TWI779177B - 微晶片毛細管電泳分析及試劑 - Google Patents
微晶片毛細管電泳分析及試劑 Download PDFInfo
- Publication number
- TWI779177B TWI779177B TW108108839A TW108108839A TWI779177B TW I779177 B TWI779177 B TW I779177B TW 108108839 A TW108108839 A TW 108108839A TW 108108839 A TW108108839 A TW 108108839A TW I779177 B TWI779177 B TW I779177B
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- protein drug
- sample
- drug sample
- antibody
- buffer
- Prior art date
Links
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 title claims description 17
- 238000003556 assay Methods 0.000 title abstract description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title abstract description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 118
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 118
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 63
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 36
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 73
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 41
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 35
- YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M lithium;dodecyl sulfate Chemical compound [Li+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 22
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 claims description 22
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 20
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 20
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 20
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 20
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 claims description 14
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 8
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 claims 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 claims 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims 1
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 abstract description 12
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 abstract description 12
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 91
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 14
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 11
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 10
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 10
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 10
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 8
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 8
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 6
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 5
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 229960002964 adalimumab Drugs 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 3
- OGMADIBCHLQMIP-UHFFFAOYSA-N 2-aminoethanethiol;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCCS OGMADIBCHLQMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- XOGTZOOQQBDUSI-UHFFFAOYSA-M Mesna Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CCS XOGTZOOQQBDUSI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000025370 Middle East respiratory syndrome Diseases 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 2
- 229960000446 abciximab Drugs 0.000 description 2
- 108010081667 aflibercept Proteins 0.000 description 2
- 229960004539 alirocumab Drugs 0.000 description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 2
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000006909 anti-apoptosis Effects 0.000 description 2
- 230000003540 anti-differentiation Effects 0.000 description 2
- -1 antibodies Proteins 0.000 description 2
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 2
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 229960003989 tocilizumab Drugs 0.000 description 2
- QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N (1-carboxy-2-sulfanylethyl)azanium;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.SCC(N)C(O)=O QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 2-[[(2s)-2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-[4-(methylcarbamoylamino)phenyl]propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound CNC(=O)NC1=CC=C(C[C@@H](CN(CC(C)N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)C=C1 RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 0.000 description 1
- KDSNLYIMUZNERS-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropanamine Chemical compound CC(C)CN KDSNLYIMUZNERS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBVAJRFEEOIAGW-UHFFFAOYSA-N 3-[bis(2-carboxyethyl)phosphanyl]propanoic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PBVAJRFEEOIAGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MJZJYWCQPMNPRM-UHFFFAOYSA-N 6,6-dimethyl-1-[3-(2,4,5-trichlorophenoxy)propoxy]-1,6-dihydro-1,3,5-triazine-2,4-diamine Chemical compound CC1(C)N=C(N)N=C(N)N1OCCCOC1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl MJZJYWCQPMNPRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005730 ADP ribosylation Effects 0.000 description 1
