TW201904974A - 雜芳基并嘧啶酮類衍生物、其製備方法及其在醫藥上用途 - Google Patents

雜芳基并嘧啶酮類衍生物、其製備方法及其在醫藥上用途

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Abstract

本發明涉及式（I）所示的雜芳基并嘧啶酮類衍生物、其製備方法及其作爲治療劑的用途，特別是作爲乙醯輔酶A羧化酶 (ACC) 抑制劑的用途，其中式（I）中的各取代基的定義與說明書中的定義相同。

Description

雜芳基并嘧啶酮類衍生物、其製備方法及其在醫藥上用途
本發明涉及一種雜芳基并吡啶酮類衍生物、其製備方法、含有該衍生物的藥物組合物以及其作為治療劑特別是作為乙醯輔酶A羧化酶(ACC)抑制劑的用途。
乙醯輔酶A羧化酶 (Acetyl-CoA carboxylase，ACC) 是參與脂肪酸代謝過程的重要蛋白之一，它以生物素(biotin)為輔酶，催化乙醯輔酶A (acetyl-CoA )生成丙二醯輔酶A (malonyl-CoA)這一不可逆反應，進而為後續脂肪酸的合成提供底物或調節脂肪酸氧化信號，該反應為脂肪酸代謝的第一步反應且為限速步驟。該催化反應可分為兩步，分別依賴於ACC所具有的生物素羧化酶 (biotin carboxylase, BC)和羧基轉移酶 (carboxyltransferase, CT)活性。
人體中ACC存在2個亞型，分別為ACC1和ACC2，其分別由ACACA和ACACB兩個基因單獨編碼表達。兩者在組織分佈和細胞內分佈上存在差異，ACC1 是胞漿酶，主要在脂肪合成組織 (如脂肪及乳腺組織)中高水平表達；ACC2定位於線粒體膜，主要富集在氧化組織 (如心臟和骨骼肌) 中，在肝臟中兩者均以高水平表達。因此，ACC1主要參與調節脂肪酸的合成， ACC2主要負責脂肪酸的氧化過程調節。ACC的活性受多種蛋白、細胞因子、內分泌激素及受體調控。其中AMPK是調節ACC活性的主要物質，可藉由直接磷酸化ACC以抑制其活性；而蛋白磷酸化酶2可使ACC去磷酸化，從而增強ACC的作用。生理條件下，胞漿中合成的游離脂肪酸藉由線粒體膜上的肉鹼棕櫚醯轉移酶1(CPT1)運送至線粒體內進行氧化供能。而胞漿中的丙二醯輔酶A變構抑制CPTl，使其活性處於較低水平，從而限制脂肪酸氧化。當機體處於應激或能量消耗增加時，可立即激活AMPK途徑，使其下游ACC失活，丙二醯輔酶A水平迅速下降，進一步解除對CPTl的抑制作用，促進脂肪酸氧化供能，為機體提供更多的ATP。
脂肪酸合成的增加和脂肪酸氧化受損所導致的脂肪酸代謝失調是多種代謝類疾病的共同特點，其涉及的疾病包括：肝脂肪變性、血脂異常、肥胖症、代謝綜合征、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)， 2 型糖尿病(T2DM)以及動脈粥樣硬化。此外，脂肪酸代謝異常也是腫瘤疾病的特徵之一，參與調節惡性腫瘤異常的細胞增殖過程。由於ACC作為脂類代謝的關鍵調節蛋白，藥物抑制ACC可在限制脂源組織中的脂肪酸的合成的同時，在氧化組織中刺激促進脂肪酸的氧化，因此為治療上述存在脂類代謝異常的疾病提供了一種極具吸引力的治療方式。
目前已經公開了一系列的ACC抑制劑專利，其中包括WO2014182943、WO2014182945、WO2014182950等，ACC抑制劑的研究和應用已取得一定的進展，例如目前吉列德公司的firsocostat處於臨床II期，但是現有技術中公開的化合物以及試驗藥物在有效性、安全性或適用性等方面仍不能令人滿意，仍有必要繼續研究和開發新的ACC抑制劑，以滿足人們日益增長的醫療和健康需要。
本發明人藉由實驗研究意外地發現，下式(I)的化合物可以有效抑制ACC。
因此，在第一個方面，本發明提供了一類如式（I）所示的雜芳基并嘧啶酮類衍生物：包括其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽， 其中： X選自-NH-、-O-或-S-；優選為-S-； 環A選自環烷基，且與環A相連接的R2 和N，不連接在同一個碳原子上； R1 選自氫原子、烷基或鹵素，其中所述的烷基任選進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、氰基、硝基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 的取代基所取代； R2 選自氫原子、羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 ，其中所述的烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR11 R12 、-C(O)NR11 R12 、-C(O)R13 、-C(O)OR13 或-NR11 C(O)R12 的取代基所取代； R3 選自芳基或雜芳基，其中所述的芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自R7 的取代基所取代； R4 和R5 各自獨立地選自氫原子、烷基、-OR10 、-SR10 、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 ； 或者，R4 、R5 與其所連接的原子一起形成3~8元飽和或部分不飽和環烷基，或形成具有1個或多個選自N、O、S(O)q 的雜原子的4~8元飽和或部分不飽和雜環基；其中所述環烷基或雜環基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 的取代基所取代； R6 選自鹵素、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 ；優選為雜芳基； 或者，R1 、R6 與其所連接的原子一起形成3~8元飽和或部分不飽和環烷基，或形成具有1個或多個選自N、O、S(O)q 的雜原子的4~8元飽和或部分不飽和雜環基，或形成5~10元芳基或雜芳基；其中所述環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 的取代基所取代； R7 各自獨立地選自羥基、鹵素、氰基、硝基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 ，其中所述烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 的取代基所取代； R8 、R9 和R10 各自獨立地選自氫原子、烷基、-OR13 、氰基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR11 R12 、-C(O)NR11 R12 、-C(O)R13 、-C(O)OR13 或-NR11 C(O)R12 的取代基所取代； 或者，R8 、R9 與其所連接的N原子一起形成一個4～8元雜環基，其中所述4～8元雜環內含有一個或多個N、O或S(O)q 原子，並且所述4～8元雜環上進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、=O、-NR11 R12 、-C(O)NR11 R12 、-C(O)R13 、-C(O)OR13 或-NR11 C(O)R12 的取代基所取代； R11 、R12 和R13 各自獨立地選自氫原子、烷基、烯基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；且 q為0、1或2。
在本文中，式(I)化合物（以及式(II)至式(IV)化合物）在範圍上也包括其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽。
在本發明的一些優選方案中，所述式( I )化合物具有式(II)結構：其中： m為1、2、3、4或5；且 環A、R1 、R2 、R6 、R7 和R10 的定義如式( I )中所述。
在本發明的一些優選方案中，所述式( I )化合物具有特定的立體構型，即具有式(III)所述的結構：其中： m為1、2、3、4或5；且 環A、R1 、R2 、R6 、R7 和R10 的定義如式( I )中所述。
在本發明的一些優選方案中，所述式( I )化合物具有式(IV)結構：其中： m為1、2、3、4或5；且 環A、R1 、R2 、R6 、R7 和R10 的定義如式( I )中所述。
在本發明的一些優選方案中，提供了式( I )、( II )、( III )或( IV )所述的化合物，其中R1 選自甲基或三氟甲基。
在本發明的一些優選方案中，提供了式( I )、( II )、( III )或( IV )所述的化合物，其中： R2 選自四唑基、-C(O)OR13 或-C(O)NR8 R9 ； R8 選自氫原子或烷基； R9 選自氰基或-OR13 ； R13 選自氫原子、烷基、烯基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代； R2 優選為-C(O)OH。
在本發明的一些優選方案中，提供了式( I )、( II )、( III )或( IV )所述的化合物，其中環A選自如下基團：、、、、、、、或； 優選為。
在本發明的一些優選方案中，提供了式( I )、( II )、( III )或( IV )所述的化合物，其中R6 選自5元雜芳基，優選為噻唑基。
在本發明的一些優選方案中，提供了式( I )、( II )、( III )或( IV )所述的化合物，其中R7 選自鹵素或烷氧基，優選為甲氧基。
在本發明的一些優選方案中，提供了式( I )、( II )、( III )或( IV )所述的化合物，其中R10 為四氫吡喃-4-基。
本發明的典型化合物包括，但不限於
上述典型化合物包括其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽。
