CN110959007B

CN110959007B - 作为acc抑制剂的化合物及其应用

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Publication number: CN110959007B
Application number: CN201880048775.2A
Authority: CN
Inventors: 王勇; 赵立文; 王亚洲; 全旭; 姜春环; 陈宏雁; 陈孟华; 李超; 廖业欣; 刘奇; 王琛; 王海; 杨圣伟; 郑国闯
Original assignee: Nanjing Sanhome Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Nanjing Sanhome Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2017-07-26
Filing date: 2018-07-25
Publication date: 2022-07-01
Anticipated expiration: 2038-07-25
Also published as: JP2020527160A; WO2019020041A1; TW201910338A; KR20200032158A; KR102418195B1; US20200165265A1; US11186587B2; CN109305976B; JP6919055B2; EP3660023B1; CN109305976A; EP3660023A1; CA3070525A1; CA3070525C; CN110959007A; EP3660023A4

Abstract

一类作为乙酰辅酶A羧化酶(ACC)抑制剂的化合物及其应用，具体地，提供式I所示的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药，它们的制备方法以及含有这些化合物的药物组合物和这些化合物或组合物用于治疗和/或预防ACC表达相关疾病，例如纤维化疾病、代谢性疾病、癌症或者组织增生类疾病的用途。该化合物对ACC具有良好的抑制活性，非常有望成为纤维化疾病、代谢性疾病、癌症或者组织增生类疾病的治疗药物。

Description

作为ACC抑制剂的化合物及其应用

技术领域

本发明属于医药化学领域，具体涉及一类作为乙酰辅酶A羧化酶(ACC)抑制剂的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，它们的制备方法以及含有这些化合物的药物组合物和这些化合物或组合物用于治疗和/或预防ACC表达相关疾病，例如纤维化疾病、代谢性疾病、癌症或者组织增生类疾病的用途。

背景技术

乙酰辅酶A羧化酶(ACC)是催化乙酰辅酶A反应生成丙二酰辅酶A的生物素酶，该催化反应是制约脂肪酸合成第一阶段的限速步骤。在哺乳动物中，ACC以两种组织特异性同功酶的形式存在，其中ACC1主要存在于脂质生成组织，如肝脏和脂肪，而ACC2主要存在于氧化组织，如肝脏、心脏和骨胳肌。ACC1和ACC2是由独立基因编码，虽然呈现不同的细胞分布，但二者共有75％的总体氨基酸序列一致性。在肝脏中，脂肪酸(FA)的合成和伸长是通过ACC1催化乙酰辅酶A生成的丙二酰基辅酶A，从而促使三酸甘油酯形成和极低密度脂蛋白(VLDL)产生。在合成脂肪酸能力有限的心脏和骨胳肌中，由ACC2形成的丙二酰基辅酶A发挥调控FA氧化的功能[Tong L,Harwood HJ Jr.J Cell Biochem.2006,99(6):1476-1788.]。

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪肝炎(NASH)被认为是肝脏代谢异常的两种表现，是目前最为常见的慢性肝病，而且其发病率正在逐年攀升。其中NASH可能会进一步发展为肝硬化和肝癌，可能引起由肝脏疾病引起的死亡。目前该类疾病缺乏有效的治疗策略，现有治疗药物仍然是以噻唑烷二酮类为代表的胰岛素增敏剂和抗氧化剂(如维生素E)，此外包括降脂药物、血管紧张素受体拮抗剂、多不饱和脂肪酸等，治疗效果非常有限。在目前的多项研究中，ACC1和ACC2被认为是有望治疗NAFLD和NASH的药物作用靶点[Geraldine Harriman,Jeremy Greenwood,Sathesh Bhat,et al.Proc Natl Acad SciU.S.A.2016,113(13):E1796-E1805.]。

对于靶向ACC途径的药物研究已有一定进展和研究基础，通过抑制ACC1和ACC2可以抑制肝脏细胞内脂肪的从头(de novo)合成，该治疗方案可显著降低肝脏脂肪含量和硬化程度，同时较早降低肝纤维化标志物水平。另有研究表明，对ACC1和ACC2同时抑制可降低肿瘤组织中重新产生FA的能力，具有抑制肿瘤细胞生长的作用[Svensson RU,Parker SJ,Eichner LJ，et al.Nat Med.2016,22(10):1108-1119.]。不过，仍然需要开发更优异的ACC抑制剂，以便获得活性更优且安全性更高的药物，从而用于治疗ACC介导的事件相关的疾病，如纤维化疾病、代谢性疾病、肿瘤和增生性疾病。

发明内容

本发明的一个目的是提供通式I所示的一类具有ACC抑制活性的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，

其中：

L选自亚烷基、3～8元亚环烷基、6～10元亚芳基、3～8元饱和或部分不饱和的含有1～3个杂原子的亚杂环烷基和7～13元含有1～3个杂原子的双环亚杂芳基，它们任选被一个或多个羟基、卤素、烷基、卤代烷基、氨基烷基、烷基氨基、烷氧基、氧代基团、烷基酰基、烯基、炔基、芳基和杂芳基取代；

R¹选自氢、卤素、羧基、卤代烷氧基、C(O)R³和S(O)₂R⁴，其中R³选自烷基、烷基氨基、3～8元环烷基、6～14元芳基、5～10元含有1～3个杂原子的杂芳基和4～10元含有1～3个杂原子的杂环烷基，它们任选被一个或多个羟基、烷基、羧基、卤素、卤代烷基、氨基烷基、烷基氨基、烷氧基、氧代基团、烷基酰基、烯基、炔基、芳基和杂芳基取代，R⁴为烷基、烷基氨基、3～8元环烷基、6～14元芳基、5～10元含有1～3个杂原子的杂芳基和4～10元含有1～3个杂原子的杂环烷基，它们任选被一个或多个烷基、卤素、卤代烷基、氨基烷基、烷基氨基、烷氧基、氧代基团、烷基酰基、烯基、炔基、芳基和杂芳基取代；

X不存在或为氧原子；

R²选自3～8元环烷基、4～10元含有1～3个杂原子的杂环烷基和7～13元饱和或部分不饱和的含有1～3个杂原子的双杂环基，它们任选被一个或多个羟基、烷基、卤代烷基、烷基酰基、环烷基酰基、烷酰基氨基、烷基砜基、氧代基团和5～8元含有1～3个杂原子的杂芳基取代，且当L为

时R²不为氧杂环丁基和四氢吡喃基；

n选自0、1、2和3，且当n为0时R²不为羟基环己基。

本发明的另一个目的是提供制备本发明的通式I的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物或前药的方法。

本发明的再一个目的是提供包含本发明的通式I的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物或前药和药学可接受的载体的组合物，以及包含本发明的通式I的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物或前药和另一种或多种ACC抑制剂的组合物。

本发明的还一个目的是提供本发明的通式I的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶、前药或药物组合物在制备用于抑制患者中的ACC表达相关疾病，例如纤维化疾病、代谢性疾病、肿瘤和增生性疾病的应用。

针对上述目的，本发明提供以下技术方案：

第一方面，本发明提供通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，

其中：

X不存在或为氧原子；

R²选自3～8元环烷基、4～10元含有1～3个杂原子的杂环烷基和7～12元饱和或部分不饱和的含有1～3个杂原子的双杂环基，它们任选被一个或多个羟基、烷基、卤代烷基、烷基酰基、环烷基酰基、烷酰基氨基、烷基砜基、氧代基团和5～8元含有1～3个杂原子的杂芳基取代，且当L为

时R²不为氧杂环丁基和四氢吡喃基；

n选自0、1、2和3，且当n为0时R²不为羟基环己基。

在一些优选的实施方案中，本发明的化合物为通式I的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中：

L选自亚C_1-8烷基、3～8元亚环烷基、6～14元亚芳基、3～8元饱和或部分不饱和的含有1～4个杂原子的亚杂环烷基和8～12元含有1～4个杂原子的双环亚杂芳基，它们任选被一个或多个羟基、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、C_1-6烷氧基、氧代基团、C_1-6烷基酰基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、6～10元芳基和5～12元杂芳基取代；

进一步优选地，L选自亚C_1-6烷基、3～6元亚环烷基、6～10元亚芳基、3～6元饱和或部分不饱和的含有1～3个杂原子的亚杂环烷基和8～10元含有1～3个杂原子的双环亚杂芳基，它们任选被一个或多个羟基、卤素、C_1-4烷基、卤代C_1-4烷基、氨基C_1-4烷基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷氧基、氧代基团、C_1-4烷基酰基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、苯基、萘基和5～8元杂芳基取代；

更一步优选地，L选自亚甲基、

亚苯基、氮杂亚环丁基和

它们任选被一个或多个羟基、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、三氟甲基、三氟乙基、氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、异丙基氨基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、氧代基团、甲酰基、乙酰基、丙酰基、异丙酰基、乙烯基、丙烯基、乙炔基、并炔基、苯基、萘基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、吡嗪基和嘧啶基取代。

R¹选自氢、氟、羧基、卤代C_1-6烷氧基、C(O)R³和S(O)₂R⁴；优选地，R¹选自氢、氟、羧基、氟乙基氧基、氯乙基氧基、溴乙基氧基、氟丙基氧基、氯丙基氧基、溴丙基氧基、氯丁基氧基、溴丁基氧基、氟丁基氧基、C(O)R³和S(O)₂R⁴。

R³选自C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、3～6元环烷基、6～10元芳基、5～8元含有1～3个杂原子的杂芳基和4～8元含有1～3个杂原子的杂环烷基，它们任选被一个或多个羟基、C_1-6烷基、羧基、卤素、卤代C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、C_1-6烷氧基、氧代基团、C_1-6烷基酰基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基、萘基和5～6元杂芳基取代；

进一步优选地，R³选自甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基、叔丁基、甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、异丙基氨基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、四氢吡咯基、四氢呋喃基、哌啶基、四氢吡喃基和吗啉基，它们任选被一个或多个羟基、甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基、叔丁基、羧基、氟、氯、溴、三氟甲基、三氟乙基、氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、异丙基氨基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、氧代基团、甲酰基、乙酰基、丙酰基、异丙酰基、乙烯基、丙烯基、乙炔基、并炔基、苯基、萘基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、吡嗪基和嘧啶基取代。

R⁴为C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、3～6元环烷基、6～10元芳基、5～8元含有1～2个杂原子的杂芳基和4～8元含有1～2个杂原子的杂环烷基，它们任选被一个或多个C_1-6烷基、卤素、卤代C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、C_1-6烷氧基、氧代基团、C_1-6烷基酰基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基和5～6元杂芳基取代；

进一步优选地，R⁴为甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、萘基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、氮杂环丁基、四氢吡咯基、四氢呋喃基、哌啶基、四氢吡喃基和吗啉基，它们任选被一个或多个C_1-4烷基、卤素、卤代C_1-4烷基、氨基C_1-4烷基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷氧基、氧代基团、C_1-4烷基酰基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、苯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、吡嗪基和嘧啶基取代。

R²选自3～6元环烷基、4～6元含有1～2个杂原子的杂环烷基和8～10元饱和或部分不饱和的含有1～2个杂原子的双杂环基，它们任选被一个或多个羟基、C_1-4烷基、卤代C_1-4烷基、C_1-4烷基酰基、C_1-4烷酰基氨基、C_1-4烷基砜基、3～6元环烷基酰基、氧代基团和5～6元含有1～3个杂原子的杂芳基取代，且当L为

时R²不为氧杂环丁基和四氢吡喃基；

进一步优选地，R²选自环己基、氮杂环丁基、哌啶基、

它们任选被一个或多个羟基、甲基、三氟甲基、三氟乙基、乙酰基、乙酰氨基、甲磺酰基、乙磺酰基、环己基甲酰基、氧代基团和咪唑基取代。

在一些实施方案中，根据本发明的通式I的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中所述式I具有如下式II的结构：

其中L、R¹、R²和X具有以上通式I中的定义。

在另一些实施方案中，根据本发明的通式I的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中所述式I具有如下式III的结构：

其中L、R¹、R²和X具有以上通式I中的定义。

在一些实施方案中，根据本发明的通式I的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中所述式I具有如下式IV的结构：

其中

R¹选自氢、卤素、羧基、卤代烷氧基、C(O)R³和S(O)₂R⁴，其中R³选自烷基、3～8元环烷基、6～10元芳基、5～8元含有1～3个杂原子的杂芳基和4～10元含有1～3个杂原子的杂环烷基，它们任选被一个或多个羟基、烷基、羧基、卤素、卤代烷基、氨基烷基、烷基氨基、烷氧基、氧代基团、烷基酰基、烯基、炔基、芳基和杂芳基取代，R⁴为烷基、烷基氨基、3～8元环烷基、6～14元芳基、5～10元含有1～3个杂原子的杂芳基和4～10元含有1～3个杂原子的杂环烷基，它们任选被一个或多个烷基、卤素、卤代烷基、氨基烷基、烷基氨基、烷氧基、氧代基团、烷基酰基、烯基、炔基、芳基和杂芳基取代；

X不存在或为氧原子；

n、p、q分别选自0、1、2和3；

M选自一个或多个羟基、烷基、氨基烷基、烷基氨基、烷氧基、烯基、炔基、卤代烷基、烷基酰基、环烷基酰基、烷酰基氨基、烷基砜基、氧代基团和5～8元含有1～3个杂原子的杂芳基，或者两个M与它们所连接的原子一起形成环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其任选被一个或多个羟基、烷基、氨基烷基、烷基氨基、烷氧基、烯基、炔基、卤代烷基、烷基酰基、环烷基酰基、烷酰基氨基、氧代基团取代。

在一些实施方案中，根据本发明的通式IV的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中L选自亚C_1-6烷基、3～6元亚环烷基、亚苯基、3～6元饱和或部分不饱和的含有1～3个杂原子的亚杂环烷基和8～10元含有1～3个杂原子的双环亚杂芳基，它们任选被一个或多个羟基、卤素、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、C_1-6烷氧基、氧代基团、C_1-6烷基酰基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、6～10元芳基和5～12元杂芳基取代；进一步优选地，L选自亚甲基、

亚苯基、氮杂亚环丁基和

在一些实施方案中，根据本发明的通式IV的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中R¹选自氢、氟、羧基、卤代C_1-6烷氧基、C(O)R³和S(O)₂R⁴；优选地，R¹选自氢、氟、羧基、氟乙基氧基、C(O)R³和S(O)₂R⁴，其中R³选自C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、3～6元环烷基、6～10元芳基、5～8元含有1～3个杂原子的杂芳基和4～8元含有1～3个杂原子的杂环烷基，它们任选被一个或多个羟基、C_1-6烷基、羧基、卤素、卤代C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、C_1-6烷氧基、氧代基团、C_1-6烷基酰基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基、萘基和5～6元杂芳基取代取代，R⁴为C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、3～6元环烷基、6～10元芳基、5～8元含有1～2个杂原子的杂芳基和4～8元含有1～2个杂原子的杂环烷基，它们任选被一个或多个C_1-6烷基、卤素、卤代C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、C_1-6烷氧基、氧代基团、C_1-6烷基酰基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基和5～6元杂芳基取代。

在一些实施方案中，根据本发明的通式IV的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中n、p、q分别选自0、1和2。

