CN114940683B - Hpk1抑制剂及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及一类可用作HPK1抑制剂的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，含有所述化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其异构体的药物组合物及制剂，制备所述化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体的方法，以及所述化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体的用途。

Description

HPK1抑制剂及其用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一类可作为HPK1抑制剂的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐及其立体异构体，含有所述化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐及其立体异构体的药物组合物及制剂，制备所述化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐及其立体异构体的方法，以及所述化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐及其立体异构体的用途。
背景技术
T细胞受体（TCR）介导的T细胞活化在胸腺T细胞发育、T细胞亚群分化以及效应T细胞功能发挥过程中均起着重要的作用。TCR可以识别抗原提呈细胞表面的MHC（主要组织相容性复合物），进而识别向细胞内部传递的信号。信号传递后引起下游信号通路的活化。TCR活化的典型胞内信号包括MAPK（丝裂原活化蛋白激酶）、PKC（蛋白激酶C）以及钙离子等信号通路。这些信号的活化最终激活T细胞的特异性基因表达，引起细胞的增殖，并使得T细胞分化为效应T细胞。内源性或过继转移的效应T细胞是抗肿瘤免疫的重要介质。持续性的抗原暴露会导致T细胞逐渐分化为耗竭状态，其特征是效应器功能和增殖能力的层次性丧失，以及明显的转录、表观遗传和代谢变化。如何预防T细胞耗竭并拓展效应T细胞功能是目前肿瘤免疫学中最紧迫的问题之一。
造血祖细胞激酶HPK1 (HematopoieticProgenitor Kinase1)是一种免疫抑制调节激酶，在造血干细胞中限制性表达。HPK1是T细胞受体（TCR）的负信号调节剂。TCR激活后，胞质HPK1被募集到细胞膜附近，活化的HPK1磷酸化衔接蛋白SLP76，以此激活SLP76作为负调节蛋白14-3-3的停靠位点，最终导致TCR信号复合物的不稳定，从而下调TCR信号。文献（Shui等，Nature Immunology(2007)8：84-91）披露HPK1缺乏导致TCR诱导的SLP-76和Erk磷酸化增强，Ca通量增加以及细胞因子和抗原特异性抗体的产生增加，表明HPK1负调节TCR信号传导和T细胞介导的免疫反应。此外，Sawasdikosol等发现HPK1 (- / -) T细胞对前列腺素PGE2的抑制和凋亡作用有抵抗力（Sawasdikosol等人，Cancer Immunol. Immunother.(2010)59:419-429）。2020年清华大学廖学斌课题组报道了HPK1在T细胞免疫疗法中的功能意义，【Siet al., Hematopoietic Progenitor Kinase1 (HPK1) Mediates T CellDysfunction and Is a Druggable Target for T Cell-Based Immunotherapies,Cancer Cell (2020)】研究人员首先在公开的肿瘤数据库中分析得知MAP4K1（编码HPK1）与T细胞耗竭相关的信号分子（如：PDCD1、TIGIT、CTLA4、LAG3等）呈现很强的正相关性。在低级别胶质瘤（LGG）、浸润性乳腺癌（BRAC）等肿瘤中显著的表现出，MAP4K1低表达的患者有着更长的生存期。接下来，研究人员选取多发性骨髓瘤组织活检，分选测量T细胞中HPK1与免疫抑制分子的蛋白表达情况，实验结果可知在耗竭的T细胞中，HPK1的表达上调。此实验结果表明HPK1与肿瘤浸润性T细胞耗竭的正相关性，HPK1可能是调节T细胞耗竭并抑制抗肿瘤免疫反应的一个重要激酶。
HPK1又称为MAP4K1，属于MAP4K家族的成员，该家族中还有其他5位成员MAP4K2（GCK激酶）、MAP4K3（GLK激酶）、MAP4K4（HGK激酶）、MAP4K5（KHS激酶）和MAP4K6（MINK激酶）。其中GLK激酶的生物学作用与HPK1的作用正好相反，GLK可以通过与下游接头蛋白结合，促进TCR通路的激活。而文献【Huai-Chia Chuang等，Chapter Seven - MAP4K FamilyKinases in Immunity and Inflammation, Advances in Immunology, 2016（129）277-314】发现HGK激酶的丢失会导致小鼠自发性全身炎症和2型糖尿病，家族中其他激酶的作用暂时不详。为了保证更好的安全性，我们需要找到对MAP4K家族其他成员具有高选择性的HPK1激酶抑制剂。
目前，该靶点药物的研究仍处于临床实验阶段，尚无药物上市，为了更好的满足临床需求，开发一款选择性高、活性高、安全性强的HPK1激酶抑制剂具有重要的临床意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种结构新颖的、对HPK1有良好抑制活性的HPK1抑制剂化合物。进一步的，该类化合物可用于抑制HPK1激酶活性，从而增强机体对肿瘤的免疫作用。更进一步的，该类化合物还可用于治疗或预防由HPK1所介导的相关疾病，尤其是癌症。该类化合物对多种癌细胞具有良好的抑制作用，并具有良好的成药性。
本发明的技术方案如下：
在一方面，本发明提供了如下通式（I）所示的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，
Figure 274212DEST_PATH_IMAGE001
（I），
其中，
Y1、Y2、Y3分别独立地选自C(R3)或N；
Y4、Y5分别独立地选自CH、N或C；
L1选自-CRaRb-、-O-或-NRa-；
R1选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代C1-6烷氧基；
R2在每次出现时分别独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、二(C1-6烷基)氨基、卤代C1-6烷基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷硫基、卤代C1-6烷氧基、卤代C1-6烷硫基、羟基C1-6烷氧基、羟基C1-6烷硫基、氨基C1-6烷氧基或氨基C1-6烷硫基；
环A以及其所连接的Y4、Y5共同组成选自任选被1-3个Q1取代的7-15元稠环烷基、7-15元稠杂环烷基；
Q1在每次出现时分别独立地选自卤素、羟基、硝基、氨基、氰基、-NRaRb、-ORa、-SRa、-C(O)Ra、或任选被氘取代的以下基团：C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、-(CH2)m-3-6元环烷基；
R3选自氢、卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基或卤代C1-6烷氧基；
Ra、Rb在每次出现时分别独立地选自氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基或卤代C1-6烷氧基；
m、t分别独立地选自0、1或2。
在某些实施方案中，所述的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，
Y3为C(R3)；
Y1、Y2分别独立地选自C(R3)或N；
Y4、Y5分别独立地选自CH、N或C；
L1选自-CRaRb-、-O-或-NRa-；
R1选自氢、卤素、C1-6烷基或卤代C1-6烷基；
R2在每次出现时分别独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基；
环A以及其所连接的Y4、Y5共同组成选自任选被1-3个Q1取代的8-12元稠环烷基、8-12元稠杂环烷基；
Q1在每次出现时分别独立地选自卤素、或任选被氘代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、-(CH2)m-3-6元环烷基；
R3选自氢、卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基或卤代C1-6烷氧基；
Ra、Rb在每次出现时分别独立地选自氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基或卤代C1-6烷氧基；
m、t分别独立地选自0、1或2。
在某些实施方案中，所述的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，具有如下通式（II-1）或通式（II-2）所示的结构：
Figure 784828DEST_PATH_IMAGE003
（II-1）、
Figure 33407DEST_PATH_IMAGE005
（II-2），
其中，Y4、Y5、L1、R1、R2、环A、Q1、R3、Ra、Rb、m、t如以上任一实施方案所述。
在某些实施方案中，所述的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，
Y3为C(R3)；
Y1、Y2分别独立地选自C(R3)或N；
Y4选自N或C；
Y5为C；
L1选自-CRaRb-、-O-或-NRa-；
R1选自氢、卤素、C1-4烷基或卤代C1-4烷基；
R2在每次出现时分别独立地选自氢、卤素、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷氧基；
环A以及其所连接的Y4、Y5共同组成选自任选被1-3个Q1取代的9-11元稠环烷基、9-11元稠杂环烷基；
