TWI789384B - 薏苡萃取物於降低高脂肪飲食之體重之用途 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種薏苡萃取組合物之用途,其係用以製造降低高脂肪飲食之體重之藥物,其中該薏苡萃取組合物包含薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物。
Description
本發明關於一種薏苡萃取物,特別關於薏苡萃取物於降低三酸甘油酯之用途。
薏苡(Coix lachryma-jobi L.var.ma-yuen Stapf)子又稱約伯的眼淚(Job's tears),為中藥材(TCM)之一,長久以來做為抗發炎藥,用於治療疣(warts)、皮膚龜裂(chapped skin)、風溼病(rheumatism)及神經痛(neuralgia)(李時珍著,本草綱目,1596)。最近一份研究報告顯示,去殼薏苡子(dehulled adlay,DA)可調節大鼠腸道的微生物叢(microbiota)(Chiang,W.;Cheng,C.;Chiang,M.;Chung,K.T.J.Agric.Food Chem.2000,48,829-832),而體外試驗也證實薏苡子具有抗發炎與抗氧化的療效(Lee,M.Y.;Tsai,S.H.;Kuo,Y.H.;Chiang,W.Food Sci.Biotechnol.2008,17,1265-1271;Kuo,C.C.;Shih,M.C.;Kuo,Y.H.;Chiang,W.J.Agric.Food Chem.2001,49,1564-1570)。許多不同來源薏苡子中,所含的多種強效成分皆已定量出(Wu,T.T.;Charles,A.L.;Huang,T.C.Food Chem.2007,104,1509-1515)。薏苡子可分離出數種酚類抗氧化劑,且萃取出的生物活性成分,在處理過程中皆相當穩定
(Hsu,H.Y.;Lin,B.F.;Lin,J.Y.;Kuo,C.C.;Chiang,W.J.Agric.Food Chem.2003,51,3763-3769)。採用分析導向進行分離(assay-guided isolation)時,可自薏苡殼(adlay hull,AH)分離出木酚素(Lignan)與酚類化合物(Kuo,C.C.;Shih,M.C.;Kuo,Y.H.;Chiang,W.J.Agric.Food Chem.2001,49,1564-1570)。分離薏苡子的抗發炎成分時,則可分離出黃酮類與數種酚酸化合物(Huang,D.W.;Kuo,Y.H.;Lin,F.Y.;Lin,Y.L.;Chiang,W.J.Agric.Food Chem.2009,57,2259-2266;Huang,D.W;Chung,C.P.;Kuo,Y.H.;Lin,Y.L.;Chiang,W.J.Agric.Food Chem.2009,57,10651-10657;Chen,H.J.;Chung,C.P.;Chiang,W.;Lin,Y.L.Food Chem.2011,126,1741-1748)。研究發現,薏苡種皮(adlay testa,AT)中的酚醇具有抗過敏活性(Chen,H.J.;Shih,C.K.;Hsu,H.Y.;Chiang,W.J.Agric.Food Chem.2010,58,2596-2601),去殼薏苡子與薏苡子麩皮(adlay bran,AB)具有抗發炎活性,能延緩癌症形成(Shih,C.K.;Chiang,W.;Kuo,M.L.Food Chem.Toxicol.2004,42,1339-1347;Li,S.C.;Chen,C.M.;Lin,S.H.;Chiang,W.;Shih,C.K.J.Sci.Food Agric.2011,91,547-552),而阿魏酸(ferulic acid)經深入研究後發現為抗發炎的活性成分(Chung,C.P.;Hsu,H.Y.;Huang,D.W.;Hsu,H.H.;Lin,J.T.;Shih,C.K.;Chiang,W.J.Agric.Food Chem.2010,58,7616-7623)。
