WO2017198221A1 - 嘧啶类衍生物、其制备方法和其在医药上的用途 - Google Patents

嘧啶类衍生物、其制备方法和其在医药上的用途 Download PDF

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关东亮
白骅
苟俊
赵伟峰
王中利
凌龙
马玉涛
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浙江海正药业股份有限公司
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Definitions

  • the present invention relates to a novel pyrimidine derivative, a process for its preparation and a pharmaceutical composition containing the same and its use as a therapeutic agent, in particular as an FGFR4 inhibitor.
  • the fibroblast growth factor receptor (FGFR) family is composed of four members (FGFR1, FGFR2, FGFR3, and FGFR4), which are kinases of the receptor tyrosine kinase family, and FGF binding leads to FGFR dimerization, followed by Autologous phosphorylation and activation of downstream signaling pathways. Receptor activation is sufficient to regenerate and activate specific downstream signaling partners involved in the regulation of diverse processes such as cell growth, cell metabolism, and cell survival. Therefore, the FGF/FGFR signaling pathway has multiple effects in many biological processes for tumor cell proliferation, migration, invasion, angiogenesis, and cell criticality.
  • the four members of the FGFR family differ from each other in terms of their ligand affinity and tissue distribution.
  • the genomic structure of the FGFR-4 gene contains 18 exons.
  • the human FGF19 gene is located at 11q13.1, and FGFR4 specifically binds to its ligand FGF19 to inhibit apoptosis and NF-kB signaling, and up-regulate expression of cell proliferation-related genes; activation of FGFR4 can cause Ikk ⁇ activity in TNF- ⁇ -treated cells The decrease is accompanied by a decrease in the distribution of NF-kB in the cell and attenuating the apoptotic effect.
  • Four FGFR genes are expressed in human liver, but mature hepatic cells (Hepatpcyte) only express FGFR4 in large amounts. The combination of FGFR4 and its ligand can also regulate the metabolism of bile acids.
  • the balance of cholesterol to bile acid conversion in the body is closely related to various normal physiological functions of the body. This balance of damage can cause various diseases such as fat in the body. Cardiovascular and cerebrovascular diseases such as liver and arteriosclerosis, so the interaction of FGFR4 and FGF19 becomes a new target for cholesterol-lowering drugs such as hyperlipidemia.
  • FGFR1 has gene mutations in breast cancer, non-small cell lung cancer, and glioblastoma.
  • fusion proteins are formed by gene transposition, in pancreatic cancer, bladder cancer, Overexpression in prostate cancer and esophageal cancer;
  • FGFR2 has mutations and amplification in gastric cancer, breast cancer and uterine cancer, and is also found in prostate cancer, esophageal cancer, ovarian cancer, pancreatic cancer, brain tumor, and colorectal cancer.
  • FGFR3 has gene mutations in multiple myeloma and bladder cancer, overexpressed in ovarian cancer, non-small cell lung cancer, hepatocellular carcinoma; FGFR4 in lung cancer, ovarian cancer, prostate cancer, liver cancer and cholangiocarcinoma There are mutations and overexpression, and there is also excessive expression in thyroid cancer, ovarian cancer, etc. (French et al. 2012 PLos ONE 7(5): e367313; Sia et al. 2013 Gastroejterology 144: 829-840).
  • One of the objects of the present invention is to disclose a new class of pyrimidine derivatives and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • the present invention provides a compound of the formula (I) or a stereoisomer, tautomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • R 1 is each independently selected from the group consisting of alkyl, halogen, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, -NR 7 R 8 , -C(O)NR 7 R 8 , -C ( O) R 9 , -C(O)OR 9 or -NR 7 C(O)R 8 wherein said alkyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl or heteroaryl is optionally selected Further one or more selected from the group consisting of hydroxyl, halogen, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, -NR 7 R 8 , -C(O Substituting a substituent of NR 7 R 8 , -C(O)R 9 , -C(O)OR 9 or -NR 7 C(O)R 8 ;
  • R 2 is selected from the group consisting of:
  • -NR 4 C(O)CR 5 CHR 6 or -NR 4 C(O)C ⁇ CR 5 ;
  • R 3 is selected from the group consisting of spiroheterocyclyl, wherein said spiroheterocyclyl is optionally further selected from one or more selected from the group consisting of hydroxyl, halogen, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocycle.
  • Base aryl, heteroaryl, haloalkoxy, -NR 7 R 8 , -C(O)NR 7 R 8 , -C(O)R 9 , -C(O)OR 9 or -NR 7 C( O) substituted with a substituent of R 8 ; or
  • R 3 is selected from monocyclic heterocyclic group, wherein said monocyclic heterocyclic group is further substituted by one or more substituents selected from cycloalkyl or -NR 7 R 8 ;
  • R 4 is each independently selected from a hydrogen atom or an alkyl group, wherein the alkyl group is optionally further one or more selected from the group consisting of a hydroxyl group, a halogen, a nitro group, a cyano group, an alkyl group, an alkoxy group, a cycloalkyl group, Heterocyclyl, aryl, heteroaryl, haloalkoxy, -NR 7 R 8 , -C(O)NR 7 R 8 , -C(O)R 9 , -C(O)OR 9 or -NR 7 Substituted by a substituent of C(O)R 8 ;
  • R 5 and R 6 are each independently selected from a hydrogen atom, an alkyl group or a halogen, wherein the alkyl group is optionally further further selected from one or more selected from the group consisting of a hydroxyl group, a halogen, a nitro group, a cyano group, an alkyl group, and an alkoxy group. , cycloalkyl, heterocyclic, aryl, heteroaryl, haloalkoxy, -NR 7 R 8 , -C(O)NR 7 R 8 , -C(O)R 9 , -C(O)OR Substituted by a substituent of 9 or -NR 7 C(O)R 8 ;
  • R 7 , R 8 and R 9 are each independently selected from a hydrogen atom, an alkyl group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group or a heteroaryl group, wherein the alkyl group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group Or a heteroaryl group optionally further selected from one or more selected from the group consisting of hydroxyl, halogen, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, -NR 10 R 11, -C (O) NR 10 R 11, -C (O) R 12, -C (O) oR 12 or -NR 10 C (O) R 11 group substituted with a substituent;
  • R 7 and R 8 together with the N atom to which they are attached form a 4 to 8 membered heterocyclic group, wherein the 4 to 8 membered heterocyclic ring contains one or more N, O, S(O) n atoms, and 4
  • R 10 , R 11 and R 12 are each independently selected from a hydrogen atom, an alkyl group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group or a heteroaryl group, wherein the alkyl group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group Or a heteroaryl group optionally further selected from one or more selected from the group consisting of hydroxyl, halogen, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, carboxylic acid or carboxy Substituted by a substituent of the acid ester;
  • n 1, 2, 3 or 4;
  • n 0, 1, or 2.
  • a preferred embodiment of the invention a compound of the formula (I), or a stereoisomer, tautomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein R 3 is selected from the group consisting of spiroheterocyclyl, wherein The spiroheterocyclyl optionally further selected from one or more selected from the group consisting of hydroxyl, halogen, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, haloalkoxy Substituted by a substituent of -NR 7 R 8 , -C(O)NR 7 R 8 , -C(O)R 9 , -C(O)OR 9 or -NR 7 C(O)R 8 , R 7 R 8 and R 9 are as defined in the general formula (I).
  • a preferred embodiment of the invention a compound of the formula (I), or a stereoisomer, tautomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof, which is a compound of the formula (II) or Stereoisomers, tautomers or pharmaceutically acceptable salts thereof:
  • R 1 to R 3 and m are as defined in the formula (I).
  • a preferred embodiment of the invention a compound of the formula (I), or a stereoisomer, tautomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein R 1 is selected from halogen or alkoxy, preferably Chlorine or methoxy.
  • a preferred embodiment of the invention a compound of the formula (I), or a stereoisomer, tautomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein R 3 is selected from the group consisting of a monospiroheterocyclic group, preferably 3 yuan / 6 yuan, 4 yuan / 4 yuan, 4 yuan / 5 yuan, 4 yuan / 6 yuan, 5 yuan / 5 yuan or 5 yuan / 6 yuan monospiroheterocyclic group, wherein the single spiro heterocyclic group It is optionally further substituted with a substituent of an alkyl group, an alkoxy group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group or a heteroaryl group.
  • R 13 is each independently selected from a hydrogen atom, an alkyl group, an alkoxy group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group or a heteroaryl group, preferably a hydrogen atom or an alkyl group, and the alkyl group is preferably an ethyl group.
  • Typical compounds of the invention include, but are not limited to:
  • the present invention provides a process for the preparation of a compound of the formula (I), which comprises:
  • R 3 when R 3 contains -NH 2 or -NH-, -NH 2 or -NH- may optionally be protected by an N protecting group; the N protecting group is preferably -C(O)R 9 , Preferred is tert-butoxycarbonyl;
  • R a and R b are each independently selected from N protecting groups, preferably phenylsulfonyl, benzyloxycarbonyl, formyl, trifluoroacetyl and tert-butoxycarbonyl; more preferably phenylsulfonyl and tert-butoxycarbonyl ;
  • X is a halogen
  • R 1 to R 6 , R 9 and m are as defined in the formula (I).
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising an effective amount of a compound of the formula (I) or (II) or a stereoisomer, tautomer thereof or Pharmaceutically acceptable salts, and pharmaceutically acceptable carriers, excipients or combinations thereof.
  • the present invention provides a method for inhibiting FGFR4, which comprises reacting said receptor with a compound of any one of formula (I) or (II), or a stereoisomer, tautomer thereof or The pharmaceutically acceptable salt, or a pharmaceutical composition thereof, is contacted.
  • the present invention provides a compound of the formula (I) or (II), or a stereoisomer, tautomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof, for use in the preparation of a FGFR4 inhibitor Use in.
  • the present invention provides a compound of the formula (I) or (II), or a stereoisomer, tautomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof, for the preparation of a therapeutically modified FGFR4 Use in medicines for diseases.
  • the present invention provides a compound of the formula (I) or (II) or a stereoisomer, tautomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof, for the preparation of a therapeutic FGF19 amplification Use in medicines for diseases.
  • the present invention provides a compound of the formula (I) or (II), or a stereoisomer, tautomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof, in the preparation of a medicament for treating cancer Use, wherein the cancer is selected from the group consisting of non-small cell lung cancer, gastric cancer, multiple myeloma, liver cancer, cholangiocarcinoma, preferably liver cancer and cholangiocarcinoma.
  • the present invention provides a method for treating cancer comprising administering to a patient in need of treatment an effective amount of a compound of the formula (I) or (II) or a stereoisomer, tautomer or drug thereof thereof.
  • a salt, or a pharmaceutical composition thereof, wherein the cancer is selected from the group consisting of non-small cell lung cancer, gastric cancer, multiple myeloma, liver cancer, cholangiocarcinoma, preferably liver cancer and cholangiocarcinoma.
  • the present invention provides a method for treating a disease in which FGFR4 is transiently expressed, which comprises administering to a patient in need of treatment an effective amount of a compound of the formula (I) or (II) or a stereoisomer or tautomer thereof. Or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof.
  • the present invention provides a method for treating a disease which is expanded by FGF19, which comprises administering to a patient in need of treatment an effective amount of a compound of the formula (I) or (II) or a stereoisomer or tautomer thereof. Or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof.
  • alkyl as a group or part of a group is meant to include C 1 -C 20 linear or branched aliphatic hydrocarbon group with a chain. It is preferably a C 1 -C 10 alkyl group, more preferably a C 1 -C 6 alkyl group.
  • alkyl groups include, but are not limited to, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, t-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1, 1-di Methylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, 2,2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1 -ethyl-2-methylpropyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 2,2-dimethyl Butyl, 1,3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2,3-dimethylbutyl Wait.
  • the alkyl group can be substituted or unsubstituted.
  • Cycloalkyl means a saturated or partially saturated carbocyclic ring of a monocyclic, fused, bridged, and spiro ring. It is preferably a C 3 -C 12 cycloalkyl group, more preferably a C 3 -C 8 cycloalkyl group, and most preferably a C 3 -C 6 cycloalkyl group.
  • Examples of monocyclic cycloalkyl groups include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, cycloheptyl, cycloheptatriene
  • the alkenyl group, the cyclooctyl group and the like are preferably a cyclopropyl group or a cyclohexenyl group.
  • “Spirocycloalkyl” means a polycyclic group of 5 to 18 members, two or more cyclic structures, and a single ring sharing a carbon atom (referred to as a spiro atom), and the ring contains one or more A double bond, but none of the rings have a fully conjugated ⁇ -electron aromatic system. It is preferably 6 to 14 members, more preferably 7 to 10 members.
  • the spirocycloalkyl group is classified into a monospiro, a spiro- or a spirocycloalkyl group, preferably a mono- and bi-spirocycloalkyl group, preferably 4 yuan/5 yuan, 4, depending on the number of common spiro atoms between the rings. Yuan / 6 yuan, 5 yuan / 5 yuan or 5 yuan / 6 yuan.
  • spirocycloalkyl include, but are not limited to, spiro[4.5]decyl, spiro[4.4]decyl, spiro[3.5]decyl, spiro[2.4]heptyl.
  • “Fused cycloalkyl” means 5 to 18 members, an all-carbon polycyclic group containing two or more cyclic structures that share a carbon atom with each other, and one or more rings may contain one or more double bonds, However, none of the rings have a fully conjugated ⁇ -electron aromatic system, preferably 6 to 12 members, more preferably 7 to 10 members. Depending on the number of constituent rings, it may be classified into a bicyclic, tricyclic, tetracyclic or polycyclic fused ring alkyl group, preferably a bicyclic or tricyclic ring, more preferably a 5-membered/5-membered or 5-membered/6-membered bicycloalkyl group.
  • fused cycloalkyl Non-limiting examples include, but are not limited to, bicyclo[3.1.0]hexyl, bicyclo[3.2.0]hept-1-enyl, bicyclo[3.2.0]heptyl, decahydronaphthyl or ten Tetrahydrophenanthrenyl.
  • “Bridge cycloalkyl” means 5 to 18 members, containing two or more cyclic structures, sharing two all-carbon polycyclic groups that are not directly bonded to each other, and one or more rings may contain one or A plurality of double bonds, but none of the rings have a fully conjugated ⁇ -electron aromatic system, preferably 6 to 12 members, more preferably 7 to 10 members. It is preferably 6 to 14 members, more preferably 7 to 10 members.
  • a bicyclic, tricyclic, tetracyclic or polycyclic bridged cycloalkyl group preferably a bicyclic ring, a tricyclic ring or a tetracyclic ring, and more preferably a bicyclic ring or a tricyclic ring.
  • bridged cycloalkyl include, but are not limited to: (1s, 4s)-bicyclo[2.2.1]heptyl, bicyclo[3.2.1]octyl, (1s,5s)-di Ring o [3.3.1] fluorenyl, bicyclo [2.2.2] octyl, (1r, 5r)-bicyclo[3.3.2] fluorenyl.
  • the cycloalkyl ring may be fused to an aryl, heteroaryl or heterocyclyl ring, wherein the ring to which the parent structure is attached is a cycloalkyl group, non-limiting examples include indanyl, tetrahydronaphthalene Base, benzocycloheptyl and the like.
  • the cycloalkyl group can be optionally substituted or unsubstituted.
  • Heterocyclyl “heterocyclic” or “heterocyclic” are used interchangeably herein to refer to a non-aromatic heterocyclic group wherein one or more of the ring-forming atoms are heteroatoms such as oxygen, Nitrogen, sulfur atoms, etc., including monocyclic, fused, bridged, and spiro rings. It preferably has a 5- to 7-membered monocyclic ring or a 7- to 10-membered double- or tricyclic ring which may contain 1, 2 or 3 atoms selected from nitrogen, oxygen and/or sulfur.
  • heterocyclyl examples include, but are not limited to, morpholinyl, thiomorpholinyl, tetrahydropyranyl, 1,1-dioxo-thiomorpholinyl, piperidinyl, 2-oxo- Piperidinyl, pyrrolidinyl, 2-oxo-pyrrolidinyl, piperazin-2-one, 8-oxa-3-aza-bicyclo[3.2.1]octyl and piperazinyl.
  • the heterocyclic group may be substituted or unsubstituted.
  • “Spiroheterocyclyl” means a polycyclic group of 5 to 18 members, two or more cyclic structures, and a single ring sharing one atom with each other, and the ring contains one or more double bonds, but no a ring having a fully conjugated ⁇ -electron aromatic system in which one or more ring atoms are selected from nitrogen, oxygen or S(O)n (where n is selected from 0, 1 or 2) heteroatoms, the remaining ring atoms are carbon. It is preferably 6 to 14 members, more preferably 7 to 10 members.
  • the spiroheterocyclyl group is classified into a monospiroheterocyclic group, a dispiroheterocyclic group or a polyspirocyclic group according to the number of shared spiro atoms between the ring and the ring, and is preferably a monospiroheterocyclic group and a dispiroheterocyclic group.