Q1在每次出现时分别独立地选自卤素、或任选被氘代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基或-(CH2)m-3-6元环烷基；
R3选自氢、卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基或卤代C1-4烷氧基；
Ra、Rb在每次出现时分别独立地选自氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基或卤代C1-4烷氧基；
m、t分别独立地选自0、1或2。
在某些实施方案中，所述的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，
Y3为CH；
Y1、Y2分别独立地选自CH或N；
Y4选自N或C；
Y5为C；
L1选自-CRaRb-、-O-或-NRa-；
R1选自氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、一氟甲基、二氟甲基或三氟甲基；
R2在每次出现时分别独立地选自氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氟乙基、二氟乙基、三氟乙基、一氟甲氧基、二氟甲氧基或三氟甲氧基；
环A以及其所连接的Y4、Y5共同组成如下基团：
Figure 22091DEST_PATH_IMAGE006
Q1在每次出现时分别独立地选自卤素、或任选被氘代的甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、一氟甲基、一氟乙基、二氟甲基、二氟乙基、三氟甲基、三氟乙基、一氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、-(CH2)m-环丙基、-(CH2)m-环丁基、-(CH2)m-环戊基、-(CH2)m-环己基；并且各Q1可对环A任意位置进行取代；
R3选自氢、卤素、氰基、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、一氟甲基、一氟乙基、二氟甲基、二氟乙基、三氟甲基、三氟乙基、一氟甲氧基、二氟甲氧基或三氟甲氧基；
Ra、Rb在每次出现时分别独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、一氟甲基、一氟乙基、二氟甲基、二氟乙基、三氟甲基、三氟乙基、一氟甲氧基、二氟甲氧基或三氟甲氧基；
m、t分别独立地选自0、1或2；
n分别独立地选自0、1、2或3。
在某些实施方案中，R1选自氢或C1-4烷基。
在某些实施方案中，R1选自氢、甲基、乙基、丙基或异丙基。
在某些实施方案中，R2在每次出现时分别独立地选自C1-4烷基或卤代C1-4烷基。
在某些实施方案中，R2在每次出现时分别独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟甲基、一氟乙基、二氟甲基、二氟乙基、三氟甲基或三氟乙基。
在某些实施方案中，环A以及其所连接的Y4、Y5共同组成如下基团：
Figure 305305DEST_PATH_IMAGE007
Q1在每次出现时分别独立地选自卤素、或任选被氘代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基或-(CH2)m-3-6元环烷基；并且各Q1可对环A任意位置进行取代。
在某些实施方案中，环A以及其所连接的Y4、Y5共同组成如下基团：
Figure 721243DEST_PATH_IMAGE009
Q1在每次出现时分别独立地选自卤素、或任选被氘代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基或-(CH2)m-3-6元环烷基；并且各Q1可对环A任意位置进行取代。
在某些实施方案中，环A以及其所连接的Y4、Y5共同组成如下基团：
Figure 457118DEST_PATH_IMAGE010
Q1在每次出现时分别独立地选自卤素、或任选被氘代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基或-(CH2)m-3-6元环烷基。
在某些实施方案中，Q1在每次出现时分别独立地选自卤素、或任选被氘代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基。
在某些实施方案中，Q1在每次出现时分别独立地选自卤素、或任选被氘代的甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、一氟甲基、一氟乙基、二氟甲基、二氟乙基、三氟甲基、三氟乙基、一氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基。
在某些实施方案中，Q1在每次出现时分别独立地选自任选被氘代的甲基、乙基、丙基、异丙基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基。
在某些实施方案中，R3选自氢、卤素、氰基或C1-4烷基。
在某些实施方案中，R3选自氢、氟、氯、溴、氰基、甲基、乙基、丙基或异丙基。
在某些实施方案中，Ra在每次出现时分别独立地选自氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基或卤代C1-4烷氧基；Rb在每次出现时分别独立地选自氢或C1-4烷基。
在某些实施方案中，Ra在每次出现时分别独立地氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基或三氟甲氧基；Rb在每次出现时分别独立地选自氢、甲基、乙基、丙基或异丙基。
在某些实施方案中，L1选自-O-或-NRa-。
在某些实施方案中，L1选自O或NH。
在某些实施方案中，R1为H。
在某些实施方案中，Ra、Rb分别独立地为H。
在某些实施方案中，L1选自-NH-或O。
在本发明技术方案中，所述环A中环氮原子上的氢可任选的被Q1取代。
在某些实施方案中，t为1。
在某些实施方案中，所述的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，具有如下通式（III-1）或通式（III-2）所示的结构：
Figure 249493DEST_PATH_IMAGE011
（III-1）、
Figure 387213DEST_PATH_IMAGE012
（III-2），
其中，Y4、L1、R2、环A、Q1、Ra、Rb、m如任一实施方案所述。
在某些实施方案中，所述的
Figure 974053DEST_PATH_IMAGE013
分别独立地选自如下基团：
Figure 197223DEST_PATH_IMAGE014
其中，Q1的定义如前文任一方案所述；并且各Q1可对三并环结构的任意位置进行取代。
在某些实施方案中，所述的
Figure 527711DEST_PATH_IMAGE015
分别独立地选自如下基团：
Figure 519937DEST_PATH_IMAGE017
其中，Q1的定义如前文任一方案所述；并且各Q1可对三并环结构的任意位置进行取代。
在某些实施方案中，所述的
Figure 543257DEST_PATH_IMAGE018
分别独立地选自如下基团：
Figure 253724DEST_PATH_IMAGE020
其中，Q1的定义如前文任一方案所述。
本发明中各技术方案之间可以相互组合形成新的技术方案，所形成的新的技术方案同样包括在本发明的范围之内。
在某些实施方案，前述化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，选自如下化合物：
Figure 122323DEST_PATH_IMAGE021
Figure 234636DEST_PATH_IMAGE022
Figure 163277DEST_PATH_IMAGE023
本发明还提供了一种药物组合物，其含有前述通式（I）、通式（II-1）、通式（II-2）、通式（III-1）、通式（III-2）所述的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，及一种或多种药用载体和/或稀释剂；所述药物组合物可以制成临床上或药学上可接受的任一剂型，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、注射剂（包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液）、栓剂、吸入剂或喷雾剂等。
在本发明的某些实施方案中，上述药物制剂可以以口服、肠胃外、直肠或经肺给药等方式施用于需要这种治疗的患者或受试者。用于口服给药时，所述药物组合物可制成口服制剂，例如可以制成常规的口服固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。用于肠胃外给药时，上述药物制剂也可制成注射剂、包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，配置注射剂时，可以不加入附加剂，也可以根据药物的性质加入适宜的附加剂。用于直肠给药时，所述药物组合物可制成栓剂等。用于经肺给药时，所述药物组合物可制成吸入剂或喷雾剂等。
本发明的药物组合物或药物制剂中可用的药用载体和/或稀释剂可以是药物制剂领域中任何常规的载体和/或稀释剂，特定载体和/或稀释剂的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。
在另一方面，本发明还涉及前述通式（I）、通式（II-1）、通式（II-2）、通式（III-1）、通式（III-2）所述化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体在制备预防和/或治疗由HPK1所介导的疾病及相关疾病的药物中的用途，所述药物可与一种或多种其他药物联用以预防或治疗由HPK1所介导的疾病及相关病症。所述疾病及相关病症选自癌症或良性肿瘤，所述癌症包括原位癌和转移的癌症。进一步的，所述癌症包括但不限于肺癌、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、直肠癌、肝癌、肾癌、食管腺癌、食管鳞状细胞癌、前列腺癌、甲状腺癌、雌性生殖道癌、淋巴瘤、神经纤维瘤、骨癌、皮肤癌、脑癌、结肠癌、睾丸癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠道间质瘤、肥大细胞肿瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、白血病、胶质瘤或肉瘤等。
