CN109223734B

CN109223734B - 羟基酪醇及其衍生物在制备抗抑郁产品中的新应用

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Publication number: CN109223734B
Application number: CN201811207103.XA
Authority: CN
Inventors: 凌沛学; 吴季栩; 邵华荣; 郭新艳; 边玲; 刘飞; 程艳玲; 张建强; 张岱州; 李帅广
Original assignee: Shandong Academy of Pharmaceutical Sciences
Current assignee: Shandong Academy of Pharmaceutical Sciences
Priority date: 2018-10-17
Filing date: 2018-10-17
Publication date: 2020-07-28
Anticipated expiration: 2038-10-17
Also published as: JP7352623B2; CN109223734A; WO2020077915A1; JP2022514168A

Abstract

本发明提供了羟基酪醇及其衍生物在制备抗抑郁产品中的应用，属于生物医药领域。羟基酪醇衍生物选自羟基酪醇盐、羟基酪醇酯和羟基酪醇醚中的至少一种，可以来自化学合成、微生物发酵或动植物提取。所述预防和治疗抑郁症产品可以是药品、食品、功能性食品等。以羟基酪醇及其衍生物为活性成分制备的抗抑郁产品，具有预防和治疗抑郁症及预防抑郁症复发的作用，可用于降低抑郁症的发病率和改善抑郁症患者的生活质量。

Description

羟基酪醇及其衍生物在制备抗抑郁产品中的新应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及羟基酪醇的新用途。

背景技术

随着社会经济的不断发展，生活节奏的加快，社会竞争日益激烈，人们的心理压力逐渐增大，抑郁症发病率逐年上升。据世界卫生组织估计全世界抑郁症患病率约3%-5%，总计约1-2亿人。到2022年，抑郁症将成为发展中国家最严重的疾病负担。

抑郁症又称抑郁障碍，是一组以抑郁心境自我体验为中心的临床症状群或状态，以持久且显著的自发性心情低落为主要临床特征，是心境障碍的主要类型。临床病症主要有：情绪低落、不合群、离群、躯体不适、食欲不振及睡眠障碍；部分病例有明显的焦虑和运动性激越；严重者可出现幻觉、妄想等精神病性症状。抑郁症主要有以下几类：内源性抑郁症、反应性抑郁症、隐匿性抑郁症、以学习困难为特征的抑郁症、药物引起的继发性抑郁症、躯体疾病引起的继发性抑郁症、产后抑郁症等。目前，市场上治疗抑郁症的药物有帕罗西汀、舍曲林、氟伏沙明、文拉法辛，存在较多的药物副作用，如嗜睡、便秘、胃肠道不适、呼吸抑制、记忆力减退和依赖性等，寻找和开发更为安全的抗抑郁药具有重要意义。

目前，关于抑郁症发病机制的理论学说较多：单胺类神经递质学说，神经内分泌学说、神经可塑性学说等。其中，单胺类神经递质学说的研究最为广发和深入，其认为抑郁症发病与单胺类神经递质如5-羟色胺、去甲肾上腺素、多巴胺等神经递质水平下降有关。多巴胺是一种重要的儿茶酚胺类神经递质，用来帮助细胞传送脉冲的化学物质。这种脑内分泌物和人的情欲、感觉有关，可传递兴奋及开心的信息。伏隔核区和纹状体区多巴胺能受损，多巴胺水平降低，则会出现快感缺失、焦虑、食欲不振等抑郁症症状。脑内多巴胺水平可能是抑郁症严重程度和治疗效果指标之一，因而调节脑内多巴胺的水平对治疗抑郁症具有重要意义。

