WO2024078448A1 - 一种hpk1激酶抑制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种hpk1激酶抑制剂及其制备方法和应用 Download PDF

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WO2024078448A1
WO2024078448A1 PCT/CN2023/123576 CN2023123576W WO2024078448A1 WO 2024078448 A1 WO2024078448 A1 WO 2024078448A1 CN 2023123576 W CN2023123576 W CN 2023123576W WO 2024078448 A1 WO2024078448 A1 WO 2024078448A1
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ring
partially unsaturated
cancer
unsaturated monocyclic
membered saturated
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林星雨
安娜
陆婷婷
柴玉爽
刘亚慧
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珠海宇繁生物科技有限责任公司
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    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
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Definitions

  • the present invention relates to the technical field of chemical medicine, and in particular to a HPK1 kinase inhibitor and a preparation method and application thereof.
  • Hematopoietic progenitor kinase 1 is a hematopoietic system-specific serine/threonine protein kinase that belongs to the MAP4K family of mammalian STE20-related protein kinases. HPK1 is mainly expressed in hematopoietic tissues and cells. A large number of research results have shown that HPK1 is involved in a variety of cellular events, including mitogen-activated protein kinase signaling, nuclear factor- ⁇ B signaling, cytokine signaling, cell proliferation and apoptosis, T cell receptor/B cell receptor signaling, and T/B/dendritic cell-mediated immune responses.
  • HPK1 is a potential target for tumor immunotherapy.
  • Sawasdikosol et al. reported that destroying the HPK1 gene of T cells and DC cells helps inhibit the growth of lung cancer cells.
  • HPK1 can be used as a new target for anti-tumor immunotherapy (Sawasdikosol S, Zha R, Yang B, Burakoff S. HPK1 as a novel target for cancer immunotherapy. Immunol Res. 2012 Dec; 54(1-3): 262-5.).
  • HPK1 kinase is a key negative feedback regulator of TCR signaling, which will destroy the stability of the TCR signaling complex. Inhibition of HPK1 can enhance T cell activity.
  • HPK1 can serve as an attractive drug target for improving immunotherapy response (for example, Si, J., Shi, X., Sun, S., Zou, B., & Liao, X.. (2020).
  • Hematopoietic progenitor kinase 1 (hpk1) mediates t cell dysfunction and is a druggable target for t cell-based immunotherapies. Cancer Cell, 38 (4).).
  • HPK1 kinase plays a key role in disease treatment, especially cancer treatment, and the discovery of small molecule inhibitors of HPK1 kinase is currently an urgent need.
  • the present invention discloses a compound and a preparation method and application thereof, which can regulate (e.g., inhibit) HPK1 kinase activity and can be used to treat a variety of HPK1-related diseases including autoimmune diseases, inflammatory diseases, and tumors.
  • a compound which has the following structure:
  • Y is C(R') or N
  • X is selected from the group consisting of: a covalent bond, -O-, -S-, -NR'-, -S(O) 2- , -S(O)2NR'-, -S(O)-, -S(O)NR'-, -C(O)-, -C(O) O- , -C(O)NR'-, -C(O)N(R')O-, -OC(O)-, -OC(O)NR'-, -N(R')C(O)O-, -N(R')C(O)-, -N(R')S(O) 2- ; or, X is a C1-4 divalent saturated or unsaturated linear or branched hydrocarbon chain, wherein one or two methylene units of the hydrocarbon chain are optionally and independently replaced by -C(R'R")-, -N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(
  • R 1 is a saturated or partially unsaturated bicyclic heterocyclic group having 11 or more members, or a saturated or partially unsaturated tricyclic heterocyclic group having 11 or more members, wherein the heterocyclic group may be substituted by m RAs , and m is an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6);
  • R4 is an aliphatic ring, an aromatic ring or a heterocyclic group, wherein the group may be substituted by n RBs , n being an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6); or, R3 and R4 together with the carbon atom to which they are attached form a carbocyclic ring or a heterocyclic ring, wherein one or more H on the carbocyclic ring or the heterocyclic ring may be substituted by a substituent selected from the following: halogen, -CN, -NO2 -OR', -NR'R", -S(O)t-R', -S(O)t-NR'R", -COR', -C(O)OR', -C(O)OR', -C(O)NR'R", -C(O)N(R')OR", -OC(O)R', -OC(O)NR'R", -NR'C(O)R
  • t 0, 1, or 2;
  • Each R' and R" is independently selected from: H, halogen, -CN, -NO2 , alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, aryl, arylalkyl, heterocyclyl, heterocyclylalkyl; or, R' and R" attached to the same nitrogen atom together with the nitrogen atom form a heterocycle.
  • Y is C(R'), for example, CH, CCl, CF, CCH3 , in particular CH.
  • Y is N.
  • X can be selected from: a covalent bond, -O-, -S-, -NR'-, -S(O) 2- , -S(O)2NR'-, -S(O)-, -S(O)NR'-, -C(O)-, -C(O)O-, -C (O)NR'-, -C(O)N(R')O-, -OC(O)-, -OC(O)NR'-, -N(R')C(O)O-, -N(R')C(O)-, -N(R')S(O) 2- .
  • X is -NR'-, R' is H, C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, and in particular, X is -NH-.
  • R2 and R3 together with the carbon atom to which they are attached form a carbocyclic ring or a heterocyclic ring, for example, a 4-7-membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, a 4-7-membered saturated or partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring, a 7-12-membered saturated or partially unsaturated bicyclic carbocyclic ring, or a 7-12-membered saturated or partially unsaturated bicyclic heterocyclic ring; in some embodiments of the present invention, R2 and R3 together with the carbon atom to which they are attached form a 5-membered saturated heterocyclic ring, for example, the compound may have the following structure:
  • R 5 and R 6 are independently selected from: H, an optionally substituted C 1-6 aliphatic group, or, R 5 and R 6 together with the atoms between them form an optionally substituted heterocyclic group.
  • R 2 is -C(O)NR'R
  • R' and R" can be independently selected from: H, halogen, -CN, -NO 2 , C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 3-6 cycloalkyl, or R' and R" together with the nitrogen atom form a 4-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic heterocycle, a 7-12 membered saturated or partially unsaturated bicyclic heterocycle; in some embodiments of the present invention, R' and R" are both H, and the compound can have the following structure:
  • R 5 and R 6 are independently selected from: H, an optionally substituted C 1-6 aliphatic group, or, R 5 and R 6 together with the atoms between them form an optionally substituted heterocyclic group.
  • R 2 and X together with the carbon atom to which they are attached form a carbocyclic ring or a heterocyclic ring, for example, a 4-7-membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, a 4-7-membered saturated or partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring, a 7-12-membered saturated or partially unsaturated bicyclic carbocyclic ring, a 7-12-membered saturated or partially unsaturated bicyclic heterocyclic ring;
  • R 2 and X together with the carbon atom to which they are attached form a 5-6-membered monocyclic heterocyclic ring, in particular a 5-6-membered monocyclic nitrogen-containing heteroaromatic ring, for example, the compound may have the following structure:
  • R 5 and R 6 are independently selected from: H, an optionally substituted C 1-6 aliphatic group, or, R 5 and R 6 together with the atoms between them form an optionally substituted heterocyclic group.
  • R 5 is selected from: H, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-6 cycloalkyl.
  • R 6 is selected from: H, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 3-6 cycloalkyl.
  • R 5 is H.
  • R 6 is H.
  • the compound may have the following structure:
  • R 3 can be selected from: H, halogen, -CN, -NO 2 , -CF 3 , -OCF 3 , -OR', -NR'R", -S(O)t-R', -S(O)t-NR'R", -COR', -C(O)OR', -C(O)NR'R", -C(O)N(R')OR", -OC(O)R', C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, C 3-6 cycloalkyl, C 4-10 cycloalkylalkyl.
  • R1 can be a saturated or partially unsaturated fused bicyclic heterocyclic group with 11 or more members, a saturated or partially unsaturated bridged bicyclic heterocyclic group with 11 or more members, a saturated or partially unsaturated spiral bicyclic heterocyclic group with 11 or more members, a saturated or partially unsaturated fused tricyclic heterocyclic group with 13 or more members, a saturated or partially unsaturated bridged tricyclic heterocyclic group with 13 or more members, a saturated or partially unsaturated spiral tricyclic heterocyclic group with 13 or more members, or a saturated or partially unsaturated partially fused (other rings are spirally connected or bridged) tricyclic heterocyclic group with 13 or more members, wherein the heterocyclic group can be substituted by m RAs , and m is an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6).