薏苡之許多用途雖已經報導,但薏苡之萃取物之不同應用仍待開發。
於本發明中,由薏苡萃取物而達到降低三酸甘油酯,進而可治療三
酸甘油酯過高之相關疾病。
本發明提供一種薏苡萃取組合物之用途,其係用以製造降低三酸甘油酯之藥物,其中該薏苡萃取組合物包含薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物。
本發明提供一種用以降低三酸甘油酯醫藥組合物,其包含一治療有效量之薏苡萃取組合物,及視情況包含醫藥上可接受之載劑,其中該薏苡萃取組合物包含薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物。
本發明提供一種於一需要降低三酸甘油酯之個體中降低三酸甘油酯之方法,其包含給予前述之醫藥組合物。
圖1顯示根據本發明之薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物(B)之氣相層析-火焰離子化偵測器圖譜。
圖2顯示餵食不同劑量之試驗物質「薏苡萃取組合物膠囊」對倉鼠肝臟組織中三酸甘油酯(TG)濃度之影響。數據以平均值(Mean)±標準差(S.D.)表示,(n=10隻/組)。使用Duncan’s multiple range tests進行統計分析,P<0.05表示數值具有顯著差異(字母a,b,c,d及e是表示各組間之數據由大到小順序排列,字母符號相同之組別代表無顯著差異)。
本發明提供一種薏苡萃取組合物之用途,其係用以製造降低三酸甘油酯之藥物,其中該薏苡萃取組合物包含薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物。
本發明提供一種用以降低三酸甘油酯醫藥組合物,其包含一治療有效量之薏苡萃取組合物,及視情況包含醫藥上可接受之載劑,其中該薏苡
萃取組合物包含薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物。
本發明提供一種於一需要降低三酸甘油酯之個體中降低三酸甘油酯之方法,其包含給予前述之醫藥組合物。
參考以下對本發明之各態樣、實例、及伴隨相關描述之化學圖式及表格的詳細描述,可更容易地瞭解本發明。在揭示及描述本發明之組合物及/或方法之前,應瞭解,除非由申請專利範圍另外特別地指出,否則本發明不受限於特定製備方法、載劑或調配物、或將本發明萃取物調配成用於局部、經口或非經腸投予之產物或組合物的特定模式,此係由於熟習相關技術之通常知識者非常清楚此等事情是可以加以變化的。亦應瞭解,本文所用之術語僅用於描述特定態樣之目的而不意欲用於限制性本發明之範疇。
除非另外指出,否則如本發明所用之以下術語應解釋為具有以下含義。
範圍在本文中通常表述為「約」一個特定值及/或至「約」另一個特定值。當表述此類範圍時,一態樣為包括一個特定值及/或至另一個特定值之範圍。類似地,當值藉由使用字「約」表述為近似值時,應瞭解特定值可形成另一態樣。另外應瞭解,每一範圍之各端點皆有顯著性,一端點與另一端點既有相關性,亦彼此獨立。
「視情況」意謂隨後所述之事件或狀況可能發生或可能不發生,且該描述包括該事件或狀況發生之情況及其未發生之情況。舉例而言,「視情況包含藥劑」意謂該藥劑可能存在或可能不存在。
必須指出,除非上下文另外清楚規定,否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所用之單數形式「一」及「該」包括複數個所指標的物。因
此,除非上下文另外需要,否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。
如本文所用之術語「個體」表示任何動物,較佳為哺乳動物,且更佳為人類。個體之實例包括人類、非人類靈長類動物、齧齒動物、天竺鼠、兔、綿羊、豬、山羊、母牛、馬、狗及貓。
