CN113861188A - 吡唑并[3,4-b]吡啶类衍生物及其制备方法和作为HPK1抑制剂的应用 - Google Patents

吡唑并[3,4-b]吡啶类衍生物及其制备方法和作为HPK1抑制剂的应用 Download PDF

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Abstract

吡唑并[3,4‑b]吡啶类衍生物及其制备方法和作为HPK1抑制剂的应用，本发明公开了一种如式(Ⅰ)所示结构的化合物(各基团定义如说明书中所述)、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐，以及包含其的药物组合物；还公开了如式(Ⅰ)所示结构的化合物的制备方法；此外还公开了如式(Ⅰ)所示结构的化合物作为HPK1抑制剂在制备用于治疗HPK1相关障碍或疾病的药物中的应用。

Description

吡唑并[3,4-b]吡啶类衍生物及其制备方法和作为HPK1抑制 剂的应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种吡唑并[3,4-b]吡啶类衍生物及其制备方法和作为HPK1抑制剂的应用。
背景技术
HPK1调节各种免疫细胞的多样功能，并且已显示其激酶活性在T细胞受体(TCR)[Liou J.,等人,Immunity,2000.12(4):p.399-408]、B细胞受体(BCR)[Liou J.,等人，Immunity,2000.12(4):p.399-408]、转化生长因子受体(TGF-βR)[Wang,W.,等人,JBiolChem,1997.272(36):第22771-5页；Zhou,G.,等人,J Biol Chem,1999.274(19):第13133-8页]、或Gs偶联的PGE2受体(EP2和EP4)[Ikegami,R.,等人,J Immunol,2001.166(7):第4689-96页]的激活之后被诱导。HPK1的过表达以激酶依赖性的方式抑制TCR诱导的AP-1依赖性基因转录的激活，表明需要HPK1来抑制Erk MAPK途径[Liou J.,等人,Immunity,2000.12(4):第399-408页]并且这种阻断被认为是负调节TCR诱导的IL-2基因转录的抑制机制[S.Sawasdikosol.,等人,Immunol Res,2012.54:262-265]。
体外HPK1-/-T细胞具有较低的TCR激活阈值，稳健地增殖、产生增强量的Th1细胞因子，HPK1-/-小鼠经历更严重的自身免疫症状[S.Sawasdikosol.,等人,Immunol Res,2012.54:262-265]。在人体中，HPK1在银屑病性关节炎患者的外周血单核细胞或系统性红斑狼疮(SLE)患者的T细胞中下调[Batliwalla F.M.,等人,Mol Med,2005.11(1-12):第21-9页]，这表明HPK1活性的减弱可能有助于患者的自身免疫。此外，HPK1还可以经由T细胞依赖性机制控制抗肿瘤免疫。在产生PGE2的Lewis肺癌肿瘤模型中，与野生型小鼠相比，肿瘤在HPK1敲除小鼠中发展得更慢[美国专利申请号2007/0087988]。HPK1缺陷型T细胞在控制肿瘤生长和转移方面比野生型T细胞更有效[Al za bi n,S.,等人,Cancer ImmunolImmunother,2010.59(3):第419-29页]。类似地，与野生型BMDC相比，来自HPK1敲除小鼠的BMDC更有效地产生T细胞应答以根除Lewis肺癌[Alzabin,S.,等人,J Immunol,2009.182(10):第6187-94页]。总之，HPK1可能是用于增强抗肿瘤免疫的良好靶标。
作为HPK1调节剂，WO 2016205942公开了苯并咪唑，WO 2018049152 A1公开了吡唑并嘧啶，WO 2018049191 A1公开了吡唑并吡啶酮，WO 2018049200A1公开了吡唑并吡啶[3,4-c]，CN 112239473和CN 112243439公开了吡咯并[2,3-b]吡啶或吡咯并[2,3-b]吡嗪。
尽管WO 2018049214A1及WO 2008124849公开了吡唑并[3,4-b]吡啶能作为HPK1调节剂，但其HPK1调节活性有待改进。
发明内容
本发明公开了一种吡唑并[3,4-b]吡啶类衍生物及其制备方法，该吡唑并[3,4-b]吡啶类衍生物可调节(例如抑制)造血祖细胞1(HPK1)活性，可用于制备治疗包括癌症在内的多种疾病。
本发明的技术方案如下：
一种如式(Ⅰ)所示结构的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐；
Figure BDA0003224207930000021
其中：
L1是单键、亚烷基、亚环烷基、*1-O-亚烷基-**1、*1-亚烷基-O-**1、*1-NH-亚烷基-**1、*1-亚烷基-NH-**1、*1-NHC(O)-**1、*1-C(O)NH-**1、亚烯基或亚炔基，其中*1是指与Cy1附接的位置，并且**1是指与
Figure BDA0003224207930000022
附接的位置；
Cy1是包含一个或两个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫中的杂原子作为一个或多个环成员的5或6元杂环基，并且在所述杂环是6元环时，R1相对于附接点L1在所述杂环基的对位(或4位)处；或者Cy1是包含一或二或三个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫中的杂原子作为一个或多个环成员的7至10元双环稠合的杂环基；
R1是卤素、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、氧代基、-CN、-NO2、-OR1a、-SO2R1a、-SO2NR1aR1b、-COR1a、-CO2R1a、-CONR1aR1b、-C(＝NR1a)NR1bR1c、-NR1aR1b、-NR1aCOR1b、-NR1aCONR1bR1c、-NR1aCO2R1b、-NR1aSONR1bR1c、-NR1aSO2NR1bR1c或-NR1aSO2R1b，所述-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自任选地被至少一个取代基R1d取代；
R1a、R1b和R1c各自独立地是氢、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自任选地被至少一个取代基R1e取代；或者(R1a和R1b)、(R1b和R1c)或(R1c和R1a)与它们所附接的一个或多个原子一起形成3至12元环，所述环包含0、1或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫中的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被至少一个取代基R1e取代；
R1d和R1e各自独立地是氢、卤素、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、氧代基、-CN、-NO2、-OR1f、-SO2R1f、-SO2NR1fR1g、-COR1f、-CO2R1f、-CONR1fR1g、-C(＝NR1f)NR1gR1h、-NR1fR1g、-NR1fCOR1g、-NR1fCONR1gR1h、-NR1fCO2R1f、-NR1fSONR1fR1g、-NR1fSO2NR1gR1h或-NR1fSO2R1g，所述-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自任选地被至少一个选自卤素、-C1-8烷基、-OR1i、-NR1iR1j、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基的取代基取代；
R1f、R1g、R1h、R1i、和R1j各自独立地是氢、-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基。
优选的，所述的6元杂环基是哌啶基、四氢吡啶基或哌嗪基。
优选的，所述的7至10元双环稠合杂环基是二氢吡啶并噁嗪、二氢苯并氧氮杂卓基、异吲哚啉基、二氢异喹啉基、四氢异喹啉基、苯并氮杂卓基、苯并氧氮杂卓基或二氢苯并噁嗪。
进一步优选的，所述的7至10元双环稠合杂环基是2,3-二氢-1H-吡啶并[2,3-b][1,4]噁嗪、5-氧代-3,4-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓基、1-氧代-2-甲基异吲哚啉-5-基、1-氧代-2-甲基-3,4-二氢异喹啉-6-基、2-甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基、2,3,4,5-四氢-1-氧代-2-苯并氮杂卓-6-基、5-氧代-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并氧氮杂卓-8-基或3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基。
优选的，所述的化合物选自：
Figure BDA0003224207930000031
Figure BDA0003224207930000041
Figure BDA0003224207930000051
Figure BDA0003224207930000061
Figure BDA0003224207930000071
Figure BDA0003224207930000081
Figure BDA0003224207930000091
Figure BDA0003224207930000101
本发明还提供了如式(Ⅰ)所示结构的化合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)在过渡金属催化下，将
Figure BDA0003224207930000102
与
Figure BDA0003224207930000103
反应生成
Figure BDA0003224207930000104
每个R、R’各自独立地是H、Boc或磺酰基；
(2)在过渡金属催化下，将
Figure BDA0003224207930000105
与
Figure BDA0003224207930000106
反应生成
Figure BDA0003224207930000107
(3)将
Figure BDA0003224207930000111
原位脱保护或逐步脱保护以获得如式(Ⅰ)所示结构的化合物；若R为H时，则不需要脱保护。
本发明还提供了另一种如式(Ⅰ)所示结构的化合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)在过渡金属催化下，将
Figure BDA0003224207930000112
与
Figure BDA0003224207930000113
反应生成
Figure BDA0003224207930000114
(2)使用卤源与
Figure BDA0003224207930000115
反应得
Figure BDA0003224207930000116
(3)在过渡金属催化下，将
Figure BDA0003224207930000117
与
Figure BDA0003224207930000118
反应生成
Figure BDA0003224207930000119
(4)将
Figure BDA00032242079300001110
原位脱保护或逐步脱保护以获得如式(Ⅰ)所示结构的化合物；若R为H时，则不需要脱保护。
本发明还提供了另一种如式(Ⅰ)所示结构的化合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)在过渡金属催化下，将
Figure BDA0003224207930000121
与
Figure BDA0003224207930000122
反应生成
Figure BDA0003224207930000123
(2)使用卤源与
Figure BDA0003224207930000124
反应得
Figure BDA0003224207930000125
(3)在过渡金属催化下，将
Figure BDA0003224207930000126
与硼酸或联硼酸频哪醇酯反应生成
Figure BDA0003224207930000127
(4)在过渡金属催化下，将
Figure BDA0003224207930000128
与
Figure BDA0003224207930000129
反应生成
Figure BDA00032242079300001210
(5)将
Figure BDA00032242079300001211
原位脱保护或逐步脱保护以获得如式(Ⅰ)所示结构的化合物；若R为H时，则不需要脱保护。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂或载体。
优选的，所述的药物组合物中进一步包含化疗剂。
本发明还提供了一种如式(Ⅰ)所示结构的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐作为HPK1抑制剂的在制备用于治疗HPK1相关障碍或疾病的药物中的应用。
优选的，所述的HPK1相关障碍或疾病具有升高的T细胞浸润水平的特征。
进一步的，所述的HPK1相关障碍或疾病选自结肠直肠癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、血液系统恶性肿瘤和肾细胞癌。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明首次公开了结构新型的吡唑并[3,4-b]吡啶类衍生物，其药理学活性表明对HPK1激酶的活性抑制效果明显，该类化合物或其立体异构体、或其药学上可接受的盐，以及包含其的药物组合物在靶向HPK1靶点相关疾病具有潜在应用价值。此外，本发明还公开了新型吡唑并[3,4-b]吡啶类衍生物的合成路线，其特点在于合成简单，操作便捷。
具体实施方式
实施例1：3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物1)
Figure BDA0003224207930000131
步骤1：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物1-1)
Figure BDA0003224207930000132
向5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(1.97g，1.0eq.)和(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)硼酸(2.2g，1.0eq.)在二氧六环(100mL)和水(50mL)中的混合物中添加K2CO3(4.14g，3.0eq.)和Pd(dppf)Cl2(731mg，0.1eq.)。将反应混合物在氮气下在100℃搅拌4h。将混合物冷却至室温并减压浓缩，将残余物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷:MeOH＝20:1)纯化得化合物1-1(2.1g，85％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.65(s,1H),8.79(d,J＝2.2Hz,1H),8.36(d,J＝2.1Hz,1H),8.16(s,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,2H),7.05(d,J＝8.8Hz,2H),3.29–3.00(m,4H),2.50–2.42(m,4H),2.24(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝294.14，Rt＝7.757min。
步骤2：3-碘-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物1-2)
Figure BDA0003224207930000141
向5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物1-1，1.5g，1.0eq.)、氢氧化钠溶液(0.82g，4.0eq.)和碘单质(2.6g，2.0eq.)在二氧六环溶剂中回流24h，将混合物冷却至室温并减压浓缩，将残余物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷:MeOH＝20:1)纯化得化合物1-2(1.5mg，80％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.77(s,1H),7.90(s,1H),7.64(d,J＝6.9Hz,2H),7.05(d,J＝6.8Hz,2H),3.20(s,4H),2.45(t,J＝16.0Hz,4H),2.23(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝420.02，Rt＝9.119min。