羟基酪醇(hydroxytyrosol，C₈H₁₀O₃，CAS：10597-60-1)，又称3,4-二羟基苯乙醇(3,4-dihydroxy phenylethanol)，是一种亲水亲脂的天然多酚化合物。常温低纯度时呈黄色油状物，高浓度时呈无色油状物，均有流动性；主要以橄榄苦苷的形式存在于橄榄科橄榄属的果实和树叶中，是橄榄油中的有效成分。由于具有邻苯二酚和苯乙醇的结构，羟基酪醇有很强的抗氧化性，近年来得到了广泛的关注。研究证明，羟基酪醇具有极强的抗氧化作用，对炎症的发生发展有着较好的抑制和预防疗效；对多巴胺能细胞具有潜在神经保护作用，能用于治疗帕金森和阿尔兹海默综合征。现有技术已公开羟基酪醇的制备方法及其用于制造保护软骨、预防和治疗骨关节炎、降血脂、治疗黄斑眼病产品中的用途，但是，羟基酪醇作为预防和治疗抑郁症的用途还未见公开。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种羟基酪醇用于制备抗抑郁产品中的新用途，具有预防和治疗抑郁症及其并发症的病情，预防抑郁症复发的作用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

羟基酪醇及其衍生物在制备预防和治疗抑郁症产品中的应用。可用于缓解和改善人在经受心理应激后引起的心理疾病病况；用于缓解和改善抑郁症中的各种病状，如：情绪低落、不合群、躯体不适、食欲不振及睡眠障碍等。

所述的羟基酪醇衍生物，选自羟基酪醇盐、羟基酪醇酯和羟基酪醇醚中的至少一种，其结构式为如式(Ⅰ)所示的化合物中部分或者全部的-OH与碱、酸、醇形成的盐、酯或醚：

式(Ⅰ)。

上述羟基酪醇衍生物在人体或者动物体内经水解可转变成羟基酪醇，产生相同或相近的生理活性。

所述羟基酪醇盐为羟基酪醇与无机或有机碱所形成的生理上可接受的盐。包括但不限于羟基酪醇的碱金属盐，如钠盐、钾盐；羟基酪醇的碱土金属盐，如钙盐、镁盐；铵盐；羟基酪醇与含氮有机碱形成的盐。所述含氮有机碱包括但不限于三甲胺、三乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二乙胺、二环己基胺、二苄基胺、N-苄基-β-苯乙基胺、N,N’-二苄基乙二胺、普鲁卡因（Procaine）、安非他明（Amphetamine）。

所述羟基酪醇酯为羟基酪醇与无机或有机酸形成生理上可接受的酯；所述无机酸选自硫酸、磷酸、碳酸、盐酸；所述有机酸选自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、马来酸、草酸、甲磺酸、琥珀酸或脂肪酸。

所述羟基酪醇醚包括羟基酪醇烷基醚、羟基酪醇芳基醚和羟基酪醇糖苷。所述的烷基醚可以是甲基、乙基、正丙基、正丁基、正己基、正辛基、异丙基或叔丁基。所述的芳基醚可以是含碳原子的芳香醚，也可以是含有氮原子、硫原子、氧原子的杂芳环醚；所述的羟基酪醇糖苷可以是羟基酪醇葡萄糖苷、羟基酪醇果糖苷等。

所述羟基酪醇及其衍生物可来自化学合成、微生物发酵或动植物提取，如，提取自橄榄果实、橄榄叶或其他含有羟基酪醇及其衍生物的提取物。

所述预防和治疗抑郁症产品，可以是药品、食品、功能性食品、特医食品或化妆品。

所述抗抑郁产品还可以包含制备药品、食品、功能性食品、特医食品或化妆品等可接受的辅料。如，填料、载体、乳化剂、赋形剂等。

所述预防和治疗抑郁症产品，可以为口服、注射或外用剂型。所述口服剂型包括但不限于含片、片剂、胶囊和颗粒剂；优选为含服剂型，如舌下含片。所述注射剂型包括但不限于注射液、粉针剂。所述外用剂型包括但不限于栓剂、气雾剂、膜剂、贴剂；优选为腔道用药剂型，如鼻腔用药剂型，可通过鼻粘膜吸收药剂。

