TWI681960B

TWI681960B - 苯并咪唑類衍生物及其製備方法及其在醫藥上的用途

Info

Publication number: TWI681960B
Application number: TW107125063A
Authority: TW
Inventors: 呂賀軍; 趙雯雯; 王成喜; 陳磊; 白驊
Original assignee: 大陸商浙江海正藥業股份有限公司
Priority date: 2017-07-21
Filing date: 2018-07-20
Publication date: 2020-01-11
Also published as: CN109280046B; CN109280046A; WO2019015635A1; TW201908308A

Abstract

本發明涉及苯并咪唑類衍生物及其製備方法和醫藥用途。具體而言，本發明涉及式(I)所示的苯并咪唑類衍生物、其製備方法及其可藥用的鹽，以及它們作為治療劑，特別是作為溴結構域蛋白抑制劑的用途，其中式(I)中的各取代基的定義與說明書中的定義相同。

Description

苯并咪唑類衍生物及其製備方法及其在醫藥上的用途

本發明屬於醫藥領域，具體涉及一種新的苯并咪唑類衍生物、其製備方法及含有該衍生物的藥物組合物，以及它們作為治療劑、特別是作為溴結構域蛋白抑制劑的用途。

近年來，腫瘤成為全球範圍內導致人類死亡的主要原因之一。腫瘤普遍具有總體治癒率低且復發率高等特點，因此預防、治療以及抑制腫瘤復發具有重要的科研價值，實現腫瘤的預防和治癒具有相當的緊迫性和挑戰性。表觀遺傳調控的異常是導致腫瘤發生的重要因素之一。

溴結構域(bromodomain)是一種能識別N-乙醯化賴胺酸殘基的蛋白結構域。含溴結構域的蛋白質的BET家族包括四個成員(BRD2、BRD3、BRD4 和BRDt)。BET家族的每個成員都使用兩個溴結構域來識別，主要(但並非排外地)在組蛋白蛋白質的胺基末端尾巴(amino-terminal tail)發現N-乙醯化的賴胺酸殘基。藉由將轉錄因子募集至染色質內的具體基因組位置來調節基因表達。例如，組蛋白連接的BRD4將轉錄因子P-TEFb募集至啟動子，導致表達涉及細胞週期進程的基因子集(Yang et al., Mol. Cell. Biol. 28: 967-976 (2008))。BRD2和BRD3還起生長促進基因的轉錄調節劑的作用。近來的研究已經證實以BET溴結構域為靶點來治療多種癌症((Zuber et al., Nature 478: 524-528(2011) ；Mertz et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. 108: 16669-16674 (2011) ；Delmore et al., Cell 146: 1-14, (2011) ；Dawson et al., Nature 478: 529-533 (2011))、動脈粥樣硬化、炎症(Huang et al., Mol. Cell.Biol. 29: 1375-1387 (2009))和HIV感染。

最新研究發現，BRD4蛋白介導的表觀遺傳異常與癌基因的過表達密切相關，並與癌細胞的生長增殖關係密切。BRD4是含溴結構域和額外終端域家族蛋白(Bromo and extra C-terminal domain, BET)蛋白家族的一員，由於在抗腫瘤方面的潛在價值，引起了各大製藥公司和科研機構的極大關注。近期還發現BRD4在病毒基因的轉錄調控中也扮演了重要角色，並且與病毒瘤的發病機制存在一定聯繫。這些研究結果說明BRD4與多種腫瘤存在密切聯繫，尤其在一些至今難以治癒或者尚無有效治療手段的腫瘤中具有重要作用，其與腫瘤關係的研究為腫瘤治療提供了新的策略。藉由作用於BRD4蛋白溴結構域的小分子化合物，干擾溴結構域與乙醯化賴胺酸的特異性結合，影響腫瘤細胞內的轉錄調節和其它細胞過程，可以實現對腫瘤的靶向治療。因此，BRD4蛋白是一個非常有前景的表觀遺傳新靶點，而作用於BRD4蛋白溴結構域的小分子抑制劑在腫瘤研究中也有著廣闊的應用前景，而且有可能從中開發出新型抗腫瘤藥物。

目前已經公開了一系列的溴結構域蛋白抑制劑專利，其中包括WO2011054846、WO2008092231、WO2012075383和WO2016139292等，其中WO2016139292公開了實施例1化合物。目前處於臨床III期的藥物為Apabetalone，處於臨床II期的藥物包括GSK-525762A、INCB-54329和BMS-986158等，同時有多個藥物處於臨床I期的藥物。但這些對於抗腫瘤的研究是遠遠不夠的，先前技術中公開的化合物以及試驗藥物在有效性、安全性或適用性等方面仍不能令人滿意，仍有必要研究和開發新的溴結構域蛋白抑制劑，以滿足人們日益增長的醫療和健康需要。