  • a-member/b-membered monospiroheterocyclyl refers to a spiroheterocyclic group in which an a-monocyclic ring and a b-membered monocyclic ring share one atom with each other.
  • spiroheterocyclyl include, but are not limited to, 1,7-dioxaspiro[4.5]fluorenyl, 2-oxa-7-azaspiro[4.4]decyl, 7-oxo Heterospiro[3.5]decyl and 5-oxaspiro[2.4]heptyl.
  • “Fused heterocyclic group” means an all-carbon polycyclic group containing two or more cyclic structures that share a pair of atoms with each other, and one or more rings may contain one or more double bonds, but none of the rings have complete A conjugated ⁇ -electron aromatic system in which one or more ring atoms are selected from the group consisting of nitrogen, oxygen or a hetero atom of S(O) n (where n is selected from 0, 1 or 2) and the remaining ring atoms are carbon. It is preferably 6 to 14 members, more preferably 7 to 10 members.
  • bicyclic, tricyclic, tetracyclic or polycyclic fused heterocyclic group preferably a bicyclic or tricyclic ring, more preferably a 5-membered/5-membered or 5-membered/6-membered bicyclic fused heterocyclic group.
  • fused heterocyclic groups include, but are not limited to, octahydropyrrolo[3,4-c]pyrrolyl, octahydro-1H-isoindenyl, 3-azabicyclo[3.1. 0] hexyl, octahydrobenzo[b][1,4]dioxine.
  • “Bridge heterocyclyl” means 5 to 14 members, 5 to 18 members, containing two or more cyclic structures, sharing two polycyclic groups which are not directly connected to each other, and one or more rings may be used.
  • bicyclic, tricyclic, tetracyclic or polycyclic bridged heterocyclic group preferably a bicyclic ring, a tricyclic ring or a tetracyclic ring, and more preferably a bicyclic ring or a tricyclic ring.
  • fused heterocyclic groups include, but are not limited to, 2-azabicyclo[2.2.1]heptyl, 2-azabicyclo[2.2.2]octyl and 2-aza-di Ring [3.3.2] sulfhydryl.
  • the heterocyclyl ring may be fused to an aryl, heteroaryl or cycloalkyl ring wherein the ring to which the parent structure is attached is a heterocyclic group.
  • the heterocyclic group may be optionally substituted or unsubstituted.
  • Aryl means a carbocyclic aromatic system containing one or two rings wherein the rings may be joined together in a fused manner.
  • aryl includes aryl groups such as phenyl, naphthyl, tetrahydronaphthyl.
  • the aryl group is a C 6 -C 10 aryl group, more preferably the aryl group is a phenyl group and a naphthyl group, and most preferably a phenyl group.
  • the aryl group can be substituted or unsubstituted.
  • the "aryl” may be fused to a heteroaryl, heterocyclyl or cycloalkyl group, wherein the parent structure is attached to an aryl ring, non-limiting examples include, but are not limited to:
  • Heteroaryl means an aromatic 5 to 6 membered monocyclic or 9 to 10 membered bicyclic ring which may contain from 1 to 4 atoms selected from nitrogen, oxygen and/or sulfur.
  • heteroaryl include, but are not limited to, furyl, pyridyl, 2-oxo-1,2-dihydropyridyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, thienyl, isoxazolyl , oxazolyl, oxadiazolyl, imidazolyl, pyrrolyl, pyrazolyl, triazolyl, tetrazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, 1,2,3-thiadiazolyl, benzodiazepine Oxacyclopentenyl, benzimidazolyl, fluorenyl, isodecyl, 1,3-dioxo-isoindenyl, quinoly
  • Heteroaryl groups can be substituted or unsubstituted.
  • the heteroaryl ring can be fused to an aryl, heterocyclic or cycloalkyl ring wherein the ring to which the parent structure is attached is a heteroaryl ring, non-limiting examples include, but are not limited to:
  • Alkoxy means a group of (alkyl-O-). Among them, the alkyl group is defined in the relevant definition herein. Alkoxy groups of C 1 -C 6 are preferred. Examples thereof include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, tert-butoxy and the like.
  • Hydrophilicity refers to an -OH group.
  • Halogen means fluoro, chloro, bromo and iodo, preferably chloro, bromo and iodo.
  • Amino means -NH 2 .
  • Niro means -NO 2 .
  • Benzyl refers to -CH 2 - phenyl.
  • Carboxy refers to -C(O)OH.
  • Carboxylic acid ester group means -C(O)O(alkyl) or (cycloalkyl) wherein alkyl, cycloalkyl are as defined above.
  • Boc refers to a tert-butoxycarbonyl group.
  • N protecting group refers to a molecule containing two or more functional groups in organic synthesis. In order to protect -NH 2 or -NH- from the reaction, a certain reagent is used to protect it first. Remove the protective group. N protecting groups include, but are not limited to, tert-butoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl, formyl or trifluoroacetyl.
  • Substituted refers to one or more hydrogen atoms in the group, preferably up to 5, more preferably 1 to 3 hydrogen atoms in each other Independently substituted by the corresponding number of substituents. It goes without saying that the substituents are only in their possible chemical positions, and those skilled in the art will be able to determine (by experiment or theory) substitutions that may or may not be possible without undue effort. For example, an amino group or a hydroxyl group having a free hydrogen may be unstable when combined with a carbon atom having an unsaturated (e.g., olefinic) bond.
  • substituted or “substituted”, unless otherwise indicated, means that the group may be substituted by one or more groups selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy.
  • R 7 , R 8 and R 9 are each independently selected from a hydrogen atom, an alkyl group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group or a heteroaryl group, wherein the alkyl group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group Or a heteroaryl group optionally further selected from one or more selected from the group consisting of hydroxyl, halogen, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, -NR 10 R 11, -C (O) NR 10 R 11, -C (O) R 12, -C (O) oR 12 or -NR 10 C (O) R 11 group substituted with a substituent;
  • R 7 and R 8 together with the N atom to which they are attached form a 4 to 8 membered heterocyclic group, wherein the 4 to 8 membered heterocyclic ring contains one or more N, O, S(O) n atoms, and 4
  • R 10 , R 11 and R 12 are each independently selected from a hydrogen atom, an alkyl group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group or a heteroaryl group, wherein the alkyl group, a cycloalkyl group, a heterocyclic group, an aryl group Or a heteroaryl group optionally further selected from one or more selected from the group consisting of hydroxyl, halogen, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, heteroaryl, carboxylic acid or carboxy Substituted by a substituent of the acid ester.
  • “Pharmaceutically acceptable salt” refers to certain salts of the above compounds which retain their original biological activity and are suitable for pharmaceutical use.
  • the pharmaceutically acceptable salt of the compound represented by the formula (I) may be a metal salt, an amine salt formed with a suitable acid, a metal salt preferably an alkali metal or an alkaline earth metal salt, and a suitable acid including an inorganic acid and an organic acid such as acetic acid.
  • benzenesulfonic acid benzoic acid, camphorsulfonic acid, citric acid, ethanesulfonic acid, fumaric acid, gluconic acid, glutamic acid, hydrobromic acid, hydrochloric acid, isethionic acid, lactic acid, malic acid, maleic acid , mandelic acid, methanesulfonic acid, nitric acid, phosphoric acid, succinic acid, sulfuric acid, tartaric acid, p-toluenesulfonic acid, and the like.
  • Particularly preferred are hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid and sulfuric acid, and most preferred is the hydrochloride salt.
  • “Pharmaceutical composition” means a mixture comprising one or more of the compounds described herein, or a physiologically pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof, and other chemical components, as well as other components such as physiologically pharmaceutically acceptable carriers and Shape agent.
  • the purpose of the pharmaceutical composition is to promote the administration of the organism, which facilitates the absorption of the active ingredient and thereby exerts biological activity.
  • the preparation method of the compound of the formula (I) or a salt thereof of the present invention comprises the following steps:
  • the compound of the formula (Ia) and the compound of the formula (Ib) are subjected to a Buchwald reaction, preferably at 4,5-bisdiphenylphosphino-9,9-dimethyloxaxime, palladium catalyzed tris(dibenzylideneacetone)
  • R a and R b are each independently selected from N protecting groups, preferably phenylsulfonyl, benzyloxycarbonyl, formyl, trifluoroacetyl and tert-butoxycarbonyl; more preferably phenylsulfonyl and tert-butoxycarbonyl ;
  • X is a halogen
  • R 3 when R 3 contains -NH 2 or -NH-, -NH 2 or -NH- may optionally be protected by an N protecting group; the N protecting group is preferably -C(O) R 9 is more preferably a tert-butoxycarbonyl group;
  • R 1 to R 6 , R 9 and m are as defined in the formula (I).
  • Example 1 is a graph showing changes in mean tumor volume of liver cancer Huh7 tumor-bearing BALB/c nude mice xenografts of Example 108 of WO2015057938 and Example 5 of the present invention in Test Example 3.
  • Figure 2 is a graph showing the mean relative tumor volume changes of the liver cancer Huh7 tumor-bearing BALB/c nude mice xenografts in Example 108 of WO2015057938 and the compound of Example 5 of the present invention in Test Example 3.
  • Fig. 3 is a graph showing changes in body weight of liver cancer Huh7 tumor-bearing BALB/c nude mice in Example 108 of WO2015057938 and Test Example 5 in Test Example 3.
  • Mass spectrometry was measured by LC/MS, and the ionization method was ESI or APCI.
  • Thin layer chromatography silica gel plate uses Yantai Yellow Sea HSGF254 or Qingdao GF254 silica gel plate.
  • the specification of silica gel plate used for thin layer chromatography (TLC) is 0.15mm ⁇ 0.2mm.
  • the specification for thin layer chromatography separation and purification is 0.4mm. ⁇ 0.5mm.
  • CD 3 OD Deuterated methanol.
  • the argon atmosphere means that the reaction flask is connected to an argon balloon having a volume of about 1 L.
  • the solution in the reaction means an aqueous solution.
  • eluent system selected from the group consisting of: A: petroleum ether and ethyl acetate systems; B: dichloromethane and methanol systems;
  • A petroleum ether and ethyl acetate systems
  • B dichloromethane and methanol systems
  • the volume ratio varies depending on the polarity of the compound, and a small amount of an acidic or alkaline reagent such as acetic acid or triethylamine may be added.
  • 6-Chloro-N-methylpyrimidin-4-amine 1e (300 mg, 2.09 mmol) was dissolved in 10 mL of N,N-dimethylformamide, cooled to 0 ° C, then added 60% sodium hydride (167 mg, 4.18 mmol) ), stirring at room temperature for 30 minutes.
  • 2,4-Dichloro-3-isocyano-1,5-methoxy-4-methylbenzene 1d (674 mg, 2.72 mmol) was dissolved in 5 mL of N,N-dimethylformamide and added dropwise The reaction solution was allowed to react at room temperature for 0.5 hour. 50 mL of water was added to the reaction mixture, and a white solid was precipitated.
  • tert-Butyl 2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylate 1 h (440 mg, 1.94 mmol), tert-butyl (4-bromo-2-nitrophenyl)carbamate 1c (616 mg) , 1.94 mmol), 4,5-bisdiphenylphosphino-9,9-dimethyloxaxan (229 mg, 0.388 mmol), tris(dibenzylideneacetone)dipalladium (352 mg, 0.388 mmol) and carbonic acid
  • the hydrazine (1.90 g, 5.83 mmol) was dissolved in 15 mL of toluene and reacted at 115 ° C for 4 hours under argon atmosphere.
  • reaction mixture was cooled to room temperature, filtered, and evaporated, evaporated, mjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjj --3-(2,6-Dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)-1-methylureido)pyrimidin-4-yl)amino)-3-nitrophenyl)-2, 7-Diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylic acid tert-butyl ester 1k (427 mg, red solid), yield: 63.3%.
  • reaction mixture was filtered and concentrated under reduced vacuolululululululululululululululululululu 3-(tert-Butoxycarbonyl)-3-(2,6-dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)-1-methylureido)pyrimidin-4-yl)amino)phenyl) -2,7-diazaspiro[3.5]decane-7-carboxylic acid tert-butyl ester 1 m (300 mg, red solid), yield: 62.0%.
  • reaction mixture was cooled to room temperature, filtered, and evaporated, evaporated, evaporated, mjjjjjjjjj -Nitrophenyl)-4,7-azaspiro[2.5]octane-4-carboxylic acid tert-butyl ester 2b (240 mg, red solid), yield: 17.0%.
  • tert-Butyl 2,8-diazaspiro[4.5]decane-8-carboxylate 3a 500 mg, 2.08 mmol
  • tert-butyl (4-bromo-2-nitrophenyl)carbamate 1c 660 mg
  • 4,5-bisdiphenylphosphino-9,9-dimethyloxaxan 230 mg, 0.42 mmol
  • tris(dibenzylideneacetone)dipalladium 380 mg, 0.42 mmol
  • carbonic acid Rhodium (2.03 g, 6.24 mmol) was dissolved in 20 mL of toluene and reacted at 120 ° C for 4 hours.
  • reaction mixture was cooled to room temperature, filtered, and evaporated, evaporated, mjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjj --3-(2,6-Dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)-1-methylureido)pyrimidin-4-yl)amino)-3-nitrophenyl)-2, 8-Diazaspiro[4.5]decane-8-carboxylic acid tert-butyl ester 3d (80 mg, red solid), yield: 27.1%.
  • 2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylic acid benzyl ester 4b (2.3 g, 8.83 mmol) was dissolved in 20 mL of methanol, and 10 mL of acetaldehyde, acetic acid (1.50 g, 26.5 mmol) and cyanide were added. Sodium borohydride (2.22 g, 35.34 mmol) was reacted at room temperature for 12 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. EtOAc (EtOAc m.
  • reaction mixture was concentrated under reduced pressure and purified residue purified eluted elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut -3,5-dimethoxy-phenyl)carbamoyl]-methyl-amino]pyrimidin-4-yl]-N-[4-(7-ethyl-2,7-diazaspiro[ 3.5]decane-2-yl)-2-(prop-2-enoylamin
  • 4-Bromo-2-nitroaniline 1a (6.00 g, 27.65 mmol) was dissolved in 45 mL of acetic acid, acetic anhydride (2.85 mL, 30.41 mmol) was added, and the mixture was heated to 100 ° C for 5 hours. 100 mL of water was added to the reaction mixture, and a solid was precipitated. The mixture was filtered, and the filter cake was dissolved with 50 mL of dichloromethane. The organic phase was washed with water (20 mL ⁇ 2), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and evaporated 4-Bromo-2-nitrophenyl)acetamide 5a (6.60 g, yellow solid), yield: 92.1%.
  • N-(4-bromo-2-nitrophenyl)acetamide 5a (1.00 g, 3.86 mmol), 4,7-azaspiro[2.5]octane-4-carboxylic acid tert-butyl ester 2a (820 mg, 3.86 mmol), 4,5-bisdiphenylphosphino-9,9-dimethyloxaxan (450 mg, 0.772 mmol), tris(dibenzylideneacetone)dipalladium (350 mg, 0.386 mmol) and cesium carbonate (3.77 g, 11.6 mmol) was dissolved in 50 mL of toluene and reacted at 115 ° C for 4 hours under argon atmosphere.
  • reaction mixture was cooled to room temperature, filtered, and evaporated, evaporated, mjjjjjjjj , 7-Azaspiro[2.5]octane-4-carboxylic acid tert-butyl ester 5b (920 mg, red solid), yield: 61.3%.
  • the reaction was carried out at 115 ° C for 4 hours under argon gas protection.
  • the reaction solution was cooled to room temperature, filtered, and evaporated, evaporated, evaporated, mjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjj -dimethoxy-phenyl)-N-[[6-[4-(8-ethyl-5,8-diazaspiro[2.5]octane-5-yl)-2-nitroaniline] Pyrimidin-4-yl]-methyl-carbamoyl]carbamic acid 5f (800 mg, red solid), yield: 53.7%.
  • reaction mixture was filtered and concentrated under reduced vacuolulululululululululululululululululululu 4-(8-ethyl-5,8-diazaspiro[2.5]octane-5-yl)aniline]pyrimidin-4-yl]methyl-carbamoyl]-N-(2,6- Dichloro-3,5-dimethoxy-phenyl)carbamic acid 5h (600 mg, yellow solid), yield: 73.2%.
  • EtOAc EtOAc m. Purification by thin layer chromatography (eluent: B system) to give N-(2-((6-(3-(2,6-dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)-1-) Methylurea)pyrimidin-4-yl)amino)-5-(4-ethyl -4,7-diazaspiro[2.5]octane-7-yl)phenyl)acrylamide 5 (100 mg, white solid), yield: 29.7%.
  • N-(4-Bromo-2-nitrophenyl)acetamide 5a (550 mg, 2.12 mmol), 2,7-azaspiro[4.4]nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester 6a (460.5 mg, 2.12 mmol), 4,5-bisdiphenylphosphino-9,9-dimethyloxaxan (246 mg, 0.425 mmol), tris(dibenzylideneacetone)dipalladium (194 mg, 0.212 mmol) and cesium carbonate (2.08g, 6.37mmol) dissolved in 20mL of toluene, argon The reaction was carried out at 115 ° C for 4 hours under protection.