術語如本文所提供之萃取物的「有效量」意謂該萃取物之量足以提供對所需功能(諸如基因表現、蛋白質功能或誘導特定類型之反應)之所需調節。如下文所指出,確實的需要量將在個體之間有變化,此視個體之疾病病況、身體狀況、年齡、性別、物種及體重、組合物之特性及配方等而定。給藥方案可經調整以誘導最佳治療反應。舉例而言,可每日投予若干分次劑量,或可依治療情形之緊急程度按比例減少劑量。因此,很難指定確實的「有效量」。然而,本發明領域中具有通常知識者使用常規實驗即可確定適當的有效量。
如本文所用之術語「治療」表示逆轉、減輕或改善此術語所適用之病症或病狀、或該病症或病狀之一或多種症狀,或抑制其進展。
如本文所用之術語「載劑」或「賦形劑」係指自身並不為治療劑,而是用作用於將治療劑傳遞至個體之載劑及/或稀釋劑及/或佐劑或媒劑,或添加至調配物中以改善調配物之處理或儲存性質或允許或有助於組合物之劑量單位形成適於經口投予之劑量單位(諸如膠囊或錠劑)的任何物質。適合之載劑或賦形劑為一般熟習製造醫藥調配物或食品之通常知識者所熟知。載劑或賦形劑可包括(舉例而言但不限於)緩衝劑、稀釋劑、崩解劑、黏合劑、黏著劑、濕潤劑、聚合物、潤滑劑、滑動劑、為遮蔽或抵消不良味道或氣味而添加之物質、調味劑、染料、芳香劑及為改善組合物之外觀
而添加之物質。可接受之載劑或賦形劑包括檸檬酸鹽緩衝劑、磷酸鹽緩衝劑、乙酸鹽緩衝劑、碳酸氫鹽緩衝劑、硬脂酸、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸及硫酸之鈉鹽及鈣鹽、碳酸鎂、滑石、明膠、阿拉伯膠、海藻酸鈉、果膠、糊精、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、蔗糖、澱粉、明膠、纖維素物質(諸如烷酸之纖維素酯及纖維素烷基酯)、低熔點蠟、可可脂、胺基酸、尿素、醇類、抗壞血酸、磷脂、蛋白質(例如血清白蛋白)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二甲亞碸(DMSO)、氯化鈉或其他鹽、脂質體、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油或粉末、聚合物(諸如聚乙烯吡咯啶酮、聚乙烯醇及聚乙二醇)、及其他醫藥學上可接受之物質。載劑不應破壞治療劑之藥理學活性,且在以足以傳遞治療量之藥劑的劑量投予時應無毒性。
根據本發明之組合物係包含薏苡子麩皮之萃取物,根據本發明之薏苡子麩皮較佳係自去殼薏苡子中所得,本文中所言之「去殼薏苡子」乙詞係指不具有殼、種皮(testas)、外皮(coverings)、外殼(shells)或荚(pods)之種子。自薏苡子中去除殼、外皮、外殼或荚之方式係為本發明所屬技術領域中具通常知識者所熟知。一般而言,去殼薏苡子包含麩皮及胚乳(endosperm),自去殼薏苡子取得麩皮之方式為本發明所屬技術領域中具通常知識者所熟知。
本發明所言之薏苡子並無特殊限定,較佳地,該薏苡係屬於禾本科(Gramineae family)、黍亞科(Panicoideae sub-family)、薏苡屬(Coix species),或薑目(Poales order)、早熟禾科(Poaceae family)、薏苡屬。更佳地,該薏苡為Coix lachryma-jobi、Coix lachryma-jobi L.,Coix lachryma-jobi L.var.ma-yuen Stapf、Coix agrestis Lour.,Coix arundinacea Lam.、Coix exaltata Jacq.或Coix lacryma L.。
根據本發明之薏苡萃取組合物包含薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物。
根據本發明之該薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物係指以二氧化碳超臨界流體萃取薏苡子麩皮所得之萃取物。超臨界流體係指當超過臨界溫度及臨界壓力以上,氣體與液體的性質會趨近於類似,最後會達成一個均勻相(homogenous)之流體狀態。超臨界流體類似氣體具有可壓縮性,兼具有類似液體之流動性,可用以萃取,亦有商用之超臨界流體萃取設備可供使用,例如NATEX、SEPAREX、UHDE及台超科皆提供有商用之超臨界流體萃取設備,其型號規格一般都以萃取槽能處理的容量表示,自500g至2000kg可供選擇,可依所需選取合宜之超臨界流體萃取設備。