步骤3：3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物1)
向(3-氟-4-甲氧基苯基)硼酸(48.7mg,1.2eq.)和3-碘-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物1-2,100mg，1eq.)在二氧六环(50mL)和水(4mL)中的混合物中添加K2CO3(99.5mg，3.0eq)和Pd(dppf)Cl2(17.4mg，0.1eq)。将反应混合物在氮气下在100℃搅拌4h。将混合物冷却至室温并减压浓缩，将残余物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷:MeOH＝20:1)纯化得化合物1(28mg，30％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)DMSO)δ13.81(s,1H),8.83(s,1H),8.59(s,1H),7.90(t,J＝9.5Hz,2H),7.69(d,J＝8.3Hz,2H),7.32(t,J＝8.8Hz,1H),7.06(d,J＝8.4Hz,2H),3.92(s,3H),3.27–3.12(m,4H),2.49–2.41(m,4H),2.23(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝418.17，Rt＝9.939min。
实施例2：3-(4-异丙氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物2)
Figure BDA0003224207930000151
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-异丙氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq.)制备化合物2(60mg,50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.68(s,1H),8.81(d,J＝1.9Hz,1H),8.55(d,J＝1.7Hz,1H),8.01(d,J＝8.7Hz,2H),7.68(d,J＝8.7Hz,2H),7.06(t,J＝8.2Hz,4H),4.69(dt,J＝12.0,6.0Hz,1H),3.42-3.32(m,4H),3.25–3.10(m,4H),2.23(s,3H),1.31(d,J＝6.0Hz,6H)。LC-MS(M+H)+＝428.22，Rt＝10.793min。
实施例3：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(3,4,5-三氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物3)
Figure BDA0003224207930000152
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(3,4,5-三氟苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物3(25mg,30％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.94(s,1H),8.82(d,J＝1.9Hz,,1H),8.63(d,J＝1.6Hz,,1H),8.12–7.85(m,2H),7.69(d,J＝8.0Hz,2H),7.04(d,J＝8.0Hz,2H),3.19-3.24(m,4H),2.46-2.53(m,4H),2.24(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝424.14，Rt＝11.088min。
实施例4：3-(2,3-二氟苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物4)
Figure BDA0003224207930000161
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(2,3-二氟苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物4(18mg,25％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.13(s,1H),8.88(d,J＝1.9Hz,1H),8.38(d,J＝2.0Hz,1H),7.75(t,J＝7.0Hz,1H),7.64(d,J＝8.7Hz,2H),7.58–7.52(m,1H),7.45–7.30(m,1H),7.05(d,J＝8.7Hz,2H),3.27–3.15(m,4H),2.50–2.44(m,4H),2.24(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝406.17，Rt＝10.103min。
实施例5：3-(2,3-二氟-4-甲氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物5)
Figure BDA0003224207930000162
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(2,3-二氟-4-甲氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物5(35mg,40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.04(s,1H),8.88(d,J＝1.9Hz,1H),8.37(d,J＝1.8Hz,1H),7.71(d,J＝7.6Hz,1H),7.66(d,J＝8.3Hz,2H),7.23(t,J＝8.1Hz,1H),7.09(d,J＝8.2Hz,2H),4.00(s,3H),3.15-3.31(m,4H),2.15-2.38(m,4H),2.27(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝436.18，Rt＝10.327min。
实施例6：3-(6-甲氧基吡啶-3-基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物6)
Figure BDA0003224207930000171
步骤1：5-溴-3-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物6-1)
Figure BDA0003224207930000172
向5-溴-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(0.323g，1.0eq.)和(6-甲氧基吡啶-3-基)硼酸(0.153g，1.0eq.)在二氧六环(15mL)和水(3mL)中的混合物中添加K2CO3(0.408g，3.0eq.)和Pd(dppf)Cl2(73mg，0.1eq.)。将反应混合物在氮气下在100℃搅拌4h。将混合物冷却至室温并减压浓缩，将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化得化合物6-1(180mg，60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.06(s,1H),8.84(dd,J＝4.0,2.3Hz,2H),8.65(d,J＝2.1Hz,1H),8.33(dd,J＝8.6,2.5Hz,1H),6.97(d,J＝8.6Hz,1H),3.94(s,3H)；LC-MS(M+H)+＝304.93，Rt＝14.330min。
步骤2：3-(6-甲氧基吡啶-3-基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物6)
Figure BDA0003224207930000173
向化合物6-1(0.100g，1.0eq.)和(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)硼酸(94mg，1.3eq.)在二氧六环(10mL)和水(2mL)中的混合物中添加K2CO3(0.136g，3.0eq.)和Pd(dppf)Cl2(24mg，0.1eq.)。将反应混合物在氮气下在100℃搅拌4h。将混合物冷却至室温并减压浓缩，将残余物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷:甲醇＝15:1)纯化得化合物6(80mg，60％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.85(s,1H),8.92(d,J＝2.1Hz,1H),8.84(d,J＝1.9Hz,1H),8.61(d,J＝1.9Hz,1H),8.39(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.72(d,J＝8.7Hz,2H),7.05(d,J＝8.8Hz,2H),6.99(d,J＝8.6Hz,1H),3.95(s,3H),3.25–3.14(m,4H),2.50–2.43(m,4H),2.23(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝401.20，Rt＝9.879min。
实施例7：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物7)
Figure BDA0003224207930000181
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由吡啶-3-基硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物7(20mg,25％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.75(s,1H),9.02(m,2H),8.84(m,2H),8.61(d,J＝1.9Hz,1H),8.09(s,1H),7.71(d,J＝8.7Hz,1H),7.02(d,J＝8.8Hz,2H),6.94(d,J＝8.6Hz,1H),3.21–3.12(m,4H),2.53–2.45(m,4H),2.22(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝371.15，Rt＝8.446min。
实施例8：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物8)
Figure BDA0003224207930000182
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由苯硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物8(50mg,60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.79(s,1H),8.84(s,1H),8.60(s,1H),8.12(d,J＝7.1Hz,2H),7.69(d,J＝7.7Hz,2H),7.57(t,J＝6.7Hz,2H),7.45(t,J＝6.5Hz,1H),7.06(d,J＝7.7Hz,2H),3.26–3.10(m,4H),2.53–2.41(m,4H),2.25(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝370.19，Rt＝10.096min。
实施例9：4-(5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)苄腈(化合物9)
Figure BDA0003224207930000191
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-氰基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物9(17mg,20％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.14(s,1H),8.87(d,J＝2.0Hz,1H),8.67(d,J＝2.0Hz,1H),8.33(d,J＝8.4Hz,2H),7.97(d,J＝8.4Hz,2H),7.70(d,J＝8.7Hz,2H),7.06(d,J＝8.8Hz,2H),3.31–3.02(m,4H),2.52–2.35(m,4H),2.24(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝395.16，Rt＝9.243min。
实施例10：3-(3-(苄氧基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物10)
Figure BDA0003224207930000192
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(3-(苄氧基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物10(25mg,30％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.88(s,1H),8.82(d,J＝2.0Hz,1H),8.50(d,J＝2.0Hz,1H),7.70(d,J＝7.7Hz,1H),7.65(dd,J＝5.6,3.0Hz,3H),7.49(dd,J＝15.6,7.6Hz,3H),7.39(t,J＝7.3Hz,2H),7.36–7.29(m,1H),7.10(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.05(d,J＝8.8Hz,2H),5.24(s,2H),3.19–3.11(m,4H),2.50–2.37(m,4H),2.22(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝476.27，Rt＝11.698min。
实施例11：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(4-(甲硫基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物11)
Figure BDA0003224207930000201
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(甲硫基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物11(18mg,30％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.81(s,1H),8.82(d,J＝6.2Hz,1H),8.59(d,J＝1.8Hz,1H),8.06(d,J＝8.4Hz,2H),7.69(d,J＝8.7Hz,2H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),7.06(d,J＝8.8Hz,2H),3.27–3.11(m,4H),2.55(s,3H),2.49–2.43(m,4H),2.23(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝416.17，Rt＝10.802min。
实施例12：3-(3-氯-5-(三氟甲基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物12)
Figure BDA0003224207930000202
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(3-氯-5-(三氟甲基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物12(25mg,40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.14(s,1H),8.85(d,J＝1.8Hz,1H),8.62(d,J＝1.8Hz,1H),8.41(s,1H),8.28(s,1H),7.90(s,1H),7.69(d,J＝8.7Hz,2H),7.07(d,J＝8.7Hz,2H),3.26–3.15(m,4H),2.50–2.40(m,4H),2.24(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝472.12，Rt＝12.173min。