- 102100034608 Angiopoietin-2 Human genes 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 201000011001 Ebola Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 description 1
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 1
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000924533 Homo sapiens Angiopoietin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000955962 Homo sapiens Vacuolar protein sorting-associated protein 51 homolog Proteins 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000044594 Interleukin-1 Receptor Accessory Human genes 0.000 description 1
- 101710180389 Interleukin-1 receptor accessory protein Proteins 0.000 description 1
- 102000010787 Interleukin-4 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038486 Interleukin-4 Receptors Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N TCEP Chemical compound OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016548 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010053096 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000907316 Zika virus Species 0.000 description 1
- 208000020329 Zika virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- XYVNHPYNSPGYLI-UUOKFMHZSA-N [(2r,3s,4r,5r)-5-(2-amino-6-oxo-3h-purin-9-yl)-4-hydroxy-2-(phosphonooxymethyl)oxolan-3-yl] dihydrogen phosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H]1O XYVNHPYNSPGYLI-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000488 activin Substances 0.000 description 1
- 229960002833 aflibercept Drugs 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000002391 anti-complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000002942 anti-growth Effects 0.000 description 1
- 230000000781 anti-lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000702 anti-platelet effect Effects 0.000 description 1
- 230000001263 anti-prolactin effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 108010008730 anticomplement Proteins 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960003852 atezolizumab Drugs 0.000 description 1
- 229950002916 avelumab Drugs 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229960004669 basiliximab Drugs 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 229960003270 belimumab Drugs 0.000 description 1
- 229950000321 benralizumab Drugs 0.000 description 1
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 1
- 229950008086 bezlotoxumab Drugs 0.000 description 1
- 229960003008 blinatumomab Drugs 0.000 description 1
- 229960000455 brentuximab vedotin Drugs 0.000 description 1
- 229960003735 brodalumab Drugs 0.000 description 1
- 229960001838 canakinumab Drugs 0.000 description 1
- 229940034605 capromab pendetide Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 229940121420 cemiplimab Drugs 0.000 description 1
- 229960003115 certolizumab pegol Drugs 0.000 description 1
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001305 cysteine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 239000013578 denaturing buffer Substances 0.000 description 1
- 229960001251 denosumab Drugs 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 229960004497 dinutuximab Drugs 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 229950003468 dupilumab Drugs 0.000 description 1
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 description 1
- 229960002224 eculizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229960004137 elotuzumab Drugs 0.000 description 1
- 229950006925 emicizumab Drugs 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 229960002027 evolocumab Drugs 0.000 description 1
- 229950000335 fasinumab Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000019249 food preservative Nutrition 0.000 description 1
- 239000005452 food preservative Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000006251 gamma-carboxylation Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960001743 golimumab Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229950010864 guselkumab Drugs 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960001001 ibritumomab tiuxetan Drugs 0.000 description 1
- 229960002308 idarucizumab Drugs 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005435 ixekizumab Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 1
- 229960005108 mepolizumab Drugs 0.000 description 1
- 229960005558 mertansine Drugs 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- AEMBWNDIEFEPTH-UHFFFAOYSA-N n-tert-butyl-n-ethylnitrous amide Chemical compound CCN(N=O)C(C)(C)C AEMBWNDIEFEPTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000513 necitumumab Drugs 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- 229950002697 nesvacumab Drugs 0.000 description 1
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 229960003419 obiltoxaximab Drugs 0.000 description 1