在一些实施方案中，根据本发明的通式IV的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中M选自一个或多个羟基、C_1-4烷基、氨基C_1-4烷基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、卤代C_1-4烷基、C_1-4烷基酰基、C_1-4烷酰基氨基、C_1-4烷基砜基、3～6元环烷基酰基、氧代基团和5～6元含有1～3个杂原子的杂芳基，或者两个M与它们所连接的原子一起形成3～8元环烷基、3～8元杂环烷基、3～8元芳基或3～8元杂芳基，其任选被一个或多个羟基、C_1-4烷基、氨基C_1-4烷基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、卤代C_1-4烷基、C_1-4烷基酰基、C_1-4烷酰基氨基、氧代基团取代；进一步优选地，M选自一个或多个羟基、甲基、氨基甲基、甲基氨基、甲氧基、乙烯基、乙炔基、三氟甲基、三氟乙基、乙酰基、乙酰氨基、甲磺酰基、乙磺酰基、环己基甲酰基、氧代基团和咪唑基，或者两个M与它们所连接的原子一起形成3～6元环烷基、3～6元杂环烷基、3～6元芳基或3～6元杂芳基，其任选被一个或多个羟基、C_1-3烷基、氨基C_1-3烷基、C_1-3烷基氨基、C_1-3烷氧基、C_2-3烯基、C_2-3炔基、卤代C_1-3烷基、C_1-3烷基酰基、C_1-3烷酰基氨基、氧代基团取代。

在一些具体的实施方案中，根据本发明的通式IV的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中L为

在一些具体的实施方案中，根据本发明的通式IV的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中R¹为

在一些具体的实施方案中，根据本发明的通式IV的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中n、p、q分别为1。

在一些具体的实施方案中，根据本发明的通式IV的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中结构

选自

在一些实施方案中，根据本发明的通式I的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中所述式I具有如下式V的结构：

其中

L选自3～8元亚环烷基、6～10元亚芳基、3～8元饱和或部分不饱和的含有1～3个杂原子的亚杂环烷基和7～13元含有1～3个杂原子的双环亚杂芳基，它们任选被一个或多个羟基、卤素、烷基、卤代烷基、氨基烷基、烷基氨基、烷氧基、氧代基团、烷基酰基、烯基、炔基、芳基和杂芳基取代；

X不存在或为氧原子；

n选自0、1、2和3；和

在一些实施方案中，根据本发明的通式V的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中L选自3～6元亚环烷基、亚苯基、3～6元饱和或部分不饱和的含有1～3个杂原子的亚杂环烷基和8～10元含有1～3个杂原子的双环亚杂芳基，它们任选被一个或多个羟基、卤素、C_1-4烷基、卤代C_1-4烷基、氨基C_1-4烷基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷氧基、氧代基团、C_1-4烷基酰基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、6～10元芳基和5～12元杂芳基取代；进一步优选地，L选自

亚苯基、氮杂亚环丁基和

在一些实施方案中，根据本发明的通式V的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中R¹选自氢、氟、羧基、卤代C_1-6烷氧基、C(O)R³和S(O)₂R⁴；优选地，R¹选自氢、氟、羧基、氟乙基氧基、C(O)R³和S(O)₂R⁴，其中R³选自C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、3～6元环烷基、6～10元芳基、5～8元含有1～3个杂原子的杂芳基和4～8元含有1～3个杂原子的杂环烷基，它们任选被一个或多个羟基、C_1-4烷基、羧基、卤素、卤代C_1-4烷基、氨基C_1-4烷基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷氧基、氧代基团、C_1-4烷基酰基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、苯基、萘基和5～6元杂芳基取代，R⁴为C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、3～6元环烷基、6～10元芳基、5～8元含有1～2个杂原子的杂芳基和4～8元含有1～2个杂原子的杂环烷基，它们任选被一个或多个C_1-6烷基、卤素、卤代C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、C_1-6烷氧基、氧代基团、C_1-6烷基酰基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基和5～6元杂芳基取代；

在一些实施方案中，根据本发明的通式V的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中n选自0、1和2。

在一些实施方案中，根据本发明的通式V的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中M选自一个或多个羟基、C_1-4烷基、氨基C_1-4烷基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、卤代C_1-4烷基、C_1-4烷基酰基、C_1-4烷酰基氨基、C_1-4烷基砜基、3～6元环烷基酰基、氧代基团和5～6元含有1～3个杂原子的杂芳基，或者两个M与它们所连接的原子一起形成3～8元环烷基、3～8元杂环烷基、3～8元芳基或3～8元杂芳基，其任选被一个或多个羟基、C_1-4烷基、氨基C_1-4烷基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、卤代C_1-4烷基、C_1-4烷基酰基、C_1-4烷酰基氨基、氧代基团取代；进一步优选地，M选自一个或多个羟基、甲基、氨基甲基、甲基氨基、甲氧基、乙烯基、乙炔基、三氟甲基、三氟乙基、乙酰基、乙酰氨基、甲磺酰基、乙磺酰基、环己基甲酰基、氧代基团和咪唑基，或者两个M与它们所连接的原子一起形成3～6元环烷基、3～6元杂环烷基、3～6元芳基或3～6元杂芳基，其任选被一个或多个羟基、C_1-3烷基、氨基C_1-3烷基、C_1-3烷基氨基、C_1-3烷氧基、C_2-3烯基、C_2-3炔基、卤代C_1-3烷基、C_1-3烷基酰基、C_1-3烷酰基氨基、氧代基团取代。

在一些具体的实施方案中，根据本发明的通式V的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中X为-O-。

在一些具体的实施方案中，根据本发明的通式V的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，其中

选自

本发明提供了以下具体化合物：

或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药。

另一方面，本发明提供本发明的通式化合物的制备方法：

a)式(1)的化合物与式(2)的化合物反应得到式(3)的中间体；

b)式(3)的中间体经常规反应得到通式(I)的化合物。

其中，步骤b)的常规反应包括但不限于如下的反应，如将式(3)的中间体经过溴代反应、Stille偶联反应、水解反应、缩合反应得到通式(I)的化合物等。

其中，L、X、R¹和R²具有通式I中的含义；R⁵选自氢或溴；在制备过程中，R¹和R²必要时有保护基，例如甲基、乙基、叔丁基、乙酰基、叔丁氧羰基等保护基。

第三方面，本发明提供药物组合物，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药和药学上可接受的载体。

在一些实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，还包含选自下列组成的一种或多种：其它ACC抑制剂、胆汁酸螯合剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HMG-CoA合成酶抑制剂、胆固醇吸收抑制剂、酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶(ACAT)抑制剂、CETP抑制剂、角鲨烯合成酶抑制剂、角鲨烯环氧酶抑制剂、PPAR-α激动剂、PPAR-γ激动剂、PPAR-δ部分激动剂、PPAR-α/γ激动剂、双胍类、ASK1抑制剂、FXR受体调节剂、LXR受体调节剂、脂蛋白合成抑制剂、肾素-血管收缩素系统抑制剂、三酸甘油酯合成抑制剂、低密度脂蛋白受体诱导剂、微粒体三酸甘油酯传递抑制剂、5-LO或FLAP抑制剂、烟酸、利尿剂、β-肾上腺素激导性阻断剂、钙通道阻断剂、血管收缩素转化酶(ACE)抑制剂、中性肽链内切酶抑制剂、内皮素拮抗剂、血管舒张剂、血管收缩素II受体拮抗剂、α/β肾上腺素激导性阻断剂、α1阻断剂、α2激动剂、醛固酮抑制剂、盐皮质激素受体抑制剂、肾素抑制剂、血管生成素2结合剂、DGAT-1抑制剂、AZD7687、LCQ908、DGAT-2抑制剂、PDE-10抑制剂、AMPK活化剂、磺酰脲、α-淀粉酶抑制剂、α-葡糖苷酶抑制剂、GLP-1调节剂、SIRT-1抑制剂、胰岛素促泌素、A2拮抗剂、JNK抑制剂、葡糖激酶活化剂、胰岛素、胰岛素模拟物、肝糖磷酸化酶抑制剂、VPAC2受体激动剂、SGLT2抑制剂、升糖素受体调节剂、GPR119调节剂、FGF21衍生物、TGR5(GPBAR1)受体激动剂、GPR40激动剂、GPR120激动剂、烟酸受体(HM74A)活化剂、SGLT1抑制剂、肉碱棕榈酰基转移酶抑制剂、果糖1，6-二磷酸酶抑制剂、醛糖还原酶抑制剂、盐皮质激素受体抑制剂、TORC2抑制剂、CCR2抑制剂、CCR5抑制剂、PKC抑制剂、脂肪酸合成酶抑制剂、丝氨酸棕榈酰基转移酶抑制剂、GPR81调节剂、GPR39调节剂、GPR43调节剂、GPR41调节剂、GPR105调节剂、Kv1.3抑制剂、视黄醇结合蛋白4抑制剂、糖皮质激素受体调节剂、生长抑素受体抑制剂、PDHK2抑制剂、PDHK4抑制剂、MAP4K4抑制剂、IL1-β调节剂、RXR-α调节剂、11-β-羟基类固醇脱氢酶1抑制剂、SCD-1抑制剂、MCR-4激动剂、CCK-A激动剂、单胺再吸收抑制剂、β-3-肾上腺素激导性受体激动剂、多巴胺受体激动剂、黑素细胞刺激激素和其类似物、5-HT2C激动剂、黑色素浓集激素拮抗剂、瘦素、瘦素类似物、瘦素激动剂、甘丙胺素拮抗剂、脂肪酶抑制剂、减食欲剂、NPY拮抗剂、PYY3-36(和其类似物)、BRS3调节剂、拟甲状腺素剂、脱氢表雄甾酮、糖皮质激素激动剂或拮抗剂、食欲激素受体拮抗剂、人类刺鼠相关蛋白(AGRP)抑制剂、H3拮抗剂或反向激动剂、神经介素U激动剂、MTP/ApoB抑制剂、CB1受体拮抗剂或反向激动剂、胃内激素激动剂或拮抗剂、调酸素和其类似物、单胺吸收抑制剂等。

在一些实施方案中，本发明提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药及包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药的药物组合物，所述化合物或药物组合物在制备用于抑制患者中的ACC表达相关疾病，例如纤维化疾病、代谢性疾病、肿瘤和增生性疾病的应用。

可以将本发明的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于经口途径，皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下和鼻内。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过口服，通过输注或推注，通过经上皮或皮肤黏膜(例如口腔黏膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。

第四方面，本发明提供本发明通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物、结晶或前药，或包含其的药物组合物在制备治疗ACC表达相关疾病，例如纤维化疾病、代谢性疾病、肿瘤和增生性疾病的药物中的用途，其中所述纤维化疾病选自肝纤维化，其中所述代谢性疾病选自肥胖、糖尿病、非酒精性脂肪性肝病或非酒精性脂肪肝炎，其中所述肿瘤和增生性疾病选自肝癌、肾癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、乳头状甲状腺肿瘤、胆管癌、结肠癌、卵巢癌、恶性淋巴肿瘤，膀胱、前列腺和胰腺的癌和肉瘤，以及皮肤、结肠、甲状腺和卵巢的原发和复发性实体瘤。

在一些实施方案中，本发明涉及一种治疗纤维化疾病、代谢性疾病、肿瘤和增生性疾病的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、溶剂化物或前药，或包含其的药物组合物，其中所述的纤维化疾病选自肝纤维化，其中所述代谢性疾病选自肥胖、糖尿病、非酒精性脂肪性肝病或非酒精性脂肪肝炎，其中所述肿瘤和增生性疾病选自肝癌、肾癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、乳头状甲状腺肿瘤、胆管癌、结肠癌、卵巢癌、恶性淋巴肿瘤，膀胱、前列腺和胰腺的癌和肉瘤，以及皮肤、结肠、甲状腺和卵巢的原发和复发性实体瘤。

术语说明

除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。

本发明“卤素”是指氟、氯、溴、碘。

本发明“烷基”指直链或支链的饱和脂肪烃基团，优选含1至6个碳原子的直链或支链基团，进一步优选含有1至3个碳原子的直链或支链基团，非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基等。烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上。

本发明的“羧基”是指分子中含有羧基(-COOH)的基团。羧基的非限制性实例包括：甲酸基(-COOH)、乙酸基(-CH₂COOH)、丙酸基(-CH₂CH₂COOH)、

等。本发明的“卤代烷基”是指至少被一个卤素取代的烷基。

本发明的“羟基烷基”是指至少被一个羟基取代的烷基。

本发明的“烷氧基”是指-O-烷基。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、正丙氧基、异丙氧基、异丁氧基、仲丁氧基等。烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上。

本发明的“亚烷基”是指烷基从形式上去掉一个氢原子所剩下的基团，如亚甲基(-CH₂-或＝CH₂)，亚乙基(-CH₂-CH₂-)，亚丙基(-CH₂-CH₂-CH₂-)等，在本文中，所述的“亚C_1-6烷基”是指C_1-6烷基从形式上去掉一个氢原子所剩下的基团。

本发明的“环烷基”是指环状的饱和烃基。合适的环烷基可以为取代或未取代的具有3～8个碳原子的单环、二环或三环饱和烃基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基。

本发明的“含有1～3个杂原子的杂环烷基”是指环烷基的环上碳原子被1～3个杂原子取代后得到的基团，如氮杂环丁基

哌啶基

四氢吡喃基、吗啉基等，在本文中，所述的“4～10元含有1～3个杂原子的杂环烷基”是指4～10元环烷基的环上碳原子被1～3个杂原子取代后得到的基团，所述的“4～6元含有1～3个杂原子的杂环烷基”是指4～6元环烷基的环上碳原子被1～3个杂原子取代后得到的基团。

本发明的“含有1～3个杂原子的双杂环基”是指饱和或部分不饱和的双环烷基的环上碳原子被1～3个杂原子取代后得到的基团，如

等，在本文中，所述的“7～12元饱和或部分不饱和的含有1～3个杂原子的双杂环基”是指7～12元饱和或部分不饱和的双环烷基的环上碳原子被1～3个杂原子取代后得到的基团，所述的“8～10元饱和或部分不饱和的含有1～2个杂原子的双杂环基”是指8～10元饱和或部分不饱和的双环烷基的环上碳原子被1～2个杂原子取代后得到的基团。

本发明的“亚环烷基”是指环烷基从形式上去掉一个氢原子所剩下的基团，如亚环丙基

亚环丁基

亚环己基

等，在本文中，所述的“3～8元亚环烷基”是指3～8元环烷基从形式上去掉一个氢原子所剩下的基团，所述的“3～6元亚环烷基”是指3～6元亚环烷基从形式上去掉一个氢原子所剩下的基团。

本发明的“含有1～3个杂原子的亚杂环烷基”是指亚环烷基的环上碳原子被1～3个杂原子取代后得到的基团，如氮杂亚环丁基

氮杂亚环己基

等，在本文中，所述的“3～8元饱和或部分不饱和的含有1～3个杂原子的亚杂环烷基”是指3～8元饱和或不饱和的含有1～3个杂原子的环烷基从形式上去掉一个氢原子所剩下的基团，所述的“3～6元饱和或部分不饱和的含有1～3个杂原子的亚杂环烷基”是指3～6元饱和或不饱和的含有1～3个杂原子的环烷基从形式上去掉一个氢原子所剩下的基团。

本发明的“芳基”是指芳烃分子的芳核碳上去掉一个氢原子后所剩下的基团，如苯基、萘基等。

本发明的“亚芳基”是指芳基从形式上去掉一个氢原子所剩下的基团，如亚苯基

和亚萘基等。

本发明的“杂芳基”是指芳基的环上碳原子被杂原子取代后得到的基团，如咪唑基

吡唑基、吡啶基、吲哚基等。

本发明的“亚杂芳基”是指杂芳基的芳核上去掉一个氢原子后所剩下的基团，如

等。

本发明的化合物中的“氢”、“碳”、“氧”包括其所有同位素。同位素应理解为包括具有相同原子数但具有不同质量数的那些原子。举例来说，氢的同位素包括氕、氚和氘，碳的同位素包括¹³C和¹⁴C，氧的同位素包括¹⁶O和¹⁸O等。

