JP5808869B2 - 二環式ピペラジン化合物 - Google Patents
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Description
本出願は、連邦規則法典第37巻§1.53(b)に基づいて出願した非仮出願であり、参照により全文が本明細書に援用される2011年11月3日出願の米国特許仮出願第61/555,396号の優先権を米国特許法第119条(e)に基づいて主張する。
本発明は、概して、炎症、免疫、および癌を含むブルトン型チロシンキナーゼ(Btk)によって媒介される障害を治療するための化合物、より具体的にはBtk活性を阻害する化合物に関する。本発明はまた、インビトロ、インサイチュ、およびインビボでの診断のための、あるいは哺乳類細胞、または関連する病状の治療のための化合物の使用方法に関する。
ヒト酵素の最大のファミリーであるプロテインキナーゼは、500種類を優に超えるタンパク質を包含する。ブルトン型チロシンキナーゼ(Btk)は、チロシンキナーゼのTecファミリーのメンバーであり、初期B細胞の発生ならびに成熟B細胞の活性化、シグナル伝達、および生存の調節因子である。
I
を有し、それにはその立体異性体、互変異性体、または薬学的に許容可能な塩が含まれる。様々な置換基は、本明細書下文に定義される。
これから本発明の特定の実施態様への言及を詳細に行う。その例は付随する構造および式に説明される。本発明は列挙される実施態様と併せて説明されるが、それらが本発明をそれらの実施態様に限定することを意図するものでないことは当然理解される。それに反して、本発明は、すべての代替形態、変更形態、および等価物を網羅することを意図し、それらは特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲の中に含まれる。当業者は、本明細書に記載されるものに類似または等価な多くの方法および材料を理解し、それらは本発明の実践において使用することができ得る。本発明は、記載される方法および材料に決して限定されない。万一、援用される文献、特許、および同様の材料の1以上が本願と異なるかまたは矛盾する場合には、限定されるものではないが、定義された用語、用語の使用法、記載される技術、または同様のものを含め、本願が支配する。別に定めのない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または同等の方法および材料を、本発明の実践または試験において使用することができるが、適した方法および材料は、下に記載される。本明細書において言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、およびその他の参照文献は、参照によりその全文が本明細書に援用される。本願において使用される命名法は、別に指定のない限り、IUPAC系命名法に基づく。
置換基の数を示す場合、「一又は複数の」という用語は、1つの置換基から可能な限り最大数の置換まで、すなわち、置換基による1つの水素の置き換えから最大すべての水素の置き換えまでの範囲をさす。用語「置換基」は、親分子の水素原子と置き換わった原子または原子団を示す。用語「置換された」は、特定基が一又は複数の置換基を有することを示す。任意の基が複数の置換基を有する可能性があり、考えられる様々な置換基が提供される場合、それらの置換基は、独立に選択され、同じである必要はない。用語「非置換の」は、特定基が置換基を有していないことを意味する。用語「場合によって置換されている」は、特定基が、置換されていないか、または考えられる置換基の群から独立に選択される1つもしくは複数の置換基によって置換されていることを意味する。置換基の数を示す場合、用語「一又は複数の」は、1つの置換基から可能な限り最大数の置換まで、すなわち、置換基による1つの水素の置き換えから最大すべての水素の置き換えまでを意味する。
本発明は、Btkキナーゼによって調節される疾患、状態および/または障害の治療において有用である可能性のある、式Ia〜Ihを含む式Iの二環式ピペラジン化合物、およびその医薬製剤:
I
またはその立体異性体、互変異性体、もしくは薬学的に許容可能な塩を提供し、式中:
実線/破線の
は、単結合もしくは二重結合を示し;
X1は、CR1またはNであり;
X2は、CR2またはNであり;
X3は、CR3またはNであり;
ここで、X1、X2、およびX3の0個、1個、または2個がNであり;
Y1およびY2は、独立にCHおよびNから選択され;
Y3は、CまたはNであり;
Y4は、CR6、NまたはNHであり;
ここで、Y1、Y2、Y3、およびY4の1個、または2個がNであり;
R1、R2およびR3は、独立に、H、F、Cl、−NH2、−NHCH3、−N(CH3)2、−OH、−OCH3、−OCH2CH3、−OCH2CH2OH、ならびに場合によりF、Cl、CN、−NH2、−NHCH3、−N(CH3)2、−OH、−OCH3、−OCH2CH3、および−OCH2CH2OHで置換されたC1−C3アルキルから選択され;
R4は、H、F、Cl、CN、−CH2OH、−CH(CH3)OH、−C(CH3)2OH、−CH(CF3)OH、−CH2F、−CHF2、−CH2CHF2、−CF3、−C(O)NH2、−C(O)NHCH3、−C(O)N(CH3)2、−NH2、−NHCH3、−N(CH3)2、−NHC(O)CH3、−OH、−OCH3、−OCH2CH3、−OCH2CH2OH、シクロプロピル、シクロプロピルメチル、1−ヒドロキシシクロプロピル、イミダゾリル、ピラゾリル、3−ヒドロキシ−オキセタン−3−イル、オキセタン−3−イル、およびアゼチジン−1−イルから選択され;
R5は、−CH3、−CH2CH3、−CH2OH、−CH2F、−CHF2、−CF3、−CN、および−CH2CH2OHから選択されるか;
あるいは、2つのR5基は、3員、4員、5員、もしくは6員の炭素環または複素環を形成し;
あるいは、R5基およびR8基は、3員、4員、5員、もしくは6員の炭素環または複素環を形成し;
nは、0、1、2、3、または4であり;
R6は、H、Cl、−CH3、−CH2CH3、−CH2CH2OH、−CH2F、−CHF2、−CF3、−NH2、−NHCH3、−N(CH3)2、−OH、−OCH3、−OCH2CH3、および−OCH2CH2OHから選択され;
R7は、以下の構造:
(式中、波線は結合部位を示す)から選択され;
R8は、H、−CH3、−S(O)2CH3、シクロプロピル、アゼチジン−3−イル、オキセタン−3−イル、およびモルホリン−4−イルから選択され;
Zは、CR9またはNであり;ここで、R9は、H、F、Cl、−CH3、−CH2CH3、−CH2CH2OH、−NH2、−NHCH3、−N(CH3)2、−OH、−OCH3、−OCH2CH3、および−OCH2CH2OHから選択される。
式Iの化合物の酵素活性(またはその他の生物活性)の阻害剤としての相対効果は、各々の化合物が予め定めた程度まで活性を阻害する濃度を求めることおよび次にその結果を比較することによって確立することができる。一般に、好ましい定量は、生化学アッセイにおいて活性の50%を阻害する濃度、すなわち50%阻害濃度または「IC50」である。IC50値の定量は、当技術分野で公知の従来技法を用いて達成することができる。一般に、IC50は、一連の濃度の研究中の阻害剤の存在下で所与酵素の活性を測定することにより定量され得る。次に、実験によって得た酵素活性の値を、使用した阻害剤濃度に対してプロットする。50%酵素活性(阻害剤の不在下の活性と比較)を示す阻害剤の濃度を、IC50値とする。同様に、その他の阻害濃度は、活性を適切に定量することによって決定することができる。例として、一部の設定では、90%阻害濃度、すなわちIC90などを確立することが望ましいことがある。
本発明の化合物は、治療される状態に適切などんな経路によって投与されてもよい。適した経路としては、経口、非経口(皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、皮内、くも膜下腔内および硬膜外を含む)、経皮、直腸、鼻腔、局所(口内および舌下を含む)、膣内、腹腔内、肺内および鼻腔内が挙げられる。局所免疫抑制治療には、化合物は、病巣内投与によって投与されてよく、それには灌流またはあるいは移植前に移植片と抑制剤とを接触させることが含まれる。好ましい経路が、例として、レシピエントの状態によって変動する可能性のあることは、当然理解される。化合物が経口投与される場合には、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤とともに、丸剤、カプセル剤、錠剤などとして処方されてよい。化合物が非経口投与される場合には、それは、薬学的に許容可能な非経口ビヒクルとともに、かつ、下に詳述されるように、単位用量で注射可能な形態に処方されてよい。
本発明の式Iの化合物は、Btkキナーゼに関連する細胞の異常な増殖、機能または行動から起こり、よって上に定義されるような本発明の化合物のそれへの投与を含む方法によって治療され得る疾患または障害、例えば、免疫障害、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝/内分泌障害または神経疾患などに罹患しているヒトまたは動物患者を治療するために有用である。癌に罹患しているヒトまたは動物患者も、上に定義されるような本発明の化合物のそれへの投与を含む方法によって治療され得る。患者の状態を、それによって改善または回復することができる。
本発明の化合物は、ヒトを含む哺乳動物の治療的処置に使用するために、通常、標準的な薬務に従って薬学的組成物として製剤化される。本発明のこの態様によれば、本発明の化合物を、薬学的に許容可能な希釈剤または担体とともに含む薬学的組成物が提供される。
式Iの化合物は、単独で、あるいは、本明細書に記載される疾患または障害、例えば炎症または過剰増殖性障害(例、癌)の治療のためのその他の治療薬と組み合わせて用いることができる。ある種の実施態様では、式Iの化合物は、医薬組合せ製剤または併用療法としての投薬計画において、抗炎症性または抗過剰増殖性を有するか、あるいは炎症、免疫応答障害、または過剰増殖性障害(例、癌)を治療するのに有用な、追加の第2の治療化合物と組み合わされる。この追加の治療薬は、抗炎症薬、免疫調節薬、化学療法薬、アポトーシス−エンハンサー、神経栄養因子、心血管疾患を治療するための薬剤、肝疾患を治療するための薬剤、抗ウイルス薬、血液疾患を治療するための薬剤、糖尿病を治療するための薬剤、および免疫不全障害を治療するための薬剤であってよい。この第2の治療薬は、NSAID抗炎症薬であってよい。この第2の治療薬は、化学療法薬であってよい。医薬組合せ製剤または投薬計画のこの第2の化合物は、好ましくはそれらが相互に有害な影響を及ぼさないように、式Iの化合物に相補的な活性を有する。そのような化合物は、意図する目的に効果的な量で組合せ製剤中に適切に存在する。一実施態様では、本発明の組成物は、式Iの化合物、あるいはその立体異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝物、または薬学的に許容可能な塩もしくはプロドラッグを、NSAIDなどの治療薬と組み合わせて含む。
また、本発明の範囲内には、本明細書に記載される式Iのインビボ代謝産物が含まれる。そのような産物は、例として、投与された化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、脱アミド化、エステル化、エステル分解、酵素的開裂等々から生じることがある。したがって、本発明には、その代謝産物を生じるのに十分な時間、本発明の化合物と哺乳動物とを接触させることを含むプロセスにより生じる化合物を含む、式Iの化合物の代謝物が含まれる。
本発明のもう一つの実施態様では、上記の疾患および障害の治療に有用な材料を含有する製造品、または「キット」が提供される。一実施態様では、キットは、式Iの化合物、あるいはその立体異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝物、または薬学的に許容可能な塩もしくはプロドラッグを含む容器を含む。キットは、容器上のまたは容器に付随するラベルまたは添付文書をさらに含んでよい。用語「添付文書」は、適応症、用法、用量、投与、禁忌および/またはそのような治療薬の使用上の注意についての情報が記載されている、治療薬の商用包装に慣例上封入される使用説明書をさすために用いられる。適した容器としては、例として、瓶、バイアル、シリンジ、ブリスター包装などが挙げられる。容器はガラスまたはプラスチックなどの多様な材料から形成されてよい。容器は、状態を治療するために効果的な式Iの化合物またはその製剤を保持することができ、かつ、無菌のアクセスポートを有してよい(例として、容器は皮下注射針で孔をあけることのできるストッパーを有する静脈用溶液バッグまたはバイアルであってよい)。組成物中の少なくとも1つの活性薬剤は式Iの化合物である。ラベルまたは添付文書は、組成物が選択される状態、例えば癌などを治療するために使用されることを示す。その上、ラベルまたは添付文書は、治療される患者が障害、例えば過剰増殖性障害、神経変性、心肥大、疼痛、片頭痛または神経外傷性の疾患もしくはイベントなどを有する患者であることを示してもよい。一実施態様では、ラベルまたは添付文書は、式Iの化合物を含む組成物が、異常な細胞増殖に起因する障害を治療するために使用され得ることを示す。また、ラベルまたは添付文書は、その他の障害を治療するために組成物を使用することができることを示してもよい。あるいは、または加えて、製造品は、薬学的に許容可能な緩衝液、例えば注射用静菌水(BWFI)、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液などを含む第2の容器をさらに含んでよい。それは、その他の緩衝液、希釈液、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的および使用者の見地から望ましいその他の材料をさらに含んでよい。
式Iの化合物は、特に本明細書に含まれる説明を考慮して、化学分野において周知のプロセス、および、その各々が参照により明示的に本明細書に援用される、Comprehensive Heterocyclic Chemistry II,Editors Katritzky and Rees,Elsevier,1997,e.g. volume 3;Liebigs Annalen der Chemie,(9):1910−16,(1985);Helvetica Chimica Acta,41:1052−60,(1958);Arzneimittel−Forschung,40(12):1328−31,(1990):に記載されるその他の複素環のためのプロセスに類似のプロセスを含む合成経路により合成することができる。出発物質は、通常、アルドリッチ・ケミカルズ(米国ウィスコンシン州ミルウォーキー)などの市販の供給源より入手可能であるか、または当業者に周知の方法を用いて容易に調製される(例、一般に、Louis F. Fieser and Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis,v. 1−23,Wiley,N.Y.(1967−2006ed.)またはBeilsteins Handbuch der organischen Chemie,4,Aufl. ed. Springer−Verlag,Berlin(補遺を含む)に記載される方法により調製される(また、Beilsteinオンラインデータベースからも入手可能)。
一般手順:鈴木カップリング
式Iの化合物を調製する方法では、反応生成物を相互に、かつ/または出発物質から分離することが有利であり得る。各々の工程または一連の工程の目的生成物は、当技術分野で一般的な技法によって所望の程度の均質性まで分離および/または精製される。一般にそのような分離は、多相抽出、溶媒または溶媒混合物からの結晶化、蒸留、昇華、またはクロマトグラフィーを伴う。クロマトグラフィーは、例として:逆相および順相;サイズ排除;イオン交換;高、中および低圧液体クロマトグラフィー法および装置;小規模分析用;擬似移動床(SMB)および分取薄層または厚層クロマトグラフィー、ならびに小規模薄層およびフラッシュクロマトグラフィーの技法を含むいくつかの方法を含むことができる。
3−ブロモ−5−クロロピリジン−2−アミン(10g、49mmol)およびクロロアセトアルデヒド(H2O中50%、12mL、98mmol)の、エタノール(100mL)中の混合物を、50℃で一晩加熱した。次に、それを室温まで冷却し、濃縮させた。アセトン(30mL)を残留物に添加し、得られる混合物を2時間急速に撹拌した。得られる固体を濾過により回収し、乾燥させて101aを黄色の固体として得た(10.0g、89%)。MS:[M+H]+231。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.20(s,1H),8.33(s,1H),8.29(s,1H),8.09(s,1H)
101a(2.3g、10mmol)、5−(4−メチルピペラジン−1−イル)ピリジン−2−アミン(1.9g、10mmol)、キサントホス(576mg、1.0mmol)、Pd2(dba)3(915mg、1.0mmol)およびCs2CO3(6.5g、20mmol)のジオキサン(50mL)中の混合物を、窒素下12時間、100℃で加熱した。次にそれを濾過し、真空蒸発させた。残留物を、1:1 酢酸エチル/石油エーテルで溶離するシリカゲルカラムにより精製して、101bを緑色の固体として得た(1.5g、44%)。MS:[M+H]+343。
マグネチックスターラー、凝縮器および窒素入口を装備した100mL一口丸底フラスコを窒素でパージし、4,5,6,7−テトラヒドロ−1H−インドール(3.00g、24.8mmol)、トリクロロアセチルクロライド(13.5g、74.4mmol)および1,2−ジクロロエタン(50mL)を装入した。溶液を85℃で2時間撹拌した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮し、収率100%(6.50g)の101cを黒色の半固体として得た:1H NMR(500MHz,DMSO−d6)δ 11.94(s,1H),7.05(s,1H),2.62(t,2H,J=6.0Hz),2.47(t,2H,J=6.0Hz),1.80(m,2H),1.65(m,2H);MS(ESI+)m/z 266.0(M+H)
マグネチックスターラーおよび窒素入口を装備した100mL一口丸底フラスコを窒素でパージし、101c(6.50g、24.8mmol)、ナトリウムエトキシド(17.0mg、0.25mmol)およびエタノール(40mL)を装入した。溶液を室温で1時間撹拌した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、収率100%(4.80g)の101dを褐色の固体として得た:融点70〜72℃;1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 9.08(s,1H),6.75(s,1H),4.25(q,2H,J=7.2Hz),2.65(t,2H,J=6.0Hz),2.56(t,2H,J=6.0Hz),1.85(m,4H),1.28(t,3H,J=7.2Hz);MS(ESI+)m/z 194.1(M+H)
マグネチックスターラーおよび窒素入口を装備した125mL一口丸底フラスコを窒素でパージし、101d(5.76g、29.8mmol)およびDMF(50mL)を装入した。氷浴を用いて溶液を0℃に冷却した。NaH(鉱油中60%分散体、1.43g、35.8mmol)を添加した。得られる混合物を室温で1時間撹拌した。その後、ブロモアセトニトリル(1.43g、35.8mmol)を添加した。混合物を室温で14時間撹拌した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を酢酸エチル(150mL)と水(450mL)とに分液した。有機層を分離し、水層を酢酸エチル(3×150mL)で抽出した。合した有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、収率55%(3.80g)の101eを黄色の半固体として得た:1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 6.66(s,1H),5.29(s,2H),4.28(q,2H,J=7.2Hz),2.62(t,2H,J=6.3Hz),2.49(t,2H,J=6.3Hz),1.92(m,2H),1.75(m,2H),1.33(t,3H,J=7.2Hz);MS(ESI+)m/z 233.1(M+H)