所述抗抑郁食品包括但不限于焙烤食品、调味品、饮料类、酒类、乳与乳制品、冷冻饮品、汤、营养棒、涂抹物、膳食补充剂、食品或饲料添加剂、功能性食物。

所述预防和治疗抑郁症产品，可与其他抗抑郁产品联合应用，以降低其他产品的应用剂量，减少副作用。还可以是羟基酪醇及其衍生物与其他活性成分组成的复方制剂，具有协同增效作用，可以提高治疗抑郁的效果，降低副作用。

其他活性成分选自但不限于具有抗抑郁活性的成分，如盐酸舍曲林、氟西汀、帕罗西汀、西酞普兰、氟伏沙明、盐酸多塞平、司来吉兰、沙芬酰胺、托洛沙酮；具有镇静催眠活性的成分，如夸西泮、替马西泮、舒乐安定、γ-氨基丁酸中的任一种或组合；具有抗氧化活性的成分，如红景天苷；羟基红景天苷、酪醇；具有治疗神经衰弱作用的成分，如天麻素。

所述预防和治疗抑郁症产品中，羟基酪醇及其衍生物的含量为0.01%-99.99%；优选为0.05%-95%；更优选为0.05%-65%；所述%为质量体积百分含量（w/v）或质量百分含量（w/ w）。

进一步的，在口服产品中的百分含量为0.05%-60%；优选为0.1%-40%。在注射用产品中的百分含量为0.1%-95%；优选为0.5%-50%。在外用产品中的百分含量为0.1%-65%。

本发明的有益效果为：

本发明提供了羟基酪醇及其衍生物用于制备抗抑郁产品的新用途，可用于预防或治疗抑郁症及其并发症病情，预防抑郁症复发，降低抑郁症的发病率和改善抑郁症患者的生活质量，与其他抗抑郁药品联用，可降低其他产品的副作用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。

实施例1 羟基酪醇舌下含片的制备

通过常规工序来制备舌下含片，配方（制成1000粒）如下：

采用湿法制粒压片法，称取处方量的蔗糖和微晶纤维素混匀，再将羟基酪醇和10%淀粉浆混匀，作为粘合剂加入制软材，过20目筛，湿颗粒70 ℃干燥1 h，20目筛整粒，加入滑石粉混匀，压片，即得。

实施例2 羟基酪醇软胶囊的制备

通过常规工序来制备软胶囊，配方（制成1000粒）如下：

取处方量羟基酪醇，加植物油溶解，作为药液待用；另取甘油及水加热至70 ℃，搅拌溶化，加入明胶，搅拌2 h后，出去上浮的泡沫，滤过。开启软胶囊机，打开左右胶盒及喷体加热，同时开启水泵循环和制冷。喷体设定43 ℃，左右胶盒设置60 ℃。预热完成后，调节俩侧制皮厚度均为0.70 mm。胶皮调试好后，将药液加入料斗中，调节装量，压制软胶囊。将软胶囊清洗，晾干。

实施例3 羟基酪醇片剂的制备

通过常规工序来制备片剂，配方（制成1000片），如下：

将糖粉、微晶纤维素和羧甲基淀粉钠混匀，再将羟基酪醇和淀粉浆混匀作为粘合剂加入，制软材，过14目尼龙筛制湿颗粒，于45 ℃干燥，外加滑石粉，混匀后，过12目尼龙筛，颗粒经含量检测合格后，压片，即得。

实施例4 羟基酪醇颗粒剂的制备

通过常规工序来制备颗粒剂，配方（1000袋）如下：。

将亚硫酸氢钠、蔗糖和微晶纤维素混匀，再将羟基酪醇和淀粉浆混匀作为粘合剂加入，制软材，过12目尼龙筛。将已过80目筛的食用香精与整粒好的颗粒混合，分装，即得。

实施例5 羟基酪醇注射剂的制备

通过常规工序来制备注射液（1000支），配方如下：

在配制容器中，加入处方量80%的注射用水，通二氧化碳饱和，加羟基酪醇溶解后，加入预先配制好的依地酸二钠溶液和亚硫酸氢钠溶液，搅拌均匀，添加二氧化碳饱和的注射用水至足量，过滤除杂。在二氧化碳气流下分装，灌封，灭菌。