进一步的，本发明还涉及含有前述通式（I）、通式（II-1）、通式（II-2）、通式（III-1）、通式（III-2）所述化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体的药物制剂在制备药物中的用途，所述药物可与一种或多种药物联用以治疗及/或预防由HPK1所介导的疾病及相关病症。
在另一方面，本发明涉及的含有前述通式（I）、通式（II-1）、通式（II-2）、通式（III-1）、通式（III-2）所述化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体的药物可以单独给药，或者与一种或多种第二治疗活性剂联合使用，所述第二治疗活性剂与本申请的HPK1抑制剂化合物组合用于治疗和/或预防由HPK1所介导的疾病和相关病症。因此，在某些实施方案中，所述的药物组合物还含有一种或多种第二治疗活性剂。在某些实施方案中，所述的第二治疗活性剂选自抗癌剂，包括有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢物、反义DNA或RNA、抗肿瘤抗生素、生长因子抑制剂、信号传导抑制剂、细胞周期抑制剂、酶抑制剂、类维生素A受体调控剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物应答调节剂、激素类药物、血管再生抑制剂、细胞生长抑制剂、靶向抗体、HMG-CoA还原酶抑制剂和异戊二烯基蛋白质转移酶抑制剂。
在某些实施方案中，待组合的各成分（例如，本发明的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体与第二治疗活性剂）可同时给药或依次顺序地分开用药。例如，可以在施用本发明化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体之前、同时或之后，施用第二治疗活性剂。此外，待组合的各成分还可以以同一制剂形式或以分开的不同制剂的形式联合给药。
在另一方面，本发明还提供了一种治疗由HPK1介导的疾病及相关病症的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的前述通式（I）、通式（II-1）、通式（II-2）、通式（III-1）、通式（III-2）所述的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，前述制剂或药物组合物；所述由HPK1介导的疾病及相关病症如上定义。
所述的“有效量”是指能够减轻、延缓、抑制或治愈受试者病症的药物剂量。给药剂量的大小与药物给药方式、药剂的药代动力学、疾病的严重程度、受试者的个性体征（性别、体重、身高、年龄）等来确定。
【发明详述】
在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员通常理解的含义，然而为了更好的理解本发明，下面提供了部分术语的定义。当本发明所提供的术语的定义和解释与本领域技术人员所通常理解的含义不符的时候，以本发明所提供的术语的定义和解释为准。
本发明所述的“卤素”是指氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。
本发明所述的“C1-6烷基”表示直链或支链的含有1-6个碳原子的烷基，包括例如“C1-4烷基”、“C1-3烷基”、“C1-2烷基”、“C2-6烷基”、“C2-5烷基”、“C2-4烷基”、“C2-3烷基”、“C3-6烷基”、“C3-5烷基”、“C3-4烷基”等，具体实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、异己基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1,2-二甲基丙基等。本发明所述的“C1-4烷基”指C1-6烷基中的含有1-4个碳原子的具体实例。
本发明所述的“C1-6烷氧基”是指“C1-6烷基-O-”，所述的“C1-6烷基”如前文所定义。本发明所述的“C1-4烷氧基”是指“C1-4烷基-O-”，所述的“C1-4烷基”如前文所定义。
本发明所述的“C1-6烷硫基”是指“C1-6烷基-S-”，所述的“C1-6烷基”如前文所定义。本发明所述的“C1-4烷硫基”是指“C1-4烷基-S-”，所述的“C1-4烷基”如前文所定义。
本发明所述的“羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、卤代C1-6烷基”是指C1-6烷基中的一个或多个氢分别被一个或多个羟基、氨基或卤素所取代。C1-6烷基如前文所定义
本发明所述“羟基C1-6烷氧基、氨基C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基”是指“C1-6烷氧基”中的一个或多个氢被一个或多个羟基、氨基或卤素所取代。
本发明所述“羟基C1-6烷硫基、氨基C1-6烷硫基、卤代C1-6烷硫基”是指“C1-6烷硫基”中的一个或多个氢被一个或多个羟基、氨基或卤素所取代。
本发明所述的“C1-6烷基氨基、二(C1-6烷基)氨基”分别是指C1-6烷基-NH-、
Figure 361040DEST_PATH_IMAGE025
。
本发明所述的“3-6元环烷基”是指含有3-6个碳原子的饱和或部分饱和的且不具有芳香性的单环环状烷基，优选“3-4元单环烷基”、“3-5元单环烷基”、“4-5元单环烷基”、“4-6元单环烷基”、“5-6元单环烷基”。所述的“3-6元饱和单环烷基”的具体实例包括但不限于：环丙烷基（环丙基）、环丁烷基（环丁基）、环戊烷基（环戊基）、环己烷基（环己基）等；所述的“3-6元部分饱和单环烷基”的具体实例包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环戊二烯基、环己烯基、环己-1,3-二烯、环己-1,4-二烯等。
本发明所述的“7-15元稠环烷基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的碳原子所形成的含有7-15个环原子的、饱和或部分饱和的、非芳香性环状基团，所述的稠环中的一个环可以为芳香性环，但稠环整体不具备芳香性；任选地，环状结构中的环碳原子可以被氧代；其包括“8-9元稠环基”、“8-12元稠环烷基”、“9-11元稠环基”等，其稠和方式可以为：5-6元环烷基并5-6元环烷基、苯并5-6元环烷基、苯并5-6元饱和环烷基等。其实例包括但不限于：二环[3.1.0]己烷基、二环[4.1.0]庚烷基、二环[2.2.0]己烷基、二环[3.2.0]庚烷基、二环[4.2.0]辛烷基、八氢并环戊二烯基、八氢-1H-茚基、十氢化萘基、十四氢菲基、双环[3.1.0]己-2-烯基、双环[4.1.0]庚-3-烯基、双环[3.2.0]庚-3-烯基、双环[4.2.0]辛-3-烯基、1,2,3,3a-四氢并环戊二烯基、2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-茚基、1,2,3,4,4a,5,6,8a-八氢化萘基、1,2,4a,5,6,8a-六氢化萘基、1,2,3,4,5,6,7,8,9,10-十氢菲基、苯并环戊基、苯并环己基、苯并环己烯基、苯并环戊烯基等。
本发明所述“7-15元稠杂环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的原子所形成的含有7-15个环原子的、且至少一个环原子为杂原子的、饱和或部分饱和的、非芳香性环状基团，所述的稠环中其中一个环可以为芳香性环，但稠环整体不具备芳香性，所述杂原子为氮原子、氧原子和/或硫原子，任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代，包括但不限于“8-9元稠杂环基”、 “8-12元稠杂环基”、“9-10元稠杂环基”、 “9-11元稠杂环基”、“10-11元稠杂环基”等，其稠和方式可以为5-6元杂环基并5-6元杂环基、5-6元杂环基并5-6元环烷基、苯并5-6元杂环基、苯并5-6元饱和杂环基、苯并6-7元杂环基、苯并6-7元饱和杂环基、5-6元杂芳基并5-6元杂环基、5-6元杂芳基并5-6元饱和杂环基等；所述“7-15元稠杂环基”具体实例包括但不仅限于：吡咯烷基并环丙基、环戊基并氮杂环丙基、吡咯烷基并环丁基、吡咯烷基并吡咯烷基、吡咯烷基并哌啶基、吡咯烷基并哌嗪基、吡咯烷基并吗啉基、哌啶基并吗啉基、苯并吡咯烷基、苯并环戊基、苯并环己基、苯并四氢呋喃基、苯并吡咯烷基、苯并咪唑烷基、苯并噁唑烷基、苯并噻唑烷基、苯并异噁唑烷基、苯并异噻唑烷基、苯并哌啶基、苯并吗啉基、苯并哌嗪基、苯并四氢吡喃基、吡啶并环戊基、吡啶并环己基、吡啶并四氢呋喃基、吡啶并吡咯烷基、吡啶并咪唑烷基、吡啶并噁唑烷基、吡啶并噻唑烷基、吡啶并异噁唑烷基、吡啶并异噻唑烷基、吡啶并哌啶基、吡啶并吗啉基、吡啶并哌嗪基、吡啶并四氢吡喃基、嘧啶并环戊基、嘧啶并环己基、嘧啶并四氢呋喃基、嘧啶并吡咯烷基、嘧啶并咪唑烷基、嘧啶并噁唑烷基、嘧啶并噻唑烷基、嘧啶并异噁唑烷基、嘧啶并异噻唑烷基、嘧啶并哌啶基、嘧啶并吗啉基、嘧啶并哌嗪基、嘧啶并四氢吡喃基；四氢咪唑并[4,5-c]吡啶基、3,4-二氢喹唑啉基、1,2-二氢喹喔啉基、苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯基、2H-色原烯基、2H-色原烯-2-酮基、4H-色烯基、4H-色烯-4-酮基、4H-1,3-苯并噁嗪基、4,6-二氢-1H-呋喃并[3,4-d]咪唑基、3a,4,6,6a-四氢-1H-呋喃并[3,4-d]咪唑基、4,6-二氢-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑基、4,6-二氢-1H-吡咯并[3,4-d]咪唑基、八氢-苯并[d]咪唑基、十氢喹啉基、六氢噻吩并咪唑基、六氢呋喃并咪唑基、4,5,6,7-四氢-1H-苯并[d]咪唑基、八氢环戊烯并[c]吡咯基、4H-1,3-苯并噁嗪基等。