实施例13：3-(5-氯-2-甲氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物13)
Figure BDA0003224207930000211
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(5-氯-2-甲氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物13(20mg,35％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.78(s,1H),8.79(d,J＝2.0Hz,1H),8.23(d,J＝2.1Hz,1H),7.66(d,J＝2.7Hz,1H),7.58(d,J＝8.7Hz,2H),7.47(dd,J＝8.8,2.7Hz,1H),7.24(d,J＝8.9Hz,1H),7.02(d,J＝8.7Hz,2H),3.87(s,3H),3.22–3.17(m,4H),2.49–2.44(m,4H),2.23(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝434.14，Rt＝10.658min。
实施例14：N-(3-(5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺(化合物14)
Figure BDA0003224207930000212
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(3-乙酰氨基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物14(22mg,35％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.79(s,1H),10.04(s,1H),8.83(d,J＝2.0Hz,1H),8.58(d,J＝2.1Hz,1H),8.38(s,1H),7.78(d,J＝7.8Hz,1H),7.67(dd,J＝12.6,9.2Hz,3H),7.47(t,J＝7.9Hz,1H),7.05(d,J＝8.8Hz,2H),3.23–3.17(m,4H),2.50–2.43(m,4H),2.24(s,3H),2.12(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝427.22，Rt＝9.321min。
实施例15：3-(2-氯-4-甲基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物15)
Figure BDA0003224207930000221
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(2-氯苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物15(30mg,45％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.94(s,1H),8.86(d,J＝2.1Hz,1H),8.17(d,J＝2.1Hz,1H),7.66–7.57(m,3H),7.52(s,1H),7.34(dd,J＝7.8,0.8Hz,1H),7.06(d,J＝8.9Hz,2H),3.26–3.17(m,4H),2.52–2.46(m,4H),2.44(s,3H),2.25(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝418.13，Rt＝10.646min。
实施例16：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物16)
Figure BDA0003224207930000222
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由萘-2-基硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物16(25mg,45％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.95(s,1H),8.86(d,J＝1.9Hz,1H),8.80(d,J＝2.0Hz,1H),8.70(s,1H),8.28(dd,J＝8.6,1.6Hz,1H),8.23–8.15(m,1H),8.07(d,J＝8.7Hz,1H),7.98(d,J＝7.1Hz,1H),7.73(d,J＝8.7Hz,2H),7.62–7.52(m,2H),7.07(d,J＝8.8Hz,2H),3.24–3.16(m,4H),2.50–2.44(m,4H),2.23(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝420.17，Rt＝11.240min。
实施例17：N,N-二甲基-4-(5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)苯胺(化合物17)
Figure BDA0003224207930000231
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(二甲氨基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物17(55mg,70％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.43(s,1H),8.84(d,J＝1.8Hz,1H),8.45(d,J＝1.9Hz,1H),7.91(d,J＝8.8Hz,2H),7.55(d,J＝8.6Hz,2H),7.05(d,J＝8.7Hz,2H),6.87(d,J＝8.8Hz,2H),3.35–3.27(m,4H),3.04(s,6H),2.67–2.61(m,4H),2.39(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝413.21，Rt＝10.231min。
实施例18：3-(4-甲氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物18)
Figure BDA0003224207930000232
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-甲氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物18(48mg,60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.69(s,1H),8.81(d,J＝1.9Hz,1H),8.55(d,J＝1.9Hz,1H),8.04(d,J＝8.7Hz,2H),7.68(d,J＝8.7Hz,2H),7.11(d,J＝8.7Hz,2H),7.05(d,J＝8.8Hz,2H),3.84(s,3H),3.28–3.15(m,4H),2.49–2.42(m,4H),2.23(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝400.30，Rt＝9.942min。
实施例19：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(2-(甲硫基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物19)
Figure BDA0003224207930000241
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(2-(甲硫基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物19(15mg,20％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.90(s,1H),8.85(d,J＝1.9Hz,1H),8.18(d,J＝1.8Hz,1H),7.61(d,J＝8.7Hz,3H),7.50(q,J＝8.0Hz,2H),7.38–7.29(m,1H),7.04(d,J＝8.7Hz,2H),3.25–3.12(m,4H),2.51–2.44(m,4H),2.42(s,3H),2.24(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝416.21，Rt＝9.880min。
实施例20：3-(3-异丙氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物20)
Figure BDA0003224207930000242
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(3-异丙氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物20(25mg,35％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.91(s,1H),8.85(s,1H),8.54(s,1H),7.67(t,J＝7.8Hz,3H),7.57(s,1H),7.47(t,J＝7.6Hz,1H),7.02(t,J＝9.1Hz,3H),5.08–4.48(m,1H),3.28–3.10(m,4H),2.51–2.38(m,4H),2.22(s,3H),1.33(d,J＝5.4Hz,6H).。LC-MS(M+H)+＝428.25，Rt＝10.928min。
实施例21：3-(4-(甲氧基甲基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物21)
Figure BDA0003224207930000251
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(甲氧基甲基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物21(45mg,50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.80(s,1H),8.83(d,J＝1.5Hz,1H),8.58(d,J＝1.5Hz,1H),8.10(d,J＝8.0Hz,2H),7.66(d,J＝8.6Hz,2H),7.49(d,J＝8.0Hz,2H),7.03(d,J＝8.6Hz,2H),4.49(s,2H),3.35(s,3H),3.26–3.18(m,4H),2.55–2.50(m,4H),2.28(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝414.21，Rt＝9.915min。
实施例22：3-(3,4-二甲氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物22)
Figure BDA0003224207930000252
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(3,4-二甲氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物22(38mg,50％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.89(s,1H),8.86(d,J＝2.0Hz,1H),8.43(d,J＝2.0Hz,1H),7.59(d,J＝1.9Hz,1H),7.54(t,J＝5.5Hz,3H),7.07(s,1H),7.06–6.99(m,2H),4.01(s,3H),3.97(s,3H),3.39–3.22(m,4H),2.73–2.58(m,4H),2.40(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝430.06，Rt＝9.782min。δ11.87(s,1H),8.54(d,J＝2.0Hz,1H),8.35(d,J＝1.9Hz,1H),7.85(d,J＝2.2Hz,1H),7.63(d,J＝8.7Hz,2H),7.38–7.28(m,2H),7.08(dd,J＝8.4,6.0Hz,3H),3.90(s,3H),3.83(s,3H),3.24–3.15(m,4H),2.53–2.45(m,4H),2.27(s,3H)
实施例23：3-(4-乙基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物23)
Figure BDA0003224207930000261
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-乙基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物23(25mg,45％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.82(s,1H),8.84(s,1H),8.58(s,1H),8.03(d,J＝7.3Hz,2H),7.65(d,J＝7.6Hz,2H),7.37(d,J＝7.1Hz,2H),7.01(d,J＝7.5Hz,2H),3.23–3.08(m,4H),2.72–2.60(m,2H),2.49–2.37(m,4H),2.21(s,3H),1.22(t,J＝7.0Hz,3H)。LC-MS(M+H)+＝398.20，Rt＝11.205min。
实施例24：3-(3-氯-4-氟苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物24)
Figure BDA0003224207930000262
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(3-氯-4-氟苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物24(17mg,20％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.77(s,1H),8.86(d,J＝1.8Hz,1H),8.36(d,J＝1.9Hz,1H),8.05(dd,J＝7.0,2.0Hz,1H),7.87(ddd,J＝8.4,4.5,2.1Hz,1H),7.54(d,J＝8.7Hz,2H),7.29(dd,J＝14.7,6.0Hz,2H),7.06(d,J＝8.7Hz,2H),3.37–3.29(m,4H),2.70–2.61(m,4H),2.41(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝422.10，Rt＝11.178min。
实施例25：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(4-戊基苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物25)
Figure BDA0003224207930000271
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-戊基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物25(20mg,35％)。1H NMR(400MHz,(400MHz,CDCl3)δ12.80(s,1H),8.87(d,J＝2.0Hz,1H),8.46(d,J＝2.0Hz,1H),7.93(d,J＝8.1Hz,2H),7.56(d,J＝8.7Hz,2H),7.35(d,J＝8.1Hz,2H),7.06(d,J＝8.8Hz,2H),3.35–3.27(m,4H),2.74–2.66(m,2H),2.66–2.60(m,4H),2.40(s,3H),1.74–1.62(m,2H),1.36(td,J＝7.6,3.6Hz,4H),0.91(t,J＝6.9Hz,3H).。LC-MS(M+H)+＝440.26，Rt＝12.614min。
实施例26：3-(3-异丙基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物26)
Figure BDA0003224207930000272