实施例6 羟基酪醇注射剂制备

通过常规工序来制备注射剂（100支），配方如下：

将维生素E溶于精制大豆油中，再加入羟基酪醇，均质，过滤除杂，灌注，灭菌，即得。

实施例7 保健饮料的制备

通过常规工序来制备保健饮料，配方如下：

按照以上重量称取原料，以少量水溶解后，再补水至1000mL，灭菌、分装即得。其中，羟基酪醇和酪氨酸为主料，为进一步调节产品的风味和口感，本发明的产品配方中还添加了适量的柠檬酸和三氯蔗糖调味剂，以及食用香精，具体制备过程按照食品领域的常规操作进行即可。

实施例8 复方羟基酪醇片剂的制备

通过常规工序来制备片剂，配方（制成1000片），如下：

将氟西汀、糖粉、微晶纤维素和羧甲基淀粉钠混匀，再将羟基酪醇和10%淀粉浆混匀加入后制软材，过14目尼龙筛制湿颗粒，于45 ℃干燥。干颗粒过12目尼龙筛整粒，然后将此颗粒与滑石粉，混匀后，再过12目尼龙筛，颗粒经含量检测合格后，压片，即得。

实施例9 羟基酪醇己酸酯的制备

制备方法如下：

在2.3 mL的吡啶中溶解1 g羟基对羟苯基乙醇，用10 mL甲苯稀释并在冰水浴中冷却。加入3mL己酰氯，生成固体。过夜，使混合物达到室温。把产物溶解在乙酸乙酯与水混合溶液中，保留有机相，除去水相。有机相依次用1.5M的HCl溶液和4%的碳酸氢钠溶液洗涤，烘干水分，浓缩，即得羟基酪醇己酸酯，其氢谱表征为：

¹H NMR (CDCl₃) δ7.0-6.8 (m, 3H); 4.40 (t, 2H, J=7.1Hz); 2.90 (t, 2H, J= 6.8Hz); 2.22 (t, 2H, J=7.3Hz); 2.23 (t, 2H, J=7.3Hz); 2.25 (t, 2H, J=7.4Hz); 1.35-2.32 (m, 6H); 1.56-1.25 (m, 12H), 0.93-0.87 (m, 9H)；

化合物结构如下：

。

实施例10 羟基酪醇己酸酯舌下含片的制备

通过常规工序来制备羟基酪醇己酸酯舌下含片，配方（制成1000粒）如下：

实施例11 悬尾法获得性绝望抑郁模型试验

羟基酪醇及其衍生物由山东省药学科学院提供。ICR小鼠70只，体重18-22g，济南朋悦实验动物繁育有限公司提供，动物室温度控制在20℃-25℃，相对湿度45%-55%，昼夜12h/12h，自由摄水和饮食。适应环境一周后，进行随机分为7组：模型对照组（0 mg/kg/d）、羟基酪醇低剂量组（1 mg/kg/d）、羟基酪醇中剂量组（4 mg/kg/d）、羟基酪醇高剂量组（10mg/kg/d）、实施例8组（每粒药片含羟基酪醇20mg，氟西汀5mg）、氟西汀组（3 mg/kg/d）、羟基酪醇己酸酯组（4 mg/kg/d）。6个试验组各组灌胃给样品，每天1次，连续30 d，0.1 mL/10g体重；模型对照组用相应的溶媒灌胃，灌胃量为0.1 mL/10 g体重。于末次给予样品2h后，将各组小鼠分别尾端（在距尾尖部2 cm处）用胶布粘于悬尾箱（30 cm×30 cm×25 cm）上部支架上，使其成倒挂状态，头部离箱底约5cm，一次悬挂2只小鼠，中间用隔板隔开。小鼠为了克服不正常体位而挣扎活动，但活动一段时间出现间断性不动，显示失望状态。悬挂时间为6min，统计后4min内悬尾累计不动时间（不动状态即小鼠停止挣扎或无任何活动），结果如表1所示：