進一步，本發明提供製備式(I)化合物的方法，該方法包括：使式(IA)化合物與R6 取代的三丁基甲錫烷反應，使得到的化合物任選進一步水解，以及使得到的化合物任選進一步拆分光學純異構體，得到式( I )化合物； 其中：X1 選自鹵素；且X、環A、R1 ~R6 的定義如式( I )中所述。
本發明提供了式(IA)所示的化合物：其中： X1 選自鹵素；且X、環A、R1 ~R5 的定義如式( I )中所述。
式(IA)的典型化合物包括，但不限於
上述典型化合物包括其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽。
進一步，本發明提供了製備式( IA )化合物的方法，所述方法包括：使式(IB)化合物與式(IC)化合物在三苯基膦存在下反應，得到式( IA )化合物； 其中： X1 選自鹵素；且X、環A、R1 ~R5 的定義如式( I )中所述。
另一方面，本發明提供了一種藥物組合物，所述的藥物組合物含有有效劑量的式( I )、( II )、( III )或( IV )所述的化合物，以及任選的可藥用的載體、賦形劑或它們的組合。
在又一方面，本發明提供一種抑制ACC的方法，包括使ACC與本發明的式( I )、( II )、( III )或( IV )化合物或其藥物組合物相接觸。本發明相應地還提供了一種預防或治療與ACC相關的疾病或狀況的方法，包括向有此需要的對象施用根據本發明的化合物或藥物組合物。
在另一方面，本發明提供了式( I )、( II )、( III )或( IV )所述的化合物或其藥物組合物在製備用作ACC抑制劑的藥物中的用途。
本發明還提供了式( I )、( II )、( III )或( IV )化合物或其藥物組合物在製備用於預防或治療與ACC相關的疾病或狀況的藥物中的用途，其中所述疾病或狀況優選為代謝類疾病，癌症，真菌、寄生蟲或細菌感染，其中所述代謝類疾病優選為肝脂肪變性、非酒精性脂肪肝、肥胖症、血脂異常、高脂血症、II型糖尿病或代謝綜合征，其中所述肥胖症優選為普拉德-威利綜合征(Prader-Willi syndrome)、巴德-畢德氏綜合征(Bardet-Biedl syndrome)或科恩綜合征(Cohen syndrome)或MOMO 綜合征，其中所述癌症優選為肝細胞癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、胃癌、結直腸癌、頭頸部腫瘤、黑色素瘤、卵巢癌或宮頸癌，更優選為肝細胞癌和非小細胞肺癌。
除非有相反陳述，否則本發明在說明書和申請專利範圍中所使用的部分術語定義如下：
“烷基”當作一基團或一基團的一部分時是指包括C1 -C20 直鏈或者帶有支鏈的C1 -C20 脂肪烴基團，優選為C1 -C10 烷基，更優選為C1 -C6 烷基，特別優選為C1 -C4 烷。烷基基團的實施例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代或未取代的。
“亞烷基”是二價烷基。優選為C1 -C10 亞烷基，更優選為C1 -C6 亞烷基，特別優選為C1 -C4 亞烷基。亞烷基基團的實施例包括但不限於亞甲基、亞乙基、、亞正丙基等。亞烷基可以是取代或未取代的。
“烯基”指由至少兩個碳原子和至少一個碳-碳雙鍵組成的如上定義的烷基，代表性實例包括但不限於乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-，2-或3-丁烯基等。優選C2 -C4 亞烷基。烯基可以是任選取代的或未取代的。
“炔基”作為一基團或一基團的一部分時是指含有一個碳碳三鍵的脂肪烴基團，其可為直鏈也可以帶有支鏈。優先選擇的是C2 -C10 炔基，更優選C2 -C6 炔基，最優選C2 -C4 炔基。炔基基團的實施例包括但不限於乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-、2-或3-丁炔基等。炔基可以是取代或未取代的。
“環烷基”是指飽和或部分飽和的單環、稠環、橋環或螺環的碳環。優選為C3 -C12 環烷基，更優選為C3 -C8 環烷基，最優選為C3 -C6 環烷基。單環環烷基的實施例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等，優選環丙基、環己烯基。
“亞環烷基”是二價環烷基。優選為C3 -C12 亞環烷基，更優選為C3 -C8 亞環烷基，最優選為C3 -C6 亞環烷基。亞烷基基團的實施例包括但不限於亞環丙基、亞環丁基、亞環戊基等。亞環烷基可以是取代或未取代的。
“螺環烷基”指5至18元的、含有兩個或兩個以上環狀結構的且單環之間彼此共用一個碳原子(稱螺原子)的多環基團，環內可含有1個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統。優選為6至14元，更優選為7至10元。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺環烷基分為單螺、雙螺或多螺環烷基，優選為單螺和雙螺環烷基，優選為4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元。“螺環烷基”的非限制性實施例包括但不限於：螺[4.5] 癸基、螺[4.4] 壬基、螺[3.5]壬基、螺[2.4]庚基。
“稠環烷基”指5至18元的、含有兩個或兩個以上環狀結構的彼此共用一對碳原子的全碳多環基團，其中一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統，優選為6至12元，更優選為7至10元。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、吡啶酮或多環稠環烷基，優選為雙環或三環，更優選為5元/5元或5元/6元雙環烷基。“稠環烷基”的非限制性實施例包括但不限於：二環[3.1.0]己基、二環[3.2.0]庚-1-烯基、二環[3.2.0]庚基、十氫化萘基或十四氫菲基。
“橋環烷基”指 5至18元的、含有兩個或兩個以上環狀結構的彼此共用兩個不直接相連接碳原子的全碳多環基團，其中一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統。優選為6至14元，更優選為7至10元。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、吡啶酮或多環橋環烷基，優選為雙環、三環或吡啶酮，更有選為雙環或三環。“橋環烷基”的非限制性實施例包括但不限於：(1s,4s)-二環[2.2.1] 庚基、二環[3.2.1]辛基、(1s,5s)-二環[3.3.1]壬基、二環[2.2.2]辛基、(1r,5r)-二環[3.3.2]癸基。
所述環烷基環可以稠合於芳基、雜芳基或雜環基環上，其中與母體結構連接在一起的環為環烷基，非限制性實施例包括茚滿基、四氫萘基、苯并環庚烷基等。環烷基可以是任選取代的或未取代的。
“雜環基”、“雜環”或“雜環的”在本申請中可交換使用，都是指非芳香性雜環基，其中一個或多個成環的原子是雜原子，如氧、氮、硫原子等，包括單環、稠環、橋環和螺環。優選具有5至7元單環或7至10元雙-或三環，其可以包含1，2或3個選自氮、氧和/或硫中的原子。“雜環基”的實例包括但不限於嗎啉基，氧雜環丁烷基，硫代嗎啉基，四氫吡喃基，1,1-二氧代-硫代嗎啉基，呱啶基，2-氧代-呱啶基，吡咯烷基，2-氧代-吡咯烷基，呱口井-2-酮，8-氧雜-3-氮雜-雙環[3.2.1]辛基和呱口井基。雜環基可以是取代或未取代的。
“螺雜環基” 指5至18元的、含有兩個或兩個以上環狀結構的且單環之間彼此共用一個原子的多環基團，其環內含有1個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)q (其中q選自0、1或2)的雜原子，其餘環原子為碳。優選為6至14元，更優選為7至10元。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺環烷基分為單螺雜環基、雙螺雜環基或多螺雜環基，優選為單螺雜環基和雙螺雜環基。更優選為4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元單螺雜環基。“螺雜環基”的非限制性實施例包括但不限於：1,7-二氧雜螺[4.5] 癸基、2-氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬基、7-氧雜螺[3.5] 壬基和5-氧雜螺[2.4]庚基。
“稠雜環基”指含有兩個或兩個以上環狀結構彼此共用一對原子的全碳多環基團，其中一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)q (其中q選自0、1或2)的雜原子，其餘環原子為碳。優選為6至14元，更優選為7至10元。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、吡啶酮或多環稠雜環基，優選為雙環或三環，更優選為5元/5元或5元/6元雙環稠雜環基。“稠雜環基”的非限制性實施例包括但不限於：八氫吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氫-1H-異吲哚基， 3-氮雜二環[3.1.0]己基，八氫苯并[b][1,4] 二㗁口井(dioxine)。