术语 “苯并环戊基”，其结构是指
Figure 33330DEST_PATH_IMAGE026
（亦可称之为2,3-二氢-1H-茚基）；术语“苯并吡咯烷”其结构包括
Figure 149DEST_PATH_IMAGE027
等；术语“吡啶并四氢呋喃基”其结构包括
Figure DEST_PATH_IMAGE028
、
Figure 834113DEST_PATH_IMAGE029
。前文所定义的其他“定义的其它稠杂环基”的具体实例具有与之类似的环状结构。
本发明所述的“碳原子、氮原子或硫原子被氧代”是指形成C=O、N=O、S=O或SO2的结构。
本发明所述的“C(Ra)(Rb)”是指Ra、Rb分别取代亚甲基上的两个氢原子形成的基团，具体的连接方式为
Figure DEST_PATH_IMAGE030
。
本发明所述“任选被取代”是指被取代基上的一个或多个氢原子可以被一个或多个取代基“取代”或“不取代”的两种情形。
本发明所述的“氘代物”是指化合物结构中的一个或多个1H被2H（也被表示为“D”）取代所形成的结构。
本发明所述的“药学上可接受的盐”指化合物中存在的酸性官能团(例如-COOH、-OH、-SO3H等)与适当的无机或者有机阳离子(碱)形成的盐，包括与碱金属或碱土金属形成的盐、铵盐，以及与含氮有机碱形成的盐；以及化合物中存在的碱性官能团(例如-NH2等)与适当的无机或者有机阴离子(酸)形成的盐，包括与无机酸或有机酸(例如羧酸等)形成的盐。其实例包括但不限于锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、铋盐、盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、四氟硼酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐和谷氨酸等。
本发明所述的“异构体”是指当本发明化合物含有一个或多个不对称中心，因而可作为外消旋体和外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单一非对映异构体。本发明化合物可以有不对称中心，这类不对称中心各自独立地产生两个光学异构体。本发明的范围包括所有可能的光学异构体和它们的混合物。本发明所述的化合物若含有烯烃双键，除非特别说明，包括顺式异构体和反式异构体。本发明所述的化合物可以以互变异构体（官能团异构体的一种）形式存在，其通过一个或多个双键位移而具有不同的氢的连接点，例如，酮和它的烯醇形式是酮-烯醇互变异构体。本发明化合物含有螺环结构，受环的立体空间结构的影响，环上的取代基可存在于环两侧从而形成相对的顺式（cis）和反式（trans）异构体。各互变异构体及其混合物都包括在本发明的范围中。所有化合物的对映异构体、非对映异构体、外消旋体、内消旋体、顺反异构体、互变异构体、几何异构体、差向异构体及其混合物等，均包括在本发明范围中。
本发明化合物可通过对映体特异性合成或从对映异构体混合物拆分以得到个别对映异构体的形式制备。常规拆分技术包括使用光学活性酸形成对映异构体对的每一异构体的游离碱的盐（接着分步结晶和游离碱再生）、使用光学活性胺形成对映异构体对的每一对映异构体的酸形式的盐（接着分步结晶和游离酸再生）、使用光学纯酸、胺或醇形成对映异构体对的每一对映异构体中的每一种的酯或酰胺（接着为色谱分离和手性助剂去除）或使用各种众所周知的色谱方法拆分起始物质或最终产物的对映异构体的混合物。
当公开的化合物的立体化学通过结构命名或描绘时，命名或描绘的立体异构体相对于其他立体异构体为至少60%重量、70%重量、80%重量、90%重量、99%重量或99.9%重量纯。当单一异构体通过结构命名或描绘时，所描绘或命名的对映异构体为至少60%重量、70%重量、80%重量、90%重量、99%重量或99.9%重量纯。光学纯度重量%为对映异构体的重量与对映异构体重量加上其光学异构体的重量比率。
本发明所述的“剂型”指将药物制成的适用于临床使用的形式，包括但不限于散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液)、喷雾剂、气雾剂、粉雾剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂、含漱剂或栓剂，更优选散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、注射剂、软膏剂、含漱剂或栓剂。
发明的有益效果
1、本发明化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体具有优异的高选择性的HPK1活性抑制作用。
2、本发明化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体在生物体内具有良好的药代动力学性质，作用持久，具有良好的暴露量和生物利用度，能够治疗和/或预防由HPK1介导的疾病。
3、本发明化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体对HPK1介导的癌症具有较好的治疗作用。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式对本发明技术方案进行描述，对本发明的上述内容作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
下述实验中所用缩写代表的含义如下：
DMAP：4-二甲氨基吡啶
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
DIEA：N,N-二异丙基乙胺
NBS：N-溴代丁二酰亚胺
THF：四氢呋喃
PE：石油醚
EA：乙酸乙酯
MeOH：甲醇
MsCl：甲磺酰氯
HATU：2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯
RuPhosPdG3：甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)
KHMDS：双(三甲基硅烷基)氨基钾
实施例1：7-((2-甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)异吲哚啉-1-酮的制备（化合物1）
Figure 378227DEST_PATH_IMAGE031
（1）3-(2-甲氧基-5-硝基吡啶-4-基)-2-氧丙酸乙酯的制备
将KHMDS(59.5 mL, 59.5 mmol)溶于四氢呋喃/乙醇(250/25 mL)中, 25 ℃下反应15 min，加入草酸二乙酯(8.7 g, 59.5 mmol)，慢慢滴加2-甲氧基-4-甲基-5-硝基吡啶的THF溶液(10 g, 59.5 mmol, 60 mL)，25 ℃下反应16 h。加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取，浓缩，柱层析(乙酸乙酯/正庚烷=0-30%)得到目标化合物(8.0 g, 50%)。
（2）5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯的制备
将3-(2-甲氧基-5-硝基吡啶-4-基)-2-氧丙酸乙酯(8.0 g, 30 mmol)溶于乙醇(150 mL)中，加入10% 钯碳(1.6 g)，25 ℃下反应16小时，过滤，有机相旋干后得到目标化合物6.5 g，收率为98%。
（3）1-乙酰基-5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯的制备
将5-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯(6.5 g, 29 mmol)溶于二氯甲烷(60 mL)中，加入三乙胺(4 g, 40 mmol)、DMAP(404 mg, 3.3 mmol)、乙酸酐(4.3 g, 42mmol)，25 ℃下反应24小时，水洗，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。
（4）1-乙酰基-5-甲氧基-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯的制备
将1-乙酰基-5-甲氧基-1H-吡咯[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯(粗品)溶于乙醇(200mL)中，加入氯化钯(582 mg)，加料完毕后，置换氢气，于25 ℃反应18小时。溶剂旋干后，经柱层析(乙酸乙酯/正庚烷=0-60%) 得到目标化合物6.3 g，两步收率82%。
（5）5-甲氧基-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯的制备
将1-乙酰基-5-甲氧基-2,3-二氢-1H-吡咯[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯(6.3 g,23.8 mmol)溶于乙醇(60 mL)，加入4M 盐酸乙醇溶液(20 mL)，80℃反应5小时。LCMS检测反应结束。浓缩，二氯甲烷萃取反应液，饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，有机相干燥浓缩目标化合物3.7 g，收率70%。
（6）1-((苄氧基)羰基)甘氨酸)-5-甲氧基-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯的制备
将5-甲氧基-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯(3.7 g, 16.7 mmol)溶于DMF (60 mL)中，加入((苄氧基)羰基)甘氨酸(4.2 g, 20 mmol)、HATU(9.5 g, 25.1mmol)、和DIEA(4.3 g, 33.4 mmol)，加毕，25 ℃反应16小时。LCMS检测反应结束。加水洗涤，二氯甲烷萃取，有机相干燥，旋干，得到目标化合物粗品。
（7） 8-甲氧基-2,3,10,10a-四氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮的制备
