий ЗЕО ІЮ Мо | асйАТтТапасАААТСААТСАТССТасАлААСАССААСПАСААСССаТатос ланцюг 81 СТСАДОДИаТОосСАсСТСАССАТАТСА,ТАСАСАСИСТССААСААССАСТТ са,ассстадАдасталатсотатаАсСсасСаСапАСАСвастатТТАТТ
АсТатТаСсаАпАпААСатаспАТтТАСАССТАТИС,ТААСТТТаАССАСТає сасСбАда,асаААсССТааТСАССаТтсСТосСтТСА сСАААТАИТаАтТаАдСсасАаатотСАасСАасостаТаттататстоСАца ааААддадасСсАсоєттосєтасаа,асасСАаТсАсАааТаттАасСАСАД
Легкий 5ЕО ІЮ Ме АСсСТттАаСсСсТаатТАТСАаСАпАААСсСТОИАССАвЧастосСА,аастосСто ланцюг во АТСТАТОСТаСАТССАССАСОЇОСаССАСТасСААТСССАаССАсСаТттСАс тассл,атасатставаАСАпАатТСсАСТСТСАССАТСОСКСЯСАС,ВССТас
АСТСТОААСАТТТТасСАСТТТАТТАСТатСсАаСАСаТАТААААССтТаас стасАдсстС,ааСсСАдаааАССААСаТасАААТСАДА
Амінокислотні і відповідні їм нуклеїновокислотні послідовності непроцесованого важкого ланцюга ПпІдс1 і послідовності легкого ланцюга пКарра містять МІ СОК ї МН СОК, показані в
Таблицях 7 і 8, варіабельні області важкого і легкого ланцюгів, показані в Таблицях 9 і 10, перелічені нижче:
Нуклеотидною послідовністю важкого ланцюга пІдс1 є:
СААТТОСТСАССАТОаСОаАТтасАаСТаТатАТСАТОСТОТТоттааТтТАаСААСАаСтТАСАССИТаТт
СсСАСТОССАССЯТаСсАаСтТАСАССсА,аСТасавабаСбАссАстаттаАддассттСасАсАсостатс сстоАссТаса,астатстттааставсатстАаастайТТАСТАСТОаСАССТаАвАТОоСаССАаСОо сСсАсапААлсасастасАатавАТасвацпАААТСААТСАТСИТапАААСАССААСОСАСААСССИ
ТОоССТСААаАаСТСИаАаТСАССАТАТСАСТАСАСАСИатосСААпААССАс т ТсаСоСТаАдастах стестатадсСсасСсаСса,авАСсСАСсвсастатттТАТАСТатаСа,аАаАпААСатацпАТАСАССТАТОаС ТААСТТаАССАСТОСОЦОССАс,СасААсоСстааТСАсСсатсАасТАассСстоСАССАДИавИаИаССС атсеаатстооооСстаСАСССТоСТоСААдсСАаСАсСстотТасавасСАСАаасСсавсаооставиаста сстаатТСААаСАСТАСТТСССССОСААСсСсС!СОостаАссатататавААСТоАСсаСассстаАССАС ссаесбатасСАСАССТІОСССЯСаСсТатосСтТАСАСТОоСТСАааАСТОТАСТОССТСоАХа,аСсАа,аВСсаИатаата
АосатассстоСАа,аСсАаа,асттааваСАСССАВАССТАСАТСТаСААСаТаААТСАСААаСССАасСА
АСАССАДаИаТацпсАСААпАААатТаАасСссСсСАААТСТТатаАСААААСТСАСАСАТаСССАССата
СоСАаСАССТаААСТОСТОСОСасапАССаТатсАатСст сс оСССССААААСССАдааАСАСо
СстТоСАТаАТСТОССОООСАСсССсСТОАсСОаТСсАСАТОССОТОСОСТОИСтТапАСатаАаССАССААСАСССТ сдаспТСААатТСААСстТаатАсатасвАасс,саоатасАааТасСАТААТаССААСАСАдАдассасис слдаспАдаСАсаТАСААСАа,аСАСсатАссататастоаа,аСатсСстАСсСсатоСТасСсАССАа,СсАСТас
СстТОААТСДИССАдааАаТАСААДаТасСсААааТСсТоСААСАААассттсСАасссССАТССПАСЦСААДААА
ССАТСТОСАААаССААдАса,аасАассССцвАпААССАСАСИаТатАСАСССтТасссССАТОСССОЯССИЯ
АТОДаСтТаАССААСпААССАватоАа,асстаАсстаТасстаа т САААаасСТТСТАТСССАаСаАСАТ сессстасалата,свАпАаСААтТасасСАаасСа,ацпАпААСААСТАСААаАССАСсасстосса7атаст саАстоСаАдсвастосТсСТоСТСстТАСАаСАдастоАСсСсаТапйАСААсаАаСАасата,аСА,СА
Зо сасаААсатсТсТсАТаСТОСОаСТаАТасСАТаАХДИааСТСТасСАСААССАСТАСАСаСАсАдИ,адас
СТСТоССТОТСТоСОООТААДАТААТАСОСАТААСАСОСТААТАСТАСАС (ЗЕО ІЮ Мо 83)
Білковою послідовністю важкого ланцюга пІдс1 є:
МОамМ/5СПІ РІ МАТАТаУНЗОМО ОСОМ САС КРОЗЕТІ 5І ТСАМЕааБЕБаМММЗУІВОРРОКИЇ.
ЕУМОЕІМНАСМТМОМРБІ КЗАМТІЗМОТ5КМОГАГ КІ З5МТААОТАУУУСАВЕнНСУТМаМмМЕОонНУСсОС
ТІ МТУ55А5ТКОаРБЗМЕРІ АРЗІБЗКОТЗОаСТААГ ас МКОМЕРЕРУТУБУУМЗСИаАЇ ТЗамНтТЕРАМ О55
СІ М5І 55УМТУРББІІ ТО ТМІСМУМНКРУЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТОСРРОРАРЕЇ ЇЇ СОРОМБІ ЕРР
КРКОТІ МІЗАТРЕУТСУУМОУМЗНЕОРЕУКЕММУ МУ МЕУМНМАКТКРАЕЄОУМОЗТУВМУМУМІ ТМ НОЮ
МІ МаКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОМУУТІ РРОВОЕЇ ТКМОУБІ ТОЇ УКагМРЗОІАМЕ
МЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ О5БОаЗЕРІ ЗК ТМОКЗАМООСММЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 5І ЗР ак (ЗЕО ІО Мо 84)
Нуклеотидною послідовністю Карра легкого ланцюга є: ссаасСсаССстТоСАССАТаСсСОО,аТапАасСтТаТтАТСАТОСТСОТСТтТааТтАасСААСАаСТтТАСАСаИТ сТоСАСТоСаАААТАСИТалдталса!сАатстосаассАсостатстататстоСАаа,ааацпААдОсАс
СсСАсССсСТОТОСТОаСАсСваеСсСАатсАсАататТАасСАаАААСТТАасстастАТСАасСАаАААСо таасСсАдаастосСАаастосСтТосАТСТАТИвСТаСАТССАССАЧСОИаССАСТасААТоССАассАс сттсАастоасаатавИатстасаАСАаАаТтТСсАСТОТСАССАТоСсОоСсАИаСсСстТасАатстТтадАвАТ ттасАаТТТАТТАСТаТтСсАасСАаТтАТААААССТОИОСтосвсаАасатса,ааССАда,асаАССААСаИт саАААТСАААСатАаС,еастаастасСАССАТСТаТтСтТСАТСТТоСсСсассСАТСТаАТтТаАаСАатТТаА
ААТСТОСААСТОаССТОТОТТатТатавстасСтаААТААСТТСТАТОССАСАпАаа,аССАААаТАСАС таавААсатасАтТААСасссСстоСААТСВвааТААСТоССАсаласАаатТатсАСсАааАдаСАасАСАас
АдапАСсАдасСсАССТАСАЧаССТодасАаСАСССТаАСССтТадасСАААасСсАаАСтТАСОАСаАААСАСА
АдатстАсасстаСсадАаТСАСССАТСАС,сСОаСсСсТвАааСстоаТасссСаТтСАСАААвАаТстТТСААСАС
СОСБАСАСТОТТАСТСТАСВА (ЗЕО ІЮ Мо 85)
Білковою послідовністю пКарра легкого ланцюга є:
МОамМ/5СПІ РІ МАТАТаУНЗЕЇММТО5РАТІ 5БМ5РОЕВАТІ 5СВАБОЗУЗАМІ АМУООКРИасОАРВІ.
ПУИСАБЗТАВАТИа! РАНЕЗОИЗавзатЕНЕТІ ТИ ОЗЕОБАМУУСООУКТМРАТРИОСТММУБІКАТМААРЗ
МЕІЕРРРЗОЕОЇ КЗатАБУМСТ ЇЇ ММЕМРАЕАКМОМ КМОМАГОБаМЗОЕЗУТЕООЗКОБЗТУБІ ЗІ ТІ
ЗКАЮУЕКНКУМУАСЕМТНОСІ 55РУТКЗЕМКСОЕС (5ЕО ІЮ Ме86б)
В одному окремому аспекті згідно винаходу сСС-націлена терапія являє собою
Зо імунокон'югат, що має молекулу анти-сСсС антитіла, кон'юговану з молекулою ауристатину. В одному варіанті реалізації винаходу імунокон'югат містить молекулу анти-зСсС антитіла, яка містить три області СОК важкого ланцюга (УН) згідно ЗЕО ІЮ Мо: 67, 68 і 69, і три області СОК легкого ланцюга (МІ) СОК згідно ЗЕО ІО Мо: 70, 71 і 72, кон'юговані з молекулою ауристатину. В іншому варіанті реалізації винаходу імунокон'югат містить молекулу анти-сСсС антитіла, яка містить варіабельну область важкого ланцюга згідно ЗЕО ІЮ Мо 79 і варіабельну область легкого ланцюга згідно ЗЕО ІО Мо 80, кон'юговані з молекулою ауристатину. У ще іншому варіанті реалізації винаходу імунокон'югат містить молекулу анти-зСсС антитіла, варіабельні області важкого і легкого ланцюгів згідно 5ЕО ІЮО Мо 79 і 80, відповідно, кон'юговані з молекулою ауристатину.
В деяких варіантах реалізації винаходу молекула ауристатину зв'язана з цистеїновим залишком на молекулі анти-з5СбС антитіла за допомогою лінкера, що містить малеїмідний фрагмент, наприклад, малеімідокапроїловий фрагмент.
В деяких варіантах реалізації винаходу молекула ауристатинуз'єднується з молекулою анти-
ССС антитіла з використанням гетеробіфункціонального лінкера, який приєднується до гідроксильної групи на молекулі ауристатину. У деяких таких варіантах реалізації винаходу лінкер містить гідразон. В деяких варіантах реалізації винаходу лінкер являє собою з'єднання гідразону, утворене в реакції малеїімідокапроїлгідразиду з кетокарбоновою кислотою, наприклад, 5-бензоїлвалеріановою кислотою. В окремих варіантах реалізації винаходу лінкером
Є (2)-6-(2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-їтл)гексаноїл)гідразоно)-6-фенілгексанова кислота.
В деяких інших варіантах реалізації винаходу молекула ауристатину з'єднується з молекулою анти-зСС антитіла з використанням гетеробіфункціонального лінкера, який приєднується до монометиламіногрупи на молекулі ауристатину. В деяких варіантах реалізації винаходу лінкер містить фрагмент, що розщеплюється, наприклад, пептидний фрагмент і р- амінобензилкарбаматний спейсер, що саморуйнується. Приклади лінкерів включають малеіїмідокапроїл (тс), малеїімідокапроїл-І -фенілаланін-! -лізин-р-амінобензилкарбамат (рЮі малеїімідокапроїл-і -валін-І -цитрулін-р-амінобензилкарбамат (мс).
В деяких варіантах реалізації винаходу ССС-націлена терапія являє собою імунокон'югат, що характеризується формулою АБ-(ме-ММАБ)т (формула (1-4)); АБ-(мео-ММАЕ ) тп (формула (1-5)); 60 Ар-(то-ММАЕ ) т (формула (І-6)); або АБ-(то-ММАРЄ ) т, (формула (І-7)), де АБ - це молекула анти-
ССС антитіла, яка містить елементи, такі як елементи, описані в будь-якій з Таблиць 7, 8, 9 або 10, 5 - є атомом сірки антитіла, і т знаходиться в діапазоні від приблизно 1 до приблизно 15. В деяких варіантах реалізації винаходу т являє собою ціле число від 1 до приблизно 5.
Аь (9) (6)
З н н я (6) Н Го) са носнавоває
Мини АКА (в) 9400 о ойчон в; но з
МН на зо т (І-4) дь (в) (в) он 5 н Н в) о Н о саше
Микити Ам Іо І що во (в; но з
МН наєо " (І-5)
Арлме о
АЖ М.Х М х.
М Ми М М о І о їЇ що о т (І-6)
Арлме о
У М А М вчвевара» (в; (в; що , о са т (І)
В деяких варіантах реалізації винаходу змінна т у формулі (І-4), (1-5), (І-6) або (1-7) знаходиться в діапазоні від 2 до приблизно 10, від приблизно 6 до приблизно 8, від приблизно 4 до приблизно 6, від приблизно З до приблизно 5 або від приблизно 1 до приблизно 3.
У деяких окремих варіантах реалізації винаходу націлена оСС-терапія являє собою імунокон'югат формули (1-4), (1-5), (І-6) або (І-7), де АБ - є молекулою антитіла, яка містить три області СОМ важкого ланцюга (МН) СОК згідно ЗЕО ІО Мо: 67, 68 і 69, і три області СОК легкого ланцюга (МІ) згідно ЗЕО ІЮ Мо: 70, 71 ї 72, і т становить від приблизно З до приблизно 5 (наприклад, приблизно 4). В деяких аспектах АБ, яка містить СОК важкого ланцюга згідно ЗЕО
ІО Ме: 67, 68 і 69, та три СОК (-и) легкого ланцюга згідно ЗЕО ІО Мо: 70, 71 їі 72, відповідно, є людським моноклональним антитілом, переважно людським антитілом Ідс1.
В інших окремих варіантах реалізації винаходу СеСС-націлена терапія являє собою імунокон'югат формули (1-4), (1-5), (І-6) або (І-7), де АБ є молекулою моноклонального антитіла, яка містить варіабельну область важкого ланцюга згідно ЗЕО ІЮО Мо: 79 і варіабельну область легкого ланцюга згідно ЗЕО ІЮО Мо: 80, і т становить від приблизно З до приблизно 5 (наприклад, приблизно 4). В деяких аспектах АБ, яка містить варіабельні області важкого і легкого ланцюгів згідно 5ЕО ІО Мо 79 і 80, відповідно, є людським моноклональним антитілом, переважно людським антитілом ІдС1.
У ще інших деяких варіантах реалізації винаходу зСС-націлена терапія являє собою імунокон'югат формули (І-4), (І-5), (І-6) або (І-7) де АБ - є молекулою людського моноклонального антитіла Ідс, яка містить послідовність важкого ланцюга Ідс1 згідно ЗЕО ІЮ
Мо: 84 і послідовність Карра легкого ланцюга згідно ЗЕО ІЮ Мо: 86, і т становить від приблизно З до приблизно 5 (наприклад, приблизно 4).
У ще іншому варіанті реалізації винаходу зСС-націлена терапія являє собою осСс- лігандний кон'югат, здатний проникати через гематоенцефалічний бар'єр. Наприклад, в деяких аспектах винахід відноситься до зСсС-ліганду, кон'югованому з нейропротекторною речовиною, такою як І -допа, яка здатна проникати через гематоенцефалічний бар'єр. Приклади таких СОСС- лігандних кон'югатів описані в заявці РСТ УУО2013/016662, зміст якої включено в даний документ шляхом посилання в повному обсязі. В варіантах реалізації винаходу згідно винаходу, пацієнти, які страждають від нейрологічних розладів або з підозрою на нейрологічні розлади (наприклад, хвороба Паркінсона), нейрони яких експресують ССС, будуть вважатися хорошими кандидатами для лікування зСсС-лігандом, кон'югованьїм з нейропротекторною речовиною.
В деяких аспектах згідно винаходу ССС-націлена терапія являє собою антагоніст ЗСС. В одному варіанті реалізації винаходу СОСС-націлена терапія являє собою пептидний антагоніст (наприклад, пептид 5Т) або низькомолекулярний інгібітор ССС.
В деяких аспектах зСС-націлена терапія являє собою агоніст СС. В одному варіанті реалізації винаходу агоніст СС є пептидом 517. В окремому варіанті реалізації винаходу агоніст
СС є пептидом 5Т, що містить амінокислотну послідовність: Н-Сув'-Сув2-(31и3-Туг-буво-
Сузб-Авп/"--Рго8-АГах-Сбув'я-ТНг1--(51у12-Сув!з-Туп"-ОН (ЗЕО ІО Ме: 87), в якій є три дисульфідні зв'язки: між Суб! і Сузб, між Суб і Сув'о ії між Суб? і Сув!З. В окремому варіанті реалізації винаходу агоніст ЗСС є пептидним агоністом, який зв'язує ОСС, таким як лінаклотид (ІгГопиоса
Рпаптасешііса!5).
В деяких варіантах реалізації згідно винаходу, пацієнти, чиї пухлинні клітини експресують
ССС она своїй поверхні, будуть вважатися хорошими кандидатами для лікування токсинокон'юЮгованою молекулою анти-зСС антитіла, такою як імунокон'югат, як описано в даному документі, або токсинокон'югованими антитілами, як описано в патентній публікації
США Мо 20110110936, вміст якої в повному обсязі включено в даний документ за допомогою посилання. Без обмеження будь-якою теорією пацієнти, чиї пухлинні клітини експресують низькі кількості (СС на своїй поверхні, не можуть бути хорошими кандидатами для комбінування
СсСсС-націленої терапії з додатковим способом лікування або бути кандидатами для терапії "голим" антитілом. В іншому прикладі доза сСС-націленої терапії може коригуватися з урахуванням кількості молекул СС, експресованих на поверхнях пухлинних клітин. Наприклад,
Зо пацієнти з високими кількостями молекул СС на поверхнях їх пухлинних клітин можуть лікуватися більш низькими дозами сСс-націленої терапії, ніж пацієнти з низькими кількостями молекул СС, експресованих на поверхні пухлинних клітин. Виявлення наявності 5СС- експресуючих пухлинних клітин іп мімо може дозволити ідентифікувати тканини у вихідній зСС- експресуючій пухлині, що має метастази. Знання тканин, які мають метастази, може привести до націленого застосуванню пухлинної терапії.
Як обговорювалося вище, молекули антитіл, описані в даному документі, припускають оцінку наявності білюяа СС в нормальних тканинах порівняно з неопластичними тканинами, через яку можуть бути оцінені наявність або тяжкість захворювання, прогресування захворювання та/або ефективність терапії. Наприклад, може контролюватися лікування і оцінюватися ефективність. В одному прикладі білок СС можна виявити і/або виміряти в першому зразку, отриманому від пацієнта, що має проліферативне захворювання, і може бути ініційовано лікування. Пізніше, другий зразок може бути отриманий від суб'єкта, і білок ОСС в зразку може бути виявлений і/або виміряний. Зменшення кількості білка ССС, виявленого або виміряного в другому зразку, може свідчити про терапевтичну ефективність.
Без обмеження будь-якою теорією може знадобитися васкуляризація для ЗСС-націленого терапевтичного засобу для отримання доступу до експресуючої СС пухлини, особливо в тих випадках, коли СС-націлений терапевтичний засіб вводять внутрішньовенно. Таким чином, в деяких варіантах реалізації способів згідно винаходу, може бути корисною оцінка або характеристика судинної системи пухлини на додаток до або в поєднанні з виявленням білка
ОСС. Наприклад, зразок тканини може бути пофарбований речовиною, яка ідентифікує клітини судинного ендотелію, таким як анти-СО-31 антитіло або молекула антитіла проти фактора фон
Віллебранда, і анти-ЗСС антитіло згідно винаходу для одночасного чи тривалого охарактеризування експресії ССС і васкуляризації тканини. В деяких аспектах згідно винаходу, така одночасна або тривала характеристика експресії СС і васкуляризації є корисною як інструмент для відбору пацієнтів для націленого лікування.
В іншому аспекті експресія СС на клітинній поверхні може бути необхідною для СС- націленого терапевтичного засобу для впливу на лізис пухлинних клітин, що експресують СС.
Наприклад, деякі пухлинні клітини можуть експресувати ЗСС, але не на клітинній поверхні.
Якщо терапевтичний засіб залежить від експресії СС вна клітинній поверхні, то такий 60 терапевтичний засіб може бути не здатним вбивати клітину, коли ССС спочатку є 5О0 внутрішньоклітинною. Таким чином, в деяких варіантах реалізації згідно винаходу, діагностичний або прогностичний аналіз може додатково включати аналіз та/або кількісний аналіз клітинної локалізації СС, наприклад, спосіб, який може відрізнити і/або кількісно визначити експресію на поверхні клітини від внутрішньоклітинної експресії. Без наміру бути обмеженими якоюсь теорією, пацієнт, чия пухлина спочатку має внутрішньоклітинну експресію
ССС, не може бути хорошим кандидатом для молекули анти-сСС антитіла, яка зв'язує позаклітинний домен (СС. Альтернативно, такий аналітичний результат може ініціювати початкове лікування речовиною, яка індукує експресію СС на клітинній поверхні (дивись, наприклад, публікацію РСТ Мо МУО04/071436). Після або одночасно з індукцією СС клітинної поверхні можна вводити молекулу анти-ссСс антитіла, яка має доступ до або зв'язується тільки з позаклітинно експресованою СС.
Набори
Також в обсязі даного винаходу знаходяться набори, що містять молекулу антитіла анти-
ССС або імунокон'югат, як описано в даному документі. Крім того, включені набори містять ліпосомні композиції, що містять молекулу антитіла анти-сСсС або імунокон'югат. Набір може містити один або декілька інших елементів, включаючи: інструкції по застосуванню; інші реагенти, наприклад, мітку, терапевтичний агент або агент, придатний для хелатування або зв'язування іншим шляхом, антитіла з міткою або терапевтичним агентом, або радіозахисною композицією; пристрої або інші матеріали для підготовки антитіла для введення; фармацевтично прийнятні носії і пристрої або інші матеріали для введення суб'єкту. Інструкції по застосуванню можуть включати інструкції для діагностичних застосувань молекули антитіла анти-ССС або імунокон'югату для виявлення ЗСС іп міго, наприклад, в зразку, наприклад, біопсії або клітині від пацієнта, що має рак, або іп мімо. Інструкції можуть включати рекомендації для терапевтичного застосування, включаючи запропоновані дози та/"або способи введення, наприклад, у пацієнта з раком (наприклад, раком шлунково-кишкового походження таким як, наприклад, рак товстої кишки, рак шлунку, рак стравоходу). Інші інструкції можуть містити інструкції щодо зв'язування антитіла з хелатором, міткою або терапевтичним агентом, або для очистки кон'югованого антитіла, наприклад, від непрореагувавших компонентів кон'югації. Як вже говорилося вище, в комплект може входити мітка, наприклад, будь-яка з міток, описаних в
Зо даному документі. Як обговорювалося вище, набір може містити терапевтичний агент, наприклад, терапевтичний агент, описаний в даному документі. В деяких варіантах реалізації винаходу антитіло буде взаємодіяти з іншими компонентами, наприклад, хелатором або міткою, або терапевтичним агентом, наприклад, радіоактивним ізотопом, наприклад, ітрієм або лютецієм. В таких випадках набір може містити одну або більше реакційних посудин для проведення реакції або сепараційний пристрій, наприклад, хроматографічну колонку, для використання при відділенні готового продукту від вихідних матеріалів або проміжних продуктів реакції.
Набір може додатково містити щонайменше один додатковий реагент, такий як діагностичний або терапевтичний засіб, наприклад, діагностичний або терапевтичний засіб, як описано в даному документі, та/або одну або більше додаткових молекул анти-ссСс антитіл або імунокон'югатів, отриманих залежно від конкретного випадку в одному або більше окремих фармацевтичних препаратів.
Набір може додатково містити радіопротектор. Відомі радіолітичні по природі ізотопи, наприклад, ЗбІтрій (У). З метою подолання цього радіолізісу радіопротектори можуть бути включені, наприклад, в реакційний буфер, за умови, що такі радіопротектори доброякісні, а це означає, що вони не інгібують або іншим чином негативно не впливають на реакцію мічення антитіла, наприклад, ізотопом, таким як У. Склад буфера відповідно до даного винаходу може включати радіопротектор, такий як людський сироватковий альбумін (НЗА) або аскорбат, які мінімізують радіолізіс за рахунок ітрію чи інших сильних радіонуклідів. Інші радіопротектори відомі в даній області і можуть бути також використані в складі буфера відповідно до даного винаходу, тобто, поглиначі вільних радикалів (фенол, сульфіти, глутатіон, цистеїн, гентизинова кислота, нікотинова кислота, аскорбілпальмітат, НОР(О)Н»Ї гліцерин, натрію формальдегіду сульфоксилат, Маг520, Маг52Оз і 50» і т.д.).
Передбачений набір являє собою набір, корисний для радіомічення хелатор-кон'югованого білка або пептиду терапевтичним радіоїзотопом для введення пацієнтові. Набір містить (Її) флакон, що містить хелатор-кон'юговане антитіло, (ії) флакон, що містить буфер для стабілізації і введення міченого радіоактивним ізотопом антитіла пацієнту, і (ії) інструкції для виконання процедури радіоактивного мічення. Набір передбачає взаємодію хелатор-кон'югованого антитіла з радіоактивним ізотопом або його сіллю протягом достатньої кількості часу при бо сприятливих умовах, наприклад, як рекомендовано в інструкції. Утворюється радіоактивно мічене антитіло, що має достатню чистоту, специфічну активність і зв'язувачу специфічність.
Радіоактивно мічене антитіло може бути розбавлене до відповідної концентрації, наприклад, в буфері, і вводитися безпосередньо пацієнту з або без подальшої очистки. Хелатор-кон'юговані антитіла можуть поставлятися в ліофілізованій формі.
Наступні приклади є ілюстративними і не призначені для обмеження даного винаходу.
ПРИКЛАДИ
Приклад 1: Отримання злитого білка екстрацелюлярного домену людської ССС і мишачого
Ес (пабСОо-ЕСО-тЕс)
Отримання злитого білка секретуємого екстрацелюлярного домену (ЕСО) людської (Й) гуанілілциклази (пОСС) константного домену (Ес) важкого ланцюга мишачого імуноглобуліну (Ід) сСга (з мутацією рецепторзв'язуючої області (ЕСКбг-тий) (тобто, злитого білка пОСС (ЕСО) -тідс2а ВеВАбБі-тий, також названих в даному документі рі КТОК108 і МІ! -44) для імунізації та скринінгу здійснювали наступним чином. Антиген СС готували субклонуванням частини гена
ССС, що кодує послідовність, що містить наступну послідовність зСС (сигнальну послідовність і екстрацелюлярний домен), в експресійний вектор рі КтОоКка:
МКГ ОГАЇ МУЗИ РОРСУМ БЕ5БОУБОМОСНМаЗУІЗМІ ММЕМЗАБАЕР
ГКМСЕВСАМНЕГАТ.СЕІМКОКГОМАСІ ММ ТУМАТЕМУЗОСІ ІНМЗООоСКЗЗтТС еагО1 АКІЗМАОВМасм аРБЗСТУЗТРОММІ ОТЕЇ 5МРМІЗАС,ЗЕИЦІ 5
СОУКЕТІ ТВІ МОРАВКІ МУР ММЕУМУКТМОЇ РЕКТУБУУЗТЗУУУКМатЕТЕ
ОСРМУМІ МАГЕАЗУЗУЕЗНЕЇ аЕКУМІ ВООКЕРОВІ МОНМА!АКЗММИМОСС
СРЕРГУКІ КООВАМАЕОІМП МОГ ЕМООМЕЕОММ ТАРОУМКММІ МІ ТІ 5
РОМБ МЗЗЕЗАМІ ЗРТКАОРБАЇАМІ МС РГС НМІ КІР ЕМСЕМІТТРК
ЕАНАЕРВАВМІТЕЕСМраРУТІ ОДМУСОМОЗ ТММ І МТ5УОТККУКМІ СТМОТНУМКТУРМОМ5РТЕПУК
МКГ. (ЗЕО ІО Мо 46)
Амінокислотну послідовність СІ у-Агд-Спіу-Рго-СІп (ЗЕО ІЮ Мо 66), в положеннях від 427 до 430, вибрали для термінування екстрацелюлярного фрагмента СС. В СС ця послідовність безпосередньо слідує після Рго, що збігається з Рго в положенні, гомологічному Рго, яке традиційно використовується для ініціювання злитих білків Ес людського Їдса1.
Область Ес мишачого Ідсгла в ріКтТОК108 була розроблена, щоб стартувати з
Зо амінокислотної послідовності, яка функціонально є кінцем домену СНІ |Рго-Ага-Валін (Маї) -Рго-
Ізолейцин (Пе) -Треонін (Тйг) -СсІй-Аспарагін (А5п)| (ЗЕО ІЮ Мо 58). Дві області мутували в константній області мишачого Ідсга. На додаток до мутацій лейцину (Гец) -І ви-Спу-Спіу (5ЕО І
Мо 59) в І еи-аланін (Аа) -СІу-АІа (ЗЕО ІЮ Мо 60) (положення 234-237 лізин (ГУув| -Гуз-Спу -С1у (ЗЕО ІО Мо 61) в І уз-АІа-СИу-АІа (ЗЕО ІЮ Мо 62), друга рецепторна ділянка Ес в положеннях 318- 322 також мутувала наступним чином: глутамінова кислота (Сім) -фенілаланін (Ре) -Гув- цистеїн (Суз) -Гуз (ЗЕО ІЮ Мо 63) в АІа-РНе-І уз-Сув-І уз (ЗЕО ІЮО Мо 64), а потім в Ріе-І уз-Сув-
Гуз (ЗЕО ІО Мо 65).
Як тільки була створена повна послідовність злитого білка, були додані фланкуючі послідовності рестрикційних ферментів для Ватні і ХбраІ, а також послідовність Козака (СТСАСС) і термінальний стоп-кодон для завершення кКДНК злитого білка. Нуклеотидні і амінокислотні послідовності злитого білка рі кКтТОКкК108 (пОоСсС/тідсб2а ЕБсКтиший) представлені нижче (сайти рестрикції Ватні і Хвраї показані малими літерами в 5ЕО ІО Мо 47):
Нуклеотидна послідовність людського ЗСС-ЕСО/Ес мишачого Ідсг2а (ЗЕО ІЮО Мо 47) сдсддаіїсссісассі ТаХАасСАсСОа ТТаста ттасаєтааст татаатСАСстТастотоСАаСосСс ссеатесстатосттАаттосСАсСатаАаТСАСААСТаССАСААТааСАасСТАТОАААТСАСССИТ
ЄСстТаАтТаАтТавпаСААстоАаа,асСсттасСсАадасССсСтаАААААСТТапААаАтТарааТаААТИаАа саабтасАААТАСТаАдвАас,СаАСатсТасСААААтТастаасССтТАААтТаТатаАСТатаААСастАСТТ тТсАТаТАТТСаСАТИСТОТаАТТСАТААСТСАСОаСссАСсСТаСсСсЯесвАаатТАаСАСсСсТТаААдааСсСтТ
СаАССТАСТСАССИСААААТТТСАААТасСАСААСОЯСАТасЯастаТататССТСАТАСпаСССТоСАТОатА
САТАСТОСАССТТССАСАТаТАССТТаАСАСАСААТТаАДаСТАССССАТОАТСТоАСаСТавАдаИт ттацйАТТатсСАТатТаАСТАТАААЧАААССТТААССАсвСастадтТаТатстСАастАСаАААаТтТаАТта
ТАСТІСТТаСТТААСТІ ТТАСАААДАССААСВАТСТаСССТТСААААСТТАТТОСТООСАС,САСТТСС
ТАТаТтТАСАДСААТаСТАСАСАААСТОАасСОаАСсТаТатптотааЙтТАССТТААТОСТОТаспСАцваТстАа
СаТаттоСТАТ ТСТОоССАССААСТССасСтТТТААсСатастаТТААпАСААСаАТААсСаАатттСА,а АТАТСТТААТаСйАССАСААСАпИаААААаСААТатаАТТАТТАТО Та ТОСТОИТоСАаАаТттостТетТ
АСААдаСстТадАа,ааатаАдсСсАаАата,СТаААпАСАТТаТСАТТАТТСТАСТасАТСТТТТСААТ вАССАССТАСТТасАсааАСААТаТСАСАасСсСсСсСтТаАСТАТАТВАААААТИТОСТОттотТаАСсаТст атотостТаааААТТОССТТСТАААТАаСТСТ ТТ СТОСАСаААТСТАТСАССААСААААСаАСАСТТ тастттасстТАТТТаААтТавпйААТОСТаСтТоТттаспАСАТАТаСТаААСАТАТТТСТТаААААТИаС 60 АпААААТАТТАССАСССССАААТТТасСТСАТаСТТТСсАааААТСТСАСТТ ТТОАдАасСааТтАТОАССС тосАдатТаАсстасцсАтаАстасасацвАтТаттаАСАаТАССАТОСТасСтстТаТатАТАССТСТаИта
САСАССААСАААТАСААСааТт ст таАССТАТИАТАСССАСИТАААТААЧАССТАТОСТОТасАТ
АТаАДаССССАСАТТСАСТТасСААСААСТОТАААСТТССТААТОАТАТТАСАССЯЬССЯССТВИаСССТСА
ВсСсСАСАДатассСАТААСАСАЧААССССТатоСстТоСАСТСАААСсСАататосооСАтаСасАаст ССАпАСсСсТоаСАватасСсАССАТССИаТСТТСсАТСТТОССТОСААДАЧАТСАДаСАТаТАСТСАТИаАТ стоостадассСсСАТтТаатСАСАТататаатаатацчататадасадапАТаАСССАаАСаТоСА вАТСАССТОСТТТатаААСААСаИтацпААаТАСАСАСАаСТСАЧПАСАСАААСССАТАСАСАС САТ тТАСААСАССТАСТСОТОССОССтТастоАаа тТассСстоСССАТСоСАасСсАССАааАСстТасатадатайсСА
АПасСАТТСАААТаСААааТСААСААСАЧАассстССАТОССССАТОСАСААААССАТСТСАДАА сосАдадачдаССАаТтАладаСТоСАСАаСТАТАТИТСТТаТасстоСАССАаСАаААдалаАТОАСТА
АПБАААХсСАсТттсАаТтоТаАССтТасСАТИАТСАСАСвСИасСтТСстТТАССтТасСссСоАААТТаСТО ТаСАСТас
АСсСАаСААТОпСасСаТтАСАпАаСААААСТАСААВААСАССаСААСАа ТСтацвпАСТСтТадтастт
СТТАСТТСАТаТтТАСАаСААаСТСАСАсСТАСААААпАасСАСсттапаАААпАааААатсттсасс тастсдатаатоСАСосАаасватсТасСАСААТСАССТТАСИАСТААаАССАТСТОССЯИаИтстотаав
СТАААТААІсіададса
Амінокислотна послідовність людського ЗЄСС-ЕСО/Ес мишачого Ідсга (ЗЕО ІО Мо 48):
МК ССОГСАСУМУБССРОРСУМ 5Е55ОМБОМСОСНМОЗУБІЇ ЗМІ ММОМЗАБГАЕРІ КМІГЕСАМНЕГАТ.
ЕІММВАавВГОМАСІ ММТУМАТЕМУЗВССИІ ІНМЗИаОСАЗЗТСЕ,І 01 АКІЗМАОА Масу ІаРОСТУЗТЕО
ММ ОТЕГ 5МРМІЗБАС,БЗЕИІ 5СОМУКЕТІ ТВ МОРАВКІ МУР ММЕУУКТМОЇГ РЕКТУЗУУЗТЗУУУКМИТ
ЕТЕОСЕРМУМІ МАГЕАБУ5ЗУЕЗНЕЇ ЕКУМІ ВООКЕРОВІ МОНМАКЗММИІМСССИ РЕНІ УКІ КООВАМА
ЕОВІМІП МОГ ЕМОСОМ ЕОММ ТАРОУМКММІ МІ ТІ РОМ МЗЗЕЗАМІ ЗРТКАОГЕАГГАМІ МОП га НМ
ГКІЕГЕМЕЕМІТТРКЕАНАЕВМТЕЄС МрСа РУТ ОрУС,СОоМОоз ТМ МТеУОоТкККкУКМ СТМОТНУМК
ТУРМОМ5РТЕПМУКМ5КІ РМОЇ ТА ВЕРОРАМУРІТОМРОСРРІ КЕСРРСААРОЇ АСАРЗУРІРРРКІКОМІ
МІБІ БРМУТСУУМОМЗЕВОРОМОЇЗУМ ЕММММЕУМНТАОТОТНАЕОУМ5ЗТІ ВУУМ5АЇ РІОНОЮГУУМЗОК
АРКСКУММВАЇ РОРІЕКТІЗКРАВРУВАРОМУМІ РРРАЕЕМТККЕБЕБЗІ ТСМІТОРІ РАЕІАМОМУ ТЬМИ В
ТЕОМУКМТАТМІ О5БОСОМЕМУЗКІ ВМОКЗТУЕНИБІ ЕАСЗУМНЕСІ НМНІ ТТКТІЗНБІ СК
Як зазначено вище, рекомбінантний білок рі КТОК108 об'єднує екстрацелюлярну область людської СС, злитої з областю Ес мишачого ІдсСга, в якій дві мутантні рецепторзв'язуючі
Зо області Ес (Ес5) піддавали мутації для запобігання рецепторного зв'язування Ес (тідбга
ЕсКтий). Вставка рекомбінантної ДНК для ріКТтТОК108 була створена за допомогою трьохетапного процесу РОК наступним чином:
На першому етапі створили фрагменти ДНК адаптованої екстрацелюлярної людської ОСС і адаптованої ЕсКтий мишачого Ідсга, які містять 35 нуклеотидів перекриваючихся послідовностей. Ці РСК реакції використовували матриці і праймери, описані в Таблиці 11 і
Таблиці 12, з протоколом, описаним в Таблиці 13, для створення двох фрагментів. Ці фрагменти ДНК виділяли з 195 агарозного гелю, використовуючи гель-очищуючий набір Оіадеп (Валенсія, штат Каліфорнія). Матриця для людської СС була забезпечена за допомогою експресуючого білок вектора, що містить послідовність людської ЗСС (Сіопіесі І арогаїогієв,
Іпс., Маунтін-Вью, штат Каліфорнія, США). Матриця для домену Ес була отримана з експресуючого конструкту для людського 1228, злитого з мишачим Ідсг2акс з двома мутантними рецепторзв'язуючими областями Ес (ГсКтцій), названими рі КТОКЗ84, які самі були створені з використанням вектора рі КТОКОЇ1 (описаного в патенті США Ме 7,053,202, зміст якого включено в даний опис за допомогою посилання в повному обсязі) як матриці.
Таблиця 11
Матриці, використані на першому етапі складальних реакцій РОК для створення рекомбінантної ДНК для рі КТОК108
Таблиця 12
Праймери, що використовуються у всіх реакціях РОК для створення рі КТОК108 рассСЕсЬ5 в'-СВСОСАТСССТСАССАТОААаАСИТтТастТаттавАстТаао-3 оОССЕСМиА |5-ТайОСАСстТотТавасСтТаАааОасСсСССОасСсСтТатТААТАТСАТТАС -3 5- раСсСЕСМив ІсАсасса,аававаосСТСАаСССАспАаТасСССАТААСАСАСААССССтТаТт
Со -5' оМІСО5-4 5Б-ТастотТАСАТТАТТТАСССАСАСАССОСаАСАТОСТСТТА рЗМОсНа 5Б-АССТОТОСАССТСТТАСТОС-3:
ЕЕ55 5Б-САТТТСАвататосатодсасА-3: 5-АТТТАССТОАСАСТАТАС-3
МІ 5-ЯТТТТОССАСТСАСОСАО-3! в'-ААСАССТАТОАССАТО-3
Таблиця 13
Протокол реакцій, що використовується на першому етапі збірних реакцій РОК для створення рекомбінантної ДНК для рі КТОК108
Регулювання режимів роботи машини 1 мкл ДНК (1:100 мініпрепа матриці) 94 "С- 2 хвилини 0,2 мкл 200 ммоль праймера 1 нІ?нВВІВЛІЛИТІТІВОВВВОООООООООООИ 0,2 мкл 200 ммоль праймера 2 10 мкл 10х буфера РСК 94 "С- 1 хвилина
З мкл 50 ммоль МасСіг 55 С- 30 секунд 2 мкл 10 ммоль мікса аМТР 7276- 2 хвилини 83,5 мкл НЕО нІ?нИІЇВШЕШЕИИІИНІВИИВВВВВВВВВВИИИИНИ 0,5 мкл Тад полімерази 72 76- 10 хвилин
Друга реакція РСК об'єднала матриці в концентраціях, вказаних в Таблиці 14. Протокол реакції, наведений в Таблиці 15, створив єдиний рекомбінантний ген злитого білка. Продукт цієї реакції використали безпосередньо в якості матриці в третій реакції РОК.
Таблиця 14
Матриці, використані на другому етапі збірних реакцій РСЕ для створення рекомбінантної ДНК для рі КТОК108
Ідс2а-ЕсВтийІ миші 10 мкм (2,5 мкл кожної)
Ідс2а-ЕсВтийІ миші 30 мкМ (7,5 мкл кожної)
Таблиця 15
Протокол реакції, що використовується на другому етапі збірних реакцій РСК для створення рекомбінантної ДНК для рі КТОК1О8
Регулювання режимів роботи машини 2,5 або 7,5 мкл кожної ДНК мкл 10х буфера РСК 94 "С- 1 хвилина
З мкл МасСіг швидкість зміни температури 30 сек. 2 мкл аМТР 7276- 2 хвилини 79,5 або 69,5 мкл Н2гО швидкість зміни температури 30 сек. 0,5 мкл Тад нн
У третій реакції РОК використовували матриці і праймери, описані в Таблиці 16 і Таблиці 12 з протоколом, описаним у Таблиці 17 нижче, для створення повних фрагментів. Ці фрагменти
ДНК були виділені з 0,795 агарозного гелю з використанням набору для очистки Оіадеп (Аррепаїх Р) ї тіамін-аденозинового (ТА) "липкого" кінця ДНК ТОРОФ ТА з набору для клонування (Аррепаїх РЕ). Були виділені унікальні клони, а ДНК очищена з використанням ДНК- мініпрепаративного набору Оіадеп (Аррепадіх Р). ДНК секвенували з праймерами М13ї, М13Зг і рЗМиСсНае для ідентифікації ДНК із бажаною послідовністю. Проміжний ТОРО клон ТОК108-15 містив бажану послідовність рекомбінантної ДНК.
Таблиця 16
Матриці, використані на третьому етапі збірних реакцій РСЕ для створення рекомбінантної ДНК для рі КТОК108 номер | продукт | матриця | праймер! | праймер2 | розмір:
Таблиця 17
Протокол реакції, використаний на третьому етапі складальних реакцій РОК для створення рекомбінантної ДНК для р КТОК1ТО8 б2мкл200мМпраймераї//-/-/:///С/СЇ7111111111111111111111111111111111 бп7язмк Но 1
Для створення експресуючого вектора ріКТОК4 використовували рсОМАЗ.17М в якості остова вектора. Він містить ген неоміцина (МЕС) для резистентності до 5-418 (СепеїйісіпФ) для створення можливості легкого відбору в умовах досліджень. Сайт рестрикції видалили з рРСОМА тМ3.1 за допомогою сайт-спрямованого мутагенезу. Промотор ЕЕ-Та4 з плазміди рРсОЕЕЗ (за походженням рЕБ-ВО57) вставили в рсОМА 7М3.1, тим самим видаливши промотор СММУ.
Кругова карта експресуючого вектора рі КТОКА представлена на фіг.1.
Клонування проводили на кінцевих продуктах РОК з використанням набору для клонування
ТОРО-З ТА. Після розщеплення з рестрикційними ферментами Ватні і Храї бажаний фрагмент з клона ТОРО зшивали з експресуючим вектором рі КтТОК4і4, який також розщеплювали за допомогою Ватні і Храї. Реакцію зшивання використовували для трансформування хімічного компонента К12 клітин Е. соїї, а потім проводили відбір на агарових чашках з бульйоном Луріа і ампіциліном. Виділяли плазміди з окремих клонів ЕЕ. сої з використанням ДНК- мініпрепаративного набору СОІАСЕМ5 і секвенували з праймерами 5Рб (5ЕО ІЮО Мо 55), ЕЕ55 (ЗЕО ІО Мо 54) та РОМОСН?2 (ЗЕО ІО Мо 53).
Визначали, чи містить клон бажану рекомбінантну ДНК, за допомогою ДНК-секвенування і використовували для отримання великої кількості чистої плазмідної ДНК із застосуванням максіпрепаративного набору ОІАСЕМ. Цю максіпрепаративну ДНК використовували для
Зо трансфецирування в дефіцитні по дигідрофолатредуктазі клітини яєчників китайського хом'яка (СнНОо-ра44).
Безсировоточну адаптовану суспензію клітинної лінії СНО-О044, названу 51-СНО-ОС44, використовували для розробки клітинних ліній, які продукують рі КТОК108. Коротко, трансфекції виробляли, використовуючи пристрій Мисіеоїесіог? від Атаха Віозубзієт5 і набір М
МисієоїесіїопФ), застосовуючи нелінеаризовану кільцеву ДНК або лінеаризовану плазмідну ДНК, оброблену рестрикційним ферментом Рми І. Трансфековані клітини підтримували в живильному середовищі ІЗ-СНО-У-55 протягом 48 годин до заміни живильним середовищем С 418. Живі трансфековані клітини підживлювали свіжим селекційним середовищем со-418 і підтримували в культурі до злиття (- 10-14 днів). Продуктивність рРГКтТОК108 кожного трансфекційного пулу оцінювали, використовуючи ІФА з мишачим Ідсга, а клітини вирощували для створення банків заморожених клітин. За допомогою ІФА з мишачим Ідсга був ідентифікований трансфекційний пул з найвищою продуктивністю для обмеженого розбавленням клонування, де клітини висівали в 5 х 96-лункові планшети для культури тканин із селекційним середовищем с-418 (приблизно 1 клітина в кожну лунку). Планшети на 96 лунок інкубували при 37 "С в інкубаторі з 5 95 СО» протягом 2 тижнів без підживлення. По 5О0мкл супернатанта з кожної лунки, яка містить одну колонію, перенесли прямо в 96-лунковий аналітичний планшет для проведення аналізу ІФА з мишачим Ідсга. Ідентифікували двадцять три клона з високою продуктивністю та збільшили послідовно через 24-лункові планшети для культивування клітин, а потім через б-лункові планшети для культивування клітин. Титр антитіл в супернатанті від цих клонів вимірювали при
З різних розведеннях методом ІФА з мишачим Ідсга.
Кращі 6 клонів, виходячи з титру мишачого Ідо2а, розширили в селекційному середовищі с- 418 для створення банків заморожених клітин і адаптували до безсировоточного суспензійного середовища Зідта Ж 21. Щільність і життєздатність клітин визначали, використовуючи автоматичний аналізатор культури клітин Седех, а концентрацію білка в супернатанті вимірювали, використовуючи аналіз ІФА з мишачим Ідсга. Після того як клітини досягли логарифмічної фази росту, їх збирали і заморожували при -80 "С протягом ночі, а потім переносили в кріокамеру з рідким азотом для зберігання.
Для отримання злитого білка клітини розморожували, засівали, а потім послідовно розклали у великі Т-колби, а потім в колби для струшування при початковій щільності 3З,0х105 клітин/мл і інкубували в зволоженому інкубаторі при температурі 37 "С з 595 СО» в орбітальному шейкері при швидкості 105 обертів на хвилину. Отримані культури підгодовували 1095 об'ємом спеціального живильного середовища Зідта Ж 21 в дні 4 ї 7 і 595 об'ємом в день 10. Поживне середовище бідта Ж 21 складається з середовища 5ідта 2 21, збагачене 40 г/л глюкози, 10 г/л
Ї-глутаміну, 10 г/л дріжджового екстракту і 10 г/л соєвого пептона. Культивовану з використанням перемішування культуру збирали центрифугуванням. Супернатант, що містить секретований білок рі КТОК108, фільтрували через 0,2-мкм низькопротеїновий зв'язуючий
Зо поліефірсульфоновий (РЕ5) мембранний фільтр з сирим рі КтТОКт08-вмісним фільтратом, готовим для очистки або зберігання при -80 "С для подальшого очищення.
Первинна очистка включала циркулювання відфільтрованих супернатантів, містячих ргкТокК108, через білок А при приблизно 4 С. Смолу потім промивали РВЗ при рн 7,4, а білок елюювали 0,1 М гліцином в РВЗ5 при рн 3,0 і нейтралізували 1М фосфатом натрію при рнН 6,5.
Нейтралізований елюат концентрували, використовуючи концентратор Мімазріп з відсіканням по молекулярній масі (МУУСО), що становить 30 кдДа, і завантажували в колонку Зирегаех 200 для ексклюзійної хроматографії (ЕС) (Аррепаїх б), яку попередньо врівноважили РВ5 з рн 7,4 буфером з метою видалення агрегатів цього білка. Очищений білок рі кКТтТОК108 елюював у вигляді одного піка з чистотою, підтвердженою на 505-РАСЕ і фарбуванням Кумасі. Фракції, що містять гомодимери пОСС (ЕСО)/тідб2а Ес, об'єднували. Після того, як концентрація об'єднаного матеріалу була визначена за допомогою Уф-абсорбції при 280 нм на спектрофотометрі Мапобгор'ї МО1000, очищений білок рі КТОК108 поділили на аліквоти і відправили на зберігання при -80 20.
