TW201741303A - 嘧啶類衍生物、其製備方法、其藥物組合物以及其在醫藥上的用途 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及嘧啶類衍生物及其製備方法和醫藥用途。具體而言，本發明涉及一種通式（I）所示的嘧啶類衍生物、其製備方法及其可藥用的鹽，以及它們作為治療劑，特別是作為FGFR4激酶抑制劑的用途，其中通式（I）中的各取代基的定義與說明書中的定義相同。□

Description

嘧啶類衍生物、其製備方法、其藥物組合物以及其在醫藥上的用途
本發明涉及一種新的嘧啶類衍生物、其製備方法及含有該衍生物的藥物組合物以及其作為治療劑特別是作為FGFR4抑制劑的用途。
成纖維細胞生長因子受體(FGFR)家族是由四個成員(FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4)組成，其屬於受體酪氨酸激酶家族的激酶，FGF結合導致FGFR二聚化，隨後為受體自體磷酸化和下游訊號通路的啟動。受體活化足以復元和活化參與如細胞生長、細胞新陳代謝和細胞存活的多元化過程調控的特定下游訊號夥伴。因此，在對於腫瘤細胞增殖、遷移、浸潤、血管形成、細胞關鍵性的許多生物過程中，FGF/FGFR訊號通路具有多效應作用。FGFR家族的四個成員在其配體親和力及組織分佈方面彼此不同。FGFR-4基因的基因組結構含有18個外顯子。
人類FGF19基因位於11q13.1，FGFR4與其配體FGF19特異性結合抑制細胞凋亡和NF-kB訊號，並且上調細胞增殖相關基因的表達；FGFR4的啟動在TNF-α處理的細胞中可以導致Ikkβ活性的下降，伴隨NF-kB在細胞中分佈的減少並且減弱細胞凋亡效應。四種FGFR基因在人體肝臟中均有表達，但成熟肝實質細胞(Hepatpcyte)僅大量表達FGFR4。FGFR4與其配體結合還可以對膽汁酸的代謝有調控作用，機體中膽固醇向膽汁酸轉化的平衡與機體多種正常生理功能有密切的關係，這一平衡的破壞會引起機體多種疾病如脂肪肝和動脈硬化等心腦血管疾病，因此FGFR4和FGF19相互作用成為高脂血症等降膽固醇藥物的新的靶標。
近年來，越來越多的證據表明，在多種類型的癌症中有FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4的基因擴增突變。大量的證據表明：FGFR1在乳腺癌、非小細胞性肺癌和成膠質細胞瘤中有基因突變，在急性骨髓性白血病中有由基因轉座導致的融合蛋白形成，在胰腺癌、膀胱癌、前列腺癌、食道癌中有過量表達；FGFR2在胃癌、乳腺癌和子宮癌中有基因突變和擴增的現象，同時在前列腺癌、食道癌、卵巢癌、胰腺癌、腦瘤、大腸癌中有過量表達；FGFR3在多發性骨髓瘤和膀胱癌中有基因突變，在卵巢癌、非小細胞性肺癌、肝細胞癌中有過量表達；FGFR4在肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝癌和膽管癌等中有突變和過量表達，在甲狀腺癌、卵巢癌等中也有過量的表達(French et al. 2012 PLos ONE 7(5)：e367313；Sia et al. 2013 Gastroejterology 144：829-840)。
目前已經公開了一系列的FGFR抑制劑專利，但對於FGFR4選擇性抑制的專利公開較少，對於FGFR4選擇性的抑制劑，相對於FGFR抑制劑具有毒性小的優勢(Brown, AP et al (2005), Toxocol. Pathol., 449-455)。目前處於臨床的FGFR4抑制劑，包括FGF-401(諾華，臨床II期)、BLU-554(Blueprint，臨床I期)和H3B6527 (衛材，臨床I期)。FGFR4選擇性抑制的專利包括WO2015059668、WO2015057938和WO2015057963等，目前對於FGFR4抑制劑對於抗肝癌等腫瘤的研究是遠遠不夠的，仍有必要研究和開發新的FGFR4抑制劑。
本發明的目的之一在於公開了一類新的嘧啶類衍生物及其藥學上的鹽。
本發明提供一種通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽：(I)
其中：
R1 各自獨立地選自烷基、鹵素、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR7 R8 、-C(O)NR7 R8 、-C(O)R9 、-C(O)OR9 或-NR7 C(O)R8 ，其中所述的烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR7 R8 、-C(O)NR7 R8 、-C(O)R9 、-C(O)OR9 或-NR7 C(O)R8 的取代基所取代；
R2 選自如下基團：
-NR4 C(O)CR5 =CHR6 或-NR4 C(O)C≡CR5 ；
R3 選自螺雜環基，其中所述的螺雜環基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、鹵代烷氧基、-NR7 R8 、-C(O)NR7 R8 、-C(O)R9 、-C(O)OR9 或-NR7 C(O)R8 的取代基所取代；或者
R3 選自單環雜環基，其中所述的單環雜環基進一步被一個或多個選自環烷基或-NR7 R8 的取代基所取代；
R4 各自獨立地選自氫原子或烷基，其中所述的烷基擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、鹵代烷氧基、-NR7 R8 、-C(O)NR7 R8 、-C(O)R9 、-C(O)OR9 或-NR7 C(O)R8 的取代基所取代；
R5 和R6 各自獨立地選自氫原子、烷基或鹵素，其中所述的烷基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、鹵代烷氧基、-NR7 R8 、-C(O)NR7 R8 、-C(O)R9 、-C(O)OR9 或-NR7 C(O)R8 的取代基所取代；
R7 、R8 和R9 各自獨立地選自氫原子、烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR10 R11 、-C(O)NR10 R11 、-C(O)R12 、-C(O)OR12 或-NR10 C(O)R11 的取代基所取代；
或者，R7 和R8 與相連接的N原子一起形成一個4～8元雜環基，其中4～8元雜環內含有一個或多個N、O、S(O)n 原子，並且4～8元雜環上進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、=O、-NR10 R11 、-C(O)NR10 R11 、-C(O)R12 、-C(O)OR12 或-NR10 C(O)R11 的取代基所取代；
R10 、R11 和R12 各自獨立地選自氫原子、烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；
m為1、2、3或4；且
n為0、1或2。
本發明的較佳方案，一種通式(I)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R3 選自螺雜環基，其中所述的螺雜環基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、鹵代烷氧基、-NR7 R8 、-C(O)NR7 R8 、-C(O)R9 、-C(O)OR9 或-NR7 C(O)R8 的取代基所取代，R7 、R8 和R9 的定義如通式(I)中所述。
本發明的較佳方案，一種通式(I)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其為通式(II)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽：(II)
其中：R1 ～R3 和m的定義如通式(I)中所述。
本發明的較佳方案，一種通式(I)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R1 選自鹵素或烷氧基，較佳為氯或甲氧基。
本發明的較佳方案，一種通式(I)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R2 選自-NHC(O)CH=CH2 。
本發明的較佳方案，一種通式(I)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R3 選自單螺雜環基，較佳為3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元單螺雜環基，其中所述的單螺雜環基選擇性地進一步被烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基的取代基所取代。
本發明的較佳方案，一種通式(I)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R2 選自-NHC(O)CH=CH2 ，R3 選自3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元單螺雜環基，其中所述的單螺雜環基選擇性地進一步被烷基所取代，所述烷基較佳為甲基或乙基。
本發明的較佳方案，一種通式(I)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R2 選自-NHC(O)CH=CH2 ，R3 選自：；
R13 各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，較佳為氫原子或烷基，所述烷基較佳為乙基。
本發明的較佳方案，一種通式(I)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R2 選自-NHC(O)CH=CH2 ；R3 選自4元至6元單環雜環基，較佳為呱啶基或呱嗪基，其中所述的呱啶基或呱嗪基進一步被一個或多個選自環烷基或-NR7 R8 的取代基所取代，其中R7 和R8 的定義如通式(I)中所述。
進一步，本發明的較佳方案，一種通式(I)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R2 選自-NHC(O)CH=CH2 ；R3 選自4元至6元單環雜環基，較佳為呱啶基或呱嗪基，其中所述的呱啶基或呱嗪基進一步被一個或多個選自C3-8 的環烷基或-NR7 R8 的取代基所取代，其中，所述C3-8 的環烷基較佳為環丙基，所述R7 和R8 各自獨立地較佳為氫原子或烷基，所述烷基較佳為甲基。
本發明的典型化合物包括，但不限於：
或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽。
進一步，本發明提供一種通式(I)化合物的製備方法，該方法包括：
通式(Ie)化合物與醯鹵化合物，較佳為X-C(O)CR5 =CHR6 或X-C(O)C≡CR5 反應，進一步脫去氨基保護基Ra 得到通式(If)化合物；
其中：當R3 中含有-NH2 或-NH-時，-NH2 或-NH-選擇性地可以被N保護基團保護；所述N保護基團較佳為-C(O)R9 ，更佳為叔丁氧基羰基；
通式(If)化合物進一步脫去氨基保護基Rb 得到通式(I)化合物；(I)
其中：
Ra 和Rb 各自獨立選自N保護基，較佳為苯磺醯基、苄基氧羰基、甲醯基、三氟乙醯基和叔丁氧基羰基；更佳為苯磺醯基和叔丁氧基羰基；
X為鹵素；
R1 ～R6 、R9 和m的定義如通式(I)中所述。
更進一步，本發明提供一種藥物組合物，所述的藥物組合物含有有效劑量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，及可藥用的載體、賦形劑或它們的組合。
本發明提供一種抑制FGFR4的方法，該方法包括將所述的受體與通式(I)或(II)任一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或其藥物組合物相接觸。
本發明提供一種通式(I)或(II)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或其藥物組合物在製備FGFR4抑制劑的藥物中的用途。
本發明提供一種通式(I)或(II)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或其藥物組合物在製備治療FGFR4過渡表達的疾病的藥物中的用途。
本發明提供一種通式(I)或(II)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或其藥物組合物在製備治療FGF19擴增的疾病的藥物中的用途。
本發明提供一種通式(I)或(II)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或其藥物組合物在製備治療癌症藥物中的用途，其中所述的癌症選自非小細胞肺癌、胃癌、多發性骨髓瘤、肝癌、膽管癌，較佳為肝癌和膽管癌。
本發明提供一種治療癌症的方法，該方法包括給予需要治療的患者有效劑量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或其藥物組合物，其中所述的癌症選自非小細胞肺癌、胃癌、多發性骨髓瘤、肝癌、膽管癌，較佳為肝癌和膽管癌。
本發明提供一種治療FGFR4過渡表達的疾病的方法，該方法包括給予需要治療的患者有效劑量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或其藥物組合物。
本發明提供一種治療FGF19擴增的疾病的方法，該方法包括給予需要治療的患者有效劑量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或其藥物組合物。
發明的詳細說明
除非有相反陳述，否則本發明在說明書和申請專利範圍中所使用的部分術語定義如下：
“烷基”當作一基團或一基團的一部分時是指包括C1 -C20 直鏈或者帶有支鏈的脂肪烴基團。較佳為C1 -C10 烷基，更佳為C1 -C6 烷基。烷基基團的實施例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代或未取代的。
“環烷基”是指飽和或部分飽和的單環、稠環、橋環和螺環的碳環。較佳為C3 -C12 環烷基，更佳為C3 -C8 環烷基，最佳為C3 -C6 環烷基。單環環烷基的實施例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等，較佳為環丙基、環己烯基。
“螺環烷基”指5至18元，兩個或兩個以上環狀結構，且單環之間彼此共用一個碳原子(稱螺原子)的多環基團，環內含有1個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統。較佳為6至14元，更佳為7至10元。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺環烷基分為單螺、雙螺或多螺環烷基，較佳為單螺和雙螺環烷基，較佳為4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元。“螺環烷基”的非限制性實施例包括但不限於：螺[4.5]癸基、螺[4.4] 壬基、螺[3.5]壬基、螺[2.4]庚基。
“稠環烷基”指5至18元，含有兩個或兩個以上環狀結構彼此公用一對碳原子的全碳多環基團，一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統，較佳為6至12元，更佳為7至10元。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環稠環烷基，較佳為雙環或三環，更佳為5元/5元或5元/6元雙環烷基。“稠環烷基”的非限制性實施例包括但不限於：二環[3.1.0]己基、二環[3.2.0]庚-1-烯基、二環[3.2.0]庚基、十氫化萘基或十四氫菲基。
“橋環烷基”指 5至18元，含有兩個或兩個以上環狀結構，彼此共用兩個不直接相連接碳原子的全碳多環基團，一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統，較佳為6至12元，更佳為7至10元。較佳為6至14元，更佳為7至10元。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環橋環烷基，較佳為雙環、三環或四環，更有選為雙環或三環。“橋環烷基”的非限制性實施例包括但不限於：(1s,4s)-二環[2.2.1] 庚基、二環[3.2.1]辛基、(1s,5s)-二環o[3.3.1]壬基、二環[2.2.2]辛基、(1r,5r)-二環[3.3.2]癸基。
所述環烷基環可以稠合於芳基、雜芳基或雜環基環上，其中與母體結構連接在一起的環為環烷基，非限制性實施例包括茚滿基、四氫萘基、苯並環庚烷基等。環烷基可以是選擇性地取代的或未取代的。
“雜環基”、“雜環”或“雜環的”在本申請中可交換使用，都是指非芳香性雜環基，其中一個或多個成環的原子是雜原子，如氧、氮、硫原子等，包括單環、稠環、橋環和螺環。較佳具有5至7元單環或7至10元雙-或三環，其可以包含1，2或3個選自氮、氧和/或硫中的原子。“雜環基”的實例包括但不限於嗎啉基，硫代嗎啉基，四氫吡喃基，1，1-二氧代-硫代嗎啉基，呱啶基，2-氧代-呱啶基，吡咯烷基，2-氧代-吡咯烷基，呱嗪-2-酮，8-氧雜-3-氮雜-雙環[3.2.1]辛基和呱嗪基。雜環基可以是取代或未取代的。
“螺雜環基” 指5至18元，兩個或兩個以上環狀結構，且單環之間彼此共用一個原子的多環基團，環內含有1個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)n(其中n選自0、1或2)的雜原子，其餘環原子為碳。較佳為6至14元，更佳為7至10元。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺雜環基分為單螺雜環基、雙螺雜環基或多螺雜環基，較佳為單螺雜環基和雙螺雜環基。更佳為3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元單螺雜環基。其中“a元/b元單螺雜環基”指a元單環和b元單環彼此公用一個原子的螺雜環基。“螺雜環基”的非限制性實施例包括但不限於：1,7-二氧雜螺[4.5] 癸基、2-氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬基、7-氧雜螺[3.5] 壬基和5-氧雜螺[2.4]庚基。