本發明人藉由實驗研究意外地發現，下式(I)的化合物可以有效用作溴結構域蛋白抑制劑，用於治療或預防與溴結構域蛋白相關的疾病。

因此，在第一個方面，本發明提供了式(I)所示的苯并咪唑類衍生物：

，包括其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中： X¹ 選自-CH=或-N=； X² 選自-CH=或-N=；且X¹ 和X² 不同時為-N=； R¹ 選自烷基；優選為甲基； R² 選自氫原子或烷基；優選為甲基； R³ 選自烷基，其中所述的烷基進一步被一個或多個烷氧基所取代； R⁴ 選自鹵素； R⁵ 選自氫原子、烷基、氰基、鹵素、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-OR¹⁰ 、-NR⁸ R⁹ 、-C(O)NR⁸ R⁹ 、-C(O)R¹⁰ 、-C(O)OR¹⁰ 或-NR⁸ C(O)R⁹ ，其中所述的烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、=O、-NR⁸ R⁹ 、-C(O)NR⁸ R⁹ 、-C(O)R¹⁰ 、-C(O)OR¹⁰ 或-NR⁸ C(O)R⁹ 的取代基所取代； R⁶ 選自氫原子、烷基、氰基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-OR¹⁰ 、-NR⁸ R⁹ 、-C(O)NR⁸ R⁹ 、-C(O)R¹⁰ 、-C(O)OR¹⁰ 或-NR⁸ C(O)R⁹ ，其中所述的烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、=O、-NR⁸ R⁹ 、-C(O)NR⁸ R⁹ 、-C(O)R¹⁰ 、-C(O)OR¹⁰ 或-NR⁸ C(O)R⁹ 的取代基所取代； R⁷ 選自氫原子或烷基；優選為氫原子； R⁸ 、R⁹ 和R¹⁰ 各自獨立地選自氫原子、烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、=O、-NR¹¹ R¹² 、-C(O)NR¹¹ R¹² 、-C(O)R¹³ 、-C(O)OR¹³ 或-NR¹¹ C(O)R¹² 的取代基所取代；或者，R⁸ 和R⁹ 與相連接的N原子一起形成一個4～8元雜環基，其中4～8元雜環內含有一個或多個N、O、S(O)_p 原子，並且4～8元雜環上任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、=O、-NR¹¹ R¹² 、-C(O)NR¹¹ R¹² 、-C(O)R¹³ 、-C(O)OR¹³ 或-NR¹¹ C(O)R¹² 的取代基所取代； R¹¹ 、R¹² 和R¹³ 各自獨立地選自氫原子、烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；且 p為0、1或2。

在本發明的一些優選方案中，所述式(I)化合物具有式(II)所示的結構，

其中： R^a 和R^b 各自獨立地選自氫原子或烷氧基，且R^a 和R^b 不同時為氫原子；所述的烷氧基優選為甲氧基； m為1、2、3或4；優選為1或2； n為1、2、3或4；優選為1或2；且 R¹ 、R² 、R⁴ ~R⁷ 的定義如通式(I)中所述。

在本發明的一些優選方案中，式(II)所示化合物具有式(III)所示結構，

其中： R^a 選為氫原子； R^b 選自烷氧基，優選為甲氧基； m為1、2、3或4；優選為1或2； n為1、2、3或4；優選為1或2；且 R¹ 、R² 、R⁴ ~R⁷ 的定義如通式(I)中所述。

在本發明的一些優選方案中，式(II)所示化合物具有式(IV)所示結構，

其中： R^a 為氫原子； R^b 選自烷氧基，優選為甲氧基； m為1、2、3或4；優選為1或2； n為1、2、3或4；優選為1或2；且 R¹ 、R² 、R⁴ ~R⁷ 的定義如通式(I)中所述。

在本發明的一些優選方案中，對式(I)、(II)、(III)或(IV)所示的化合物而言，R⁴ 選自氟、氯或溴；優選為氟。

在本發明的一些優選方案中，對式(I)、(II)、(III)或(IV)所示的化合物而言，R⁶ 選自雜環基，優選為嗎啉基。

本發明的典型化合物包括但不限於

，包括其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽。

進一步，本發明提供了式(I)化合物的製備方法，該方法包括：

使式(IA)化合物與R⁶ H反應，得到式(I)化合物；其中： X選自鹵素，優選為氯或溴； R⁶ 選自雜環基；且 R¹ ～R⁵ 、R⁷ 、X¹ 和X² 的定義如通式(I)中所述。

本發明還提供了式(IA)所示的化合物，包括其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，

其中： X選自鹵素，優選為氯或溴；且 R¹ ～R⁵ 、R⁷ 、X¹ 和X² 的定義如通式(I)中所述。

式(IA)的典型化合物包括但不限於

包括其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽。

進一步，本發明提供了式(IA)化合物的製備方法，該方法包括：

使式(Ib)化合物與式(Ic)化合物反應，得到式(IA)化合物；其中： X選自鹵素，優選為氯或溴；且 R¹ ～R⁵ 、R⁷ 、X¹ 和X² 的定義如通式(I)中所述。

更進一步，本發明提供了一種藥物組合物，所述的藥物組合物含有有效劑量的式(I)、(II)、(III)或(IV)所述的化合物（包括立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽），以及可藥用的載體、賦形劑或它們的組合。

本發明還提供了一種抑制溴結構域蛋白的方法，包括將所述的蛋白與式(I)、(II)、(III)或(IV)所述的化合物或其藥物組合物相接觸，其中所述的溴結構域蛋白優選為BRD2、BRD3和BRD4，更優選為BRD4。

本發明進一步提供了式(I)、(II)、(III)或(IV)所述的化合物（包括其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽）或其藥物組合物在製備用作溴結構域蛋白抑制劑的藥物中的用途，其中所述的溴結構域蛋白優選為BRD2、BRD3和BRD4，更優選為BRD4。

本發明進一步提供了式(I)、(II)、(III)或(IV)所述的化合物（包括其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽）或其藥物組合物在製備用於治療或預防與溴結構域蛋白相關的疾病的藥物中的用途，其中所述的疾病優選為癌症或炎症，其中所述的炎症優選為類風濕性關節炎、克隆恩病、濕疹、巨細胞性動脈炎、肝炎、炎性腸病、骨關節炎、胰腺炎、肺炎、銀屑病、銀屑病性關節炎、系統性紅斑狼瘡、腎小球性腎炎、狼瘡性腎炎、膜性腎小球腎炎或心肌炎；所述的炎症更優選為類風濕性關節炎；其中所述的癌症優選為小細胞肺癌、非小細胞肺癌、乳腺癌、結直腸癌、前列腺癌、黑色素瘤、胰腺癌、神經膠質瘤、腦瘤、宮頸癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、腎細胞癌、胃癌、膀胱癌、肝癌、睾丸核蛋白中線癌、多發性骨髓瘤、急性髓性白血病、急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、慢性髓細胞性白血病或慢性骨髓性白血病。