Приклад 2: Отримання кролячих тАБб шляхом білкової імунізації
Кролячі моноклональні антитіла проти злитого біль»а пОСС (ЕСО) -тідсбга ВсАрі-тийі (рі КТОК108) були отримані з використанням КармАбБ-, наданих Еріотісх (Бурлінгейм, штат
Каліфорнія). Для отримання МАБ використовували злитий білок НСС (ЕС) -тідсга ВеВБг- тий (рі кТОкК108), названий в даному документі як МІ -44.
Три кроля (МІ.1009, МІ-1010 ії МІ1011) імунізували МІС-44, використовуючи звичайні методи імунізації. Сироваткові титри проти МІ -44 і не-6СС зворотно-скринінговий антиген (пМаасАМ- тес) оцінювали, використовуючи тестові кровопускання. Бустерні імунізації здійснювали після вихідних імунізацій. Кролика МІ/1010 з більш високим сироватковим титром вибрали як кандидата на спленектомію і моноклональне злиття з використанням патентованої партнерської клітинної лінії для злиття клітин і методів Ерйоптісв.
В два окремих дня (день 1 ії день 2), двісті млн. лімфоцитних клітин зливали з 100 млн. партнерськими клітинами і висівали в 20Х 9б-лункові планшети, відповідно. Планшети утримували в інкубаторах для культури тканин в стандартних умовах. Зростання клітин досліджували через 2-3 тижні після злиття, а ефективність злиття підраховували, використовуючи кількість лунок з ростом, поділене на загальну кількість обстежених лунок. бо Ефективність злиття для злиття в 1-й день була виміряна при 7295 ефективності злиття, в той час як ефективність злиття на 2-й день склала 7995. Щонайменше два планшета були досліджені, як зазначено далі:
Скринінг всіх 40 планшетів проводили, використовуючи стандартні методи ІФА з планшетами, покритими 50 нг МІС-44/лунку. Кров МІ-1010 у розведенні 1:10К використовували в якості позитивного контролю. 151 клон, що має О.О. більше, ніж 0.5, вважали імовірно позитивними і висіювали в 24-лунковий планшет.
Подальший підтверджуючий скринінг проводили за допомогою ІФА з використанням планшетів, покритих 50 нг МІ -44 або 50 нг пМаасАМ-теЕс/лунку. 143 клона були підтверджені позитивними проти МІЇ!- -44, і серед них 72 були визначені як МІ -44 специфічні, тобто вони були негативними проти білка пМаасАМ-тЕс.
Після оцінки мультиклонального супернатанта деякі зі специфічних мультиклонів МІС-44 субклонували: включаючи мультиклон Мо148 і Моб7. Субклонування здійснювали, використовуючи метод обмежених клітинних розведень. Скринінг деяких субклональних супернатантів здійснювали за допомогою ІФА. Гібридомні клітини для субклонів Ме148-2 і Моб7-4 відбирали для заморозки/зберігання і для додаткового скринінгу і аналізу в якості ОСС реагенту, що визначають, в імуногістохімічному аналізі (ІНС), як описано в Прикладі 3.
Антитіла МІС-44-148-2 і МІС-44-67-4 також клонували в рсОМАЗ.1 тпео (Іпмігодеп) для продукування шляхом тимчасової трансфекції в клітини ссавців і для секвенування.
Нуклеїновокислотні і амінокислотні послідовності важких і легких ланцюгів антитіл МІ -44-148-2 і
МІ -44-67-4 надані нижче. Сигнальна послідовність в кожному ланцюзі ДО показана жирним шрифтом; СОК показані підкресленням.
Нуклеїновокислотна послідовність МІ -44-148-2 Н2 (ЗЕО ІЮ Мо 4)
АТасСАСАСТОСОСсСТОаСОЯСТОаСТОТОоСТастоастатастоСААдАасата,атсСсАиатат
САатсАатаддасвсьАатосасвсиасаАаассТСсТтСсАдассААСасАтТАСССТОАСАСТСАССтТас
АсСсатоттТасАТТСТОССТоАатТАаТСАТАВААТаААСТОСИВСТоСасСсСАпАСстТоСА,СаавАдИась састасААТапйАТСИаСААТСАТТАСТСАТААТАСТАТСАСАТАСТАСЬССОСЗХССотТаа,ваСслААддас
СаАТССАССАТСАССАСААДАСАССАаСа,АпААСАСасТАСТОТаААААТаАССАаТСТаАСАс ссабаспАСсАСааССАСТТАТТоТатасСсАапАааАдапАТтТАаТтТАТаССОССТАТТАТТТТаАСТТатТОаСа сассСсАдааСАСССТааТСАССАТСТОСТСА
Коо) сааСААССтТАдаасСсТоСАТСАаТстТТоСсСсАСсТОИССКССОоССТаСТаСОааспАСАСАСССАИаст
СсСсАсСастадссставастаєєтаатСААддасватАсстоссасвсласСсАаастадлссатадсстааА дстсавасСсАСССТоАССААТтТассватАасасасєстоссатосатоСсавСАатостАвасстотТА стсаеастадасаа,асатаастадасатаАССсТсАдаСАассаасСсСатсАССстТасСсААСЯТОаСССА
СССАасССАССААСАССАААДа тТасАСсАдалссатта,асассстоаАСАтТасСсАааСАдасссАсата
СоСАСССССтТаААСстТоСстТавсаасапАССаТтстатсТСсАТСТТССССССААААСССААаалдсСАСс
СстТСАТаАТСТСАСОСАССсСсСсСсаАаатСсАСсАТтасатаатаатацАаСс,атаАяасСсСАаааАтТалсссс сАдасТаСАатТТСсАСАТаатТАСАТАААСААСал,СсАасвсатасасСАассассовассассастТАСас сАдасАсСАатТСААСАасСсАСсадтосасатаатАасСАСССсТоССсСАТтсаСасСАССАСИалХстТас стадссааСАда,апАаТТСсААаТасСсАААатоСАСААСААаасСсАСтсаасССоСАТССАСААА
АССАТСТОСААдДасСсСАааАдасасСАаасооєставлдасСсаААдаатСстТАСАССАТаавассстоСосва ласаастад,аСАа,аСАасатосатсАасСТаАССТасСАТОАТСААСаастСсТАСССТТОСОаАСА тотоватоасдатасаАаААаАдАСсааААасасАааАацАСААСТАСААдалссАсассвассатас таавАСсАааСсаАСсаасТосСтТАСТТОСТСТАСАасСА5АлаСстотсАатассСсАСсасАасталатаасАаса саасаАдсатсттсАссТтастоСатаАдтТасСсАасаАааасстТасСАСААССАСТАСАСаСАаААатТос
АТСТОССОСТотТоСааатАААТОА
Амінокислотна послідовність МІ -44-148-2 Н2 (5ЕО ІЮО Мо 42)
МЕТаги ВУЛ МАМІ КОМОСОБУКЕЗОСИІ ЕКРТОТІ ТІ ТСТтУЗаГБ5І 5ББНАММУМУУВОТРИКаї.
ЕМЛАПТНМЗІТУМАБУАКЗАЗТІТАМТЗЕМТМТІ КМТ5І ТААОТАТУРСАВЕОЗМаУУвгОрІ Марат м
ТІ
СОРКАРБЗМЕРІ АРСОСОаОТРУОБЗТУТ аСІ УКаМІ РЕРУТУГУМЗОаТІ ТМСОМАТЕРЗУНОБЗИЇ БІ 55
МУ5МУМТ5550РУТСММАНРАТМТКМОКТУМАРЗТОЗКРТСРРРЕ СОС РЗМУБРІЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМ
ТСУУМрУБОВОРЕМОЄПГУМІММЕОМАТАВРРІ ВЕСОЕЄЕМ5ТІВУМ5ТІ РІАНОВУМ ВЕОКЕРКСКУНМК
АЇ РАРІЕКТІЗКАВИОРІ ЕРКУУТМОРРАЕЕЇ 558551. ТСМІМИЕМРБОІЗМЕМЕКМОаКАЄОМУКТТ
РАМ О5рав5зУРІ У5КІ БМРТЗЕМОВОаОМЕТСЗУМНЕАІЇ НМНУТОКВІЗАЗРИОК
Нуклеїновокислотна послідовність МІ -44-148-2 1.5 (5ЕО ІЮО Мо 5)
АтапвАСАСсалдсвсасссССАСсТСАаСсТастассастостаєтасттаастосСсАдаатассСА авАТатассТтАТаАТАТаАСССАсаАСсТоСсА,асстотатавАасатаастатаасАсасСАСАатТСАС
САТСАДОа ТаССАСсасСсАаатоАсСАаСАТТАаТтТААСТааттАаасСстасТАТСАаСАСАААССАСОС
САаТСсТоССААдассссСтаАТСТАСАаааСАТСОСАСТСОТОСИаСАТСОТОСОССТОоТСАТСЯССаСТТСА (510) саасосдатасАатстаасАСАСАааТТСАСТСТСАССАТСАСТОССОЯТОСАсСТатасСсаАТаста
ССАСТТАСТАСТаТСсАаСАСАСТТАТАСТААТААТСАТСТТаАТААТОСТ ПТТОоОСОаСВОСАСОИСАСо сгастаатаатСААА сатадтосАааттасАССТАСТаТоОСТСАТСТТСССАСсСсСАастастаАтоАа,сатассСААСтТас
ААСсСАатСсАССАТСОЯТОТатТатТасСосаААТАААТАСТТ ТОССЯаАТИатТСсАСсСатоАсСсТвааадаата адтаайСАССАСССАААСААСТаайСАТСПАСПААСАаТААААСАССаИсСсАСаААТТСТаСАСАТТИатА
ССТАСААССТСАаСАССАСТОТОАСАСТаАССАаСАСАСАСИТАСААСАаССАСААдАДа аа ТАСАС стасдасатадссСАаасасСАСоАсстсАатсатсСсАаАастТсААтТАаасасатадстаттАа
Амінокислотна послідовність МІ! -44-148-2 1 5 (ЗЕО ІЮО Мо 43)
МОТВАРТО СІ ПМ РОАВСАМОМТОТРАБМЕМАМОССИ ТУТІКСОАБОБІЗМУМ А МООКРО
ОБРКРИМВА5ТІ АБСОМ5ЗАЕНОЗОЗИаИТОЕТІ ТІЗВОМЕСАВВААТУУСООТУТММНІ Ома гацватЕММ
Ук
СОРМАРТМІЕРРААВОМАТатУМ ТІМСМАМКУЕРОМТ УТ ЕМрИаИаттОТттТаї!ємеКТРОМЗАОСТУМІ 5
ЗІ Т5ТОММЗНКЕУТСВУТОСТТЗУМОЗЕМНИОООС
Нуклеїновокислотна послідовність МІ -44-67-4 Н2 (ЗЕО ІЮ Мо 6)
АтаслалстасастасеастаастсотостастоастатастоСААдАасататоСсаата7атсдат ссатаздасаатосаса7аватасстаатАаСсасставаАСАССССтТаАСАСТоАССТасАСАС сстотТааАТоСаАСАТСАаТААСТАТаСААТАТСОСТОСОСТОСОЯССАСИ,аИСстТоСАсасАдасцаст ваААТТСАТСССОСАТАТАТТАИТТАТасСТААААаИТАТАТАСТАСЬСЯАССТАСИ,аСсСАААд,аассссат
ТСассСАТСТОССААААССТоСТоаАСсСАСсватасАТТацпАААТСАССАаСТОоСаАСААССадасА
САССЯаССАССТАТТТТТИТаССсАааАсАаспАтТАатасСтТАСТТАТАаТОСТААСТТатаасасаСССАС
ССсАссстТасатсАССатстосСтТСА сааСААССтТАдаасСсТоСАТСАИаТСТТоССсАСсТОССЮСЯСССССТаСТаССвСаваАСАСАСССАО,СТ
СсСсАСсастоАассставастасстаайТСАААдаасатАсстосСсачвч;ласСсАХатадссатадсстааА дстсавасСсАСССТоАССААТтТассватАасасасєстоссатосатоСсавСАатостАвасстотТА стсаеастадасаа,асатаастадасатаАССсТсАдаСАассаасСсСатсАССстТасСсААСЯТОаСССА
СССАасССАССААСАССАААДа тТасАСсАдалссатта,асассстоаАСАТтасАаСАдасссСАСИта
СсоСАСССССтТаААстТостТасовсавАсСаТтстТатсТТСсАТСТТССССССААДААСССААаалдсСАСс
СстТСАТаАТСТСАСОСАССсСсСсСсаАаатСсАСсАТтасатаатаатацАаСс,атаАяасСсСАаааАтТалсссс сАдасТаСАатТТСсАСАТаатТАСАТАААСААСал,СсАасвсатасасСАассассовассассастТАСас
Коо) сАдасАсСАатТСААСАасСсАСсадтосасатаатАасСАСССсТСССАтсаСаСАССАасАстас стадаааасСААласпАаТТсААаТасСАААаТССАСААСААдаасСАСстТоСааСССССАТССАИААА
АССАТСТОСААдДасСсСАааАдасасСАаасооєставлдасСсаААдаатСстТАСАССАТаавассстоСосва сласластадаСАаасСсАасатовсатсАаасстаАССстТасСсАТаАТСААСаасТСстТАСССТТССаАСА тотоватосдатасаАаААаАдАдСа,асалл,асСАаАааАСААСТАСААаАссАСсассвассатас зб тТааАСсАсСадсаасСТССтТАСТТОСТСТАСАаСААдастотсАатТаСССАСсОалатадатаасСАс,са саасаАдсатсттсАссТтастоСатаАдтТасСсАасаАааасстТасСАСААССАСТАСАСаСАаААатТос
АТСТОССОЯаСТоТоСасаТАААТИалд
Амінокислотна послідовність МІ -44-67-4 Н2 (5ЕО ІО Мо 44)
МЕТаГ ВУ/Л ЛІ МАМІ КОМОСОЗМЕЕЗОаВІ МТРОТРІ ТІ ТСТАБОаЗОІЇЗМУАІЗУМУУВОАРИКИЇ ЕЕ
ІСМІЗУаквІММАБУАКаИаВЕАІЗКТООТ ГМО ЕІТОРТТЕОТАТУЕСАВЕОЗАТУЗРМІ МС РОТІ МТУ
СОРКАРБЗМЕРІ АРСОСОаОТРУОБЗТУТ аСІ УКаМІ РЕРУТУГУМЗОаТІ ТМСОМАТЕРЗУНОБЗИЇ БІ 55
МУ5МУМТ5550РУТСММАНРАТМТКМОКТУМАРЗТОЗКРТСРРРЕ СОС РЗМУБРІЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМ
ТСУУМрУБОВОРЕМОЄПГУМІММЕОМАТАВРРІ ВЕСОЕЄЕМ5ТІВУМ5ТІ РІАНОВУМ ВЕКЕРКСКУНМК
АЇ РАРІЕКТІЗКАВИОРІ ЕРКУУТМОРРАЕЕЇ 558551. ТСМІМИЕМРБОІЗМЕМЕКМОаКАЄОМУКТТ
РАМ О5рав5зУРІ У5КІ БМРТЗЕМОВОаОМЕТСЗУМНЕАІЇ НМНУТОКВІЗАЗРИОК
Нуклеїновокислотна послідовність МІ -44-67-4 І 4 (БЕО ІЮО Мо 7)
АтапвАСАСсалдсвсасссСсСАСсТоАсСсТастассастостастастотаастосСсАдаатассСА вАТаТаССсСтТАТаАТАТОАСССАСАСТОСАЛССССТОТатасАаастАаастатаасцсАаасСАСАСТСАС
САТСААДОТИССАаСааССАсСТСАпАсаТАТТААСАССТАСТТАИаССТастАТСАаСАСАААССАСаИас
САаСсатоСсСААХастостадгтстТАСсАаасаасСАТССАСТСТаССАТСТОСОСаИаТСотТСАТСССИаТтТсСА
АдассХдатапвАатотаааАСАаАатТсАСТСТСАССАТСоАДасвасатаслататассаАтаста
ССАСТТАСТАСТаТСААСАсСОССИТТАТАИТТАТААТААТСТТОСАТССЯТОСТ ТСаСОССС,АСИасАСС сгастаатТаатТСАСА сатадтосАааттасАССТАСТаТоОСТСАТСТТСССАСсСсСАастастаАтоАа,сатассСААСтТас ААСАатСсАССАТСОСТОТОаТатаасСОаААТАААТАСТТТОССадтТаТатСсАасСсатсасстаасХАастТа вАТааСАССАСССАААСААСтТааСАТССАСААСАСТААААСАССасСАпААТТСТасСАСАТТаТтА
ССТАСААССТСАаСАССАСТОТОАСАСТаАССАаСАСАСАСИТАСААСАаССАСААдАДа аа ТАСАС стасСсАдаИатТалдссСсАасааСАСсаАсстАстсатосСАалдастСсААтТаасасатадстаттАа
Амінокислотна послідовність МІЇ -44-67-4 І 4 (ЗЕО ІЮО Мо 45) (510) МОТВАВАРТО СІ ПЛ УМ РОАВСАМОМТОТРАБМЕМАМОССИТМ ТІКСОАБОБІМТ МІ АМУМООКРОЮ
АРК МВА5ТІ АБСОІМ55АЕКазава ГЕЕТІ ТІЗИМЕСАВААТУМСООСУВУММІ ОВАгааатЕМУМ т
СОРМАРТМІЕРРААВОМАТатУМ ТІМСМАМКУЕРОМТ УТ ЕМрИаИаттОТттТаї!ємеКТРОМЗАОСТУМІ 5
ЗП Т5ТОММЗНКЕУТСКУТОСТТЗУМОЗЕМНООС
Приклад 3: Імуногістохімія з використанням анти-ССсС антитіла
Виявлення експресії ССС в моделях тсКсС ксенотрансплантатів пухлини людини
Аналіз ІНС з використанням антитіла МІ! -44-148-2 був розроблений для оцінки експресії
ОСС в ксенотрансплантатних пухлинах НЕК293-5СС і декількох ксенотрансплантатних вихідних людських пухлинах (РНТХ), отриманих із зразків метастатичного раку товстої і прямої кишки (ТтСКС) самок мишей СІЮ.
Рівні більа СС в зафіксованих формаліном і залитих парафіном (БЕРЕ) тканинах оцінювали на зрізах товщиною в 5 мкм і інкубували з антитілом МІ! -44-148-2 (3,5 мкг/мл) протягом 1 години на автоматизованому пристосуванні для забарвлення Мепіапа Медісаї
Зувівте (Тисб5оп, Ай) Оівсомегу ХТ?9. Антитіла біотінілірували з кролячим анти-козячим вторинним антитілом (Месіог Іарогайгіеє) і проявляли з 3,3'-діамінобексідіновою (ВАВ) субстратною системою з керуванням пам'яттю (Мепіапа Медіса! Зубіет5). Предметні скельця контрастно фарбували гематоксиліном і відобразили з використанням скануючої системи для цільних препаратів Арегіо.
Рівні ОСС значно відрізнялися серед цих пухлин за Н-оцінками (система підрахунку очок, описана нижче) від 44в пухлинних ксенотрансплантатах НЕК293-ОСС і від 1, 1-2, 2-6, 2-3чі 4-8 різних пухлинних ксенотрансплантатах РНТХ. В цілому, в пухлинах з помірно/добре диференційованими пухлинними клітинами, які зберегли поляризовану епітеліальну структуру,
ОСС зосереджена на стороні просвіту пухлинної тканини.
Виявлення експресії СС в зразках товстої кишки людини і пухлинних мікроматрицях
Антитіла МІ -44-148-2 і МІ -44-67-4, описані в даному документі, також були обрані в якості реагента для виявлення (СС ов протоколі ІНС, описаному вище, з використанням вищезазначених ксенотрансплантатів первинних людських пухлин (РНТХ), НТ29 і НЕК293 ОСС- трансфекованих клітинних пелет, на додаток до злоякісних і доброякісних зразків товстої кишки людини (ЕЕРЕ і пухлинні мікро-матриці (ТМА)).
Зо НТ-29 ії НЕК293 сСсС-трансфековані клітинні пелети офарбилися як і очікувалося. РНТХ продемонстрували широкий спектр інтенсивності забарвлення з клонами МІ -44-148-2 і МІЇ -44- 67-4. 1 МІ -44-148-2, і МІ -44-67-4 офарблювалися позитивно в добре чи в міру диференційованих карциномах товстої кишки іп 5йи або метастазах. Погано диференційовані пухлини офарблювалися менш інтенсивно. Нормальні тканини товстої кишки демонстрували позитивне апікальне фарбування з використанням антитіл, продукованих субклонами МІ! -44- 148-2 і МІС-44-67-4.
Антитіла із субклонів МІ -44-148-2 і МІ -44-67-4 забезпечили очевидно виражене інтенсивне і специфічне забарвлення в єСС-трансфекованих НЕК293 клітинах і клітинах НТ29, без будь- якого неспецифічного фарбування в батьківських клітинних лініях НЕК293 і НТ29. Обидва клона також позитивно офарбилися в добре чи в міру диференційованих карциномах товстої кишки іп 5йи або метастазах. Менш інтенсивне фарбування спостерігалося для обох субклонів в погано диференційованих карциномах. Нормальна товста кишка демонструвала позитивне апікальне фарбування для обох клонів, як і очікувалося. МІ! -44-1448-2 продемонстрував в цілому більш високу чутливість і специфічність, ніж МІ -44-67-4 в ІНС. Тоді як МІГ-44-67-4 продемонстрував найкращий динамічний діапазон, ніж Мі! -44-148-2, в клітинних пелетах, Мі -44-148-2 продемонстрував вищий ступінь динамічного діапазону, ніж МІ-44-67-4, в ТМА. В цілому, МІГ- 44-148-2 субклон показав перевагу над МіІ/-67-4, демонструючи більш високу чутливість і специфічність в ІНС і повний динамічний діапазон в ТМА і інтенсивне забарвлення (12 оцінка
ІНС) в нормальній товстій кишці при низькій концентрації.
Виходячи з результатів вихідних експериментів ІНС, описаних вище, субклон МІ! -44-148-2 був обраний для розробки та перевірки автоматизованого протоколу, еквівалентного протоколу
ІНС, описаного вище, з використанням автоматизованого пристосування для фарбування Тек-
Маїе. Автоматизований ІНС аналіз є корисним інструментом для скринінгу онкологічних пацієнтів з зСС-експресуючими пухлинами як критерій відбору для клінічних випробувань лікарських засобів, націлених на зСС-експресуючий рак, і в цілому як інструмент скринінгу пацієнтів (наприклад, ракових пацієнтів), які повинні отримати ССС-націлену терапію.
Протокол ІНС, представлений у Таблиці 18, був розроблений для виявлення СС в людських клітинах ЕРРЕ і тканинах, і близько 53 пухлини товстої і прямої кишки і 20 нормальних тканин товстої кишки, а також 2 ТМА раку товстої кишки (придбані у О5 Віотах) були обстежені бо з приводу експресії ОСС. Ці пухлини охоплюють широке коло ступенів злоякісності пухлини, а також метастазних тканин раку товстої кишки.
Чотирьохмікронні зрізи були отримані з різних зразків тканини. Зрізи тканин депарафінізували за допомогою 4,5-хвилинних замін ксилолу з подальшими серіями зниження концентрації спирту до дистильованої води. Індуковане паром відновлення епітопу (ЗНІЕК) використовували з розчином ЗНІЕК2 протягом 20 хвилин в капілярному зазорі верхньої камери парової установки ВіаскК апа ОескКег.
Таблиця 18А
Процедура ІНС 11116. |ОАВСпотодеп-Зх5Охвилинкожний.///://ОС1С
Таблиця 188
Специфікація реактивності антитіла
Фахівцю в даній галузі техніки повинно бути зрозуміло, що енхансер вихідного антитіла може бути анти-кролячим вторинним антитілом, індукованим в інших видах, відмінних від кролика (наприклад, людині, щурах, козах, мишах і т.д.), які мають той же ізотип, що і кролячі тА МІ -44 -148-2 або МІ -44-67 (кролячий ІдсС), або аналогічним реагентом, придатним для посилення сигналу МІ! -44.
Зазначений вище протокол використовував інкубацію антитіла МІ -44-148-2 в концентрації 1,0 мкг/мл протягом ночі з пероксидазним виявленням без біотину (набір ОКгамівзіоп від
Тпепто/Лар Мізіоп) і з САВ в якості хромогену. Ця процедура повністю автоматизована з використанням ТеспМаїє 500 або ТеспМаїе 1000 (Коспе біадпобвіїс5). Після фарбування препаративні скельця зневоднювали за допомогою серійних розведень етанолу до абсолютного спирту з наступним полосканням в ксилолі. Препаративні скельця постійно були закриті покривними скельцями і Суїозеаї. Предметні скельця досліджували під мікроскопом для оцінки фарбування. Про позитивне фарбування свідчить наявність коричневого (САВ-НЕР) продукту реакції. Гематоксилінове контрастне фарбування дає блакитний ядерний барвник для оцінки морфології клітин і тканин.
За оцінкою фарбування СС було визначено, що Н-оцінний підхід буде найкращим підходом для кількісного визначення експресії 5СС. Н-оцінний підхід забезпечує оптимальне розширення даних для визначення відмінності в інтенсивності фарбування і пухлинного процентного вмісту фарбування в межах пухлинного типу і серед типів пухлин. Він також забезпечує хороший інструмент для визначення порогових значень позитивного фарбування. В бо цьому методі передбачений відсоток клітин (0-100) в пухлині з інтенсивністю забарвлення в діапазоні від 0-3. В теперішньому методі були передбачені показники з інтенсивністю 0, 0,5, 1, 2 і 3. В залежності від маркера, 0,5 фарбування може оцінюватися як позитивне або негативне і відбиває світло, але помітне фарбування для маркера. Щоб отримати Н-оцінку, відсоток пухлинних клітин множиться на кожну інтенсивність і підсумовується:
Н-оцінка - (956 пухлини"1) ї(9о пухлини"2) ї(9о пухлини"3). Наприклад, якщо пухлина на 2090 негативна (0), то 3095 -1, 1095 2, 4095 3, що дало б Н-оцінку 170.
Максимальна Н-оцінка становить 300 (10095 7 -3) для субклітинної локалізації (тобто, апікальної або цитоплазматичної), якщо 10095 пухлинних клітин мітять з інтенсивністю 3 жк.
Спочатку, в якості контролю для порівняння зразків не використовували лише одну загальну Н- оцінку, але оцінювали на додаток до огляду недійсного відсотка клітин в кожній інтенсивності.
Наприклад, показник 90 може представляти 9095 пухлинних клітин, забарвлених з 1інтенсивністю, або 3095 клітин з Зінтенсивністю. Ці зразки мають однакову Н-оцінку, але сильно відрізняються за експресією (СС. Відсоток клітин, підрахований при кожній інтенсивності, може варіювати, але, як правило, зараховується з кроком в 10905; тим не менш, невеликий відсоток підрахунку одного компонента може оцінюватися при 195 і 595 також для того, щоб продемонструвати, що присутній деякий рівень фарбування. Для ОСС апікальне фарбування може розглядатися для оцінки з низькорівневим кроком, таким як 1 і 595.
Дві різні субклітинні локалізації оцінювали по ССС за допомогою Н-оціночного підходу. Вони включали цитоплазматичне фарбування та оапікальне асоційоване фарбування.
Цитоплазматичний зразок фарбування спостерігався в основному в якості дифузного по всій цитоплазмі пухлинних клітин. Проте в деяких випадках були варіанти фарбування цитоплазми, які включали інтенсивне глобулярне фарбування або точкове, крупнозернисте фарбування.
Інтенсивне глобулярне фарбування оцінювали як Зяцитоплазматичне фарбування. Точкове фарбування було пов'язано з апікальним фарбуванням, і не була дана окрема оцінка для цього типу цитоплазматичного фарбування (М - 4 зразка для точкового фарбування). ССС -апікальне фарбування спостерігалося, коли був присутній просвіт. Інші спостережувані зразки фарбування СС включали мембраноподібне, безпросвітне фарбування (один випадок), а позаклітинне фарбування було присутнє в пухлинному просвіті. В нормальних тканинах товстої
Зо кишки фарбування в цілому було апікальним поряд з дифузним цитоплазматичним фарбуванням.
Оскільки показники Н були отримані як для цитоплазматичної, так і для апікальної експресії
ССС, і оскільки не відомо, чи один тип локалізації є більш важливим в порівнянні з іншим для ефективності ЗСС-націленої терапії, то були взяті всі дані і в деяких випадках отримували сукупний показник Н, використовуючи суму як апікальної, так і цитоплазматичної експресії ССС.
В таких випадках максимальний показник Н становив 600 для суми двох оцінок (300 апікальної -300 цитоплазматичної).
В цілому, фарбування в зразках нормальної товстої кишки показало, що СС анатомічно привілейована, коли експресується на апікальній поверхні. СС експресувалася на більш ніж 9595 пухлинних зразків і, на відміну від нормальної тканини, продемонструвала дифузне цитоплазматичне фарбування в деяких випадках. Сильне фокусне ОСС-фарбування в зразках
СКС печінкових метастазів людини, також спостерігалося.
Таблиця 19А демонструє результати Н-оцінки апікального і цитоплазматичного фарбування відібраних нормальних і пухлинних тканин. Дані, показані в Таблиці 19А, розбиті відповідно за походженням зразка (внутрішній (позначений як МІ ММ), ТМА (позначений як ВІОМАХ) і СКО (позначений як ОцаїІТек)) і ступеня диференціювання пухлини. Сумарні дані позитивності забезпечуються при використанні порогів інтенсивності фарбування 0,5 і 1,0. В цілому було оцінено 173 зразка пухлини. При використанні порогового значення 0,5-для позитивної інтенсивності фарбування для кожного цитоплазматичного або апікального фарбування 95965 пухлин вважаються позитивними. При використанні порогового значення 1,0-9290 зразків вважаються позитивними.
Джерело тканин показує зміну в процентах позитивних пухлинних клітин, а також Н- показник. Для 1-«-порога позитивності фарбування діапазон становить від 8495 (СКО пухлинних
МТВ зразків) до 10095 (внутрішніх зразків або СКО зразків однієї тканини - зазначають меншу кількість зразків в цих групах). Внутрішні пухлинні тканини продемонстрували дуже високу Н- оцінку, складову 253 (п-9 зразків). Були також відмінності в результатах оцінки 2 ТМА. 05
Віотах ТМА С0992 забарвлювалося більш сильно, ніж СО701. Без наміру бути пов'язаним з будь якою теорією, відмінність у ТМА може через різницю з фіксацією з джерелом тканини або через те, що один блок можна було б скоротити пізніше, ніж інший. бо Розглядалися стабільність антигену в вирізаному зрізі і свіжість зрізаних зразків. Зразки, що вивчаються в невідкладному дослідженні, включали зразки, які були вирізані і зберігалися, а також свіжовирізані зразки, вказуючи на необхідність подальших досліджень стабільності зразків тканини з часом.
Деякі відмінності спостерігалися в зСсС-позитивності і ступеня злоякісності пухлини (дивись
Таблицю 198), з великим позитивним фарбуванням, пов'язаним з добре диференційованими пухлинами в порівнянні з низкодиференційованими пухлинами (шість пухлин з О5 Віотах не включають ступінь). Пухлини 1-го ступеня (п-20) показали 10095 позитивність; пухлини 2-го ступеня (п--95) мітились в 9895 позитивних випадках; пухлини 3-го ступеня (п-44) мітились при показнику позитивності 8895. Погано диференційовані пухлини зазвичай не мають просвіту, що може пояснити деякі з цього зниження фарбування через відсутність апікального фарбування.
Цей відсоток позитивності заснований на пороговому значенні інтенсивності фарбування 0,5'к.
Сім з 7 дальніх метастазів були позитивними (з внутрішніх і тканин СКО). Метастатичні пухлини від О5 Віотах ТМА були перераховані як метастази в лімфатичні вузли.
В цілому, ОСС забарвлює дуже високий відсоток пухлин товстої кишки і тканин нормальної товстої кишки, незалежно від джерела тканини або ступеня диференціювання пухлини.
Таблиця 19А
Зведена інформація про фарбування раку товстої кишки за джерелами зразка 000 | загапьна 00 кількість познтявних зразків 000 | середня Ноцінка) б товстокишкові СА зразки 0001 кількість | ббей більш фо ай більш 0000 ша 000 ШИ ши ЗИ ЕТ С: ЕС: намахсювовихх 00000000011111116|116ар их 6 Є лаз есьою 173), 164) БМ) 160) 92м) 102). 158)
Таблиця 198
Зведена інформація про фарбування раку товстої кишки за ступенем злоякісності пухлини
ОЇ лькістьо | загально | 5-5 00001100 зразкисловстоїкишки о 000 | Шо в На а сСппньї С юїго 10055 стві СС: 9Я БО
Точність паралельних визначень (СС в аналізі ІНС оцінювали в одному підході з використанням 5 повторів кожної з трьох клітинних пелет і 14 різних тканин карциноми товстої кишки. Клітинні пелети готували на окремих предметних скельцях. Зразки пухлини товстої кишки помістили в два різних мультипухлинних блоки. Ці тканини оцінювали з приводу реактивності ССС в ІНС.
Точність фарбування клітинних пелет: майже ідентичне фарбування спостерігалося у всіх 5 внутрішньосерійних повторах З клітинних пелет.
Точність фарбування зразків пухлини товстої кишки: дуже схоже на майже ідентичне фарбування спостерігалося серед 5 внутрішньосерійних повторів 14 зразків пухлини товстої кишки. Зразки оцінював сертифікований патологоанатом з використанням Н-показника, як описано раніше. Стандартне відхилення показало, що у всіх випадках розкид був мінімальним,
Зо тим самим демонструючи підходящу точність фарбування в одній серії. В цілому,
спостерігалося повністю узгоджене внутрішньосерійне СС ІНС фарбування клітинної пелети і досліджуваних зразків карциноми товстої кишки.
Міжсерійну мінливість і варіативність аналізу в зв'язку з різними операторами оцінювали в 5 окремих серіях ОСС ІНС фарбування. Чотири серії проводилися в різні дні одним оператором, а другий оператор проводив п'яту серію. Фарбування включало тестування тих же тканин, що і в тестуванні точності, описаному вище.
Відтворюваність фарбування клітинних пелет: майже ідентичне фарбування спостерігалося у всіх 5 внутрішньосерійних повторностях З клітинних пелет.
Відтворюваність фарбування зразків пухлини товстої кишки: дуже схоже на майже ідентичне фарбування спостерігалося серед 5 міжсерійних повторів 14 зразків пухлини товстої кишки.
Зразки оцінював сертифікований патологоанатом з використанням Н-показника, як описано раніше. Стандартне відхилення показало, що у всіх випадках розкид був мінімальним, тим самим демонструючи підходящу відтворюваність фарбування день у день і з іншим оператором. В цілому, спостерігалося повністю узгоджене міжсерійне і незалежне від оператора
ОСС ІНС фарбування клітинної пелети і досліджуваних зразків карциноми товстої кишки.
Специфічність СС ІНС аналізу оцінювали шляхом дослідження панелі нормальних людських тканин. Ці нормальні людські тканини включали 30 різних типів тканин: наднирників, сечового міхура, кісткового мозку, молочної залози, кори головного мозку, шийки матки, фаллопієвих труб, серця, нирки, печінки, легенів, лімфатичних вузлів, нервів, яєчників, підшлункової залози, привушної (слинної залози), гіпофіза, плаценти, передміхурової залози, скелетних м'язів, шкіри, спинного мозку, селезінки, шлунку, насінників, тимуса, щитовидної залози, мигдаликів, сечоводу і матки. Для кожного типу тканини щонайменше З унікальних екземпляри були пофарбовані та оцінені з приводу імунореактивності СС.
В цілому, як було показано за допомогою аналізу ІНС, описаного в даному документі, аналіз
ОСС ІНС з використанням антитіла МІ -44-148-2 був найвищою мірою специфічним для зразків пухлини товстої кишки у порівнянні з фарбуванням нормальних тканин, особливо апікальним фарбуванням. Апікальне фарбування було виявлено тільки в 2 зразках шлунку; однак це фарбування спостерігалося також в негативному контролі. Цитоплазматичне фарбування, зазвичай світле, спостерігалося в декількох типах тканин, включаючи фолікулу (1 з З зразків),
Зо шкіру (фолікула і дерма, 2 з З зразків), парієтальні клітини шлунку (2 з З зразків), залозистий епітелій передміхурової залози (світле в З з З випадків), гіпофіз (2 з З випадків), епітелій матки (З з З випадків), епітелій маткових труб (2 з З випадків), трофобласта плаценти (світле в 2 з З випадків) і легені (ендотелій в З з З випадків і епітелій бронхіол в 1 з З випадків). Найсильніше цитоплазматичне фарбування (2 ж) було присутнє в одному випадку маткової труби і в одному випадку гіпофіза. В обох випадках спостерігалося більш світле фарбування в тих же відсіках в негативному контролі. Плазматичні клітини були позитивними в ряді тканин, у тому числі селезінки, мигдалин і лімфатичному вузлі. Гістіоцити були позитивними в селезінці, легенях і лімфатичному вузлі. Стромальне фарбування було присутнє в яєчках (2 з З випадків), матці (З з
З випадків) і яєчниках (1 з З випадків). Позаклітинне фарбування кровоносних судин спостерігалося повсюдно і виникало без специфічного зв'язування сироватки.
Аналіз (СС з використанням кролячого моноклонального антитіла, Мі -44-148-2, фарбування на платформі ТеспМаїгїе показує послідовне між-і внутрішньосерійне фарбування пухлин і контрольних клітинних пелет. Аналіз ЗСС визначається вельми чутливим в карциномі товстої кишки, так як забарвлює переважну більшість досліджуваних зразків пухлини товстої кишки. Аналіз СС представляється набагато більш специфічним для пухлин товстої кишки у порівнянні з нормальними тканинами. Експресія СС, спостережувана в багатьох пухлинах товстої кишки, є сильнішою, ніж будь-яке фарбування, спостережуване на панелі 30 нормальних тканин з, щонайменше, З повтореннями кожного типу тканини. Не було виявлено апікального фарбування ССС в якій-небудь нормальній тканині, тоді як апікальне фарбування є звичайним у більшості зразків СС. Тільки цитоплазматичне фарбування спостерігається в деяких типах нормальних тканин і це фарбування, як правило, є світлим. Антитіло МІЇ -44-148-2 представляється відтвореним, чутливим і відносно специфічним ІНС-маркером для фарбування зафіксованих формаліном, залитих парафіном (ЕЕРЕ) пухлин товстої кишки.
Приклад 4: Додаткова імуногістохімія в неколоректальних РНТХ моделях і пухлинних мікрочипах і колоректальні і неколоректальні людські клінічні зразки
Автоматизований ІНС аналіз, описаний в Прикладі 3, був використаний для оцінки експресії
ССС (тобто, апікальної, цитоплазматичної та/або агрегованої експресії СС) в різних неколоректальних зразках з різних джерел, включаючи ксенотрансплантати вихідних людських пухлин (РНТХ), отриманих із зразків шлункового раку і раку підшлункової залози самок мишей бо ЗСІО і різних пухлинних мікрочипів (ТМА5), придбаних у 05 ВіоМах, Рапіотіс5 та інших комерційних джерел), специфічні для раку підшлункової залози, шлункового раку, раку стравоходу, раку легенів лейоміосаркоми/рабдоміосаркоми. Експресію СС також оцінювали за допомогою автоматизованого ІНС аналізу, описаного в Прикладі 3, в різних людських клінічних зразках, включаючи зразки пухлин шлунку, підшлункової залози та стравоходу, отримані з бази даних тканин, спецпродукт СКО (ОчаІТек), що займається запуском автоматизованого ІНС аналізу, рак товстої і прямої кишки, шлунковий рак, рак підшлункової залози, рак стравоходу та рак тонкої кишки, отримані від ракових пацієнтів, досліджених з приводу експресії СС перед зарахуванням у відкрите багатоцентрове з ескалацією доз вперше на людині дослідження 5СС- націленого кон'югату антитіла-лікарського засобу, позначеного як МІ МО264, у дорослих пацієнтів з розвиненими шлунково-кишковими злоякісними хворобами, що експресують гуанілілциклазу С (5ійцау С26001, СііпісаІ ТгіаІ5.дом ідепійег МСТО157 7758).
Результати ІНС фарбування різних нормальних і ракових зразків колоректальних тканин і неколоректальних тканин (шлункових, панкреатичних, тонкокишечних, стравохідних, легеневих, рабдоміосаркомних, лейоміосаркомних) з різних джерел (РНТХ, людських клінічних зразків і пухлинних мікрочипів) представлені в Таблицях 20-32 нижче. Таблиці 20-32 включають показники ІНС (0, 0,5, 1, 2 жі 3-5) і відповідні Н-показники, розраховані, виходячи з показників
ІЇНС для апікального ("А") і цитоплазматичного ("Сб" або "цито" фарбування СС в різних досліджуваних тканинах. Крім того, Таблиця 32 ілюструє порівняння ІНС даних експресії СС в людських клінічних зразках первинного і метастатичного раку, в кожному випадку отриманих від одного і того ж пацієнта. Як показано в першій лівій колонці, зразки "А" (тобто, ТА, 2А, ЗА, 4А,
БА, бА, 7А, 8А, 9А 10А і так далі), відносяться до зразків первинної пухлини, тоді як зразки "В "(тобто, 18, 28, ЗВ, 48, 58, 68, 7В, 88, 9В, 108 і так далі) відносяться до зразків метастазуючої пухлини, отриманим від того ж пацієнта, у якого були взяті зразки первинної пухлини (відповідний зразок "А"). В інших випадках, позначення "ТА" і "1В" відносяться до первинної та метастатичної пухлини, відповідно, отриманої від того ж самого пацієнта; позначення "2А" і "2в" відносяться до первинної та метастатичної пухлини, відповідно, отриманої від іншого пацієнта і так далі. Більшість зразків пухлини, показаних в Таблиці 32, були отримані від пацієнтів, що мають первинний і метастатичний рак товстої і прямої кишки, крім випадків, коли вказано інше, відбите в колонці "Коментарі", в цьому випадку вказаний певний тип неканцерогенної товстої і
Зо прямої кишки. Як видно в колонці "Коментарі" в Таблиці 32, деякі зразки нейроендокринних пухлин, нирковоклітинної карциноми, шлункових пухлин, шлункової І5Т, панкреатичних пухлин і маткової лейоміосаркоми також були досліджені з приводу експресії 5СС за допомогою аналізу ІНС.
Таблиця 20
ІНС аналіз в моделях РНТХ раку шлунку людини
ОСС апікальне і цитоплазматичне фарбування (відсоток)
Мо зразка | Тип зразка оцінка | оцінка
Шлунковий СА злгогз рота 0001721 111 рої во | во
Шлунковий СА слесов | енотають | (010190) /5| 5) |в) о
Шлунковий СА зовн 1111251. 1511 Гері,
Шлунковий СА слкотя сротаня 0 80 || | | 10
Шлунковий СА слеотв | сенотанст: | (0 о || 111150
Шлунковий СА слеоет едотантя | 01011111
Шлунковий СА сля сротанят 0 о | І 1 11111910
Шлунковий СА сделво | енотансть | 00111111
Шлунковий СА слесів | едотант | (10000160) 00120 во) мо ою
Шлунковий СА осінні 11115121 |5 рю |з
САЕЛБІ|ШлункювийсА | 50 | 50| 501 1 1 1 1201 1191 25 | по
Таблиця 20
ІНС аналіз в моделях РНТХ раку шлунку людини
ОСС апікальне і цитоплазматичне фарбування (відсоток)
Мо зразка | Тип зразка ї роу д оцінка | оцінка 0111111 ФКсенотванспл.ї 7/1 ЇЇ Її
Шлунковий СА само сснотанял | (01501 я || | | о
Шлунковий СА самої сонотенля 10 110 11111111
Шлунковий СА само енотанть | (0 ово о
Шлунковий СА самоз: | сснотанял | ||| 1111115 о
Шлунковий СА занос |»|» 1») | 1» |»| 5 т
Шлунковий СА самост енотанть | 010111
Шлунковий СА самово | сснотшанят 010! 11111111
Шлунковий СА законне 17115) |5151 |»| т тв
Шлунковий СА самояе сонотанль | 001501 || 1115 о
Шлунковий СА зно 1111» 19 юю сю| зо
Шлунковий СА самого сонотанль | 001201 || 111 о
Шлунковий СА
Шлунковий СА само сенотансть | оо лою 5 о
Шлунковий СА злмон|(штненся |в)» 1») | 1» || 5 тв
Шлунковий СА само сонотаняль | 001501 || 115 о
Шлунковий СА вамете денотат | (91110060) | о о
Шлунковий СА сама соротанял 0110 11111111
Шлунковий СА саме | сенотант | ||| | 101 | | | | 5
Таблиця 21
Модель РНТУХ раку підшлункової залози людини . . пОоЗзИит. Фо Фо
Мо тип пухлини Апікальне і пит відс фарбування / пози! пози! н Н зразка У д НЕГАТ. | Т. т. ос |оА|1-С|1А|2С|25А|ЗСІЗАЇ 7/7 Цито |Апікал| Цито (Апікалі 417 |Шлунковий.ї | |40Щ|7100120| |20| |го|позит.| 100 | 60 | 100 | 120 118 |Панкреатичний| |100|50 1|40| |т0| |позит.| 100 о | т60| о 119 |Панкреатичнийї |50| /50|60| |40| (|позит. 120 (Шлуковий |30|701/70/30| | / | |позит. 121 |Панкреатичний| 20| 2080 70| |тл0| | |позит.| 80 | во | во | 90 122 |Панкреатичнийї | | /501|50|50Щ|50| (|позИит. 123 |Шлувковий.ї | |100| / |50Ї| |50| |позит.| 100 о | 250| о 124 |Панкреатичний| 30 | 80 | 50 10|20|т10| | |позит.| 70 | го | 90 | зо 125 Панкреатичнийї | | /20|501| 50 50 | 30 | ПОЗИТ. 126 |Панкреатичний| |50Щ|80/20|20|20| |ло|позит.| 100 | 50 | 120 | 90 (127 |Панкреатичний| 6ОЇ |501 | |20| | во|позит.
Таблиця 21
Модель РНТУХ раку підшлункової залози людини й й поЗзИит. Фо Фо
Мо тип пухлини Апікальне і пит відс фарбування пози пози зразка У д НЕГАТ. | Т. т. оС | оА|1-С|ї1зА|2-С|23А|З3С|З3А|Ї 7 | Цито |Апікалу Цито |Апікалі 128 Панкреатичнийїї | /|201 2 Щ|40| 40 |/100|позит. 129 Панкреатичний)| 50 |100/150| | | | | |позит.| 50 о | 50 | о 130 /Панкреатичнийї |80180|20|20| | | позит. 131 /Панкреатичний!ї, | | | (501 |50/|чт00|позит. 132 Панкреатичний| |30 120 | 30 | 40 | зо | 40 | 10 | позит. 133 /Панкреатичний|100|100| | | | / | |НЕГАТ.| 0 | 0 | о | о 134 Панкреатичний| | /40/|40 40 | 40 | го | го | позит. 135 Панкреатичний| |70170|20|30|1710| | позит. 136 /Панкреатичний! |301| |з0|100|30| | чо |позит. 137 Панкреатичнийї | | / |701| 50) 30 | 50 | ПОЗИТ. 138 Панкреатичний| | 0 11001 | | | | |позит.| лоо о | л00| о 139 Панкреатичний! | /50140|50|30| | зо |позит. 140 Панкреатичний! |5011001501 | | | позит. 141 Панкреатичний/ 30/40 140 | 30 30|30| | |позит.| 70 / во | 100 | 90 142 Панкреатичний| |100/30| Щ|70| / | |позит.| лоо| о | 170| о 143 Панкреатичний| |30/| |з0)|50| го | 50 | го | позит. 144 | Панкреатичний! /|20150120150|20| |40|позит.| 100 80 | 150 | 180 (145 |Панкреатичнийї | /40| |з30| | зо |чо00|позит.
Таблиця 22А
Гістохімічне фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА) 05 Віотах Р1921
Апікальне і цитоплазматичне фарбування пози по. то ПО- нін (відсоток) І зит ЗИт.
Поло І и Стать Патологія сте: ОС | ОА |14С | 1ЖА | 2нС | 25А | ЗЄС | 35А | НЕГАТ. ІЦито | Апікал |Цито пої чіпа
Протокова аденокарцинома
А1|48| Ж | (хроніч. 1001100 НЕГАТ. запалення панкреат. тканин) лг|и| ж деюареюв| "| | | | 1 І | 1 ЇЇ 1 аденокарцинома
Ази з | денокадшюма| 1 0 | | 10 |юорпозит о | мо | о |воб аденокарцинома ле|е| Ж адороарциюма| ! о|о| | | | | него ооо аденокарцинома
Ав | Ж деюареюа| "| | | | 1 І 1 11711 аденокарцинома
Ає|5| ж здоюарюма| "1 | | ЇЇ 1 1 ЇЇ аденокарцинома
Атфю ж | донокадиюма| 2 | 180 || | юорпозит|тоо| оо | 170 |вос аденокарцинома лев) Ж адороарциюма| 2 о|о| | | | | нет о ооо аденокарцинома ле |е| Ж одороарциюма| ! М0|0| | | | | него ооо аденокарцинома
Протокова
АТО (41 Ж |аденокарцинома 1 100 | 100 НЕГАТ. (рідко) аи|5| з зденоареюма| 1 |10| | | | || |во|позит| о | мо| о (ово аденокарцинома
Таблиця 22А
Гістохімічне фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА) 05 Віотах Р1921
О5Віотах РА1921 Панкреатичний ТМА - й Чо
Апікальне і цитоплазматичне фарбування позит/ по- то ПО- нін (відсоток) зит ЗИт.
