TWI769174B - 抗tim-3抗體及其用途 - Google Patents
抗tim-3抗體及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- TWI769174B TWI769174B TW106129066A TW106129066A TWI769174B TW I769174 B TWI769174 B TW I769174B TW 106129066 A TW106129066 A TW 106129066A TW 106129066 A TW106129066 A TW 106129066A TW I769174 B TWI769174 B TW I769174B
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- acid sequence
- antibody
- tim
- Prior art date
Links
- 101001068133 Homo sapiens Hepatitis A virus cellular receptor 2 Proteins 0.000 claims abstract description 110
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 claims abstract description 100
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 323
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 51
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 44
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 37
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 claims description 18
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 14
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 claims description 14
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 12
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 10
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 9
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 8
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 8
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 6
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 3
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 3
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 claims description 2
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 claims description 2
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 claims description 2
- 101001138062 Homo sapiens Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000831007 Homo sapiens T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Proteins 0.000 claims description 2
- 101000666896 Homo sapiens V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Proteins 0.000 claims description 2
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 claims description 2
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 102100020943 Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100024834 T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Human genes 0.000 claims description 2
- 102100038282 V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Human genes 0.000 claims description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 2
- 229940124675 anti-cancer drug Drugs 0.000 claims description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 claims description 2
- IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N fluquinconazole Chemical compound C=1C=C(Cl)C=C(Cl)C=1N1C(=O)C2=CC(F)=CC=C2N=C1N1C=NC=N1 IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 claims description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 2
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 claims description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 2
- 239000004308 thiabendazole Substances 0.000 claims description 2
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 claims 1
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 claims 1
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 claims 1
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 claims 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims 1
- 229940126546 immune checkpoint molecule Drugs 0.000 claims 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 claims 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 30
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 22
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 abstract description 12
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 abstract description 12
- 230000006870 function Effects 0.000 abstract description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 abstract description 9
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 58
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 29
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 25
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 22
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 20
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 20
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 15
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 14
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 13
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 10
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 10
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 10
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 9
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 9
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 8
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 8
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 8
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 8
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 7
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 7
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 6
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 6
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 6
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 6
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 6
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 5
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 102100035361 Cerebellar degeneration-related protein 2 Human genes 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000737796 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related protein 2 Proteins 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 4
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 4
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 4
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101150046249 Havcr2 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 3
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 3
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 102100031351 Galectin-9 Human genes 0.000 description 2
- 101710121810 Galectin-9 Proteins 0.000 description 2
- 101001023379 Homo sapiens Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Proteins 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 102100035133 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Human genes 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N brefeldin A Chemical compound O[C@@H]1\C=C\C(=O)O[C@@H](C)CCC\C=C\[C@@H]2C[C@H](O)C[C@H]21 KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N 0.000 description 2
- JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N brefeldin-A Natural products CC1CCCC=CC2(C)CC(O)CC2(C)C(O)C=CC(=O)O1 JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 2
- 230000031942 natural killer cell mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 102200121585 rs746702002 Human genes 0.000 description 2
- 102200031793 rs800292 Human genes 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- APDGJFZXPJDQMS-REOHCLBHSA-N (2s)-2-amino-3-[hydroxy(phosphonooxy)phosphoryl]oxypropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(=O)OP(O)(O)=O APDGJFZXPJDQMS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 101100510617 Caenorhabditis elegans sel-8 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010007707 Hepatitis A Virus Cellular Receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000018682 Interleukin Receptor Common gamma Subunit Human genes 0.000 description 1
- 108010066719 Interleukin Receptor Common gamma Subunit Proteins 0.000 description 1
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 1
- 102220572775 Lamina-associated polypeptide 2, isoform alpha_F59Y_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 101100226902 Mus musculus Fcrlb gene Proteins 0.000 description 1
- 101100369641 Mus musculus Tigit gene Proteins 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241001614181 Phera Species 0.000 description 1