“橋雜環基”指5至18元、優選5至14元含有兩個或兩個以上環狀結構且彼此共用兩個不直接相連接的原子的多環基團，其中一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)q (其中q選自0、1或2)的雜原子，其餘環原子為碳。優選為6至14元，更優選為7至10元。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、吡啶酮或多環橋雜環基，優選為雙環、三環或吡啶酮，更有選為雙環或三環。“稠雜環基”的非限制性實施例包括但不限於：2-氮雜二環[2.2.1] 庚基， 2-氮雜二環[2.2.2]辛基和 2-氮雜二環[3.3.2] 癸基。所述雜環基環可以稠合於芳基、雜芳基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜環基。雜環基可以是任選取代的或未取代的。
“亞雜環基”是指二價雜環基。優選具有5至7元單環亞雜環基或7至10元雙環雜環基或三環亞雜環基，其可以包含1，2或3個選自氮、氧和/或硫中的原子。亞雜環基可以是取代或未取代的。
“芳基”是指含有一個或者兩個環的碳環芳香系統，其中所述環可以以稠合的方式連接在一起。術語“芳基”包括比如苯基、萘基、四氫萘基的芳香基團。優選芳基為C6 -C10 芳基，更優選芳基為苯基和萘基，最優選為苯基。芳基可以是取代或未取代的。所述“芳基”可與雜芳基、雜環基或環烷基稠合，其中與母體結構連接在一起的為芳基環，非限制性實施例包括但不限於： 和。
“雜芳基”是指芳香族5至6元單環或9至10元雙環，其可以包含1至4個選自氮、氧和/或硫中的原子。“雜芳基”的實施例包括但不限於呋喃基，吡啶基，2-氧代-1，2-二氫吡啶基，噠口井基，嘧啶基，吡口井基，噻吩基，異㗁唑基，㗁唑基，㗁二唑基，咪唑基，吡咯基，吡唑基，三唑基，四氮唑基，噻唑基，異噻唑基，1，2，3-噻二唑基，苯并間二氧雜環戊烯基，苯并咪唑基，吲哚基，異吲哚基，1，3-二氧代-異吲哚基，喹啉基，吲唑基，苯并異噻唑基，苯并㗁唑基和苯并異㗁唑基。雜芳基可以是取代或未取代的。所述雜芳基環可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環，非限制性實施例包括但不限於： 和。
“烷氧基”是指（烷基-O-）的基團。其中，烷基見本文有關定義。C1 -C6 的烷氧基為優先選擇，尤其優選C1 -C4 烷氧基。其實例包括，但不限於：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基等。
“羥基”指-OH基團。
“鹵素”是指氟、氯、溴和碘，優選氯、溴和碘。
“胺基”指-NH2 。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO2 。
“苄基”指-CH2 -苯基。
“羧基”指-C(O)OH。
“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或(環烷基)，其中烷基、環烷基的定義如上所述。
“DMSO”指二甲基亞碸。
“Et”指乙基。
“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，優選為最多5個，更優選為1～3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基替換。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，本領域技術人員能夠在不付出過多努力的情況下確定(藉由實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和鍵(如烯鍵)的碳原子結合時可能是不穩定的。
本說明書所述的“取代”或“取代的”，如無特別指出，均是指基團可被一個或多個選自以下的基團取代：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、胺基、鹵代烷基、羥烷基、羧基、羧酸酯基、=O、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 的取代基所取代；
“可藥用的鹽”是指上述化合物能保持原有生物活性並且適合於醫藥用途的某些鹽類。式（I ）化合物的可藥用的鹽可以為金屬鹽、與合適的酸形成的胺鹽，金屬鹽優選鹼金屬、鹼土金屬鹽，合適的酸包括無機酸和有機酸，例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡糖酸、麩胺酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、蘋果酸、馬來酸、扁桃酸、甲磺酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸等。特別優選的是鹽酸、氫溴酸、磷酸和硫酸，最優選的是鹽酸鹽。
“藥物組合物”表示含有一種或多種本文所述化合物（包括其可藥用的鹽或立體異構體、互變異構體或前體藥物等形式）與任選的其他藥物活性成分的混合物，其可以包含其他任選組分例如可藥用的載體和/或賦形劑。藥物組合物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
在本文中，用語“多個”包括兩個或更多個，例如兩個、三個、四個等。 本發明化合物的合成方法
為了完成本發明的目的，本發明採用如下技術方案：
本發明式( I )化合物的製備方法，包括以下步驟：使式(IB)化合物與式(IC)化合物在三苯基膦存在下反應，得到式( IA )化合物； 使式(IA)化合物與R6 取代的三丁基甲錫烷反應，使得到的化合物任選進一步水解，以及使得到的化合物任選進一步拆分光學純異構體，得到式( I )化合物； 其中：X1 選自鹵素；且X、環A、R1 ~R6 的定義如式( I )中所述。
以下結合實施例用於進一步描述本發明，但這些實施例並非限制著本發明的範圍。
實施例給出了式（I）所表示的代表性化合物的製備及相關結構鑒定數據。必須說明，下述實施例是用於說明本發明而不是對本發明的限制。1 H NMR圖譜是用Bruker儀器（400MHz）測定而得，化學位移用ppm表示。使用四甲基矽烷內標準（0.00ppm）。1 H NMR的表示方法：s=單峰，d=雙重峰，t=三重峰，q=四重峰，m=多重峰，br=變寬的，dd=雙重峰的雙重峰，dt=三重峰的雙重峰。若提供偶合常數時，其單位為Hz。
質譜是用LC/MS儀測定得到，離子化方式可為ESI或APCI。
薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254 矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm～0.2 mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm～0.5mm。
柱層析一般使用煙臺黃海矽膠200~300目矽膠為載體。
在下列實例中，除非另有指明，所有溫度為攝氏溫度，除非另有指明，各種起始原料和試劑來自市售或者是根據已知的方法合成，市售原料和試劑均不經進一步純化直接使用，除非另有指明，市售廠家包括但不限於Aldrich Chemical Company，ABCR GmbH & Co.KG，Acros Organics，廣贊化工科技有限公司和景顏化工科技有限公司等。
CD3 OD：氘代甲醇。
CDCl3 ：氘代氯仿。
DMSO-d6 ：氘代二甲基亞碸。
氬氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氬氣氣球。
實施例中無特殊說明，反應中的溶液是指水溶液。
對化合物進行純化，採用矽膠柱層析和矽膠薄板層析法，其中展開劑或洗脫劑體系選自：A：石油醚和乙酸乙酯體系；B：二氯甲烷和甲醇體系；C：二氯甲烷：乙酸乙酯；其中溶劑的體積比根據化合物的極性不同而不同，也可以加入少量的酸性或鹼性試劑進行調節，如醋酸或三乙胺等。 實施例1 (1R , 3R )-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸 第一步 2-(2-甲氧基苯基)環氧乙烷
將2-甲氧基苯甲醛1a (20.0 g，146.9 mmol) 溶於100 mL二甲亞碸中，依次加入叔丁基硫代次碘酸鹽(36.0 g，173.3 mmol)和氫氧化鈉(24.7 g，441.0 mmol)，加熱至80℃反應1.5小時。反應液冷卻至室溫，加入200 mL水，用石油醚（200 mL ×3）萃取，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液（200 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(2-甲氧基苯基)環氧乙烷1b (13.1 g，無色油狀物)，產率：57%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.27 (t, J=1.2 Hz, 1H), 7.17 (d, J=7.6 Hz, 1H), 6.98 (t, J=1.2 Hz, 1H), 6.89 (d, J=7.6 Hz, 1H), 4.22 (t, J=0.4 Hz, 1 H), 3.87 (s, 3H), 2.71 (dd, J=5.6, 2.4 Hz, 1 H) 3.14 (dd, J=5.6, 2.4 Hz, 1 H). 第二步 2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙醇
將(2-甲氧基苯基)環氧乙烷1b (26.0 g，173.0 mmol) 加入到攪拌的四氫-2H-吡喃-4-醇1c (53.1 g，519.7 mmol)和三氟甲磺酸鋁(4.10 g，8.65 mmol)中，室溫反應3小時。向反應液中加入200 mL二氯甲烷和200 mL水，分液，有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙醇1d (13.0 g，白色固體)，產率：30%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.42 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.26 (t, J=7.2 Hz, 1H), 6.98 (t, J=7.2 Hz, 1H), 6.87 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.07 (dd, J=8.0, 4.0 Hz, 1H), 3.87-4.00 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.62-3.72 (m, 1H), 3.46-3.58 (m, 2H), 3.32-3.43 (m, 2H), 2.35-2.37 (m, 1H), 1.99-2.03 (m, 1H), 1.77-1.80 (m, 1H), 1.60-1.70 (m, 2H). 第三步 2-(三丁基甲錫烷基)㗁唑
將㗁唑1e (500 mg，7.24 mmol)溶於12 mL四氫呋喃中。氮氣保護下，冷卻至-78℃攪拌5分鐘，緩慢加入正丁基鋰(4.56 mL，7.29 mmol)，加完後，在-78℃攪拌30分鐘。然後加入三丁基氯化錫(1.96 mL，7.24 mmol)，在-78℃攪拌10分鐘，升至室溫反應1小時。反應液減壓濃縮，向殘留物中加入15 mL正己烷，過濾，濾液減壓濃縮，得到2-(三丁基甲錫烷基)㗁唑1f (1.8 g，淡黃色液體)，產率：70%。1 H NMR (400 MHz, CDCl3): 7.84 (1H, s), 7.18 (1H, s), 1.67-1.53 (6H, m)，1.42-1.29 (6H, m), 1.20 (6H, m), 0.89 (9H, t, J=7 Hz). 第四步 2-胺基-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯
氬氣保護下，將2-氰基乙酸乙酯1g (185.5 g, 1.64 mol)、丙酮(100 g, 1.72 mol)、硫磺(53 g, 1.64 mol)溶於500 mL的無水乙醇中，緩慢滴加嗎啉1h (149.6 g, 1.64 mol), 20分鐘內加完。45℃下反應10小時。反應液冷卻至室溫，過濾除去剩餘硫粉。將濾液減壓濃縮，加入900 mL75%乙醇，室溫下攪拌30分鐘。黃色固體析出，過濾，除去固體，減壓濃縮濾液，在殘留物中加入600 mL 40%乙醇，70℃下攪拌30分鐘，自然冷卻，逐漸析出固體，過濾得到2-胺基-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯1i (95 g，綠色固體)，產率：31.4%。 MS m/z(ESI)：185.9 [M+1] 第五步 3-氧代環丁烷-1-甲酸叔丁酯
將3-氧代環丁烷-1-甲酸1j (5.7 g, 50 mmol)、叔丁醇(9.25 g, 125 mmol)、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(11.5 g, 60 mmol)和4-二甲胺基吡啶(3.1 g, 25 mmol)溶於130 mL二氯甲烷中，室溫下攪拌12小時。加入100 mL二氯甲烷稀釋反應液，依次以水(100 mL)、1N鹽酸水溶液(50 mL)和飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌，有機相以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到3-氧代環丁烷-1-甲酸叔丁酯1k (8.5 g，紅棕色油狀物)，產率：100%。 第六步 (1S, 3S)-3-羥基環丁烷-1-甲酸叔丁酯
將3-氧代環丁烷-1-甲酸叔丁酯1k (6.5 g，38.2 mmol)溶於72 mL四氫呋喃/甲醇(V:V = 8:1)中，0℃下分批加入硼氫化鈉(0.71 g, 19.1 mmol)，室溫下反應一小時。加入80 mL飽和碳酸鉀水溶液，以乙酸乙酯(100 mL×3)萃取，合併有機相，以飽和氯化鈉水溶液(80 mL)洗滌，分去水層，有機相以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到(1S , 3S )-3-羥基環丁烷-1-甲酸叔丁酯1l (6.58 g，粘稠固體)，產率：100%； 第七步 (1R, 3R)-3-(1,3-二氧代異吲哚啉-2-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯
將(1S , 3S )-3-羥基環丁烷-1-甲酸叔丁酯1l (4.9 g, 28.45 mmol)、異二氫吲哚-1,3-二酮1m (4.6 g, 31.3 mmol)和三苯基膦(11.2 g, 42.1 mmol)溶於80 mL四氫呋喃中，攪拌下加入偶氮二異丙基二羧酸(8.6 g, 42.7 mmol)，室溫下反應2小時。減壓濃縮，以20 mL乙酸乙酯溶解殘留物，加入100 mL石油醚，析出大量三苯氧磷，過濾除去三苯氧磷，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到(1R , 3R )-3-(1,3-二氧代異吲哚啉-2-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯1n (7.5 g，白色固體)，產率：87.5%。 第八步 (1R, 3R)-3-胺基環丁烷-1-甲酸叔丁酯
將(1R , 3R )-3-(1,3-二氧代異吲哚啉-2-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯1n (4.5 g，14.9 mmol)溶於45 mL乙醇中，加入水合肼(2.2 g, 44.8 mmol)，室溫下反應12小時。過濾，以乙醇(10 mL×2)洗滌濾餅，濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到(1R , 3R )-3-胺基環丁烷-1-甲酸叔丁酯1o (1.2 g，無色油狀)，產率：66.4%。 第九步 2-(3-(1R, 3R)-3-(叔丁氧基羰基)環丁基)脲基)-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯
將2-胺基-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯1i (1.44 g，7.8 mmol)溶於60 mL二氯甲烷中，0℃下，滴加雙(三氯甲基)碳酸酯(810 mg, 2.7 mmol)的二氯甲烷溶液(10 mL)，室溫下攪拌30分鐘。0℃下加入三乙胺(2.4 g, 23.4 mmol)，室溫下攪拌30分鐘。0℃下加入(1R , 3R )-3-胺基環丁烷-1-甲酸叔丁酯1o (1.3 g，7.8 mmol)，室溫下反應30分鐘。加入100 mL二氯甲烷稀釋反應液，以飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌，分去水層，有機相以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(3-(1R , 3R )-3-(叔丁氧基羰基)環丁基)脲基)-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯1p (2.5 g，白色固體)，產率：83%。 MS m/z(ESI)：383.0 [M+1] 第十步 (1R, 3R)-3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯
將2-(3-(1R , 3R )-3-(叔丁氧基羰基)環丁基)脲基)-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯1p (250 mg, 0.65 mmol)和碳酸銫(426 mg, 1.31 mmol)溶於3 mLN,N-二甲基甲醯胺中，100℃下反應2小時。加入50 mL乙酸乙酯稀釋反應液，有機相依次用水(10 mL×3)和飽和氯化鈉水溶液(10 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到(1R , 3R )-3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯1q (200 mg，白色固體)，產率：91.3%。 MS m/z(ESI)：280.9 [M-55] 第十一步 (1R, 3R)-3-(6-溴-5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯
將(1R , 3R )-3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯1q (2.2 g, 6.54 mmol)溶於50 mL二氯甲烷中，0℃下加入N-溴代琥珀醯亞胺(1.4 g, 7.85 mmol)，在0℃下反應30 分鐘。加入200 mL二氯甲烷稀釋反應液，以飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌，分去水層，有機相以無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到(1R , 3R )-3-(6-溴-5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯1r (2.5 g，白色固體)，產率：92.0%。 MS m/z(ESI)：358.8 [M-55] 第十二步 (1R, 3R)-3-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯
氮氣保護下，將(1R , 3R )-3-(6-溴-5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯1r (723 mg, 1.74 mmol)、2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙醇1d (834 mg, 3.30 mmol)和三苯基膦(912 mg, 3.48 mmol)溶於20 mL無水四氫呋喃中。冷卻至0℃攪拌3分鐘，加入偶氮二甲酸二異丙酯(0.69 mL, 3.48 mmol) 溶於4 mL四氫呋喃的溶液，加完後，升至室溫反應18小時。反應液減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到(1R , 3R )-3-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯1s (986 mg，白色固體)，產率：87%。 MS m/z(ESI)：649.8 [M+1] 第十三步 (1R, 3R)-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯
氮氣保護下，將(1R , 3R )-3-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯1s (986 mg，1.52 mmol)、2-(三丁基甲錫烷基)㗁唑1f (817 mg，2.28 mmol)和四三苯基膦鈀(245 mg，0.21 mmol)溶於12 mL 甲苯中，加熱至110℃反應7小時。反應液冷卻至室溫，加入40 mL 水，用乙酸乙酯(15 mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到(1R , 3R )-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯1t (756 mg，淡黃色固體)，產率：78 %。 MS m/z(ESI)：638.8 [M+1] 第十四步 (1R, 3R)-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸
將(1R , 3R )-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸叔丁酯1t (756 mg，1.18 mmol)溶於10 mL 二氯甲烷中。 0℃下滴加2 mL三氟乙酸，加完後，升至室溫反應3小時。向反應液中加入25 mL水，用乙酸乙酯(10 mL×3)萃取，用水(30 mL×4)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物用矽膠薄板層析法(展開劑：B體系)純化，得到(1R , 3R )-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸1 (185 mg，白色固體)，產率：27 %。 MS m/z(ESI)：582.2 [M+1]1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.31 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.49 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.29 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 7.13- 6.89 (m, 2H), 5.53 (m, 1H), 5.31 (m, 1H), 4.02 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.55 (m, 2H), 3.36 (m, 1H), 3.24 (m, 2H), 3.07 (m, 3H), 2.78 (s, 3H), 2.41 (s, 2H), 1.63 (s, 2H), 1.42-1.12 (m, 2H). 實施例2和實施例3 (1R, 3R)-3-(1-((S)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸 (1R, 3R)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸 第一步 (1R, 3R)-3-(1-((S)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸 (1R, 3R)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸
將(1R , 3R )-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸1 (120 mg, 0.60 mmol)藉由採用超臨界流體色譜(SFC)法，用製備色譜和手性柱對手性異構體進行拆分(手性柱ChiralPak AS, 250×30 mm I.D., 5µm； 70 mL/min；流動相為A (對於CO2 )和B (對於甲醇)(0.1%NH3 .H2 O))，得到(1R , 3R )-3-(1-((S )-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸2 (56.3 mg, 白色固體)，產率：46.9%，保留時間5.289 min，ee值99.7%; (1R , 3R )-3-(1-((R )-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸3 (63.3 mg, 白色固體)，產率：52.28%，保留時間 4.505 min，ee值99.8%。化合物 2 MS m/z(ESI)：582.2 [M+1]1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.31 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.49 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.29 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 7.13- 6.89 (m, 2H), 5.53 (m, 1H), 5.31 (m, 1H), 4.02 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.55 (m, 2H), 3.36 (m, 1H), 3.24 (m, 2H), 3.07 (m, 3H), 2.78 (s, 3H), 2.41 (s, 2H), 1.63 (s, 2H), 1.42-1.12 (m, 2H).化合物 3 MS m/z(ESI)：582.2 [M+1]1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.31 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.49 (d,J = 7.4 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.29 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 7.13- 6.89 (m, 2H), 5.53 (m, 1H), 5.31 (m, 1H), 4.02 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.55 (m, 2H), 3.36 (m, 1H), 3.24 (m, 2H), 3.07 (m, 3H), 2.78 (s, 3H), 2.41 (s, 2H), 1.63 (s, 2H), 1.42-1.12 (m, 2H). 實施例4 (1S, 3S)-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸 第一步 3-氧代環丁烷-1-甲酸乙酯
將3-氧代環丁烷-1-甲酸1j (4.56 g, 40 mmol)、乙醇(2.3 g, 50 mmol)、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(9.2 g, 48 mmol)和4-二甲胺基吡啶(2.4 g, 20 mmol)溶於100 mL二氯甲烷中，室溫下攪拌12小時。加入100 mL二氯甲烷稀釋反應液，依次以水(150 mL)、1N鹽酸水溶液(50 mL)和飽和氯化鈉水溶液(100 mL)洗滌，有機相以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到3-氧代環丁烷-1-甲酸乙酯4a (5.5 g，無色油狀物)，產率：96.7%。 第二步 (1S, 3S)-3-(二苄基胺基)環丁烷-1-甲酸乙酯
將3-氧代環丁烷-1-甲酸乙酯4a (5.5 g, 40 mmol)和二苄胺(8.58 g, 44 mmol)溶於180 mL四氫呋喃中，室溫下攪拌1小時。加入三乙醯基硼氫化鈉(17.1 g, 80 mmol)和20 mL乙酸，室溫下反應12小時。減壓下除去四氫呋喃，加入飽和碳酸氫鈉水溶液，調節pH至鹼性，以乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，合併有機相，以50 mL飽和氯化鈉水溶液洗滌，有機相以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠薄板層析法(展開劑：A體系)純化，得到(1S , 3S )-3-(二苄基胺基)環丁烷-1-甲酸乙酯4b (6.0 g，無色油狀物)，產率：46.5%。 第三步 (1S, 3S)-3-胺基環丁烷-1-甲酸乙酯