Поло "жен: Стать Патологія Сте-| об |) од |49С Я5А | ос очА | ЗС | ЗзА | НЕГАТ. Цито|Апікал |Цито Апі- ня пінь кал чіпа мг|е| Ж адороарциюма| 1 М0|0| | | | | него ооо аденокарцинома
Протокова
А13147| Ж |аденокарцинома 1 (рідко)
Протокова «|| ох аденоарциюма| 1 | 50| 1050150 || | о|позит)5о во | во тво
Протокова (о) Ж здоноареюма| 11 | 18301 79) | | юо|позит
Протокова лте|Бе ж | денокаднома| 2 оо | 1 | нет о) о о | о
Протокова ов'бри| Ж адороарциюма| 2 о|о| | | | | него ооо
Протокова овг|5| ч здоноарциюма| 2 | 80|80|20|20 | | | Цпозит
Протокова овоЩюо оч о денокаднома| 1 90|80 ою) || зпозит ве | з адероарциюма| ! о|о| | | | | него ооо аденокарцинома ве) з здороарциюма| 2 0 |0| | | | | него ооо аденокарцинома
Протокова ове/5| з здороарциюма| 2 0 |0| | | | | него ооо
Протокова овфее ж |донокаднома| 1 0) 8о| | тю | Цпозт|о| о. о
Протокова ове(в| Ж адороарциюма| 2 о|о| | | | | нет о ооо ове(5| Ж здороарциюма| 2 0| 850! | | | | Цпозт)о ю|о о аденокарцинома
Протокова вто|5| ч зденоарциюма| 2 | 50| | 50180 | | | Цпозит
Протокова виЩ|юо з | оденокаднома| 1 50| 805020 00 зпозит вер чию ою! | 11 | 0 наго ооо арцинома виз|е| ч здороарциюма| 2 | 50|0|50| | | | Зпозит|во о |в о аденокарцинома
Протокова вт«|5| з зденоарциюма| 2 о|о| | | | | него ооо
Протокова ви|ее ж | денокаднома| 1 0|80| 20) | / | Цпозт)|о| о. о
Протокова
ВІ6|64| Ж |аденокарцинома 100 | 100 НЕГАТ. (рідко)
Протокова сфе Ж адороарциюма| 2 о|8о| | | | | Цпозт)о ю|о о ос2|в5| ч здороарциюма| 2 50| 8050120 | | | Цпозит аденокарцинома
Протокова осз|57| ч здоноарциюма| 2 0| 50! | | | | пози) во) во
Протокова се| з (есе ош 2| |5Ге|5| 111 тових
Протокова сер) з (оесшнош 2 | (ее 1011 реат
Протокова аденокарцинома( сб |43| Ж фіброжирова 100 | 100 НЕГАТ. тканина)
Таблиця 22А
Гістохімічне фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА) 05 Віотах Р1921
О5Віотах РА1921 Панкреатичний ТМА - й Чо
Апікальне і цитоплазматичне фарбування позит/ по- то ПО- нін (відсоток) зит ЗИт.
Поло "жен: Стать Патологія Сте-| об |) од |49С Я5А | ос очА | ЗС | ЗзА | НЕГАТ. Цито|Апікал |Цито Апі- ня пінь кал чіпа ост|57| з здероарциюма| 2 0 || | | || | Цпозит)о з|о во аденокарцинома
Протокова се) ч одороарциюма| ! М0|80| | | | | Цпозт)о го) ого
Протокова осе|67 ж | днокаднома| 2 00|80| 20) | / | (позт)|о| о. о
Протокова сто|ве| Ж здороарциюма| 2 80|50|20| 50 | | | Цпозит см|57| з зденоарциюма| 2 | 50| 8050120 | | | Цпозит аденокарцинома
Протокова сте|не| ч здоноарциюма| 2 | 50| 8050120 | | | Цпозит
Протокова сиз|тв з | денокаднома| 2 50|40| 5050) | | позит| во) во | во | 70
Протокова аденокарцинома( хронічне
Ст4|43| Ж запалення 10 | 10 пОЗИТт.| 10 10 10 170 фіброжирової тканини)
Протокова ств; з здеюариюм| 2 | | | 1111 111111 сте|е| з здороарциюма| 2 0 |0| | | | | него ооо аденокарцинома
Протокова оте) з зденоарциюма| 2 |20|80|20 | 20) го) чо |позит|тоо во | о тво ре) ж | донокаднома| 2 оо | | | нет о) о о | о аденокарцинома
Протокова оз) ч здороарциюма| 2 о|о| | | | | него ооо о«|55| ч здороарциюма| 2 0 |0| | | | | него ооо аденокарцинома
Протокова 0505) з здороарциюма| 2 0| 850! | | | | Цпозт)о ю|о о
Протокова аденокарцинома( 57| ч фіброжирова 100 | 100 пОЗИТт.| 100 100 тканина)
Протокова оте) з здоноарциюма| 2 о|о| | | | | него ооо
Протокова пев) з здороарциюма| 2 |М01| | | | Зпозит)мю о | о
Протокова опе|е З | днокаднома| 2 0010030) 80 | зо |позит|тоюо| во | то во
Протокова сто(те| Ж здороарциюма| 2 о|о| | | | | него ооо
Протокова ои|59| з зденоарциюма| 2 0| 80! | | | | Цпозт)о ю|о о
Протокова ст2|ве| ч здороарциюма| 2 0| 850! | | | | Цпозт)о ю|о о
Протокова стави З | денокаднома| 2 о || | | | нет о) о о | о
Протокова аденокарцинома( хронічне р14|57| ч запалення 100 | 100 НЕГАТ. фіброжирової тканини)
Таблиця 22А
Гістохімічне фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА) 05 Віотах Р1921
О5Віотах РА1921 Панкреатичний ТМА - й Чо
Апікальне і цитоплазматичне фарбування позит/ по- то ПО- нін (відсоток) зит ЗИт.
Поло "жен: Стать Патологія Сте-| об |) од |49С Я5А | ос очА | ЗС | ЗзА | НЕГАТ. Цито|Апікал |Цито Апі- ня пінь кал чіпа сте) з здороарциюма| 2 0 |0| | | | | него ооо аденокарцинома
Протокова сте|в| ч зденоарщеюма| 2 ||| | | | Цпозит
Протокова овбфБ7 з | оденокаднома| 2 50| 505050) 00 зпозит
Протокова
Е2 |72 ч аденокарцинома 50 50 | 10 поЗзит.| 50 10 50 |10 (рідко)
Протокова овоЇюе з | донокаднома| 2 0 50|40| 5030) 80 | позит| во) во | во | во
Протокова ове|55| ч здороарциюма| 2 | 50|00|50| | | | Зпозит)|во о |в о
Протокова аденокарцинома(
ЕБ |47| ч тканинапанкреати 100 | 100 поОЗзиИтТ.| 1001 100 |1001100 чного протоку ) ве) ч здоюариюм| 2 | | | 1111 11111 аденокарцинома ве) з здороарциюма| 2 о|о| | | | | него ооо аденокарцинома
Протокова він еюмнше| 1 ||» 15 | лов
Протокова ове|57 З | денокаднома| 2 | 50| 805020 00 позит
Протокова по|те| ч здероарциюма| 2 50| 050130 | | | Цпозит м|е| з здеюардеюв| 2 | | | 11 1 11111 аденокарцинома
Протокова г|5| ч здоноарциюма| 2 о|о| | | | | него ооо
Протокова з|е" з | денокаднома| 2 | 50| 505050) 00 зпозит з здеюардиюм| 2 | | | 111 1 111111 аденокарцинома
Протокова
Е15159 ч аденокарцинома | 2 | 100| 100 НЕГАТ. (рідко) е|| з здеюардию| "| | | | 111 1 111111 аденокарцинома
Протокова еі| з зденоарцеюма| 2 о|о| | | | | него ооо
Протокова ефе ж | донокаднома| 2 800! 0 | | | позт)|ю| о || о
Протокова оге|| ч здороарциюма| 2 ||| ю | | | Дпозит з здороарциюма| 1 80! 2/7 || / о |позит аденокарцинома
Протокова іх зденоарцеюма| 2 о|о| | | | | него ооо
Протокова вет ж |денокаднома| 2 50|80 5010) 00 зпозит
Протокова ін Ж адеоарциюма| 2 5о|о|5о| || | | Зпозит)|во о |в о і) ч здооарциюма| 2 80! 2/7 || | Цпозит аденокарцинома
Протокова ч зденоареюма| 2 | 50| ||| | | | Цпозит
Таблиця 22А
Гістохімічне фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА) 05 Віотах Р1921
О5Віотах РА1921 Панкреатичний ТМА - - Чо
Апікальне і цитоплазматичне фарбування позит/ по- то ПО- нін (відсоток) ЗИт.
ЗИТт.
Поло "жен: Стать Патологія Сте-| об |) од |49С Я5А | ос очА | ЗС | ЗзА | НЕГАТ. Цито|Апікал |Цито Апі- ня пінь кал чіпа о(е| Ж здороарциюма| 2 о|0| | | | | него ооо аденокарцинома
Протокова ифе| з зденоарцеюма| 2 | 7|80| 20|5| | Цпозит|тю зо |і во
Протокова пере оч | денокаднома| 2 | 1603020 30) | чо |позит
Протокова зе Ж адероарциюма| 2 о|о| | | | | него ооо «|е| Ж адороарциюма| 2 0|80|5о| лю | | | Цпозит аденокарцинома
Протокова е5ри| Ж зденоарцеюма| 2 | 50|0|5о| | | | Зпозит)во о |в о
Протокова тер| з (ою ше 2|5|5|5|5| || | ес | тю
Протокова з здероарциюма| 2 о|о| | | | | него ооо осг|е| Ж здороарциюма| 2 0|0| | | | | него ооо аденокарцинома
Протокова рю еооше| 2 ю|ю|ю|ю | | лет
Протокова сеТи з | денокаднома| 2 50|80 5010) | зпозит
Протокова оов|ее| Ж здороарциюма| 2 | 50|00|50| | | | Зпозит)|во о |в о
Протокова аб 152 ч аденокарцинома 50 |100| 50 поЗзит.| 50 50 (рідко) з некрозом ое7|5| Ж адероарциюма| 2 (ор! | | | пози аденокарцинома
Протокова сет) Ж здороарцеюма| 2 |20|80| 50 20|80| | позит|тоо во | 120 го
Протокова семи оч | донокаднома| 2 0 || | | | нет о) о о | о
Протокова сто|е| Ж здороарциюма| 2 | 50|00|50| | | | Зпозит)|во о |в о спрю хо оо ше| 2 |ю|ю|ю | | лет аденокарцинома
Протокова сті з (сно 2 1» 125 | пом
Протокова ст|в| ж |(косюе ноші 2| |5Ге|5| | 1 | тових
Протокова ат14152 ч аденокарцинома 50 |100| 50 поЗзит.| 50 50 (рідко) з некрозом
Протокова сер ж оснош г |||» 1 | | Цеат ств|т| ж здоюариюм| 2 1 1 1 111 111111 аденокарцинома
Аденокарцинома/ З |100|100| | / | | | |нНЕГАТ|Ї 0 0 | о
Аденокарцинома| З | 501100| 50 / | | | (|позит/|50| о 50/06
Протокова нео) Ж здероарщеюма| 2 |01ю| | | | Зпозит)мю о | о
Протокова нет з | донокаднома| 2 60008 || / | (позит|| о | во| о
Протокова оне|т| ч здороарциюма| 2 50| 8050120 | | | Цпозит
Протокова не |59| ж |зденоарцеюма| 2 | о|о| | | | | | Цнеат|о| о | оо
Таблиця 22А
Гістохімічне фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА) 05 Віотах Р1921
О5Віотах РА1921 Панкреатичний ТМА - - Чо
Апікальне і цитоплазматичне фарбування позит/ по- то ПО- нін (відсоток) ЗИт.
ЗИТт.
Поло "жен: Стать Патологія Сте-| об |) од |49С Я5А | ос очА | ЗС | ЗзА | НЕГАТ. Цито|Апікал |Цито Апі- ня пінь кал чіпа онтфе| Ж адероарциюма| 2 50|0|5о| | | | Зпозит)во о |в о аденокарцинома
Протокова оне|55| ч здоноарцеюма| З | 50| 8050120 | | / Цпозит
Аденокарцинома/ З |100|100| | / | | | |нНЕГАТ|Ї 0 0 | о
Аденокарцинома| З | 501100| 50 / | | | (|позит/|50| о 50/06
Протокова зиіво Ж оденоарциюма| 2 010100) 0000 | позит юю, о оо) о
Протокова аденокарцинома(
НІіІ2176| ч фіброзна 100 | 100 НЕГАТ. тканинаікровонос на судина)
Протокова зиз|те| ч зденоарциюма| 2 | 50|0|5о| | | | Зпозит)|во о |в о
Протокова чиєіва Ж аденоюрщинюма| 2 (60 001000 позит
Протокова зив|е| Ж здероарциюма| 2 о|о| | | | | него ооо зие|е| ч здероарциюма| 2 |М0|80| | | | Цпозит)мо о |мо о аденокарцинома
Протокова оп) з зденоарциюма |29 5о|8о|5о| лю | | | позит
Протокова бе м деноарцинюма| З 0 119 | | | нет о о | о | о ві; я дор (мово! 5) | | Цпозит)мюо о | о
І 7 ч - 1 ПпОЗИТ. | 1 1
З 16 (рідко) 00 50 50 00 50 ом ж адоноарциюма| З 50|0|5о| | | | Зпозит)во о |в о аденокарцинома
Аденосквамозна карцинома (фіброзна
Б 49 ч тканина і кровоносна судина)
Плоскоклітинна се (5) чадом |З ооо! | | | пози) о |в о
Недиференційов тт м нрав | морю | || днеято о о о | о
Недиференційов ев) ч шир | ||| | | | Зпозит)во о |в о ее) ч здороарциюма| 2 50| 8050120 | | | Цпозит аденокарцинома
Протокова по 162 ч аденокарцинома | 2 | 100| 100 НЕГАТ. (рідко)
Аденокарцинома/| З | |100|50| /501 | | (|позитгілто0! о /т150|0)
Протокова опа|ве| ж здоноарциюма| З | 50|00|50| | | | Зпозит)|во о |в о пзіе| з ршюма (71 ор! 11 | | Дпозит)ю о | о карцинома
Плоскоклітинна по) з кднюма я (3 || | | | Цпозит
Недиференційов віт м Грав рою! 100 | дпозитотюю о оо) о
А теннннй НОЙ НІ НА М КОНЯ НН НОЯ НАННЯ НА НАННЯ НАННЯ КАН КА НА
Недиференційов| - |100|1007 | | | | | НЕГА о0| о | о
Таблиця 22А
Гістохімічне фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА) 05 Віотах Р1921
О5Віотах РА1921 Панкреатичний ТМА - - Чо
Апікальне і цитоплазматичне фарбування позит/ по- то ПО- нін (відсоток) ЗИт.
ЗИТт.
Поло "жен: Стать Патологія Сте-| об |) од |49С Я5А | ос очА | ЗС | ЗзА | НЕГАТ. Цито|Апікал |Цито Апі- ня пінь кал чіпа
ЇЇ Іанийрк | | | | Ї | Її її її 1 її 1 1.
Карциноддна | - /л100|100! | / | | / НЕГА! 0 0 о /|о
Апікальна е|5 ч |(аршиюдеа | ою! | |) | нет о) о о | о
Нейроендокринна ефе з (рю ою! | 1 | нет о) о о | о)
Аденокарцинома/) 1 | 501901 50Щ1101 / | | упозит.
Аденокарцинома| 2 |100|90| |10171 | | | (позит| о то | о (то)
Аденокарцинома| 2 | | ГГ ГГ / ГГ г ЇЇ ї 1 1 1 1
Аденокарцинома 2 | | |! ГГ її її /Г Її Її її 1 зийрає рою ю| | | | поту ю| ою о
Карциноддна | - /л100|100! | / | | / НЕГА! 0 0 о /|о
Апікальна фе з |(ршиюдеа | ою! | 1 | нет о) о о | о
Нейроендокринна ле|ее з || оо! | 11 | нет о) о о | о)
Аденокарцинома ч1352| ж | роніч. 100 | 100 позит. | 100 100 запалення панкреат. тканин)
Аденокарцинома| 2 |50180/|50| / |201| | упозит.
Аденокарцинома 2 | | /! ГГ її її /Г Її Її її 1
Аденокарцинома 2 | | | Ї 1 1 Ї ЇЇ 1 Її 1 1
Аденокарцинома| 2 | /80|100|201 | | | упозит.
Аденокарцинома/ 2 | |90Щ|100|101 / | | упозит.
Аденокарцинома| 2 |т100/1100| | / | / | (|нНЕГАТ! 0 о 00
Аденокарцинома/ З |100|100| | / | | | НЕГА! 0 0 | о | 0
Аденокарцинома| З | | |/50| /501501| | 50 (|позит.
Аденокарцинома! З | | | Ї 7 її Г ЇЇ ЇЇ | | її
Аденокарцинома/ З |100|100| | / | | | |нНЕГАТ|Ї 0 0 | о ке6о| Ч ЦАденокарцинома| 3 | | | | / | / 7 | | / !
Аденокарцинома| 2 |100190| |10171 | | | позит| о то | о (то)
Аденокарцинома| 2 |50180|501|201 | | | упозит.
Аденокарцинома
Фідюрпечни |З ою | || Знеято о) о о | о
Аденокарцинома| З |т100/1100| | / | / | (|нНЕГАТ! 0 о 00
Аденокарцинома! З | | | Ї 7 її Г ЇЇ ЇЇ | | її
Аденокарцинома| З |т700/1100| | / | / | (|нНЕГАТ! 0 о 00
Аденокарцинома/ З |100|100| | / | | | |нНЕГАТ.|Ї 0 0 | о /КІ6|60| Ч Аденокарцинома| З |100|100| | | | / | (|нЕГАТ| 0 | о |о
І1 56 ч Протокова з аденокарцинома фею ж |срдиюма | мою! | | | нет о) о о | о карцинома
Аденокарцинома| 2 |100|90| |10171 | | | (позит| о то | о (то)
Аденокарцинома| 2 | 50190 50110 | | | упозит. віз шення 1 111111 11 аденокарцинома
Аденокарцинома
І6 159 ч (панкреатична 100 50 50 пОЗИТт.| 100 250 тканина)
Протокова осіво Ж оденоарцинюма| З 00 19 | | 0 | Знеят о о | о | о
Солідна
Ї8 |13)| Ж |псевдопапілярна 100 | 100 НЕГАТ. карцинома
Таблиця 22А
Гістохімічне фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА) 05 Віотах Р1921
О5Віотах РА1921 Панкреатичний ТМА - й Зо
Апікальне і цитоплазматичне фарбування позит/ по- то ПО- нін (відсоток) зит ЗИт.
Поло "жен: Стать Патологія Сте-| об |) од |49С Я5А | ос очА | ЗС | ЗзА | НЕГАТ. Цито|Апікал |Цито Апі- ня пінь кал чіпа 6) з здоноарциюма| З 0|0| | | | | него ооо аденокарцинома
Аденосквамозна лоре| ж рю | оо ю| | | | (пози) ю о |ю о аю 2 рою | | | / Ц|нежту о ооо
Аденокарцинома| 2 |100190| |т10/ | | | (|позит о | то | о /то
Протокова ле|ю| ч здоноарцеюма| 2 0|40| | || | Цпозт)о в) во
Аденокарцинома/| З | |100| | 7501 2 1ц|501| (|позитг|т00! о |250|0)
Протокова ле|о| Ж здероарциюма| З 0|0| | | | | него ооо
Солідна
Ї16113| Ж |псевдопапілярна 100 | 100 НЕГАТ. карцинома
Таблиця 228
Узагальнені результати фарбування СС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА)
Віотах Р1921
АУус;ь АУус;ь дУусь дУусь Загальна Загальна Реї до ПОЗИТ. | 96 ПОЗИТ. Н Н кількість кількість
Таблиця 23А
Гістохімічне (ІНС) фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА) 5 Віотах РАТО02 и5ВІіотах РА1002 Панкреатичний ТМА
Апікальне і цитоплазматичне Бк - позит./ по- поз н Нн фарбування (відсотою) зит ит
Поло- жен- Стат - сте- Ци- | Апі- Апі- ня Ь патологія пінь ОС ОА |14СІ14А|2-С12А| 3 | ЗА | НЕГАТ. то | кал Цито кал чіпа
АденокарциномаЇ 2 | | / ЇЇ | ЇЇ /Ї 1 її її | її 1
Аденокарцинома| 1 | | /Г ЇГ / ЇЇ 1 1 її її | її
Аденокарцинома| 2 | |80(|1001 | |0ї| / ло (позит.
Аденокарцинома| 2 | | | (100! (100! | позит| о |200| о | зоб) аю 1 | о рюї ю| 1 Дпозит
Аденокарцинома| 2 |100|100! | | | | | |нЕГАТ. | 0 | 0 | о | о
Аденокарцинома
Фідюрзнекроюм 2 ою! | | 0 | |нежту оо) о | о
Аденокарцинома| 1 Щ|80|80| / /20Щ120| | |позит.
Аденокарцинома| 1 100,80! | | Щ|20| | упозит| о 1|20| 0 | 40
Аденокарцинома| 1 Ц|100|100! | | | | | |нЕГАТ. | 0 0 | о | о
Аденокарцинома| 2 |100|1100| | | / | | (нЕГАТ.| о /о0| о | о
Таблиця 23А
Гістохімічне (ІНС) фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА)
Віотах РАТОО2 и5ВІіотах РА1002 Панкреатичний ТМА
Апікальне і цитоплазматичне т Б фарбування (відсоток) позит/ по-| поз й й
ЗИ. ит.
Поло- жен- Стат - сте- Ци- | Апі- Апі- ня Ь патологія пінь ОС ОА |14СІ14А|2-С12А| 3 | ЗА | НЕГАТ. то | кал Цито кал чіпа
Аденокарцинома| 2 | 1001100 Ї | / | | Гпозиттло0/ о | 100 | о
Аденокарцинома! 2 |70|80|20|101 | | | упозит.
Аденокарцинома
С4 65 | Ч |(фіброжирова тканина)
Аденокарцинома (хроніч.
С5 67| Ж запалення 100| 20 пОЗИТт.| 20 20 панкреат. тканин)
Аденокарцинома| 71 |100|100! | | | | | |нЕГАТ. | 0 | 0| 0 | о
Аденокарцинома| 2 |80160|20120| /20| | (|позит|20140| 20 | 60
Аденокарцинома| 1 Щ|50190|50|1101 | | | упозит.
Аденокарцинома| 2 |30Щ|100/70| | | | | упозит| 01 7 | о
Аденокарцинома| 2 |100/1100| | | / | | Г|нЕГАТ./ о 0 | о | о
Аденокарцинома! 2 Щ|90Щ|80|10Щ|201 | | | упозит. вад І 1 11111111 /ЕЗ | 68| Ж |Аденокарцинома) 2 |90/|100|10| | | | | (позит| 10 о то | о
Аденокарцинома| 2 | л00|100Ї | / | | Гпозит|то0/ о | 100 | о
Аденокарцинома| 2 |100|100! | | | | | |нЕГАТ. | 0 | 0 | о | о
Аденокарцинома пот ж ер | 2 ор! | | | |) нет о| о о | о
Аденокарцинома| 2 |30Щ|100/70| | | | | упозит| | 01 7 | о 3 | 60| Ж |Аденокарциянома/ 2 |70/|100|30| | / | | (|позит|з0/ 0 | з0 | о аю 2 ||| | | | повит
Аденокарцинома| 2 |100|100! | | | | | |нЕГАТ. | 0 | 0| 0 | о
Аденокарцинома! 2 |70Щ|50130| | 201 /|з0у(|позит.
Аденокарцинома| З |1001100| | | / | | (нЕГАТ./ о 0 о | о аю 1! 01 | помт)ю о) тю о
Аденокарцинома| З | (|1001100! | | | | у позигітлоо| о | 100 | о 5 | 60| Ч |Аденокардинома)ї 2 | | | | / ЇЇ / |! 7 ! її їЇ
Аденокарцинома| 2 |100/1100| | | / | | ГнЕГАТ./ 0 0 о | о
Аденокарцинома| 2 | Щ|100/70| /|з30| | | у позит.тло0| о | 130 | 0
Аденокарцинома| З | 7100/5012 Щ|501 | | (позит/то0/о | 150 о она | 60| Ж фАденокардинома)ї З | | | | / ЇЇ / | ГГ Її її
Аденокарцинома(
Не ж фіброзна тканина і кровоносна судина)
Нормальна
ІІ 40 Ч |панкреатична 1001100 НЕГАТ. тканина
Нормальна
І2 47 | Ч |панкреатична тканина
Нормальна
ІЗ 25 Ч |панкреатична 70 1100 0) пОЗИт.|100| 30 | 100 тканина
Нормальна
Ії 35 | Ж |панкреатична тканина
Нормальна
ІБ 0) Ч |панкреатична 70 11001 30 пОЗИт.|100| 30 | 100 0) тканина
Нормальна ро з |рашретчна | | ою | | | | негатуюю| о | тою | о
Таблиця 23А
Гістохімічне (ІНС) фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА)
Віотах РАТОО2 и5ВІіотах РА1002 Панкреатичний ТМА
Апікальне і цитоплазматичне т Б - позит./ по- поз н Нн фарбування (відсотою) зит) ит
Поло- жен- Стат - сте- Ци- | Апі- Апі- ня Ь патологія пінь ОС ОА |14СІ14А|2-С12А| 3 | ЗА | НЕГАТ. то | кал Цито кал чіпа 771 ІЇжаниа.747777/ Її ЇЇ 11717 171 1717171717Г111
Нормальна 92 0) Ч |панкреатична 1001100 НЕГАТ. | 100 100 тканина
Нормальна
УЗ 40 | Ч |панкреатична тканина
Нормальна у4 35 | Ч |панкреатична тканина
Нормальна у5 21 | Ж |панкреатична тканина
Таблиця 238
Узагальнені результати фарбування СС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА) 05 Віотах РАТО02
Згальна Згальна 9 пПОЗИТ. | 95 пПОЗИТ. Н Н щік стат Ре
КІЛЬКІСТЬ КІЛЬКІСТЬ
Таблиця 24А
Гістохімічне (ІНС) фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА)
Рапіотісз РАС481 - частина 1
Рапіотіс5 РАС481 Панкреатичний ТМА-Частина 1 й - Чо | о
Апікальне і цитоплазматичне фарбування | ПОЗИТ. - по-| по-| НН Нн (відсоток) Го |зит, зит.
Поло- Ста сте- Ци- | Апі- | Ци- | Апі- ження Ч ть | патологія пінь 0/0; ОА 114С|14А|2-С12-А|3-СІ З А | НЕГАТ. то | кал! то | кал ло |46і чЧф(Нормална.4/// | -| | | / | / / | | / 010 о|о
І Аб2|48 Ч|ноома.0077:КМ | -Ї ЇЇ Її | ЇЇ | Ї 71 її 0110100
Аз |58І Ж|Нормальна.ї | - 7100! Мо! | | | | | унЕГАТ./ о | о о
Пухлина олоє|зв| ж отрівцевихклимн З (2001! | 1 | 1 | неят о ооо /АО5 44) Ж |Аденокарцинома | І | 50 | |100ї50| | | | | упозит| 50 о / 50 | с
І АОб|64 Ж |Аденокарцинома | І |т700| 100! | | | | | |нНЕГАТ о | о | 0 о
А07|39 Ж |Аденокарцинома | І | | | 501 Щ|50| | (|т00упозит.
І АОВ/|49 Ж |Аденокарцинома | І | 90 | 100! | |10| | | позиг| ло | о |20| о |у со1|56, Ж|Аденокарцинома | І | | | | ЇЇ 7 7 | | / її 1
І сСо2|491 Ж |Аденокарцинома | ПП |тл00| 100! | | | | | |нНЕГАТ | о | о | 0
І соз|52і Ж |Аденокарцинома | ПП |тл00| 100! | | | | | |нЕГАТ о | о | 0 /сС04|42, Ж |Аденокарцинома | П | 90 | оо |л1о0| | | | | упозит| то о / 10 | о
І со5|541 Ч |Аденокарцинома | ПП |тл00| 100! | | | | | |нНЕГАТ о | о | 0 (со6|59, Ч |Аденокарцинома | П | 100| 10030! | | | | упозит.| зо| 0 | з0 | с
І со07|34 Ж |Аденокарцинома | Й | | (1001100 Ї20| | | | у|позит.
І сов |69| Ч |Аденокарцинома | 1 | | ооо! | | | | упозит.|т00| о /т00| о
Таблиця 24А
Гістохімічне (ІНС) фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА)
Рапютісв РАС481 - частина 1
Рапіотіс5 РАС481 Панкреатичний ТМА-Частина 1
Апікальне і цитоплазматичне фарбування | ПОЗИТ. ть ть (відсоток) / поупо| ну н
ЗИ. ЗИТ.
Поло- Ста сте- Ци- | Апі- | Ци- | Апі- ження) Вікі патологія - 0/0; ОА 114С|14А|2-С12-А|3-СІ З А | НЕГАТ. чіпа ть пінь то |) кал | то | кал 0140, Ж Аденокарцинома | П | 100! оо! | | | | | НЕГА 0,0
ЕО2 79) Ж |Аденокарцинома | Ш | 100) 100! | | | / | унНЕГАТ! 0 | о | 0 о
ОЗ |76, Ж |Аденокарцинома | ШІ | 100! 00! | | | | | /нНЕГАТ.! 0 | о о 04 |52| Ч |Аденокарцинома | Ш | 80 | | 100Ї20| | | / | упозит/г2го| о |20 | о /БО5 (51) Ж |Аденокарцинома | МП | 50 | 100150! | | | | упозит| 50 0 /50| с
Об |42, Ж Аденокарцинома | ШІ Ї | | | | | ЇЇ | | / | / 1 0740) Ч |Аденокарцинома | Ш | 50 | (100Ї50| | | / | |позит/| 50 о |50/| 0
БО8 |64) чЧ |Метастатичнийраб! 7! | | | | | ЇЇ | | Її /Г її 71 1
Таблиця 248
Узагальнені результати фарбування СС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА) Рапютісв РАСА481 - частина 1
Загальна Загальна до ПОЗИТ. до ПОЗИТ. Н Н т. нац Реї
КІЛЬКІСТЬ КІЛЬКІСТЬ
Таблиця 24С
Гістохімічне (ІНС) фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА)
Рапютісв РАСА81 - частина 2
Рапіотісх РАС481 Панкреатичний ТМА-Частина 2
Апікальне і цитоплазматичне фарбування пОЗИит. по. по. Ні н (відсотою) НЕГАТ. зит! зит
Поло- й сте- Апі- (Ци-іАпі- ження Стать| патологія пінь ОС | ОА |14С0 | 14А | 2 | 253А | 3 | З3-А ) НЕГАТ. |Цито кал то | кал чіпа во1|46| чЧ |Нормальна | -| | / | | / | | її 1 ва 48| Ч /Новма./. | -Ї | | / / | | 7 / її 1 1.
І воз| 58| Ж |Новмма.7//7 | -| | / | | / | | її 1 1 1.
Пухлина во4 | 28 Ж | острівцевих 100 | 100 НЕГАТ. клітин
Аденокар- во з! ж рю | | лю| | | |) Ц|нежт оо |о| о
Аденокар- ве с ж юве || ||» | | / пот
Аденокар- во жена 111101 117 хо позит
Аденокар- ве з! ж рю | | юю! | | / пот ю/ о |ю| о
Аденокар- роті вв| ж рю | | лю| | | |) Ц|нежт о) о|о| о
Аденокар- пог зе) ж рю | "молю! | | | / Ц|нежт о) о|о| о
Аденокар- розв жна | прото! | | | | нет о) о о роя зе) ж рю | прю юю! / | | / Цпомт ю/ о |ю| о (І ро5| 54| Ч |Аденокар- | пП|т100|т100| | / | | | |нЕГАТ о | о (010)
Таблиця 24С
Гістохімічне (ІНС) фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА)
Рапютісв РАСА81 - частина 2
Рапіотісх РАС481 Панкреатичний ТМА-Частина 2
Апікальне і цитоплазматичне фарбування пОЗИит. | т (відсоток) НЕГАТ. | ЛО ПОНІ Н д "| зит/ зит.
Поло- й сте- Апі- (Ци-іАпі- ження Стать| патологія пінь ОС | ОА |14С0 | 14А | 2 | 253А | 3 | З3-А ) НЕГАТ. |Цито кал то | кал чіпа 7 771 цдинома.ї7//7/ | ЇЇ ЇЇ Її 1 1 1 її 1 1 111
Аденокар- ровів чо онає | "оо! | | / | | позит|го| о | о
Аденокар- роті ся) ж дю || юю! ||) позито тою о ро о
Аденокар- повів! ч Гр | "молю! | | | / Ц|нежт о. о|о| о
Аденокар- кію| ж рю | "мо лю| | / | | / Цнежх о о|о| о
Аденокар- кет жає | міх! | | | | Цнеят о) о о| о
Аденокар- козі т| ж рю |М|юою| | / | | / Цнежт о о|о| о
Аденокар- кеіве| ч рю | ммс лю| | / | | / Ц|нежх о. о|о| о
Аденокар- ввів) ж рю || юю! | | | / Цпомт я о |ю| о
Аденокар- вела ж юна | Мою! | / | | позит| во о во) о
Аденокар- вті! ч дю || юю! / | | / Цпоит во о |во| о
Метаста- ке сє| ч |рмийвяк | "||| | || | | пото о |в) о
Таблиця 240
Узагальнені результати фарбування СС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА) Рапіотіс5 РАС481 - частина 2
Загальна Загальна до ПОЗИТ. до ПОЗИТ. Н Н т. нац Реї
КІЛЬКІСТЬ КІЛЬКІСТЬ
Таблиця 25
Гістохімічне (ІНС) фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА)
Віотах 57101501 - частина 1
О5Віотах 5ТС1501 Шлунковий ТМА - Частина 1
Апікальне і цитоплазматичне до ПО-Ї 96 ПО- 11111110 оороуанявідоююд є |помит
Поло- й сте- . Апі- ження Стать патологія пінь ОС | 0А 114211 АІ2-С|2-А|3-013-А | НЕГАТ. | Цито |Апікал |Цито кал чіпа
АТ | 35| чЧ |Нормална.4. | -Ї ЇЇ | | ЇЇ 1 1 1 1 1 1 її
Аг | 83| Ч Нормальна | - | |(1001100ї | | | | у позиг| лоої о (100 о
Хронічний азів чІіяеии 07 рю | | | озо|позит) о) зо оо) во
Хронічний лів че | 1 | 5 гово | зо| во |повит,
Таблиця 25
Гістохімічне (ІНС) фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА)
Віотах 5ТС1501 - частина 1
Апікальне і цитоплазматичне до ПО-Ї 96 ПО- 71707771 оароуваннявідоюю позит) зит виг) ну ну
Поло- й сте- . Апі- ження Стать патологія пінь ОС | 0А 114211 АІ2-С|2-А|3-013-А | НЕГАТ. | Цито |Апікал |Цито кал чіпа
Шлункова із іде рю 1 пухлина
Перстневид- мн хін | | р | де юю ою аденокарцинома
А | 42| Ч |Аденокарцинома| ШІ | /т00 1100! | | | | позит| л100| о 100) о
АВ О| 44| Ж (|Аденокарцинома Ш-ЩШІ |201/50| |/50130| |50(|позит.| 100 | 80 |150| 210
І АЗ | 54| Ж |Аденокарцинома| І | /50| | (100201 |зо|позит.| 100 | 50 |200) 130
АТО 51| Ч (|Аденокарцинома І-І то0/1100!. | | | | позит| 00 о (|т00| о
АТ 61| Ч |Аденокарцинома Ш-ШІ | | | (100,50 |50(|позит.| 100 | 100 | 200) 250 о АТ2| 50| Ч |Аденокарцинома| | /70| | (100! | |зо|позит.| 100 | зо |200) 90
АТЗ 53| Ж |Аденокарцинома| Ш | 100/70| |/з30| | | (|позит.| 100 о |130| о /АТ4 | 55| УЧ |Аденокарцинома) ШІ | /100! | Щ|70| |з0| |позит| л100| о /|230/ 0
АТ5| 73| Ж |Аденокарциінома, 1, ЇГ | 7 71 71 71 11 1 1 1 її о с1 | 47| Ж |Аденокарцинома Ш-ШІЧО0І100|. | | | | | унНЕГАТ.Ї 0 | о /|0о | о ба | 70| чЧ |Аденокарцинома І-Ш 50/50/1501 | | | |50(|позит.| 50 50 | 50 | 150
І с3 | 36| Ч |Аденокарцинома|І-пПІ1001 50 | | | | |50|позит| о | 50 | о 150)
І сС4 | 65| Ч |Аденокарцинома)| ШІ60170| | |20| |г2го|зо|позит| 40 | зо |т100) 90
І сб5 | 62| ЧчЧ |Аденокарцинома| ШІ т00/1100!. | | / 7 | |нЕГАТ.,Ї 0 / о | о | о сб | 77| Ч |Аденокарцинома Ш-Ш 50100 / 501 | | | | упозит| 50 | о |50/ о
І с7 | 45| Ж |Аденокарцинома | І-пІт00! 30! | | | | |70|позит| о / 70 | о | 210
І с8 | 67| Ч |Аденокарцинома МІ-ШІ 70190130 | 70 | упозит.| зо | то | 30 | 20 се | 62| Ч |Аденокарцинома Ш-ШІЧО0І100|. | | | | | унНЕГАТ.Ї 0 | о /|0о | о |у
І сто| 55| Ж |Аденокарцинома І-Ш 50100 50| | | | | позит.| 50 | о |50| о
І с11|75| Ч |Аденокарцинома) Ш | /т00 1100! | | | | упозит| 100 | о 100) о ст| | ч|нйраю с юорюї | | | | нежт) о | о | о | о
І с13| 41| Ч |Аденокарцинома Ш-Ш| 501 80|50110| |т10| | позит| 50 | го | 50 з0
І с14| 58| Ч |Аденокарцинома П-ШІ 701/1801/30/20| | | | Гпозит.| з0 / го | зо | 20 о с15|52| Ж |Аденокарцинома|І-й| /40| | (100,30 |зо|позит.| 100 | 6о |200) 150 ефе ідемо рю я | де ю ою
Е1 53 Ч | стромальна 100) 20 20 пОЗИт.| 40 пухлина
Б2О| 72| ЧчЧ |Аденокарцинома| 1 | /100/20| |з0| |50| (|позит.| л00 о |230| 0 ві ри | дек
ЕЗ 57 Ч Тинна 1001100 НЕГАТ. аденокарцинома /Е4 | 60| Ч |Аденокарцинома| Ш 1001100! | | | | | унЕГАТ.Ї 0 | о /|0о | о |у 5 | 66| Ж |Аденокарцинома, ШІ /Г / 7 7 7 71 1 1 7 1 її /Е6Є | 6б2| Ч (|Аденокарцинома|І-й І | |т70| |60| |з0|т00|позит.| 100 | 100 | 220) зоб
ЕЕ | 48| Ж |Аденокарцинома| Ш 5010020! Щ|з30| | | упозит| 50 | о /|80/ о
ЕВ | 60| Ч |Аденокарцинома Ш-ШІ 100/20| |з30| |50| (|позит.| 700 о |230| о /ЕЗ | 56| Ч |Аденокарцинома) Ш | /100/501 | | 50 упозит| л00| о |200/ о 220 Щ| 54| Ч (|Аденокарцинома| Ш | Гло0/ло0!. | | | | позит| 00 о (|т00| о 11 64| Ж |Аденокарцинома| Ш | 100,30! | | /70| |позит| л00| о /|240/ о /Е2| 59| Ч |Аденокарцинома| Ш 80100! | |/20, | | (|позит| го | о /|40| о вз| | ч|шнраю сірої | | | |2| пози) | о 2ю о аний рак ре рин | р де юю ою
Е14 | 65 Ч инна 100 100 поЗзит.| 100 00 аденокарцинома /Е15Щ| 35| Ж |Аденокарцинома| ШІ (100! | 70, |з0| (|позит.| 00 о /|230| 0
І с1 | 71| Ч |Аденокарцинома)| Ш|90/100| 10, | | | | упозит| то | о || о ен рю (| де ю ою се 38 Ч Тинна 5О 1100 50 пОозит.| 50 100 аденокарцинома сз| | ч |срмали | 100! | | | | | нет) о | о | о | о стромальна
Таблиця 25
Гістохімічне (ІНС) фарбування ССС в панкреатичних пухлинних мікрочипах (ТМА)
Віотах 5ТС1501 - частина 1
О5Віотах 5721501 Шлунковий ТМА - Частина 1
Апікальне і цитоплазматичне до ПО-Ї 96 ПО-
Поло- сте- Апі- ження Стать патологія пінь ОС | 0А 114211 АІ2-С|2-А|3-013-А | НЕГАТ. | Цито |Апікал |Цито кал чіпа 11 Їпулила. | | Її |! | | Її її г 1 1 1 1 04 | 56| Ж |Аденокарцинома! І-І | 501 130 | го (|т100|позит. 05 | 45| Ч |Аденокарцинома| | /л100 1100! | | | | позит| 100 | о /|т00/ о сб | 45| Ч |Аденокарцинома| Ш 1001100! | | | | | унЕГАТ.Ї 0 | о /|0о | о |у
І с7 | 74| Ч |Аденокарцинома| Ш|чт00/1100Ї | | | | | |нНЕГАТ| 0 / о | о | о 08 | 24| Ж |Аденокарцинома| ПП | 30150/150| |201|501 | позит.| 70 | 50 | 90) 100) 9 | 51| чЧ |Лмфома, | -| ооо! | | | | (позит| 00 о (|т00| о
Перстневиднокліт ат0| 53 Ч Тинна 5О 11001 50 пОозит.| 50 50 аденокарцинома сіл|58| Ж |лимфома.00 |-| | | | | | 7/ Її Її
І с1і2| 58| Ж |Ллмфома.707 /|/-Ї 1 1 1 1 1 111 1 1 1 1
І сіз3| 81| Ч |Аденокарцинома|І-й | 201 70|50130|30| | | позит| 80 | зо |110у з0
Перстневиднокліт сат4 | 56 Ч Тинна аденокарцинома о с15| 35| Ч |Аденокарцинома!і-й| | 100! | 100! | у|позит. мо 61| Ч |Аденокарцинома| ПП |т100/1100|. | | | | | унЕГАТ.Ї 0 | о /|0о | о |у зийрав | сроос!ї 100 днеят о | о | о о 13 | 78| Ч |Аденокарцинома| Ш 1001100! | | | | | унНЕГАТ.Ї 0 | о /|0о/ о 4 | 65| Ж |Аденокарцинома| Ш)І/40/80|/20| |/40| | |го(|позит.| 60 | го |т100| 60 | 68| Ч |Аденокарцинома Ш-ШІЧО0І100|. | | | | | нНЕГАТЇ 0 | о /|0о | о |у 16 | 60| Ч |Аденокарцинома-ШІ | | / | / / 7 ГГ 1 1 17 | 53| Ч |Аденокарцинома| п /100Ї50| | | | | |50|позит| 0 / 50 | о | т150
Муцинозна в || ж |двноариюма М 00 | |20| |во0| |позит| мо) о о о 19 | 50| Ч |Аденоякарцинома, 7 | | | / | / / 7 7 1 1 мо | 74| Ч |Аденокарцинома| Ш 1001100! | | | | | унЕГАТ.Ї 0 | о /|0о | о |у
Перстневиднокліт 111 75 Ж Іинна 100 100 поЗзит.| 100 00 аденокарцинома мг | 68| Ж |Аденокарцинома Ш-ЩШІ |70/100! | | | |зо(|позит.| 100 зо |т00| 90 ше 11071111
І мп4 | 53| Ж |лмфомаі7007 |/-;Ї ЇЇ | 1 1 1 111 1 1 1 (| м5 | 80| Ч (|Аденокарцинома| | |100| | (100! | | упозит| 100 | о |200) о
Таблиця 258
Узагальнені результати фарбування ССС в шлункових ТМА 05
Віотах 5ТС1501 - частина 1
Загальна Загальна
У ПОЗИТ. У ПОЗИТ. Н Н 2. т, Ресї
КІЛЬКІСТЬ КІЛЬКІСТЬ
Таблиця 250
Гістохімічне (ІНС) фарбуванні ССС в шлункових пухлинних мікрочипах
Віотах 5101501 - частина 2 - - Чо
Апікальне і цитоплазматичне фарбування пози то ПО- по-! н Н (відсоток) ЗИт. зит
Поло- - - - сте- Апі- Апі- тертю я рен рере рент нені ві | ч /З5|Нормальна. | - |100|1100Ї / | | | | / | о 110 0/0 в; | чЧ |83|Нормальна. | - | |90/100| | / | |701/ | ло | 70 |т00| 30) вач ват || (мою 11 | | | рр юю о гастрит вч (мою || 110 || вою) | юю пов ово|воо гастрит оз рю 1 вь ч 59 | стромальна 100100 пухлина ек фер | | рев
Ж ноклітинна 50 100 50 50 100 аденокарцинома
ВЛ | чЧ |42|Аденокарцинома Ш | |т100/150| /|501 | | / 7000 |т150|0) в | Ж 044 |Аденокарциномай-Ш! |100! / 150, |501 | | т700|о0 |2г50|0о ве | Ж (54 |Аденокарцинома І | | | / 100,30! 70 | 00 |т100 | 200 270 вто | ч |51|Аденокарциномай-й!| |90/100| | /т10| | | | лоо | то |т00| 20)
ВІ | ч 61 |АденокарциномайШ! | | / 7100, | Щ|т7100,! | 00 |т100 | 200300 ві2 | чЧ |50|Аденокарцинома 7 | | / | | / | | / /
ВІЗ | Ж /53|Аденокарцинома ШО | |1001901 / | |т710ї | | т700|о 1200 вія | чЧ |55|Аденокарцинома Ш | /|100140| /|з30/ |з30| | /л00/|о |т190/0) /ВІ5 | Ж 73 |Аденокарцинома, ПОЇ |100|100ї | | | | | | т700| о /т00|о рі | Ж (47 |АденокарциномаП-ШІл00 100! 1 | | ЇЇ ЇЇ оо оо ра | ч |70|Аденокарцинома й) |50/100| | / | 50172 5Бюж 470050 |т700|150) 03 | чЧ 36 |Аденокарцинома І-І 100| 50 | | | | 5071 5 ющ | о |501 0 (50 р. | ч |65|Аденокарцинома Ш | |100/120| /|з30/ Щ|50| | /тл00/|о |230|0) 05 | Ч /62|Аденокарцинома Ш /90/|90|10/10| | | | / | ло |ло|ло 06 | Ч 77 |АденокарциномаїП-Ш! 40 |100/ 301 /30| | | / | 60 |о0 90/01 07 | Ж |45|Аденокарцинома ІМІ|100| 50. | | | | 507 5 Юю БВеи 1 о 501 0 (150) 08 | Ч 167 |Аденокарциномай"Ш! 80/90/1101 /710|710! | | | го |т10|з0|20 ре | ч |62|Аденокарцинома й ШІтлЛО0|100ї. | | / | | / о 101 оо) рі | Ж /55|Аденокарцинома-Ш|л00 100! / | | / | / оо оо рі | ч |75|Аденокарцинома Ш | 501001 | /|501 | | / 50 |о0|т00|0) о2| ч |на | с рою 1111111 ор різ | ч |41|Аденокарциномай- | | / | 1001 | 1007! | лоо 100 | 2001300) р14 | Ч 58 |АденокарциномаПШІ700 | 90! / | 710! | / | о |т70 о 20 рі5 | ж |52|Аденокарцинома ІМІ| |80 | 1001 | 2017 700 |20|200| 60)
КЕ Ме ее їн ч 63 | стромальна 100 | 20 20 20 пухлина 2 | Ч 72|Аденокарцинома 1 | |100/201 /30| |501 | | т700|о 2300
Перстневидноклі вірю ее 111 аденокарцинома 4 | Ч 60 |Аденокгарцинома Ш ЇЇ | | / | | / | / / 5 | ж |66|Аденокарцинома Ш | |т100/130| |501 |20| | /тл00/|о |т190|0 б | Ч о /62|Аденокарцинома І-ІІ | | / 7100, | Щ|т7100,! | л00 |т100 | 200 300 7 | ж |48|Аденокарцинома Ш | 50|100150| | / | | / 501 015010) 8 | чЧ 60 |АденокарциномаПй-Ш! 40/50 / /|501|710|10Щ|501 | бо | 60 | 1300/1170 ве | ч |56|Аденокарцинома Ш | |1001 | 1007 | | / 7000 20010) о | ч 54 |Аденокарцинома Ш | 80|100/201 | | | | / | 20 |0 20/00 о | Ж 064 |Аденокарцинома ШО| |100/501 /ц/20| |з30| | | т700| о 800 а | ч |59|Аденокарцинома Ш | 80100 | /|201 | | / 20 | 014010) з ч | раю с |мою | | | 11.11 1919100 аний рак хр | 1 реву 14 ч 65 | тинна 100 100 100 00 аденокарцинома (15 | Ж 35 |Аденокарцинома Ш | |100|30/ |50| |20| | | т700| о |т90|о
Таблиця 250
Гістохімічне (ІНС) фарбуванні ССС в шлункових пухлинних мікрочипах
Віотах 5ТС1501 - частина 2 - - Чо
Апікальне і цитоплазматичне фарбування пози то ПО- по-! н Н (відсоток) ЗИт.
ЗИТт.