表1 羟基酪醇对小鼠悬尾试验的影响（mean±SD，n=10）

注：与模型对照组相比，*P<0.05。

由表1可见，给药动物组悬尾不动时间和模型对照组比较，均有显著性差异。其中，羟基酪醇的给药剂量越多，小鼠悬尾不动时间呈剂量依赖性缩短。羟基酪醇中剂量组（4mg/kg/d）、羟基酪醇己酸酯组（4 mg/kg/d）与氟西汀组（3 mg/kg/d）比较均没有显著性差异，说明羟基酪醇及其己酸酯衍生物均具备有改善病情或辅助治疗抑郁症的的效果。同时，实施例8组（4 mg/kg/d羟基酪醇+1 mg/kg/d氟西汀）与羟基酪醇组（10 mg/kg/d）比较，悬尾不动时间未见显著性差异，且显著优于羟基酪醇（4 mg/kg/d）和氟西汀组（3 mg/kg/d），说明组合物的搭配使用具有协同增效作用，有助于病情的缓解。

实施例12 旷场实验

羟基酪醇及其衍生物由山东省药学科学院提供。ICR小鼠70只，体重18-22 g，济南朋悦实验动物繁育有限公司提供，动物室温度控制在20 ℃-25 ℃，相对湿度45 %-55 %，昼夜12h/12h，自由摄水和饮食。适应环境一周后，小鼠抑郁模型用皮质酮腹腔注射21 d，通过观察动物行为学改变判断模型的成功。造模成功后，进行随机分为7组：模型对照组（0 mg/kg/d）、羟基酪醇低剂量组（1 mg/kg/d）、羟基酪醇中剂量组（4 mg/kg/d）、羟基酪醇高剂量组（10 mg/kg/d）、实施例8组（每粒药片含羟基酪醇20mg，氟西汀5mg）、氟西汀组（3 mg/kg/d）、羟基酪醇己酸酯组（4 mg/kg/d），每组10只小鼠。7个试验组各组灌胃给样品，每天1次，连续30 d，灌胃量为0.1 mL/10g体重；模型对照组用相应的溶媒灌胃，灌胃量为0.1 mL/10g体重。于末次给予样品2h后，将各组小鼠分别单独放在没有盖子的敞箱内（55 cm×55 cm×40 cm），在箱子的底部用白线分成11 cm×11 cm大小的小方格，此箱底和四壁制成黑色以便在较暗的房间里与小白鼠想成很好的对比。用摄影机固定于房间中心的上方，小鼠的自发活动被摄像记录测定。在造模21d后测定小鼠的移动距离和直立次数，把小鼠放在箱子的底部中间，让其自由活动适应环境5 min后，再进行测量5 min，每次用摄像机记录和观察。两次实验之间，箱子底部的每一小格用70 %的乙醇擦洗干净。每次的测量时间均为下午4点，室内稳定25 ℃-28 ℃，并保持室内安静。记录小鼠的自发活动：小鼠每通过一个小格或跨越10cm分别被记做平行1分，同时小鼠的双前肢直立或接触纸箱壁被记录为直立1次。结果如表2所示：

表2 羟基酪醇对小鼠平行移动格数和直立次数的影响（mean±SD，n=10）

注：与对照组相比，*P<0.05。

由表2可见，给药动物组平行移动格数和直立次数与模型对照组相比均有显著性差异。其中，羟基酪醇的给药剂量越多，小鼠活动次数呈剂量依赖性增多，探索行为增多。羟基酪醇中剂量组（4 mg/kg/d）、羟基酪醇己酸酯组（4 mg/kg/d）与氟西汀组（3 mg/kg/d）相比均没有显著性差异，说明羟基酪醇及其己酸酯衍生物均具备有改善病情，治疗抑郁症的的效果。同时，实施例8组（4 mg/kg/d羟基酪醇+1 mg/kg/d氟西汀）与羟基酪醇组（10 mg/kg/d）比较，平行移动格数和直立次数未见显著性差异，且显著优于羟基酪醇（4 mg/kg/d）和氟西汀组（3 mg/kg/d），说明组合物的搭配使用具有协同增效作用，有助于病情的缓解。

