TWI749518B - 哌嗪醯胺衍生物，其製備方法及其在醫藥上的用途 - Google Patents

哌嗪醯胺衍生物，其製備方法及其在醫藥上的用途 Download PDF

Info

Publication number
TWI749518B
TWI749518B TW109112254A TW109112254A TWI749518B TW I749518 B TWI749518 B TW I749518B TW 109112254 A TW109112254 A TW 109112254A TW 109112254 A TW109112254 A TW 109112254A TW I749518 B TWI749518 B TW I749518B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
group
alkyl
compound
methyl
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Application number
TW109112254A
Other languages
English (en)
Other versions
TW202104209A (zh
Inventor
張盼盼
顏孫力
李英
郭陳莉
錢文建
葉成
施正政
胡泰山
陳磊
Original Assignee
大陸商浙江海正藥業股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 大陸商浙江海正藥業股份有限公司 filed Critical 大陸商浙江海正藥業股份有限公司
Publication of TW202104209A publication Critical patent/TW202104209A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI749518B publication Critical patent/TWI749518B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/08—Bridged systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

本發明涉及一種式(I)所示的哌嗪醯胺衍生物或其可藥用的鹽、及其藥物組合物，以及它們作為治療劑，特別是作為選擇性轉染期間重排(RET，rearrangement transfection)激酶抑制劑的用途。其中a環，e環，X1，X2，X3，X4，R1，R2，R3，R4，R4’，R5，R5’，R6，R6’，R7，R7’，R8，m和n的定義與說明書中的定義相同。