- 102000003993 Phosphatidylinositol 3-kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000430 Phosphatidylinositol 3-kinases Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 241000508269 Psidium Species 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- 102000001332 SRC Human genes 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 201000005188 adrenal gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024447 adrenal gland neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 102220377136 c.10C>A Human genes 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000012054 celltiter-glo Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 230000007783 downstream signaling Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108091008915 immune receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000027596 immune receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000037451 immune surveillance Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006296 mab medium Substances 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical group 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000033300 receptor internalization Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000008299 semisolid dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 108010087686 src-Family Kinases Proteins 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 238000010396 two-hybrid screening Methods 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/77—Internalization into the cell
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本發明涉及特異性結合T細胞免疫球蛋白結構域和粘液素結構域3 (Tim-3)的抗體。抗Tim-3抗體可用於治療、預防或診斷免疫疾病、癌性疾病、感染性疾病或可通過Tim-3介導的功能調節的其他病理病症。
Description
本申請要求於2016年8月26日提交的國際申請No.PCT/CN2016/096924的優先權,其通過引用全部併入本申請。
本申請公開的是特異性結合T細胞免疫球蛋白結構域和粘蛋白結構域3(Tim-3)的抗體。
T細胞免疫球蛋白結構域和粘蛋白結構域3(Tim-3,HAVCR2或CD366)是33 KD I型跨膜糖蛋白,其是包含T細胞免疫球蛋白和粘蛋白結構域的家族的成員,在促進慢性病毒感染和腫瘤逃避免疫監視的T細胞耗竭中起重要作用(Monney et al.,2002 Nature 415:536-541;Sanchez-Fueyo A,et al.,2003 Nat Immunol.4:1093-101;Sabatos CA,et al.,2003 Nat Immunol.4:1102-10;Anderson et al.,2006 Curr Opin Immunol.18:665-669)。編碼Tim-3的基因和cDNA在小鼠和人中被克隆和表徵(Monney et al.,2002 Nature 415:536-541;McIntire et al.,2001 Nat.Immunol.2:1109-1116)。成熟的人Tim-3含有280個胺基酸殘基(NCBI登錄號:NP_116171.3)。其胞外域(extracellular domain)由胺基酸殘基1-181組成,跨膜結構域和胞質C-末端尾部包含殘基182-280。沒有已知的抑制性信號傳導基序,諸如在胞質結構域中發現的基於免疫受體酪胺酸的抑制性基序(ITIM)和酪胺酸轉換基序(switch motif)(ITSM)。
Tim-3最初在Th1細胞中被鑒定出來。隨後的研究顯示除了T細胞之外,Tim-3還在其他類型的免疫細胞,諸如NK細胞、巨噬細胞、DC和肥大細胞中表現(Hastings et al.,2009 Eur J Immunol 39:2492-2501;Anderson et al.,2007 Science 318:1141-1143;Phong BL,et al.,2015 J Exp Med.pii:jem.20150388)。Tim-3很少在其他人體組織中表現。在T細胞中,Tim-3表現通過TCR/CD3活化而被正調控(Hastings et al.,2009 Eur J Immunol 39:2492-2501)。此外,普通的γ鏈細胞因子(例如IL-2、IL-7、IL-15和IL-21)也以PI-3激酶依賴性方式增加Tim-3表現(Mujib S,et al.,2012 J Immunol.188:3745-56)。腫瘤微環境(TME)中的T細胞通常與其他“檢查點”抑制性免疫受體諸如PD-1、Lag-3和Tigit共表現Tim-3(Fourcade J,et al.,2010 J Exp Med.207:2175-86;Gros A,et al.,2014 J Clin Invest.124:2246-59)。
迄今為止,已經報道了幾種Tim-3配位體(Tim-3L),其包括半乳糖凝集素-9和磷脂醯絲胺酸(PtdSer),被認為是兩種主要的Tim-3配位體(Anderson AC,2012 Curr Opin Immunol.24:213-6)。Tim-3L與Tim-3受體的結合誘導抑制T細胞活化的細胞內信號傳導,從而導致細胞增生、IL-2和IFN-γ分泌減少(Dekruyff et al.,2010 J.Immunol.184:1918-1930;Zhu et al.,2005 Nat.Immunol.6:1245-1252)。T細胞中Tim-3信號傳導的詳細機制仍然剩下大部分未知。一些研究顯示,Tim-3可被募集到免疫突觸並在與TCR相互作用時隔離Src激酶Lck,由此抑制其信號傳導,特別是NFAT信號傳導路徑(Tomkowicz B,et al.,2015 PLoS One 10:e0140694;Clayton KL,et al.,2014 J.Immunol.192:782-91)。
在癌症和病毒感染中,Tim-3信號傳導的活化促進免疫細胞功能障礙,導致癌症生長物(outgrowth)或擴大的病毒感染。在腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)、巨噬細胞和腫瘤細胞中Tim-3表現的上調已經在許多類型的癌症諸如肺癌(Zhuang X,et al.,Am J Clin Pathol 2012 137:978-985)、肝癌(Li H,et al.,Hepatology 2012 56:1342-1351)、胃癌(Jiang et al.,PLoS One 2013 8:e81799)、腎癌(Komohara et al.,Cancer Immunol Res.2015 3:999-1000)、乳腺癌(Heon EK,et al.,2015 Biochem Biophys Res Commun.464:360-6)、結腸癌(Xu et al.,Oncotarget 2015)、黑素細胞癌(Gros A,et al.,2014 J Clin Invest.2014 124:2246-2259)和子宮頸癌(Cao et al.,PLoS One 2013 8:e53834)中報道。此等癌症中Tim-3表現的增加與患者生存預後不良的結果相關。Tim-3信號的上調不但在對癌症的免疫耐受中起重要作用,而且對慢性病毒感染也起作用。在HIV和HCV感染期間,T細胞上Tim-3的表現顯著高於健康人,並且與病毒載量和疾病進展呈正相關(Jones RB,et al.,2008 J Exp Med.205:2763-79;Sakhdari A,et al.,2012 PLoS One 7:e40146;Golden-Mason L,et al.,2009 J Virol.83:9122-30;2012 Moorman JP,et al.,J Immunol.189:755-66)。此外,阻斷Tim-3受體單獨或與PD-1/PD-L1阻斷聯合可在體外和體內拯救功能性“耗盡”的T細胞(Dietze KK,et al.,2013 PLoS Pathog 9:e1003798;Golden-Mason L,et al.,2009 J Virol.83:9122-30)。因此,通過治療劑調節Tim-3信號傳導可能使免疫細胞例如T細胞、NK細胞和巨噬細胞(Mφ)免於耐受,誘導有效的免疫響應以根除腫瘤或慢性病毒感染。
已經報道了一些抗體可在與其在細胞表面上的標靶結合時被內化(Hurwitz E,et al.,1995,Proc Natl Acad Sci USA 92:3353-7;Poul MA,et al.,2000,J Mol Biol.301:1149-61;Fischer E,et al.,2012,Clin Cancer Res.18:6208-18)。抗體誘導的受體胞吞作用導致細胞表面受體的下調和受體依賴性信號傳導的抑制(Liu L,et al.,2014,Clin Cancer Res.20:6059-70)。由於抗體內化會降低受體的表面表現,通常需要對受體的抗體進行持久的內化。
因此,需要對Tim-3受體具有高親和力和特異性的抗Tim-3抗體,並且優選進一步具有Tim-3受體的持久內化。
本申請公開的是以高親和力和特異性結合Tim-3的抗體分子。具體而言,本申請公開的抗Tim-3抗體提供了Tim-3受體持續或持久的內化。還提供的是編碼抗體分子的核酸分子、表現載體、主體細胞和用於製備抗體分子的方法。也提供了包含抗體分子的醫藥組合物。本申請公開的抗Tim-3抗體分子可單獨使用或與其他藥劑或治療形式組合使用,以治療、預防和/或診斷與由Tim-3介導的細胞內信號傳導的免疫細胞抑制相關的疾病,例如,免疫病症、癌症、感染性疾病、克羅恩病、膿毒病、全身炎症反應綜合征(SIRS)和腎小球腎炎。因此,本申請公開了使用抗Tim-3抗體分子治療上述各種病症或疾病的組合物和方法,並且還提供了抗Tim-3抗體分子在製備用於治療上述各種病症或疾病的藥物中的用途。
在某些態樣,本申請提供了能夠結合人Tim-3的抗Tim-3抗體,其包括至少1個、2個、3個、4個、5個或6個互補決定區(CDR),其包含SEQ ID NO 3-8或26-27的胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包括至少1個、2個或3個來自重鏈可變區(VH)的CDR,所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 3-5或26的胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體。在一些實施例中,抗Tim-3抗體包括至少1個、2個或3個來自輕鏈可變區(VL)的CDR,所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO 6-8或27的胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包括至少1個、2個、3個、4個、5個或6個來自重鏈和輕鏈可變區的CDR,所述重鏈和輕鏈可變區包含SEQ ID NO 3-8或26-27的胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包括6個來自重鏈和輕鏈可變區的CDR,所述重鏈和輕鏈可變區包含SEQ ID NO 3-8或26-27的胺基酸序列或其包含
一個或多個保守取代的變異體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)重鏈可變區(VH),其包含1個、2個或3個選自SEQ ID NO 3、4、5或26的CDR胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;和/或(b)輕鏈可變區(VL),其包含1個、2個或3個選自SEQ ID NO 6、7、8或27的CDR胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a1)重鏈可變區(VH),其包含SEQ ID NO 3的VH-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 4的VH-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 5的VH-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;和輕鏈可變區(VL),其包含SEQ ID NO 6的VL-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 7的VL-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 8的VL-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;(b)重鏈可變區(VH),其包含SEQ ID NO 3的VH-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 26的VH-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 5的VH-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;和輕鏈可變區(VL),其包含SEQ ID NO 6的VL-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 7的VL-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 8的VL-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;(c)重鏈可變區(VH),其包含SEQ ID NO 3的VH-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 4的VH-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 5的VH-CDR3胺基酸序列或其包含
一個或多個保守取代的變異體;和輕鏈可變區(VL),其包含SEQ ID NO 6的VL-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 7的VL-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 27的VL-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;或(d)重鏈可變區(VH),其包含SEQ ID NO 3的VH-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 26的VH-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 5的VH-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;和輕鏈可變區(VL),其包含SEQ ID NO 6的VL-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 7的VL-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 27的VL-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)重鏈可變區(VH),其包含SEQ ID NO 3的VH-CDR1胺基酸序列,SEQ ID NO 4的VH-CDR2胺基酸序列和SEQ ID NO 5的VH-CDR3胺基酸序列;和輕鏈可變區(VL),其包含SEQ ID NO 6的VL-CDR1胺基酸序列,SEQ ID NO 7的VL-CDR2胺基酸序列和SEQ ID NO 8的VL-CDR3胺基酸序列;或(b)重鏈可變區(VH),其包含SEQ ID NO 3的VH-CDR1胺基酸序列,SEQ ID NO 26的VH-CDR2胺基酸序列和SEQ ID NO 5的VH-CDR3胺基酸序列;和輕鏈可變區(VL),其包含SEQ ID NO 6的VL-CDR1胺基酸序列,SEQ ID NO 7的VL-CDR2胺基酸序列和SEQ ID NO 27的VL-CDR3胺基酸序列。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體是人源化抗體分子。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體是人源化單克隆抗體(mAb)分子。
在一些實施例中,抗體包含與SEQ ID NO 9、17、28或40的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結
構域。在一些實施例中,抗體包含與SEQ ID NO 9、17或28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域。在一些實施例中,抗體包含與SEQ ID NO 11、19、30或36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 11的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(b)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 19的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(c)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(d)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(e)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 11的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(f)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 19的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(g)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或