“稠雜環基”指含有兩個或兩個以上環狀結構彼此共用一對原子的全碳多環基團，一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)n (其中n選自0、1或2)的雜原子，其餘環原子為碳。較佳為6至14元，更佳為7至10元。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環稠雜環基，較佳為雙環或三環，更佳為5元/5元或5元/6元雙環稠雜環基。“稠雜環基”的非限制性實施例包括但不限於：八氫吡咯並[3,4-c]吡咯基、八氫-1H-異吲哚基， 3-氮雜二環[3.1.0]己基，八氫苯並[b][1,4] 二噁英(dioxine)。
“橋雜環基”指5至14元，5至18元，含有兩個或兩個以上環狀結構，彼此共用兩個不直接相連接的原子的多環基團，一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子的芳香系統，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)n (其中n選自0、1或2)的雜原子，其餘環原子為碳。較佳為6至14元，更佳為7至10元。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環橋雜環基，較佳為雙環、三環或四環，更有選為雙環或三環。“稠雜環基”的非限制性實施例包括但不限於：2-氮雜二環[2.2.1] 庚基， 2-氮雜二環[2.2.2]辛基和 2-氮雜二環[3.3.2] 癸基。所述雜環基環可以稠合於芳基、雜芳基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜環基。雜環基可以是選擇性地取代的或未取代的。
“芳基”是指含有一個或者兩個環的碳環芳香系統，其中所述環可以以稠合的方式連接在一起。術語“芳基”包括比如苯基、萘基、四氫萘基的芳香基團。較佳芳基為C6 -C10 芳基，更佳芳基為苯基和萘基，最佳為苯基。芳基可以是取代或未取代的。所述“芳基”可與雜芳基、雜環基或環烷基稠合，其中與母體結構連接在一起的為芳基環，非限制性實施例包括但不限於： 和。
“雜芳基”是指芳香族5至6元單環或9至10元雙環，其可以包含1至4個選自氮、氧和/或硫中的原子。“雜芳基”的實施例包括但不限於呋喃基，吡啶基，2-氧代-1，2-二氫吡啶基，噠嗪基，嘧啶基，吡嗪基，噻吩基，異噁唑基，噁唑基，噁二唑基，咪唑基，吡咯基，吡唑基，三唑基，四唑基，噻唑基，異噻唑基，1，2，3-噻二唑基，苯並間二氧雜環戊烯基，苯並咪唑基，吲哚基，異吲哚基，1，3-二氧代-異吲哚基，喹啉基，吲唑基，苯並異噻唑基，苯並噁唑基和苯並異噁唑基。雜芳基可以是取代或未取代的。所述雜芳基環可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環，非限制性實施例包括但不限於： 和。
“烷氧基”是指（烷基-O-）的基團。其中，烷基見本文有關定義。C1 -C6 的烷氧基為優先選擇。其實例包括，但不限於：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基等。
“羥基”指-OH基團。
“鹵素”是指氟、氯、溴和碘，較佳為氯、溴和碘。
“氨基”指-NH2 。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO2 。
“苄基”指-CH2 -苯基。
“羧基”指-C(O)OH。
“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或(環烷基)，其中烷基、環烷基的定義如上所述。
“Boc”指叔丁氧基羰基。
“N保護基”指在有機合成中，含有2個或多個官能團的分子，為了使-NH2 或-NH-免遭反應的破壞，常用某種試劑先將其保護，待反應完成後，再脫去保護基。N保護基包括但不限於叔丁氧基羰基、苄氧羰基、甲醯基或三氟乙醯基。
“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，較佳為最多5個，更佳為1～3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，本發明所屬技術領域中具有通常知識者能夠在不付出過多努力的情況下確定(通過實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的氨基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。
本說明書所述的“取代”或“取代的”，如無特別指出，均是指基團可被一個或多個選自以下的基團取代：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、疏基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、氨基、鹵代烷基、羥烷基、羧基、羧酸酯基、=O、-NR7 R8 、-C(O)NR7 R8 、-C(O)R9 、-C(O)OR9 或-NR7 C(O)R8 。
R7 、R8 和R9 各自獨立地選自氫原子、烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR10 R11 、-C(O)NR10 R11 、-C(O)R12 、-C(O)OR12 或-NR10 C(O)R11 的取代基所取代；
或者，R7 和R8 與相連接的N原子一起形成一個4～8元雜環基，其中4～8元雜環內含有一個或多個N、O、S(O)n 原子，並且4～8元雜環上進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、=O、-NR10 R11 、-C(O)NR10 R11 、-C(O)R12 、-C(O)OR12 或-NR10 C(O)R11 的取代基所取代；
R10 、R11 和R12 各自獨立地選自氫原子、烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代。
“可藥用的鹽”是指上述化合物能保持原有生物活性並且適合於醫藥用途的某些鹽類。式（I）所表示的化合物的可藥用的鹽可以為金屬鹽、與合適的酸形成的胺鹽，金屬鹽較佳為鹼金屬、鹼土金屬鹽，合適的酸包括無機酸和有機酸，例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡糖酸、谷氨酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、蘋果酸、馬來酸、扁桃酸、甲磺酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸等。更佳為鹽酸、氫溴酸、磷酸和硫酸，最佳是鹽酸鹽。
“藥物組合物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學可藥用的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
本發明化合物的合成方法
為了完成本發明的目的，本發明採用如下技術手段：
本發明通式(I)所述的化合物或其鹽的製備方法，包括以下步驟：
通式(Ia)化合物和通式(Ib)化合物進行Buchwald反應，較佳在4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽、鈀催化三(二亞苄基丙酮)二鈀和碳酸銫的存在下，得到通式(Ic)化合物；將通式(Ic)化合物中的氨基進行保護，較佳與二碳酸二叔丁酯反應，得到Rb 保護的通式(Id)化合物；通式(Id)化合物的硝基在氫氣條件下還原，選擇性地進一步烷基化，得到通式(Ie)化合物；通式(Ie)化合物與醯鹵化合物，較佳為X-C(O)CR5 =CHR6 或X-C(O)C≡CR5 反應，進一步脫去氨基保護基Ra 得到通式(If)化合物；通式(If)化合物進一步脫去氨基保護基Rb 得到通式(I)化合物；
其中：
Ra 和Rb 各自獨立選自N保護基，較佳為苯磺醯基、苄基氧羰基、甲醯基、三氟乙醯基和叔丁氧基羰基；更佳為苯磺醯基和叔丁氧基羰基；
X為鹵素；
在反應通式路線中，當R3 中含有-NH2 或-NH-時，-NH2 或-NH-選擇性地可以被N保護基團保護；所述N保護基團較佳為-C(O)R9 ，更佳為叔丁氧基羰基；
R1 ～R6 、R9 和m的定義如通式(I)中所述。
以下結合實施例用於進一步描述本發明，但這些實施例並非限制著本發明的範圍。
實施例
實施例給出了式（I）所表示的代表性化合物的製備及相關結構鑒定資料。必須說明，下述實施例是用於說明本發明而不是對本發明的限制。1 H NMR圖譜是用Bruker儀器（400MHz）測定而得，化學位移用ppm表示。使用四甲基矽烷內標準（0.00ppm）。1 H NMR的表示方法：s=單峰，d=雙重峰，t=三重峰，m=多重峰，br=變寬的，dd=雙重峰的雙重峰，dt=三重峰的雙重峰。若提供偶合常數時，其單位為Hz。
質譜是用LC/MS儀測定得到，離子化方式可為ESI或APCI。
薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)
使用的矽膠板採用的規格是0.15mm至0.2 mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm至0.5mm。
柱層析一般使用煙臺黃海矽膠200至300目矽膠為載體。
在下列實施例中，除非另有指明，所有溫度為攝氏溫度，除非另有指明，各種起始原料和試劑來自市售或者是根據已知的方法合成，市售原料和試劑均不經進一步純化直接使用，除非另有指明，市售廠家包括但不限於Aldrich Chemical Company，ABCR GmbH & Co.KG，Acros Organics，廣贊化工科技有限公司和景顏化工科技有限公司等處購買。
CD3 OD：氘代甲醇。
CDCl3 ：氘代氯仿。
DMSO-d6 ：氘代二甲基亞碸。
氬氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氬氣氣球。
實施例中無特殊說明，反應中的溶液是指水溶液。
對化合物進行純化，採用矽膠柱層析洗脫劑體系和薄層色譜法，其中洗脫劑體系選自：A：石油醚和乙酸乙酯體系；B：二氯甲烷和甲醇體系；其中溶劑的體積比根據化合物的極性不同而不同，也可以加入少量的酸性或鹼性試劑進行條件，如醋酸或三乙胺等。
實施例1
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)丙烯醯胺
第一步
N-(4-溴-2-硝基-苯基)-N-叔丁氧羰基氨基甲酸叔丁酯
將4-溴-2-硝基苯胺1a (7.50 g，34.56 mmol)溶於90 mL四氫呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(15.08 g，69.12 mmol)和4-二甲氨基吡啶(200 mg，1.64 mmol)，升溫至80℃反應2小時。反應液減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到N-(4-溴-2-硝基-苯基)-N-叔丁氧羰基氨基甲酸叔丁酯1b (12.6 g，黃色固體)，產率：87.4%。
MS m/z(ESI)：361.0 [M+1-56]
第二步
(4-溴-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
將N-(4-溴-2-硝基-苯基)-N-叔丁氧羰基氨基甲酸叔丁酯1b (7.12 g，17.1 mmol)和碳酸鉀(7.08 g，51.2 mmol)溶於140 mL 乙腈中，升溫至35℃反應1.5小時。反應液過濾，濾液減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到(4-溴-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯1c (4.49 g，亮黃色固體)，產率：82.8%。
MS m/z(ESI)：216.8 [M+1-100]
第三步
3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-氯嘧啶-4-基)-1-甲基脲
將6-氯-N-甲基嘧啶-4-胺1e (300 mg，2.09 mmol)溶於10 mL N,N-二甲基甲醯胺中，冷卻至0℃，加入60%氫化鈉(167 mg，4.18 mmol)，室溫攪拌30分鐘。將2,4-二氯-3-異氰-1,5-甲氧基-4-甲基苯1d (674 mg，2.72 mmol)溶於5 mL N,N-二甲基甲醯胺中並滴加到反應液中，室溫反應0.5小時。向反應液中加入50 mL水，有白色固體析出，過濾後濾餅用乙酸乙酯重結晶，得到3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-氯嘧啶-4-基)-1-甲基脲1f (710 mg，白色固體)，產率：86.8%。
MS m/z(ESI)：392.8 [M+1]
第四步
(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲醯基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯
將3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-氯嘧啶-4-基)-1-甲基脲1f (1.20 g，3.06 mmol)溶於20 mL 四氫呋喃中，冷卻至0℃，加入二碳酸二叔丁酯(1.34 g，6.13 mmol)和4-二甲氨基吡啶(187 mg，1.53 mmol)，升溫至75℃回流1小時。反應液減壓下濃縮，加入30 mL二氯甲烷溶解，依次用水（20 mL x2）和飽和氯化鈉溶液（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲醯基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g (1.34 g，白色固體)，產率：88.9%。
MS m/z(ESI)：492.8 [M+1]
第五步
2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
將2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1h (440 mg，1.94 mmol)、(4-溴-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯1c (616 mg，1.94 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(229 mg，0.388 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(352 mg，0.388 mmol)和碳酸銫(1.90 g，5.83 mmol)溶於15 mL甲苯中，氬氣保護下115℃反應4小時。反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1i (600 mg，紅色固體)，產率：66.7%。
MS m/z(ESI)：485.0 [M+23]
第六步
2-(4-氨基-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
將2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1i (600 mg，1.30 mmol)和氫氧化鉀(218 mg，3.89 mmol)溶於10 mL水和乙醇的混合溶液（V/V=1/4）中，加熱至回流反應3小時。反應液減壓下濃縮，加入20 mL乙酸乙酯，分層，水相用乙酸乙酯（20 mL x2）萃取，合併有機相用水（20 mL x2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(4-氨基-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1j (400 mg，紅色固體)，產率：85.1%。
MS m/z(ESI)：362.1 [M+1]
第七步
2-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
將(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲醯基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g (450 mg，0.909 mmol)、2-(4-氨基-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1j (300 mg，0.828mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(96 mg，0.165 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(75 mg，0.082 mmol)和碳酸銫(810 mg，2.40 mmol)溶於15 mL甲苯中，110℃反應4小時。反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1k (427 mg，紅色固體)，產率：63.3%。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.15 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.18 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.11 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 6.75-6.71 (m, 1H), 6.59 (s, 1H), 3.93 (s, 6H), 3.70 (s, 4H), 3.63 (s, 2H), 3.46-3.36 (m, 4H), 1.82-1.76 (m, 4H), 1.49 (s, 9H), 1.41 (s, 9H).