将1-((苄氧基)羰基)甘氨酸)-5-甲氧基-2,3-二氢-1H-吡咯[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯(粗品)溶于甲醇(100 mL)中，加入钯碳(1 g)，加料完毕后，置换氢气，于25 ℃反应18小时，过滤浓缩直接用于下步反应。
（8）8-甲氧基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪的制备
将8-甲氧基-2,3,10,10a-四氢吡啶[4',3':4,5]吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(粗品)溶于四氢呋喃(100 mL)中，0 ℃下加入氢化锂铝(3.0 g, 80 mmol)，加毕，60 ℃反应4小时。LCMS检测反应结束。0 ℃下，加水淬灭反应，硅藻土过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析分离(甲醇:二氯甲烷=0-60%)得目标化合物1.5 g，三步反应收率43.8%。
（9）8-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪的制备
将8-甲氧基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪(1.5g, 7.3 mmol)、33%甲醛水溶液(1.29 g, 14.6 mmol)、氰基硼氢化钠(854 mg, 13.6 mmol)溶于醋酸/甲醇(0.35/50 mL)中，60 ℃下反应16小时。LCMS检测反应结束。浓缩，二氯甲烷萃取，饱和碳酸氢钠洗，有机相干燥浓缩得到产物1.2 g，收率75%。
（10）8-羟基-2-甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪的制备
将8-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶[4',3':4,5]吡咯[1,2-a]吡嗪(600 mg, 2.7 mmol)溶于33%氢溴酸醋酸溶液中，100 ℃反应5小时。LCMS检测反应结束。浓缩溶剂，DIEA调节至碱性，柱层析分离(甲醇:水=0-60%)得目标化合物350 mg，收率74%。
（11）8-三氟甲磺酸酯基-2-甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪的制备
将8-羟基-2-甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶[4',3':4,5]吡咯[1,2-a]吡嗪(350mg, 1.7 mmol)溶于二氯甲烷(10 mL)中，加入吡啶(1.3 g, 16.9 mmol)，0 ℃加入三氟甲磺酸酐(1.4 g, 5.0 mmol)，加毕反应1小时。LCMS检测反应结束。浓缩溶剂，柱层析分离(乙腈/水=0-90%)得目标化合物170 mg，收率42%。
（12）7-((2-甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3:4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚-2-羧酸叔丁酯的制备
将8-三氟甲磺酸酯基-2-甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪(170 mg, 0.50 mmol)溶于二氧六环(20 mL)中，加入7-氨基-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(190 mg, 0.50 mmol)、RuPhosPd-G3 (42 mg, 0.050 mmol)和碳酸铯(326 mg, 1 mmol)，加毕，氮气保护下，100 ℃反应30分钟。LCMS检测反应结束。浓缩直接用于下步反应。
（13）7-((2-甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)异吲哚啉-1-酮的制备
将7-((2-甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3:4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(粗品)溶于4 M 氯化氢乙酸乙酯溶液(2 mL)和饱和二氯甲烷溶液(10 mL)中，25 ℃反应30分钟。浓缩，加入DIEA调节至碱性，经柱层析(甲醇/水=0-50%)得目标化合物17.0 mg，两步收率7.3%。
分子式: C27H27N7O 分子量: 465.6 LC-MS (M/e): 466.1 (M+H+)
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6) δ: 9.68 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.55 (s, 1H),8.52-8.45 (m, 1H), 8.23 (s,1H) , 7.76 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.17 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.49 (s, 2H),3.62-3.41(m, 1H), 2.92-2.95(m, 2H), 2.83-2.85 (m, 2H), 2.78 (s, 3H), 2.33 (s,3H), 1.71-1.82 (m, 2H), 1.55-1.68 (m, 2H).
实施例2：7-((2-氘代甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)异吲哚啉-1-酮的制备（化合物2）
Figure DEST_PATH_IMAGE032
Figure 323049DEST_PATH_IMAGE033
（1）8-甲氧基-2-氘代甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪的制备
将8-甲氧基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪(1.5g, 7.3 mmol)溶于DMF(20 mL)中，加入碳酸钾(1.29 g, 14.6 mmol)、氘代碘甲烷(847 mg,5.8 mmol)，0 ℃下反应1小时。LCMS检测反应结束。浓缩柱层析（MeOH/H2O=0-50%）得到产物600 mg，收率37%。
（2）8-羟基-2-氘代甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪的制备
将8-甲氧基-2-氘代甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪(600 mg, 2.7 mmol)溶于33%氢溴酸醋酸溶液中，100 ℃反应5小时。LCMS检测反应结束。浓缩溶剂，DIEA调节至碱性，柱层析分离(甲醇:水=0-60%)得目标化合物350 mg，收率62%。
（3）8-三氟甲磺酸酯基-2-氘代甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪的制备
将8-羟基-2-氘代甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶[4',3':4,5]吡咯[1,2-a]吡嗪(350 mg, 1.7 mmol)，溶于二氯甲烷(10 mL)中，加入吡啶(1.3 g, 16.9 mmol), 0 ℃加入三氟甲磺酸酐(1.4 g, 5.0 mmol)，加毕，反应1小时。LCMS检测反应结束。浓缩溶剂，柱层析分离(乙腈/水=0-90%)得目标化合物170 mg，收率29%。
（4）7-((2-氘代甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯的制备
将8-三氟甲磺酸酯基-2-氘代甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪(170 mg, 0.50 mmol)溶于二氧六环(20 mL)中，加入7-氨基-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(190 mg, 0.50 mmol)、RuPhosPd-G3(42 mg, 0.050 mmol)和碳酸铯(326 mg, 1 mmol)，加毕，氮气保护100 ℃反应30分钟。LCMS检测反应结束。浓缩直接用于下步反应。
（5）7-((2-氘代甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)异吲哚啉-1-酮的制备
将7-((2-氘代甲基-1,2,3,4,10,10a-六氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(粗品)溶于4 M 氯化氢乙酸乙酯溶液(2 mL)和饱和二氯甲烷溶液(10 mL)中，25 ℃反应30分钟。浓缩，加入DIEA调节至碱性，经柱层析(甲醇/水=0-50%)得目标化合物17.0 mg，两步反应收率7.3%。
分子式: C27H24D3N7O 分子量: 468.6 LC-MS (M/e): 469.1 (M+H+)
1H-NMR(400MHz, DMSO-d6) δ: 9.68 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.55 (s, 1H),8.52-8.45 (m, 1H), 8.23 (s, 1H) , 7.76 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.17 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.49 (s, 2H),3.62-3.41(m, 1H), 2.92-2.95(m, 2H), 2.83-2.85 (m, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.71-1.82 (m, 2H), 1.55-1.68 (m, 2H).