Description

哌嗪醯胺衍生物，其製備方法及其在醫藥上的用途
本發明涉及醫藥技術領域，尤其是一種新的哌嗪醯胺衍生物以及含有該衍生物的藥物組合物以及其作為治療劑特別是作為選擇性轉染期間重排(RET)激酶抑制劑的用途。
本發明要求於2019年4月12日提交到中國專利局的發明名稱為“哌嗪醯胺衍生物，其製備方法及其在醫藥上的用途”的中國專利申請201910294193.9的優先權，其內容通過引用以整體併入本文。
轉染期間重排基因(RET(rearrangement transfection)基因)是一種原癌基因，在人體內編碼酪氨酸激酶受體，對細胞的繁殖和存活進行調控。該基因的活化需要通過與膠質細胞衍生的神經營養因數家族的受體以及該家族的α受體共同作用，來形成二聚體，通過磷酸化作用，調節信號通路，行使信號傳導和調節生命活動的功能。RET基因的異常表達與多種癌症疾病相關。該基因通過染色體重排與其他基因發生融合或者是通過定點的變異，可以不依賴配體而處於持續啟動狀態，導致信號通路異常，從而導致細胞的過度增殖和癌症的產生。
近年來，越來越多證據顯示，RET基因融合和突變是某些癌症誘發的驅動力，並且與其他驅動基因並不重合，具有顯著的特異性。RET基因融合多見於乳頭狀甲狀腺癌和非小細胞肺癌，如30%散發的乳頭狀甲狀腺癌和70%輻射誘導的乳頭狀甲狀腺癌以及約2%的非小細胞肺癌是由RET基因的融合驅動。RET基因突變多見於甲狀腺髓樣癌，如超過50%的甲狀腺髓樣癌以及近乎所有的先天性髓樣癌和多發性內分泌腺瘤病是由RET基因的定點突變造成。
目前的治療手段主要採取具有RET激酶抑制活性的多靶點激酶抑制劑來治療RET基因融合或突變的癌症病人。但是在此條件下，由於脫靶效應和藥物毒性，藥物的劑量不足以達到足夠抑制異常RET基因表達的水平。此外，在治療癌症的過程中，癌細胞會通過變異產生耐藥性。而一旦耐藥性產生，病人的治療選擇將會變得非常的有限。因此，目前非常需要一種選擇性的RET激酶抑制劑來治療RET基因融合或突變的病人。
市場上還未有選擇性地針對於RET激酶的藥物，目前已經公開了一系列的選擇性RET激酶抑制劑專利，其中包括WO2016127074、WO2017079140、WO2017011776、WO2017161269、WO2018017983、WO2018022761、WO2018071454、WO2018136661、WO2018136663等，目前處於臨床試驗的藥物為Blu-667、Loxo-292和GSK-3352589。但這些對於抗腫瘤研究是遠遠不夠的，仍有必要研究和開發新的選擇性RET激酶抑制劑，來解決未滿足的醫療需求。
為了克服現有技術的不足之處，在第一方面，本發明提供了一種式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽：
Figure 109112254-A0202-12-0002-3
 其中：
a環選自吡唑基、吡啶基或者吡啶酮基；
R1選自氫、C1-C3烷基或C3-C6環烷基，所述C1-C3烷基和C3-C6環烷基任選進一步被一個或多個鹵素原子所取代；
X1選自CH或N；
R2選自氫或C1-C6烷基；
R3選自氫、氰基、C1-C6烷基、C1-C5伯醇基、C3-C7叔醇基、C1-C3烷氧基、C3-C6環烷基和-R9CO2R10，所述C1-C6烷基、C1-C3伯醇基、C3-C7叔醇基、C1-C3烷氧基和C3-C6環烷基任選進一步被一個或多個鹵素原子所取代；
或者R2、R3與其所連接的兩個碳原子一起形成芳基，所述芳基任選進一步被一個或多個鹵素原子或C1-C6烷基取代；
R9選自化學鍵或C1-C4亞烷基；
R10選自氫或C1-C6烷基；
X2，X3，X4選自CH或N；當X2為N時，X3，X4中最多有一個為N；當X2為CH時，X3，X4均為CH；
R4，R4’，R5，R5’，R6，R6’，R7，R7’獨立地選自氫、C1-C3烷基或C1-C4烷氧基，所述C1-C3烷基任選進一步被一個或多個羥基、羧基或氰基所取代；
或者，R4和R4’，R5和R5’，R6和R6’或者R7和R7’連接在一起形成-(CH2)2-，-(CH2)3-，-CH(CH3)CH2-，-OCH2CH2-或-CH2OCH2-；
或者，R4和R5，R4和R6，R4和R7，R4’和R5’，R4’和R6’，R4’和R7’，R5和R6，R5和R7，R5’和R6’，R5’和R7’，R6和R7或者R6’和R7’連接在一起形成-(CH2)q-或-(CH2OCH2)-；
或者，R4和R4’，R5和R5’，R6和R6’或者R7和R7’一起代表=O；
e環選自吡唑基、吡啶基、苯基或3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基；
R8獨立地選自氫、鹵素、氰基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基或C3-C6環烷基，所述C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和C3-C6環烷基任選進一步被一個或多個鹵素原子所取代；
m為1或2；
n為1、2或3；
q為2或3。
在本發明的優選方案中，提供了一種式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其為式(II)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽：
Figure 109112254-A0202-12-0004-4
 其中：
e環，X1，X2，X3，X4，R1，R2，R3，R4，R4’，R5，R5’，R6，R6’，R7，R7’，R8，m和n的定義如式(I)中所述。
在本發明的優選方案中，提供了一種式(I)或式(II)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，所述R3選自氫、氰基、C1-C6烷基、羥甲基、羥基異丙基、C1-C3烷氧基、C3-C6環烷基和-R9CO2R10，所述C1-C6烷基、羥甲基、羥基異丙基、C1-C3烷氧基和C3-C6環烷基任選進一步被一個或多個鹵素原子所取代，或者R2、R3與其所連接的兩個碳原子一起形成芳基，所述芳基任選進一步被一個或多個鹵素原子或C1-C6烷基取代，R9選自化學鍵或C1-C4亞烷基，R10選自氫或C1-C6烷基。
在本發明的優選方案中，提供了一種式(I)或式(II)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，所述R3選自氫、甲基、三氟甲基、羥甲基、羥基異丙基、-COOH和-COOMe，或者R2、R3與其所連接的兩個碳原子一起形成苯環。
在本發明的優選方案中，提供了一種式(I)或式(II)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，所述R4，R4’，R5，R5’，R6，R6’，R7，R7’各自獨立地選自氫、甲基、-CH2OH和-CH2CH2OH，或者R4和R4’，R5和R5’，R6和R6’或者R7和R7’連接在一起形成-(CH2)2-、-OCH2CH2-或-CH2OCH2-，或者R4和R5，R4和R6，R4和R7，R4’和R5’，R4’和R6’，R4’和R7’，R5和R6，R5和R7，R5’和R6’，R5’和R7’，R6和R7或者R6’和R7’連接在一起形成-CH2OCH2-或-(CH2)2-。
在本發明的優選方案中，提供了一種式(I)或式(II)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，所述R8獨立地選自氫、鹵素、氰基或C1-C3烷基，所述鹵素為氟或氯，所述C1-C3烷基為甲基。
本發明式(I)代表的化合物具體結構包括，但不限於：
Figure 109112254-A0202-12-0005-5
Figure 109112254-A0202-12-0006-6
Figure 109112254-A0202-12-0007-7
Figure 109112254-A0202-12-0008-8
Figure 109112254-A0202-12-0009-9
Figure 109112254-A0202-12-0010-10
Figure 109112254-A0202-12-0011-11
 或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽。
在另一方面，本發明提供一種藥物組合物，所述的藥物組合物含有有效劑量的式(I)或式(II)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，及可藥用的載體、賦形劑或它們的組合。
在又一方面，本發明提供一種式(I)或式(II)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽、或其藥物組合物在製備轉染期間重排激酶抑制劑中的用途。
在又一方面，本發明提供了一種抑制轉染期間重排激酶的方法，包括向有此需要的物件給予本發明所述的化合物或藥物組合物。
在又一方面，本發明還提供了一種治療或預防與轉染期間重排基因相關或由其驅動的疾病的方法，包括向有此需要的物件給予本發明所述的化合物或藥物組合物。
在本發明上述用途或方法中，所述與轉染期間重排基因相關或由其驅動的疾病優選為癌症，其中所述的癌症優選為肺癌、甲狀腺癌、結腸癌、乳腺癌或胰腺癌。
發明的詳細說明
本發明在說明書和申請專利範圍中所使用的部分術語定義如 下：
“烷基”當作一基團或一基團的一部分時是指包括直鏈或者帶有支鏈的脂肪烴基團。烷基基團的實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代或未取代的。在本發明中，優選的烷基是C1-C6烷基，更優選的烷基是C1-C4烷基或C1-C3烷基。
“環烷基”是指飽和或部分飽和的單環、稠環、橋環和螺環的碳環。單環環烷基的實例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基等，優選環丙基、環己烯基。在本發明中，優選的環烷基是C3-C6環烷基。
“芳基”是指含有一個或者兩個環的碳環芳香系統，其中所述環可以以稠合的方式連接在一起。術語“芳基”包括比如苯基、萘基、四氫萘基的芳香基團。優選芳基為C6-C10芳基，更優選芳基為苯基和萘基，最優選為苯基。
“烷氧基”是指“烷基-O-”基團。C1-C6烷氧基、C1-C4烷氧基或C1-C3烷氧基為優先選擇。其實例包括，但不限於：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基等。
“C1-C5伯醇基”是指含有1-5個碳原子的一元伯醇基，其實例包括-CH2OH、-CH2CH2OH、-CH2CH2CH2OH、-CH(CH3)CH2OH、-(CH2)4OH、-CH(CH3)CH2CH2OH、-CH2CH(CH3)CH2OH、-C(CH3)2CH2OH、-(CH2)5OH、-CH2CH2CH(CH3)CH2OH、-CH2CH(CH3)CH2CH2OH、-CH(CH3)CH2CH2CH2OH、-CH2C(CH3)2OH、-CH(CH2OH)CH(CH3)2、-CH(CH3)CH(CH3)CH2OH。
“C3-C7叔醇基”是指含有3-7個碳原子一元叔醇基，其實例包括-C(CH3)2OH、-CH2C(CH3)2OH、-CH2CH2C(CH3)2OH、-CH(CH3)C(CH3)2OH、-CH2CH2CH2C(CH3)2OH、-CH2CH(CH3)C(CH3)2OH、-CH(CH3)CH2C(CH3)2OH、-C(CH3)2C(CH3)2OH、-(CH2)4C(CH3)2OH、-CH2CH2CH(CH3)C(CH3)2OH、-CH2CH(CH3)CH2C(CH3)2OH、-CH(CH3)CH2CH2C(CH3)2OH、 -CH(CH3)CH(CH3)C(CH3)2OH、-CH2C(CH3)2C(CH3)2OH、-C(CH3)2CH2C(CH3)2OH。
“羥基”指-OH。“鹵素”是指氟、氯、溴和碘，優選氯、溴和氟。“氨基”指-NH2。“氰基”指-CN。“苄基”指-CH2-苯基。“羧基”指-C(O)OH。“酯基”指-C(O)O(烷基)或(環烷基)，其中烷基、環烷基的定義如上所述。“DMSO”指二甲基亞碸。“Boc”指叔丁氧基羰基。“DIPEA”指：二異丙基乙胺。“Pd2(dba)3”指：三(二亞苄基丙酮)二鈀。“t-BuXPhos”指：2-二-叔丁膦基-2’,4’,6’-三異丙基聯苯。“DMAc”指：N,N-二甲基乙醯胺。“DMF”指：N,N-二甲基甲醯胺。“PCy3”指：三環己基膦。“HATU”指：2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽。“PyBOP”指：六氟磷酸苯並三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷。“T3P”指：丙基磷酸配。“Bpin”指：硼酸頻哪醇酯。“NMP”指：N-甲基吡咯烷酮。
“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，優選為最多5個，更優選為1~3個氫原子，例如1個氫原子、2個氫原子或3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，本領域技術人員能夠在不付出過多努力的情況下確定(通過實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的氨基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。
本發明中立體化學的定義和慣例的使用通常參考以下文獻：S.P.Parker,Ed.,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-HillBook Company,New York；and Eliel,E.and Wilen,S.,"Stereochemistry of Organic Compounds",John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994.本發明的化合物可以包含不對稱中心或手性中心，因此存在不同的立體異構體。本發明的化合物所有的立體異構體形式，包括但絕不限於非對映體、對映異構體、阻轉異構體及其它們的混合物，如外消旋混合物，組成了本發明的一部分。非對映異構體可以以其物理化學差異為基礎，通過層析、結晶、蒸餾或昇華等方法被分離為個別非對映異構體。對映異構體可以通過分離，使手性異構混合物轉化為非對映異構混合物，其方式是與適當光學活性化合物(例如手性輔助劑，譬如手性醇或Mosher氏醯氯)的反應，分離非對映異構體，且使個別非對映異構體轉化為相應的純對映異構體。本發明的中間體與化合物 也可以以不同互變異構形式存在，且所有此種形式被包含在本發明的範圍內。很多有機化合物都以光學活性形式存在，即它們有能力使平面偏振光的平面發生偏轉。在描述光學活性化合物時，首碼D、L或R、S用來表示分子手性中心的絕對構型。首碼d、l或(+)、(-)用來命名化合物平面偏振光偏轉的符號，(-)或l是指化合物是左旋的，首碼(+)或d是指化合物是右旋的。這些立體異構體的原子或原子團互相連接次序相同，但是它們的立體結構不一樣。特定的立體異構體可以是對映體，異構體的混合物通常稱為對映異構體混合物。50：50的對映體混合物被稱為外消旋混合物或外消旋體，這可能導致化學反應過程中沒有立體選擇性或立體定向性。術語“外消旋混合物”和“外消旋體”是指等摩爾的兩個對映異構體的混合物，缺乏光學活性。