第八步
2-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
將2-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1k (500 mg，0.611 mmol)溶於10 mL 四氫呋喃中，冷卻至0℃，加入二碳酸二叔丁酯(200 mg，0.917 mmol)和4-二甲氨基吡啶(37.3 mg，0.306 mmol)，反應液加熱至回流反應3小時。反應液減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1l (500 mg，黃色固體)，產率：89.1%。
第九步
2-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
將2-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1l (500 mg，0.545 mmol)溶於10 mL甲醇中，加入雷尼鎳(200 mg)，氫氣保護下，室溫反應12小時。反應液過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1m (300 mg，紅色固體)，產率：62.0%。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.66 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 6.81 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H), 5.9-5.85 (m, 1H), 5.84-5.79 (m, 1H), 3.94 (s, 6H), 3.63 (s, 3H), 3.6 (s, 4H), 3.43-3.32 (m, 4H), 1.82-1.72 (m, 4H), 1.46 (s, 9H), 1.42 (s, 9H), 1.41 (s, 9H).
第十步
2-(3-丙烯醯氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
將2-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1m (200 mg，0.225 mmol)溶於10 mL 二氯甲烷中，冰浴下加入N，N-二異丙基乙胺(87 mg，0.676 mmol)和丙烯醯氯(22 mg，0.248 mmol)，室溫反應0.5小時。反應液減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(3-丙烯醯氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1n (200 mg，淡黃色固體)，產率：94.3%。
第十一步
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)丙烯醯胺
將2-(3-丙烯醯氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1n (200 mg，0.84 mmol)溶於10 mL 二氯甲烷中，冰浴下加5 mL三氟乙酸，氮氣保護室溫反應12小時。反應液減壓濃縮，加入20 mL二氯甲烷和甲醇的混合溶液（V/V=10/1），用飽和碳酸氫鈉溶液（10 mL）洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠薄層層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)丙烯醯胺1 (80 mg，淡黃色固體)，產率：58.8%。
MS m/z(ESI)：640.8 [M+1]
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.1 (s, 1H), 9.64 (s, 1Hl), 8.82 (s, 1H), 8.3 (s, 1H), 7.22 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.95-6.86 (m, 2H), 6.58-6.48 (m, 1H), 6.28 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.22 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 5.76 (s, 1H), 5.71 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 3.93 (s, 6H), 3.63 (s, 4H), 3.21 (s, 3H), 3.12-3.01 (m, 4H), 2.0-1.91 (m, 4H).
實施例2
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)苯基)丙烯醯胺
第一步
7-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-4,7-氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯
將4,7-氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯 2a (803 mg，3.78 mmol)、(4-溴-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯 1c (1.02 g，3.15 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(35 mg，0.063 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(115 mg，0.126 mmol)和碳酸銫(3.08 g，9.46 mmol)溶於30 mL甲苯中，氬氣保護下110℃反應6小時。反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到7-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-4,7-氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2b (240 mg，紅色固體)，產率：17.0%。
MS m/z (ESI): 348 [M-100]
第二步
7-(4-氨基-3-硝基苯基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯
將7-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-4,7-氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2b (240 mg，0.53 mmol)和氫氧化鉀(90 mg，1.61 mmol)溶於8 mL水和乙醇的混合溶液（V/V=1/3）中，加熱至回流反應6小時。反應液減壓下濃縮，加入20 mL乙酸乙酯和10mL水，分層，水相用乙酸乙酯（10 mL x2）萃取，合併有機相用飽和氯化鈉溶液（20 mL x2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到粗品7-(4-氨基-3-硝基苯基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2c (160 mg，紅色固體)，產率：86.6%。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.5 (s, 1H), 7.19-7.15 (m, 1H), 6.76 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 5.95-5.75 (m, 2H), 3.75-3.65 (m, 2H), 3.10-3.02 (m, 2H), 2.95-2.80 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.10-1.04 (m, 2H), 0.89-0.84 (m, 2H).
第三步
7-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯
將(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲醯基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g (248 mg，0.51 mmol)、7-(4-氨基-3-硝基苯基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2c (160 mg，0.46mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(53 mg，0.092 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(42 mg，0.046 mmol)和碳酸銫(449 mg，1.38 mmol)溶於10 mL甲苯中，110℃反應4小時。反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到7-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2d (262 mg，紅色固體)，產率：71.0%。
MS m/z(ESI)：803.8 [M+1]
第四步
7-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯
將7-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2d (262 mg，0.326 mmol)溶於10 mL 四氫呋喃中，冷卻至0℃，加入二碳酸二叔丁酯(107 mg，0.489 mmol)和4-二甲氨基吡啶(20 mg，0.163 mmol)，反應液加熱至回流反應1小時。反應液減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到7-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2e (260 mg，黃色固體)，產率：88.4%。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.55 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.22-7.05 (m, 2H), 6.59 (s, 1H), 3.94 (s, 6H), 3.78 (t,J = 4.4 Hz, 2H), 3.66 (s, 3H), 3.33 (t,J = 4.4 Hz, 2H), 3.12 (s, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.44-1.38 (m, 18H), 1.14-1.09 (m, 2H), 0.96-0.89 (m, 2H).
第五步
7-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-4,7-二氮雜螺[2.5] 辛烷-4-羧酸叔丁酯
將7-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2e (260 mg，0.288 mmol)溶於9 mL四氫呋喃和甲醇的混合溶液(V/V=1/2)中，加入雷尼鎳(100 mg)，氫氣保護下，室溫反應6小時。反應液過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到7-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2f (200 mg，黃色固體)，產率：79.7%。
第六步
7-(3-丙烯醯氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯
將7-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2f(200 mg，0.229 mmol)溶於10 mL 二氯甲烷中，冰浴下加入N，N-二異丙基乙胺(89 mg，0.687 mmol)和丙烯醯氯(23 mg，0.252 mmol)，室溫反應0.5小時。反應液減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到7-(3-丙烯醯氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2g (180 mg，黃色固體)，產率：84.8%。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.64 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.11-8.0 (m, 1H), 7.07-7.02 (m, 1H), 6.59 (s, 1H), 6.37 (d,J = 16.8 Hz, 1H), 6.25-6.15 (m, 1H), 5.75 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 3.95 (s, 6H), 3.85-3.77 (m, 2H), 3.64 (s, 3H), 3.35-3.25 (m, 2H), 3.12 (s, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.42 (s, 9H), 1.34 (s, 9H), 1.14-1.06 (m, 2H), 0.97-0.91 (m, 2H).
第七步
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)苯基)丙烯醯胺
將7-(3-丙烯醯氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2g (170 mg，0.183 mmol)溶於6 mL 二氯甲烷中，冰浴下加3 mL三氟乙酸，氮氣保護室溫反應12小時。反應液減壓濃縮，加入20 mL二氯甲烷和甲醇的混合溶液（V/V=10/1），用飽和碳酸氫鈉溶液（10 mL）洗滌，有機相減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠薄層層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)苯基)丙烯醯胺2 (40 mg，淡黃色固體)，產率：34.8%。
MS m/z(ESI)：626.9 [M+1]
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.09 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.46-7.31 (m, 2H), 6.89 (s, 1H), 6.85 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 6.63-6.48 (m, 1H), 6.39-6.13 (m, 2H), 5.73 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 3.93 (s, 6H), 3.29-3.11 (m, 9H), 1.13-0.99 (m, 2H), 0.97-0.78 (m, 2H).