本發明還提供了式(I)、(II)、(III)或(IV)所述的化合物（包括其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽）或其藥物組合物在製備用於治療或預防糖尿病性腎病、高血壓性腎病、HIV-相關的腎病、多囊性腎病、肥胖、血脂異常、高膽固醇血症、阿爾茨海默病、代謝綜合症、脂肪肝、II型糖尿病、胰島素抵抗、糖尿病性視網膜病或糖尿病性神經病的藥物中的用途。

除非有相反陳述，否則本發明在說明書和申請專利範圍中所使用的部分術語定義如下：

“烷基”當作一基團或一基團的一部分時是指包括直鏈或者帶有支鏈的C₁ -C₂₀ 脂肪烴基團。優選為C₁ -C₁₀ 烷基，更優選為C₁ -C₆ 烷基，特別優選為C₁ -C₄ 烷基。烷基基團的實施例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代或未取代的。

“環烷基”是指飽和或部分飽和的單環、稠環、橋環或螺環的碳環。優選為C₃ -C₁₂ 環烷基，更優選為C₃ -C₈ 環烷基，最優選為C₃ -C₆ 環烷基。單環環烷基的實施例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等，優選環丙基、環己烯基。

“螺環烷基”指5至18元的、含有兩個或兩個以上環狀結構的且單環之間彼此共用一個碳原子(稱螺原子)的多環基團，環內可含有1個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統。優選為6至14元，更優選為7至10元。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺環烷基分為單螺、雙螺或多螺環烷基，優選為單螺和雙螺環烷基，優選為4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元。“螺環烷基”的非限制性實施例包括但不限於：螺[4.5] 癸基、螺[4.4] 壬基、螺[3.5]壬基、螺[2.4]庚基。

“稠環烷基”指5至18元的、含有兩個或兩個以上環狀結構的彼此共用一對碳原子的全碳多環基團，其中一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統，優選為6至12元，更優選為7至10元。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、吡啶酮或多環稠環烷基，優選為雙環或三環，更優選為5元/5元或5元/6元雙環烷基。“稠環烷基”的非限制性實施例包括但不限於：二環[3.1.0]己基、二環[3.2.0]庚-1-烯基、二環[3.2.0]庚基、十氫化萘基或十四氫菲基。

“橋環烷基”指 5至18元的、含有兩個或兩個以上環狀結構的彼此共用兩個不直接相連接碳原子的全碳多環基團，其中一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統。優選為6至14元，更優選為7至10元。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、吡啶酮或多環橋環烷基，優選為雙環、三環或吡啶酮，更有選為雙環或三環。“橋環烷基”的非限制性實施例包括但不限於：(1s,4s)-二環[2.2.1] 庚基、二環[3.2.1]辛基、(1s,5s)-二環[3.3.1]壬基、二環[2.2.2]辛基、(1r,5r)-二環[3.3.2]癸基。

所述環烷基環可以稠合於芳基、雜芳基或雜環基環上，其中與母體結構連接在一起的環為環烷基，非限制性實施例包括茚滿基、四氫萘基、苯并環庚烷基等。環烷基可以是任選取代的或未取代的。

“雜環基”、“雜環”或“雜環的”在本申請中可交換使用，都是指非芳香性雜環基，其中一個或多個成環的原子是雜原子，如氧、氮、硫原子等，包括單環、稠環、橋環和螺環。優選具有5至7元單環或7至10元雙-或三環，其可以包含1，2或3個選自氮、氧和/或硫中的原子。“雜環基”的實例包括但不限於嗎啉基，氧雜環丁烷基，硫代嗎啉基，四氫吡喃基，1,1-二氧代-硫代嗎啉基，呱啶基，2-氧代-呱啶基，吡咯烷基，2-氧代-吡咯烷基，呱口井-2-酮，8-氧雜-3-氮雜-雙環[3.2.1]辛基和呱口井基。雜環基可以是取代或未取代的。

“螺雜環基”指5至18元的、含義兩個或兩個以上環狀結構的且單環之間彼此共用一個原子的多環基團，其環內含有1個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)_p (其中p選自0、1或2)的雜原子，其餘環原子為碳。優選為6至14元，更優選為7至10元。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺環烷基分為單螺雜環基、雙螺雜環基或多螺雜環基，優選為單螺雜環基和雙螺雜環基。更優選為4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元單螺雜環基。“螺雜環基”的非限制性實施例包括但不限於：1,7-二氧雜螺[4.5] 癸基、2-氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬基、7-氧雜螺[3.5] 壬基和5-氧雜螺[2.4]庚基。

“稠雜環基”指含有兩個或兩個以上環狀結構彼此共用一對原子的全碳多環基團，其中一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_p (其中p選自0、1或2)的雜原子，其餘環原子為碳。優選為6至14元，更優選為7至10元。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、吡啶酮或多環稠雜環基，優選為雙環或三環，更優選為5元/5元或5元/6元雙環稠雜環基。“稠雜環基”的非限制性實施例包括但不限於：八氫吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氫-1H-異吲哚基，3-氮雜二環[3.1.0]己基，八氫苯并[b][1,4] 二㗁英(dioxine)。

“橋雜環基”指5至18元、優選5至14元，含有兩個或兩個以上環狀結構且彼此共用兩個不直接相連接的原子的多環基團，其中一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)_p (其中p選自0、1或2)的雜原子，其餘環原子為碳。優選為6至14元，更優選為7至10元。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、吡啶酮或多環橋雜環基，優選為雙環、三環或吡啶酮，更有選為雙環或三環。“稠雜環基”的非限制性實施例包括但不限於：2-氮雜二環[2.2.1]庚基，2-氮雜二環[2.2.2]辛基和2-氮雜二環[3.3.2]癸基。所述雜環基環可以稠合於芳基、雜芳基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜環基。雜環基可以是任選取代的或未取代的。