100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(h)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(i)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 11的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(j)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 19的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(k)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(l)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(m)與SEQ ID NO 40的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 11的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(n)與SEQ ID NO 40的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 19的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(o)與SEQ ID NO 40的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或
100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;或(p)與SEQ ID NO 40的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 11的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(b)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 19的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(c)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(d)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(e)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 11的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(f)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 19的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;
(g)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(h)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(i)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 11的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(j)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 19的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(k)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;或(l)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)包含SEQ ID NO 9的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 11的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;(b)包含SEQ ID NO 17的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 19的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;(c)包含SEQ ID NO 28的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO
30的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;(d)包含SEQ ID NO 28的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 36的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;(e)包含SEQ ID NO 40的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 36的胺基酸序列的輕鏈可變結構域。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a1)包含SEQ ID NO 9的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 11的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;(b)包含SEQ ID NO 17的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 19的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;(c)包含SEQ ID NO 28的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 30的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;或(d)包含SEQ ID NO 28的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 36的胺基酸序列的輕鏈可變結構域。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含所述抗體包含與SEQ ID NO 13、22或32的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈。在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含與SEQ ID NO 15、24、34或38的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)與SEQ ID NO 13的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 15的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(b)與SEQ ID NO 13的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 24的胺基酸序列具有至少95%、96%、
97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(c)與SEQ ID NO 13的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 34的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(d)與SEQ ID NO 13的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 38的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(e)與SEQ ID NO 22的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 15的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(f)與SEQ ID NO 22的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 24的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(g)與SEQ ID NO 22的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 34的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(h)與SEQ ID NO 22的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 38的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(i)與SEQ ID NO 32的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 15的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(j)與SEQ ID NO 32的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 24的胺基酸序列具有至少95%、96%、
97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(k)與SEQ ID NO 32的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 34的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;或(l)與SEQ ID NO 32的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 38的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)包含SEQ ID NO 13的胺基酸序列的重鏈,和包含SEQ ID NO 15的胺基酸序列的輕鏈;(b)包含SEQ ID NO 22的胺基酸序列的重鏈,和包含SEQ ID NO 24的胺基酸序列的輕鏈;(c)包含SEQ ID NO 32的胺基酸序列的重鏈,和包含SEQ ID NO 34的胺基酸序列的輕鏈;或(d)包含SEQ ID NO 32的胺基酸序列的重鏈,和包含SEQ ID NO 38的胺基酸序列的輕鏈。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含以下的一種或多種:(a)在SEQ ID NO 24的1位具有天門冬胺酸到麩胺酸突變的輕鏈;(b)在SEQ ID NO 24的4位具有白胺酸到甲硫胺酸突變的輕鏈;(c)在SEQ ID NO 24的62位具有纈胺酸到異白胺酸突變的輕鏈;(d)在SEQ ID NO 24的74位具有天門冬胺酸到麩胺酸突變的輕鏈;(e)在SEQ ID NO 24的96位具有甲硫胺酸到白胺酸突變的輕鏈;(f)在SEQ ID NO 22的59位具有苯丙胺酸到酪胺酸突變的重鏈;(g)在SEQ ID NO 22的60位具有脯胺酸到纈胺酸突變的重鏈;
(h)在SEQ ID NO 22的77位具有絲胺酸到蘇胺酸突變的重鏈;或(i)在SEQ ID NO 22的78位具有半胱胺酸到白胺酸突變的重鏈。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體是Fab、F(ab’)2、Fv或單鏈Fv(ScFv)。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含亞類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其變異體的重鏈恒定區,和κ或λ型的輕鏈恒定區或其變異體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含變異體人IgG1重鏈恒定區,其包含SEQ ID NO 21的胺基酸序列,和人κ輕鏈恒定區。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體是分離的或重組體。
在某些態樣,本申請提供了組合物,例如,醫藥組合物,其包含本申請所述的抗體分子的至少一種,和醫藥上可接受之賦形劑。在一些實施例中,醫藥組合物包括抗Tim-3抗體和一種或多種其他藥劑的組合,例如,治療劑或其他抗體分子。在一些實施例中,抗Tim-3抗體與標記或治療劑綴合。
在某些態樣,本申請還提供了刺激個體的免疫響應的方法。所述方法包括向個體單獨施用或與一種或多種藥劑或操作組合施用本申請所述的抗體(例如,治療有效量的抗Tim-3抗體分子)。
在某些態樣,本申請還提供了治療(例如,一種或多種降低、抑制或延遲進展)個體的癌症或腫瘤的方法。所述方法包括,向個體單獨施用或與一種或多種藥劑或操作組合施用本申請所述的抗體(例如,治療有效量的抗Tim-3抗體分子)。在一些實施例中,抗Tim-3抗體與化學療法、靶向療法、溶瘤藥物、細胞毒劑、基於免疫的療法、細胞因子、外科手術、放射操作、協同刺激分子的活化劑、抑制性分子的抑制劑、疫苗或細胞免疫療法組合施用。在一些實施例中,抗Tim-3抗體與選自PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、LAG-3、CEACAM-1、CEACAM-5、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4或TGFR的免疫檢
查點分子的抑制劑組合施用。在一些實施例中,抗Tim-3抗體與抗PD-1 mAb 317-4B6(也稱為Hu317-4B6,317-4B6/IgG4mt10,在美國專利No.8,735,553中描述)組合施用。
在某些實施例中,癌症包括,但不限於,肺癌、肝癌、胃癌、宮頸癌、黑素瘤、腎癌、乳腺癌、結直腸癌、白血病、淋巴瘤、卵巢癌、頭頸癌或癌症的轉移病灶。
在另外的態樣,本申請提供了治療感染性疾病的方法,其包括向個體單獨施用或與一種或多種藥劑或操作組合施用治療有效量的本申請所述的抗Tim-3抗體。在一些實施例中,感染性疾病是選自HIV感染和HCV感染的慢性病毒感染性疾病。
在一些態樣,本申請還提供了抗Tim-3抗體分子在製備用於治療本申請所述的各種病症或疾病的藥物中的用途。
本申請所述的抗Tim-3抗體分子顯示一套特別的效應物功能和物理化學特性,其可抑制免疫細胞中Tim-3介導的細胞信號傳導,重新活化免疫細胞並增強免疫力。並且,具有修飾重鏈恒定區的全長人IgG1形式的mAb在效應物功能方面具有一套獨特的特徵。抗Tim-3 mAb也被人源化,與人抗體分子具有高度相似性。此外,抗Tim-3抗體可與抗PD-1抗體協同作用,在體外活化T細胞,減少腫瘤生長。因此,本申請公開的抗Tim-3抗體在治療癌症、病毒感染和理論上與免疫耐受或“耗盡”相關的其他人類疾病中可具有治療效用。
圖1顯示Tim-3-mIgG2a(頂部)和Tim-3-huIgG1(底部)的示意圖,其中L是連接子,N是N末端,C是C末端。
圖2A-2B顯示抗Tim-3抗體的系統發生樹(phylogenetic tree)。圖2A
顯示抗Tim-3抗體重鏈可變(Vh)區的系統發生樹;圖2B顯示抗Tim-3抗體輕鏈可變(Vl)區的系統發生樹。使用DNASTAR`s Megalign軟體比對總共23個Tim-3 Vh和20個Vκ序列。在系統發生樹中展現出序列同源性。
圖3顯示在ELISA中hu425-2E-1和hu425-2F-1的Tim-3結合親和力與hu425-1-1的Tim-3結合親和力的比較。
圖4顯示在ELISA中mAbs 1G5和Ab2000與hu425-2-3b一起的Tim-3結合親和力。
圖5顯示通過抗Tim-3抗體hu425-2-3b抑制Tim-3介導的吞噬作用。
圖6顯示在原代人PBMC中通過包括ch425和hu425-1-1的抗Tim-3抗體活化IFN-γ分泌。
圖7顯示通過抗Tim-3抗體hu425-2-3b活化CMV特異性人T細胞。
圖8A-8B顯示抗Tim-3抗體hu425-2-3b促進NK細胞介導的細胞毒性。
圖9顯示抗Tim-3抗體hu425-2-3b降低Tim-3受體的表面表現。
圖10顯示抗Tim-3抗體(hu425-2-3b、Ab1和Ab2)的Tim-3受體的內化。
圖11顯示抗Tim-3抗體hu425-2-3b單獨或與抗PD-1抗體hu317-4B6組合增強MLR中的IFN-γ分泌。
圖12A-12B顯示抗Tim-3抗體hu425-2-3b未誘導ADCC(抗體依賴性細胞介導的細胞毒性)和CDC(補體依賴性細胞毒性)。
圖13顯示抗Tim-3抗體ch425、抗PD-1抗體hu317-4B6及其組合在人A431同種異體的異種移植物模型(allogeneic xenograft model)中的抗腫瘤作用。
定義
示例性保守胺基酸取代取代
除非在本文件中另有具體定義,否則本申請所使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域普通技術人員通常理解的含義。
除非上下文另有明確規定,否則如本申請包括所附申請專利範圍所使用的單詞的單數形式,諸如“一”、“一個”和“該”,包括它們相應的複數引用。
除非上下文另有明確規定,否則術語“或”用來指術語“和/或”,並可與術語“和/或”互換使用。
除非上下文另有需要,否則在整個說明書以及隨後的申請專利範圍中,單詞“包含(comprise)”和變異體諸如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”將被理解為意味著包含所述的胺基酸序列、DNA序列、步驟或其組,但是不排除任何其他胺基酸序列、DNA序列、步驟。當在本申請中使用時,術語“包含(comprising)”可使用術語“含有”、“包括”或有時使用“具有”代替。
術語“Tim-3”包括各種哺乳動物同種型,例如,人Tim-3、人Tim-3的物種同系物和包含Tim-3中至少一個抗原決定基的類似物。並且,Tim-3,例如人Tim-3的胺基酸序列和編碼該序列的核苷酸序列是本領域中已知的。
本申請中的術語“施用(administration)”、“給藥(administering)”、“處理(treating)”和“治療(treatment)”,當用於動物、人、實驗個體、細胞、組織、器官或生物體液時,指外源藥劑、治療劑、診斷劑或組合物與動物、人、個體、細胞、組織、器官或生物體液接觸。細胞的處理包括使試劑與細胞接觸,以及使試劑與體液接觸,其中體液與細胞接觸。術語“施用(administration)”和“治療(treatment)”也指通過試劑、診斷、結合化合物或另一種細胞進行例如細胞的體外和活體外治療。本申請中的術語“個體”包括任何有機體,優選動物,更優選哺乳動物(例如,大鼠、小鼠、犬、貓、兔),並且最優選人。
抗體或抗體分子
本申請公開的是以高親和力和特異性結合Tim-3的抗體分子。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包括至少1個、2個、3個、4個、5個或6個互補決定區(CDR),其包含SEQ ID NO 3-8或26-27的胺基酸序列或其包