具体实施方式

下面代表性的实施例是为了更好地说明本发明，而非用于限制本发明的保护范围。以下实施例中使用的材料如无特殊说明均为商购获得。

实施例1:3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁烷-1-甲酸

步骤1:3-氧代环丁烷甲酸乙酯的制备

在1000mL单口瓶中，将3-氧代环丁烷基羧酸(25.0g,219.1mmol)溶于甲苯(500mL)，加入原乙酸三乙酯(106.6g,657.3mmol)，在110℃下加热搅拌5h。反应结束后，冷却至室温，加入稀盐酸(1.0M,20mL)淬灭反应。分离有机层，依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得标题化合物24.9g，无需纯化，直接投下一步反应。

步骤2:3-(二苄基氨基)环丁烷甲酸乙酯的制备

将3-氧代环丁烷甲酸乙酯(20.0g,140.7mmol)溶于无水四氢呋喃(800mL)，依次加入冰醋酸(80mL)，二苄胺(30.5g,154.8mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(59.6g,281.4mmol)，室温搅拌过夜。反应结束后，过滤，滤液浓缩，再加入二氯甲烷(600mL)溶解，依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝8:1)，得标题化合物28.7g，收率63％。MS(ESI)m/z 324.2[M+H]⁺。

步骤3:3-氨基环丁烷甲酸乙酯的制备

将3-(二苄基氨基)环丁烷甲酸乙酯(25.0g,77.3mmol)溶于甲醇(1000mL)，依次加入10％Pd/C(6.2g)，甲酸铵(48.8g,773.9mmol)，在70℃下加热1.5h。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩，加入乙酸乙酯(500mL)，饱和氯化钠水溶液洗涤两次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，无需纯化，得标题化合物。直接投下一步反应。MS(ESI)m/z144.1[M+H]⁺。

步骤4:2-(3-(3-(乙氧基羰基)环丁基)脲基)-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯的制备

于-5℃低温浴，将2-胺基-4-甲基-3-甲酸乙酯(12.2g,65.6mmol)及三乙胺(26.6g,262.4mmol)的无水二氯甲烷(450mL)溶液滴至三光气(19.5g,65.6mmol)的无水二氯甲烷(150mL)溶液中。滴毕，室温搅拌1h，再加入3-氨基环丁烷甲酸乙酯(9.4g,65.6mmol)，室温搅拌过夜。反应结束后，浓缩，加入水(400mL)，乙酸乙酯萃取(400mL×3)，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝40:1)，得标题化合物14.2g，收率61％。MS(ESI)m/z 355.1[M+H]⁺。

步骤5:3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁烷甲酸乙酯的制备

在500mL两口瓶中，将2-(3-(3-(乙氧基羰基)环丁基)脲基)-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯(13.0g,36.7mmol)溶于无水四氢呋喃(230mL)，在氩气保护下，加入氢化钠(1.3g,55.0mmol)，然后在110℃下加热回流2h。反应结束后，冷却至室温，加入饱和氯化铵溶液(300mL)淬灭，乙酸乙酯萃取(400mL×3)，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝80:1)，得标题化合物5.8g，收率51％。MS(ESI)m/z 309.1[M+H]⁺。

步骤6:3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁烷甲酸乙酯的制备

在250mL三口瓶中，加入3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁烷甲酸乙酯(2.0g,6.4mmol)及三苯基膦(5.1g,19.4mmol)，氩气保护，加入无水四氢呋喃(100mL)溶解，再依次加入2-(2-甲氧基苯基)-2-(4-四氢吡喃氧基)乙醇(1.6g,6.5mmol)及偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)(3.9g,19.4mmol)，在40℃下搅拌过夜。反应结束后，直接硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝6:1)，得标题化合物1.7g，收率48％。MS(ESI)m/z543.2[M+H]⁺。

步骤7:3-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁烷-1-甲酸乙酯的制备

在100mL单口瓶中，将3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁烷甲酸乙酯(0.725g,1.336mmol)溶于氯仿(20mL)，依次加入N-溴代丁二酰亚胺(0.262g,1.470mmol)及偶氮二异丁腈(0.022g,0.134mmol)，室温搅拌2h。反应结束后，直接硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得标题化合物0.778g，收率94％。MS(ESI)m/z 621.1[M+H]⁺。

步骤8:3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁烷甲酸乙酯的制备

在25mL两口瓶中，加入3-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁烷-1-甲酸乙酯(0.753g,1.212mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.111g,0.121mmol)及2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(0.231g,0.485mmol)，氩气保护，然后加入无水甲苯(9mL)，再加入2-三正丁锡基噁唑(0.870g,2.423mmol)，在90℃下搅拌过夜。反应结束后，直接硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得标题化合物0.364g，收率49％。MS(ESI)m/z 610.2[M+H]⁺。

步骤9:3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁烷甲酸的制备

在25mL单口瓶中，将3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁烷甲酸乙酯(0.200g,0.328mmol)溶于乙醇(10mL)，加入氢氧化钠水溶液(1.0M,4.0mL)，室温反应0.5h。反应结束后，浓缩去除大部分乙醇，稀盐酸(1.0M)酸化至pH 3～4，乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机层，饱和氯化钠水溶液洗涤两次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝25:1)，得标题化合物0.074g，收率39％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.71(d,1H),7.55(dd,1H),7.32–7.27(m,1H),7.22(d,1H),7.02(t,1H),6.86(d,1H),5.44–5.38(m,1H),5.36–5.30(m,1H),4.22–4.03(m,2H),3.86(s,3H),3.79–3.65(m,2H),3.47–3.39(m,1H),3.37–3.28(m,2H),3.19–3.07(m,2H),3.07–2.95(m,1H),2.88(s,3H),2.75–2.65(m,2H),1.77–1.69(m,2H),1.58–1.50(m,1H),1.43–1.35(m,1H).MS(ESI)m/z 580.1[M-H]^-。

实施例2:3-(3,3-二氟环丁基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2–((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

步骤1:2-(3-(3,3-二氟环丁胺基)脲基)-4-甲基-噻吩-3-甲酸乙酯的制备

于-5℃低温浴，将2-胺基-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯(5.786g,19.5mmol)和三乙胺(11.84g,117mmol)的无水二氯甲烷(110mL)溶液滴加至三光气(5.786g,19.5mmol)的无水二氯甲烷(50mL)溶液中。滴完0℃搅拌1.5h，移至室温。加入3,3-二氟环丁胺(2.8g,19.5mmol)，反应过夜。浓缩，硅胶柱层析，再用乙酸乙酯打浆，产品溶于乙酸乙酯。母液浓缩得标题化合物4.5g，收率80％。MS(ESI)m/z 319.1[M+H]⁺。

步骤2:3-(3,3-二氟环丁基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备

在250mL两口瓶中，将2-(3-(3,3-二氟环丁胺基)脲基)-4-甲基-噻吩-3-甲酸乙酯(2.5g,7.86mmol)溶于无水四氢呋喃(20mL)和无水N,N-二甲基甲酰胺(15mL)，在氩气保护下，加入氢化钠(0.472g,11.79mmol)，然后在110℃下加热回流2h。反应结束后，冷却至室温，加入饱和氯化铵溶液(40mL)淬灭，乙酸乙酯萃取(40mL×3)，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)，得标题化合物1.5g，收率70％。MS(ESI)m/z 273.2[M+H]⁺。

步骤3:3-(3,3-二氟环丁基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备

将3-(3,3-二氟环丁基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(1.5g,5.5mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，加入无水碳酸钾(2.277g,16.5mmol)及4-(2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)四氢-2H-吡喃(2.079g,6.6mmol)，在130℃下加热搅拌过夜。反应结束后，加入水(30mL)，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)，得标题化合物1.9g，收率68％。MS(ESI)m/z507.2[M+H]⁺。

步骤4:3-(3,3-二氟环丁基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-溴噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备

将3-(3,3-二氟环丁基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.9g,1.78mmol)溶于氯仿(250mL)，依次加入N-溴代丁二酰亚胺(0.348g,1.96mmol)及偶氮二异丁腈(0.025g,0.154mmol)，室温搅拌2h。反应结束后，直接硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝6:1)，得标题化合物0.9g，收率87％。MS(ESI)m/z 585.1[M+H]⁺。

步骤5:3-(3,3-二氟环丁基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备

氩气保护下，向3-(3,3-二氟环丁基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-溴噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.40g,0.685mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.063g,0.0685mmol)及2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(0.131g,0.274mmol)中加入无水甲苯(7mL)，再加入2-三正丁锡基噁唑(0.492g,1.37mmol)，在90℃下搅拌5h。反应结束后，直接硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)，得标题化合物0.200g，收率51％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.71(d,1H),7.55(dd,1H),7.31(dd,1H),7.22(s,1H),7.03(t,1H),6.86(d,1H),5.41(t,1H),5.37–5.29(m,1H),4.20–4.07(m,2H),3.86(s,3H),3.79–3.72(m,1H),3.72–3.64(m,1H),3.64–3.48(m,2H),3.46–3.40(m,1H),3.38–3.27(m,2H),2.95–2.81(m,2H),2.89(s,1H),1.78–1.68(m,2H),1.55–1.48(m,1H),1.42–1.34(m,1H).MS(ESI)m/z 574.2[M+H]⁺。

实施例3:(1R,3r)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-1-甲基环丁烷甲酸的制备

步骤1:3-(二苄基氨基)-1-甲基环丁烷甲酸甲酯的制备

在1000mL单口瓶中，将1-甲基-3-氧代-环丁甲酸甲酯(4.95g,34.8mmol)溶于无水四氢呋喃(200mL)中，依次加入冰醋酸(22mL)，二苄胺(7.56g,38.3mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(14.8g,69.7mmol)，并在室温下搅拌过夜。反应结束后，过滤，滤液浓缩，加入二氯甲烷(300mL)溶解，依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝8:1)，得标题化合物10.4g，收率92％。MS(ESI)m/z 324.2[M+H]⁺。

步骤2:3-氨基-1-甲基环丁烷甲酸甲酯的制备

在2000mL单口瓶中，将3-(二苄基氨基)-1-甲基环丁烷甲酸甲酯(10.4g,32.2mmol)溶于甲醇(410mL)，依次加入6.46g 10％Pd/C，甲酸铵(20.3g,321.6mmol)，在70℃下加热1.5h。冷却至室温，硅藻土过滤，滤液浓缩，加入乙酸乙酯(400mL)，饱和氯化钠水溶液洗涤两次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得标题化合物，直接投下一步。MS(ESI)m/z 144.2[M+H]⁺。

步骤3:(R)-4-(2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)四氢-2H-吡喃的制备

将(R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙醇(0.600g,2.38mmol)与四溴化碳(1.18g,3.57mmol)置于50mL单口瓶中，氮气保护，加入无水四氢呋喃(10mL)，在氮气流下加入三苯基膦(0.936g,3.57mmol)，室温搅拌过夜。反应结束后，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝12:1)，得标题化合物0.610g，收率81％。MS(ESI)m/z 315.0[M+H]⁺。

步骤4:2-(3-(3-(甲氧基羰基)-3-甲基环丁基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备

在1000mL单口瓶中，将三光气(9.56g,32.2mmol)溶于无水二氯甲烷(70mL)，并置于-5℃下。将2-胺基-4-甲基噻吩-3-甲酸甲酯(5.97g,32.2mmol)及三乙胺(13.0g,128.8mmol)溶于无水二氯甲烷(140mL)，滴加入上述三光气的二氯甲烷溶液中。滴毕，在室温下搅拌1h，加入3-氨基-1-甲基环丁基甲酸甲酯(4.6g,32.2mmol)，室温搅拌过夜。反应结束后，浓缩，加入水(250mL)，乙酸乙酯萃取(250mL×3)，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝40:1)，得标题化合物5.2g，收率46％。MS(ESI)m/z355.1[M+H]⁺。

步骤5:1-甲基-3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁烷甲酸甲酯的制备

将2-(3-(3-(甲氧基羰基)-3-甲基环丁基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯(3.34g,9.42mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(77mL)，加入无水碳酸铯(7.67g,23.6mmol)，并置于80℃下加热搅拌4h，反应结束后，冷却至室温，加入乙酸乙酯(100mL)，饱和氯化钠溶液洗涤(100mL×3)，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，乙酸乙酯打浆纯化，得标题化合物1.3g，收率45％。MS(ESI)m/z 309.1[M+H]⁺。

步骤6:(1R,3r)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2–((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基-1-甲基环丁烷甲酸甲酯的制备

在100mL两口瓶中，将1-甲基-3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)环丁烷甲酸甲酯(0.523g,1.70mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(13mL)，加入无水碳酸钾(0.703g,5.09mmol)及(R)-4-(2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)四氢-2H-吡喃(0.534g,1.7mmol)，在120℃下加热搅拌过夜。反应结束后，加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(60mL×3)，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得标题化合物0.286g，收率30％。

步骤7:(1R,3r)-3-(6-溴-1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2–((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-1-甲基环丁烷甲酸甲酯的制备

在50mL单口瓶中，将(1R,3r)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2–((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基-1-甲基环丁烷甲酸甲酯(0.286g,0.527mmol)溶于氯仿(8mL)，依次加入N-溴代丁二酰亚胺(0.103g,0.580mmol)及偶氮二异丁腈(0.009g,0.053mmol)，在室温下搅拌2h。反应结束后，直接硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝7:1)，得标题化合物0.244g，收率74％。

步骤8:(1R,3r)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-1-甲基环丁烷甲酸甲酯的制备

在25mL两口瓶中，加入(1R,3r)-3-(6-溴-1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2–((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-1-甲基环丁烷甲酸甲酯(0.244g,0.392mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.036g,0.039mmol)及2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(0.075g,0.157mmol)，氩气保护，加入无水甲苯(5mL)，加入2-三正丁基锡基噁唑(0.282g,0.785mmol)，在90℃下搅拌过夜。反应结束后，直接硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得标题化合物0.175g，收率73％。

步骤9:(1R,3r)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-1-甲基环丁烷甲酸的制备

在25mL单口瓶中，将(1R,3r)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-1-甲基环丁烷甲酸甲酯(0.175g,0.287mmol)溶于甲醇(6mL)，加入氢氧化钠水溶液(1.0M,6mL)，在室温下反应1h。反应结束后，稀盐酸(2M)调节pH值至弱酸性，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机层，并饱和氯化钠水溶液洗涤两次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，经硅胶板层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)，得标题化合物0.068g，收率40％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.70(s,1H),7.57(dd,1H),7.32–7.27(m,1H),7.24–7.20(m,1H),7.02(t,1H),6.85(d,1H),5.65–5.55(m,1H),5.45–5.39(m,1H),4.17–4.04(m,2H),3.90–3.83(m,3H),3.79–3.72(m,1H),3.72–3.64(m,1H),3.47–3.41(m,1H),3.37–3.29(m,2H),3.05–2.96(m,2H),2.92–2.87(m,3H),2.84–2.77(m,2H),1.73(dd,2H),1.59(s,3H),1.55–1.49(m,1H),1.40–1.35(m,1H).MS(ESI)m/z 594.2[M-H]^-。

实施例4:(1S,3s)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-1-甲基环丁烷甲酸

步骤1:(1S,3s)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2–((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基-1-甲基环丁烷甲酸甲酯的制备

在100mL两口瓶中，将1-甲基-3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,2-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)环丁烷甲酸甲酯(0.523g,1.70mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(13mL)，加入无水碳酸钾(0.703g,5.09mmol)及(R)-4-(2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)四氢-2H-吡喃(0.534g,1.7mmol)，在120℃下加热搅拌过夜。反应结束后，加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(60mL×3)，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得标题化合物0.272g，收率28％。