“芳基”是指含有一個或者兩個環的碳環芳香系統，其中所述環可以以稠合的方式連接在一起。術語“芳基”包括比如苯基、萘基、四氫萘基的芳香基團。優選芳基為C₆ -C₁₀ 芳基，更優選芳基為苯基和萘基，最優選為苯基。芳基可以是取代或未取代的。所述“芳基”可與雜芳基、雜環基或環烷基稠合，其中與母體結構連接在一起的為芳基環，非限制性實施例包括但不限於：

和

。

“雜芳基”是指芳香族5至6元單環或9至10元雙環，其可以包含1至4個選自氮、氧和/或硫中的原子。“雜芳基”的實施例包括但不限於呋喃基，吡啶基，2-氧代-1，2-二氫吡啶基，嗒口井基，嘧啶基，吡口井基，噻吩基，異㗁唑基，㗁唑基，㗁二唑基，咪唑基，吡咯基，吡唑基，三唑基，四氮唑基，噻唑基，異噻唑基，1，2，3-噻二唑基，苯并間二氧雜環戊烯基，苯并咪唑基，吲哚基，異吲哚基，1，3-二氧代-異吲哚基，喹啉基，吲唑基，苯并異噻唑基，苯并㗁唑基和苯并異㗁唑基。雜芳基可以是取代或未取代的。所述雜芳基環可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環，非限制性實施例包括但不限於：

和

。

“烷氧基”是指（烷基-O-）的基團。其中，烷基見本文有關定義。C₁ -C₆ 的烷氧基為優先選擇，尤其優選C₁ -C₄ 烷氧基。其實例包括，但不限於：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基等。

“羥基”指-OH基團。

“鹵素”是指氟、氯、溴和碘。

“胺基”指-NH₂ 。

“氰基”指-CN。

“硝基”指-NO₂ 。

“苄基”指-CH₂ -苯基。

“羧基”指-C(O)OH。

“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或(環烷基)，其中烷基、環烷基的定義如上所述。

“Bn”指苄基。

“DMSO”指二甲基亞碸。

“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，優選為最多5個，更優選為1～3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基替換。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，本領域技術人員能夠在不付出過多努力的情況下確定(藉由實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和鍵(如烯鍵)的碳原子結合時可能是不穩定的。

本說明書所述的“取代”或“取代的”，如無特別指出，均是指基團可被一個或多個選自以下的基團取代：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、胺基、鹵代烷基、羥烷基、羧基、羧酸酯基、=O、-OR¹⁰ 、-SR¹⁰ 、-C(O)NR⁸ R⁹ 、-C(O)R¹⁰ 、-C(O)OR¹⁰ 或-NR⁸ C(O)R⁹ 。

“可藥用的鹽”是指上述化合物能保持原有生物活性並且適合於醫藥用途的某些鹽類。式( I )化合物的可藥用的鹽可以為金屬鹽、與合適的酸形成的胺鹽，金屬鹽優選鹼金屬、鹼土金屬鹽，合適的酸包括無機酸和有機酸。

“藥物組合物”表示含有一種或多種本文所述化合物（包括其生理學上可藥用的鹽或立體異構體、互變異構體或前體藥物等形式）與任選的其他藥物活性成分的混合物，其可以包含其他任選組分例如可藥用的載體和/或賦形劑。藥物組合物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。

在本文中，用語“多個”包括兩個或更多個，例如兩個、三個、四個等。本發明化合物的合成方法為了完成本發明的目的，本發明採用如下技術方案：

本發明式(I)化合物的製備方法包括以下步驟：

使式(Ia)化合物與R³ NH₂ 反應，得到式(Ib)化合物；使式(Ib)化合物與式(Ic)化合物反應，得到式(IA)化合物；使式(IA)化合物與R⁶ H反應，得到式(I)化合物；其中： X選自鹵素，優選為氯或溴； R⁶ 選自雜環基；且 R¹ ～R⁵ 、R⁷ 、X¹ 和X² 的定義如式(I)中所述。

以下結合實施例用於進一步描述本發明，但這些實施例並非限制著本發明的範圍。 實施例

實施例給出了式(I )所表示的代表性化合物的製備及相關結構鑒定資料。必須說明，下述實施例是用於說明本發明而不是對本發明的限制。¹ H NMR圖譜是用Bruker儀器(400MHz)測定而得，化學位移用ppm表示。使用四甲基矽烷內標準(0.00ppm)。¹ H NMR的表示方法：s=單峰，d=雙重峰，t=三重峰，m=多重峰，br=變寬的，dd=雙重峰的雙重峰，dt=三重峰的雙重峰。若提供偶合常數時，其單位為Hz。

質譜是用LC/MS儀測定得到，離子化方式可為ESI或APCI。

薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm～0.2 mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm～0.5mm。

柱層析一般使用煙臺黃海矽膠200~300目矽膠為載體。

在下列實施例中，除非另有指明，所有溫度為攝氏溫度，除非另有指明，各種起始原料和試劑來自市售或者是根據已知的方法合成，市售原料和試劑均不經進一步純化直接使用，除非另有指明，市售廠家包括但不限於Aldrich Chemical Company，ABCR GmbH & Co.KG，Acros Organics，廣贊化工科技有限公司和景顏化工科技有限公司等處購買。

CD₃ OD：氘代甲醇。

CDCl₃ ：氘代氯仿。

DMSO-d₆ ：氘代二甲基亞碸。

氬氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氬氣氣球。

實施例中若無特殊說明，反應中的溶液是指水溶液。

對化合物進行純化，採用矽膠柱層析和薄層色譜法，其中洗脫劑體系選自：A：石油醚和乙酸乙酯體系；B：二氯甲烷和甲醇體系；C：二氯甲烷：乙酸乙酯；其中溶劑的體積比根據化合物的極性不同而不同，也可以加入少量的酸性或鹼性試劑進行調節，如醋酸或三乙胺等。實施例1 5-(1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-7-氟-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮

第一步 2-(二苄基胺基)丙烷-1,3-二醇

將2-胺基丙烷-1,3-二醇1a (10.0 g, 109.7 mmol)和碳酸鉀(47.7 g, 345.6 mmol)溶於300 mL乙醇中，室溫下攪拌，在反應液中滴加溴化苄(56 g, 329 mmol)，回流反應12小時。過濾，將濾液減壓濃縮，將得到的殘留物溶於200 mL二氯甲烷中，以水(100 mL)洗滌，分去水層，有機相以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(二苄基胺基)丙烷-1,3-二醇1b (20 g，白色固體)，產率：67%。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ): δ 7.40-7.25 (m, 10H), 3.74 (s, 4H), 3.69 (m, 2H), 3.59 (m, 2H), 2.99 (m, 3H). 第二步 N,N-二苄基-1,3-二甲氧基丙-2-胺

氬氣保護下，將2-(二苄基胺基)丙烷-1,3-二醇1b (5 g, 18.4 mmol)和氫氧化鉀(8.3 g, 147.6 mmol)溶於80 mL二甲亞碸中，室溫下攪拌10分鐘。在反應液中滴加碘甲烷(10.4 g, 73.6 mmol)，室溫下反應1小時。在反應液中加入100 mL水，淬滅反應。以乙酸乙酯(100 mL×3)萃取，合併有機相，以飽和氯化鈉水溶液(100 mL×1)洗滌，以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到N,N-二苄基-1,3-二甲氧基丙-2-胺1c (5 g，白色固體)，產率：90.9%。 MS m/z(ESI)：300.0[M+1] 第三步 1,3-二甲氧基丙-2-胺

氫氣保護下，將N,N-二苄基-1,3-二甲氧基丙-2-胺1c (5 g，16.7 mmol)溶於50 mL甲醇中，加入10%鈀碳催化劑(500 mg, 10%)，置換氫氣3次，室溫下反應12小時。過濾，將濾液減壓濃縮，得到粗品1,3-二甲氧基丙-2-胺1d (1.99 g，無色油狀物)，產率：100%。 MS m/z(ESI)：120.1[M+1]¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ): δ 5.72 (s, 2H), 3.44 (m, 4H), 3.32 (m, 1H) 3.28 (s, 6H). 第四步 4-溴-N-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-2-氟-6-硝基苯胺

將5-溴-1,2-二氟-3-硝基苯1e (500 mg, 2.11 mmol)和1,3-二甲氧基丙-2-胺1d (276 mg, 2.32 mmol)溶於20 mL乙腈中，加入碳酸鉀(437 mg, 3.16 mmol)，80℃下反應6小時。減壓濃縮，除去溶劑，加入200 mL水，以乙酸乙酯(300 mL×3)萃取，合併有機相，以飽和氯化鈉水溶液(100 mL×1)洗滌，以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到4-溴-N-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-2-氟-6-硝基苯胺1f (560 mg，黃色固體)，產率：78.7%。 MS m/z(ESI)：337.9[M+1] 第五步 5-(5-溴-1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-7-氟-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮

將4-溴-N-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-2-氟-6-硝基苯胺1f (186 mg, 0.55 mmol)和1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-甲醛1g (100 mg, 0.66 mmol,根據專利申請WO2016146738(A1)公開的中間體2的製備方法制得)溶於5 mL乙醇中，依次加入2 mL水和連二亞硫酸鈉(287 mg, 1.66 mmol)，90℃下反應3小時。加入10 mL水和 10 mL乙酸乙酯稀釋反應液，以乙酸乙酯(10 mL×3)萃取，合併有機相，以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到5-(5-溴-1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-7-氟-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮1h (150 mg，黃色固體)，產率：64.9%。 MS m/z(ESI)：438.9[M+1] 第六步 5-(1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-7-氟-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮

氬氣保護下，將5-(5-溴-1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-7-氟-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮1h (50 mg, 0.12 mmol)、嗎啉(21 mg, 0.24 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(11 mg, 0.012 mmol)、2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(11 mg, 0.024 mmol)和叔丁醇鉀(34 mg, 0.36 mmol)溶於5 mL1,4-二氧六環中，100℃下微波反應1小時。加入10 mL水和10 mL乙酸乙酯稀釋反應液，以乙酸乙酯(10 mL×3)萃取，合併有機相，以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到的殘留物用薄層色譜法(展開劑：B體系)純化，得到5-(1-(1,3-二甲氧基丙-2-基)-7-氟-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮1 (10 mg，白色固體)，產率：18.5%。 MS m/z(ESI)：444.5[M+1]¹ H NMR(400 MHz, CDCl₃ ): δ7.98 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.75-6.71 (m, 1H), 4.88-4.83 (m, 1H), 3.90-3.83 (m, 4H), 3.80-3.75 (m, 4H), 3.62 (s, 3H), 3.26 (s, 6H), 3.18-3.16 (t,J = 4.0 Hz, 4H), 2.22 (s, 3H). 實施例2 5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮

第一步 4-溴-2-氟-N-(1-甲氧基丁-2-基)-6-硝基苯胺

將5-溴-1,2-二氟-3-硝基苯1e (600 mg, 2.52 mmol)和1-甲氧基丁-2-胺2a (260 mg, 2.52 mmol)溶於20 mL乙腈中，加入碳酸鉀(521 mg, 3.78 mmol)，80℃下反應6小時。減壓濃縮，除去溶劑，加入50 mL水，以乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，合併有機相，以飽和氯化鈉水溶液(100 mL×1)洗滌，以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到4-溴-2-氟-N-(1-甲氧基丁-2-基)-6-硝基苯胺2b (600 mg，黃色固體)，產率：74.2%。 MS m/z(ESI)：322.8[M+1] 第二步 5-(5-溴-7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮

將4-溴-2-氟-N-(1-甲氧基丁-2-基)-6-硝基苯胺2b (600 mg, 1.87 mmol)和1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-甲醛1g (282 mg, 1.87 mmol)溶於10 mL乙醇中，依次加入2 mL水和連二亞硫酸鈉(813 mg, 4.67 mmol)，100℃下反應3小時。減壓濃縮，在殘留物中加入50 mL乙酸乙酯，攪拌，過濾，除去固體不溶物，將濾液減壓濃縮，殘留物溶解於甲苯(10 mL×3)中進一步減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到5-(5-溴-7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮2c (650 mg，黃色固體)，產率：82.2%。 MS m/z(ESI)：421.8[M+1] 第三步 5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮

氬氣保護下，將5-(5-溴-7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮2c (220 mg, 0.52 mmol)、嗎啉(90.6 mg, 1.0 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(47.6 mg, 0.052 mmol)、2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(47.6 mg, 0.1 mmol)和叔丁醇鉀(149.9 mg, 1.56 mmol)溶於5 mL1,4-二氧六環中，100℃下微波反應2小時。加入50 mL水和 30 mL乙酸乙酯稀釋反應液，以乙酸乙酯(30 mL×2)萃取，合併有機相，以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮2 (221 mg，白色固體)，產率：99.1%。 MS m/z(ESI)：429.0[M+1]¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.31 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.81 (d,J = 15.1 Hz, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.05 (t,J = 10.3 Hz, 1H), 3.92-3.85 (m, 4H), 3.81 (d,J = 9.1 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.26 - 3.19 (m, 4H), 2.23 (s, 3H), 2.03-1.92 (m, 1H), 1.90-1.79 (m, 1H), 0.61 (t,J = 7.3 Hz, 3H). 實施例3和實施例4 (S )-5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮 (R )-5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮

第一步 (S )-5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮 (R )-5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮

將5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮2 (210 mg, 0.49 mmol)進一步藉由採用超臨界流體色譜(SFC)法，用高效液相製備色譜和手性柱對手性異構體進行拆分(手性柱ChiralPak AD, 300×50 mm I.D., 10µm；80 mL/min；流動相為A（對於CO₂ ）和B （對於ETOH） (0.1%NH₃ .H₂ O))，得到(S )-5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮3 (57.09 mg, 白色固體)，產率：27.2%，100% ee，保留時間 4.590 min；(R )-5-(7-氟-1-(1-甲氧基丁-2-基)-5-嗎啉基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮4 (60.38 mg, 白色固體)，產率：28.8%，100% ee，保留時間 2.863 min。化合物 3 MS m/z(ESI)：429.0 [M+1]¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.31 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.81 (d,J = 15.1 Hz, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.05 (t,J = 10.3 Hz, 1H), 3.92-3.85 (m, 4H), 3.81 (d,J = 9.1 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.26 - 3.19 (m, 4H), 2.23 (s, 3H), 2.03-1.92 (m, 1H), 1.90-1.79 (m, 1H), 0.61 (t,J = 7.3 Hz, 3H).化合物 4 MS m/z(ESI)：429.0 [M+1]¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.31 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.81 (d,J = 15.1 Hz, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.05 (t,J = 10.3 Hz, 1H), 3.92-3.85 (m, 4H), 3.81 (d,J = 9.1 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.26 - 3.19 (m, 4H), 2.23 (s, 3H), 2.03-1.92 (m, 1H), 1.90-1.79 (m, 1H), 0.61 (t,J = 7.3 Hz, 3H).生物學評價 測試例 1 本發明化合物對 BRD4 蛋白活性測定

本發明的示例化合物藉由以下方法測試其針對BRD4蛋白的生物活性。

本測試方法採用Cisbio Assays公司的EPIGENEOUS™ BROMODOMAIN ASSAY在體外條件下，測試化合物對重組人源BRD4蛋白與乙醯化組蛋白多肽底物之間基於FRET(螢光能量共振轉移)的相互作用的影響來表述化合物針對BRD4的生物活性。其中GST標記的重組人源BRD4(1/2)蛋白來源於BPS Bioscience，乙醯化組蛋白多肽底物[Lys(5,8,12,16)Ac] H4(1-21)-biotin peptide購於AnaSpec。

具體實驗方法和流程可參考EPIGENEOUS™ BROMODOMAIN ASSAY試劑盒說明書，實驗流程簡述如下：

本發明中的化合物先溶解於DMSO中，隨後以試劑盒中提供的緩衝液將其稀釋至測試所需濃度(終濃度範圍10 μM-0.1 nM)。將2 μL化合物加入到384孔微孔板中，隨後分別加入4uL以緩衝液稀釋的GST標記的重組人源BRD4(1/2)蛋白和4 μL乙醯化組蛋白多肽底物，最後向孔中加入偶聯有銪系元素化合物的抗GST抗體和偶聯有鏈酶親和素的FRET受體d2各5uL，振盪混勻後以封板膜密封，並在室溫下振盪孵育3～5小時。化合物每個濃度設複孔對照，對照孔和空白孔中加入2μL DMSO。隨後在相容TF-FRET模式的酶標儀上測定讀取各孔在對應銪系元素激發波長下，發射波長為620 nM和665 nM下的螢光強度。藉由與對照組的螢光強度數值進行比較計算化合物在各濃度點下的抑制率，進而藉由GraphPad Prism 5軟體中以化合物濃度對數-抑制率進行非線性回歸分析並得到化合物抑制BRD4蛋白與乙醯化組蛋白多肽底物相互作用的IC₅₀ 值。表1 本發明示例化合物對BRD4蛋白活性抑制的IC₅₀ 資料