实施例13 大鼠慢性不可预知轻度应激抑郁模型

羟基酪醇及其衍生物由山东省药学科学院提供。SD大鼠70只，体重183-224g，济南朋悦实验动物繁育有限公司提供，动物室温度控制在20℃-25℃，相对湿度45%-55%，昼夜12h/12h，自由摄水和饮食。

适应环境一周后，进行随机分为7组：模型对照组（0 mg/kg/d）、羟基酪醇低剂量组（0.5mg/kg/d）、羟基酪醇中剂量组（2mg/kg/d）、羟基酪醇高剂量组（6mg/kg/d）、实施例8组（每粒药片含羟基酪醇20mg，氟西汀5mg）、氟西汀组（2mg/kg/d）、羟基酪醇己酸酯组（4mg/kg/d）。造模及给药：空白对照组大鼠正常摄食饮水，不给予任何刺激，5只一笼饲养；其余大鼠将进行6周的慢性不可预知温和刺激抑郁模型的构建（单笼饲养）。每天选用应激方式的1种，不同的应激源随机分布，间隔至少7 d应用相同的应激源。除了24 h持续压力，应激在每天8:30-12:00实施。应激方式包括：夜间照明12 h、鼠笼倾斜45° 24 h、冷水（4℃-8 ℃）游泳 5 min、45 ℃热水游泳5 min、行为限制1 h、潮湿垫料24 h、夹尾1 min、禁水24 h、禁食24 h、拥挤鼠笼过夜等。慢性应激2周后，所有大鼠再进行一次强迫游泳实验和蔗糖偏好实验。然后，给药组开始给药，每天1 次，连续给药4周（给药期间继续造模），模型对照组口服给予相应溶媒，采用强迫游泳实验和蔗糖偏好实验评价药物对小鼠抑郁样行为的影响。

在糖水测试前先用2瓶水让动物适应48 h，第一个24h，两瓶均装有等量1%（w/v）蔗糖水。第二个24h，1瓶装有1%糖水，另1瓶装有等量纯净水，并且在12h后调换两个水瓶的位置。随后动物禁水不禁食，24h后进行糖水/纯水消耗实验。每笼放一只大鼠，同时给予每只大鼠事先称重好的几乎等量的两瓶水：1瓶1%糖水，另1瓶纯净水。测试时间为2h，测试1h后双瓶位置互换。测试结束后再次对双瓶进行称重。每只小鼠的糖偏好=[糖水消耗量/(白水消耗量+糖水消耗量)]×100%，结果如表3所示：

表3 羟基酪醇对大鼠的糖偏好和强迫游泳行为的影响（mean±SD，n=10）

注：与模型对照组相比，*P<0.05。

糖水偏好试验及强迫游泳结果显示，与模型对照组相比，给药组糖水偏好及游泳不动时间均有显著改善，并与剂量呈正相关。羟基酪醇中剂量组（2 mg/kg/d）、羟基酪醇己酸酯组（2 mg/kg/d）与氟西汀组（2 mg/kg/d）相比没有显著性差异，说明羟基酪醇及其己酸酯衍生物具备有治疗或辅助治疗抑郁症的的效果。同时，实施例8组（2 mg/kg/d羟基酪醇+0.5 mg/kg/d氟西汀）与羟基酪醇组（6 mg/kg/d）比较，糖水偏好及游泳不动时间未见显著性差异，且显著优于羟基酪醇（2mg/kg/d）和氟西汀组（2 mg/kg/d），说明组合物的搭配具有协同增效作用，有助于病情的缓解。

实施例14 羟基酪醇对抑郁症大鼠脑内单胺类神经递质含量的影响

适应环境一周后，进行随机分为7组：模型对照组（0 mg/kg/d）、羟基酪醇低剂量组（0.5 mg/kg/d）、羟基酪醇中剂量组（2 mg/kg/d）、羟基酪醇高剂量组（6 mg/kg/d）、实施例8组（每粒药片含羟基酪醇20mg，氟西汀5mg）、氟西汀组（2 mg/kg/d）、羟基酪醇己酸酯组（2mg/kg/d）。