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(3-异丙基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物26(18mg,25％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.76(s,1H),8.83(s,1H),8.54(s,1H),7.91(d,J＝8.4Hz,2H),7.65(d,J＝8.4Hz,2H),7.48(t,J＝7.5Hz,1H),7.32(d,J＝7.5Hz,1H),7.04(d,J＝8.5Hz,2H),3.23–3.15(m,J＝4.3Hz,4H),3.04(dt,J＝13.6,6.8Hz,1H),2.51–2.41(m,4H),2.24(s,3H),1.30(d,J＝6.8Hz,6H)。LC-MS(M+H)+＝412.21，Rt＝11.556min。
实施例27：3-(2-乙氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物27)
Figure BDA0003224207930000281
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(2-乙氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物27(22mg,35％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.66(s,1H),8.80(d,J＝1.8Hz,1H),8.31(d,J＝1.8Hz,1H),7.68(d,J＝6.5Hz,1H),7.58(d,J＝8.6Hz,2H),7.42(t,J＝7.2Hz,1H),7.18(d,J＝8.2Hz,1H),7.08(t,J＝7.4Hz,1H),7.01(d,J＝8.6Hz,2H),4.14(q,J＝6.9Hz,2H),3.21–3.14(m,4H),2.49–2.40(m,4H),2.22(s,3H),1.19(t,J＝6.9Hz,3H)。LC-MS(M+H)+＝414.21，Rt＝10.273min。
实施例28：3N,N-二甲基-4-(5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)苯甲酰胺(化合物28)
Figure BDA0003224207930000282
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(二甲基氨基甲酰基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物28(60mg,80％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.03(s,1H),8.87(d,J＝1.9Hz,1H),8.44(d,J＝2.0Hz,1H),8.05(d,J＝8.2Hz,2H),7.60(d,J＝8.3Hz,2H),7.55(d,J＝8.7Hz,2H),7.06(d,J＝8.7Hz,2H),3.40–3.25(m,4H),3.06(s,6H),2.72–2.62(m,4H),2.40(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝441.23，Rt＝9.353min。
实施例29：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(对甲苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物29)
Figure BDA0003224207930000291
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由对甲苯基硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物29(35mg,50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.76(s,1H),8.83(s,1H),8.56(s,1H),8.01(d,J＝7.3Hz,2H),7.65(d,J＝7.9Hz,2H),7.35(d,J＝7.3Hz,2H),7.01(d,J＝7.8Hz,2H),3.21–3.12(m,4H),2.49–2.42(m,4H),2.38(s,3H),2.23(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝384.24，Rt＝10.829min。
实施例30：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物30)
Figure BDA0003224207930000292
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-苯氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物30(25mg,45％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.80(s,1H),8.86(s,1H),8.60(s,1H),8.15(d,J＝6.8Hz,2H),7.67(d,J＝6.6Hz,2H),7.49–7.40(m,2H),7.23–7.10(m,5H),7.02(d,J＝6.8Hz,2H),3.22–3.14(m,4H),2.50–2.42(m,4H),2.25(s,3H。LC-MS(M+H)+＝462.24，Rt＝11.795min。
实施例31：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(4-(三甲基甲硅烷基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物31)
Figure BDA0003224207930000301
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(三甲基甲硅烷基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物31(12mg,20％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.86(s,1H),8.84(d,J＝1.6Hz,1H),8.61(d,J＝1.5Hz,1H),8.09(d,J＝7.8Hz,2H),7.73–7.65(m,4H),7.05(d,J＝8.6Hz,2H),3.31–3.07(m,4H),2.51–2.38(m,4H),2.23(s,3H),0.30(s,9H)。LC-MS(M+H)+＝442.24，Rt＝12.495min。
实施例32：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(3-(三氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物32)
Figure BDA0003224207930000302
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(3-(三氟甲氧基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物32(22mg,45％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.12(s,1H),8.88(s,1H),8.64(s,1H),8.21(d,J＝7.6Hz,1H),8.02(s,1H),7.71(dd,J＝14.2,8.1Hz,3H),7.44(d,J＝7.8Hz,1H),7.11(d,J＝8.3Hz,2H),3.42–3.27(m,4H),2.95–2.76(m,4H),2.51(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝454.20，Rt＝11.419min。
实施例33：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物33)
Figure BDA0003224207930000311
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(3,4,5-三甲氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物33(25mg,30％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.01(s,1H),8.88(d,J＝1.9Hz,1H),8.41(d,J＝2.0Hz,1H),7.54(d,J＝8.7Hz,2H),7.21(s,2H),7.06(d,J＝8.8Hz,2H),3.97(s,6H),3.94(s,3H),3.39–3.26(m,4H),2.70–2.60(m,4H),2.40(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝460.26，Rt＝9.945min。
实施例34：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(4-丙基苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物34)
Figure BDA0003224207930000312
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-丙基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物34(35mg,55％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.71(s,1H),8.84(s,1H),8.57(s,1H),8.02(d,J＝7.1Hz,2H),7.68(d,J＝7.6Hz,2H),7.37(d,J＝7.0Hz,2H),7.05(d,J＝7.6Hz,2H),3.24–3.19(m,4H),2.64(t,J＝6.3Hz,2H),2.51–2.45(m,4H),2.25(s,3H),1.67(dd,J＝13.2,6.3Hz,2H),0.95(t,J＝6.5Hz,3H)。LC-MS(M+H)+＝412.29，Rt＝11.829min。
实施例35：3-(4-(叔丁基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物35)
Figure BDA0003224207930000321
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(叔丁基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物35(25mg,45％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.70(s,1H),8.85(s,1H),8.59(s,1H),8.04(d,J＝8.2Hz,2H),7.71(d,J＝8.5Hz,2H),7.60(d,J＝8.2Hz,2H),7.09(d,J＝8.6Hz,2H),3.25(d,J＝4.3Hz,4H),2.52(s,4H),2.28(s,3H),1.39(s,9H).。LC-MS(M+H)+＝426.26，Rt＝12.005min。
实施例36：4-(4-(5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)苯基)吗啉(化合物36)
Figure BDA0003224207930000322
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-吗啉代苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物36(25mg,55％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.67(s,1H),8.80(d,J＝1.1Hz,1H),8.54(d,J＝1.0Hz,1H),7.97(d,J＝8.5Hz,2H),7.68(d,J＝8.5Hz,2H),7.08(dd,J＝13.7,8.7Hz,4H),3.77(d,J＝4.2Hz,4H),3.26–3.16(m,8H),2.52(m,4H),2.28(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝455.27，Rt＝10.012min。
实施例37：3-([1,1'-联苯]-4-基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物37)
Figure BDA0003224207930000331
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由[1,1'-联苯]-4-基硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物37(15mg,30％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.82(s,1H),8.84(s,1H),8.62(s,1H),8.21(d,J＝6.1Hz,2H),7.84(d,J＝6.3Hz,2H),7.74(d,J＝5.4Hz,2H),7.67(d,J＝6.4Hz,2H),7.49(s,2H),7.41–7.31(m,1H),7.04(d,J＝6.2Hz,2H),3.26–3.11(m,4H),2.50–2.35(m,4H),2.23(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝446.22，Rt＝11.901min。
实施例38：3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物38)
Figure BDA0003224207930000332
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物38(45mg,60％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.77(s,1H),8.81(d,J＝2.0Hz,1H),8.51(d,J＝1.9Hz,1H),7.70(d,J＝8.7Hz,2H),7.58(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.52(d,J＝2.0Hz,1H),7.09(d,J＝8.8Hz,2H),7.02(d,J＝8.4Hz,1H),4.32(s,4H),2.53–2.50(m,8H),2.45(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝428.20，Rt＝10.085min。
实施例39：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(4-乙烯基苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物39)
Figure BDA0003224207930000341
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-乙烯基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物39(16mg,25％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.88(s,1H),8.86(d,J＝2.1Hz,1H),8.64(d,J＝1.9Hz,1H),8.12(d,J＝8.3Hz,2H),7.73(d,J＝8.7Hz,2H),7.68(t,J＝7.7Hz,2H),7.10(d,J＝8.7Hz,2H),6.85(dd,J＝17.6,10.9Hz,1H),5.94(d,J＝17.7Hz,1H),5.36(d,J＝11.2Hz,1H),3.29–3.24(m,4H),2.66–2.57(m,4H),2.33(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝396.20，Rt＝11.077min。