實施例3
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-7-基)苯基)丙烯醯胺
第一步
2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮雜螺[2.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
將2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3a (500 mg，2.08 mmol)、(4-溴-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯1c(660 mg，2.08 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(230 mg，0.42 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(380 mg，0.42 mmol)和碳酸銫(2.03 g，6.24 mmol)溶於20 mL甲苯中，120℃反應4小時。反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮雜螺[2.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3b (260 mg，紅色固體)，產率：26.2%。
MS m/z(ESI)：477.0 [M+1]
第二步
2-(4-氨基-3-硝基苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
將2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮雜螺[2.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3b (260 mg，0.54 mmol)和氫氧化鉀(91.83 mg，1.64 mmol)溶於8 mL水和乙醇的混合溶液（V/V=1/3）中，加熱至90℃反應6小時。反應液減壓下濃縮，加入10 mL乙酸乙酯，分層，水相用乙酸乙酯（10 mL x2）萃取，合併有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到粗品2-(4-氨基-3-硝基苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3c (160 mg，黑紅色固體)，產率：75.5%。
MS m/z(ESI)：377.0 [M+1]
第三步
2-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
將(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲醯基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g (216 mg，0.44 mmol)、2-(4-氨基-3-硝基苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3c (150 mg，0.40mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(46 mg，0.08 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(146 mg，0.04 mmol)和碳酸銫(390 mg，1.20 mmol)溶於10 mL甲苯中，110℃反應4小時。反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3d (80 mg，紅色固體)，產率：27.1%。
第四步
2-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
將2-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3d (80 mg，0.096 mmol)溶於10 mL 四氫呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(32 mg，0.144 mmol)和4-二甲氨基吡啶(6 mg，0.046 mmol)，反應液加熱至78℃反應1小時。反應液減壓下濃縮，得到粗品2-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3e (89 mg，黃色固體)，產率：100%。
第五步
2-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
將2-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3e (89 mg，0.0955 mmol)溶於6 mL四氫呋喃和甲醇的混合溶液(V/V=1/2)中，加入雷尼鎳(50 mg)，氫氣保護下，室溫反應12小時。反應液過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3f (85 mg，黃色固體)，產率：98.7%。
第六步
2-(3-丙烯醯氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
將2-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3f (85 mg，0.094 mmol)溶於10 mL 二氯甲烷中，加入N，N-二異丙基乙胺(36.5 mg，0.283 mmol)和丙烯醯氯(10 mg，0.104 mmol)，室溫反應1小時。反應液減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2-(3-丙烯醯氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3g (80 mg，黃色固體)，產率：88.8%。
第七步
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-7-基)苯基)丙烯醯胺
將2-(3-丙烯醯氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3g (80 mg，0.084 mmol)溶於6 mL 二氯甲烷中，冰浴下加3 mL三氟乙酸，氮氣保護室溫反應12小時。反應液減壓濃縮，加入20 mL二氯甲烷和甲醇的混合溶液（V/V=10/1），用飽和碳酸氫鈉溶液（10 mL）洗滌，有機相減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠薄層層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-7-基)苯基)丙烯醯胺3 (17 mg，黃色固體)，產率：31.0%。
MS m/z(ESI)：656.8 [M+1]
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.11 (s, 1H), 9.60 (s, 1H), 8.71-8.63 (m, 2H), 8.29 (s, 1H), 7.21 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.56-6.46 (m, 1H), 6.42 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.2 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 5.69 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 3.93 (s, 6H), 3.32 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 3.25-3.16 (m, 5H), 3.15-3.05 (m, 4H), 1.93 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 1.81-1.68 (m, 4H).
實施例4
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)丙烯醯胺
第一步
2-苄基-7-叔丁基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸
將2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1h (2.0 g，8.84 mmol)溶於20 mL二氯甲烷中，加入氯甲酸苄酯(3.06 g，17.67 mmol)和N,N-二異丙基乙胺(4.57 g，35.35 mmol)，室溫反應12小時。反應液減壓濃縮，加入20 mL乙酸乙酯溶解，用依次用1M的鹽酸溶液（10 mL）和飽和氯化鈉溶液（10 mL）洗滌，有機相減壓下濃縮，得到2-苄基-7-叔丁基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸4a (3.18 g，黃色油狀物)，產率：100%。
第二步
2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸苄酯
將2-苄基-7-叔丁基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸4a (3.20 g，8.88 mmol)溶於20 mL二氯甲烷中，加入10 mL三氟乙酸，室溫反應4小時。反應液減壓濃縮，加入30 mL乙酸乙酯溶解，用依次用碳酸氫鈉溶液（10 mL x2）和飽和氯化鈉溶液（10 mL）洗滌，有機相減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸苄酯4b (2.30 g，無色粘稠物)，產率：99.6%。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.41 (s, 1H), 7.43-7.29 (m, 5H), 5.09 (s, 2H), 3.77 (s, 4H), 3.16-2.96 (m, 4H), 2.09-1.96 (m, 4H).
第三步
7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸苄酯
將2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸苄酯4b (2.3 g，8.83 mmol)溶於20 mL甲醇中，加入10 mL乙醛、醋酸(1.50 g，26.5 mmol)和氰基硼氫化鈉(2.22 g，35.34 mmol)，室溫反應12小時。反應液減壓濃縮，加入20 mL乙酸乙酯和10 mL水，分層，有機相用依次用飽和碳酸氫鈉溶液（10 mL）和飽和氯化鈉溶液（10 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸苄酯4c (2.0 g，無色粘稠物)，產率：78.4%。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.42-7.31 (m, 5H), 5.1 (s, 2H), 3.9-3.7 (m, 4H), 3.58-3.38 (m, 2H), 3.15-3.02 (m, 2H), 2.85-2.55 (m, 2H), 2.3-2.06 (m, 4H), 1.39 (t,J = 12Hz, 3H).
第四步
7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷
將7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸苄酯4c (2.00 g，6.94 mmol)溶於20 mL甲醇中，加入鈀炭(70 mg)，氫氣氛圍下，室溫反應12小時。反應液過濾，濾液減壓濃縮，得到7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷4d (1.0 g，油狀物)，產率：93.4%。
第五步
(4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
將7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷4d (1.50 g，4.73 mmol)、(4-溴-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯1c (1.09 g，7.09 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(821 mg，1.42 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(649 mg，0.71 mmol)和碳酸銫(4.62 g，14.19 mmol)溶於50 mL甲苯中，110℃反應4小時。反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到(4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯4e (1.00 g，紅色固體)，產率：54.1%。
MS m/z(ESI)：391.0 [M+1]
第六步
(4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基甲酸
將(4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯4e (1.00 g，2.56 mmol)溶於10 mL二氯甲烷中，加入5 mL三氟乙酸，室溫反應4小時。反應液減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到(4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基甲酸4f (680 mg，紅色固體)，產率：91.5%。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 7.11 (s, 1H), 6.76 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 6.73-6.67 (m, 1H), 3.65-3.58 (m, 4H), 3.19-3.03 (m, 4H), 2.72-2.56 (m, 2H), 2.45-2.35 (m, 2H), 2.17-2.08 (m, 2H), 1.41 (t,J = 5.6 Hz, 3H).
第七步
叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]氨基甲酸
將(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲醯基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g (1.00 g，2.03 mmol)、(4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基甲酸4f (650 mg，2.24 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(259 mg，0.447 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(205 mg，0.224 mmol)和碳酸銫(2.65 g，6.13 mmol)溶於20 mL甲苯中，115℃反應6小時。反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]氨基甲酸4g (800 mg，紅色固體)，產率：52.9%。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 9.17 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.21 (d,J = 9.2 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.11 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 6.77-6.71 (m, 1H), 6.61 (s, 1H), 3.95 (s, 6H), 3.71 (s, 4H), 364 (s, 3H), 3.52-2.25 (m, 6H), 2.08-1.96 (m, 4H), 1.29-1.25 (m, 3H).
第八步
叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸
將叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]氨基甲酸4g (800 mg，1.07 mmol)溶於20 mL 四氫呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(351 mg，1.61 mmol)和4-二甲氨基吡啶(131 mg，1.07 mmol)，反應液加熱至80℃反應1小時。反應液減壓下濃縮，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸4h (850mg，黃色固體)，產率：93.7%。
MS m/z(ESI)：423.0 [M/2+1]
第九步
叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-氨基-苯基]氨基甲酸
將叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸4h (850 mg，1.01 mmol)溶於20 mL甲醇中，加入雷尼鎳(500 mg)，氫氣保護下，室溫反應20小時。反應液過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-氨基-苯基]氨基甲酸4i (210 mg，淡黃色固體)，產率：25.6%。
MS m/z(ESI)：408.0 [M/2+1]
第十步
叔丁基-N-[6- [[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-(丙-2-烯醯基氨基)苯基]氨基甲酸
將叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-氨基-苯基]氨基甲酸4i (210 mg，0.257 mmol)溶於10 mL 二氯甲烷中，加入N，N-二異丙基乙胺(133 mg，1.03 mmol)和丙烯醯氯(46.6 mg，0.815 mmol)，室溫反應48小時。反應液減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-(丙-2-烯醯基氨基)苯基]氨基甲酸4j (120 mg，黃色固體)，產率：53.6%。
MS m/z(ESI)：435.0 [M/2+1]
第十一步
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)丙烯醯胺
將叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)-2-(丙-2-烯醯基氨基)苯基]氨基甲酸4j (120 mg，0.138 mmol)溶於10 mL 二氯甲烷中，加入5 mL三氟乙酸，室溫反應14小時。反應液減壓濃縮，加入20 mL二氯甲烷和甲醇的混合溶液（V/V=10/1），用飽和碳酸鈉溶液（10 mL）和飽和氯化鈉溶液（10 mL）洗滌，有機相減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)丙烯醯胺4 (25 mg，黃色固體)，產率：27.1%。
MS m/z(ESI)：668.8 [M+1]
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.09 (s, 1H), 10.48 (s, 1H), 9.69 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.23 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.63-6.45 (m, 1H), 6.32-6.15 (m, 2H), 5.71 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 3.93 (s, 6H), 3.75-3.55 (m, 4H), 3.48-3.38 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 3.25-2.81 (m, 4H), 2.19-1.92 (m, 4H), 1.28-1.19 (m, 3H).
實施例5
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-乙基-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)丙烯醯胺
第一步
N-(4-溴-2-硝基苯基)乙醯胺
將4-溴-2硝基苯胺1a(6.00 g，27.65 mmol)溶於45 mL醋酸中，加入乙酸酐(2.85 mL，30.41 mmol)，加熱至100℃反應5小時。反應液中加入100 mL水，有固體析出，過濾，濾餅用50 mL二氯甲烷溶解，有機相用依次用水（20 mL x2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓下濃縮，得到N-(4-溴-2-硝基苯基)乙醯胺5a (6.60 g，黃色固體)，產率：92.1%。
MS m/z(ESI)：258.8 [M+1]
第二步
7-(4-乙醯氨基-3-硝基苯基)-4,7-氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯
將N-(4-溴-2-硝基苯基)乙醯胺5a (1.00 g，3.86 mmol)、4,7-氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯 2a (820 mg，3.86 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(450 mg，0.772 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(350 mg，0.386 mmol)和碳酸銫(3.77 g，11.6 mmol)溶於50 mL甲苯中，氬氣保護下115℃反應4小時。反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到7-(4-乙醯氨基-3-硝基苯基)-4,7-氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯5b (920 mg，紅色固體)，產率：61.3%。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 10.01 (s, 1H), 8.61 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.32-7.27 (m, 2H), 3.85-3.65 (m, 2H), 3.31-3.15 (m, 2H), 3.02 (s, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.14-1.08 (m, 2H), 0.98-0.88 (m, 2H).