200mLパール反応器ボトルを窒素でパージし、10%パラジウム炭素(50%湿潤、乾重1.28g)、101e(3.00g、12.9mmol)、12%塩酸(6.5mL、25mmol)、酢酸エチル(60mL)およびエタノール(40mL)を装入した。ボトルにパール水添器を取り付け、排気し、水素ガスを50psiの圧力まで装入し、6時間振盪した。この後、水素を排気し、窒素をボトルの中に装入した。珪藻土濾過剤(セライト(登録商標)521、4.0g)を添加し、混合物を、セライト521のパッドを通して濾過した。濾過ケーキをエタノール(2×20mL)で洗浄し、合した濾液を減圧下で濃縮乾固した。残留物を酢酸エチル(150mL)と10%炭酸カリウム水溶液(100mL)とに分液した。有機層を分離し、水層を酢酸エチル(3×75mL)で抽出した。合した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物をエタノール(5mL)でトリチュレートして、収率71%(1.71g)の1−(2−アミノエチル)−4,5,6,7−テトラヒドロ−1H−インドール−2−カルボン酸エチル 101fを白色固体として得た:融点102〜104℃;1H NMR(500MHz,DMSO−d6)δ 6.61(s,1H),6.22(br,2H),4.15(m,4H),2.77(m,2H),2.59(t,2H,J=6.5Hz),2.42(t,2H,J=6.5Hz),1.70(m,2H),1.62(m,2H),1.23(t,3H,J=7.0Hz);MS(APCI+)m/z 237.2(M+H)
マグネチックスターラーおよび窒素入口を装備した100mL一口丸底フラスコを窒素でパージし、101f(1.80g、7.63mmol)、ナトリウムエトキシド(1.55g、22.8mmol)およびエタノール(50mL)を装入した。混合物を55℃で5時間撹拌した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を酢酸エチル(200mL)と水(100mL)とに分液した。有機層を分離し、水層を酢酸エチル(2×100mL)で抽出した。合した有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、収率42%(605mg)の101gを白色固体として得た:融点207〜209℃;1H NMR(500MHz,DMSO−d6)δ 7.41(s,1H),6.36(s,1H),3.84(t,2H,J=6.0Hz),3.42(m,2H),2.51(t,2H,J=6.0Hz),2.42(t,2H,J=6.0Hz),1.76(m,2H),1.65(m,2H);(APCI+)m/z 191.3(M+H)
1,3−ジブロモ−5−フルオロ−2−ヨードベンゼン(50g、132mmol)の−35℃で冷却した無水トルエン(300mL)中の溶液に、イソプロピルマグネシウムクロライド(84mL、171mmol、Et2O中2.0M)の溶液を、内部温度を−25℃よりも低く維持しながら30分にわたって添加した。透明な褐色の溶液が得られ、撹拌を1.5時間−25℃で継続した。次に、無水DMF(34mL、436mmol)を、30分の時間にわたり添加した。反応混合物を10℃(室温)まで1時間にわたって温め、この温度で1.5時間撹拌した。次にそれを3.0M HClでクエンチし、それに続いて酢酸エチルを添加した。有機層を分離し、減圧下で蒸発させた。残留物を、石油エーテル/酢酸エチル(50:1〜20:1)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、101hを白色固体として得た(20g、54%)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 10.23(s,1H),7.48(d,J=7.5,2H)
101h(20g、71mmol)のEtOH(500mL)中の溶液に、NaBH4(10g、284mmol)を添加した。混合物を室温(10℃)で4時間撹拌し、TLCは、出発材料が消失したことを示した。反応をHCl水溶液(150mL、1M)によってクエンチし、大部分のEtOHが蒸留されるまで真空蒸発させた。残留物を酢酸エチルによって抽出した(500mL×3)。有機層を合し、Na2SO4で乾燥させ、真空蒸発させた。残留物を、石油エーテル/酢酸エチル(50:1〜20:1)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、101iを白色固体として得た(15g、75%)。MS:[M−OH]+267。1H NMR(500MHz,DMSO−d6)δ 7.68(d,J=8.5,2H),5.23(s,1H),4.71(s,2H)
101i(20g、71mmol)の0℃のCH2Cl2(500mL)中の溶液に、ピリジン(8.4g、107mmol)および塩化アセチル(8.3g、107mmol)を添加した。混合物を室温で5時間撹拌した。TLCは、出発材料が消失したことを示した。反応を真空で蒸発させ、残留物を石油エーテル/酢酸エチル(50:1〜20:1)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、101jを白色固体として得た(20g、87%)。MS:[M−Oac]+267。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.36(d,J=7.5,2H),5.38(s,2H),2.10(s,3H)
マグネチックスターラーを装備した250mL一口丸底フラスコに、101g(3.8g、20mmol)、101j(20g、60mmol)、キサントホス(1.2g、2mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(1.8g、2mmol)、Cs2CO3(16g、50mmol)、および1,4−ジオキサン(120mL)を装入した。系を排気した後、N2を再び充満させた。還流冷却器をフラスコに取り付け、反応混合物を100℃で16時間加熱した。次に、混合物を室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる残留物を5:1石油エーテル/酢酸エチルで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、101kを白色固体として得た(5.2g、60%)。MS:[M+H]+435。1H NMR(500MHz,DMSO−d6)δ 7.70(dd,J=3,1H),7.48(dd,J=3,1H),6.52(s,1H),5.01(m,2H),4.18(m,2H),4.02(m,1H),3.73(m,1H),2.60(m,2H),2.45(m,2H),1.98(s,3H),1.77(m,2H),1.68(m,2H)
マグネチックスターラーを装備した250mL一口丸底フラスコに、101k(3.8g、8.65mmol)、(PinB)2(11g、43.25mmol)、Pd(dppf)Cl2(0.4g、0.5mmol)、KOAc(2.5g、26mmol)、および1,4−ジオキサン(150mL)を装入した。系を排気した後、N2を再び充満させた。還流冷却器をフラスコに取り付け、反応混合物を100℃で15時間加熱した。次に、混合物を室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる残留物を5:1石油エーテル/酢酸エチルで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、101lを黄色の固体として得た(3.2g、77%)。MS:[M+H]+483。
25mLの密封管に、101b(300mg、0.88mmol)、101l(423mg、0.88mmol)、Cs2CO3(572mg、1.76mmol)、CH3CN(25mL)に懸濁されたPd2(dba)3(80mg、0.09mmol)、およびH2O(1mL)を装入した。混合物を、マイクロ波照射下で1時間、140℃で加熱した。次にそれを蒸発させ、残留物を、10:1 塩化メチレン/メタノールで溶離するシリカゲルカラムにより精製して粗生成物を得、それを1:4 水/CH3CN中、0.3%のNH4HCO3で溶離する逆相Combi−flashによりさらに精製して、101を黄色の固体として得た(150mg、28%)。MS:(M+H)+621。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.94(s,1H),8.27(d,J=1.5,1H),8.16(d,J=1.5,1H),7.96(d,J=1.0,1H),7.91(d,J=2.5,1H),7.58(d,J=1.5,1H),7.33−7.42(m,3H),7.25−7.28(m,1H),6.53(s,1H),4.88(t,J=4.5,1H),4.30(d,J=4.5,2H),4.12−4.20(m,3H),3.90−3.92(m,1H),3.06(t,J=4.5,4H),2.53−2.65(m,2H),2.43−2.48(m,6H),2.21(s,3H),1.76−1.81(m,2H),1.67−1.71(m,2H)
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した250mL一口丸底フラスコに、1,4−ジオキサン(60mL)、4−(6−アミノピリジン−3−イル)ピペラジン−1−カルボン酸tert−ブチル(1.5g、5.39mmol)、8−ブロモ−6−クロロイミダゾ[1,2−a]ピリジン 101a(3.7g、16.18mmol)、および炭酸セシウム(3.52g、10.79mmol)を装入した。キサントホス(312mg、0.539mmol)およびPd2(dba)3(494mg、0.539mmol)を添加し、反応混合物を窒素下5時間、100℃で加熱した。この後、反応を室温まで冷却した。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残留物を、100:1CH2Cl2/MeOHで溶離するフラッシュカラムで精製して、102a(1.8g、78%)を得た。MS:[M+H]+429。
化合物102a(1.75g、4.08mmol)を、4.0M HCl/ジオキサン(10mL)に懸濁し、室温で5時間撹拌した。次にそれを減圧下で濃縮して、102b(1.2g、81%)を得た。MS:[M+H]+329。
102b(0.773g、1.75mmol)、オキセタン−3−オン(0.189g、2.62mmol)、NaBH3CN(0.22g、3.5mmol)、および塩化亜鉛/Et2O(3.5ml、3.5mmol)のメタノール(40mL)中の混合物を、50〜60℃で5時間撹拌した。固体を濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮した。残留物を、5:1CH2Cl2/メタノールで溶離するカラムクロマトグラフィーにより精製して、102c(200mg、30%)を得た。MS:[M+H]+385。
102c(180mg、0.468mol)のジオキサン/H2O(12mL/1mL)中溶液に、2−(5−フルオロ−2−(ヒドロキシメチル)−3−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)フェニル)−3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−1(2H)−オン 101l(225mg,0.468mmol)、Pd2(dba)3(43mg、0.0468mmol)、トリシクロヘキシルホスフィン(131mg、0.468mmol)、およびCs2CO3(305mg、0.935mmol)を添加した。この混合物をマイクロ波中で140℃で1時間加熱した。次に、固体を濾過し、濾液を濃縮して、黄色の固体を得、それを逆相分取HPLCによりさらに精製して、102を白色固体として得た(36mg、11%)。LCMS:[M+H]+663。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.53(d,J=2.5,1H),8.27(s,1H),8.16(s,1H),7.95(s,1H),7.92−7.91(d,J=2.5,1H),7.57(s,1H),7.42−7.36(m,2H),7.36−7.33(m,1H),7.27−7.25(d,J=9,1H),6.53(s,1H),4.88−4.86(t,J=9,1H),4.57−4.54(m,2H),4.47−4.45(m,2H),4.31−4.30(d,J=4.5,2H),4.18−4.13(m,3H),3.92−3.90(m,1H),3.45−3.42(m,1H),3.09−3.10(m,4H),2.64−2.54(m,2H),2.47−2.45(m,2H),2.39−2.38(m,4H),1.79−1.78(m,2H),1.69−1.67(m,2H)
マグネチックスターラーを装備した250mL一口丸底フラスコを窒素でパージし、4,5,6,7−テトラヒドロベンゾ[b]チオフェン−2−カルボン酸(3.00g、16.5mmol)、塩化メチレン(80mL)、およびDMF(60mg、0.825mmol)を装入し、0℃に冷却した。得られる溶液に、塩化オキサリル(2.31g、18.2mmol)を滴下した。この添加が完了した後、反応を室温まで温め、2時間撹拌した。この後、反応を減圧下で濃縮乾固した。得られる白色の固体を塩化メチレン(80mL)に溶解し、溶液を0℃に冷却した。トリエチルアミン(5.00g、49.5mmol)およびN,O−ジメチルヒドロキシルアミン(1.61g、16.5mmol)を次に添加した。添加が完了した後、冷却浴を除去し、反応混合物を室温で16時間撹拌した。この後、反応混合物を、水(100mL)と酢酸エチル(200mL)とに分液した。層を分離し、水相を酢酸エチル(100mL)で抽出した。合した有機抽出物を水(100mL)、それに続いてブライン(100mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾過により除去し、溶媒を減圧下で蒸発させた。得られる残留物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、収率88%の103a(3.29g)を白色固体として得た:融点36〜37℃;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.79(s,1H),3.76(s,3H),3.34(s,3H),2.78(t,2H,J=6.0Hz),2.62(t,2H,J=6.0Hz),1.82(m,4H);MS(APCI+)m/z 226.3(M+H)
マグネチックスターラーを装備した100mL一口丸底フラスコを窒素でパージし、103a(2.70g、12.0mmol)および無水THF(45mL)を装入し、溶液をアセトン/氷浴で−10℃まで冷却した。THF中ビニルマグネシウムブロミドの1.0M溶液(13.2mL、13.2mmol)を滴下し、得られる反応混合物を、0℃で4時間撹拌した。この後、反応混合物を、酢酸エチル(100mL)と2M塩酸水溶液(40mL)とに分液した。層を分離し、水相を酢酸エチル(40mL)で抽出した。合した有機抽出物を、水(100mL)、それに続いてブライン(100mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。得られる残留物を塩化メチレン(30mL)に溶解し、塩化水素のジエチルエーテル中2M溶液(15mL)を添加した。室温で1時間撹拌した後、溶媒を減圧下で除去した。得られる残留物のカラムクロマトグラフィーによる精製により、収率29%(804mg)の103bを灰白色固体として得た:融点57〜58℃;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.41(s,1H),3.89(t,2H,J=7.0Hz),3.30(t,2H,J=7.0Hz),2.81(t,2H,J=6.0Hz),2.64(t,2H,J=6.0Hz),1.83(m,4H);MS(ECI+)m/z 229.1(M+H)
マグネチックスターラーを装備した50mL一口丸底フラスコに、103b(800mg、3.51mmol)および98%硫酸(8mL)を装入した。95℃で16時間撹拌した後、反応混合物を氷(50g)の中に注ぎ、得られる懸濁液を酢酸エチル(3×50mL)で抽出した。有機抽出物を合し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。得られる残留物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、103cを収率47%(320mg)で灰白色固体として得た:融点75〜76℃;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 2.89(m,2H),2.87−2.83(m,4H),2.56(t,2H,J=6.5Hz),1.84(m,4H)
機械撹拌機および窒素入口を装備した100mL一口丸底フラスコに、ヒドロキシルアミン塩酸塩(573mg、8.25mmol)およびメタノール(10mL)を装入した。混合物を氷浴を用いて0℃まで冷却した。酢酸ナトリウム(677mg、8.25mmol)を添加した。混合物を0℃で30分間撹拌した。この後、103c(319mg、1.65mmol)を添加し、反応を室温で16時間撹拌した。この後、混合物を濃縮し、得られる残留物を、水(10mL)でトリチュレートした。得られる固体を回収し、45℃の真空炉で乾燥させて、収率84%(287mg)の103dを灰白色固体として得た:融点173〜174℃;1H NMR(500MHz,DMSO−d6)δ 10.38(s,1H),2.97(m,2H),2.77−2.73(m,4H),2.47(m,2H),1.75(m,4H);MS(APCI+)m/z 208.3(M+H)
還流冷却器、マグネチックスターラーおよび窒素入口を装備した50mL一口丸底フラスコに、103d(285mg、1.38mmol)およびポリリン酸(15g)を装入した。80℃で16時間撹拌した後、反応混合物を室温まで冷却し、水(30mL)を添加した。得られる混合物を30分間撹拌し、濾過した。濾過ケーキを水(20mL)で洗浄し、45℃の真空炉で乾燥させて、収率75%(215mg)の103eを灰白色固体として得た:融点203℃;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 5.62(s,1H),3.59(t,2H,J=7.0Hz),2.81(t,2H,J=6.0Hz),2.72(t,2H,J=7.0Hz),2.48(t,2H,J=6.0Hz),1.84(m,4H). MS(APCI+)m/z 208.3(M+H)
103e(3g、14.5mmol)、2,6−ジブロモ−4−フルオロベンジルアセテート 101j(14g、43.5mmol)、キサントホス(839mg、1.45mmol)、Pd2(dba)3(1.33g、1.45mmol)およびCs2CO3(9.4g、29mmol)のジオキサン(200mL)中の溶液を、窒素下15時間、100℃で加熱した。濾過後、濾液を真空蒸発させ、酢酸エチル/石油エーテル(1:1)で溶離するフラッシュカラムにより精製して、103f(5g、収率77%)を黄色の固体として得た。LCMS:(M+H)+452。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 7.71(dd,J=2.5,1H),7.51(dd,J=3,1H),5.04(m,1H),4.10(m,1H),3.68(m,1H),2.86(m,2H),2.77(m,2H),2.55(m,3H),1.98(s,3H),1.78(m,4H)