含一個或多個保守取代的變異體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包括至少1個、2個或3個來自重鏈可變區(VH)的CDR,所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 3-5或26的胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體。在一些實施例中,抗Tim-3抗體包括至少1個、2個或3個來自輕鏈可變區(VL)的CDR,所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO 6-8或27的胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包括至少1個、2個、3個、4個、5個或6個來自重鏈和輕鏈可變區的CDR,所述重鏈和輕鏈可變區包含SEQ ID NO 3-8或26-27的胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包括6個來自重鏈和輕鏈可變區的CDR,所述重鏈和輕鏈可變區包含SEQ ID NO 3-8或26-27的胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)重鏈可變區(VH),其包含1個、2個或3個選自SEQ ID NO 3、4、5或26的CDR胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;和/或(b)輕鏈可變區(VL),其包含1個、2個或3個選自SEQ ID NO 6、7、8或27的CDR胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)重鏈可變區(VH),其包含SEQ ID NO 3的VH-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 4的VH-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 5的VH-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;和輕鏈可變區(VL),其包含SEQ ID NO 6的VL-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 7的VL-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 8的
VL-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;(b)重鏈可變區(VH),其包含SEQ ID NO 3的VH-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 26的VH-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 5的VH-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;和輕鏈可變區(VL),其包含SEQ ID NO 6的VL-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 7的VL-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 8的VL-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;(c)重鏈可變區(VH),其包含SEQ ID NO 3的VH-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 4的VH-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 5的VH-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;和輕鏈可變區(VL),其包含SEQ ID NO 6的VL-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 7的VL-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 27的VL-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;或(d)重鏈可變區(VH),其包含SEQ ID NO 3的VH-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 26的VH-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 5的VH-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體;和輕鏈可變區(VL),其包含SEQ ID NO 6的VL-CDR1胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體,SEQ ID NO 7的VL-CDR2胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體和SEQ ID NO 27的VL-CDR3胺基酸序列或其包含一個或多個保守取代的變異體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)重鏈可變區(VH),其包含SEQ ID NO 3的VH-CDR1胺基酸序列,SEQ ID
NO 4的VH-CDR2胺基酸序列和SEQ ID NO 5的VH-CDR3胺基酸序列;和輕鏈可變區(VL),其包含SEQ ID NO 6的VL-CDR1胺基酸序列,SEQ ID NO 7的VL-CDR2胺基酸序列和SEQ ID NO 8的VL-CDR3胺基酸序列;或(b)重鏈可變區(VH),其包含SEQ ID NO 3的VH-CDR1胺基酸序列,SEQ ID NO 26的VH-CDR2胺基酸序列和SEQ ID NO 5的VH-CDR3胺基酸序列;和輕鏈可變區(VL),其包含SEQ ID NO 6的VL-CDR1胺基酸序列,SEQ ID NO 7的VL-CDR2胺基酸序列和SEQ ID NO 27的VL-CDR3胺基酸序列。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體是人源化抗體分子。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體是人源化單克隆抗體(mAb)。
在一些實施例中,抗體包含與SEQ ID NO 9、17、28或40的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域。在一些實施例中,抗體包含與SEQ ID NO 9、17或28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域。在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含與SEQ ID NO 11、19、30或36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 11的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(b)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 19的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(c)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少
95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(d)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(e)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 11的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(f)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 19的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(g)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(h)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(i)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 11的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(j)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 19的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(k)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少
95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(m)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;與SEQ ID NO 40的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 11的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(n)與SEQ ID NO 40的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 19的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(o)與SEQ ID NO 40的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;或(q)與SEQ ID NO 40的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 11的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(b)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 19的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(c)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或
100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(d)與SEQ ID NO 9的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(e)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 11的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(f)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 19的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(g)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(h)與SEQ ID NO 17的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(i)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 11的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(j)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 19的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;(k)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或
100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;或(l)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)包含SEQ ID NO 9的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 11的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;(b)包含SEQ ID NO 17的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 19的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;(c)包含SEQ ID NO 28的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 30的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;(d)包含SEQ ID NO 28的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 36的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;或(e)包含SEQ ID NO 40的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 36的胺基酸序列的輕鏈可變結構域。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)包含SEQ ID NO 9的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 11的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;(b)包含SEQ ID NO 17的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 19的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;(c)包含SEQ ID NO 28的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 30的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;或(d)包含SEQ ID NO 28的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO
36的胺基酸序列的輕鏈可變結構域。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含所述抗體包含與SEQ ID NO 13、22或32的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈。在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含與SEQ ID NO 15、24、34或38的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)與SEQ ID NO 13的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 15的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(b)與SEQ ID NO 13的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 24的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(c)與SEQ ID NO 13的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 34的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(d)與SEQ ID NO 13的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 38的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(e)與SEQ ID NO 22的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 15的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(f)與SEQ ID NO 22的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 24的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;
(g)與SEQ ID NO 22的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 34的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(h)與SEQ ID NO 22的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 38的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(i)與SEQ ID NO 32的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 15的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(j)與SEQ ID NO 32的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 24的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;(k)與SEQ ID NO 32的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 34的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈;或(l)與SEQ ID NO 32的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈,和與SEQ ID NO 38的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含:(a)包含SEQ ID NO 13的胺基酸序列的重鏈,和包含SEQ ID NO 15的胺基酸序列的輕鏈;(b)包含SEQ ID NO 22的胺基酸序列的重鏈,和包含SEQ ID NO 24的胺基酸序列的輕鏈;(c)包含SEQ ID NO 32的胺基酸序列的重鏈,和包含SEQ ID NO 34的胺基酸