步骤2:(1S,3s)-3-(6-溴-1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2–((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-1-甲基环丁烷甲酸甲酯的制备

在50mL单口瓶中，将(1S,3s)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2–((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基-1-甲基环丁烷甲酸甲酯(0.272g,0.501mmol)溶于氯仿(8mL)中，再分别加入N-溴代丁二酰亚胺(0.098g,0.551mmol)及偶氮二异丁腈(0.009g,0.053mmol)，在室温下搅拌2h。反应结束后，直接硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝7:1)，得标题化合物0.231g，收率74％。

步骤3:(1S,3s)-3-(1–((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-1-甲基环丁烷甲酸甲酯的制备

在25mL两口瓶中，加入(1S,3s)-3-(6-溴-1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2–((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-1-甲基环丁烷甲酸甲酯(0.227g,0.365mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.034g,0.036mmol)及2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(0.070g,0.146mmol)，并氩气保护，然后加入无水甲苯(4mL)，再加入2-三正丁锡基噁唑(0.262g,0.730mmol)，在90℃下搅拌过夜。反应结束后，直接硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得标题化合物0.159g，收率71％。

步骤4:(1S,3s)-3-(1-((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-1-甲基环丁烷甲酸的制备

在25mL单口瓶中，将(1S,3s)-3-(1–((R)-2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-1-甲基环丁烷甲酸甲酯(0.159g,0.261mmol)溶于甲醇(6mL)，加入氢氧化钠水溶液(1.0M,6mL)，在室温下反应1h。反应结束后，稀盐酸(2M)调节pH值至弱酸性，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机层，并饱和氯化钠水溶液洗涤两次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶板层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)，得标题化合物0.030g，收率19％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.72(d,1H),7.55–7.50(m,1H),7.32–7.27(m,1H),7.23(d,1H),7.01(t,1H),6.87(d,1H),5.76–5.65(m,1H),5.41(dd,1H),4.26–4.16(m,1H),4.13–4.02(m,1H),3.87(s,3H),3.78–3.65(m,2H),3.47–3.40(m,1H),3.36–3.22(m,4H),2.89(s,3H),2.34–2.25(m,2H),1.76–1.71(m,2H),1.54(s,3H),1.44–1.35(m,2H).MS(ESI)m/z 594.2[M-H]^-。

实施例5:1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

步骤1:7-甲基-8-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶的制备

将4-甲基-2-胺基吡啶(6.10g,40.0mmol)和氯乙醛(40％aq.,11.2g,143mmol)加入到乙醇(100mL)中，加热至100℃回流，12h后将反应液倒入水(200mL)中，碳酸氢钠饱和溶液调节pH至6～7，二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，乙酸乙酯重结晶得标题化合物5.30g，收率75％。LC-MS m/z 178.1[M+H]⁺。

步骤2:7-甲基-8-胺基咪唑并[1,2-a]吡啶的制备

将7-甲基-8-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶(3.74g,20.0mmol)加入到乙醇/水(v/v＝9:1,100mL)的混合液中，加入铁粉(11.0g,200mmol)，滴加浓盐酸(3滴)，加热至100℃回流，2h后将反应液用硅藻土抽滤，滤液浓缩后用碳酸氢钠饱和溶液调节pH至6～7，二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩得标题化合物2.80g，收率95％。LC-MS m/z 148.2[M+H]⁺。

步骤3:2-氨基-5-溴-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯的制备

将2-氨基-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯(3.70g,20.0mmol)加入到二氯甲烷(50mL)中，冷却至-10℃。分批加入N-溴代丁二酰亚胺(3.70g,21.0mmol)至反应液中，1h后将反应液中加入到饱和碳酸氢钠溶液(100mL)中，乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩后直接投入下一步。LC-MS m/z 264.0[M+H]⁺。

步骤4:5-溴-4-甲基-2-(3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)脲基)噻吩-3-甲酸乙酯的制备

将三光气(0.740g,2.50mmol)加入到无水二氯甲烷(10mL)中，冷却至-10℃，滴加7-甲基-8-胺基咪唑并[1,2-a]吡啶(0.735g,5.0mmol)和三乙胺(1.50g,15.0mmol)的无水二氯甲烷溶液，滴毕，冰浴搅拌2h，滴加2-氨基-5-溴-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯(5.28g,20.0mmol)，滴毕，室温搅拌12h后，将反应液浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝1:0～10:1)得标题化合物0.9g，收率82％。LC-MS m/z 437.0[M+H]⁺。

步骤5:6-溴-5-甲基-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备

将5-溴-4-甲基-2-(3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)脲基)噻吩-3-甲酸乙酯(0.90g,2.0mmol)和碳酸铯(1.60g,5mmol)加入到乙醇(20mL)中，加热至100℃回流，3h后反应完毕，将反应液浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝1:0～10:1)得标题化合物0.70g，收率89％。LC-MS m/z 391.1[M+H]⁺。

步骤6:6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备

将6-溴-5-甲基-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.160g,0.40mmol)，4-(2-溴-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)四氢-2H-吡喃(0.251g,0.80mmol)，碳酸铯(0.325g,1.00mmol)加入到无水N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入碘化钾(0.005g)，加热至120℃，12h后将反应液倒入水(30mL)中，调节pH至6～7，乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1～1:3)得标题化合物0.030g，收率13％。LC-MS m/z 625.1[M+H]⁺。

步骤7:1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备

将6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.030g,0.05mmol)，2-(三丁基锡)噁唑(0.036g,0.10mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.009g,0.01mmol)，2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(0.019g,0.04mmol)加入到甲苯(2mL)中，氩气保护下加热至90℃，8h后将反应液浓缩，硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:2～1:4)得标题化合物0.020g，收率65％。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.14(t,1H),7.70(s,1H),7.62–7.52(m,2H),7.32–7.23(m,1H),7.23–7.12(m,2H),6.96–6.73(m,3H),5.01–4.88(m,1H),4.68–4.55(m,1H),4.27–4.11(m,1H),3.79(s,3H),3.75–3.52(m,2H),3.29–3.08(m,3H),2.88(s,3H),2.25(s,3H),1.77–1.65(m,1H),1.50–1.40(m,1H),1.39–1.27(m,2H).LC-MSm/z 614.2[M+H]⁺。

实施例6:3-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

步骤1:5-氨基-3-甲基噻吩-2,4-二甲酸二乙酯的制备

在1000mL单口瓶中，将乙酰乙酸乙酯(50.0g,384mmol)，氰基乙酸乙酯(43.4g,384mmol)，硫单质(12.3g,384mmol)溶于无水乙醇(300mL)中，缓慢滴加二乙胺(28.1g,384mmol)，滴毕，室温反应过夜。反应结束后，过滤，滤液倒入水(2.4L)中，有大量黄色固体出现，过滤，将两次过滤的滤饼用乙醇/水(v/v＝1:8)洗一次，在40℃下真空干燥，得标题化合物69.4g，收率70％。MS(ESI)m/z 258.1[M+H]⁺。

步骤2:5-(3-(1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)脲基)-3-甲基噻吩-2,4-二甲酸乙酯的制备

-5℃低温反应浴，将5-氨基-3-甲基噻吩-2,4-二甲酸二乙酯(45.0g,175mmol)及三乙胺(70.8g,700mmol)的无水二氯甲烷(750mL)溶液，滴加至三光气(51.9g,175mmol)的无水二氯甲烷(250mL)溶液中。滴毕，在室温下搅拌1h，再加入N-叔丁氧羰基-3-氨基环丁胺(30.1g,175mmol)，室温搅拌过夜。反应结束后，浓缩，加入水(600mL)，用乙酸乙酯(700mL×3)萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得标题化合物44.8g，收率56％。MS(ESI)m/z 456.2[M+H]⁺。

步骤3:3-(1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁基-3-基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸乙酯的制备

在1000mL两口瓶中，将5-(3-(1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)脲基)-3-甲基噻吩-2,4-二甲酸乙酯(28.5g,62.5mmol)溶于无水四氢呋喃(430mL)，在氩气保护下，加入氢化钠(2.25g,93.8mmol)，在110℃下加热回流2h。反应结束后，冷却至室温，加入饱和氯化铵溶液(400mL)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(400mL×3)，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得标题化合物20.1g，收率78％。MS(ESI)m/z410.2[M+H]⁺。

步骤4:3-(1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸的制备

在1000mL单口瓶中，将3-(1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁基-3-基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸乙酯(15.0g,36.6mmol)溶于甲醇(300mL)，加入氢氧化钠水溶液(4.0M,100mL)，室温搅拌过夜。反应结束后，浓缩去除大部分甲醇，在冰浴下，用浓盐酸调节pH值至弱酸性，用乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得标题化合物，直接投下一步反应。MS(ESI)m/z 380.1[M-H]^-。

步骤5:3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的制备

在500mL单口瓶中，将3-(1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(8.0g,21.0mmol)溶于N-甲基吡咯烷酮(160mL)中，加入无水碳酸钾(3.4g,25.2mmol)及无水醋酸银(4.2g,25.2mmol)，在110℃中加热2h。反应结束后冷却至室温，加水(300mL)淬灭，乙酸乙酯(200mL×3)萃取，有机层水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得标题化合物，直接投下一步反应。MS(ESI)m/z338.1[M+H]⁺。

步骤6:3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备

在250mL两口瓶中，加入3-(5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(4.0g,11.8mmol)及三苯基膦(9.3g,35.4mmol)，氩气保护，溶于无水四氢呋喃(100mL)，再依次加入2-(2-甲氧基苯基)-2-(4-四氢吡喃氧基)乙醇(3.0g,11.8mmol)及偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)(7.2g,35.4mmol)，在40℃下搅拌过夜。反应结束后，直接硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得标题化合物1.0g，收率15％。MS(ESI)m/z 572.2[M+H]⁺。

步骤7:3-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备

在100mL单口瓶中，将3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(0.800g,1.399mmol)溶于氯仿(25mL)，再依次加入N-溴代丁二酰亚胺(0.249g,1.399mmol)及偶氮二异丁腈(0.023g,0.140mmol)，室温搅拌2h。反应结束后，直接硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)，得标题化合物0.692g，收率76％。MS(ESI)m/z 650.2[M+H]⁺。

步骤8:3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备

在25mL两口瓶中，加入3-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(0.612g,0.941mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.086g,0.094mmol)及2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(0.179g,0.376mmol)，氩气保护，加入无水甲苯(9mL)，再加入2-三正丁锡基噁唑(0.676g,1.881mmol)，在90℃下搅拌过夜。反应结束后，直接硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得白色固体0.246g，收率41％。MS(ESI)m/z 639.2[M+H]⁺。

步骤9:3-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备

在25mL单口瓶中，将3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(0.108g,0.169mmol)溶于甲苯(5mL)，再加入硅胶(100-200目,1.08g)，回流反应4h。冷却至室温，抽滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)，得标题化合物0.083g，收率91％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.70(s,1H),7.62–7.54(m,1H),7.35–7.27(m,1H),7.21(s,1H),7.03(t,1H),6.92–6.84(m,1H),5.44–5.35(m,1H),4.58–4.48(m,1H),4.34–4.24(m,1H),4.16–4.05(m,1H),4.05–3.93(m,1H),3.91(s,1H),3.87(s,3H),3.83–3.81(m,1H),3.81–3.66(m,3H),3.48–3.42(m,1H),3.39–3.28(m,2H),2.86(d,3H),1.78–1.69(m,2H),1.59–1.52(m,1H),1.48–1.37(m,1H).MS(ESI)m/z 539.2[M+H]⁺。

实施例7:3-(1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

向实施例6步骤9制得的3-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.03g,0.056mmol)中加入二氯甲烷(3mL)及三乙胺(0.2mL)，在冰浴下，滴加乙酰氯(0.006g,0.084mmol)，室温搅拌。反应结束后，加入甲醇(1mL)淬灭反应，浓缩后硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝25:1)，得标题化合物0.018g，收率56％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.72(s,1H),7.58–7.52(m,1H),7.35–7.28(m,1H),7.23(s,1H),7.03(t,1H),6.87(dd,1H),5.68–5.51(m,1H),5.44–5.37(m,1H),4.65(dd,1H),4.51–4.43(m,1H),4.4–4.27(m,2H),4.19–4.04(m,2H),3.87(d,3H),3.80–3.64(m,2H),3.47–3.38(m,1H),3.37–3.26(m,2H),2.88(d,3H),1.94(s,3H),1.73–1.69(m,2H),1.57–1.48(m,1H),1.40–1.34(m,1H).MS(ESI)m/z581.2[M+H]⁺。

实施例8:3-(1-(环丙烷羰基)氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

将实施例6步骤9制得的3-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.150g,0.28mmol)溶于二氯甲烷(3mL)，加入三乙胺(0.057g,0.56mmol)，在冰浴下，滴加环丙甲酰氯(0.036g,0.34mmol)，室温搅拌1h后加热回流反应24h。加入甲醇(1mL)淬灭，浓缩后硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1～1:3)，得标题化合物0.038g，收率23％。MS(ESI)m/z 607.2[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.69(s,1H),7.63–7.55(m,1H),7.34–7.28(m,1H),7.23–7.19(m,1H),7.03(t,1H),6.87(t,1H),5.41–5.36(m,1H),4.62–4.56(m,1H),4.50–4.44(m,1H),4.36–4.29(m,1H),4.24–4.13(m,2H),3.98(dd,1H),3.91(s,1H),3.87(s,2H),3.79–3.69(m,2H),3.47–3.41(m,1H),3.38–3.30(m,2H),2.87(d,3H),1.80–1.68(m,2H),1.65–1.59(m,1H),1.47–1.37(m,1H),1.03–0.94(m,2H),0.90–0.81(m,2H).MS(ESI)m/z 607.2[M+H]⁺。

实施例9:1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-3-(1-(甲基磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

在25mL单口瓶中，将实施例6步骤9制得的3-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.020g,0.037mmol)溶于无水四氢呋喃(1mL)，加入三乙胺(0.2mL)，在冰浴下，滴加甲磺酰氯(0.006g,0.048mmol)，然后在室温下搅拌。反应结束后，加入甲醇(2mL)淬灭反应，直接硅胶板层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)，得标题化合物0.010g，收率43％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.70(s,1H),7.61–7.55(m,1H),7.34–7.28(m,1H),7.22(s,1H),7.03(t,1H),6.92–6.84(m,1H),5.41–5.34(m,1H),4.75–4.58(m,2H),4.43(dd,1H),4.35–4.22(m,1H),4.20–3.96(m,3H),3.89(d,3H),3.81–3.67(m,2H),3.49–3.39(m,1H),3.38–3.28(m,2H),3.05(d,3H),2.87(d,3H),1.77–1.70(m,2H),1.57–1.52(m,1H),1.44–1.38(m,1H).MS(ESI)m/z 617.2[M+H]⁺。

实施例10:3-(1-(乙基磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

在25mL单口瓶中，将实施例6步骤9制得的3-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.100g,0.186mmol)溶于无水四氢呋喃(5mL)，加入三乙胺(0.5mL)，在冰浴下，滴加乙磺酰氯(0.031g,0.241mmol)，然后在室温下搅拌。反应结束后，加入甲醇(5mL)淬灭反应，直接硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)，得标题化合物0.067g，收率57％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.70(d,1H),7.60–7.55(m,1H),7.34–7.29(m,1H),7.22(d,1H),7.03(t,1H),6.89(t,1H),5.42–5.33(m,1H),4.77–4.59(m,2H),4.41(dd,1H),4.34–4.22(m,1H),4.18–4.04(m,2H),4.02–3.93(m,1H),3.89(d,3H),3.81–3.67(m,2H),3.49–3.40(m,1H),3.38–3.28(m,2H),3.22–3.11(m,2H),2.87(d,3H),1.74–1.69(m,2H),1.58–1.53(m,1H),1.47–1.42(m,1H),1.39(t,3H).MS(ESI)m/z 631.2[M+H]⁺。