- 229960003347 obinutuzumab Drugs 0.000 description 1
- 229950005751 ocrelizumab Drugs 0.000 description 1
- 229960002450 ofatumumab Drugs 0.000 description 1
- 229950008516 olaratumab Drugs 0.000 description 1
- 229960000470 omalizumab Drugs 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 description 1
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002087 pertuzumab Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 229960002633 ramucirumab Drugs 0.000 description 1
- 229960003876 ranibizumab Drugs 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 229960004910 raxibacumab Drugs 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229960003254 reslizumab Drugs 0.000 description 1
- 229960001886 rilonacept Drugs 0.000 description 1
- 108010046141 rilonacept Proteins 0.000 description 1
- 229950005978 rinucumab Drugs 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229950006348 sarilumab Drugs 0.000 description 1
- 229960004540 secukinumab Drugs 0.000 description 1
- 229960003323 siltuximab Drugs 0.000 description 1
- BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogenphosphate monohydrate Chemical compound O.[Na+].OP(O)([O-])=O BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940075562 sodium phosphate dihydrate Drugs 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 229950006444 trevogrumab Drugs 0.000 description 1
- CRKADHVTAQCXRA-UHFFFAOYSA-K trisodium;phosphate;dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O CRKADHVTAQCXRA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003824 ustekinumab Drugs 0.000 description 1
- 229960004914 vedolizumab Drugs 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960002760 ziv-aflibercept Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44747—Composition of gel or of carrier mixture
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44717—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones
- G01N27/44721—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones by optical means
- G01N27/44726—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones by optical means using specific dyes, markers or binding molecules
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44743—Introducing samples
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44756—Apparatus specially adapted therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44756—Apparatus specially adapted therefor
- G01N27/44791—Microapparatus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6806—Determination of free amino acids
- G01N33/6812—Assays for specific amino acids
- G01N33/6815—Assays for specific amino acids containing sulfur, e.g. cysteine, cystine, methionine, homocysteine
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本發明提供用於評估蛋白質藥物產品樣品之純度及鑑別該蛋白質藥物產品樣品中之雜質之MCE分析及試劑。本發明提供用於分析蛋白質藥物樣品中之分析物之方法。
Description
本發明之各態樣概言之係關於毛細管電泳之領域，特別是微晶片毛細管電泳。
實施穩健、可再現、用戶友好之技術對於滿足當今品質控制(QC)實驗室對生物產品之測試需求至關重要。技術升級係必要的，有助於提高產量，同時繼續生成高品質之分析數據，並努力儘量減少無效測試結果及儀器相關調查之數量。儘管電泳歷來用於產品純度及片段化分析之QC，但該方法已經從基於凝膠轉變為基於毛細管，最近又轉變為微晶片。微晶片毛細管電泳(MCE)可大幅縮短樣品分析時間，同時維持QC分析所需之性能及再現性標準(Ouimet,C.等人，Expert Opin Drug Discov.,12(2)：213-224(2017))。
儘管MCE已經成為一種很有前途之技術，在製藥工業中越來越多地用於表徵生物製藥、品質控制及藥物發現，但其容易受到分析干擾。
因此，本發明之一個目的係提供改善之MCE分析及減少分析干擾之組合物。
本發明之另一個目的係提供用於改善蛋白質藥物產品中雜質之檢測之MCE分析及組合物。
提供用於評估蛋白質藥物產品樣品之純度及鑑別該蛋白質藥物產品樣品中之雜質之MCE分析及試劑。提供用於分析蛋白質藥物樣品中之分析物之方法。較佳蛋白質藥物包括(但不限於)抗體及其抗原結合片段、融合 蛋白及重組蛋白。該分析採用MCE技術分離、鑑別及量化蛋白質產品及蛋白質產品中之雜質。雜質包括(但不限於)蛋白質聚集體、蛋白質片段、蛋白質多聚體及分析污染物。亦提供還原及非還原緩衝液。
一個實施例提供非還原水性電泳樣品緩衝液，其含有烷基化劑，例如155至175mM 2-碘乙醯胺；0.50至1.5%十二烷基硫酸鋰；及65至95mM磷酸鈉，其中水性電泳樣品緩衝液之pH小於7。在較佳實施例中，緩衝液之pH為6。在另一個實施例中，水性緩衝液含有166mM 2-碘乙醯胺、0.81%十二烷基硫酸鋰及81mM磷酸鈉。
亦提供還原緩衝液。在一個實施例中，還原緩衝液係含有0.5至1.5%十二烷基硫酸鋰、55至85mM磷酸鈉及還原劑之水性電泳樣品緩衝液，其中水性電泳樣品緩衝液之pH大於8。在較佳實施例中，緩衝液之pH為9。在一個實施例中，還原緩衝液含有135至155mM二硫蘇糖醇。另一個實施例提供含有0.69%十二烷基硫酸鋰、69mM磷酸鈉及142mM二硫蘇糖醇之還原緩衝液。
一個實施例提供用於鑑別蛋白質藥物樣品中之污染物或雜質之非還原MCE方法，其包括將蛋白質樣品添加至上述非還原緩衝液以形成緩衝蛋白質藥物樣品之步驟。將緩衝蛋白質藥物樣品加熱至65至85℃並保持5至15分鐘，形成變性緩衝蛋白質藥物樣品。在較佳實施例中，將緩衝蛋白質藥物樣品加熱至70℃並保持10分鐘。
將蛋白質藥物樣品與可檢測之標記混合，並在30至40℃下加熱20至40分鐘，以形成變性之經標記蛋白質藥物樣品。較佳可檢測標記包括(但不限於)Dyomics DY-631 NHS酯。可以使用其他可檢測標記，包括其他染料、螢光團、發色團、質量標籤、量子點及諸如此類以及美國專利第6,924,372號中所揭示之彼等標記，該專利之全文皆以引用方式併入本文中。在較佳實施例中，將添加有標記之蛋白質藥物樣品加熱至35℃並保持30分鐘。多餘之標記視情況地從樣品去除，例如藉由使用旋轉過濾器。
將變性之標記蛋白質藥物產品稀釋並使其在微晶片毛細管電泳系統上經受MCE以分離稀釋之蛋白質藥物樣品，從而產生電泳圖。在一個實施例中，從0.5mg/ml開始，然後在微晶片上注射之樣品之最終濃度為9 μg/ml至MCE。電泳圖含有對應於蛋白質藥物產品及雜質之峰。該方法藉由鑑別出電泳圖中對應於污染物或雜質之峰來結束。
另一個實施例提供用於鑑別蛋白質藥物樣品中之污染物或雜質之還原MCE方法。該方法開始於將蛋白質樣品添加至上述任一種還原緩衝液以形成緩衝蛋白質藥物樣品。藉由將緩衝蛋白質藥物樣品加熱至65至85℃、較佳70℃並保持10分鐘，使緩衝蛋白質藥物樣品變性，以形成變性蛋白質藥物樣品。將蛋白質藥物樣品與可檢測之標記混合，並在30至40℃下加熱20至40分鐘，以形成變性之標記蛋白質藥物樣品。在較佳實施例中，將添加有標記之蛋白質藥物樣品加熱至35℃並保持30分鐘。多餘之標籤視情況地從樣品去除，例如藉由使用旋轉過濾器。較佳可檢測標記包括(但不限於)Dyomics DY-631 NHS酯。可以使用之其他可檢測標記包括其他染料、螢光團、發色團、質量標籤、量子點及諸如此類以及美國專利第6,924,372號中所揭示之彼等標記，該專利之全文皆以引用方式併入本文中。
在一個實施例中，樣品濃度之所建立分析範圍為0.4mg/ml至0.6mg/ml，對應於分析之約7μg/ml至11μg/ml之最終濃度，其在微晶片毛細管電泳系統上經受MCE分析以產生電泳圖。該方法藉由鑑別出電泳圖中對應於污染物或雜質之峰來結束。