实施例3：7-((6-甲基-5,6-二氢苯并[b]吡啶基[3,2-f][1,4]恶唑啉-2-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑[1,5-a]吡啶-3-基)异吲哚啉-1-酮的制备（化合物3）
Figure DEST_PATH_IMAGE034
（1）2-((2,6-二氯吡啶-3-基)甲基)氨基)苯酚的制备
将2-氨基苯酚(3.1 g, 28.4 mmol)、2,6-二氯烟醛(5.0 g, 28.4 mmol)和硼氢化钠 (3.6 g mg, 56.8 mmol)溶于甲醇(50 mL) 中，在30 ℃下反应10小时结束。体系浓缩，残余物经柱层析(乙酸乙酯/石油醚=1/8)得目标产物2.8 g，收率为36.8%。
（2）2-((2,6-二氯吡啶-3-基)甲基)(甲基)氨基)苯酚的制备
将2-((2,6-二氯吡啶-3-基)甲基)氨基)苯酚 (1 g, 3.7 mmol)、多聚甲醛 (223mg, 7.4 mmol)和氰基硼氢化钠 (465 mg, 7.4 mmol) 溶于甲醇(20 mL) 中，在30 ℃下反应6小时结束。体系浓缩，残余物经柱层析(乙酸乙酯/石油醚=1/10)得目标产物700 mg，收率为66.7%。
（3）2-氯-6-甲基-5,6-二氢苯并[b]吡啶基[3,2-f][1,4]氧氮杂卓的制备
将2-((2,6-二氯吡啶-3-基)甲基)(甲基)氨基)苯酚(670 mg, 2.4 mmol)、氢化钠(192mg, 4.8 mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(10 mL)中，在60 ℃下反应2小时结束。体系浓缩，残余物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯=10/1)得目标产物400 mg，收率为68.5%。
（4）7-((6-甲基-5,6-二氢苯并[b]吡啶基[3,2-f][1,4]氧氮杂卓-2-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑基[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯的制备
将2-氯-6-甲基-5,6-二氢苯并[b]吡啶基[3,2-f][1,4]氧氮杂卓(247 mg, 1mmol)，7-氨基-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(378mg,1 mmol)，RuPhos Pd G3(84 mg,0.1 mmol)和碳酸铯(652 mg，2 mmol)的1,4-二氧六环(10 mL)悬浊液，氮气保护下在100 ℃下反应2小时。体系浓缩，残余物经柱层析(二氯甲烷/甲醇=20/1)得目标产物60 mg，收率为10.2%。
（5）7-((6-甲基-5,6-二氢苯并[b]吡啶基[3,2-f][1,4]氧氮杂卓-2-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑[1,5-a]吡啶-3-基)异吲哚啉-1-酮的制备
将7-((6-甲基-5,6-二氢苯并[b]吡啶基[3,2-f][1,4]氧氮杂卓-2-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑基[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(59 mg)溶于二氯甲烷(1.5 mL)中，加入三氟乙酸 (0.5 mL)，在30 ℃下反应1小时，浓缩旋干，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9，二氯甲烷萃取 ，经prep-TLC(二氯甲烷:甲醇=20:1) 得目标产物10 mg 收率为20.4%。
分子式: C29H24N6O2 分子量: 488.6 LC-MS (M/e): 489.2 (M+H+)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.09 (s,1H), 8.85 (s, 1H), 8.63-8.59 (m,2H), 8.09 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.82-7.75 (m, 2H), 7.62-7.61 (d, 1H), 7.20-7.18 (d, 2H), 7.05-6.95 (m, 1H), 6.90-6.85 (m, 1H), 6.80-6.70 (m, 1H),4.53(s, 2H), 4.22 (s,2H), 2.91 (s,3H), 2.34 (s,3H).
实施例4：7-((2-甲基-1,2,3,4-四氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑[1,5-a]吡啶-3-基)异吲哚啉-1-酮的制备（化合物4）
Figure 737850DEST_PATH_IMAGE035
（1）8-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪的制备
将8-溴-2-甲基-3,4-二氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1(2H)-酮(1.0g, 3.6 mmol)溶于四氢呋喃(50 mL)，加入氢化铝锂(274 mg, 7.2 mmol)，25 ℃反应15 分钟。加水淬灭，抽滤，滤液加入二氯甲烷与水分液萃取，无水硫酸钠干燥，有机相旋干，经正相分离(二氯甲烷:甲醇=20:1 )得目标化合物180 mg，收率18.9%。
（2）7-((2-甲基-1,2,3,4-四氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯的制备
将7-氨基-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(140 mg, 0.37 mmol)和8-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪(98 mg, 0.37 mmol)溶于1,4-二氧六环(30 mL)中，加入RuPhos-Pd-G3(155 mg, 0.19mmol)和碳酸铯(482 mg, 1.5 mmol)。N2保护下，110 ℃反应16 h，反应完毕，加水淬灭，加入二氯甲烷与水分液萃取，有机相旋干，经正相分离(二氯甲烷:甲醇=10:1 )得目标化合物40 mg，收率19.2%。
（3）7-((2-甲基-1,2,3,4-四氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑[1,5-a]吡啶-3-基)异吲哚啉-1-酮的制备
将7-((2-甲基-1,2,3,4-四氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(40 mg，0.21mmol)溶于乙酸乙酯(3 mL)中，加入氯化氢的乙酸乙酯溶液 (15 mL)。25 ℃下反应1小时。体系用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至碱性，浓缩旋干，经正相纯化(二氯甲烷:甲醇=10:1 )得目标化合物4.7 mg，收率14.3%。
分子式: C27H25N7O2 分子量: 463.5 LC-MS (M/e): 464.2 (M+H+)
1H NMR(400 MHz,DMSO-d 6) δ:9.69 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.57 (s, 1H),8.50 (s, 1H), 8.30 (d, J=8.4 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.74(d, J=9.6 Hz, 1H),7.63(d, J=8.8 Hz, 1H), 7.16(d, J=9.2 Hz, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.16 (s, 1H),4.48 (s, 2H), 4.25-4.10 (m, 2H), 3.74 (s, 2H), 3.00-2.80 (m, 2H), 2.42 (s,3H), 2.32 (s, 3H),
实施例5：7-((7-甲基-6,7,8,9-四氢吡啶并[4',3':4,5]咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑[1,5-a]吡啶-3-基)异吲哚啉-1-酮的制备（化合物5）
Figure DEST_PATH_IMAGE036
（1）甘氨酸叔丁酯(4-硝基吡啶-3-基)
将3-氟-4硝基吡啶(2.7 g, 19.0 mmol)和甘氨酸叔丁酯(3.0 g，22.9 mmol)溶于DMF (20 mL)，加入碳酸钾(3.9 g, 28.2 mmol)升温至50 ℃后反应3小时。LCMS检测反应结束。冷却至25℃，加入乙酸乙酯稀释，分液，乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，残留物柱层析分离，硅胶柱纯化(PE/EA=0-50%)得标题化合物4.2 g，收率87.3 %。
（2）(4-硝基-6-溴吡啶-3-基)甘氨酸叔丁酯
将甘氨酸叔丁酯(4-硝基吡啶-3-基)(4.2 g, 16.6 mmol)和NBS(3.5 g, 19.6mmol)溶于乙腈 (50 mL)，升温至50 ℃后反应7小时。LCMS检测反应结束。柱层析分离，硅胶柱纯化(PE/EA=0-50%)得标题化合物2.9 g，收率52.6%。
（3）(4-氨基-6-溴吡啶-3-基)甘氨酸叔丁酯
将(4-硝基-6-溴吡啶-3-基)甘氨酸叔丁酯(2.1 g, 6.3 mmol)和Rh/C(1.1 g，N/A)溶于MeOH (30 mL)，升温至25 ℃后反应6小时。LCMS检测反应结束。柱层析分离，硅胶柱纯化(PE/EA=0-50%)得标题化合物1.1 g，收率57.6 %。
（4）2-(6-溴-2-(氯甲基)-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-3-基)乙酸叔丁酯
将(4-氨基-6-溴吡啶-3-基)甘氨酸叔丁酯(500 mg, 1.7 mmol)和1,1,1-三甲氧基氯乙烷 (1.3 g, 8.4 mmol)，对甲基苯磺酸(32 mg, 0.17 mmol)溶于二氧六环 (10mL)，微波升温至125 ℃后，反应0.5小时。LCMS检测反应结束。柱层析分离，硅胶柱纯化(PE/EA=0-50%)得标题化合物450 mg，收率75.4 %。
（5）2-(6-溴-2-(氯甲基)-3H咪唑[4,5-c]吡啶-3-基)乙烷-1-醇