將(1S , 3S )-3-(二苄基胺基)環丁烷-1-甲酸乙酯4b (5.0 g, 15.5 mmol)溶於150 mL乙醇中，加入10%Pd-C (200 mg, 4%)，置換氫氣3次，室溫下反應12小時。過濾，除去剩餘Pd-C，濾液減壓濃縮，得到(1S , 3S )-3-胺基環丁烷-1-甲酸乙酯4c (2.1 g，無色油狀)，產率：95.5%。 第四步 2-(3-((1S , 3S )-3-(乙氧基羰基)環丁基)脲基)-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯
將2-胺基-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯1i (2.78 g，15.0 mmol)溶於100 mL二氯甲烷中，0℃下，滴加雙(三氯甲基)碳酸酯(1.56 g, 5.25 mmol)的二氯甲烷溶液(20 mL)，室溫下攪拌30分鐘。0℃下加入三乙胺(4.5 g, 45 mmol)，室溫下攪拌30分鐘。0℃下加入(1S , 3S )-3-胺基環丁烷-1-甲酸乙酯4c (2.2 g，15.5 mmol)，室溫下反應30分鐘。加入100 mL二氯甲烷稀釋反應液，以飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌，分去水層，有機相以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(3-((1S , 3S )-3-(乙氧基羰基)環丁基)脲基)-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯4d (4.7 g，淡黃色固體)，產率：89%。 MS m/z(ESI)：354.9 [M+1] 第五步 (1S, 3S)-3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸乙酯
將2-(3-((1S , 3S )-3-(乙氧基羰基)環丁基)脲基)-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯4d (4.7 g, 13.3 mmol)和碳酸銫(8.67 g, 26.6 mmol)溶於30 mLN,N-二甲基甲醯胺中，100℃下反應1小時。加入150 mL乙酸乙酯稀釋反應液，依次以水(50 mL×3)和飽和氯化鈉水溶液(50 mL×1)洗滌，有機相以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到(1S , 3S )-3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸乙酯4e (2.0 g，淡黃色固體)，產率：49.0%。 MS m/z(ESI)：308.9 [M+1] 第六步 (1S , 3S )-3-(6-溴-5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸乙酯
將(1S , 3S )-3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸乙酯4e (2.0 g, 6.5 mmol)溶於65 mL二氯甲烷中，0℃下加入N-溴代琥珀醯亞胺(1.2 g, 6.5 mmol)，0℃下反應30 分鐘。加入200 mL二氯甲烷稀釋反應液，以飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌，分去水層，有機相以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到(1S , 3S )-3-(6-溴-5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸乙酯4f (2.0 g，白色固體)，產率：80.0%。 MS m/z(ESI)：386.8 [M+1] 第七步 (1S, 3S)-3-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸乙酯
氮氣保護下，將(1S , 3S )-3-(6-溴-5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸乙酯4f (2.0 mg，5.2 mmol)、2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙醇1d (1.52 g，6.0 mmol)和三苯基膦(1.58 g，6.0 mmol)溶於25 mL 無水四氫呋喃中。冷卻至0℃攪拌3分鐘，加入偶氮二甲酸二異丙酯(1.2 g，6.0 mmol) 溶於4 mL四氫呋喃的溶液，加完後，升至室溫反應18小時。反應液減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到(1S , 3S )-3-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸乙酯4g (2.9 g，白色固體)，產率：90 %。 MS m/z(ESI)：621.2 [M+1] 第八步 (1S, 3S)-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸乙酯
氮氣保護下，將(1S , 3S )-3-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸乙酯4g (1.24 g，2.0 mmol)、2-(三丁基甲錫烷基)㗁唑1f (1.4 g，3 mmol)和四三苯基膦鈀(323.5 mg，0.28mmol)溶於20 mL 甲苯中。加熱至110℃反應7小時。反應液冷卻至室溫，加入60 mL 水，用乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到(1S , 3S )-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸乙酯4h (936 mg，淡黃色固體)，產率：78 %。 MS m/z(ESI)：609.9 [M+1] 第九步 (1S, 3S)-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸
將(1S , 3S )-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸乙酯4h (936 mg，1.5 mmol)和氫氧化鋰(108 mg, 4.5 mmol)溶於10 mL四氫呋喃/甲醇中(V:V=1:1)。室溫反應12小時。減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠薄板層析法(展開劑：B體系)純化，得到(1S , 3S )-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸4 (760 mg，白色固體)，產率：87.3%。 MS m/z(ESI)：582.2 [M+1]1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.17 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.49 (d,J = 6.7 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.30 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.10- 6.92 (m, 2H), 5.33-5.26 (m, 1H), 5.04 (m , 1H), 4.16- 3.89 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.56 (m, 2H), 3.43-3.35 (m, 1H), 3.24 (m, 2H), 3.00 - 2.81 (m, 3H), 2.77 (s, 3H), 2.46 (m, 2H), 1.63 (s, 2H), 1.34-1.13 (m, 2H). 實施例5和實施例6 (1S, 3S)-3-(1-((S)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸 (1S, 3S)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸 第一步 (1S, 3S)-3-(1-((S)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸 (1S, 3S)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸
將(1S , 3S )-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸4 (130 mg, 0.23 mmol)藉由採用超臨界流體色譜(SFC)，用製備色譜和手性柱對手性異構體進行拆分(手性柱ChiralCel OJ, 250×30 mm I.D., 5µm；70 mL/min；流動相為A（對於CO2 ）和B（對於甲醇） (0.1%NH3 .H2 O))，得到(1S , 3S )-3-(1-((S )-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸5 (59.12 mg, 白色固體)，產率：45.48%，保留時間 3.736 min，ee值100%; (1S , 3S )-3-(1-((R )-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氫-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(㗁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氫噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)環丁烷-1-甲酸6 (68.73 mg, 白色固體)，產率：52.87%，保留時間 4.066 min，ee值99.8%。化合物 5 MS m/z(ESI)：582.2 [M+1]1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.17 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.49 (d,J = 6.7 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.30 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.10- 6.92 (m, 2H), 5.33-5.26 (m, 1H), 5.04 (m , 1H), 4.16- 3.89 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.56 (m, 2H), 3.43-3.35 (m, 1H), 3.24 (m, 2H), 3.00 - 2.81 (m, 3H), 2.77 (s, 3H), 2.46 (m, 2H), 1.63 (s, 2H), 1.34-1.13 (m, 2H).化合物 6 MS m/z(ESI)：582.2 [M+1]1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.17 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.49 (d,J = 6.7 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.30 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.10- 6.92 (m, 2H), 5.33-5.26 (m, 1H), 5.04 (m , 1H), 4.16- 3.89 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.56 (m, 2H), 3.43-3.35 (m, 1H), 3.24 (m, 2H), 3.00 - 2.81 (m, 3H), 2.77 (s, 3H), 2.46 (m, 2H), 1.63 (s, 2H), 1.34-1.13 (m, 2H).生物學評價 測試例 1 、本發明化合物對 ACC1 和 ACC2 的酶活性抑制 IC50 的測定
以下方法用於測定本發明優選化合物在體外條件下對重組人源ACC1,ACC2蛋白的酶活性的抑制程度。
本方法原理基於由ACC蛋白催化乙醯輔酶A生成丙二醯輔酶A的反應。該反應過程中會消耗ATP並生成ADP。藉由採用來自Promega(普洛麥格)的ADP-Glo™激酶試劑盒可以將反應生成的ADP重新轉化為ATP，這部分ATP可與試劑盒中的熒光素酶-熒光素髮生反應，並生成化學發光信號。因此藉由測量化學發光信號的強度，可以反映催化反應中生成的ADP量，從而間接測定ACC蛋白的酶活性以及受試化合物對於酶活性的影響。所使用的主要試劑包括：ACC1，ACC2蛋白(購於BPS bioscience， ACC1貨號50200， ACC2貨號50201)，乙醯輔酶A(acetyl-CoA， 購於Sigma， 貨號A2056)，NaHCO3(購於Sigma，貨號S6014)，ADP-Glo™ Kinase assay kit(購於Promega，貨號V9102)。
測試流程簡述如下： 首先配製反應所需的1x緩衝液，其組成如下：50mM HEPES (pH7.4 購於Invitrogen，貨號15630)，2mM 氯化鎂(MgCl2 ，購於Sigma，貨號M1028)，2mM 檸檬酸鉀(Potassium citrate，購於Sigma，貨號89306)，0.01% Brij-35 detergent (購於Merck，貨號203728)，2mM DTT(購於Sigma，貨號D0632)。將測試用化合物粉末溶解於DMSO配製為10 mM濃度的貯存液，隨後依次進行3倍稀釋配製成測試所需濃度，每個化合物設10個濃度點，濃度範圍為10 μM-0.5 nM。首先向384孔微孔板中加入適量的ACC蛋白(2 nM)，再向各孔中加入已稀釋好的不同濃度的測試化合物溶液，每個濃度設有複孔對照，同時設置溶劑對照(空白組)，陰性對照組(DMSO組)。隨後將384孔板在微孔板振盪器上振盪混勻後，在室溫條件下孵育15分鐘。之後向各孔中加入以前述緩衝液稀釋的含有ATP，乙醯輔酶A和NaHCO3的底物混合液以開始反應，三組分的終濃度分別為ATP 20 μM，乙醯輔酶A 10 μM，NaHCO3 30mM。在室溫下反應30分鐘後，依照ADP-Glo™ Kinase assay kit試劑盒說明書中的方法，向各孔中加入對應的反應液和檢測液(具體操作方法可參考試劑盒說明書)，最後在Envision 2104多功能酶標儀(Perkin Elmer)上測定各孔的相對光單位(RLU)數值。某一濃度下化合物抑制ACC酶活性的百分比抑制率按以下公式進行計算： 抑制率%=[(陰性對照孔RLU平均值-空白孔RLU平均值)-(測試孔RLU平均值-空白孔RLU平均值)]/ (陰性對照孔RLU平均值-空白孔RLU平均值)*100 最後在GraphPad Prism5軟件中對化合物的濃度對數值和相應濃度的百分比抑制率進行非線性回歸分析得到該化合物的半數抑制濃度值(IC50 )。 表1 本發明化合物對ACC1酶和ACC2酶活性抑制的IC50 數據 備註：ND表示未測定。
結論：本發明的化合物對於ACC1酶和ACC2酶均具有較好的抑制作用。測試例 2 、本發明化合物對 [14 C]- 乙酸鹽併入 HepG2 細胞抑制活性測定
以下方法用於測定本發明化合物在體外條件下對[14 C]-乙酸鹽併入HepG2細胞抑制程度。 1． 試劑與儀器 1.1. 試劑與耗材 表2 試劑與耗材 表3 試劑與耗材 1.2. 儀器 表4 儀器 1.3. 本發明化合物的準備
待測的本發明化合物均以10 mM溶解在DMSO中，使用前儲存在4℃中。 2． 實驗步驟 2.1. 細胞培養
HepG2細胞購置於美國模式培養物集存庫(American type culture collection, ATCC)資源庫購買。細胞培養在含有10%胎牛血清，青黴素(100 units/mL)和鏈黴素(100 µg/mL)的DMEM中，在含5%二氧化碳的37℃培養箱中孵育，每2~3天傳代一次。 2.2. [2-14 C]-Acetate攝入實驗
(1) 第一天，在24孔板中按2×105個細胞每孔接種HepG2細胞，在含5%二氧化碳的37℃培養箱中孵育。 (2) 第四天，更換含有化合物的培養基。本發明化合物初始濃度為3 μM，4倍稀釋，5個濃度梯度，DMSO終濃度為0.5% (v/v)，在含5%二氧化碳的37℃培養箱中孵育1小時。 (3) 每孔加入2 μCi [2-14 C]-Acetate，在含5%二氧化碳的37℃培養箱中繼續孵育5小時。 (4) 將培養基轉移至15 mL離心管中，向每孔加入0.5 mL的0.1M NaOH，將細胞裂解液轉移到對應的15 mL離心管中。 (5) 每管加入1 mL乙醇和0.17 mL的50% KOH，90℃水浴1小時。 (6) 取出樣品，待冷卻到室溫後每管加入5 mL石油醚，顛倒數次，1000 rpm 離心5分鐘。棄上層有機相，保留水相用於脂肪酸提取。 (7) 每管加入1 mL濃鹽酸 (確保其pH值低於1)。 (8) 每管加入5 mL石油醚，顛倒數次，1000轉/分鐘，離心5分鐘，轉移4 mL石油醚層到新的玻璃管(18×180 mm)中。 (9) 重複步驟(8)。 10) 將彙集的提取物放置在64℃水浴中蒸發過夜。 (11) 第五天，用240 μL含有200 μg亞油酸的氯仿/正己烷 (1:1) 溶解脂肪酸。 (12) 取10 μL點樣在矽膠板中，並在正庚烷：乙醚：醋酸 (體積比90:30:1)混合液中層析10分鐘。 (13) 用碘蒸汽顯色脂肪酸條帶，並裁剪到閃爍管中，加入2 mL ULTIMA GOLD室溫下孵育10分鐘。 14) 用MicroBeta記錄閃爍信號。
在GraphPad Prism5軟件中對化合物的濃度和相應濃度的閃爍信號進行非線性回歸分析得到該化合物的半數抑制濃度值(IC50 )。 表5 本發明化合物對[14 C]-乙酸鹽併入HepG2細胞抑制的IC50 值
結論：本發明的化合物對於 [14 C]-乙酸鹽併入HepG2細胞具有明顯抑制作用，優於作為對照化合物的Firsocostat。測試例 3 、本發明化合物 ICR 小鼠口服藥代動力學研究 1、摘要
以ICR小鼠為受試動物，採用LC-MS/MS法測定小鼠灌胃給予實施例3化合物和對照firsocostat後，測定其不同時刻血漿和肝臟中的藥物濃度，研究本發明化合物在小鼠體內的藥代動力學特徵。 2、實驗方案 2.1實驗藥品與動物 實施例3化合物和Firsocostat；
健康成年ICR雄性小鼠18只，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物體重：29.3~35.4g。 2.2 藥物配置與給藥
稱取適量的實驗藥品，加入0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，研磨製成配製成1 mg/mL懸浮液；