造模方法同实施例13。

慢性应激2周后，给药组开始给药，每天1 次，连续给药4周（给药期间继续造模），模型对照组口服给予相应溶媒。给药结束后，按0.35 mL/100 g腹腔注射麻醉大鼠，迅速剥取大脑。在冰盘上，分离除去小脑和血肿周边组织。称重，取400 mg组织，放入组织匀浆器中，加入0.1 mol/L高氯酸（含0.05% EDTA-Na₂）1 mL，在冰水浴下匀浆。完成后，将匀浆转移入1.5 mL离心管中，在4 ℃条件下，10000 r/min离心10 min，取上清液置-80 ℃冰箱保存。

分别精密称取去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）和5-羟色胺（5-HT）标准品适量，用0.1 mol/L高氯酸（内含0.1%半胱氨酸）溶液分别配成质量浓度为1mg/mL的标准储备液，分别将储备液稀释成NE浓度0.1、0.5、1.5、3、4.5 μg/mL，DA浓度为0.2、1、2、4、5 μg/mL，5-HT浓度为0.5、1、1.5、2、3 μg/mL，作为各组分的标准品对照液。

采用HPLC进行检测，色谱条件：色谱柱选择CLC-ODS柱，色谱的流动相为pH2.5离子对试剂（十二烷基硫酸钠 0.15 g，EDTA-Na 2 0.028 g，pH2.5-3 硫酸溶液0.2 mL，10% 甲醇溶液 400 mL，蒸馏水定容至1000 mL）；流速1.2 mL/min；柱温 40℃。荧光激发波长285nm，发射波长313 nm，进样量20 μL，以峰面积外标法定量。

表4 羟基酪醇对大鼠的脑内的单胺类神经递质含量的影响（mean±SD，n=10）

注：与模型对照组相比，*P<0.05。

由表4可见，与模型对照组相比，给药组单胺类神经递质均有显著提高，并与羟基酪醇给药剂量呈正相关。羟基酪醇中剂量组（2 mg/kg/d）、羟基酪醇己酸酯组（2 mg/kg/d）与氟西汀组（2 mg/kg/d）相比没有显著性差异，说明羟基酪醇及其己酸酯衍生物均可提高抑郁症动物脑内单胺类神经递质的水平。同时，实施例8组（2 mg/kg/d羟基酪醇+0.5mg/kg/d氟西汀）与羟基酪醇组（6 mg/kg/d）比较，脑内单胺类神经递质的水平未见显著性差异，且显著优于羟基酪醇（2mg/kg/d）和氟西汀组（2 mg/kg/d），说明组合物的搭配具有协同增效作用，有助于抑郁症病情的缓解。

实施例15 羟基酪醇舌下含片、羟基酪醇片和羟基酪醇己酸酯舌下含片的药动学特征

羟基酪醇舌下含片（20 mg/片）、羟基酪醇片（20 mg/片）和羟基酪醇己酸酯舌下含片（20 mg/片）由山东省药学科学院提供，制备方法如实施例一、二和十所示。Beagle犬18只，雌雄各半，体重8.0-12 kg，济南朋悦实验动物繁育有限公司提供。动物室温度控制在20℃-25℃，相对湿度45%-55%，昼夜12h/12h，自由摄水和饮食。

给药剂量均为40mg/只。随机分为A、B和C三组，禁食12h后，A组给予羟基酪醇舌下含片，B组口服给予羟基酪醇片，C组给予羟基酪醇己酸酯舌下含片。分别于给药前及给药后0.083、0.167、0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10h共12个时间点于后肢隐静脉取血2mL，肝素抗凝收集血液，分离血浆并储存于-20℃冰箱保存，待测。动物给药4h后统一进食。

上述Begle犬第一次给药7d后，进行第2次给药，给药1h时立即处死并迅速剥取脑。在冰盘上，分离除去小脑和血肿周边组织，称重，取500 mg脑组织，放入组织匀浆器中，加入生理盐水2.5 mL，在冰水浴下匀浆。完成后，将匀浆转移入1.5 mL离心管中，在4 ℃条件下，10000 r/min离心10 min，取上清液置-80 ℃冰箱保存。