  • R1 can be a saturated or partially unsaturated fused bicyclic heterocyclic group having 11 or more members, a saturated or partially unsaturated spiral bicyclic heterocyclic group having 11 or more members, a saturated or partially unsaturated bridged bicyclic heterocyclic group having 11 or more members, a saturated or partially unsaturated fused tricyclic heterocyclic group having 11 or more members, a saturated or partially unsaturated partially fused (other rings spiral or bridged) tricyclic heterocyclic group having 11 or more members, wherein the heterocyclic group can be replaced by m R A
  • m is an integer from 0 to 6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6).
  • R 1 is a fused bicyclic heterocyclic group having 11 or more members, which is saturated or partially unsaturated, wherein the bicyclic heterocyclic group may be substituted by m RAs , where m is an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6).
  • R 1 is Among them, the A ring can be a 5-7-membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring, and the B ring can be a 7-10-membered (e.g., 7, 8, 9, 10-membered) saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring.
  • ring A is a 5-6 membered monocyclic heterocycle or a benzene ring, in particular a 5-6 membered partially unsaturated monocyclic heterocycle or a benzene ring, for example in particular
  • the B ring is a 7-8 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring or heterocyclic ring or bridged heterocyclic ring, for example.
  • R1 is selected from:
  • R 1 is a 13-membered or more saturated or partially unsaturated fused tricyclic heterocyclic group, wherein the tricyclic heterocyclic group may be substituted by m RAs , m being an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6).
  • m being an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6).
  • R 1 is Among them, the A' ring is fused with the B' ring, and the B' ring is fused with the C' ring.
  • the A' ring can be a 5-7-membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring
  • the B' ring can be a 7-10-membered (e.g., 7, 8, 9, 10-membered) saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring
  • the C' ring can be a 4-8-membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring.
  • the A' ring is a 5-6 membered monocyclic heterocyclic ring or a benzene ring, in particular a 5-6 membered partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring or a benzene ring, for example in particular
  • the B' ring is a 7-8 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic or heterocyclic ring, for example.
  • the C' ring is a 5-6 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbon ring, heterocyclic ring or benzene ring, for example One of them.
  • R1 is selected from:
  • R 1 is a 13-membered or more saturated or partially unsaturated partially fused (other rings are spiro-connected or bridged) tricyclic heterocyclic group, wherein the tricyclic heterocyclic group may be substituted by m RAs , m is an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6), for example, R 1 is Among them, the "A" ring is fused with the "B” ring, the "B” ring is spiro-connected with the "C” ring, the "A” ring is a 5-7-membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring, the "B” ring is a 7-10-membered (e.g., 7, 8, 9, 10-membered) saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring, and the "C” ring is
  • the A" ring is a 5-6 membered monocyclic heterocyclic ring or a benzene ring, in particular a 5-6 membered partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring or a benzene ring, for example in particular
  • the B" ring is a 7-8 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic or heterocyclic ring, for example.
  • the C" ring is a 3-6 membered saturated monocyclic carbocyclic ring, for example One of the
  • R1 is selected from:
  • n can be 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, especially 1, 2 or 3.
  • C 3-10 cycloalkyl e.g.
  • C 4-8 cycloalkylalkyl e.g.
  • 3-10 membered saturated heterocyclic group e.g.
  • C 5-10 heteroaryl e.g.
  • each RA is independently selected from: H, -F, -Cl, -Br, -I, -CH3 , -CF 3 , -CHF 2 , -CH 2 F, -CH 2 CF 3 , -OH, Especially H, -F, -CN, -CH 3 , -CF 3 , -CHF 2 , -CH 2 F, -CH 2 CF 3 , -OH, -NH2 .
  • R1 is selected from:
  • R4 can be, for example, a 3-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, a 3-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring, an 8-12 membered saturated or partially unsaturated bicyclic carbocyclic ring, an 8-12 membered saturated or partially unsaturated bicyclic heterocyclic ring, a 10-membered or more saturated or partially unsaturated tricyclic carbocyclic ring, a 10-membered or more saturated or partially unsaturated tricyclic heterocyclic ring, a benzene ring, a naphthalene ring, an anthracene ring group, wherein the group can be substituted by n RBs , and n is an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6).
  • R4 is a 3-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic heterocyclic group, wherein the group may be substituted by n RBs , where n is an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6).
  • R4 is The E ring is a 4-6 membered saturated or partially unsaturated monocyclic heterocyclic group, for example One of them.
  • R4 is selected from:
  • R 4 is an 8-12 membered saturated or partially unsaturated fused bicyclic heterocyclic group, wherein the bicyclic heterocyclic group may be substituted by n RBs , where n is an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6).
  • R 4 is The E' ring is fused with the F' ring, the E' ring can be a 5-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring, and the F' ring can be a 5-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring.
  • the E' ring is a 5-6 membered saturated or partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring or benzene ring, in particular a 5-6 membered partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring or benzene ring, for example One of them.
  • the F' ring is a 5-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbon ring, heterocyclic ring or benzene ring, in particular a 5-6 membered partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring or benzene ring, for example One of them.
  • R4 is selected from:
  • R 4 is a saturated or partially unsaturated tricyclic heterocyclic group having 10 or more members, wherein the tricyclic heterocyclic group may be substituted by n RBs , where n is an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6).
  • n is an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6).
  • R 4 is Among them, the E" ring is fused with the F" ring, and the F" ring is fused with the G" ring.
  • the E" ring can be a 5-7-membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring
  • the F" ring can be a 5-7-membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring
  • the G" ring can be a 5-7-membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring.
  • the E" ring is a 5-6 membered saturated or partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring or benzene ring, in particular a 5-6 membered partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring or benzene ring, for example One of them.
  • the F" ring is a 5-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbon ring, heterocyclic ring or benzene ring, in particular a 5-6 membered partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring or benzene ring, for example One of them.
  • the G" ring is a 5-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring, for example One of them.
  • R4 is selected from:
  • R 4 is a saturated or partially unsaturated tricyclic heterocyclic group having 10 or more members, wherein the tricyclic heterocyclic group may be substituted by n RBs , where n is an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6).
  • n is an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6).
  • R 4 is The E"' ring is fused with both the F"' and G"' rings, and the F"' ring is also fused with the G"' ring.
  • the E"' ring can be a 5-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring
  • the F"' ring can be a 5-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring
  • the G"' ring can be a 5-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring.
  • the E'' ring is a 5-6 membered saturated or partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring or benzene ring, in particular a 5-6 membered partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring or benzene ring, for example One of them.
  • the F"' ring is a 5-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbon ring, heterocyclic ring or benzene ring, in particular a 5-6 membered partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring or benzene ring, for example One of them.
  • the G"' ring is a 5-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic ring, heterocyclic ring or benzene ring, for example One of them.
  • R4 is selected from:
  • R 4 is a saturated or partially unsaturated tricyclic heterocyclic group having 10 or more members, wherein the tricyclic heterocyclic group may be substituted by n RBs , where n is an integer of 0-6 (e.g., 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6).
  • R 4 is Among them, the E"" ring is fused with the F"" ring, the F"" ring is spiro-connected with the G"" ring, the E"" ring can be a 5-7-membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic or heterocyclic ring, the F"" ring is a 5-7-membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic or heterocyclic ring, and the G"" ring is a 3-6-membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbocyclic or heterocyclic ring.
  • the E"" ring is a 5-6 membered monocyclic heterocycle, in particular a 5-6 membered partially unsaturated monocyclic heterocycle, for example
  • the F"" ring is a 5-7 membered saturated or partially unsaturated monocyclic carbon ring, heterocyclic ring or benzene ring, in particular a 5-6 membered partially unsaturated monocyclic heterocyclic ring or benzene ring, for example One of them.
  • the G"" ring is a 3-6 membered saturated monocyclic carbocyclic ring, for example One of the
  • R4 is selected from:
  • n can be 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, especially 1, 2 or 3.