将2-(6-溴-2-(氯甲基)-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-3-基)乙酸叔丁酯(400 mg, 1.1mmol)和硼氢化钠 (127 mg, 3.3 mmol)、氯化钙(363 mg, 3.3 mmol)溶于乙醇(20 mL)，25 ℃后反应16小时。浓缩。水洗，乙酸乙酯萃取得粗品300 mg，直接用于下一步。
（6）2-(6-溴-2-(氯甲基)-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-3-基)甲基磺酸乙酯
将 2-(6-溴-2-(氯甲基)-3H咪唑[4,5-c]吡啶-3-基)乙烷-1-醇(300 mg, 1.0mmol)和三乙胺(261 mg, 2.6 mmol)溶于二氯甲烷 (20 mL)，加入MsCl(236 mg, 2.1mmol)，25 ℃后反应0.5 小时。LCMS检测反应结束。柱层析分离，硅胶柱纯化(PE/EA=0-100%)得标题化合物210 mg，收率55.2%。
（7）3-溴-6,7,8,9-四氢吡啶并[4',3':4,5]咪唑并[1,2-a]吡嗪
将2-(6-溴-2-(氯甲基)-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-3-基)甲基磺酸乙酯(190 mg,0.52 mmol)溶于乙腈 (4 mL)，加入氨水异丙醇(4 mL)，90 ℃后反应2 小时。LCMS检测反应结束。浓缩，直接用于下一步。
（8）3-溴-7-甲基-6,7,8,9-四氢吡啶并[4',3':4,5]咪唑并[1,2-a]吡嗪
将3-溴-6,7,8,9-四氢吡啶并[4',3':4,5]咪唑并[1,2-a]吡嗪(粗品, N/A)溶于乙酸(5 mL)，加入甲醇(5 mL)、氰基硼氢化钠(75 mg, 1.2 mmol)、33%甲胺水溶液(72 mg,0.80 mmol)，25 ℃下反应6小时。LCMS检测反应结束。浓缩，柱层析分离，硅胶柱纯化(PE/EA=0-100%)得标题化合物70 mg，两步收率50.8 %。
（9）7-((7-甲基-6,7,8,9-四氢吡啶并[4',3':4,5]咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯
将 3-溴-7-甲基-6,7,8,9-四氢吡啶并[4',3':4,5]咪唑并[1,2-a]吡嗪(60 mg,0.22 mmol)和异丙胺(235 mg, 4 mmol)溶于乙腈 (50 mL)，升温至40 ℃后反应3小时。LCMS检测反应结束。柱层析分离，硅胶柱纯化(二氯甲烷:甲醇=10:1)得标题化合物60 mg，收率47.3%。
（10）7-((7-甲基-6,7,8,9-四氢吡啶并[4',3':4,5]咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑[1,5-a]吡啶-3-基)异吲哚啉-1-酮
将7-((7-甲基-6,7,8,9-四氢吡啶[4',3':4,5]咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(60 mg, 0.11mmol)溶于HCl/EA (5 mL)，25 ℃后反应1小时。LCMS检测反应结束。柱层析分离，C18柱纯化(MeCN:H2O=0-50%)得标题化合物10 mg，收率20.2%。
分子式: C26H24N8O 分子量: 464.5 LC-MS (M/e): 465.2 (M+H+)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ：9.84 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.65-8.53(m,2H), 8.39-8.38(m,1H), 8.24(s, 1H), 7.77-7.75(m,1H), 7.68-7.66(m,1H), 7.24-7.16(m,2H), 4.55(s, 2H), 4.22(s, 2H), 3.79-3.70 (m, 2H), 2.95-2.93(m,2H),2.41(s, 3H), 2.25(s, 3H).
实施例6：2-甲基-8-((7-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3,4-二氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1(2H)-酮的制备（化合物8）
Figure 742715DEST_PATH_IMAGE037
（1）5-溴-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯的制备
于4-甲基-5-硝基-2-溴吡啶(7.6 g, 35.0mmol)中加入草酸二乙酯(24.0 g,164.3 mmol)和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(12.8 g, 84.1 mmol)将混合物置于25 ℃下搅拌4小时，浓缩旋干，加入乙酸(80 mL)，混合物升温至60℃加入铁粉(3.9 g,69.9 mmol)中，后升温至70 ℃反应16小时。体系加水淬灭，过滤，滤液用水洗三次，滤饼用于乙酸乙酯，抽滤，将滤液浓缩旋干得目标化合物6.2 g粗品，直接用于下一步反应。
（2）1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯的制备
将5-溴-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯(6.2 g, 23.0 mmol)溶于DMF(100mL) ，零度下加入叔丁醇钾(3.9 g, 32.0 mmol)反应30分钟，再加入1,2,3-恶噻唑烷-3-羧酸叔丁酯-2,2-二氧化物(6.7 g, 30.0 mmol)，25℃反应1 h。反应完毕，体系加水淬灭，用稀盐酸调节pH至4左右，加入乙酸乙酯与水分液萃取，有机相旋干，经正向分离(石油醚:乙酸乙酯=3:1)得目标化合物7.3 g，两步收率50.6%。
（3）1-(2-氨基乙基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯盐酸盐的制备
将1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯(4.9 g, 11.9 mmol)溶于乙酸乙酯(50 mL)，加入盐酸乙酸乙酯溶液(250 mL)，25 ℃反应3h。反应完毕旋干，得直接用于下一步反应。
（4）8-溴-3,4-二氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1(2H)-酮的制备
将1-(2-氨基乙基)-5-溴-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸乙酯盐酸盐(N/A,11.9mmol)溶于甲醇(100 mL)中，加入碳酸钾(4.9 g, 33.5 mmol)，25℃反应4 h。加入二氯甲烷与水分液萃取三次，有机相旋干，得目标化合物，直接用于下一步。
（5）8-溴-2-甲基-3,4-二氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1(2H)-酮的制备
将8-溴-3,4-二氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1(2H)-酮(N/A, 11.9mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(100 mL)，0℃下加入氢化钠(1.4 g, 35.0 mmol)，加毕，继续搅拌30分钟，后滴加甲基碘(3.4 g, 24.0 mmol)，将混合物置于25℃反应1 h。加水淬灭，加入乙酸乙酯与水分液萃取，有机相旋干，经正相分离(乙酸乙酯=100%)得产品2.5 g，两步收率75.1%。
（6）7-((2-甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代吲哚啉2-羧酸叔丁酯的制备
将7-氨基-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(190 mg, 0.50 mmol)和8-溴-2-甲基-3,4-二氢吡啶并[4’,3’:4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1(2H)-酮(140 mg, 0.50 mmol)溶于1,4-二氧六环(30 mL)中，加入RuPhos-Pd-G3(83 mg,0.099 mmol)和碳酸铯(325 mg, 1.0 mmol)。N2保护下，110 ℃反应16 h，反应完毕，加水淬灭，加入二氯甲烷与水分液萃取，有机相旋干，经正相分离(二氯甲烷:甲醇=10:1 )得目标化合物120 mg，收率41.4%。
（7）2-甲基-8-((7-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3,4-二氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-1(2H)-酮的制备
将7-((2-甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-4-(6-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(120 mg，0.21 mmol)溶于乙酸乙酯(3 mL)中，加入氯化氢的乙酸乙酯溶液 (15 mL)。25 ℃下反应1小时。体系用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至碱性，浓缩旋干，经正相纯化(二氯甲烷:甲醇=9:1)得目标化合物54.5 mg，收率55.0%。
分子式: C27H23N7O2 分子量: 477.5 LC-MS (M/e): 448.2 (M+H+)
1H NMR(400 MHz,DMSO-d 6) δ:9.78 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.71 (s, 1H),8.57 (s, 1H), 8.23 -8.21 (m, 2H), 7.74 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.65 (d, J=8.4 Hz,1H), 7.31 (s, 1H), 7.16 (d, J=9.2 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 4.49 (s, 2H), 4.46-4.43 (m, 2H), 3.88-3.85 (m, 2H), 3.08 (s, 3H), 2.49 (s, 3H).