於本發明之一較佳具體實施例中,該超臨界流體萃取過程係以二氧化碳超臨界流體與一共溶劑共同萃取。較佳地,該共溶劑為約1重量%至約10%重量比之具有1至7碳數之醇。於本發明之一具體實施例中,薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物係以約1重量%至約10%重量比之具有1至7碳數之醇與二氧化碳超臨界流體共同萃取薏苡子麩皮。
本文中所言之「具有1至7碳數之醇」乙詞係指直鏈或支鏈、具取代或不具取代、單元或多元、飽和或不飽和之醇,較佳係為不具取代、單元及飽和醇。另一方面,該具有1至7碳數之醇較佳為1至4碳數之醇。於本發明之一較佳具體實施例中,該具有1至7碳數之醇係為甲醇、乙醇、正丙醇(n-propanol)、異丙醇(isopropanol)、正丁醇、異丁醇(iso-butanol)、仲丁醇(sec-butanol)、叔丁醇(tert-butanol)、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、2-甲基-2-丁醇、3-甲基-2-丁醇、3-甲基-1-丁醇、2,2-二甲基-1-丙醇、1-己醇、2,4-己二烯-1-醇、2-甲基-环戊醇、環己醇、1-庚
醇、2-庚醇或環庚醇;尤佳地,該醇係為甲醇或乙醇;最佳地,該醇為乙醇。該醇可單獨使用或混合多種使用。
本文中所言之具有1至7碳數之醇較佳係為水溶液,其濃度較佳為自約49%至約99.9%之醇溶液;更佳為自約75%至約99.9%之醇溶液;尤佳為自約90%至約98.0%之醇溶液。
於本發明之一具體實施例中,該薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物之萃取壓力為自約150bar至約600bar;較佳係自約200bar至約580bar;更佳係為自約350bar至約550bar。
於本發明之一具體實施例中,該薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物之萃取溫度為自約30℃至約80℃;較佳係自約40℃至約70℃;更佳係為自約50℃至約60℃。
於本發明之一具體實施例中,該薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物之二氧化碳流量為自約20kg/h至約50kg/h;較佳係為自約30kg/h至約45kg/h;尤佳為自約38kg/h至約40kg/h。
於本發明之一具體實施例中,該薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物之萃取時間為自約30分鐘至約100分鐘;較佳係為自約40分鐘至約60分鐘。
於本發明之一具體實施例中,該薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物中二氧化碳超臨界流體與薏苡子麩皮之重量比例較佳為約5:1至約30:1;更佳係為自約10:1至約20:1。
於本發明之一較佳具體實施例中,該薏苡子麩皮係於萃取前先行切成小塊或攪碎為粉末。於本發明之另一較佳具體實施例中,薏苡子麩皮萃取前係經乾燥。切塊、攪碎或乾燥之方式為本發明所屬技術領域中具通常
知識者所熟知。
較佳地,該萃取方法進一步包含步驟自該萃取物獲得一液體分液,並移除固體。移除固體部份已獲得該液體分液之方法係為本發明所屬技術領域中具通常知識者所熟知。
較佳地,該超臨界流體萃取方法進一步包含一濃縮步驟。濃縮之方法係為本發明所屬技術領域中具通常知識者所熟知,例如使用減壓濃縮機進行。
於本發明之一較佳具體實施例中,該萃取步驟可重複實施,並收集合併該萃取物。
於本發明之一較佳具體實施例中,該薏苡萃取組合物另包含抗氧化劑,根據本發明之抗氧化劑包括但不限於維生素E。