Поло- сте- Апі- Апі- ження Стать патологія пінь ОС | ОА 11-01 1А 2 | 2-А | 3-0 | 3-А | НЕГАТ. | Цито кал Цито кал ні | ч |71|Аденокарцинома Ш | 90|100110| | ,/ / | / | тло |о0 016)
Перстневидноклі нг ч 38 | тинна аденокарцинома
Шлункова нЗ ч стромальна 100100 пухлина на | Ж (56 |Аденокарцинома І-І! | | / 100, | Щ|т7100,! | т00 |т00 | 2оо зо он | ч (|45|Аденокарциномаї ЇЙ | |т100/1100| | |; / | / | л00|о(|т00|о не | ч 345 |Аденокарцинома Ш | |т100|100ї | | | | 7 | т700|о то
ОН | ч |74|Аденокарциномаї ШШ |100|1001. | | | / | / | 0 |о01 0106 не | Ж (24 |Аденокарцинома ! /80|80| / /20| | 2017 | го |20|40|60 не | ч |51Ілмимфома.7077 | -Ї | | | 7 | 1 її 1 1.
Перстневидноклі нІо ч 53 | тинна 70 1100 30 30 0) аденокарцинома ни | Ж |58|ІЛмфома.їд777 7-1 | | ЇЇ ЇЇ ЇЇ 1 1 ГГ її 1 11 ні | ж |58|лмфома.7/.7.7ДГ/-| | ЇЇ 1 1 1 її г 1 1 11
НІіз | ч (|81|АденокарциномаІ-!| /|90 100110 | / | | | т00 | то |т00| 0)
Перстневидноклі
Нн14 ч 56 | тинна аденокарцинома
Ні | ч 35 |Аденокарцинома І-І! |70Щ1801 /20| | Щ|з0| | 700 | зо | т2о|90 91 | ч Щ|61|Аденокарциномаї І |80|100120| | | / | / | 2о | 0 |2о0|65
Недиференційов че ч 42 аний рак
УЗ | чЧ Щ|78|Аденокарцинома, Ш |100|1001. | | | / | / | 0 |о010106 94 | Ж /65|Аденокарцинома Ш | |501501 /ц/50| | 5017 5 | 100 | 50 | 150150 95 | Ч Щ|68|Аденокарциномарйі-Ш)Іт00/! 801 | | /2071 | | | о |2о0о| о 140) 96 | Ч 160 |Аденокарциномай-Ш! |100| / 150, Щ|501 | | т700|о0 |2г50|о 97 | чЧ |53|Аденокарциномаї П |501|80150| | 10 |т70ї | 50 |г2о0|50|50 зе | ж те | деноариюв| "| | 11111011 аденокарцинома 99 | Ч |50|Аденокарцинома Й | /|40| | |т100/30| |з30| | 00 | бо | 200150) | ч (74 |Аденокарцинома Ш |100|100Ї. | | / / / / о | о оо
Перстневидноклі 11 Ж 75 | тинна 100 100 100 00 аденокарцинома 12 | Ж )І|68|Аденокарциномайі- | 90/70 110 | 307 | | | ло |зо| то 60) ше, г с1717171717171717111117171771711 914 | Ж |53|Ллмфома.ї/../ЦГ//-| | ЇЇ 1 1 1 її г 1 1 1 1 (15 | ч Щ|80|Аденокарциномаї Й | |т1001 | |100Ї | | | | л00|о |2о0| 06
Таблиця 250
Узагальнені результати фарбування СС в шлункових ТМА 05 Віотах 5ТС1501 - частина 2
Загальна Загальна до ПОЗИТ. | 96 ПОЗИТ. Н Н т. т. Ресї
КІЛЬКІСТЬ КІЛЬКІСТЬ
Таблиця 26А
ІНС-фарбування ССС стравохідних пухлинних мікрочипів Рапіотісх Е5С1021
Рапіотісх Е5С1021 Стравохідний ТМА
Апікальне і цитоплазматичне ПОЗИ 95 ПО-| 95 ПО- Н Н фарбування (відсоток) / ЗИТ. | ЗИТ.
Поло- Сте- ження Стать патологія пінь ОСІ ОА 11-СІ1-А|2-СІ2-А|3-С | 3--А ІНЕГАТ.) Цито | Апікал |Цито| Апікал чіпа
І АОІ | 56 | Ч Нормальна | МПоблоої | | | | | |нЕГАТ 0 | 0 | о| о
Аг | 53 | Ч Нормальна | Поблоо!ї | | | | | (|нЕГАТ 0 | 0 | о| о
І АоЗ | 53| Ч Нормальна | Мод! | | / | | нНЕГАТ. 0 | о |0о| о
ІА. | ба | Ч |Езофаїт | Моблоої | | | | | |нЕГАТ 0 | 0 | о| о
І АО5 | 66 | Ч Езофапіт | Модлос! | | 1 | | нЕГАТ. 0 | 0 |о0| о
Плоскоклітинна лов. в| З аринюмає 1 |000| | |20) |50| рози | о || о
Плоскоклітинна лот|з6) ч рмюма (Мт лооо | | | (|сят о) оо о лова) Ж дмюма. |! ооо | | | рози во) о мо о карцинома
Плоскоклітинна се |ва ч арииюма (М1лодюо | | | (ет о) оо о
Плоскоклітинна лю|5| ч ариюмає 1 || | || | | ромт зо) о |в) о
Плоскоклітинна ам|вв| Ж диюма |! поро | | | (|еят о| оо о л|ва) ч адмюма |! рос о! | | рози! го) о 20 о карцинома
Плоскоклітинна лз|5е) ч адмюмає |! рос зо! | | рози! о) ою о
Плоскоклітинна во) со| З ариюма. |! ою! | | | | | ет о| о | о) о
Плоскоклітинна вое|5о) ч диюма |! ороо | | | /9| розиї ю| о/з» о ве)ч4) ч диюма 1 ор | | | рози! о) о в о карцинома
Плоскоклітинна вм)|60) ч адиюма |! пою | | | (ет о) оо о
Плоскоклітинна вові) Ж ариюма. 1 900130! | | | | ромт зо) о |з) о
Плоскоклітинна во)55) ч армюма |! ооо зо! | | рози! о) о/з о воб|56) ч адмюма. |! ооо | |20) 20) рози я) о мо о карцинома
Плоскоклітинна вое)чв) ч о армюмає |! ооо | | | рози! о) ою о
Плоскоклітинна ве/5| ч ариюма. тою! | | | | | ет о| о | о) о
Плоскоклітинна во|56) ч адиюма (тло | | | (|сят о) оо о ви|и| 9 адиюма (Мтлодюо | | | (ет о) оо о карцинома
Плоскоклітинна в|55) ч адмюмає Моро | | | рози го) о 5 о
Плоскоклітинна вз|58| ч ариюма. Мою 3о| | | | | ромт зо) о |з) о
Плоскоклітинна си|гв| Ж адмюма Моро | | / | рози! | о тю о сог|5е| Ж рмюма(М1лодюо | | | (ет о) оо о карцинома
Плоскоклітинна соз|65) ч армиюма Моро | | | рози! | о тю о
Плоскоклітинна сом) а3| ч рима. М|ю во! |) | | рот | о |в) о
Плоскоклітинна со5|62) ч армнюма. Моро о! | | рози! ю| ою о
Плоскоклітинна со|55) ч ардмнюма Моро во! | | рози во) о 5 о
І со7 | 59 | чЧ |Плоскоклітинна |І-1|701100Ї | |з0|! | | позит! зо | о |60| о
Таблиця 26А
ІНС-фарбування ССС стравохідних пухлинних мікрочипів Рапіотісх Е5С1021
Рапіотісх Е5С1021 Стравохідний ТМА
Апікальне і цитоплазматичне ПОЗИ 95 ПО-| 95 ПО- Н Н фарбування (відсоток) / ЗИТ. | ЗИТ.
Поло- Сте- ження Стать патологія пінь ОСІ ОА 11-СІ1-А|2-СІ2-А|3-С | 3--А ІНЕГАТ.) Цито | Апікал |Цито| Апікал чіпа (карцинома | | | | | Її її | Її се|ч2! ч рмнюма Моро о! | | рози! ю| о /ю о карцинома
Плоскоклітинна сю|в1) ч о армиюмає Моро во! | | рози! во) о в о
Плоскоклітинна сю|57| ч ариюма. | о| | | | | рот | о || о
Плоскоклітинна сиве) ч адмюма М рою! | 0 | розит мо) о то о ст|ва) ч адмюма Моро | | | рози! го) о 5 о карцинома
Плоскоклітинна стз|55) ч армиюмає Моро во! | | рози во) о 5 о
Плоскоклітинна пот) 7о| ч ариюма. тою | | | | | ет о| о | о о
Плоскоклітинна рог|вв) ч армнюма. Моро о! | | рози! ю| ою о 0оз|55) ч рмнюма. Моро | | | рози! ю| о 20 о карцинома
Плоскоклітинна рм|в5| Ж адмюма Моро го! | | рози! го) о 20 о
Плоскоклітинна пово) З ариюмає | ооо! | | | | рози мо) о |юо) о
Плоскоклітинна роє|вв| ч армнюма. Моро о! | | рози го) о 20 о оот|5е) ч армюма (М1лодюо | | | (ет о) оо о карцинома
Плоскоклітинна ров|вв| Ж армиюма(М1лодюо | | | (ет о) оо о
Плоскоклітинна пою) 55| Ч аринюма. Іо о! | | | | розт о) о |в) о
Плоскоклітинна ою|во) ч армнюмає Моро го! | | рози го) о 20 о
Плоскоклітинна оп|в| Ж адмюма юю (Мтлодюо | | | (ет о) оо о
Плоскоклітинна о2|5е) ч о армюма юю (Мтлодюо | | | (ет о) оо о
Плоскоклітинна оз|л| Ж ардиюма | | | 0ю0/ | | розит мо) о |2ю) о
Плоскоклітинна ви |57) ч адмюма Моро тю! | | рози! ю| ою о
Плоскоклітинна ве |6я) ч о армиюмає Моро 2о| | | рози во) о в о
Плоскоклітинна ве)72) ч армюма Моро о! | | рози! ю| о /ю о
Плоскоклітинна во) 7а| З ариюма тою | | | | | ет о | о | о о
Плоскоклітинна вое|51) ч о армюмає Моро | | | рози! го) ою о
Плоскоклітинна во)в1) ч армюма |" поюо | | | (ет о) оо о
Плоскоклітинна вот|ва) ч аршиюма |" поюо | | | (ет о) оо о
Плоскоклітинна во )єз| ч ариюма. | "ою! | | | | | ет о| о | о) о ве) ч адиюма (тло | | | (ет о) оо о карцинома во) ч дим |" | 1 11111111 карцинома
Плоскоклітинна ем |5| ч (юдиюма |" розо| | | | | рози! | о |») о
Таблиця 26А
ІНС-фарбування ССС стравохідних пухлинних мікрочипів Рапіотісх Е5С1021
Рапіотісх Е5С1021 Стравохідний ТМА
Апікальне і цитоплазматичне ПОЗИ 95 ПО-| 95 ПО- Н Н фарбування (відсоток) / ЗИТ. | ЗИТ.
Поло- Сте- ження Стать патологія пінь ОСІ ОА |14-С|І1А|2-С)2-А|3-С | 3-А ІНЕГАТ.| Цито | Апікал |Цито| Апікал чіпа 2 | 77 | Ч ф|Аденокарцинома| ПО |80170/|20| | | | (|зо0позит| го | з0 | го| 90 вз|6) ч едиюма | "пою | | | (ет о) оо о карцинома
Плоскоклітинна ки|ч5) ч адмюма | "пою | | | (ет о) оо о
Плоскоклітинна ге .|в2| м риюма. | "ою! | | | | | ет о| о | о о
Плоскоклітинна ге|ве) ч едиюма |" оо! | | рози во) ою о тм |вв) ч едиюма | М рою! | 0 | рози то) о о о карцинома
Плоскоклітинна го |5а) ч ариюма | "пою | | | (ет о) оо о
Плоскоклітинна го.) ч ериюма. "| 00/ | 50) |50| розит мо) о |2во) о
Плоскоклітинна гот|в"| ч адмюма |" поро | | | (|еят о) оо о те|5а) ч адмюма | "роз! | | рози! о) ою о карцинома
Плоскоклітинна ге|в7) ч армюма | "пою | | | (ет о) оо о
Плоскоклітинна по) Ж рима. | "|| | | | | ромт | о | о) о 1 | 56| Ч УЦАденокарцинома| ! |20Ї | | 801 | |то0позит) 80 | т00 |т160| зо0
Плоскоклітинна бтрволо, | 2) | | рози м ою) о
Плоскоклітинна баолорю! | зо) | | рози зо о в о бтрооло, | | | | нят о о 9) о карцинома
Плоскоклітинна бтрооло, | | | | нят о о 9) о
Плоскоклітинна соз.|е5| ч аринюма. простою! | | | | | ет о| о | о) о
Плоскоклітинна нтророо| | | | рози з о |з) о ееролеюро! | || рози юю о юю) о карцинома
Плоскоклітинна нтропою| | | | роз ю/ ою) о
Плоскоклітинна бтлодо! | |) | | неято ооо
Плоскоклітинна -ролеюро! | | розич юю) о юю) о се|ча) ч рмюма | лою | | | (ет о) оо о карцинома
Плоскоклітинна сю|чв) ч армюма | пою | | | (ет о) оо о
Плоскоклітинна си|е7| м ариюма || ооо! | | | | рози юю) о |юо) о
Плоскоклітинна ст|вв) ч ариюма | плорюю | | / | (ет о) о о о (ної | 58| Ч )|Аденокарцинома| Ш | |100|100Ї | / | | позит/лоо! о |т100| о
Плоскоклітинна не. 55| ч ариюма. "ою | | | | | ет о| о | о) о
Плоскоклітинна нов) Ж адмюмає | оворос ю| | | рози! ю| о /ю о
Плоскоклітинна нм|т| Ж адмюма | подо | | | (ет о) оо о
Плоскоклітинна нов|во| ч (ариюма || |осрю| | | | | рози мо) о |хо| о
Таблиця 26А
ІНС-фарбування ССС стравохідних пухлинних мікрочипів Рапіотісх Е5С1021
Рапіотісх Е5С1021 Стравохідний ТМА
Апікальне і цитоплазматичне ПОЗИ 95 ПО-| 95 ПО- Н Н фарбування (відсоток) / ЗИТ. | ЗИТ.
Поло- Сте- ження Стать патологія пінь ОСІ ОА 11-СІ1-А|2-СІ2-А|3-С | 3--А ІНЕГАТ.) Цито | Апікал |Цито| Апікал чіпа
Плоскоклітинна ное|59| ч рима | 00050) 50) | | розит мо о тво о
Плоскоклітинна ног|ве) ч аршииюма | лою | | | (ет о| о о о ное|55| ч рима | (оорюю! | | | | розит юю о | о карцинома
Плоскоклітинна ное|в5| ж | ариюма || | | | | (нт о о | о
Карциноидная | Модлоо! | | | | | (нЕГАТІ 0 | о |0| о нм|55| з |ориюма | | | | | | | (|нелт о о |0 о карцинома не|со| ч |сввнийрю | | | | | | | (| о | о | о| о ованньй рак
Таблиця 268
Узагальнені результати фарбування ССС в стравохідних пухлинних мікрочипах Рапіотіс5
ЕБЗС1021
Загальна Загальна до ПОЗИТ. до ПОЗИТ. Н Н т. нац Ресї
КІЛЬКІСТЬ КІЛЬКІСТЬ
28 | 71 .ЮЙ1 39 | 4 | 57 | 96 | 595
Таблиця 27А
ІНС-фарбування ССС в стравохідних пухлинних мікрочипах 05 ВіомМах Е5З8010 - частина 1
О5ВіоМах Е5З8010 Стравохідний ТМА-Частина 1 - - Чо
Апікальне і цитоплазматичне позит/ по- то ПО- Н Н фарбування (відсотою) зИт ЗИт.
Поло- Апіка ження Стать | патологія степінь ) 0С | 0А І11-С11-А|2-С|2А|З3-С | 3-А | НЕГАТ. |Цито| Апікал |(Цито л чіпа
Атбвв| з оршнюма. | 7 (50 | | | пот во) о во) о карцинома
Плоскоклітинна
Аз ове| ч оршюма. | 1 (50 00 | 50) Зпозит во) о тво) о
Плоскоклітинна
Ав |вг| ч ариюма. | 2 (500 | |2| / | пот о о || о
Плоскоклітинна
Агве| ч рю. | 1 | М 0079) 830) позит мо) о /гво) о ле яє| ч оршюма. | 1 |50Мю 050) | | Зпозит во) о 100) о карцинома
Плоскоклітинна в'е| ч ершюма. | "7 |0Моюо | |з) Цпозит во) о 120) о
Плоскоклітинна ван) Ж аршин. | "7 Голо | | | | |нейт о о | о| о
Плоскоклітинна веовг| ч оршнюма. | 2 (500 0 | || пот тю) о зо) о во) з оршюма. | 7 (508 30) | | позит во) о во) о карцинома
Плоскоклітинна ве ове| ч рю. | 2 | | | | пот зо) о зо) о ст |65| Ч |Плоскоклтинна | 1 (10001100! | | | | | унЕГАТ 0 о |о | о
Таблиця 27А
ІНС-фарбування ОСС в стравохідних пухлинних мікрочипах 05 Віомах Е5З8010 - частина 1
О5ВіоМах Е5З8010 Стравохідний ТМА-Частина 1 . . о То
Апікальне і цитоплазматичне позит./ по- о ПО- Н Н фарбування (відсотою) ЗИтТ ЗИт.
Поло- Апіка ження Стать | патологія степінь | ОС | ОА 11-С)1-А|2-С|2-А|3-С|3-А | НЕГАТ. ІЦито| Апікал |Цито л чіпа 1 7.7 Ікарцдинома.7/77 Її 1 ЇЇ 17 1717 17 17Г171717717717171
Плоскоклітинна оз |5ю з орикюма. | 2 (80001 | | | пози) ю| ою о
Плоскоклітинна св |во| чари. | 2 (7000) | || / | (пот о |во| о ст|е| ж (аршин. | 2 (500 | |2| / | пот о о || о карцинома
Плоскоклітинна се |ве| Ж аршиююма. | 2 (500020) | | / | пот го) о | го) о
Плоскоклітинна с) з ордиюма. | 2 (8000! |) | Зпозит|о| о о
Плоскоклітинна оз || ч ариююма. 0 | 2 (600) | | / | пот єю о || о ов || ч ариююма. 0 | З (500 | || / | пот ю/ о |2о| о карцинома
Плоскоклітинна о || Ж аршиюма. 2 | 2 | 0017) 50)! | Цпозит мо! о |то| о
Плоскоклітинна се |з Ж оринюма. | 2 (500020 | | 00 Зпозит|2о)| о го о
Плоскоклітинна е|е| ч (аршин. | 2 (800) | | / | пот го) о | 2о| о вв || ч (рима | З Голо | | | | |нейт о о | о| о карцинома
Плоскоклітинна но |е| ч аршиююма. | 2 (500020) | | / | пот го) о | го) о
Плоскоклітинна ев ж ордиюма. | 3 ооо! | | | нет о ооо
Плоскоклітинна ве || Ж (ариюма. 0 | 2 (3000) | | / | пот м о | | о
Плоскоклітинна з (аршин | 2 Голо | | | | |неяк о о | о| о
Плоскоклітинна
ЕЗ ч |карцинома (рідко 20 |100 позит. тканина стравоходу) єв |з) ч ариюма | 2 Голо | | | | |нейт о) о | о | о карцинома
Карциномаійпзйш| - | пооілоо! | | | | позит/ло0) 0 /т100| о
Плоскоклітинна ге || Ж рима. | 2 Голо | | | | |неят о) о | о| о ст|е| ж рима. | 2 Голо | | | | |нейк о о | о| о карцинома
Плоскоклітинна оз |57| ч аршиюма | З Голо | | | | |нейт о о | о| о
Плоскоклітинна св | з ордиюма. | З ооо! | | | | нет о| ооо
Плоскоклітинна ст |вв| Ж аршин. | З ото | | | | |неят о) о | о| о се || Ж аршин. | З Голо | | | | |нейт о о | о| о карцинома
Плоскоклітинна но) ч (аршин | З Голо | | | | |нейт о о | о| о
Плоскоклітинна на |в з ордиюма. | 2 (8000! || | пози |ю| о го
Плоскоклітинна нео |ве| ч (ариюма. 0 | 3 ото | | | | |неят о) о | о| о
Плоскоклітинна не ж (аршин | З Голо | | | | |нейт о о | о| о
Плоскоклітинна не || ж (аршин | З Го! | | | | | ЦЧнеят о) о | о | о
Таблиця 278
Узагальнені результати фарбування ОСС в стравохідних пухлинних мікрочипах
ВіомМах Е58010 - частина 1
КІЛЬКІСТЬ КІЛЬКІСТЬ
| 071 38 | 0 | 24 | 40 | бо
Таблиця 27С
ІНС-фарбування ССС в стравохідних пухлинних мікрочипах 5 ВіомМах Е58010 - частина 2
Апікальне і цитоплазматичне фарбування (відсоток) позиг/ по-упеу| н Н
ЗИТ. | ЗИТ.
Поло- сте- Апіка Апіка ження Стать) патологія пінь ОС | ОА 114-211 А2-СІ2АЇ3-С|3-АЇ| НЕГАТ. | Цито л Цито л чіпа
Рак поруч з нормальною
Аг Ч | тканиною стравоходу 1001100 НЕГАТ. (хронічне запалення слизової оболонки)
Рак поруч з
А 56 Ч | нормальною 50 11001 50 пОоЗИит.| 50 50 тканиною стравоходу
Рак поруч з
Аб 62 Ч | нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу
Рак поруч з нормальною тканиною
АВ 58 ч стравоходу(хронічне запалення слизової оболонки)
Рак поруч з
АТО | 46 Ч | нормальною 20 |100 поЗзит. тканиною стравоходу
Рак поруч з в2г 43 Ч | нормальною 70 11001 30 пОоЗИит.| 30 0) тканиною стравоходу
Рак поруч з ва 61 Ж | н нормальною 1001100 НЕГАТ. тканиною стравоходу
Рак поруч з 62 Ч | нормальною 70 100 0) пОоЗИит.| 30 тканиною стравоходу
Рак поруч з вв 50 Ч | нормальною 20 |100 поЗзит. тканиною стравоходу
Рак поруч з во Ч | нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу
Рак поруч з
Се 65 Ч | нормальною 1001 70 30 ПпОЗИТ. | 100 130 тканиною стравоходу
Рак поруч з
С4 50 Ч | нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу
Рак поруч з сб Ч | нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу св /зе| ж нормальною | 1 ророї | | | | Чпозит|мо| о | оо о нормальною
Таблиця 27С
ІНС-фарбування ОСС в стравохідних пухлинних мікрочипах
ВіомМах Е58010 - частина 2
Апікальне і цитоплазматичне т т фарбування (відсоток) позитупо-|по| н й
ЗИТ. | ЗИТ.
Поло- сте- Апіка Апіка ження Стать) патологія пінь ОС | ОА 114-211 А2-СІ2АЇ3-С|3-АЇ| НЕГАТ. | Цито л Цито л чіпа 7171 І|тканиноюстравоходу|,77Г/ | | Її її 1 ЇЇ її 1 1 1
Рак поруч з сен ни и || реве тканиною стравоходу
Рак поруч з нормальною тканиною рег 43 ч стравоходу (хронічне 50 11001 50 пОоЗИит.| 50 50 запалення слизової оболонки)
Рак поруч з нормальною ра 62 ч тканиною стравоходу 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 (рідко тисоза)
Рак поруч з 62 Ч | нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу
Рак поруч з нормальною
Ж | тканиною стравоходу 1001100 НЕГАТ. (хронічне запалення слизової оболонки)
Рак поруч з 010 | 54 | Ж |нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу
Рак поруч з
Е2 48 Ч | нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу
Рак поруч з
Е4 57 Ч | нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу
Рак поруч з
Еб6 58 Ч | нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу
Рак поруч з нормальною
ЕВ 53 Ж | тканиною стравоходу 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 (хронічне запалення слизової оболонки)
Рак поруч з
ЕТО | 56 Ж | н нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу
Рак поруч з нормальною тканиною гг 76 ч стравоходу (хронічне 70 11001 30 пОоЗИит.| 30 0) запалення слизової оболонки)
Рак поруч з 4 Ч | нормальною 20 |100 поЗзит. тканиною стравоходу
Рак поруч з
Е6 53 Ч | нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу
Рак поруч з нормальною
Е8 49 Ж | тканиною стравоходу 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 (хронічне запалення слизової оболонки) (то | 62 | Ж |Ракпоручзз | - | лооМосї | | | | (позит|тл00) о |т00| о
Таблиця 27С
ІНС-фарбування ОСС в стравохідних пухлинних мікрочипах
ВіомМах Е58010 - частина 2
Апікальне і цитоплазматичне т т фарбування (відсоток) позитупо-|по| н й
ЗИТ. | ЗИТ.
Поло- сте- Апіка Апіка ження Стать) патологія пінь ОС | ОА 114-211 А2-СІ2АЇ3-С|3-АЇ| НЕГАТ. | Цито л Цито л чіпа 101 танюоосвююю! || 11111111 тканиною стравоходу
Рак поруч з нормальною тканиною стравоходу се 448| Ж (Гладкий м'яз і 20 1100 поЗзИит. тканина слизової залози)
Рак поруч з нормальною тканиною стравоходу са 57 ч (фіброзна тканина, 20 1100 поЗзИит. кровоносна судина і гладкий м'яз тканина)
Рак поруч з нормальною аб 45 Ч | тканиною стравоходу (Гладкий м'яз тканини)
Рак поруч з ав 55 Ж | н нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу
Рак поруч з ато | 53 Ж | н нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу
Рак поруч з нормальною нг Ч | тканиною стравоходу 70 11001 30 пОоЗИит.| 30 0) (хронічне запалення слизової оболонки)
Рак поруч з на 64 Ч | нормальною 1001100 НЕГАТ. тканиною стравоходу
Рак поруч з не 55 Ч | нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу
Рак поруч з нормальною на 53 Ж | тканиною стравоходу 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 (хронічне запалення слизової оболонки)
Рак поруч з
НІО | 54 | Ж |нормальною 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 тканиною стравоходу
Таблиця 270
Узагальнені результати фарбування ССС в стравохідних ТМА 05 ВіомМах ЕЗ8010 - частина 2
КІЛЬКІСТЬ КІЛЬКІСТЬ
776. | .ЮЙйо0 Б Ю.ї1 75 | 0 | 34 | з8 | 8995
Таблиця 28А
ІНС-фарбування ОСС в легеневих пухлинних мікрочипах ОЗ ВіомМах І С20813
О5Віотах І С20813 Легені ТМА
Апікальне і цитоплазматичне МИ фарбування (відсоток) позитг/ по-|по-у| н Н роу д зит.|зит.
Поло- Стат сте- Апі- Апі- ження Ь патологія пінь ОС | ОА |114С11А2-С|І2-А|3-С) 3-А | НЕГАТ. |Цито кал Цито кал лог члені армюма | 1 ооо 100 нат оо) о о карцинома -| Плоскоклітинна ле |вз| члені арикюма 0 | 2 ооо 00 нат оо) о о -| Плоскоклітинна дз || члені рююма | 2 ооо | | | 1 1 Знежт ооо о -| Плоскоклітинна ооо ж легені ярма. | ооо 00 нет оо о о
Ар ж лені армюма 0 | 2 ооо 00 нет оо) о о карцинома -| Плоскоклітинна шрцинома (ід СОЮ | 1100 нет о ооо -| Плоскоклітинна
Ат |в| члені ярюма | 2 рою | | | 1 | Знежт ооо о -| Плоскоклітинна ле ово члені армнюма. 0 | ооо 00 нет оо о о ле |ве| члені ярма | 2 ооо 00 нет оо) о о карцинома -| Плоскоклітинна ато ев) ч легені арцивюма | 2 ооо 00 нет оо) о о -| Плоскоклітинна оАпфеі| ч |леені рюма | 2 рою | | | 1 | Знежт ооо о -| Плоскоклітинна аг |во| чо легені армнюма. 0 | ооо 00 нет оо о о ліз не) члені армнюма 0 | 2 ооо 00 нет оо) о о карцинома -| Плоскоклітинна ам Ц|ве| члені арка | 2 ооо 00 нат оо) о о -| Плоскоклітинна ол (в) члені рюма | 2 ооо | | | 1 1 Знежт ооо о -| Плоскоклітинна ол || ж легені армюма. 0 | ооо 00 нет оо о о -| Плоскоклітинна вве) члені арююма 0 | 2 ооо 00 нат оо) о о -| Плоскоклітинна ве вв) члені аркюма 0 | 2 ооо 00 нат оо) о о -| Плоскоклітинна ва || члені рюма | 2 рою | | | 1 1 Знежт ооо о -| Плоскоклітинна ве |ее| члені армнюма. 0 | 2 300050 00000 пози во о | во) о -| Плоскоклітинна овео|нв| члені аркюма | 2 ооо 00 нат оо) о о -| Плоскоклітинна ве || члені арикюма 0 | 2 ооо 00 нат оо) о о -| Плоскоклітинна вто) члені рюма | 2 рою | | | 1 1 Знежт ооо о -| Плоскоклітинна вве члені армюма 0 | ооо 00 нет оо о о -| Плоскоклітинна ве || ж лені арка. | 2 ооо 00 нет оо) о о -| Плоскоклітинна ов (в) члені рю | 2 ооо | | | 1 1 Знежт ооо о ов |т| члені ярма | ооо 1 нет оо | о о карцинома віз |вг| члені армнюма | 2 ооо 00 нет оо) о о карцинома
Плоскоклітинна
В13 |64| Ч |Легені| карциномаз 2 |1001100 НЕГАТ. некрозом
Таблиця 28А
ІНС-фарбування ОСС в легеневих пухлинних мікрочипах ОЗ ВіомМах І С20813
О5Віотах І С20813 Легені ТМА
Апікальне і цитоплазматичне МІ фарбування (відсоток) позит/по-|по-| н Н
ЗИ. |ЗИТ.
Поло- Стат сте- Апі- Апі- ження Ь патологія пінь ОС | ОА |114С11А2-С|І2-А|3-С) 3-А | НЕГАТ. |Цито кал Цито кал
Плоскоклітинна
В14 |61| Ч |Легені| карциномаз З 100| 10 ПпОЗИТ.| 10 10 некрозом -| Плоскоклітинна ові |ви| члені армнюма. 0 | ооо 00 нет оо о о -| Плоскоклітинна віє |в члені аркюма 0 | 2 ооо 00 нет оо) о о -| Плоскоклітинна ост|вв| члені ариююма | 2 ооо 00 нат оо) о о -| Плоскоклітинна оса |з члені оринома. 0 | ооо | 1100 нет о ооо
Плоскоклітинна
С3 176| Ч |Легені| карцинома (рідкодї 2 1|100|100 НЕГАТ. з некрозом -| Плоскоклітинна се |во| члені армюма 0 | ооо 00 нет оо о о осв |ее| члені арнюма. 0 | 2 ооо 00 нет оо) о о карцинома
Плоскоклітинна
Св 1|76| Ч |Легені | арцинома 1001 100 НЕГАТ. (легеневі тканини)
Плоскоклітинна -| карцинома
С7 |70| Ч |Легені (пухлинний некроз) -| Плоскоклітинна осв |ве члені зрнома. 0 | ооо | 1100 нет о ооо
Плоскоклітинна карцинома -| (бронхи,
С9 Ч |Легені фіброзна тканина 1001100 НЕГАТ. ї кровоносна судина) сто |ев| члені ариюма (21 1 1 1 111 карцинома спе) члені ярма. | 2 9000 о 00 дпозит тю о | о) о карцинома -| Плоскоклітинна сте |ее| члені арцкюма | 2 9000 о 00 дпозит тю о | о) о -| Плоскоклітинна ост |5а члені рима. 2 | оре 110000 фпозит мо о тю о -| Плоскоклітинна ост |ве| члені арка | 600 00 пози) єю о| го о ств |во| члені арнюма. 0 | 27000130 00 |позит зо о) зо) о карцинома
Плоскоклітинна карцинома (хрящ, хронічне .| запалення
С16 59) Ч |Легені фіброзної тканини і кровоносних судин) -| Плоскоклітинна сфе члені орнома. 0 | 2 ооо | 1100 нет о ооо -| Плоскоклітинна се |ве| члені армюма. 0 | С ооо 100 нет оо о о оз |вг| ч |лечні арикюма | 2 ооо | | | | 1 |негат оо | о | о карцинома
Таблиця 28А
ІНС-фарбування ОСС в легеневих пухлинних мікрочипах ОЗ ВіомМах І С20813
О5Віотах І С20813 Легені ТМА
Апікальне і цитоплазматичне МІ фарбування (відсоток) позит/по-|по-| н Н
ЗИ. |ЗИТ.
Поло- Стат сте- Апі- Апі- ження Ь патологія пінь ОС | ОА |114С11А2-С|І2-А|3-С) 3-А | НЕГАТ. |Цито кал Цито кал -| Плоскоклітинна о |ве| члені армюма 0 | ооо 00 нет оо о о -| Плоскоклітинна ов |не| члені аркюма | 2 ооо 00 нат оо) о о -| Плоскоклітинна ово) члені рюма | 2 ооо | | | 1 1 Знежт ооо о -| Плоскоклітинна ог |ве| члені арка |З 9000 9 00 |позит тю о | го) о ов о|вв| ж лені армнюма | 2 ооо 00 нет оо) о о карцинома -| Плоскоклітинна се |яв| члені арнюма | 2 80002 000 |позит го ого) о -| Плоскоклітинна оо || члені рюма | 2 ооо | | | 1 1 Знежт ооо о оом|т| члені ярма | ооо 1 нет оо | о о карцинома ріг |ев| члені армнома. 0 | 2 5000150 0000 |позиту во о) во) о карцинома -| Плоскоклітинна ота |вг| члені арикюма | 2 ооо 00 нет оо) о о -| Плоскоклітинна оо |в) ч легені рююма | 2 ооо | | | 1 1 Знежт ооо о -| Плоскоклітинна отв |вт| члені ярма | ооо 00 нет оо о о оте |то| члені арнюма 0 | 2 ооо 00 нет оо) о о карцинома -| Плоскоклітинна оєб|ве) члені арююма | 2 ооо 00 нат оо) о о -| Плоскоклітинна се |в) члені яриююма | 2 (50105! | | | Зпозит|о| о) о -| Плоскоклітинна оз |в члені армюма 0 | ооо 00 нет оо о о ов |т| члені армюма 0 | ооо 100 нат оо) о о карцинома -| Плоскоклітинна он о|е| ж лені аркюма | 2 ооо 00 нат оо) о о -| Плоскоклітинна вв) члені срюма | 2 рою | | | 1 | Знежт ооо о -| Плоскоклітинна еф ж лені армюма 0 | ооо 00 нет оо о о
Плоскоклітинна
ЕВ /|64| Ч |Легені| карцинома (легеневі тканини)
Плоскоклітинна
Е9У 165| Ч |Легені) карциномаз 2 |1001100 НЕГАТ. некрозом -| Плоскоклітинна ого |вз| ч легені рцююма | 2 ооо | | | 1 1 Знежт ооо о -| Плоскоклітинна ем |вг| члені армюма 0 | 2 ооо 000 дпозиту юю о |тоо| о ов |вв| ж лені ярма. (2 ооо 000 фпозитітюю о |тоо) о карцинома -| Плоскоклітинна овз|л| члені аршкюмає | 2 00/50 30 20 |позит/тюю! о |то| о -| Плоскоклітинна єм |е| члені ериюма 012 | ооо! | | 1 1 Дпозит|юю! о тю о -| Аденосквамозна ов || ж льні армюма | (3000150 000 пози во о | во) о тб |67| Ж |Легені|Аденосквамозна| - | (|100150| Щ|40| |т10| (|позит.|т00| о |т160| о
Таблиця 28А
ІНС-фарбування ОСС в легеневих пухлинних мікрочипах ОЗ ВіомМах І С20813
О5Віотах І С20813 Легені ТМА
Апікальне і цитоплазматичне МІ фарбування (відсоток) позит/по-|по-| н Н
ЗИ. |ЗИТ.
Поло- Стат сте- Апі- Апі- ження Ь патологія пінь ОС | ОА |114С11А2-С|І2-А|3-С) 3-А | НЕГАТ. |Цито кал Цито кал 1701771 карцинома.7//.7 ЇЇ | | 71 1 1 1 1 1 СГ 771 1 1 1 -| Аденосквамозна оф ож олені ринома. | С |0рююво| 1101000 фповит во ово о -| Аденосквамозна оте Це члені армюма | ооо 100 нет оо о о є || члені армюма | С ооо 100 нат оо) о о карцинома -| Аденосквамозна ве || ж лені шрююмає | 1500050 00000 |позиту во ово) о -| Аденосквамозна є о|вв о чолеені руна. | | ово 1500000 повит мо о тво о -| Папілярнааденок осв о|врфж лені зро ооо 10 |неат оо | о | о
ОР? |61| Ч |Легені(Аденокарцинома! 2 | | |80| 201501 | 50 (позит. 8 |60| Ж |Легені|Аденокарцинома| 2 |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о ге |62| Ж |Легені|Аденокарцинома| 2 |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о ото |38| Ч |Легені|Аденокарцинома| 2 |100|100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | о | о 11 |42| Ж |Легені|Аденокарцинома| 2 |50Щ180150|20| | | | у|позит. 2 |56| Ж |Легені|Аденокарцинома| 2 |100|100ї | | | | | нЕГАТ | 0 | 0 | о | 0 (Із |59| Ч Легені |(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о мя Ц|вз| члені арка. | 60002 00 фпозит го о | го) о (15 |68| Ж |Легені|(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о ме || ж лені знеюююм | ооо 0 нет оо) о о з некрозом
Аденокарцинома (хронічне запалення 21 |56| Ж /Легені | фіброзної тканини і кровоносних судин) -| Папілярнааденок сг |во| члені зрнома | 00 оо юю 0 пози го о | зо) о -| Папілярнааденок осз|е| члені зрдномає 2 0002 00 |позит го ого) о -| Папілярнааденок се |ве| члоені дю (21 1 1 11 -| Папілярнааденок осв |в Ж олені рнома 1 ооо | 1100 нет о ооо -| Папілярнааденок осв |ве| члені зрнома | ооо 100 нет оо о о -| Папілярнааденок ст || члені зрднома 2 ооо 100 нат оо) о о -| Папілярнааденок осв |в ж лені зрднома | ооо 00 нат оо) о | о 89 |72| Ч |Легені|(Аденокарцинома| З |50Щ|100150| | | | | (позит| 50 0 |50/ о сло |53| Ж |Легені|(Аденокарцинома| 2 |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о -| Папілярнааденок опе) члені зривом 000 09 00 |позит тю о | го) о ост |в| ж лені зривом 12 ооо 100 дпозитітюю о |тоо) о арцинома -| Папілярнааденок ості ж лені зрдкома 2 70002 о 0 |позит зо оо о риса 2 ооо! | || нет ооо | о (с15Щ|49| Ч |Легені|Аденокарцинома| 2 | |т001100Ї | | | | позит.|тло00)| о |т100| о (16 |58| Ч Легені |(Аденокарцинома| 2 | |т001100! | | | | (|позит.|то00| о 100) о ні 62) чЧ |Легені|Аденокарцинома| 2 100901 |т10| | | | позит о | 10 | о | 10 на |54| Ж |Легені|Аденокарцинома| З |т00|1100Ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 | о
Таблиця 28А
ІНС-фарбування ОСС в легеневих пухлинних мікрочипах ОЗ ВіомМах І С20813
О5Віотах І С20813 Легені ТМА
Апікальне і цитоплазматичне МІ фарбування (відсоток) позит/по-|по-| н Н
ЗИ. |ЗИТ.
Поло- Стат сте- Апі- Апі- ження Ь патологія пінь ОС | ОА |114С11А2-С|І2-А|3-С) 3-А | НЕГАТ. |Цито кал Цито кал -| Аденокарцинома онзозе| члені ефроюмо | 2 оо | | | | | Цнеят|о| о о о на |68| Ч |Легені|(Аденокарцинома| 2 |50Щ|100150| | | | | (позит| 50 0 |50/ о
Нн5 64) Ж |Легені|Аденокарцинома| 2 (1001100! | / | | | нЕГАТ 0 0.0 о не |41| Ж |Легені|(Аденокарцинома| - |90|100110| | | | | (позит| то 0 |10/ о
НУ 40) Ч |Легені|Аденокарцинома| З (1001100! | / | | | нЕГАТ 0 0.0 о -| Аденокарцинома не |вв| ж лені здооюм |З ооо 100 нет ооо о -| Аденокарцинома онеове| члені зероюми |З оо | | | | | Ц|неят|о| о о) о винна 0200 тю! || 0 повит вршеома 20020! | | | позит|2о| о го) о знедоюми (2 | ово 20) | | позит)тюю| о | то) о о нІіЗз 60) Ч |Легені|Аденокарцинома| 2 (1001100! | / | | | нЕГАТ. 0 |0о 0 о
Нтя |64| Ж |Легені|Аденокарцинома| 2 |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о нів (82) Ч |Легені|Аденокарцинома| З |100|90| /10/ | | | позит. о | 0 у то /НІіб |60| Ч |Легені|(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о 50) Ж |Легені|(Аденокарцинома| З |50Щ|100150| | | | | (позит| 50 0 |50/ о 12 46) Ч |Легені|Аденокарцинома| З (1001100! | / | | | нЕГАТ. 0 | о 0 | о зов олеені до 3 ІІ 111111 и (51, Ч Легені |(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о 15 Щ70| Ч |Легені|(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о 16 67) чЧ |Легені|Аденокарцинома| З | |10|60/ /201|30| 20) 60 |позит./ 100 90 | 160 | 240 17 (36, Ч Легені |(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о 18 349) Ч |Легені|Аденокарцинома| З (1001100! | / | | | нНЕГАТ. 0 |0о 0 о 9 Щ|60| Ч |Легені|(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о мо |39| Ж |Легені|(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о мл (65) чЧ |Легені|Аденокарцинома| З | (|т001100ї | | | | позит.тлоо! о |т00| о
Ме |69| Ж |Легені|(Аденокарцинома| З | |100170| |з30|! | | (|позит.|тл00| о /|130/ о
З 751 Ч |Легені|Аденокарцинома| З (1001100! | / | | | нЕГАТ. 0 |0о 0 о 4 (|75| Ч Легені |(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о 61) Ж |Легені|Аденокарцинома| З | (|1001100ї | | | | позиттло0і о (100 о 6 (|44| Ч |Легені|(Аденокарцинома| З (100901 |т10| | | | (позит.| 0 |10 | 0) 10 91 |59| Ч Легені |Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о 92 |68| Ж |Легені|Аденокарцинома| З |80|100|201 / | | | позит/ го о |20 | о -| Аденокарцинома зв овв| члені осроюми |З оо | | | | | Ц|неяг|о| о о о -| Аденосквамозна зе |ев| члені арка. | 17000130 00000 фпозит зо о) зо) о 95 39) Ч |Легені|Аденокарцинома| З |80|100|201 / | | | позит/ го | о |20 | о 96 |74| Ч |Легені|(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о 97 501 Ч |Легені|Аденокарцинома| - (1001100! | / | | | нНЕГАТ. 0 |0о 0 о 98 |36| Ж |Легені|(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о 99 |46| Ч |Легені|(Аденокарцинома| З |90|100110| | | | | (позит| то 0 |10/ о ло 69) Ч |Легені|Аденокарцинома| З |50|1100|501 / | | | позит/ 50 | 0 150 о 11 |30| ЧУ Легені |(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о лег |651 Ч |Легені|Аденокарцинома| З (1001100! | / | | | нНЕГАТ. 0 |0о 0 о 13 |52| Ч |Легені|(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о 14 |66| Ч |Легені|(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о |47| Ч |Легені|Аденокарцинома| З (1001100! | / | | | нЕГАТ 0 0.0 о 316 |52| Ж |Легені|(Аденокарцинома| З |90|100110| | | | | (позит| то 0 |10/ о
Кт 58) Ж |Легені|Аденокарцинома| З (1001100! | / | | | нЕГАТ 0 |о0 0 о
Ка |46| Ж |Легені|(Аденокарцинома| З |50Щ|100150| | | | | (позит| 50 0 |50/ о
КЗ |69| Ч |Легені|(Аденокарцинома| З |1001100ї | | | | | |нЕГАТ | 0 | 0 | 0 о ка |58| чЧ |Легені|Дрібноклтинна | - |чо0|100| | | | | | нЕГАТ | о | о 0 | о
Таблиця 28А
ІНС-фарбування ОСС в легеневих пухлинних мікрочипах ОЗ ВіомМах І С20813
О5Віотах І С20813 Легені ТМА
Апікальне і цитоплазматичне МІ фарбування (відсоток) позит/по-|по-| н Н
ЗИТт.|ЗИТт.
Поло- Стат сте- Апі- Апі- ження Ь патологія пінь ОС | ОА |114С11А2-С|І2-А|3-С) 3-А | НЕГАТ. |Цито кал Цито кал 7711711 кардинома.ї7/77/ | | | Її 7 7/1 17 17 Г7771717177171 -| Дрібноклітинна
КБ 151) Ч |Легені карцинома 100|100 НЕГАТ. -| Дрібноклітинна
Кб 163| Ж |Легені карцинома 100|100 НЕГАТ. оковв| члені риюма 0 | 00 | | | | | |неяг|о| о о о карцинома -| Дрібноклітинна кв во! Ч Легені карцинома 100|100 НЕГАТ. -| Дрібноклітинна
КО 163| Ч |Легені карцинома 100|100 НЕГАТ. -| Дрібноклітинна кто вв! Ч Легені карцинома 100|100 НЕГАТ. ки олеені риюма | оо | | | | | Ц|неяг|о| о о о карцинома ока во) члені рома | оо | | | | | |неяг|о| о о о карцинома -| Дрібноклітинна
КІЗ |31| Ж |Легені карцинома 100|100 НЕГАТ. -| Дрібноклітинна
К14 |61| Ч |Легені карцинома 100|100 НЕГАТ. ків ва| ж лені риюма | 00 | | | | | |неяг|о| о о о карцинома -| Дрібноклітинна
К16 вв! Ж |Легені карцинома 100|100 НЕГАТ. -| Дрібноклітинна
Ії 143| Ж |Легені карцинома 100|100 НЕГАТ. -| Дрібноклітинна 2 156| Ч |Легені карцинома 100|100 НЕГАТ. -| Дрібноклітинна
ІЗ 1|62| Ч |Легені карцинома 100|100 НЕГАТ. омоде|ж лені рю | оо | | | | | нят) о| о о о карцинома
Дрібноклітинна карцинома і5 59) ж |Легені| Фіброзна 100 | 100 НЕГАТ. тканина і кровоносна судина) -| Дрібноклітинна
Їб 155| Ж |Легені карцинома 100|100 НЕГАТ. -| Дрібноклітинна 7 |28| Ч |Легені карцинома 100|100 НЕГАТ. ощвоове| члені риюма | 00 | | | | | |неяг|о| о о о карцинома оч олетні | мою | | | | | Ц|неяг|о| о о о опо(||ж|леен рю | юю | 1) пози тю о | о) о нтде| членів | оз! | | | | Цпозит|зо| о зо о мав ж летів | ото | | | | | Ц|неяг|о| о о о
Бронхоальвеоляр омзовв| ж лені раю | оо | | | | | |неяг|о| о о о
Бронхоальвеоляр ше |вг| члені дйраю | оо ю 100 дпозит тю о | о) о вийраю ооо | | | | | нет оо о о (76 |64) Ж |Легені|Бронхоальвеоляр| - |100|100| | | | | | нЕГАТ / о | о 0 | о
Таблиця 28А
ІНС-фарбування ОСС в легеневих пухлинних мікрочипах ОЗ ВіомМах І С20813
О5Віотах І С20813 Легені ТМА
Апікальне і цитоплазматичне МІ фарбування (відсоток) позит/по-|по-| н Н
ЗИ. |ЗИТ.
Поло- Стат сте- Апі- Апі- ження Ь патологія пінь ОС | ОА |114С11А2-С|І2-А|3-С) 3-А | НЕГАТ. |Цито кал Цито кал 7 77177171 Інийраї././ ЇЇ ЇЇ 17 71771717 121111
Муцинозний
МІ 159) Ч |/|Легені | бронхоальвеоляр 1001100 НЕГАТ. ний рак
Муцинозний
М2 1|50| Ж |Легені | бронхоальвеоляр ний рак (рідко)
Муцинозний
МЗ |27| Ч |Легені | бронхоальвеоляр 1001100 НЕГАТ. ний рак
Муцинозний
МА 148| Ч |Легені | бронхоальвеоляр 1001100 НЕГАТ. ний рак ра | (юю тю! | | | | поз) ю| о тю о ос інмннй НН НО НИ НИ НОЯ НОЯ КОНЯ НА НАННЯ НА НА АК НА ий рак -| Мукоепідермоїдн мб е| члені раю | ою | | | | | неяк)о| о о о вра | (ою! | | | | пози) ю| о тю о ий рак -| Апікальна омеояе| ч легені ершнодн | 09 | | | | | Ц|неяг|о| о о о -| Апікальна ом |нт| члені арка | оо 100 нет ооо о -| Апікальна ом'ет| олені ершнюда | 09 | | | | | Ц|неяк|о| о о о
Великоклітинна
М12 |65| Ч |Легені| нейроендокрінна 1001100 НЕГАТ. карцинома
Змішана - | великоклітинна
М13 |43| Ч |Легені нейроендокринна 100|100 НЕГАТ. карцинома ма |ве| чо леені рю | оо 1100 нат ооо о ом зе| ж лені | ою | | | | | неяк)|о| о о о м'є|ве| ч |Летні зршнюма | 10 | | | | | Цнеяг|о| о | о | о карцинома
Таблиця 288
Узагальнені результати фарбування ССС в легеневих ТМА 05 ВіоМах І С20813 ду ду АУусі| АУС 2. 2.