圖1A顯示典型之非還原樣品分析之電泳圖。圖1B顯示典型之還原樣品分析之電泳圖。X軸代表以分鐘為單位之時間，且Y軸代表相對螢光單位(RFU)。增加之遷移時間對應於增加之蛋白質大小。
除非本文另有指示或上下文明顯矛盾，否則在描述目前所主張本發明之上下文中(特別是在申請專利範圍之上下文中)使用術語「一(a、an)」、「該」及類似之指代物應解釋為覆蓋單數及複數。
除非在此另有指示，否則在此記載之值的範圍僅意欲用作個別提 及落入該範圍內之每個單獨值之速記方法，並且每個單獨值納入本說明書中，就像在本文個別記載一樣。
術語「約」之使用意欲描述在高於或低於所述值大約+/-10%範圍內之值；在其他實施例中，此等值之值可以在高於或低於所述值大約+/-5%之範圍內；在其他實施例中，此等值之值可以在高於或低於所述值之大約+/-2%之範圍內；在其他實施例中，此等值之值可以在高於或低於所述值之大約+/-1%之範圍內。前面之範圍意欲藉由上下文來闡明，且並不意味著進一步限制。除非本文另有指示或上下文另外明顯矛盾，否則本文描述之所有方法皆可以任何合適之順序實施。除非另外主張，本文提供之任何及所有實例或例示性語言(例如「諸如」)之使用僅僅意欲更好地說明本發明，而不係對本發明之範圍構成限制。本說明書中之任何語言皆不應解釋為指示任何未主張之元素對於實踐本發明之實施係必不可少的。
「蛋白質」係指包含藉由肽鍵彼此連接之兩個或更多個胺基酸殘基之分子。蛋白質包括多肽及肽，且亦可包括修飾，例如醣基化、脂質附著、硫酸化、麩胺酸殘基之γ-羧基化、烷基化、羥基化及ADP-核糖基化。蛋白質可以具有科學或商業價值，包括基於蛋白質之藥物，且蛋白質尤其包括酶、配位體、受體、抗體及嵌合或融合蛋白。蛋白質係由各種類型之重組細胞使用熟知細胞培養方法產生，並且通常係藉由遺傳改造技術(例如，編碼嵌合蛋白之序列、密碼子最佳化序列、無內含子序列等)引入細胞中，在該等細胞中其可以作為附加體存在或者整合至細胞之基因組中。
「抗體」係指由四條多肽鏈(兩條重鏈(H)及兩條輕鏈(L))組成之免疫球蛋白分子，該等重鏈及輕鏈藉由二硫鍵相互連接。每個重鏈具有重鏈可變區(HCVR或VH)及重鏈恆定區。重鏈恆定區含有三個結構域，CH1、CH2及CH3。每個輕鏈具有輕鏈可變區及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區由一個結構域(CL)組成。VH及VL區可以進一步細分為超變區，稱為互補決定區(CDR)，散佈有更保守之區域，稱為框架區(FR)。每個VH及VL由三個CDR及四個FR構成，自胺基末端至羧基末端按以下順序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。術語「抗體」包括任何同種型或亞類之醣基化及非醣基化免疫球蛋白。術語「抗體」包括藉由重組方式製備、表 現、產生或分離之抗體分子，例如自轉染表現抗體之宿主細胞分離之抗體。術語抗體亦包括雙特異性抗體，其包括可結合至一個以上不同表位之異四聚免疫球蛋白。雙特異性抗體通常描述在美國專利申請公開第8,586,713號中，該專利申請以引用方式併入本申請中。
「Fc融合蛋白」包含兩種或更多種蛋白質之一部分或全部，其中一種係免疫球蛋白分子之Fc部分，該兩種蛋白質在自然界中原本係不存在的。包含與抗體衍生多肽之不同部分(包括Fc結構域)融合之某些異源多肽之融合蛋白之製備已描述於例如Ashkenazi等人，Proc.Natl.Acad.Sci USA,88：10535(1991)；Byrn等人，Nature 344：677(1990)；及Hollenbaugh等人，「Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins」,Current Protocols in Immunology，增刊4，第10.19.1-10.19.11頁(1992)。「受體Fc融合蛋白」包含與Fc部分偶聯之受體之一或多個胞外結構域，在一些實施例中，該等胞外結構域包含接在免疫球蛋白CH2及CH3結構域之後之鉸鏈區。在一些實施例中，Fc融合蛋白包含結合至一或多個配位體之兩個或更多個不同之受體鏈。舉例而言，Fc融合蛋白係陷阱，例如IL-1陷阱或VEGF陷阱。
術語「MCE」或「微晶片毛細管電泳」係指基於微晶片之分析物毛細管電泳(CE)分離。
提供用於分析蛋白質藥物樣品中之分析物之方法。較佳蛋白質藥物包括(但不限於)抗體及其抗原結合片段、融合蛋白及重組蛋白。該等分析採用MCE技術來分離、鑑別及量化蛋白質產品及蛋白質產品中之雜質。雜質包括(但不限於)蛋白質聚集體、蛋白質片段、蛋白質多聚體及分析污染物。亦提供還原及非還原緩衝液。
一個實施例提供非還原水性電泳樣品緩衝液，其含有155至175mM烷基化劑，例如2-碘乙醯胺或NEM；0.50至1.5%十二烷基硫酸鋰；及75至95mM磷酸鈉，其中水性電泳樣品緩衝液之pH小於7。在較佳實施 例中，緩衝液之pH為6。在另一個實施例中，水性緩衝液含有166mM 2-碘乙醯胺、0.81%十二烷基硫酸鋰及81mM磷酸鈉。
亦提供還原緩衝液。在一個實施例中，還原緩衝液係含有0.5至1.5%十二烷基硫酸鋰、65至95mM磷酸鈉及還原劑之水性電泳樣品緩衝液，其中水性電泳樣品緩衝液之pH大於8。在較佳實施例中，緩衝液之pH為9。
還原劑為業內已知。例示性還原劑包括(但不限於)二硫蘇糖醇(DTT，CAS 3483-12-3)、β-巰基乙醇(BME、2BME、2-ME、b-mer，CAS 60-24-2)、2-胺基乙烷硫醇(2-MEA-HCl，亦稱為半胱胺-HCl，CAS 156-57-0)、三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽(TCEP，CAS 5961-85-3)、半胱胺酸鹽酸鹽(Cys-HCl,CAS 52-89-1)或2-巰基乙烷磺酸鈉鹽(MESNA)。用於還原蛋白質鍵之其他方法為業內已知，例如含有樹脂之固定化還原劑管柱，基於硫醇之還原劑已固定至該樹脂，以實現肽及蛋白質二硫鍵之固相還原。亦設想適於還原多肽之間之化學相互作用之還原劑(包括氧化劑)。
在一個實施例中，還原緩衝液含有135至155mM二硫蘇糖醇。
另一個實施例提供含有0.69%十二烷基硫酸鋰、69mM磷酸鈉及142mM二硫蘇糖醇之還原緩衝液。
一個實施例提供一種用於鑑別蛋白質藥物樣品中之污染物或雜質之非還原MCE方法，該方法包括將蛋白質樣品添加至上述非還原緩衝液以形成緩衝蛋白質藥物樣品之步驟。將緩衝蛋白質藥物樣品加熱至65至85℃並保持5至15分鐘，形成變性緩衝蛋白質藥物樣品。在較佳實施例中，將緩衝之蛋白質藥物樣品加熱至70℃並保持10分鐘。然後將可檢測標記添加至變性緩衝蛋白質藥物樣品，並在30至40℃下加熱20至40分鐘以形成變性標記之蛋白質藥物樣品。在較佳實施例中，將添加有標記之變性蛋白質藥物樣品加熱至35℃並保持30分鐘。多餘之標籤視情況地從樣品去除，例如藉由使用旋轉過濾器。
較佳可檢測標記包括(但不限於)Dyomics DY-631 NHS酯。可使用其他可檢測之標記，包括其他染料、螢光團、發色團、質量標籤、量子點及諸如此類以及美國專利第6,924,372號中所揭示之那些標記，該專利之全文皆以引用方式併入本文中。
將變性之標記蛋白質藥物產品稀釋並使其在微晶片毛細管電泳系統上經受MCE以分離稀釋之蛋白質藥物樣品，從而產生電泳圖。在一個實施例中，從0.5mg/ml開始，然後在微晶片上注射之樣品之最終濃度為9μg/ml至MCE。電泳圖含有對應於蛋白質藥物產品及雜質之峰。該方法藉由鑑別電泳圖中對應於污染物或雜質之峰來結束。
另一個實施例提供一種用於鑑別蛋白質藥物樣品中之污染物或雜質之還原MCE方法。該方法開始於將蛋白質藥物樣品添加至上述任一種還原緩衝液以形成緩衝蛋白質藥物樣品。藉由將緩衝蛋白質藥物樣品加熱至65至85℃、較佳70℃並保持10分鐘，使緩衝蛋白質藥物樣品變性，以形成變性蛋白質藥物樣品。然後將添加有標記之蛋白質藥物樣品在30至40℃下加熱20至40分鐘，形成變性之標記蛋白質藥物樣品。在較佳實施例中，將添加有標籤之蛋白質藥物產品樣品加熱至35℃並保持30分鐘。多餘之標籤視情況地從樣品去除，例如藉由使用旋轉過濾器。較佳可檢測標記包括(但不限於)Dyomics DY-631 NHS酯。可使用之其他可檢測標記包括其他染料、螢光團、發色團、質量標籤、量子點及諸如此類以及美國專利第6,924,372號中所揭示之那些標記，該專利之全文皆以引用方式併入本文中。
在一個實施例中，樣品濃度之所建立分析範圍為0.4mg/ml至0.6mg/ml，對應於分析之約7μg/ml至11μg/ml之最終濃度，其在微晶片毛細管電泳系統上經受MCE分析以產生電泳圖。該方法藉由鑑別電泳圖中對應於污染物或雜質之峰來結束。
用於實施所揭示MCE分析之儀器在市面上有售。在較佳實施例中，所揭示之MCE分析係使用LabChip GXII或LabChip GXII觸摸HT及LabChip® HT蛋白質表現晶片來實施。
使用所揭示MCE分析及試劑分析之所關注蛋白質(例如蛋白質藥物產品)可為適於在原核或真核細胞中表現之任一所關注蛋白質且可用於所提供之經改造宿主細胞系統中。舉例而言，所關注蛋白質包括(但不限於)抗體或其抗原結合片段、嵌合抗體或其抗原結合片段、ScFv或其片段、Fc融合蛋白或其片段、生長因子或其片段、細胞介素或其片段、或細胞表面受體之胞外結構域或其片段。所關注蛋白質可為由單個亞單位組成之簡單多肽或包含兩個或更多個亞單位之複雜多亞單位蛋白質。所關注蛋白質可為生物製藥產品、食品添加劑或防腐劑或任何經受純化及品質標準之蛋白質產品。
在一些實施例中，蛋白質藥物產品(所關注蛋白質)係抗體、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、單株抗體、多特異性抗體、雙特異性抗體、抗原結合抗體片段、單鏈抗體、雙價抗體、三價抗體或四價抗體、Fab片段或F(ab')2片段、IgD抗體、IgE抗體、IgM抗體、IgG抗體、IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體或IgG4抗體。在一個實施例中，抗體係IgG1抗體。在一個實施例中，抗體係IgG2抗體。在一個實施例中，抗體係IgG4抗體。在一個實施例中，抗體係嵌合IgG2/IgG4抗體。在一個實施例中，抗體係嵌合IgG2/IgG1抗體。在一個實施例中，抗體係嵌合IgG2/IgG1/IgG4抗體。