“互變異構體”或“互變異構的形式”是指不同能量的結構的同分異構體可以通過低能壘互相轉化。例如質子互變異構體(即質子移變的互變異構體)包括通過質子遷移的互變，如酮式-烯醇式和亞胺-烯胺的同分異構化作用。原子價(化合價)互變異構體包括重組成鍵電子的互變。除非其他方面表明，本發明所描述的結構式包括所有的同分異構形式(如對映異構、非對映異構和幾何異構)：例如含有不對稱中心的R、S構型，雙鍵的(Z)、(E)異構體，和(Z)、(E)的構象異構體。因此，本發明的化合物的單個立體化學異構體或其對映異構體、非對映異構體或幾何異構體的混合物都屬於本發明的範圍。
本發明中的“堿”是指布朗斯特堿或者路易士堿。
在本發明中，“化學鍵”特別意指共價鍵。
“可藥用的鹽”是指本發明化合物能保持原有生物活性並且適合於醫藥用途的某些鹽類。式(I)所表示的化合物的可藥用的鹽為與合適的酸形成的胺鹽，合適的酸包括無機酸和有機酸，例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡糖酸、谷氨酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、蘋果酸、馬來酸、扁桃酸、甲磺酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸等。
“藥物組合物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學可藥用的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性 成分的吸收進而發揮生物活性。
本發明化合物的合成方法
為了完成本發明的目的，本發明可採用如下技術方案實現：
本發明式(I)化合物根據基團的不同，其製備方法有以下三種：方法一：
當R3為R3’，且R3’選自氫，氰基，C1-C6烷基，C1-C3烷氧基，C3-C6環烷基，-R9CO2R10’時，所述C1-C6烷基任選進一步被一個或多個鹵素原子所取代；或者R2、R3’與其所連接的兩個碳原子一起形成芳基，所述芳基任選進一步被一個或多個鹵素原子或C1-C6烷基取代；R9選自化學鍵或C1-C4亞烷基；R10’選自C1-C6烷基的式(I)化合物，即為式(I-a)化合物，其通過式(B)化合物或其鹽和式(A)化合物或其鹽在縮合劑的作用下反應得到：
Figure 109112254-A0202-12-0015-12
上述反應的反應溫度為0~40℃；反應溶劑為二氯甲烷、乙腈或N,N-二甲基甲醯胺，優選N,N-二甲基甲醯胺；縮合劑為HATU,、PyBOP或T3P，優選HATU或PyBOP；上述反應在鹼性條件下進行，所用的堿為二異丙基乙基胺或三乙胺，優選二異丙基乙基胺；其中，a環，e環，X1，X2，X3，X4，R1，R2，R4，R4’，R5，R5’，R6，R6’，R7，R7’，R8，m和n的定義如式(I)中所述。
其中，式(A)所示的化合物的製備方法如下所示：
其一，當X1為N時，其反應步驟包括：
Figure 109112254-A0202-12-0016-13
式(1-2)化合物與式(1-1)化合物發生親核芳香取代反應得到式(1-3)化合物；式(1-4)化合物與式(1-3)化合物發生親核芳香取代反應得到式(1-5)化合物；式(1-5)化合物在酸性條件下脫除叔丁氧羰基，得到式(A-1)化合物或其鹽；其中：a環，R1，R2，R3’，R4，R4’，R5，R5’，R6，R6’，R7，R7’和m的定義如式(I-a)中所述。
其二，當X1為CH時，其反應步驟包括：
Figure 109112254-A0202-12-0016-14
式(1-4)化合物與式(2-1)化合物發生親核芳香取代反應得到式(2-2)化合物；式(1-2)化合物與式(2-2)化合物在鈀催化條件下反應得到式(2-3)化 合物；式(2-3)化合物在酸性條件下脫除叔丁氧羰基，得到式(A-2)化合物或其鹽；其中，a環，R1，R2，R3’，R4，R4’，R5，R5’，R6，R6’，R7，R7’和m的定義如式(I-a)中所述。
式(B)所示的化合物的製備方法包括兩種：
其一，當e環連接在d環上的原子為N原子時：
Figure 109112254-A0202-12-0017-17
式(3-2)化合物與式(3-1)化合物發生親核芳香取代反應得到式(3-3)化合物；式(3-3)化合物水解生成式(B-1)化合物。其中，Hal1為氟、氯、溴或碘，且e環，X2，X3，X4，R8和n的定義如式(I-a)中所述。
其二，當e環連接在d環上的原子為C原子時：
Figure 109112254-A0202-12-0017-15
M為-B(OH)2或Bpin，
式(4-2)化合物與式(4-1)化合物發生Suzuki偶聯反應得到式(4-3)化合物；式(4-3)化合物水解生成式(B-2)化合物；其中Hal2為氯、溴或碘；且e環，X2，X3，X4，R8和n的定義如式(I-a)中所述。
方法二：
當R3為R9COOH時的式(I)化合物，即為式(I-c)化合物，其通過 式(I-b)化合物與堿(氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀等)反應製備得到：
Figure 109112254-A0202-12-0018-18
其中，R9選自化學鍵或C1-C4亞烷基，R10’選自C1-C6烷基；且a環，e環，X1，X2，X3，X4，R1，R2，R4，R4’，R5，R5’，R6，R6’，R7，R7’，R8，m和n的定義如式(I)中所述。
方法三：
當R3為R3”，且R3”為C1-C5伯醇基時的式(I)化合物，即為式(I-d)化合物，其通過式(I-b)化合物與還原試劑(NaBH4、LiAlH4等)反應製備得到：
Figure 109112254-A0202-12-0018-84
其中，R9選自化學鍵或C1-C4亞烷基，R10’選自C1-C6烷基；且a環，e環，X1，X2，X3，X4，R1，R2，R4，R4’，R5，R5’，R6，R6’，R7，R7’，R8，m和n的定義如式(I)中所述。
方法四：
當R3為R3'''，且R3'''為C3-C7叔醇基時的式(I)化合物，即為式(I-e)化合物，其通過式(I-b)化合物與甲基碘化鎂或甲基溴化鎂反應製備生成：
Figure 109112254-A0202-12-0018-20
其中，R9選自化學鍵或C1-C4亞烷基，R10’選自C1-C6烷基；且a環，e環，X1，X2，X3，X4，R1，R2，R4，R4’，R5，R5’，R6，R6’，R7，R7’， R8，m和n的定義如式(I)中所述。
實施例
實施例給出了本發明具體化合物的製備及相關結構鑒定資料。必須說明，以下實施例是用於說明本發明而不是對本發明的限制。化合物的結構是通過核磁共振(NMR，nuclear magnetic resonance)和質譜(MS，mass spectrometry)來確定的。1H NMR圖譜是用Bruker儀器(400MHz)測定而得，化學位移用ppm表示，使用四甲基矽烷內標準(0.00ppm)。1H NMR的表示方法：s=單峰，d=雙重峰，m=多重峰，br=變寬的，dd=雙重峰的雙重峰，dt=三重峰的雙重峰。若提供耦合常數時，其單位為Hz。質譜的測定用FINNIGAN LCQAd(ESI)質譜儀(生產商：Thermo，型號：Finnigan LCQ advantage MAX)。
薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm~0.2mm，薄層層析分離、純化產品採用的規格是0.4mm~0.5mm矽膠製備板。
矽膠柱層析一般使用煙臺黃海200~300目矽膠為載體。
本發明的已知起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可購買自ABCR GmbH & Co.KG，Acros Organnics，Aldrich Chemical Company，韶遠化學科技(Accela ChemBio Inc)、達瑞化學品、畢得醫藥等公司。
實施例中如無特殊說明，反應均在空氣氛下進行。
氮氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氮氣氣球。
實施例中無特殊說明，反應中的溶液是指水溶液。
實施例中如無特殊說明，反應的溫度為室溫，室溫的範圍是20℃~30℃。
實施例中的反應進程的監測採用薄層色譜法(TLC，thin-layer chromatography)，所使用的展開劑的體系有：二氯甲烷和甲醇體系，正己烷和乙酸乙酯體系，展開劑的體積比根據化合物的極性不同而進行調節。
實施例1
Figure 109112254-A0202-12-0020-24
第一步：2-氯-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺的合成
Figure 109112254-A0202-12-0020-23
將6-甲基-2,4-二氯嘧啶(1a)(9.72g,60mmol)、5-甲基-1H-3-氨基吡唑(1b)(7.0g,72mmol)和DIPEA(11.6g，72mmol)溶於30mL DMSO中，於60℃下攪拌反應，TLC監測反應至原料消失，降低溫度至室溫，加入10mL水淬滅反應，加入200mL乙酸乙酯，有機相分別水洗三次(30mL×3)，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑得棕黃色黏稠液體，加入80mL二氯甲烷溶解，靜置3小時，析出白色固體2-氯-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(1c)9.9g，產率74%。
MS m/z(ESI)：224.3[M+1]
第二步：4-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure 109112254-A0202-12-0020-22
將2-氯-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(1c)(892mg,4mmol)、1-叔丁氧羰基哌嗪(1d)(1.49g,8mmol)和K2CO3(1.66g,12mmol)溶於25mL DMF中，於140℃下反應6個小時，反應液冷卻至室溫，加入10mL 水淬滅反應，加入150mL乙酸乙酯，有機相分別水洗三次(15mL×3)，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑後，矽膠柱層析分離(洗脫劑及體積比為：二氯甲烷：甲醇=20：1)，得4-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1e)1.01g，產率67%。
MS m/z(ESI)：374.2[M+1]
第三步：6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-(1-哌嗪基)嘧啶-4-胺鹽酸鹽的合成
Figure 109112254-A0202-12-0021-25
將4-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1e)(1.24g,3.3mmol)溶於25mL的1,4-二氧六環中，滴加25mL濃度為2.6mol/L的HCl/1,4-二氧六環溶液，50℃下反應4h，反應結束後過濾，濾液分別用乙酸乙酯、乙醚洗滌濾餅，真空乾燥得淡黃色固體6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-(1-哌嗪基)嘧啶-4-胺鹽酸鹽(1f)1.1g，產率>99%。
MS m/z(ESI)：274.2[M+1]
第四步：6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)煙酸甲酯的合成
Figure 109112254-A0202-12-0021-26
將6-氟煙酸甲酯(1g)(3.10g,20mmol)、4-氟吡唑(1h)(2.07g,24mmol)和K2CO3(6.91g,50mmol)溶於25mL DMF中，於100℃下反應6個小時，反應液冷卻至室溫，加入10mL水淬滅反應，加入150mL乙酸乙酯，有機相分別水洗三次(15mL×3)，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑後，矽膠柱層析分離(洗脫劑及體積比為：二氯甲烷：甲醇=20：1)，得6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)煙酸甲酯(1i)3.6g，產率82%。
MS m/z(ESI)：222.1[M+1]
第五步：6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)煙酸的合成
Figure 109112254-A0202-12-0022-28
將6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)煙酸甲酯(1i)(3.6g,16.2mmol)和一水合氫氧化鋰(1.36g,32.4mmol)溶於40mL甲醇和20mL蒸餾水配製得到的混合溶劑中，於50℃反應2個小時，TLC監測反應至原料消失，反應液冷卻至室溫，減壓除去溶劑後，加入100mL蒸餾水，加入1mol/L稀鹽酸調節pH值至2-5，攪拌1個小時，過濾，50℃烘乾濾餅，得6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)煙酸(1j)3.1g，產率92%。
MS m/z(ESI)：208.1[M+1]
第六步：(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)(4-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)甲酮的合成
Figure 109112254-A0202-12-0022-27
將6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)煙酸(1j)(83mg,0.4mmol)和HATU(228mg,0.6mmol)溶於4mL DMF中，冷卻至0℃，加入DIPEA(163mg,1.6mmol)，攪拌2分鐘後，加入6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-(1-哌嗪基)嘧啶-4-胺鹽酸鹽(1f)(140mg,0.45mmol)，保持0℃反應30分鐘，加入10mL水淬滅反應，加入100mL乙酸乙酯，水洗三次(15mL×3)，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑後，矽膠柱層析分離(洗脫劑及體積比為：二氯甲烷：甲醇=30：1)，得到粗品進一步通過矽膠製備板分離(展開劑及體積比為：二氯甲烷：甲醇=10：1)，得(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)(4-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)甲酮(I-1)80mg，產率43%。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.81(s,1H),9.28(s,1H),8.76(d,J=4.5Hz,1H),8.57(s,1H),8.09(d,J=8.2Hz,1H),7.99(t,J=7.2Hz,2H),6.24(s,1H), 6.11(s,1H),3.81-3.73(m,6H),3.51-3.46(m,2H),2.18(s,3H),2.13(s,3H)ppm.
MS m/z(ESI)：463.2[M+1].
參考實施例1，可製備下列化合物：
Figure 109112254-A0202-12-0023-29