  • reaction mixture was cooled to room temperature, filtered, and evaporated tolululululululululululululululululululululululu 2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-carboxylic acid tert-butyl ester 6b (490 mg, red solid), yield: 57.1%.
  • N-(4-(7-ethyl-2,7-azaspiro[4.4]octane-2-yl)-2-nitrophenyl)acetamide 6d (401 mg, 2.20 mmol) was dissolved in 20 mL of ethanol 4 mL of potassium hydroxide (271 mg, 4.83 mmol) was added, and the mixture was heated to 90 ° C for 4 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. EtOAc (EtOAc m.
  • reaction mixture was concentrated under reduced pressure and purified residue purified eluting elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut elut Chloro-3,5-dimethoxy-phenyl)carbamoyl]methyl-amino]pyrimidin-4-yl]-N-[4-(3-ethyl-3,8-diazaspiro[ 4.4] ⁇ -8-yl)-2-nitro-phenyl]carbamic acid 6 g (410 mg, yellow solid), yield: 90.5%.
  • reaction mixture was filtered and concentrated under reduced vacuolulululululululululululululululululululu 4-(3-ethyl-3,8-diazaspiro[4.4]decane-8-yl)aniline]pyrimidin-4-yl]-methyl-carbamoyl]-N-(2,6 -Dichloro-3,5-dimethoxy-phenyl)carbamic acid 6h (310 mg, red solid), yield: 71.4%.
  • N-(4-bromo-2-nitrophenyl)acetamide 5a (14.17 g, 49.72 mmol), N,N-dimethylpiperidin-4-amine dihydrochloride 7a (10.00). g, 54.69 mmol), 4,5-bisdiphenylphosphino-9,9-dimethyloxaxan (11.5 g, 19.88 mmol), tris(dibenzylideneacetone)dipalladium (9.1 g, 9.94 mmol) And cesium carbonate (48.40 g, 148.6 mmol) were dissolved in 150 mL of toluene and heated to reflux for 4 hours.
  • N-(2,6-Dichloro-3,5-dimethoxy-phenyl)-N-[[6-[4-[4-(dimethylamino)-1-piperidinyl]- 2-Nitro-anilino]-methyl-carbamoyl]carbamic acid tert-butyl ester 7d 400 mg, 0.536 mmol was dissolved in 20 mL of tetrahydrofuran, di-tert-butyl dicarbonate (242.63 mg, 1.11 mmol) and 4 -Dimethylaminopyridine (20.37 mg, 0.167 mmol), and the reaction mixture was heated to 75 ° C for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure.
  • reaction mixture was filtered and concentrated under reduced vacuolulululululululululululululululululululululu [4-(Dimethylamino)-1-piperidinyl]anilino]pyrimidin-4-yl]methylcarbamoyl]-N-2,6-dichloro-3,5-dimethoxy- tert-Butyl phenyl)carbamate 7f (202 mg, yellow solid), yield: 65.1%.
  • reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified mjjjjjjjjj -[4-(Dimethylamino)-1-piperidinyl]anilino]pyrimidin-4-yl]methylcarbamoyl]-N-2,6-dichloro-3,5-dimethoxy 4-phenyl)carbamic acid tert-butyl ester 7 g (162 mg, pale yellow solid), yield: 80.6%.
  • EtOAc EtOAc m.
  • N-(4-bromo-2-nitrophenyl)acetamide 5a (1.00 g, 3.86 mmol), 1-cyclopropylpiperazine 8a (483.26 mg, 3.86 mmol), 4,5 under argon - bisdiphenylphosphino-9,9-dimethyloxaxan (446.71 mg, 0.772 mmol), tris(dibenzylideneacetone)dipalladium (353.48 mg, 0.386 mmol) and cesium carbonate (2.52 g, 7.72) Methyl) was dissolved in 10 mL of toluene and heated to 120 ° C for 4 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and concentrated under reduced pressure. EtOAcjjjjjjj 2-Nitrophenyl)acetamide 8b (500 mg, red solid), yield: 42.7%.
  • reaction mixture was concentrated under reduced pressure and purified residue purified mjjjjlilililililililili Piperazin-1-yl)-2-nitro-anilino]pyrimidin-4-yl]-methyl-carbamoyl]-N-2,6-dichloro-3,5-dimethoxy-benzene Tert-butyl carbamate 8e (655 mg, orange-yellow solid), yield: 93.9%.
  • reaction mixture was filtered and concentrated under reduced vacuoielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielielie
  • Piperidin-4-one hydrochloride 9a (5.0 g, 36.8 mmol) was dissolved in 100 mL of tetrahydrofuran, triethylamine (7.7 mL, 55.2 mmol) was added, stirred for 5 min, and di-tert-butyl dicarbonate (9.6 g) was added. 44.2 mmol) and 4-dimethylaminopyridine (225 mg, 1.84 mmol) were reacted at room temperature for 12 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. EtOAc (EtOAc)EtOAc. Concentration under reduced pressure gave 4-oxopiperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester 9b (6.7 g, m. 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) ⁇ 3.71-3.74 (m, 4H), 2.43-2.46 (m, 4H), 1.50 (s, 9H)
  • 4-terpiperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester 9b (12.0 g, 60.2 mmol) was dissolved in 40 mL of ethanol, 40 mL of glacial acetic acid and cyclopropylamine 9c (4.2 mL, 60.2 mmol) were added and stirred for 0.5 hr.
  • Sodium borohydride (7.56 g, 120.4 mmol) was reacted at room temperature for 2 hours.
  • the reaction mixture was concentrated under reduced pressure.
  • EtOAc EtOAc m. Filtration and concentration under reduced pressure gave 4-(cyclopropylamino)piperidine-l-carboxylic acid tert-butyl ester 9d (11.1 g, colorless liquid), yield: 77.1%.
  • N-(4-bromo-2-nitrophenyl)acetamide 5a (6.18 g, 23.8 mmol), N-cyclopropyl-N-methylpiperidin-4-amine 9f (3.35) under argon g, 21.7 mmol), 4,5-bisdiphenylphosphino-9,9-dimethyloxaxan (2.51 g, 4.34 mmol), tris(dibenzylideneacetone)dipalladium (3.97 g, 4.34 mmol) And cesium carbonate (21.2 g, 65.1 mmol) were dissolved in 100 mL of toluene and heated to 110 ° C for 4 hours.
  • N-(4-(4-(cyclopropyl(methyl)amino)piperidin-1-yl)-2-nitrophenyl)acetamide 9 g (5.0 g, 15.0 mmol) and potassium hydroxide (8.4) g, 150.0 mmol) was dissolved in 320 mL of a mixed solution of water and ethanol (V/V 1/15), and heated to 90 ° C for 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. EtOAc (EtOAc m.
  • Test Example 1 Determination of FGFR kinase activity by the compound of the present invention
  • the following method was used to determine the degree of inhibition of the kinase activity of recombinant human FGFR protein by the compounds of the invention under in vitro conditions.
  • This method uses the company of Cisbio Tyrosine Kinase Kit (Cat. No. 62TK0PEB), which is based on time-resolved fluorescence energy resonance transfer (TF-FRET), which reflects compound phosphorylation by measuring the degree of phosphorylation of FGFR protein-mediated biotinylated peptide substrates.
  • TF-FRET time-resolved fluorescence energy resonance transfer
  • the inhibition of FGFR kinase activity is strong and weak.
  • Recombinant human FGFR protein was purchased from Carna bioscience (Japan, article number FGFR1#08-133, FGFR2#08-134, FGFR3#08-135, FGFR4#08-136).
  • the experimental procedure is briefly described as follows: The test compound is first dissolved in DMSO to prepare a stock solution, and then serially diluted with a buffer provided in the kit, and the final concentration of the test compound in the reaction system ranges from 10 ⁇ M to 0.1 nM.
  • the concentration of the ATP solution (Biotech Engineering (Shanghai) Co., Ltd., A600311) used in the test is the ATP Km concentration corresponding to each FGFR subtype measured in advance, and the ATP Km concentration corresponding to FGFR1 to 4 is 100 ⁇ M, respectively. 40 ⁇ M, 40 ⁇ M and 120 ⁇ M.
  • the reaction is carried out in a 384-well microplate, first adding the compound and a certain amount of FGFR protein to the well, and incubating at room temperature for 5-30 minutes, then adding the ATP solution and the biotinylated polypeptide substrate solution to the reaction solution. And incubate for 50 minutes with shaking at room temperature. Subsequently, an anti-phosphotyrosine antibody conjugated with a lanthanide compound and streptavidin conjugated with modified allophycocyanin XL665 were added to the reaction, and incubation was continued for 1 hour at room temperature with shaking.
  • the fluorescence intensity values of the respective wells at an excitation wavelength of 304 nm and emission wavelengths of 620 nM and 665 nM were measured in a TF-FRET mode on a microplate reader.
  • the percentage inhibition of the compound at each concentration was calculated by comparison with the fluorescence intensity ratio of the control group (0.1% DMSO), and the nonlinear regression analysis was performed on the value-inhibition rate of the compound concentration by GraphPad Prism 5 software, or the compound was obtained.
  • IC 50 values see Table 1.
  • the compounds of the present invention have a better inhibitory effect on FGFR4, and the selectivity is superior to FGFR1, FGFR2 and FGFR3, and the inhibitory activity of the compound of the present invention against FGFR4 is superior to that of the compound of Example 108 of WO2015057938 (which is Example 108 of WO2015057938 was prepared and identified).
  • Test Example 2 Determination of Huh7 activity of liver cancer cells by the compound of the present invention
  • liver cancer cells Huh7 purchased from the Cell Resource Center of Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences
  • Huh7 cells were cultured in 10% fetal bovine serum, 100 U penicillin and 100 ⁇ g/mL streptavidin.
  • DMEM medium 10% fetal bovine serum, 100 U penicillin and 100 ⁇ g/mL streptavidin.
  • Liver cancer cell activity was measured by using Cell Counting Kit-8 kit (Dojindo, Toray Chemical Technology).
  • test compound is first dissolved in DMSO to prepare a stock solution, and then serially diluted with the corresponding medium of the cells to prepare a test sample, and the final concentration of the compound is in the range of 30 ⁇ M. -0.01 nM.
  • Tumor cells in the logarithmic growth phase were seeded at a suitable density into 96-well cell culture plates, and after overnight at 37 ° C in a 5% CO 2 incubator, the test compound samples were added and the cells were further cultured for 72 hours.
  • the compound of the present invention has a significant proliferation inhibitory effect on FGFR4 abnormal liver cancer cells, and is excellent.
  • Test Example 3 Test of the growth inhibitory effect of the compound of the present invention on human liver cancer Huh7 tumor-bearing BALB/c nude mice xenografts
  • Huh7 cells were cultured in DMEM medium containing 10% fetal bovine serum, 100 U penicillin, and 100 ⁇ g/mL streptomycin. Culture in a 37 ° C, 5% CO 2 incubator. Logarithmic growth phase cells were taken before inoculation, washed with PBS (Phosphate Buffered Saline, phosphate buffer) after 0.25% trypsin digestion, and the cells were resuspended in serum-free medium to adjust the cell concentration to 3.3 ⁇ 10 7 cells. /mL (1:1 Matrigel, PBS).
  • PBS Phosphate Buffered Saline, phosphate buffer
  • mice were aseptically inoculated with 150 ⁇ L of cell suspension (5.0 ⁇ 10 6 cells/mouse) under the right axilla.
  • cell suspension 5.0 ⁇ 10 6 cells/mouse
  • Group 9 mice with similar tumor volume and good shape are selected (the shape is as single a sphere as possible, no irregular shape or multiple tumors are gathered together)
  • Group 9 was divided into 5 groups.
  • Each group of animals was given a test substance once a day according to the body weight of the animal twice a day (bid), intraperitoneal injection (ip) or oral administration (po), on the day of grouping (day 13 after inoculation), the first One dose was administered for 22 consecutive days and the body weight of the animals per day was recorded.
  • Group 1 solvent control group, intraperitoneal administration of blank administration preparation, bid, administration volume: 10 mL/kg; Group 2, intraperitoneal injection of compound 108 of WO2015057938, administered at a dose of 25 mg/kg per day Two times (bid); Groups 3 and 4, the compound of Example 5 was administered by intraperitoneal injection at a dose of 25 mg/kg and 50 mg/kg, respectively; bid; Group 5, the compound of Example 5 was administered by intragastric administration. The dose was 300 mg/kg, bid.
  • the formation of tumors at the inoculation site of each group of animals was observed.
  • the long diameter (Y) and short diameter (X) of the tumor nodules were measured twice a week using vernier calipers and calculated according to the following formula:
  • V (X 2 Y)/2.
  • Evaluation index of antitumor activity tumor growth inhibition rate TGI (%), relative tumor growth rate T/C (%).
  • the relative tumor volume (RTV) is calculated as:
  • TV initial is the tumor volume measured at the time of group administration
  • TV t is the tumor volume at each measurement during administration.
  • the relative tumor growth rate (%T/C) is calculated as:
  • RTV T represents the treatment group RTV
  • RTV C represents the solvent control group RTV.
  • the formula for calculating the tumor growth inhibition rate TGI (%) is:
  • TGI 100% ⁇ [1-(TV t(T) -TV initial(T) )/(TV t(C) -TV initial(C) )]
  • TV t(T) represents the tumor volume measured by the treatment group at each time
  • TV initial (T) represents the tumor volume of the treatment group at the time of group administration
  • TV t (C) represents the tumor volume measured by the solvent control group at each time
  • TV Initial (C) indicates the tumor volume of the solvent control group at the time of group administration.
  • the formula for calculating the tumor weight inhibition rate IR (%) is:
  • W C represents the tumor weight of the control group
  • W T represents the tumor weight of the treatment group
  • Animal weight loss rate 100% ⁇ (BW initial - BW t ) / BW initial
  • BW t represents the body weight of the animal measured each time during administration
  • BW initial represents the body weight of the animal at the time of group administration.
  • Fig. 1 The average tumor volume change of the compound of Example 108 of WO2015057938 and the compound of Example 5 of the present invention for transplanted tumor of liver cancer Huh7 tumor-bearing BALB/c nude mice is shown in Fig. 1;
  • Fig. 2 The average relative tumor volume change of the compound of Example 108 of WO2015057938 and the compound of Example 5 of the present invention for liver cancer Huh7 tumor-bearing BALB/c nude mice is shown in Fig. 2.
  • TGI% Growth inhibition rate of the compound of the present invention on liver cancer cell Huh7 tumor-bearing BALB/c nude mice xenografts
  • Example 5 of the present invention was at 22 doses at 25 mg/kg (IP, bid), 50 mg/kg (IP, bid) and 300 mg/kg (PO, bid).
  • IP, bid 25 mg/kg
  • IP, bid 50 mg/kg
  • PO, bid 300 mg/kg
  • the tumor model based on Huh-7 cells was established to have a significant growth inhibition effect, and no significant weight change.
  • the activity of Example 5 was superior to the compound of Example 108 of WO2015057938 at an IP dose of 25 mg.