於本發明之一較佳具體實施例中,該薏苡子麩皮之萃取物係進行氣相層析-火焰離子化偵測器(gas chromatography-flame ionization detector,GC-FID)分析。分析條件如下:
i.氣相層析儀:(Thermo,Tract GC Ulture/ITQ 900)
ii.檢出器:火焰離子檢出器(Flame ionization detector,FID)
iii.層析管:RT®-2560(Biscyanopropyl polisiloxane),內膜厚度0.2μm,內徑0.25mm×100m(Restek)。
iv.層析管溫度:初溫:100℃,4min
溫度上升速率(1):3℃/min,終溫:210℃、10min
溫度上升速率(2):2℃/min,終溫:216℃、5min
溫度上升速率(3):2℃/min,終溫:218℃、3min
溫度上升速率(4):2℃/min,終溫:220℃、5min
溫度上升速率(5):2℃/min,終溫:240℃、5min
v.檢出器溫度:250℃
vi.注入器溫度:225℃
vii.移動相氣體氦氣流速:1mL/min
viii.檢體注入體積:1μL
該薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物之圖譜係示於圖1。
根據本發明之組合物較佳為醫藥組合物或食品組合物。
本發明之醫藥組合物可藉由本發明領域中已知之任何方法局部或全身投予,包括但不限於藉由肌肉內、皮內、靜脈內、皮下、腹膜內、鼻內、經口、黏膜或外部途徑投予。適當的投藥途徑、調配方法及投藥時程可由本發明領域中具有通常知識者來決定。在本發明中,醫藥組合物可根據相應投藥途徑以多種方式調配,諸如液體溶液、懸浮液、乳液、糖漿、錠劑、丸劑、膠囊、持續釋放調配物、散劑、顆粒、安瓿、注射液、輸注液、套組、軟膏、洗劑、擦劑、乳膏或其組合。在必要時,其可經滅菌或與任何醫藥學上可接受之載劑或賦形劑混合,其中有許多醫藥學上可接受之載劑或賦形劑已為一般技術者所知。
根據本發明之食品組合物中,該薏苡子麩皮之萃取物可在食品製造過程中,添加於習用之食品組合物中(亦即可食用之食品或飲品或其前驅物)。幾乎所有之食品組合物皆可添加根據本發明之該薏苡子麩皮之萃取物。可添加根據本發明之該薏苡子麩皮之萃取物之食品組合物包含,但不限於糖果、烘焙食品、冰淇淋、乳製品、甜品及風味小點、小吃、肉類替代產品、快餐食品、湯類、麵食、麵條、罐頭食品、冷凍食品、乾製食
品、冷藏食品、油脂、嬰兒食品、軟食物、或麵包塗醬或其混合物。
於下述實例之薏苡萃取組合物降低三酸甘油酯評估試驗中,分為正常飲食組,高脂肪飲食組,高脂肪飲食添加乳化劑組及對使用高脂肪飲食(high-fat diet;HFD)誘導的倉鼠,分別以4組不同劑量(0.5x:30.84mg、1x:61.67mg、5x:308.35mg及10x:616.67mg/kg body weight)之薏苡萃取組合物膠囊餵養8週,結果顯示,試驗物質薏苡萃取組合物可降低實驗動物血清之三酸甘油酯(TG),並具有統計上顯著意義。
於本發明之一較佳具體實施例中,薏苡萃取組合物係用以製造治療原發性三酸甘油酯過高症之藥物。
於本發明之一較佳具體實施例中,薏苡萃取組合物係用以製造治療續發性三酸甘油酯過高症之藥物。較佳地,該續發性三酸甘油酯過高症包含但不限於糖尿病、肥胖、高尿酸血症、肝醣貯藏疾病、高胰島素血症、女性荷爾蒙異常、甲狀腺素異常、酒精攝取過多、碳水化合物攝取過多、腎衰竭、腎病症候群、急性胰臟炎、動脈硬化、高血壓、心臟病、腦中風、脂肪肝、子宮內膜癌、痛風、利尿劑副作用、乙型阻斷劑副作用、皮質類固醇副作用或女性荷爾蒙副作用。
以下之非限制性之實例有助於本發明所屬技術領域中具通常知識者實施本發明。該等實例不應視為過度地限制本發明。本發明所屬技術領域中具有通常知識者可在不背離本發明之精神或範疇的情況下對本文所討論之實施例進行修改及變化,而仍屬於本發明之範圍。
薏苡萃取組合物
藥品及試劑:薏苡子購自台灣台中縣農民,為台中選育4號(Taichung Shuenyu no.4,TCS4)薏苡(C.lachrymajobi L.)