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.80(s,1H),9.26(s,1H),8.74(d,J=4.6Hz,1H),8.55(s,1H),8.07(d,J=8.5Hz,1H),7.99-7.97(m,2H),6.22(s,1H),6.11(s,1H),4.52-4.49(s,2H),3.17-2.94(s,3H),2.18(s,3H),2.12(s,3H),1.19(d,J=6.8Hz,3H)ppm.
MS m/z(ESI)：477.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0023-30
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.84(s,1H),9.29(s,1H),8.75(d,J=4.5Hz,1H),8.57(s,1H),8.09(d,J=8.5Hz,1H),8.02-7.93(m,2H),6.21(s,1H),6.14(s,1H),5.01-4.21(m,4H),3.65-3.35(m,3H),3.14-2.84(m,3H),2.18(s,3H),2.12(s,3H)ppm.
MS m/z(ESI)：493.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0023-31
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.81(s,1H),9.27(s,1H),8.76(d,J=4.4Hz,1H),8.64(s,1H),8.17(d,J=8.5Hz,1H),8.02-7.98(m,2H),6.23(s,1H),6.12(s,1H),4.81-4.79(m,1H),4.50-4.37(m,2H),4.21-4.18(m,1H),3.13-3.09(m,2H),2.19(s,3H),2.12(s,3H),1.95-1.83(m,2H),1.71-1.61(m,2H) ppm.
MS m/z(ESI)：489.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0024-32
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 12.12(s,1H),10.03(s,1H),8.77(d,J=4.5Hz,lH),8.66(s,1H),8.38(d,J=8.2Hz,1H),8.23-8.07(m,1H),8.06-7.90(m,2H),7.56(t,J=7.7Hz,1H),7.33(d,J=8.4Hz,1H),7.11(t,J=7.6Hz,1H),6.44(s,1H),4.84(s,1H),4.74-4.38(m,2H),4.24(s,1H),3.23-3.20(m,2H),2.26(s,3H),1.91(s,2H),1.71-1.68(m,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：525.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0024-33
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.85(s,1H),9.26-9.22(m,2H),8.88(s,1H),8.82(d,J=4.5Hz,1H),8.13(d,J=4.0Hz,1H),6.23(s,1H),6.12(s,1H),4.86-4.85(m,1H),4.81-4.65(m,1H),4.52-4.50(m,1H),4.42-4.39(m,1H),3.17-3.08(m,2H),2.20(s,3H),2.12(s,3H),1.91(d,J=11.7Hz,2H),1.70(d,J=8.2Hz,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：490.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0024-34
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.22(s,1H),8.77(d,J=4.5Hz,1H),8.62(s,1H),8.14(s,2H),8.01(t,J=7.0Hz,2H),6.15(brs,2H),5.09-4.41(m,3H),4.20-3.63(m,5H),3.25-3.17(m,2H),2.18(s,3H),2.12(s,3H)ppm.
MS m/z(ESI)：505.5[M+1]
Figure 109112254-A0202-12-0025-35
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.83(s,1H),9.25(s,1H),8.86(s,1H),8.65(s,1H),8.19(d,J=8.7Hz,1H),8.03(s,1H),8.01-7.94(m,1H),6.23(s,1H),6.12(s,1H),4.86-4.75(m,1H),4.52-4.35(m,2H),4.23-4.17(m,1H),3.14-3.06(m,2H),2.19(s,3H),2.12(s,3H),1.96-1.83(m,2H),1.75-1.62(m,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：505.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0025-36
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.84(s,1H),9.48(s,1H),9.28(s,1H),8.71(s,1H),8.48(s,1H),8.24(s,1H),8.06(s,1H),6.23(s,1H),6.11(s,1H),4.81(s,1H),4.49(s,1H),4.38(s,1H),4.19(s,1H),3.33(s,2H),2.19(s,3H),2.11(s,3H),1.90(s,2H),1.66(s,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：496.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0025-37
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.82(s,1H),9.27(s,1H),8.30(d,J=2.5Hz,1H),7.67(dd,J=8.7,2.3Hz,1H),6.43(d,J=8.7Hz,1H),6.21(s,1H),6.13(s,1H),4.43-4.8(m,3H),3.65-3.20(m,5H),3.07(d,J=12.6Hz,2H),2.20(s,3H),2.11(s,3H),1.89-1.40(m,6H),1.06(s,3H),0.83(s,3H)ppm.
MS m/z(ESI)：514.3[M+1]
Figure 109112254-A0202-12-0026-38
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 12.00(s,1H),9.90(s,1H),8.76(d,J=4.4Hz,1H),8.65(d,J=2.0Hz,1H),8.18(dd,J=8.5,2.2Hz,1H),8.09-7.89(m,2H),6.80(s,1H),6.29(s,1H),4.83(s,1H),4.49-4.35(m,2H),4.24(s,1H),3.81(s,3H),3.22-3.15(m,2H),2.21(s,3H),1.91(s,2H),1.83-1.61(m,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：533.2[M+1]
Figure 109112254-A0202-12-0026-39
MS m/z(ESI)：489.2[M+1]
實施例2
Figure 109112254-A0202-12-0026-40
第一步：3-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯的合成
Figure 109112254-A0202-12-0026-42
將2-氯-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(1c)(2.01g,9mmol)、3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(2a)(3.82g,18mmol)和K2CO3(3.73g,27mmol)溶於25mL DMAc中，於140℃下反應，TLC監測至反 應結束，反應液冷卻至室溫，加入5mL水淬滅反應，加入150mL乙酸乙酯，有機相分別水洗三次(15mL×3)，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑後，矽膠柱層析分離(洗脫劑及體積比為：二氯甲烷：甲醇=20：1)，得3-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(2b)2.81g，產率77%。
MS m/z(ESI)：400.5[M+1]
第二步：2-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺鹽酸鹽的合成
Figure 109112254-A0202-12-0027-43
將3-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(2b)(2.6g,6.5mmol)溶於40mL 1,4-二氧六環中，滴加40mL濃度為2.6mol/L的HCl/1,4-二氧六環溶液，50℃反應4h，過濾，分別用乙酸乙酯、乙醚洗滌濾餅，真空乾燥得2-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺鹽酸鹽(2c)2.2g，產率>99%。
MS m/z(ESI)：300.3[M+1]
第三步：6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)噠嗪-3-甲酸甲酯的合成
Figure 109112254-A0202-12-0027-44
將4-氟-1H-吡唑(1h)(2.4g,27.8mmol)溶於40mL DMF中，冷卻至0℃，緩慢加入氫化鈉(1.4g,34.8mmol)，於0℃下反應30min，加入6-氯-噠嗪-3-甲酸甲酯(2d)(4.0g,23.2mmol)，TLC監測反應至原料消失，加入10mL冰水淬滅反應，加入200mL乙酸乙酯，有機相分別水洗三次(30mL×3)，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑後，矽膠柱層析分 離(洗脫劑及體積比為：二氯甲烷：甲醇=20：1)，得6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)噠嗪-3-甲酸甲酯(2f)4.53g，產率88%。
MS m/z(ESI)：223.2[M+1]
第四步：6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)噠嗪-3-甲酸的合成
Figure 109112254-A0202-12-0028-46
將6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)噠嗪-3-甲酸甲酯(2f)(4.53g,20.4mmol)、一水合氫氧化鋰(1.71g,40.8mmol)和蒸餾水20mL溶於50mL甲醇中，於40℃反應2個小時，TLC監測反應至原料消失，反應液冷卻至室溫，減壓除去甲醇後，加入100mL蒸餾水，加入1mol/L稀鹽酸調節pH值至2-5，攪拌1個小時，過濾，50℃烘乾濾餅，得6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)噠嗪-3-甲酸(2g)3.81g，產率90%。
MS m/z(ESI)：209.1[M+1]
第五步：(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)噠嗪-3-基)(3-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮的合成
Figure 109112254-A0202-12-0028-45
將2-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺鹽酸鹽(2c)(700mg,2.1mmol)、6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)噠嗪-3-甲酸(2g)(390mg,1.9mmol)和PyBOP(1.63g,3.1mmol)溶於20mL DMF中，冷卻至0℃，加入DIPEA(810mg,6.3mmol)，保持0℃反應30分鐘，加入10mL水淬滅反應，加入150mL乙酸乙酯，水洗三次(20mL×3)，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑後，矽膠柱層析分離(洗脫劑及體積比為：二氯甲烷：甲醇=20：1)，得到粗品進一步通過矽膠製備板分離(展開劑及體積比為：二氯甲烷：甲醇=10：1)，得(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)噠嗪-3-基)(3-(4- 甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮(I-13)400mg，產率43%。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.85(s,1H),9.27(s,1H),9.08(d,J=4.4Hz,1H),8.34(d,J=9.1Hz,1H),8.21(d,J=9.2Hz,1H),8.15(d,J=4.0Hz,1H),6.19(s,1H),6.14(s,1H),4.89(d,J=5.6Hz,1H),4.74(d,J=5.4Hz,1H),4.55(d,J=12.8Hz,1H),4.43(d,J=12.6Hz,1H),320(d,J=12.7Hz,1H),3.12(d,J=12.6Hz,1H),2.20(s,3H),2.12(s,3H),1.92(d,J=9.3Hz,2H),1.71(d,J=9.0Hz,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：490.2[M+1].
參考實施例2，可製備下列化合物：
Figure 109112254-A0202-12-0029-48
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.89(s,1H),9.42(s,1H),9.09(d,J=4.5Hz,1H),8.35(d,J=9.1Hz,1H),8.22(d,J=9.2Hz,1H),8.15(d,J=4.1Hz,1H),7.89(d,J=5.7Hz,1H),6.33(s,1H),6.16(s,1H),4.95-4.84(m,1H),4.84-4.69(m,1H),4.54(d,J=12.7Hz,1H),4.43(d,J=12.5Hz,1H),3.21(d,J=12.5Hz,1H),3.17-3.08(m,1H),2.21(s,3H),1.93(d,J=9.1Hz,2H),1.71(d,J=8.5Hz,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：476.3