第三步
(N-(2-硝基-4-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)乙醯胺
將7-(4-乙醯氨基-3-硝基苯基)-4,7-氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯5b (720 mg，2.36 mmol)溶於10 mL二氯甲烷中，加入5 mL三氟乙酸，室溫反應4小時。反應液減壓濃縮，加入20 mL乙酸乙酯溶解，分層，有機相用依次用飽和碳酸鈉溶液（10 mL）和飽和食鹽水（10 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓下濃縮，得到(N-(2-硝基-4-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)乙醯胺5c (650 mg，紅色固體)，產率：95.0%。
MS m/z(ESI)：291.0 [M+1]
第四步
N-(4-(4-乙基-4,7-氮雜螺[2.5]辛烷-7-基)-2-硝基苯基)乙醯胺
將(N-(2-硝基-4-(4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)乙醯胺5c (600 mg，2.06 mmol)溶於20 mL甲醇中，加入40%的乙醛2 mL、醋酸(250 mg，4.13 mmol)和氰基硼氫化鈉(260 mg，4.13 mmol)，室溫反應12小時。反應液減壓濃縮，加入20 mL乙酸乙酯，有機相用依次用飽和碳酸鈉溶液（10 mL x2）和飽和氯化鈉溶液（10 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓下濃縮，得到N-(4-(4-乙基-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-7-基)-2-硝基苯基)乙醯胺5d (660 mg，紅色固體)，產率：100%。
MS m/z(ESI)：319.0 [M+1]
第五步
4-(4-乙基-4,7-氮雜螺[2.5]辛烷-7-基)-2-硝基苯胺
將N-(4-(4-乙基-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-7-基)-2-硝基苯基)乙醯胺5d (700 mg，2.20 mmol)溶於20 mL乙醇中，加入4 mL氫氧化鉀(493.4 mg，8.79 mmol)，加熱至90℃反應3小時。反應液減壓濃縮，加入20 mL乙酸乙酯和10 mL水，分層，有機相用飽和氯化鈉溶液（10 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到4-(4-乙基-4,7-氮雜螺[2.5]辛烷-7-基)-2-硝基苯胺5e (6.60 g，紅色固體)，產率：98.8%。
MS m/z(ESI)：277.0 [M+1]
第六步
叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(8-乙基-5,8-二氮雜螺[2.5]辛烷-5-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]氨基甲酸
將(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲醯基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g (1.00 g，2.03 mmol)、4-(4-乙基-4,7-氮雜螺[2.5]辛烷-7-基)-2-硝基苯胺5e (618 mg，2.24 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(235 mg，0.407 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(186 mg，0.203 mmol)和碳酸銫(1.99 g，6.10 mmol)溶於30 mL甲苯中，氬氣保護下115℃反應4小時。反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(8-乙基-5,8-二氮雜螺[2.5]辛烷-5-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]氨基甲酸5f (800 mg，紅色固體)，產率：53.7%。
MS m/z(ESI)：366.0 [M/2+1]
第七步
叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(8-乙基-5,8-二氮雜螺[2.5]辛-5-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸
將叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(8-乙基-5,8-二氮雜螺[2.5]辛烷-5-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]氨基甲酸5f (800 mg，1.09 mmol)溶於20 mL 四氫呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(358 mg，1.64 mmol)和4-二甲氨基吡啶(134 mg，1.09 mmol)，反應液加熱至80℃反應1小時。反應液減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(8-乙基-5,8-二氮雜螺[2.5]辛-5-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸5g (850 mg，黃色固體)，產率：93.5%。
MS m/z(ESI)：832.8[M+1]
第八步
叔丁基-N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(8-乙基-5,8-二氮雜螺[2.5]辛烷-5-基)苯胺]嘧啶-4-基]甲基-氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸
將叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(8-乙基-5,8-二氮雜螺[2.5]辛-5-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸5g (850 mg，1.02 mmol)溶於20 mL甲醇中，加入雷尼鎳(400 mg)，氫氣保護下，室溫反應6小時。反應液過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到叔丁基-N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(8-乙基-5,8-二氮雜螺[2.5]辛烷-5-基)苯胺]嘧啶-4-基]甲基-氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸5h (600 mg，黃色固體)，產率：73.2%。
MS m/z(ESI)：401.9 [M/2+1]
第九步
叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]甲基氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(8-乙基-5,8-二氮雜螺[2.5]辛烷-5-基)-2-(丙-2-烯醯基氨基)苯基]氨基甲酸
將叔丁基-N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(8-乙基-5,8-二氮雜螺[2.5]辛烷-5-基)苯胺]嘧啶-4-基]甲基-氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸5h (600 mg，0.748 mmol)溶於15 mL 二氯甲烷中，加入N，N-二異丙基乙胺(463 mg，3.73 mmol)和丙烯醯氯(135 mg，1.50 mmol)，室溫反應4小時。反應液減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]甲基氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(8-乙基-5,8-二氮雜螺[2.5]辛烷-5-基)-2-(丙-2-烯醯基氨基)苯基]氨基甲酸5i (440 mg，紅色固體)，產率：68.7%。
MS m/z(ESI)：378. 6[(M-100)/2+1]
第十步
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-乙基-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)丙烯醯胺
將叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]甲基氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(8-乙基-5,8-二氮雜螺[2.5]辛烷-5-基)-2-(丙-2-烯醯基氨基)苯基]氨基甲酸5i (440 mg，0.514 mmol)溶於15 mL 二氯甲烷中，加入5 mL三氟乙酸，室溫反應12小時。反應液減壓濃縮，加入20 mL乙酸乙酯，依次用飽和碳酸鈉溶液（20 mL）和飽和氯化鈉溶液（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠薄層層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-乙基-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)丙烯醯胺5 (100 mg，白色固體)，產率：29.7%。
MS m/z(ESI)：678.8 [M+23]
1 H NMR (400 MHz, CDCL3 ) δ 12.53 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 6.76-6.66 (m, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.62 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 6.26-6.17 (m, 1H), 5.9-5.84 (m, 1H), 5.79 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 3.92 (s, 6H), 3.8-2.1 (m, 11H), 1.69-1.42 (m, 3H), 1.32-1.02 (m, 2H), 0.98-0.6 (m, 2H).
實施例6
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[4.4]壬烷-2-基)苯基)丙烯醯胺
第一步
7-(4-乙醯氨基-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯
將N-(4-溴-2-硝基苯基)乙醯胺5a (550 mg，2.12 mmol)、2,7-氮雜螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯 6a (460.5 mg，2.12 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(246 mg，0.425 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(194 mg，0.212 mmol)和碳酸銫(2.08 g，6.37 mmol)溶於20 mL甲苯中，氬氣保護下115℃反應4小時。反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到(7-(4-乙醯氨基-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯6b (490 mg，紅色固體)，產率：57.1%。
MS m/z(ESI)：405.0 [M+1]
第二步
(N-(2-硝基-4-(2,7-二氮雜螺[4.4]壬烷-2-基)苯基)乙醯胺
將(7-(4-乙醯氨基-3-硝基苯基)-2,7-二氮雜螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯6b (490 mg，1.21 mmol)溶於10 mL二氯甲烷中，加入5 mL三氟乙酸，室溫反應2小時。反應液減壓濃縮，加入20 mL乙酸乙酯溶解，減壓下濃縮，得到(N-(2-硝基-4-(2,7-二氮雜螺[4.4]壬烷-2-基)苯基)乙醯胺6c (368 mg，紅色固體)，產率：100%。
MS m/z(ESI)：305.0 [M+1]
第三步
N-(4-(7-乙基-2,7-氮雜螺[4.4]辛烷-2-基)-2-硝基苯基)乙醯胺
將(N-(2-硝基-4-(2,7-二氮雜螺[4.4]壬烷-2-基)苯基)乙醯胺6c (368 mg，1.21 mmol)溶於10 mL甲醇中，加入40%的乙醛2 mL、醋酸(145 mg，2.42 mmol)和氰基硼氫化鈉(304 mg，4.84 mmol)，室溫反應12小時。反應液減壓濃縮，加入20 mL乙酸乙酯和10 mL水，分層，有機相用依次用飽和碳酸鈉溶液（20 mL）和飽和氯化鈉溶液（10 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓下濃縮，得到N-(4-(7-乙基-2,7-氮雜螺[4.4]辛烷-2-基)-2-硝基苯基)乙醯胺6d (401 mg，紅色固體)，產率：100%。
MS m/z(ESI)：333.0 [M+1]
第四步
4-(7-乙基-2,7-氮雜螺[4.4]壬烷-2-基)-2-硝基苯胺
將N-(4-(7-乙基-2,7-氮雜螺[4.4]辛烷-2-基)-2-硝基苯基)乙醯胺6d (401 mg，2.20 mmol)溶於20 mL乙醇中，加入4 mL氫氧化鉀(271 mg，4.83 mmol)，加熱至90℃反應4小時。反應液減壓濃縮，加入20 mL乙酸乙酯和10 mL水，分層，水相用乙酸乙酯（10 mL x2）萃取，合併有機相用飽和氯化鈉溶液（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到4-(7-乙基-2,7-氮雜螺[4.4]壬烷-2-基)-2-硝基苯胺6e (270 mg，紅色固體)，產率：77.1%。
MS m/z(ESI)：291.0 [M+1]
第五步
叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(3-乙基-3,8-二氮雜螺[4.4]壬烷-8-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]氨基甲酸
將(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲醯基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g (400 mg，0.813 mmol)、4-(7-乙基-2,7-氮雜螺[4.4]壬烷-2-基)-2-硝基苯胺6e (260 mg，0.895 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(94 mg，0.163 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(75 mg，0.0813 mmol)和碳酸銫(795 mg，2.44 mmol)溶於20 mL甲苯中，氬氣保護下115℃反應4小時。反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(3-乙基-3,8-二氮雜螺[4.4]壬烷-8-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]氨基甲酸6f (400 mg，紅色固體)，產率：66.0%。
MS m/z(ESI)：323.0 [M/2+1]
第六步
叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(3-乙基-3,8-二氮雜螺[4.4]壬烷-8-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸
將叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(3-乙基-3,8-二氮雜螺[4.4]壬烷-8-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]氨基甲酸6f (400 mg，0.536 mmol)溶於15 mL 四氫呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(175 mg，0.805 mmol)和4-二甲氨基吡啶(66 mg，0.576 mmol)，反應液加熱至80℃反應1小時。反應液減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(3-乙基-3,8-二氮雜螺[4.4]壬-8-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸6g (410 mg，黃色固體)，產率：90.5%。
第七步
叔丁基-N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(3-乙基-3,8-二氮雜螺[4.4]壬烷-8-基)苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸
將叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(3-乙基-3,8-二氮雜螺[4.4]壬-8-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸6g (450 mg，0.532 mmol)溶於15 mL甲醇中，加入雷尼鎳(200 mg)，氫氣保護下，室溫反應6小時。反應液過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到叔丁基-N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(3-乙基-3,8-二氮雜螺[4.4]壬烷-8-基)苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸6h (310 mg，紅色固體)，產率：71.4%。
MS m/z(ESI)：408.7 [M/2+1]
第八步
叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]甲基氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(3-乙基-3,8-二氮雜螺[4.4]壬烷-8-基)-2-(丙-2-烯醯基氨基)苯基]氨基甲酸
將叔丁基-N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(3-乙基-3,8-二氮雜螺[4.4]壬烷-8-基)苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸6h (310 mg，0.380 mmol)溶於10 mL 二氯甲烷中，加入N，N-二異丙基乙胺(246 mg，1.90 mmol)和丙烯醯氯(69 mg，0.760 mmol)，室溫反應4小時。反應液減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]甲基氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(3-乙基-3,8-二氮雜螺[4.4]壬烷-8-基)-2-(丙-2-烯醯基氨基)苯基]氨基甲酸6i (150 mg，紅色固體)，產率：45.5%。
MS m/z (ESI): 385.9 [M+1/2]
第九步
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[4.4]壬烷-2-基)苯基)丙烯醯胺
將叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]甲基氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(3-乙基-3,8-二氮雜螺[4.4]壬烷-8-基)-2-(丙-2-烯醯基氨基)苯基]氨基甲酸6i (150 mg，0.172 mmol)溶於10 mL 二氯甲烷中，加入5 mL三氟乙酸，室溫反應12小時。反應液減壓濃縮，加入20 mL乙酸乙酯，依次用飽和碳酸鈉溶液（10 mL x2）和飽和氯化鈉溶液（10 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠薄層層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(7-乙基-2,7-二氮雜螺[4.4]壬烷-2-基)苯基)丙烯醯胺6 (20 mg，白色固體)，產率：17.3%。
MS m/z(ESI)：335.8 [M/2+1]
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ 12.11 (s, 1H), 10.43-10.19 (m, 1H), 9.55 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.1 (s, 1H), 7.21 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.09-6.94 (m, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.58-6.44 (m, 1H), 6.42-6.34 (m, 1H), 6.28-6.18 (m, 1H), 5.74-5.66 (m, 1H), 3.93 (s, 6H), 3.8-3.46 (m, 2H), 3.38-3.28 (m, 4H), 3.24-3.92 (m, 7H), 2.22-1.78 (m, 4H), 1.32-1.12 (m, 3H).