在一些實施例中，抗體係選自由以下組成之群：抗程式性細胞死亡1抗體(例如如美國專利申請公開第US2015/0203579A1號中所述之抗PD1抗體)、抗程式性細胞死亡配位體-1(例如如美國專利申請公開第US2015/0203580A1號中所述之抗PD-L1抗體)、抗Dll4抗體、抗血管生成素-2抗體(例如如美國專利第9,402,898號中所述之抗ANG2抗體)、抗血管生成素樣3抗體(例如如美國專利第9,018,356號中所述之抗AngPtl3抗體)、抗血小板源生長因子受體抗體(例如如美國專利第9,265,827號中所述之抗PDGFR抗體)、抗Erb3抗體、抗泌乳素受體抗體(例如如美國專利第9,302,015號中所述之抗PRLR抗體)、抗補體5抗體(例如如美國專利申請公開第US2015/0313194A1號中所述之抗C5抗體)、抗TNF抗體、抗表皮生長因子受體抗體(例如如美國專利第9,132,192號中所述之抗EGFR抗體或如美國專 利申請公開第US2015/0259423A1號中所述之抗EGFRvIII抗體)、抗前蛋白轉化酶枯草溶菌素-9抗體(例如如美國專利第8,062,640號或美國專利申請公開第US2014/0044730A1號中所述之抗PCSK9抗體)、抗生長及分化因子-8抗體(例如抗GDF8抗體，亦稱為抗肌骨素抗體，如美國專利第8,871,209或9,260,515號中所述)、抗升糖素受體(例如如美國專利申請公開第US2015/0337045A1或US2016/0075778A1號中所述之抗GCGR抗體)、抗VEGF抗體、抗IL1R抗體、介白素4受體抗體(例如如美國專利申請公開第US2014/0271681A1號或美國專利第8,735,095號或第8,945,559號中所述之抗IL4R抗體)、抗介白素6受體抗體(例如如美國專利第7,582,298號、第8,043,617號或第9,173,880號中所述之抗IL6R抗體)、抗IL1抗體、抗IL2抗體、抗IL3抗體、抗IL4抗體、抗IL5抗體、抗IL6抗體、抗IL7抗體、抗介白素33(例如如美國專利第9,453,072號或第9,637,535號中所述之抗IL33抗體)、抗呼吸道融合病毒抗體(例如如美國專利第9,447,173號中所述之抗RSV抗體)、抗分化簇3(例如如美國專利第9,657,102號及申請公開第US20150266966A1號及美國申請第62/222,605號中所述之抗CD3抗體)、抗分化簇20(例如如美國專利第9,657,102號及申請公開第US20150266966A1號及美國專利第7,879,984號中所述之抗CD20抗體)、抗CD19抗體、抗CD28抗體、抗分化簇-48(例如如美國專利第9,228,014號中所述之抗CD48抗體)、抗Fel d1抗體(例如如美國專利第9,079,948號中所述)、抗中東呼吸症候群病毒(例如如美國專利申請公開第US2015/0337029A1號中所述之抗MERS抗體)、抗埃博拉病毒(Ebola virus)抗體(例如如美國專利申請公開第US2016/0215040號中所述)、抗茲卡病毒(Zika virus)抗體、抗淋巴球活化基因3抗體(例如抗LAG3抗體或抗CD223抗體)、抗神經生長因子抗體(例如如美國專利申請公開第US2016/0017029號及美國專利第8,309,088號及第9,353,176號中所述之抗NGF抗體)及抗活化素A抗體。在一些實施例中，雙特異性抗體係選自由以下組成之群：抗CD3×抗CD20雙特異性抗體(如美國專利第9,657,102號及申請公開第US20150266966A1號中所述)、抗CD3×抗黏液素16雙特異性抗體(例如抗CD3×抗Muc16雙特異性抗體)及抗CD3×抗前列腺特異性膜抗原雙特異性抗體(例如抗CD3×抗PSMA雙特異性抗 體)。在一些實施例中，所關注蛋白質係選自由以下組成之群：阿昔單抗(abciximab)、阿達木單抗(adalimumab)、阿達木單抗-atto、阿多-曲妥珠單抗(ado-trastuzumab)、阿倫珠單抗(alemtuzumab)、阿利人單抗(alirocumab)、阿替珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)、巴利昔單抗(basiliximab)、貝利木單抗(belimumab)、苯雷利珠單抗(benralizumab)、貝伐珠單抗(bevacizumab)、貝洛托單抗(bezlotoxumab)、布利莫單抗(blinatumomab)、貝倫妥單抗維多汀(brentuximab vedotin)、布羅達單抗(brodalumab)、卡那單抗(canakinumab)、卡羅單抗噴地肽(capromab pendetide)、聚乙二醇化賽妥珠單抗(certolizumab pegol)、賽美麗單抗(cemiplimab)、西妥昔單抗(cetuximab)、地諾單抗(denosumab)、地妥昔單抗(dinutuximab)、度匹魯單抗(dupilumab)、德瓦魯單抗(durvalumab)、依庫珠單抗(eculizumab)、埃洛妥珠單抗(elotuzumab)、艾美賽珠單抗(emicizumab)-kxwh、阿利人單抗艾坦辛(emtansinealirocumab)、依伐單抗(evinacumab)、依伏庫單抗(evolocumab)、法希姆單抗(fasinumab)、戈利木單抗(golimumab)、古塞庫單抗(guselkumab)、替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)、依達賽珠單抗(idarucizumab)、英夫利昔單抗(infliximab)、英夫利昔單抗-abda、英夫利昔單抗-dyyb、伊匹單抗(ipilimumab)、伊珠單抗(ixekizumab)、美泊利單抗(mepolizumab)、奈昔木單抗(necitumumab)、奈伐單抗(nesvacumab)、尼沃魯單抗(nivolumab)、奧托昔單抗(obiltoxaximab)、奧妥珠單抗(obinutuzumab)、歐瑞珠單抗(ocrelizumab)、奧法木單抗(ofatumumab)、奧拉單抗(olaratumab)、奧馬珠單抗(omalizumab)、帕尼單抗(panitumumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、雷莫蘆單抗(ramucirumab)、蘭尼單抗(ranibizumab)、瑞西巴庫單抗(raxibacumab)、瑞麗珠單抗(reslizumab)、利諾庫單抗(rinucumab)、利妥昔單抗(rituximab)、賽瑞蘆單抗(sarilumab)、蘇金單抗(secukinumab)、司妥昔單抗(siltuximab)、托西莫單抗(tocilizumab)、托西莫單抗、曲妥珠單抗(trastuzumab)、曲弗單抗(trevogrumab)、優特克單抗(ustekinumab)及維多珠單抗(vedolizumab)。
在一些實施例中，所關注蛋白質係含有Fc部分及另一結構域之重組蛋白(例如，Fc融合蛋白)。在一些實施例中，Fc融合蛋白係受體Fc融合 蛋白，其含有與Fc部分偶合之受體之一或多個細胞外結構域。在一些實施例中，Fc部分包含鉸鏈區，其後為IgG之CH2及CH3結構域。在一些實施例中，受體Fc融合蛋白含有兩個或更多個不同之受體鏈，其結合至單個配位體或多個配位體。舉例而言，Fc融合蛋白係TRAP蛋白，例如IL-1陷阱(例如，列洛西普(rilonacept)，其含有與hIgG1之Fc融合之Il-1R1細胞外區融合之IL-1RAcP配位體結合區；見美國專利第6,927,004號，其全文以引用方式併入本文中)或VEGF陷阱(例如，阿柏西普(aflibercept)或ziv-阿柏西普，其包含與hIgG1之Fc融合之VEGF受體Flk1之Ig結構域3之VEGF受體Flt1之Ig結構域2；見美國專利第7,087,411號及第7,279,159號)。在其他實施例中，Fc融合蛋白係ScFv-Fc融合蛋白，其含有與Fc部分偶合之抗體之一或多個抗原結合結構域，例如可變重鏈片段及可變輕鏈片段。
使用所揭示之MCE分析及試劑分析之蛋白質藥物產品係所產生之細胞培養物。細胞培養物可為「進料分批細胞培養物」或「進料分批培養物」，其係指分批培養物，其中細胞及培養基最初供應至培養容器中，並且在培養過程中，在終止培養之前，在有或沒有週期性細胞及/或產物收穫之情況下，以不連續之增量將額外之培養營養物緩慢進給至培養物中。進料分批培養包括「半連續進料分批培養」，其中週期性地去除整個培養物(可能包括細胞及培養基)，並用新鮮培養基代替。進料分批培養不同於簡單的「分批培養」，而用於細胞培養之所有組分(包括動物細胞及所有培養營養物)在分批培養之培養過程開始時供應至培養容器。進料分批培養可以不同於「灌注培養」，由於在標準進料分批過程中上清液沒有自培養容器中去除，而在灌注培養中，細胞藉由例如過濾限制在培養物中，並且培養基連續或間歇地引入培養容器中並自培養容器去除。然而，考慮在進料分批細胞培養期間出於測試目的去除樣品。進料分批過程繼續進行，直至確定達到最大工作體積及/或蛋白質產量，然後收獲蛋白質。
細胞培養物可為「連續細胞培養物」，其係一種用於連續生長細胞之技術，通常在特定之生長階段。舉例而言，若需要持續供應細胞，或需要生產特定之所關注蛋白質，則細胞培養可能需要維持在特定之生長階 段。因此，為了將細胞維持在該特定階段，必須持續監控並相應地調整條件。
將細胞在細胞培養基中培養。術語「細胞培養基」及「培養基」係指用於生長哺乳動物細胞之營養液，其通常提供促進細胞生長所需之營養物，例如碳水化合物能量源、必需胺基酸(例如苯丙胺酸、纈胺酸、蘇胺酸、色胺酸、蛋胺酸、白胺酸、異白胺酸、離胺酸及組胺酸)及非必需胺基酸(例如丙胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、半胱胺酸、麩胺酸、麩胺醯胺、甘胺酸、脯胺酸、絲胺酸及酪胺酸)、微量元素、能量源、脂質、維生素等。細胞培養基可以含有提取物，例如血清或蛋白腖(水解產物)，其供應支持細胞生長之原料。培養基可以含有酵母源或大豆提取物，而非動物源提取物。化學定義之培養基係指其中所有化學組分皆已知(即具有已知化學結構)之細胞培養基。化學定義之培養基完全不含動物源組分，如血清或動物源蛋白腖。在一個實施例中，培養基係化學定義之培養基。
溶液亦可含有能提高生長及/或存活率超過最小速率之組分，包括激素及生長因子。溶液可以配製成對於培養之特定細胞之存活及增殖最佳之pH及鹽濃度。
「細胞系」係指經由細胞之連續傳代或傳代培養自特定譜系中獲得之一或多種細胞。術語「細胞」與「細胞群」可互換使用。
術語「細胞」包括適於表現重組核酸序列之任何細胞。細胞包括原核生物及真核生物之細胞，例如細菌細胞、哺乳動物細胞、人類細胞、非人動物細胞、鳥類細胞、昆蟲細胞、酵母細胞或細胞融合物，例如雜交瘤或四體雜交瘤。在某些實施例中，細胞係人類、猴子、猿、倉鼠、大鼠或小鼠細胞。在其他實施例中，細胞係選自以下細胞：中國倉鼠卵巢(CHO)(例如CHO K1、DXB-11 CHO、Veggie-CHO)、COS(例如COS-7)、視網膜細胞、Vero、CV1、腎臟(例如HEK293、293 EBNA、MSR 293、MDCK、HaK、BHK21)、HeLa、HepG2、WI38、MRC5、Colo25、HB 8065、HL-60、淋巴球(例如Jurkat(T淋巴球)或Daudi(B淋巴球))、A431(表皮)、U937、3T3、L細胞、C127細胞、SP2/0、NS-0、MMT細胞、幹細胞、腫瘤細胞及衍生自前述細胞之細胞系。在一些實施例中，細胞包含一或多個病毒基因， 例如表現病毒基因之視網膜細胞(例如PER.C6®細胞)。在一些實施例中，細胞係CHO細胞。在其他實施例中，細胞係CHO K1細胞。
一個實施例提供一種套組，該套組包括一或多種所揭示之緩衝液或製備所揭示緩衝液之成份。套組可包括用於緩衝液或成份之容器。緩衝液可為溶液或凍乾形式。套組視情況地亦包括第二容器，該第二容器含有凍乾製劑之稀釋劑或重構溶液；及視情況地使用溶液或重構及/或使用凍乾緩衝液或粉末成份之說明書。
套組可另外包括實施所揭示MCE分析所需之其他試劑，包括緩衝液、稀釋劑及過濾器中之一或多種。緩衝液及試劑可在瓶子、小瓶或試管中。
將LabChip GXII或LabChip GXII觸摸HT及LabChip® HT蛋白質表現晶片用於毛細管電泳分離及數據收集(Perkin Elmer)。將上文所揭示之非還原及還原變性緩衝液用於MCE分析。