取3Kg薏苡子麩皮,置入超臨界萃取槽。萃取過程加入95%酒精2kg/hr做為共溶劑與二氧化碳超臨界流體同時進行萃取。
超臨界萃取條件為壓力500bar、溫度55℃,頻率35Hz、二氧化碳流速40-42kg/hr、5%wt乙醇。升壓時間設定為30分鐘;萃取時間50分鐘。在壓力升至200bar時加入乙醇,直至萃取完成再關閉酒精。萃取後得到840g萃取物。後續將840g萃取物以減壓濃縮裝置進行濃縮,去除水份及酒精。濃縮後得到750g萃取物,濃縮倍數為四倍。
於薏苡子麩皮萃取物中加入維生素E 0.45g,並填充膠囊,每顆膠囊含有499.7mg薏苡麩皮萃出物與0.3mg維生素E。
薏苡萃取組合物降低三酸甘油酯
實驗動物
實驗動物:選用國家動物實驗中心敘利亞倉鼠(Syrian hamsters)約6週齡公鼠。
動物之飼養
餵養條件:根據衛生福利部食品藥物管理署所修正之調節血脂評估方法(2007)進行。將倉鼠飼養在動物中心的飼育室中,分別以1隻倉鼠1個大飼育籠飼養,環境設定在(亮暗各12小時,50%濕度及恆溫22±2℃)。
動物實際分組、調節血脂功效實驗設計與實驗物質餵食方式
1.實際分組與實驗設計:
(1)動物分組乃先依臨時編號,將動物稱重後,採用隨機方式編號分組。適應1週後,將72隻倉鼠分為7組,分別為1個正常飲食(基礎飼料)組、1個高脂肪飲食(High-fat diet,HFD;添加0.2%的膽固醇)組、1個高脂肪飲食加入乳化劑(HFD+Em)組和高脂肪飲食分別加入4個不同劑量的
受試樣品組(HFD+0.5xJBMCL)、(HFD+1xJBMCL)、(HFD+5xJBMCL)及(HFD+10xJBMCL),每組為10隻公鼠,給予基礎或高脂肪飼料及飲水。
(2)個體識別:耳號(打耳洞法)。
(3)試驗組的識別:各試驗組飼育籠附上標示卡,標示籠號、品系、性別、週齡、入室日期、試驗期間、試驗編號、試驗名稱及動物編號。
2.實驗物質餵食方式:採用經口管(gavage)餵食。
1.基礎飼料
(1)名稱:Laboratory Rodent Diet 5001
(2)廠牌:LabDiet®,USA
(3)來源:PMI®Nutrition International,USA
(4)餵食法:自由攝取
(5)基礎飼料含28.5%蛋白質,13.5%脂肪,58.0%醣類,因此熱量為3.36大卡/克
(6)自配高脂肪飼料:高脂肪飼料的製備及組成是依Huang等人(2015)所提之方法進行。89.8%基礎飼料(w/w)添加基礎飼料添加10%(w/w)豬油及0.2%(w/w)膽固醇(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO,USA),含21.88%蛋白質,33.59%脂肪及44.53%醣類,因此熱量為3.93大卡/克
2.飲水
(1)種類:本試驗所採用之飲用水為經逆滲透純水機處理後之逆滲透水裝入經高溫高壓滅菌之塑膠瓶。
(2)給水方法:自由供飲
實驗動物與人體間劑量之換算
試驗物質薏苡萃取組合物膠囊一天建議攝取量為500毫克,依據2005年美國食品藥物管理局所公告之人體與實驗動物間劑量換算之方法,而以60公斤重成人為基準,以倉鼠為實驗動物進行時,劑量換算是以人體每日每公斤體重建議攝取量的7.4倍為實驗動物的1倍劑量,因此劑量共分4組(0.5x:30.84mg、1x:61.67mg、5x:308.35mg及10x:616.67mg/kg body weight)。
動物飼養型態
本研究以倉鼠品系進行,飼養採用基礎飼料及高脂肪(得添加0.2%的膽固醇)飼料。實驗時間為8週,經飼養適當週數後,高脂肪飲食組之血脂質會逐漸上升,若攝取高脂肪飼料添加不同劑量試驗物質「薏苡萃取組合物膠囊」之實驗組,其血脂質明顯(P<0.05)低於高脂肪飲食組,則可認定該產品具降低血脂質之功能。
實驗記錄及動物犧牲
實驗必須記錄每隻倉鼠的每週體重與平均每日飼料攝取量。動物犧牲前稱體重,抽取血液樣品前,以空腹禁食12-14小時為原則,以二氧化碳窒息犧牲倉鼠,確定其無呼吸心跳開始進行心臟採血,取2mL血液於4℃以1500 xg離心15分鐘,取得上層血清及解剖取肝臟組織並秤重,血清及肝臟組織以-80℃保存。