实施例40：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(4-(三氟甲氧基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物40)
Figure BDA0003224207930000342
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(三氟甲氧基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物40(35mg,50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.04(s,1H),8.86(d,J＝2.0Hz,1H),8.65(d,J＝2.0Hz,1H),8.26(d,J＝8.8Hz,2H),7.72(d,J＝8.8Hz,2H),7.53(d,J＝8.1Hz,2H),7.08(d,J＝8.8Hz,2H),3.32–3.24(m,4H),2.70–2.56(m,4H),2.34(s,3H。LC-MS(M+H)+＝454.16，Rt＝11.040min。
实施例41：3-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物41)
Figure BDA0003224207930000351
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物41(30mg,50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.46(s,1H),8.81(s,1H),8.53(d,J＝18.7Hz,2H),8.12(s,1H),7.67(d,J＝7.7Hz,2H),7.02(d,J＝7.6Hz,2H),3.98(s,3H),3.24–3.13(m,4H),2.50–2.40(m,4H),2.23(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝374.19，Rt＝8.918min。
实施例42：3-([1,1'-联苯基]-3-基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物42)
Figure BDA0003224207930000352
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由[1,1'-联苯]-3-基硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物42(15mg,35％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.93(s,1H),8.84(d,J＝1.5Hz,1H),8.59(d,J＝1.3Hz,1H),8.26(s,1H),8.10(d,J＝7.4Hz,1H),7.77(d,J＝7.4Hz,2H),7.75–7.60(m,4H),7.51(t,J＝7.5Hz,2H),7.41(t,J＝7.2Hz,1H),7.07(d,J＝8.6Hz,2H),3.26–3.16(m,4H),2.65–2.52(m,4H),2.30(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝446.22，Rt＝11.818min。
实施例43：3-(4-异丁基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物43)
Figure BDA0003224207930000361
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-异丁基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物43(30mg,45％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.78(s,1H),8.82(d,J＝2.0Hz,1H),8.58(d,J＝1.8Hz,1H),8.00(d,J＝8.1Hz,2H),7.69(d,J＝8.7Hz,2H),7.32(d,J＝8.1Hz,2H),7.07(d,J＝8.7Hz,2H),3.27–3.15(m,4H),2.51–2.50(m,6H),2.25(s,3H),1.90(dt,J＝16.9,6.6Hz,1H),0.92(d,J＝6.6Hz,6H)。LC-MS(M+H)+＝426.26，Rt＝12.161min。
实施例44：3-(4-异丁氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物44)
Figure BDA0003224207930000362
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-异丁氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物44(35mg,55％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.68(s,1H),8.79(d,J＝28.0Hz,1H),8.55(s,1H),8.02(d,J＝8.2Hz,2H),7.69(d,J＝8.3Hz,2H),7.12(d,J＝8.7Hz,2H),7.11–7.01(m,2H),3.86(d,J＝6.3Hz,2H),3.30–3.22(m,4H),2.72–2.55(m,4H),2.34(s,3H),2.09(dt,J＝12.8,6.3Hz,1H),1.04(d,J＝6.5Hz,6H)。LC-MS(M+H)+＝442.27，Rt＝11.873min。
实施例45：3-(4-乙氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物45)
Figure BDA0003224207930000371
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-乙氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物45(36mg,50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.65(s,1H),8.80(s,1H),8.53(s,1H),8.00(d,J＝8.1Hz,2H),7.67(d,J＝8.1Hz,2H),7.13–6.99(m,4H),4.11(dd,J＝13.3,6.5Hz,2H),3.36–3.29(m,4H),2.79–2.67(m,4H),2.41(s,3H),1.37(t,J＝6.7Hz,3H)。LC-MS(M+H)+＝414.19，Rt＝10.746min。
实施例46：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物46)
Figure BDA0003224207930000372
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(三氟甲基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物46(23mg,40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.07(s,1H),8.87(d,J＝2.0Hz,1H),8.67(d,J＝2.0Hz,1H),8.35(d,J＝8.1Hz,2H),7.88(d,J＝8.3Hz,2H),7.71(d,J＝8.7Hz,2H),7.07(d,J＝8.8Hz,2H),3.26–3.14(m,4H),2.50–2.42(m,J＝4.9Hz,4H),2.24(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝438.18，Rt＝11.374min。
实施例47：3-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物47)
Figure BDA0003224207930000381
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(2-氟-6-甲氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物47(17mg,25％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.85(s,1H),8.82(d,J＝0.6Hz,1H),8.02(s,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.51(dd,J＝15.3,8.0Hz,1H),7.17–6.85(m,4H),3.78(s,3H),3.25–3.10(m,4H),2.50–2.37(m,4H),2.22(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝418.21，Rt＝9.672min。
实施例48：3-(4-乙氧基-3-(三氟甲基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物48)
Figure BDA0003224207930000382
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-乙氧基-3-(三氟甲基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物48(28mg,45％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.86(s,1H),8.84(s,1H),8.56(s,1H),8.36(d,J＝8.0Hz,1H),8.21(s,1H),7.67(d,J＝8.3Hz,2H),7.40(d,J＝8.5Hz,1H),7.06(d,J＝8.4Hz,2H),4.26(dd,J＝13.4,6.5Hz,2H),3.26–2.98(m,4H),2.50–2.37(m,4H),2.24(s,3H),1.66–1.27(m,J＝6.8Hz,3H).。LC-MS(M+H)+＝482.24，Rt＝11.595min。
实施例49：3-(4-(二氟甲基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物49)
Figure BDA0003224207930000391
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(二氟甲基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物49(20mg,35％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.93(s,1H),8.87(s,1H),8.66(s,1H),8.27(d,J＝7.5Hz,2H),7.76(d,J＝7.5Hz,2H),7.72(d,J＝8.0Hz,2H),7.09(d,J＝8.1Hz,2H),3.28–3.21(m,4H),2.55–2.51(m,4H),2.29(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝420.22，Rt＝10.496min。
实施例50：3-(4-(叔丁氧基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物50)
Figure BDA0003224207930000392
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(叔丁氧基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物50(35mg,55％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.67(s,1H),8.82(d,J＝1.6Hz,1H),8.57(d,J＝1.5Hz,1H),8.02(d,J＝8.5Hz,2H),7.68(d,J＝8.6Hz,2H),7.15(d,J＝8.5Hz,2H),7.06(d,J＝8.6Hz,2H),3.26–3.20(m,4H),2.54–2.51(m,4H),2.28(s,3H),1.39(s,9H).。LC-MS(M+H)+＝442.24，Rt＝11.335min。
实施例51：3-(4-(二氟甲氧基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物51)
Figure BDA0003224207930000401
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(二氟甲氧基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物51(28mg,40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.83(s,1H),8.86(s,1H),8.61(s,1H),8.35–8.06(m,2H),7.84–7.62(m,2H),7.60–7.19(m,3H),7.08(d,J＝6.2Hz,2H),3.28–3.19(m,4H),2.56–2.49(m,4H),2.28(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝436.20，Rt＝10.557min。
实施例52：3-(4-(2H-四唑-5-基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物52)
Figure BDA0003224207930000402
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(2H-四唑-5-基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物52(19mg,30％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.92(s,1H),8.85(d,J＝1.9Hz,1H),8.70(d,J＝1.9Hz,1H),8.25(d,J＝8.4Hz,2H),8.19(d,J＝8.4Hz,2H),7.75(d,J＝8.7Hz,2H),7.11(d,J＝8.7Hz,2H),3.42–3.23(m,J＝4.4Hz,4H),2.99–2.82(m,J＝4.3Hz,4H),2.56(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝438.22，Rt＝9.473min。
实施例53：3-(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物53)
Figure BDA0003224207930000411
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物53(25mg,40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.84(s,1H),8.85(s,1H),8.65(s,1H),8.56(s,1H),8.25(d,J＝8.0Hz,2H),8.03(d,J＝8.1Hz,2H),7.81(s,1H),7.71(d,J＝8.1Hz,2H),7.08(d,J＝8.1Hz,2H),6.60(s,1H),3.27–3.20(m,4H),2.53–2.42(m,4H),2.26(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝436.24，Rt＝10.290min。
实施例54：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物54)
Figure BDA0003224207930000412
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(吡咯烷-1-基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物54(30mg,45％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.48(s,1H),8.78(d,J＝1.7Hz,1H),8.51(d,J＝1.7Hz,1H),7.90(d,J＝8.6Hz,2H),7.66(d,J＝8.6Hz,2H),7.05(d,J＝8.7Hz,2H),6.68(d,J＝8.6Hz,2H),3.39–3.25(m,J＝38.2Hz,8H),3.23–3.17(m,4H),2.25(s,3H),2.04–1.93(m,4H).。LC-MS(M+H)+＝439.26，Rt＝11.500min。