表1顯示用於製備MCE分析之樣品之工作流程。簡言之，將蛋白質樣品稀釋至0.5mg/ml。將1μl非還原(NR)或還原(R)變性緩衝液及4μl稀釋樣品添加至96孔板。將樣品混合、離心並在產品規定之溫度(通常為75℃)下加熱10分鐘。然後用5μM市售染料(例如Dyomics DY-631 NHS酯)標記樣品。將樣品混合，離心，然後在35℃加熱30分鐘。然後用105μl稀終止溶液稀釋標記之樣品。使用LabChip GXII或LabChip GXII觸摸HT分離樣品。
製備200mM一水合磷酸鈉、200mM二水合磷酸鈉及10%十二烷基硫酸鋰(LDS)之儲備溶液。使用儲備溶液及Milli-Q®水，製備100mM磷 酸鈉1% LDS pH 6及100mM磷酸鈉1% LDS pH 9之溶液。
藉由添加34μL 1M碘乙醯胺(IAM)(在Milli-Q®水中新鮮製備)+166μL 100mM磷酸鈉1% LDS pH 6+5μL Milli-Q®水來製備非還原緩衝液。最終濃度為166mM2-碘乙醯胺、0.81%十二烷基硫酸鋰及81mM磷酸鈉。
藉由添加68μL 10x還原劑(500mM二硫蘇糖醇(DTT)+166μL 100mM磷酸鈉1% LDS pH 9+6μL Milli-Q®水)製備還原緩衝液。最終濃度為0.69%十二烷基硫酸鋰；69mM磷酸鈉及142mM二硫蘇糖醇。
微晶片毛細管電泳(MCE)可大幅縮短樣品分析時間，同時保持QC分析所需之性能及重現性標準。使用本文所揭示之非還原及還原變性緩衝液開發MCE分析。圖1A-1B顯示代表性電泳圖，其顯示非還原樣品及還原樣品中蛋白質之分析。
雖然在前面之說明書中，已經針對本發明之某些實施例描述了本發明，並且出於說明之目的，已經提出了許多細節，但熟習此項技術者將明瞭本發明容易受到其他實施例之影響，並且在不背離本發明之基本原理之情況下，本文描述之某些細節可以有相當大之變化。
此處引用之所有參考文獻之全文皆以引用方式併入本文中。在不背離本發明之精神或基本屬性之情況下，本發明可以其他特定形式體現，因此，應當參考所附申請專利範圍，而非前述說明書，以指示本發明之範圍。
Claims (14)
- 一種水性電泳樣品緩衝液，其包含：155至175mM 2-碘乙醯胺；0.50至1.5%十二烷基硫酸鋰；及75至95mM磷酸鈉，其中該水性電泳樣品緩衝液之pH小於7。
- 如申請專利範圍第1項之水性電泳樣品緩衝液，其中該pH為6。
- 如申請專利範圍第1項之水性電泳樣品緩衝液，其包含166mM 2-碘乙醯胺、0.81%十二烷基硫酸鋰及81mM磷酸鈉。
- 一種水性電泳樣品緩衝液，其係由以下組成：166mM 2-碘乙醯胺，0.81%十二烷基硫酸鋰，及81mM磷酸鈉，其中該水性電泳樣品緩衝液之pH為6.0。
- 一種用於鑑別蛋白質藥物樣品中之污染物或雜質之方法，該方法包含以下步驟：將該蛋白質藥物樣品添加至水性電泳樣品緩衝液以形成緩衝蛋白質藥物樣品，該水性電泳樣品緩衝液包含155至175mM 2-碘乙醯胺、0.50至1.5%十二烷基硫酸鋰、及75至95mM磷酸鈉，其中水性電泳樣品緩衝液之pH小於7；將該緩衝蛋白質藥物樣品加熱至65至85℃並保持5至15分鐘以形成變性緩衝蛋白質藥物樣品；將可檢測標記添加至該變性緩衝蛋白質藥物樣品且將其在30至40℃下加熱20至40分鐘以形成變性標記之蛋白質藥物樣品；稀釋該變性標記之蛋白質藥物樣品且使其在微晶片毛細管電泳系統上進行微晶片毛細管電泳以分離該稀釋變性標記之蛋白質藥物樣品，從而產生電泳圖；及鑑別該電泳圖中對應於污染物或雜質之峰。
- 如申請專利範圍第5項之方法，其中將該緩衝蛋白質藥物樣品 在70℃下加熱10分鐘。
- 如申請專利範圍第5項之方法，其中將該變性緩衝蛋白質藥物樣品在35℃下加熱30分鐘。
- 如申請專利範圍第5項之方法，其中該稀釋之蛋白質藥物樣品為9μg/ml。
- 如申請專利範圍第5項之方法，其中該可檢測標記為DY-631 N-羥基琥珀醯亞胺基酯。
- 一種用於鑑別蛋白質藥物樣品中之污染物或雜質之方法，該方法包含以下步驟：將蛋白質樣品添加至水性電泳樣品緩衝液以形成緩衝蛋白質藥物樣品，該水性電泳樣品緩衝液包含0.50至1.5%十二烷基硫酸鋰、45至75mM磷酸鈉、及還原劑，其中該水性電泳樣品緩衝液之pH大於8；將該緩衝蛋白質藥物樣品加熱至65至85℃並保持5至15分鐘以形成變性蛋白質藥物樣品；將可檢測標記添加至該變性蛋白質藥物樣品且將其在30至40℃下加熱20至40分鐘以形成變性標記之蛋白質藥物樣品；稀釋該變性標記之蛋白質藥物樣品且使其在微晶片毛細管電泳系統上進行微晶片毛細管電泳分析以產生電泳圖；及鑑別該電泳圖中對應於污染物或雜質之峰。
- 如申請專利範圍第10項之方法，其中將該緩衝蛋白質藥物樣品在70℃下加熱10分鐘。
- 如申請專利範圍第10項之方法，其中將該變性蛋白質藥物樣品在35℃下加熱30分鐘。
- 如申請專利範圍第10項之方法，其中該稀釋之蛋白質藥物樣品為9μg/ml。
- 一種套組，其包含含有155至175mM 2-碘乙醯胺、0.50至1.5%十二烷基硫酸鋰、及75至95mM磷酸鈉的水性電泳樣品緩衝液，其中該水性電泳樣品緩衝液之pH小於7；及用於在該緩衝液中製備電泳用樣品之書面說明書。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201862644933P | 2018-03-19 | 2018-03-19 | |
| US62/644,933 | 2018-03-19 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW202004178A TW202004178A (zh) | 2020-01-16 |
| TWI779177B true TWI779177B (zh) | 2022-10-01 |
Family
ID=65952203
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW108108839A TWI779177B (zh) | 2018-03-19 | 2019-03-15 | 微晶片毛細管電泳分析及試劑 |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11054389B2 (zh) |
| EP (2) | EP4317959A3 (zh) |
| JP (3) | JP7315565B2 (zh) |
| KR (2) | KR20230031987A (zh) |
| CN (1) | CN111868085A (zh) |
| AR (1) | AR117402A1 (zh) |
| AU (1) | AU2019239633A1 (zh) |
| BR (1) | BR112020015291B1 (zh) |
| CA (1) | CA3089655A1 (zh) |
| DK (1) | DK3768709T3 (zh) |
| EA (1) | EA202092203A1 (zh) |
| ES (1) | ES2969882T3 (zh) |
| FI (1) | FI3768709T3 (zh) |
| HU (1) | HUE065344T2 (zh) |
| IL (2) | IL307577A (zh) |
| MX (1) | MX2020009696A (zh) |
| PL (1) | PL3768709T3 (zh) |
| SG (1) | SG11202007011YA (zh) |
| TW (1) | TWI779177B (zh) |
| WO (1) | WO2019182901A1 (zh) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20210333235A1 (en) * | 2018-03-19 | 2021-10-28 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Microchip capillary electrophoresis assays and reagents |
| US20210293749A1 (en) * | 2018-03-19 | 2021-09-23 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Microchip capillary electrophoresis assays and reagents |
| BR112020015291B1 (pt) | 2018-03-19 | 2023-09-26 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc | Tampão de amostra de eletroforese aquoso, método para identificar contaminantes ou impurezas em uma amostra de fármaco proteico, e, kit |
| CA3165060C (en) | 2020-01-21 | 2023-06-20 | Yiming Zhao | Deglycosylation methods for electrophoresis of glycosylated proteins |
| EP4281542A1 (en) | 2021-01-20 | 2023-11-29 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of improving protein titer in cell culture |
| CN113189184B (zh) * | 2021-04-28 | 2022-09-09 | 浙江大学 | 含有半胱氨酸的毛细管凝胶电泳样品缓冲液 |
| AU2022286340A1 (en) * | 2021-06-01 | 2024-01-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Microchip capillary electrophoresis assays and reagents |
| EP4405390A1 (en) | 2021-09-20 | 2024-07-31 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of controlling antibody heterogeneity |
| EP4423018A1 (en) | 2021-10-26 | 2024-09-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Systems and methods for generating laboratory water and distributing laboratory water at different temperatures |