103f(3g、6.65mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’−オクタメチル−2,2’−ビス(1,3,2−ジオキサ−ボロラン)(10g、40mmol)のジオキサン(160mL)中の溶液に、PdCl2(dppf)(543mg、0.66mmol)およびCH3COOK(3.9g、40mmol)を添加した。混合物を、100℃で15時間アルゴン雰囲気下で撹拌した。混合物を濾過し、真空蒸発させ、酢酸エチル/石油エーテル(1:2)で溶離するフラッシュカラムにより精製して、103g(2.5g、収率76%)を黄色の固体として得た。LCMS:(M+H)+500
化合物101について記載される手順に従って、103g(499mg、1.0mmol)と、6−クロロ−N−(5−(4−メチルピペラジン−1−イル)ピリジン−2−イル)イミダゾ[1,2−a]ピリジン−8−アミン 101b(342mg、1.0mmol)を反応させて103を白色固体として得た(220mg、35%)。LCMS:[M+H]+638。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.22(s,2H),7.96(d,J=2.5,1H),7.83(s,1H),7.63(d,J=1.0,1H),7.57(d,J=1.0,1H),7.30(dd,J=3.0,9.0,1H),7.24(dd,J=2.5,9.0,1H),7.03(dd,J=3.0,9.0,1H),6.92(d,J=8.5,1H),4.57(d,J=11.5,1H),4.35(t,J=8.5,1H),4.21(s,1H),4.09−4.15(m,1H),3.87−3.92(m,1H),3.16(t,J=5.0,4H),2.85−3.02(m,4H),2.60(t,J=5.0,4H),2.51−2.57(m,2H),2.37(s,3H),1.85−1.95(m,4H)
4−ブロモ−6−クロロピリダジン−3−アミン(5.0g、24mmol)および2−クロロアセトアルデヒド(12g、75mmol)のエタノール(100mL)溶液を15時間加熱還流した。反応混合物を濃縮し、アセトン(75mL)で洗浄して、104aを黄色の固体として得た(6.0g、71%)。MS:[M+H]+234。
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した100mL一口丸底フラスコに、104a(2.0g、4mmol)、5−(4−メチルピペラジン−1−イル)ピリジン−2−アミン(920mg、4.8mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(366mg、0.4mmol)、キサントホス(688mg、1.2mmol)、Cs2CO3(2.6g、8.0mmol)、および1,4−ジオキサン(60mL)を装入した。3サイクルの真空/アルゴンフラッシュの後、混合物を15時間加熱還流した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる残留物を、ジクロロメタン/メタノール(20:1)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、104bを黄色の固体として得た(1.4g、70%)。MS:[M+H]+344。
密封管に、104b(340mg、0.8mmol)、4−フルオロ−2−(1−オキソ−3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−2(1H)−イル)−6−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)ベンジルアセテート 101l(400mg、0.8mmol)、Pd2(dba)3(72mg、0.1当量、0.08mmol)、PCy3(68mg、0.3当量、0.24mmol)、炭酸セシウム(520mg、2当量、1.6mmol)、ジオキサン(15mL)、および水(1mL)を装入した。3サイクルの真空/アルゴンフラッシュ後、混合物を130℃で14時間加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる残留物を、ジクロロメタン/−メタノール(20:1)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、104(100mg、16%)を得た。LCMS:[M+H]+622。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.95(s,1H),8.23(s,1H),8.16(s,1H),8.00(d,J=2.0,1H),7.67(s,1H),7.43−7.46(m,3H),7.34−7.36(m,1H),6.52(s,1H),4.67(t,J=5.0,1H),4.34−4.41(m,2H),4.13−4.18(m,3H),3.87−3.88(m,1H),3.10−3.12(m,4H),2.57−2.61(m,2H),2.43−2.47(m,6H),2.21(s,3H),1.77−1.79(m,2H),1.68−1.69(m,2H)
化合物104bについて記載される手順に従って、8−ブロモ−6−クロロイミダゾ[1,2−b]ピリダジン 104a(233mg、1.0mmol)、および5−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)ピリジン−2−アミン(234mg、1.0mmol)を反応させて、105aを白色固体として得た(296mg、77%)。LCMS:[M+H]+386。
化合物104について記載される手順に従って、105a(385mg、1.0mmol)および4−フルオロ−2−(1−オキソ−3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−2(1H)−イル)−6−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)ベンジルアセテート 101lの鈴木反応により、105を黄色の固体として得た(60mg、9%)。LCMS:[M+H]+664。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 10.04(d,J=4.0,1H),8.26(s,1H),8.18(s,1H),8.10−8.13(m,1H),7.70(s,1H),7.44−7.55(m,3H),7.34−7.36(m,1H),6.52(s,1H),4.84(s,1H),4.66−4.72(m,3H),4.33−4.43(m,2H),4.11−4.19(m,3H),3.86−3.89(m,2H),3.49−3.51(m,2H),3.03−3.14(m,4H),2.57−2.63(m,3H),2.45−2.47(m,4H),1.77−1.80(m,2H),1.68−1.69(m,2H)
6,8−ジブロモイミダゾ[1,2−a]ピラジン(1.2g、4.3mmol)、ジ−イソプロピルエチルアミン(1.1g、8mmol)、および4−(6−アミノピリジン−3−イル)ピペラジン−1−カルボン酸tert−ブチル(1g、3.5mmol)のIPA(20mL)中の混合物を、マイクロ波照射下で1.5時間、130℃で撹拌した。得られる懸濁液を濾過し、固体を水で洗浄し、真空で乾燥させて粗生成物を得、それをCH2Cl2/MeOH(50:1)で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーによってさらに精製して、106aを白色固体として得た(800mg、50%)。MS:[M+H]+474。
106a(260mg、0.5mmol)のCH2Cl2(3mL)中の混合物に、TFA(0.5mL)を添加し、反応混合物を、25℃で2時間撹拌した。反応溶液を濃縮して、106bを淡黄色の液体として次の工程のための精製を行わずに得た(210mg、97%)。MS:[M+H]+374。
106b(210mg、0.52mmol)、ホルムアルデヒド(150mg、5mmol)、およびNaBH3CN(220mg、3.5mmol)のメタノール(8mL)中の混合物を、20℃で3時間撹拌した。固体を濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮した。残留物を、CH2Cl2/メタノール(20:1)で溶離するカラムクロマトグラフィーにより精製して、106c(200mg、90%)を得た。MS:[M+H]+388。
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した250mL一口丸底フラスコに、1,4−ジオキサン(60mL)、106c(200mg、0.5mmol)、4−フルオロ−2−(1−オキソ−3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−2(1H)−イル)−6−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)ベンジルアセテート 101l(385mg、0.8mmol)、および炭酸セシウム(332mg、1mmol)を装入した。キサントホス(30mg、0.08mmol)およびPd2(dba)3(55mg、0.08mmol)を添加し、反応混合物を90℃で4時間加熱した。この後、反応を室温まで冷却し、それを濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残留物を、CH2Cl2/MeOH(10:1)で溶離するフラッシュカラムで精製して、106d(200mg、60%)を得た。MS:[M+H]+664。
106d(200mg、0.92mmol)およびLiOH(300mg、10mmol)のiPrOH/THF(1:1、3.5mL)およびH2O(1mL)中の混合物を、50℃で0.5時間撹拌した。混合物を真空蒸発させ、残留物を酢酸エチル(10mL×2)で抽出した。合した酢酸エチル抽出物を減圧下で濃縮し、残留物を逆相分取HPLCによって精製して、106(45mg、20%)を得た。LCMS:[M+H]+622。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.04(s,1H),8.41(s,1H),8.13−8.10(m,2H),7.98(s,1H),7.71(s,1H),7.47−7.44(m,2H),7.39−7.37(m,1H),6.53(s,1H),5.38−5.36(m,1H),4.37−4.44(m,2H),4.19−3.98(m,4H),3.12(s,4H),2.60−2.58(m,2H),2.50− 2.45(m,6H),2.21(s,3H),1.79−1.68(m,2H),1.69−1.67(m,2H)
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した250mL一口丸底フラスコに、CH3CN(5mL)およびH2O(1.5mL)中の、1、4−ジオキサン(60mL)、6−ブロモ−N−(5−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)ピリジン−2−イル)イミダゾ[1,2−a]ピラジン−8−アミン(130mg、0.3mmol)、4−フルオロ−2−(1−オキソ−3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−2(1H)−イル)−6−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)ベンジルアセテート 101l(146mg、0.3mmol)、PdCl2(dppf)(25mg、0.03mmol)、K3PO4(138mg、0.6mmol)、およびNaOAc(48mg、0.6mmol)を装入した。系を排気し、N2を再び充満させた。反応混合物を100℃で2時間加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる残留物を、10:1CH2Cl2/MeOHで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、107a(150mg、70%)を褐色の固体として得た。MS:[M+H]+706.4。
100mL一口丸底フラスコに、THF/iPA/H2O(5mL/5mL/2mL)およびLiOH(85mg、3.5mmol)中の、107a(150mg、0.21mol)を撹拌しながら装入した。この混合物を、50℃で0.5時間撹拌した。次に、20mL H2Oを添加し、混合物をEA(30mL×3)で抽出した。合した有機層をNa2SO4で乾燥させ、濃縮して黄色の固体を得、それを逆相分取HPLCによりさらに精製して、107を白色固体として得た(74mg、収率52%)。LCMS:[M+H]+664.3。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.06(s,1H),8.41(s,1H),8.13−8.10(m,2H),7.98(d,J= 2.5,1H),7.71(s,1H),7.48−7.44(m,2H),7.39−7.36(m,1H),6.54(s,1H),5.38(m,1H),4.57−4.35(m,6H),4.18−4.13(m,4H),3.44−3.42(m,1H),3.15(s,4H),2.59(d,J=3.0,2H),2.47−2.40(m,6H),1.79−1.69(m,4H)
3−ブロモ−5−クロロピリジン−2−アミン(10g、0.05mol)およびジメトキシ−N,N−ジメチルメタナミン(7g、0.06mmol)の混合物を、100℃で1時間撹拌した。混合物を水に注入した後、酢酸エチル(20mL×4)で抽出した。合した有機層を減圧下で濃縮し、残留物を酢酸エチル/PE(1:2)で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、108a(10g、77%)を得た。LCMS:[M+H]+262。
108a(2g、10mmol)およびヒドロキシルアミン塩酸塩(1.4g、20mmol)のMeOH(10mL)中の混合物を、100℃で0.5時間撹拌した。混合物を酢酸エチル(20mL×4)で抽出し、合した有機相を水で洗浄した。次にそれを減圧下で濃縮して108b(2g、80%)を得、それをさらなる精製を行わずに次の工程で使用した。LCMS:[M+H]+250。
108b(500mg、2mmol)およびPPA(1.4g、20mmol)の混合物を、100℃で4時間撹拌した。次に、混合物を酢酸エチル(20mL×4)で抽出し、合した有機相を水で洗浄した。それを減圧下で濃縮して108c(250mg、50%)を得、それをさらなる精製を行わずに次の工程で使用した。LCMS:[M+H]+250。
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した25mL一口丸底フラスコに、1,4−ジオキサン(8mL)、108c(250mg、1.07mmol)、5−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)ピリジン−2−アミン(252mg、1mmol)、および炭酸セシウム(700mg、2mmol)を装入した。キサントホス(30mg、0.08mmol)およびPd2(dba)3(55mg、0.08mmol)を添加し、反応混合物を105℃で3時間加熱した。この後、反応を室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残留物を、CH2Cl2/MeOH(20:1)で溶離するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、108d(250mg、60%)を得た。MS:[M+H]+386。
4−フルオロ−2−(1−オキソ−3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−2(1H)−イル)−6−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)ベンジルアセテート 101l(165mg、0.38mmol)、108d(140mg、0.38mmol)、PdCl2(dppf)(41mg、0.056mmol)、K3PO4(100mg)、およびNaOAc(50mg)のMeCN(10mL)およびH2O(3mL)中の混合物を、密封管中で2時間110℃で加熱した。溶媒を真空蒸発させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、108e(250mg、60%)を得た。MS:[M+H]+706。
108e(250mg、0.35mmol)およびLiOH(300mg、10mmol)のiPrOH/THF(1:1、3.5mL)およびH2O(1mL)中の混合物を、50℃で0.5時間撹拌した。混合物を真空蒸発させ、残留物を酢酸エチル(5mL×2)で抽出した。合した酢酸エチル抽出物を減圧下で濃縮し、残留物を逆相分取HPLCによって精製して、108(110mg、25%)を得た。LCMS:[M+H]+664。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.33(s,1H),8.67(s,1H),8.55−8.54(m,2H),7.95(d,J =3.0,1H),7.44−7.41(m,2H),7.37−7.33(m,2H),6.53(s,1H),4.98(t,J=5.0,1H),4.55−4.54(m,2H),4.45−4.44(m,2H),4.13−4.32(m,5H),3.91(s,1H),3.43−3.41(m,1H),3.10(s,4H),2.60−2.38(m,8H),1.78−1.76(m,2H),1.69−1.67(m,2H)
4−クロロ−2−ニトロベンゼンアミン(5.1g、30mmol)およびN−ブロモ−スクシンイミド(6.2g、36mmol)のアセトニトリル(50mL)中の混合物を一晩加熱還流した。それを室温まで冷却し、酢酸エチル(50mL)で希釈した。混合物を飽和K2CO3水溶液(100mL×2)で洗浄した。有機相を分離し、無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて、109aを黄色の固体として得た(8.1g、100%)。LCMS:[M+H]+253。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.17(d,J=2.5Hz,1H),7.71(d,J=2.5Hz,1H),6.64(s,2H)
109a(5.0g、20mmol)の酢酸エチル(100mL)中の溶液に、SnCl2.2H2O(22.6g、100mmol)を添加した。反応を2時間加熱還流した。室温まで冷却した後、反応混合物をNa2CO3水溶液(200mL)の中に注ぎ、混合物を酢酸エチル(200mL×3)で抽出した。合した有機相を無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて、109bを暗赤色の液体として得た(4.3g、97%)。LCMS:[M+H]+223。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 6.97(d,J=2.5Hz,1H),6.65(d,J=2.5Hz,1H),3.67(bs,4H)
109b(4.3g、19.5mmol)のギ酸(10mL)中の混合物を、80℃で1時間加熱した。室温まで冷却した後、反応混合物をNa2CO3水溶液(30mL)の中に注ぎ、混合物を酢酸エチル(30mL×3)で抽出した。合した有機相を無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて、109cを褐色の固体として得た(3.5g、77%)。LCMS:[M+H]+233。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 10.05(bs,1H),8.18(s,1H),7.64(bs,1H),7.50(s,1H)
109c(3.5g、15mmol)のN,N−ジメチルホルムアミド(30mL)中の溶液に、炭酸カリウム(4.14g、30mmol)およびヨードメタン(1.4mL、22.7mmol)を添加した。反応を室温で一晩撹拌した。水(50mL)を添加して反応をクエンチし、得られる混合物を酢酸エチル(5mL×3)で抽出した。合した有機相を無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残留物を、石油エーテル/酢酸エチル(4:1〜1:2)で溶離するカラムクロマトグラフィーにより精製して、109dを白色固体として得た(1.4g、38%)。LCMS:[M+H]+245/247。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.89(s,1H),7.46(d,J=2.0Hz,1H),7.32(d,J=2.0Hz,1H),3.81(s,3H)。