  • C 3-10 cycloalkyl e.g.
  • C 4-8 cycloalkylalkyl e.g.
  • 3-10 membered saturated heterocyclic group e.g.
  • C 5-10 heteroaryl e.g.
  • each RB is independently selected from: H, -F, -Cl, -Br, -I, -CN, -CH3 , -CF 3 , -CHF 2 , -CH 2 F, -CH 2 CF 3 , -OH, Especially H, -F, -CN, -CH 3 , -CF 3 , -CHF 2 , -CH 2 F, -CH 2 CF 3 , -OH, -NH 2 ,
  • R4 is selected from:
  • Z is halogen (eg, F, Cl, Br, I).
  • the compound has the following structure:
  • a pharmaceutical composition which comprises the compound described in the first aspect, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, ester, prodrug, solvate, deuterated compound thereof, and one or more pharmaceutically acceptable excipients.
  • the pharmaceutically acceptable excipients may be selected from one or more of: disintegrants, binders, lubricants, suspending agents, stabilizers, fillers, absorption enhancers, surfactants, flavoring agents, antioxidants, preservatives, and the like.
  • the compound described in the first aspect or its pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, ester, prodrug, solvate, deuterated compound, can be used alone or in combination with other types of active ingredients.
  • the pharmaceutical composition can be administered by any suitable route, such as enteral administration or parenteral administration (eg, intravenous, intramuscular, subcutaneous, intraorgan, intranasal, intradermal, instillation, intracerebral, rectal, etc.).
  • enteral administration or parenteral administration eg, intravenous, intramuscular, subcutaneous, intraorgan, intranasal, intradermal, instillation, intracerebral, rectal, etc.
  • the pharmaceutical composition can be in any suitable dosage form, such as a dosage form for gastrointestinal administration, for example, including, but not limited to, tablets, pills, powders, granules, capsules, lozenges, syrups, liquids, emulsions, suspensions, etc.; a dosage form for parenteral administration, for example, an injectable dosage form: such as an injection (for example, for subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection), a dosage form for respiratory administration: such as a spray, an aerosol, a powder aerosol, etc., a dosage form for skin administration, such as an external solution, a lotion, an ointment, a plaster, a paste, a patch, etc., a dosage form for mucosal administration: such as eye drops, eye ointments, nasal drops, gargles, sublingual tablets, etc., a dosage form for cavity administration: such as suppositories, aerosols, effervescent tablets, drops,
  • various dosage forms of the above-mentioned pharmaceutical composition can be prepared according to conventional production methods in the pharmaceutical field, such as mixing the active ingredient with one or more pharmaceutically acceptable excipients and then preparing the mixture into the desired dosage form.
  • the weight percentage of the compound described in the first aspect, or its pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, ester, prodrug, solvate, deuterated compound can be 0.1-99.5%, for example, 0.5%, 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%.
  • a fourth aspect of the present invention there is provided use of the compound of the first aspect, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, ester, prodrug, solvate, or deuterated compound thereof, in the preparation of a drug for inhibiting HPK1 activity.
  • the inhibition includes, but is not limited to, inhibiting HPK1 protein activity.
  • the compound described in the first aspect or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, ester, prodrug, solvate, deuterated compound thereof, in the preparation of a drug for preventing and/or treating a disease.
  • the above-mentioned disease is a disease associated with HPK1.
  • the above-mentioned diseases are diseases associated with abnormal activity of HPK1, especially diseases that can be beneficially prevented and/or treated by inhibiting HPK1, such as autoimmune diseases, inflammatory diseases, and tumors.
  • autoimmune diseases include, but are not limited to, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific autoimmune diseases and systemic autoimmune diseases, for example, organ-specific
  • the above-mentioned inflammatory diseases include, but are not limited to, one or more of gout, chronic obstructive pulmonary disease, periodic fever, rash, lymphadenopathy, sepsis, asthma, and allergies.
  • the above-mentioned tumors include but are not limited to adrenal cancer, anal cancer, angiosarcoma, appendix cancer, bile duct cancer, bladder cancer, breast cancer, brain cancer, bronchial cancer, carcinoid tumor, cervical cancer, choriocarcinoma, chordoma, craniopharyngioma, colorectal cancer, connective tissue cancer, epithelial cancer, ependymoma, endothelial sarcoma, endometrial cancer, esophageal cancer, Ewing's sarcoma, eye cancer, gallbladder cancer, gastric cancer, gastrointestinal stromal tumor (GIST), germ cell cancer, head and neck cancer, hematological malignancies, hemangioblastoma, hypopharyngeal cancer, inflammatory bowel disease, Myofibroblastoma, immunocytic amyloidosis, kidney cancer, liver cancer, lung cancer, lei
  • the above tumor is a hematological malignancy, such as leukemia, lymphoma, and multiple myeloma (MM).
  • MM multiple myeloma
  • leukemia can be chronic lymphocytic leukemia (CLL) (e.g., B cell CLL, T cell CLL), chronic myeloid leukemia (CML) (e.g., B cell CML, T cell CML), acute lymphocytic leukemia (ALL) (e.g., B cell ALL, T cell ALL), acute myeloid leukemia (AML) (e.g., B cell AML, T cell AML), acute monocytic leukemia, particularly acute myeloid leukemia.
  • CLL chronic lymphocytic leukemia
  • CML chronic myeloid leukemia
  • ALL acute lymphocytic leukemia
  • AML acute myeloid leukemia
  • leukemia can be relapsed, refractory or drug-resistant.
  • the lymphoma can be Hodgkin lymphoma (HL) (e.g., B cell HL, T cell HL) and non-Hodgkin lymphoma (NHL) (e.g., B cell NHL such as diffuse large cell lymphoma (DLCL) (e.g., diffuse large B cell lymphoma), follicular lymphoma, chronic lymphocytic leukemia/small lymphocytic lymphoma (CLL/SLL), mantle cell lymphoma (MCL), marginal zone B cell lymphoma (e.g., mucosa-associated lymphoid tissue (MALT) lymphoma, nodular marginal zone B cell lymphoma, splenic marginal zone B cell lymphoma), primary mediastinal B cell lymphoma, Burkitt's lymphoma, lymphoplasmacytic lymphoma (i.e., Waldenstrom's macroglobulinemia ( macroglobulinemia), hairy cell leuk
  • the above tumors are multiple myeloma (MM), diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), and acute monocytic leukemia.
  • the disease is a disease related to pathogen infection
  • HPK1 is an immunosuppressive regulatory kinase that can negatively regulate T cell receptors.
  • the body's immune response can be triggered to achieve the effect of resisting pathogens (especially viruses), which can be beneficial to the prevention and treatment of diseases related to pathogen infection.
  • the pathogens can be microorganisms, parasites (protozoa, worms, etc.) or other agents.
  • the microorganisms can be selected from one or more of viruses, chlamydia, rickettsia, mycoplasma, bacteria, spirochetes, fungi, etc.
  • the pathogen is a virus, for example, but not limited to, adenoviridae (such as adenovirus), herpesviridae (such as HSV1 (oral herpes), HSV2 (external genital herpes), VZV (varicella), EBV (Epstein-Barr virus), CMV (cytomegalovirus)), poxviridae (such as smallpox virus, vaccinia virus), papovaviridae (such as papillomavirus (HPV)), parvoviridae (such as B19 virus), hepadnaviridae (such as hepatitis B virus), polyomaviridae (such as polyoma Viruses), Reoviridae (such as reovirus, rotavirus), Picornaviridae (such as enterovirus, foot-and-mouth disease virus), Caliciviridae (such as Norwalk virus, hepatitis E virus),
  • V-OC43 V-OC43, HCoV-NL63, HCoV-HKU1, SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, etc.
  • Astroviridae such as astrovirus
  • Bornaviridae such as Borna virus
  • retroviruses HIV
  • coronaviruses such as HCoV-229E, HCoV-OC43, HCoV-NL63, HCoV-HKU1, SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2, etc.
  • hepatitis B virus hepatitis B virus.
  • the diseases related to the above-mentioned pathogen infection include, but are not limited to, influenza, SARS, COVID-19, viral hepatitis (such as hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, etc.), AIDS, rabies, dengue fever, Ebola virus disease, etc., especially AIDS, COVID-19, and hepatitis B.