将血浆及脑组织匀浆样品在室温下解冻，取200 μL置于1.5 mL EP 管中，加20 μg/mL水杨苷（内标）对照品溶液10 μL，涡旋混匀3 min，加乙腈1 mL，涡旋混匀3 min，14 800r/min离心12min，取上清液1 mL，37 ℃氮气吹干，残渣加初始流动相120 μL复溶，14 800r/min离心15 min，取上清液，进样测定。

采用LC-MS/MS对其中羟基酪醇含量进行分析。色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C₁₈ 色谱柱（2.1mm×50 mm，1.7μm）；色谱条件：流动相乙腈（A）-0.1%甲酸（B），梯度洗脱（0-1 min，95%B；1-3.5 min，95% →5%B；3.5-5 min，5%B；5-6 min，5%→95%B；6-7.5min，95%B）；柱温：35℃；体积流量：0.3 mL/min；进样量5 μL；质谱条件：MRM多反应监测，电喷雾负离子源；毛细管电压2.5kV；提取电压3 V；离子源温度120 ℃；脱溶剂气温度400 ℃；碰撞电压15 V；锥孔电压30 V；脱溶剂气体体积流量800 L/h；羟基酪醇和水杨苷的选择检测离子质核比m/z分别为153.01→123.01、285.28→123.04。

方法学验证结果显示本方法适用于生物样本中羟基酪醇的含量测定，线性范围为5-1000ng/mL。所得羟基酪醇舌下含片、羟基酪醇片剂及羟基酪醇己酸酯Beagle犬体内的药动学参数如表5所示：

表5 Beagle犬血浆中羟基酪醇的药动学参数（mean±SD, n=6）

表6 给药1h后Beagle犬脑组织中羟基酪醇的浓度（mean±SD，n=6）

结果显示，与口服片剂比较，羟基酪醇经由舌下含服的给药方式能更快进入血液循环达到峰值，且羟基酪醇能更快富集于大脑。羟基酪醇己酸酯可提高羟基酪醇的血浆和脑组织暴露水平，有利于羟基酪醇透过血脑屏障进入脑组织发挥预防和治疗抑郁症的疗效。

Claims

1.羟基酪醇及其衍生物在制备预防和治疗抑郁症产品中的应用；所述羟基酪醇衍生物的结构式如式(I)所示：

式(I)；

所述预防和治疗抑郁症产品中，羟基酪醇及其衍生物的含量为0.01%-99.99%，所述%为质量体积百分含量或质量百分含量。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述羟基酪醇及其衍生物来源于化学合成、微生物发酵或动植物提取。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述植物选自橄榄果实、橄榄叶或其他含羟基酪醇或其衍生物的植物。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述预防和治疗抑郁症产品为口服、注射、外用药品。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，口服药品为舌下含服剂型、软胶囊、片剂、颗粒剂；注射药品为注射剂；外用药品为鼻腔用药。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，羟基酪醇及其衍生物与其他活性成分组合成复方制剂。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，其他活性成分选自具有抗抑郁活性的成分、具有镇静催眠活性的成分、具有抗氧化活性的成分、具有治疗神经衰弱作用的成分。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述抗抑郁活性成分选自盐酸舍曲林、氟西汀、帕罗西汀、西酞普兰、氟伏沙明、盐酸多塞平、司来吉兰、沙芬酰胺、托洛沙酮；所述镇静催眠活性的成分选自夸西泮、替马西泮、舒乐安定、γ-氨基丁酸中的任一种或组合；所述抗氧化活性的成分选自红景天苷、羟基红景天苷、酪醇；所述治疗神经衰弱作用的成分选自天麻素。

9.根据权利要求1-8任一所述的应用，其特征在于，所述预防和治疗抑郁症产品中，羟基酪醇及其衍生物的含量为0.05%-95%；所述%为质量体积百分含量或质量百分含量。