マグネチックスターラーを装備したマイクロ波バイアルに、109d(486mg、2.0mmol)、5−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)ピリジン−2−アミン(390mg 1.67mmol)、炭酸セシウム(1.09g、3.34mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(152mg、0.167mmol)およびキサントホス(193mg、0.334mmol)を装入した。懸濁液に5分間窒素を通気させた後、反応を一晩120℃で加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残留物を石油エーテル/酢酸エチル(15mL、2:1)の混合物で洗浄して、109eを黄色の固体として得た(720mg、100%)。LCMS:[M+H]+399.3。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.20(d,J=2.0,1H),8.04(d,J=2.5,1H),7.72(s,1H),7.61(s,1H),7.28−7.29(m,1H),6.90−6.91(m,2H),4.70−4.71(m,4H),3.77(s,3H),3.70−3.71(m,1H),3.17(t,J=5.0,4H),2.52(t,J=5.0,4H)
マグネチックスターラーを装備したマイクロ波バイアルに、109e(300mg、0.75mmol)、4−フルオロ−2−(1−オキソ−3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−2(1H)−イル)−6−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)ベンジルアセテート 101l(545mg、1.13mmol)、炭酸カリウム(414mg、3.0mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(68mg、0.075mmol)、およびトリシクロヘキシルホスフィン(210mg、0.75mmol)を装入した。懸濁液に5分間窒素を通気させた後、反応を110℃で一晩加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残留物を逆相分取HPLCにより精製して、 109を白色固体として得た(71mg、14%)。LCMS:[M+H]+677.3。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.64(s,1H),8.23(d,J=1.0,1H),8.18(s,1H),7.88(d,J=2.5,1H),7.38−7.39(m,1H),7.33−7.35(m,1H),7.24(d,J=9.0,1H),7.18−7.19(m,2H),6.52(s,1H),4.85(bs,1H),4.56(t,J=6.0,2H),4.46(t,J=6.0,2H),4.29(s,2H),4.16−4.18(m,3H),3.93−3.94(m,1H),3.84(s,3H),3.44−3.45(m,1H),3.07(t,J=4.0,4H),2.61−2.62(m,2H),2.47(t,J=6.0,2H),2.39(t,J=4.0,4H),1.79−1.80(m,2H),1.70−1.71(m,2H)
以下の2つの手順を、Organic Preparations and Procedures Int.,29(4),471−498から採用した。マグネチックスターラーおよび窒素入口を装備した500mL一口丸底フラスコに、ベンゼン(240mL)中2−クロロ−4,4−ジメチルシクロペンタ−1−エンカルバルデヒド(38g、240mmol)を装入した。この溶液に、エトキシカルボニルメチレントリフェニルホスホラン(84g、240mmol)を添加した。混合物を14時間撹拌した。その後、溶媒を蒸発させ、残留物を、ヘキサン(2L)でトリチュレートして、PPh3副生成物から生成物を抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空濃縮した。残留物を、100%ヘキサン−1:1 ヘキサン/酢酸エチル勾配を用いるカラムクロマトグラフィーにより精製して、収率37%(20g)の110aを得た。
マグネチックスターラーおよび窒素入口を装備した250mL一口丸底フラスコに、DMSO(100mL)中の110a(17g、74mmol)を装入した。この溶液に、アジ化ナトリウム(9.6g、150mmol)を添加した。次に、混合物を75℃まで加熱し、8時間撹拌した。室温まで冷却した後、H2O(100mL)およびCH2Cl2(200mL)を添加し、有機層を分離した。水層をCH2Cl2(50mL)で抽出した。合した有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空濃縮した。残留物を、100%ヘキサン−1:1 ヘキサン/酢酸エチル勾配を用いるカラムクロマトグラフィーにより精製して、収率37%(5.7g)の110bを得た。
マグネチックスターラーおよび窒素入口を装備した250mL一口丸底フラスコに、DMF(57mL)中の110b(6.2g、30mmol)を装入した。この溶液に、NaH(鉱油中80%分散体、1.26g、42.1mmol)を添加した。得られる混合物を、室温で90分間撹拌した。その後、ブロモアセトニトリル(2.94mL、42mmol)を添加した。混合物を14時間撹拌した。その後、水(100mL)および酢酸エチル(200mL)を添加し、有機層を分離した。水層を酢酸エチル(2×50mL)で抽出した。合した有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、収率95%(7g)の110cを得た。
500mLパール反応器ボトルを窒素でパージし、10%パラジウム炭素(50%湿潤、乾重2.0g)、110c(4.5g、18mmol)、12%塩酸(9.2mL、37mmol)、酢酸エチル(80mL)およびエタノール(52mL)を装入した。ボトルにパール水添器を取り付け、排気し、50psiの圧力まで水素ガスを充填し、6時間振盪した。この後、水素を排気し、窒素をボトルの中に装入した。セライト521(10.0g)を添加し、混合物を、セライト521のパッドを通して濾過した。濾過ケーキをエタノール(2×50mL)で洗浄し、合した濾液を減圧下で濃縮乾固した。粗残留物110dを、さらなる精製を行わずに次の工程に送った。
マグネチックスターラーおよび窒素入口を装備した100mL一口丸底フラスコを窒素でパージし、粗110d(約18mmol)、ナトリウムエトキシド(6.2g、92mmol)およびエタノール(120mL)を装入した。混合物を、55℃で一晩撹拌した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を、酢酸エチル(200mL)と水(100mL)とに分液した。溶液を濾過した。固体を酢酸エチル(15mL)で洗浄して、850mgの目的生成物110eを得た。有機層を分離し、水層を酢酸エチル(2×100mL)で抽出した。合した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下でほぼ濃縮乾固した。溶液を濾過し、固体(1.44g)を酢酸エチル(15mL)で洗浄した。合した固体を真空乾燥させて、収率61%(2.3g)の110eを得た。
密封管にマグネチックスターラーを装備し、1,4−ジオキサン(36mL)中の110e(740mg、3.6mmol)、2,6−ジブロモ−4−フルオロベンジルアセテート 101j(2.4g、7.2mmol)および炭酸セシウム(2.6g、7.9mmol)を装入した。溶液に30分間窒素を通気させた後、キサントホス(250mg、0.43mmol)およびトリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(260mg、0.29mmol)を添加し、反応混合物を16時間100℃に加熱した。この後、H2O(50mL)および酢酸エチル(50mL)を添加した。水層を分離し、酢酸エチル(2×50mL)で抽出した。合した有機抽出物をブライン(100mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。得られる残留物を、100%ヘキサン−100%酢酸エチルの勾配で溶離するカラムクロマトグラフィーにより精製して、収率56%(910mg)の110fを得た。
化合物110gは、110f(450mg、1.0mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’−オクタメチル−2,2’−ビ(1,3,2−ジオキサボロラン)(635mg、2.5mmol)、酢酸カリウム(393mg、4.0mmol)、CH2Cl2とのビス(ジフェニルホスフィノ)−フェロセン]ジクロロパラジウム(II)錯体(PdCl2dppf:CH2Cl2(1:1)、66mg、0.08mmol)および1,4−ジオキサン(20mL)を用いることを除いて、103gと同じ手順を用いて合成した。反応混合物を100℃で5時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、セライト521のパッドに通して濾過した。濾過ケーキを酢酸エチル(2×25mL)で洗浄し、合した濾液を減圧下で濃縮乾固して、110g(定量的収量)を黒色の油状物質として得、それを直接次の工程に使用した。MS(ESI+)m/z 497.3(M+H)。
6−クロロ−N−(5−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)ピリジン−2−イル)イミダゾ[1,2−a]ピリジン−8−アミン 102c(300mg、0.777mol)のジオキサン/H2O(12mL/1mL)中の懸濁液に、110g(385mg、0.777mmol)、Pd2(dba)3(70mg、0.0777mmol)、トリシクロヘキシルホスフィン(220mg、0.777mmol)、およびCsCO3(510mg,1.554mmol)を添加した。この混合物を、N2下15時間、120℃で撹拌した。次にそれを濾過し、濾液を濃縮して、黄色の固体を得、それを逆相分取HPLCによりさらに精製して、110を白色固体として得た(70mg、収率15%)。 LCMS:[M+H]+678。1H NMR(500MHz,MeOD)δ 8.29(s,1H),8.09(d,J=2.5,1H),8.05(s,1H),7.66(s,1H),7.50(dd,J=3.5,9.5,1H),7.41(dd,J=2.0,9.0,1H),7.34(dd,J=2.5,8.5,1H),7.17(d,J=9,1H),6.70(s,1H),4.74(t,J=7,2H),4.65(t,J=6,2H),4.58−4.59(m,2H),4.29−4.30(m,1H),4.24−4.25(m,2H),4.04−4.05(m,1H),3.58−3.59(m,1H),3.26−3.27(m,4H),2.61(s,2H),2.56−2.58(m,4H),2.50(s,2H),1.27(s,6H)
マグネチックスターラーを装備した密封管に、(4−フルオロ−2−{6−オキソ−8−チア−5−アザトリシクロ[7.4.0.02,7]トリデカ−1(9),2(7)−ジエン−5−イル}−6−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)フェニル)メチルアセテート 103g(200mg、0.44mmol)、6−クロロ−N−(5−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)ピリジン−2−イル)イミダゾ[1,2−b]ピリダジン−8−アミン 108a(155mg、0.44mmol)、トリシクロヘキシルホスフィン(112mg、0.4mmol)、Pd2(dba)3(28mg、0.024mmol)、Cs2CO3(261mg、0.8mmol)、およびジオキサン(25mL)を装入した。3サイクルの真空/アルゴンフラッシュ後、反応混合物を110℃で16時間加熱した。次に、混合物を真空蒸発させ、残留物を酢酸エチル(10mL×2)で抽出した。合した酢酸エチル抽出物を減圧下で濃縮し、残留物を逆相分取HPLCによって精製して、111(59mg、22%)を得た。MS:[M+H]+681。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.94(s,1H),8.23(s,1H),8.16(s,1H),8.02(s,1H),7.67(s,1H),7.44−7.46(m,3H),7.34−7.36(m,1H),4.64−4.66(m,1H),4.54−4.57(m,2H),4.42−4.48(m,3H),4.35−4.38(m,1H),3.96−4.10(m,1H),3.79−3.89(m,1H),3.42−3.45(m,1H),3.14−3.16(m,4H),2.54−2.96(m,4H),2.47−2.50(m,2H),2.37−2.41(m,4H),1.79(t,J=4.0,4H)
マグネチックスターラーを装備した密封管に、(4−フルオロ−2−{6−オキソ−8−チア−4,5−ジアザトリシクロ[7.4.0.02,7]トリデカ−1(9),2(7),3−トリエン−5−イル}−6−(テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)フェニル)メチルアセテート(200mg、0.44mmol)、6−クロロ−N−(5−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)ピリジン−2−イル)イミダゾ[1,2−b]ピリダジン−8−アミン 105a(155mg、0.44mmol)、トリシクロヘキシルホスフィン(112mg、0.4mmol)、Pd2(dba)3(28mg、0.024mmol)、Cs2CO3(261mg、0.8mmol)、およびジオキサン(25mL)を装入した。3サイクルの真空/アルゴンフラッシュの後、反応混合物を110℃で16時間加熱した。混合物を真空蒸発させ、残留物を酢酸エチル(10mL×2)で抽出した。合した酢酸エチル抽出物を減圧下で濃縮し、残留物を逆相分取HPLCによって精製して、112(26mg、12%)を得た。MS:[M+H]+680。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.95(s,1H),8.49(s,1H),8.24(s,1H),8.17(s,1H),8.04(s,1H),7.67(s,1H),7.45−7.53(m,4H),4.54−4.57(m,3H),4.45−4.47(m,2H),4.33(d,J=12.5,2H),3.35−3.46(m,1H),3.13−3.17(m,4H),2.83−2.94(m,4H),2.47−2.50(m,4H),1.82−1.87(m,4H)
マグネチックスターラー、添加漏斗および窒素入口を装備した1L三口丸底フラスコを窒素でパージし、エーテル(200mL)およびヨウ化銅(I)(54.46g、0.286mol)を装入した。混合物を0℃まで冷却し、メチルリチウム(エーテル中1.6M、357.5mL、0.572mol)を1.5時間にわたり反応混合物に滴下し、0℃でさらに2時間撹拌した。この後、3−メチルシクロペンタ−2−エノン(25g、0.260mol)のエーテル(150mL)中溶液を1.5時間にわたり滴下した。次に、反応混合物を0℃で2時間撹拌し、硫酸ナトリウム十水和物(300g)の中に注いだ。得られる混合物を30分間撹拌した。この後、混合物を濾過し、エーテル(1000mL)で洗浄した。濾液を濃縮し、減圧下で蒸留して収率70%(20.5g)の3,3−ジメチルシクロペンタノン 113aを無色の液体として得た:沸点50〜55℃(10mmHg);1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 2.31(t,2H,J=7.8Hz),2.05(s,2H),1.79(t,2H,J=7.8Hz);MS(ESI+)m/z 113.3(M+H)
マグネチックスターラー、還流冷却器、添加漏斗および窒素入口を装備した500mL三口丸底フラスコを窒素でパージし、DMF(9.49g、0.100mol)および塩化メチレン(100mL)を装入した。反応混合物を0℃まで冷却し、オキシ塩化リン(14.1g、0.0920mol)を30分にわたって反応に滴下した。ひとたびこの添加が完了すると、反応を室温まで温め、1時間撹拌した。この後、113a(11.2g、0.100mol)の塩化メチレン(100mL)中の溶液を1時間にわたって滴下した。次に、反応を還流で18時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、砕氷(400mL)と酢酸ナトリウム(100g、1.22mol)との混合物の中に注いだ。得られる混合物を45分間撹拌した。この後、水層を分離し、塩化メチレン(2×500mL)で抽出した。次に、合した有機層を水(2×200mL)、それに続いてブライン(200mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。次に、乾燥剤を濾過により除去し、濾液を濃縮して、粗生成物2−クロロ−4,4−ジメチルシクロペンタ−1−エンカルバルデヒドを得、それを機械撹拌機、還流冷却器および窒素入口を装備した500mL三口丸底フラスコの中に入れた。塩化メチレン(200mL)、2−メルカプト酢酸エチル(11.0g、0.092mol)およびトリエチルアミン(30g、0.207mol)を次に添加した。次に、反応混合物を還流で6時間撹拌した。この後、反応を室温まで冷却し、濃縮して濃厚な橙色の残留物とした。エタノール(200mL)およびトリエチルアミン(30.0g、0.207mol)を添加し、反応を12時間加熱還流した。次に、反応を室温まで冷却し、減圧下で濃縮して得られる残留物をエーテル(600mL)で希釈した。得られる混合物を1M塩酸(150mL)、ブライン(100mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。得られる残留物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、113bを収率34%(7.70g)で無色の液体として得た:1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 7.48(s,1H),4.33(q,2H,J=7.2Hz),2.72(s,2H),2.56(s,2H),1.38(t,3H,J=1.8Hz),1.17(s,6H);MS(ESI+)m/z 225.1
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した250mL一口丸底フラスコ中、113b(4.00g、17.8mmol)をエタノール(50mL)に溶解した。THF(50mL)、水(50mL)および水酸化リチウム(854mg、35.6mmol)を添加し、混合物を、60℃で4時間撹拌した。この後、反応を室温まで冷却し、2M塩酸でpH1.5に酸性化し、その後酢酸エチル(2×200mL)で抽出した。有機層を合し、水(2×100mL)、それに続いてブライン(100mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。次に、乾燥剤を濾過により分離した。得られる濾液を蒸発させた後、113cを収率91%(3.2g)で白色固体として得た:融点170〜172℃;1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 12.77(s,1H),7.46(s,1H),2.71(s,2H),2.53(s,2H),1.20(s,6H);MS(ESI−)m/z 195.0