实施例55：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(4-(吡咯烷-1-基磺酰基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物55)
Figure BDA0003224207930000421
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(吡咯烷-1-基磺酰基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物55(12mg,35％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1HNMR(400MHz,DMSO)δ14.02(s,1H),8.86(d,J＝0.7Hz,1H),8.68(s,1H),8.36(d,J＝8.2Hz,2H),7.94(d,J＝8.2Hz,2H),7.70(d,J＝8.5Hz,2H),7.06(d,J＝8.5Hz,2H),3.24–3.16(m,8H),2.50–2.39(m,4H),2.24(s,3H),1.88–1.53(m,4H)。LC-MS(M+H)+＝503.21，Rt＝10.199min。
实施例56：N,N-二乙基-3-(5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)苯甲酰胺(化合物56)
Figure BDA0003224207930000422
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(3-(二乙基氨基甲酰基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物56(16mg,30％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.88(s,1H),8.86(s,1H),8.58(s,1H),8.19(d,J＝7.3Hz,1H),8.01(s,1H),7.66(dd,J＝21.3,7.8Hz,3H),7.42(d,J＝7.1Hz,1H),7.08(d,J＝7.8Hz,2H),3.31–3.28(m,4H),3.26–3.20(m,4H),2.53–2.45(m,4H),2.26(s,3H),1.18(s,6H).。LC-MS(M+H)+＝469.31，Rt＝10.279min。
实施例57：N,N-二甲基-3-(5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)苯基)甲胺(化合物57)
Figure BDA0003224207930000431
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-((二甲氨基)甲基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物57(29mg,50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.81(s,1H),8.82(s,1H),8.59(s,1H),8.05(d,J＝7.7Hz,2H),7.69(d,J＝8.2Hz,2H),7.45(d,J＝7.6Hz,2H),7.06(d,J＝8.3Hz,2H),3.45(s,2H),3.27–3.15(m,4H),2.50–2.42(m,4H),2.23(s,3H),2.19(s,6H)。LC-MS(M+H)+＝427.30，Rt＝7.113min。
实施例58：1-(4-(5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)苯基)环丙烷-1-甲腈(化合物58)
Figure BDA0003224207930000432
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(1-乙炔基环丙基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物58(15mg,35％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.81(s,1H),8.83(d,J＝2.0Hz,1H),8.59(d,J＝2.0Hz,1H),8.12(d,J＝8.4Hz,2H),7.68(d,J＝8.8Hz,2H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.06(d,J＝8.8Hz,2H),3.24–3.20(m,4H),2.51–2.44(m,4H),2.25(s,3H),1.82(q,J＝4.8Hz,2H),1.59(q,J＝5.1Hz,2H)。LC-MS(M+H)+＝435.23，Rt＝10.340min。
实施例59：3-(4-(苄氧基)-3-(三氟甲基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物59)
Figure BDA0003224207930000441
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(苄氧基)-3-(三氟甲基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物59(16mg,35％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.84(s,1H),8.84(s,1H),8.56(s,1H),8.37(d,J＝8.0Hz,1H),8.27(s,1H),7.68(d,J＝7.8Hz,2H),7.60–7.42(m,5H),7.39(d,J＝6.8Hz,1H),7.07(d,J＝7.8Hz,2H),5.39(s,2H),3.25–3.19(m,4H),2.52–2.45(m,4H),2.26(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝544.29，Rt＝12.286min。
实施例60：3-(4-(苄氧基)-3-甲基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物60)
Figure BDA0003224207930000442
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(苄氧基)-3-甲基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物60(25mg,40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.60(s,1H),8.78(d,J＝1.9Hz,1H),8.52(d,J＝1.9Hz,1H),7.86(d,J＝6.5Hz,2H),7.65(d,J＝8.7Hz,2H),7.50(d,J＝7.3Hz,2H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.33(t,J＝7.3Hz,1H),7.16(d,J＝9.1Hz,1H),7.04(d,J＝8.7Hz,2H),5.21(s,2H),3.22–3.15(m,4H),2.50–2.41(m,4H),2.33(s,3H),2.23(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝490.32，Rt＝12.245min。
实施例61：3-(4-(苄氧基)-3,5-二氟苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物61)
Figure BDA0003224207930000451
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(苄氧基)-3,5-二氟苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物61(25mg,45％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.84(d,J＝1.8Hz,1H),8.63(d,J＝1.8Hz,1H),7.81(d,J＝9.2Hz,2H),7.71(d,J＝8.6Hz,2H),7.49(d,J＝7.0Hz,2H),7.45–7.28(m,3H),7.06(d,J＝8.7Hz,2H),5.26(s,2H),3.24–3.21(m,4H),2.52–2.42(m,4H),2.26(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝512.26，Rt＝12.131min。
实施例62：3-(4-环丙氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物62)
Figure BDA0003224207930000452
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-环丙氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物62(19mg,35％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.62(s,1H),8.82(d,J＝1.6Hz,1H),8.55(d,J＝1.6Hz,1H),8.04(d,J＝8.6Hz,2H),7.68(d,J＝8.6Hz,2H),7.23(d,J＝8.6Hz,2H),7.07(d,J＝8.7Hz,2H),3.99–3.88(m,1H),3.27–3.15(m,4H),2.52–2.48(m,4H),2.27(s,3H),0.90–0.80(m,2H),0.76–0.65(m,J＝7.8Hz,2H).。LC-MS(M+H)+＝426.26，Rt＝11.028min。
实施例63：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(4-(吡啶-3-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物63)
Figure BDA0003224207930000461
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(吡啶-3-基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物63(25mg,45％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.80(s,1H),8.97(d,J＝2.0Hz,1H),8.83(d,J＝2.1Hz,1H),8.62(d,J＝2.1Hz,1H),8.60(dd,J＝4.7,1.5Hz,1H),8.23(d,J＝8.4Hz,2H),8.18–8.06(m,1H),7.89(d,J＝8.4Hz,2H),7.68(d,J＝8.8Hz,2H),7.54–7.47(m,1H),7.06(d,J＝8.8Hz,2H),3.21–3.16(m,4H),2.49–2.45(m,4H),2.24(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝447.26，Rt＝9.901min。
实施例64：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(4-(吡啶-4-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物64)
Figure BDA0003224207930000462
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(吡啶-4-基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物64(20mg,40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.87(s,1H),8.84(s,1H),8.67(d,J＝4.7Hz,2H),8.64(s,1H),8.25(d,J＝8.0Hz,2H),7.97(d,J＝8.0Hz,2H),7.77(d,J＝4.8Hz,2H),7.69(d,J＝8.4Hz,2H),7.06(d,J＝8.4Hz,2H),3.24–3.20(m,4H),2.50–2.43(m,4H),2.24(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝447.26，Rt＝9.212min。
实施例65：4-(4-(5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)苄基)吗啉(化合物65)
Figure BDA0003224207930000471
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(吗啉甲基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物65(25mg,40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.74(s,1H),8.84(s,1H),8.60(s,1H),8.07(d,J＝7.7Hz,2H),7.69(d,J＝8.1Hz,2H),7.50(d,J＝7.3Hz,2H),7.07(d,J＝8.0Hz,2H),3.73–3.59(m,4H),3.56(s,2H),3.26–3.18(m,4H),2.57–2.50(m,4H),2.48–2.37(m,4H),2.27(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝469.31，Rt＝7.144min。
实施例66：1-(3-(5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)苯基)乙酮(化合物66)
Figure BDA0003224207930000472
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(3-乙酰苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物66(25mg,40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.98(s,1H),8.86(s,1H),8.60(d,J＝17.3Hz,2H),8.38(d,J＝7.6Hz,1H),8.02(d,J＝7.6Hz,1H),7.79–7.64(m,3H),7.07(d,J＝8.6Hz,2H),3.26–3.16(m,4H),2.70(s,3H),2.51–2.43(m,J＝5.1Hz,4H),2.25(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝412.22，Rt＝10.014min。
实施例67：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(4-(甲基磺酰基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物67)
Figure BDA0003224207930000481
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(甲基磺酰基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物67(25mg,40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.16(s,1H),8.91(d,J＝1.9Hz,1H),8.73(d,J＝1.9Hz,1H),8.42(d,J＝8.5Hz,2H),8.10(d,J＝8.5Hz,2H),7.75(d,J＝8.7Hz,2H),7.11(d,J＝8.8Hz,2H),3.32(s,3H),3.29–3.21(m,4H),2.55–2.49(m,4H),2.29(s,3H).。LC-MS(M+H)+＝448.20，Rt＝9.045min。