實施例7
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-(二甲基氨基)呱啶-1-基)苯基)丙烯醯胺
第一步
N-(4-(4-(二甲基氨基)呱啶-1-基)-2-硝基苯基)乙醯胺
氮氣保護下，將N-(4-溴-2-硝基苯基)乙醯胺5a (14.17 g，49.72 mmol)、N,N-二甲基呱啶-4-胺二鹽酸鹽7a (10.00 g，54.69 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(11.5 g，19.88 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(9.1 g，9.94 mmol)和碳酸銫(48.40 g，148.6 mmol)溶於150 mL甲苯中，加熱回流4小時。反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-(4-(4-(二甲基氨基)呱啶-1-基)-2-硝基苯基)乙醯胺7b (6.40 g，棕黑色固體)，產率：42%。
MS m/z(ESI)：307.0 [M+1]
第二步
1-(4-氨基-3-硝基苯基)-N,N-二甲基呱啶-4-胺
將N-(4-(4-(二甲基氨基)呱啶-1-基)-2-硝基苯基)乙醯胺7b (6.40 g，20.89 mmol)和氫氧化鉀(5.86 g，104.4 mmol)溶於80 mL甲醇和水的混合溶劑（V/V=1/1）中，加熱回流2小時。反應液減壓濃縮，加入100 mL水，用乙酸乙酯（50 mL x3）萃取，合併有機相，依次用水（50 mL x3）和飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到1-(4-氨基-3-硝基苯基)-N,N-二甲基呱啶-4-胺7c (5.4 g，棕黑色固體)，產率：97.8%。
MS m/z(ESI)：265.0 [M+1]
第三步
N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-[4-(二甲基氨基)-1-呱啶基]-2-硝基-苯胺基]-甲基-氨基甲醯基]氨基甲酸叔丁酯
氬氣保護下，將(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲醯基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g (500 mg，1.02 mmol)、1-(4-氨基-3-硝基苯基)-N,N-二甲基呱啶-4-胺7c (285.07 mg，1.02 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(117.66 mg，0.203 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(93.11 mg，0.101 mmol)和碳酸銫(662.57 mg，2.03 mmol)溶於15 mL甲苯中， 加熱至120℃反應4小時。反應液減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-[4-(二甲基氨基)-1-呱啶基]-2-硝基-苯胺基]-甲基-氨基甲醯基]氨基甲酸叔丁酯7d (420 mg，棕紅色固體)，產率：57.4%。
MS m/z(ESI)：718.8 [M+1]
第四步
N-[6-[[叔丁氧基羰基-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-[4-(二甲基氨基)-1-呱啶基]-2-硝基-苯基]氨基甲酸叔丁酯
將N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-[4-(二甲基氨基)-1-呱啶基]-2-硝基-苯胺基]-甲基-氨基甲醯基]氨基甲酸叔丁酯7d (400 mg，0.536 mmol)溶於20 mL 四氫呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(242.63 mg，1.11 mmol)和4-二甲氨基吡啶(20.37 mg，0.167 mmol)，反應液加熱至75℃反應2小時。反應液減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-[6-[[叔丁氧基羰基-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-[4-(二甲基氨基)-1-呱啶基]-2-硝基-苯基]氨基甲酸叔丁酯7e (323 mg，橙黃色固體)，產率：70.9%。
MS m/z(ESI)：818.8 [M+1]
第五步
N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧基羰基-4-[4-(二甲基氨基)-1-呱啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
將N-[6-[[叔丁氧基羰基-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲醯基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-[4-(二甲基氨基)-1-呱啶基]-2-硝基-苯基]氨基甲酸叔丁酯7e (322 mg，0.393 mmol)溶於10 mL甲醇中，加入雷尼鎳(300 mg)，氫氣保護下，室溫反應3小時。反應液過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧基羰基-4-[4-(二甲基氨基)-1-呱啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯7f (202 mg，黃色固體)，產率：65.1%。
MS m/z(ESI)：788.8 [M+1]
第六步
N-[[6-[2-丙烯醯胺基-N-叔丁氧基羰基-4-[4-(二甲基氨基)-1-呱啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
將N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧基羰基-4-[4-(二甲基氨基)-1-呱啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯7f (188 mg，0.238 mmol)溶於10 mL 二氯甲烷中，加入N，N-二異丙基乙胺(131.42 mg，0.952 mmol)和丙烯醯氯(43.09 mg，0.476 mmol)，室溫反應2小時。反應液減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到叔N-[[6-[2-丙烯醯胺基-N-叔丁氧基羰基-4-[4-(二甲基氨基)-1-呱啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯7g (162 mg，淡黃色固體)，產率：80.6%。
MS m/z(ESI)：842.8 [M+1]
第七步
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-(二甲基氨基)呱啶-1-基)苯基)丙烯醯胺
將N-[[6-[2-丙烯醯胺基-N-叔丁氧基羰基-4-[4-(二甲基氨基)-1-呱啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯7g (162 mg，0.192 mmol)溶於5 mL 二氯甲烷中，加入5 mL三氟乙酸，室溫反應1小時。反應液減壓濃縮，加入10 mL二氯甲烷，用飽和碳酸鈉溶液（10 mL x2）洗滌，減壓濃縮，得得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-(二甲基氨基)呱啶-1-基)苯基)丙烯醯胺7 (66 mg，淡黃色固體)，產率：53.4%。
MS m/z(ESI)：642.8 [M+1]
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 12.56 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.23 (d,J = 8.9 Hz, 2H), 6.77 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.41 (d,J = 16.5 Hz, 1H), 6.24 (d,J = 10.2 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.76 (d,J = 9.8 Hz, 1H), 3.91 (s, 6H), 3.80 (d,J = 12.1 Hz, 2H), 3.28 (s, 3H), 2.76 (s, 3H), 2.56 (s, 6H), 2.01 (s, 2H), 1.74 (s, 2H).
實施例8
N-(5-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯醯胺
第一步
N-(4-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-硝基苯基)乙醯胺
氬氣保護下，將N-(4-溴-2-硝基苯基)乙醯胺5a (1.00 g，3.86 mmol)、1-環丙基呱嗪8a (483.26 mg，3.86 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(446.71 mg，0.772 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(353.48 mg，0.386 mmol)和碳酸銫(2.52 g，7.72 mmol)溶於10 mL甲苯中， 加熱至120℃反應4小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-(4-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-硝基苯基)乙醯胺8b (500 mg，紅色固體)，產率：42.7%。
MS m/z(ESI)：304.9 [M+1]
第二步
4-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-硝基苯胺
將N-(4-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-硝基苯基)乙醯胺8b (424 mg，1.39 mmol)溶於50 mL乙醇和水的混合溶劑（V/V=3/2）中，加熱至95℃反應4小時。反應液減壓濃縮，用二氯甲烷（20 mL x3）萃取，合併有機相，減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到4-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-硝基苯胺8c (311 mg，紅棕色固體)，產率：85.2%。
MS m/z(ESI)：263.0 [M+1]
第三步
N-[[6-[4-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
氬氣保護下，將(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲醯基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g (500 mg，1.02 mmol)、4-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-硝基苯胺8c (266.71 mg，1.02 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(117.66 mg，0.203 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(93.11 mg，0.102 mmol)和碳酸銫(662.57 mg，2.03 mmol)溶於20 mL甲苯中，加熱至120℃反應4小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-[[6-[4-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8d (612 mg，紅棕色固體)，產率：83.9%。
MS m/z(ESI)：716.8 [M+1]
第四步
N-[[6-[N-叔丁氧羰基-4-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-硝基-苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
將N-[[6-[4-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8d (612 mg，0.853 mmol)溶於20 mL 四氫呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(372.26 mg，1.71 mmol)和4-二甲氨基吡啶(52.09 mg，0.426 mmol)，反應液加熱至75℃反應2小時。反應液減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-[[6-[N-叔丁氧羰基-4-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-硝基-苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8e (655 mg，橙黃色固體)，產率：93.9%。
MS m/z(ESI)：816.8 [M+1]
第五步
N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(4-環丙基呱嗪-1-基)苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
將N-[[6-[N-叔丁氧羰基-4-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-硝基-苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8e (650 mg，0.795 mmol)溶於20 mL甲醇中，加入雷尼鎳(1.00 g)，氫氣氛圍下，室溫反應2小時。反應液過濾，減壓濃縮，得到粗品N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(4-環丙基呱嗪-1-基)苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8f (596 mg，橙黃色固體)，產率：95.2%。
第六步
N-[[6-[2-丙烯醯胺基-N-叔丁氧羰基-4-(4-環丙基呱嗪-1-基)苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
將N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(4-環丙基呱嗪-1-基)苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8f (565 mg，0.717 mmol)溶於10 mL 二氯甲烷中，加入N，N-二異丙基乙胺(411.04 mg，2.87 mmol)和丙烯醯氯(129.83 mg，1.43 mmol)，室溫反應10分鐘。向反應液中加入10 mL飽和碳酸氫鈉溶液，用二氯甲烷（20 mL x3）萃取，合併有機相，減壓濃縮，得到粗品N-[[6-[2-丙烯醯胺基-N-叔丁氧羰基-4-(4-環丙基呱嗪-1-基)苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8g (600 mg，黃色固體)，產率：99.5%。
MS m/z(ESI)：842.8 [M+1]
第七步
N-(5-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯醯胺
將N-[[6-[2-丙烯醯胺基-N-叔丁氧羰基-4-(4-環丙基呱嗪-1-基)苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8g (600 mg，0.713 mmol)溶於5 mL 二氯甲烷中，加入5 mL三氟乙酸，室溫反應4小時。反應液減壓濃縮，加入10 mL飽和碳酸氫鈉溶液和10 mL二氯甲烷，分液，水相用二氯甲烷（10 mL x2）萃取，合併有機相，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠薄層層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-(5-(4-環丙基呱嗪-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯醯胺8 (200 mg，淡黃色固體)，產率：43.9%。
MS m/z(ESI)：640.8 [M+1]
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 12.55 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.71 (s, 2H), 7.21 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 6.76 (d,J = 8.8 Hz, 2H), 6.52 (s, 1H), 6.42 (d,J = 17.0 Hz, 1H), 6.21 (dd,J = 16.8, 10.0 Hz, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.77 (d,J = 10.3 Hz, 1H), 3.92 (s, 6H), 3.27 (s, 7H), 2.80 (s, 4H), 1.62 (s, 1H), 0.51 (s, 4H).