Загальна кількість Загальна кількість Р до ПОЗИТ. | 96 ПОЗИТ. Н Н сії 71101112 0 | 15 | ..ЮИю7а4...7.717 | 205 010 10101 юо0 1 21 | о» 810 1101 Б 5 южщ ф5Б | 22 | 2355
Таблиця 29А
ІНС-фарбування ССС в пухлинних мікрочипах лейоміосаркоми/рабдоміосаркоми - - Фо Чо
Апікальне і цитоплазматичне по- | по-!. н Н фарбування (відсотою) зит.!зит ташу пози
Й Діагноз НЕГАТ. ні ні ванн|Ста Орган/ патології/опис |Тип/| ОС | 0А |1--С11 -АІ2--С12А|З3-СІ3А Цито Ап Цито Ап я ть тканина кал кал тканини цент- ру
Фіброзна Високо злоякісна
Ат ч | ве|тканина лейомюсарюма ПВ ПооМоС | | | нет о) о оо
Фіброзна Високо злоякісна
Аг ч |в танина |лейомюсарюма |М6 оо оо | | | нет о оо о
Фіброзна Помірно
АЗ | Ч |26 р злоякісна ІА І100|100 НЕГАТ. тканина пи лейоміосаркома
Фіброзна Помірно
А4 | Ч |26 злоякісна ІА І100|100 НЕГАТ. тканина пи лейоміосаркома
Фіброзна Помірно
АБ | Ж |56 тканина зпоякісна 1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Фіброзна Помірно
Аб| Ж |56 тканина зпоякісна 1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Ат | ж |та|танина |лейсміосарюма | ооо | | | нат о оо о тканина лейоміосаркома
Ав ж |та тканина | лейоміосарюома | ооо | | | нет ооо о тканина лейоміосаркома
Фіброзна Помірно
АЗ | Ч |34 тканина злоякісна ПА /|1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Фіброзна Помірно
ВІ чЧ 134 тканина злоякісна ПА 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 лейоміосаркома
Гладкий Помірно
В2 | Ж |20 мя злоякісна ША 1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Гладкий Помірно
ВЗ| Ж |20 м'яз злоякісна ША 1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Жирова Помірно
В4 |) Ж |49 р злоякісна 1001100 НЕГАТ. тканина пи лейоміосаркома
Жирова Помірно
В5) Ж 149 тканина зпоякісна МЕТІ100 п/а лейоміосаркома
Помірно
Жирова злоякісна
Ж |34 тканина епітеліоїдна 100/100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Помірно
Жирова злоякісна
В7| Ж |34 тканина епітеліоїдна 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 лейоміосаркома
Гладкий Низько злоякісна ізн пожеен яр || (ек
Гладкий Низько злоякісна ве ч |в мя |лойоміосарююма | 500020 | | | позит| 2) ого о , Низько злоякісна ості |ня|звяою З еоміосарюма 6 ооо | | | нет оо оо ' Низько злоякісна осе| ж |на звязка З едоміосарюма | 0000 | | | нет оо о о
Гладкий Помірно сз| Ж м'яз злоякісна 1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Гладкий Помірно б4| Ж м'яз злоякісна 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 лейоміосаркома
Таблиця 29А
ІНС-фарбування ССС в пухлинних мікрочипах лейоміосаркоми/рабдоміосаркоми
Апікальне і цитоплазматичне т ть - по-|по-| нн Нн фарбування (відсоток) зит.!зит ташу позит
Й Діагноз НЕГАТ. ні ні ванн|Ста Орган/ патології/опис |Тип/| ОС | 0А |1--С11 -АІ2--С12А|З3-СІ3А Цито Ап Цито Ап я ть тканина кал кал тканини цент- ру
Гладкий Низько злоякісна ож ве мя |лейомюсарюма |ТА ооо | | 00 |неАт о оо о
Гладкий Низько злоякісна се ж вени |лейоміосарюма | ооо | | | нет о оо о
Гладкий Злоякісна
С7| Ж |54 мя плеоморфна 1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Гладкий Злоякісна с8в| Ж |54 мя плеоморфна 1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Гладкий Низько злоякісна се ж|ве/ мн |лейоміосарюма ("8 ооо | | | |позит|юо| о то о
Гладкий Низько злоякісна оржве мн |лойоміосарюма |" ооо | | | нят оо о о
Гладкий Низько злоякісна ре) ж | мя |лейомосарюма | 80! | | |позит/ю | о
Гладкий Низько злоякісна оз ж в'яне |лейомосарюма | 500050 | | | позит|во| ово о
Гладкий Помірно ра| ч 178 м'яз злоякісна ПА ІМЕТІ100 п/а лейоміосаркома
Гладкий Помірно о51) ч |78 м'ях злоякісна ПА ІМЕТІ100 п/а лейоміосаркома
Гладкий Помірно
Ж 152 м'ях злоякісна ПА /|1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Гладкий Помірно 07 | ж 152 м'яз злоякісна НА ) 50 11001 50 пОоЗзИит.| 50 50 лейоміосаркома
Гладкий Помірно чЧ 161 м'яз злоякісна ПА 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 лейоміосаркома
Помірно злоякісна лейоміосаркома
Гладкий (фіброзна
Ч 161 м'яз тканина, ПА 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 кровоносна судина і гладкий м'яз)
Фіброзна Плеоморфна
ЕТ | Ж |ЗЗ тканина рабдоміосаркома ПА /|1001100 НЕГАТ.
Фіброзна Плеоморфна
Е2 | Ж |ЗЗ тканина рабдоміосаркома ПА /|1001100 НЕГАТ.
Зачеревинн | Ембріональна раодоміосарюома| ЛА ооо || | фпозит)юо | ото о
Зачеревинн | Ембріональна рабдоміосарююма МА| бос | | 0 Зпозит о) о 100, о
Шийка Плеоморфна рабдомюсарюома| 6 00 оо | | | нет ооо о
Шийка Плеоморфна рабдомосаркома| 600 лоо | | | нет ооо о с, Веретеноклітинна рабдоміосарома| МА ооо | | | нет ооо о с, Веретеноклітинна рабдоміосарююма 1А| бос || 0 Зпозит о) о 100, о
Плеоморфна рабдомюсарюома| 6 00 оо | | | нет ооо о
Плеоморфна раодоміосаркома| 6 0оооІ | | | | | |неят|о| о о | о
Таблиця 29А
ІНС-фарбування ССС в пухлинних мікрочипах лейоміосаркоми/рабдоміосаркоми
Апікальне і цитоплазматичне т ть - по-|по-| нн Нн фарбування (відсотою) зит.!зит ташу пози
Й Діагноз НЕГАТ. ні ні ванн|Ста Орган/ патології/опис |Тип/| ОС | 0А |1--С11 -АІ2--С12А|З3-СІ3А Цито Ап Цито Ап я ть тканина кал кал тканини цент- ру
Поперечно- г Ч 130| полосатий | Рабдоміосаркома 1001100 НЕГАТ. м'яз
Поперечно-
ЕЗ Ч 130| полосатий | Рабдоміосаркома 70 1100) З0 пОЗИиТт.| 30 30 м'яз
Ембріональна раодоміссарома| ЛА ооо | | | нят ооо о
Ембріональна рабдоміосарюма| ЛА ОО 1 | 0 нет о ооо
Поперечно" Плеоморфна
Е6 Ч 191 полосатий рабдоміосаркома 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100
Поперечно" Плеоморфна
Е7 Ч 191 полосатий рабдоміосаркома 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100
Плеоморфна рабдомюсарюома| 6 00 оо | | | нет ооо о ож |та пяно З рабдомосарюма| тв оо оо | | | |неят оо о о рабдоміосаркома
Шийка Плеоморфна рабдомосаркома| 600 лоо | | | нет ооо о
Шийка Плеоморфна ребдомісаркюма| ЛВ ооро 1 | 0 |неАТ о ооо
Черевна Ембріональна рабдоміосарюома| 6 00 оо | | | нет ооо о «| ж |но порожнина | рабдоміосарюома| 6 00 оо || | нет о оо о порожнина | рабдоміосаркома
Порожнина | Ембріональна раодоміссарома| 600 лоо | | | нят ооо о
Порожнина | Ембріональна рабдоміосарюма| ЛЕО 1 | 0 нет о ооо
Поперечно" Плеоморфна 027 | Ч |50)| полосатий р ПА /|1001100 НЕГАТ. м'яз рабдоміосаркома
Поперечно" Плеоморфна а8в| ч |50 полосатий рабдоміосаркома ПА 1001100 ПпОЗИТ. | 100 100 ве) ч |10 полоси Альвеолярна 100) 70 30 позит. | 100 130 м'яз рабдоміосаркома І но чоло половатий | альвеолярна БО 1001 БО позит.| 50 5О м'яз рабдоміосаркома І
Шийка Плеоморфна пра нею є | 11 | теат| | в| і в
Шийка Плеоморфна пен ТСН НО НИ НО СЯ СН СХ НС НС сеіеінлсви рот т юрою| | 1 | (тат|» о» о, тканина рабдоміосаркома
М'яка Альвеолярна рабдоміосарома| "6 ооо | | | нет ооо о
М'яка Веретеноклітинна рабдоміосаркюма| А во | | 0 |позит|го ого о
М'яка Веретеноклітинна рабдоміосаріома| А 000020 | | позит|2о) ого о не) з |но|смяниє | рабдоміосарююма| "ооо | | | фпозит)юо! о то о рабдоміосаркома с, Ембріональна рабдоміссарююма| "6 ооо || | фпозит)юо| о то о іо | Ж |48|Матка |Гладкиймяз | - МооМооЇ | | | | | |нЕГАТ | о | о | о | с
Таблиця 29А
ІНС-фарбування ССС в пухлинних мікрочипах лейоміосаркоми/рабдоміосаркоми
Апі - Фо Фо пікальне і цитоплазматичне по- | по-!. н Н фарбування (відсотою) зит.!зит ташу пози
Й Діагноз НЕГАТ. ні ні ванн|Ста Орган/ патології/опис |Тип/| ОС | 0А |1--С11 -АІ2--С12А|З3-СІ3А Цито Ап Цито Ап я ть тканина кал кал тканини цент- ру 12 | Ж |8|Серце |Серцевийм'яз | - ооо! | | | | | |нЕГАТ. | о | о | о | с
Із | Ж |14|Серце |Серцевийм'яз, | - ооо! | | | | | |нЕГАТ | о | о | о | сб
Нормальний е| | пев (море |пароро| | | 3) | |неат о о о о
Ксенотрансплан- 1007 тат людської (аСС293); | ембріональної п/а Ксенотранс | нирки - ССС п/а 100 100 пПОЗИТ. | 100 00 пл. трансфектирован на
Клітинна лінія
Ниркова боі клітинна нирки ембріона п/ла длінія- 293 | ЛЮДИНИ - асс п/ла 100 100 пОЗИТ. | 100 00
НЕК-ОСССЯ? транофектирован
Чкркова Клітинна лінія п/а лінія- 293 нирки ембріона п/а 11001100 НЕГАТ.
НЕК-293| | одини е| | тенет мл м паро! | | | тю) Цво|позит| о то) о | во!
Рак товстої кишки пла| | пани тв млн | / | || » пла| | (паниюз мл М па |во|во|20/1ю| 20 |то|позит| го яо| го) во
СУ НО АК са С СЕЗ З СТ НИ ШО ШО АСУ
Рак товстої кишки е| | тенет млн | / | || »
Рак товстої кишки пла| | пениеє ут лан | / | || -ж пла| | пениют мл М пає) |! Їс2о во |во|позит| во 100) во | ово! ча! | |тениає (мтремю ма|во| ||| |зо| | во|позит.
Таблиця 298
Результати оцінювання негативного контрольного Ар пухлинних мікрочипах лейоміосаркоми/рабдоміосаркоми - - Фо Чо
Апікальне і цитоплазматичне пОЗИиТт./ фарбування (відсотою) НЕГАТ. Зит зит Н Н
Розта- шува- Діагноз - -
Ста Орган/ в Апі- Апі- ння | ть тканина патологіїопис |Тип/| ОС | СА І14С11-А|2-С12-АІЗ3-СІ135А Цито кал Цито кал цент- тканини ру
Фіброзна| Високо злоякісна омо|ч| 85 | танина |лейоміюсарюма (вро тою| | | | | нейт о оо) о
Фіброзна| Високо злоякісна ле | чав данина |лейсмюсарюма (ворог! | | | | нет оо о) о
Фіброзна Помірно
АЗ | Ч | 26 тканина | злоякісна ІА 1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Фіброзна Помірно
А4 | Ч | 26 р злоякісна ІА 1001100 НЕГАТ. тканина пи лейоміосаркома (АБ |Ж/|56|Фіброзна(Помірно |пвІтооітоо| | | | | | УнеЕГАТ| 0 | о | о | о
Таблиця 298
Результати оцінювання негативного контрольного Ар пухлинних мікрочипах лейоміосаркоми/рабдоміосаркоми - - Фо Чо
Апікальне і цитоплазматичне пОЗИиТт./ - по-| по-| Н Нн фарбування (відсотою) НЕГАТ. зит. | зит
Розта- шува- Діагноз - -
Ста Орган/ и Апі- Апі- ння | ть тканина патології/опис |Тип/| 0С | 0А 114-С114-АІ2-СІ2АІЗСІ ЗА Цито кал Цито кал цент- тканини ру тканина | злоякісна лейоміосаркома
Фіброзна Помірно
Аб Ж 56 тканина | Злоякісна 1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Ат ЖІ та панина |лейсмюсарюма | ороІ | 1 | нет ооо о тканина | лейоміосаркома
Ав |Ж|7а данина |лейсмюсарюма |! | | нет ооо о тканина | лейоміосаркома
Фіброзна Помірно
А9З | Ч | 34 тканина | злоякісна ПА |100|100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Фіброзна Помірно
ВІ ЧІ 34 р злоякісна ПА 11001100 НЕГАТ. тканина пудіши лейоміосаркома
Гладкий Помірно
В2 |Ж | 20 мя злоякісна ША /|100|100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Гладкий Помірно
ВЗ |Ж | 20 м'яз злоякісна ША /|100|100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Жирова Помірно
В4 | Ж | 49 р злоякісна 1001100 НЕГАТ. тканина пи лейоміосаркома
Жирова Помірно
В5 |Ж | 49 тканина | Злоякісна 1001100 п/а лейоміосаркома
Помірно
Жирова | злоякісна
Ж |за тканина | епітеліоїдна 100100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Помірно
Жирова | злоякісна
В7 | Ж | 34 тканина | епітеліоїдна 1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома ве|ч|зе мя; |лейсмосарюма | ПоОоІ | | | нет ооо) о
М'яз лейоміосаркома
Гладкий | Низько злоякісна ве |ч|зе мя |лойсмосарюма ЛАП! | | | нет ооо о , Низько злоякісна ост|ж|чє|звяск | едомосарюма (По | | | | нейт о оо) о ' Низько злоякісна сг |ж|ла звяза | сйсмосарюма (оре! | | | нет ооо о
Гладкий Помірно оз Ж м'яз злоякісна 1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Гладкий Помірно с4|Ж м'яз злоякісна 1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома освіжі|ве мя лейсмосарюма | ПоОроІ | | | нет ооо) о
М'яз лейоміосаркома
Гладкий | Низько злоякісна осе|жі|ве мя | дойсмосарюма ЛАП! | 1 | нет ооо о
Гладкий Злоякісна
С7 | Ж | 54 м'ях плеоморфна 1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Гладкий Злоякісна с8 | Ж) 54 м'ях плеоморфна 1001100 НЕГАТ. лейоміосаркома
І се |Ж|58 |Гладкий |Низько злоякісна ПВ|т00|100| | | | 7 | УунНЕГАТ| о | 0 | о | о
Таблиця 298
Результати оцінювання негативного контрольного Ар пухлинних мікрочипах лейоміосаркоми/рабдоміосаркоми - - Чо Чо
Апікальне і цитоплазматичне пОЗИиТт./ - по-) по-| Нн Нн фарбування (відсоток) НЕГАТ. зит. | зит
Розта- шува- Діагноз - -
Ста Орган/ йо Апі- Апі- ння | ть тканина патології/опис |Тип/| 0С | 0А 114-С114-АІ2-СІ2АІЗСІ ЗА Цито кал Цито кал цент- тканини ру 71 м'яз лейомосарюма| | | | | 7/ Її | | Г |! 1 | |!
Гладкий | Низько злоякісна ообожовемяхе о лейоміосарюма (Ле Поороо | | | | нет ооо о
СЕЗ Сен а ССО НІНО І НИ НСС НС НС СТАС
М'ЯЗ лейоміосаркома
Гладкий | Низько злоякісна сов ож в'яне леоміосарюма | оо | | | 0 нет ооо о
Гладкий Помірно ра | ч | 78 м'яз злоякісна ПА |100|100 п/а лейоміосаркома
Гладкий Помірно рові ря | злоякісна НА 1001100 п/а лейоміосаркома
Гладкий Помірно
ЖІ 52 м'ях злоякісна ПА |100|100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Гладкий Помірно 07 |Ж| 52 м'ях злоякісна ПА |100|100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Гладкий Помірно
Ч | 61 м'яз злоякісна ПА |100|100 НЕГАТ. лейоміосаркома
Помірно злоякісна лейоміосаркома
Гладкий | (фіброзна
Ч | 61 м'яз тканина, ПА |100|100 НЕГАТ. кровоносна судина і гладкий м'яз)
Фіброзна| Плеоморфна
ЕІ |Ж | З3 тканина | рабдоміосаркома ПА |100|100 НЕГАТ.
Фіброзна| Плеоморфна
Е2 |Ж | З3 тканина | рабдоміосаркома ПА |100|100 НЕГАТ.
Зачерев Еморіональна
ЕЗ | Ч | 21 | инний - ША1І1001|100 НЕГАТ. - рабдоміосаркома простір
Зачерев Еморіональна
Е4 | Ч | 21 | инний - ША1І1001|100 НЕГАТ. - рабдоміосаркома простір
Шийка Плеоморфна раодомосарюма твІоо ою! | | | нет ооо о
Шийка Плеоморфна рабдомосаркома 600 оо || 0 нет ооо о
Веретеноклітинн
Е7 | Ч | 16 | Сім'яникіа ПА |100|100 НЕГАТ. рабдоміосаркома
Веретеноклітинн
ЕВ | Ч | 16 | Сім'яникіа ПА |100|100 НЕГАТ. рабдоміосаркома
Плеоморфна рабдомосаркома 1600 оо || 0 нет ооо о
Плеоморфна рабдомюсарюма вІоо ою! | | | нет о) ооо
Попереч нозполо - г2 | Ч | 30 сатий Рабдоміосаркомаї! 1001100 НЕГАТ.
М'яз
Попереч - ресдоміосарюме пе|ооо| | | | | | |нежт| о| о о| о
Таблиця 298
Результати оцінювання негативного контрольного Ар пухлинних мікрочипах лейоміосаркоми/рабдоміосаркоми - - Чо Чо
Апікальне і цитоплазматичне пОЗИиТт./ - по-) по-| Нн Нн фарбування (відсотою) НЕГАТ. зит. | зит
Розта- шува- Діагноз - -
Ста Орган/ йо Апі- Апі- ння | ть тканина патології/опис |Тип/| 0С | 0А 114-С114-АІ2-СІ2АІЗСІ ЗА Цито кал Цито кал цент- тканини ру сатий
М'яз
Еморіональна радомюсарюма МАГОО | | | | нет о) ооо
Еморіональна радоміосарюма МАГОО | || | нет ооо о
Попереч
Еб | Ч | в4 |ногполо | Плеоморфна 100|100 НЕГАТ. сатий рабдоміосаркома
М'яз
Попереч нозполо | Плеоморфна
Е7 | Ч | 81 сатий рабдоміосаркома 1001100 НЕГАТ.
М'яз
Плеоморфна рабдомосаркома 1600 оо || 0 нет ооо о
Плеоморфна рабдомюсарюма нвІоо ою! | | | нет о) ооо
Шийка Плеоморфна раодомосарюма твІоо ою! | | | нет ооо о
Шийка Плеоморфна раодомосарюма не оо ою || | нет ооо о с3 Ж 40 | порожни | Ембріональна 100100 НЕГАТ ца рабдоміосаркома І с4 | Ж 40 | порожни | Ембріональна 100100 НЕГАТ ца рабдоміосаркома І
Порожни| Ембріональна рабдоміосарюма 60 оо ||| нет ооо о
Порожни| Ембріональна радомюсарюмо МвІоо ою! || | нет о) ооо
Попереч нозполо | Плеоморфна а7 | ч 50 сатий рабдоміосаркома ПА |100|100 НЕГАТ.
М'яз
Попереч нозполо | Плеоморфна 8 | Ч | 50 сатий рабдоміосаркома ПА |100|100 НЕГАТ.
М'яз
Попереч но-поло | Альвеолярна 09 |Ч|10 сатий рабдоміосаркома 1001100 НЕГАТ.
М'яз
Попереч но-поло | Альвеолярна
НІ Ч | 10 сатий рабдоміосаркома 1001100 НЕГАТ.
М'яз
Шийка Плеоморфна раодомосарюма твІоо ою! | | | нет ооо о
Шийка Плеоморфна рабдомосаркома 1600 оо || 0 нет ооо о
М'яка Альвеолярна радоміосарюма Лео оо! || | нет о) ооо
М'яка Альвеолярна рабдоміосарюма Лео ою || | нет ооо о , Веретеноклітинн не | ч ло |Мяка |а ІА 100100 НЕГАТ тканина й І рабдоміосаркома ін" | ч/40|М'яка |Веретеноклтинні ІА |100|100| | | / | | УнЕГАТ| 0 | о | о | о
Таблиця 298
Результати оцінювання негативного контрольного Ар пухлинних мікрочипах лейоміосаркоми/рабдоміосаркоми - - Чо Чо
Апікальне і цитоплазматичне поЗзИит./ по- по-!. нН Н фарбування (відсоток) НЕГАТ. зит. | зит
Розта- шува- Діагноз - -
Ста Орган/ йо Апі- Апі- ння | ть тканина патології/опис |Тип/| 0С | 0А 114-С114-АІ2-СІ2АІЗСІ ЗА Цито кал Цито кал цент- тканини ру тканина |а рабдоміосаркома с, Еморіональна радомюсарюма Лео ою! || | нет о) ооо с, Еморіональна раодоміосарюма Лео ою || | нет о) ооо по |жЖ/48|Матка |Гладкийм'яз | - (1001100! | | / | | |нНЕГАТ| 0 | 0 | о | о 12 |Ж| 8 |Серце |Серцевийм'яз | - (1001100! | | | | | |нЕГАТ.! 0 | 0 | о | о із |Жж/714|Серце |Серцевийм'яз | - (1001100! | | / | | /нНЕГАТ 0 | 0 | о | ос ними я и ПНЯ ПО КОНЯ КОНЯ ННЯ КОНЯ КОНЯ КОНЯ ННЯ КОХАННЯ КОНЯ КОНЯ КОНЯ КОНЯ КОНЯ НОЯ па | | |Пузир |НормальнаПузир|п/а|Їт001100| | | | | | |неЕєгАт. о | о | о | ос 1007 Ксенотрансплант (аСС293) ат человеческой п/а ); змбриональной |п/а|1001100 НЕГАТ.
Ксенотр | почки - ЙСС анспл. |) Тгапвієсієй
Ниркова клітинна | Клеточная линия лінія- почки змбриона п/а 293 человека - ССС п/ла|1001100 НЕГАТ.
НЕК- Тгапзієсієй ессСЯ2
Ниркова клітинна лінія- Клеточная линия п/а 293 почки змбриона | п/а|100|100 НЕГАТ.
ІНЕК- человека 2931
Тканина | Раку товстої та| | ле дщемте (черооро!| | | | | неят оо | о | о
Тканина | Раку товстої та 0 р щем ем | || 1 16 1
Тканина | Раку товстої те 0 ошщемте (чапоороої | | | | неят ооо о
Тканина | Раку товстої тар шемте |чапоороої | | | | неят ооо о
Тканина | Раку товстої та| | щем ем | |) 111 1)
Тканина | Раку товстої тар щем ем | || 1 1 1
Тканина | Раку товстої те 0 р шщемте (чапоороої | | | | неят ооо о
Тканина | Раку товстої те | (б вшемт |черорої | | | | | нету о | о | о | о
Таблиця ЗОА
ІНС-фарбування ССС в неракових клінічних зразках товстої і прямої кишки людини з бази даних СКО (ОпцаїТек) оОмаїТек Тканина Оаїаразе Затріев . . Чо | 90 бе | дарований 0 Позит/по по нон
ЗиИТт.|ЗИТ. зе | т І сок рнореярюреяюря нет пінь кал кал пот|г юр | 11 реа оо міжтузлоотю | | | | непо о оо пот|еоврю в оре, ро лози лов|з юю ю|о вро вро лот ю ||| 5.
Адепо міже/з лото | | | | непо о оо
Адепо полосарютюю 11 пемтю ок о.
Адепо між горою! | | | | пози тю ою) о за Са яяс|гію| 15) 15) | реатю| ою за Са
ПЕ Енсс со НО ШИНИ ЩО НА СУСЗЯНСЯ НС НС СЯ за Са
Таблиця ЗОВ
ІНС-фарбування ОСС в людських клінічних зразках нормальної товстої кишки і раку товстої і прямої кишки (степінь злоякісності пухлини 1, 2, 2 8. З або 3) з бази даних тканин СКО (ОмчаїТек)
Ме зразку| Ме зразку т
Омцате| /міМм ип зразку Цитоп-
Кк ОС | ОА 0.5-С20.5А 1-С | 1А | 2-С0|2-А|3-0|З3-А| лазм | Апікал | степінь ом рномхосовв шшкевий 1011 оо | ло) ою | стю | лька 034 |ІРКОМХО00525| кишковий 100 | 30 70 200 270 льна зв рномхосововшшкевий 00150! (50) ||| лю! | зо | г
О35 |ІРКОМХО00526| кишковий 50 50 100 75 300 2 оз рномхосовст юшкевий 0050) (50) | (во во) 50 ово | лька
О36 |РКАОМХО00527| кишковий 50 50 50 50 75 250 льна
Товсто- оз рномхоровов юшковий| 50) (го 030! | (лю! хв | зо зе рномхосовов шшковий 0150) (50) | (го во. 5 ово | лька
О38 |РКОМХО00529| кишковий 50 50 20 75 280 льна ою рномхосовзошшкевий 10150) | во вового | сво | з
О39 |РВОМХО00530| кишковий 50 5О | 50 | 50 | го0 250 Кк) ою рномхосовз|юшковий 50) (50) | (во во) 50 ово | лька 040 |РКОМХО00531| кишковий 50 50 50 50 75 250 льна
Товсто- ом рномходовас юшковий| (золою) | ло зо) зо! во | зво оо рномхосовза шшкевий 10150) | 5о|го| во. зво | ово | ла 042 |РКОМХО00533| кишковий 50 50 | 20 150 280 льна сома рномхосовзікшкевий 10150) |5о|зо| (ло! зво | сю | г 043 |ІРКОМХО00534| кишковий 50 50 | 30 70 150 270 2 ом рномхосовзвюшковий волю! | || | | | | во го | лька 044 |РАОМХО00535| кишковий 100 20 50 20 льна
Товсто- схе рномхоровавіюшковй| ||| (во! во! | лою! зво | зо | г
Таблиця ЗОВ
ІНС-фарбування ОСС в людських клінічних зразках нормальної товстої кишки і раку товстої і прямої кишки (степінь злоякісності пухлини 1, 2, 2 8. З або 3) з бази даних тканин СКО (ОмчаїТек)
Ме
ЗВО рвюфрвн ню п оно лом вно пол У | дк | ск
ОпмаїТе МіММ Цитоп-
Кк ОС | ОА 0.5-С0.5А| 1-6 | 1-А | 2-40 | 2-А|3-0|3-А| лазм Апікал | степінь сєє расмхосовзлюшкювий| ||| 1 пос! зо| ло) оо сло | льна 046 |ІРКОМХО00537| кишковий 100 | 30 70 200 270 льна от расмхоровзаюшковий| | (во! со) ||| ло во во |» 047 |РКОМХО00538| кишковий 20 100 00 2 св рсмхосоєзв шшкювий || 5о| (50150) |в тв | ово ла 048 ІРКОМХО00539| кишковий 50 50 50 50 75 250 льна сгз расові юшковий| || 11 зооіво| (со) го о» 049 |РАСМХО00540)| кишковий 100 20 200 220 2 ово расмхоови|юшковий| || о! 5050) |5о| | ло 0 зво льна 050 ІРКОМХО00541| кишковий 50 50 | 50 50 75 150 льна ові расмхоровиюшковий| || 11 оо! | (ло со / во |» 051 ІРКОМХО00542| кишковий 100 100 200 00 2 сво ресмхосовязішшкювий ||| ло /30| | (ло зво | зо лька 052 ІРКНОМХО00543| кишковий 70 ЗО 100 130 300 льна оєз расмхоровиіюшковий| ||| (о! 1 зо зо зо |» 053 ІРКОМХО00544| кишковий 100 100 100 300 2 ові расмхороває юшковий| | (50! (50) 1 яоо| ло воо 0 льна 054 ІРКОМХО00545| кишковий 50 50 100 75 300 льна ов рсмхосовяє шшковий | 2о|во| (ло) | зо) |во/ ов | ою» 055 |ІРКОМХО00546)| кишковий 20 10 30 50 55 210 2 ов раскхороватюшковий| | (ово! (во ||| во 0 тво льна 056 |РАСМХО00547| кишковий 100 | 50 50 50 75 льна ов раскхороваа юшковий| | (о! (30) зо! | (зо по / зо |» 057 |РКСОМХО00548| кишковий 40 ЗО ЗО 100 110 300 2 свв раскхосовао юшковий| | (ло! | (зо) | ло| зо) во 0 ооо | льна 058 |ІРНЯМХО00549| кишковий 100 Ко) 40 Ко) 50 200 льна ве рсмхосоєво шшковий | (830) (во) 0 2о| | (ло ло6 | зю |» 059 |РКОМХО00550| кишковий ЗО 50 20 100 105 300 2 ово раскхороветюшквий| ||| во) ло во|лово| ззо 0 ово льна
РКОаМХО00551| кишковий 10 | 50 10 | 50 130 250 льна ові: раскхоровво шшковий | во|во| | лю) (ло! | со| зо | во | газ 061 ІРКОМХО00552| кишковий 10 10 20 30 283 ов расмхоровва юшковий| | (о! 50) 0050) во) ло ово льна 062 |РКОМХО00553| кишковий 50 50 50 50 75 250 льна оєз рсмхосоєвл шшковий ||| 20 /во| | (ло зво | зю |» 063 |ІРКСМХО00554| кишковий 20 100 180 300 2 ов: расмхороввсюшкювий| ||| ло) во) во) оо 0 ово льна 064 |ІРКОМХО00555| кишковий 100 50 50 100 250 льна ов расмхоровве юшки ||| 090) ло! | (зо по) зо |» 065 |ІРКОМХО00556| кишковий 10 100 110 300 2 ов раскхосоввт юшковий| || 30 50) со. 5о| во) лоб 0 ово льна
РКОаМХО00557| кишковий 30 50 20 | 50 50 105 250 льна свт расмхосоєвві вшковий || 1111 ЇЇ 111 067 |РКОМХО00558| кишковий єв раскхоровво шшковий| | (о! (50) 1 зо ло воо льна 068 |РКОМХО00559| кишковий 50 50 100 75 300 льна ов раскхоровво шшковий| во| (во! (2000 зо| о 5о| ово ооо
РАОМХО00560) кишковий | 50 50 20 30 50 25 230 2 ото раскхововетюшковий| || о! 5020 зо) во) ло 0 ово льна 070. ІРКОМХО00561| кишковий 50 50 | 20 Ко) 50 75 230 льна ом рсмхосоєєї ашковий ||| 111 ЇЇ 111 071 ІРКОМХО00562| кишковий от» раскхоровва шшковий| | ло| ло | зо|г2оі | 2о| |2о| єв зго льна 072 ІРКНОМХО00563| кишковий 40| 70 ЗО | 20 20 20 65 120 льна оз расххороввцюшкювий| | (| || 11 зо во зо |» 073 ІРКОМХО00564| кишковий 100 100 50 300 2 ом расові юшковий| | (о! (50) 1 яоо| ло воо 0 льна 074 ІРНЯМХО00565| кишковий 50 50 100 75 300 льна от рсмхосоєєє шшковий | (юо| | ло! || |ло/ово | ово» 075 ІРКОМХО00566)| кишковий 100 10 20 70 50 260 2 отв рРаскхоровет юшковий| | || || | |во| |5о| лв | ово | льна 076 ІРКОМХО00567| кишковий 50 50 50 50 75 250 льна
Таблиця ЗОВ
ІНС-фарбування ОСС в людських клінічних зразках нормальної товстої кишки і раку товстої і прямої кишки (степінь злоякісності пухлини 1, 2, 2 8. З або 3) з бази даних тканин СКО (ОмчаїТек)
Ме
ЗВО рвюфрвн ню п оно лом вно пол У | дк | сн
ОпмаїТе МіММ Цитоп-
Кк ОС | ОА 0.5-С0.5А| 1-6 | 1-А | 2-40 | 2-А|3-0|3-А| лазм Апікал | степінь ол расмхосовве юшковий| го! ||| лю! | (ло во во г 077 |ІРКОМХО00568)| кишковий | 20 70 10 100 00 2 отв раскхосовво юшковий| | зо|лоо| | (го 0 зо| со) во мо льна 078 ІРКОМХО00569| кишковий ЗО | 100 20 30 20 50 140 льна сте расмхосоєто шшкювий | (юо| | 11 | (ою во | зю |» 079 ІРКОМХО00570)| кишковий 100 100 50 300 2 ово расмхоровтіюшквий| ||| 50) о | зоо| зво 0 воо льна
О80 ІРКОМХО00571| кишковий 50 50 100 150 300 льна ові расмхосовтсіюшковий| | (во! (со) || ло во во |» 081 ІРКОМХО00572| кишковий 20 100 00 2 ово расмхоровтаюшковий| | (50! (50) 1 ло ло вона
О82 |ІРКОМХО00573| кишковий 50 50 100 75 00 на вза рсмхосоєта шшкювий || 5о| (50) ||| |во/ отв | ово»
О83 |РКСМХО00574| кишковий 50 50 20 75 280 2 ов расмхоровтєюшковий| ||| ло) со) во) о вона 084 ІРКОМХО00575| кишковий 100 20 100 280 на ов раскхосовтє юшковий| || о! 020) 0 зо/со| | во| 5 / ово
О085 ІРКОМХО00576)| кишковий 50 20 30 | 20 105 280 2 вв рсмхосоєтл шшкювий ||| (501 во) |во0 тв | ово на
О86 |РАСМХО00577| кишковий 50 50 50 50 75 250 на ов раскхоровтаюшковий| | (20! (во) со | (зо по / зо |» 087 |ІРКОМХО00578| кишковий 20 20 100 110 300 2 вв расмхоровтерюшковий| ||| 50) 501 | збо) зво 0 вона 088 ІРНЯМХО00579| кишковий 50 50 100 150 300 на ве расмхоовво юшковий| ||| 150) о! | лоо| зво 0 во з
О89 |ІРКОМХО00580)| кишковий 50 50 100 150 00 З ово рсмхосоєвтшшкювий || 5о| (501 во) |в тв | ово ла
РКОаМХО00581| кишковий 50 50 50 50 75 250 льна св: раскхоровво юшковий| || 30! 50) 0 со/с2о| | во| 5 / ово 091 ІРКОМХО00582| кишковий ЗО 50 20 | 20 105 280 2 сво расова юшковий| ||| 50) 0 5о| во) ло ово льна 092 ІРКОМХО00583| кишковий 50 50 50 50 75 250 льна свв раскхосовви юшковий| | со|лоо| | (зо) || 5о| во зво» 093 ІРКОМХО00584| кишковий 20 | 100 30 50 50 180 2 сви рсмхосоєвв шшковий || 5о| (50120) |во0ол5 | ово ла 094 ІРКОМХО00585| кишковий 50 50 20 75 280 льна се расххороввюшевн| || 11111111 095 |РКОМХО00586| кишковий се раскххороввтюшковий| ||| 50) 0 5о| во) ло ово льна
РєРКОаМХО00587| кишковий 50 50 50 50 75 250 льна св расмхороввеюшковий| ||| 020) во! | (ло зво во г 097 |РКОМХО00588)| кишковий 20 100 180 00 2 сов рсмхосоєвв шшкювий || 5о| (501 || (лою тво | зола 098 ІРКОМХО00589| кишковий 50 50 100 75 300 льна свв раскхоровоо юшковий| || о! 030) со/5о| | 5о| вв ово
РАСОМХО00590| кишковий 50 30 20 | 50 50 95 250 2 отоо раскхоровот юшковий| || о! 050) 0 5о| во) ло ово льна 0100 І(ІРКЕМХО00591| кишковий 50 50 50 50 75 250 льна тої раскхосовог вшковий| | со|лоо| || 5о| зо во зво»
О101 ІРКОМХО00592| кишковий 20 | 100 50 Ко) 50 190 2 отоо Рсмхососов|шшкювий || 5о| (501 ||| (лою тво | зола 0102 |РАОМХО00593| кишковий 50 50 100 75 300 льна отоз раскхоровол юшковий оо ілоо| (11111 оо з
О103 ІРКаМХО00594І| кишковий | 100 | 100 З отоя раскхоровов шшковий| ||| (50) 00 во) ло) ло о льна 0104 ІРКЯМХО00595| кишковий 50 50 10 75 210 льна отов раскхосовов юшковий| || во! (лого) | зо| | 5о| ло / со г 0105 ІРКОМХО00596| кишковий 40 | 20 30 50 70 230 2 ов Рассел шшковий || 110 (ло | (лою) ово | зо | лька 0106 ІРКЯАМХО00597| кишковий 100 100 200 300 льна тот Раскходовові вишковий | 10 | 10| 1о| | зо) | зо | ло | го | зо| з55 | ово | газ 0107 І(РКОМХО00598| кишковий | 10 | 10 | 10 30 30 | 40 | 20 | 50 155 230 283
Таблиця ЗОВ
ІНС-фарбування ОСС в людських клінічних зразках нормальної товстої кишки і раку товстої і прямої кишки (степінь злоякісності пухлини 1, 2, 2 8. З або 3) з бази даних тканин СКО (ОмчаїТек)
Ме
ЗВО рвюфрвн ню п оно лом вно пол У | дк | ск
ОпмаїТе МіММ Цитоп-
Кк ОС | ОА 0.5-С0.5А| 1-6 | 1-А | 2-40 | 2-А|3-0|3-А| лазм Апікал | степінь остов расмхосовов юшковий| || 11 оо! | (яоо| сою воо | льна 0108 ІРКОМХО00599| кишковий 100 100 200 00 льна отоз расмхосовос юшковий| воло! | 02 1 | 1 | го о 0109 ІРАСМХО00600) кишковий 100 20 20 2 оно Рясмхосоєотшшкювий || 5о| (501 ||| (лою тво | зола 0110 |РАОМХО00601| кишковий 50 50 100 75 300 льна ант раскходовог вшковий| ло (со (во) ло! | (зо во 0 зо» 0111 ІРКаМХО00602| кишковий | 10 20 10 100 300 2 оно расмхосовоз юшковий| || о! 050) 050) во) ло ово льна 0112 ІРКОМХО00603| кишковий 50 50 50 50 75 250 льна ом раскхосовоюшковий| | (50! 50) 0020) о во| ло во г 0113 І(ІРКОМХО00604| кишковий 50 50 20 75 280 2 она Расмхосоєоє шшковий || 5о| (501 во) |в тв | ово ла 0114 ІРКЯМХО00605| кишковий 50 50 50 50 75 250 льна ом раскхоровоєіюшковий| ||| | со/ | зоолоо| зв во 0115 |РАОМХО00606| кишковий 50 20 30 | 100 155 300 2 ом раскхосовот юшковий| ||| ло) во) во) оо 0 ово льна 0116 ІРКОМХО00607| кишковий 100 50 50 100 250 льна ом Расмхосоєові шшкювий (ло| о (зі | | | | 0 в) о з 0117 ІРКОМХО00608| кишковий 1001 70 30 65 З ом раскхоровов юшковий| ||| ло во) во) ооо льна 0118 ІРКОМХО00609| кишковий 100 50 50 100 250 льна оме раскхоровло шшковий| | (30! (50) со | зо зо 0 зо» 0119 ІРКаМХО00610| кишковий ЗО 50 20 100 105 300 2 ого раскхововн|юшковий| ||| ло) во) во) оо 0 ово льна 0120 І(ІРКОМХО00611| кишковий 100 50 50 100 250 льна тез Рсмхосоєїг шшковий || 830) (во) | лю|с2о| во ев | ово |» 0121 ІРКОМХО00612| кишковий 30 10 | 20 95 280 2 тео расова вшковий| ||| ло! 11 зоо| зоо 0 воо 0 льна 0122 ІРКаМХО00613| кишковий 100 100 100 300 льна аз раскхоровта юшковий| | (30! 50) со | зо зо 0 зо»
О123 ІРКЯМХО00614| кишковий ЗО 50 20 100 105 300 2 стгя раскхововіе юшковий| |во| | (лоо|гої || со оо во льна 0124 І|РКОМХО00615| кишковий 100 | 20 20 100 льна оев Рсмхосоєтє шшковий | (лого! со! |зо| зо во | зво» 0125 І|РКОМХО00616| кишковий 100 | 20 20 30 30 50 180 2 тов раскхоровітюшковий| ||| ло зо) ло оо сло льна 0126 ІРКЯМХО00617| кишковий 100 30 70 100 270 льна тет расова юшковий| ||| во) со | зо зго во» 0127 |РАОМХО00618| кишковий 20 100 120 300 2 ств раскхосовте юшковий| || о! воло) | ло| со) ло 0 зво льна 0128 ІРКОМХО00619| кишковий 50 50 | 40 40 20 75 180 льна ого рсмхосоєго шшковий оо! || 111 | (юю о | зю |» 0129 ІРДаМХО00620)| кишковий | 100 100 300 2 ство раскхоровот вшковий| ||| во) со | зоо| ло 0 воо льна 0130 ІРКаМХО006211| кишковий 20 100 120 300 льна ові раскхоровос вшковий| | (20 030) во! | зо змо / зо» 0131 ІРКаМХО00622| кишковий 20 ЗО 50 100 140 300 2 ство расмхосовоз вшковий| ||| 09) зо | яоо| лзо 0 воо льна 0132 ІРКаМХО00623| кишковий 70 Ко) 100 130 00 льна отзз Рсмхосоєма шшковий! | | | |і || | юю! зо | зю | »
О133 І(ІРКаМХО00624| кишковий 70 ЗО 100 130 300 2
Таблиця 31
Клінічні зразки з Фази І випробування С260001 з ескалацією дози ССС-націленого у ц ц терапевтичного МІ МО264
Ме Тип |Стат| Дата Зразок Апікальне і цитоплазматичне пОЗИиТт./ зе
Паціє зразку| ь сбору типфнсть Ксуа дата фарбування (відсоток) НЕГАТ. по-| пог) Н Н нта "ІЗИТ.|ЗИТ.
Апі- Апі- 17177101 оса фнотзарютарю з! Іо вд |Ннт вд, незабарв- бввм сс | ч | 09 | лених в/22/2012 |100 100 | ПоЗИТ. 100 зоо скелець 5 незабарв- рве сво | ж | 5010 | лених в/г2/2012 100 20 | о |з0| 0 | зо 20 | поЗИиТт. 150 скелець
Панк- 1 сво реати-| Ж | 12 | парафіновий| 5/22/2012 100| 100 | позит. | 100 | 100) 300 300 чний блок 5 незабарв-
Р сво | ч | 5014 | лених в/в/гот2 |10) о |БО| о |20) о |20 100 | позит. 100) 150) 300 скелець
Панк- 20 незабарв-
Рв реати-| ч | 706 | лених т7/в/2012 100) 10 позит. | 10 10 чний скелець 5 незабарв- звавитраво! ч | 010 | лених т7/в/2012 100 10 позит. | 10 20 д скелець
Панк- 5 незабарв-
Рв реати-| ч | 7014 | лених т7/в/2012 100) 10 позит. | 10 10 чний скелець слог| спо | ч | бору |етРєслок| лагота поотос оо 0010 о |негАт о о о | о 5 незабарв- зви сво | ж | 014 | лених 7/11у/2012. 100|100 НЕГАТ. скелець 5 незабарв-
РИ сво | ж | 75 | лених т/2ау2012. Во | 20 | 2о 20 позит. | 20 20 220 скелець 5 незабарв-
РИ сво | ж | 75 | лених т/2ау2012. 80 | 10 | 10 | 10 | о | зо Бо | позит. | 10 10 | 220 скелець 5 незабарв- зво сво | ж | ов | лених т/Раугої2 |40| 0 50 | о | 10 | го позит. 100 | 70 | 280 скелець 5 незабарв- за сво | ж | 5509 | лених Т7/РБІ?2О12 100 100 | позит. | 100 | 100 | 100) з00 скелець 5 незабарв- зв сс | ж | бо11. | лених Т7/РБІ?2О12 20 | 20 пОЗИТ. 100 100 | 120 | 280 скелець (до. | 5 незабарв-
Рв сс | ж | 5007. | лених т/Рв/?о12 | во | Бо 10 | о | 10 | Бо позит. 20 Бо | зо | 100 скелець пу. | 5 незабарв-
Шия пунк ч бот лених 7/81/2012 | 20 | 1001 20 5О 10 поЗзит. 150 скелець 5 незабарв-
Рв сво | ч | 008 | лених 7/31/2012. БО | 20 | 30 | 10 | 20 | 2о Бо | позит. | 5О 70 | 200 скелець незабарв- зва страво! ч | 0 | лених в/в/2о12. | 100100 НЕГАТ. д скелець опа. | 5 незабарв-
РИ сво | ж | М008 | лених в/10/2012 |100 10 10 | позит. 100 200 скелець тая он «Ге Гетесюетьнее Тв Т5рні Те кою зу тор во 6 незабарв- рвав страво! ч | 701 | лених в/21/2012 | 100100 НЕГАТ. д скелець 5во02г| САС | Ч | 24-08- |5 незабарв- |8/21/2012Мо0| | |10| 20, | 70 |позиг| о 100) о |260)
Таблиця 31
Клінічні зразки з Фази І випробування С260001 з ескалацією дози ССС-націленого терапевтичного МІ МО264
Ме Тип |Стат| Дата Зразок Апікальне і цитоплазматичне пОЗИиТт./ зе
Паціє зразку| ь сбору типфнсть Ксуа дата фарбування (відсоток) НЕГАТ. по-| пог) Н Н нта " |ЗИТ.ІЗИТ.
Апі- Апі- 11000010 ресроарнордеюрдвоза| о дини др -115 2010 |лених скелець
Панк- 5 незабарв-
Рв реати-| ч | 167 | лених в/22/2012 | 20 10 | 40 | зо |20|30|20 зо | позит. 140) 180 чний скелець
Панк- 5 незабарв-
РА реати-| ч | 70 | лених в/22/2012 | 40. 10 | 40 | во | 20) 30 10 | позит. 140 чний скелець
Зо сто я 50 рптевюінтеме о/р юрерю з пев ет ою
Тонкок
ЬЙ тоое спо | ж | 525 |ттееєанн|внатит, юю. 11191 повиті кю зо ер, 58002 |Шлунко 03-05- рот 1еЕРЕблоканатоте зорю ло зо) Що |позит| во о | 120) о
Панк- 5 незабарв- -423 - 2011 чний скелець незабарв- т сво | ч | СИ6 | лених в/17/2012 100 100 | позит. | 100 | 100) 200.) 300 скелець 5 незабарв- звВО02 09-11- | лених 419 САС | ч 2005 | скелець «2 9ле/го121401 20 | 40 | 20 | 20 | 20 40 | ПОЗИТ. 180
НаЕз 58002 |Страво 10-05- | 1 РГЕРЕ блок рою гнав пес горог го |з) Що |позит| во о | то) о 5 незабарв- -02 2010 2 скелець
Панк- 5 незабарв- 1001 реати-| ж | 09087) дених 10/15/201 | 50 | во | Бо 10 1о |позит.| 50 | 20.) 50 | 50 -103 - 2009 2 чний скелець 5 незабарв- -104 2010 2 скелець 5 незабарв- -116 2010 2 скелець
Панк- 5 незабарв- -105 - 2010 2 чний скелець 5 незабарв- -106 2010 2 скелець незабарв- 58001. сво | ж ) 0502: | дених 10/31/201 з0|10| то позит. | 10 100 | 10 | 270 -411 2005 2 скелець 5 незабарв-
Рв сво | ж | Фото | лених 11/6/2012 | 70 30 | 100 позит. | 30 100 300 скелець 5 незабарв-
БО сво | ч | З108- ) дених 11/7/2012 20 100 | позит. | 20 |100| 20. з00 -07 2009 скелець 5 незабарв- 58002 |Шлунко 03-08- скелець 1 блок 58003 29-02- т/в/'голгпоорос! | | | 1 | |нЕГАТ. | о 0/0 | о
Таблиця 31
Клінічні зразки з Фази І випробування С260001 з ескалацією дози ССС-націленого терапевтичного МІ МО264
Ме Тип |Стат| Дата Зразок Апікальне і цитоплазматичне пОЗИиТт./ зе
Паціє зразку| ь сбору типкількість Неуа дата фарбування (відсоток) НЕГАТ. по-|по-| Н Н нта " |ЗИТ.ІЗИТ.