Figure 109112254-A0202-12-0029-50
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.86(s,1H),9.30(s,1H),9.05(d,J=4.4Hz,1H),8.34(d,J=9.1Hz,1H),8.14(d,J=3.9Hz,1H),8.12(d,J=9.2Hz,1H),6.24(s,1H),6.12(s,1H),3.86(s,2H),3.78(s,2H),3.75(s,2H),3.59(s,2H),2.18(s,3H),2.13(s,3H)ppm.
MS m/z(ESI)：464.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0030-51
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 12.06(s,1H),10.10(s,1H),9.08(d,J=4.4Hz,1H),8.35(d,J=9.1Hz,1H),8.22(d,J=9.2Hz,1H),8.15(d,J=4.0Hz,1H),6.59-6.26(brs,2H),4.93(s,1H),4.79(s,1H),4.63-4.27(m,2H),3.26-3.14(m,2H),2.23(s,3H),2.07-1.81(m,2H),1.71(d,J=8.7Hz,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：544.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0030-52
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.86(s,1H),9.30(s,1H),9.18(s,1H),8.34(d,J=9.1Hz,1H),8.23(d,J=9.1Hz,1H),8.16(s,1H),6.20(s,1H),6.14(s,1H),4.89(s,1H),4.74(s,1H),4.55(d,J=11.7Hz,1H),4.43(d,J=12.2Hz,1H),3.28-3.08(m,2H),2.20(s,3H),2.13(s,3H),1.93(d,J=8.8Hz,2H),1.74-1.72(m,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：506.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0030-86
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.82(s,1H),9.22(s,1H),9.07(d,J=4.4Hz,1H),8.36(d,J=9.2Hz,1H),8.19(d,J=9.0Hz,1H),8.15(d,J=4.0Hz,1H),6.16(brs,2H),4.94(s,1H),4.75(d,J=13.4Hz,1H),4.66(s,1H),4.25(s,1H),4.00(d,J=11.6Hz,1H),3.92-3.69(m,3H),3.17(d,J=5.1Hz,1H),2.19(s,3H),2.12(s,3H)ppm.
MS m/z(ESI)：506.2[M+1].
實施例3
Figure 109112254-A0202-12-0031-54
2-(8-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)煙醯基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-4-甲酸的合成
Figure 109112254-A0202-12-0031-55
將2-(8-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)煙醯基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(I-11)(80mg,0.15mmol)和一水合氫氧化鋰(42mg,1mmol)溶於2.5mL甲醇/水(V：V=5：1)混合溶劑中，室溫下反應過夜，減壓除去甲醇，加入10mL水稀釋，用1mol/L稀鹽酸調節pH值至2-3，加入乙酸乙酯萃取三次(20mL×3)，合併有機相，飽和食鹽水洗一次，乾燥，過濾，矽膠柱層析分離(洗脫劑及體積比為：二氯甲烷：甲醇=10：1)，得2-(8-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)煙醯基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(I-19)55mg，產率71%。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 12.12(s,1H),10.02-9.62(m,1H),8.77(d,J=4.5Hz,1H),8.65(s,1H),8.18(d,J=8.6Hz,1H),8.00(t,J=7.7Hz,2H),6.85(s,1H),6.23(s,1H),4.92-4.03(m,4H),3.48-3.00(m,2H),2.21(s,3H),1.91(s,2H),1.68-1.65(m,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：519.2[M+1].
實施例4
Figure 109112254-A0202-12-0032-56
(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)(3-(4-(羥甲基)-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮的合成
Figure 109112254-A0202-12-0032-57
將2-(8-(6-(4-氟-1H-吡唑-l-基)煙醯基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(I-11)(53mg,0.1mmol)溶於1.5mL四氫呋喃中，冷卻至0℃，加入LiAlH4(11mg,0.3mmol)，緩慢恢復至室溫反應，TLC監測反應至原料消失，加入少量十水合硫酸鈉淬滅，過濾，乙酸乙酯洗滌濾液，收集有機相，減壓除去溶劑，加入30mL乙酸乙酯，水洗三次(5mL×3)，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，矽膠柱層析分離(洗脫劑及體積比為：二氯甲烷：甲醇=20：1)得(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)(3-(4-(羥甲基)-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,8-二氨雜雙環[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮(I-20)10mg，產率20%。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.85(s,1H),9.38(s,1H),8.76(d,J=4.4Hz,1H),8.64(d,J=2.2Hz,1H),8.17(dd,J=8.4,2.2Hz,1H),8.07-7.90(m,2H),6.49(s,1H),6.15(s,1H),5.21(t,J=5.9Hz,1H),4.79(s,1H),4.54-4.29(m,2H),4.21(d,J=6.0Hz,3H),3.11(d,J=12.8Hz,2H),2.19(s,3H),1.89(s,2H),1.65(s,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：505.2[M+1]
實施例5
Figure 109112254-A0202-12-0033-58
(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)(3-(4-(2-羥丙基-2-基)-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮的合成
Figure 109112254-A0202-12-0033-59
將2-(8-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)煙醯基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(I-11)(265mg,0.5mmol)，溶於5mL四氫呋喃中，氮氣氛中冷卻至0℃，緩慢滴加3mol/L甲基碘化鎂的乙醚溶液，滴加完成，恢復室溫反應，TLC監測至反應結束，加入飽和氯化銨水溶液淬滅反應，加入100mL乙酸乙酯，水洗三次(20mL×3)，飽和食鹽水洗一次，乾燥，過濾，矽膠柱層析分離(洗脫劑及體積比為：二氯甲烷：甲醇=30：1)得(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)(3-(4-(2-羥丙基-2-基)-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮(I-21)56mg，產率22%。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.84(s,1H),9.34(s,1H),8.76(d,J=4.5Hz,1H),8.65(s,1H),8.18(d,J=8.7Hz,1H),8.02(d,J=4.2Hz,1H),7.99(d,J=8.7Hz,1H),6.59(s,1H),6.15(s,1H),4.95(s,1H),4.52-4.17(m,4H),3.14-3.09(m,2H),2.20(s,3H),1.91(s,2H),1.67(s,2H),1.32(s,6H)ppm.
MS m/z(ESI)：533.3[M+1]
實施例6
Figure 109112254-A0202-12-0034-62
第一步：6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)噠嗪-3-甲酸甲酯的合成
Figure 109112254-A0202-12-0034-61
將6-氯-噠嗪-3-甲酸甲酯(2d)(1.73g,10mmol)、(1-甲基-1H-吡唑-4-基)硼酸頻哪醇酯(7a)(4.16g,20mmol)、Pd2(dba)3(410mg,0.5mmol)、PCy3(280mg,1mmol)和磷酸鉀(6.4g,30mmol)溶於35mL二氧六環/水(V：V=6：1)混合溶劑中，在氮氣氛中，於100℃下反應過夜。反應結束後，將反應液降低溫度至室溫，矽藻土過濾，乙酸乙酯洗滌，減壓除去有機溶劑，加入300mL乙酸乙酯，水洗三次(40mL×3)，飽和食鹽水洗一次，乾燥，矽膠柱層析分離(洗脫劑及體積比為：二氯甲烷：甲醇=30：1)得6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)噠嗪-3-甲酸甲酯(7b)1.4g，產率65%。
MS m/z(ESI)：219.1[M+1]
第二步：6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)噠嗪-3-甲酸的合成
Figure 109112254-A0202-12-0034-60
將6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)噠嗪-3-甲酸甲酯(7b)(1.4g,7mmol)和一水合氫氧化鋰(580mg,14mmol)溶於50mL甲醇/水(V：V=2：1)混合溶劑中，50℃下反應，LC-MS監測至反應結束，減壓除去甲醇後，加入10mL水，用1mol/L稀鹽酸調節pH值至2-3，析出固體，過濾，乾燥，得6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)噠嗪-3-甲酸(7c)580mg，產率20%。
MS m/z(ESI)：205.2[M+1]
第三步：(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)噠嗪-3-基)(3-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,8-二氨雜雙環[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮的合成
Figure 109112254-A0202-12-0035-65
將2-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺鹽酸鹽(2c)(201mg,0.6mmol)、6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)噠嗪-3-甲酸(7c)(123mg,0.6mmol)和PyBOP(468mg,0.9mmol)溶於6mL DMF中，冷卻至0℃，加入DIPEA(310mg,2.4mmol)，保持0℃反應30分鐘，加入5mL水淬滅反應，加入100mL乙酸乙酯，水洗三次(15mL×3)，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑後，矽膠柱層析分離(洗脫劑及體積比為：二氯甲烷：甲醇=20：1)，得到粗品進一步通過製備板分離(展開劑及體積比為：二氯甲烷：甲醇=10：1)，得(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)噠嗪-3-基)(3-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-基)甲酮(I-22)62mg，產率22%。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.86(s,1H),9.29(s,1H),8.56(s,1H),8.22(s,1H),8.10(d,J=8.8Hz,1H),7.98(d,J=8.8Hz,1H),6.22(s,1H),6.16(s,1H),4.88(d,J=5.8Hz,1H),4.79(s,1H),4.54(d,J=12.7Hz,1H),4.44(d,J=12.6Hz,1H),3.94(s,3H),3.19(d,J=12.7Hz,1H),3.11(d,J=12.8Hz,1H),2.20(s,3H),2.12(s,3H),1.92(d,J=8.4Hz,2H),1.71(d,J=8.2Hz,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：486.3[M+1].
參考實施例6，可製備下列化合物：
Figure 109112254-A0202-12-0035-87
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 13.16(s,1H),11.84(s,1H),9.27(s,1H),8.67(s,1H),8.42(s,1H),8.13(s,1H),7.92(d,J=8.2Hz,1H),7.78(d,J=8.2Hz,1H),6.22(s,1H),6.13(s,1H),5.08-4.13(m,4H),3.10(d,J=12.8Hz,2H),2.19(s,3H),2.12(s,3H),1.88(s,2H),1.65(d,J=9.7Hz,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：471.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0036-66