結論：本發明的示例化合物對於BRD4蛋白具有較好的抑制作用。備註：WO2016139292的實施例1化合物的結構式如下式所示：

其製備方法參見WO2016139292的實施例1。測試例2 本發明化合物對前列腺癌細胞(LNCaP)增殖抑制測定

本發明示例化合物的細胞水準活性藉由CCK-8 (Dojindo，東仁化學科技)以吸光度方法來檢測化合物對細胞增殖的抑制作用。將處於對數生長期的前列腺癌細胞LNCaP (購於中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心)以4000個每孔的密度接種至96孔培養板中，培養過夜後，加入不同濃度的測試化合物(終濃度濃度範圍30 μM～0.1 nM)。在37℃，5％ CO₂ 條件下培養細胞72小時。培養結束後，向每孔加入適宜體積的CCK-8試劑 (購於東仁化學科技(上海)有限公司，貨號CK04)並在37℃下繼續培養1～5小時，隨後在酶標儀上讀取各孔的在450 nM下的吸光度數值。藉由與對照組的吸光度數值進行比較計算化合物在各濃度點下的抑制率，進而藉由GraphPad Prism 5軟體中以化合物濃度對數-抑制率進行非線性回歸分析並得到化合物抑制細胞增殖的IC₅₀ 值。表2 本發明示例化合物對LNCaP增殖抑制的IC₅₀ 資料

結論：本發明的示例化合物對於前列腺癌細胞LNCaP增殖具有較好的抑制作用。測試例3 本發明化合物對人類急性單核細胞白血病細胞MV4-11裸鼠移植瘤的生長抑制作用的測試

1 ．實驗目的 本測試用來評價連續22天，每天兩次，口服給予實施例1、實施例4化合物以及WO2016139292的實施例1化合物，考察其對人類急性單核細胞白血病細胞MV4-11裸鼠移植瘤的生長抑制作用。2 ．受試物配製 2.1 空白給藥製劑配製配製適量體積的含有90% PEG300和10%乙醇(10% TPGS，w/v)作為空白組給藥試液。 2.2 WO2016139292的實施例1化合物給藥製劑配製稱取適量WO2016139292的實施例1化合物，加入適量體積含有90% PEG300和10%乙醇(10% TPGS，w/v)的溶媒，渦旋振盪均勻，配製成濃度為0.5 mg/mL的給藥製劑。 2.3實施例1化合物口服給藥製劑配製稱取適量實施例1化合物，加入適量體積含有90% PEG300和10%乙醇(10% TPGS，w/v)的溶媒，渦旋振盪均勻，配製成濃度為0.5 mg/mL的給藥製劑。 2.4實施例4化合物口服給藥製劑配製稱取適量實施例4化合物，加入適量體積含有90% PEG300和10%乙醇(10% TPGS，w/v)的溶媒，渦旋振盪均勻，配製成濃度為0.5 mg/mL的給藥製劑。3 ．實驗動物 品種和品系：BALB/c裸鼠，SPF，雌性，6~7周齡(16～22克)，健康狀況良好，32隻，適應環境時間5～7天。合格證號：1140070017310，購買於北京維通利華實驗動物技術有限公司。4 ． MV-4-11 細胞培養 在5% CO₂ 、37 °C培養條件下，MV4-11細胞(購買於美國模式培養物保藏所(ATCC))在含10%胎牛血清的IMDM培養基中進行常規細胞培養。以0.25%胰酶消化傳代，根據細胞生長情況進行傳代，傳代比例為1:3或1:4。5 ．動物接種及分組 實驗第0天，收取對數生長期MV4-11細胞，細胞計數後重懸於含50%的PBS(磷酸緩衝鹽溶液)(pH7.4，0.01 M)和50%的基質膠(Matrigel)中，調整細胞濃度至7.0 × 10⁷ 細胞/mL；將細胞置於冰盒中，用1-mL注射器吸取細胞懸液，注射到裸鼠前右側腋窩皮下，每隻動物接種200 mL (14 × 10⁶ 細胞/隻)，建立MV4-11移植瘤模型。接種後第12天，腫瘤長至體積100~300 mm³ 左右時，選出腫瘤體積相近、形狀較好的小鼠(形狀儘量為單一圓球形，無不規則的形狀或多個腫瘤聚在一起)每組8隻，分為4組。6 ． 動物給藥和觀察 各組動物每天固定時間根據動物體重給予受試物1天1次(QD)，口服給藥(po)，於分組當天(接種後第12天)，開始第一次給藥，連續22天，並記錄每天動物體重。第1組灌胃給予空白溶劑，給藥體積為10 mL/kg，QD，PO；第2組灌胃給予WO2016139292的實施例1化合物，給藥劑量5 mg/kg，QD，PO；第3組給予實施例1化合物，給藥劑量：第12~19天為5 mg/kg，QD，PO；第20~33天為2 mg/kg，QD，PO；第4組給予實施例4化合物，給藥劑量：第12~19天為5 mg/kg，QD，PO；第20~33天為2 mg/kg，QD，PO。觀察各組動物接種部位腫瘤的形成狀況，實驗開始後每週測量2次瘤徑，計算腫瘤體積，同時稱量動物體重並記錄。腫瘤體積(TV)計算公式如下： TV (mm³ ) =l ×w ² /2 其中，l 表示腫瘤長徑 (mm)；w 表示腫瘤短徑 (mm)。抗腫瘤活性的評價指標：腫瘤生長抑制率TGI (%)，相對腫瘤增殖率T/C (%)。相對腫瘤體積(RTV)的計算公式為： RTV = 100 × TV_t /TV_initial 其中，TV_initial 為分組時給藥前測量到的腫瘤體積；TV_t 為給藥期間每一次測量時的腫瘤體積。相對腫瘤增殖率T/C (%)的計算公式為： T/C = 100% ´ (RTV_T /RTV_C ) 其中，RTV_T 表示治療組RTV；RTV_C 表示溶劑對照組RTV。腫瘤生長抑制率TGI (%)的計算公式為： TGI = 100% × [1－(TV_t(T) －TV_initial(T) )/( TV_t(C) －TV_initial(C) )] 其中，TV_t(T) 表示治療組每次測量的腫瘤體積；TV_initial(T) 表示分組時給藥前治療組的腫瘤體積；TV_t(C) 表示溶劑對照組每次測量的腫瘤體積；TV_initial(C) 表示分組時給藥前溶劑對照組的腫瘤體積。瘤重抑瘤率IR (%) 的計算公式為： IR = 100% × (W_C －W_T )/W_C 其中，W_C 表示對照組瘤重；W_T 表示治療組瘤重。7 ．結果 WO2016139292的實施例1化合物、本發明實施例1和實施例4化合物對MV4-11荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤平均腫瘤體積變化圖見圖1； WO2016139292的實施例1化合物、本發明實施例1和實施例4化合物對MV4-11荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤平均相對腫瘤體積變化圖見圖2。表3 本發明化合物對MV4-11荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤的生長抑制率(TGI%)的影響