序列的輕鏈;或(d)包含SEQ ID NO 32的胺基酸序列的重鏈,和包含SEQ ID NO 38的胺基酸序列的輕鏈。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含以下的一種或多種:(a)在SEQ ID NO 24的1位具有天門冬胺酸到麩胺酸突變的輕鏈;(b)在SEQ ID NO 24的4位具有白胺酸到甲硫胺酸突變的輕鏈;(c)在SEQ ID NO 24的62位具有纈胺酸到異白胺酸突變的輕鏈;(d)在SEQ ID NO 24的74位具有天門冬胺酸到麩胺酸突變的輕鏈;(e)在SEQ ID NO 24的96位具有甲硫胺酸到白胺酸突變的輕鏈;(f)在SEQ ID NO 22的59位具有苯丙胺酸到酪胺酸突變的重鏈;(g)在SEQ ID NO 22的60位具有脯胺酸到纈胺酸突變的重鏈;(h)在SEQ ID NO 22的77位具有絲胺酸到蘇胺酸突變的重鏈;或(i)在SEQ ID NO 22的78位具有半胱胺酸到白胺酸突變的重鏈。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體是Fab、F(ab’)2、Fv或單鏈Fv(ScFv)。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含亞類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重鏈恒定區或其變異體,和κ或λ型的輕鏈恒定區或其變異體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含亞類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的變異體重鏈恒定區,其中變異體重鏈恒定區提供了減少或消除的效應物功能,諸如抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)或補體依賴性細胞毒性(CDC)。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含人IgG1的重鏈恒定區或其變異體。在更優選的實施例中,抗Tim-3抗體包含人IgG1的變異體重鏈恒定區,其包含一種或多種選自下組的突變:E233P、L234A、L235A、L236△和P329A。在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含變異體人IgG1重鏈恒定區,其包含SEQ ID NO 21的
胺基酸序列,和人κ輕鏈恒定區。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體是分離的或重組體。
在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含至少一個抗原結合位點,或至少一個可變區。在一些實施例中,抗Tim-3抗體包含來自本申請所述的抗體的抗原結合片段。
本申請中的術語“抗體”以最廣泛的意義使用,並且具體地涵蓋抗體(包括全長單克隆抗體)和抗體片段,只要它們識別抗原,例如Tim-3、PD-1。抗體通常是單特異性的,但是也可描述為自特異性的(idiospecific)、異特異性的(heterospecific)或多特異性的(polyspecific)。抗體分子通過特異性結合位點結合抗原上的特異性抗原決定簇或抗原決定基。
本申請中的術語“單克隆抗體”或“mAb”或“Mab”指基本上同源的抗體的群體,即除了可能少量存在的自然發生的突變之外,包含在胺基酸序列相同的群體中的抗體分子。與之相比,習知(多克隆)抗體製劑通常包括大量在它們的可變結構域,特別是它們的通常對不同抗原決定基具有特異性的互補決定區(CDR)中具有不同胺基酸序列的不同抗體。修飾語“單克隆”表示抗體獲自基本上同源的抗體群體的特點,並且不被解釋為需要通過任何特定方法產生抗體。單克隆抗體(mAb)可通過本領域技術人員已知的方法獲得。參見,例如Kohler G et al.,Nature 1975 256:495-497;美國專利申請No.4,376,110;Ausubel FM et al.,CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY 1992;Harlow E et al.,ANTIBODIES:A LABORATORY MANUAL,Cold spring Harbor Laboratory 1988;和Colligan JE et al.,CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY 1993。本申請公開的mAb可以是包括IgG、IgM、IgD、IgE、IgA的任何免疫球蛋白種類及其任何亞類。產生mAb的雜交瘤可在體外或在體內培養。高mAb效價可在體內生產中獲得,其中將來自單個雜交瘤的細胞腹膜內注射至小鼠,諸如原始-始發態
(pristine-primed)Balb/c小鼠,產生含有高濃度所需mAb的腹水。同種型IgM或IgG的mAb可使用本領域技術人員已知的柱層析法從這樣的腹水或從培養上清液中純化。
通常,基本抗體結構單元包含四聚體。每個四聚體包含兩個相同多肽鏈對,每對具有一條“輕鏈”(大約25kDa)和一條“重鏈”(大約50-70kDa)。每條鏈的胺基末端部分包含主要負責抗原識別的具有大約100至110個或更多個胺基酸的可變區。重鏈的碳末端部分可定義為主要負責效應物功能的恒定區。通常,人輕鏈被分為κ和λ輕鏈。此外,人重鏈通常被分為α、δ、ε、γ或μ,並且分別將抗體的同種型定義為IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。在輕鏈和重鏈中,可變區和恒定區通過大約12個或更多個胺基酸的“J”區連接,其中重鏈還包括大約10個或更多個胺基酸的“D”區。
每個輕鏈/重鏈(VL/VH)對的可變區形成抗體結合位點。因此,通常,完整的抗體具有兩個結合位點。除了在雙功能或雙特異性抗體中以外,兩個結合位點通常相同。
通常,重鏈和輕鏈兩者的可變結構域包含三個高變區,也稱為“互補決定區(CDR)”,其位於相對保守的框架區(FR)之間。CDR通常通過框架區對齊,從而能夠結合特定抗原決定基。通常,從N末端到C末端,重鏈和輕鏈可變結構域兩者均包含FR-1(或FR1)、CDR-1(或CDR1)、FR-2(FR2)、CDR-2(CDR2)、FR-3(或FR3)、CDR-3(CDR3)和FR-4(或FR4)。通常,根據Sequences of Proteins of Immunological Interest,Kabat,et al.,National Institutes of Health,Bethesda,Md.;5<m>ed.;NIH Publ.No.91-3242(1991);Kabat(1978)Adv.Prot.Chem.32:1-75;Kabat,et al.,(1977)J.Biol.Chem.252:6609-6616;Chothia,et al,(1987)J Mol.Biol.196:901-917 or Chothia,et al,(1989)Nature 342:878-883的定義,將胺基酸分配至每個結構域。
術語“高變區”指負責抗原結合的抗體的胺基酸殘基。高變區包含來自“CDR”(即,輕鏈可變結構域的VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3和重鏈可變結構域的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3)的胺基酸殘基。參見,Kabat et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(通過序列定義抗體的CDR區);也可參見Chothia and Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917(通過結構定義抗體的CDR區)。術語“框架”或“FR”殘基指除了高變區殘基之外在本申請中被定義為CDR殘基的彼等可變結構域殘基。
除非另有說明,否則“抗體片段”或“抗原結合片段”指抗體的抗原結合片段,即保留與全長抗體結合的抗原特異性結合的能力的抗體片段,例如,保留一個或多個CDR區的片段。抗原結合片段的實例包括,但不限於,Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段;雙抗體;線性抗體;單鏈抗體分子,例如,單鏈Fv(ScFv);納米抗體和由抗體片段形成的多特異性抗體。
特異性結合特定靶蛋白的抗體被描述為特異性結合特定靶蛋白。這意味著與其他蛋白相比,抗體顯示出優先結合該標靶,但是這種特異性不需要絕對結合特異性。例如,在不產生不良結果諸如假陽性的情況下,如果其結合是樣品中靶蛋白存在的決定性因素,則抗體被認為對於其預期標靶是“特異性的”。用於本發明的抗體或其結合片段,將以比非靶蛋白的親和力大至少兩倍,優選至少10倍,更優選至少20倍,並且最優選至少100倍的親和力結合靶蛋白。據說,本申請中的抗體特異性結合包含給定的胺基酸序列,例如成熟人Tim-3分子的胺基酸序列的多肽,如果其結合包含此序列的多肽但是不結合缺乏此序列的蛋白質。
本申請中的術語“人抗體”指僅包含人免疫球蛋白序列的抗體。人抗體如果在小鼠中、在小鼠細胞中或在源自小鼠細胞的雜交瘤中產生,則可含
有鼠型碳水化合物鏈。類似地,“小鼠抗體”或“大鼠抗體”分別指僅包含小鼠或大鼠免疫球蛋白序列的抗體。
術語“人源化抗體”指含有來自非人(例如鼠類)抗體以及人抗體的序列的抗體形式。這種抗體含有極少源自非人免疫球蛋白的序列。通常,人源化抗體將包含至少一個,通常兩個可變結構域的基本上全部,其中全部或基本上全部的高變區環(hypervariable loop)與非人免疫球蛋白的高變區環對應,並且全部或基本上全部的FR區是人免疫球蛋白序列的FR區。人源化抗體還將可選地包含至少一部分免疫球蛋白恒定區(Fc),典型的是人免疫球蛋白的恒定區。必要時,將前綴“hum”、“hu”、“Hu”或“h”添加至抗體克隆名稱以區分人源化抗體與親本齧齒動物抗體。雖然為了增加親和性、增加人源化抗體的穩定性或由於其他原因可包括某些胺基酸取代,但是齧齒動物抗體的人源化形式通常將包含親本齧齒動物抗體的相同CDR序列。
本申請中的術語“癌症”或“腫瘤”指或描述哺乳動物的生理狀況,其典型特徵在於未受調節的細胞生長。癌症的實例包括但不限於,肺癌(其包括小細胞肺癌或非小細胞肺癌)、腎上腺癌、肝癌、胃癌、宮頸癌、黑素瘤、腎癌、乳腺癌、結直腸癌、白血病、膀胱癌、骨癌、腦癌、子宮內膜癌、頭頸癌、淋巴瘤、卵巢癌、皮膚癌、甲狀腺癌或癌症的轉移病灶。
除非另有說明,否則術語“CDR”指免疫球蛋白可變區中的互補決定區,其使用Kabat編號系統定義。
醫藥組合物和套組
在一些態樣,本申請提供了組合物,例如,醫藥上可接受之組合物,其包含本申請所述的抗Tim-3抗體,與至少一種醫藥上可接受之賦形劑一起配製。本申請使用的術語“醫藥上可接受之賦形劑”包括生理學上相容的任何和所有溶劑、分散介質、等滲劑和吸收延遲劑等。賦形劑可適合於靜脈內、肌內、
皮下、腸胃外、直腸、脊髓或表皮施用(例如通過注射或輸注)。
本申請中的組合物可以是各種形式。此等包括,例如,液體、半固體和固體劑型,諸如液體溶液(例如,可注射和輸注溶液)、分散體或混懸液、脂質體和栓劑。適合的形式取決於預期的施用模式和治療應用。典型適合的組合物是可注射或輸注溶液的形式。一個適合的施用模式是腸胃外(例如,靜脈內、皮下、腹膜內、肌內)。在一些實施例中,抗體通過靜脈輸注或注射施用。在某些實施例中,抗體通過肌內或皮下注射施用。
本申請使用的術語“治療有效量”指當向個體施用用於治療疾病,或者至少一種疾病或病症的臨床症狀時,足以進行對疾病、病症或症狀的這種治療的抗體的量。“治療有效量”可隨著抗體,疾病、病症和/或疾病或病症的症狀,疾病、病症和/或疾病或病症的症狀的嚴重性,待治療的個體的年齡,和/或待治療的個體的體重而變化。任何給定情況中適當的量對本領域技術人員可以是顯而易見的或可通過習知實驗確定。在聯合治療的情況下,“治療有效量”指有效治療疾病、病症或狀況的組合對象的總量。
“個體”是哺乳動物,例如靈長類動物,優選高等靈長類,例如人(例如,本申請所述的具有病症或處於具有病症的風險的患者)。
實例1:抗Tim-3單克隆抗體的產生
基於傳統雜交瘤技術(de StGroth and Sheidegger,1980,J Immunol Methods 35:1;Mechetner,2007,Methods Mol Biol 378:1)產生許多鼠抗Tim-3單克隆抗體(mAb)。選擇酶聯免疫吸附測定(ELISA)和熒光活化細胞分選(FACS)測定中具有高結合活性的mAb進一步表徵。
免疫和結合測定的Tim-3重組蛋白
基於GenBank序列(登錄號:AF450242.1)合成編碼全長人Tim-3
(SEQ ID NO.1)的cDNA。將由Tim-3(SEQ ID NO.2)的胺基酸(AA)1-202組成的胞外域(ECD)的編碼區PCR擴增,並克隆至基於pcDNA3.1的表現載體(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA),其C末端融合至小鼠IgG2a(GenBank登錄號:CAC20702)的Fc區或融合至人IgG1重鏈(UniProtKB/Swiss-Prot登錄號:P01857)的Fc區,分別產生兩種重組融合蛋白表現質粒Tim-3-mIgG2a和Tim-3-huIgG1。Tim-3融合蛋白的示意圖示於圖1。為了重組融合蛋白產生,Tim-3-mIgG2a和Tim-3-huIgG1質粒被瞬間轉染至基於HEK293的哺乳動物細胞表現系統(內部開發)並在裝備有旋轉振盪器的CO2恒溫箱中培養5-7天。收集含有重組蛋白的上清液並通過離心澄清。使用Protein G Sepharose Fast Flow柱(Cat.No.:17061805,GE Life Sciences)純化Tim-3-mIgG2a和Tim-3-huIgG1。Tim-3-mIgG2a和Tim-3-huIgG1蛋白質用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)透析並以小等分試樣儲存在-80℃冰箱中。
穩定的表現細胞株
為了建立表現全長人Tim-3(huTim-3)或猴Tim-3(mkTim-3,該基因可從ZYAGE獲得,Cat.No.:KD-702)的穩定細胞株,將Tim-3基因克隆至逆轉錄病毒載體pFB-Neo(Cat.No.:217561,Agilent,USA)。根據先前的方案(Zhang T,et al.,2005,Blood 106:1544-51)產生雙嗜逆轉錄病毒載體(Dual-trophic retroviral vector)。將含有huTim-3和mkTim-3的載體分別轉導至HuT78和NK92MI細胞(ATCC,Manassas,VA,USA),以產生細胞株HuT78/huTim-3和NK92MI/mkTim-3。通過在含有10% FBS和G418的完全RPMI1640培養基中培養和FACS結合測定來選擇高表現細胞株。
免疫、雜交瘤融合和克隆
使用100μl含有10μg Tim-3-mIgG2a和水溶性助劑(Cat.No.:KX0210041,KangBiQuan,Beijing,China)的抗原溶液腹膜內(i.p.)免疫8-12周齡Balb/c小鼠(HFK BIOSCIENCE CO.,LTD,Beijing,China)。三周後重複該操作。
第二次免疫後兩周,通過ELISA和FACS評價小鼠血清的Tim-3結合。血清篩選後10天,使用50μg Tim-3-mIgG2a腹膜內增強具有最高抗Tim-3抗體血清效價的小鼠。增強後3天,分離脾臟淋巴細胞,並使用標準技術(Colligan JE,et al.,CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY,1993)將其融合至鼠骨髓瘤細胞株SP2/0細胞(ATCC)。
通過ELISA和FACS評估抗體的Tim-3結合親和力
首先通過如Methods in Molecular Biology(2007)378:33-52所述的ELISA篩選雜交瘤克隆的上清液並進行一些修改。簡言之,將Tim-3-huIgG1蛋白包被在96孔平板中。使用HRP連接的抗小鼠IgG抗體(Cat.No.:7076S,Cell Signaling Technology,USA)和底物(Cat.No.:00-4201-56,eBioscience,USA)進行顯影(development),並且在450nm波長的吸收信號使用酶標儀(SpectraMax Paradigm,Molecular Devices,USA)量測。ELISA陽性克隆使用上述HuT78/huTim-3或NK92mi/mkTim-3細胞通過FACS進一步驗證。Tim-3表現細胞(105個細胞/孔)與ELISA陽性雜交瘤上清液一起溫育,接著與Alexa Fluro-647標記的山羊抗小鼠IgG抗體(Cat.No.:A0473,Beyotime Biotechnology,China)結合。使用流式細胞儀(Guava easyCyte 8HT,Merck-Millipore,USA)定量細胞熒光。
來自在ELISA和FACS篩選兩者中顯示陽性信號的雜交瘤的條件培養基經過功能測定,在基於人免疫細胞的測定(見下節)中識別具有良好功能活性的抗體。具有所需功能活性的抗體被進一步亞克隆和表徵。
雜交瘤的亞克隆和雜交瘤對無血清或低血清培實基的適應
主要通過ELISA、FACS和功能測定(在實例7和8中描述)篩選後,陽性雜交瘤克隆通過有限稀釋進行亞克隆。通過功能測定驗證的頂部抗體亞克隆適應於在具有3% FBS的CDM4MAb培養基(Cat.No.:SH30801.02,Hyclone,USA)中生長。
單克隆抗體的表現和純化
將雜交瘤細胞在CDM4MAb培養基(Cat.No.:SH30801.02,Hyclone)中培養,並且在37℃在CO2恒溫箱中溫育5至7天。通過離心收集條件培養基,並且在純化前經過0.22μm膜過濾。按照製造商的指南,將含有鼠抗體的上清液施加並結合到蛋白A柱(Cat.No.:17127901,GE Life Sciences)上。將蛋白A-親和純化抗體用PBS透析或使用HiLoad 16/60 Superdex200柱(Cat.No.:17531801,GE Life Sciences)進一步純化以除去聚集體。蛋白質濃度通過量測在280nm的吸光度確定。將最終抗體製劑以等分試樣儲存在-80℃冰箱中。
實例2. Tim-3抗體的克隆和序列分析
收穫鼠雜交瘤細胞以基於製造商的方案使用Ultrapure RNA套組(Cat.No.:74104,QIAGEN,Germany)製備總RNA。第一股cDNA使用來自Invitrogen(Cat.No.:18080-051)的cDNA合成套組合成,鼠mAb的Vh和Vk基因的PCR擴增使用PCR套組(Cat.No.:CW0686,CWBio,Beijing,China)進行。基於先前報道的序列(Brocks et al.,2001 Mol Med 7:461)合成用於重鏈可變區(Vh)和κ輕鏈可變區(Vk)的抗體cDNA克隆的寡聚引子。然後將PCR產物亞克隆至pEASY-Blunt克隆載體(Cat.No.:CB101-02,TransGen,China)並測序。從DNA測序結果中推斷Vh和Vk區的胺基酸序列。