Abstract

本发明涉及嘧啶类衍生物及其制备方法和医药用途。具体而言，本发明涉及一种通式(I)所示的嘧啶类衍生物、其制备方法及其可药用的盐，以及它们作为治疗剂，特别是作为FGFR4激酶抑制剂的用途，其中通式(I)中的各取代基的定义与说明书中的定义相同。

Description

嘧啶类衍生物、其制备方法和其在医药上的用途 发明领域
本发明涉及一种新的嘧啶类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂特别是作为FGFR4抑制剂的用途。
发明背景
成纤维细胞生长因子受体(FGFR)家族是由四个成员(FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4)组成，其属于受体酪氨酸激酶家族的激酶，FGF结合导致FGFR二聚化，随后为受体自体磷酸化和下游信号通路的激活。受体活化足以复元和活化参与如细胞生长、细胞新陈代谢和细胞存活的多元化过程调控的特定下游信号伙伴。因此，在对于肿瘤细胞增殖、迁移、浸润、血管形成、细胞关键性的许多生物过程中，FGF/FGFR信号通路具有多效应作用。FGFR家族的四个成员在其配体亲和力及组织分布方面彼此不同。FGFR-4基因的基因组结构含有18个外显子。
人类FGF19基因位于11q13.1，FGFR4与其配体FGF19特异性结合抑制细胞凋亡和NF-kB信号，并且上调细胞增殖相关基因的表达；FGFR4的激活在TNF-α处理的细胞中可以导致Ikkβ活性的下降，伴随NF-kB在细胞中分布的减少并且减弱细胞凋亡效应。四种FGFR基因在人体肝脏中均有表达，但成熟肝实质细胞(Hepatpcyte)仅大量表达FGFR4。FGFR4与其配体结合还可以对胆汁酸的代谢有调控作用，机体中胆固醇向胆汁酸转化的平衡与机体多种正常生理功能有密切的关系，这一平衡的破坏会引起机体多种疾病如脂肪肝和动脉硬化等心脑血管疾病，因此FGFR4和FGF19相互作用成为高脂血症等降胆固醇药物的新的靶标。
近年来，越来越多的证据表明，在多种类型的癌症中有FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4的基因扩增突变。大量的证据表明：FGFR1在乳腺癌、非小细胞性肺癌和成胶质细胞瘤中有基因突变，在急性骨髓性白血病中有由基因转座导致的融合蛋白形成，在胰腺癌、膀胱癌、前列腺癌、食道癌中有过量表达；FGFR2在胃癌、乳腺癌和子宫癌中有基因突变和扩增的现象，同时在前列腺癌、食道癌、卵巢癌、胰腺癌、脑瘤、大肠癌中有过量表达；FGFR3在多发性骨髓瘤和膀胱癌中有基因突变，在卵巢癌、非小细胞性肺癌、肝细胞癌中有过量表达；FGFR4在肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝癌和胆管癌等中有突变和过量表达，在甲状腺癌、卵巢癌等中也有过量的表达(French et al.2012PLos ONE 7(5)：e367313；Sia et al.2013 Gastroejterology 144：829-840)。
目前已经公开了一系列的FGFR抑制剂专利，但对于FGFR4选择性抑制的专利公开较少，对于FGFR4选择性的抑制剂，相对于FGFR抑制剂具有毒性小的优势(Brown,AP et al(2005),Toxocol.Pathol.,449-455)。目前处于临床的FGFR4抑制剂，包括FGF-401(诺华，临床II期)、BLU-554(Blueprint，临床I期)和H3B6527(卫材，临床I期)。FGFR4选择性抑制的专利包括WO2015059668、WO2015057938和WO2015057963等，目前对于FGFR4抑制剂对于抗肝癌等肿瘤的研究是远远不够的，仍有必要研究和开发新的FGFR4抑制剂。
发明内容
本发明的目的之一在于公开了一类新的嘧啶类衍生物及其药学上的盐。
本发明提供一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure PCTCN2017085135-appb-000001
Figure PCTCN2017085135-appb-000002
其中：
R1各自独立地选自烷基、卤素、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-NR7R8、-C(O)NR7R8、-C(O)R9、-C(O)OR9或-NR7C(O)R8，其中所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-NR7R8、-C(O)NR7R8、-C(O)R9、-C(O)OR9或-NR7C(O)R8的取代基所取代；
R2选自如下基团：
-NR4C(O)CR5＝CHR6或-NR4C(O)C≡CR5；
R3选自螺杂环基，其中所述的螺杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、卤代烷氧基、-NR7R8、-C(O)NR7R8、-C(O)R9、-C(O)OR9或-NR7C(O)R8的取代基所取代；或者
R3选自单环杂环基，其中所述的单环杂环基进一步被一个或多个选自环烷基或-NR7R8的取代基所取代；
R4各自独立地选自氢原子或烷基，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、卤代烷氧基、-NR7R8、-C(O)NR7R8、-C(O)R9、-C(O)OR9或-NR7C(O)R8的取代基所取代；
R5和R6各自独立地选自氢原子、烷基或卤素，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、卤代烷氧基、-NR7R8、-C(O)NR7R8、-C(O)R9、-C(O)OR9或-NR7C(O)R8的取代基所取代；
R7、R8和R9各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-NR10R11、-C(O)NR10R11、-C(O)R12、-C(O)OR12或-NR10C(O)R11的取代基所取代；
或者，R7和R8与相连接的N原子一起形成一个4～8元杂环基，其中4～8元杂环内含有一个或多个N、O、S(O)n原子，并且4～8元杂环上进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-NR10R11、-C(O)NR10R11、-C(O)R12、-C(O)OR12或-NR10C(O)R11的取代基所取代；
R10、R11和R12各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；
m为1、2、3或4；且
n为0、1或2。
本发明的优选方案，一种通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R3选自螺杂环基，其中所述的螺杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、卤代烷氧基、-NR7R8、-C(O)NR7R8、-C(O)R9、-C(O)OR9或-NR7C(O)R8的取代基所取代，R7、R8和R9的定义如通式(I)中所述。
本发明的优选方案，一种通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure PCTCN2017085135-appb-000003
其中：R1～R3和m的定义如通式(I)中所述。
本发明的优选方案，一种通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R1选自卤素或烷氧基，优选为氯或甲氧基。
本发明的优选方案，一种通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R2选自-NHC(O)CH＝CH2。
本发明的优选方案，一种通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R3选自单螺杂环基，优选为3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基，其中所述的单螺杂环基任选进一步被烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基的取代基所取代。
本发明的优选方案，一种通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R2选自-NHC(O)CH＝CH2，R3选自3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基，其中所述的单螺杂环基任选进一步被烷基所取代，所述烷基优选为甲基或乙基。
本发明的优选方案，一种通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R2选自-NHC(O)CH＝CH2，R3选自：
Figure PCTCN2017085135-appb-000004
R13各自独立地选自氢原子、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，优选为氢原子或烷基，所述烷基优选为乙基。
本发明的优选方案，一种通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R2选自-NHC(O)CH＝CH2；R3选自4元～6元单环杂环基，优选为哌啶基或哌嗪基，其中所述的哌啶基或哌嗪基进一步被一个或多个选自环烷基或-NR7R8的取代基所取代，其中R7和R8的定义如通式(I)中所述。
进一步，本发明的优选方案，一种通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R2选自-NHC(O)CH＝CH2；R3选自4元～6元单环杂环基，优选为哌啶基或哌嗪基，其中所述的哌啶基或哌嗪基进一步被一个或多个选自C3-8的环烷基或-NR7R8的取代基所取代，其中，所述C3-8的环烷基优选为环丙基，所述R7和R8各自独立地优选为氢原子或烷基，所述烷基优选为甲基。
本发明的典型化合物包括，但不限于：
Figure PCTCN2017085135-appb-000005
Figure PCTCN2017085135-appb-000006
Figure PCTCN2017085135-appb-000007
或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐。
进一步，本发明提供一种通式(I)化合物的制备方法，该方法包括：
Figure PCTCN2017085135-appb-000008
通式(Ie)化合物与酰卤化合物，优选为X-C(O)CR5＝CHR6或X-C(O)C≡CR5反应，进一步脱去氨基保护基Ra得到通式(If)化合物；
其中：当R3中含有-NH2或-NH-时，-NH2或-NH-任选可以被N保护基团保护；所述N保护基团优选为-C(O)R9，更优选为叔丁氧基羰基；
Figure PCTCN2017085135-appb-000009
通式(If)化合物进一步脱去氨基保护基Rb得到通式(I)化合物；
Figure PCTCN2017085135-appb-000010
其中：
Ra和Rb各自独立选自N保护基，优选为苯磺酰基、苄基氧羰基、甲酰基、三氟乙酰基和叔丁氧基羰基；更优选为苯磺酰基和叔丁氧基羰基；
X为卤素；
R1～R6、R9和m的定义如通式(I)中所述。
更进一步，本发明提供一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，及可药用的载体、赋形剂或它们的组合。
本发明提供一种抑制FGFR4的方法，该方法包括将所述的受体与通式(I)或(II)任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物相接触。
本发明提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备FGFR4抑制剂的药物中的用途。
本发明提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗FGFR4过渡表达的疾病的药物中的用途。
本发明提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗FGF19扩增的疾病的药物中的用途。
本发明提供一种通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗癌症药物中的用途，其中所述的癌症选自非小细胞肺癌、胃癌、多发性骨髓瘤、肝癌、胆管癌，优选为肝癌和胆管癌。
本发明提供一种治疗癌症的方法，该方法包括给予需要治疗的患者有效剂量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物，其中所述的癌症选自非小细胞肺癌、胃癌、多发性骨髓瘤、肝癌、胆管癌，优选为肝癌和胆管癌。
本发明提供一种治疗FGFR4过渡表达的疾病的方法，该方法包括给予需要治疗的患者有效剂量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物。
本发明提供一种治疗FGF19扩增的疾病的方法，该方法包括给予需要治疗的患者有效剂量的通式(I)或(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物。
发明的详细说明
除非有相反陈述，否则本发明在说明书和权利要求书中所使用的部分术语定义如下：
“烷基”当作一基团或一基团的一部分时是指包括C1-C20直链或者带有支链的脂肪烃基团。优选为C1-C10烷基，更优选为C1-C6烷基。烷基基团的实施例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代或未取代的。
“环烷基”是指饱和或部分饱和的单环、稠环、桥环和螺环的碳环。优选为C3-C12环烷基，更优选为C3-C8环烷基，最优选为C3-C6环烷基。单环环烷基的实施例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等，优选环丙基、环己烯基。
“螺环烷基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺、双螺或多螺环烷基，优选为单螺和双螺环烷基，优选为4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元。“螺环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：螺[4.5]癸基、螺[4.4]壬基、螺[3.5]壬基、螺[2.4]庚基。
“稠环烷基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构彼此公用一对碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。“稠环烷基” 的非限制性实施例包括但不限于：二环[3.1.0]己基、二环[3.2.0]庚-1-烯基、二环[3.2.0]庚基、十氢化萘基或十四氢菲基。
“桥环烷基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。“桥环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：(1s,4s)-二环[2.2.1]庚基、二环[3.2.1]辛基、(1s,5s)-二环o[3.3.1]壬基、二环[2.2.2]辛基、(1r,5r)-二环[3.3.2]癸基。
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实施例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或未取代的。
“杂环基”、“杂环”或“杂环的”在本申请中可交换使用，都是指非芳香性杂环基，其中一个或多个成环的原子是杂原子，如氧、氮、硫原子等，包括单环、稠环、桥环和螺环。优选具有5至7元单环或7至10元双-或三环，其可以包含1，2或3个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂环基”的实例包括但不限于吗啉基，硫代吗啉基，四氢吡喃基，1，1-二氧代-硫代吗啉基，哌啶基，2-氧代-哌啶基，吡咯烷基，2-氧代-吡咯烷基，哌嗪-2-酮，8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛基和哌嗪基。杂环基可以是取代或未取代的。
“螺杂环基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个原子的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。其中“a元/b元单螺杂环基”指a元单环和b元单环彼此公用一个原子的螺杂环基。“螺杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：1,7-二氧杂螺[4.5]癸基、2-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬基、7-氧杂螺[3.5]壬基和5-氧杂螺[2.4]庚基。
“稠杂环基”指含有两个或两个以上环状结构彼此共用一对原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。“稠杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：八氢吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氢-1H-异吲哚基，3-氮杂二环[3.1.0]己基，八氢苯并[b][1,4]二噁英(dioxine)。
“桥杂环基”指5至14元，5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接的原子的多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。“稠杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：2-氮杂二环[2.2.1]庚基，2-氮杂二环[2.2.2] 辛基和2-氮杂二环[3.3.2]癸基。所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基。杂环基可以是任选取代的或未取代的。
“芳基”是指含有一个或者两个环的碳环芳香系统，其中所述环可以以稠合的方式连接在一起。术语“芳基”包括比如苯基、萘基、四氢萘基的芳香基团。优选芳基为C6-C10芳基，更优选芳基为苯基和萘基，最优选为苯基。芳基可以是取代或未取代的。所述“芳基”可与杂芳基、杂环基或环烷基稠合，其中与母体结构连接在一起的为芳基环，非限制性实施例包括但不限于：
Figure PCTCN2017085135-appb-000011
“杂芳基”是指芳香族5至6元单环或9至10元双环，其可以包含1至4个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂芳基”的实施例包括但不限于呋喃基，吡啶基，2-氧代-1，2-二氢吡啶基，哒嗪基，嘧啶基，吡嗪基，噻吩基，异噁唑基，噁唑基，噁二唑基，咪唑基，吡咯基，吡唑基，三唑基，四唑基，噻唑基，异噻唑基，1，2，3-噻二唑基，苯并间二氧杂环戊烯基，苯并咪唑基，吲哚基，异吲哚基，1，3-二氧代-异吲哚基，喹啉基，吲唑基，苯并异噻唑基，苯并噁唑基和苯并异噁唑基。杂芳基可以是取代或未取代的。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包括但不限于：
Figure PCTCN2017085135-appb-000012
“烷氧基”是指(烷基-O-)的基团。其中，烷基见本文有关定义。C1-C6的烷氧基为优先选择。其实例包括，但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
“羟基”指-OH基团。
“卤素”是指氟、氯、溴和碘，优选氯、溴和碘。
“氨基”指-NH2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO2。
“苄基”指-CH2-苯基。
“羧基”指-C(O)OH。
“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基的定义如上所述。
“Boc”指叔丁氧基羰基。
“N保护基”指在有机合成中，含有2个或多个官能团的分子，为了使-NH2或-NH-免遭反应的破坏，常用某种试剂先将其保护，待反应完成后，再脱去保护基。N保护基包括但不限于叔丁氧基羰基、苄氧羰基、甲酰基或三氟乙酰基。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此 独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
本说明书所述的“取代”或“取代的”，如无特别指出，均是指基团可被一个或多个选自以下的基团取代：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、疏基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基、羧酸酯基、＝O、-NR7R8、-C(O)NR7R8、-C(O)R9、-C(O)OR9或-NR7C(O)R8。
R7、R8和R9各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-NR10R11、-C(O)NR10R11、-C(O)R12、-C(O)OR12或-NR10C(O)R11的取代基所取代；
或者，R7和R8与相连接的N原子一起形成一个4～8元杂环基，其中4～8元杂环内含有一个或多个N、O、S(O)n原子，并且4～8元杂环上进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-NR10R11、-C(O)NR10R11、-C(O)R12、-C(O)OR12或-NR10C(O)R11的取代基所取代；
R10、R11和R12各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代。
“可药用的盐”是指上述化合物能保持原有生物活性并且适合于医药用途的某些盐类。式(I)所表示的化合物的可药用的盐可以为金属盐、与合适的酸形成的胺盐，金属盐优选碱金属、碱土金属盐，合适的酸包括无机酸和有机酸，例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、苹果酸、马来酸、扁桃酸、甲磺酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。特别优选的是盐酸、氢溴酸、磷酸和硫酸，最优选的是盐酸盐。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本发明化合物的合成方法
为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
本发明通式(I)所述的化合物或其盐的制备方法，包括以下步骤：
Figure PCTCN2017085135-appb-000013
通式(Ia)化合物和通式(Ib)化合物进行Buchwald反应，优选在4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽、钯催化三(二亚苄基丙酮)二钯和碳酸铯的存在下，得到通式(Ic)化合物；将通式(Ic)化合物中的氨基进行保护，优选与二碳酸二叔丁酯反应，得到Rb保护的通式(Id)化合物；通式(Id)化合物的硝基在氢气条件下还原，任选进一步烷基化，得到通式(Ie)化合物；通式(Ie)化合物与酰卤化合物，优选为X-C(O)CR5＝CHR6或X-C(O)C≡CR5反应，进一步脱去氨基保护基Ra得到通式(If)化合物；通式(If)化合物进一步脱去氨基保护基Rb得到通式(I)化合物；
其中：
Ra和Rb各自独立选自N保护基，优选为苯磺酰基、苄基氧羰基、甲酰基、三氟乙酰基和叔丁氧基羰基；更优选为苯磺酰基和叔丁氧基羰基；
X为卤素；
在反应通式路线中，当R3中含有-NH2或-NH-时，-NH2或-NH-任选可以被N保护基团保护；所述N保护基团优选为-C(O)R9，更优选为叔丁氧基羰基；
R1～R6、R9和m的定义如通式(I)中所述。
附图说明
图1为测试例3中WO2015057938的实施例108和本发明实施例5化合物对肝癌Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤平均肿瘤体积变化图。
图2为测试例3中WO2015057938的实施例108和本发明实施例5化合物对肝癌Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤平均相对肿瘤体积变化图。
图3为测试例3中WO2015057938的实施例108和本发明实施例5化合物对肝癌Huh7荷瘤BALB/c裸鼠体重变化图。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
实施例
实施例给出了式(I)所表示的代表性化合物的制备及相关结构鉴定数据。必须说明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。1H NMR图谱是用Bruker仪器(400MHz)测定而得，化学位移用ppm表示。使用四甲基硅烷内标准(0.00ppm)。1H NMR的表示方法：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，m＝多重峰，br＝变宽的，dd＝双重峰的双重峰，dt＝三重峰的双 重峰。若提供偶合常数时，其单位为Hz。
质谱是用LC/MS仪测定得到，离子化方式可为ESI或APCI。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
在下列实施例中，除非另有指明，所有温度为摄氏温度，除非另有指明，各种起始原料和试剂来自市售或者是根据已知的方法合成，市售原料和试剂均不经进一步纯化直接使用，除非另有指明，市售厂家包括但不限于Aldrich Chemical Company，ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，广赞化工科技有限公司和景颜化工科技有限公司等处购买。
CD3OD：氘代甲醇。
CDCl3：氘代氯仿。
DMSO-d6：氘代二甲基亚砜。
氩气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气气球。
实施例中无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。
对化合物进行纯化，采用硅胶柱层析洗脱剂体系和薄层色谱法，其中洗脱剂体系选自：A：石油醚和乙酸乙酯体系；B：二氯甲烷和甲醇体系；其中溶剂的体积比根据化合物的极性不同而不同，也可以加入少量的酸性或碱性试剂进行条件，如醋酸或三乙胺等。
实施例1
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)丙烯酰胺
Figure PCTCN2017085135-appb-000014
Figure PCTCN2017085135-appb-000015
第一步
N-(4-溴-2-硝基-苯基)-N-叔丁氧羰基氨基甲酸叔丁酯
将4-溴-2-硝基苯胺1a(7.50g，34.56mmol)溶于90mL四氢呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(15.08g，69.12mmol)和4-二甲氨基吡啶(200mg，1.64mmol)，升温至80℃反应2小时。反应液减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到N-(4-溴-2-硝基-苯基)-N-叔丁氧羰基氨基甲酸叔丁酯1b(12.6g，黄色固体)，产率：87.4％。
MS m/z(ESI)：361.0[M+1-56]
第二步
(4-溴-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
将N-(4-溴-2-硝基-苯基)-N-叔丁氧羰基氨基甲酸叔丁酯1b(7.12g，17.1mmol)和碳酸钾(7.08g，51.2mmol)溶于140mL乙腈中，升温至35℃反应1.5小时。反应液过滤，滤液减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到(4-溴-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯1c(4.49g，亮黄色固体)，产率：82.8％。
MS m/z(ESI)：216.8[M+1-100]
第三步
3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-氯嘧啶-4-基)-1-甲基脲
将6-氯-N-甲基嘧啶-4-胺1e(300mg，2.09mmol)溶于10mL N,N-二甲基甲酰胺中，冷却至0℃，加入60％氢化钠(167mg，4.18mmol)，室温搅拌30分钟。将2,4-二氯-3-异氰-1,5-甲氧基-4-甲基苯1d(674mg，2.72mmol)溶于5mL N,N-二甲基甲酰胺中并滴加到反应液中，室温反应0.5小时。向反应液中加入50mL水，有白色固体析出，过滤后滤饼用乙酸乙酯重结晶，得到3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-氯嘧啶-4-基)-1-甲基脲1f(710mg，白色固体)，产率：86.8％。
MS m/z(ESI)：392.8[M+1]
第四步
(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲酰基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯
将3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(6-氯嘧啶-4-基)-1-甲基脲1f(1.20g，3.06mmol)溶于20mL四氢呋喃中，冷却至0℃，加入二碳酸二叔丁酯(1.34g，6.13mmol)和4-二甲氨基吡啶(187mg，1.53mmol)，升温至75℃回流1小时。反应液减压下浓缩，加入30mL二氯甲烷溶解，依次用水(20mL x2)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲酰基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g(1.34g，白色固体)，产率：88.9％。
MS m/z(ESI)：492.8[M+1]
第五步
2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
将2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1h(440mg，1.94mmol)、(4-溴-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯1c(616mg，1.94mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(229mg，0.388mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(352mg，0.388mmol)和碳酸铯(1.90g，5.83mmol)溶于15mL甲苯中，氩气保护下115℃反应4小时。反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1i(600mg，红色固体)，产率：66.7％。
MS m/z(ESI)：485.0[M+23]
第六步
2-(4-氨基-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
将2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1i(600mg，1.30mmol)和氢氧化钾(218mg，3.89mmol)溶于10mL水和乙醇的混合溶液(V/V＝1/4)中，加热至回流反应3小时。反应液减压下浓缩，加入20mL乙酸乙酯，分层，水相用乙酸乙酯(20mL x2)萃取，合并有机相用水(20mL x2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到2-(4-氨基-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1j(400mg，红色固体)，产率：85.1％。
MS m/z(ESI)：362.1[M+1]
第七步
2-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
将(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲酰基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g(450mg，0.909mmol)、2-(4-氨基-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1j(300mg，0.828mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(96mg，0.165mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(75mg，0.082mmol)和碳酸铯(810mg，2.40mmol)溶于15mL甲苯中，110℃反应4小时。反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到2-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1k(427mg，红色固体)，产率：63.3％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),8.59(s,1H),8.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.42(s,1H),7.11(d,J＝6.4Hz,1H),6.75-6.71(m,1H),6.59(s,1H),3.93(s,6H),3.70(s,4H),3.63(s,2H),3.46-3.36(m,4H),1.82-1.76(m,4H),1.49(s,9H),1.41(s,9H).