Апі- Апі- 17171101 осафеонатюрдвюо в цито діри р -107 | реати- 2012 |лених чний скелець незабарв- 58003. сво | ж ) 27901: | дених 11/8/2012 100 10! то позит. 100 270 -06 2009 скелець 5 незабарв-
Рв сво | ж | 701 | лених 11/в/2012 |100 20 позит. 100 280 скелець 5 незабарв-
ВІ свс | ч | УК | лених 11/8/2012 зо) о |30|30|40| 70 позит.|100 100 210 270 скелець 5 незабарв- 51001 сво | ч ) 9970: | дених Млгіг01170| зо зо 70 |позит.| 30 100 | зо | 270 -109 2007 2 скелець 5 незабарв- 58003 |Страво 09-03- 11/13/201 скелець незабарв- -11- 2012 2 скелець 5 незабарв- -110 2012 2 скелець 1 58003 сво | ч | 17708- ) парафіновий| 17.16/201120). |з0|ч10|40 20140 70 | позит. 100 | 140 | 260 -102 2010 блок 2
Бвоог| Пане о4-ов- | З незабарв- | 4/16/201 реати-| Ж лених 30 70 поОЗзИитТ.|100 170 -126 й 2011 2 чний скелець 5 незабарв- 58003ІСтраво! у | 21710. ) дених 1129/2011 | до |осі5о| 10 позит. 70 -112 |-хідний 2011 2 скелець
Панк- 5 незабарв- -114 їй 2011 2 чний скелець
Панк- 5 незабарв-
Му реати-| Ч роя лених 12/33/2012 | 20 |100| 40 20 20 поЗзит. 140 чний скелець (до. | 5 незабарв-
Р сс | ж | Уоб9 | лених 12/3/2012| | 20 70 | 10 | зо | го во | позит. | 100 130 | 200 скелець опа. | 5 незабарв-
РІ свс | ч | 09 | лених 12/т/?гоч2 | |зо лобіо! | то во | позит. | 100 | 70 | 100. 180 скелець 5 незабарв- 58003 ІШлунко 07-02- 12/13/201 скелець 5 незабарв- 58001 |Страво 06-01- 12/21/201 скелець
Панк- 1 -128 й 2011 2 чний блок
Бводг| панк 10-12- |! 12/21/201 реати-| Ч парафіновий 50 50 100 | ПОЗИТ. | 100 1100 | 150 | 300 -130 - 2008 2 чний блок
Бводг| панк 10-12- |! 12/21/?01 реати-| Ч парафіновий 50 5025 75 | ПОЗИТ. | 1001100 | 150 | 275 -130 - 2008 2 чний блок
Бводг| панк 10-12- |! 12/21/201 реати-| Ч парафіновий 50 50 100 | ПОЗИТ. | 100 1100 | 150 | 300 -130 чний 2008 блок 2 58002 13-04- 12/2л/201| | 251 |75125| | 75 (позит.
Таблиця 31
Клінічні зразки з Фази І випробування С260001 з ескалацією дози ССС-націленого терапевтичного МІ МО264
Ме Тип |Стат| Дата Зразок Апікальне і цитоплазматичне пОЗИиТт./ зе
Паціє зразку| ь сбору типфнсть Ксуа дата фарбування (відсоток) НЕГАТ. по-| пог) Н Н нта "ІЗИТ.|ЗИТ.
Апі- Апі- 11770001 оса феонтюрдвюо в цито діри р -130 | реати- 2011 |парафіновий| 2 чний блок незабарв-
Р сво | ч | 010 | лених У лбто1оБ| | во| 25 | ов | 25 БО позит.| 75100100 225 скелець 5 незабарв- 17 2011 2 скелець
Панк- 5 незабарв- | 1/4/2013 5
Ра реати-| ч | 7905 | лених т1ив/2013711001100 НЕГАТ. чний скелець х 5 незабарв- задо страво! ч | 10 | лених зв/гоїз |БОЇ |40| 10 100 | позит. | БО | 100 300 д скелець 9 незабарв- зад страво! ч | 1 | лених 1ла/2013 | 70 | 10 30 10 позит. | з0 30 260 д скелець 5 незабарв- 58002 |Страво 23-11- | лених
Чо Іхідний! У 2010 |скелецькя (1162013) |5о|40| 30|2030| зо |позит. 100 | 50 | 190 | 130
ЕЕРЕ блок 5 незабарв- от пунк ч | 75 | лених тлв/гої3|70|70110| | го зо | позит. | зо | зо | Бо скелець опа. | 5 незабарв-
Тв свс | ч | 09 | лених 1117/2013 | 20 100 | позит. 100 300 скелець 44. | 5 незабарв-
Ми страво ч о лених 1/25/2013 | 10 | 10 10 | зо | 10 70 | позит. 120 | 240 д скелець 5 незабарв-
У сво | ч | 5009 | лених з/яв/гоя3|5О| 50 100 позит.| 50 100) 5О | 300 скелець
Панк- 5 незабарв-
У реати-| Ж | 5 УУ | лених з/Рв/2013 | во | 70|20|20|.. | 10 позит.| 2030 20) 40 чний скелець 5 незабарв- засумлункої ч | 19 | лених 1/РВ/2013 10) 10 1о | позит. | 100 | 2о | 110| 5о скелець 5 незабарв- засулункої щ | 7857) лених г/д/РОї3. |100 зо! |40 БО | пОЗИТт. 100 240 скелець 5 незабарв- зво сво | ч | 011 | лених 2/в/2013 зо! | 70 100 | позИт. | 100 | 100) 170) 300 скелець
Панк- 5 незабарв- зво реати-| ч | 019 | лених 2/в/?013. (100) 95 5 позит. 5 10 чний скелець
Панк- 5 незабарв- зве |реати-| Ч | 019 | лених г/ллугої| 1001100 позит. | 100 100 чний скелець 5 незабарв- звоутишечні ч | 014 | лених г/ллугояв || 20 1100 позит. | 100 100) 240 скелець 5 незабарв- ве ж | 5012 | лених г/лаугозз оо 2о| 130| БО позит. 130 скелець 5 незабарв- зво пунк ч | 1 | лених 2115/2013 | 100. 95 5 позит. 5 10 скелець 16 незабарв- зво сво | ж | 5012. | лених 2л5Б/2013 | 100 20 40 40 | ПОЗИТ. 200 скелець
Таблиця 31
Клінічні зразки з Фази І випробування С260001 з ескалацією дози ССС-націленого терапевтичного МІ МО264
Ме Тип |Стат| Дата Зразок Апікальне і цитоплазматичне пОЗИиТт./ зе
Паціє зразку| ь сбору |Тип/кількість Ксуа дата фарбування (відсоток) НЕГАТ. по-| пог) Н Н нта " |ЗИТ.ІЗИТ.
Апі- Апі- 10000010 ресроарнордеюрдвоза| о дини др незабарв- зво сво | ч | 010 | лених г/в/гої3|70| | зо 100 позит.| 30 100) 30 | 300 скелець
Панк- 5 незабарв- зве |реати-| Ч | 7519 | лених 2/18/2013 100) 10 позит.|100) 10 100) 10 чний скелець 5 незабарв- -131 2012 скелець
Панк- 5 незабарв- 58002 03-03- чний скелець
Панк- 5 незабарв- 58002 03-03- чний скелець 5 незабарв- -122 2009 скелець
Панк- 5 незабарв- -128 й 2011 чний скелець незабарв- -1421 2010 скелець 5 незабарв- 58001|Страво! У | 25-02 дених г/ев/гої3 00 БІ 130110 в. |позит. 45 65 -115 |-хідний 2011 скелець 5 незабарв- 58003 ІШлунко 07-01- скелець
Панк- 10 незабарв- -133 - 2011 чний скелець 5 незабарв- 58002 |Страво 20-03- скелець 5 незабарв- 58002 |Страво 08-03- скелець 1 58002 ж | 93710- | парафіновий| 3/1/2013. | 20 |100| 40 зо 10 позит. 130 -137 2011 б лок
Таблиця 32
Гістохімічна (ІНС) експресія ССС в зразках первинних і метастатических товстокишкових пухлин
Ме Ме Апікальне і цитоплазматичне фарбування поЗзИит./ Фо Фо Н Н з азка скель я (відсоток) коментарі НЕГАТ. |ПОЗИТ.|ПОЗИТ. й й І. | Цито | Апікал | Цито |Апікал)
ЛА ЇЇ 1 | | 201 80 | 1007! (КК | позит. 18 | 2 | | 80, |201 | 100! 7 С | позит. 2А | з | 50100120 |20| ло! | позит.| л00 | 50 |л00| 90 ав | 4 | (100160, /|40! | | | | позит.| лоо | о || о
ЗА | 5 | | 120, Щ|801 | 100! 7 | позит. зв 6 | | 801 |20| | (100! 7 уопозит.
І 4А | 7 |501 1501501! 20; |30| | позит. 488 | 8 | 50100120 |з0| | | | позит| ло | 50 |л00| во
І 5А | 9 | | 180, /|20120| |80| | позит. 5 | 710 |50|40|30|201|120|20| 20 | позит.| 50 | 60 | 70 | 120 6А | лі | | /80|710|20|з30| |60| (рх (| позит.
Таблиця 32
Гістохімічна (ІНС) експресія ССС в зразках первинних і метастатических товстокишкових пухлин зразка скельця (відсоток) коментарі НЕГАТ. |ПОЗИТ.|ПОЗИТ.
І. | Цито | Апікал | Цито /Апікал) 6 | 12 | | 15017101 50120| |70| | позит.| тло0 | лоо | 150 | 260 7А | 13 |30| 501 Щ|201|20| 80 | позит.| 70 | 100 | 90 | 280 78 | 714 |з30| 150, /|20120| |80| | позит.| 70 | т00 | 90 | 280 8А | 15 | | | | 700! | (7100, | позит | ло | лоо | го | з00 88 | 16 | | 1501 Щ|501 | 100! | позит.| тло0 | лоо | 150 | зо0 висока степінь рі |||» Пд ти») вію в вакуолях ов | 18 | |в60|л00|20| |20| | | | позит| ло | 40 |ло00| 60 лЛоА | 19 | | 80, /|20|1 | 100! | позит.| лоб | лоо | 120 | зо0 лов; 20 | | 1501 Щ|501 | 100! | позит.| тло0 | тлоо | 150 | зо0
МА гі |50|101|50Щ130| /з0| |з0| | позит.| 50 | 90 | 50 | 180 71в| 22 |501601501|20| |тл0! |тл10| | позит.| 50 | 40 | 50 | 70 л12А|Ї 23 | | 80 201501 1501 57 | позит| 00 | 100 | 120 | 250 висока степінь - фарбування, в основному, в 128 24 20110 | 30 50 вакуолях - поЗзИит. 100 100 290 | 230 присутні кілька просвітів
ЗА | 25 |501|20150|10| |20| |50| «| позит.| 50 | 80 | 50 | го 138 | 26 | |в80/л100|1710| |тл10 | | | позиту| ло | го | т100| зо компонент персневидно 14А 27 20 100 клітини не поЗзИит. 100 100 120 | 300 оцінювали 148; 28 | | 1501 Щ|50Ї1 | 100! | позит.| тло0 | лоо | 150 | зо0 л15А| 29 |501|50140|10|т7101|30| |л0 | позит.| 50 | 50 | 60 | 100 158 | 31 |50Щ|1001501 | | | | | щ щ(хБ | позит.| 50 | 0 | 50| о лвА| 32 |60/|201|30|20|т70|30| | 30 | муцинозне | ПОЗИТ. | 40 | 80 | 50 | 170 л16в| 33 | | 170,1 |з301 | 100! | позит.| лоб | лоо | 130 | зо0 / 17А| 34 | | 190 |70ї1 | 100! | позит.| лоб | лоо | ло | зо 178 35 |50|201|50Щ|120| /|/20| 40 | позит.| 50 | 80 | 50 | 180 18А| 36 | | /70|20|30|з30| |50 5 ющ | позит.| тло0 | ло0о | 130 | 230 л8в| 37 |л0|50|80|10|т7101|20| 20 | позит.| 90 | 50 |т00| 110 19А| 38 | | 180 /|20| | 100! | позит.| лоб | лоо | 120 | зо0 л198| 39 |70170130, | 20 |7л10| | позит.| зо | зо | зо | 70 са) о |во|юо г! | | | / З бетрес позит| 2 о | 2о| о 2гов| 41 |50190|20| Щ|з0|710| | / | позит.| 50 | то | 80 | 20 21А| 42 |501 1501 | | | 100! | позит| 50 | 00 | 50 | зо0 немає ознак св) я | | | 1 1 11 ан 111 2ггА| 44 |60|т10130|10|7101|20| |60| | позит.| 40 | 90 | 50 | 230 228| 45 | |ло|л00Ї | |70| 80 | позит| 100 | 90 | 00 | 260 2г3А| 46 |50|10150| | | | 90 | позит.| 50 | 90 | 50 | 270 2гз3в| 47 | | 1701 |з30ї1 | 100! | позит.| лоб | лоо | 130 | зо0 24А| 48 | |л0о|80| |201|40| 501 Б |позит| 100 | 90 | 120 | 230 тільки сен зюіюю| ні») з ри юю» в
АМТ пухлини 25А| 50 |501301501|20| |20| |30| | позит.| 50 | 70 | 50 | 150 258| 51 | | 80 20 | 7100, | позит| 100 | 100 | 120 | зо00 2гбА| 52 | | 80 /|201|501 |50 | позит.| тло0 | л00 | 120 | 250 немає ознак вв) в Те) 1111 ан 27А| 54 |40|70120|10|20|т10|20|10| | позит.| 60 | з0 | 120 | 60 278| 55 | | |60| |201|30|20170| | позит.| 100 | лоо | 160 | 270 2г8А| 56 | | 1501 |50Ї1 | 100! | позит.| тло0 | лоо | 150 | зо0 2г88| 57 | | 30 501 |г2гої|7100,! | позит.| тло | лоо | 190 | зо00 29А| 58 | | 1501 Щ|50Ї1 | 100! | позит.| тло0 | лоо | 150 | зо0 29 | 59 Щ|50Ї1 /401|20|101|1з30| 50 | позит.| 50 | 00 | 60 | 230 ЗоА| 61 |10| 70 Щ|201|20| 80 | позит.| 90 | 100 | 170 | 280 зов; 62 | | 1501 |501501 |50 | позит.| тло0 | лоо | 150 | 250
ЗА 63 | | | | 501 Щ|5оІ|лтооЇ | позит.| т00 | т00 | 250 | зоб
Таблиця 32
Гістохімічна (ІНС) експресія ССС в зразках первинних і метастатических товстокишкових пухлин зразка скельця (відсоток) коментарі НЕГАТ. |ПОЗИТ.|ПОЗИТ.
Цито | Апікал | Цито | Апікал
З; 64 | | |50| ц/50Щ150| Щ|501 | позит.| 100 | тоо | 150 | 250 /ЗаА| 65 | | 80 |20| | 100! | позит. | 100 | 100 | 120 | з00
І з2В| 66 50150150 | | | 501 5 |позит.| 50 | 50 | 50 | 150 /ЗЗА| 67 | | |80| |20Щ|501 Щ|50| | позит.| 100 | 100 / 120 | 250
І ЗЗ38| 68 | | |20| 80 | |т1001 | позит. | 100 | тоо | 180 | зоб
ЗА | 69 | | |т100Ї | 30! 1|70| | позит. | 100 | то | 100 | 270
І з4в| 7 | | |л100Ї20| |401 |40| | позит. | тл0о | т00 | 100 | 220
З5А| 7 | | |70| ц|20| |л0(|т1001 | позит. | 100 | тоо | 140 | зоб /з5в| 72 | | 1ц|70| |20| |тл0(0100Ї! | позит. | 100 | 100 / 140 | з00
ЗбА| 73 | | |501401|40|50|710|710| | позит. | 100 | тоо | 160 | 170 /З6в| 74 | | |з30140|40|301з30|30| | позит. | 100 | 100 | г2оо | 190
З7А| 75 | |г2о|т100|т10| Щ|20| |501 | позит.| 100 | 80 | т00| гоб
І 378| 76 1/50190|50| | | | 710 | позит.| 50 | то | 50 | зо
ЗВА| 77 |30| 1ц|70| | Щ|501 Щ|501 | позит.| 70 | 100 | 70 | 250
І З88| 78 180 |20| | | | 71001 | позит.| го | тоо | го | зоб
З9А| 79 | | 7100! | 501 Щ|501 | позит.| тл00 | 100 | 100 | 250
І 398| 80 | | Щ|7100Її | | | 71001 | позит. | 100 | тоо | 100 | зоб
ІА | 81 | | Щ|40| |60|20| |80| | позит. | т00 | тоо | 160 | 280 немає ознак ві ва іт)! || 313 и
АКА 83 |20|60|80|20| |т10ї1 |т10| | позит.| 80 | 40 | 80 | 7 4в| 84 /50140|50|20| |20| |20| | позит.| 50 | 60 | 50 | 120 42гА| 85 | |т10|80|101|20140| |40| | позит. | 100 | 90 | 12о| іо
І 428| 86 | |л0|80|10|20|301 |50| | позит. | 100 | 90 / 1201 220
І4З3А| 87 | |т10|301|з301/50|130|201|30| | позит. | 100 | 90 | 190 | 180
І 43в| 88 | | 50 |40|301т101|70| | позит. | 100 | 100 / 160 | 270 44А| 89 | | |80| ц/20| | 71001 | позит. | 100 | то | т12о | зоб
І 448| 91 |60|100|130| |10! | | | | позит.| 40 | 0 | 50| о 4БА| 92 | | |з30| |5ОЇ |г2го(|т100Ї | позит. | тл00 | 00 | 190 | зоо0 гольджіпо- дібне 70 20 10 | 100 фарбування в позит. 100 100 140 | 300 цитоплазмі 46А| 94 |90|190|710|10| | | | | | позит.| ло | 10 | то | то
І 468| 95 /20|80|80| | |тл10| |т710| | позит| 80 | го | во | 50 аденома - яті ев |во|то во! | | фенаспухин позит| 50 | о | 5 о 478) 97 | |40|80|201|20|20| |20| | позит. | тл00 | 60 | 120 | 120 48А| 98 |30| 1ц/70| | Щ|201 Щ|80| | позит.| 70 | т00 | 70 | 280
І488| 99 190 |т10| | Щ|20| |80| | позит.| тло | тоо | то | 280 49А| 100 |30| ц|40| |30|301 |70| | позит.| 70 | 100 | 100 | 270
І 498| 101 /30|71|50| /ц/20| | |з0| | позит| 70 | зо | 50 | 90 50А | 102 | |т10щ|901|з30|10| | |60| | позит. | 100 | 90 | по| іо 5о0в| 103 (100,70, |10 | | |20| | позит.| 0 | з0 | 0 | 7
БА | 104 /50180|50| | Щ|20| | | | позит.| 50 | го | 50 | « немає ознак вів іжт| || 31311 и 52гА| 106 /50190|50| | |т10! | | | позит.| 50 | то | 50 | 20
І 52в| 107 |90ц|190|710|10| | / Її! | позит.| ло | 10 | то | то 5ЗА| 108 | /40|80|201|20|20| |20| | позит. | 100 | 60 | 120 | 120
І 53В| 109 |50|1801|50120| | | | |! | позит.| 50 | 20 | 50 | 20 54А | 110 | |50|70|20130|20| |т710| | позит. | т100 | 50 | т1з0| 90 548 | 111 | 20180 ц/20|120| |60| | позит. | 100 | 80 | 12о| 220 55А | 112 |100|1100Її | | | 7 1 ющюКм |нЕГАТ.| 0 | 0 | 0 | с (558 | 113 100 1100Ї | | ЇЇ 7 7 1 ющ БК |нЕГАТ.|Ї 0 | о | 0 | о 56А| 114 |50170150130| | | ! ! | позит.| 50 | 30 | 50 | зо 568 | 115 |1001100Ї | | ЇЇ 7 7 1 М | нНЕГАТ.|Ї 0 | о | 0 | о 57А | 116 /50|70|50|10| |тл10| |т710| | позит.| 50 | зо | 50 | бо невеликии вві м" | воно воло) | то обсятуєини| позит | о | 20 | 50) во 58ВА| 118 |10| |80|20|10Щ|1401 |40| | позит.| 90 | 100 | 100 | 220 невеликии вві ме | |зоітоо| го 20) 20 (осяелуєини| ПОЗИТ| 100 | во | 00) то
І 59А| 121 | | |70| Щ|30|30, |70| | позит. | тл00 | т00 | 130 | 270
Таблиця 32
Гістохімічна (ІНС) експресія ССС в зразках первинних і метастатических товстокишкових пухлин зразка скельця (відсоток) коментарі НЕГАТ. |ПОЗИТ.|ПОЗИТ.
Цито | Апікал | Цито | Апікал 598| 122 | | 307 || | 100! | позит. | тло0о | т00 / 170 | зоб боА | 123 |50|701|50|710| |т10! |7101 | позит.| 50 | з0 | 50 | 60 6ов| 124 |10|301/70|20|20|201 Щ|30| | позит.| 90 | 70 | 10 150 бІА| 125 |50| Щ|30| |20|50 |501 5 ющю«|позит.| 50 | т00 | 70 | 250 бів| 126 |100Ї | /20| |з301 |50| | позит.| 0 | 00 | о | 230 б2А| 127 | |80|100,Ї | |т7101 |тл101 | позит. | 100 | 20 / 100 50
І 62в| 128 | |90|80| |г20|т10! | / | позит.| ло | ло | 120 го
І 6ЗА| 129 |л10|50|80| |10Щ|201 Щ|30| | позит.| 90 | 50 / 100 130 63 | 130 | |100190| |л0| | | 7 | позит| лоо | 0 | по о 64А| 131 | |90|80| |20|7101 | | | позит. | тло0о0 | 10 / 120 го 648 | 132 | |60|70|10|з30|20| |т101 | позит. | ло | 40 | 130 во 65А| 133 | 50190150 | |710ї71 | | | позит.| 50 | 10 | 50 | 20 пухлина се| о тюреію| | | | ббе тю) ю»| о |» п ступеня 6бА| 135 | |з30|80| |20|501 |20| | позит. | 100 | 70 / 12о| 160 невеликии вв) зв | тою! | 10 (ссилки позит | мо о || о 67А| 137 |л10|г2го|80| |л0| | |801 | позит.| 90 | 80 | 100) 240 67в| 138 |30|20170| | |401 |40| | позит.| 70 | 80 | 70 | го вакуолярне вва) его) | 20) 60 то | дарбувння|позит| вою || з 68в| 140 | |100Ї70| | | /з30! | | позит.| 100 | 0 /т60ї о б69А| 141 | |40|20| |80|30| /|301 | позит. | ло | 60 | 180 150 69в| 142 | |201|201|20|50|301з30|30| | позит. | 100 | 80 /2ло| 170 70А| 143 | | 507 50 | 100! | позит. | тло0о | т00 / 1501 з00 708 | 144 | |тл01|401|30|40|30|20|301 | позит. | тло0 | 90 | 180) 180 тільки декілька! клітин не оцінено 7в| 72 |60|50120| |/20|20| |з301 | позит.| 40 | 50 | 60 | 130 вища степінь - ве ек ее негативне 72 | 722 |100|1100Її. | | | 7 | нЕГАТ. | 0 | 0 | 0 | со
І 73А| 7371 |20о|80|180| | | | /|201 | позит.| в8о | го | 80 | бо
І 73в| 732 |40|50140|10|10|201т101|20| | позит.| 60 | 50 / 90 | по вакуолярне мам | | 1 17111 ротою) даррувдння|позит| мо оо | зоо | зов
І 748| 742 | |20|501|10|50Щ|1301 |40| | позит. | 100 | 80 / 1501 190
І 75А | 7531 | | 170, |з0|з30! |71 | позит. | тлоо | тоо | 130 | 270 758 | 752 |101|50190|10| Щ|201 |20| | позит.| 90 | 50 / 90 | по
І 76А| 761 | |т10|601|101|40|201 |60| | позит. | 100 | 90 / 140 230 768 | 762 | | |501101|50Щ130| |601 | позит. | лоо | тоо | 150 | 250 77А| 771 | |201901|20|10|201 |40| | позит. | тл00 | 80 / 110 180 778 | 772 |10|20190|10| |20| |501 юю |позит.| 90 | во | 90 | гоб
І 78А | 7841 | | 7100Ї | | 7 їл100! --/ рф позит. | лоо | лоо | 100 | з00
І 788| 7852 | | |100Ї | | | їло0! | позит. | лоо | тло0 | 100 | зо00
І 79А| 797 | | 80 ц/20| | |л100ї | позит. | лоо | тоо | 120 | зо0
І 798| 792 | | 50 50 | 100! | позит. | тл0о | 100 / 150 з00
ОА | 8071 190| 710, | | | 1001 | позит| ло | тлоо | 10 | зо0 /80в| 802 | | ц/20| |50| /з0Щ|100! | позит. | 100 | т00 | 21о | зоб 8А| 811 | | 80 |20|301 |70| | позит. | тл00 | 100 / 120 | 270 вів| 812 | |тл0(|90|л10|тл10|20| |60| | позит. | ло | 90 | 110) 230
І 82А| 821 | | 50 50 | 100! | позит. | тло0о | т00 / 150 з00 828| 822 |20| 80 | | | /л100ї | позит.| 80 | то | 80 | зо0 8ЗА| 831 |30| |/70150| |201 Щ|30| | позит.| 70 | т00 | 70 | 180 гольджіподібн ее Пе ее ен в цитоплазмі 84А| 841 |80| 20, | | | /л100ї | позит| го | то | 20 | зоб (848 | 842 |100|60| |20| |тл101 |т10| | позит.| 0 | 40 | 0 | 7 85А| 8541 | | |100Ї | | 7 100! | позит. | лоо | тло0 | 100 | зоб
І 858 | 852 |100| | | Ї | їЇ їлт00ї | позит.| о | то | о | зоб
Таблиця 32
Гістохімічна (ІНС) експресія ССС в зразках первинних і метастатических товстокишкових пухлин
Ме Ме Апікальне і цитоплазматичне фарбування поЗзИит./ Фо Фо Н Н з азка скель я (відсоток) коментарі НЕГАТ. |ПОЗИТ.|ПОЗИТ. й й І. | Цито | Апікал | Цито |Апікал) 8бА| 8671 |10/40180| |л0! | 60 | позит.| 90 | 60 |т100| 180 868 862 | | 50 50 | (100, | позит. 87А | 877 |л10|т70180|20|т7101|20| |50 5 ю ю |позит.| 90 | 90 |т100| 210 8781 872 |тл0|10|501|30|30|30|710ц/з30| позит. | 90 | 90 | 140) 180 88А| 881 | /|30180|20|20|20| |30| | позит. 88 | 882 | |100150| |501 | | | | позит.| л00 | о | 150 о клітина 89А 89-1 100 | 100 ниркового НЕГАТ. епітелію 89 | 892 |л100|100ї | | / | ; | | нЕГАТ.|Ї 0 | о | 0 | о панкреатичне 90А 90-1 50 1100 20 0) нейроендокри| ПОЗИТ. 50 110 нне
Й вакуолярне зов) ог | хо | 20) |в | баруваня позит| мо о | ово) о перитонеальн 91А | 91-1 | 100 | 100 ое - НЕГАТ. ліпосаркома вів | 912 |л100|100ї | | / | | | | нЕГАТ.Ї 0 | о | 0 | о зга) вто юю! | | 7 | 7 | МОБ |н)| о) о о о 928 | 922 |100|100ї | | / | / | | нЕГАТ.Ї 0 | о | 0 | о гольджіподібн 9ЗА 93-1 50 30 20 100 Те фарбування| ПОЗИТ. 50 100 70 300 в цитоплазмі 938 932 |50| 30 201 | (100, | позит. 94А | 941 |50| 50, | | | 100! 7 | опозит. 848 942 | | 80 201 | (100, | позит.
БА | 951 | | 140| |501 |л0|100,! (рРх/ | позит. 9581 95.2 |50| Щ|50Ї / / | 100, р у|опозит. 9бА| 967 | | | | |л100! | 100! (Р | позит. 968 | 962 |1001401 ц|20| |20| |20| | позит.| 0 | 60 | о | 120 97А | 97-1 |л100|100Ї | | | | | УЦпанкреатичне НЕГАТ.| 0 | 0 |0о | 0 і 978| 972 |л100|100ї | | / | | | | нЕГАТ.Ї 0 | о | 0 | о маточне - а 988 582 | |100Ї | | | 00! | позит. | 100 | 0 |з00| о панкреатичне 99А 99-1 10 |100 нейроендокри| ПОЗИТ. 270 нне 998 | 992 |100|100ї | | / | | | | нЕГАТ.|Ї 0 | о | 0 | о
Т00А 1001 | | 7100, | 50 50 шлункове | ПОЗИТ. тов 1002 | |20|60| |40|40| |40| | позит.| тло | 80 | 140 | го
Узагальнення результатів імуногістохімічного (ІНС) фарбування ССС
Результати імуногістохімічного (ІНС) фарбування СС, представлені в прикладі З і 4, демонструють, що СС експресується в різних злоякісних новоутвореннях шлунково-кишкового тракту, включаючи товстокишкові, шлункові, тонкокишкові та стравохідні пухлини, а також пухлини, які не відносяться до шлунково-кишковому тракту, включаючи панкреатичні пухлини та легеневі аденокарциноми, легеневі плоскоклітинні карциноми, лейоміосаркоми (-/та рабдоміосаркому. Коротка інформація про аналіз різних пухлинних мікрочипів представлена в
Таблиці 33 нижче.
Таблиця 33
Аналіз ТМА показує експресію СС в різних злоякісних новоутвореннях
Фо «3 позитивного фарбування " тип пухлини М тестованих : о (товстомишкова.ї 777 |1111298.7 | 77771767 | 90 | 2 щ 95
Таблиця 33
Аналіз ТМА показує експресію СС в різних злоякісних новоутвореннях
Фо «3 позитивного фарбування " тип пухлини М тестованих : олегеневасквамознкаї 17741770 11108 177108 олейомосарююма 77171111 18 17711110 11444 | 4440 рабдоміосаркома 718 17777710 | 56 | 556 "(95 позитивних визначається показником Не 10)
Людські клінічні зразки злоякісних новоутворень шлунково-кишкового тракту і пов'язаних з шлунково-кишковим трактом злоякісних новоутворень також дали позитивний результат для різних рівнів експресії СС, як підсумовано в Таблиці 34 нижче.
Таблиця 34
Відсоток відібраних пухлин в позитивному С26001
М Фо будь-якого Фо більше 400 (на комбінованій/агрегатній позитивного апікальній и цитоплазматичній Н-оцінці) шлункові 171179 1111778 11111110 отонкокишкові | 02 1777710100 ЇЇ 77711110 всього 7793 | 717860 ЇЇ 11111111 (Позитивний визначається як показник Н» - 10 при апікальному або цитоплазматичному фарбуванні)
Результати, представлені в Таблиці 34, аналогічні результатам, піднаглядним для ТМА, узагальненим в Таблиці 33.
Комбінований/агрегатний розподіл Н-показника експресії СС за типами пухлин від пацієнта, зарахованого для випробування С26001, показано на фіг. 2А-20.
Комбінований/агрегатний розподіл Н-показника експресії (ССС, вибраних з різних товстокишкових, шлункових і панкреатичних пухлинних мікрочипів, показано на фіг. ЗА-3С.
Оскільки цей винахід було показано і описано з посиланнями на передбачені варіанти його реалізації, то фахівцям в даній області техніки буде зрозуміло, що різні зміни в формі і деталях можуть бути зроблені без відступу від обсягу винаходу, охопленого прикладеною формулою.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105 МІГГЕММІОМ РНАКМАСЕШТІСА! 5, ІМС. «120» Молекула анти-сссС антитіла та її використання для тестування на чутливість до ссс-націленої терапії «130» мМРІІ12-018РІКММОМ «140» и5 61/639,376 «1415» 2012-04-27
Коо) «160» 89 «170» Патентна версія 3.5 «2105 1
«2115» 18 «212» білок «2135 Езспегісніа соїї «4005 1
А5п о ТИг Ре Туг Суз Суз сій Ге Су5 Су5з Ап РГО АЇїа Су АїЇа С1Уу 1 5 10 15
Суз тук «210» 2 «211» 3360 «212» ДНК «213» Ното з5арієепе «400» 2 дассададад аадсдсддадд аададсддас сдадддассс састададдс хдсссатста бо дассссстдс стссстадда дсссаасада дсааадсаад сдддсасаад дадсатадде 120 стаасуєдас сддддаєсасо аадасадаєстдс хкассддастт ддсестдсдуд ссастдсеся 180 щі тссадсссдд дкддстдссс тесадесссс аддсдадсса даастдссас аасддсадст 240 асдаааєсад сдуєсстдаєд ахсдддсааст садсстстдс ададсссстдуд ааавасттад 300
Зо аадасдсдудс даасдадддад сстадааастад сдададдасд сстдсаааає дстддсстаа 360 асадасдастдс даасдстаст сссасдстаєс сддастудест дасссасаас ссаддсдасе 420 дссддадсад сасстдєдаа ддсстсдасс тастсаддаа аассссааас дсасаасдда 480 щ тддастдсдє сстсасаддд ссстсасдта сатастссас сттссадатд тасстсдаса 540 садааєссдад стассссатд асстсадста даадесссдд ассдесаєсду дастасааад 600 ааассттаас саддссдастуд сстссадста дааадссдає дсассссттд дссаастст 6б6о ддааааассаа сдасстдссс сссаааастє астсстуддад састссдстає дсссасаада 720 асддсасада аасстдаддас тдеесстддє ассттаасдс сстуддаддсе адсдеєссся 780
З астсстссса сдаастсддс ссстааддсда сдсстаадаса адасааддад ссссаддата 840 тстсаасдда ссасаасадд аааадсаастд сдаєссаєтає дсдсдасадс ссададессс 900 тстасаадсс даадддсєдас сдадсадсдуд стдаадасає тдссассаєс стадсддатс 960 тЕсссаасда ссадсастсс даддасаастд ссасадсссс тдастасатд ааааасдесс 1020 тгасестдас дстдсстсст доддаассссс сестааатад стстссстсс аддаасстатє 1080 щ сассаасааа асдадассст дсссстдссо асссдаасдд аассстдстс сттддасата 1140 тасстдаадає ассссстсдаа аасддадааа ахсассассас ссссааастт дстсатадсту 1200 (516) тсаддаасст састссстдаа дддсаєсдасд дессадсдас стстддаєсдас хсодададата 1260 тсдасадсас сасддсдсес студстасасст стасддасас саадааатас ааадесстт 1320 тдассстасда стасссасдсра аасаадасст ассстодастодда сасдадсссс асасссасту 1380 5 ддаадаассс тааассссст аасдастаєсса саддссдддада ссстсадаєс стсдаєдаєта 1440 садсстссас сстсастдда дстадсддсдс хтасетсстдсе сдссдсестс стдатдстса 1500 70 даааасастад аааадаєсає даастссуєс адаааааасуд дсесссасаєсє сстсстдааа 1560 асасстстсс тстддадасс аасдадасса ассасдссад ссссаадаєс дасдасдаса 1620 ааадасдада сасаасссад адастасдас адсдсаааса сдасааааад сдадсдаєтс 1680 7 тсааадаєст саадсасаас дасддсаасс ссассдаааа асадаадаса даассдааса 1740 адессдсссса дассдастає стасаасстда ссаадссста сддсасадсуд ааасттсдата 1800 ссасдасссс сддддаєдаса даастасстоасуд адададдаєс сстссдддаа деісстааата 1860 асасаастсс стассстдає ддсасаєсса тодаєссддда дссстаадаєс сстассттас 1920 асдасаєсстдс таадддаасд ссатасстдс астссадсаа дасадаадесс сатддссдсс 1980 тдааасстас саастасдсрта дсддасадса даасдасоддс даадаєсаст дастссаоддсе 2040 дсаассссає сссасстсса аааааддасс хтдсддасадс сссададсас стссдссаад 2100 ссаасасссс ссадааадда дасдсдсаса дссасдддає сассдсасад дадаєссатсс 2160 тадасадааада аасстсстас астссдадссї дсесдддассуд даасдадаад аскссссадад 2220 тддаааасєссс саасддаасд ааасссттсс дсссадаєьє ассссстддаа асадсадада 2280 ааааададссї адаадсдсас стасстдсаа аааастудєсд ддаддаадає ссадаааада 2340 дассадаєсс сааааааассї дадастасас стдссаадає асстддасес ссссасдасс 2400 ааааааасда аадстатастуд дасасстсда сссдасуєст асадстатає сстсдааасс 2460 тддаасаєсї ддасададдаа аддасасадс стдсасааддс адададддас адддассдаса 2520 дассстаасст тасдсєсдсес ссааддстад стддсааадсс сссдааддад аааддсеста 2580 тдададссдда астасаєсдад даадссасаа сстассссад сдасаєсдста ддссссаста 2640
Зо стасстдсаа асасадсасс сссасдудаад тадсдддасає дсстаасдас асстатсаада 2700 десссдасса сасстудсєсдає сассаєсдастуд сстасаадду ддааассаєс дасдатасає 2760 асасддсдудс стадсддеєсд сстаададаа асддсааєссуд дсасдсаата дасаєстдсса 2820 адасддсссс ддааассстс адсетссасдд ддассессда дсстддадсає сттсстддсс 2880 тсссаастатуд дасссодасасс ддадсссаст стоддсссстд хтастасстдда дссасдоддаа 2940 тсаадасдсс ксоассастусє стасссддад асасддуесаа сасадсстст аддасддаає 3000 ссастддсст сссттсдада асссасдсда дсддссссас сатадссаєс стдаададаа 3060 стдадсдсса ассссттстає даадсдадад дадааасаста сссааададада ададдааата 3120 адастасста стддстдаст дддаєсдаадд ассадааасс саасстдсса асссстсста 3180 стдасддадаа ссаасадсдє ссдсаадсад аасстссада сасдаєссодсс аастстттас 3240 адаааадаса ддсадсаддд асаадаадсс ааааасссад асдддсадсс адстасаааа 3300 ааддсастстї ддаасасссуд садссдааста ссасадасаа ддададсасс хсастсстааа 3360 «210» З «211» 1073 «212» білок «213» Ното з5арієепе 60 «400» З мес гу тик Гей гей гей А5ЗріеиЧ АїТа гей Тер 5екг гей гей Рне сіп 1 5 10 15 65
Рго сіу тер Гей бек РМпе 5ег 5ег сіп ма! 5ек сп АбЗп Су Ні А5П 20 25 30 70 сіу 5екг туг сі Іїе б5ег ма! гей мес мес сіу Ап 5ег Аїа Рпе Аїа 35 40 45
СТИ РгО Гей їГу5 Ап Гей Сі А5р АТа ма! Ап сіи СІ1у гей си Іе 75 50 55 бо ма! Агуд с1у Агд Ге сіп А5п Аїа сіу Гей А5п ма! тик ма! Азп Аїа 65 70 75 80
Тиг Ре мет туг 5ег А5р сіу Ге Іїе Ні А5п 5ег с1у А5зр суз Ага 85 90 95 5зег 5ег Тк суз сі с1у гГеш А5ріеи їеи Агу Гуз Іїе 5ег Азп Аїа 100 105 110 сіп Аг мет сіу суз ма! гей ІТїТе с1у Рго 5ег Суз Тиг туг 5ег тпг 115 120 125
Рпе сіп Меєс туг Гей А5р Ттиг сі Гей б5ег тує Рго Мет Іїе 5ег Аїа 130 135 140 сіу 5ег РМПе сіу Гей бег сСу5 Азр Туг Гуз сі ТИг о Геу Тиг Аго Гей 145 150 155 160 мет 5ег Рго АЇїа Аг уз їеи мес туг Ре Ге ма! Ап Рпе Тер Гуз 165 170 175
ТК Аби Ар Геи Рго Ре Гу5 ТиИг Ттуг б5ег Тер 5екг тик 5ег тТуг ма!