鼠mAb通過比較序列同源性分析,並基於序列相似性分組(圖2)。互補決定區(CDR)基於Kabat(Wu and Kabat,1970,J.Exp.Med.132:211-250)和IMGT(Lefranc,1999,Nucleic Acids Research 27:209-212)系統通過序列標注並通過基於互聯網的序列分析(http://www.imgt.org/IMGT_vquest/share/textes/index.html)來定義。代表性頂部克隆mu425(Vh和Vk)的胺基酸序列列於下表1(SEQ ID NO.9和11)。mu425的CDR序列列於下表2(SEQ ID NO 3-8)。
實例3. 通過SPR進行純化鼠抗Tim-3抗體的親和力測定
在ELISA和FACS中具有高結合活性,以及在基於細胞的測定(實例7和8所述)中具有強大功能活性的Tim-3抗體通過SPR測定使用BIAcoreTM T-200(GE Life Sciences)來表徵它們的結合動力學。簡言之,將抗人IgG抗體固定
在活化的CM5生物傳感器芯片(Cat.No.:BR100530,GE Life Sciences)上。使人帶Fc標簽的Tim-3 IgV結構域流過芯片表面並且被抗人IgG抗體捕獲。然後使連續稀釋的純化的鼠抗體流過芯片表面,並且分析表面等離子體共振信號的變化以通過使用一對一Langmuir結合模型(BIA Evaluation Software,GE Life Sciences)計算結合速率(k on)和解離速率(k off)。以k off/k on的比率計算平衡解離常數(K D)。包括mu425、mu44、mu225和mu411的頂部mAb的結合親和力概況示於表3。
實例4. 鼠抗人Tim-3 mAb mu425的人源化
mAb人源化和工程改造
為了mu425的人源化,通過爆破IMGT(http://www.imgt.org/IMGT_vquest/share/textes/index.html)和NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)網站的人免疫球蛋白基因資料庫搜索與mu425可變區的cDNA序列具有高度同源性的人種系IgG基因的序列。選擇存在于高頻率的人抗體庫(human antibody repertoires)(Glanville,2009,PNAS 106:20216-20221)並且與mu425高度同源的人IGVH和IGVK基因作為人源化的模板。在人源化之前,將mu425重鏈和輕鏈可變區分別融合至稱為人IgG1mf(SEQ ID NO.21)的經修飾人IgG1恒定區和人κ恒定區。IgG1mf(SEQ ID NO:21)是IgG1突變異體,其與野生型人IgG1比較含有突變E233P、L234A、L235A、L236△和P329A(基
於EU系統的胺基酸編碼)的組合。
人源化通過CDR移植(Methods in Molecular Biology,Vol 248:Antibody Engineering,Methods and Protocols,Humana Press)進行,並且人源化抗體(hu425s)以人IgG1形式工程改造。在人源化的初始循環中,從鼠到人框架區的胺基酸殘基的突變通過模擬3D結構來指導,並且用於保持CDR的典範結構(canonical structure)的結構重要性的鼠框架殘基被保留在人源化抗體425,hu425-1-1(在SEQ ID NO.22和24中設定重鏈和輕鏈的胺基酸序列)的第一版本中。具體地,將mu425 Vk的CDR移植到保留(在SEQ ID NO.19中設定輕鏈可變結構域的胺基酸序列)4個鼠框架殘基(D1、L4、V62和D74)的人種系可變基因IGVK3-15的框架中。將mu425 Vh的CDR移植到保留(在SEQ ID NO.17中設定重鏈可變結構域的胺基酸序列)1個鼠框架(C78)殘基的人種系可變基因IGVH3-7的框架中。
使用內部開發的表現載體以人全長抗體形式構建Hu425-1-1,所述表現載體分別含有稱為IgG1mf(SEQ ID NO.21)的人IgG1變異體的恒定區和κ鏈,具有容易適應的亞克隆位點。hu425-1-1抗體的表現和製備通過將上述兩個構建體共轉染到293G細胞中並通過使用蛋白A柱(Cat.No.:17543802,GE Life Sciences)的純化來實現。將純化的抗體在PBS中濃縮至0.5-5mg/mL,並且以等分試樣儲存在-80℃冰箱中。
基於hu425-1-1模板,吾等製備了許多將Vk框架區中保留的鼠殘基轉化成相應的人種系殘基的單突變,其中包括Vk的D1E,L4M,V62I和D74E。所得hu425-1-2a(D1E)、hu425-1-2b(L4M)、hu425-1-2c(V62I)和hu425-1-2d(D74E)均具有與hu425-1-1相似的結合和功能活性。為了進一步改善重鏈的人源化水準,吾等還將保留的殘基C78和來自鼠序列的H-CDR2(Kabat的定義)的C末端部分改為相應的人種系殘基。3種人源化抗體的規格是hu425-2A-1(Vh的F59Y)、
hu425-2R-1(Vh的P60V)和hu425-2C-1(Vh的C78L)。所有人源化突變使用在特定位置含有突變的引子和定點突變套組(Cat.No.FM111-02,TransGen,Beijing,China)製備。所需突變通過序列分析驗證。此等hu425變異體抗體在前述結合和功能測定中測試。與hu425-1-1相比,hu425-2B-1具有顯著降低的結合親和力和功能性(未顯示資料),而hu425人源化變異體的其餘版本具有與hu425-1-1相似的結合和功能活性。
Hu425抗體通過在CDR和框架區中引入突變來進一步工程改造,以改善人類治療用途的分子生化和生物物理性質。考慮因素包括胺基酸組成、熱穩定性(Tm)、表面疏水性和等電點(pIs),同時保持功能活性。
總之,兩種精心設計的人源化單克隆抗體的版本,hu425-2-2(在SEQ ID NO.28和30中設定重鏈和輕鏈可變區的胺基酸序列)和hu425-2-3b(在SEQ ID NO.28和36中設定重鏈和輕鏈可變區的胺基酸序列)源於上述突變過程,並且被詳細表徵。hu425-2-2和hu425-2-3b兩者均包含H-CDR2(SEQ ID NO:26)和L-CDR3(SEQ ID NO:27)的突變。重鏈/輕鏈可變區的胺基酸序列和hu425-2-2和hu425-2-3b的6個CDR列於下表4和表5。結果顯示bu425-2-3b和hu425-2-2兩者在結合親和力和功能活性,諸如抑制Tim-3介導的下游信號傳導方面非常相似。
對於親和力測定,來自hu425 mAb系列的Fab使用Pierce Fab製備套組(Cat.No.44985,ThermoFisher Scientific)製備,並且用於基於表面等離子共振(SPR)技術的親和力-測定。抗Tim-3 Fab抗體的SPR測定結合概況的結果匯總於表6。hu425-2-2和hu425-2-3b的Fab具有非常相似的結合概況,平均解離常數分別為0.419nM和0.361nM,其與hu425-1-1的平均解離常數接近。
還證實了上面顯示的所有人源化抗體在來自健康供體的原代人免疫細胞上的功能活性。
實例5. 通過SPR進行抗Tim-3抗體的親和力比較
Hu425-2-3b和兩種已知的Tim-3抗體,Ab1(包含SEQ ID NO:40的重鏈可變區和SEQ ID NO:41的輕鏈可變區)和Ab2(包含SEQ ID NO:42的重鏈可變區和SEQ ID NO:43的輕鏈可變區),以帶有S228P突變的人IgG4形式產生,並且通過使用BIAcoreTM T-200(GE Life Sciences)的SPR測定表徵它們的結合動力學。
簡言之,將抗人Fab抗體固定在活化的CM5生物傳感器芯片(Cat.:BR100530,GE Life Sciences)上。使抗Tim-3流過芯片表面並且被抗人Fab抗體捕獲。然後使連續稀釋(0.12nM至30nM)的Tim-3-his流過芯片表面,並且分析表面等離子共振信號的變化以通過使用一對一Langmuir結合模型(BIA Evaluation Software,GE Life Sciences)計算結合速率(k on)和解離速率(k off)。以k off/k on的比率計算平衡解離常數(K D)。Hu425-2-3b、Ab1和Ab2展現出相當的結合親和力。抗體
hu425-2-3b以與納摩爾KD劑量相關方式特異性結合Tim-3。
實例6. mu425/hu425 CDR對Tim-3結合的貢獻
在人源化過程中,產生來自hu425-1-1的具有胺基酸突變的幾個變異體。如圖3所示,兩種這樣的突變變異體幾乎完全消除了與Tim-3的結合,但是在重鏈的CDR3中各自僅具有中性(化學相似的)胺基酸取代,D102E(mAb稱為hu425-2E-1)和G103A(稱為hu425-2F-1)。彼等發現支持了mu425人源化抗體中重鏈的CDR3對Tim-3結合功能具有顯著貢獻的觀點。
另一態樣,mu425/hu425輕鏈的CDR1和CDR2與小鼠種系基因IGKV3-1相同。還發現幾個鼠抗體在它們的輕鏈可變區中含有相同的鼠種系CDR1和CDR2序列,例如Ab2000(美國專利No.7,989,597)和mAb 1G5(美國專利No.7,563,874)。吾等研究了此等抗體是否還可結合Tim-3。為此,Ab2000和1G5以人IgG1mf形式產生,並且通過ELISA對Tim-3-mIg結合進行評價。如圖4所示,與hu425-2-3b相比,Ab2000或1G5均不能產生任何Tim-3結合信號。因此,鼠種系基因IGKV3-1的CDR1和CDR2對Tim-3結合不充分。
為了進一步評價CDR對Tim-3結合的貢獻,通過抗體hu425-2-3b和抗體Ab1彼此交換重鏈和輕鏈產生兩種雜交抗體。hu425-2-3b和Ab1兩者是源於小鼠的抗Tim-3,並且它們與小鼠種系IGKV3-1中的彼等共用相同的L-CDR1和L-CDR2。共表現hu425-2-3b的重鏈和Ab1的輕鏈以產生雜交抗體425 HC/Ab1
LC,而雜交抗體Ab1 HC/425 LC通過共表現Ab1的重鏈和hu425-2-3b的輕鏈來製備。雜交抗體的結合活性通過生物膜干涉(BioLayer Interferometry)(ForteBio Octet)來分析。雜交抗體通過蛋白A吸頭捕獲,然後浸入Tim-3-his溶液用於BLI結合信號分析。觀察到Ab1 HC/425 LC保留Tim-3結合能力,而捕獲的425 HC/Ab1 LC未能產生顯著的結合信號。這表明hu425-2-3b的LC-CDR3是其與Tim3結合所需的,而其L-CDR1和L-CDR2對結合Tim3是不充分的,或可能不是結合Tim3所需的。
實例7. 通過抗Tim-3抗體阻斷Tim-3介導的吞噬作用
已經顯示出Tim-3經其IgV結構域結合磷酯醯絲胺酸(PtdSer),並介導凋亡細胞的吞噬作用(De Kruyff et al.,J.Immunol,2010,184:1918-1930;Nakayama et al.,Blood,2009,113:3821-3830)。PtdSer是磷脂,其被限制在正常哺乳動物細胞中質膜的內葉,但是暴露在凋亡細胞的外表面上。PtdSer通過阻礙免疫響應參與腫瘤微環境的免疫抑制(Fadok et al.,J Clin Invest,1998,101:890-898;Frey et al.,Semin Immunopathol.,2011,33:497-516)。抗Tim-3抗體的體內施用導致凋亡細胞的清除減少,增加局部炎症並破壞免疫耐受,這表明PtdSer-Tim-3軸參與體內免疫抑制(Chabtini et al.,J.Immunol 190:88-96,2013;Nakayama et al.,Blood 113:3821-30,2009)。
為了確定抗Tim-3抗體是否能阻斷Tim-3介導的吞噬作用,基於細胞的測定使用傳感器和功能性讀數細胞株THP-1/Tim-3,即使用全長Tim-3基因穩定轉染的THP-1(ATCC,人單核細胞細胞株)來建立。在該測定中,通過使用2%乙醇過夜處理而誘導HuT78(ATCC)經受有限的凋亡,接著根據製造商的說明使用CFSE染料(Invitrogen,1μM)標記。然後,THP-1/Tim-3細胞與CFSE標記的凋亡HuT78細胞在抗Tim-3人源化抗體的存在下共同培養6小時。Tim-3介導的吞噬作用被確定為CFSE+THP-1/Tim-3與總THP-1/Tim-3細胞(門控CD3-群體)的百分
比。如圖5所示,hu425-2-3b劑量依賴性地抑制THP-1/Tim-3細胞對凋亡HuT78細胞的吞噬作用。
實例8. 通過與T細胞接合物表現腫瘤細胞共培養的原代人PBMC中的抗Tim-3抗體活化IFN-γ分泌
據報道,Tim-3和PD-1兩者都是在活化的T細胞中表現的抑制性受體,其可能起到誘導T細胞耗竭的作用(Anderson AC.et al.,2016,Immunity 44:989-1004)。來自癌症患者的Tim-3+ CD4和CD8 T細胞實際上比Tim-3- T細胞分泌更少的Th1細胞因子IFN-γ(Arai Y.et al.,2012,Yonago Acta medica 55:1-9;Xu B,et al.,2015,Oncotarget 6:20592-603)。
吾等已經在人PBMC中使用抗CD3 mAb OKT3活化的T細胞探索了Tim-3和抗Tim-3抗體的功能。外周血單核細胞(PBMC)使用Histopaque-1077(Cat.No.:10771,Sigma)用密度梯度離心方案從健康供體中分離。測定前的三天,PBMC使用40ng/mL抗CD3 mAb OKT3(Cat.No.:16-0037,eBioscience,USA)刺激以擴增用作效應物細胞的CD3+ T細胞。基於美國專利No.8,735,553所述的方法,稱為A549/OS8的靶細胞是使用T細胞接合物(engager)(OS8)穩定轉染的肺癌細胞株A549(ATCC)。OS8在N末端結構域含有抗人CD3 mAb OKT3的scFv,其直接與TCR/CD3複合物作用並活化T細胞。效應物細胞PBMC與絲裂黴素C短暫處理的A549/OS8靶細胞共同培養以模擬在TCR/CD3複合物接合時活化的T細胞對腫瘤細胞的響應。測定在96孔平底板中存在或缺乏抗Tim-3抗體下進行。在共同培養15-18小時後,培養上清液通過使用Ready-Set-Go!ELISA套組(Cat.No.:88-7316,eBiosciences)的ELISA來測定IFN-γ水準。如圖6所示,當A549/OS8靶細胞與效應物細胞共同培養時,抗Tim-3抗體(ch425和hu425-1-1)誘導效應物細胞中增加的IFN-γ分泌。
實例9. 通過抗Tim-3抗體活化CMV特異性人T細胞
Tim-3抗體的功能活性使用天然來源的識別人CMV PP65肽(NLVPMVATV,495-503,HLA-A2.1-限制性的)(Boeckh M,Boeckh M and Geballe AP,2011,J Clin Invest.121:1673-80)的T細胞進一步評估。簡言之,來自健康供體的PBMC首先通過使用抗HLA-A2 mAb的FACS篩選。然後在含有10% FBS的完全RPMI中,使用PP65肽(>98%純度,由GL Biochem,Shanghai合成)模擬HLA-A2+ PBMC一周。
靶細胞株A549/A2.1通過HLA-A2.1的穩定轉染來建立。在絲裂黴素-c(100μg/ml)處理和pp65肽(5μg/ml)脈衝30分鐘後,在存在或缺乏抗Tim-3抗體或對照下,A549/A2.1細胞(104)與96孔板中的相等數量的pp65敏化PBMC共同培養過夜。培養上清液中的IFN-γ通過ELISA確定。所有條件一式三份進行。如圖7所示,hu425-2-3b促進pp65特異性T細胞將IFN-γ分泌到細胞培養上清液中。
實例10. 抗Tim-3抗體增強NK細胞介導的細胞毒性
已知Tim-3以相對高的水準在自然殺傷(NK)細胞上組成性表現(Ndhlovu LC,et al.,2012,Blood 119:3734-43;da Silva IP,et al.,2014,Cancer Immunol Res.2:410-22)。在黑素瘤中,發現在NK細胞上的較高Tim-3表現與晚期腫瘤階段和預後差相關。此外,NK細胞功能似乎受Tim-3活性影響(da Silva IP,et al.,2014,Cancer Immunol Res.2:410-22)。
為了證實人源化抗Tim-3抗體是否能夠促進NK介導的細胞毒性,原代NK細胞根據製造商的說明使用來自Miltenyi Biotec(德國)的NK細胞分離套組從健康供體的PBMC中分離。在使用人IL-2(1000U/ml)刺激一天后,NK細胞與K562細胞在37℃在抗Tim-3抗體、佈雷菲德菌素A(brefeldin A)和抗CD107a-APC(eBioscience)的存在下共同培養5小時。CD3-CD56+ NK細胞上的CD107a表現通過流式細胞儀定量。結果顯示抗Tim-3抗體hu425-2-3b增加了通過平均熒光強度(MFI)和細胞數的百分比量測的CD107a表現(圖8)。
實例11. 抗Tim-3抗體降低Tim-3受體的表面表現
為了解決包括hu425-2-3b的Tim-3內化的可能性,首先在完全RPMI1640培養基中,將來自健康供體的NK細胞與hu425-2-3b(10μg/mL)在37℃或4℃溫育1小時。Tim-3受體的表面表現通過使用非競爭性Tim-3 Ab mu420(內部產生的)染色,接著使用山羊抗小鼠IgG-APC(Biolegend)染色來確定。如圖9所示,與陰性對照經人IgG處理的細胞相比,hu425-2-3b在37℃引起Tim-3表面表現的顯著降低。降低可能是由於抗Tim-3抗體誘導的受體內化,因為它在短時間內表現出明顯的溫度依賴。結果明顯表現出hu4-25-2-3b誘導的Tim-3受體的下調,可能歸因於Tim-3的內化。通過誘導Tim-3內化,預期hu425-2-3b將降低Tim-3與其多種配位體(諸如半乳凝集素-9和PtdSer)的相互作用。
實例12. 抗Tim-3抗體展現增加的內化率
為了進一步研究抗體的內化,在不同時間點(1、3、5和18小時)使用Tim-3表現NK細胞株(NK92MI/huTim-3)確定抗Tim-3抗體誘導的內化。簡言之,將抗Tim-3抗體(10μg/ml),其包括hu425-2-3b、Ab1和Ab2,在37℃或4℃與NK92MI/huTim-3(5x104)一起溫育18小時。Tim-3受體的表面表現通過使用山羊抗人IgG-FITC染色來確定。內化的%被計算為在37°的Tim-3表面表現與在4℃的表現水準相比的降低(%)。如圖10所示,在更短溫育(1-5小時)過程中,hu425-2-3b誘導與Ab1和Ab2相當的Tim-3內化水準。在溫育18小時後,確實表現出比Ab1和Ab2兩者都顯著持久的內化,這表明hu425-2-3b對Tim-3內化的持久活性。
實例13. 人源化抗Tim-3 mAb單獨和與PD-1 mAb組合刺激免疫細胞
已經報道了免疫抑制性受體PD-1和Tim-3在患有晚期腫瘤和慢性病毒傳染的患者中的“功能失調”腫瘤抗原特異性CD8+ T細胞中上調(Fourcade J,et al.,2010,J Exp Med.207:2175-86;Thommen DS,et al.,2015,Cancer Immunol Res.3:1344-55;Jin HT,et al.,2010,Proc Natl Acad Sci USA.107:14733-8)。同時阻