  • the compound described in the first aspect or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, ester, prodrug, solvate, or deuterated compound thereof can be used alone or in combination with other types of pharmaceutical preparations and/or therapeutic methods.
  • the other types of drug preparations are selected from: PD-1, PD-L1, CTLA-4, TIM-3, TGF- ⁇ and its receptors, LAG3 antagonists or TLR4, TLR7, TLR8, TLR9, STING agonists.
  • the other types of treatment methods are selected from: radiotherapy, immunotherapy (such as CAR-T cell therapy).
  • cancer has the corresponding definition described in the fifth aspect of the present invention.
  • the seventh aspect of the present invention there is provided the use of the compound described in the first aspect, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, ester, prodrug, solvate, or deuterated compound thereof, in combination with PD-1, PD-L1, CTLA-4, TIM-3, TGF- ⁇ and its receptors, LAG3 antagonists, or TLR4, TLR7, TLR8, TLR9, or STING agonists in cancer immunotherapy.
  • the seventh aspect of the present invention there is provided the use of the compound described in the first aspect, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, ester, prodrug, solvate, deuterated compound thereof, in combination with CAR-T immunotherapy in cancer immunotherapy.
  • a method for inhibiting HPK1 activity comprising the step of administering to a subject in need thereof the compound of the first aspect, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, ester, prodrug, solvate, deuterated compound thereof, or the pharmaceutical composition of the third aspect of the present invention.
  • the inhibition includes, but is not limited to, inhibiting HPK1 protein activity.
  • the above-mentioned subject can be a mammal, especially a human.
  • a method for preventing and/or treating HPK1-related diseases comprising the step of administering to a subject in need thereof the compound of the first aspect, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, ester, prodrug, solvate, deuterated compound thereof, or the pharmaceutical composition of the third aspect of the present invention.
  • the HPK1-related disease has the corresponding definition described in the fifth aspect of the present invention.
  • the above-mentioned subject can be a mammal, especially a human.
  • a method for preventing and/or treating cancer comprises the step of administering to a subject in need thereof the compound of the first aspect, or its pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, ester, prodrug, solvate, deuterated compound or the pharmaceutical composition of the third aspect of the present invention.
  • cancer has the corresponding definition described in the fifth aspect of the present invention.
  • the above-mentioned subject can be a mammal, especially a human.
  • the method may also include administering to the subject one or more other types of pharmaceutical preparations and/or therapeutic methods.
  • the other types of drug preparations are selected from: PD-1, PD-L1, CTLA-4, TIM-3, TGF- ⁇ and its receptors, LAG3 antagonists or TLR4, TLR7, TLR8, TLR9, STING agonists.
  • the other types of treatment methods are selected from: radiotherapy, immunotherapy (such as CAR-T cell therapy).
  • the method may also administer CAR-T cell therapy.
  • a method for enhancing the cytotoxicity of immune cells e.g., T cells
  • inhibiting exhaustion and/or enhancing spleen and/or tumor infiltration comprises the step of administering to a subject in need thereof the compound of the first aspect, or its pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, ester, prodrug, solvate, deuterated compound or the pharmaceutical composition of the third aspect of the present invention.
  • a method for identifying a candidate agent for use in combination with CAR-T cell therapy is provided.
  • the method may include the following steps:
  • the conditions for incubating the test agent, CAR-T cells, and tumor cells include any conditions known in the art, some of which are exemplified herein. Cytotoxicity can also be measured by any method known in the art.
  • the screening methods herein are also not limited to tumor cell types or any particular CAR-T cell population.
  • test agent is pre-screened as an HPK-1 kinase inhibitor.
  • test agent is not prescreened in an HPK-1 kinase inhibition assay.
  • the present invention synthesizes and prepares a series of compounds (especially pyridooxazepine derivatives), which can regulate (for example, inhibit) HPK1 kinase activity and can be used to treat various HPK1-related diseases including autoimmune diseases, inflammatory diseases, and tumors, and have good research and application value.
  • compounds especially pyridooxazepine derivatives
  • HPK1 kinase activity can be used to treat various HPK1-related diseases including autoimmune diseases, inflammatory diseases, and tumors, and have good research and application value.
  • aliphatic group refers to a straight or branched hydrocarbon chain that is completely saturated or contains one or more unsaturated units, or a cyclic hydrocarbon group that is completely saturated or contains one or more unsaturated units (also referred to as “carbocycle”, “aliphatic ring”, “cycloalkyl” in this article), which is connected to other parts of the molecule by a single bond.
  • Suitable aliphatic groups include, but are not limited to, linear or branched, substituted or unsubstituted alkyl, alkenyl, alkynyl, and mixtures thereof, such as (cycloalkyl)alkyl, (cycloalkenyl)alkyl, (cycloalkyl)alkenyl, etc.
  • Typical aliphatic groups contain 1 to 10 (e.g., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) carbon atoms, preferably 1 to 6 carbon atoms.
  • alkyl refers to a straight or branched hydrocarbon chain radical that does not contain an unsaturated bond, and the hydrocarbon chain radical is connected to the rest of the molecule by a single bond.
  • Typical alkyl groups contain 1 to 10 (e.g., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) carbon atoms, preferably 1 to 6 carbon atoms, such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, neopentyl, tert-pentyl, n-hexyl, isohexyl, etc.
  • alkyl is substituted by a cycloalkyl, it is correspondingly a "cycloalkylalkyl", such as cyclopropylmethyl, cyclopropylethyl, cyclobutylmethyl, cyclopentylmethyl, cyclohexylmethyl, etc.
  • cycloalkylalkyl such as cyclopropylmethyl, cyclopropylethyl, cyclobutylmethyl, cyclopentylmethyl, cyclohexylmethyl, etc.
  • aryl it is correspondingly an "aralkyl", such as benzyl, diphenylmethyl or phenethyl.
  • heterocyclic alkyl it is correspondingly a "heterocyclic alkyl”.
  • C 0 alkyl refers to H, i.e., C 0-10 alkyl includes H and C 1-10 alkyl.
  • alkylene refers to a hydrocarbon group (divalent alkyl) formed by losing two hydrogen atoms from an alkane molecule, which may be a straight chain or a branched chain and is connected to the rest of the molecule by a single bond.
  • a typical alkylene group has 1 to 10 (e.g., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) carbon atoms, preferably 1 to 6 carbon atoms, such as methylene ( -CH2- ), ethylene, propylene, butylene, etc.
  • C0 alkylene refers to a single bond, i.e., C0-10 alkylene includes a single bond and C1-10 alkylene.
  • cycloalkyl refers to alicyclic hydrocarbons, such as those containing 1 to 4 single rings and/or condensed rings, 3-18 carbon atoms, preferably 3-10 (e.g. 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) carbon atoms, such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl or adamantyl, etc.
  • alkoxy refers to a substituent formed by replacing the hydrogen in a hydroxy group with an alkyl group, such as an alkoxy group containing 1 to 10 carbon atoms, for example, methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, and the like.
  • alkylamino refers to an amino group ( -NH2 ) in which one or both hydrogen atoms are replaced by an alkyl group, such as an alkylamino group containing 1 to 10 carbon atoms, for example
  • halogen refers to fluorine, chlorine, bromine or iodine.
  • haloalkyl refers to a group in which one or more hydrogen atoms in an alkyl group are replaced by a halogen atom (eg, fluorine, chlorine , bromine or iodine), for example, -CHF2 , -CH2F , -CF3 , -CH2 - CF3 , -CH2CH2- CF3 , -CH2CH2CH2 - CF3 .
  • halogen atom eg, fluorine, chlorine , bromine or iodine
  • aryl refers to a monocyclic or polycyclic free radical, including a polycyclic free radical containing a monocyclic aromatic group and/or a condensed aromatic group, such as a radical containing 1-3 monocyclic or condensed rings and 6-18 (e.g., 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18) carbon ring atoms.
  • the C6 - C12 aryl group in the present invention refers to an aryl group containing 6-12 carbon ring atoms, such as phenyl, naphthyl, biphenyl, indenyl, etc.
  • heterocyclyl refers to a 3- to 18-membered ring group containing 2 to 17 carbon atoms and 1 to 10 heteroatoms selected from N, O or S atoms.