实施例68：5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物68)
Figure BDA0003224207930000482
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物68(35mg,50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.70(s,1H),8.83(s,1H),8.57(s,1H),8.09(d,J＝8.1Hz,2H),7.69(d,J＝8.0Hz,2H),7.26(d,J＝8.1Hz,2H),7.08(d,J＝8.0Hz,2H),4.85(dd,J＝17.3,8.6Hz,2H),3.26–3.19(m,4H),2.54–2.46(m,4H),2.28(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝468.24，Rt＝10.960min。
实施例69：2-(4-(5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)苯基)-1,3,4-恶二唑(化合物69)
Figure BDA0003224207930000491
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(1,3,4-恶二唑-2-基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物69(18mg,35％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.01(s,1H),9.36(s,1H),8.87(s,1H),8.69(s,1H),8.37(d,J＝7.9Hz,2H),8.20(d,J＝7.8Hz,2H),7.72(d,J＝8.0Hz,2H),7.08(d,J＝8.1Hz,2H),3.28–3.20(m,4H),2.54–2.48(m,4H),2.28(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝438.18，Rt＝9.610min。
实施例70：N,N-二乙基-4-(5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)苯胺(化合物70)
Figure BDA0003224207930000492
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(二乙氨基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物70(50mg,80％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.50(s,1H),8.78(d,J＝1.8Hz,1H),8.52(d,J＝1.8Hz,1H),7.89(d,J＝8.7Hz,2H),7.66(d,J＝8.6Hz,2H),7.04(d,J＝8.7Hz,2H),6.81(d,J＝8.8Hz,2H),3.45–3.39(m,J＝6.8Hz,4H),3.31–3.00(m,4H),2.53–2.40(m,4H),2.23(s,3H),1.13(t,J＝6.9Hz,6H)。LC-MS(M+H)+＝441.30，Rt＝9.361min。
实施例71：3-(3,5-二氟-4-甲氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物71)
Figure BDA0003224207930000501
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(3,5-二氟-4-甲氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物71(25mg,65％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.98(s,1H),8.84(d,J＝1.5Hz,1H),8.65(d,J＝1.4Hz,1H),7.84(d,J＝9.2Hz,2H),7.72(d,J＝8.6Hz,2H),7.06(d,J＝8.6Hz,2H),4.00(s,3H),3.28–3.13(m,J＝4.1Hz,4H),2.50–2.43(m,J＝4.4Hz,4H),2.24(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝436.20，Rt＝10.892min。
实施例72：3-(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物72)
Figure BDA0003224207930000502
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物72(60mg,70％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.87(s,1H),8.84(d,J＝2.0Hz,1H),8.56(d,J＝2.0Hz,1H),8.40(dd,J＝8.7,1.9Hz,1H),8.21(d,J＝1.9Hz,1H),7.68(d,J＝8.7Hz,2H),7.43(d,J＝8.7Hz,1H),7.07(d,J＝8.8Hz,2H),3.98(s,3H),3.28–3.04(m,4H),2.50–2.40(m,4H),2.24(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝468.24，Rt＝11.068min。
实施例73：3-(2-氟-4-甲氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物73)
Figure BDA0003224207930000503
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(2-氟-4-甲氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物73(50mg,75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.90(s,1H),8.83(s,1H),8.27(s,1H),7.82(t,J＝8.6Hz,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,2H),7.05(d,J＝8.8Hz,3H),6.97(d,J＝8.4Hz,1H),3.86(s,3H),3.28–3.07(m,4H),2.48–2.42(m,4H),2.23(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝418.21，Rt＝10.356min。
实施例74：3-(4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物74)
Figure BDA0003224207930000511
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物74(80mg,75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.85(s,1H),8.84(d,J＝2.1Hz,1H),8.06(d,J＝2.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.4Hz,1H),7.59(d,J＝8.8Hz,2H),7.48–7.32(m,2H),7.02(d,J＝8.8Hz,2H),3.93(s,3H),3.26–3.09(m,4H),2.50–2.39(m,4H),2.22(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝468.24，Rt＝10.431min。
实施例75：3-(3-氯-4-甲氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物75)
Figure BDA0003224207930000512
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(3-氯-4-甲氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物75(55mg,75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.83(s,1H),8.82(d,J＝1.4Hz,1H),8.56(d,J＝1.3Hz,1H),8.08(s,2H),7.68(d,J＝8.5Hz,2H),7.30(d,J＝9.1Hz,1H),7.06(d,J＝8.6Hz,2H),3.94(s,3H),3.26–3.05(m,4H),2.50–2.37(m,J＝4.2Hz,4H),2.23(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝434.23，Rt＝10.745min。
实施例76：3-(2-氯-4-甲氧基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物76)
Figure BDA0003224207930000521
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(2-氯-4-甲氧基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物76(25mg,50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.88(s,1H),8.83(d,J＝2.1Hz,1H),8.14(d,J＝2.1Hz,1H),7.60(t,J＝8.1Hz,3H),7.24(d,J＝2.5Hz,1H),7.09(dd,J＝8.6,2.6Hz,1H),7.03(d,J＝8.8Hz,2H),3.87(s,3H),3.27–3.12(m,4H),2.50–2.39(m,4H),2.22(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝434.19，Rt＝10.411min。
实施例77：3-(4-(苄氧基)苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物77)
Figure BDA0003224207930000522
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(苄氧基)苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物77(30mg,60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.71(s,1H),8.82(s,1H),8.56(s,1H),8.05(d,J＝8.3Hz,2H),7.69(d,J＝8.2Hz,2H),7.51(d,J＝7.1Hz,2H),7.43(t,J＝7.2Hz,2H),7.37(d,J＝7.0Hz,1H),7.19(d,J＝8.3Hz,2H),7.07(d,J＝8.3Hz,2H),5.21(s,2H),3.26–3.13(m,4H),2.51–2.38(m,4H),2.24(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝476.28，Rt＝11.717min。
实施例78：3-(4-(苄氧基)-3-氟苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物78)
Figure BDA0003224207930000531
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(苄氧基)-3-氟苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物78(30mg,65％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.83(s,1H),8.82(d,J＝1.3Hz,1H),8.59(s,1H),8.03–7.82(m,2H),7.69(d,J＝8.5Hz,2H),7.51(d,J＝7.2Hz,2H),7.43(t,J＝7.5Hz,2H),7.40–7.26(m,2H),7.06(d,J＝8.5Hz,2H),5.27(s,2H),3.24–3.14(m,4H),2.50–2.41(m,J＝4.2Hz,4H),2.23(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝494.27，Rt＝11.750min。
实施例79：3-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物79)
Figure BDA0003224207930000532
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-甲氧基-3-甲基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物79(25mg,60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.68(s,1H),8.80(s,1H),8.54(s,1H),8.05–7.79(m,2H),7.66(d,J＝7.6Hz,2H),7.07(dd,J＝15.3,8.4Hz,3H),3.86(s,3H),3.19(s,4H),2.46(s,4H),2.28(s,3H),2.23(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝414.19，Rt＝10.829min。
实施例80：N,N,2-三甲基-4-(5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)苯甲酰胺(化合物80)
Figure BDA0003224207930000541
以与在实施例1步骤3中描述的方式类似的方式由(4-(二甲基氨基甲酰基)-3-甲基苯基)硼酸和化合物1-2(100mg,1.0eq)制备化合物80(20mg,50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.88(s,1H),8.83(d,J＝1.7Hz,1H),8.62(d,J＝1.7Hz,1H),7.96(d,J＝6.8Hz,2H),7.69(d,J＝8.6Hz,2H),7.31(d,J＝8.3Hz,1H),7.07(d,J＝8.7Hz,2H),3.24–3.15(m,4H),3.04(s,3H),2.83(s,3H),2.49–2.42(m,4H),2.32(s,3H),2.23(s,3H)。LC-MS(M+H)+＝455.27，Rt＝9.473min。
生物学测定
I.HPK1激酶结合测定
在基于时间分辨荧光共振能量转移方法的结合测定中，测试本文公开的化合物对HPK1激酶(aa1-346，Life Technologies)的抑制。将重组HPK1(5nM)与本文公开的化合物或DMSO一起在室温下在含有50mM HEPES pH 7.5、10mM MgCl2、1mM EGTA、0.01％Brij-35的测定缓冲液中预孵育1小时。并且然后将Tracer222(Life Technologies)和Eu-Anti-GST抗体(cisbio)添加到板中，并且在室温下进一步孵育1h。在BMG PHERAstar FS仪器上读取TR-FRET信号(ex337nm，em 620nm/665nm)。基于在665nm处的荧光与在620nm处的荧光的比率计算在递增浓度的化合物的存在下对HPK1的抑制。通过Graphpad Prism软件将数据拟合到四参数逻辑方程得出每种化合物的IC50。本文公开的化合物显示酶结合值，如表1所示。
表1.本文公开的化合物在100nM时的酶抑制率(％)
Figure BDA0003224207930000542
Figure BDA0003224207930000551
注：A＝70％-90％,B＝50％-70％,C＝％30-50％,D＝10％-20％,E<10％
II.在1mM ATP的HPK激酶活性测定