斷PD-1和Tim-3受體兩者可擴大疫苗誘導的NY-ESO-1特異性CD8+ T細胞(Fourcade J.,et al.,2014,Cancer Res.74:1045-55)。建立習知T細胞響應測定,混合淋巴細胞反應(MLR)以通過抗Tim-3和抗PD-1抗體表徵潛在的共刺激效應。簡言之,“刺激物(stimulator)PBMC”使用絲裂黴素c(100μg/ml,Sigma)預處理,並且與不同供體的“響應物(responder)PBMC”以1:1的比例在具有10% AB血清(Sigma)和抗Tim-3和/或抗PD-1 mAb 317-4B6(也稱為hu317-4B6、317-4B6/IgG4mt10,述於美國專利申請No.8,735,553)的完全RPMI1640培養基中共同培養。反應在96孔平底板中進行4天,每個條件一式三份資料點設置。細胞培養上清液中的IFN-γ分泌作為讀數進行分析。
結果顯示hu425-2-3b劑量依賴性地顯著增強MLR中的IFN-γ產生。hu425-2-3b與317-4B6(50ng/ml)的組合導致IFN-γ產生的增加高於單獨的hu425-2-3b或抗PD-1抗體,這表明抗Tim-3 mAb與抗PD-1 mAb的共同刺激作用(圖11)。
絲裂黴素C預處理的“刺激物PBMC”與“響應物PBMC”在96孔平底板中在抗Tim-3 mAb、hu425-2-3b或hu425-2-3b加抗PD-1 Ab hu317-4b6(50ng/ml)的存在下共同培養4天。上清液中的IFN-γ通過ELISA確定。所有條件一式三份進行,結果以平均值+SD顯示。
實例14. Hu425-2-3b沒有ADCC和CDC效應物功能
hu425-2-3b誘導ADCC和CDC的能力使用下述體外測定來確定。IgG1mf(SEQ ID NO:21)是含有突變E233P、L234A、L235A、L236△和P329A(基於EU系統的胺基酸編號)的組合的IgG1突變異體。設計此等突變以消除Fc與所有FcγR以及C1q的結合。
ADCC(抗體依賴性細胞介導的細胞毒性)
設置經典的ADCC測定以確定hu425-2-3b是否能誘導ADCC。測
定效應物細胞株NK92MI/CD16V細胞通過共轉導含有CD16 V158 (V158等位基因)和FcRγ cDNA的表現質粒從NK92MI細胞(ATCC)產生。Tim-3表現T細胞株HuT78/Tim-3用作靶細胞。效應物細胞(4x104)在hu425-2-3b或對照抗體、陽性對照抗MHC-I A,B,C(Biolegend)或陰性對照人IgG的存在下與相等數量的靶細胞共培養5小時。細胞毒性通過乳酸脫氫酶(LDH)釋放測定使用CytoTox 96非放射性細胞毒性測定套組(Promega,Madison,WI)來確定。特異性裂解通過以下等式確定。
結果證實hu425-2-3b與陰性對照具有相同ADCC基礎水準,而抗MHC-I A,B,C以劑量依賴性方式誘導ADCC(圖12A)。
CDC(補體成賴性細胞毒性)
使用預活化的人PBMC和來自健康供體的新鮮自體血清確定hu425-2-3b是否會引發CDC。通過Celltiter glo測定套組(Promega,Beijing,China)確定CDC的細胞裂解。簡言之,將來自健康供體的PBMC用PHA(10μg/ml,Sigma)預活化3天,然後在37℃在RPMI1640加自體血清(15%)和hu425-2-3b或對照抗體(0.04-30μg/mL)中溫浴過夜。由CDC引起的細胞死亡是通過反應結束後的細胞裂解後從活細胞釋放的ATP的減少來測定的。抗MHC-I A,B,C用作陽性對照。使用96孔熒光計(PHERA Star FS,BMG LABTECH)進行熒光讀數,並且如下從相對熒光單位(RFU)讀數計算CDC活性:%CDC活性=[(RFU測試-RFU背景)/(總細胞裂解的RFU-RFU背景)]×100。實驗結果表明,使用從兩個不同供體分離的PBMC,hu425-2-3b不具有可偵測的CDC。與之相比,陽性對照抗體抗MHC-I誘導顯著的CDC活性(圖12B)。
結果顯示,hu425-2-3b消除ADCC和CDC效應物功能,同時保持
最佳物理化學性質。
實例15. 抗Tim-3抗體與抗PD-1抗體組合抑制小鼠異種移植癌症模型中的腫瘤生長
通過異種移植癌症模型與抗PD-1抗體組合評價Tim-3抗體的潛在抗癌活性,其中免疫受損小鼠移植有人癌細胞和同種異體PBMC。簡言之,NOD/SCID小鼠在腫瘤接種前用環磷醯胺(150mg/kg)預處理2天。從健康志願者的外周血中分離人PBMC,與基質膠中的A431表皮樣癌細胞(Cat.No.CRL-1555,ATCC)混合,並將其皮下注射到動物中。從第0天開始,將動物隨機分成4組,每組5-10只小鼠。小鼠每週-次(QW)經腹膜內(i.p.)注射媒劑(PBS)、5mg/kg抗Tim-3 mAb嵌合體425(ch425)、抗PD-1抗體317-4B6(1mg/kg)或組合療法(5mg/kg ch425+1mg/k 317-4B6)治療4周。每週兩次記錄小鼠的腫瘤大小,在研究期間每天監測小鼠的臨床毒性指征。使用公式:[D×(d2)]/2計算腫瘤體積,其中D表示腫瘤的長直徑,d表示短直徑。所有動物研究均按照Beigene動物護理和使用程式進行。
如圖13所示,以5mg/kg的劑量單獨用ch425治療對腫瘤生長幾乎沒有影響或沒有影響。317-4B6在1mg/kg的劑量顯示腫瘤生長延遲趨勢,而無統計學顯著性(P>0.05)。然而,ch425和317-4B6的組合治療顯示顯著的協同效應,相對於媒劑治療組抑制腫瘤生長超過60%。
結果表明,ch425與317-4B6的組合療法可激活人免疫細胞以抑制小鼠體內癌症模型中的腫瘤生長,這與實例11中所述的體外資料一致。
<110> 英屬開曼群島商百濟神州有限公司(BeiGene,Ltd)
<120> 抗Tim-3抗體及其用途
<140> TW 106129066
<141> 2017-08-25
<150> PCT/CN2016/096924
<151> 2016-08-26
<160> 43
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 301
<212> PRT
<213> 人
<210> 2
<211> 202
<212> PRT
<213> 人
<210> 3
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠
<210> 6
<211> 15
<212> PRT
<213> 小鼠
<210> 7
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠
<210> 9
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠
<210> 10
<211> 357
<212> DNA
<213> 小鼠
<210> 11
<211> 111
<212> PRT
<213> 小鼠
<210> 12
<211> 333
<212> DNA
<213> 小鼠
<210> 13
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ch425重鏈pro
<210> 14
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ch425重鏈DNA
<210> 15
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ch425輕鏈pro
<210> 16
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ch425輕鏈DNA
<210> 17
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-1-1 VH pro
<210> 18
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-1-1 VH DNA
<210> 19
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-1-1 VK pro
<210> 20
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-1-1 VK DNA
<210> 21
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG1mf pro
<210> 22
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-1-1重鏈pro
<210> 23
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-1-1重鏈DNA
<210> 24
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-1-1輕鏈pro
<210> 25
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-1-1輕鏈DNA
<210> 26
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-2-2 HCDR2
<210> 27
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-2-2 LCDR3
<210> 28
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-2-2 VH pro
<210> 29
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-2-2 VH DNA
<210> 30
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-2-2 VK pro
<210> 31
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-2-2 VK DNA
<210> 32
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-2-2重鏈pro
<210> 33
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-2-2重鏈DNA
<210> 34
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-2-2輕鏈pro
<210> 35
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-2-2輕鏈DNA
<210> 36
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-2-3b VK pro
<210> 37
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-2-3b VK DNA
<210> 38
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-2-3b輕鏈pro
<210> 39
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> hu425-2-3b輕鏈DNA
<210> 40
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列
<210> 41
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列
<210> 42
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列
<210> 43
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列
Claims (17)
- 一種能夠結合人Tim-3的抗體,其包含:重鏈可變區(VH),其包含SEQ ID NO 3的VH-CDR1胺基酸序列,SEQ ID NO 26的VH-CDR2胺基酸序列和SEQ ID NO 5的VH-CDR3胺基酸序列;和輕鏈可變區(VL),其包含SEQ ID NO 6的VL-CDR1胺基酸序列,SEQ ID NO 7的VL-CDR2胺基酸序列和SEQ ID NO 27的VL-CDR3胺基酸序列。
- 如請求項1的抗體,其中所述抗體包含:(i)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 36的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域;或(ii)與SEQ ID NO 28的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變結構域,和與SEQ ID NO 30的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域。
- 如請求項1的抗體,其中所述抗體包含:(i)包含SEQ ID NO 28的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 36的胺基酸序列的輕鏈可變結構域;或(ii)包含SEQ ID NO 28的胺基酸序列的重鏈可變結構域,和包含SEQ ID NO 30的胺基酸序列的輕鏈可變結構域。
- 如請求項1的抗體,其中所述抗體是Fab、F(ab’)2、Fv或單鏈Fv(ScFv)。
- 如請求項1的抗體,其中所述抗體包含亞類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其變異體的重鏈恒定區,和κ或λ型的輕鏈恒定區或其變異體。
- 如請求項5的抗體,其中所述抗體包含亞類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的變異體重鏈恒定區,其中所述變異體重鏈恒定區提供減少或消除的效應物功能。
- 如請求項6的抗體,其中所述效應物功能是抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)或補體依賴性細胞毒性(CDC)。
- 如請求項5的抗體,其中所述抗體包含人IgG1的重鏈恒定區或其變異體。
- 如請求項8的抗體,其中所述變異體人IgG1的重鏈恒定區包含一種或多種選自下組的突變:E233P、L234A、L235A、L236△和P329A。
- 如請求項9的抗體,其中所述變異體人IgG1重鏈恒定區包含SEQ ID NO 21的胺基酸序列,和人IgG1 κ輕鏈恒定區。
- 一種醫藥組合物,其包含請求項1-10中任一項的抗體,和醫藥上可接受之賦形劑。
- 一種如請求項1-10中任一項的抗體在製備用於供治療癌症或腫瘤或感染性疾病的方法中使用的藥物中的用途,所述方法包括以有效治療癌症或腫瘤或感染性疾病的量向有此需要的個體施用請求項1-10中任一項的抗體。
- 如請求項12的用途,其中所述癌症選自肺癌、肝癌、胃癌、宮頸癌、黑素瘤、腎癌、乳腺癌、結直腸癌、白血病、淋巴瘤、卵巢癌、頭頸癌或癌症的轉移病灶。
- 如請求項12的用途,其中所述抗體與第二治療劑或操作組合施用,其中所述第二治療劑或操作選自化學療法、靶向療法、溶瘤藥物、細胞毒劑、基於免疫的療法、細胞因子、外科手術、放射操作、協同刺激分子的活化劑、抑 制性分子的抑制劑、疫苗或細胞免疫療法。
- 如請求項12的用途,其中所述抗體與選自PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、LAG-3、CEACAM-1、CEACAM-5、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4或TGFR的免疫檢查點分子的抑制劑組合施用。
- 如請求項12的用途,其中所述抗體與抗PD-1 mAb 317-4B6或317-4B6/IgG4mt10組合施用。
- 如請求項12的用途,其中所述感染性疾病是選自HIV感染和HCV感染的慢性病毒感染。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
WOPCT/CN2016/096924 | 2016-08-26 | ||
CN2016096924 | 2016-08-26 | ||
??PCT/CN2016/096924 | 2016-08-26 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW201819414A TW201819414A (zh) | 2018-06-01 |
TWI769174B true TWI769174B (zh) | 2022-07-01 |
Family
ID=61246369
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW106129066A TWI769174B (zh) | 2016-08-26 | 2017-08-25 | 抗tim-3抗體及其用途 |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US11203637B2 (zh) |
EP (2) | EP3504243B1 (zh) |
JP (2) | JP6968872B2 (zh) |
KR (1) | KR102460525B1 (zh) |
CN (3) | CN116655790A (zh) |
AU (1) | AU2017317227B2 (zh) |
BR (1) | BR112019003976A2 (zh) |
CA (1) | CA3034962A1 (zh) |
EA (1) | EA201990594A1 (zh) |
IL (1) | IL264970B1 (zh) |
MX (1) | MX2019002242A (zh) |
NZ (1) | NZ751246A (zh) |
SG (2) | SG10201912199XA (zh) |
TW (1) | TWI769174B (zh) |
WO (1) | WO2018036561A1 (zh) |
ZA (1) | ZA201901113B (zh) |
Families Citing this family (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BR112016005408B1 (pt) * | 2013-09-13 | 2023-03-21 | Beigene Switzerland Gmbh | Anticorpos anti-pd1, f(ab) ou f(ab)2 e uso referido anticorpo para tratamento de cancer ou infecção viral |
EP3160505A4 (en) | 2014-07-03 | 2018-01-24 | BeiGene, Ltd. | Anti-pd-l1 antibodies and their use as therapeutics and diagnostics |
CN109475536B (zh) | 2016-07-05 | 2022-05-27 | 百济神州有限公司 | 用于治疗癌症的PD-l拮抗剂和RAF抑制剂的组合 |
CN109757103B (zh) | 2016-07-14 | 2024-01-02 | 百时美施贵宝公司 | 针对tim3的抗体及其用途 |
CN110087680B (zh) | 2016-08-19 | 2024-03-19 | 百济神州有限公司 | 使用包含btk抑制剂的组合产品治疗癌症 |
MX2019002242A (es) | 2016-08-26 | 2019-08-16 | Beigene Ltd | Anticuerpos anti-tim-3 y uso de los mismos. |