使用与上述制备例相同或相似的方法制备了以下表格所示的化合物：
化合物编号 LC-MS(M/e, M+H+)
6 464.2
7 465.2
9 467.2
实验方案
以下提供本发明部分化合物的示例性实验方案，以显示本发明化合物有利活性和有益技术效果。但是应当理解，下述实验方案仅仅是对本发明内容的示例，而不是对本发明范围的限制。
实验例1 本发明化合物对体外酶学活性的抑制实验
测试物：本发明部分化合物，其结构式和制备方法见本发明制备例。
下述实验中所用缩写代表的含义如下：
DMSO：二甲基亚砜；
HEPES：羟乙基哌嗪乙硫磺酸
实验方法：用Lantha screen Assay方法，在体外6个激酶上对化合物进行评价。
实验步骤：
1.制备含50 mM HEPES溶液，10 mM氯化镁，4 mM二硫苏糖醇，0.01%牛血清白蛋白和0.01% 吐温-20的1×激酶缓冲液：
2.化合物稀释：
1）取90 μL的100% DMSO，再加入10 μL 10mM化合物溶液，即配制成1 mM 化合物溶液。在96 孔板上第二个孔中加入90 μL的100% DMSO，再加入10 μL 1 mM 化合物溶液，即配制成100 μM化合物溶液，其他孔加入60 μL的100% DMSO。从第二孔中取30 μL化合物加入第三孔中，依次往下做3 倍稀释，共稀释10个浓度。
转移40μL上述配制的100μM化合物溶液到384孔Echo板中。
2）转移40 μL 100% DMSO到两个空孔中作为不加化合物的阳性对照和不加酶的阴性对照。
3）使用Echo 550转移100 nL化合物到384孔测试板中，化合物的检测起始浓度为1μM。
3.用1×激酶缓冲液配置2×激酶溶液，转移5 μL 2×激酶溶液到384孔板反应孔中，阴性对照孔加入1×激酶缓冲液，450转/分钟振荡混匀，室温下静置孵育10分钟。
4.用1×激酶缓冲液配置2×底物溶液，转移5 μL 2×底物溶液到384孔板反应孔中，450转/分钟振荡混匀。
5.室温进行反应90分钟。
6.配置2×含抗体的终止反应液，转移10 μL 2×终止反应液到384孔板反应孔中，1000转/分钟离心1分钟，室温放置60分钟，检测。
7.数据读取：Envision2104 Multilable Reader上读取在340 nm处激发，520 nm和495 nm处发射的数值。
8. 数据计算
1）将荧光读数的数值比（Lantha signal（520nm/495nm））通过公式转换为抑制百分率：
抑制百分率 = (最大值-Lantha signal)/(最大值-最小值)*100
“最小值”为不加酶的阴性对照样孔读数；“最大值”为不加化合物的阳性对照孔读数。
2）将数据导入MS Excel，IC50结果使用XLFit excel add-in version 5.4.0.8进行曲线拟合。
实验结果
表1 本发明化合物体外酶学抑制活性
Figure DEST_PATH_IMAGE038
实验结论
本发明化合物对MAP4K1/HPK1有很好的抑制活性，并且本发明化合物对HPK1具有优异的选择性。

Claims (8)

1.式（I）所示化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，
Figure 808234DEST_PATH_IMAGE001
（I），
其中，
Y3为C(R3)；
Y1、Y2分别独立地选自C(R3)或N；
Y4选自N或C；
Y5为C；
L1选自-CRaRb-、-O-或-NRa-；
R1选自氢、卤素、C1-4烷基或卤代C1-4烷基；
R2在每次出现时分别独立地选自氢、卤素、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷氧基；
环A以及其所连接的Y4、Y5共同组成选自任选被1-3个Q1取代的9-11元稠环烷基、9-11元稠杂环烷基；
Q1在每次出现时分别独立地选自卤素、或任选被氘代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基或-(CH2)m-3-6元环烷基；
R3选自氢、卤素、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基或卤代C1-4烷氧基；
Ra、Rb在每次出现时分别独立地选自氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基或卤代C1-4烷氧基；
m、t分别独立地选自0、1或2。
2.如权利要求1所述的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中：
Y3为CH；
Y1、Y2分别独立地选自CH或N；
Y4选自N或C；
Y5为C；
L1选自-CRaRb-、-O-或-NRa-；
R1选自氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、一氟甲基、二氟甲基或三氟甲基；
R2在每次出现时分别独立地选自氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氟乙基、二氟乙基、三氟乙基、一氟甲氧基、二氟甲氧基或三氟甲氧基；
环A以及其所连接的Y4、Y5共同组成如下基团：
Figure 821189DEST_PATH_IMAGE002
；
Q1在每次出现时分别独立地选自卤素、或任选被氘代的甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、一氟甲基、一氟乙基、二氟甲基、二氟乙基、三氟甲基、三氟乙基、一氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、-(CH2)m-环丙基、-(CH2)m-环丁基、-(CH2)m-环戊基、-(CH2)m-环己基；并且各Q1可对环A任意位置进行取代；
R3选自氢、卤素、氰基、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、一氟甲基、一氟乙基、二氟甲基、二氟乙基、三氟甲基、三氟乙基、一氟甲氧基、二氟甲氧基或三氟甲氧基；
Ra、Rb在每次出现时分别独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、一氟甲基、一氟乙基、二氟甲基、二氟乙基、三氟甲基、三氟乙基、一氟甲氧基、二氟甲氧基或三氟甲氧基；
m、t分别独立地选自0、1或2；
n分别独立地选自0、1、2或3。
3.如权利要求2所述的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，
环A以及其所连接的Y4、Y5共同组成如下基团：
Figure 31591DEST_PATH_IMAGE003
Q1在每次出现时分别独立地选自卤素、或任选被氘代的甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、一氟甲基、一氟乙基、二氟甲基、二氟乙基、三氟甲基、三氟乙基、一氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基；并且各Q1可对环A任意位置进行取代。
4.如权利要求3所述的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中，
环A以及其所连接的Y4、Y5共同组成如下基团：
Figure 275753DEST_PATH_IMAGE004
Q1在每次出现时分别独立地选自卤素、或任选被氘代的甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、一氟甲基、一氟乙基、二氟甲基、二氟乙基、三氟甲基、三氟乙基、一氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基；并且各Q1可对环A任意位置进行取代。
5.如权利要求1所述的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，选自如下化合物：
Figure 546197DEST_PATH_IMAGE005
。
6.含有权利要求1-5任一项所述的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体的药物制剂，其特征在于，包含一种或多种药学上可接受的赋形剂，该药物制剂为药学上可接受的任一剂型。
7.含有权利要求1-5任一项所述的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体的药物组合物，其特征在于，包含一种或多种第二治疗活性剂，所述的第二活性治疗剂选自有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢物、反义DNA或RNA、抗肿瘤抗生素、生长因子抑制剂、信号传导抑制剂、细胞周期抑制剂、酶抑制剂、类维生素A受体调控剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物应答调节剂、激素类药物、血管再生抑制剂、细胞生长抑制剂、靶向抗体、HMG-CoA还原酶抑制剂和异戊二烯基蛋白质转移酶抑制剂。
8.权利要求1-5任一项所述的化合物、其氘代物、其药学上可接受的盐或其立体异构体、权利要求6所述的药物制剂、或权利要求7所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防由HPK1所介导的疾病及相关病症的药物中的应用，所述由HPK1所介导的疾病及相关病症选自癌症或良性肿瘤。
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