| WO2024158961A1 (en) | 2023-01-25 | 2024-08-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Mass spectrometry-based characterization of antibodies co-expressed in vivo |
| WO2024163708A1 (en) | 2023-02-01 | 2024-08-08 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Asymmetrical flow field-flow fractionation with mass spectrometry for biomacromolecule analysis |
| WO2024178213A2 (en) | 2023-02-22 | 2024-08-29 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | System suitability parameters and column aging |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999060017A2 (en) * | 1998-05-18 | 1999-11-25 | University College London | Human tumour-derived polypeptide hormone phosphatonin |
Family Cites Families (49)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7087411B2 (en) | 1999-06-08 | 2006-08-08 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Fusion protein capable of binding VEGF |
| CZ20033143A3 (en) * | 2001-05-21 | 2004-04-14 | Aclara Biosciences, Inc. | Methods and compositions for analyzing proteins |
| JP2003114216A (ja) * | 2001-10-05 | 2003-04-18 | Advance Co Ltd | 電気泳動装置 |
| MXPA04008150A (es) * | 2002-02-21 | 2005-06-17 | Wyeth Corp | Gasp1: una proteina que contiene dominio de folistatina. |
| DE60309238T2 (de) | 2002-03-08 | 2007-06-06 | Asml Netherlands B.V. | Lithographische Maske, lithographischer Apparat und Verfahren zur Herstellung einer Vorrichtung |
| DE10258150A1 (de) | 2002-12-10 | 2004-07-08 | Dyomics Gmbh | Hydrophile Marker auf der Basis von Benzopyrylo-Polymethinen |
| AU2003903317A0 (en) * | 2003-06-27 | 2003-07-10 | Proteome Systems Intellectual Property Pty Ltd | Method of isolating a protein |
| ATE546734T1 (de) * | 2003-12-05 | 2012-03-15 | Cleveland Clinic Foundation | Risikomarker für eine herzkreislaufkrankheit |
| WO2006020498A2 (en) * | 2004-08-11 | 2006-02-23 | The Cleveland Clinic Foundation | Therapeutic agents and methods for cardiovascular disease |
| PL2041177T3 (pl) | 2006-06-02 | 2012-09-28 | Regeneron Pharma | Przeciwciała o wysokim powinowactwie przeciw ludzkiemu receptorowi IL 6 |
| US7608693B2 (en) | 2006-10-02 | 2009-10-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | High affinity human antibodies to human IL-4 receptor |
| EA031877B1 (ru) * | 2007-02-12 | 2019-03-29 | А1М Фарма Аб | Применение альфа-1-микроглобулина для профилактики или лечения преэклампсии |
| CN101827946A (zh) * | 2007-05-18 | 2010-09-08 | 茵维特罗根公司 | 快速蛋白质标记和分析 |
| MY147651A (en) | 2007-07-31 | 2012-12-31 | Regeneron Pharma | Human antibodies to human cd20 and method of using thereof |
| US8309088B2 (en) | 2007-08-10 | 2012-11-13 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating osteoarthritis with an antibody to NGF |
| AU2009312532B2 (en) * | 2008-11-06 | 2013-05-16 | Ichnos Sciences SA | Treatment with anti-alpha2 integrin antibodies |
| JO3672B1 (ar) | 2008-12-15 | 2020-08-27 | Regeneron Pharma | أجسام مضادة بشرية عالية التفاعل الكيماوي بالنسبة لإنزيم سبتيليسين كنفرتيز بروبروتين / كيكسين نوع 9 (pcsk9). |
| EP3916011A1 (en) | 2009-06-26 | 2021-12-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Readily isolated bispecific antibodies with native immunoglobulin format |
| CN102648415A (zh) * | 2009-08-25 | 2012-08-22 | 生命技术公司 | 定量荧光蛋白标准品 |
| JO3417B1 (ar) | 2010-01-08 | 2019-10-20 | Regeneron Pharma | الصيغ المستقرة التي تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد مستقبل( interleukin-6 (il-6r |
| JO3340B1 (ar) | 2010-05-26 | 2019-03-13 | Regeneron Pharma | مضادات حيوية لـعامل تمايز النمو 8 البشري |
| JOP20190250A1 (ar) | 2010-07-14 | 2017-06-16 | Regeneron Pharma | صيغ مستقرة تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد عامل نمو الأعصاب |
| AR083044A1 (es) | 2010-09-27 | 2013-01-30 | Regeneron Pharma | Anticuerpos anti-cd48 y usos de los mismos |
| PL2624865T3 (pl) | 2010-10-06 | 2018-11-30 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Stabilizowane preparaty zawierające przeciwciała przeciwko receptorowi interleukiny-4 (IL-4R) |
| JO3756B1 (ar) | 2010-11-23 | 2021-01-31 | Regeneron Pharma | اجسام مضادة بشرية لمستقبلات الجلوكاجون |
| AR087329A1 (es) | 2011-06-17 | 2014-03-19 | Regeneron Pharma | Anticuerpos humanos contra proteina 3 de tipo angiopoietina humana |
| EP2780368B1 (en) | 2011-11-14 | 2018-01-03 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for increasing muscle mass and muscle strength by specifically antagonizing gdf8 and/or activin a |
| WO2013112438A1 (en) | 2012-01-23 | 2013-08-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Stabilized formulations containing anti-ang2 antibodies |
| JO3820B1 (ar) | 2012-05-03 | 2021-01-31 | Regeneron Pharma | أجسام مضادة بشرية لـ fel d1وطرق لاستخدامها |
| TW201843172A (zh) | 2012-06-25 | 2018-12-16 | 美商再生元醫藥公司 | 抗－ｅｇｆｒ抗體及其用途 |
| JP6309521B2 (ja) | 2012-08-13 | 2018-04-11 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． | ｐＨ依存性結合特性を有する抗ＰＣＳＫ９抗体 |