血清總三酸甘油酯(TG)濃度測定
取10μL血清,使用全自動乾式生化分析儀(日本富士公司,機型:FUJI DRI-CHEM 4000i,Tokyo,Japan)進行血清包含三酸甘油酯(Triglyceride;TG)之濃度分析。
肝臟之總三酸甘油酯(TG)之濃度測定
依Lee等人(2015)所提出的方法。20mg肝臟組織加入200μL有機溶劑(chloroform:isopropanol:NP40=7:11:0.1)混合,在冰浴中使用1個迷你攪拌機(Nippi,Tokyo,Japan)進行脂肪萃取,以12000g離心10分鐘(4℃)後,收集100μL上清液,加入稀釋緩衝溶液(1M potassium phosphate,pH=7.4,500mM NaCl及50mM cholic acid)溶解,分別使用市售總膽固醇(TC)及三酸甘油酯(TG)的ELISA定量分析套組(Cayman,MI,USA),依廠商提供方法進行定量分析。
統計學分析
所有資料將以平均值±標準偏差(SD)的方式表示。採用SPSS電腦統計套裝軟體第20版進行變異數分析(Analysis of Variance,ANOVA),並以Duncan’s Multiple Range Tests來測試不同處理組間的顯著差異效果。當P<0.05時才視為在統計學上有意義。
結果:
高脂肪飲食(HFD)誘導之倉鼠體重的影響
由表1結果可知正常飲食組,高脂肪飲食組,高脂肪飲食添加乳化劑組及對使用高脂肪飲食(high-fat diet;HFD)誘導的倉鼠,分別以4組不同劑量(0.5x:30.84mg、1x:61.67mg、5x:308.35mg及10x:616.67mg/kg body weight)之薏苡萃取組合物膠囊餵養8週,評估試驗期間對各組倉鼠體重變化之影響情形。剛開始餵養高脂肪飲食(HFD)組體重明顯比正常飲食組及高脂肪飲食添加不同劑量薏苡萃取組合物膠囊4組為高(P<0.05)。隨著餵養週數增加,HFD組及高脂肪飲食添加乳化劑組的倉鼠體重增加情形比餵養高脂肪飲食添加不同劑量薏苡萃取組合物膠囊的4組
上升更加顯著。當試驗進行至第八週時,可發現不同劑量之試驗物質「薏苡萃取組合物膠囊(JBMCL)」在與高脂肪飲食組相比下,其體重有明顯降低,並具有統計上之顯著差異,而且亦具有劑量效應之關係,顯示試驗物質「薏苡萃取組合物膠囊」可能可有效減緩實驗動物體重之上升。
1.正常飲食;HFD:高脂肪飲食;HFD+乳化劑(Em);HFD+0.5 x JBMCL(30.84mg/day/kg bw);HFD+1 x JBMCL(61.67mg/day/kg bw);HFD+5 x JBMCL(308.35mg/day/kg bw)及HFD+10 x JBMCL(616.67mg/day/kg bw)。
2.數據以平均值(Mean)±標準差(S.D.)表示,(n=10隻/組)。使用Duncan’s multiple range tests進行統計分析,P<0.05表示數值具有顯著差異(字母a,b,c,d及e是表示各組間之數據由大到小順序排列,字母符號相同之組別代表無顯著差異)。
薏苡萃取組合物膠囊對高脂肪飲食(HFD)餵養之倉鼠每日平均飼料攝取量的影響
由正常飲食組,高脂肪飲食組,高脂肪飲食添加乳化劑組及對使用高脂肪飲食(high-fat diet;HFD)誘導的倉鼠,分別以4組不同劑量(0.5x:30.84mg、1x:61.67mg、5x:308.35mg及10x:616.67mg/kg body weight)之薏苡萃取組合物膠囊餵養8週,進一步評估各組實驗動物之每日平均飼料攝取量情形。由表2結果可知各組動物在正式試驗過程中,對每日平均飼料攝取量均會隨著飼養時間增加而正常增加,且第1週到第8週各組倉鼠之每日平均飼料攝取量均無顯著差異,表示各組均有進行正常的進食。