第八步
2-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
将2-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1k(500mg，0.611mmol)溶于10mL四氢呋喃中，冷却至0℃，加入二碳酸二叔丁酯(200mg，0.917mmol)和4-二甲氨基吡啶(37.3mg，0.306mmol)，反应液加热至回流反应3小时。反应液减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到2-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1l(500mg，黄色固体)，产率：89.1％。
第九步
2-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
将2-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1l(500mg，0.545mmol)溶于10mL甲醇中，加入雷尼镍(200mg)，氢气保护下，室温反应12小时。反应液过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到2-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1m(300mg，红色固体)，产率：62.0％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.66(s,1H),8.21(s,1H),6.81(d,J＝8.4Hz,1H),6.59(s,1H),5.9-5.85(m,1H),5.84-5.79(m,1H),3.94(s,6H),3.63(s,3H),3.6(s,4H),3.43-3.32(m,4H),1.82-1.72(m,4H),1.46(s,9H),1.42(s,9H),1.41(s,9H).
第十步
2-(3-丙烯酰氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯
将2-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1m(200mg，0.225mmol)溶于10mL二氯甲烷中，冰浴下加入N，N-二异丙基乙胺(87mg，0.676mmol)和丙烯酰氯(22mg，0.248mmol)，室温反应0.5小时。反应液减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到2-(3-丙烯酰氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1n(200mg，淡黄色固体)，产率：94.3％。
第十一步
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)丙烯酰胺
将2-(3-丙烯酰氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1n(200mg，0.84mmol)溶于10mL二氯甲烷中，冰浴下加5mL三氟乙酸，氮气保护室温反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL二氯甲烷和甲醇的混合溶液(V/V＝10/1)，用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶薄层层析法(洗 脱剂：B体系)纯化，得到N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)丙烯酰胺1(80mg，淡黄色固体)，产率：58.8％。
MS m/z(ESI)：640.8[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.1(s,1H),9.64(s,1Hl),8.82(s,1H),8.3(s,1H),7.22(d,J＝8.4Hz,1H),6.95-6.86(m,2H),6.58-6.48(m,1H),6.28(d,J＝8.0Hz,1H),6.22(d,J＝8.8Hz,1H),5.76(s,1H),5.71(d,J＝10.4Hz,1H),3.93(s,6H),3.63(s,4H),3.21(s,3H),3.12-3.01(m,4H),2.0-1.91(m,4H).
实施例2
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4,7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)苯基)丙烯酰胺
Figure PCTCN2017085135-appb-000016
第一步
7-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-4,7-氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯
将4,7-氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2a(803mg，3.78mmol)、(4-溴-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯1c(1.02g，3.15mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(35mg，0.063mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(115mg，0.126mmol)和碳酸铯(3.08g，9.46mmol)溶于30mL甲苯中，氩气保护下110℃反应6小时。反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到7-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-4,7-氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2b(240mg，红色固体)，产率：17.0％。
MS m/z(ESI):348[M-100]
第二步
7-(4-氨基-3-硝基苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯
将7-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-4,7-氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2b(240mg，0.53mmol)和氢氧化钾(90mg，1.61mmol)溶于8mL水和乙醇的混合溶液(V/V＝1/3)中，加热至回流反应6小时。反应液减压下浓缩，加入20mL乙酸乙酯和10mL水，分层，水相用乙酸乙酯(10mL x2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠溶液(20mL x2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗品7-(4-氨基-3-硝基苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2c(160mg，红色固体)，产率：86.6％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.5(s,1H),7.19-7.15(m,1H),6.76(d,J＝8.4Hz,1H),5.95-5.75(m,2H),3.75-3.65(m,2H),3.10-3.02(m,2H),2.95-2.80(m,2H),1.47(s,9H),1.10-1.04(m,2H),0.89-0.84(m,2H).
第三步
7-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯
将(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲酰基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g(248mg，0.51mmol)、7-(4-氨基-3-硝基苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2c(160mg，0.46mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(53mg，0.092mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(42mg，0.046mmol)和碳酸铯(449mg，1.38mmol)溶于10mL甲苯中，110℃反应4小时。反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到7-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2d(262mg，红色固体)，产率：71.0％。
MS m/z(ESI)：803.8[M+1]
第四步
7-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯
将7-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2d(262mg，0.326mmol)溶于10mL四氢呋喃中，冷却至0℃，加入二碳酸二叔丁酯(107mg，0.489mmol)和4-二甲氨基吡啶(20mg，0.163mmol)，反应液加热至回流反应1小时。反应液减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到7-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2e(260mg，黄色固体)，产率：88.4％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.55(s,1H),8.44(s,1H),7.62(s,1H),7.22-7.05(m,2H),6.59(s,1H),3.94(s,6H),3.78(t,J＝4.4Hz,2H),3.66(s,3H),3.33(t,J＝4.4Hz,2H),3.12(s,2H),1.48(s,9H),1.44-1.38(m,18H),1.14-1.09(m,2H),0.96-0.89(m,2H).
第五步
7-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯
将7-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2e(260mg，0.288mmol)溶于 9mL四氢呋喃和甲醇的混合溶液(V/V＝1/2)中，加入雷尼镍(100mg)，氢气保护下，室温反应6小时。反应液过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到7-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2f(200mg，黄色固体)，产率：79.7％。
第六步
7-(3-丙烯酰氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯
将7-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2f(200mg，0.229mmol)溶于10mL二氯甲烷中，冰浴下加入N，N-二异丙基乙胺(89mg，0.687mmol)和丙烯酰氯(23mg，0.252mmol)，室温反应0.5小时。反应液减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到7-(3-丙烯酰氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2g(180mg，黄色固体)，产率：84.8％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.64(s,1H),8.28(s,1H),8.11-8.0(m,1H),7.07-7.02(m,1H),6.59(s,1H),6.37(d,J＝16.8Hz,1H),6.25-6.15(m,1H),5.75(d,J＝10.4Hz,1H),3.95(s,6H),3.85-3.77(m,2H),3.64(s,3H),3.35-3.25(m,2H),3.12(s,2H),1.48(s,9H),1.42(s,9H),1.34(s,9H),1.14-1.06(m,2H),0.97-0.91(m,2H).
第七步
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4,7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)苯基)丙烯酰胺
将7-(3-丙烯酰氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2g(170mg，0.183mmol)溶于6mL二氯甲烷中，冰浴下加3mL三氟乙酸，氮气保护室温反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL二氯甲烷和甲醇的混合溶液(V/V＝10/1)，用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)洗涤，有机相减压浓缩，得到的残留物用硅胶薄层层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4,7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)苯基)丙烯酰胺2(40mg，淡黄色固体)，产率：34.8％。
MS m/z(ESI)：626.9[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.09(s,1H),9.84(s,1H),9.01(s,1H),8.32(s,1H),7.46-7.31(m,2H),6.89(s,1H),6.85(d,J＝8.8Hz,1H),6.63-6.48(m,1H),6.39-6.13(m,2H),5.73(d,J＝9.6Hz,1H),3.93(s,6H),3.29-3.11(m,9H),1.13-0.99(m,2H),0.97-0.78(m,2H).
实施例3
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-7-基)苯基)丙烯酰胺
Figure PCTCN2017085135-appb-000017
第一步
2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮杂螺[2.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
将2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3a(500mg，2.08mmol)、(4-溴-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯1c(660mg，2.08mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(230mg，0.42mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(380mg，0.42mmol)和碳酸铯(2.03g，6.24mmol)溶于20mL甲苯中，120℃反应4小时。反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮杂螺[2.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3b(260mg，红色固体)，产率：26.2％。
MS m/z(ESI)：477.0[M+1]
第二步
2-(4-氨基-3-硝基苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
将2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮杂螺[2.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3b(260mg，0.54mmol)和氢氧化钾(91.83mg，1.64mmol)溶于8mL水和乙醇的混合溶液(V/V＝1/3)中，加热至90℃反应6小时。反应液减压下浓缩，加入10mL乙酸乙酯，分层，水相用乙酸乙酯(10mL x2)萃取，合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗品2-(4-氨 基-3-硝基苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3c(160mg，黑红色固体)，产率：75.5％。MS m/z(ESI)：377.0[M+1]
第三步
2-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
将(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲酰基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g(216mg，0.44mmol)、2-(4-氨基-3-硝基苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3c(150mg，0.40mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(46mg，0.08mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(146mg，0.04mmol)和碳酸铯(390mg，1.20mmol)溶于10mL甲苯中，110℃反应4小时。反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到2-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3d(80mg，红色固体)，产率：27.1％。
第四步
2-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
将2-(4-((6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3d(80mg，0.096mmol)溶于10mL四氢呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(32mg，0.144mmol)和4-二甲氨基吡啶(6mg，0.046mmol)，反应液加热至78℃反应1小时。反应液减压下浓缩，得到粗品2-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3e(89mg，黄色固体)，产率：100％。
第五步
2-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
将2-(4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3e(89mg，0.0955mmol)溶于6mL四氢呋喃和甲醇的混合溶液(V/V＝1/2)中，加入雷尼镍(50mg)，氢气保护下，室温反应12小时。反应液过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到2-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3f(85mg，黄色固体)，产率：98.7％。
第六步
2-(3-丙烯酰氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯
将2-(3-氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3f(85mg，0.094mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入N，N-二异丙基乙胺(36.5mg，0.283mmol)和丙烯酰氯(10mg，0.104mmol)，室温反应1小时。反应液减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到2-(3-丙烯酰氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3g(80 mg，黄色固体)，产率：88.8％。
第七步
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-7-基)苯基)丙烯酰胺
将2-(3-丙烯酰氨基-4-((叔丁氧基羰基)(6-(3-(叔丁氧基羰基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯3g(80mg，0.084mmol)溶于6mL二氯甲烷中，冰浴下加3mL三氟乙酸，氮气保护室温反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL二氯甲烷和甲醇的混合溶液(V/V＝10/1)，用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)洗涤，有机相减压浓缩，得到的残留物用硅胶薄层层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-7-基)苯基)丙烯酰胺3(17mg，黄色固体)，产率：31.0％。
MS m/z(ESI)：656.8[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.11(s,1H),9.60(s,1H),8.71-8.63(m,2H),8.29(s,1H),7.21(d,J＝8.8Hz,1H),6.96(s,1H),6.89(s,1H),6.56-6.46(m,1H),6.42(d,J＝8.0Hz,1H),6.2(d,J＝15.6Hz,1H),5.69(d,J＝10.0Hz,1H),3.93(s,6H),3.32(t,J＝6.4Hz,2H),3.25-3.16(m,5H),3.15-3.05(m,4H),1.93(t,J＝7.2Hz,2H),1.81-1.68(m,4H).
实施例4
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)丙烯酰胺
Figure PCTCN2017085135-appb-000018
Figure PCTCN2017085135-appb-000019
第一步
2-苄基-7-叔丁基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸
将2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯1h(2.0g，8.84mmol)溶于20mL二氯甲烷中，加入氯甲酸苄酯(3.06g，17.67mmol)和N,N-二异丙基乙胺(4.57g，35.35mmol)，室温反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL乙酸乙酯溶解，用依次用1M的盐酸溶液(10mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，有机相减压下浓缩，得到2-苄基-7-叔丁基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸4a(3.18g，黄色油状物)，产率：100％。
第二步
2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸苄酯
将2-苄基-7-叔丁基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸4a(3.20g，8.88mmol)溶于20mL二氯甲烷中，加入10mL三氟乙酸，室温反应4小时。反应液减压浓缩，加入30mL乙酸乙酯溶解，用依次用碳酸氢钠溶液(10mL x2)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，有机相减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸苄酯4b(2.30g，无色粘稠物)，产率：99.6％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.41(s,1H),7.43-7.29(m,5H),5.09(s,2H),3.77(s,4H),3.16-2.96(m,4H),2.09-1.96(m,4H).
第三步
7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸苄酯
将2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸苄酯4b(2.3g，8.83mmol)溶于20mL甲醇中，加入10mL乙醛、醋酸(1.50g，26.5mmol)和氰基硼氢化钠(2.22g，35.34mmol)，室温反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL乙酸乙酯和10mL水，分层，有机相用依次用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸苄酯4c(2.0g，无色粘稠物)，产率：78.4％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.42-7.31(m,5H),5.1(s,2H),3.9-3.7(m,4H),3.58-3.38(m,2H),3.15-3.02(m,2H),2.85-2.55(m,2H),2.3-2.06(m,4H),1.39(t,J＝12Hz,3H).