Зо 180 185 190 тук Гуз АЗп с1у тпг сі те сі АЗр Суб Ре Тер тук Гей А5Зп Аїа 195 200 205
Гей сі Аїа бек ма! 5ег туг Рпе 5ек ніх сіи Гей с1у Ріпе Гуз ма! 210 215 220
Уа! гей Агуд сіп А5р Гуз сі Ре сіп А5р ІТе Гей мет А5р нів А5Пп 225 230 235 240
Агуд Гуз 5екг А5п ма! Іїе Іїе мес су5 сіу с1у Рго сій РІПе гГеи Туг 245 250 255
Гуз Ге Гуз с1у А5р Аго АїТа ма!Ї АТа сій А5р Іїе ма! ІЇе че гей 260 265 270 ма! Азр Гей Ре А5п А5р сіп туг Рпе Сі Ар Ап ма! Типг Аїа рРго 275 280 285
А5р туг мет Гуз АЗп ма! Ге ма! гей тийг Гей б5ег Рго сС1у А5Пп 5ег 290 295 300 бо бе Гей А5п 5ег бег Ріпе бек Аго А5пП Гей бек Рго ТИг Гуз Аго А5р 305 310 315 320 65 Рпе АТа Ге АТа туг Ге Ап с1у ІЇТе гей Ге Ріпе СсІу ніх мет гей 325 330 335
Гуз ІІе Рпе гей Ссіи А5п с1у сі А5п о ІЇе тик ТИг о РгОо Гу5 Ре Аїа 70 340 345 350
Ніб АТа Рпе Агу А5п ге ТиИг о РИйе сіи с1іу тукг Азр сіу Рго ма! тТиг 355 360 365 75
Гей А5р А5р Тер с1у А5р ма! А5р 5ег тиск Мет ма!ї ге ге тук тик
370 375 380 5ег ма! Азр ТтиИг Гуз Гуз тук Гуз ма! Ге ге Тиг о тук А5зр тик ні 385 390 395 400 ма! Азп Гуз ТиИг туго Рго ма! Азр Мест б5ег Рго ТИг РПе ТиИг тер Гуз 405 410 415
А5зп 5ег Гуз Гей Рго А5п А5р ІЇе тиг су Агу с1у Рго сіп ІЇе геий 420 425 430 мес Іїе Аїа ма! Рпе типг Ге Ттпг с1у Аїа ма! ма! геи гей ге ге 435 440 445 ма! АТа гей гей мет ге Агд Гуз туг Агуд Гуз А5зр Туг си Геи Ага 450 455 460 сСіп губ губ тер 5ек Ні ІЇе Рго РгОо сі А5п ІЇе РМпе РГО Геи си 465 470 475 480
Тиг Аби сі тб о Абп Ні ма! 5ег їец уз ІЇе д5р д5р А5р Гуз Ага 485 490 495
Зо
Агуд А5р Тег ІЇе сіп Агд Ге Аг сіп Суз Гуз туг А5р Гуз Гуз Ага 500 505 510 ма! пе гей Гуз А5р Ге губ Ні АЗп А5р сіу Азп Ре Тиг Си Гу 515 520 525 сіп Гуз ІЇе сі Гей Ап уз гей Гей сіп Іїе Азр Туг туг А5пП Гей 530 535 540
Тк Гуз Ре Ттуг сіу тик ма! Гуз Гей АЗр ТтиИг Мес Іїе Ре Су ма! 545 550 555 560 че сіи туг су5 с1Їй Агуд сіу 5ег їеу Агуд сіи маї гГеи А5п А5р тег 565 570 575 чІ1е 5ег туг РгОо А5р сіу Тийг Ре Мет А5р Тер сі Ре Гу5 Іїе 5ег 580 585 590 ма! Гей тук Азр Іїе Аїа губ сіу Мес 5ег тук еп нів 5ег 5ег уз 595 600 605 60 Тпгосіи ма! ніх с1у Агуд Гей Гуз 5ег ТИг о АЗп Суз ма! маї А5р 5ег 610 615 620
Агуд меє ма! ма! Гуз ІЇїе ТиПг А5р Ріпе сіу суз А5Зп 5ег ІЇе Гец РгО 65 625 630 635 640
Рго Гуз Гуз Азр Ге Тгр тпг АїТа Рго сій Ніх Ге Агуд сіп Аїа дп 645 650 655 70 чІ1е 5ег сіп губ с1у Азр ма! туг 5ег туг с1у І1е Пе АТа сп си 66о 665 670 75 ч11е І1е Ге Агод Гуз сі Те Рпе туг Тиг огГеи 5ег суз Агу А5р Ага 675 680 685
Азп сій Гуз ІчІЇе Рпе Агуд ма! сіи А5п б5ег д5п сіу Меє Гуз Рго РНе 690 695 700
Аг Рго Азр Гей Ре Ге си Тпг АТа сіи сіи Гу5 сій Ге сіи ма! 705 710 715 720 туг Ге Ге маї Гуз д5п сСуз Тер сі сі А5р Рго си Гуз Агд РгО 725 730 735
А5зр Ре Гуз Гуз ІЇїе сі Тиг Ттиг о їеи АТа Гуз ІЇїе Ре СсС1у Ге РНе 740 745 750
Ні А5р сіп Гуз А5п сі б5ег о Туг Мет А5р ТИг Гей ІЇе Агд Ага Ге 755 760 765 сіп ге туг 5ег Аг Ап Ге сіи Ні Гей ма! сі сі Аг тб сп 770 775 780
Ге тукг Гуз АТа сі АгО А5р Агуд АТа др Агд Ге Ап Рпе Ме Ігеи 785 790 795 800
Зо
Ге Рго Агуд Ге ма! ма! Гуз бек ей уз сі Гуз сіу Ріпе ма!ї си 805 810 815
Рго сій Ге тук сі сіи ма! тик ІТе тує Рпе 5ег Азр ІІе ма!ї с1у 820 825 830
Рпе тис тик о ІТе Су5 уз туго 5ег ТИг Рго Мет сіи ма! ма! А5р мес 835 840 845
Гей А5п А5р о ІЇе тукг Гуз 5ег Рпе А5зр Ні Іїе маї А5р ніх Ні д5р 850 855 860 ма! тук Гуз ма! сій тис ІЇїе с1у А5р Аїа туг Мет ма! АТа 5ек с1у 865 870 875 880
Геи Рко Гуз Агуд Ап с1у А5пП Агу Ні Аїа ІЇїе Азр ІЇе АЇїа Гуз мес 885 890 895
Аїа ей сій Іїе Ге 5ег РПпе Мет сіу тпг Ре сій Гей сіи Ні Ге 900 905 910
Рго сІ1у Ге Рго Іїе Тер Іїе Агу Іїе сіу ма! ніх 5ег сіу Рго су бо 915 920 925
АЗїа АТа сіу ма! ма! сіу Іїе гу5 Мет Рго Агуд Ттукг Суз Геу Рпе С1У 930 935 940 65
Азр Тиг ома! А5п тТийг Аїа 5ег Аг Мет сіи 5ек Тк су гГеи РгО гей 945 950 955 960 70
Агу че ніх ма! 5екг сіу 5ег Типг ІЇїе АТа ІТе Гей Гуз Ага тиг си 965 970 975 75 суз сбіп Ре гГеу Ттуг сіи ма! Агуд сіу сій тТиг туг гей Гуз с1у Ага 980 985 990
С1у А5п сі те тик тує тер ге тб с1у Мес губ Азр о сіп губ РНе 995 1000 1005
Азп Гей РКО тб о РгГО Рго Тйго ма! сій А5Зп о сіп сіп Аго гей сп 1010 1015 1020
АЗїа сій РПе 5ег А5зр Мет ІЇїе Аїа дп б5екгіеи сіп Гуз Аг9 сіп 1025 1030 1035
Аза діа сі1у Іїе Агуд 5ег сіп їу5 Рго Агуд Агод ма! Аїа 5ег туг 1040 1045 1050
Гуз Гуз с1іу тк ге сіи туг гей сіп Гей д5п Тк о те А5р гу 1055 1060 1065 сі 5еко тис тує РПе 1070 «210» 4 «2115» 1380 «212» ДНК «213» штучна послідовність
Зо «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид «400» 4 асддадассд ддстдсдста дсссстсстуд дссдстдсдс ссаааддсдс ссадсдссад бо тсадсдаадд адсссдддда аддсстстс аадссаасдд асассстдас асесасстдс 120 ассдестстуд даєсьстссст садсадссає адаасдаасї дддессдсса дастссадад 180 ааддддассдд аасддаєсудс аассаєттстасі сасаасадса ссасасаста сдсдадстад 240 дсдаааадсс даєссассає сассадааас ассадсдада асасддедас сєстдаааата 300 ассадсстда садссдсдда сасддссасс хтасссстудсд ссадададда стадсасадаа 360 тассаєсссд астсдсдддод сссаддсасс стддесасса сстсстсада асаасстаад 420 дсессаєсад сстесссаст дассссстдс тодсддадаса сасссадстс сасдаєсдасс 480 стдддстдсс хддісааадд дсасстсссд дадссадсда ссдєдасстуд даастсадас 540 ассстсасса асддддсасд сасстссссЯа сссдсссддс адесстсадд сстстастсад 600 стдадсадсуд тддсдадсдє дассссаадс адссадсссуд ссасстдсаа сдасддсссас 6б6о ссадссасса асассааадї ддасаадасс дЕсдсдссст сдасаєдсад саадсссаса 720 тдсссасссс стдаастсст аддададассуд сстдесесса ссттсссссс аааасссаад 780 60 дасассстса сдаєстсасд сасссссдад дісасаєдсд хтддасддсдда сдідадссад 840 даєдассссдуд аддсдсадес сасасддсас асааасаасд адсаддсдсд сассасссад 900 65 ссдссудстас дддадсадса дсссаасадс асдаєссдсд сдассадсас сстссссатс 960 дсдсассадд астддсєдад дадсааддад сссаадсдса аадсссасаа сааддсастс 1020 ссддссссса ссдадаааас сасстссааа дссададддс адсссстдда дссдааддсс 1080 70 тасассаєсда ассстссссд ддаддадстд адсадсадду садссадсст дасстдсатд 1140 ассаасддст сстассстсс сдасаєсссд дсддадсдда адаадаасдд дааддсадад 1200 75 дасаастаса адассасдсс ддссдсдстд дасадсдасд дсссстастс сстстасадс 1260 аадссстсад стдсссасдад сдадсддсад саддодсдасд сстссасста стссодтдаатд 1320 сасдаддсст стдсасаасса стасасдсад аадсссаєст сссдстстсс дадсааасда 1380 «210» 5 «2115» 711 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид «400» 5 асддасасда дддсссссас хсадстодстуд ддадстсстдс тдсестддсее сссаддсдсс бо 7 адасдсдсст асдатаєдас ссадасссса дсстстусда аддсадссдсі доададдсаса 120 дссассаєса адсдссаддс садссададс астадсаастї ддесадсстуд дсассадсад 180 ааассадддс адсстсссаа дсссстдаєс тасадддсає ссастстддс асстддадес 240 тсассдсддає ссададдсад сддаєстд9уд асасадссса стстсассає садсаддсота 300 дадсдсдссд акдстдссас стастастус садсадастї атастаасаа ссассттдає 360 щі аасддеєссд дсоддадддас сдаддасддасд дісаааддсад асссадссдс асстастатс 420 стсаєстссс сассадстудс сдаєсаддсуд дсаастуддаа садссассає сататоататад 480
Зо дсдаасааає ассстсссда стдссассадаєс ассстдддадд сддасддсас сасссаааса 540 астддсаєсд адаасадсаа аасассдсад аассстдсад ассудсрасста саасстсадс 600 адсассстда сассдассад сасасадтас аасадссаса аададстасас стдасаддадата 66о щ асссадддса сдасстсаді сдіссададс тісаасадда дсдастдеста 9 711 «2105 6 «2115» 1377 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид «4005» 6 асадададасстд ддастдсдстод дсекстсстуд дісдстдсдс ссаааддсді ссадсдєсад бо тсддасддадд адсссаддда ссдсстдудсс асасстдодда сасссстдас астсасстдс 120 асадссестуд дасссдасає садсаастає дсаатаєсстї дддессдсса ддстссадад 180 ааддддстдод аасссаєсдд асастасстадс тасддсаааа дсасатаста сдсдадстда 240 щ дсдаааддсес ддессдссає стссаааасс хсдссдасса сддсддаєся ддааассасс 300 адсссдасаа ссдаддасас ддссасстає ттттдсдсса дададдасад сдстасттає 360 (516) адссстааст тдасддддссс аддсассстуд дссассдєст сстсаддаса асстааддсс 420 ссассадест ссссастддс сссстдстдс ддддасасас ссадстссас дасдассстад 480 дастдсстдод ссааадддса сстсссддад ссадсдассд сдасстддаа стсдддсасс 540 5 стсассаасд дддасасдсас стесссдссс діссддсаді сстсаддсесе стасссдстд 600 адсадсуєдд сдадсудєдас стсаадсадс садсссудстса сстдсаасуді ддсссассса 6б6о 70 дссассааса ссааадсдда саадассдєс дсдссстсда сасдсадсаа дсссасасдс 720 ссассссстд аасссстддд дддассдусе дестссаєст сссссссааа асссааддас 780 ассстсаєда сстісасдсас ссссдаддсс асахтдсуєда хддсддасдс: дадссаддах 840 7 дассссдадд сдсадсссас асддсасата аасаасдадс аддсдсдсас сдсссддссд 900 ссдстасддд адсадсадсс саасадсасд асссдсудсдд єсадсассся ссссассдса 960 сассаддасї ддсєдадддд сааддадссс аадсдсааад сєссасаасаа ддсастссса 1020 дсссссаєсуд адаааассає ссссааадсс ададддсадс ссстддадсс дааддестас 1080 ассаєсдддсес стссссддда ддадстдадс адсаддаєсдд сєсадсстдас стасатсдатс 1140 аасддсеест ассстсссда сасстсдаста дадсдадада адаасдддаа ддсададдас 1200 аастасаада ссасдссдас састастддас адсдасддсе сстасеесст стасадсаад 1260 стстсадсдс ссасдадсда дсадсадсдд дасдасдєст ссасстдстс сасдатдсас 1320 даддсесстдс асаассаста сасдсадаад хссасстссс дссстссддуд хтааатда 1377 «210» 7 «2115» 711 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид «400» 7 асддасасда дддсссссас ссадстдста дадсесстдс хдсестддсе сссаддідсс бо адасдсдссе аєсдасаєдас ссадасссса дссістудсдуд аддсадссді дддаддсаса 120
Зо десассаєса адсдссаддс садссададс ассаасасст асестадсстуд дсассадсад 180 ааассадддс адсдесссаа дстсстдаєс тасадддсає ссасестддс асстададсес 240 тсассдсддає ссаааддсад тддасєссддад асададесса стстсассає садсддасата 300 дадсдсдссуд аєдстдссас стастастодас саасадддеє асадссатаа саасстсдає 360 сасадсеессуд дсддадддас сдаддсдаєса ассасаддсд аєссадесдс асстастдтс 420 стсаєстссс сассадстдс сдассаддаса дсаастуддаа садссассає сататататад 480 дсдаасааає асттссссда стдассассдіс асстдддадд хддаєддсас сасссаааса 540 астддсаєсуд адаасадсаа аасассдсад аассстдсад ассдсасста саасстсадс 600 адсассстда сасєдассад сасасадсас аасадссаса аададсасас стасааддатад 6б6о асссадддса сдасстсадї сдсссададс сссаасаддд дедастдета д 711 «210» 8 «2115» 30 «212» білок «213» Ното з5арієепе «400» 8 чІ1е ге ма! А5р гей Рпе А5п Ар сіп тує Рпе сіи Азр АЗп ма! тег 1 5 10 15 60
Аїа Рго А5р Ттуг Мет губ А5Зп ма! гей маї Гей тиг Гей 5ег 20 25 30 65 «210» 9 «2115» 25 «212» білок «213» Ното з5арієепе 70 «400» 9
Рпе АТа Ні АТа Ре Аг Ап гей Тиг РПе сіи сіу туг Азр с1у Рго 1 5 10 15 75 ма! тик Гей А5Зр Ар тер с1у А5р ма! 20 25
«2105» 10 «2115» 351 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид «400» 10 садссадсда аддадсссдд дададдсстс сісаадссаа сддатассст дасастсасс 60 тдсассдсст стадаєсстс сстсадсадс; сасадаасда астддадаєссд ссадастсса 120 ддадааддддс сддаасддає сдсаассаєі астсасааса дсассасата стасоасдадс 180 тдддсдаааа дссдаєсссас сассассада аасассадсуд адаасасддс дассстдааа 240 асдассадсс сдасадссдс ддасасдасс асттасссст дсдссадада ддасадсатд 300 дадсассаєс ссдасссудсд дддсссаддс ассстддаєса ссасстсстса 351 «2105 11 «2115» 117 «212» білок «213» штучна послідовність
Зо «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид «400» 11 сіп 5екг ма! Гуз сіи б5ег сіу сіу сіу Гей РПе Гу5 РгОо ТИг А5Зр тег 1 5 10 15
Ге тТийкг о Се тик Су тигома! бек сіу Рпе 5ег Ге 5ег 5ег Ніз Ага 20 25 30 мет А5п Тер ма! Аго сіп тйг о Рго с1у Гуз с1у ге сі тер Іе Аїа 35 40 45 чІ1е ше тис о нНіб А5п бек ІЇе Ттиг туг туг АТа 5ек Тгр АТа Гу 5ег бо 50 Ага бек Тиг оІТе ТИг Агу АбЗп Тиг обег сі Ап Тйб ома! Те гей гу 65 70 75 80 мет тис бек ге Типг АТа АТа д5р Тк Аїа тТийг отуг Рпе суз Аїа Ага 55 85 90 95
Сі А5р бек мет сіу туг туг Ре А5р Гей Тер с1у Рго С1у тиг Ге 100 105 110 бо
Уа! тик ІІе 5егк 5ег 115 65 «210» 12 «211» 330 «212» ДНК «213» штучна послідовність 70 «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид «400» 12 75 дсстасдаса сдасссадас сссадсстсо дсддаддсад стасдуддадд сасадссасс бо ассаадсдсс аддссадсса дадсассадсі аастуддесад сстддсаєса дсадааасса 120 дддсадестс ссаадсссст дасстасадд дсаєссассс тддсаєстдд ддасстсатсд 180 сддессадад дсадсддаєс содддасасад сссастстса ссаєсадсдд сахадаатає 240 дссдасдстуд ссасттаста стдісадсад астстасаста асаассаєст сдасаатадає 300 тІсддсадад ддассдаддає ддасаддессааа 330 «210» 13 «211» 110 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид «400» 13
АТа тукг Азр Мет Типг осіп Тис Рго АТа 5ег ма! сіи ма! АТа ма! с1у 1 5 10 15 сіу тпг ма! тик ІТе гу5 су5 сіп АТа 5ек сіп 5ег ІЇе 5ег дА5зп тер 20 25 30 іей АТа тер туг сіп сіп Гу5 Рго сіу сіп 5ек Рго Гуз Рго Гей Пе
Зо 35 40 45 туг Аг АїТа б5ег Ттийг Гей Аїа 5ег сіу ма! 5ег 5ег Аг Рпе Агд с1у 50 55 бо 5ег сіу 5ег с1у Ттийг о сіп РПпе тик гей Тийг о Іїе 5ег сіу ма! си су 65 70 75 80
АТїа А5р Аїа АТа тиг отуг тукг Су сіп сій те о туг ТС А5П А5ЗПпП Ні 85 90 95
Ге А5р Ап с1у Рпе сіу сіу сіу тк сій ма! ма! ма! Гуз 100 105 110 «210» 14 «211» 348 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид «400» 14 садссддаєдд аддадсссдд дадсісадсстад дісасдсстуд ддасасссст дасастсасс 60 (516) тдсасадсст стоддасєссуда сассадсаас стастдсаатає сстдададссса ссаддстсса 120 ддадааддддс сддаасссає содасасаєі адссасддса ааадсастата стасодсдадс 180 тдддсдааад дссдасссдс сасстссааа асстсудссда ссасдасадада сстдддааатс 240 65 ассадсссда саассдадда сасддссасс хтастсудсд ссадададда садсодстаст 300 тасадссста астстдсдоддод сссаддсасс стоддссассуд кстсстса 348 70 «210» 15 «2115» 116 «212» білок «213» штучна послідовність 75 «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид
«400» 15 сіп 5екг ма! сі сі б5ег сіу с1у Агуд Гей ма! Тиг о Рго сіу тйг Рго 1 5 10 15
Гей ТтипгоГеи тик о Су5 Тйг АТа б5ег сіу 5ег А5р ІЇе 5ег А5Зп Туг Аїа 20 25 30 чІ1е 5ег Тер ма! Агу сіп Аїа Рго СсСІу Гуз с1іу Гей си Ре те Сс1Уу 35 40 45 туг те 5ег туг с1у Гуз 5екг ІЇе туг туг АїТа 5ег Тер АТа Гуз с1у 50 55 60
Агу Ре АЇїа ІЇїе 5ег їу5 ТИг о 5ег о бег Ттпг тик ма! А5р ге си Пе 65 70 75 80
Тигобег о Рго тТийг оте сій А5ротйг Аїа тис тує Ре су5 АїТа Аг сій 85 90 95
А5р 5екг Аїа Тиг туг 5ег РГО А5п ей Тер С1у Рго сіу тис Гей ма! 100 105 110
Зо
Тиг ма! 5ег 5ег 115 «210» 16 «211» 330 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид «400» 16 дсстаєдата сдасссадас сссадсстістї асуддаддсад стдсдддадд сасадссасс 60 ассаадсдсс аддссадсса дадсаєссаас асстасттад сстддсаєса дсадааасса 120 ддадсадсдес ссаадстсст дасстасадд дсаєссассс тддсаєссдд дастсатса 180 сддсссааад дсадсддасєс сдоадасадад сссастстса ссассадсдо сахтададсахє 240 дссдасдстуд ссасттаста стдісаасад ддаєсасаде асаасаасст сдассатаст 300 тІсддсадад ддассдаддає ддасддессаса 330 «210» 17 «211» 110 «212» білок 60 «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид 65 «400» 17
АТа тукг Азр Мет Типг осіп Тис Рго АТа 5ег ма! сіи ма! АТа ма! с1у 1 5 10 15 70 сіу тик ма! тік ІТе Гуз Су5 сіп АТа б5ек сіп бек Іїе дп тиг туг 20 25 30 75 Гей АТа тер туг сіп сіп гГу5 Рго с1у сіп Агд Рго Гуз Гей Геи Пе 35 40 45 туг Агд АїТа б5ег Ттийг Гей діа 5ег сіу ма! 5ег 5ег Аг Рпе Гуз С1У 50 55 бо 5зег сіу 5ег с1у Ттийг сі РПпе тик гей Тийг о Іїе 5ег сіу ма! сіи су 65 70 75 80
АТїа Ад5р Аїа діа тийг туго туго суз сіп сіп с1іу тук 5ек туг А5п А5ПпП 85 90 95
Ге А5р Аг АТа Рпе сіу сіу сіу тк сій ма! ма! ма! тиг 100 105 110 «210» 18 «211» 15 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «400» 18 адссасадаа сдаас 15
Зо «210» 19 «211» 48 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «400» 19 ассаєссассс асаастадсає сасасастас дсдадссддд сдаааадс 48 «210» 20 «2115» 30 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «400» 20 даддасадса сддддсаєсса сестсдасета 30 «2105» 21 «2115» 5 «212» білок «213» штучна послідовність бо «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 21 зекг Ні Агуд мес д5п 1 5 65 «210» 22 «2115» 16 «212» білок 70 «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид 75 «400» 22 чІ1е ше тис о ніб Аб5п 5ег Ії1е тиг о туг туг АТа 5ек Тгр АТа Гу 5ег 1 5 10 15
«210» 23 «2115» 10 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 23
Сі А5р 5екг мет сіу тук туг Ре дА5р геи 1 5 10 «210» 24 «2115» 33 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «400» 24 саддссадсс ададсаєсад саастддста дсс 33 «210» 25 «2115» 21 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «400» 25 адддсаєсса стстддсаєс є 21 «210» 26 «211» 36 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «400» 26 садсадассс асастаастаа ссаєстсдає аатдає 36 «2105» 27 «2115 11 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «4005» 27 60 сіп АТа 5ег сіп 5ег ІЇе 5ег А5п Тер Гей Аїа 1 5 10 «210» 28 65 «2115» 7 «212» білок «213» штучна послідовність «220» 70 «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 28
Аг АТа 5ег тик Ге Аїа 5ег 1 5 75 «210» 29 «211» 12
«212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 29 сСіп сіп тб тує Тис Аби А5пП Ні ге А5р А5п с1у 1 5 10 «210» 30 «211» 15 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «400» 30 аастасдсаа татсс 15 «2105» 31 «211» 48 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид
Зо «4005» 31 тастассадес асддсаааад стасасастас дсдадсстддда сдаааддс 48 «2105» 32 «211» 12 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «4005» 32 адссстааст та 12 «210» 33 «2115» 5 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 33
Азп туг Аїа Іїе 5ег 1 5 «2105» 34 бо «2115» 16 «212» білок «213» штучна послідовність «220» 65 «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «4005» 34 тук Пе б5ег туг сіу Гуз 5ег І1е туг туг Аїа 5ег Тер АїТа Гуз С1У 1 5 10 15 70 «210» 35 «2115» 10 «212» білок 75 «213» штучна послідовність «220»
«223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 35
Сі А5р 5екг Аїа тик туг 5ег РгГО А5П Гей 1 5 10 «210» 36 «2115» 33 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «400» 36 саддссадсс ададсаєсаа сасстастта дсс 33 «2105» 37 «2115» 21 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «4005» 37 адддсаєсса стстддсаєс є 21
Зо «210» 38 «211» 36 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «400» 38 саасаддаєс асадссасаа саасстсдає сдтдси 36 «210» 39 «2115 11 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 39
Сп АТа бек сіп 5ек І1е д5п тТиг туг гей Аїа 1 5 10 «210» 40 «2115» 7 «212» білок «213» штучна послідовність бо «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 40
Агу АТа 5ег Тк Ге Аїа 5ег 1 5 65 «2105» 41 «211» 12 «212» білок 70 «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид 75 «400» 41 сіп сіп сіу туг 5ег туг А5пП А5пП Гей А5р Ага Аїа 1 5 10
«210» 42 «211» 459 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид «400» 42 мес сіи тик с1у гей Аго тер Гей гей Гей ма! АїТа ма! гей Гуз с1у 1 5 10 15 ма! сіп суб сіп 5ег ма! гу5 сі б5ек сіу сСіу С1у Ге РПпе губ РгОо 20 Тиг о А5р о тиг огеи тк огей те о Суз тис ма! б5ег с1у Рпе 5ег Гецй 5ег зек Ні Агуд Мест д5п Тер ма! Аг сіп тйг Рго с1у Гуз СсС1у гГеи си 25 50 55 бо
Тер те АТа Іїе ІЇїе тик Ні Ап 5ег ІЇ1е тТиИг туг тук АїТа 5ег тер 65 70 75 80
Зо
АТїа Гуз 5ег Агд 5ег ТиИг о ІЇе ТИг Агу АЗп Тис бек сі А5Зп о тАг ма! 85 90 95 35
ТК Гей Гуз Мет тпг бек гей Тк АТа АТа д5р Тис АїТа тик тукг РНе 100 105 110 40 суз Аїа Агуд сій А5р бег Мет сіу тукг тукг Рпе Азр Ге Тер с1у Рго 115 120 125 сС1у тис ге ма! тик І1е б5ег 5ег с1у сіп Рго Гу5 Аїа Рго 5ег маї 45 130 135 140
Ре Рго Гей АТа Рго Суз Суз с1іу Азр ТИг Рго 5ег 5ег Ттиг ма! тик 145 150 155 160
Ге сіу Ссу5х Гей ма! Гуз сіу туг Гей Рго сі Рго ма! тийг ма! тик 165 170 175
Тер А5п о бег сіу тк Гей Тк о АбЗп сіу ма! Агу тб Ре Рго 5ег Ммаї 180 185 190 60 Агуд сіп 5екг о 5ек сіу Ге туг 5ег їеи 5ег о 5ег ма! ма! 5екг ма! тиг 195 200 205 5зег б5ек 5ег біп Рго ма! тік Суб Ап ма! АїТа Ні Рго Аїа тис А5П 65 210 215 220 тик оСуз ма! А5р губ тик ма! АТа Рго 5ег тТиг Суб 5ек губ РгО Тис 225 230 235 240 70 суз РгОо РгОо Рго сій Гей Ге сіу с1у Рко 5екг ма! Ре І1е РМпе РГгОо 245 250 255 75
Рго Гуз Рго Гуз Азр ТИг оїеи Мет Іїе 5екг Аг Тиг о Рго сіи ма! тик 260 265 270 суз ма! ма! ма! Азр ма! б5ег сій д5р А5р Рго сій ма!ї сіп Рпе Тег 275 280 285
Тер туг ІТе А5п А5пП с1и сіп ма! Агуд Тиг АїТа Агу РгО РКО Гец Ага 290 295 300 сі сбіп бій Ре А5п о бег Ттйг о ІТе Агуд ма! ма! 5ег тТиг гей Рго Іїе 305 310 315 320
Аїа нів сіп д5р тер геш Агуд сіу Гуз сі Рпе Гуз суз Гуз ма! нів 325 330 335
А5п Гуз АЇїа Гей Рго АЇа Рго ІЇе сіи Гуз Тк Іїе 5ек Гуз Аїа Ага 340 345 350 сіу сіп Рго Ге сій Рго Гуз ма! туг тиг мес с1у Рго РГгО Аг9 си 355 360 365 сі Ге б5ег 5ег Аго бег ма! бек гей Тк Су Мет ІЇїе А5п сіу РПе 370 375 380
Зо тук Рго 5ег А5р ІЇе 5ег ма! сіи Тер си Гу5 А5Зп су Гуз АїТа Си 385 390 395 400
А5зр А5п тує Гуз Тис о тТйг Рго АТа ма!ї гей А5р 5ег А5р с1у 5ег туг 405 410 415
Рпе Ге тукг бег їу5 Ге бег ма! Рго тік 5ег сіи Тер сіп Аго9 с1у 420 425 430
Азр ма! Рпе тТиИг Суз 5ег ма! мет ні сій АїТа еп ніх д5п ніх тус 435 440 445
Тпг сій Гуз 5ег ІТїе 5ег Аг 5ег Рго су Гуз 450 455 «210» 43 «2115» 236 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид «400» 43 60 мет А5р ТИг Агуд Аа Рго тпг сіп ге ге сСТ1Уу гей їеи їеи гей тер 1 5 10 15
Ге Ркго с1у АТа Аг сСу5 АТа туг Ад5р Меє ТиИг о сіп Тиг Рго Аїа 5ег 65 20 25 30 ма! сіи ма! АТа ма! сСіу сіу тийг ма! тик ІТе Гуз су5 сіп Аїа 5ег 35 40 45 70 сіп 5ег ІЇе 5екг Ап Ттгр Ге Аїа Тер тук сіп сіп Гуз Рго с1у сіп 50 55 60 75 зекг Рго Гуз Рго Ге ІЇе туг Агуд Аїа 5ег ТК Гей АТа 5ег су ма! 65 70 75 80 зекг 5ег Агу Рпе Агуд сіу 5ег сіу бег с1у Тк сіп Ре тиг ге тиг 85 90 95 че 5екг с1у ма! сі Су5 АТа д5р Аїа Аїа тпг тук туг су5з сп сп 100 105 110
Тк отук Тиг А5пП А5п Ні гей А5р Ап с1у Ре сіу сіу сіу тик си 115 120 125 ма! ма! ма! Гуз сіу А5р Рго ма! Аїа Рго Ттипг мМа!Ї Гей Іїе Рпе Рго 130 135 140
Рго АТа Аїа А5р сіп ма! АТа тпг о сіу тпк ма! тик Іїе ма! су ма! 145 150 155 160
АТа А5п гу Ттуг РИПе Рго А5зр ма! тик ма! тик тер сіи ма! А5р с1у 165 170 175
Тк оте сТій те те сТ1у чІЇїе СТИ Аби 5ег губ ТИг РКО сп А5ЗпП 5ег 180 185 190
Зо
АТа А5р Су5 ТиИг о туг А5пП Ге б5ег бек ТИг Гей ТиИг оГеу Тис бек тик 195 200 205 сіп тукг А5зп 5ег Ні уз сі тує тик сСуз Агд ма! тиг о сіп с1у тпг 210 215 220
Тиг о бег ма! ма! сіп 5екг РМпе д5п Аг сіу А5р су 225 230 235 «210» 44 «2115» 458 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид «400» 44 мес сіи тик с1у гей Аго тер Гей гей Гей ма! АїТа ма! гей Гуз с1у 1 5 10 15 ма! сіп суз сіп 5ег ма! сі сіи б5ег сіу с1у Агуд Гей ма! Тиг РгОо 20 25 30 60 с1у Тис о Рго Ге Типгогеи тб о Суз тб Аїа 5ег с1у 5ег А5р Іїе 5ег 35 40 45
А5зп туг Аїа Іїе 5ег Тер ма! Агу сіп АїТа Рго сІу Гуз СТУ гГеи си 65 50 55 60
Рпе ІІ1е сіу туг Іїе 5ег туг сіу Гуз 5ег Ії1е туг туг АїТа 5ег тер 65 70 75 80 70
Аїа гуз сіу Агуд Рпе Аїа Іїе 5ег їу5 ТтИйг о5екг о 5ек Тк тТиг ма! А5р 85 90 95 75
Гей сі Іїе тТИйг бек РКО Тиг тис сі А5р тк АТа тис тує РВе су 100 105 110
Аїа Адгуд сій А5р о 5ег АЇїа Тиг о туг б5ег Рго А5п Гей Тер с1у Рго Сс1у 115 120 125 тик Ге ма! тис ма! 5ек бек с1у сій Рго Гу5 АЇа Рго 5ег ма! РНе 130 135 140
Рго Ге Аїа Рго Суб Суз с1у А5р ТИг РгО бек 5ег Тиг ма! тик ге 145 150 155 160 сіу суз Ге ма! Гуз сіу туг Гей Рго сій Рго ма! тТиг ма! тиг тер 165 170 175
А5зп о5екг о сіу Тк Ге Тис о А5п сіу ма! Агу Тис Рйе Рго 5ег ма! Ага 180 185 190 сіп 5ег бек сіу Гей туг 5ег Ге 5ег о 5ек ма! ма! 5ег ма! тис 5ег 195 200 205 5зег о 5ек сій Рго ма! тс Суб Азп ма! АТа Ні Рго АЇїа ТИг А5ЗП Тиг 210 215 220
Зо
Гуз ма! Азр ух тик ма! АТа Рко 5ек тик сСу5 5ег Гуз Рго Тис су 225 230 235 240
Рго РгОо РгГоО сій Ге їеи сіу с1у Рго 5ек ма! Рпе Іїе РПпе Рго РГгО 245 250 255
Гуз Рго Гуз Азр ТИг оїеи Мет ІТе 5екг Агуд Тийг о Рго сі ма! тег су 260 265 270 ма! ма! ма! А5зр ма! 5ег сіп А5р А5р Рго сіи ма! сіп РПпе тиск тер 275 280 285 туг те А5п А5п си сіп ма! Агу тйг АїТа Аг Рго РгО Гей Аг си 290 295 300 сбіп сбіп Ре А5п б5ег Тиг о ІТе Агуд ма! ма! 5екг Ттиг Ге Рго Пе Аїа 305 310 315 320
Ні сіп А5р Тер ге Агуд сіу Гуз сій Ре Гуз Суз Гуз ма! нів А5п 325 330 335
Гуз АТа Геп Рго АЇїа Рго ІТе сій Гуз Тік Іїе 5ег уз АїТа Агд с1у бо 340 345 350 сіп Рко Ге сі Рго уз ма! тук тик мес с1у Рго РгОо Аг9 си сій 355 360 365 65
Ге бек бек Агуд б5ег ма! б5ег о їеи Тиг су Мет Іїе А5п сіу РПе туг 370 375 380 70
Рго 5ег А5зр Іїе 5ег ма! сі тер сій Гу5 Ап СсІу Гуз АТа СсСіи А5р 385 390 395 400 75 Азпотук Гуз Тк о Тйг Ро АТа маї гей А5р 5ег А5р сіу 5ег Туг РНе 405 410 415
Ге тук бек Гуз Ге бег ма! Рго Тиг 5екг сіи Тер сіп Аг с1у дор 420 425 430 ма! Ре тик Суз 5ег ма! мет ніх сі АТа гей Ні А5п Ні тук тис 435 440 445 сіп Гуз 5ег ІЇе 5ег Агу 5ег Рго с1у Гуз 450 455 «210» 45 «2115» 236 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид «400» 45 мет А5р Тиг Агуд Аїа Рго тпг сіп гей гей сС1Уу гГец ге їеи гей тер 1 5 10 15
Ге Ркго с1у АТа Аг су5 АТа туг А5р Меє ТиИг о сіп Тиг Рго Аїа 5ег 20 25 30
Зо ма! сіи ма! АТа ма! сСі1у сіу тпйг ма! тк Ії1е Гуз су5з сіп Аїа 5ег 35 сіп 5ег Іїе А5зп Тиг туг Ге АїТа тер тук сіп сіп Гуз Рго с1у сіп 60
Агу Рго Гуз Гей Ге Іїе туг Агу АїТа 5ег Тис Гей АТа 5ег су ма! 40 65 70 75 80 зег 5ег Агу Рпе Гуз сіу 5ег сіу бег сіу Тк сі Ре Тиг Ге тиг 85 90 95 45 че 5екг с1у ма! сі су5 АТа д5р Аїа Аїа тпг тук туг су5з сп сп 100 105 110 50 сіу туг бек туг А5п А5п Гей А5р Аг Аїа Рпе сіу сіу сіу тпг си 115 120 125 55 ма! ма! ма! тик сіу А5р Рго ма! Аїа Рго тик ма!Ї Гей Іїе Рпе Рго 130 135 140
Рго АТа Аїа А5р сіп ма! АТа тийг о сіу тпг ма! тик Іїе ма! су ма! бо 145 150 155 160
АТа А5п гу Ттуг РИПе Рго А5зр ма! тик ма! тик тер сіи ма! А5р с1у 165 170 175 65
Тк оте с1пй тб те с1у чІЇїе СТИ Аби 5ег губ ТИг РКО сп А5ЗпП 5ег 180 185 190 70
АТа А5р Су5 ТиИг о туг А5пП Ге б5ег бек ТИг Гей ТиИг оГеу Тис бек тик 195 200 205 75 сбіп тукг А5зп бек Ні уз сі тує тик о сСуз Гуз ма! тиг сіп с1у тпг 210 215 220
Тиг о бег ма! ма! сіп 5екг РМпе д5п Аг сіу А5р су 225 230 235 «210» 46 «2115» 420 «212» білок «213» Ното з5арієепе «400» 46 мес гу тик Гей гей гей А5ЗріеиЧ АїТа гей Тер 5екг гей гей Рне сіп 1 5 10 15
Рго сіу Тер Гей бек Ре 5ег 5ег сіп ма! бек сій Ап Су Ні А5П 20 сіу 5екг туг сі Іїе б5ег ма! гей мес мес сіу Ап 5ег Аїа Рпе Аїа
СТІ РгО Гей їу5 Ап Гей Сі А5р АТа ма! Азп сіи СІ1у гей си Пе 25 50 55 бо
Уа! Агуд с1у Агд Ге сіп А5п Аїа сіу Гей д5п ма! тик ма! Ап Аїа 65 70 75 80
Зо
Тиг Ре мет туг 5ег А5р сіу Ге Іїе Ні А5п 5ег с1у А5зр суз АГгЗ 85 90 95 35 5зег 5ег Тк Ссуз сі с1у гГеш А5ріеи їеи Аг Гуз Іїе 5ег Азп Аїа 100 105 110 40 сіп Аг мет сіу суз ма! Гей ІїТе с1у Рго 5ег Су5з Тиг туг 5ег тпг 115 120 125
Рпе сіп Меєс туг Гей А5р тик сі Гей б5ег тує Рго Мет Іїе 5ег Аїа 45 130 135 140 сіу 5ег РИПе сІіу Гей бег сСу5 Азр Туг Гуз сі ТИг оГеу Тиг Аг9 Гей 145 150 155 160 мет 5ег Рго АЇїа Аг уз їеи мес туг Ре Ге ма! Ап Рпе Тер Гуз 165 170 175
ТК Аби Ар Ге Рго Ре Гу5 ТиИг о Туг б5ег Тер 5екг тик 5ек тук ма! 180 185 190 60 туг Гуз Азп с1у тк сій Те осі А5р Суб Ре Тгр туг Гей А5Зп Аїа 195 200 205
Гей сі Аїа бек ма! 5ег тує Рпе 5ек ніх сіи ге сіу Рпе Гуз ма! 65 210 215 220
Уа! гей Агуд сіп А5р гу сі Ре сіп А5р ІТе Гей мет А5р нів А5Пп 225 230 235 240 70
Агуд Гуз 5екг А5п ма! Іїе ІІе мех су5 сіу су Рго сі РПе гГеи Туг 245 250 255 75
Гуз Ге Гуз с1у А5р Аго АїТа ма!Ї АТа сій А5р Іїе ма! ІЇе Іе гей 260 265 270 ма! Азр Гей Ре А5п А5р сіп туг Рпе сіи Ар Ап ма! Типг Аїа рРго 275 280 285
А5р туг мет Гуз АЗп ма! Ге ма! гей тийг Гей б5ег Рго сС1у А5Пп 5ег 290 295 300
Ге Ге АЗзп бек б5ег Рипе 5ег Агу А5п о Гец б5ег Рго ТИг Гуз Аго А5р 305 310 315 320
Рпе АТа Ге АТа туг Ге Ап с1у ІЇТе Гей Ге Ріпе СсІу ніх мет гей 325 330 335
Гуз ІІе Рпе Гей сіи Ап с1іу сі А5п ІЇе тик ТИг о РгОо Гу5 Ре Аїа 340 345 350
Ніб АТа Рпе Агу А5п ге ТиИг о РИйе сіи с1іу тукг Азр сіу Рго ма! тТиг 355 360 365
Гей А5р А5р Тер с1у А5р ма! А5р 5ег тиск Мет ма!ї ге ге тук тик 370 375 380
Зо 5ег ма! Азр ТтиИг Гуз Гуз тук Гуз ма! Ге ге Тиг о тук А5зр тик ні 385 390 395 400
Уа! А5п о гуз Тк туго Рго ма! А5зр Мет б5ег о Рго Тк Ре тТиИг тер Гуз 405 410 415
А5зп 5ег Гуз Гецй 420 «210» 47 «211» 2028 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид «400» 47 сдсуддаєссс ссассаєдаа дасастдста ссддасьвудд сессдсддєс астадстсттс 60 садсссадддасє аддстдсссс стадесссссад дсдадссада астдссасаа тадсадстат 120 даааєсадсд ссстдаєдає доаддсаастса дсстссдсад адсссстдаа ааассттддаа 180 дасдсддсєда асдаддддсс ддааасадсд ададдасдєс сдсаааасдс сддсстааатє 240 бо дсдасстудєда асдсстастсс сасасаєсссод дасддсствда сссасаастс аддсдастас 300 сддадсадса сстдсдаадд сстсдасста стсаддаааа їссссааасдс асаасддата 360 65 дастдсассс ссатадддес стсасудстаса тассссасст сссадасдта сстсдасаса 420 даассдадсс ассссаєдає стсадстада адссссуддає сдесасдсда стасааадаа 480 ассттаасса ддседаєсдєс сссадстада аадссдаєує асессттвддає саастсстад 540 70 аааассаасуд асстдссстт саааасттає ссстуддадса сетссудтасдс ссасаадаатє 600 ддсасадааа стдаддастд стсстоддсас стсаасдстс хддаддстад садатестсстатє 660 75 тЕстсссасдуд аастсаддссс сааддсдуастд ссаадасаад асааддадес ссаддататс 720 тсаасддасс асаасаддаа аадсаасудсуд ассассастдасє дсдасаддссс ададесстс 780 тасаадстда адддсдассд адсадсаддсе даадасаєсд ссасстаєсст адсодаєсеє 840 тссааєсдасс адсасссдда ддасаасдес асадсссстд астастаєдаа ааасдесст 900 деЕсстдасдс хдхстсстдод даасетссстї стааасадсе сеесстссад дааєсстатєтса 960 ссаасаааас дадассссудс ссттдсстасє ссдаасддаа ссстдстстс тадасатата 1020 стдаадатасє сссссдаааа сддадаааас асстассассс ссааассттдс тсасдстссс 1080 аддаасстса стсстдаадд дсасдасаддс ссадсдасся тддаєсдасто дададатадєтс 1140 дасадсасса тддсдстсст дсастасстсо дсддасасса адааасасаа даєсстсса 1200 асстасдаса сссасдсааа саадасстасє сстдсддаста сдадссссас асссасттда 1260 аадаассста аасстсстаа сдастасєссаса дассддддсес стсадсссад адсдсссата 1320 асасадаасс сстдесстсс астсааадад тассссссат дсдсадсссс адасстсдса 1380 дасдсассає ссдссттсає стсссстсса аадаєсаадд асдстасесає даєсстссста 1440 адссссастдуд ссасасдастає дасддсддає дсдадсдадд асдасссада сдсссадатс 1500 адсстддасєсд сдаасаасдс ддаадсасас асадсссада сасааассса тадададдах 1560 тасаасадса стстссдддс ддаєсадсдсс стссссассс адсассадда стадасдадс 1620
Зо ддасааддсасє ссааасдсаа ддссаасаас ададссстсс сассссссас сдадаааасс 1680 асстсаааас ссададддсес адсаададсс ссасаддсає асдестсдсс тссассадса 1740 даададаєда стаадааада дсссадестуд асстдсаєда ссасаддсес стсасстдсс 1800
З5 даааєсдстд сддастддас садсаасддд сдсасададс аааастасаа даасассдса 1860 асадссстдуд ассстдасдд ссстсасстсс асдсасадса адсссададс асаааададс 1920 40 астсдддааа дзаддаадест ссссдсстдс ссадсддєсс асдадддаєсо дсасаатсас 1980 сттасдасса адассаєсстс ссадссестуд дадасааасаає стададса 2028 45 «210» 48 «211» 667 «212» білок «213» штучна послідовність 50 «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид «400» 48 мес гу тик Гей гей гей А5Зріеиш АїТа гей Тер 5ег їеий Гей РНне сп 1 5 10 15 55
Рго сіу Тер Гей бек Ре 5ег 5ег сіп ма! бек сій Ап су Ні А5П 20 25 30 60 сСіу 5ег тукг сі Іїе 5ег ма! Ге Мехс мес сіу А5п 5ег АТа Рне Аїа 65 СІ РРО Гец Гуз Ап Геи си А5зр АїТа ма!Ї Ап сіи сС1у гей си Іїе бо
Уа! Агуд с1у Агуд Ге сіп А5п АїТа с1у Гей А5п ма! тик ма! Ап Аїа 70 65 70 75 80
Тиг Ре мет туг бек А5р сіу Ге Іїе Ні А5п 5ег с1у А5зр суз АГгЗ 85 90 95 75 5ег 5ег Тк суз сі с1у гей А5р ей їеи Агуд Гуз Іїе 5ег А5зп Аїа
100 105 110 сіп Аг мет сіу суз ма! Гей ІїТе с1у Рго 5ег Су5з Тиг туг 5ег тпг 115 120 125
Рпе сіп Меє тукг гей А5р тик сі Гей б5ег тує Рго Мет Іїе 5ег Аїа 130 135 140 сіу 5ег РМПе сІіу Гей бег сСу5 Азр Туг Гуз сі ТИг о Геу Тиг Аг Гей 145 150 155 160 мет 5ег Рго АЇїа Аг уз їеи мес туг Ре Ге ма! Ап Рпе Тер Гуз 165 170 175
ТИг о АЗп Ар огеи Рго Ре Гуз ТиИг туго бег Тер 5ег Тис о 5ег туг ма! 180 185 190 тук Гуз АЗп с1у тпг сі те сі АЗр Суб Ре Тер тук Гей А5Зп Аїа 195 200 205
Гей сі Аїа бек ма! 5ег тує Рпе 5ек ніх сіи Гей с1у Ріпе Гуз ма! 210 215 220
Зо
Уа! гей Агуд сіп А5р гу сі Ре сіп А5р ІТе Гей мет А5р нів А5Пп 225 230 235 240
Агуд Гуз 5екг А5п ма! Іїе Іїе мес су5 сіу с1у Рго сій РІПе гГеи Туг 245 250 255
Гуз Ге Гуз с1у А5р Аго АїТа ма!Ї АТа сій А5р Іїе ма! ІЇе Іе гей 260 265 270 ма! Азр Гей РМИпе А5п А5р сіп туг гей сій Ар Ап ма! Тиг Аїа рРго 275 280 285
А5р тукг мет Гуз АЗп ма! Ге ма! гей тийг Гей б5ег Рго сС1у А5Пп 5ег 290 295 300
Гей Гей А5п 5ег бег РМпе бек Аго А5пП Гей бек Рго ТИг Гуз Аго А5р 305 310 315 320
Ре АТа гей АїТа тукг гей Ап сСІіу ІЇе Гей ей Ре сС1у ніх мес ге 325 330 335 60 Гуз Іїе Ре Ге сій Азп с1у сі А5п ІЇе Тис о Тиг о Рго Гуз Ре АїТа 340 345 350
Ніб АТа Ре Агу А5п ге ТиИг Ре сіи с1іу тукг Азр сіу Рго ма! тТиг 65 355 360 365
Гей А5р А5р Тер с1у А5р ма! А5р 5ег тиск Мет ма!ї ге ге тук тик 370 375 380 70 5ег ма! Азр ТтиИг Гуз Гуз тук Гуз ма! Ге ге Тиг о тук А5зр тик ні 385 390 395 400 75 ма! Азп Гуз ТиИг туго Рго ма! Азр Мест б5ег Рго ТИг РПе ТиИг тер Гуз 405 410 415
А5зп о 5екг Гуз Гей Рго А5п А5р ІЇе Типг с1у Агуд с1у Рго сіп Рго Ага 420 425 430 ма! Рго Іїе Тийг сій А5пП РКО Су5 РГО РГО Гей губ сі Су5 РгО РГгГО 435 440 445 су5з АЇїа АЇїа Рго Азр Гей Аїа сіу АТа Рко 5екг ма! Ре І1е РМпе РгОо 450 455 460
Рго губ Іїе Гуз Азр ма! їеи мет Іїе 5ек їеу б5ег Рго Мет ма! тик 465 470 475 480 суз ма! ма! ма! Азр ма! б5ег сіи А5р А5р Рго А5зр ма! сіп Іїе 5ег 485 490 495
Тер Рпе ма! А5п А5п ма! сіи ма! ніх Ттипг АТа сіп тс сіп те нів 500 505 510
Агуд сій А5р о туг А5п о 5ег ТИг огГей Аг ма! ма! 5екг АїТа геи Рго ІїЇе 515 520 525
Зо сіп ніх сіп А5р Тер мес б5ег сіу губ Аїа Рпе Гу сСу5 Гуз маї деп 530 535 540
А5п Аго Аїа Гей Рго бег Рго Іїе сіи Гуз Тиг Іїе бек Гуз РгО Ага 545 550 555 560 с1у Рго ма! Агуд Аїа Рго сіп ма! туг ма! Ге Рго Рго Рго Аїа си 565 570 575 сіи мес тик огуз Гуз Сі Ре 5ег ге Тк Су5 мес Іїе тик с1у РНе 580 585 590
Ге Рго АТа сі ІІїе Аїа ма! Ад5р Тер Тиг 5ег Ап с1у Аг тпг си 595 600 605 сій А5п туго Гуз АЗп о ТИг о АТа тийг Ома! Гей А5р бек АЗр с1у 5ег туг 610 615 620
Рпе мес туг б5ег їу5 Ге Агод ма! сіп Гуз 5ег Тиг Тер си Аго с1у 625 630 635 640 5ег Гей Ре АТа Суб 5ег ма! ма! ніх сіи с1у Ге Ні А5п Ні Ге бо 645 650 655
Тпгботипг огСуз тб ІТе 5ег Аг 5ег їеу сС1у Гуз 66о 665 65 «210» 49 «211» 41 «212» ДНК 70 «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний праймер «400» 49 75 сдсддасссс стсассаєдаа дасдсєтдстд ссддасстда с 41
«210» 50 «211» 42 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний праймер «400» 50 тддасассст ддассдаддд ссссадсста саастаєссаєте ад 42 «2105» 51 «211» 49 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний праймер «400» 51 саддссдддд ссстсадссс ададсдссса стаасасадаа сссстдісс 49 «2105» 52 «211» 40 «212» ДНК «213» штучна послідовність
Зо «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний праймер «400» 52 тдсестадає тасссассса дадассддда дасддестса 40 «210» 53 «211» 20 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний праймер «400» 53 асстоасадад сссестастда 20 «2105» 54 «211» 20 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний праймер «400» 54 сассссаддасє ассасдадда 20 бо «2105» 55 «211» 18 «212» ДНК «213» штучна послідовність 65 «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний праймер «400» 55 асссаддсда састатсад 18 70 «210» 56 «2115» 17 «212» ДНК «213» штучна послідовність 75 «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний праймер
«400» 56 деессссад ссасдас 17 «2105» 57 «211» 16 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний праймер «4005» 57 аасадстастд ассатад 16 «210» 58 «211» 8 «212» білок «213» Ми5 5р. «400» 58
Рго Агуд ма! Рго Іїе тиг си А5Пп 1 5 «210» 59 «2115» 4 «212» білок «213» Ми5 5р. «400» 59
Гей Ге су с1у 1 «210» 60 «2115» 4 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 60
Гей АТа сС1у Аїа 1 «2105 61 «2115» 4 «212» білок «213» Ми5 5р. «400» 61
Гуз Гуз су С1У 1 бо «210» 62 «2115» 4 «212» білок «213» штучна послідовність 65 «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 62
Гуз АТа с1у Аїа 70 1 «210» 63 «2115» 5 75 «212» білок «213» Ми5 5р.