实施例11:3-(1-苯甲酰基氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2–((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

在25mL单口瓶中，将实施例6步骤9制得的3-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.100g,0.186mmol)溶于无水四氢呋喃(6mL)，加入三乙胺(0.7mL)，在冰浴下，滴加苯甲酰氯(0.034g,0.241mmol)，60℃下加热搅拌5h。反应结束后，加入甲醇(6mL)淬灭反应，硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝40:1)，得标题化合物0.066g，收率56％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.98(d,2H),7.70(s,1H),7.58–7.51(m,2H),7.43–7.36(m,2H),7.33–7.27(m,1H),7.24–7.20(m,1H),7.04–6.96(m,1H),6.90–6.81(m,1H),5.40–5.32(m,1H),4.78–4.68(m,2H),4.55–4.43(m,1H),4.32–4.22(m,1H),4.20–3.97(m,3H),3.86(d,3H),3.76–3.67(m,1H),3.62–3.53(m,1H),3.43–3.33(m,1H),3.32–3.15(m,2H),2.89(d,3H),1.68–1.62(m,2H),1.53–1.48(m,1H),1.41–1.34(m,1H).MS(ESI)m/z 643.2[M+H]⁺。

实施例12:1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-3-(1-(吗啉-4-甲酰基)氮杂环丁烷-3-基)-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

将实施例6步骤9制得的3-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.104g,0.193mmol)和三乙胺(0.078g,0.772mmol)的无水二氯甲烷(2mL)溶液，滴加到-5℃低温反应浴冷却的三光气(0.058g,0.193mmol)的无水二氯甲烷(1mL)溶液中，加完后-5℃继续搅拌2h，加入吗啉(0.034g,0.386mmol)，加完后室温下搅拌过夜。直接硅胶柱层析(乙酸乙酯)，得标题化合物0.060g，收率：48％。MS(ESI)m/z 652.2[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.71(dd,1H),7.62–7.55(m,1H),7.35–7.28(m,1H),7.25–7.22(m,1H),7.05(t,1H),6.90(t,1H),5.43–5.33(m,1H),4.70–4.60(m,1H),4.59–4.48(m,1H),4.35–4.24(m,1H),4.24–4.07(m,2H),4.05–3.96(dd,1H),3.91(d,3H),3.83–3.68(m,3H),3.68–3.54(m,4H),3.54–3.40(m,4H),3.40–3.25(m,3H),2.86(d,3H),1.80–1.68(m,2H),1.57–1.49(m,1H),1.43–1.36(m,1H).MS(ESI)m/z 652.2[M+H]⁺。

实施例13:1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-3-(1-吡啶甲酰基氮杂环丁烷-3-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

在25mL单口瓶中，将实施例6步骤9制得的3-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.100g,0.186mmol)溶于无水四氢呋喃(5mL)，加入三乙胺(0.7mL)，在冰浴下，加入吡啶-2-甲酰氯盐酸盐(0.040g,0.223mmol)，在70℃下加热搅拌2h。反应结束后，加入甲醇(5mL)淬灭反应，硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)，得标题化合物0.024g，收率20％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.75(d,1H),8.04(d,1H),7.80(t,1H),7.69(s,1H),7.56(t,1H),7.50–7.40(m,1H),7.33–7.27(m,1H),7.22(s,1H),7.06–6.96(m,1H),6.92–6.80(m,1H),5.41–5.33(m,1H),4.85–4.71(m,2H),4.70–4.57(m,1H),4.33–4.21(m,1H),4.18–4.05(m,2H),4.01–3.89(m,1H),3.86(d,3H),3.77–3.68(m,1H),3.67–3.54(m,1H),3.45–3.36(m,1H),3.35–3.16(m,2H),2.86(s,3H),1.73–1.65(m,2H),1.57–1.47(m,1H),1.42–1.33(m,1H).MS(ESI)m/z 644.2[M+H]⁺。

实施例14:3-(1-(1H-咪唑-2-羰基)氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2–((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

在25mL单口瓶中，将实施例6步骤9制得的3-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.080g,0.148mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(6mL)，再依次加入咪唑-2-甲酸(0.025g,0.223mmol)，N,N-二异丙基乙胺(0.8mL)，三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐(0.104g,0.223mmol)及4-二甲胺基吡啶(0.006g,0.044mmol)在室温下搅拌3h，然后，在80℃下加热搅拌过夜。反应结束后，加入水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝40:1)，得标题化合物0.030g，收率32％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.55(s,1H),7.73–7.68(m,1H),7.62–7.55(m,1H),7.37–7.31(m,1H),7.31–7.28(m,1H),7.23–7.20(m,1H),7.15(s,1H),7.08–7.02(m,1H),6.95–6.87(m,1H),5.49–5.32(m,1H),5.05(dd,1H),4.86–4.69(m,1H),4.67–4.53(m,1H),4.54–4.38(m,1H),4.29–4.19(m,1H),4.11–4.00(m,1H),3.97(s,2H),3.90(s,1H),3.89–3.83(m,1H),3.81–3.63(m,2H),3.48–3.40(m,1H),3.39–3.22(m,2H),2.85(d,3H),1.69–1.60(m,2H),1.58–1.49(m,1H),1.45–1.36(m,1H).MS(ESI)m/z 633.2[M+H]⁺。

实施例15:1-(3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)氮杂环丁烷-1-羰基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-羧酸

步骤1:1-(3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羰基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯的制备

于-5℃低温浴，将实施例6步骤9制得的3-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.150g,0.278mmol)及三乙胺(0.169g,1.67mmol)的无水二氯甲烷(5mL)溶液滴加至三光气(0.083g,0.278mmol)的无水二氯甲烷(5mL)溶液中。滴毕，在0℃下搅拌1h，再加入3-甲基氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯盐酸盐(0.093g,0.557mmol)，室温搅拌过夜。反应结束后，浓缩溶液，加入水(15mL)，乙酸乙酯(15mL×3)萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:2)，得标题化合物0.060g，收率31％。MS(ESI)m/z 694.3[M+H]⁺。

步骤2:1-(3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羰基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-甲酸的制备

在25mL单口瓶中，将1-(3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羰基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯(0.060g,0.086mmol)溶于甲醇(2mL)，加入氢氧化钠水溶液(1.0M,2mL)，室温反应1h。反应结束后，用稀盐酸(2M)调节pH值至弱酸性，乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机层，并用饱和氯化钠水溶液洗涤两次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，制备色谱分离，得标题化合物0.020g，收率34％。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.70(s,1H),7.56(d,1H),7.34–7.28(m,1H),7.21(s,1H),7.03(t,1H),6.89(t,1H),5.48–5.34(m,1H),4.65–4.46(m,2H),4.34–4.12(m,4H),4.09–3.96(m,2H),3.89(d,3H),3.81–3.47(m,5H),3.44–3.26(m,3H),2.82(s,3H),1.80–1.67(m,2H),1.57–1.47(m,3H),1.40–1.32(m,1H),1.31–1.20(m,1H).MS(ESI)m/z 678.2[M-H]^-。

实施例16:3-(1-(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-酰基)氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

将三光气(0.055g,0.186mmol)溶于无水二氯甲烷(3mL)，置于-5℃搅拌。将实施例6步骤9制得的3-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.100g,0.186mmol)和三乙胺(0.113g,1.116mmol)溶于无水二氯甲烷(5mL)，在-5℃下缓慢滴加到上述三光气的二氯甲烷溶液中。滴完0℃搅拌反应1.5h。然后移至室温，加入3-甲基-3-氮杂环丁醇(0.025g,0.204mmol)，反应过夜。浓缩硅胶柱层析(乙酸乙酯)，得标题化合物0.012g产品，收率10％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.70(s,1H),7.60–7.50(m,1H),7.36–7.28(m,1H),7.22(d,1H),7.04(d,1H),6.92(d,1H),5.49(s,1H),4.67–4.56(m,1H),4.54–4.35(m,1H),4.23–4.15(m,1H),4.13–3.99(m,2H),3.95(s,2H),3.90(s,3H),3.87–3.61(m,5H),3.57–3.17(m,4H),2.88(d,3H),1.92–1.68(m,2H),1.53–1.47(m,1H),1.46–1.43(m,1H),1.43(s,3H).MS(ESI)m/z 652.1[M+H]⁺。

实施例17:2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-4-基氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸

步骤1:4-(2-羟基-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

将4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.01mg,9.99mmol)，三(三氟甲磺酸)铝(0.158g,0.333mmol)置于100mL圆底烧瓶中，反应体系除水，氮气保护。加入无水四氢呋喃(20mL)，反应降至0℃，把2-(2-甲氧基苯基)环氧乙烷(1.50g,10.0mmol)加入到反应体系中，将反应升温至室温，搅拌过夜。反应结束后，向反应液中加入饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥。浓缩柱层析纯化得标题化合物0.45g。LC-MS m/z [M+H]⁺＝352。

步骤2:2-(3-(1-(叔丁氧基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)脲基)-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯的制备

向500mL圆底烧瓶中加入2-氨基-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯(10g,54mmol)和无水二氯甲烷(100mL)，于0℃缓慢滴加三光气(5.288g,17.8mmol)的二氯甲烷溶液(100mL)，0℃下反应1h。随后逐滴缓慢加入三乙胺(21.816g,216mmol)，继续0℃下反应3h。随后加入2-氨基异丁酸叔丁酯盐酸盐(12.636g,64.8mmol)，升至室温反应过夜。反应结束后，饱和食盐水洗涤，蒸除溶剂，残余物使用二氯甲烷和石油醚进行重结晶，得标题化合物12g。LC-MS m/z[M+H]⁺＝371。

步骤3:2-甲基-2-(5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)丙酸叔丁酯的制备

向无水乙醇(200mL)中缓慢加入钠(7.45g,324mmol)，待固体钠完全溶解后，加入2-(3-(1-(叔丁氧基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)脲基)-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯(12g,32.4mmol)，然后升温回流1h，反应结束后用冰乙酸中和至pH值呈中性，大量固体析出，减压抽滤，滤液浓缩后后柱层析纯化，得标题化合物3.1g。LC-MS m/z[M+H]⁺＝325。

步骤4:4-(2-(3-(1-(叔丁氧基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

将三苯基膦(4.06g,15.5mmol)置于500mL两口瓶中，氩气保护。加入无水四氢呋喃(100mL)，于0℃缓慢滴加偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)(3.13g,15.5mmol)，于0℃反应1h，随后加入2-甲基-2-(5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)丙酸叔丁酯(1.0g,3.1mmol)和4-(2-羟基-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.31g,3.7mmol)，升至室温反映过夜。反应完毕后，加入饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩柱层析纯化得标题化合物1.38g。LC-MS m/z[M+H]⁺＝658。

步骤5:4-(2-(6-溴-3-(1-(叔丁氧基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

将4-(2-(3-(1-(叔丁氧基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.38g,2.09mmol)加入到二氯甲烷(15mL)中，于-10℃加入N-溴代丁二酰亚胺(373mg,2.09mmol)，在-10℃反应0.5h。用饱和食盐水猝灭反应，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物1.41g。LC-MS m/z[M+H]⁺＝736。

步骤6:4-(2-(3-(1-叔丁氧基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备

将4-(2-(6-溴-3-(1-(叔丁氧基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(642mg,0.873mmol)，2-(三丁基锡烷基)噁唑(1.250g,3.492mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(80mg,0.0873mmol)和2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(125mg,0.2619mmol)加入到甲苯(20mL)中，氩气保护下于110℃反应过夜。将反应液冷却至室温，浓缩柱层析纯化得标题化合物356mg。LC-MS m/z[M+H]⁺＝725。

步骤7:2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-4-基氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸的制备

将4-(2-(3-(1-叔丁氧基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(250mg,0.345mmol)溶解于四氢呋喃(10mL)，加入浓盐酸(2mL)，50℃下反应过夜。反应结束后，冷却至室温，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析纯化得标题化合物5mg。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.23(s,1H),δ7.74(s,1H),7.58(d,1H),7.34(d,1H),7.26(s,2H),7.09-7.05(m,1H),5.35-5.33(m,1H),4.94-4.88(m,1H),4.07(s,3H),3.83-3.70(m,3H),3.40-3.24(m,4H),2.96(s,3H),2.24-1.92(m,4H),1.55-1.40(m,6H).LC-MS m/z[M+H]⁺＝569。

实施例18:2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-1-基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸

步骤1:2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-1-基)乙醇的制备

把哌啶(2.55g,30.0mmol)加入无水二氯甲烷(30mL)中，反应降至0℃，把2-(2-甲氧基苯基)环氧乙烷(1.50g,6.0mmol)加入到反应中，在室温下反应4h。反应结束后向反应液中加入饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥。浓缩柱层析纯化得标题化合物1.0g。LC-MS m/z[M+H]⁺＝236。

步骤2:2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-1-基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯的制备

制备方法同实施例17步骤4的4-(2-(3-(1-(叔丁氧基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备的制备方法，不同的是将原料由4-(2-羟基-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯替换为实施例18步骤1制得的2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-1-基)乙醇，得标题化合物1.26g。LC-MS m/z[M+H]⁺＝542。

步骤3:2-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-1-基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯的制备

将2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-1-基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯(1.26g,2.326mmol)加入到二氯甲烷(80mL)中，冷却至-10℃，然后向溶液中加入N-溴代丁二酰亚胺(413mg,2.326mmol)，反应0.5h。反应完毕后，加入饱和食盐水淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩柱层析纯化得标题化合物438mg。LC-MS m/z[M+H]⁺＝620。

步骤4:2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-1-基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸的制备

制备方法同实施例17步骤6至步骤7的2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-4-基氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸的制备方法，不同的是将原料由4-(2-(6-溴-3-(1-(叔丁氧基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯替换为实施例18步骤3制得的2-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-1-基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2，3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯，得标题化合物136mg。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.41(s,1H),8.17(s,1H),7.58(brs,1H),7.39-7.32(m,2H),7.02(brs,2H),6.23-5.91(m,1H),3.71(s,3H),3.14-2.99(m,2H),2.70(s,3H),2.60(brs,1H),2.33-2.29(m,2H),1.70(s,6H),1.40-1.23(m,7H).LC-MS m/z[M+H]⁺＝553。

实施例19:2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((1-甲基哌啶-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸

步骤1:2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-4-基氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯的制备

制备方法同实施例17步骤1至步骤7的2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-4-基氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸的制备方法，不同的是将步骤7的反应温度由50℃替换为室温，得标题化合物，未经纯化直接用于下一步。LC-MS m/z[M+H]⁺＝625。

步骤2:2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((1-甲基哌啶-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯的制备

将2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-4-基氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯(150mg,0.24mmol)使用二氯甲烷溶解，加入的无水氯化锌的四氢呋喃溶液(0.96mL,0.48mmol,0.5M)和多聚甲醛(43mg,0.48mmol)，室温下反应1h后降温至0℃，随后加入硼氢化钠(18mg,0.48mmol),室温下反应过夜。反应结束后，将反应的pH调节至8～9，使用乙酸乙酯进行萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，不经纯化直接用于下一步。LC-MS m/z[M+H]⁺＝639。

步骤3:2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((1-甲基哌啶-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸的制备