1.正常飲食;HFD:高脂肪飲食;HFD+乳化劑(Em);HFD+0.5 x JBMCL(30.84mg/day/kg bw);HFD+1 x JBMCL(61.67mg/day/kg bw);HFD+5 x JBMCL(308.35mg/day/kg bw)及HFD+10 x JBMCL(616.67mg/day/kg bw)。
2.數據以平均值(Mean)±標準差(S.D.)表示,(n=10隻/組)。使
用Duncan’s multiple range tests進行統計分析,P<0.05表示數值具有顯著差異(字母a,b,c,d及e是表示各組間之數據由大到小順序排列,字母符號相同之組別代表無顯著差異)。
薏苡萃取組合物膠囊對高脂肪飲食(HFD)誘導之倉鼠三酸甘油酯濃度之影響
由血液生化分析儀檢測倉鼠血清中三酸甘油酯(TG),評估4組不同劑量(0.5x:30.84mg、1x:61.67mg、5x:308.35mg及10x:616.67mg/kg body weight)薏苡萃取組合物膠囊之功效。表3結果顯示,對使用高脂肪飲食(high-fat diet;HFD)誘導的倉鼠,分別以不同劑量之薏苡萃取組合物膠囊餵養8週後,與高脂肪飲食組相比,可明顯降低血清中三酸甘油脂,且不同劑量之試驗物質皆具有統計上之顯著差異,並具有劑量效應之關係。
1.正常飲食;HFD:高脂肪飲食;HFD+乳化劑(Em);HFD+0.5 x JBMCL(30.84mg/day/kg bw);HFD+1 x JBMCL(61.67mg/day/kg bw);HFD+5 x JBMCL(308.35mg/day/kg bw)及HFD+10 x JBMCL(616.67mg/day/kg bw)。
2.數據以平均值(Mean)±標準差(S.D.)表示,(n=10隻/組)。使用Duncan’s multiple range tests進行統計分析,P<0.05表示數值具有顯
著差異(字母a,b,c,d及e是表示各組間之數據由大到小順序排列,字母符號相同之組別代表無顯著差異)。
薏苡萃取組合物膠囊對高脂肪飲食(HFD)誘導之倉鼠肝臟中三酸甘油酯(TG)及膽固醇濃度的影響
使用ELISA定量分析套組測定倉鼠肝臟中三酸甘油酯(TG)濃度,其結果示於圖2,可知正常飲食組,高脂肪飲食組,高脂肪飲食添加乳化劑組及對使用高脂肪飲食(high-fat diet;HFD)誘導的倉鼠,分別以4組不同劑量(0.5x:30.84mg、1x:61.67mg、5x:308.35mg及10x:616.67mg/kg body weight)之JBM喬本薏苡酯膠囊餵養8週,評估不同劑量薏苡萃取組合物膠囊組之調節血脂肪功效。由圖2結果顯示,試驗物質「薏苡萃取組合物膠囊」均會降低肝臟中三酸甘油酯(TG)濃度,並具有統計上的顯著差異,尤其以5x及10x劑量之試驗物質能更明顯的降低肝臟中三酸甘油酯(TG)。因此,由結果顯示試驗物質「薏苡萃取組合物膠囊」可以預防脂肪堆積於肝臟。
上述實施例僅為說明本發明之原理及其功效,而非限制本發明。習於此技術之人士對上述實施例所做之修改及變化仍不違背本發明之精神。本發明之權利範圍應如後述之申請專利範圍所列。
Claims (3)
- 一種薏苡萃取組合物之用途,其係用以製造降低高脂肪飲食之體重之藥物,其中該薏苡萃取組合物包含薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物,該薏苡子麩皮之二氧化碳超臨界流體萃取物係以約1重量%至約10%重量比之乙醇與二氧化碳超臨界流體,於壓力為自約150bar至約600bar及溫度自約30℃至約80℃共同萃取薏苡子麩皮。
- 如請求項1之用途,其中該薏苡係為Coix lachryma-jobi L.。
- 如請求項1之用途,其中該薏苡萃取組合物包含維生素E。
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TW107111637A TWI789384B (zh) | 2018-04-02 | 2018-04-02 | 薏苡萃取物於降低高脂肪飲食之體重之用途 |
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