| JOP20200236A1 (ar) | 2012-09-21 | 2017-06-16 | Regeneron Pharma | الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها |
| WO2014055936A1 (en) * | 2012-10-04 | 2014-04-10 | Integenx Inc. | Preservation of biological materials in non-aqueous fluid media |
| JP6286445B2 (ja) * | 2012-12-24 | 2018-02-28 | セル・アイディアズ・ピーティーワイ・リミテッド | がんの治療のためのワクチン及びワクチン有効性を増強するための組成物 |
| JO3405B1 (ar) | 2013-01-09 | 2019-10-20 | Regeneron Pharma | الأجسام المضادة لمضاد مستقبل عامل النمو المشتق من الصفائح الدموية - بيتا واستخداماتها |
| EP2948177A1 (en) | 2013-01-22 | 2015-12-02 | AbbVie Inc. | Methods for optimizing domain stability of binding proteins |
| JO3532B1 (ar) | 2013-03-13 | 2020-07-05 | Regeneron Pharma | الأجسام المضادة لمضاد انترلوكين-33 واستعمالاتها |
| TWI659968B (zh) | 2013-03-14 | 2019-05-21 | 再生元醫藥公司 | 針對呼吸道融合病毒ｆ蛋白質的人類抗體及其使用方法 |
| CA2904377C (en) | 2013-03-15 | 2021-07-13 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Il-33 antagonists and uses thereof |
| TWI641620B (zh) | 2013-08-21 | 2018-11-21 | 再生元醫藥公司 | 抗－ｐｒｌｒ抗體及其用途 |
| TWI680138B (zh) | 2014-01-23 | 2019-12-21 | 美商再生元醫藥公司 | 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體 |
| TWI681969B (zh) | 2014-01-23 | 2020-01-11 | 美商再生元醫藥公司 | 針對ｐｄ-１的人類抗體 |
| RS59077B1 (sr) | 2014-03-11 | 2019-09-30 | Regeneron Pharma | Anti-egfrviii antitela i njihova primena |
| TWI754319B (zh) | 2014-03-19 | 2022-02-01 | 美商再生元醫藥公司 | 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物 |
| NZ726602A (en) | 2014-05-05 | 2024-05-31 | Regeneron Pharmaceuticals Inc | Humanized c5 and c3 animals |
| JO3701B1 (ar) | 2014-05-23 | 2021-01-31 | Regeneron Pharma | مضادات حيوية بشرية لمتلازمة الشرق الأوسط التنفسية - بروتين كورونا فيروس الشوكي |
| US9657099B2 (en) | 2014-09-16 | 2017-05-23 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-glucagon antibodies |
| TWI710573B (zh) | 2015-01-26 | 2020-11-21 | 美商再生元醫藥公司 | 抗伊波拉病毒醣蛋白之人類抗體 |
| BR112020015291B1 (pt) | 2018-03-19 | 2023-09-26 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc | Tampão de amostra de eletroforese aquoso, método para identificar contaminantes ou impurezas em uma amostra de fármaco proteico, e, kit |
-
2019
- 2019-03-15 BR BR112020015291-9A patent/BR112020015291B1/pt active IP Right Grant
- 2019-03-15 IL IL307577A patent/IL307577A/en unknown
- 2019-03-15 HU HUE19714055A patent/HUE065344T2/hu unknown
- 2019-03-15 IL IL277264A patent/IL277264B2/en unknown
- 2019-03-15 CN CN201980020003.2A patent/CN111868085A/zh active Pending
- 2019-03-15 AU AU2019239633A patent/AU2019239633A1/en active Pending
- 2019-03-15 MX MX2020009696A patent/MX2020009696A/es unknown
- 2019-03-15 ES ES19714055T patent/ES2969882T3/es active Active
- 2019-03-15 WO PCT/US2019/022525 patent/WO2019182901A1/en active Application Filing
- 2019-03-15 EP EP23210273.1A patent/EP4317959A3/en active Pending
- 2019-03-15 JP JP2020542113A patent/JP7315565B2/ja active Active
- 2019-03-15 KR KR1020237006012A patent/KR20230031987A/ko active IP Right Grant
- 2019-03-15 DK DK19714055.1T patent/DK3768709T3/da active
- 2019-03-15 PL PL19714055.1T patent/PL3768709T3/pl unknown
- 2019-03-15 EA EA202092203A patent/EA202092203A1/ru unknown
- 2019-03-15 SG SG11202007011YA patent/SG11202007011YA/en unknown
- 2019-03-15 TW TW108108839A patent/TWI779177B/zh active
- 2019-03-15 EP EP19714055.1A patent/EP3768709B1/en active Active
- 2019-03-15 US US16/355,050 patent/US11054389B2/en active Active
- 2019-03-15 FI FIEP19714055.1T patent/FI3768709T3/fi active
- 2019-03-15 CA CA3089655A patent/CA3089655A1/en active Pending
- 2019-03-15 KR KR1020207026013A patent/KR102503356B1/ko active IP Right Grant
- 2019-03-19 AR ARP190100686A patent/AR117402A1/es unknown
-
2023
- 2023-04-24 JP JP2023070686A patent/JP7486637B2/ja active Active
-
2024
- 2024-05-07 JP JP2024075118A patent/JP2024097873A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999060017A2 (en) * | 1998-05-18 | 1999-11-25 | University College London | Human tumour-derived polypeptide hormone phosphatonin |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 網路文獻 NuPAGE Technical Guide, Invitrogen, 2003. * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI779177B (zh) | 微晶片毛細管電泳分析及試劑 | |
| US20230110712A1 (en) | System and method for characterizing protein dimerization | |
| KR20200115485A (ko) | 약물 생성물 불순물을 특성화하기 위한 시스템 및 방법 | |
| US20210333235A1 (en) | Microchip capillary electrophoresis assays and reagents | |
| TWI854343B (zh) | 微晶片毛細管電泳分析及試劑 | |
| US20210293749A1 (en) | Microchip capillary electrophoresis assays and reagents | |
| TW202314240A (zh) | 微晶片毛細管電泳分析及試劑 | |
| EA045662B1 (ru) | Водный электрофоретический буфер (варианты), способ выявления загрязнений или примесей в образце белкового лекарственного средства, набор для микрочипового капиллярного электрофореза | |
| CN117651860A (zh) | 微芯片毛细管电泳测定和试剂 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| GD4A | Issue of patent certificate for granted invention patent |