将2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((1-甲基哌啶-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯(110mg,0.172mmol)加入到四氢呋喃(10mL)中，向溶液中加入浓盐酸(2mL)，然后在50℃下反应过夜。冷却至室温，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥,浓缩柱层析纯化得标题化合物10mg。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.46(s,1H),δ7.71(s,1H),7.49(s,1H),7.20(s,1H),7.04(s,1H),6.95-6.92(m,2H),5.36-5.34(m,1H),4.13-4.04(m,1H),3.92(s,3H),3.55-3.51(m,2H),3.41-3.25(m,4H),2.94(s,3H),2.25(s,3H),2.11-1.92(m,4H),1.60-1.55(m,6H).LC-MS m/z[M+H]⁺＝583。

实施例20:2-(1-(2-((1-乙酰基哌啶-4-基)氧基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸

步骤1:2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-4-基氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯的制备

将实施例17步骤4制得的4-(2-(3-(1-(叔丁氧基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.38g,2.09mmol)加入到四氢呋喃(20mL)中，加入浓盐酸(2mL)，室温下搅拌过夜。氢氧化钠中和至碱性(pH 8～9)，用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得到标题化合物798mg，不经纯化直接用于下一步。LC-MS m/z[M+H]⁺＝558。

步骤2:2-(1-(2-((1-乙酰基哌啶-4-基)氧基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯的制备

将2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-4-基氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯(798mg,1.43mmol)用二氯甲烷溶解，加入三乙胺(289.4mg,2.86mmol)，于0℃滴加乙酰氯(134.71mg,1.72mmol)，室温下反应过夜。反应结束后，调节pH至8～9，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得标题化合物，不经纯化直接用于下一步。LC-MS m/z[M+H]⁺＝600。

步骤3:2-(1-(2-((1-乙酰基哌啶-4-基)氧基)-2-(甲氧基苯基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸的制备

制备方法同实施例17步骤5至步骤7的2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-4-基氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸的制备方法，不同的是将原料由4-(2-(3-(1-(叔丁氧基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯替换为实施例20步骤2制得的2-(1-(2-((1-乙酰基哌啶-4-基)氧基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯，得标题化合物222mg。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.43(s,1H),δ8.24(s,1H),7.50(d,1H),7.40(s,1H),7.35-7.31(m,1H),7.07-7.01(m,2H),5.30-5.28(m,1H),4.06-4.01(m,1H),3.83(s,3H),3.41-3.39(m,3H),3.20-3.16(m,1H),2.75(s,3H),1.96-1.99(m,1H),1.89(brs,2H),1.67(d,6H),1.54-1.60(m,3H),1.28-1.24(m,3H).LC-MS m/z[M+H]⁺＝611。

实施例21:2-(1-(2-((1-(环丙甲酰基哌啶-4-基)氧基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸

步骤1:2-(1-(2-((1-(环丙甲酰基)哌啶-4-基)氧基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯的制备

将实施例20步骤1制得的2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-4-基氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯(1.76g,3.2mmol)用二氯甲烷溶解，加入三乙胺(647mg,6.4mmol)，于0℃下滴加环丙基甲酰氯(401mg,3.84mmol)，室温下反应过夜。反应结束后，调节pH至8～9，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物，不经纯化直接用于下一步。LC-MS m/z[M+H]⁺＝626。

步骤2:2-(1-(2-((1-(环丙甲酰基哌啶-4-基)氧基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基)-5-甲基-6-(恶唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4H)-基)-2-甲基丙酸的制备

制备方法同实施例17步骤5至步骤7的2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-4-基氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸的制备方法，不同的是将原料由4-(2-(3-(1-(叔丁氧基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯替换为实施例21步骤1制得的2-(1-(2-((1-(环丙甲酰基)哌啶-4-基)氧基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯，得标题化合物25mg。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.42(s,1H),δ8.24(s,1H),7.50(d,J＝6.4,1H),7.39(s,1H),7.34-7.30(m,1H),7.06-7.01(m,2H),5.31-5.28(m,1H),4.08-3.99(m,1H),3.82(s,3H),3.59-3.51(m,2H),3.44-3.41(m,2H),3.20-3.16(m,2H),2.75(s,3H),1.85(brs,3H),1.67(d,J＝11.68Hz,6H),1.60-1.54(m,3H),1.31-1.24(m,3H).LC-MS m/z[M+H]⁺＝637。

实施例22:2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((1-甲磺酰基)哌啶-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸

步骤1:2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((1-甲磺酰基)哌啶-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯的制备

将实施例19步骤1制得的2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-4-基氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯(150mg,0.24mmol)用二氯甲烷溶解，加入三乙胺(49mg,0.48mmol)，降温至0℃，随后加入甲磺酰氯(41mg,0.36mmol)，室温下反应过夜。反应结束后，调节pH至8～9，乙酸乙酯进行萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得标题化合物，不经纯化直接用于下一步。LC-MS m/z[M+H]⁺＝703。

步骤2:2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((1-甲磺酰基)哌啶-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸的制备

将2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((1-甲磺酰基)哌啶-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯(75mg,0.117mmol)加入到四氢呋喃(10mL)中，向溶液中加入浓盐酸(2mL)，然后在50℃下反应过夜。冷却至室温，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥。浓缩柱层析纯化得标题化合物6.2mg。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.52(s,1H),δ8.25(s,1H),7.50(d,1H),7.40(s,1H),7.36-7.32(m,1H),7.08-7.03(m,2H),5.29-5.26(m,1H),4.22(brs,1H),3.82(s,3H),3.34(brs,3H),3.18-3.16(m,1H),3.03-3.00(m,2H),2.84(brs,1H),2.73(s,3H),2.55-2.57(m,3H),1.68(d,6H),1.55-1.59(m,3H).LC-MS m/z[M+H]⁺＝647。

实施例23:2-(1-2-((1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)氧基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸

步骤1:3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备

将3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.41g,20mmol)加入到无水甲醇(30mL)中，冷却至0℃，加入硼氢化钠(1.51g,40mmol)，于0℃反应1h。反应结束后，加入饱和食盐水猝灭反应，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物3.4g。

步骤2:3-(2-羟基-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备

把3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2.08g,12.0mmol)，三(三氟甲磺酸)铝(0.711g,1.50mmol)置于100mL圆底烧瓶中，反应体系除水，氮气保护。加入无水四氢呋喃(40mL)，反应降至0℃，加入2-(2-甲氧基苯基)环氧乙烷(1.50g,10.0mmol)，升温至室温搅拌过夜。反应结束后向反应液中加入饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥。浓缩柱层析纯化得标题化合物2g。LC-MS m/z[M+H]⁺＝324。

步骤3:3-(2-(3-(1-(叔丁氧基)-2-甲基-1-氧丙-2-基)-5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备

制备方法同实施例17步骤4的4-(2-(3-(1-(叔丁氧基)-2-甲基-1-氧代丙-2-基)-5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备方法，不同的是将原料由4-(2-羟基-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯替换为实施例23步骤2制得的3-(2-羟基-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯，得标题化合物0.8g。LC-MS m/z[M+H]⁺＝630。

步骤4:2-(1-(2-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯的制备

将3-(2-(3-(1-(叔丁氧基)-2-甲基-1-氧丙-2-基)-5-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(0.8g,1.27mmol)加入到四氢呋喃(30mL)中，加入浓盐酸(2mL)，室温下搅拌过夜。氢氧化钠中和至弱碱性，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物。LC-MS m/z[M+H]⁺＝530。

步骤5:2-(1-(2-((1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)氧基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸酯的制备

将2-(1-(2-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯(0.25g,0.473mmol)加入到无水二氯甲烷(40mL)中，于0℃加入三乙胺(96mg,0.945mmol)，随后加入乙酰氯(45mg,0.568mmol)，缓慢升至室温搅拌过夜。反应液中加入饱和食盐水，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩柱层析纯化得标题化合物130mg。LC-MS m/z[M+H]⁺＝572。

步骤6:2-(1-(2-((1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)氧基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸的制备

制备方法同实施例18步骤3至步骤4的2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-1-基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸的制备方法，不同的是将原料由2-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(哌啶-1-基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸叔丁酯替换为实施例23步骤5制得的2-(1-(2-((1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)氧基)-2-(2-甲氧基苯基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-2-甲基丙酸酯，得标题化合物24.6mg。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.43(s,1H),8.23(s,1H),7.42-7.39(m,2H),7.33-7.30(m,1H),7.05-6.98(m,2H),5.11-5.05(m,1H),4.20-4.06(m,4H),3.93-3.76(m,4H),3.48-3.43(m,1H),2.74(s,3H),1.74-1.64(m,8H),1.23(br,2H).LC-MS m/z[M+H]⁺＝583。

实施例24:4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸

步骤1:2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备

将2-氨基-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯(4.8g,25.9mmol)，三光气(3.1g,10.36mmol)置于两口瓶中，氩气保护下，于-20℃下滴加二氯甲烷(200mL)，原料溶解后，将三乙胺(10.5g,103.6mmol)的二氯甲烷溶液缓慢滴入反应液，滴加时间为1h。0℃下继续反应4h，随后加入4-氨基苯甲酸叔丁酯(5g,25.9mmol)，反应液于室温搅拌过夜。加水淬灭反应，反应液分层，分出有机相，水相再用二氯甲烷萃取两遍，有机相合并，干燥，浓缩。柱层析分离纯化得到标题化合物7g。LC-MS m/z[M+H]⁺＝405。

步骤2:4-(5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸乙酯的制备

将钠块(356mg，15.5mmol)称入干燥的两口瓶中，氩气保护下，加入重蒸的无水乙醇。钠块反应完以后，加入2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯(2g，6.19mmol),80℃反应2h，反应完全后旋干乙醇。直接乙酸乙酯柱层析，得到标题化合物1g。LC-MS m/z[M+H]⁺＝331。

步骤3:4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸乙酯的制备

将4-(5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸乙酯的制备(650mg,1.97mmol)，(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙醇(596mg,2.36mmol)，和三苯基磷(1.03g,3.94mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，氩气保护下，0℃下滴加偶氮二甲酸二异丙酯的四氢呋喃溶液，室温反应过夜。加水(10mL)洗,乙酸乙酯萃取，有机相干燥，浓缩。柱层析后处理，得到标题化合物200mg。LC-MS m/z[M+H]⁺＝565。

步骤4:4-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸乙酯的制备

将4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸乙酯(200mg，0.355mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，0℃下滴加N-溴代丁二酰亚胺的N,N-二甲基甲酰胺溶液，0℃反应1h。反应液加等体积饱和氯化钠溶液洗，乙酸乙酯萃取，有机相再用饱和氯化钠溶液洗，有机相干燥，浓缩。柱层析分离纯化得到标题化合物140mg。LC-MS m/z[M+H]⁺＝643。

步骤5:4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸乙酯的制备

将4-(6-溴-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸乙酯(140mg，0.22mmol)，(三丁基甲锡烷基)噁唑(313mg,0.87mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(20mg,0.022mmol)，2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(42mg,0.088mmol)溶于干燥的甲苯(5mL)中，氩气保护，90℃反应过夜。溶剂旋干，柱层析后处理得到标题化合物100mg。LC-MS m/z[M+H]⁺＝631。

步骤6:4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备

将4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸乙酯(100mg,0.158mmol)溶于甲醇(15mL)和水(5mL)的混合溶剂中，加入氢氧化锂(38mg,10mmol)，室温反应24h。反应液中加入5％盐酸酸化至pH为5～6，乙酸乙酯萃取，干燥，浓缩，柱层析分离得到标题化合物40mg。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.00(s,1H),8.26(s,1H),8.08(d,2H),7.51(d,1H),7.42-7.39(m,3H),7.35-7.29(m,1H),7.06-7.01(m,2H),5.34-5.31(m,1H),4.17-4.14(m,1H),4.04-4.02(m,1H),3.80(s,3H),3.60-3.59(m,2H),3.42-3.27(m,3H),2.79(s,3H),1.68-1.65(m,2H),1.30-1.24(m,2H).LC-MS m/z[M+H]⁺＝604。

实施例24a:(R)-4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸

制备方法同实施例24的制备方法，不同的是将(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙醇替换为(R)-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙醇，制得标题化合物。LC-MS m/z[M+H]⁺＝604。

实施例25:3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备

步骤1:2-(3-(3-(叔丁氧基羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备

制备方法同实施例24步骤1的2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备方法，不同的是将原料由4-氨基苯甲酸叔丁酯替换为3-氨基苯甲酸叔丁酯(5g,25.9mmol)，得到标题化合物8.5g。LC-MS m/z[M+H]⁺＝405。

步骤2:3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备

制备方法同实施例24步骤2至步骤6的4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备方法，不同的是将原料由2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯替换为实施例25步骤1制得的2-(3-(3-(叔丁氧基羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯，得到标题化合物200mg。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.11(s,1H),8.25(s,1H),8.04(d,1H),7.83(d,1H),7.67(t,1H),7.52(t,2H),7.42(s,1H),7.32(t,1H),7.04(dd,2H),5.35-5.32(m,1H),4.17-4.14(m,1H),4.04-3.98(m,1H),3.80(s,3H),3.62-3.59(m,2H),3.44-3.41(m,1H),3.31-3.24(m,2H),2.79(s,3H),1.72-1.65(m,2H),1.30-1.24(m,2H)。LC-MS m/z[M+H]⁺＝604。

实施例26:3-甲氧基-4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备

步骤1:2-(3-(2-甲氧基-4-(甲氧基羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备

制备方法同实施例24步骤1的2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备方法，不同的是将原料由4-氨基苯甲酸叔丁酯替换为4-氨基-3-甲氧基苯甲酸甲酯(4.7g,25.9mmol)，得到标题化合物3.2g。LC-MS m/z[M+H]⁺＝393。

步骤2:3-甲氧基-4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备

制备方法同实施例24步骤2至步骤6的4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备方法，不同的是将原料由2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯替换为实施例26步骤1制得的2-(3-(2-甲氧基-4-(甲氧基羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯，得到标题化合物48mg。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.11(s,1H),8.25(d,1H),7.67–7.64(m,2H),7.53–7.48(m,1H),7.41(d,1H),7.38–7.31(m,2H),7.05–7.03(m,2H),5.35–5.27(m,1H),4.30–4.04(m,2H),3.84(s,3H),3.80(s,3H),3.64–3.48(m,4H),3.26–3.23(m,1H),2.78(s,3H),1.65–1.63(m,2H),1.36–1.34(m,2H).LC-MSm/z[M+H]⁺＝634.2。

实施例27:4-甲氧基-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)-乙基]-5-甲基-6-噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)-苯甲酸

步骤1:2-(3-(2-甲氧基-5-(甲氧基羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备

制备方法同实施例24步骤1的2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备方法，不同的是将原料由4-氨基苯甲酸叔丁酯替换为3-氨基-4-甲氧基苯甲酸甲酯(4.7g,25.9mmol)，得到标题化合物8.4g。LC-MS m/z[M+H]⁺＝393。

步骤2:4-甲氧基-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备

制备方法同实施例24步骤2至步骤6的4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备方法，不同的是将原料由2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯替换为实施例27步骤1制得的2-(3-(2-甲氧基-5-(甲氧基羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯，得标题化合物19mg。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.09(s,1H),8.18(d,1H),7.94–7.92(m,1H),7.90(d,1H),7.88(d,1H),7.56(d,1H),7.35–7.69(m,1H),7.21(d,1H),7.06–7.01(m,1H),6.98–6.92(m,1H),5.50–5.44(m,1H),4.35–3.98(m,2H),3.93–3.87(m,6H),3.82–3.65(m,2H),3.54–3.36(m,3H),2.86(d,3H),1.84–1.72(m,2H),1.62–1.44(m,2H).LC-MS m/z[M+H]⁺＝634.2。