  • the heterocyclyl may be a monocyclic, bicyclic, tricyclic, or tetracyclic polycyclic system, which may include a fused (two rings share two ring atoms), a spiro (two rings share one ring atom) or a bridged (two rings share three or more ring atoms) ring system (excluding the case of linked rings).
  • the heterocyclyl may be partially saturated (heteroaryl) or fully saturated (heterocycloalkyl).
  • Suitable heteroaryl groups in the compounds of the present invention contain 1, 2 or 3 heteroatoms selected from N, O or S atoms, and the heteroaryl groups include, for example, coumarin, including 8-coumarin, quinolyl, including 8-quinolyl, isoquinolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrazolyl, pyrimidinyl, furanyl, pyrrolyl, thienyl, thiazolyl, isothiazolyl, triazolyl, tetrazolyl, isoxazolyl, oxazolyl, imidazolyl, indolyl, isoindole, indazolyl, indolizinyl, phthalazinyl, pteridinyl, purine oxadiazolyl, thiadiazolyl, furazolyl, pyridazinyl, triazinyl, cinnolinyl, benzimidazolyl,
  • Suitable heterocycloalkyl groups in the compounds of the present invention contain 1, 2 or 3 heteroatoms selected from N, O or S atoms, and include, for example, pyrrolidinyl, tetrahydrofuranyl, dihydrofuranyl, tetrahydrothiophenyl, tetrahydrothiopyranyl, piperidinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, oxathiolanyl, piperazinyl, azetidinyl, oxetanyl, thietanyl, homopiperidinyl, oxirane, thiirane, azepanyl, oxepanyl, oxazepanyl , diazepinyl, triazepinyl, 1,2,3,6-tetrahydropyridinyl, 2-pyrrolinyl, 3-pyrrolinyl, dihydroindolinyl, 2H-pyranyl, 4
  • pharmaceutically acceptable salts includes acid addition salts and base addition salts.
  • acid addition salt includes, but is not limited to, salts from inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid and phosphonic acid, and salts from organic acids such as aliphatic mono- and dicarboxylic acids, phenyl-substituted alkanoic acids, hydroxyalkanoic acids, alkanedioic acids, aromatic acids and aliphatic and aromatic sulfonic acids. Salt.
  • inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid and phosphonic acid
  • organic acids such as aliphatic mono- and dicarboxylic acids, phenyl-substituted alkanoic acids, hydroxyalkanoic acids, alkanedioic acids, aromatic acids and aliphatic and aromatic sulfonic acids.
  • these salts include but are not limited to sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate, hydrochloride, hydrobromide, iodate, acetate, propionate, caprylate, isobutyrate, oxalate, malonate, succinate, suberate, sebacate, fumarate, maleate, mandelate, benzoate, chlorobenzoate, methylbenzoate, dinitrobenzoate, phthalate, benzenesulfonate, toluenesulfonate, phenylacetate, citrate, lactate, maleate, tartrate and mesylate, also comprising amino acid salts such as arginate, gluconate, galacturonate etc.
  • Acid addition salts can be prepared by contacting the free alkali form with a sufficient amount of the required acid to form a salt in a conventional manner.
  • the free alkali form can be regenerated by contacting the salt form with an alkali, and the free alkali is separated in a conventional manner.
  • base addition salt refers to a salt formed with a metal or amine, such as an alkali metal and alkaline earth metal hydroxide, or with an organic amine.
  • metals used as cations include, but are not limited to, sodium, potassium, magnesium, and calcium.
  • suitable amines include, but are not limited to, N,N'-dibenzylethylenediamine, chloroprocaine, choline, diethanolamine, ethylenediamine (ethane-1,2-diamine), N-methylglucamine, and procaine.
  • Base addition salts can be prepared by contacting the free acid form with a sufficient amount of the desired base in a conventional manner to form a salt. The free acid form can be regenerated by contacting the salt form with an acid and isolating the free acid in a conventional manner.
  • stereoisomer includes the presence of enantiomers, diastereomers and geometric isomers.
  • Some compounds of the present invention have cyclic hydrocarbon groups that can be substituted on more than one carbon atom, in which case all geometric forms, including cis and trans, and mixtures thereof, are within the scope of the present invention.
  • solvate refers to a physical association of a compound of the invention with one or more solvent molecules.
  • the physical association includes various degrees of ionic and covalent bonding, including hydrogen bonding.
  • the solvate can be isolated, for example when one or more solvent molecules are incorporated into the crystal lattice of a crystalline solid.
  • Solvates include solution phases and separable solvates.
  • Representative solvates include ethanolates, methanolates, and the like.
  • prodrug refers to a form of the compound of formula I which is suitable for administration to patients without undue toxicity, irritation, allergic response, etc. and is effective for its intended use, including acetal, ester and zwitterion forms.
  • the prodrug is transformed in vivo, such as by hydrolysis in the blood, to yield the parent compound.
  • deuterated compound refers to a compound substituted with deuterium, wherein “substituted with deuterium” means that one or more hydrogen atoms are replaced with a corresponding number of deuterium atoms.
  • the compounds of the present invention will inherently contain small amounts of deuterated isotopologues. Despite this variation, the concentrations of such naturally abundant stable hydrogen and carbon isotopes are low and insignificant compared to the degree of stable isotopic substitution in the compounds of the present invention. See, for example, Wada, E et al., Seikagaku, 1994, 66:15; Gannes, LZ et al., Comp Biochem Physiol Mol Integr Physiol, 1998, 119:725.
  • any atom not designated as deuterium is present at its natural isotopic abundance.
  • a position is specifically designated as “H” or “hydrogen”
  • the position is understood to have hydrogen according to its natural abundance isotopic composition.
  • a position is specifically designated as "D” or “deuterium”
  • the position is understood to have deuterium at an abundance of at least 3000 times greater than the natural abundance of deuterium (which is 0.015%) (i.e., at least 45% deuterium incorporation).
  • isotopic enrichment factor refers to the ratio between the isotopic abundance and the natural abundance of a particular isotope.
  • the compounds of the invention have an isotopic enrichment factor for each designated deuterium atom of at least 3500 (52.5% deuterium incorporation at each designated deuterium atom), at least 4000 (60% deuterium incorporation), at least 4500 (67.5% deuterium incorporation), at least 5000 (75% deuterium incorporation), at least 5500 (82.5% deuterium incorporation), at least 6000 (90% deuterium incorporation), at least 6333.3 (95% deuterium incorporation), at least 6466.7 (97% deuterium incorporation), at least 6600 (99% deuterium incorporation), or at least 6633.3 (99.5% deuterium incorporation).
  • isotopologue refers to species wherein the chemical structure differs from a specific compound of the present invention only in its isotopic composition.
  • patient or “subject” and the like are used interchangeably herein and refer to any animal or cell thereof treated according to the methods described herein, whether in vitro or in situ.
  • the aforementioned animal includes mammals, e.g., rats, mice, guinea pigs, rabbits, dogs, monkeys or humans, particularly humans.
  • treating refers to preventing, curing, reversing, attenuating, alleviating, minimizing, inhibiting, suppressing and/or halting one or more clinical symptoms of a disease after onset of the disease.
  • prevent refers to avoiding, minimizing or making the onset or development of a disease difficult by treating it before it occurs.
  • disease associated with HPK1 mainly refers to diseases associated with abnormal HPK1 activity, especially diseases that can be beneficially prevented and/or treated by inhibiting HPK1.
  • tumor refers to an abnormal mass of tissue, wherein the growth of the mass exceeds the growth of normal tissue and is not coordinated with the growth of normal tissue.
  • Tumors can be “benign” or “malignant”, depending on the following characteristics: degree of cell differentiation (including morphology and function), growth rate, local invasion and metastasis.
  • benign tumors are usually well-differentiated, characterized by slower growth than malignant tumors, and remain confined to the site of origin. In addition, benign tumors do not have the ability to infiltrate, invade or metastasize to distant sites.
  • tumors may later lead to malignant tumors, which may be caused by additional genetic changes in a subpopulation of the neoplastic cells of the tumor, and these tumors are called “precancerous tumors".
  • malignant tumors are usually poorly differentiated (anaplastic) and have a characteristic rapid growth, accompanied by progressive infiltration, invasion and destruction of surrounding tissues.
  • malignant tumors usually have the ability to metastasize to distant sites.