マグネチックスターラー、還流冷却器、および凝縮器の上に設置したバブラーを装備した100mL一口丸底フラスコに、113c(2.30g、11.6mmol)、トルエン(25mL)、塩化チオニル(4.09g、34.9mmol)およびDMF(1滴)を装入した。混合物を1時間加熱還流した後、45℃ロータリーエバポレーターで減圧下で蒸発させた。得られる酸塩化物を塩化メチレン(20mL)で希釈した。
マグネチックスターラーを装備した100mL一口丸底フラスコを窒素でパージし、113d(2.41g、10.0mmol)および無水THF(20mL)を装入した。この溶液を−70℃に冷却し、THF中1Mビニルマグネシウムブロミド(11mL、11.0mmol)を、反応温度を−60℃よりも低く保って添加した。反応混合物を、−13〜−7℃で2時間撹拌した後、30分にわたって室温まで温めた。反応を再び−70℃まで冷却し、エーテル中の塩化水素の2M溶液(22.5mL、45mmol)を添加した。次に、反応物を−10℃の冷凍庫で一晩貯蔵した。この後、混合物をロータリーエバポレーターで減圧下で蒸発させ、得られる残留物を水(100mL)とエーテル(100mL)とに分液した。エーテル抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーターで減圧下で蒸発させて、粗113e(2.86g、118%)を褐色の油状として、約75%の純度(NMRによる)で得た:1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 7.45(s,1H),3.89(t,2H,J=6.9Hz),3.30(t,2H,J =6.9Hz),2.75(s,2H),2.59(s,2H),1.24(s,6H)
マグネチックスターラーを装備した100mL一口丸底フラスコに、粗113e(2.86g、10.0mmol(定量的収量を推定))および98%硫酸を装入した。反応混合物を90℃の油浴で一晩加熱した。反応混合物を氷/アセトン浴の中に入れ、リン酸水素二カリウム(105g、0.603mol)の水(300mL)中の冷(5℃)溶液を一度に添加した。得られる混合物を酢酸エチル(300mL)とともに振盪し、濾過した。濾過ケーキを酢酸エチル(100mL)で洗浄した。濾液の酢酸エチル層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーターで減圧下で蒸発させた。得られる残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカ、80:20 ヘキサン/酢酸エチル)により精製して、113fを収率37%で2工程にわたって(683mg)非晶性の褐色の固体として得た:融点60〜62℃;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 2.92−2.87(m,4H),2.79(s,2H),2.53(s,2H),1.26(s,6H);MS(ESI+)m/z 207.0(M+H)
マグネチックスターラーおよび窒素入口を装備した250mL一口丸底フラスコに、塩酸ヒドロキシルアミン(688mg、9.90mmol)、酢酸ナトリウム(812mg、9.90mmol)およびメタノール(10mL)を装入し、混合物を室温にて30分間。この後、113fの溶液(680mg、3.30mmol)を室温で滴下し、反応を室温で14時間、窒素雰囲気下で撹拌した。反応が完了していなかったので、塩酸ヒドロキシルアミン(1.15g、16.5mmol)および酢酸ナトリウム(1.35g、16.5mmol)を添加し、室温で58時間、撹拌を継続した。この後、混合物を塩化メチレン(150mL)および水(100mL)で希釈し、層を分離した。有機層をブライン(50mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾過により除去し、濾液を濃縮して、粗113gを定量的収量(730mg)で黄色の半固体として得、それを精製を行わずに次の工程で使用した:融点122〜124℃;1H NMR(主要異性体)(500MHz,CDCl3)δ 3.13−3.11(m,2H),2.85−2.83(m,2H),2.77(s,2H),2.49(s,2H),1.24(s,6H);MS(ESI+)m/z 222.0(M+H)
還流冷却器、機械撹拌機および窒素入口を装備した100mL三口丸底フラスコに、113g(700mg、3.16mmol)およびポリリン酸(25g)を装入した。反応混合物を、80℃で13時間、窒素雰囲気下で撹拌した。この後、混合物を0℃まで冷却し、内部温度を10〜45℃に保ちながら水(50mL)を注意深く滴下した。混合物を90:10 塩化メチレン/メタノール(100mL)で希釈し、層を分離した。水層を90:10 塩化メチレン/メタノール(50mL)で抽出し、合した有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液(50mL)、ブライン(150mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾過により除去した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカ、95:5 塩化メチレン/メタノール)により精製して、6,6−ジメチル−3,4,6,7−テトラヒドロ−5H−シクロペンタ[4,5]チエノ[2,3−c]ピリジン−1(2H)−オン 113hを収率90%(630mg)で非晶性の灰白色の固体として得た:融点205〜207℃;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 5.51(s,1H),3.60−3.56(m,2H),2.76−2.73(m,4H),2.49(s,2H),1.26(s,6H);MS(ESI+)m/z 222.0(M+H)
113h(2g、9.05mmol)、2,6−ジブロモ−4−フルオロベンジルアセテート(101j)(8.8g、27.15mmol)、キサントホス(524mg、0.9mmol)、Pd2(dba)3(828mg、0.9mmol)およびCs2CO3(5.9g、18mmol)のジオキサン(200mL)中の混合物を、窒素下15時間、100℃で加熱した。反応混合物を濾過し、濾過されたものを真空蒸発させた。残留物を、1:1 酢酸エチル/石油エーテルで溶離するシリカル(silical)−ゲルカラムで精製して、113iを黄色の固体として得た(3g、71%)。MS:(M+H)+466。
113i(3g、6.45mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’−オクタメチル−2,2’−ビ(1,3,2−ジオキサボロラン)(9.8g、38.7mmol)のジオキサン(160mL)中の溶液に、PdCl2(dppf)(525mg、0.65mmol)およびCH3COOK(3.8g、38.7mmol)を添加した。混合物を、100℃で15時間、アルゴン雰囲気下で撹拌した。反応混合物を濾過し、真空蒸発させた後、残留物を、1:2 酢酸エチル/石油エーテルで溶離するシリカル(silical)−ゲルカラムにより精製して、113jを黄色の固体として得た(2.5g、76%)。MS:(M+H)+514。
実施例112の手順に従って、6−クロロ−N−(5−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)ピリジン−2−イル)イミダゾ[1,2−a]ピリジン−8−アミンと113jとを反応させて、113を収率13%で得た。LCMS:[M+H]+695。1H NMR(500MHz,MeOD)δ 8.30(s,1H),8.09(d,J=2.5,1H),8.05(s,1H),7.66(s,1H),7.50(dd,J=3.5,9.0,1H),7.40(dd,J=3,9,1H),7.34(dd,J=2,9,1H),7.16(d,J=9,1H),4.74(t,J=6.5,2H),4.65(t,J=6,2H),4.60−4.61(m,2H),4.16−4.17(m,1H),4.01−4.02(m,1H),3.58−3.59(m,1H),3.25−3.26(m,4H),3.12−3.14(m,1H),2.97−2.98(m,1H),2.81(s,2H),2.60−2.61(m,2H),2.55−2.56(m,4H),1.29(d,J=2.5,6H)
−70℃で冷却した無水テトラヒドロフラン(40mL)中の2−ブロモ−4−クロロピリジン(1.6g、8.0mmol)の溶液に、リチウムジイソプロピル−アミド(5.0mL、10.0mmol、2.0M)の溶液を5分間にわたって添加し、−70℃でさらに1時間撹拌した。無水DMF(1.3g)を3分間にわたって導入し、混合物をさらに30分間撹拌した。次にそれを飽和NH4Cl(30mL)でクエンチし、酢酸エチル(20mL×3)で抽出した。合した有機層を無水Mg2SO4で乾燥させ、濾過し、および減圧下で蒸発させた。残留物を、石油エーテル/酢酸エチル(20:1)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、114aを黄色の固体として得た(900mg、48%)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 10.21(s,1H),8.52(d,J=5.5Hz,1H),7.79(d,J=5.0Hz,1H)。
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した100mL一口丸底フラスコに、114a(800mg、3.5mmol)、3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−1(2H)−オン 101g(665mg、3.5mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(320mg、0.35mmol)、キサントホス(400mg、0.7mmol)、Cs2CO3(2.3g、7.0mmol)、および1,4−ジオキサン(20mL)を装入した。3サイクルの真空/アルゴンフラッシュの後、混合物を90℃で5時間加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる残留物を、ジクロロメタン/メタノール(80:1)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、114bを黄色の固体として得た(1.2g、50%)。MS:[M+H]+330。
114b(1.0g、3.0mmol)のメタノール(50mL)中の溶液に、10℃の水素化ホウ素ナトリウム(380mg、9.0mmol)を添加し、さらに30分間撹拌した。次に、反応混合物を水(1mL)でクエンチし、濃縮した。残留物をジクロロメタン(50mL)に溶解し、水(10mL)で洗浄した。有機相を無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて、114cを黄色の固体として得た(900mg、90%)。MS:[M+H]+332。
114c(900mg、2.7mol)およびトリエチルアミン(900mg、9.0mol)のジクロロメタン(5mL)中の混合物に、塩化アセチル(600mg、6.0mol)を室温で撹拌しながら滴下し、さらに1時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、ジクロロメタンで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、114dを白色の固体として得た(950mg、94%)。MS:[M+H]+374。
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した100mL一口丸底フラスコに、114d(950mg、2.5mmol)、Pin2B2(1.6g、2.0当量、5mmol)、Pd2(dba)3(230mg、0.1当量、0.25mmol)、X−phos(232mg、0.2当量、0.5mmol)、AcOK(735mg、3当量、7.5mmol)およびジオキサン(20mL)を装入した。3サイクルの真空/アルゴンフラッシュの後、混合物を65℃まで14時間加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる残留物をPE/EA=3/1(10mL)により洗浄して、114eを黄色の固体として得た(950mg、87%)。MS:[M+H]+383。
密封管に、6−クロロ−N−(5−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)ピリジン−2−イル)イミダゾ[1,2−b]ピリダジン−8−アミン 105a(200mg、0.5mmol)、114e(200mg、1.0当量、0.5mmol)、Pd2(dba)3(46mg、0.1当量、0.05mmol)、PCy3(40mg、0.2当量、0.1mmol)、炭酸セシウム(325mg、2当量、1.0mmol)、およびジオキサン(10mL)を装入した。3サイクルの真空/アルゴンフラッシュ後、混合物を130℃で14時間加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮した。得られる残留物を、ジクロロメタン/メタノール(40:1)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、逆相分取HPLCでさらに精製して、114(13mg、4%)を得た。LCMS:[M+H]+647。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.96(s,1H),8.56(d,J=5.0,1H),8.24(s,1H),8.18(s,1H),7.99(d,J=2.5,1H),7.68(s,1H),7.45−7.50(m,3H),6.58(s,1H),4.72(t,J=5.0,1H),4.55−4.59(m,3H),4.45−4.47(m,2H),4.37−4.40(m,1H),4.19−4.29(m,2H),4.08−4.10(m,1H),3.91−3.94(m,1H),3.42−3.45(m,1H),3.14−3.16(m,4H),2.52−2.63(m,2H),2.46−2.47(m,2H),2.36−2.40(m,4H),1.76−1.78(m,2H),1.66−1.70(m,2H)
5−ブロモ−2−ニトロピリジン(30g、148mmol)のDMSO(1L)中の溶液に、K2CO3(40g、296mmol)およびピペラジン−1−カルボン酸tert−ブチル(28g、148mmol)を添加した。混合物を、65℃で一晩撹拌した。冷却した後、それを水(2L)に注入した。沈殿した固体を回収し、真空下で乾燥させた。次にそれを20:1 石油エーテル/酢酸エチル、その後塩化メチレンで溶離するフラッシュカラムによりさらに精製して、115aを黄色の固体として得た(17g、37%)。MS:[M+H]+309。
500mL瓶を窒素でパージし、115a(3.1g、10mmol)、10%パラジウム炭素(50%湿潤、1.0g)およびエタノール(100mL)を装入した。それを排気し、水素ガスを充填し、16時間室温で撹拌した。次に、水素を排気し、窒素を瓶に充填した。触媒をセライトのパッドによる濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮して、115b(2.7g、97%)を得た。MS:[M+H]+279
101bの手順に従い、8−ブロモ−6−クロロイミダゾ[1,2−b]ピリダジン 104a(1.44g、6.2mmol)、および115b(905mg、3.1mmol)で出発して、115cを黄色の固体として得た(2.2g、80%)。MS−ESI:[M+H]+444.2
オートクレーブに、115c(1.60g、3.6mmol)およびHBr/AcOH(60mL)を装入した。それを150℃で18時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮して黒色の油状物質を得た。この油状物質をメタノール(30mL)/ジクロロメタン(30mL)/石油エーテル(90mL)で再結晶化して、115dを黄色の固体として得た(1.1g、65%)。MS−ESI:[M+H]+388.1
(S)−6−ブロモ−N−(5−(2−メチルピペラジン−1−イル)ピリジン−2−イル)イミダゾ[1,2−b]ピリダジン−8−アミン臭化水素酸塩 115d(1.05g、2.24mmol)、オキセタン−3−オン(483mg、6.7mmol)、およびZnCl2(914mg、6.7mmol)のメタノール(30mL)中の混合物に、NaBH3CN(421mg、6.7mmol)を添加した。反応混合物を50℃で14時間加熱し、減圧下で濃縮した。水(30mL)を残留物に添加し、得られる混合物をジクロロメタン(% X 30mL)で抽出した。合した有機相を無水MgSO4で乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で蒸発させた。残留物を、40:1 ジクロロメタン/メタノールで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、115eを黄色の固体として得た(220mg、22%)。MS−ESI:[M+H]+444.1
密封管に、115e(156mg、0.35mmol)、3−(アセトキシメチル)−2−(1−オキソ−3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−2(1H)−イル)ピリジン−4−イルボロン酸 114e(134mg、0.35mmol)、Pd2(dba)3(64mg、0.070mmol)、PCy3(40mg、0.14mmol)、炭酸セシウム(228mg、0.70mmol)、水(1滴)、およびジオキサン(9mL)を装入した。3サイクルの真空/アルゴンフラッシュの後、混合物を130℃で16時間加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる残留物を、40:1 ジクロロメタン/メタノールで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、逆相分取HPLCでさらに精製して、115(31mg、13%)を得た。MS−ESI:[M+H]+661.3。1H NMR(500MHz,DMSO−d6)δ 9.97(s,1H),8.56(d,J=5.0Hz,1H),8.25(d,J=5.0Hz,1H),8.19(d,J=0.5Hz,1H),7.95(s,1H),7.68(d,J=1.0Hz,1H),7.48−7.44(m,3H),6.58(s,1H),4.76(t,J=5.0Hz,1H),4.58−4.54(m,3H),4.49−4.46(m,1H),4.43−4.36(m,2H),4.30−4.05(m,3H),3.94−3.87(m,2H), 3.42−3.37(m,1H),3.24−3.19(m,1H),3.00−2.96(m,1H),2.66−2.57(m,3H),2.47−2.43(m,3H),2.28−2.26(m,1H),2.12−2.09(m,1H),1.79−1.68(m,4H),1.00(d,J=6.5Hz,3H)。
4−ブロモ−6−クロロ−1H−ベンゾ[d]イミダゾール 109c(3.5g、15mmol)のN,N−ジメチルホルムアミド(30mL)中の溶液に、水素化ナトリウム(360mg、15mmol)および2−(トリメチルシリル)エトキシメチルクロライド(2.7g、16.5mmol)を添加した。反応を室温で2時間撹拌した。水(100mL)を添加して反応をクエンチした。混合物を酢酸エチル(3×80mL)で抽出した。合した有機相を無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて、116aを褐色の固体として得た(4.2g、77%)。MS−ESI:[M+H]+361.0