实施例28:2-氟-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸

步骤1:3-氨基-2-氟苯甲酸乙酯的制备

氩气保护，于-10℃将氯化亚砜(10mL)缓慢滴入无水乙醇(30mL)中。滴毕，将3-氨基-2-氟苯甲酸(5g，32.3mmol)投入反应瓶中，80℃回流过夜。反应完毕后，用饱和碳酸氢钠溶液调反应液pH呈弱碱性，乙酸乙酯萃取。有机相干燥，浓缩，得到标题化合物5.7g。LC-MSm/z[M+H]⁺＝184

步骤2:2-(3-(3-(乙氧基羰基)-2-氟苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备

制备方法同实施例24步骤1的2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备方法，不同的是将原料由4-氨基苯甲酸叔丁酯替换为实施例28步骤1制得的3-氨基-2-氟苯甲酸乙酯(4.74g,25.9mmol)，得到标题化合物3.75g。LC-MS m/z[M+H]⁺＝395。

步骤3:2-氟-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备

制备方法同实施例24步骤2至步骤6的4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备方法，不同的是将原料由2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯替换为实施例28步骤2制得的2-(3-(3-(乙氧基羰基)-2-氟苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯，得到标题化合物83mg。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.51(s,1H),8.27(s,1H),8.02-7.99(m,1H),7.69(s,1H),7.54-7.46(m,2H),7.43(s,1H),7.33(dd,1H),7.08-7.01(m,2H),5.36-5.30(m,1H),4.34-3.81(m,2H),3.81(s,3H),3.63-3.62(m,1H),3.54-3.46(m,1H),3.40-3.22(m,3H),2.80-2.79(m,3H),1.65(s,2H),1.37-1.24(m,2H).LC-MS m/z[M+H]⁺＝622。

实施例29:2-甲氧基-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸

步骤1:2-甲氧基-3-硝基苯甲酸甲酯的制备

将3-硝基水杨酸甲酯(6g,30.43mmol)，碳酸钾(16.82g,121.73mmol)，碘甲烷(12.96g，91.30mmol)，加入到N,N-二甲基甲酰胺中，氩气保护，60℃加热反应4h。反应完毕后加水(20mL)淬灭反应，乙酸乙酯(40mL)萃取，分出有机相，水(20mL)萃取两遍，有机相干燥，浓缩。柱层析后处理得到标题化合物5g。

步骤2:3-氨基-2-甲氧基苯甲酸甲酯的制备

将2-甲氧基-3-硝基苯甲酸甲酯(5g,18.94mmol)，铁粉(4.75g,85.18mmol)，氯化铵(7g,130.31mmol)，水(20mL)，甲醇(40mL)，四氢呋喃(20mL)加入到反应瓶中，70℃反应5h，反应完毕后抽滤，滤液浓缩。加入水(20mL)，用乙酸乙酯(40mL)萃取两遍，有机相干燥，浓缩，得到标题化合物4.2g。

步骤3:2-(3-(2-甲氧基-3-(甲氧基羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备

制备方法同实施例24步骤1的2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备方法，不同的是将原料由4-氨基苯甲酸叔丁酯替换为实施例29步骤2制得的3-氨基-2-甲氧基苯甲酸甲酯(4.7g,25.9mmol)，得到标题化合物2g。LC-MS m/z[M+H]+＝393.15。

步骤4:2-甲氧基-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备

制备方法同实施例24步骤2至步骤6的4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备方法，不同的是将原料由2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯替换为实施例29步骤3制得的2-(3-(2-甲氧基-3-(甲氧基羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯，得到标题化合物45mg。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.00(s,1H),8.25(s,1H),7.80(d,1H),7.53-7.51(m,1H),7.44-7.41(m,2H),7.32-7.30(m,2H),7.03-7.01(m,2H),5.29-5.28(m,1H),4.31(d,1H),4.09(s,1H),3.79(s,3H),3.65(s,3H),3.44-3.26(m,5H),2.78(s,3H),1.65-1.54(m,2H),1.34-1.33(m,2H).LC-MS m/z[M+H]⁺＝634.2。

实施例30:4-氟-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸

步骤1:2-(3-(2-氟-5-(甲氧基羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备

制备方法同实施例24步骤1的2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备方法，不同的是将原料由4-氨基苯甲酸叔丁酯替换为3-氨基-4-氟苯甲酸甲酯(4.38g,25.9mmol)，得到标题化合物1g。LC-MS m/z[M+H]+＝381.2。

步骤2:4-氟-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备

制备方法同实施例24步骤2至步骤6的4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备方法，不同的是将原料由2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯替换为实施例30步骤1制得的2-(3-(2-氟-5-(甲氧基羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯，得到标题化合物45mg。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.00(s,1H),8.19(s,1H),7.99-7.97(m,2H),7.55-7.54(m,1H),7.44-7.40(m,1H),7.29-7.30(m,2H),6.97-7.04(m,2H),5.50-5.47(m,1H),4.32(d,1H),4.11-4.03(m,1H),3.85(s,3H),3.77-3.73(m,2H),3.48-3.46(m,1H),3.39-3.35(m,2H),2.84-2.83(m,3H),1.76-1.73(m,2H),1.53-1.43(m,2H).LC-MS m/z[M+H]⁺＝622.2。

实施例31:3-(3-(2-氟乙氧基)环丁基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

步骤1:3-羟基环丁基氨基甲酸叔丁酯的制备

将3-氧代环丁基氨基甲酸叔丁酯(5g,26.99mmol)，溶于乙醇(50mL)，0℃下加入硼氢化钠(525mg,13.87mmol)，室温搅拌2h。反应完毕后，将反应液浓缩，加入(10mL)碳酸氢钠水溶液，二氯甲烷(30mL)萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压脱溶，得4.8g标题化合物。

步骤2:(3-(2-氟乙氧基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯的制备

将钠氢(60％)(1.7g,71.2mmol)加入到反应瓶中，氩气保护下加入3-羟基环丁基氨基甲酸叔丁酯(4g,21.36mmol)，1-溴-2-氟乙烷(4.07g,32.04mmol)，无水四氢呋喃(40mL)，室温搅拌过夜反应。反应结束后抽滤，滤液浓缩，柱层析得到标题化合物4g。

步骤3:3-(2-氟乙氧基)环丁基-1-胺的制备

将(3-(2-氟乙氧基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(4g,17.15mmol)溶于盐酸(2M)/乙酸乙酯溶液(43mL,85.73mmol)，室温搅拌反应过夜，反应完全后加入饱和碳酸氢钠水溶液调pH＝6～7，乙酸乙酯(60mL)萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得标题化合物2.2g。

步骤4:2-(3-(3-(2-氟乙氧基)环丁基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备

制备方法同实施例24步骤1的2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯的制备方法，不同的是将原料由4-氨基苯甲酸叔丁酯替换为实施例31步骤3制得的3-(2-氟乙氧基)环丁基-1-胺(3.45g,25.9mmol)，得到标题化合物1g。

步骤5:3-(3-(2-氟乙氧基)环丁基)-1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的制备

制备方法同实施例24步骤2至步骤6的4-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2H)-基)苯甲酸的制备方法，不同的是将原料由2-(3-(4-(叔丁氧羰基)苯基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯替换为实施例31步骤4制得的2-(3-(3-(2-氟乙氧基)环丁基)脲基)-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯，得到标题化合物1.8g。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.23(s,1H),7.49(dd,1H),7.38(d,1H),7.30(m,1H),7.03(dd,1H),6.98(d,1H),5.50-5.57(m,1H),5.29-5.32(m,1H),4.60-4.62(m,1H),4.49-4.52(m,1H),4.30-4.33(m,1H),4.41-4.05(m,2H),3.78(s,3H),3.60-3.53(m,2H),3.35-3.58(m,1H),3.20-3.25(m,2H),2.90-2.95(m,2H),2.79(s,3H),2.26-2.30(m,2H),1.61-1.65(m,2H),1.32-1.35(m,2H),1.17-1.20(m,2H)。LC-MS m/z[M+H]⁺＝600.2。

实施例32至实施例55的制备方式参照实施例1至实施例31的制备方法进行，实施例32至实施例55的化合物结构如表1所示：

表1

实验例1 体外乙酰基-CoA羧化酶(ACC)抑制实验

1实验材料

1.1化合物

对照化合物为专利WO2013/071169实施例I-181中公开的化合物ND-630(其为目前临床中最有希望的用于此类疾病的药物)，化学名为(2-[1-[2-(2-甲氧基苯基)-2-(氧杂环己烷-4-基氧基)乙基]-5-甲基-6-(1,3-噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1H,2H,3H,4H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-3-基]-2-甲基丙酸)，参照专利WO2013/071169中描述的方法制备并通过氢谱和质谱鉴定。

化合物准备：以上实施例制备的本发明的化合物和对照化合物，每个化合物用DMSO配制成10mM备用，实验时从1000nM开始3倍稀释依次为1000nM、333.3nM、111.1nM、37.1nM、12.3nM、4.12nM、1.37nM、0.46nM、0.15nM、0.05nM。

1.2主要试剂

HEPES缓冲液购自Invitrogen公司；MgCl₂、柠檬酸钾缓冲溶液、DTT、乙酰基-CoA和NaHCO₃购自Sigma公司；BRIJ-35购自MERCK公司；ACC1和ACC2酶均购自BPS生物公司；ADP-Glo^TM激酶试剂盒购自Promega公司。

1.3耗材和仪器：

96孔聚丙烯板购自Nunc公司；振荡器购自QILINBEIER公司；离心机购自Eppendorf公司；384孔白板和Envision 2104读板器购自Perkin Elmer公司。

2实验方法

2.1.试剂配制

1×反应缓冲液(PH＝7.4)配制：用HEPES(1M)、MgCl₂(1M)、BRIJ-35(10％)、柠檬酸钾缓冲溶液(1M)、BSA(10mg/mL)和DTT(500mM)的储备液配制酶活反应缓冲液：包含HEPES(50mM)、MgCl₂(2mM)、BRIJ-35(0.01％)、柠檬酸钾缓冲溶液(2mM)、BSA(50μg/mL)和DTT(2mM)。

2.2.ACC酶活实验

1)ACC1酶活测试

将4.5μL 2.2×的ACC1酶(2nM)工作液加入384孔板中；然后加入0.5μL的不同浓度的化合物，室温孵育15min。

用2.1中配制的缓冲液配制2×的底物(40μM ATP，20μM乙酰CoA，60mM NaHCO3)；向384孔板中加入5μL的2×底物，室温孵育30min；然后加入10μL ADP-Glo试剂，室温孵育40min，终止反应；最后加入20μL酶检测试剂，室温孵育40min，用Envision 2104仪器读取荧光值信号(RLU)。

2)ACC2酶活测试

将4.5μL 2.2×的ACC2酶(1.1nM)工作液加入384孔板中；然后加入0.5μL的不同浓度的化合物，室温孵育15min。

用2.1中配制的缓冲液配制2×的底物(40μM ATP，40μM乙酰CoA，24mM NaHCO₃)；向384孔板中加入5μL的2×底物，室温孵育30min；然后加入10μL ADP-Glo试剂，室温孵育40min，终止反应；最后加入20μL酶检测试剂，室温孵育40min，用Envision 2104仪器读取荧光值信号(RLU)。

3实验数据处理

阴性对照组：含5％DMSO的溶媒；阳性对照组：含100nM的ND-630。求取各浓度以及阳性和阴性对照的数据的平均值，并且计算标准差。由下式计算抑制百分比：抑制率(100％)＝100×(RLU_阴性对照-RLU_化合物)/(RLU_阴性对照-RLU_阳性对照)。抑制率数据用非线性回归方程式拟合计算各化合物的IC₅₀，非线性回归方程为Y＝最低值+(最高值-最低值)/(1+10^((LogIC50 ^{-X)×HillSlope)})，其中X为化合物浓度的对数，Y为抑制百分比(100％)。

4实验结果

表2

“-”表示未测

以上实验结果表明，本发明的化合物对ACC1和ACC2均具有好的抑制活性。

实验例2 大鼠肝脏分布评价

1.实验材料

1.1动物

雄性SD大鼠，SPF级，购自上海西普尔必凯实验动物有限公司；220-250g，许可证号：SCXK(沪)2013-0016。实验前给予2-3天适应期。给药前禁食8～12h，给药2h后给水，4h后给食。

1.2主要试剂

甲醇、乙腈购自Merck公司；无水乙醇、PEG400和生理盐水购自南京凯基生物科技发展有限公司；邻甲苯海拉明购自上海子起生物科技有限公司。

1.3仪器

API 4000型三重四级杆液质联用仪、Analyst QS A01.01色谱工作站均购自美国AB SCIEX公司；Milli-Q超纯水器购自Millipore公司；CF16R XII台式高速冷冻离心机购自Hitachi公司；Qilinbeier Vortex-5振荡器购自德国IKA公司；电热恒温水浴锅购自常州国华电器有限公司；电动移液器购自美国Thermo公司；微量分析天平购自上海梅特勒有限公司。

2.实验方法

2.1供试药物配制

称取供试化合物6mg(以游离碱计)，加入至20mL乙醇-PEG400-生理盐水(10:30:60)中，涡旋2min，超声3min，配制浓度为0.3mg/mL的供试品溶液，用于口服给药；取供试品溶液100μL用甲醇定容至10ng/mL，同时配制等浓度的对照品，HPLC上进样检测供试品及对照品溶液浓度，计算供试品准确度。

2.2样品采集

单次口服给予SD大鼠供试化合物3mg/kg，给药体积为10mL/kg，大鼠给药后0.25h股动脉放血、断颈处死，立即收集肝脏和血液(用肝素钠抗凝)，置于冰上。

2.3肝脏样品处理和分析

称取0.4g肝脏，剪碎，于2mL 75％甲醇-水中匀浆,将匀浆液离心(离心条件：8000rpm/min，5min，4℃)，转移上清液冻存，进样前复溶、离心，取上清，用LC-MS/MS分析上清样品中化合物的含量。

2.4血浆样品处理和分析

采集后的全血样品置于冰盒中，于30min以内离心(离心条件：8000rpm/min，5min，4℃)并转移上层血浆100μL，加300μL甲醇沉淀，振荡、离心，加入流动相稀释，取上清，用LC-MS/MS分析上清样品中化合物的含量。

3实验结果

表3

化合物名称	肝脏(ng/g)	血浆(ng/mL)	肝脏/血浆分配比
				实施例1	4180	29.1	144
实施例4	4828	72.8	67.1
				实施例7	1457	19.3	75.5
实施例24	3167	48.5	65.3
				实施例25	3198	21.2	151
ND-630	6066	145	41.8

化合物在肝脏中的浓度越高，治疗肝脏疾病的效价越高，同等剂量下疗效越好，而肝脏/血浆比越高，表明供试化合物的靶器官选择性越强，化合物的安全性可能越好。从以上结果可以看出，本发明的化合物在肝脏中均有较高的分布，肝脏选择性及靶向性良好(肝/血比＞50)，因此，本发明化合物有望成为更优效更安全的治疗脂肪肝、非酒精性脂肪肝肝炎(NASH)等代谢性肝脏疾病的药物。

实验例3：体外人肝脏星状细胞LX-2激活抑制实验

1实验材料

1.1化合物制备

以上实施例制备的本发明的化合物和对照化合物，每个化合物用DMSO配制成60mM，备用。

1.2细胞株

人肝星状细胞LX-2，由徐列明教授在美国西奈山医学院肝病中心建立，上海肝病研究所细胞库保存。

1.3主要试剂

DMEM培养基、FBS、胰酶、磷酸盐缓冲液(DPBS)和青霉素-链霉素双抗购自美国GIBCO公司；重组人TGF-β1细胞因子(PeproTech公司，货号：100-21)；TransZOL Up PlusRNA抽提试剂盒(全式金，货号：ER501-01)；cDNA逆转录试剂盒(全式金，货号：AH341-01)；5×SYBR Green qPCR试剂盒(QuantiNovaTM，货号：154045739)。