在基于时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)方法的测定中，测试本文公开的化合物对HPK1激酶(aa1-346，Life Technologies)活性的抑制。在384孔低容量黑色板中在含有50mM HEPES、0.01％BSA、0.1mM原钒酸盐、10mM MgCl2、1mM DTT，pH＝7.0，0.005％Tween-20的缓冲液中的含有HPK1激酶(40nM)、1mM ATP、0.5μM STK1底物和0-10μM化合物的反应混合物中进行测定。将激酶与本文公开的化合物或DMSO一起在室温下孵育60分钟，并且通过添加ATP和STK1底物引发反应。在室温下反应120分钟之后，根据制造商的说明书(CisBio)添加等体积的终止/检测溶液。所述终止/检测溶液含有在检测缓冲液中的STK抗体-穴状化合物(Cryptate)和XL665-缀合的链霉亲和素。在PHERAstar FS读板器(BMG Labtech)上记录TR-FRET信号(在337nm波长处的激发的情况下在665nm处的荧光发射与在620nm处的发射的比率)。STK1底物的磷酸化导致STK抗体-穴状化合物与生物素化的STK1底物结合，这将荧光供体(Eu3+穴状化合物)置于与受体(链霉亲和素-XL665)密切接近，从而导致高的荧光共振能量转移程度。基于在665nm处的荧光与在620nm处的荧光的比率计算在递增浓度的化合物的存在下对HPK1的抑制。通过Graphpad Prism软件将数据拟合到四参数逻辑方程得出每种化合物的IC50。本文公开的化合物显示酶活性值，如表2所示。
表2.本文公开的化合物在100nM时的酶抑制率(％)
化合物编号 抑制率/％ 化合物编号 抑制率％ 化合物编号 抑制率％
61 B 69 D 77 E
62 B 70 D 78 A
63 B 71 D 79 B
64 B 72 E 80 D
65 B 73 E
66 A 74 B
67 A 75 A
68 A 76 B
注：A＝70％-90％,B＝50％-70％,C＝％30-50％,D＝10％-20％,E<10％
尽管为了理解清楚的目的，已经通过说明和实施例详细地描述了前述发明，但是对于本领域技术人员清楚的是，可以实施某些较小的改变和修改。因此，描述和实施例不应被解释为限制本发明的范围。

Claims (10)

1.一种如式(Ⅰ)所示结构的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐；
Figure FDA0003224207920000011
其中：
L1是单键、亚烷基、亚环烷基、*1-O-亚烷基-**1、*1-亚烷基-O-**1、*1-NH-亚烷基-**1、*1-亚烷基-NH-**1、*1-NHC(O)-**1、*1-C(O)NH-**1、亚烯基或亚炔基，其中*1是指与Cy1附接的位置，并且**1是指与
Figure FDA0003224207920000012
附接的位置；
Cy1是包含一个或两个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫中的杂原子作为一个或多个环成员的5或6元杂环基，并且在所述杂环是6元环时，R1相对于附接点L1在所述杂环基的对位处；或者Cy1是包含一或二或三个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫中的杂原子作为一个或多个环成员的7至10元双环稠合的杂环基；
R1是卤素、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、氧代基、-CN、-NO2、-OR1a、-SO2R1a、-SO2NR1aR1b、-COR1a、-CO2R1a、-CONR1aR1b、-C(＝NR1a)NR1bR1c、-NR1aR1b、-NR1aCOR1b、-NR1aCONR1bR1c、-NR1aCO2R1b、-NR1aSONR1bR1c、-NR1aSO2NR1bR1c或-NR1aSO2R1b，所述-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自任选地被至少一个取代基R1d取代；
R1a、R1b和R1c各自独立地是氢、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自任选地被至少一个取代基R1e取代；或者(R1a和R1b)、(R1b和R1c)或(R1c和R1a)与它们所附接的一个或多个原子一起形成3至12元环，所述环包含0、1或2个独立地选自氮、氧或任选氧化的硫中的杂原子作为一个或多个环成员，所述环任选地被至少一个取代基R1e取代；
R1d和R1e各自独立地是氢、卤素、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、氧代基、-CN、-NO2、-OR1f、-SO2R1f、-SO2NR1fR1g、-COR1f、-CO2R1f、-CONR1fR1g、-C(＝NR1f)NR1gR1h、-NR1fR1g、-NR1fCOR1g、-NR1fCONR1gR1h、-NR1fCO2R1f、-NR1fSONR1fR1g、-NR1fSO2NR1gR1h或-NR1fSO2R1g，所述-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基各自任选地被至少一个选自卤素、-C1-8烷基、-OR1i、-NR1iR1j、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基的取代基取代；
R1f、R1g、R1h、R1i、和R1j各自独立地是氢、-C1-8烷基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-、-C2-8烯基、-C2-8炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基。
2.根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的6元杂环基是哌啶基、四氢吡啶基或哌嗪基。
3.根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的7至10元双环稠合杂环基是二氢吡啶并噁嗪、二氢苯并氧氮杂卓基、异吲哚啉基、二氢异喹啉基、四氢异喹啉基、苯并氮杂卓基、苯并氧氮杂卓基或二氢苯并噁嗪。
4.根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的化合物选自：
Figure FDA0003224207920000021
Figure FDA0003224207920000031
Figure FDA0003224207920000041
Figure FDA0003224207920000051
Figure FDA0003224207920000061
Figure FDA0003224207920000071
Figure FDA0003224207920000081
5.一种如权利要求1-4任一项所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在过渡金属催化下，将
Figure FDA0003224207920000091
与
Figure FDA0003224207920000092
反应生成
Figure FDA0003224207920000093
每个R、R’各自独立地是H、Boc或磺酰基；
(2)在过渡金属催化下，将
Figure FDA0003224207920000094
与
Figure FDA0003224207920000095
反应生成
Figure FDA0003224207920000096
(3)将
Figure FDA0003224207920000097
原位脱保护或逐步脱保护以获得如式(Ⅰ)所示结构的化合物；若R为H时，则不需要脱保护。
6.一种如权利要求1-4任一项所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在过渡金属催化下，将
Figure FDA0003224207920000098
与
Figure FDA0003224207920000099
反应生成
Figure FDA00032242079200000910
(2)使用卤源与
Figure FDA0003224207920000101
反应得
Figure FDA0003224207920000102
(3)在过渡金属催化下，将
Figure FDA0003224207920000103
与
Figure FDA0003224207920000104
反应生成
Figure FDA0003224207920000105
(4)将
Figure FDA0003224207920000106
原位脱保护或逐步脱保护以获得如式(Ⅰ)所示结构的化合物；若R为H时，则不需要脱保护。
7.一种如权利要求1-4任一项所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在过渡金属催化下，将
Figure FDA0003224207920000107
与
Figure FDA0003224207920000108
反应生成
Figure FDA0003224207920000109
(2)使用卤源与
Figure FDA00032242079200001010
反应得
Figure FDA00032242079200001011
(3)在过渡金属催化下，将
Figure FDA0003224207920000111
与硼酸或联硼酸频哪醇酯反应生成
Figure FDA0003224207920000112
(4)在过渡金属催化下，将
Figure FDA0003224207920000113
与
Figure FDA0003224207920000114
反应生成
Figure FDA0003224207920000115
(5)将
Figure FDA0003224207920000116
原位脱保护或逐步脱保护以获得如式(Ⅰ)所示结构的化合物；若R为H时，则不需要脱保护。
8.一种药物组合物，其特征在于，包含治疗有效量的如权利要求1-4任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂或载体。
9.一种如权利要求1-4任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐作为HPK1抑制剂在制备用于治疗HPK1相关障碍或疾病的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的HPK1相关障碍或疾病选自结肠直肠癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、血液系统恶性肿瘤和肾细胞癌。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114940683A (zh) * 2022-07-26 2022-08-26 轩竹(北京)医药科技有限公司 Hpk1抑制剂及其用途
US11453681B2 (en) 2019-05-23 2022-09-27 Gilead Sciences, Inc. Substituted eneoxindoles and uses thereof
CN116162087A (zh) * 2023-02-20 2023-05-26 杭州医学院 一种hpk 1和/或lck激酶调节剂、制备方法及其应用
WO2023250335A1 (en) * 2022-06-21 2023-12-28 Chulalongkorn University 1,4-diphenyl-1 h-indazole and 1-pyridin-2-yl-4-phenyl-1 h-indazole derivatives as pd-1/pd-l1 modulators for the treatment of cancer
US11897878B2 (en) 2018-10-31 2024-02-13 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds
US11925631B2 (en) 2018-10-31 2024-03-12 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160200722A1 (en) * 2013-08-22 2016-07-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Compounds inhibiting leucine-rich repeat kinase enzyme activity
WO2018049214A9 (en) * 2016-09-09 2018-10-18 Incyte Corporation Pyrazolopyridine derivatives as hpk1 modulators and uses thereof for the treatment of cancer
CN109923114A (zh) * 2016-09-09 2019-06-21 因赛特公司 作为hpk1调节剂的吡唑并吡啶衍生物和其用于治疗癌症的用途
CN110402248A (zh) * 2017-03-15 2019-11-01 豪夫迈·罗氏有限公司 作为hpk1抑制剂的氮杂吲哚类
TW202102500A (zh) * 2019-03-26 2021-01-16 比利時商健生藥品公司 二環ｈｐｋ１抑制劑
CN113166139A (zh) * 2018-11-22 2021-07-23 百济神州有限公司 作为HPK1抑制剂的吡咯并[2,3-b]吡啶及其用途

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160200722A1 (en) * 2013-08-22 2016-07-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Compounds inhibiting leucine-rich repeat kinase enzyme activity
WO2018049214A9 (en) * 2016-09-09 2018-10-18 Incyte Corporation Pyrazolopyridine derivatives as hpk1 modulators and uses thereof for the treatment of cancer
CN109923114A (zh) * 2016-09-09 2019-06-21 因赛特公司 作为hpk1调节剂的吡唑并吡啶衍生物和其用于治疗癌症的用途
CN110402248A (zh) * 2017-03-15 2019-11-01 豪夫迈·罗氏有限公司 作为hpk1抑制剂的氮杂吲哚类
CN113166139A (zh) * 2018-11-22 2021-07-23 百济神州有限公司 作为HPK1抑制剂的吡咯并[2,3-b]吡啶及其用途
TW202102500A (zh) * 2019-03-26 2021-01-16 比利時商健生藥品公司 二環ｈｐｋ１抑制劑

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11897878B2 (en) 2018-10-31 2024-02-13 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds
US11925631B2 (en) 2018-10-31 2024-03-12 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds
US11453681B2 (en) 2019-05-23 2022-09-27 Gilead Sciences, Inc. Substituted eneoxindoles and uses thereof
WO2023250335A1 (en) * 2022-06-21 2023-12-28 Chulalongkorn University 1,4-diphenyl-1 h-indazole and 1-pyridin-2-yl-4-phenyl-1 h-indazole derivatives as pd-1/pd-l1 modulators for the treatment of cancer
CN114940683A (zh) * 2022-07-26 2022-08-26 轩竹(北京)医药科技有限公司 Hpk1抑制剂及其用途
CN114940683B (zh) * 2022-07-26 2023-01-17 轩竹(北京)医药科技有限公司 Hpk1抑制剂及其用途
CN116162087A (zh) * 2023-02-20 2023-05-26 杭州医学院 一种hpk 1和/或lck激酶调节剂、制备方法及其应用

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