マグネチックスターラーを装備したマイクロ波バイアルに、116a(600mg、1.65mmol)、5−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)ピリジン−2−アミン(390mg 1.67mmol)、炭酸セシウム(1.09g、3.34mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(152mg、0.167mmol)、キサントホス(193mg、0.334mmol)、およびジオキサン(10mL)を装入した。懸濁液に10分間窒素を通気させた後、反応を120℃で一晩加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残留物を石油エーテルと酢酸エチルの混合溶媒(15mL、2:1)で洗浄して、116bを黄色の固体として得た(720mg、85%)。MS−ESI:[M+H]+515.2
116b(720mg、1.4mmol)のTFA(10mL)中の混合物を、室温で6時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、水(10mL)で希釈した。アンモニア水を添加することにより、混合物のpHを7に調節した。次にそれをジクロロメタン(3×20mL)で抽出した。合した有機相を無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて、116cを褐色の固体として得た(500mg、93%)。MS−ESI:[M+H]+385.1
マグネチックスターラーを装備したマイクロ波バイアルに、116c(300mg、0.78mmol)、4−フルオロ−2−(1−オキソ−3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−2(1H)−イル)−6−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)ベンジルアセテート 101k(545mg、1.13mmol)、炭酸カリウム(414mg、3.0mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(68mg、0.075mmol)、トリシクロヘキシルホスフィン(210mg、0.75mmol)、水(0.2mL)、およびジオキサン(10mL)を装入した。懸濁液に10分間窒素を通気させた後、密閉バイアルを110℃で一晩加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残留物を逆相分取HPLCにより精製して、116を白色固体として得た(52mg、10%)。MS−ESI:[M+H]+663.3。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.23(bs,1H),8.11(s,1H),7.88(d,J=4.5Hz,1H),7.35−7.31(m,1H),7.23−7.17(m,2H),7.13−7.09(m,2H),6.52(s,1H),4.57−4.45(m,overlap,4H),4.31(d,J=7.5Hz,2H),4.11−4.01(m,4H),3.51−3.47(m,1H),3.10−3.06(m,4H),2.59−2.41(m,8H),1.81−1.68(m,4H)
6−クロロ−9H−プリン−2−アミン(5.0g、29.6mmol)およびNaH(1.43g、32.5mmol)のDMF(30mL)中の混合物を、室温で0.5時間撹拌した。(2−(クロロメトキシ)エチル)トリメチルシラン(SEMCl、CAS登録番号76513−69−4、4.91g、29.6mmol)を添加し、得られる混合物を室温で1.0時間撹拌した。次にそれを濾過し、濾液を真空蒸発させた。残留物を、3:1 石油エーテル/酢酸エチルで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、117a(5.1g、58%)を黄色の固体として得た。MS−ESI:[M+H]+300.1
117a(2.99g、10.0mmol)、CH2I2(4.0mL、51.0mmol)、およびCuI(1.91g、10.0mmol)のTHF中の混合物に、亜硝酸イソアミル(4.0mL、30.0mmol)を添加した。混合物を1.0時間加熱還流し、室温まで冷却した。反応混合物を、酢酸エチルと1N HCl水溶液とに分液した。有機相を飽和NH4Cl水溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物を、3:1 石油エーテル/酢酸エチルで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、117b(2.02g、49%)を黄色の固体として得た。MS−ESI:[M+H]+411.0
117b(3.07g、10.0mmol)のジオキサン(50mL)中の溶液に、4.0M HCl/ジオキサン(10mL、40.0mmol)を添加した。反応混合物を室温で5時間撹拌した。次に混合物を減圧下で濃縮して、117c(2.4g、99%)を黄色の固体として得、それをさらなる精製を行わずに使用した。MS:[M+H]+208。
117c(2.0g、8.23mmol)、塩化亜鉛(2.2g、16.4mmol)、オキセタン−3−オン(1.18g、16.4mmol)のメタノール(80mL)中の混合物に、NaBH3CN(1.02g、16.4mmol)を添加した。混合物を、50℃で5時間撹拌した。次に混合物を減圧下で濃縮し、残留物を水(100mL)で希釈した。それをジクロロメタン(3×100mL)で抽出し、合した有機層を減圧下で濃縮した。残留物を、4:1 石油エーテル/酢酸エチルで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、117d(1.65g、76%)を黄色の固体として得た。MS:[M+H]+264。
250mL丸底フラスコを窒素でパージし、117d(1.5g、5.7mmol)、10%パラジウム炭素(50%湿潤、750mg)、およびエタノール(60mL)を装入した。フラスコを排気し、水素ガスを充填し、室温で15時間撹拌した。次に、水素を排気し、窒素をフラスコに充填した。触媒をセライトのパッドによる濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮して、117e(1.2g、90%)を得、それをさらなる精製を行わずに次の工程で使用した。MS:[M+H]+234
117b(2.05g、5.0mmol)、117e(1.17g、5.0mmol)、およびトリエチルアミン(1.01g、10mmol)のi−プロパノール(30mL)中の混合物を、80℃で4時間撹拌した。次にそれを濾過し、濾液を真空蒸発させた。残留物を、30:1 ジクロロメタン/メタノールで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、117f(1.82g、60%)を黄色の固体として得た。MS−ESI:[M+H]+608.1
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した50mL一口丸底フラスコに、117f(607mg、1.0mmol)、4−フルオロ−2−(1−オキソ−3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−2(1H)−イル)−6−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)ベンジルアセテート 101k(482mg、1.0mmol)、Pd(dppf)Cl2(82mg、0.10mmol)、K3PO4(424mg、2.0mmol)、酢酸ナトリウム(164mg、2.0mmol)、水(0.5mL)、およびアセトニトリル(20mL)を装入した。3サイクルの真空/アルゴンフラッシュの後、混合物を2時間加熱還流した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる残留物を、30:1 ジクロロメタン/メタノールで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、117gを黄色の固体として得た(600mg、72%)。MS−ESI:[M+H]+836.5
117g(550mg、0.660mmol)およびCF3COOH(6mL)の混合物を、室温で2時間撹拌した。次にそれを減圧下で濃縮して、粗117hを黄色の固体として得(140mg、30%)、それをさらなる精製を行わずに次の工程で使用した。MS−ESI:[M+H]+706.4
117h(140mg、0.20mmol)および水酸化リチウム(48mg、2.0mmol)のi−プロパノール/THF(1:1、4mL)および水(1mL)中の混合物を、30℃で1時間撹拌した。混合物を真空蒸発させ、残留物を水(5mL)で希釈した。次にそれを酢酸エチル(2×10mL)で抽出した。合した酢酸エチル抽出物を減圧下で濃縮し、残留物を逆相分取HPLCにより精製して、117(85mg、64%)を白色固体として得た。MS−ESI:[M+H]+664.4。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 12.45(s,1H),8.26(s,1H),7.86(d,J=8.5Hz,2H),7.66(d,J=8.0Hz,2H),7.11(d,J=9.0Hz,1H),6.96(d,J=8.0Hz,2H),6.88(s,1H),4.74−4.68(m,4H),4.66−4.60(m,2H),4.17−4.09(m,3H),3.91−3.90(m,1H),3.59(t,J=6.5Hz,1H),3.25−3.23(m,4H),2.59−2.52(m,8H),1.89−1.80(m,4H)。
マグネチックスターラーを装備したマイクロ波バイアルに、4−ブロモ−6−クロロ−1−((2−(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)−1H−ベンゾ[d]イミダゾール 116a(600mg、1.65mmol)、5−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)ピリジン−2−アミン(390mg 1.67mmol)、炭酸セシウム(1.09g、3.34mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(152mg、0.167mmol)、キサントホス(193mg、0.334mmol)、およびジオキサン(10mL)を装入した。懸濁液に10分間窒素を通気させた後、反応を120℃で一晩加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残留物を石油エーテルと酢酸エチルの混合溶媒(15mL、2:1)で洗浄して、118aを黄色の固体として得た(720mg、85%)。MS−ESI:[M+H]+515.2
118a(720mg、1.4mmol)のTFA(10mL)中の混合物を、室温で6時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、水(10mL)で希釈した。アンモニア水を添加することにより、混合物のpHを7に調節した。次にそれをジクロロメタン(3×20mL)で抽出した。合した有機相を無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて、118bを褐色の固体として得た(500mg、93%)。MS−ESI:[M+H]+385.1
マグネチックスターラーを装備したマイクロ波バイアルに、118b(200mg、0.52mmol)、3−(アセトキシメチル)−2−(1−オキソ−3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−2(1H)−イル)ピリジン−4−イルボロン酸 114e(545mg、0.78mmol)、炭酸カリウム(216mg、1.56mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(48mg、0.052mmol)、トリシクロヘキシルホスフィン(146mg、0.52mmol)、水(0.2mL)、およびジオキサン(10mL)を装入した。懸濁液に10分間窒素を通気させた後、密閉バイアルを110℃のマイクロ波の下で1時間照射した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残留物を逆相分取HPLCにより精製して、118を白色固体として得た(50mg、15%)。MS−ESI:[M+H]+646.3。1H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.69(d,J=2.0Hz,1H),8.49(d,J=5.0Hz,1H),8.32−8.28(m,2H),8.13(s,1H),7.85−7.83(m,1H),7.39−7.33(m,2H),7.36(s,1H),7.29(s,1H),6.59(s,1H),5.89(s,1H),4.56(t,J=6.5Hz,2H),4.46(t,J=6.5Hz,2H),4.23−4.16(m,2H),4.15−4.12(m,4H),3.89−3.53(m,1H),3.13−3.07(m,5H),2.64−2.54(m,2H),2.51−2.43(m,5H),1.79 −1.70(m,4H)
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した50mL一口丸底フラスコに、(4−フルオロ−2−{6−オキソ−8−チア−5−アザトリシクロ[7.4.0.02,7]トリデカ−1(9),2(7)−ジエン−5−イル}−6−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)フェニル)メチルアセテート 103g(288mg、0.60mmol)、2−ヨード−N−(4−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)フェニル)−9−((2−(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)−9H−プリン−6−アミン 117f(364mg、0.60mmol)、Pd(dppf)Cl2(49mg、0.060mmol)、K3PO4(254mg、1.20mmol)、酢酸ナトリウム(98mg、1.20mmol)、水(0.5mL)、およびアセトニトリル(10mL)を装入した。3サイクルの真空/アルゴンフラッシュの後、混合物を100℃で2時間加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる残留物を、30:1 ジクロロメタン/メタノールで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、119a(307mg、60%)を得た。MS−ESI:[M+H]+853.4
119a(307mg、0.360mmol)およびCF3COOH(5mL)の混合物を、30℃で2時間撹拌した。混合物を真空蒸発させ、残留物を水(5mL)で希釈した。混合物のpHを飽和NaHCO3溶液で7に調節し、酢酸エチル(3×10mL)で抽出した。合した抽出物をMgSO4で乾燥させ、蒸発乾固させて、119b(150mg、60%)を得、それをさらなる精製を行わずに次の工程で使用した。MS−ESI:[M+H]+723.4
119b(150mg、0.210mmol)および水酸化リチウム(50mg、2.10mmol)のi−プロパノール/THF(1:1、4mL)および水(1mL)中の混合物を、30℃で1時間撹拌した。混合物を真空蒸発させ、残留物を水(5mL)で希釈した。次にそれを酢酸エチル(2×10mL)で抽出した。合した酢酸エチル抽出物を減圧下で濃縮し、残留物を逆相分取HPLCにより精製して、119(85mg、58%)を黄色の固体として得た。MS−ESI:[M+H]+681.3。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 12.72(s,1H),8.45(s,1H),7.93(d,J=7.5Hz,1H),7.79(s,1H),7.72(d,J=9.0Hz,2H),7.12(d,J=8.0Hz,1H),6.98(d,J=9.0Hz,2H),4.74−4.67(m,6H),4.09−4.04(m,1H),3.78−3.73(m,1H),3.57(t,J=6.5Hz,1H),3.24−3.22(m,4H),2.99−2.93(m,1H),2.88−2.83(m,3H),2.53−2.51(m,6H),1.93−1.81(m,5H)。
マグネチックスターラーおよび窒素入口を装備した500mL丸底フラスコを窒素でパージし、5,6,7,8−テトラヒドロインドリジン−2−カルボン酸(30.4g、184mmol)、DMF(1.00g、13.6mmol)および塩化メチレン(300mL)を装入した。氷浴を用いて溶液を0℃まで冷却した。塩化オキサリル(28.0g、221mmol)を滴下し、反応混合物を30分にわたって室温まで温め、5時間撹拌した。この後、得られる溶液を濃縮して褐色の固体を得た。この固体を無水メタノール(400mL)に溶解し、溶液を0℃に冷却した。トリエチルアミン(57g、552mmol)を反応混合物に添加し、それをさらに2時間室温で撹拌した。この後、反応混合物を減圧下で濃縮乾固した。残留物を塩化メチレン(300mL)で希釈し、水(200mL)および飽和重炭酸ナトリウム水溶液(200mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。得られる残留物をヘキサン(200mL)で滴定して、120aを収率58%(19.1g)の白色固体として得た:融点72〜74℃;1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ 7.13(s,1H),6.23(s,1H),3.93(t,2H,J=6.0Hz),3.77(s,3H),2.75(t,2H,J=6.0Hz),1.93(m,2H),1.80(m,2H);(APCI+)m/z 180.1(M+H)
添加漏斗、温度計を装備した500mL三口丸底フラスコに、120a(6.70g、37.4mmol)、ヨードアセトニトリル(12.5g、74.9mmol)、硫酸鉄(II)七水和物(5.20g、18.7mmol)およびジメチルスルホキシド(250mL)を装入した。過酸化水素(35%、18.2g、187mmol)を、水浴を用い、室温でシリンジポンプによって1時間の時間をかけて混合物に滴下した。硫酸鉄(II)七水和物(2〜3当量)を、反応混合物の色が暗赤色になるまで、温度を25℃〜35℃の間に保つために少量ずつ反応混合物に添加した。反応が完了していないことをTLCが示す場合、それよりも多くの過酸化水素(2〜3当量)およびそれよりも多くの硫酸鉄(II)七水和物(1〜2当量)を、反応が完了するまで同じ方法で添加した。その後、反応混合物を、飽和重炭酸ナトリウム溶液(200mL)と酢酸エチル(400mL)とに分液した。有機層を分離し、水層を酢酸エチル(2×100mL)で抽出した。合した有機層を飽和チオ硫酸ナトリウム溶液(50mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、収率78%(6.40g)の120bを黄色の油状物質として得た:1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 6.23(s,1H),4.23(s,2H), 3.94(t,2H,J=6.5Hz),3.81(s,3H),2.74(t,2H,J=6.5Hz),2.00(m,2H),1.83(m,2H);(APCI+)m/z 219.3(M+H)
3−(シアノメチル)−5,6,7,8−テトラヒドロインドリジン−2−カルボン酸メチル 120bを、室温で一晩、塩化水素の存在下、エタノールおよび酢酸エチル中50psiの水素下、白金系酸化物触媒で水素化して、120c(380mg、1.74mmol)を得、それを次の工程に使用した。