1.4耗材和仪器：

CKX41倒置显微镜，日本Olympus公司产品，多功能酶标仪，美国MolecularDevices公司产品，Thermo Nano Drop 2000核酸定量分析仪，ABI 9700PCR扩增仪，ABI7500 PCR荧光定量，Thermo高速离心机(MEGAFUGE8)；全自动制冰机(雪科，IMS-30)

2实验方法

2.1.试剂配制

将本发明实施例的化合物和对照化合物DMSO母液用培养基依次稀释到30μM、10μM、3μM。按照PeproTech试剂盒说明书将TGF-β1用试剂盒配制的10mM的枸橼酸缓冲液溶解至1μg/mL，备用。

2.2.LX-2细胞处理

LX-2细胞传代后以的2×10⁵个/mL密度接种于6孔培养板内，每孔含10％FBS的DMEM 2mL，5％CO₂培养箱内37℃培养，记为Day1。24h后(Day2)，融合度达到70-80％，吸弃旧培养液，换以无血清的DMEM对细胞作低血清饥饿处理。于Day3吸弃旧培养液，加入培养液或含有不同浓度药物的培养液继续温育培养，分为对照组(无血清DMEM培养液)，TGFβ1组，TGFβ1+化合物组，TGFβ1工作浓度10ng/mL。药物作用24h后(Day4)，吸弃细胞上清，预冷1×PBS洗涤细胞1次，用于抽提总RNA。

2.3.总RNA抽提

2.3.1样品前处理：于细胞培养6孔板中每孔加入1mL的TransZOL Up试剂，水平放置片刻，使裂解液均匀分布于细胞表面并裂解细胞，使用移液枪吹打细胞使得细胞完全脱落，将裂解液转移至2mL RNase free离心管中，反复吹吸直至裂解液无明显沉淀。

2.3.2抽提步骤：根据TransZOL Up总RNA抽提试剂盒说明书进行操作。

2.4.总RNA浓度及纯度测定

取2μL总RNA置于NanoVue分光光度计检测A260nm波长吸光度，算出RNA浓度。RNA样品的纯度根据260nm及280nm吸光值比值(A260/A280)计算，比值在1.8～2.1范围，说明RNA无污染也无降解，方可用于后续试验。

2.5.cDNA的合成

将提取的RNA按照等质量稀释到相应的浓度为0.1μg～0.5μg(Total RNA≤1μg)之间，实验各个样本逆转录体系中总RNA的质量为～500ng。

按照逆转录试剂盒说明书(TransScriptⅡAll-in-One First-Strand cDNASynthese kit,Lot:AH341-1)，进行如下操作。合成的cDNA-70℃保存备用。

将以上体系轻轻混匀，以上体系液体放入ABI 9700PCR仪器中，设置如下程序：50℃×15min→85℃×5s→4℃×10min，将获得的cNDA贮存于-20℃或者立即使用。

2.6.Real-time PCR反应

所用Real-Time PCR引物：

PCR样本体系：

加样后轻轻混匀，离心，将PCR管置于PCR仪中，设置程序如下。

PCR仪器循环设置：

每样本设2个复孔，PCR仪器设定程序，计算目的基因相对表达量。

3实验数据处理

Real Time PCR结果的阈值由Real Time PCR detector system自动设置，按如下方法计算Col1A1基因的相对含量。

ΔCt(药物处理组Col1A1基因)＝Avg.Ct(药物处理组Col1A1基因)-Avg.Ct(药物处理组GAPDH基因)

ΔCt(TGF组Col1A1基因)＝Avg.Ct(TGF组Col1A1基因)-Avg.Ct(TGF组GAPDH基因)

ΔCt(对照组Col1A1基因)＝Avg.Ct(对照组Col1A1基因)-Avg.Ct(对照组GAPDH基因)

ΔΔCt＝ΔCt(TGF组/药物处理组Col1A1基因)–ΔCt(对照组Col1A1基因)的平均值

Col1A1基因的相对含量计算公式：RQ＝2^-ΔΔCt

相对定量的结果由ABI 7500实时定量荧光PCR仪器自动分析所得。

4实验结果

表4 Col1A1基因的相对含量计算

化合物	抑制率(％)
		实施例4	78.54
实施例24a	24.50
		实施例25	62.94
实施例56	105.01
		ND-630	42.06

Collagen 1是肝纤维化形成过程的关键的信号因子，其表达由Col1A1基因含量所代表。实验结果表明，本发明的化合物对TGF-β1诱导的LX-2细胞的Collagen 1基因的表达均具有显著的抑制活性。与ND-630相比，本发明的部分化合物对肝细胞纤维化形式的抑制活性更强，可用于ACC介导的纤维化疾病、增生性疾病等。

实验例4 HFD-CCL4诱导的NASH及肝纤维化药效评价

先用高脂饮食(HFD)诱导动物肝脏脂肪变性，在此基础上再用四氯化碳(CCL4)诱导肝脏炎症、坏死，发生肝纤维化，该模型与人NASH疾病发生过程以及病理现象类似。本项实验目的是在HFD-CCL4诱导的C57BL/6小鼠的NASH模型中评价本发明的化合物的药效，以ND-630作为对照化合物。HFD-CCL4诱导10周，药物干预4周，观察药物对NASH及肝纤维化的治疗作用。

1.实验材料

1.1仪器

脱水机Leica HistoCore PEARL；石蜡包埋机Leica HistoCore Arcadia C&H；石蜡切片机Leica RM2235；自动染色剂Leica ST5020；扫描仪HAMAMATSU NANO Zoomer S210；SR染色分析软件Visiopharm VIS 6.6.0.2516。

1.2动物

C57BL/6小鼠(雄性，18-20g)购于北京维通利华有限公司。实验动物饲养所有实验操作都经过KCI动物使用和福利委员会(IACUC)批准。小鼠饲养条件如下：温度20–25℃，湿度40％–70％，昼夜明暗交替时间12小时/12小时。每周换2次垫料。

2.实验方法

2.1化合物配制

本发明实施例的待测化合物和ND-630采用PEG200:0.2M Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液(35:65)溶液稀释至0.3mg/mL，1mg/mL，3mg/mL，备用给药，现配现用。

2.2动物造模

HFD-CCL4诱导C57BL/6小鼠NASH模型：动物在KCI实验动物中心SPF屏障内进行3-7天的适应性饲养后，动物更换HFD饲料饲养，饲养周期为10周。HFD饲养第6周结束时，根据动物体重将HFD组随机分组，每组10只，口服给予CCL4(一周三次，上午9-10点)，并持续4周。详细建模方法根据KCI已建立的方法建立HFD-CCL4诱导的雄性C57BL/6小鼠NASH模型，造模剂为Olive Oil+CCL4溶液(由KCI配制)。其余10只动物给予正常维持饲料伴随饲养作为正常对照动物。

动物分为正常对照组、HFD-CCL4模型组(模型组)和化合物组(本发明的测试化合物组、ND-630组)。

2.3化合物的给药方案

HFD饲养第6周结束后开始灌胃给予本发明的待测化合物和ND-630，每日一次，持续4周，第10周结束给药。其中，本发明的待测化合物组的剂量为10mg/kg/d，ND-630组的剂量为30mg/kg/d，即本发明的待测化合物组的给药剂量为ND-630组的给药剂量的三分之一。

2.4实验样本收集

末次给药结束后翌日即CCL4最后一次给予48h后各组动物禁食六小时，按照KCI标准操作规程将动物进行安乐死。根据KCI动物解剖实验操作规程将动物进行解剖，动物经低温PBS全身灌流后，采集肝脏，将部分动物肝脏(固定选择每个动物左侧同一肝叶)液氮迅速冷冻，-80℃低温保存。余下动物肝脏经福尔马林后固定(肝脏与固定液的体积比例为1:10)，进行相关病理相关检测。

2.5苏木素-伊红染色

肝左叶经10％福尔马林固定后，用石蜡包埋，制成5μm切片，用于苏木素-伊红(haematoxylin-eosin,H&E)染色。苏木素-伊红染色反映组织炎症，脂肪沉积，空泡变性和组织纤维化的程度，对病变程度进行半定量分析。

2.6天狼猩红染色

肝组织制成5μm切片，干燥2h，复水后用天狼猩红(北京海德创业，货号26357)室温染色30min，再脱水封片，用于图像分析。用Aperio ScanScope CS2(莱卡)，200×倍数扫描病理切片，再在Aperio ImageScope程序中打开扫描的图片，去除血管，剩下目标图像用Color Deconvolution v9分析算法。使用软件将被染为红色的纤维化部分识别为阳性信号，并计算出纤维化的百分率。

3.统计学分析

数据以均值±标准误表示。显著性分析采用学生t-test,one way ANOVA或者twoway ANOVA及post-hoc Dunnett′s test。

4.实验结果

4.1肝脏脂肪变性

实验动物给予高脂饮食10周，与正常对照组比，模型组肝脏脂肪变性程度显著加深。实施例25的化合物组(10mg/kg/d)较模型组脂肪变性明显消失，明显优于ND-630组(30mg/kg/d)。实验结果见表5。

表5 肝脏脂肪变性

4.2肝细胞变性

与正常对照组比，模型组肝细胞变性程度显著性升高；各化合物组治疗后，与模型组相比，实施例25的化合物组(10mg/kg/d)治疗后肝细胞变性程度明显减轻。实验结果见表6。

表6 肝细胞坏死

由此可见，本发明的化合物对HFD-CCL4诱导的小鼠NASH模型有一定的治疗作用；在组织病理上，与模型组相比可有效降低肝脏脂肪变性和肝细胞变性损伤。

尽管以上已经对本发明作了详细描述，但是本领域技术人员理解，在不偏离本发明的精神和范围的前提下可以对本发明进行各种修改和改变。本发明的权利范围并不限于上文所作的详细描述，而应归属于权利要求书。

Claims

1.一种通式V的化合物或其药学上可接受的盐：

其中

L选自亚苯基和8～10元含有1～3个杂原子的双环亚杂芳基，它们任选被一个或多个羟基、卤素、C_1-4烷基、卤代C_1-4烷基、氨基C_1-4烷基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷氧基、C_1-4烷基酰基、C_2-4烯基、C_2-4炔基取代；

R¹选自氢、氟、羧基、卤代C_1-6烷氧基、C(O)R³和S(O)₂R⁴，其中R³选自C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、3～6元环烷基、6～10元芳基、5～8元含有1～3个杂原子的杂芳基和4～8元含有1～3个杂原子的杂环烷基，它们任选被一个或多个羟基、C_1-4烷基、羧基、卤素、卤代C_1-4烷基、氨基C_1-4烷基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷氧基、氧代基团、C_1-4烷基酰基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、苯基、萘基和5～6元杂芳基取代；R⁴选自C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、3～6元环烷基、6～10元芳基、5～8元含有1～2个杂原子的杂芳基和4～8元含有1～2个杂原子的杂环烷基，它们任选被一个或多个C_1-6烷基、卤素、卤代C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、C_1-6烷氧基、氧代基团、C_1-6烷基酰基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基和5～6元杂芳基取代；

X不存在或为氧原子；

n选自0、1、2和3；和

M选自一个或多个羟基、C_1-4烷基、氨基C_1-4烷基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、卤代C_1-4烷基、C_1-4烷基酰基、C_1-4烷酰基氨基、C_1-4烷基砜基、3～6元环烷基酰基、氧代基团和5～6元含有1～3个杂原子的杂芳基，或者两个M与它们所连接的原子一起形成3～8元环烷基、3～8元杂环烷基、3～8元芳基或3～8元杂芳基，其任选被一个或多个羟基、C_1-4烷基、氨基C_1-4烷基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷氧基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、卤代C_1-4烷基、C_1-4烷基酰基、C_1-4烷酰基氨基、氧代基团取代。

2.根据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中L选自亚苯基和

它们任选被一个或多个羟基、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、异丙基、三氟甲基、三氟乙基、氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、异丙基氨基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、甲酰基、乙酰基、丙酰基、异丙酰基、乙烯基、丙烯基、乙炔基取代。

3.根据权利要求1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹选自氢、氟、羧基、氟乙基氧基、C(O)R³和S(O)₂R⁴，其中R³选自C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、3～6元环烷基、6～10元芳基、5～8元含有1～3个杂原子的杂芳基和4～8元含有1～3个杂原子的杂环烷基，它们任选被一个或多个羟基、C_1-4烷基、羧基、卤素、卤代C_1-4烷基、氨基C_1-4烷基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷氧基、氧代基团、C_1-4烷基酰基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、苯基、萘基和5～6元杂芳基取代；R⁴选自C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、3～6元环烷基、6～10元芳基、5～8元含有1～2个杂原子的杂芳基和4～8元含有1～2个杂原子的杂环烷基，它们任选被一个或多个C_1-6烷基、卤素、卤代C_1-6烷基、氨基C_1-6烷基、C_1-6烷基氨基、C_1-6烷氧基、氧代基团、C_1-6烷基酰基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、苯基和5～6元杂芳基取代。

4.根据权利要求1或2的化合物或其药学上可接受的盐，其中M选自一个或多个羟基、甲基、氨基甲基、甲基氨基、甲氧基、乙烯基、乙炔基、三氟甲基、三氟乙基、乙酰基、乙酰氨基、甲磺酰基、乙磺酰基、环己基甲酰基、氧代基团和咪唑基，或者两个M与它们所连接的原子一起形成3～6元环烷基、3～6元杂环烷基、3～6元芳基或3～6元杂芳基，其任选被一个或多个羟基、C_1-3烷基、氨基C_1-3烷基、C_1-3烷基氨基、C_1-3烷氧基、C_2-3烯基、C_2-3炔基、卤代C_1-3烷基、C_1-3烷基酰基、C_1-3烷酰基氨基、氧代基团取代。

5.根据权利要求3的化合物或其药学上可接受的盐，其中M选自一个或多个羟基、甲基、氨基甲基、甲基氨基、甲氧基、乙烯基、乙炔基、三氟甲基、三氟乙基、乙酰基、乙酰氨基、甲磺酰基、乙磺酰基、环己基甲酰基、氧代基团和咪唑基，或者两个M与它们所连接的原子一起形成3～6元环烷基、3～6元杂环烷基、3～6元芳基或3～6元杂芳基，其任选被一个或多个羟基、C_1-3烷基、氨基C_1-3烷基、C_1-3烷基氨基、C_1-3烷氧基、C_2-3烯基、C_2-3炔基、卤代C_1-3烷基、C_1-3烷基酰基、C_1-3烷酰基氨基、氧代基团取代。

6.一种药物组合物，其包含权利要求1-5之任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。

7.权利要求1-5之任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求6所述的药物组合物在制备用于抑制患者中的ACC表达相关疾病的药物中的应用。

8.根据权利要求7的应用，其中所述疾病为纤维化疾病、代谢性疾病、肿瘤和增生性疾病。

9.根据权利要求7的应用，其中所述疾病为肝纤维化、肥胖、糖尿病、非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪肝炎、肝癌、肾癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、乳头状甲状腺肿瘤、胆管癌、结肠癌、卵巢癌、恶性淋巴肿瘤，膀胱、前列腺和胰腺的癌和肉瘤。

10.根据权利要求7的应用，其中所述疾病为皮肤、结肠、甲状腺和卵巢的原发和复发性实体瘤。