«400» 63
Си Ре Гуз сСуз Гуз 1 5 «210» 64 «211» 5 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 64
АТа Рпе Гуз су Гуз 1 5 «210» 65 «2115» 4 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 65
Рпе Гуз су Гуз 1
Зо «210» 66 «2115» 5 «212» білок «213» Ното з5арієепе «400» 66 с1у Агд с1у Рго сп 1 5 «2105» 67 «2115» 5 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 67 сіу туг туг тер 5ег 1 5 «210» 68 «2115» 16 «212» білок «213» штучна послідовність «220» 60 «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 68 сі Іїе А5зп Ні Аг с1у А5п Тс А5п о А5р А5Зп РГО 5ег ей Гуз 5ег 1 5 10 15 65 «210» 69 «2115 11 «212» білок 70 «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид 75 «400» 69 сі Агд сіу туг тийг о туг с1у А5п РПе А5р Ні 1 5 10
«210» 70 «2115 11 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 70
Аг АТа 5ек сіп 5ег ма! 5ег Аг Ап Гей Аїа 1 5 10 «2105» 71 «2115» 7 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «4005» 71 с1у Аїа 5ег Тиг Аг9 Аїа тпг 1 5 «2105» 72 «211» 9 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «4005» 72 сіп сіп туг Гуз Тиг тер Рго Аг те 1 5 «210» 73 «211» 15 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «400» 73 дассастаст ддадс 15 «2105» 74 «211» 45 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «4005» 74 (516) дааассааєс ассдсддааа сассаасдас аасссдсссс ссаад 45 «2105» 75 «2115» 33 65 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид 70 «400» 75 даасусддає асасстасдд саасессдас сас 33 75 «210» 76 «2115» 33 «212» ДНК
«213» штучна послідовність «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «400» 76 адддссадсс ададсусєсад садааастта дсс 33 «2105» 77 «2115» 21 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид «4005» 77 дакдсатсса ссадддссас є 21 «210» 78 «2115» 27 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний олігонуклеотид
Зо «400» 78 садсадсаста ааасстддсес ссодасд 27 «210» 79 «211» 119 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид «4005» 79 сп ма! сіп гей сіп сіп тер СсС1у АТа сС1у гей гей Гуз РгОо 5ег си 1 5 10 15 тик Гей б5ег ге типг о сСу5 Аїа ма! Ре сіу сіу 5ег Рпе 5ек с1у тук 20 25 30 туг тер 5ег Тер ІТе Агу сіп Рго Рго Сс1у Гуз с1у гГеи си тер Пе 35 40 45 сіу сі ІЇїе А5п Ні Аг с1у А5п ОТ А5п Ар Ап РГО 5ег гей ув 50 55 бо зекг Агуд ма! Тк ІЇе 5ег ма! А5зр тиг 5ег Гуз А5Зп сіп Ре АїТа ге 65 70 75 80 бо
Гуз Ге 5ек бек ма! Тиг АТа АТа д5р тпг АїТа ма! туг туг суз Аїа 85 90 95 65
Аг сій Аг о сіу туг тис о туг с1у А5п РПе А5р ніх тер с1у сіп с1у 100 105 110 70 Тиг Ге ма! тиг ма! 5ег 5ег 115 «210» 80 75 «211» 107 «212» білок «213» штучна послідовність
«223» Опис штучної послідовності: синтетичний поліпептид «400» 80 сі Іїе ма! мес тийг о сіп 5ег Рго АТа Тийг оГец б5ег ма! 5ег Рго с1у 1 5 10 15 сі Аг АТа Тигогеи бег су5 Агуд АТа 5екг сіп 5ег ма! 5ег Агу вп 20 25 30
Гей АТа тер туг сіп сіп гГу5 Рго сі1у сіп Аїа Рго Агд Гей Гей Пе 35 40 45 туг с1у АТа 5ег ТПг Агуд Аїа тиг сіу Іїе Рго Аїа Аг Рпе 5ег С1У 50 55 бо 5ег сіу 5ег с1у тпг сі РПе тик Гей Ттипг Іїе с1у 5ек гей с1п 5ег 65 70 75 80 сі А5р Ре Аїа ма! туг туг суз сіп сіп туг Гуз Тиг тер Рго Ага 85 90 95
Тк Ре сту сіп сіу Ттийг А5Зп ма! сіи Іе Гуз
Зо 100 105 «210» 81 «2115» 357 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид «400» 81 саддсдсадс сасадсадсд дадсдсадда стуссдаадс стссддадас сстатссстс 60 асстдсастд сссттадсдоа дессстссадс ддасєсастаст ддадсстддає ссдссадссс 120 ссадддаадд ддссддадсд дассддддаа ассаассаєс дсддааасас саасдасаас 180 ссуєссстса ададссдадс сассатаєса дсадасасує ссаадаасса детсассста 240 аадстдадес стдсдассдс сдсадасаса дстдетсаєс астдсдсдад адаасдасода 300 тасасстатад дсаастссда ссастуддддс садддаассс тддісассує стсстса 357 «2105» 82 «2115» 321 «212» ДНК «213» штучна послідовність бо «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний полінуклеотид «400» 82 65 дааасадсда сдасдсадсс сссадссасс стдсстдсдє стссаддада аададссасс бо стстсстдса дддссадсса дадсдссадс адааассстад сстддсаєса дсадааасст 120 ддссаддсес ссаддсесст сасстасдус дсасссасса дддссастдд аатсссадсс 180 70 аддеєссадсд дсадсддудєс содддасадад сссастстса ссаєссддсад сстдсадтст 240 даадаєсссд садессаєса стдісадсад тасаааасст ддсстсуддас деіссддссаа 300 75 ддадассаасуд стддааассаа а 321
«210» 83 «2115» 1444 «212» ДНК «213» Ното з5арієепе «400» 83 даасссстса ссаєдддаєд дадстастаєс ассстсттст хддсадсаас адстасадає бо дессастссс аддсдсадсс асадсадсда дасадсаддас хтдесдаадсс сссддадасс 120 стдЕссстса сстдсдстду стстдасада ссесссадсд дестастастуд дадстддатс 180 сдссадсссс садддааддд дстадададсдуд ассддддааа ссаассаєсд сддааасасс 240 аасдасаасс сдсссстсаа дадссдадсс ассатаєссад стадасасдаєс саадаассад 300 тЕсдссстда адстдадесс тудсдассдсс дсддасасдд стдустаєта стдсдсдада 360 даасусддає асасстастдд стаастссдас састддддсс адддаассся ддссассдес 420 адсссадсстї ссассааддд сссаєссдаєс сессссстдд сассстсстс саададсасс 480 тстддддаса садсддссст аддастдсстуд десааддаст асттссссда ассодсдаса 540 дсдссудсдда асссаддсдс сстдассадс дасдсдсаса ссттсссадс тассстасад 600 тсстсаддас сстастсссті садсадсутд дедассдідс сстссадсад сттдддсасс 6б6о садасстаса сстдсаасді даассасаад сссадсааса ссааддсдда саадааадстт 720
Зо дадсссааає сесудсдасаа аастсасаса стдсссассудї дсссадсасс сдаастсста 780 дададассудє садестесст стссссссса ааасссаадд асассстсат дасстсссад 840 асссстдадд ссасасдсасє дасддсддас дсдадссасуд аадассстда дассаадесс 900 аассддсасд сддасддсді ддаддсдсасє аасдссаада сааадссдсуд ддадаадсад 960 тасаасадса сдсассдтудс ддасєсадсудєс стсассдссс тодсассадда стддстсдаатс 1020 дасааддаду асаадсдсаа дасстссаас ааадссстсс садсссссає сдадаааасс 1080 ассіссааад ссааадддса дссссдадаа ссасаддсду асассстдсс сссатсссад 1140 дасдадссда ссаадаасса ддссадсстуд асстдсстдуд ссаааддсес стассссадс 1200 дасаєсдссд сддадсддда дадсаасддд садссддада асаастасаа дассасасст 1260 сссдсдстдуд ассссдасдд стссттстсс стстасадса адсстсассдс ддасаададс 1320 аддсддсадс аддддаасдає стсстсасдс сссдсдасдс асдаддсссо дсасаассас 1380 тасасдсада ададсстстс сстасссссд ддасааасаас адддасааса ддасаатаст 1440 адад 1444 «210» 84 «211» 468 бо «212» білок «213» Ното з5арієепе «400» 84 мес сіу тер 5ек сСу5 І1е Іїе Гей Рпе Ге ма! Аїа тийг АїТа тиг сС1у 65 1 5 10 15 ма! ніх 5ек с1п ма! сіп гей сіп сіп тер С1у АТа С1Уу гей геи уз 20 25 30 70
Рго 5ег сіи ТИйг Гей б5ег ге Ттипг о сСу5 Аїа ма! Ре сіу сіу 5егк РПе 35 40 45 75 зекг сіу Ттукг тукг Тер 5ег Тер Іїе Аг с1іп Рго Рго сІу Гуз С1У Ге 50 55 бо сі тер Іїе с1у сі ІЇе А5п Ні Агуд с1іу А5п о ТИг Ап Ар А5ЗпП РГО 65 70 75 80 зекг Гей Гуз 5екг Агуд ма! Тиг о ІЇе 5ег ма! А5р тик 5ек Гуз Азп сп 85 90 95
Ре АТа гей Гуз Гей б5ег 5ег ма! ТИг АТа АТа А5р тТиг АїТа ма! туг 100 105 110 туг су5 АТа Агд сій Агуд сіу туг Тис отуг с1у А5п Рпе А5р нів тер 115 120 125 су сіп сіу тк гей ма! тис ма! 5ег о 5ек АТа бек ТтиИг Гуз С1у РгО 130 135 140 5ег ма! Ре Рго Гей Аїа Рго 5екг бек губ 5ег Тиг о 5ек сіу с1у тиг 145 150 155 160
Аїа АТа гей сіу Суз Ге ма! губ Азр Туг Ре Рго Сі Рго ма! тис 165 170 175
Зо ма! 5ек тер А5зп 5ег с1у АЇїа ге Тийкг о б5ег сіу ма! ні тис РМпе Рго 180 185 190
Аїа ма! Гей сіп 5ег б5ег с1у Ге туг 5екг Гей 5ег 5ег ма! ма! тиг 195 200 205 ма! Рго 5ек 5ег 5ег ге сіу тпйг сіп тийг тує ІТе суб А5Зп маї А5П 210 215 220
Ні Гуз Рго 5ег А5п ТИг Гуз ма! Азр губ Гуз ма! СЇи Рго Гу5 5ег 225 230 235 240 суз А5р губ ТтИк нів тиг Суб Рго Рго Су5 РгО АїЇа Рго Си Геи ге 245 250 255 сСіу С1у Рго 5ек ма! РМпе гей РМЙе РГгГО РРО Гу5 РгО Гуз А5р тпиг Геи 260 265 270 мет Іїе 5екг Агуд Тиг оРго сіи ма! тик сСуз ма! ма! ма! А5р ма! 5ег 275 280 285
Ні сій Ар Рго сій ма! Гу5 РИпйе Ап Тер туг ма! Азр с1у ма! си бо 290 295 300
Уа! нів А5п Аїа гу ТиИг Гуз РгО Аг сій сій сбіп тує А5Зп о 5ег Тиг 305 310 315 320 65 туг Агд ма! ма! 5ек ма! Гей тиг ма! геу ніх сіп А5р тер Гей Ап 325 330 335 70
Су Гуз сі тук Гуз Ссуз Гуз ма! 5ег А5Зп губ АїТа еп РгОо АТа Рго 340 345 350 75 ч11е сі1и Гуз тпг ІЇїе 5ек їу5 АЇїа Гуз с1у сіп Рго Аг си Рго сп 355 360 365 ма! тук Тк Гей РКО Рго 5ег Агу Ар сій Гей Тиск Гуз А5Зп сп ма! 370 375 380 5зег Гей тик Сух Гей ма! Гуз сС1у Рпе Туг Рго 5ег А5зр Пе Аїа ма! 385 390 395 400 сі Тер сі 5ег А5п сіу сій Рго с1и А5п о АЗп туго Гуз Тиг о тАг РгО 405 410 415
Рго ма! Гей А5зр бек А5р сіу 5ег Рпе РПе Гей Туг 5ег Гуз Гей тик 420 425 430 ма! А5р Гуз 5екг Ага тер сіп сіп с1у А5п ма! Рпе 5ег су 5ег ма! 435 440 445 мес ніх сі АТа гей Ні Ад5п Ні Туг тк сіп гу5 5ег їеци 5ег ге 450 455 460 зег Рго сС1у Гуз 465
Зо «210» 85 «2115 722 «212» ДНК «213» Ното з5арієепе «400» 85 дсддссудссе сассасддда саддадстата ссассстст сесддсадса асадстасад 60 дсдєссастс сдааасадсуд асдасдсадсі стссадссас сстдеістдтд сстссаддад 120 ааададссас сстстсстодс адддссадсс ададсдсєсад садааасстта дсстддтсатс 180 адсадааасс сддссаддст сссаддстсс ссаєстаєдд сдсаєссасс адддссаста 240 даассссадс саддесссадс дасадсдаддс стдддасада десссастстс ассатсддса 300 дсстдсадес сдаадаєсссс дсадсссасі астдссадса дсасаааасс сддсстсдда 360 сдссуддсса адддассаас дсддааасса аасдстасддє ддссдсасса сстдассттса 420 тстссссдсс асстдаєсдад садссдаааст стоадаастдс стстассдта сдсстдстда 480 асаасетсста ссссададад дссааадсас адсддааддс ддасаасдсес стссаатсад 540 дсаассссса ддададсдсс асададсадд асадсаадда садсасстас адсстсадса 600 дсассстдас сстдадсааа дсадастасд адааасасаа адсстасдсс сдсдаадсса 66о0 сссаєссаддд сседадсссуд сссдссасаа ададссссаа саддддадад сдассадсста 720 60 ча 722 «210» 86 «2115» 233 65 «212» білок «213» Ното 5арієп5 «400» 86 мес сіу тер 5ек сСсу5 І1е Іїе Гей Рпе Ге ма! Аїа тийг АїТа тиг сС1у 70 1 5 10 15 ма! нів 5ек бій Іїе ма! мес тийг сіп 5ег Рго АТа тис Ге 5ег ма! 20 25 30 75 зег Рго сіу сій Агуд Аїа ТиПгогГеи 5ег су5 Агуд АТа 5ег сіп 5ег ма!
35 40 45 5ег Агу АЗп гей АЇа Тер туг сіп сіп гу5 Рго сіу сіп Аїа Рго Ага 50 55 60
Гей Ге Іїе тукг с1у Аїа 5ег Тпйг Агуд Аїа тийг с1у Іїе Рго Аїа Ага 65 70 75 80
Рпе 5ег сіу 5ег сіу 5ег с1у тПг сі РПе тик Гей Тиг І1е сС1у 5ек 85 90 95
Гей сбіп 5ек Сі А5р Ре АТа ма! тук тукг су5 сіп сіп тукг Гуз тик 100 105 110
Тер Рго Аг Тйг Ре сіу сіп сіу Тйг Ап ма! сій ІЇе Гуз Агд тег 115 120 125 ма! АТа Аїа Рго 5ег ма! Ре Іїе Рпе РгО РгОо 5ег А5р сіи сіп ге 130 135 140
Гуз 5ег сіу тТИг АТа 5ег ма! ма! суб Гей гей А5п АЗп РПе Туг РгО 145 150 155 160
Зо
Агу сій Аїа Гуз ма! сіп тер Гуз ма! д5р д5п Аїа гей сіп 5ег с1у 165 170 175
А5п о 5ек сіп сій 5ег ма! тик сі сіп А5р бек губ А5р 5ег Тис туг 180 185 190 зекг Гей 5екг 5екг ТИг о Геу Тиг огГеи б5ег уз АТа А5р туг си Гуз Ні 195 200 205
Гуз ма! тук АТа Ссу5з сіи ма! тиг ніх сіп с1у Ге 5ег 5ег РгОо ма! 210 215 220
Типг Гуз 5ег Рпе А5ПпП Аг с1у сіи су 225 230 «210» 87 «211» 14 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид бо «220» «223» М-кінцевий Н «220» 65 «221» інші характеристики «222» (13..06) «223» дисульфідний зв'язок між залишками «220» 70 «221» інші характеристики «222» (23..010) «223» дисульфідний зв'язок між залишками «220» 75 «221» інші характеристики «222» (5)..(13) «223» дисульфідний зв'язок між залишками
«223» с-кінцевий он «400» 87 суз Суз сі тук Суз суз А5п РГО Аїа Су5з тик сіу Су туг 1 5 10 «210» 88 «2115 6 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний Нізх-маркер «220» «221» інші характеристики «222» (13..06) «223» ця послідовність може охоплювати залишки 2, 3, 4, 5 або б «4005 88. о о о
Ні НІ5 НІ15 НІ15 НІ15 НІ15 1 5 «210» 89 «211» 4 «212» білок «213» штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: синтетичний пептид «400» 89 су Рпе Гей с1Уу

Claims (1)

  1. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
    1. Молекула антитіла до СС або її антигензв'язувальний фрагмент, що містить три ділянки важкого ланцюга, що визначають комплементарність (НСОКІ, НСОК2 ії НСОКЗ), що містять амінокислотні послідовності ХЕО ІЮ МО: 21, 22 і 23, відповідно, і три ділянки легкого ланцюга, що визначають комплементарність (СОКІ, ГСОМК2 і І СОМКЗ), що містять амінокислотні послідовності зЕО ІЮ МО: 27, 28 і 29, відповідно.
    2. Молекула антитіла до ССС або антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, де молекула антитіла до ОСС або антигензв'язувальний фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, ЖЕО ІЮ МО: 11, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка БО містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 13.
    З. Молекула антитіла до СС або антигензв'язувальний фрагмент за п. 1 або 2, яка відрізняється тим, що вказана молекула антитіла до ЗСС є моноклональним антитілом, антитілом кролика, моноклональним антитілом кролика і/або гуманізованим моноклональним антитілом кролика.
    4. Молекула антитіла до СС або антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-3, яка відрізняється тим, що молекула антитіла до ССС являє собою антитіло до.
    5. Молекула антитіла до СС або її антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-4, яка відрізняється тим, що молекула антитіла до ССС являє собою антигензв'язувальний фрагмент. бо 6. Молекула антитіла до СС або антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-5, яка відрізняється тим, що молекула антитіла до (СС або антигензв'язувальний фрагмент кон'юговані з виявлюваною міткою.
    7. Молекула антитіла до СС або антигензв'язувальний фрагмент за п. 6, яка відрізняється тим, що виявлювана мітка вибрана з групи, що складається з пероксидази хрону (НЕР), лужної 65 фосфатази, галактозидази, глюкоамілази, лізоциму, сахаридоксидази, гетероциклічної оксидази, лактопероксидази або мікропероксидази, біотину, авідину, спінових міток, бактеріофагових міток і придатних вільних радикалів, флуорофору, необов'язково вибраного з флуоресцеїну або його похідних, родаміну або його похідних, дансилу, умбеліферону, люциферази, люциферину і 2,3-дигідрофталазиндіонів; і радіоактивної речовини, необов'язково вибраної з З2Р, ЗН, 1, 188ДН, ЗК, 52ГРе, 57бо, 67б)и, 67(За, 68(за, 77ВІ, 88, МКУ, 87М5у, 99То, п, 113Муп, 123), 125|, 127056, 12905, 131, 132), 197Но, гозрр і 206ВІі, і 213ВІ.
    8. Виділена послідовність нуклеїнової кислоти, яка кодує молекулу антитіла до СС або антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пунктів 1-5.
    9. Вектор експресії, що містить виділену послідовність нуклеїнової кислоти за п. 8.
    10. Виділена клітина, що містить виділену послідовність нуклеїнової кислоти за пунктом 8 або вектор експресії за п. 9.
    11. Спосіб отримання молекули антитіла до ССС або антигензв'язувального фрагмента за будь- яким з пп. 1-5, який включає культивування клітини за п. 10 в умовах, які надають можливість отримувати молекулу антитіла або антигензв'язувальний фрагмент, тим самим продукуючи молекулу антитіла до ОСС або антигензв'язувальний фрагмент.
    12. Спосіб виявлення молекули (зСС в біологічному зразку, що включає контактування біологічного зразка з молекулою антитіла до зСС або антигензв'язувальним фрагментом за будь-яким з пп. 1-7 та визначення, чи зв'язується молекула антитіла до СС або антигензв'язувальний фрагмент з молекулою СС в біологічному зразку.
    13. Спосіб за п. 12, який відрізняється тим, що виявлення молекули СС включає імуногістохімічний аналіз.
    14. Спосіб за п. 12 або 13, який відрізняється тим, що біологічний зразок являє собою зразок, отриманий при біопсії пухлини від пацієнта з підозрою на наявність раку, що експресує ОСС, де рак необов'язково вибраний з раку товстої і прямої кишки, раку шлунку, раку тонкої кишки, рак стравоходу, раку підшлункової залози, раку легень, саркоми м'яких тканин, нейроектодермальної пухлини і нейроендокринної пухлини.
    15. Спосіб за п. 14, в якому: (а) рак легені являє собою плоскоклітинний рак або аденокарциному; (5) саркома м'яких тканин являє собою лейміосаркому або рабдоміосаркому; і/або (с) нейроендокринна пухлина являє собою шлунково-кишкову або бронхолегеневу нейроендокринну пухлину.
    16. Спосіб за будь-яким з пп. 12-15, що додатково включає кількісне визначення експресії ССС в біологічному зразку. Зо 17. Спосіб за п. 16, який відрізняється тим, що експресія ССС у біологічному зразку включає апікальну експресію ОСС, цитоплазматичну експресію ССС або обидві.
    18. Спосіб за п. 16 або 17, який відрізняється тим, що кількісне визначення включає Н- оцінювальний підхід.
    19. Набір, що містить молекулу антитіла до СС або антигензв'язувальний фрагмент за будь- яким з пп. 1-7 та інструкції з використання молекули антитіла до ОСС або антигензв'язувального фрагмента при виявленні молекули ССС в біологічному зразку.
    20. Спосіб визначення чутливості ракових клітин до зСсС-націленої терапії і/або оцінки того, чи є суб'єкт потенційним кандидатом для сСсС-націленої терапії, що включає: ї) забезпечення зразка ракових клітин від пацієнта; ї) контактування зразка з молекулою антитіла до ОСС або антигензв'язувальним фрагментом за будь-яким з пп. 1-7; і ії) виявлення утворення комплексу між молекулою молекулу антитіла до СС або антигензв'язувальним фрагментом і білюом ОСС в зразку, де утворення комплексу свідчить про те, що ракова клітина є чутливою до сСсС-націленої терапії, і/або про те, що пацієнт є кандидатом для лікування із застосуванням ССс-націленої терапії.
    21. Спосіб за п. 20, який відрізняється тим, що виявлення утворення комплексу включає в себе імуногістохімічний аналіз.
    22. Спосіб за п. 20 або 21, який відрізняється тим, що рак вибирають з групи, що складається з раку товстої і прямої кишки, шлункового раку, раку тонкої кишки, раку стравоходу, раку підшлункової залози, раку легень, саркоми м'яких тканин, нейроектодермальної пухлини і нейроендокринної пухлини.
    23. Спосіб за п. 22, в якому: (а) рак легені являє собою плоскоклітинний рак або аденокарциному; (5) саркома м'яких тканин являє собою лейміосаркому або рабдоміосаркому, і/або (с) нейроендокринна пухлина являє собою шлунково-кишкову або бронхолегеневу нейроендокринну пухлину.
    24. Застосування молекули антитіла до СС або антигензв'язувального фрагмента за будь- яким з пп. 1-7 при лікуванні у пацієнта раку, який експресує ОСС, що включає в себе:
    її виявлення експресії білюа СС в зразку ракових клітин, отриманого від пацієнта шляхом контактування зразка з молекулою антитіла до СС або антигензв'язувальним фрагментом за будь-яким з пп. 1-7; і ії) призначення пацієнту ЯСОС-направленої терапії, якщо одна або декілька ракових клітин експресують ССС.
    25. Застосування за п. 24, яке відрізняється тим, що зСС-направлена терапія включає в себе терапевтичну молекулу антитіла до СС.
    26. Застосування за п. 25, яке відрізняється тим, що терапевтична молекула антитіла до СС являє собою моноклональне антитіло.
    27. Застосування за п. 25 або 26, яке відрізняється тим, що терапевтична молекула антитіла до СС являє собою людське Ідс1 антитіло.
    28. Застосування за будь-яким з пп. 25-27, яке відрізняється тим, що терапевтична молекула антитіла до СС містить три ділянки важкого ланцюга, що визначають комплементарність (НСОКІ, НСОКО ї НОСОК), які містять амінокислотні послідовності зЕО ІЮ МО: 67, 68 їі 69, відповідно, і три ділянки легкого ланцюга, що визначають комплементарність (І СОК1, СО і І СО), які містять амінокислотні послідовності зЕО ІЮО МО: 70, 71 та 72, відповідно.
    29. Застосування за будь-яким з пп. 25-28, яке відрізняється тим, що терапевтична молекула антитіла до ОСС містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 79, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 80.
    30. Застосування за будь-яким з пп. 25-29, яке відрізняється тим, що терапевтична молекула антитіла до СС кон'югована з цитотоксичною речовиною.
    31. Реакційна суміш, яка містить біологічний зразок і молекулу антитіла до СС або антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-7.
    32. Реакційна суміш за п. 31, яка відрізняється тим, що: (а) біологічний зразок містить одну або більше клітин; і/або (Б) біологічний зразок містить зразок тканини.
    33. Реакційна суміш за п. 31 або 32, яка відрізняється тим, що біологічний зразок являє собою зразок, отриманий при біопсії первинної або метастатичної пухлини, де зразок, отриманий при Зо біопсії, необов'язково вибраний з раку товстої і прямої кишки, раку шлунку, раку тонкої кишки, раку стравоходу, раку підшлункової залози, раку легень, саркоми м'яких тканин, нейроектодермальної пухлини і нейроендокринної пухлини.
    34. Реакційна суміш за п. 33, в якій: (а) рак легень являє собою плоскоклітинний рак або аденокарциному; (5) саркома м'яких тканин являє собою лейміосаркому або рабдоміосаркому; і/або (с) нейроендокринна пухлина являє собою шлунково-кишкову або бронхолегеневу нейроендокринну пухлину.
    35. Реакційна суміш за будь-яким з пп. 31-34, яка додатково містить реагент, придатний для виявлення утворення комплексу між молекулою антитіла до ССС або антигензв'язувальним фрагментом і білком ССС в біологічному зразку.
    36. Спосіб створення персоніфікованого протоколу лікування раку, що включає: () контактування біологічного зразка з однією або декількома раковими клітинами, отриманими від пацієнта з підозрою на наявність ЗССС-експресуючого раку, з молекулою антитіла до СС або антигензв'язувальним фрагментом за будь-яким з пп. 1-7; (ї) виявлення утворення комплексу між молекулою антитіла до СС або антигензв'язувальним фрагментом і білком ССС в біологічному зразку; (ії) кількісне визначення експресії СС в біологічному зразку з комплексу; (ім) порівняння рівня експресії ЗСС з базою даних, що містить зразки з нормальною експресією ОСС, (М) вибір ОСС-націленої терапії і, необов'язково, режиму дозування, виходячи з рівня експресії ССС, визначеного в біологічному зразку.
    37. Спосіб за п. 36, який відрізняється тим, що рак, який експресує ОСС, вибраний з раку товстої і прямої кишки, раку шлунку, раку тонкої кишки, раку стравоходу, раку підшлункової залози, раку легень, саркоми м'яких тканин, нейроектодермальної пухлини і нейроендокринної пухлини.
    38. Спосіб за п. 37, в якому: (а) рак легень являє собою плоскоклітинний рак або аденокарциному; (Б) саркома м'яких тканин являє собою лейміосаркому або рабдоміосаркому; і/або (с) нейроендокринна пухлина являє собою шлунково-кишкову або бронхолегеневу 60 нейроендокринну пухлину.
    39. Спосіб за будь-яким з пп. 36-38, який відрізняється тим, що виявлення утворення комплексу включає в себе імуногістохімічний аналіз.
    40. Спосіб за будь-яким з пп. 36-39, який відрізняється тим, що експресія ССС у біологічному зразку включає апікальну експресію ССС, цитоплазматичну експресію ССС або обидві.
    41. Спосіб за будь-яким з пп. 36-40, який відрізняється тим, що кількісне визначення включає в себе Н-оцінювальний підхід. ваз КО) м кот) ВИЖЩ13), | НіпанцяЗау У АВощадв) кл БЕК Еліс сз: ВВ . 11 « КОН 138) Б ле краївів) 1 зра гот -х й Бренівза) 0000 АК сок тТо58) у вон ІК Ух ЖК Есойд1670) Хе мощів) Бащзетє- 55 у хпоКтве) М і лЛроцА 8у40 "Хвац1703) би, Мао тот" і мАраці713) Ши Втац2812) Решщзовоі 2812)
    Фіг. 1
    СКС
    600.00 р-н заооо В | ! ! І план
    200.00 | | " І. |! ЇЇ ! ІІ НИ І | п./0 -АЄИ8 З - -- те ДН зо ВІН М
    Фіг. 24 Шлунковий 400:00- ння шо о жого - Юю «Ж сс ше ра 34005687 8 9
    Фіг. 28
    Панкреатичний
    300.00 | І І І І п тт
    100.00 | І І І і | І АН в уд ША ННННННН В гля ше 12 34567 8 9 101112131415160 17181920 212 фіг. 20 Стравохідний
    100.00 І . й й й й .- ШИНИ 1 2 3 456 7 8 9 10 11 19 13
    Фіг. 20
    ВОЮ.ОВО прут тт ннннттнннтттк тт пе Ії ретентннжнттнккннт тина пужннннняих ! паланлдтннн нан ттрт я же тт Ж тет Ет я ис нею и ж лнлн ндст жаль ТК Що | І о ЦК ПИ ПЕ ВІНОК ПЕНЮ зосої | ше ин - 4 ПЕК НА ОЦЯ ПЕКИ КИ т ох шежтижни тів ожину що пиття ттття ПІНКИ НВК в ДЕМИМИЖННН КИ ш ІД МНИВ ВИК ІВ МИХЕВ ЦК НЕОН нон НЕОН ВНВВ МУ ПИВОМ й ЗИ ЕН ПМОМ у ПЕКНЕНКЦВН ПІКИ во Он ВВ, фонове вв нен г лснлееєьскокоююь сект чт сніп пкт тя пт тя ЖАЛА ВТ АРІ ВА ЖАРТ Ж ЖАВ ТАЖ ТВА РТВ КАТЕ т чт ПЕК ВК НН о КВК КИ ЕК, НИ Ш п Ну пи ЗЕНИК МИНЕ НАННЯ ІКОН НВ СОСКИ КН ВЕН ЕНе ДЕННЕ НК НОВНИХ І ПИКЕДОВННИ М ВНИМ НН МИХ Н ОКО НЕК ее ЕКОН НН ПЕМеМІЦНКННИ еВ и ПНО НИКОМ и ПОКЕКВ, ПИ И неп КИЕВ М НОЙ КОНОя ПОООКЕ Нв но нон у ! о В 00 ПИКА ее ПЕН Не ЕЕ; ; МЕНЕ КН ЕК КК НЕНВВ ПЕНІ НИКИ п а сіння ш- пен ве еВ поино н й ІНН ее ВЕНА НН В НЯ нг н вв ЕН ПоНненвенкаш ПЕН Ве м МІНИ НИМ ин ПІКИ Ко В я пн МЕКНКН НК Ви ПИКННН КН ИК КМ НАННЯ ОЖИНА НЕ НАВ п Моця ІКМННОНК ННМ НЕАНЕ ПІКИ КН КВН КИНЕ КОН, : ПЕКИ НИК Ниви НКИ МЕМООВННН НЕК ПИКА ПИ ВКМ ПНІ Кене ПІБКСНЕЕИИН КВК ПЕВ КИМО НК НВК ВИК КНИЖН Повне Ве ЕНН ІННО НВНН НИК ВЕН ДИКО Ким ПЕК ДН НОВ и: ВНИМ НМИ ВНИМ ММК КК ПМПК НКИ их КЕН НК Не с їх ПК Ким М Ме вим нан КК МЕНЕ ЕЕ Не І МИХ ИН ВЕНА ие НВО ІПМ ами имени ПИКА ПЕЕКННЕНН НН ЕКК КВ ЕКОН ІНК ММВ МОВИ ПЕННННИ НН А о Не ЗЕ оох ДАЙ ІВЦ КК ке Я ве В он ОВЕН й й й й о ВЕ ІКОНКИ КН Б пеОНЕНЕ Не КАН КИ ЕКОН КК ПКУ КИМ УК И У НН ПИМОНИЛИМ о НН ее КО ЕН НУ А ПЕЩЕНИЦИНИВ ПЕННДИНКИ МН НЕК ПИМТ КИНЕ КАНА и о ІК ПЕК ЕНН ВОК КВ ПЕН Но о НВ ВУХ ОКО Н В НВ ІКОНИ КК ОК: ЕК КК КН НИ ПДК НИМНН КК по В КН НН ПОВНА о В ВВА КН Сен НЕ ЕНН и АН Я ях ВКА Н В и МНЕ ЕЕ в ВИНО ою и. ; ПЕВНЕ ЕНН екв КН Ко в НН НН ТАНЕ ПЕК КН ВИН КЕКВ КВ ик Не ВЕН КНЕЕВ ЗК, ПН НИИ ВН ВЕН ПОН В ННЯ ПН НИ ЦИНК КК ПЕЕИНИМИ ВІНИК их ПИЖИНЦНК НЕК ННІ ВКМ ПЕКИ МИИИ МИ НМИ КИМИМЕ НИКИ им ЗОН НН Нв ЕЕ НН ТС с ОО ІННИ ек ПЕКИ ДЕКО я ПЕВ НВВККК ТИХИМ МИ ВТК В Я ПИВ НЕДНННА НК ВК ев МІНІМАЛКУ ПНО КН НН НОЯ НЕВИННЕ ЕКОН НК І ДВО НИНІ Ки, пен вн ВЕ ПОПИ КВК НИЖНИК НВК КК ПК ВК КК КН ЗНОВ ПК ВИШЕИМНКИ ВН В ОВЕН и НВ НО ВА ДЕН ВН ТІ НАД НН ПВ я ПОН ВИНКНЕ в и НКе УФ МЖК НК ТВ КК МВ М КВ ПІНКИ ВКА ПАНЕ УВА Не АН ВО З
    0.00. Ве кН Ви в НК по ее НН і о 5 НееВНе Ко нвовеее ЩА шен Ен пе Ме Кк ази З ЕЕ Я ВО НЕО УВА еНО КОН я г ун КК КК ЗК КН ПОЕМИ КН ПИВ КИК МИ КМИНУ ; В п о о о ДЕ КОКО а У у . й іно МКК КУКА ТНК ее АН ня МИХ й ; і гом НМ о У сн ооо кк» , ЕЕ ОБ М 53 83 72 1 З Ж ОМ ВЕ 8 ЩО ЩО Я 2 2 и М З ОМ ШЮ фіг. ЗА | Щ ОВ в К у ТЕ па Ж ПТ АЛІ МЕТ НМА АА МНЕ АККАУНТА АЛЕЯ А Ст еття їх ЖЕ ї ВЕК ІК і Я Ех Я ТУ
    ЖЕ .
    400. тя. і х і. Е ЯН Ж Я Е: ї 53 Я 315. ЖЖ КЗ: ЖЕ КІІ й 1233 ї здо НН КК НН З 4 Її !
    З. з БІТ Ж я ТЕТ Її Ії хі 3 з Ж З КЗ я З : ІТК:
    с с. х Я с. Її ЗВ УРЕ З Б. плекс поучяяся І 55 - опт ТАН ТАТ чт Б тт пап КАР пт о | | ї і НЕ ти пло А АТ Й плаття НН ЗНЯВ ї | з ЗЕ БІТИ. Ї : НН КУ: ХІІ ИКИК КУ НІЕККХ. с: ЗЕ: ;. х х шлак і х х З ЖЕ З т х5 ЗИ ТЯ В ЗІ ТІ гТиХ Іі ;: ії ВКА: Я 53 х ї ї Е їх Е. І Я ЖЕК: З ї НН ЖЕ ї ЕКЗ ЗЕ ЕХ і Ї Е 1: і ЯН і ЗЕ КЕ БЕН ЖЕК ВУЖ ЖЖ : ї ЩІ Я НЕ Її ой 53 З 5 3 ЩЕ 35 НН Е БЕН ! Ще А ВЕЖ Е КВ З В КЕ: ЗЖЕ 55535335 555, їн В А КАВ калокетуттеттттуттютттст Ії За й КІ дк ру ! і й : з і і й їй " їжу ЖЕК ; м т Ві в : і ! кі що ЯН ов А Б
    Пезунисвий УС їщ Рея я ж яв жа МА Ж Ж Є птн т ж тяж АВЯ В Ж ВТАВВ АЖ АВАНСУ четччче пс еттттттт що да пн В ОНА НАНА ще кВ ЗВ хо ЯК
    400.00 в нн ВВ В Ви Її в НЕ К ук м ВЕ. КОЮ кн нн В зо КЕН ЖВ ЕН ХВ КН ЕНН, і ЗІОНК 20о0д ЕЕКНЧН о Не пн ин ПІІ ПОІМ МК ЗНМ КН НЕ ВЕ ПІВ МІВ ММК ЕЕ обо НН і ун КЕ НО ЗІВА МИ пек пово ов олова іні інінінінінінінініні іні піні вв нн воно І ВІНКИ НН ен еВ КН КНЯ З ОК ВЕ ЖЕНЕ ВІККА У о ОК КН ВЕН КК ДВК: кн ОН ВН ЕІ КОН В ВА и ОН НІВ Но БОЖИЙ
    КІ. ух ВК У МЕМ КОКСУ МК МКК ВІВ КМУ МТУ МЕ ТУТ КВ З ОВ В ВУ ; з ї ї УЗ і ОВ ЯЗ мя ях рт ак ЯЗ яд г5 «вд амх с щу ї 8 37 25 33 4 49 57 55 УЗ 8 85 Б, 5 НЗ Б 29 137 345 53 481 365 4) 185 183 З 062 --3333--- - т .-----.--2..-.-:.-7-2--2-2.26 6: -
UAA201412715A 2012-04-27 2013-04-27 Молекула анти-gcc антитіла і її використання для тестування на чутливість до gcc-націленої терапії UA117910C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261639376P 2012-04-27 2012-04-27
PCT/US2013/038542 WO2013163633A1 (en) 2012-04-27 2013-04-27 Anti-gcc antibody molecules and use of same to test for susceptibility to gcc-targeted therapy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA117910C2 true UA117910C2 (uk) 2018-10-25

Family

ID=49477498

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201412715A UA117910C2 (uk) 2012-04-27 2013-04-27 Молекула анти-gcc антитіла і її використання для тестування на чутливість до gcc-націленої терапії

Country Status (41)

Country Link
US (3) US9000129B2 (uk)
EP (1) EP2841575B1 (uk)
JP (2) JP6472746B2 (uk)
KR (1) KR102046435B1 (uk)
CN (1) CN104395470B (uk)
AR (1) AR090884A1 (uk)
AU (1) AU2013251312B2 (uk)
CA (1) CA2871614C (uk)
CL (1) CL2014002911A1 (uk)
CO (1) CO7280144A2 (uk)
CR (1) CR20140497A (uk)
CY (1) CY1122557T1 (uk)
DK (1) DK2841575T3 (uk)
DO (1) DOP2014000242A (uk)
EA (1) EA034689B1 (uk)
EC (1) ECSP14028523A (uk)
ES (1) ES2749181T3 (uk)
GE (1) GEP201706737B (uk)
HK (1) HK1208049A1 (uk)
HR (1) HRP20191690T1 (uk)
HU (1) HUE046404T2 (uk)
IL (1) IL235307B (uk)
LT (1) LT2841575T (uk)
MA (1) MA37569B1 (uk)
ME (1) ME03560B (uk)
MX (1) MX362020B (uk)
MY (1) MY188442A (uk)
NZ (1) NZ701601A (uk)
PE (1) PE20142322A1 (uk)
PH (1) PH12014502399B1 (uk)
PL (1) PL2841575T3 (uk)
PT (1) PT2841575T (uk)
RS (1) RS59370B1 (uk)
SA (1) SA113340502B1 (uk)
SG (1) SG11201406855TA (uk)
SI (1) SI2841575T1 (uk)
TN (1) TN2014000454A1 (uk)
TW (1) TWI631137B (uk)
UA (1) UA117910C2 (uk)
WO (1) WO2013163633A1 (uk)
ZA (1) ZA201407723B (uk)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX366890B (es) 2009-10-23 2019-07-30 Millennium Pharm Inc Moléculas de anticuerpo anti - gcc y composiciones y métodos relacionados.
EP3060580B1 (en) * 2013-10-21 2021-03-31 Centre For Drug Research And Development Anti-podocalyxin antibodies and methods of using the same
CA2936907C (en) 2014-02-14 2022-06-07 Arkansas Children's Hospital Research Institute, Inc. Acetaminophen protein adducts and methods of use thereof
JP6785239B2 (ja) 2014-12-03 2020-11-18 バイオベンチャーズ・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーＢｉｏＶｅｎｔｕｒｅｓ， ＬＬＣ 抗アセトアミノフェン抗体及びアセトアミノフェンタンパク質付加物
EP3356418A4 (en) 2015-10-01 2019-07-03 The Centre for Drug Research and Development ANTI-PODOCALYXIN ANTIBODIES AND METHODS OF USE
JP7356351B2 (ja) 2016-12-12 2023-10-04 エクセラ・バイオサイエンシーズ・インコーポレイテッド マイクロキャピラリーアレイを使用したスクリーニングのための方法およびシステム
KR102080887B1 (ko) * 2017-11-07 2020-02-24 고려대학교 산학협력단 Gcc2 유전자 또는 단백질을 과발현하는 엑소좀 기반 폐암 진단 또는 예후 예측용 마커 조성물
US11568657B2 (en) 2017-12-06 2023-01-31 Ventana Medical Systems, Inc. Method of storing and retrieving digital pathology analysis results
EP3721372A1 (en) * 2017-12-06 2020-10-14 Ventana Medical Systems, Inc. Method of storing and retrieving digital pathology analysis results
CN112996492A (zh) * 2018-09-05 2021-06-18 阿姆斯特丹大学 Pde11或pde2抑制剂用于治疗帕金森氏疾病的用途
WO2021205325A1 (en) * 2020-04-08 2021-10-14 Pfizer Inc. Anti-gucy2c antibodies and uses thereof
MX2022015133A (es) * 2020-06-02 2023-01-11 Teijin Pharma Ltd Anticuerpo humanizado anti-receptor de igf-1.
AU2021404641A1 (en) * 2020-12-17 2023-06-29 Parasol Biotech Ltd. Gucy2c binding molecules and uses thereof
WO2024067762A1 (en) * 2022-09-28 2024-04-04 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Antibody and chimeric antigen receptors targeting gcc and methods of use thereof
WO2024094688A1 (en) 2022-11-01 2024-05-10 Heidelberg Pharma Research Gmbh Anti-gucy2c antibody and uses thereof
CN116535514B (zh) * 2023-06-15 2024-02-02 上海斯丹赛生物技术有限公司 抗鸟苷酸环化酶c抗体及其在癌症治疗中的应用

Family Cites Families (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5237051A (en) 1990-12-06 1993-08-17 Vanderbilt University Purified enterotoxin receptor protein
US5879656A (en) 1993-10-26 1999-03-09 Thomas Jefferson University Methods of treating metastatic colorectal cancer with ST receptor binding compounds
US7097839B1 (en) 1993-10-26 2006-08-29 Thomas Jefferson University ST receptor binding compounds and methods of using the same
CA2174928C (en) 1993-10-26 2011-08-16 Scott A. Waldman Compositions that specifically bind to colorectal cancer cells and methods of using the same
US5518888A (en) 1993-10-26 1996-05-21 Thomas Jefferson University ST receptor binding compounds and methods of using the same
US5601990A (en) 1994-09-13 1997-02-11 Thomas Jefferson University Methods of diagnosing colorectal tumors and metastasis thereof
US6455251B1 (en) 1994-09-13 2002-09-24 Thomas Jefferson University Methods of and kits and compositions for diagnosing colorectal tumors and metastasis thereof
CA2254082C (en) 1996-05-03 2012-09-11 Thomas Jefferson University Metastatic colorectal cancer vaccine
US6602659B1 (en) 1996-05-03 2003-08-05 Thomas Jefferson University Methods of and kits and compositions for diagnosing colorectal tumors and metastasis thereof
US6120995A (en) 1997-08-07 2000-09-19 Thomas Jefferson University Compositions that specifically bind to colorectal cancer cells and methods of using the same
US6696550B2 (en) 1998-07-23 2004-02-24 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Humanized anti-CCR2 antibodies and methods of use therefor
US8092514B1 (en) 1998-11-16 2012-01-10 Boston Scientific Scimed, Inc. Stretchable anti-buckling coiled-sheet stent
US20040031072A1 (en) 1999-05-06 2004-02-12 La Rosa Thomas J. Soy nucleic acid molecules and other molecules associated with transcription plants and uses thereof for plant improvement
CA2404431C (en) 2000-03-27 2011-06-07 Thomas Jefferson University Guanylyl cyclase c in the detection of stomach and esophageal cancers
PE20020574A1 (es) 2000-12-06 2002-07-02 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta
CA2434762A1 (en) 2001-01-26 2002-09-19 Joseph M. Patti Monoclonal antibodies to the clfa protein and method of use in treating or preventing infections
ES2330312T5 (es) 2001-03-29 2014-01-31 Synergy Pharmaceuticals, Inc. Agonistas de receptor de guanilato ciclasa para el tratamiento de la inflamación de tejidos y de la carcionogénesis
CN1561345B (zh) 2001-04-13 2011-09-14 比奥根艾迪克Ma公司 抗vla-1的抗体
WO2003057838A2 (en) 2001-12-28 2003-07-17 Abgenix, Inc. Antibodies against the muc18 antigen
US20040110933A1 (en) 2002-09-13 2004-06-10 Dyax Corporation CD44-binding ligands
DE10254601A1 (de) 2002-11-22 2004-06-03 Ganymed Pharmaceuticals Ag Differentiell in Tumoren exprimierte Genprodukte und deren Verwendung
US7304036B2 (en) 2003-01-28 2007-12-04 Microbia, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
US7371727B2 (en) 2003-01-28 2008-05-13 Microbia, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
EP1599165A4 (en) 2003-02-10 2010-09-08 Univ Jefferson THE USE OF GCC LIGANDS
EP2357237A1 (en) 2003-05-14 2011-08-17 Domantis Limited A process for recovering polypeptides that unfold reversibly from a polypeptide repertoire
US7871610B2 (en) 2003-08-12 2011-01-18 Dyax Corp. Antibodies to Tie1 ectodomain
WO2006012264A1 (en) 2004-06-25 2006-02-02 Thomas Jefferson University Compounds of the inventions of guanylyl cyclase c
CN105085678B (zh) 2004-12-21 2019-05-07 阿斯利康公司 血管生成素-2的抗体及其应用
AR056857A1 (es) 2005-12-30 2007-10-24 U3 Pharma Ag Anticuerpos dirigidos hacia her-3 (receptor del factor de crecimiento epidérmico humano-3) y sus usos
US7879802B2 (en) 2007-06-04 2011-02-01 Synergy Pharmaceuticals Inc. Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of gastrointestinal disorders, inflammation, cancer and other disorders
MX2010001395A (es) 2007-08-10 2010-03-10 Regeneron Pharma Anticuerpos humanos de alta afinidad de factor de crecimiento de nervio humano.
NZ582916A (en) * 2007-08-10 2012-08-31 Centocor Ortho Biotech Inc Immunoglobulin cleavage fragments as disease indicators and compositions for detecting and binding such
RS51987B (en) * 2007-11-30 2012-02-29 Genentech Inc. VEGF POLYMORPHISMS AND ANTI-ANGIOGENESIC THERAPY
US20110195415A1 (en) 2008-05-13 2011-08-11 Thomas Jefferson University Guanylyl cyclase c qrt-pcr
WO2009149278A1 (en) 2008-06-04 2009-12-10 Synergy Pharmaceuticals Inc. Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of gastrointestinal disorders, inflammation, cancer and other disorders
EP2321341B1 (en) 2008-07-16 2017-02-22 Synergy Pharmaceuticals Inc. Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of gastrointestinal, inflammation, cancer and other disorders
WO2010065293A1 (en) * 2008-12-03 2010-06-10 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. Antibodies for guanylyl cyclase receptors
EP3266795A1 (en) * 2009-02-12 2018-01-10 Cell Signaling Technology, Inc. Method for detecting a fig-ros fusion polynucleotide
JP2012518389A (ja) 2009-02-25 2012-08-16 ダイアグノキュア インコーポレイテッド Ｇｉ癌の転移を検出するための方法
WO2010104035A1 (ja) * 2009-03-12 2010-09-16 学校法人近畿大学 非小細胞肺癌に対する化学療法の治療効果予測方法
US20120225099A1 (en) 2009-06-15 2012-09-06 Thomas Jefferson University Compositions for and methods of activating guanylyl cyclase c
JP5955771B2 (ja) 2009-10-22 2016-07-20 トーマス・ジェファーソン・ユニバーシティＴｈｏｍａｓ Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ 細胞ベースの抗癌組成物ならびに当該物の製造方法および使用方法
MX366890B (es) * 2009-10-23 2019-07-30 Millennium Pharm Inc Moléculas de anticuerpo anti - gcc y composiciones y métodos relacionados.
JP2013534515A (ja) * 2010-06-01 2013-09-05 モナシュ ユニバーシティ プロセシングされていない受容体型チロシンキナーゼｃ−ＭＥＴに対する抗体
CA2806447A1 (en) * 2010-08-13 2012-02-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Neuropilin as a biomarker for bevacizumab combination therapies
US20150086481A1 (en) 2011-07-28 2015-03-26 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Diagnosis and treatment of parkinson's disease
US9156915B2 (en) 2012-04-26 2015-10-13 Thomas Jefferson University Anti-GCC antibody molecules
WO2014134311A1 (en) * 2013-02-28 2014-09-04 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Administration of an anti-gcc antibody-drug conjugate and a dna damaging agent in the treatment of cancer

Also Published As

Publication number Publication date
MY188442A (en) 2021-12-09
BR112014026742A2 (pt) 2017-07-11
PT2841575T (pt) 2019-10-11
LT2841575T (lt) 2019-10-10
CA2871614C (en) 2021-08-31
SG11201406855TA (en) 2014-11-27
ECSP14028523A (es) 2015-09-30
TN2014000454A1 (en) 2016-03-30
HRP20191690T1 (hr) 2019-12-27
HUE046404T2 (hu) 2020-02-28
US20160130344A1 (en) 2016-05-12
CN104395470A (zh) 2015-03-04
ME03560B (me) 2020-07-20
CO7280144A2 (es) 2015-05-29
JP6517267B2 (ja) 2019-05-22
US9273146B1 (en) 2016-03-01
CL2014002911A1 (es) 2015-01-30
DK2841575T3 (da) 2019-09-23
PL2841575T3 (pl) 2020-01-31
KR102046435B1 (ko) 2019-11-19
CN104395470B (zh) 2018-02-06
JP2015516985A (ja) 2015-06-18
ES2749181T3 (es) 2020-03-19
SA113340502B1 (ar) 2015-09-17
IL235307A0 (en) 2014-12-31
GEP201706737B (en) 2017-09-25
HK1208049A1 (en) 2016-02-19
PH12014502399A1 (en) 2014-12-22
KR20150004882A (ko) 2015-01-13
US9000129B2 (en) 2015-04-07
AU2013251312A1 (en) 2014-10-30
PH12014502399B1 (en) 2014-12-22
JP2017131245A (ja) 2017-08-03
EP2841575A1 (en) 2015-03-04
EA034689B1 (ru) 2020-03-06
TWI631137B (zh) 2018-08-01
JP6472746B2 (ja) 2019-02-20
EA201491977A1 (ru) 2015-04-30
AR090884A1 (es) 2014-12-10
CY1122557T1 (el) 2021-01-27
WO2013163633A1 (en) 2013-10-31
RS59370B1 (sr) 2019-11-29
MX362020B (es) 2019-01-04
ZA201407723B (en) 2019-01-30
MA37569B1 (fr) 2020-08-31
TW201348258A (zh) 2013-12-01
EP2841575B1 (en) 2019-06-26
IL235307B (en) 2019-07-31
EP2841575A4 (en) 2016-06-15
NZ701601A (en) 2016-09-30
SI2841575T1 (sl) 2019-11-29
CR20140497A (es) 2015-02-10
US20130287783A1 (en) 2013-10-31
DOP2014000242A (es) 2014-11-30
CA2871614A1 (en) 2013-10-31
AU2013251312B2 (en) 2018-03-22
PE20142322A1 (es) 2015-01-25
MX2014013081A (es) 2015-01-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA117910C2 (uk) Молекула анти-gcc антитіла і її використання для тестування на чутливість до gcc-націленої терапії
CN105814079B (zh) 用于检测叶酸受体1的抗体和测定
ES2927090T3 (es) Anticuerpo anti-TROP-2 humano que muestra actividad antitumoral in vivo
ES2625742T3 (es) Anticuerpos anti-CEACAM5 y usos de los mismos
ES2788151T3 (es) Kits y ensayos de diagnóstico para la detección del receptor 1 de folato
CN110382535A (zh) 抗-gpr20抗体以及抗-gpr20抗体-药物缀合物
UA127198C2 (uk) Антитіло, яке зв'язує axl
UA108991C2 (uk) Молекула антитіла до gcc і пов'язані композиції та способи лікування раку
US20210269549A1 (en) Anti-sas1b antibodies, associated methods of use, and compositions and methods for detecting and treating cancer
BR112012029281B1 (pt) anticorpo contra trop-2 humano, anticorpo monoclonal contra trop-2 humano, fragmento de anticorpo derivado de anticorpo, hibridoma, conjugado, composição farmacêutica, uso de composição farmacêutica, método para detectar um tumor e kit para tratar, diagnosticar ou detectar um tumor
BRPI0315666B1 (pt) Dna de a34 e a33 do tipo 3, proteínas, seus anticorpos e métodos de tratamento usando os mesmos
CN106659790A (zh) 抗cdh6抗体药物缀合物
CN104302669A (zh) 抗cd98抗体及其使用方法
ES2949317T3 (es) Anticuerpo monoclonal antiAggrus, dominio en Aggrus que es necesario para la unión a CLEC-2 y método para la detección del inhibidor de unión de Aggrus-CLEC-2
CN105452297A (zh) mAb 2抗-Met抗体
WO2021251459A1 (ja) ヒト化抗ｇｐｃ－１抗体
TWI782000B (zh) 抗ｇｐｒ２０抗體、其製造方法及其應用
WO2017147247A1 (en) Anti-sas1b antibodies and methods of use
BR112014026742B1 (pt) Moléculas de anticorpo anti-gcc, sequências ácido nucleico, vetor, método de produção uma molécula de anticorpo e usos de uma molécula de anticorpo anti-gcc, kit e mistura de reação