  • cancer refers to a malignant tumor (Stedman’s Medical Dictionary, 25th ed.; Hensyl ed.; Williams & Wilkins: Philadelphia, 1990).
  • autoimmune disease refers to a disease caused by the body's immune response to its own antigens, resulting in damage to its own tissues.
  • inflammation refers to the body's defensive response to irritation, manifested as redness, swelling, heat, pain, and dysfunction; it can be caused by infection. Infectious inflammation may also be non-infectious inflammation not caused by infection, such as inflammation caused by immune response (such as various types of hypersensitivity reactions, inflammation caused by some autoimmune diseases).
  • inflammatory disease refers to a disease with inflammation.
  • diseases associated with pathogen infection mainly refers to diseases caused by pathogen infection, which include symptoms of body damage and infection response caused by pathogen invasion.
  • CAR-T immunotherapy refers to chimeric antigen receptor T cell immunotherapy, which is one of the more effective treatments for malignant tumors. Its basic principle is to use the patient's own immune cells to eliminate cancer cells. It is a type of cell therapy.
  • HPK1 inhibitor refers to molecules that reduce, inhibit, or otherwise reduce one or more biological activities of HPK1, such as serine/threonine kinase activity, binding to adaptor proteins (such as SLP76 family, Gads, HIP-55, GRB2 family). Inhibition using an HPK1 inhibitor does not necessarily indicate complete elimination of HPK1 activity.
  • HPK1 activity may be reduced by a significant amount compared to a control, such as a reduction in HPK1 activity of at least about 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100%.
  • the HPK1 inhibitor reduces, inhibits, or otherwise reduces the serine/threonine kinase activity of HPK1.
  • the HPK1 inhibitor reduces, inhibits or otherwise reduces HPK1-mediated phosphorylation of SLP76 and/or Gads.
  • the compounds described herein directly bind to HPK1 and inhibit its kinase activity.
  • step 1
  • the reaction mixture was quenched by adding 40 mL of 1.2 M NaHCO 3 solution at 0 ° C, then diluted with 100 mL of water and extracted with 150 mL of DCM (50 mL ⁇ 3). The combined organic layer was washed with brine 200 mL (100 mL ⁇ 2), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to obtain a residue.
  • the crude product 5-chloro-1,6,8-triazatricyclo[7.2.1.02,7]dodeca-2(7),3,5-triene (205 mg, crude) as a yellow solid was used in the next step without further purification, which was confirmed by LCMS.
  • step 1
  • step 1
  • step 1
  • step 1
  • step 1
  • step 1
  • compound 1 (10 g, 51.02 mmol), compound 2 (30 mL, 102.04 mmol, 3.5 mol/L), potassium carbonate (14 g, 102.04 mmol) and RuPhosPd3 (2.1 g, 0.05 mmol) in dioxane (120 mL) and H 2 O (20 mL) were stirred at 100°C for 2 hours.
  • step 1
  • compound 4 (4.5 g, 17.60 mmol) was dissolved in tetrahydrofuran (20 mL), cooled in an ice bath, and a tetrahydrofuran solution of lithium aluminum hydride (1 M, 26.4 mL, 26.4 mmol) was added dropwise. After the addition, the temperature was raised to 70 degrees for reaction for 3 hours, then cooled to 0 degrees, water (16 mL) was added, stirred for 15 minutes, and then sodium hydroxide aqueous solution (15% W/W, 20 mL) was added, and stirred for another 15 minutes.
  • step 1
  • step 1
  • step 1
  • step 1
  • step 1
  • step 1
  • step 1
  • step 1
  • the compound was dissolved in 100% DMSO, and the stock concentration was 10mM.
  • the starting concentration of the test was 5uM, three-fold gradient dilution, ten data points, and each point was repeated twice.
  • HPK1 protein was purchased from Thermo (Cat. No.: PV6355), diluted to 2X stock solution, and the concentration was 10nM (the final protein concentration of the enzyme activity assay was 5nM).
  • 2X HPK1 protein 2.5 ⁇ l 2X HPK1 protein was added to each well of the plate containing the test compound, centrifuged at 1000rpm for 30 seconds, and then incubated at 25°C for 15 minutes.
  • MBP protein was purchased from Millipore (Cat. No.: 13-110), and ATP was purchased from Sigma (Cat. No.: A7699-5G). The two were prepared into 2X working solution with concentrations of 4uM and 80uM. 2.5 ⁇ l of the mixture of 2X MBP and ATP was added, centrifuged at 1000rpm for 30 seconds, and then incubated at 25°C for 90 minutes. Then 5ul ADP-GloTM (Promega, Cat.
  • GLK enzymatic kit was purchased from Promega (Cat#VA7177). ATP was purchased from Sigma (Cat#A7699-5G), BSA was purchased from Miltenyi Biotec (Cat#130-091-376), and ADP-GLO kit was purchased from Promega (Cat#V9102).
  • the ADP-GLO method can be used to detect the activity of GLK in the GLK enzymology kit and the inhibitory effect of compounds on GLK activity.
  • the experimental reaction was carried out in a 384-well plate (Conrning, Cat#4512) with a total reaction system of 20ul.
  • the reaction system mainly includes 1 ⁇ kinase buffer, 0.1mg/ml BSA, 500 ⁇ M DTT, 12.5nM GLK, 0.1ug/ul PKA substrate and 30uM ATP.
  • the compound was diluted with DMSO to 10 concentration points and 50nl was transferred to the experimental assay plate.
  • the experimental reaction started after the addition of 12.5nM GLK.
  • the luminescent signal value was converted into a percentage inhibition rate.
  • Inhibition rate % (sample value - maximum value) / (minimum value - maximum value) ⁇ 100.
  • the minimum value refers to the value measured in the wells without GLK but with DMSO and substrate (PKA substrate and ATP), and the maximum value refers to the value measured in the wells with DMSO, GLK and substrate (PKA substrate and ATP).
  • KHS1 enzyme kit was purchased from Promega (Cat#V4108). ATP was purchased from Sigma (Cat#A7699-5G), staurosporine was purchased from MedChemExpress (Cat#HY-15141), BSA was purchased from Miltenyi Biotec (Cat#130-091-376), and ADP-GLO kit was purchased from Promega (Cat#V9102).
  • the ADP-GLO method can be used to detect the activity of KHS1 in the KHS1 enzymology kit and the inhibitory effect of compounds on KHS1 activity.
  • the experimental reaction was carried out in a 384-well plate (Conrning, Cat#4512) with a total reaction system of 20ul.
  • the reaction system mainly includes 1 ⁇ kinase buffer, 0.1mg/ml BSA, 50 ⁇ M DTT, 0.8ug/ml KHS1, 0.1ug/ul MBP protein and 10uM ATP.
  • the compound was diluted with DMSO to 10 concentration points and 50nl was transferred to the experimental assay plate.
  • the experimental reaction was started after the addition of 0.8ug/ml KHS1.
  • the luminescence signal value is converted into a percentage inhibition rate.
  • Inhibition rate % (sample value - maximum value) / (minimum value - maximum value) ⁇ 100.
  • the minimum value refers to the The values measured in the wells with KHS1 added but DMSO and substrate (MBP protein and ATP) added, and the maximum value refers to the value measured in the wells with DMSO, KHS1 and substrate (MBP protein and ATP) added.
  • the compound storage concentration is 10mM, and it is diluted 3-fold to 8 concentration gradients with DMSO, and then diluted 10-fold with PBS. 2uL of the diluted compound of different concentrations is added to each well and mixed evenly;
  • the compounds of the present invention can effectively increase the production of IL-2 in PBMC.
  • Fold change 1.5
  • the concentration of the compound can be lower than 4000nM, and further, it can be lower than 2000nM, lower than 1000nM, and even lower than 500nM, which is very beneficial for improving the body's immune ability and treating tumors, inflammatory diseases and other diseases.