マグネチックスターラーおよび窒素入口を装備した100mL一口丸底フラスコを窒素でパージし、120c(上記の通り調製、推定1.74mmol(定量的収量を推定))、ナトリウムエトキシド(354mg、5.22mmol)およびエタノール(20mL)を装入した。混合物を、55℃で5時間撹拌した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を酢酸エチル(200mL)と水(100mL)とに分液した。有機層を分離し、水層を酢酸エチル(2×100mL)で抽出した。合した有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、収率67%(220mg)の120dを白色固体として得た:融点195〜197℃;1H NMR(500MHz,DMSO−d6)δ 6.76(s,1H),5.89(s,1H),3.78(t,2H,J=6.5Hz),3.35(m,2H),2.66(m,4H),1.87(m,2H),1.72(m,2H);(APCI+)m/z 191.3(M+H)
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した100mL一口丸底フラスコに、1,4−ジオキサン(60mL)、2,6−ジブロモ−4−フルオロベンジルアセテート(1.9g、6.0mmol)、120d(400mg、2.0mmol)、および炭酸セシウム(1.3g、4.0mmol)を装入した。得られる混合物に30分間窒素を通気させた後、キサントホス(120mg、0.2mmol)およびトリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(180mg、0.2mmol)を添加し、反応混合物を100℃で12時間加熱した。この後、反応を室温まで冷却し、酢酸エチル(40mL)と水(40mL)とに分液し、濾過した。水層を分離し、酢酸エチル(3×70mL)で抽出した。合した有機層をブライン(30mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮した。残留物を、2:1 石油エーテル/酢酸エチルで溶離するフラッシュカラムで精製して、120e(421mg、46%)を黄色の固体として得た。MS:[M+H]+435。1H NMR(500MHz,MeOD)δ 7.52−7.50(m,1H),7.23−7.20(m,1H),6.14(s,1H),5.20−5.10(m,2H),4.09−4.06(m,1H),3.95−3.92(m,1H),3.88−3.85(m,1H),3.78−3.75(m,1H),3.07−2.97(m,2H),2.81−2.77(m,2H),2.03−2.00(m,5H),1.87−1.84(m,2H)
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した100mL一口丸底フラスコに、1,4−ジオキサン(30mL)、120e(1000mg、2.30mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(3.03g、11.5mmol)、Pd(dppf)Cl2(94mg、0.11mmol)、および酢酸カリウム(676mg、6.90mmol)を装入した。混合物に10分間窒素を通気させた後、それを90℃で3時間加熱した。次にそれを濾過し、濾液を真空で蒸発させて、120f(1.2g、108%)を黒色の油状物質として得た。MS−ESI:[M+H]+483.2
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した50mL一口丸底フラスコに、120f(400mg、0.82mmol)、2−ヨード−N−(4−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)フェニル)−9−((2−(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)−9H−プリン−6−アミン 117f(604mg、0.99mmol)、PdCl2(dppf)(33mg、0.040mmol)、K3PO4(347mg、1.64mmol)、および酢酸ナトリウム(134mg、1.64mmol)、アセトニトリル(15mL)、および水(1mL)を装入した。系を排気し、N2を再び充満させた。反応混合物を100℃で2時間加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる残留物を、30:1 ジクロロメタン/メタノールで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、120g(460mg、66%)を緑色の固体として得た。MS−ESI:[M+H]+836.4。
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した50mL一口丸底フラスコに、120g(350mg、0.42mmol)、TBAF(925mg、2.93mmol)、およびTHF(10mL)を装入した。反応混合物を80℃で17時間加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる残留物を、30:1 ジクロロメタン/メタノールで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、120h(240mg、83%)を黄色の固体として得た。MS−ESI:[M+H]+706.3。
120h(240mg、0.34mmol)のプロパン−2−オール(8mL)、テトラヒドロフラン(8mL)、および水(1.5mL)中の溶液に、水酸化リチウム(25mg、1.02mmol)を添加した。混合物を、30℃1.5時間で撹拌した。それを蒸発させ、残留物を逆相分取HPLCにより精製して、120(116mg、51%)を黄色の固体として得た。MS−ESI:[M+H]+664.3。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 8.29(s,1H),7.81(d,J=8.0Hz,1H),7.69(d,J=8.0Hz,2H),7.08(d,J=6.5Hz,1H),6.91(d,J=8.0Hz,2H),6.29(s,1H),4.71−4.57(m,6H),4.05−4.03(m,1H),3.86−3.77(m,3H),3.63−3.61(m,1H),3.23−3.22(m,4H),3.05−3.03(m,1H),3.89−2.79(m,3H),2.54−2.56(m,4H),2.00−1.98(m,2H),1.84−1.82(m,2H)。
還流冷却器を装備した50mL丸底フラスコに、8−ブロモ−6−クロロイミダゾ[1,2−a]ピリジン 101a(264mg、1.14mmol)、5−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)ピリジン−2−アミン(328mg、1.14mmol)、Pd2(dba)3(102mg、0.11mmol)、キサントホス(63mg、0.11mmol)、Cs2CO3(3.58g、11.0mmol)、ジオキサン(20mL)を装入した。3サイクルの真空/アルゴンフラッシュの後、混合物を100℃で一晩加熱した。次にそれを濾過し、濾液を減圧下で蒸発させた。残留物を1:50 メタノール/ジクロロメタンで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、121aを橙色の固体として得た(290mg、66%)。MS−ESI:[M+H]+385.1。
マイクロ波バイアルに、121a(100mg、0.26mmol)、3−(アセトキシメチル)−2−(1−オキソ−3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−2(1H)−イル)ピリジン−4−イルボロン酸 114e(150mg、0.39mmol)、Pd2(dba)3(23mg、0.025mmol)、P(Cy)3(7mg、0.025mmol)、Cs2CO3(170mg、0.52mmol)、ジオキサン(5mL)、および水(0.1mL)を装入した。3サイクルの真空/アルゴンフラッシュの後、反応混合物を、マイクロ波照射下で1時間、130℃で撹拌した。次にそれを濾過し、濾液を減圧下で蒸発させた。残留物を逆相分取HPLCにより精製して121(66mg、39%)を得た。MS−ESI:[M+H]+646.3。1H NMR(500MHz,DMSO−d6)δ 8.99(s,1H),8.53(d,J=5.0Hz,1H),8.31(d,J =1.5Hz,1H),8.23(d,J=1.5Hz,1H),7.99(d,J=1.0Hz,1H),7.90(d,J=3.0Hz,1H),7.58(d,J=1.5Hz,1H),7.43−7.40(m,2H),7.35(d,J=9.0Hz,1H),6.58(s,1H),4.95(bs,1H),4.56(t,J=6.5Hz,2H),4.46(t,J=6.5Hz,2H),4.42−4.40(m,2H),4.28−4.09(m,3H),3.94−3.87(m,1H),3.45−3.42(m,1H),3.10−3.08(m,4H),2.66−2.56(m,2H),2.50−2.47(m,underneath solvent peak,2H),2.40−2.38(m,4H),1.80−1.69(m,4H)。
密封管に、6−クロロ−N−(5−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)ピリジン−2−イル)[1,2,4]トリアゾロ[1,5−a]ピリジン−8−アミン 108d(196mg、0.51mmol)、3−(アセトキシメチル)−2−(1−オキソ−3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−2(1H)−イル)ピリジン−4−イルボロン酸 114e(200mg、0.52mmol)、PdCl2(dppf)(24mg、0.030mmol)、K3PO4(212mg、1.0mmol)、酢酸ナトリウム(83mg、1.0mmol)、アセトニトリル(10mL)、および水(0.2mL)を装入した。混合物を140℃で0.5時間加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を真空蒸発させた。残留物を、20:1 ジクロロメタン/メタノールで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、122a(200mg、56%)を白色固体として得た。MS−ESI:[M+H]+689.3。
122a(200mg、0.29mmol)および水酸化リチウム(42mg、1.0mmol)のi−プロパノール/THF(1:1、3.5mL)および水(1mL)中の混合物を、40℃で0.5時間撹拌した。混合物を減圧下で蒸発させ、残留物を水(5mL)で希釈した。それを酢酸エチル(2×5mL)で抽出した。合した酢酸エチル抽出物を減圧下で濃縮し、残留物を逆相分取HPLCにより精製して、122(70mg、38%)を淡黄色の固体として得た。MS−ESI:[M+H]+647.3。1H NMR(500MHz,DMSO−d6)δ 9.36(s,1H),8.69(s,1H),8.61(s,1H),8.57−8.55(m,2H),7.93(d,J=2.5Hz,1H),7.48−7.43(m,2H),7.37−7.35(m,1H),6.59(s,1H),5.05(t,J=5.0Hz,1H),4.57−4.55(m,2H),4.61−4.59(m,2H),4.40−4.39(m,2H),4.26−4.12(m,3H),3.92−3.89(m,1H),3.43(t,J=6.0Hz,1H),3.11−3.09(m,4H),2.63−2.57(m,2H),2.50−2.47(m,2H),2.40−2.39(m,4H),1.79−1.77(m,2H),1.70−1.68(m,2H)。
マグネチックスターラーおよび還流冷却器を装備した25mL一口丸底フラスコに、2−ヨード−N−(4−(4−(オキセタン−3−イル)ピペラジン−1−イル)フェニル)−9−((2−(トリメチルシリル)エトキシ)メチル)−9H−プリン−6−アミン 117f(360mg、0.60mmol)、{2−[(アセチルオキシ)メチル]−3−{4,4−ジメチル−9−オキソ−1,10−ジアザトリシクロ[6.4.0.02,6]ドデカ−2(6),7−ジエン−10−イル}−5−フルオロフェニル}ボロン酸 110g(360mg、0.90mmol)、Pd(dppf)Cl2(30mg、0.030mmol)、K3PO4(270mg、1.2mmol)、酢酸ナトリウム(180mg、1.2mmol)、水(0.5mL)、およびアセトニトリル(10mL)を装入した。3サイクルの真空/アルゴンフラッシュの後、混合物を100℃で2時間加熱した。次にそれを室温まで冷却し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得られる残留物を、20:1 ジクロロメタン/メタノールで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、123aを黄色の固体として得た(200mg、35%)。MS−ESI:[M+H]+850.4。
123a(200mg、0.25mmol)およびCF3COOH(4mL)の混合物を室温で2時間撹拌した。次に、混合物を減圧下で濃縮して粗123bを黄色の固体として得(160mg、90%)、それをさらなる精製を行わずに次の工程で使用した。MS−ESI:[M+H]+720.4
123b(160mg、0.20mmol)および水酸化リチウム(48mg、2.0mmol)のTHF/i−プロパノール(5:3、8mL)および水(2mL)中の混合物を、30℃で1時間撹拌した。混合物を真空蒸発させ、残留物を水(5mL)で希釈した。次にそれを酢酸エチル(2×10mL)で抽出した。合した酢酸エチル抽出物を減圧下で濃縮し、残留物を逆相分取HPLCにより精製して、123(40mg、32%)を白色固体として得た。MS−ESI:[M+H]+678.3。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 12.28(s,1H),8.62(s,1H),7.89−7.87(m,1H),7.72−7.67(m,3H),7.13−7.11(m,1H),6.99−6.97(m,2H),6.85(s,1H),4.73−4.65(m,6H),4.25−4.21(m,1H),4.16−4.09(m,2H),3.89−3.87(m,1H),3.59−3.57(m,1H),3.25−3.23(m,4H),2.56−2.51(m,overlap,8H),1.28(s,3H),1.27(s,3H)。
機械撹拌機、添加漏斗および窒素入口を装備した3L三口丸底フラスコを窒素でパージし、3−ニトロピラゾール−5−カルボン酸(28.0g、178mmol)およびTHF(420mL)を装入し、氷/アセトン浴を用いて−5℃まで冷却した。ホウ素−THF錯体溶液(1.0M、535mL、535mmol)を、5℃よりも低い内部反応温度を維持する速度で添加した。添加が完了した後、冷却浴を取り外し、反応を室温で18時間撹拌した。この後、氷/アセトン浴を用いて反応を−5℃まで冷却し、水(70mL)および4N塩酸(70mL)を添加し、ホウ素錯体をピラゾールで破壊するために、反応を還流で1時間撹拌した。反応を室温まで冷却し、減圧下で濃縮して約30mLの体積とした。酢酸エチル(175mL)を添加し、混合物を15分間撹拌した。水層を分離し、酢酸エチル(4×200mL)で抽出した。合した有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液(2×50mL)、ブライン(50mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮して(3−ニトロ−1H−ピラゾール−5−イル)メタノール 124aを収率94%(24.0g)で淡黄色の固体として得た:1H NMR(300MHz,DMSO−d6)δ 13.90(br s,1H),6.87(s,1H),5.58(t,1H,J=5.4Hz),4.53(d,2H,J=5.1Hz);MS(ESI+)m/z 144.0(M+H)
機械撹拌機および温度調節器を装備した1L三口丸底フラスコを窒素でパージし、124a(25.0g、175mmol)、DMF(250mL)、および炭酸セシウム(70.0g、215mmol)を装入し、104℃で5分間加熱した。次に、氷/アセトン浴を用いて反応混合物を0℃まで冷却し、ジブロモエタン(329g、1.75mol)を少量ずつ添加した(発熱なし)。反応を、0℃で1時間、次に室温で4時間撹拌した。この後、KH2PO4(40g)の水(400mL)中の溶液をゆっくりと添加した。反応混合物を室温で30分間撹拌した。酢酸エチル(450mL)を添加し、水層を分離し、酢酸エチル(2×100mL)で抽出した。合した有機層を水(200mL)、ブライン(200mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去した。濾液を減圧下で濃縮して、収率86%(37.5g)の粗124bを橙色の油状物質として得た:1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 6.85(s,1H),4.82(d,2H,J=5.4Hz),4.66(t,2H,J=6.3Hz),3.83(t,2H,J=6.3Hz);MS(ESI+)m/z 249.9(M+H)。
マグネチックスターラー、窒素入口および還流冷却器を装備した500mL三口丸底フラスコを窒素でパージし、124b(37.0g、148mmol)およびクロロホルム(160mL)を装入した。氷/アセトン浴を用いて反応を−5℃まで冷却し、三臭化リン(40.0g、148mmol)を少量ずつ添加した。冷却浴を除去し、反応を還流で2時間撹拌した。この後、反応を−5℃まで冷却し、8.5のpHに達するまで飽和重炭酸ナトリウム水溶液(250mL)を添加した。混合物を酢酸エチル(3×150mL)で抽出し、合した有機層を飽和炭酸ナトリウム水溶液(2×50mL)、ブライン(75mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥剤を濾過により除去した。濾液を減圧下で濃縮して、黄色の残留物を得、それを穏やかに加熱して塩化メチレン(60mL)に溶解した。ヘキサン(約20mL)を添加すると、溶液は濁った。固体の沈殿が生じるまで混合物を加熱し、塩化メチレン(9mL)を添加すると、溶液は透明になった。溶液を室温まで放冷し、4時間後、得られる結晶を真空濾過により回収した。濾過ケーキを塩化メチレン:ヘキサン(2×20mL)の氷冷1:2 混合物で洗浄して、1−(2−ブロモエチル)−5−(ブロモメチル)−3−ニトロ−1H−ピラゾール(19.7g)を得た。合した濾液を蒸発させ、この手順を再び実施してさらに9.70gの1−(2−ブロモエチル)−5−(ブロモ−メチル)−3−ニトロ−1H−ピラゾールを得た。固体を合し、高真空下で18時間乾燥させて、収率57%(26.0g)の1−(2−ブロモエチル)−5−(ブロモメチル)−3−ニトロ−1H−ピラゾール 124cを白色の結晶として得た:融点95〜97℃;1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 6.93(s,1H),4.63(t,2H,J=6.0Hz),4.54(s,2H),3.86(t,2H,J=6.0Hz)。
マグネチックスターラーおよび窒素入口を装備した1L一口丸底フラスコに、THF(350mL)、124c(10.0g、32.2mmol)、THF中2Mメチルアミン溶液(113mL、225mmol)を装入し、室温で72時間撹拌した。この後、反応を減圧下で濃縮乾固し、得られる固体を酢酸エチル(75mL)および10%炭酸カリウム水溶液(75mL)の混合物とともに撹拌した。水層を分離し、酢酸エチル(2×75mL)で抽出した。合した有機抽出物を、10%炭酸カリウム水溶液(75mL)、それに続いてブライン(50mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾過により除去し、濾液を減圧下で濃縮して、124dを収率97%(5.70g)で黄色の固体として得た:1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 6.62(s,1H),4.28(t,2H,J=5.4Hz),3.67(s,2H),2.95(t,2H,J=5.4Hz),2.52(s,3H);MS(ESI+)m/z 183.0(M+H)