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.84(s,1H),9.28(s,1H),8.67(s,1H),8.37(s,1H),8.07(s,1H),7.92(dd,J=8.1,2.2Hz,1H),7.73(d,J=8.1Hz,1H),6.21(s,1H),6.13(s,1H),4.78(s,1H),4.55-4.32(m,2H),4.21(s,1H),3.90(s,3H),3.10(d,J=12.7Hz,2H),2.19(s,3H),2.12(s,3H),1.88(s,2H),1.65(d,J=9.8Hz,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：485.3[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0036-67
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.84(s,1H),9.27(s,1H),8.82(s,1H),8.21(dd,J=8.5,5.5Hz,2H),8.06(t,J=6.5Hz,2H),7.35(t,J=8.7Hz,2H),6.22(s,1H),6.13(s,1H),4.86-4.75(m,1H),4.55-4.35(m,2H),4.24-4.16(m,1H),3.13-3.10(m,2H),2.19(s,3H),2.12(s,3H),1.93-1.86(m,2H),1.67-1.65(m,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：499.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0036-68
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.86(s,1H),9.29(s,1H),8.41(d,J=8.9Hz,1H),8.31(d,J=8.6Hz,2H),8.09(d,J=8.8Hz,1H),7.43(t,J=8.7Hz,2H),6.23(s,1H),6.15(s,1H),4.93-4.87(m,1H),4.74(s,1H),4.56(d,J=12.7Hz,1H),4.45(d,J=12.6Hz,1H),3.15-3.12(m,2H),2.20(s,3H),2.12(s,3H),1.94(d,J=10.9Hz,2H),1.72(d,J=8.7Hz,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：500.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0037-71
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.46-9.10(m,1H),8.41(d,J=8.7Hz,1H),8.30(dd,J=8.4,5.5Hz,2H),8.15(s,1H),8.00(d,J=8.7Hz,1H),7.44(t,J=8.6Hz,2H),6.23(s,1H),6.12(s,1H),3.92-3.84(m,2H),3.84-3.67(m,4H),3.59-3.57(m,2H),2.18(s,3H),2.13(s,3H)ppm.
MS m/z(ESI)：474.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0037-70
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.85(s,1H),9.30(s,1H),8.89(s,1H),8.74(s,2H),8.23(d,J=8.1Hz,1H),8.13(d,J=11.7Hz,3H),6.21(s,1H),6.13(s,1H),4.82(s,1H),4.44(d,J=44.1Hz,2H),4.18-4.11(m,1H),3.20-3.03(m,2H),2.19(s,3H),2.12(s,3H),1.91(s,2H),1.66(s,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：482.2[M+1].
Figure 109112254-A0202-12-0037-69
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.84(s,1H),9.28(s,1H),8.95 (s,1H),8.61(d,J=4.6Hz,1H),8.14(d,J=8.0Hz,1H),7.84(d,J=7.8Hz,2H),7.67(d,J=7.8Hz,2H),7.52(dd,J=7.9,4.8Hz,1H),6.23(s,1H),6.13(s,1H),4.80(s,1H),4.47(s,1H),4.38(s,1H),4.18(s,1H),3.12-3.08(m,2H),2.19(s,3H),2.12(s,3H),1.87(s,2H),1.66(s,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：481.3[M+1].
實施例7
Figure 109112254-A0202-12-0038-72
第一步：3-(6-溴-4-甲基吡啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸甲酯的合成
Figure 109112254-A0202-12-0038-73
將2-氟-4-甲基-6-溴-吡啶(8a)(1.9g,10mmol)、3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(2a)(2.54g,12mmol)、K2CO3(4.14g,30mmol)溶於25mL DMF中，於110℃下攪拌反應，TLC監測反應至原料消失，恢復至室溫，加入10mL水淬滅反應，加入150mL乙酸乙酯，有機相分別水洗三次(25mL×3)，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑後，矽膠柱層析分離產物(展開劑及體積比為：石油醚：乙酸乙酯=7：1)，真空乾燥得3-(6-溴-4-甲基吡啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸甲酯(8b)820mg，產率22%。
MS m/z(ESI)：382.1[M+1]
第二步：3-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)吡啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸甲酯的合成
Figure 109112254-A0202-12-0039-75
在氮氣氛下，將3-(6-溴-4-甲基吡啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸甲酯(8b)(754mg,1.97mmol)、5-甲基-1H-3-氨基吡唑(1b)(380mg,3.94mmol)、Pd2(dba)3(357mg,0.39mmol)、t-BuXphos(336mg,0.79mmol)和醋酸鉀(579mg,5.91mmol)溶於17mL DMAc中，於140℃下攪拌反應，TLC監測至反應結束後，反應液恢復至室溫，加入100mL乙酸乙酯，有機相分別水洗三次(20mL×3)，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，矽膠柱層析分離產物(洗脫劑及比例：石油醚：乙酸乙酯=1：1)，得3-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)吡啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸甲酯(8c)520mg，產率61%。
MS m/z(ESI)：399.3[M+1]
第三步：6-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-4-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-2-胺鹽酸鹽的合成
Figure 109112254-A0202-12-0039-74
將3-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)吡啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸甲酯(8c)(520mg,1.3mmol)溶於8mL 1,4-二氧六環中，滴加10mL濃度為2.6mol/L氯化氫的1,4-二氧六環溶液，於50℃下反應，LC-MS監測反應至原料消失，恢復至室溫，減壓除去溶劑，加入20mL乙酸乙酯，攪拌10分鐘，過濾，濾餅分別用乙酸乙酯、乙醚洗滌，真空乾燥得6-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-4-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-2-胺鹽酸鹽(8d)324mg，產率74%。
MS m/z(ESI)：299.2[M+1]
第四步：6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)噠嗪-3-基)(8-(4-甲基-6-((5-甲基 -1H-吡唑-3-基)氨基)吡啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)甲酮的合成
Figure 109112254-A0202-12-0040-76
將6-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-4-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-2-胺鹽酸鹽(8d)(184mg,0.55mmol)、6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)噠嗪-3-甲酸(2g)(104mg,0.5mmol)和PyBOP(289mg,0.75mmol)溶於5mL DMF中，將反應液冷卻至0℃，加入DIPEA(204mg,2mmol)，保持0℃反應20分鐘後，加入3mL水淬滅反應，加入50mL乙酸乙酯，有機相分別水洗三次(10mL×3)，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，矽膠柱層析分離(洗脫劑及比例：二氯甲烷：甲醇=15：1)得(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)噠嗪-3-基)(8-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)吡啶-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)甲酮(I-30)63mg，產率26%。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ 9.07(d,J=4.2Hz,1H),8.61(s,1H),8.34(d,J=9.1Hz,1H),8.21(d,J=9.1Hz,1H),8.15(d,J=3.4Hz,2H),6.34(s,1H),5.99(s,1H),5.90(s,1H),4.91(s,1H),4.78(s,1H),4.11(d,J=12.1Hz,1H),3.98(d,J=11.4Hz,1H),3.16(d,J=8.3Hz,1H),3.04(d,J=11.7Hz,1H),2.18(s,3H),2.12(s,3H),1.95(d,J=8.9Hz,2H),1.80(d,J=8.4Hz,2H)ppm.
MS m/z(ESI)：489.3[M+1]
生物學評價
測試例1、本發明化合物對RET激酶活性的測定
本方法使用Cisbio公司的HTRF®KinEASE-TK酪氨酸激酶試劑盒(貨號62TK0PEB)，通過測定生物素化的多肽底物磷酸化程度，以時間分辨-螢光能量共振轉移方法(TR-FRET)進行測定。人源RET蛋白(RET激酶)購買於Carna bioscience(日本，貨號08-159-5μg)。
實驗步驟如下：
(1)將待測化合物(本發明化合物和作為對照的WO2018017983A1中的化合物164)溶解於100%的DMSO中，使其終濃度為10mM。
(2)用46uL的100% DMSO溶解4uL步驟(1)配製的待測化合物溶液，將本步驟得到的溶液編為2號。
(3)將2號溶液進行後續梯度稀釋，稀釋倍數為5倍(即20μL的100% DMSO加5μL化合物)，共稀釋9個梯度，編號為3到11號。
注：2號不用於第(4)步的稀釋。
(除特別說明，以下步驟均需要在冰上進行)
(4)用試劑盒(Cisbio，貨號62TK0PEB)中提供的緩衝液對編號為3到11號的溶液繼續進行梯度稀釋，稀釋倍數為20倍(即3到11號溶液中分別加19μL緩衝液)。此時，3到11號體系中待測化合物的終濃度範圍為3200nM~0.008nM(9個梯度)，DMSO終濃度為2%。
(5)將步驟(4)中9個梯度濃度的待測化合物溶液按濃度依次加入384孔板中，每孔4μL，設置兩個複孔。
(6)每孔加2μL的人源RET蛋白，冰上孵育10分鐘。
(7)每孔加入2μL的ATP(Sigma #A7699)和2μL的生物素化多肽底物(Cisbio，貨號62TK0PEB)啟動磷酸化反應。在37℃下孵育半小時。
(8)每孔中加入5μL偶聯有銪系元素化合物的抗磷酸化酪氨酸抗體(試劑盒內提供，貨號62TK0PEB)和5μL偶聯有修飾化的別藻藍蛋白XL665的鏈黴親和素(Cisbio，貨號62TK0PEB)。
(9)室溫下繼續孵育1小時。孵育結束後，用酶標儀(BMG Labtech，型號：FLUOStar Omega)的TF-FRET模式測定各孔在激發波長為304nM，讀取各孔在發射波長為615nM和665nM下的螢光強度，自動算出比值。
(10)通過與對照組螢光強度比值進行對比，計算化合物在各濃度下的抑制率，進而通過GraphPad Prism5以對數濃度-抑制率進行曲線擬合，計算化合物的IC50值，結果見下表2。
選用的對照激酶為與RET激酶結構類似的另一種受體酪氨酸激酶KDR，購買自Carna bioscience(日本，貨號08-191-5μg)。梯度稀釋步驟同RET激酶，使待測化合物在反應體系中的終濃度範圍為16000nM~0.04nM(用2-10號溶液進行步驟4的梯度稀釋)，其他反應條件同上，DMSO的終濃度為2%。待測化合物對KDR激酶抑制的IC50值計算方法與RET激酶抑制的IC50值 計算方法相同。
Figure 109112254-A0202-12-0042-77
從上表可以看出，本發明的化合物對RET激酶活性具有顯著的抑制作用，且抑制作用的效果均明顯優於WO2018017983A1中的化合物164。本發明化合物對於RET激酶的抑制活性也明顯優於對KDR激酶的抑制活性。 因此本發明化合物可作為一類有效的選擇性RET激酶抑制劑。
其中化合物164的結構式如下所示，其結構和製備方法公開於WO2018017983A1。
Figure 109112254-A0202-12-0043-78