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Abstract

提供了一种HPK1激酶抑制剂及其制备方法和应用。该激酶抑制剂可调节(例如抑制)HPK1激酶活性，可用于治疗包括自身免疫性疾病、炎症性疾病、肿瘤、病原体感染性疾病在内的多种与HPK1相关的疾病，具有较佳的研究和应用价值。

Description

一种HPK1激酶抑制剂及其制备方法和应用 技术领域
本发明涉及化学医药技术领域，具体涉及一种HPK1激酶抑制剂及其制备方法和应用。
背景技术
造血祖细胞激酶1(hematopoietic progenitor kinase 1，HPK1，又名MAP4K1)是造血系统特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，属于哺乳动物STE20相关蛋白激酶的MAP4K家族。HPK1主要在造血组织和细胞中表达。大量研究结果表明，HPK1参与多种细胞事件，包括促分裂原活化蛋白激酶信号传导、核因子-κB信号传导、细胞因子信号传导、细胞增殖和凋亡、T细胞受体/B细胞受体信号和T/B/树突状细胞介导的免疫反应，在免疫中具有多种作用，并与自身免疫性疾病、癌症和炎症反应的发病机制有关(例如Zhang Q,Ding S,Zhang H.Interactions between hematopoietic progenitor kinase 1and its adaptor proteins(Review).Mol Med Rep.2017 Nov；16(5):6472-6482.中所述)。
临床研究表明，HPK1是一种潜在的肿瘤免疫治疗靶点，例如Sawasdikosol等人报道了破坏T细胞和DC细胞的HPK1基因有助于抑制肺癌细胞的生长，HPK1可作为抗肿瘤免疫治疗的新靶点(Sawasdikosol S,Zha R,Yang B,Burakoff S.HPK1as a novel target for cancer immunotherapy.Immunol Res.2012 Dec；54(1-3):262-5.)。此外，据报道，HPK1激酶是TCR信号的关键负反馈调节因子，会破坏TCR信号复合体的稳定性，抑制HPK1可增强T细胞活性，因此，HPK1可作为改善免疫治疗反应的有吸引力的药物靶标(例如Si,J.,Shi,X.,Sun,S.,Zou,B.,&Liao,X..(2020).Hematopoietic progenitor kinase1(hpk1)mediates t cell dysfunction and is a druggable target for t cell-based immunotherapies.Cancer Cell,38(4).中所述)。
可见，HPK1激酶在疾病治疗特别是癌症治疗中具有关键作用，HPK1激酶小分子抑制剂的发现是目前的迫切需求。
发明内容
为克服现有技术的不足，本发明公开了一种化合物及其制备方法和应用，该化合物可调节(例如抑制)HPK1激酶活性，可用于治疗包括自身免疫性疾病、炎症性疾病、肿瘤在内的多种与HPK1相关的疾病。
在本发明第一方面，提供一种化合物，其具有如下结构：
其中，
Y为C(R')或N；
X选自：共价键、-O-、-S-、-NR'-、-S(O)2-、-S(O)2NR'-、-S(O)-、-S(O)NR'-、-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)NR'-、-C(O)N(R')O-、-OC(O)-、-OC(O)NR'-、-N(R')C(O)O-、-N(R')C(O)-、-N(R')S(O)2-；或者，X为C1-4二价饱和或不饱和直链或支链烃链，其中烃链的一个或两个亚甲基单元任选且独立地被-C(R'R”)-、-N(R')-、-N(R')C(O)-、-C(O)N(R')-、-N(R')S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-或-S(O)2取代；
R1为11元以上饱和或部分不饱和的双环杂环基、11元以上饱和或部分不饱和的三环杂环基，其中所述杂环基可以被m个RA取代，m为0-6的整数(例如0、1、2、3、4、5、6)；
R2和R3独立地选自以下基团：H、卤素、-CN、-NO2、-OR'、-NR'R”、-S(O)t-R'、-S(O)t-NR'R”、-COR'、-C(O)OR'、-C(O)NR'R”、-C(O)N(R')OR”、-OC(O)R'、-OC(O)NR'R”、-NR'C(O)R”、-N(R')C(O)NR'R'、-N(R')C(NR')NR'R'、-NR'-S(O)t-R'、-NR'-S(O)t-NR'R'、-N＝S(O)R'R”、-S(NR')(O)R”、-N(R')CN、-P(O)(R')NR'R”、-P(O)(R')OR”或-P(O)R'R”、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环基烷基，其中所述基团中的一个或多个H可以被选自以下的取代基取代：卤素、-CN、-NO2、-OR'、-NR'R”、-S(O)t-R'、 -S(O)t-NR'R”、-COR'、-C(O)OR'、-C(O)NR'R”、-C(O)N(R')OR”、-OC(O)R'、-OC(O)NR'R”、-NR'C(O)R”、-N(R')C(O)NR'R'、-N(R')C(NR')NR'R'、-NR'-S(O)t-R'、-NR'-S(O)t-NR'R'、-N＝S(O)R'R”、-S(NR')(O)R”、-N(R')CN、-P(O)(R')NR'R”、-P(O)(R')OR”或-P(O)R'R”；或，R2和R3与其连接的碳原子一起形成碳环或杂环；或，R2和X与其连接的碳原子一起形成碳环或杂环；所述碳环或杂环上的一个或多个H可以被选自以下的取代基取代：卤素、-CN、-NO2、-OR'、-NR'R”、-S(O)t-R'、-S(O)t-NR'R”、-COR'、-C(O)OR'、-C(O)NR'R”、-C(O)N(R')OR”、-OC(O)R'、-OC(O)NR'R”、-NR'C(O)R”、-N(R')C(O)NR'R'、-N(R')C(NR')NR'R'、-NR'-S(O)t-R'、-NR'-S(O)t-NR'R'、-N＝S(O)R'R”、-S(NR')(O)R”、-N(R')CN、-P(O)(R')NR'R”、-P(O)(R')OR”或-P(O)R'R”；
R4为脂肪环、芳环或杂环基团，其中所述基团可以被n个RB取代，n为0-6的整数(例如0、1、2、3、4、5、6)；或，R3和R4与其连接的碳原子一起形成碳环或杂环，所述碳环或杂环上的一个或多个H可以被选自以下的取代基取代：卤素、-CN、-NO2、-OR'、-NR'R”、-S(O)t-R'、-S(O)t-NR'R”、-COR'、-C(O)OR'、-C(O)NR'R”、-C(O)N(R')OR”、-OC(O)R'、-OC(O)NR'R”、-NR'C(O)R”、-N(R')C(O)NR'R'、-N(R')C(NR')NR'R'、-NR'-S(O)t-R'、-NR'-S(O)t-NR'R'、-N＝S(O)R'R”、-S(NR')(O)R”、-N(R')CN、-P(O)(R')NR'R”、-P(O)(R')OR”或-P(O)R'R”；
各RA和RB独立地选自：H、＝O、卤素、-CN、-NO2、-OR'、-NR'R”、-S(O)t-R'、-S(O)t-NR'R”、-COR'、-C(O)OR'、-C(O)NR'R”、-C(O)N(R')OR”、-OC(O)R'、-OC(O)NR'R”、-NR'C(O)R”、-N(R')C(O)NR'R'、-N(R')C(NR')NR'R'、-NR'-S(O)t-R'、-NR'-S(O)t-NR'R'、-N＝S(O)R'R”、-S(NR')(O)R”、-N(R')CN、-P(O)(R')NR'R”、-P(O)(R')OR”或-P(O)R'R”、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环基烷基；
t为0、1或2；
各R'和R”独立地选自：H、卤素、-CN、-NO2、烷基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环基烷基；或，与同一个氮连接的R'和R”与该氮原子一起形成杂环。
在本发明的一个实施方式中，Y为C(R')，例如，CH、CCl、CF、CCH3，特别是CH。
在本发明另一个实施方式中，Y为N。
具体地，X可以选自：共价键、-O-、-S-、-NR'-、-S(O)2-、-S(O)2NR'-、-S(O)-、-S(O)NR'-、-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)NR'-、-C(O)N(R')O-、-OC(O)-、-OC(O)NR'-、-N(R')C(O)O-、-N(R')C(O)-、-N(R')S(O)2-。
在本发明的一个实施方式中，X为-NR'-，R'为H、C1-6烷基、C3-6环烷基，特别是，X为-NH-。
在本发明的一个实施方式中，R2和R3与其连接的碳原子一起形成碳环或杂环，例如，4-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、4-7元饱和或部分不饱和的单环杂环、7-12元饱和或部分不饱和的双环碳环、7-12元饱和或部分不饱和的双环杂环；在本发明的一些实施例中，R2和R3与其连接的碳原子一起形成5元饱和杂环，例如，所述化合物可以具有如下结构：
其中，R5和R6独立地选自：H、任选取代的C1-6脂肪族基团，或者，R5和R6与其中间的原子一起形成任选取代的杂环基。
在本发明另一个实施方式中，R2为-C(O)NR'R”，R'和R”可以独立地选自：H、卤素、-CN、-NO2、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基，或R'和R”与氮原子一起形成4-7元饱和或部分不饱和的单环杂环、7-12元饱和或部分不饱和的双环杂环；在本发明的一些实施例中，R'和R”均为H，所述化合物可以具有如下结构：

其中，R5和R6独立地选自：H、任选取代的C1-6脂肪族基团，或者，R5和R6与其中间的原子一起形成任选取代的杂环基。