第四步
7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷
将7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸苄酯4c(2.00g，6.94mmol)溶于20mL甲醇中，加入钯炭(70mg)，氢气氛围下，室温反应12小时。反应液过滤，滤液减压浓缩，得到7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷4d(1.0g，油状物)，产率：93.4％。
第五步
(4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
将7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷4d(1.50g，4.73mmol)、(4-溴-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯1c(1.09g，7.09mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(821mg，1.42mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(649mg，0.71mmol)和碳酸铯(4.62g，14.19mmol)溶于50mL甲苯中，110℃反应4小时。反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到(4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯4e(1.00g，红色固体)，产率：54.1％。
MS m/z(ESI)：391.0[M+1]
第六步
(4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基甲酸
将(4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯4e(1.00g，2.56mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温反应4小时。反应液减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到(4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基甲酸4f(680mg，红色固体)，产率：91.5％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.11(s,1H),6.76(d,J＝8.8Hz,1H),6.73-6.67(m,1H),3.65-3.58(m,4H),3.19-3.03(m,4H),2.72-2.56(m,2H),2.45-2.35(m,2H),2.17-2.08(m,2H),1.41(t,J＝5.6Hz,3H).
第七步
叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]氨基甲酸
将(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲酰基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g(1.00g，2.03mmol)、(4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯基)氨基甲酸4f(650mg，2.24mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(259mg，0.447mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(205mg，0.224mmol)和碳酸铯(2.65g，6.13mmol)溶于20mL甲苯中，115℃反应6小时。反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得 到叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]氨基甲酸4g(800mg，红色固体)，产率：52.9％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.17(s,1H),8.58(s,1H),8.21(d,J＝9.2Hz,1H),7.44(s,1H),7.11(d,J＝2.4Hz,1H),6.77-6.71(m,1H),6.61(s,1H),3.95(s,6H),3.71(s,4H),364(s,3H),3.52-2.25(m,6H),2.08-1.96(m,4H),1.29-1.25(m,3H).
第八步
叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸
将叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]氨基甲酸4g(800mg，1.07mmol)溶于20mL四氢呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(351mg，1.61mmol)和4-二甲氨基吡啶(131mg，1.07mmol)，反应液加热至80℃反应1小时。反应液减压下浓缩，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸4h(850mg，黄色固体)，产率：93.7％。
MS m/z(ESI)：423.0[M/2+1]
第九步
叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-氨基-苯基]氨基甲酸
将叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸4h(850mg，1.01mmol)溶于20mL甲醇中，加入雷尼镍(500mg)，氢气保护下，室温反应20小时。反应液过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-氨基-苯基]氨基甲酸4i(210mg，淡黄色固体)，产率：25.6％。
MS m/z(ESI)：408.0[M/2+1]
第十步
叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-(丙-2-烯酰基氨基)苯基]氨基甲酸
将叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-氨基-苯基]氨基甲酸4i(210mg，0.257mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入N，N-二异丙基乙胺(133mg，1.03mmol)和丙烯酰氯(46.6mg，0.815mmol)，室温反应48小时。反应液减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-(丙-2-烯酰基氨基)苯基]氨基甲酸4j(120mg，黄色固体)，产率：53.6％。
MS m/z(ESI)：435.0[M/2+1]
第十一步
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)丙烯酰胺
将叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-2-(丙-2-烯酰基氨基)苯基]氨基甲酸4j(120mg，0.138mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温反应14小时。反应液减压浓缩，加入20mL二氯甲烷和甲醇的混合溶液(V/V＝10/1)，用饱和碳酸钠溶液(10mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，有机相减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯基)丙烯酰胺4(25mg，黄色固体)，产率：27.1％。
MS m/z(ESI)：668.8[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.09(s,1H),10.48(s,1H),9.69(s,1H),8.87(s,1H),8.30(s,1H),7.23(d,J＝8.8Hz,1H),6.94(s,1H),6.89(s,1H),6.63-6.45(m,1H),6.32-6.15(m,2H),5.71(d,J＝10.0Hz,1H),3.93(s,6H),3.75-3.55(m,4H),3.48-3.38(m,2H),3.22(s,3H),3.25-2.81(m,4H),2.19-1.92(m,4H),1.28-1.19(m,3H).
实施例5
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-乙基-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)丙烯酰胺
Figure PCTCN2017085135-appb-000020
Figure PCTCN2017085135-appb-000021
第一步
N-(4-溴-2-硝基苯基)乙酰胺
将4-溴-2硝基苯胺1a(6.00g，27.65mmol)溶于45mL醋酸中，加入乙酸酐(2.85mL，30.41mmol)，加热至100℃反应5小时。反应液中加入100mL水，有固体析出，过滤，滤饼用50mL二氯甲烷溶解，有机相用依次用水(20mL x2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压下浓缩，得到N-(4-溴-2-硝基苯基)乙酰胺5a(6.60g，黄色固体)，产率：92.1％。
MS m/z(ESI)：258.8[M+1]
第二步
7-(4-乙酰氨基-3-硝基苯基)-4,7-氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯
将N-(4-溴-2-硝基苯基)乙酰胺5a(1.00g，3.86mmol)、4,7-氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯2a(820mg，3.86mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(450mg，0.772mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(350mg，0.386mmol)和碳酸铯(3.77g，11.6mmol)溶于50mL甲苯中，氩气保护下115℃反应4小时。反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到7-(4-乙酰氨基-3-硝基苯基)-4,7-氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯5b(920mg，红色固体)，产率：61.3％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.01(s,1H),8.61(d,J＝9.6Hz,1H),7.68(s,1H),7.32-7.27(m, 2H),3.85-3.65(m,2H),3.31-3.15(m,2H),3.02(s,2H),2.27(s,3H),1.49(s,9H),1.14-1.08(m,2H),0.98-0.88(m,2H).
第三步
(N-(2-硝基-4-(4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)乙酰胺
将7-(4-乙酰氨基-3-硝基苯基)-4,7-氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯5b(720mg，2.36mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温反应4小时。反应液减压浓缩，加入20mL乙酸乙酯溶解，分层，有机相用依次用饱和碳酸钠溶液(10mL)和饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压下浓缩，得到(N-(2-硝基-4-(4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)乙酰胺5c(650mg，红色固体)，产率：95.0％。
MS m/z(ESI)：291.0[M+1]
第四步
N-(4-(4-乙基-4,7-氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)-2-硝基苯基)乙酰胺
将(N-(2-硝基-4-(4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)乙酰胺5c(600mg，2.06mmol)溶于20mL甲醇中，加入40％的乙醛2mL、醋酸(250mg，4.13mmol)和氰基硼氢化钠(260mg，4.13mmol)，室温反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL乙酸乙酯，有机相用依次用饱和碳酸钠溶液(10mL x2)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压下浓缩，得到N-(4-(4-乙基-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)-2-硝基苯基)乙酰胺5d(660mg，红色固体)，产率：100％。
MS m/z(ESI)：319.0[M+1]
第五步
4-(4-乙基-4,7-氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)-2-硝基苯胺
将N-(4-(4-乙基-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)-2-硝基苯基)乙酰胺5d(700mg，2.20mmol)溶于20mL乙醇中，加入4mL氢氧化钾(493.4mg，8.79mmol)，加热至90℃反应3小时。反应液减压浓缩，加入20mL乙酸乙酯和10mL水，分层，有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到4-(4-乙基-4,7-氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)-2-硝基苯胺5e(6.60g，红色固体)，产率：98.8％。
MS m/z(ESI)：277.0[M+1]
第六步
叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(8-乙基-5,8-二氮杂螺[2.5]辛烷-5-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]氨基甲酸
将(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲酰基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g(1.00g，2.03mmol)、4-(4-乙基-4,7-氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)-2-硝基苯胺5e(618mg，2.24mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(235mg，0.407mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(186mg，0.203mmol)和碳酸铯(1.99g，6.10mmol)溶于30mL甲苯中，氩气保护下115℃反应4小时。反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(8-乙基-5,8-二氮杂螺[2.5]辛烷-5-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]氨基甲酸5f(800mg，红色固体)，产率：53.7％。
MS m/z(ESI)：366.0[M/2+1]
第七步
叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(8-乙基-5,8-二氮杂螺[2.5]辛-5-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸
将叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(8-乙基-5,8-二氮杂螺[2.5]辛烷-5-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]氨基甲酸5f(800mg，1.09mmol)溶于20mL四氢呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(358mg，1.64mmol)和4-二甲氨基吡啶(134mg，1.09mmol)，反应液加热至80℃反应1小时。反应液减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(8-乙基-5,8-二氮杂螺[2.5]辛-5-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸5g(850mg，黄色固体)，产率：93.5％。
MS m/z(ESI)：832.8[M+1]
第八步
叔丁基-N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(8-乙基-5,8-二氮杂螺[2.5]辛烷-5-基)苯胺]嘧啶-4-基]甲基-氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸
将叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(8-乙基-5,8-二氮杂螺[2.5]辛-5-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸5g(850mg，1.02mmol)溶于20mL甲醇中，加入雷尼镍(400mg)，氢气保护下，室温反应6小时。反应液过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到叔丁基-N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(8-乙基-5,8-二氮杂螺[2.5]辛烷-5-基)苯胺]嘧啶-4-基]甲基-氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸5h(600mg，黄色固体)，产率：73.2％。
MS m/z(ESI)：401.9[M/2+1]
第九步
叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]甲基氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(8-乙基-5,8-二氮杂螺[2.5]辛烷-5-基)-2-(丙-2-烯酰基氨基)苯基]氨基甲酸
将叔丁基-N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(8-乙基-5,8-二氮杂螺[2.5]辛烷-5-基)苯胺]嘧啶-4-基]甲基-氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸5h(600mg，0.748mmol)溶于15mL二氯甲烷中，加入N，N-二异丙基乙胺(463mg，3.73mmol)和丙烯酰氯(135mg，1.50mmol)，室温反应4小时。反应液减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]甲基氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(8-乙基-5,8-二氮杂螺[2.5]辛烷-5-基)-2-(丙-2-烯酰基氨基)苯基]氨基甲酸5i(440mg，红色固体)，产率：68.7％。
MS m/z(ESI)：378.6[(M-100)/2+1]
第十步
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-乙基-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)丙烯酰胺
将叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]甲基氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(8-乙基-5,8-二氮杂螺[2.5]辛烷-5-基)-2-(丙-2-烯酰基氨基)苯基]氨基甲酸5i(440mg，0.514mmol)溶于15mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL乙酸乙酯，依次用饱和碳酸钠溶液(20mL)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶薄层层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-乙基 -4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)苯基)丙烯酰胺5(100mg，白色固体)，产率：29.7％。
MS m/z(ESI)：678.8[M+23]
1H NMR(400MHz,CDCL3)δ12.53(s,1H),8.39(s,1H),7.79(s,1H),6.76-6.66(m,1H),6.53(s,1H),6.62(d,J＝16.0Hz,1H),6.26-6.17(m,1H),5.9-5.84(m,1H),5.79(d,J＝10.0Hz,1H),3.92(s,6H),3.8-2.1(m,11H),1.69-1.42(m,3H),1.32-1.02(m,2H),0.98-0.6(m,2H).
实施例6
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)苯基)丙烯酰胺
Figure PCTCN2017085135-appb-000022
第一步
7-(4-乙酰氨基-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯
将N-(4-溴-2-硝基苯基)乙酰胺5a(550mg，2.12mmol)、2,7-氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯6a(460.5mg，2.12mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(246mg，0.425mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(194mg，0.212mmol)和碳酸铯(2.08g，6.37mmol)溶于20mL甲苯中，氩气 保护下115℃反应4小时。反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到(7-(4-乙酰氨基-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯6b(490mg，红色固体)，产率：57.1％。
MS m/z(ESI)：405.0[M+1]
第二步
(N-(2-硝基-4-(2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)苯基)乙酰胺
将(7-(4-乙酰氨基-3-硝基苯基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯6b(490mg，1.21mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温反应2小时。反应液减压浓缩，加入20mL乙酸乙酯溶解，减压下浓缩，得到(N-(2-硝基-4-(2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)苯基)乙酰胺6c(368mg，红色固体)，产率：100％。
MS m/z(ESI)：305.0[M+1]
第三步
N-(4-(7-乙基-2,7-氮杂螺[4.4]辛烷-2-基)-2-硝基苯基)乙酰胺
将(N-(2-硝基-4-(2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)苯基)乙酰胺6c(368mg，1.21mmol)溶于10mL甲醇中，加入40％的乙醛2mL、醋酸(145mg，2.42mmol)和氰基硼氢化钠(304mg，4.84mmol)，室温反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL乙酸乙酯和10mL水，分层，有机相用依次用饱和碳酸钠溶液(20mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压下浓缩，得到N-(4-(7-乙基-2,7-氮杂螺[4.4]辛烷-2-基)-2-硝基苯基)乙酰胺6d(401mg，红色固体)，产率：100％。
MS m/z(ESI)：333.0[M+1]
第四步
4-(7-乙基-2,7-氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)-2-硝基苯胺
将N-(4-(7-乙基-2,7-氮杂螺[4.4]辛烷-2-基)-2-硝基苯基)乙酰胺6d(401mg，2.20mmol)溶于20mL乙醇中，加入4mL氢氧化钾(271mg，4.83mmol)，加热至90℃反应4小时。反应液减压浓缩，加入20mL乙酸乙酯和10mL水，分层，水相用乙酸乙酯(10mL x2)萃取，合并有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到4-(7-乙基-2,7-氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)-2-硝基苯胺6e(270mg，红色固体)，产率：77.1％。
MS m/z(ESI)：291.0[M+1]
第五步
叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(3-乙基-3,8-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]氨基甲酸
将(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲酰基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g(400mg，0.813mmol)、4-(7-乙基-2,7-氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)-2-硝基苯胺6e(260mg，0.895mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(94mg，0.163mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(75mg，0.0813mmol)和碳酸铯(795mg，2.44mmol)溶于20mL甲苯中，氩气保护下115℃反应4小时。反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(3-乙基-3,8-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]氨基甲酸6f(400mg，红色固体)，产率：66.0％。
MS m/z(ESI)：323.0[M/2+1]
第六步
叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(3-乙基-3,8-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸
将叔丁基-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-(3-乙基-3,8-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-基)-2-硝基苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]氨基甲酸6f(400mg，0.536mmol)溶于15mL四氢呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(175mg，0.805mmol)和4-二甲氨基吡啶(66mg，0.576mmol)，反应液加热至80℃反应1小时。反应液减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(3-乙基-3,8-二氮杂螺[4.4]壬-8-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸6g(410mg，黄色固体)，产率：90.5％。
第七步
叔丁基-N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(3-乙基-3,8-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-基)苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸
将叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(3-乙基-3,8-二氮杂螺[4.4]壬-8-基)-2-硝基-苯基]氨基甲酸6g(450mg，0.532mmol)溶于15mL甲醇中，加入雷尼镍(200mg)，氢气保护下，室温反应6小时。反应液过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到叔丁基-N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(3-乙基-3,8-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-基)苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸6h(310mg，红色固体)，产率：71.4％。
MS m/z(ESI)：408.7[M/2+1]
第八步
叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]甲基氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(3-乙基-3,8-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-基)-2-(丙-2-烯酰基氨基)苯基]氨基甲酸
将叔丁基-N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(3-乙基-3,8-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-基)苯胺]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸6h(310mg，0.380mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入N，N-二异丙基乙胺(246mg，1.90mmol)和丙烯酰氯(69mg，0.760mmol)，室温反应4小时。反应液减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]甲基氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(3-乙基-3,8-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-基)-2-(丙-2-烯酰基氨基)苯基]氨基甲酸6i(150mg，红色固体)，产率：45.5％。
MS m/z(ESI):385.9[M+1/2]
第九步
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(7-乙基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)苯基)丙烯酰胺
将叔丁基-N-[6-[[叔丁氧基羰基(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]甲基氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-(3-乙基-3,8-二氮杂螺[4.4]壬烷-8-基)-2-(丙-2-烯酰基氨基)苯基]氨基甲酸6i(150mg，0.172mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL乙酸乙酯，依次用饱和碳酸钠溶液(10mL x2)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶薄层层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(7-乙 基-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)苯基)丙烯酰胺6(20mg，白色固体)，产率：17.3％。
MS m/z(ESI)：335.8[M/2+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.11(s,1H),10.43-10.19(m,1H),9.55(s,1H),8.69(s,1H),8.1(s,1H),7.21(d,J＝8.8Hz,1H),7.09-6.94(m,1H),6.89(s,1H),6.58-6.44(m,1H),6.42-6.34(m,1H),6.28-6.18(m,1H),5.74-5.66(m,1H),3.93(s,6H),3.8-3.46(m,2H),3.38-3.28(m,4H),3.24-3.92(m,7H),2.22-1.78(m,4H),1.32-1.12(m,3H).