Claims (12)

  1. 一種式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽：
    Figure 109112254-A0305-02-0046-1
     其中：a環選自吡唑基、吡啶基或者吡啶酮基；R1選自氫、C1-C3烷基或C3-C6環烷基，所述C1-C3烷基和C3-C6環烷基任選進一步被一個或多個鹵素原子所取代；X1選自CH或N；R2選自氫或C1-C6烷基；R3選自氫、氰基、C1-C6烷基、C1-C5伯醇基、C3-C7叔醇基、C1-C3烷氧基、C3-C6環烷基和-R9CO2R10，所述C1-C6烷基、C1-C5伯醇基、C3-C7叔醇基、C1-C3烷氧基和C3-C6環烷基任選進一步被一個或多個鹵素原子所取代；或者R2、R3與其所連接的兩個碳原子一起形成芳基，所述芳基任選進一步被一個或多個鹵素原子或C1-C6烷基取代；R9選自化學鍵或C1-C4亞烷基；R10選自氫或C1-C6烷基；X2，X3，X4選自CH或N；當X2為N時，X3，X4中最多有一個為N；當X2為CH時，X3，X4均為CH；R4，R4’，R5，R5’，R6，R6’，R7，R7’獨立地選自氫、C1-C3烷基或C1-C4烷氧基，所述C1-C3烷基任選進一步被一個或多個羥基、羧基或氰基所取代；或者，R4和R4’，R5和R5’，R6和R6’或者R7和R7’連接在一起形成-(CH2)2-，-(CH2)3-，-CH(CH3)CH2-，-OCH2CH2-或-CH2OCH2-；或者，R4和R5，R4和R6，R4和R7，R4’和R5’，R4’和R6’，R4’和R7’，R5和R6，R5和R7，R5’和R6’，R5’和R7’，R6和R7或者R6’和R7’連接在一起形成 -(CH2)q-或-(CH2OCH2)-；或者，R4和R4’，R5和R5’，R6和R6’或者R7和R7’一起代表=O；e環選自吡唑基、吡啶基、苯基或3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基；R8獨立地選自氫、鹵素、氰基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基或C3-C6環烷基，所述C1-C3烷基、C1-C3烷氧基和C3-C6環烷基任選進一步被一個或多個鹵素原子所取代；m為1或2；n為1、2或3；q為2或3。
  2. 如請求項1所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其為式(II)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽：
    Figure 109112254-A0305-02-0047-2
     其中：e環，X1，X2，X3，X4，R1，R2，R3，R4，R4’，R5，R5’，R6，R6’，R7，R7’，R8，m和n的定義如請求項1中所述。
  3. 如請求項1或2所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R3選自氫、氰基、C1-C6烷基、-CH2OH、-C(CH3)2OH、C1-C3烷氧基、C3-C6環烷基和-R9CO2R10，所述C1-C6烷基任選進一步被一個或多個鹵素原子所取代，或者R2、R3與其所連接的兩個碳原子一起形成芳基，所述芳基任選進一步被一個或多個鹵素原子或C1-C6烷基取代，R9選自化學鍵或C1-C4亞烷基，R10選自氫或C1-C6烷基。
  4. 如請求項3所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中所述R3選自氫、甲基、三氟甲基、-CH2OH、-C(CH3)2OH、-COOH和-COOMe， 或者R2、R3與其所連接的兩個碳原子一起形成苯環。
  5. 如請求項1-4任一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中所述R4，R4’，R5，R5’，R6，R6’，R7，R7’各自獨立地選自氫、甲基、-CH2OH和-CH2CH2OH，或者R4和R4’，R5和R5’，R6和R6’或者R7和R7’連接在一起形成-(CH2)2-、-OCH2CH2-或-CH2OCH2-，或者R4和R5，R4和R6，R4和R7，R4’和R5’，R4’和R6’，R4’和R7’，R5和R6，R5和R7，R5’和R6’，R5’和R7’，R6和R7或者R6’和R7’連接在一起形成-CH2OCH2-或-(CH2)2-。
  6. 如請求項1-5任一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中所述R8獨立地選自氫、鹵素、氰基或C1-C3烷基，所述鹵素為氟或氯，所述C1-C3烷基為甲基。
  7. 如請求項1-6任一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中所述化合物選自以下化合物：
    Figure 109112254-A0305-02-0048-3
    Figure 109112254-A0305-02-0049-4
    Figure 109112254-A0305-02-0050-5
     或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽。
  8. 一種藥物組合物，其含有有效劑量的如請求項1~7中任一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，及可藥用的載體、賦形劑或它們的組合。
  9. 一種如請求項1~7中任一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽或如請求項8所述的藥物組合物在製備轉染期間重排激酶抑制劑中的用途。
  10. 一種如請求項1~7中任一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽或如請求項8所述的藥物組合物在製備用於治療由轉染期間重排基因驅動的疾病的藥物中的用途。
  11. 如請求項10所述的用途，其中所述疾病為癌症。
  12. 如請求項11所述的用途，其中所述癌症為肺癌、甲狀腺癌、結腸癌、乳腺癌或胰腺癌。
TW109112254A 2019-04-12 2020-04-10 哌嗪醯胺衍生物，其製備方法及其在醫藥上的用途 TWI749518B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910294193.9A CN111808077B (zh) 2019-04-12 2019-04-12 哌嗪酰胺衍生物，其制备方法及其在医药上的用途
CN201910294193.9 2019-04-12