健康成年ICR雄性小鼠18只，分為2組，禁食過夜後分別灌胃給藥，給藥劑量為10 mg/kg，給藥體積為10 mL/kg，給藥後4小時給食。
A組小鼠灌胃給予10 mg×kg-1 實施例3化合物的給藥製劑，B組小鼠灌胃給予10 mg×kg-1 firsocostat的給藥製劑。 2.3 樣品採集
給藥前經由眼眶採血80 uL，給藥後於各設定時間點經CO2 深度麻醉後經由心臟採血0.20 mL，全血樣品置於含EDTA-K2的抗凝管中；並立即摘取肝臟組織。採樣時間點如下： 血漿：給藥前0小時，給藥後0.5 小時，1小時，4小時。 肝臟：給藥後1小時。
血液樣本採集後置於含EDTA-K2 抗凝管中，離心分離血漿(離心條件：1500 g，10分鐘)，收集上層血漿樣品至樣品管中。稱取部分肝臟組織樣品，按比例(組織:勻漿液 = 1:5, w/v)加入20%甲醇水進行勻漿。收集的生物樣品分析前存放於-40 ~ -20 °C的冰箱。
採用LC-MS/MS進行分析化合物灌胃給藥後小鼠血漿和肝臟中待測化合物的含量。 3、藥代動力學參數結果
本發明的實施例3化合物和Firsocostat的藥代動力學參數如下：
結論：本發明化合實施例3與Firsocostat相比，藥代吸收良好，具有較好的藥代動力學性質；同時給藥1小時後，肝臟中藥物濃度為：10740 ng/g，實施例3化合物在肝臟中有較好的富集。 備註：Firsocostat的結構如下，根據WO2013071169 製備而得。
在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之後，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附申請專利範圍所限定的範圍。

Claims (19)

  1. 一種式( I )所示的化合物：包括其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽， 其中： X選自-NH-、-O-或-S-；優選為-S-； 環A選自環烷基，且與環A相連接的R2 和N不連接在同一個碳原子上； R1 選自氫原子、烷基或鹵素，其中所述的烷基任選進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、氰基、硝基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 的取代基所取代； R2 選自氫原子、羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 ，其中所述的烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR11 R12 、-C(O)NR11 R12 、-C(O)R13 、-C(O)OR13 或-NR11 C(O)R12 的取代基所取代； R3 選自芳基或雜芳基，其中所述的芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自R7 的取代基所取代； R4 和R5 各自獨立地選自氫原子、烷基、-OR10 、-SR10 、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 ； 或者，R4 、R5 與其所連接的原子一起形成3~8元飽和或部分不飽和環烷基，或形成具有1個或多個選自N、O、S(O)q 的雜原子的4~8元飽和或部分不飽和雜環基，其中所述環烷基或雜環基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 的取代基所取代； R6 選自鹵素、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 ，優選為雜芳基； 或者，R1 、R6 與其所連接的原子一起形成3~8元飽和或部分不飽和環烷基，或形成具有1個或多個選自N、O、S(O)q 的雜原子的4~8元飽和或部分不飽和雜環基，或形成5~10元芳基或雜芳基，其中所述環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 的取代基所取代； R7 各自獨立地選自羥基、鹵素、氰基、硝基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 ，其中所述烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR8 R9 、-C(O)NR8 R9 、-C(O)R10 、-OC(O)R10 、-S(O)q NR8 R9 、-NR8 S(O)2 R9 或-NR8 C(O)R9 的取代基所取代； R8 、R9 和R10 各自獨立地選自氫原子、烷基、-OR13 、氰基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR11 R12 、-C(O)NR11 R12 、-C(O)R13 、-C(O)OR13 或-NR11 C(O)R12 的取代基所取代； 或者，R8 、R9 與其所連接的N原子一起形成一個4～8元雜環基，其中所述4～8元雜環內含有一個或多個N、O、S(O)q 原子，並且4～8元雜環上進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、=O、-NR11 R12 、-C(O)NR11 R12 、-C(O)R13 、-C(O)OR13 或-NR11 C(O)R12 的取代基所取代； R11 、R12 和R13 各自獨立地選自氫原子、烷基、烯基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；且 q為0、1或2。
  2. 如請求項1所述的化合物，其具有式(II)結構：其中： m為1、2、3、4或5；且 環A、R1 、R2 、R6 、R7 和R10 的定義如請求項1中所述。
  3. 如請求項2所述的化合物，其具有式(III)所述結構：其中： m為1、2、3、4或5；且 環A、R1 、R2 、R6 、R7 和R10 的定義如請求項1中所述。
  4. 如請求項2所述的化合物，其具有式(IV)所述結構：其中： m為1、2、3、4或5；且 環A、R1 、R2 、R6 、R7 和R10 的定義如請求項1中所述。
  5. 如請求項1~4中任一項所述的化合物，其中環A選自如下基團：、、、、、、、或； 優選為。
  6. 如請求項1~5中任一項所述的化合物，其中R1 選自甲基或三氟甲基。
  7. 如請求項1~6中任一項所述的化合物，其中： R2 選自四唑基、-C(O)OR13 或-C(O)NR8 R9 ； R8 選自氫原子或烷基； R9 選自氰基或-OR13 ； R13 選自氫原子、烷基、烯基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代； R2 為-C(O)OH。
  8. 如請求項1~7中任一項所述的化合物，其中R6 選自5元雜芳基，優選為噻唑基。
  9. 如請求項1~8中任一項所述的化合物，其中R7 選自鹵素或烷氧基，優選為甲氧基。
  10. 如請求項1~9中任一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R10 為四氫吡喃-4-基。
  11. 如請求項1所述的化合物，選自： 或。
  12. 一種製備如請求項1所述的式( I )化合物的方法，所述方法包括：使式(IA)化合物與R6 取代的三丁基甲錫烷反應，使得到的化合物任選進一步水解，並將水解得到的化合物任選進一步拆分光學純異構體，得到式( I )化合物； 其中：X1 選自鹵素；且X、環A、R1 ~R6 的定義如請求項1中所述。
  13. 一種式(IA)所示的化合物：包括其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽， 其中： X1 選自鹵素；且X、環A、R1 ~R5 的定義如請求項1中所述。
  14. 如請求項13所述的化合物，選自：或。
  15. 一種製備如請求項13所述的式( IA )化合物的方法，所述方法包括：使式(IB)化合物與式(IC)化合物在三苯基膦存在下反應，得到式( IA )化合物； 其中： X1 選自鹵素；且X、環A、R1 ~R5 的定義如請求項1中所述。
  16. 一種藥物組合物，含有有效劑量的如請求項1~11中任一項所述的化合物，以及任選的可藥用的載體、賦形劑或它們的組合。
  17. 一種如請求項1~11中任一項所述的化合物或如請求項16所述的藥物組合物在製備用作ACC抑制劑的藥物中的用途。
  18. 一種如請求項1~11中任一項所述的化合物或如請求項16所述的藥物組合物在製備用於預防或治療與ACC相關的疾病或狀況的藥物中的用途，其中所述疾病或狀況優選為代謝類疾病，癌症，真菌、寄生蟲或細菌感染；其中所述代謝類疾病優選為肝脂肪變性、非酒精性脂肪肝、肥胖症、血脂異常、高脂血症、II型糖尿病或代謝綜合征，其中所述肥胖症優選為普拉德-威利綜合征(Prader-Willi syndrome)、巴德- 畢德氏綜合征(Bardet-Biedl syndrome)或科恩綜合征(Cohen syndrome)或MOMO 綜合征，其中所述癌症優選為肝細胞癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、胃癌、結直腸癌、頭頸部腫瘤、黑色素瘤、卵巢癌或宮頸癌，更優選為肝細胞癌和非小細胞肺癌。
  19. 一種預防或治療與ACC相關的疾病或狀況的方法，包括向有此需要的對象施用如請求項1至11中任一項所述的化合物或如請求項16所述的藥物組合物。
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