實施例9
N-(5-(4-(環丙基(甲基)氨基)呱啶-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-4-基)氨基)苯基)丙烯醯胺
第一步
4-氧代呱啶-1-甲酸叔丁酯
將呱啶-4-酮鹽酸鹽9a (5.0 g，36.8 mmol)溶於100 mL四氫呋喃中，加入三乙胺(7.7 mL，55.2 mmol)，攪拌5分鐘，加入二碳酸二叔丁酯(9.6 g，44.2 mmol)和4-二甲氨基吡啶(225 mg，1.84 mmol)，室溫反應12小時。反應液減壓下濃縮，加入100 mL二氯甲烷，依次用1M鹽酸溶液（50 mL ×2）、飽和碳酸鈉溶液（50 mL）和飽和氯化鈉溶液（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到4-氧代呱啶-1-甲酸叔丁酯9b (6.7g，無色固體)，產率：91.8%。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.71-3.74 (m, 4H), 2.43-2.46 (m, 4H), 1.50 (s, 9H)
第二步
4-(環丙基氨基)呱啶-1-甲酸叔丁酯
將4-氧代呱啶-1-甲酸叔丁酯9b (12.0 g，60.2 mmol)溶於40 mL 乙醇中，加入40 mL冰醋酸和環丙胺9c(4.2 mL，60.2 mmol)，攪拌0.5小時，加入氰基硼氫化鈉(7.56 g，120.4 mmol)，室溫反應2小時。反應液減壓下濃縮，加入500 mL飽和氯化銨溶液，用乙酸乙酯（500 mL）萃取，依次用飽和碳酸鈉溶液（400 mL）和飽和氯化鈉溶液（500 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到4-(環丙基氨基)呱啶-1-甲酸叔丁酯9d (11.1 g，無色液體)，產率：77.1%。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.01-4.06 (m, 2H), 2.75-2.83 (m, 3H), 2.14-2.17 (m, 1H), 1.90-1.94 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.26-1.30 (m, 2H), 0.46-0.50 (m, 2H), 0.38-0.40 (m, 2H)
第三步
4-(環丙基(甲基)氨基)呱啶-1-甲酸叔丁酯
將4-(環丙基氨基)呱啶-1-甲酸叔丁酯9d (11.1 g，46.2 mmol)溶於300 mL 乙腈中，加入碳酸鉀(19.15 g，138.6 mmol)和碘甲烷(3.45 mL，55.44 mmol)，室溫反應2小時。反應液過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到4-(環丙基(甲基)氨基)呱啶-1-甲酸叔丁酯9e (8.0 g，無色液體)，產率：68%。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 4.13-4.19 (m, 2H), 2.63-2.69 (m, 3H), 2.39 (s, 3H)，1.82-1.99 (m, 3H), 1.47-1.54 (m, 2H), 1.49 (s, 9H) , 0.54-0.56 (m, 4H)
第四步
N-環丙基-N-甲基呱啶-4-胺
將4-(環丙基(甲基)氨基)呱啶-1-甲酸叔丁酯9e (8.0 g，31.4 mmol)溶於30 mL 二氯甲烷中，加入5 mL三氟乙酸，室溫反應2小時。反應液減壓下濃縮，所得殘留物加入20 mL二氯甲烷繼續減壓濃縮，再次加入50 mL二氯甲烷溶解，然後加入碳酸鉀粉末至無氣泡產生，過濾，減壓濃縮，得到N-環丙基-N-甲基呱啶-4-胺9f (3.8 g，棕色液體)，產率：78.3%。
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 3.12-3.15 (m, 2H), 2.60-2.63 (m, 2H), 2.52-2.56 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 1.85-1.95 (m, 2H), 1.75-1.78 (m, 1H), 1.46-1.50 (m, 2H), 0.46-0.50 (m, 2H), 0.40-0.42 (m, 2H)
第五步
N-(4-(4-(環丙基(甲基)氨基)呱啶-1-基)-2-硝基苯基)乙醯胺
氬氣保護下，將N-(4-溴-2-硝基苯基)乙醯胺5a (6.18 g，23.8 mmol)、N-環丙基-N-甲基呱啶-4-胺9f (3.35 g，21.7 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(2.51 g，4.34 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(3.97 g，4.34 mmol)和碳酸銫(21.2 g，65.1 mmol)溶於100 mL甲苯中， 加熱至110℃反應4小時。反應液冷卻至室溫，用500 mL乙酸乙酯萃取，依次用水（300 mL ×2）和飽和氯化鈉溶液（300 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：A體系)純化，得到N-(4-(4-(環丙基(甲基)氨基)呱啶-1-基)-2-硝基苯基)乙醯胺9g (5.0 g，棕色固體)，產率：69.4%。
MS m/z(ESI)：333.0 [M+1]
第六步
1-(4-氨基-3-硝基苯基)-N-環丙基-N-甲基呱啶-4-胺
將N-(4-(4-(環丙基(甲基)氨基)呱啶-1-基)-2-硝基苯基)乙醯胺9g (5.0 g，15.0 mmol)和氫氧化鉀(8.4 g，150.0 mmol)溶於320 mL水和乙醇的混合溶液（V/V=1/15）中，加熱至90℃反應2小時。反應液減壓下濃縮，加入500 mL乙酸乙酯，分層，有機相用水（400 mL）、飽和氯化鈉溶液（400 mL）和飽和碳酸氫鈉溶液（400 mL）洗滌，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到1-(4-氨基-3-硝基苯基)-N-環丙基-N-甲基呱啶-4-胺9h (2.60 g，棕色油狀物)，產率：57.5%。
MS m/z(ESI)：291.0 [M+1]
第七步
N-[[6-[4-[4-[環丙基(甲基)氨基]-1-呱啶基]-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
氬氣保護下，將(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲醯基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g (491.8 mg，1.00 mmol)、1-(4-氨基-3-硝基苯基)-N-環丙基-N-甲基呱啶-4-胺9h (290.4 mg，1.00 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(115.7 mg，0.20 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(183.0 mg，0.20 mmol)和碳酸銫(977 mg，3.00 mmol)溶於10 mL甲苯中，110℃反應5小時。反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-[[6-[4-[4-[環丙基(甲基)氨基]-1-呱啶基]-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯9i (310 mg，棕色固體)，產率：41.6%。
MS m/z(ESI)：744.8 [M+1]
第八步
N-[[6-[N-叔丁氧羰基-4-[4-[環丙基(甲基)氨基]-1-呱啶基]-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
將N-[[6-[4-[4-[環丙基(甲基)氨基]-1-呱啶基]-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯9i (300 mg，0.40 mmol)溶於10 mL 四氫呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(176 mg，0.80 mmol)和4-二甲氨基吡啶(48.8 mg，0.40 mmol)，反應液加熱至80℃反應4小時。反應液減壓下濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-[[6-[N-叔丁氧羰基-4-[4-[環丙基(甲基)氨基]-1-呱啶基]-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯9j (200 mg，棕黃色固體)，產率：58.1%。
MS m/z(ESI)：846.8 [M+1]
第九步
N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-[4-[環丙基(甲基)氨基]-1-呱啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸酯
將N-[[6-[N-叔丁氧羰基-4-[4-[環丙基(甲基)氨基]-1-呱啶基]-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯9j (200 mg，0.23 mmol)溶於10 mL甲醇和四氫呋喃的混合溶劑（V/V=1/1）中，加入雷尼鎳(200 mg)，氫氣氛圍下，室溫反應3小時。反應液過濾，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-[4-[環丙基(甲基)氨基]-1-呱啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸酯9k (90 mg，白色固體)，產率：46.6%。
MS m/z(ESI)：817.8 [M+1]
第十步
N-[[6-[2-丙烯醯氨基-N-叔丁氧羰基-4-[4-[環丙基(甲基)氨基]-1-呱啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸酯
將N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-[4-[環丙基(甲基)氨基]-1-呱啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸酯9k (90 mg，0.11 mmol)溶於5 mL 二氯甲烷中，冰浴下加入N，N-二異丙基乙胺(0.1 mL，0.55 mmol)和丙烯醯氯(20 mg，0.22 mmol)，室溫反應1小時。加入50 mL二氯甲烷，分液，有機相用飽和碳酸鈉溶液（500 mL）和飽和氯化鈉溶液（50 mL）洗滌，減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠柱層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-[[6-[2-丙烯醯氨基-N-叔丁氧羰基-4-[4-[環丙基(甲基)氨基]-1-呱啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸酯9l (70 mg，淡黃色固體)，產率：72.9%。
MS m/z(ESI)：869.8 [M+1]
第十一步
N-(5-(4-(環丙基(甲基)氨基)呱啶-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-4-基)氨基)苯基)丙烯醯胺
將N-[[6-[2-丙烯醯氨基-N-叔丁氧羰基-4-[4-[環丙基(甲基)氨基]-1-呱啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲醯基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸酯9l (68 mg，0.078 mmol)溶於2 mL 二氯甲烷中，冰浴下加入1 mL三氟乙酸，室溫反應2小時。反應液中加入50 mL二氯甲烷，用飽和碳酸鈉溶液（50 mL×2）洗滌，有機相減壓濃縮，得到的殘留物用矽膠薄層層析法(洗脫劑：B體系)純化，得到N-(5-(4-(環丙基(甲基)氨基)呱啶-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-4-基)氨基)苯基)丙烯醯胺9 (30 mg，淡黃色固體)，產率：57.6%。
MS m/z(ESI)：669.9 [M+1]
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 12.56 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.24 (m, 1H), 6.76 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 6.51 - 6.53 (m, 1H), 6.41 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 6.21-6.27 (m, 1H), 5.95 (s, 1H), 5.76 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 3.91 (s, 6H), 3.74-3.81 (m, 2H), 3.35 (s, 3H), 2.83-2.86 (m, 1H), 2.71-2.77 (m, 2H), 2.55 (s, 3 H), 2.02-2.10 (m, 3H), 1.80-1.82 (m, 2H), 0.85-0.87 (m, 2H), 0.68-0.84 (m, 2H)
生物學評價
測試例1、本發明化合物對FGFR激酶活性測定
以下方法用於測定本發明化合物在體外條件下對重組人源FGFR蛋白的激酶活性的抑制程度。本方法使用Cisbio公司的HTRF®KinEASE-TK酪氨酸激酶試劑盒（貨號62TK0PEB），該試劑盒原理基於時間分辨螢光能量共振轉移（TF-FRET），通過測定FGFR蛋白介導的生物素化的多肽底物的磷酸化程度來反映化合物對FGFR激酶活性的抑制強弱。詳細實驗操作可參考試劑盒說明書。重組人源FGFR蛋白購於Carna bioscience（日本，貨號分別為FGFR1 #08-133，FGFR2 #08-134，FGFR3 #08-135，FGFR4 #08-136）。
將實驗流程簡述如下：受試化合物首先溶解於DMSO中製備為貯存液，隨後以試劑盒中提供的緩衝液進行梯度稀釋，受試化合物在反應體系中的終濃度範圍為10 μM至0.1 nM。測試所用的ATP溶液（生工生物工程（上海）股份有限公司，A600311）的濃度為預先測定的對應每個FGFR亞型的ATP Km值濃度，FGFR1至4對應的ATP Km值濃度分別為100 μM，40 μM，40 μM和120 μM。反應在384孔微孔板中進行，首先向孔中加入化合物和一定量的FGFR蛋白，並在室溫下孵育5-30分鐘，隨後向反應液中加入ATP溶液和生物素化的多肽底物溶液，並在室溫下振盪孵育50分鐘。隨後向反應中加入偶聯有銪系元素化合物的抗磷酸化酪氨酸抗體和偶聯有修飾化的別藻藍蛋白XL665的鏈酶親和素，並在室溫下繼續振盪孵育1小時。孵育結束後，在酶標儀以TF-FRET模式上測定各孔在激發波長為304nm，發射波長為620nM和665nM的螢光強度值。通過與對照組(0.1% DMSO)的螢光強度比值進行比較計算化合物在各濃度下的百分比抑制率，並通過GraphPad Prism 5軟體以化合物濃度對數值-抑制率進行非線性回歸分析，或得化合物的IC50 值，見表1。
表1 本發明化合物對FGFR酶活性抑制的IC50 資料
從表1可以看出，本發明的化合物對FGFR4的抑制作用較好，選擇性優於FGFR1、FGFR2和FGFR3，且本發明化合物對於FGFR4的抑制活性優於WO2015057938的實施例108的化合物（其按照WO2015057938的實施例108製備並鑒定）。
測試例2、本發明化合物對肝癌細胞Huh7活性測定
以下方法用於測定本發明化合物對腫瘤細胞增殖的影響。針對FGFR4亞型，採用肝癌細胞Huh7(購於中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心)進行化合物抑制肝癌細胞活性測定， Huh7細胞培養於含10%胎牛血清、100 U青黴素和100 μg/mL鏈黴素的DMEM培養基中。培養在37℃，5％CO2 培養箱內。肝癌細胞活性通過採用Cell Counting Kit-8試劑盒 (Dojindo，東仁化學科技)來進行測定。
實驗方法按照試劑盒說明書的步驟操作，簡述如下：受試化合物首先溶解於DMSO中製備為貯存液，隨後以對應細胞的培養基進行梯度稀釋，配製成測試樣品，化合物的終濃度範圍在30 μM-0.01 nM。將處於對數生長期的腫瘤細胞以適宜的密度接種至96孔細胞培養板中，在37℃，5％CO2 培養箱內過夜後，加入測試化合物樣品後繼續培養細胞72小時。培養結束後，向每孔加入適宜體積的CCK-8檢測液，並在37℃下孵育1～4小時，隨後在酶標儀上讀取樣品各孔在450 nM下的吸光度數值。通過與對照組(0.3% DMSO)的吸光度數值進行比較計算化合物在各濃度點的百分比抑制率，之後在GraphPad Prism 5軟體中以化合物濃度對數-抑制率進行非線性回歸分析，得到化合物抑制細胞增殖的IC50 值，見表2。