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW202104209A TW202104209A (zh) 2021-02-01
TWI749518B true TWI749518B (zh) 2021-12-11

Family

ID=72750953

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW109112254A TWI749518B (zh) 2019-04-12 2020-04-10 哌嗪醯胺衍生物，其製備方法及其在醫藥上的用途

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20220177450A1 (zh)
EP (1) EP3954680A4 (zh)
JP (1) JP7335972B2 (zh)
CN (1) CN111808077B (zh)
TW (1) TWI749518B (zh)
WO (1) WO2020207419A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117466901A (zh) * 2022-07-23 2024-01-30 浙江海正药业股份有限公司 哌嗪酰胺衍生物的晶型及其制备方法和用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018017983A1 (en) * 2016-07-22 2018-01-25 Blueprint Medicines Corporation Compounds useful for treating disorders related to ret
CN108473468A (zh) * 2015-11-02 2018-08-31 蓝图药品公司 Ret的抑制剂
TW201904974A (zh) * 2017-06-15 2019-02-01 大陸商浙江海正藥業股份有限公司 雜芳基并嘧啶酮類衍生物、其製備方法及其在醫藥上用途

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007269629A (ja) * 2004-06-21 2007-10-18 Astellas Pharma Inc キナゾリン誘導体
EP1715059A1 (en) * 2005-04-21 2006-10-25 Esbatech AG Method for the identification of possibly harmful receptor tyrosine kinase (RTK) mutations and of inhibitors or medication directed against RTK mutants
CN103242341B (zh) * 2013-04-19 2015-12-09 中国科学院广州生物医药与健康研究院 噻吩并2，4取代嘧啶类化合物及其药物组合物与应用
WO2016127074A1 (en) 2015-02-06 2016-08-11 Blueprint Medicines Corporation 2-(pyridin-3-yl)-pyrimidine derivatives as ret inhibitors
SI3322706T1 (sl) 2015-07-16 2021-04-30 Array Biopharma, Inc. Substituirane pirazolo(1,5-A)piridinske spojine kot zaviralci ret-kinaze
TW201738228A (zh) 2016-03-17 2017-11-01 藍圖醫藥公司 Ｒｅｔ之抑制劑
US10035789B2 (en) 2016-07-27 2018-07-31 Blueprint Medicines Corporation Compounds useful for treating disorders related to RET
JOP20190077A1 (ar) 2016-10-10 2019-04-09 Array Biopharma Inc مركبات بيرازولو [1، 5-a]بيريدين بها استبدال كمثبطات كيناز ret
AR109919A1 (es) * 2016-10-10 2019-02-06 Array Biopharma Inc Compuestos pirazolo[1,5-a]piridina sustituida como inhibidores de ret quinasa
WO2018136663A1 (en) 2017-01-18 2018-07-26 Array Biopharma, Inc. Ret inhibitors
ES2948194T3 (es) 2017-01-18 2023-09-01 Array Biopharma Inc Compuestos de pirazolo[1,5-a]pirazina sustituida como inhibidores de la cinasa RET

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108473468A (zh) * 2015-11-02 2018-08-31 蓝图药品公司 Ret的抑制剂
WO2018017983A1 (en) * 2016-07-22 2018-01-25 Blueprint Medicines Corporation Compounds useful for treating disorders related to ret
TW201904974A (zh) * 2017-06-15 2019-02-01 大陸商浙江海正藥業股份有限公司 雜芳基并嘧啶酮類衍生物、其製備方法及其在醫藥上用途

Also Published As

Publication number Publication date
EP3954680A4 (en) 2022-12-21
JP2022528437A (ja) 2022-06-10
TW202104209A (zh) 2021-02-01
WO2020207419A1 (zh) 2020-10-15
CN111808077A (zh) 2020-10-23
US20220177450A1 (en) 2022-06-09
EP3954680A1 (en) 2022-02-16
JP7335972B2 (ja) 2023-08-30
CN111808077B (zh) 2023-05-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2742115C2 (ru) Гетероциклические соединения в качестве ингибиторов киназы RET
TWI551595B (zh) 2,4-disubstituted benzene-1,5-diamine derivatives and their use, Its preparation of pharmaceutical compositions and pharmaceutical compositions
TWI751163B (zh) Ｆｇｆｒ４抑制劑、其製備方法和應用
JP6035423B2 (ja) 新規な縮合ピリミジン化合物又はその塩
TW202120488A (zh) 作為shp2抑制劑的化合物及其應用
CN108349896B (zh) 作为fgfr抑制剂的杂环化合物
CN114940683B (zh) Hpk1抑制剂及其用途
EP3694330B1 (en) Indazolyl-spiro[2.2]pentane-carbonitrile derivatives as lrrk2 inhibitors, pharmaceutical compositions, and uses thereof
CN109745321B (zh) 包含fgfr4抑制剂的药物组合物
WO2018028664A1 (zh) Fgfr4抑制剂及其制备方法和应用
CN111196814B (zh) 芳环连二噁烷并喹唑啉或喹啉类化合物、组合物及其应用
JP2022523477A (ja) ピロロピリミジン誘導体及びこれを有効成分として含有するタンパク質キナーゼ関連疾患の予防又は治療用薬学的組成物
WO2014090147A1 (zh) 嘧啶类衍生物及其可药用盐、其制备方法及其在医药上的应用
CN105884695B (zh) 杂环衍生物类酪氨酸激酶抑制剂
WO2020156319A1 (zh) N-甲酰胺衍生物、其制备方法及其在医药上的用途
JP7329510B2 (ja) ピラゾロピリジノン化合物
CN111836819A (zh) 一种含有芳胺基取代的吡咯并嘧啶类化合物、制备方法及其应用
TWI749518B (zh) 哌嗪醯胺衍生物，其製備方法及其在醫藥上的用途
JP2021504334A (ja) ピラゾロピリジノン化合物
WO2023006088A1 (zh) 一种用于egfr激酶抑制剂的化合物、组合物及其应用
CN114591334A (zh) 二氢吡唑并嘧啶酮衍生物
WO2021093720A1 (zh) 吡唑[1,5-a]吡啶-3-腈化合物及其在医药上的用途
CN115843296B (zh) Cdk9抑制剂及其用途
TWI772370B (zh) 作為胞內體類鐸（toll-like）受體抑制劑之化合物及組合物
CN116375712A (zh) 双吗啉取代的杂环化合物及其医药用途