实施例7
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)苯基)丙烯酰胺
Figure PCTCN2017085135-appb-000023
第一步
N-(4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-2-硝基苯基)乙酰胺
氮气保护下，将N-(4-溴-2-硝基苯基)乙酰胺5a(14.17g，49.72mmol)、N,N-二甲基哌啶-4-胺二盐酸盐7a(10.00g，54.69mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(11.5g，19.88mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(9.1g，9.94mmol)和碳酸铯(48.40g，148.6mmol)溶于150mL甲苯中，加热回流4小时。反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-(4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-2-硝基苯基)乙酰胺7b(6.40g，棕黑色固体)，产率：42％。
MS m/z(ESI)：307.0[M+1]
第二步
1-(4-氨基-3-硝基苯基)-N,N-二甲基哌啶-4-胺
将N-(4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-2-硝基苯基)乙酰胺7b(6.40g，20.89mmol)和氢氧化钾(5.86g，104.4mmol)溶于80mL甲醇和水的混合溶剂(V/V＝1/1)中，加热回流2小时。反应液减压浓缩，加入100mL水，用乙酸乙酯(50mL x3)萃取，合并有机相，依次用水(50mL x3)和饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到1-(4-氨基-3-硝基苯基)-N,N-二甲基哌啶-4-胺7c(5.4g，棕黑色固体)，产率：97.8％。
MS m/z(ESI)：265.0[M+1]
第三步
N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]-2-硝基-苯胺基]-甲基-氨基甲酰基]氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，将(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲酰基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g(500mg，1.02mmol)、1-(4-氨基-3-硝基苯基)-N,N-二甲基哌啶-4-胺7c(285.07mg，1.02mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(117.66mg，0.203mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(93.11mg，0.101mmol)和碳酸铯(662.57mg，2.03mmol)溶于15mL甲苯中，加热至120℃反应4小时。反应液减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]-2-硝基-苯胺基]-甲基-氨基甲酰基]氨基甲酸叔丁酯7d(420mg，棕红色固体)，产率：57.4％。
MS m/z(ESI)：718.8[M+1]
第四步
N-[6-[[叔丁氧基羰基-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]-2-硝基-苯基]氨基甲酸叔丁酯
将N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-N-[[6-[4-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]-2-硝基-苯胺基]-甲基-氨基甲酰基]氨基甲酸叔丁酯7d(400mg，0.536mmol)溶于20mL四氢呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(242.63mg，1.11mmol)和4-二甲氨基吡啶(20.37mg，0.167mmol)，反应液加热至75℃反应2小时。反应液减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-[6-[[叔丁氧基羰基-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]-2-硝基-苯基]氨基甲酸叔丁酯7e(323mg，橙黄色固体)，产率：70.9％。
MS m/z(ESI)：818.8[M+1]
第五步
N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧基羰基-4-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
将N-[6-[[叔丁氧基羰基-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酰基]-甲基-氨基]嘧啶-4-基]-N-[4-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]-2-硝基-苯基]氨基甲酸叔丁酯7e(322mg，0.393mmol)溶于10mL甲醇中，加入雷尼镍(300mg)，氢气保护下，室温反应3小时。反应液过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧基羰基-4-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯7f(202mg，黄色固体)，产率：65.1％。
MS m/z(ESI)：788.8[M+1]
第六步
N-[[6-[2-丙烯酰胺基-N-叔丁氧基羰基-4-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
将N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧基羰基-4-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯7f(188mg，0.238mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入N，N-二异丙基乙胺(131.42mg，0.952mmol)和丙烯酰氯(43.09mg，0.476mmol)，室温反应2小时。反应液减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到叔N-[[6-[2-丙烯酰胺基-N-叔丁氧基羰基-4-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯7g(162mg，淡黄色固体)，产率：80.6％。
MS m/z(ESI)：842.8[M+1]
第七步
N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)苯基)丙烯酰胺
将N-[[6-[2-丙烯酰胺基-N-叔丁氧基羰基-4-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯7g(162mg，0.192mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温反应1小时。反应液减压浓缩，加入10mL二氯甲烷，用饱和碳酸钠溶液(10mL x2)洗涤，减压浓缩，得得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-(2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)苯基)丙烯酰胺7(66mg，淡黄色固体)，产率：53.4％。MS m/z(ESI)：642.8[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.56(s,1H),8.37(s,1H),8.10(s,1H),7.64(s,1H),7.23(d,J＝8.9Hz,2H),6.77(s,1H),6.51(s,1H),6.41(d,J＝16.5Hz,1H),6.24(d,J＝10.2Hz,1H),5.93(s,1H),5.76(d,J＝9.8Hz,1H),3.91(s,6H),3.80(d,J＝12.1Hz,2H),3.28(s,3H),2.76(s,3H),2.56(s,6H),2.01(s,2H),1.74(s,2H).
实施例8
N-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺
Figure PCTCN2017085135-appb-000024
第一步
N-(4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)乙酰胺
氩气保护下，将N-(4-溴-2-硝基苯基)乙酰胺5a(1.00g，3.86mmol)、1-环丙基哌嗪8a(483.26mg，3.86mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(446.71mg，0.772mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(353.48mg，0.386mmol)和碳酸铯(2.52g，7.72mmol)溶于10mL甲苯中，加热至120℃反应4小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-(4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)乙酰胺8b(500mg，红色固体)，产率：42.7％。
MS m/z(ESI)：304.9[M+1]
第二步
4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺
将N-(4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯基)乙酰胺8b(424mg，1.39mmol)溶于50mL乙醇和水的混合溶剂(V/V＝3/2)中，加热至95℃反应4小时。反应液减压浓缩，用二氯甲烷(20mL x3)萃取，合并有机相，减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺8c(311mg，红棕色固体)，产率：85.2％。
MS m/z(ESI)：263.0[M+1]
第三步
N-[[6-[4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，将(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲酰基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g(500mg，1.02mmol)、4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺8c(266.71mg，1.02mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(117.66mg，0.203mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(93.11mg，0.102mmol)和碳酸铯(662.57mg，2.03mmol)溶于20mL甲苯中，加热至120℃反应4小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-[[6-[4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8d(612mg，红棕色固体)，产率：83.9％。
MS m/z(ESI)：716.8[M+1]
第四步
N-[[6-[N-叔丁氧羰基-4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-硝基-苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
将N-[[6-[4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8d(612mg，0.853mmol)溶于20mL四氢呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(372.26mg，1.71mmol)和4-二甲氨基吡啶(52.09mg，0.426mmol)，反应液加热至75℃反应2小时。反应液减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-[[6-[N-叔丁氧羰基-4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-硝基-苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8e(655mg，橙黄色固体)，产率：93.9％。
MS m/z(ESI)：816.8[M+1]
第五步
N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(4-环丙基哌嗪-1-基)苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
将N-[[6-[N-叔丁氧羰基-4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-硝基-苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8e(650mg，0.795mmol)溶于20mL甲醇中，加入雷尼镍(1.00g)，氢气氛围下，室温反应2小时。反应液过滤，减压浓缩，得到粗品N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(4-环丙基哌嗪-1-基)苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8f(596mg，橙黄色固体)，产率：95.2％。
第六步
N-[[6-[2-丙烯酰胺基-N-叔丁氧羰基-4-(4-环丙基哌嗪-1-基)苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
将N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-(4-环丙基哌嗪-1-基)苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰 基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8f(565mg，0.717mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入N，N-二异丙基乙胺(411.04mg，2.87mmol)和丙烯酰氯(129.83mg，1.43mmol)，室温反应10分钟。向反应液中加入10mL饱和碳酸氢钠溶液，用二氯甲烷(20mL x3)萃取，合并有机相，减压浓缩，得到粗品N-[[6-[2-丙烯酰胺基-N-叔丁氧羰基-4-(4-环丙基哌嗪-1-基)苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8g(600mg，黄色固体)，产率：99.5％。
MS m/z(ESI)：842.8[M+1]
第七步
N-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺
将N-[[6-[2-丙烯酰胺基-N-叔丁氧羰基-4-(4-环丙基哌嗪-1-基)苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯8g(600mg，0.713mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温反应4小时。反应液减压浓缩，加入10mL饱和碳酸氢钠溶液和10mL二氯甲烷，分液，水相用二氯甲烷(10mL x2)萃取，合并有机相，减压浓缩，得到的残留物用硅胶薄层层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-(5-(4-环丙基哌嗪-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺8(200mg，淡黄色固体)，产率：43.9％。
MS m/z(ESI)：640.8[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.55(s,1H),8.38(s,1H),7.71(s,2H),7.21(d,J＝8.8Hz,1H),6.76(d,J＝8.8Hz,2H),6.52(s,1H),6.42(d,J＝17.0Hz,1H),6.21(dd,J＝16.8,10.0Hz,1H),5.86(s,1H),5.77(d,J＝10.3Hz,1H),3.92(s,6H),3.27(s,7H),2.80(s,4H),1.62(s,1H),0.51(s,4H).
实施例9
N-(5-(4-(环丙基(甲基)氨基)哌啶-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺
Figure PCTCN2017085135-appb-000025
Figure PCTCN2017085135-appb-000026
第一步
4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯
将哌啶-4-酮盐酸盐9a(5.0g，36.8mmol)溶于100mL四氢呋喃中，加入三乙胺(7.7mL，55.2mmol)，搅拌5分钟，加入二碳酸二叔丁酯(9.6g，44.2mmol)和4-二甲氨基吡啶(225mg，1.84mmol)，室温反应12小时。反应液减压下浓缩，加入100mL二氯甲烷，依次用1M盐酸溶液(50mL×2)、饱和碳酸钠溶液(50mL)和饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯9b(6.7g，无色固体)，产率：91.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.71-3.74(m,4H),2.43-2.46(m,4H),1.50(s,9H)
第二步
4-(环丙基氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯9b(12.0g，60.2mmol)溶于40mL乙醇中，加入40mL冰醋酸和环丙胺9c(4.2mL，60.2mmol)，搅拌0.5小时，加入氰基硼氢化钠(7.56g，120.4mmol)，室温反应2小时。反应液减压下浓缩，加入500mL饱和氯化铵溶液，用乙酸乙酯(500mL)萃取，依次用饱和碳酸钠溶液(400mL)和饱和氯化钠溶液(500mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到4-(环丙基氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯9d(11.1g，无色液体)，产率：77.1％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.01-4.06(m,2H),2.75-2.83(m,3H),2.14-2.17(m,1H),1.90-1.94 (m,2H),1.45(s,9H),1.26-1.30(m,2H),0.46-0.50(m,2H),0.38-0.40(m,2H)
第三步
4-(环丙基(甲基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-(环丙基氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯9d(11.1g，46.2mmol)溶于300mL乙腈中，加入碳酸钾(19.15g，138.6mmol)和碘甲烷(3.45mL，55.44mmol)，室温反应2小时。反应液过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到4-(环丙基(甲基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯9e(8.0g，无色液体)，产率：68％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.13-4.19(m,2H),2.63-2.69(m,3H),2.39(s,3H)，1.82-1.99(m,3H),1.47-1.54(m,2H),1.49(s,9H),0.54-0.56(m,4H)
第四步
N-环丙基-N-甲基哌啶-4-胺
将4-(环丙基(甲基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯9e(8.0g，31.4mmol)溶于30mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温反应2小时。反应液减压下浓缩，所得残留物加入20mL二氯甲烷继续减压浓缩，再次加入50mL二氯甲烷溶解，然后加入碳酸钾粉末至无气泡产生，过滤，减压浓缩，得到N-环丙基-N-甲基哌啶-4-胺9f(3.8g，棕色液体)，产率：78.3％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.12-3.15(m,2H),2.60-2.63(m,2H),2.52-2.56(m,1H),2.34(s,3H),1.85-1.95(m,2H),1.75-1.78(m,1H),1.46-1.50(m,2H),0.46-0.50(m,2H),0.40-0.42(m,2H)
第五步
N-(4-(4-(环丙基(甲基)氨基)哌啶-1-基)-2-硝基苯基)乙酰胺
氩气保护下，将N-(4-溴-2-硝基苯基)乙酰胺5a(6.18g，23.8mmol)、N-环丙基-N-甲基哌啶-4-胺9f(3.35g，21.7mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(2.51g，4.34mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(3.97g，4.34mmol)和碳酸铯(21.2g，65.1mmol)溶于100mL甲苯中，加热至110℃反应4小时。反应液冷却至室温，用500mL乙酸乙酯萃取，依次用水(300mL×2)和饱和氯化钠溶液(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到N-(4-(4-(环丙基(甲基)氨基)哌啶-1-基)-2-硝基苯基)乙酰胺9g(5.0g，棕色固体)，产率：69.4％。
MS m/z(ESI)：333.0[M+1]
第六步
1-(4-氨基-3-硝基苯基)-N-环丙基-N-甲基哌啶-4-胺
将N-(4-(4-(环丙基(甲基)氨基)哌啶-1-基)-2-硝基苯基)乙酰胺9g(5.0g，15.0mmol)和氢氧化钾(8.4g，150.0mmol)溶于320mL水和乙醇的混合溶液(V/V＝1/15)中，加热至90℃反应2小时。反应液减压下浓缩，加入500mL乙酸乙酯，分层，有机相用水(400mL)、饱和氯化钠溶液(400mL)和饱和碳酸氢钠溶液(400mL)洗涤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到1-(4-氨基-3-硝基苯基)-N-环丙基-N-甲基哌啶-4-胺9h(2.60g，棕色油状物)，产率：57.5％。
MS m/z(ESI)：291.0[M+1]
第七步
N-[[6-[4-[4-[环丙基(甲基)氨基]-1-哌啶基]-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，将(6-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基甲酰基-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1g(491.8mg，1.00mmol)、1-(4-氨基-3-硝基苯基)-N-环丙基-N-甲基哌啶-4-胺9h(290.4mg，1.00mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(115.7mg，0.20mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(183.0mg，0.20mmol)和碳酸铯(977mg，3.00mmol)溶于10mL甲苯中，110℃反应5小时。反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-[[6-[4-[4-[环丙基(甲基)氨基]-1-哌啶基]-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯9i(310mg，棕色固体)，产率：41.6％。MS m/z(ESI)：744.8[M+1]
第八步
N-[[6-[N-叔丁氧羰基-4-[4-[环丙基(甲基)氨基]-1-哌啶基]-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯
将N-[[6-[4-[4-[环丙基(甲基)氨基]-1-哌啶基]-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯9i(300mg，0.40mmol)溶于10mL四氢呋喃中，加入二碳酸二叔丁酯(176mg，0.80mmol)和4-二甲氨基吡啶(48.8mg，0.40mmol)，反应液加热至80℃反应4小时。反应液减压下浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-[[6-[N-叔丁氧羰基-4-[4-[环丙基(甲基)氨基]-1-哌啶基]-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯9j(200mg，棕黄色固体)，产率：58.1％。
MS m/z(ESI)：846.8[M+1]
第九步
N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-[4-[环丙基(甲基)氨基]-1-哌啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸酯
将N-[[6-[N-叔丁氧羰基-4-[4-[环丙基(甲基)氨基]-1-哌啶基]-2-硝基苯胺基]嘧啶-4-基]甲基氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸叔丁酯9j(200mg，0.23mmol)溶于10mL甲醇和四氢呋喃的混合溶剂(V/V＝1/1)中，加入雷尼镍(200mg)，氢气氛围下，室温反应3小时。反应液过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-[4-[环丙基(甲基)氨基]-1-哌啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸酯9k(90mg，白色固体)，产率：46.6％。MS m/z(ESI)：817.8[M+1]
第十步
N-[[6-[2-丙烯酰氨基-N-叔丁氧羰基-4-[4-[环丙基(甲基)氨基]-1-哌啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸酯
将N-[[6-[2-氨基-N-叔丁氧羰基-4-[4-[环丙基(甲基)氨基]-1-哌啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸酯9k(90mg，0.11mmol)溶于5mL二氯甲烷中，冰浴下加入N，N-二异丙基乙胺(0.1mL，0.55mmol)和丙烯酰氯(20mg，0.22mmol)，室温反应1小时。加入50mL二氯甲烷，分液，有机相用饱和碳酸钠溶液(500mL)和饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-[[6-[2-丙烯酰氨基-N-叔丁氧羰基-4-[4-[环丙基(甲基)氨基]-1-哌啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸酯9l(70mg，淡黄色固体)，产率：72.9％。
MS m/z(ESI)：869.8[M+1]
第十一步
N-(5-(4-(环丙基(甲基)氨基)哌啶-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺
将N-[[6-[2-丙烯酰氨基-N-叔丁氧羰基-4-[4-[环丙基(甲基)氨基]-1-哌啶基]苯胺基]嘧啶-4-基]-甲基-氨基甲酰基]-N-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)氨基甲酸酯9l(68mg，0.078mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下加入1mL三氟乙酸，室温反应2小时。反应液中加入50mL二氯甲烷，用饱和碳酸钠溶液(50mL×2)洗涤，有机相减压浓缩，得到的残留物用硅胶薄层层析法(洗脱剂：B体系)纯化，得到N-(5-(4-(环丙基(甲基)氨基)哌啶-1-基)-2-((6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺9(30mg，淡黄色固体)，产率：57.6％。MS m/z(ESI)：669.9[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.56(s,1H),8.36(s,1H),8.10(s,1H),7.67(s,1H),7.24(m,1H),6.76(d,J＝9.0Hz,1H),6.51-6.53(m,1H),6.41(d,J＝7.5Hz,1H),6.21-6.27(m,1H),5.95(s,1H),5.76(d,J＝10.4Hz,1H),3.91(s,6H),3.74-3.81(m,2H),3.35(s,3H),2.83-2.86(m,1H),2.71-2.77(m,2H),2.55(s,3H),2.02-2.10(m,3H),1.80-1.82(m,2H),0.85-0.87(m,2H),0.68-0.84(m,2H)
生物学评价
测试例1、本发明化合物对FGFR激酶活性测定
以下方法用于测定本发明化合物在体外条件下对重组人源FGFR蛋白的激酶活性的抑制程度。本方法使用Cisbio公司的
Figure PCTCN2017085135-appb-000027
酪氨酸激酶试剂盒(货号62TK0PEB)，该试剂盒原理基于时间分辨荧光能量共振转移(TF-FRET)，通过测定FGFR蛋白介导的生物素化的多肽底物的磷酸化程度来反映化合物对FGFR激酶活性的抑制强弱。详细实验操作可参考试剂盒说明书。重组人源FGFR蛋白购于Carna bioscience(日本，货号分别为FGFR1#08-133，FGFR2#08-134，FGFR3#08-135，FGFR4#08-136)。
将实验流程简述如下：受试化合物首先溶解于DMSO中制备为贮存液，随后以试剂盒中提供的缓冲液进行梯度稀释，受试化合物在反应体系中的终浓度范围为10μM～0.1nM。测试所用的ATP溶液(生工生物工程(上海)股份有限公司，A600311)的浓度为预先测定的对应每个FGFR亚型的ATP Km值浓度，FGFR1～4对应的ATP Km值浓度分别为100μM，40μM，40μM和120μM。反应在384孔微孔板中进行，首先向孔中加入化合物和一定量的FGFR蛋白，并在室温下孵育5-30分钟，随后向反应液中加入ATP溶液和生物素化的多肽底物溶液，并在室温下振荡孵育50分钟。随后向反应中加入偶联有铕系元素化合物的抗磷酸化酪氨酸抗体和偶联有修饰化的别藻蓝蛋白XL665的链酶亲和素，并在室温下继续振荡孵育1小时。孵育结束后，在酶标仪以TF-FRET模式上测定各孔在激发波长为304nm，发射波长为620nM和665nM的荧光强度值。通过与对照组(0.1％DMSO)的荧光强度比值进行比较计算化合物在各浓度下的百分比抑制率，并通过GraphPad Prism 5软件以化合物浓度对数值-抑制率进行非线性回归分析，或得化合物的IC50值，见表1。
表1本发明化合物对FGFR酶活性抑制的IC50数据
Figure PCTCN2017085135-appb-000028
从表1可以看出，本发明的化合物对FGFR4的抑制作用较好，选择性优于FGFR1、FGFR2和FGFR3，且本发明化合物对于FGFR4的抑制活性优于WO2015057938的实施例108的化合物(其按照WO2015057938的实施例108制备并鉴定)。
测试例2、本发明化合物对肝癌细胞Huh7活性测定
以下方法用于测定本发明化合物对肿瘤细胞增殖的影响。针对FGFR4亚型，采用肝癌细胞Huh7(购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)进行化合物抑制肝癌细胞活性测定，Huh7细胞培养于含10％胎牛血清、100U青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM培养基中。培养在37℃，5％CO2培养箱内。肝癌细胞活性通过采用Cell Counting Kit-8试剂盒(Dojindo，东仁化学科技)来进行测定。
实验方法按照试剂盒说明书的步骤操作，简述如下：受试化合物首先溶解于DMSO中制备为贮存液，随后以对应细胞的培养基进行梯度稀释，配制成测试样品，化合物的终浓度范围在30μM-0.01nM。将处于对数生长期的肿瘤细胞以适宜的密度接种至96孔细胞培养板中，在37℃，5％CO2培养箱内过夜后，加入测试化合物样品后继续培养细胞72小时。培养结束后，向每孔加入适宜体积的CCK-8检测液，并在37℃下孵育1～4小时，随后在酶标仪上读取样品各孔在450nM下的吸光度数值。通过与对照组(0.3％DMSO)的吸光度数值进行比较计算化合物在各浓度点的百分比抑制率，之后在GraphPad Prism 5软件中以化合物浓度对数-抑制率进行非线性回归分析，得到化合物抑制细胞增殖的IC50值，见表2。
表2本发明化合物对肝癌细胞Huh7活性抑制的IC50数据
Figure PCTCN2017085135-appb-000029
从表2可以看出，本发明的化合物对FGFR4异常的肝癌细胞具有显著增殖抑制作用，且优 于WO2015057938的实施例108化合物。
测试例3本发明化合物对人肝癌Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤的生长抑制作用的测试
1.实验目的
本测试用来评价连续22天，每天两次，口服或腹腔注射给予实施例5化合物以及WO2015057938的实施例108化合物对Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤的生长抑制作用。
2.受试物配制
2.1空白给药制剂配制：
配制适量体积的含有5％DMSO、10％PEG 300、8％Tween 80和77％生理盐水(v/v)的制剂作为空白组给药试液。
2.2WO2015057938的实施例108化合物给药制剂配制
称取适量WO2015057938的实施例108化合物，装入玻璃瓶中；加入适量体积DMSO，涡旋振荡使药物完全溶解，再加入适量体积的溶剂TPS(Tween80：PEG300：生理盐水＝8％：10％：77％(v/v/v)溶液)，涡旋振荡均匀，使DMSO:PEG300:Tween-80:生理盐水比例为5:10:8:77(v/v/v/v)，配制成浓度为2.5mg/mL的给药制剂。
2.3实施例5化合物腹腔注射给药制剂配制
称取适量实施例5化合物，装入玻璃瓶中；加入适量体积DMSO，涡旋振荡使药物完全溶解，再加入适量体积的溶剂TPS(Tween80:PEG300:生理盐水＝8％:10％:77％(v/v/v)溶液)，涡旋振荡均匀，使DMSO:PEG300:Tween-80:生理盐水比例为5:10:8:77(v/v/v/v)，配制成浓度为2.5mg/mL和5mg/mL的给药制剂。
2.4实施例5化合物口服给药制剂配制
称取600mg实施例5化合物，装入玻璃瓶中；加入适量体积3.92mL EtOH，加入9.8mL的PEG400，然后再加入5.88mL的1M HCl，涡旋振荡均匀，使EtOH:PEG400:水比例为20:50:30(v/v/v)，配制成浓度为30mg/mL的给药制剂。
3.实验动物
品种和品系：BALB/c裸鼠，SPF，雌性，7～9周龄(16～22克)，健康状况良好，45只，适应环境时间5～7天。合格证号：1140070017310，购买于北京维通利华实验动物技术有限公司。
4.肝癌细胞Huh7培养
第0天，Huh7细胞培养于含10％胎牛血清、100U青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM培养基中。培养在37℃，5％CO2培养箱内。接种前取对数生长期细胞，以0.25％胰蛋白酶消化后PBS(Phosphate Buffered Saline,磷酸盐缓冲液)洗涤，用不含血清的培养基重新悬浮细胞计数，调整细胞浓度至3.3×107cells/mL(1:1基质胶(Matrigel),PBS)。
5.动物接种及分组
每个小鼠在无菌状态下，右侧腋下皮下接种150μL细胞悬液(5.0×106cells/mouse)。接种后第12天，肿瘤长至体积200～300mm3左右时，选出肿瘤体积相近、形状较好的小鼠(形状尽量为单一圆球形，无不规则的形状或多个肿瘤聚在一起)每组9只，分为5组。
6.动物给药和观察
各组动物每天固定时间根据动物体重给予受试物1天2次(bid)，腹腔注射给药(ip)或是口服给药(po)，于分组当天(接种后第13天)，开始第一次给药，连续22天，并记录每天动物体重。
第1组，溶剂对照组，腹腔注射给予空白给药制剂，bid，给药体积为10mL/kg；第2组，腹腔注射给药WO2015057938的实施例108化合物，给药剂量为25mg/kg，每天两次(bid)；第3组和第4组，腹腔注射给药实施例5化合物，给药剂量分别为25mg/kg和50mg/kg，bid；第5组，灌胃给药实施例5化合物，给药剂量为300mg/kg，bid。
观察各组动物接种部位肿瘤的形成状况，每周2次用游标卡尺测量肿瘤结节的长径(Y)和短径(X)，并按如下公式计算：
肿瘤结节的体积(V)：V＝(X2Y)/2。
抗肿瘤活性的评价指标：肿瘤生长抑制率TGI(％)，相对肿瘤增殖率T/C(％)。
相对肿瘤体积(RTV)的计算公式为：
RTV＝100×TVt/TVinitial
其中，TVinitial为分组给药时测量到的肿瘤体积；TVt为给药期间每一次测量时的肿瘤体积。
相对肿瘤增殖率(％T/C)的计算公式为：
％T/C＝100％×(RTVT/RTVC)
其中，RTVT表示治疗组RTV；RTVC表示溶剂对照组RTV。
肿瘤生长抑制率TGI(％)的计算公式为：
TGI＝100％×[1－(TVt(T)－TVinitial(T))/(TVt(C)－TVinitial(C))]
其中，TVt(T)表示治疗组每次测量的肿瘤体积；TVinitial(T)表示分组给药时治疗组的肿瘤体积；TVt(C)表示溶剂对照组每次测量的肿瘤体积；TVinitial(C)表示分组给药时溶剂对照组的肿瘤体积。
瘤重抑瘤率IR(％)的计算公式为：
IR＝100％×(WC－WT)/WC
其中，WC表示对照组瘤重；WT表示治疗组瘤重。
动物体重下降率的计算公式为(结果见图3)：
动物体重下降率＝100％×(BWinitial－BWt)/BWinitial
其中，BWt表示给药期间每次测量的动物体重；BWinitial表示分组给药时的动物体重。
7.结果
WO2015057938的实施例108化合物和本发明实施例5化合物对肝癌Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤平均肿瘤体积变化图见图1；
WO2015057938的实施例108化合物和本发明实施例5化合物对肝癌Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤平均相对肿瘤体积变化图见图2。
WO2015057938的实施例108和本发明实施例5化合物对肝癌Huh7荷瘤BALB/c裸鼠体重变化图见图3。
表3本发明化合物对肝癌细胞Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤的生长抑制率(TGI％)
Figure PCTCN2017085135-appb-000030
表4本发明化合物对肝癌细胞Huh7荷瘤BALB/c裸鼠移植瘤的相对肿瘤增殖率T/C(％)
Figure PCTCN2017085135-appb-000031
表5.实验结束时各组动物瘤重及瘤重抑瘤率
Figure PCTCN2017085135-appb-000032
表6.给药期间各组动物体重及体重下降率
Figure PCTCN2017085135-appb-000033
由表3～6、图1～3可知，在25mg/kg(IP，bid)，50mg/kg(IP，bid)和300mg/kg(PO，bid)剂量下，本发明实施例5化合物在22天内对基于Huh-7细胞建立小鼠体内肿瘤模型具有明显的生长抑制作用，且无明显的体重变化。通过表3～6、附图1和附图2可知，在25mg，IP剂量下，实施例5的活性优于WO2015057938的实施例108的化合物。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (21)

  1. 一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
    Figure PCTCN2017085135-appb-100001
    其中：
    R1各自独立地选自烷基、卤素、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-NR7R8、-C(O)NR7R8、-C(O)R9、-C(O)OR9或-NR7C(O)R8，其中所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-NR7R8、-C(O)NR7R8、-C(O)R9、-C(O)OR9或-NR7C(O)R8的取代基所取代；
    R2选自如下基团：
    -NR4C(O)CR5＝CHR6或-NR4C(O)C≡CR5；
    R3选自螺杂环基，其中所述的螺杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、卤代烷氧基、-NR7R8、-C(O)NR7R8、-C(O)R9、-C(O)OR9或-NR7C(O)R8的取代基所取代；或者
    R3选自单环杂环基，其中所述的单环杂环基进一步被一个或多个选自环烷基或-NR7R8的取代基所取代；
    R4各自独立地选自氢原子或烷基，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、卤代烷氧基、-NR7R8、-C(O)NR7R8、-C(O)R9、-C(O)OR9或-NR7C(O)R8的取代基所取代；
    R5和R6各自独立地选自氢原子、烷基或卤素，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、卤代烷氧基、-NR7R8、-C(O)NR7R8、-C(O)R9、-C(O)OR9或-NR7C(O)R8的取代基所取代；
    R7、R8和R9各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-NR10R11、-C(O)NR10R11、-C(O)R12、-C(O)OR12或-NR10C(O)R11的取代基所取代；
    或者，R7和R8与相连接的N原子一起形成一个4～8元杂环基，其中4～8元杂环内含有一个或多个N、O、S(O)n原子，并且4～8元杂环上进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-NR10R11、-C(O)NR10R11、-C(O)R12、-C(O)OR12或-NR10C(O)R11的取代基所取代；
    R10、R11和R12各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；
    m为1、2、3或4；且
    n为0、1或2。
  2. 根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R3选自螺杂环基，其中所述的螺杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、卤代烷氧基、-NR7R8、-C(O)NR7R8、-C(O)R9、-C(O)OR9或-NR7C(O)R8的取代基所取代，R7、R8和R9的定义如权利要求1中所述。
  3. 根据权利要求1或2所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
    Figure PCTCN2017085135-appb-100002
    其中：R1～R3和m的定义如权利要求1中所述。
  4. 根据权利要求1至3任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R1选自卤素或烷氧基，优选为氯或甲氧基。
  5. 根据权利要求1至3任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R2为-NHC(O)CH＝CH2。
  6. 根据权利要求1至3任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R3选自单螺杂环基，优选为3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基，其中所述的单螺杂环基任选进一步被烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基的取代基所取代。
  7. 根据权利要求5所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R3选自3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基，其中所述的单螺杂环基任选进一步被烷基所取代，所述烷基优选为甲基或乙基取代。
  8. 根据权利要求5所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R3选自：
    Figure PCTCN2017085135-appb-100003
    R13各自独立地选自氢原子、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，优选为氢原子或烷基，所述烷基优选为乙基。
  9. 根据权利要求5所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R3选自4元～6元单环杂环基；优选为哌啶基或哌嗪基，其中所述的哌啶基或哌嗪基进一步被一个或多个选自环烷基或-NR7R8的取代基所取代，其中R7和R8的定义如权利要求1中所述。
  10. 根据权利要求9所述化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中所 述环烷基优选为C3-8元的环烷基，更优选为环丙基，所述R7和R8各自独立地优选为氢原子或烷基，所述烷基优选为甲基。
  11. 根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中所述的化合物包括：
    Figure PCTCN2017085135-appb-100004
  12. 一种根据权利要求1所述的式(I)化合物的制备方法，所述方法包括：
    Figure PCTCN2017085135-appb-100005
    通式(Ie)化合物与酰卤化合物，优选为X-C(O)CR5＝CHR6或X-C(O)C≡CR5反应，进一步脱去氨基保护基Ra得到通式(If)化合物；
    当R3中含有-NH2或-NH-时，-NH2或-NH-任选可以被N保护基团保护；所述N保护基团优选为-C(O)R9，更优选为叔丁氧基羰基；
    Figure PCTCN2017085135-appb-100006
    通式(If)化合物进一步脱去氨基保护基Rb得到通式(I)化合物；
    Figure PCTCN2017085135-appb-100007
    其中：
    Ra和Rb各自独立选自N保护基，优选为苯磺酰基、苄基氧羰基、甲酰基、三氟乙酰基和叔丁氧基羰基；更优选为苯磺酰基和叔丁氧基羰基；
    X为卤素；
    R1～R6、R9和m的定义如权利要求1中所述。
  13. 一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的根据权利要求1～11中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，及可药用的载体、赋形剂或它们的组合。
  14. 一种抑制FGFR4的方法，其中包括将所述的受体与根据权利要求1～11中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求13所述的药物组合物相接触。
  15. 根据权利要求1～11中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求13所述的药物组合物在制备FGFR4抑制剂的药物中的用途。
  16. 根据权利要求1～11中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求13所述的药物组合物在制备治疗FGFR4过渡表达的疾病的药物中的用途。
  17. 根据权利要求1～11中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求13所述的药物组合物在制备治疗FGF19扩增的疾病的药物中的用途。
  18. 根据权利要求1～11中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求13所述的药物组合物在制备治疗癌症药物中的用途，其中所述的癌症选自非小细胞肺癌、胃癌、多发性骨髓瘤、肝癌、胆管癌，优选为肝癌和胆管癌。
  19. 一种治疗癌症的方法，该方法包括给予需要治疗的患者有效剂量的根据权利要求1～11中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求13所述的药物组合物，其中所述的癌症选自非小细胞肺癌、胃癌、多发性骨髓瘤、肝癌、胆管癌，优选为肝癌和胆管癌。
  20. 一种治疗FGFR4过渡表达的疾病的方法，该方法包括给予需要治疗的患者有效剂量的根据权利要求1～11中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求13所述的药物组合物。
  21. 一种治疗FGF19扩增的疾病的方法，该方法包括给予需要治疗的患者有效剂量的根据权利要求1～11中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求13所述的药物组合物。
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