CN110062885A (zh) | 2016-11-01 | 2019-07-26 | 安奈普泰斯生物有限公司 | 针对t细胞免疫球蛋白和粘蛋白3(tim-3)的抗体 |
AU2018205401A1 (en) | 2017-01-09 | 2019-07-25 | Tesaro, Inc. | Methods of treating cancer with anti-TIM-3 antibodies |
WO2019001417A1 (en) | 2017-06-26 | 2019-01-03 | Beigene, Ltd. | IMMUNOTHERAPY FOR HEPATOCELLULAR CARCINOMA |
AU2018316166A1 (en) | 2017-08-07 | 2020-02-06 | The Regents Of The University Of California | Platform for generating safe cell therapeutics |
CN111801334B (zh) | 2017-11-29 | 2023-06-09 | 百济神州瑞士有限责任公司 | 使用包含btk抑制剂的组合治疗惰性或侵袭性b-细胞淋巴瘤 |
WO2019179420A1 (en) * | 2018-03-20 | 2019-09-26 | Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. | Novel anti-tim-3 antibodies |
TW202003565A (zh) | 2018-03-23 | 2020-01-16 | 美商必治妥美雅史谷比公司 | 抗mica及/或micb抗體及其用途 |
US11807683B2 (en) | 2018-04-12 | 2023-11-07 | Nanjing Leads Biolabs Co., Ltd. | Antibody binding TIM-3 and use thereof |
MX2021001516A (es) * | 2018-08-20 | 2021-04-19 | Jiangsu Hengrui Medicine Co | Uso del anticuerpo tim-3 en la preparacion de medicamentos para el tratamiento de tumores. |
KR20210045999A (ko) * | 2018-08-21 | 2021-04-27 | 앨버트 아인슈타인 컬리지 오브 메디신 | 인간 Tim-3에 대한 모노클로날 항체 |
KR20220016156A (ko) | 2019-05-30 | 2022-02-08 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 면역-종양학 요법에의 적합성을 위한 다종양 유전자 시그너쳐 |
EP3976832A1 (en) | 2019-05-30 | 2022-04-06 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy |
WO2020243570A1 (en) | 2019-05-30 | 2020-12-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Cell localization signature and combination therapy |
US20230279105A1 (en) * | 2019-06-21 | 2023-09-07 | Single Cell Technology, Inc. | Anti-tim-3 antibodies |
CN110498855A (zh) * | 2019-07-25 | 2019-11-26 | 钟小泉 | 一种tim-3抗体及其用途 |
BR112022008184A2 (pt) * | 2019-11-21 | 2022-07-12 | Beigene Ltd | Métodos de tratamento do câncer e para aumentar, potencializar ou estimular uma resposta ou função imune |
CN111995681B (zh) * | 2020-05-09 | 2022-03-08 | 华博生物医药技术(上海)有限公司 | 抗tigit的抗体、其制备方法和应用 |
WO2022047412A1 (en) | 2020-08-31 | 2022-03-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Cell localization signature and immunotherapy |
WO2022120179A1 (en) | 2020-12-03 | 2022-06-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Multi-tumor gene signatures and uses thereof |
JP2024503265A (ja) | 2020-12-28 | 2024-01-25 | ブリストル-マイヤーズ スクイブ カンパニー | 抗体組成物およびその使用の方法 |
MX2023007650A (es) | 2020-12-28 | 2023-09-11 | Bristol Myers Squibb Co | Metodos de tratamiento de tumores. |
CN112940127A (zh) * | 2021-03-12 | 2021-06-11 | 北京广未生物科技有限公司 | 骨髓间充质干细胞联合单克隆抗体治疗癌症中的用途 |
EP4314068A1 (en) | 2021-04-02 | 2024-02-07 | The Regents Of The University Of California | Antibodies against cleaved cdcp1 and uses thereof |
EP4326773A1 (en) * | 2021-04-23 | 2024-02-28 | Suzhou Neologics Bioscience Co., Ltd. | Tim-3-targetting antibodies and uses thereof |
WO2023178329A1 (en) | 2022-03-18 | 2023-09-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of isolating polypeptides |
WO2023235847A1 (en) | 2022-06-02 | 2023-12-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibody compositions and methods of use thereof |
WO2024041651A1 (en) * | 2022-08-25 | 2024-02-29 | Beigene, Ltd. | Methods of cancer treatment using anti-pd1 antibodies in combination with anti-tim3 antibodies and anti-lag3 antibodies |
WO2024041652A1 (en) * | 2022-08-25 | 2024-02-29 | Beigene, Ltd. | Methods of cancer treatment |
WO2024044675A1 (en) | 2022-08-25 | 2024-02-29 | Beigene, Ltd. | Methods of cancer treatment using anti-pd1 antibodies in combination with anti-tim3 antibodies |
WO2024184812A1 (en) | 2023-03-06 | 2024-09-12 | Beigene Switzerland Gmbh | Anti-cldn6 antibodies and methods of use |
WO2024184811A1 (en) | 2023-03-06 | 2024-09-12 | Beigene Switzerland Gmbh | Anti-cd3 multispecific antibodies and methods of use |
WO2024184810A1 (en) | 2023-03-06 | 2024-09-12 | Beigene Switzerland Gmbh | Anti-cldn6 and anti-cd3 multispecific antibodies and methods of use |
CN117777306B (zh) * | 2023-07-04 | 2024-08-20 | 深圳豪石生物科技有限公司 | 一种靶向cldn18.2的增强型嵌合抗原受体及其用途 |
CN117777307B (zh) * | 2023-09-26 | 2024-08-20 | 深圳豪石生物科技有限公司 | 一种cldn18.2特异性嵌合t细胞受体、嵌合t细胞受体免疫细胞及其应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TW201207397A (en) * | 2010-06-11 | 2012-02-16 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Anti-tim-3 antibody |
Family Cites Families (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4376110A (en) | 1980-08-04 | 1983-03-08 | Hybritech, Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
US7563874B2 (en) | 1998-08-31 | 2009-07-21 | The Regents Of The University Of California | Therapeutic monoclonal antibodies that neutralize botulinum neurotoxins |
EP1406653A4 (en) * | 2001-06-29 | 2005-05-04 | Univ Leland Stanford Junior | T-LYMPHOCYTE REGULATORY GENES AND METHODS OF USE |
CA2474497C (en) | 2002-01-30 | 2013-12-03 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Compositions and methods related to tim-3, a th1-specific cell surface molecule |
JP2011500730A (ja) | 2007-10-26 | 2011-01-06 | ガバニング カウンセル オブ ザ ユニバーシティ オブ トロント | Tim−3を用いた治療および診断方法 |
EP2303926A1 (en) | 2008-06-20 | 2011-04-06 | Oklahoma Medical Research Foundation | Immunogenic memapsin 2 -secretase peptides and methods of use |
US8841418B2 (en) | 2011-07-01 | 2014-09-23 | Cellerant Therapeutics, Inc. | Antibodies that specifically bind to TIM3 |
CN102492038B (zh) * | 2011-12-09 | 2014-05-28 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 | 抗人Tim-3的中和性单克隆抗体L3D及其用途 |
AU2014312310A1 (en) * | 2013-08-28 | 2016-04-07 | Abbvie Stemcentrx Llc | Novel SEZ6 modulators and methods of use |
BR112016005408B1 (pt) | 2013-09-13 | 2023-03-21 | Beigene Switzerland Gmbh | Anticorpos anti-pd1, f(ab) ou f(ab)2 e uso referido anticorpo para tratamento de cancer ou infecção viral |
CN103721255A (zh) | 2014-01-07 | 2014-04-16 | 苏州大学 | 共同阻断pd-1和tim-3信号通路在抗胃癌治疗中的用途 |
JOP20200096A1 (ar) * | 2014-01-31 | 2017-06-16 | Children’S Medical Center Corp | جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها |
EP3160505A4 (en) * | 2014-07-03 | 2018-01-24 | BeiGene, Ltd. | Anti-pd-l1 antibodies and their use as therapeutics and diagnostics |
AU2015340056A1 (en) * | 2014-10-27 | 2017-05-25 | Agency For Science, Technology And Research | Anti-TIM-3 antibodies |
LT3215532T (lt) | 2014-11-06 | 2020-01-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-tim3 antikūnai ir jų naudojimo būdai |
MX2019002242A (es) | 2016-08-26 | 2019-08-16 | Beigene Ltd | Anticuerpos anti-tim-3 y uso de los mismos. |
-
2017
- 2017-08-25 MX MX2019002242A patent/MX2019002242A/es unknown
- 2017-08-25 BR BR112019003976A patent/BR112019003976A2/pt unknown
- 2017-08-25 EA EA201990594A patent/EA201990594A1/ru unknown
- 2017-08-25 US US16/328,047 patent/US11203637B2/en active Active
- 2017-08-25 SG SG10201912199XA patent/SG10201912199XA/en unknown
- 2017-08-25 IL IL264970A patent/IL264970B1/en unknown
- 2017-08-25 EP EP17842983.3A patent/EP3504243B1/en not_active Withdrawn - After Issue
- 2017-08-25 EP EP21190971.8A patent/EP3970749A1/en active Pending
- 2017-08-25 AU AU2017317227A patent/AU2017317227B2/en active Active
- 2017-08-25 SG SG11201901548SA patent/SG11201901548SA/en unknown
- 2017-08-25 CN CN202310121523.0A patent/CN116655790A/zh active Pending
- 2017-08-25 CN CN202310121525.XA patent/CN116478290A/zh active Pending
- 2017-08-25 NZ NZ751246A patent/NZ751246A/en unknown
- 2017-08-25 KR KR1020197007868A patent/KR102460525B1/ko active IP Right Grant
- 2017-08-25 WO PCT/CN2017/099098 patent/WO2018036561A1/en unknown
- 2017-08-25 CA CA3034962A patent/CA3034962A1/en active Pending
- 2017-08-25 JP JP2019511565A patent/JP6968872B2/ja active Active
- 2017-08-25 CN CN201780052246.5A patent/CN109790218B/zh active Active
- 2017-08-25 TW TW106129066A patent/TWI769174B/zh active
-
2019
- 2019-02-21 ZA ZA2019/01113A patent/ZA201901113B/en unknown
-
2021
- 2021-10-27 JP JP2021175867A patent/JP7158552B2/ja active Active
- 2021-11-15 US US17/526,817 patent/US20220135675A1/en not_active Abandoned
-
2023
- 2023-09-27 US US18/475,552 patent/US20240076375A1/en active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TW201207397A (en) * | 2010-06-11 | 2012-02-16 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Anti-tim-3 antibody |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
TWI769174B (zh) | 抗tim-3抗體及其用途 | |
TWI816729B (zh) | 抗tigit抗體及其作為治療和診斷的用途 | |
JP7345578B2 (ja) | 新規抗pd-l1抗体 | |
JP2022130393A (ja) | 抗ctla4-抗pd-1二機能性抗体、その医薬組成物および使用 | |
JP2023528036A (ja) | Tigitに対する抗体 | |
TWI850696B (zh) | 抗Tim-3抗體及其用途 | |
CN114641500B (zh) | 使用抗ox40抗体与抗tim3抗体的组合治疗癌症的方法 | |
WO2023040940A1 (zh) | Pvrig/tigit结合蛋白联合免疫检查点抑制剂用于治疗癌症 | |
EA042181B1 (ru) | Анти-tim-3 антитела и их применение |