表2 本發明化合物對肝癌細胞Huh7活性抑制的IC50 資料
從表2可以看出，本發明的化合物對FGFR4異常的肝癌細胞具有顯著增殖抑制作用，且優於WO2015057938的實施例108化合物。
測試例3本發明化合物對人肝癌Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤的生長抑制作用的測試
1．實驗目的
本測試用來評價連續22天，每天兩次，口服或腹腔注射給予實施例5化合物以及WO2015057938的實施例108化合物對Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤的生長抑制作用。
2. 受試物配製
2.1 空白給藥製劑配製：
配製適量體積的含有5% DMSO、10% PEG 300、8% Tween 80和77% 生理鹽水(v/v)的製劑作為空白組給藥試液。
2.2 WO2015057938的實施例108化合物給藥製劑配製
稱取適量WO2015057938的實施例108化合物，裝入玻璃瓶中；加入適量體積DMSO，渦旋振盪使藥物完全溶解，再加入適量體積的溶劑TPS (Tween80：PEG300：生理鹽水= 8%：10%：77% (v/v/v)溶液)，渦旋振盪均勻，使DMSO:PEG300:Tween-80:生理鹽水比例為5:10:8:77（v/v/v/v），配製成濃度為2.5 mg/mL的給藥製劑。
2.3實施例5化合物腹腔注射給藥製劑配製
稱取適量實施例5化合物，裝入玻璃瓶中；加入適量體積DMSO，渦旋振盪使藥物完全溶解，再加入適量體積的溶劑TPS (Tween80:PEG300:生理鹽水 = 8%:10%:77% (v/v/v)溶液)，渦旋振盪均勻，使DMSO:PEG300:Tween-80:生理鹽水比例為5:10:8:77（v/v/v/v），配製成濃度為2.5 mg/mL和5 mg/mL的給藥製劑。
2.4實施例5化合物口服給藥製劑配製
稱取600 mg實施例5化合物，裝入玻璃瓶中；加入適量體積3.92 mL EtOH，加入9.8 mL的PEG400，然後再加入5.88 mL的1M HCl，渦旋振盪均勻，使EtOH:PEG400:水比例為20:50:30（v/v/v），配製成濃度為30 mg/mL的給藥製劑。
3. 實驗動物
品種和品系：BALB / c裸鼠，SPF，雌性，7〜9週齡（16〜22克），健康狀況良好，45只適應環境時間5〜7天合格證號：1140070017310，購買於北京維通利華實驗動物技術有限公司。
4.肝癌細胞Huh7培養
第0天，Huh7細胞培養於含10％胎牛血清，100 U青黴素和100μg/ mL鏈黴素的DMEM培養基中培養於37℃，5％CO2 培養箱內接種前取對數生長期細胞，以0.25％胰蛋白酶消化後PBS（磷酸緩衝鹽水，磷酸鹽緩衝液）洗滌，用不含血清的培養基重新懸浮細胞計數，調整細胞濃度至3.3×10 7個細胞/ mL（1： 1基質膠（Matrigel），PBS）。
5.動物接種及分組
每個小鼠在無菌狀態下，右側腋下皮下接種150μL細胞懸液（5.0×106cells / mouse）。接種後第12天，腫瘤長至體積200〜300 mm3左右時，選出腫瘤體積相近，形狀較好的小鼠（形狀盡量為單一圓球形，無不規則的形狀或多個腫瘤聚在一起）每組9只，分為5組。
6.動物給藥和觀察
各組動物每天固定時間根據動物體重給予受試物1天2次（bid），腹腔注射給藥（ip）或是口服給藥（po），於分組當天（接種後第13天） ，開始第一次給藥，連續22天，並記錄每天動物體重。
第1組，溶劑對照組，腹腔注射給予空白給藥製劑，bid，給藥體積為10 mL / kg;第2組，腹腔注射給藥WO2015057938的實施例108化合物，給藥劑量為25 mg / kg，每天兩次（bid）;第3組和第4組，腹腔注射給藥實施例5化合物，給藥劑量分別為25 mg / kg和50 mg / kg，bid;第5組，化學藥劑量為300 mg / kg，出價。
觀察各組動物接種部位腫瘤的形成狀況，每週2次用游標卡尺測量腫瘤結節的長徑（Y）和短徑（X），並按如下公式計算：
腫瘤結節的體積（V）：V =（X2Y）/ 2。
抗腫瘤活性的評價指標：腫瘤生長抑制率TGI（％），相對腫瘤增殖率T / C（％）。相對腫瘤體積（RTV）的計算公式為： RTV = 100 × TVt /TVinitial
其中，TVinitial 為分組給藥時測量到的腫瘤體積；TVt 為給藥期間每一次測量時的腫瘤體積。
相對腫瘤增殖率（%T/C）的計算公式為：
%T/C = 100% ´ (RTVT /RTVC )
其中，RTVT 表示治療組RTV；RTVC 表示溶劑對照組RTV。
腫瘤生長抑制率TGI（%）的計算公式為：
TGI = 100% × [1－(TVt(T) －TVinitial(T) )/( TVt(C) －TVinitial(C) )]
其中，TVt(T) 表示治療組每次測量的腫瘤體積；TVinitial(T) 表示分組給藥時治療組的腫瘤體積；TVt(C) 表示溶劑對照組每次測量的腫瘤體積；TVinitial(C) 表示分組給藥時溶劑對照組的腫瘤體積。
瘤重抑瘤率IR（%）的計算公式為：
IR = 100% × (WC －WT )/WC
其中，WC 表示對照組瘤重；WT 表示治療組瘤重。
動物體重下降率的計算公式為(結果見第3圖)：
動物體重下降率 = 100% × (BWinitial －BWt )/BWinitial
其中，BWt 表示給藥期間每次測量的動物體重；BWinitial 表示分組給藥時的動物體重。
7. 結果
WO2015057938的實施例108化合物和本發明實施例5化合物對肝癌Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤平均腫瘤體積變化圖見第1圖；
WO2015057938的實施例108化合物和本發明實施例5化合物對肝癌Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤平均相對腫瘤體積變化圖見第2圖。
WO2015057938的實施例108和本發明實施例5化合物對肝癌Huh7荷瘤BALB/c裸鼠體重變化圖見第3圖。
表3 本發明化合物對肝癌細胞Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤的生長抑制率(TGI%)
表4 本發明化合物對肝癌細胞Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤的相對腫瘤增殖率T/C(%)
表5.實驗結束時各組動物瘤重及瘤重抑瘤率
表6.給藥期間各組動物體重及體重下降率
由表3至6、第1至 3圖可知，在25 mg/kg (IP，bid)，50 mg/kg (IP，bid)和300 mg/kg (PO，bid)劑量下，本發明實施例5化合物在22天內對基於Huh-7細胞建立小鼠體內腫瘤模型具有明顯的生長抑制作用，且無明顯的體重變化。通過表3至6、第1圖和第2圖可知，在25mg，IP劑量下，實施例5的活性優於WO2015057938的實施例108的化合物。
在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之後，本發明所屬技術領域中具有通常知識者可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附申請專利範圍所限定的範圍。
無
第1圖為測試例3中WO2015057938的實施例108和本發明實施例5化合物對肝癌Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤平均腫瘤體積變化圖。
第2圖為測試例3中WO2015057938的實施例108和本發明實施例5化合物對肝癌Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤平均相對腫瘤體積變化圖。
第3圖為測試例3中WO2015057938的實施例108和本發明實施例5化合物對肝癌Huh7荷瘤BALB/c裸鼠體重變化圖。
無

Claims (18)

  1. 一種通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽： (I) 其中， R1 各自獨立地選自烷基、鹵素、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR7 R8 、-C(O)NR7 R8 、-C(O)R9 、-C(O)OR9 或-NR7 C(O)R8 ，其中所述的烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR7 R8 、-C(O)NR7 R8 、-C(O)R9 、-C(O)OR9 或-NR7 C(O)R8 的取代基所取代； R2 選自如下基團： -NR4 C(O)CR5 =CHR6 或-NR4 C(O)C≡CR5 ； R3 選自螺雜環基，其中所述的螺雜環基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、鹵代烷氧基、-NR7 R8 、-C(O)NR7 R8 、-C(O)R9 、-C(O)OR9 或-NR7 C(O)R8 的取代基所取代；或者 R3 選自單環雜環基，其中所述的單環雜環基進一步被一個或多個選自環烷基或-NR7 R8 的取代基所取代； R4 各自獨立地選自氫原子或烷基，其中所述的烷基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、鹵代烷氧基、-NR7 R8 、-C(O)NR7 R8 、-C(O)R9 、-C(O)OR9 或-NR7 C(O)R8 的取代基所取代； R5 和R6 各自獨立地選自氫原子、烷基或鹵素，其中所述的烷基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、鹵代烷氧基、-NR7 R8 、-C(O)NR7 R8 、-C(O)R9 、-C(O)OR9 或-NR7 C(O)R8 的取代基所取代； R7 、R8 和R9 各自獨立地選自氫原子、烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-NR10 R11 、-C(O)NR10 R11 、-C(O)R12 、-C(O)OR12 或-NR10 C(O)R11 的取代基所取代； 或者，R7 和R8 與相連接的N原子一起形成一個4至8元雜環基，其中4至8元雜環內含有一個或多個N、O、S(O)n 原子，並且4至8元雜環上進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、=O、-NR10 R11 、-C(O)NR10 R11 、-C(O)R12 、-C(O)OR12 或-NR10 C(O)R11 的取代基所取代； R10 、R11 和R12 各自獨立地選自氫原子、烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，其中所述烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代； m為1、2、3或4；且 n為0、1或2。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R3 選自螺雜環基，其中所述的螺雜環基選擇性地進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、鹵代烷氧基、-NR7 R8 、-C(O)NR7 R8 、-C(O)R9 、-C(O)OR9 或-NR7 C(O)R8 的取代基所取代，R7 、R8 和R9 的定義如申請專利範圍第1項中所述。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其為通式(II)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽：(II) 其中，R1 ～R3 和m的定義如申請專利範圍第1項中所述。
  4. 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述之化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R1 選自鹵素或烷氧基，較佳為氯或甲氧基。
  5. 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述之化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R2 為-NHC(O)CH=CH2 。
  6. 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述之化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R3 選自單螺雜環基，較佳為3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元單螺雜環基，其中所述的單螺雜環基選擇性地進一步被烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基的取代基所取代。
  7. 如申請專利範圍第5項所述之化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R3 選自3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元單螺雜環基，其中所述的單螺雜環基選擇性地進一步被烷基所取代，所述烷基較佳為甲基或乙基取代。
  8. 如申請專利範圍第5項所述之化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R3 選自：； R13 各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，較佳為氫原子或烷基，所述烷基較佳為乙基。
  9. 如申請專利範圍第5項所述化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中R3 選自4元至6元單環雜環基；較佳為呱啶基或呱嗪基，其中所述的呱啶基或呱嗪基進一步被一個或多個選自環烷基或-NR7 R8 的取代基所取代，其中R7 和R8 的定義如申請專利範圍第1項中所述。
  10. 如申請專利範圍第9項所述化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中所述環烷基較佳為C3-8 元的環烷基，更佳為環丙基，所述R7 和R8 各自獨立地較佳為氫原子或烷基，所述烷基較佳為甲基。
  11. 如申請專利範圍第1項所述之化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中所述的化合物包括： 或。
  12. 一種如申請專利範圍第1項所述之式（I）化合物的製備方法，所述方法包括：通式(Ie)化合物與醯鹵化合物，較佳為X-C(O)CR5 =CHR6 或X-C(O)C≡CR5 反應，進一步脫去氨基保護基Ra 得到通式(If)化合物； 當R3 中含有-NH2 或-NH-時，-NH2 或-NH-選擇性地可以被N保護基團保護； 所述N保護基團選自為-C(O)R9 ，更佳為叔丁氧基羰基；通式(If)化合物進一步脫去氨基保護基Rb 得到通式(I)化合物； (I) 其中， Ra 和Rb 各自獨立選自N保護基，較佳為苯磺醯基、苄基氧羰基、甲醯基、三氟乙醯基或叔丁氧基羰基； 更佳為苯磺醯基和叔丁氧基羰基； X為鹵素； R1 ～R6 、R9 和m的定義如申請專利範圍第1項中所述。
  13. 一種藥物組合物，所述的藥物組合物含有有效劑量的如申請專利範圍第1項至第11項至中任一項所述之化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，及可藥用的載體、賦形劑或它們的組合。
  14. 一種抑制FGFR4的方法，其中包括將所述的受體與如申請專利範圍第1項至第11項至中任一項所述之化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或如申請專利範圍第13項所述之藥物組合物相接觸。
  15. 一種如申請專利範圍第1項至第11項至中任一項所述之化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或如申請專利範圍第13項所述之藥物組合物在製備FGFR4抑制劑的藥物中的用途。
  16. 一種如申請專利範圍第1項至第11項至中任一項所述之化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或如申請專利範圍第13項所述之藥物組合物在製備治療FGFR4過渡表達的疾病的藥物中的用途。
  17. 一種如申請專利範圍第1項至第11項至中任一項所述之化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或如申請專利範圍第13項所述之藥物組合物在製備治療FGF19擴增的疾病的藥物中的用途。
  18. 一種如申請專利範圍第1項至第11項至中任一項所述之化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或如申請專利範圍第13項所述之藥物組合物在製備治療癌症藥物中的用途，其中所述的癌症選自非小細胞肺癌、胃癌、多發性骨髓瘤、肝癌、膽管癌，較佳為肝癌和膽管癌。
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