表4 本發明化合物對MV4-11荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤的相對腫瘤增殖率T/C(%)的影

表5.實驗結束時各組動物瘤重及瘤重抑瘤率

由表3~5、圖1~2可知，在5 mg/kg；2 mg/kg (PO，QD)劑量下，本發明實施例1和4化合物在給藥22天內對MV-411細胞建立小鼠體內腫瘤模型具有明顯的生長抑制作用，且兩者的活性均優於WO2016139292的實施例1的化合物。

在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之後，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附申請專利範圍所限定的範圍。

無

圖1為測試例2中WO2016139292的實施例1化合物、本發明實施例1和實施例4化合物對MV4-11荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤平均腫瘤體積變化圖。

圖2為測試例2中WO2016139292的實施例1化合物、本發明實施例1和實施例4化合物對MV4-11荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤平均相對腫瘤體積變化圖。

Claims

一種式(II)所示的化合物：
其中：R^a和R^b各自獨立地選自氫原子或C₁-C₄烷氧基，且R^a和R^b不同時為氫原子；m為1、2、3或4；n為1、2、3或4；且R¹為甲基；R²為甲基；R⁴選自鹵素；R⁵和R⁷均為氫原子；R⁶為嗎啉基。
如請求項1所述的化合物，其具有式(III)所示結構：
其中：R^a為氫原子；R^b選自C₁-C₄烷氧基；m為1、2、3或4；n為1、2、3或4；且R¹、R²、R⁴~R⁷的定義如請求項1中所述。
如請求項1所述的化合物，其具有式(IV)所示結構：
其中：R^a為氫原子；R^b選自C₁-C₄烷氧基；m為1、2、3或4；n為1、2、3或4；且R¹、R²、R⁴~R⁷的定義如請求項1中所述。
如請求項1~3中任一項所述的化合物，其中R⁴選自氟、氯或溴。
如請求項1所述的化合物，其中所述的化合物選自：
如請求項1~3中任一項所述的化合物，其中所述C₁-C₄烷氧基為甲氧基。
如請求項1~3中任一項所述的化合物，其中m為1或2，和/或n為1或2。
如請求項4所述的化合物，其中R⁴為氟。
一種製備如請求項1所述的式(II)化合物的方法，所述方法包括：
使式(IA’)化合物與R⁶H反應，得到式(II)化合物；其中：X選自鹵素；R⁶選自嗎啉基；且R¹~R²、R⁴~R⁵、R⁷、R^a和R^b的定義如請求項1中所述。
如請求項9所述的方法，其中X為氯或溴。
一種式(IA’)所示的化合物：
其中：X選自鹵素；且R¹~R²、R⁴~R⁵、R⁷、R^a和R^b的定義如請求項1中所述。
如請求項11所述的化合物，其中X為氯或溴。
如請求項11所述的化合物，其中所述的化合物選自：
一種製備如請求項11所述的式(IA’)化合物的方法，所述方法包括：
使式(Ib’)化合物與式(Ic’)化合物反應，得到式(IA’)化合物；其中：X選自鹵素；且R¹~R²、R⁴~R⁵、R⁷、R^a和R^b的定義如請求項1中所述。
如請求項14所述的方法，其中X為氯或溴。
一種藥物組合物，所述的藥物組合物含有有效劑量的如請求項1~8中任一項所述的化合物，及可藥用的載體、賦形劑或它們的組合。
一種如請求項1~8中任一項所述的化合物，或如請求項16所述的藥物組合物在製備用作溴結構域蛋白抑制劑的藥物中的用途。
如請求項17所述的用途，其中所述的溴結構域蛋白選自BRD2、BRD3和BRD4。
如請求項17所述的用途，其中所述的溴結構域蛋白為BRD4。
一種如請求項1~8中任一項所述的化合物或如請求項16所述的藥物組合物在製備用於治療或預防與溴結構域蛋白相關的疾病的藥物中的用途，其中所述的疾病為癌症或炎症。
如請求項20所述的用途，其中所述的炎症為類風濕性關節炎、克隆恩病、濕疹、巨細胞性動脈炎、肝炎、炎性腸病、骨關節炎、胰腺炎、肺炎、銀屑病、銀屑病性關節炎、系統性紅斑狼瘡、腎小球性腎炎、狼瘡性腎炎、膜性腎小球腎炎或心肌炎。
如請求項20所述的用途，其中所述的炎症為類風濕性關節炎。
如請求項20所述的用途，其中所述的癌症為小細胞肺癌、非小細胞肺癌、乳腺癌、結直腸癌、前列腺癌、黑色素瘤、胰腺癌、神經膠質瘤、腦瘤、宮頸癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、腎細胞癌、胃癌、膀胱癌、肝癌、睾丸核蛋白中線癌、多發性骨髓瘤、急性髓性白血病、急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、慢性髓細胞性白血病或慢性骨髓性白血病。
一種如請求項1~8中任一項所述的化合物或如請求項16所述的藥物組合物在製備治療或預防糖尿病性腎病、高血壓性腎病、HIV-相關的腎病、多囊性腎病、肥胖、血脂異常、高膽固醇血症、阿爾茨海默病、代謝綜合症、脂肪肝、II型糖尿病、胰島素抵抗、糖尿病性視網膜病或糖尿病性神經病的藥物中的用途。