500mLパール反応器ボトルを窒素でパージし、10% パラジウム炭素(50%湿潤、乾重800mg)および124d(4.00g、2.20mmol)のエタノール(160mL)中の溶液を装入した。ボトルをパール水添器に取り付け、排気し、45psiの圧力まで水素ガスを充填し、2時間振盪した。この後、水素を排気し、窒素をボトルの中に充填した。セライト521(1.0g)を添加し、混合物を、セライト521のパッドに通して濾過した。濾過ケーキをエタノール(2×75mL)で洗浄し、合した濾液を減圧下で濃縮乾固させて、収率99%の124e(3.31g)を橙色の固体として得た:1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 5.34(s,1H),3.98(t,2H,J=5.4Hz),3.52(s,3H),2.84(t,2H,J=5.7Hz),2.45(s,3H);MS(ESI+)m/z 153.1(M+H)
実施例104bに記載される手順に従って、8−ブロモ−6−クロロイミダゾ[1,2−b]ピリダジン 104a、1.43g、6.2mmol)および124e(900mg、5.9mmol)で出発して、124fを黄色の固体として得た(800mg、44%)。MS−ESI:[M+H]+304.1
オートクレーブに、124f(800mg、2.6mmol))およびHBr/AcOH(60mL)を装入した。それを150℃で18時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮して、黒色の油状物質を得た。この油状物質をメタノール(30mL)/ジクロロメタン(30mL)/石油エーテル(90mL)から再結晶化させて124gを黄色の固体として得た(600mg、66%)。MS−ESI:[M+H]+348.1
実施例123に記載される手順に従って、124g(900mg、2.60mmol)および3−(アセトキシメチル)−2−(1−オキソ−3,4,6,7,8,9−ヘキサヒドロピラジノ[1,2−a]インドール−2(1H)−イル)ピリジン−4−イルボロン酸 114e(1.01g、2.6mmol)で出発して、124を白色固体として得た(147mg、10%)。MS−ESI:[M+H]+565.3。1H NMR(500MHz,DMSO−d6)δ 10.02(s,1H),8.56(d,J=5.0Hz,1H),8.17(s,1H),7.75(s,1H),7.66(s,1H),7.46(d,J=5.0Hz,1H),6.58(s,1H),6.03(s,1H),4.73(t,J=5.0Hz,1H),4.62−4.58(m,1H),4.40−4.37(m,1H),4.27−4.19(m,2H),4.10−4.08(m,1H),4.00−3.93(m,3H),3.54(s,2H),2.82(t,J=5.0Hz,2H),2.64−2.56(m,2H),2.47−2.46(m,2H),2.37(s,3H),1.79−1.68(m,4H)。
式Iの化合物を試験するために使用することができる標準的な生化学的Btkキナーゼアッセイの一般化された手順は以下の通りである。1X細胞シグナル伝達キナーゼ緩衝液(25mM トリス−HCl、pH7.5、5mM β−グリセロホスフェート、2mM ジチオトレイトール、0.1mM Na3VO4、10mM MgCl2)、0.5μM プロメガPTKビオチン化ペプチド基質2、および0.01%BSAを含有する、マスターミックスマイナスBtk酵素を調製する。1X細胞シグナル伝達キナーゼ緩衝液、0.5μM PTKビオチン化ペプチド基質2、0.01% BSA、および100ng/ウェル(0.06mU/ウェル)Btk酵素を含有する、マスターミックスプラスBtk酵素を調製する。Btk酵素を以下の通り調製する:C末端V5および6x Hisタグを含む全長ヒト野生型Btk(受託番号NM−000061)を、このエピトープタグ付けされたBtkを有するバキュロウイルスを作成するために、pFastBacベクターにサブクローニングする。バキュロウイルスの生成は、インビトロジェン社のその公開されているプロトコール「Bac−to−Bacバキュロウイルス発現系」(カタログ番号10359−016および10608−016)に詳述される説明書に基づいて行う。3代継代ウイルスを用いてSf9細胞を感染させて組換え型Btkタンパク質を過剰発現させる。次に、Btkタンパク質をNi−NTAカラムを用いて均質に精製する。最終タンパク質調製物の純度は、高感度Sypro−Ruby染色に基づいて95%超である。200μM ATPの溶液を水中で調製し、1N NaOHでpH7.4に調整する。1.25μLの量の5%DMSO中の化合物を96ウェルハーフエリアCostarポリスチレンプレートに移す。化合物を1つずつ、11ポイント用量応答性曲線(出発濃度は10μM;1:2希釈)で試験する。18.75μLの量のマスターミックスマイナス酵素(陰性対照として)およびマスターミックスプラス酵素を96ウェルハーフエリアCostarポリスチレンプレート中の適切なウェルに移す。5μLの200μM ATPを、最終ATP濃度を40μMとするために96ウェルハーフエリアCostarポリスチレンプレート中のその混合物に添加する。反応を室温で1時間インキュベートさせる。30mM EDTA、20nM SA−APC、および1nM PT66Abを含有するパーキン・エルマー 1X検出緩衝液で反応を停止させる。励起フィルター330nm、発光フィルター665nm、および第2の発光フィルター615nmを用い、パーキン・エルマー Envisionによって時間分解蛍光を用いてプレートを読み取る。その後、IC50値を計算する。あるいは、Lanthascreenアッセイを用いて、そのリン酸化ペプチド生成物の定量化によってBtk活性を評価することができる。ペプチド産物上のフルオレセインと検出抗体上のテルビウムとの間に起こるFRET(蛍光共鳴エネルギー移動)は、ペプチドのリン酸化を低下させるBtkの阻害剤の添加によって減少する。25uLの最終反応体積で、Btk(h)(0.1ng/25ul反応)を、50mMのHepes pH7.5、10mMのMgCl2、2mMのMnCl2、2mMのDTT、0.2mMのNaVO4、0.01%のBSA、および0.4uMのフルオレセインポリ−GATとともにインキュベートする。25uM(ATPのKm)までATPを添加することにより反応を開始させる。室温で60分間のインキュベートションの後、60mMのEDTA中2nMのTb−PY20検出抗体の終濃度を室温で30分間添加することにより反応を停止させる。検出は、340nMの励起ならびに495nmおよび520nmの発光を用いるパーキン・エルマー Envisionで定量する。例となるBtk阻害のIC70値を表1および2に示す。
式Iの化合物を試験するために使用することができる標準的な細胞のBtkキナーゼアッセイの別の一般化された手順は、以下の通りである。ラモス細胞を、0.5×107細胞/mlの密度で試験化合物の存在下37℃で1時間インキュベートする。次に、10μg/mlの抗ヒトIgM F(ab)2とともに37℃で5分間インキュベートすることにより細胞を刺激する。細胞をペレット化し、溶解し、透明溶解液でタンパク質アッセイを実施する。各試料の等量のタンパク質を、SDS−PAGEに供し、Btk自己リン酸化を評価するために抗phosphoBtk(Tyr223)抗体(Cell Signaling Technology #3531;Epitomics、カタログ番号2207−1)またはphosphoBtk(Tyr551)抗体(BD Transduction Labs #558034)、あるいは、各溶解液中のBtkの総量を制御するための抗Btk抗体(BD Transduction Labs #611116)のいずれかによるウエスタンブロッティングに供する。
式Iの化合物を試験するために使用することができる標準的な細胞のB細胞増殖アッセイの一般化された手順は、以下の通りである。B細胞を、B細胞単離キット(Miltenyi Biotech、カタログ番号130−090−862)を用いて8〜16週齢のBalb/cマウスの脾臓から精製した。試験化合物を0.25%DMSOに希釈し、2.5×105精製マウス脾臓B細胞とともに30分間インキュベートした後、100μlの最終体積中、10μg/mlの抗マウスIgM抗体(Southern Biotechnology Associates、カタログ番号1022−01)を添加する。24時間のインキュベートションの後、1μCi3H−チミジンを添加し、プレートをさらに36時間インキュベートした後、SPA[3H]チミジン取込みアッセイ系(Amersham Biosciences # RPNQ 0130)の製造業者のプロトコールを用いて回収する。SPAビーズに基づく蛍光をマイクロベータカウンター(Wallace Triplex 1450、パーキン・エルマー)で計数する。
式Iの化合物を試験するために使用することができる標準的なT細胞増殖アッセイの一般化された手順は、以下の通りである。T細胞を、Pan T細胞単離キット(Miltenyi Biotech、カタログ番号130−090−861)を用いて8〜16週齢のBalb/cマウスの脾臓から精製した。試験化合物を0.25%DMSOに希釈し、37℃で90分間、10μg/mlの各々の抗CD3(BD #553057)および抗CD28(BD #553294)抗体を予め塗布した透明平底プレート中の100μlの最終体積中、2.5×105精製マウス脾臓T細胞とともにインキュベートする。24時間のインキュベートションの後、1μCi3H−チミジンを添加し、プレートをさらに36時間インキュベートした後、SPA[3H]チミジン取込みアッセイ系(Amersham Biosciences # RPNQ 0130)の製造業者のプロトコールを用いて回収する。SPAビーズに基づく蛍光をマイクロベータカウンター(Wallace Triplex 1450、パーキン・エルマー)で計数する。
式Iの化合物を試験するために使用することができるB細胞活性の阻害の標準的なアッセイの一般化された手順は、以下の通りである。全マウス脾細胞を、赤血球溶解(BD Pharmingen #555899)により8〜16週齢のBalb/cマウスの脾臓から精製した。試験化合物を0.5%DMSOに希釈し、透明平底プレート(Falcon 353072)中の200μlの最終体積中、1.25×106脾細胞とともに37℃で60分間インキュベートする。次に、15μg/mlのIgM(Jackson ImmunoResearch 115−006−020)の添加により細胞を刺激し、37℃で24時間、5%CO2でインキュベートする。24時間のインキュベートションの後、細胞を円錐底の透明な96ウェルプレートに移し、1200×g×5分間での遠心分離によりペレット化する。細胞を、CD16/CD32(BD Pharmingen #553142)により予めブロッキングし、その後CD19−FITC(BD Pharmingen #553785)、CD86−PE(BD Pharmingen #553692)、および7AAD(BD Pharmingen #51−68981E)で三重染色する。細胞をBD FACSCaliburで選別し、CD19+/7AAD−集団にゲートをかける。ゲートをかけた集団でのCD86表面発現のレベルを、試験化合物濃度に対して測定する。
以下は、生存細胞の数を測定するためにXTT読み出し情報を用いる標準的なB−ALL(急性リンパ芽球性白血病)細胞生存研究の手順である。このアッセイを用いて、培養液中でのB−ALL細胞の生存を阻害する能力について、式Iの化合物を試験することができる。使用することのできる1つのヒトB細胞急性リンパ芽球性白血病株は、SUP−B15、ATCCより入手可能なヒトPre−B細胞ALL株である。
ヒト血液を、以下の制限:1週間無投薬の非喫煙者をもつ健常なボランティアから得る。血液(8種の化合物を試験する約20mL)を、静脈穿刺によりヘパリンナトリウムを含むバキュテイナ(登録商標)(Becton、DickinsonおよびCo.)管に採取する。
式Iの化合物の有効性は、以下のプロトコールを用いる細胞増殖アッセイによって測定される(Mendoza et al(2002)Cancer Res. 62:5485−5488)。試薬およびプロトコールを含むCellTiter−Glo(登録商標)発光細胞生存率アッセイは、市販されている(プロメガ社(米国ウィスコンシン州マディソン)、技術告示TB288)。このアッセイは、化合物の細胞に入り細胞増殖を阻害する能力を評価する。このアッセイの原理は、Cell−Titer Glo試薬の添加によって細胞溶解およびルシフェラーゼ反応による発光シグナルの発生がもたらされる均質アッセイに存在するATPを定量化することによる、存在する生存細胞の数の定量に基づく。発光シグナルは、存在するATPの量に比例する。
1.約104細胞を培地中に含有する細胞培養の100μlのアリコートを、384ウェルの不透明な壁のプレートの各ウェルに入れる。
2.培地を含み細胞を含まない対照ウェルを調製する。
3.化合物を実験ウェルに添加し、3〜5日間インキュベートする。
4.プレートを約30分間室温に平衡化させる。
5.各ウェル中に存在する細胞培養液の体積に等しい体積のCellTiter−Glo試薬を添加する。
6.内容物をオービタルシェーカーで2分間混合して細胞溶解を誘導する。
7.プレートを室温で10分間インキュベートして発光シグナルを安定化させる。
8.発光を記録し、RLU=相対発光単位としてグラフで報告する。
Claims (26)
- 式I:
I
[式中、
実線/破線の
は、単結合もしくは二重結合を示し;
X1は、CR1またはNであり;
X2は、CR2またはNであり;
X3は、CR3またはNであり;
ここで、X1、X2、およびX3の0個、1個、または2個がNであり;
Y1およびY2は、独立に、CHおよびNから選択され;
Y3は、CまたはNであり;
Y4は、CR6、NまたはNHであり;
ここで、Y1、Y2、Y3、およびY4の1個または2個がNであり;
R1、R2およびR3は、独立に、H、F、Cl、C 1 −C3アルキルから選択され;
R4は、H、F、Cl、CN、−CH2OH、−CH(CH3)OH、−C(CH3)2OH、−CH(CF3)OH、−CH2F、−CHF2、−CH2CHF2、−CF 3 から選択され;
R5は、−CH3、−CH2CH3、−CH2OH、−CH2F、−CHF2、−CF3、−CN、および−CH2CH2OHから選択され;
nは、0、1、2、3、または4であり;
R6は、H、Cl、−CH3、−CH2CH 3 から選択され;
R7は、構造:
(式中、波線は結合部位を示す)から選択され;
R8は、H、−CH3 、シクロプロピル、オキセタン−3−イルから選択され;
Zは、CR9またはNであり;ここで、R9は、H、F、Cl、−CH3、−CH2CH 3 から選択される]
から選択される化合物、またはその立体異性体、互変異性体、もしくは薬学的に許容可能な塩。 - 式Ia:
Ia
の構造を有する、請求項1に記載の化合物。 - 式Ib:
Ib
の構造を有する、請求項2に記載の化合物。 - 構造:
を有する式Ic〜Ihから選択される、請求項1に記載の化合物。 - X1がNであり、X2がCR2であり、かつX3がCR3である、請求項1に記載の化合物。
- X1がCR1であり、X2がNであり、かつX3がCR3である、請求項1に記載の化合物。
- X1がCR1であり、X2がCR2であり、かつX3がNである、請求項1に記載の化合物。
- X1およびX3がNである、X1およびX2がNである、または、X2およびX3がNである、から選択される、請求項1に記載の化合物。
- R4が−CH2OHである、請求項1に記載の化合物。
- X2がCR2であり、かつ、R2がFである、請求項4に記載の化合物。
- X1およびX3がCHである、請求項5に記載の化合物。
- Y4がCR6であり、かつ、R6がCH3である、請求項1に記載の化合物。
- 表1から選択される、請求項1に記載の化合物。
- 表2から選択される、請求項1に記載の化合物。
- 請求項1〜14のいずれか一項に記載の化合物と薬学的に許容可能な担体、滑剤、希釈剤、または賦形剤を含有する薬学的組成物。
- 治療剤をさらに含む、請求項15に記載の薬学的組成物。
- 請求項1〜14のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容可能な担体を組み合わせる工程を含む、薬学的組成物を作製するための方法。
- 治療上有効な量の請求項15に記載の前記薬学的組成物を含む、免疫障害、癌、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝/内分泌機能障害および神経疾患から選択され、かつブルトン型チロシンキナーゼに起因する疾患または障害を治療するための医薬。
- 前記疾患または障害が、免疫障害である、請求項18に記載の医薬。
- 前記免疫障害が、関節リウマチである、請求項19に記載の医薬。
- 前記疾患または障害が、全身および局所炎症、関節炎、免疫抑制に関連する炎症、臓器移植拒絶、アレルギー、潰瘍性大腸炎、クローン病、皮膚炎、喘息、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症状群、多発性硬化症、強皮症/全身性硬化症、特発性血小板減少性紫斑病(ITP)、抗好中球細胞質抗体(ANCA)血管炎、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、乾癬である、請求項18に記載の医薬。
- 前記疾患または障害が、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌(cervix)、前立腺癌、精巣癌、泌尿生殖器癌、食道癌、喉頭癌、神経膠芽腫、神経芽腫、胃癌(stomach)、皮膚癌、角化棘細胞腫、肺癌、類表皮癌、大細胞癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、小細胞癌、肺腺癌、骨癌、結腸癌、腺腫、膵癌(pancreas)、腺癌、甲状腺癌、濾胞癌、未分化癌、乳頭癌、精上皮腫、黒色腫、肉腫、膀胱癌、肝臓癌および胆道癌、腎臓癌、膵癌(pancreatic)、骨髄障害、リンパ腫、毛様細胞種、口腔癌、上咽頭癌、咽頭癌、口唇癌、舌癌、口腔癌、小腸癌、結腸直腸癌、大腸癌、直腸癌、脳および中枢神経系の癌、ホジキン病、白血病、気管支癌、甲状腺癌、肝臓および肝内胆管癌、肝細胞癌、胃癌(gastric)、神経膠腫/神経膠芽腫、子宮内膜癌、黒色腫、腎臓および腎盂癌、膀胱癌、子宮体癌、子宮頸癌(uterine cervix)、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病(CLL)、骨髄性白血病、口腔咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、黒色腫、および絨毛結腸腺腫(villous colon adenoma)から選択される癌である、請求項18に記載の医薬。
- 抗炎症薬、免疫調節薬、化学療法薬、アポトーシス−エンハンサー、神経栄養因子、心血管疾患を治療するための薬剤、肝疾患を治療するための薬剤、抗ウイルス薬、血液疾患を治療するための薬剤、糖尿病を治療するための薬剤、および免疫不全障害を治療するための薬剤から選択される治療剤をさらに含む、請求項18に記載の医薬。
- a)請求項15に記載の第1の薬学的組成物
を含む、ブルトン型チロシンキナーゼに起因する状態を治療するためのキット。 - 免疫障害、癌、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝/内分泌機能障害および神経疾患から選択され、かつブルトン型チロシンキナーゼに起因する疾患または障害を治療する際に医薬として使用するための、請求項15に記載の薬学的組成物。
- 免疫障害、癌、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝/内分泌機能障害および神経疾患の治療のための医薬の製造における、請求項15に記載の薬学的組成物の使用であって、前記医薬がブルトン型チロシンキナーゼを阻害する、使用。
Applications Claiming Priority (3)
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---|---|---|---|
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