在本发明另一个实施方式中，R2和X与其连接的碳原子一起形成碳环或杂环，例如，4-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、4-7元饱和或部分不饱和的单环杂环、7-12元饱和或部分不饱和的双环碳环、7-12元饱和或部分不饱和的双环杂环；在本发明的一些实施例中，R2和X与其连接的碳原子一起形成5-6元单环杂环，特别是5-6元单环含氮杂芳环，例如，所述化合物可以具有如下结构：
其中，R5和R6独立地选自：H、任选取代的C1-6脂肪族基团，或者，R5和R6与其中间的原子一起形成任选取代的杂环基。
具体地，R5选自：H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基。
具体地，R6选自：H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基。
在本发明的一些实施例中，R5为H。
在本发明的一些实施例中，R6为H。
在本发明的一些实施例中，所述化合物可以具有如下结构：
具体地，R3可以选自：H、卤素、-CN、-NO2、-CF3、-OCF3、-OR'、-NR'R”、-S(O)t-R'、-S(O)t-NR'R”、-COR'、-C(O)OR'、-C(O)NR'R”、-C(O)N(R')OR”、-OC(O)R'、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、C4-10环烷基烷基。
具体地，R1可以为11元以上饱和或部分不饱和的稠合双环杂环基、11元以上饱和或部分不饱和的桥接双环杂环基、11元以上饱和或部分不饱和的螺接双环杂环基、13元以上饱和或部分不饱和的稠合三环杂环基、13元以上饱和或部分不饱和的桥接三环杂环基、13元以上饱和或部分不饱和的螺接三环杂环基、13元以上饱和或部分不饱和的部分稠合(其他环螺接或桥接)的三环杂环基，其中所述杂环基可以被m个RA取代，m为0-6的整数(例如0、1、2、3、4、5、6)。
具体地，R1可以为11元以上饱和或部分不饱和的稠合双环杂环基、11元以上饱和或部分不饱和的螺接双环杂环基、11元以上饱和或部分不饱和的桥接双环杂环基、11元以上饱和或部分不饱和的稠合三环杂环基、11元以上饱和或部分不饱和的部分稠合(其他环螺接或桥接)三环杂环基，其中所述杂环基可以被m个RA 取代，m为0-6的整数(例如0、1、2、3、4、5、6)。
在本发明的一个实施方式中，R1为11元以上饱和或部分不饱和的稠合双环杂环基，其中所述双环杂环基可以被m个RA取代，m为0-6的整数(例如0、1、2、3、4、5、6)，例如，R1为其中，A环可以为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，B环为7-10元(例如7、8、9、10元)饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环。
在本发明的一些实施例中，A环为5-6元单环杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 特别是
在本发明的一些实施例中，为 中的一种，特别是
在本发明的一些实施例中，B环为7-8元饱和或部分不饱和的单环碳环或杂环或桥接杂环，例如 中的一种，特别是
在本发明的一些实施例中，R1选自：
在本发明另一个实施方式中，R1为13元以上饱和或部分不饱和的稠合三环杂环基，其中所述三环杂环基可以被m个RA取代，m为0-6的整数(例如0、1、2、3、4、5、6)，例如，R1为其中，A'环与B'环稠合，B'环与C'环稠合，A'环可以为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，B'环可以为7-10元(例如7、8、9、10元)饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，C'环可以为4-8元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环。
在本发明的一些实施例中，A'环为5-6元单环杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 特别是
在本发明的一些实施例中，为 中的一种，特别是
在本发明的一些实施例中，B'环为7-8元饱和或部分不饱和的单环碳环或杂环，例如 中的一种，特别是
在本发明的一些实施例中，C'环为5-6元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，例如 中的一种。
在本发明的一些实施例中，R1选自：
在本发明另一个实施方式中，R1为13元以上饱和或部分不饱和的部分稠合(其他环螺接或桥接)的三环杂环基，其中所述三环杂环基可以被m个RA取代，m为0-6的整数(例如0、1、2、3、4、5、6)，例如，R1为其中，A”环与B”环稠合，B”环与C”环螺接，A”环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，B”环为7-10元(例如7、8、9、10元)饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，C”环为3-6元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环。
在本发明的一些实施例中，A”环为5-6元单环杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 特别是
在本发明的一些实施例中，B”环为7-8元饱和或部分不饱和的单环碳环或杂环，例如 中的一种，特别是
在本发明的一些实施例中，C”环为3-6元饱和的单环碳环，例如中的一种，特别是
在本发明的一些实施例中，R1选自：
具体地，m可以为0、1、2、3、4、5、6，特别是1、2或3。
具体地，各RA可以独立地选自：H、＝O、卤素(例如-F)、-CN、-NO2、C1-6烷基(例如-CH3、 )、C1-6卤代烷基(例如-CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3)、-OH、C1-6烷氧基(例如)、C1-6羟基取代烷基(例如)、 C1-6烷氧基取代烷基(例如)、-NH2、C1-6烷胺基(例如 )、C1-6烷胺基取代烷基(例如 )、C3-10环烷基(例如 )、C4-8环烷基烷基(例如 )、3-10元饱和杂环基(例如 )、C5-10杂芳基(例如 )、
在本发明的一些实施例中，各RA独立地选自：H、-F、-Cl、-Br、-I、-CH3、 -CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3、-OH、 特别是H、-F、-CN、-CH3、-CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3、-OH、-NH2。
在本发明的一些实施例中，R1选自：


具体地，R4可以为，例如，3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环、8-12元饱和或部分不饱和的双环碳环、8-12元饱和或部分不饱和的双环杂环、10元以上饱和或部分不饱和的三环碳环、10元以上饱和或部分不饱和的三环杂环、苯环、萘环、蒽环基团，其中所述基团可以被n个RB取代，n为0-6的整数(例如0、1、2、3、4、5、6)。
在本发明的一个实施方式中，R4为3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环基团，其中所述基团可以被n个RB取代，n为0-6的整数(例如0、1、2、3、4、5、6)，例如，R4为E环为4-6元饱和或部分不饱和的单环杂环基团，例如 中的一种。
在本发明的一些实施例中，R4选自：
在本发明另一个实施方式中，R4为8-12元饱和或部分不饱和的稠合双环杂环基，其中所述双环杂环基可以被n个RB取代，n为0-6的整数(例如0、1、2、3、4、5、6)，例如，R4为其中，E'环与F'环稠合，E'环可以为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，F'环可以为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环。
在本发明的一些实施例中，E'环为5-6元饱和或部分不饱和的单环杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种。
在本发明的一些实施例中，F'环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种。
在本发明的一些实施例中，R4选自：


在本发明另一个实施方式中，R4为10元以上饱和或部分不饱和的三环杂环基，其中所述三环杂环基可以被n个RB取代，n为0-6的整数(例如0、1、2、3、4、5、6)，例如，R4为其中，E”环与F”环稠合，F”环与G”环稠合，E”环可以为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，F”环可以为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环、G”环可以为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环。
在本发明的一些实施例中，E”环为5-6元饱和或部分不饱和的单环杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种。
在本发明的一些实施例中，F”环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种。
在本发明的一些实施例中，G”环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，例如 中的一种。
在本发明的一些实施例中，R4选自：
在本发明另一个实施方式中，R4为10元以上饱和或部分不饱和的三环杂环基，其中所述三环杂环基可以被n个RB取代，n为0-6的整数(例如0、1、2、3、4、5、6)，例如，R4为其中E”'环与F”'、G”'环均稠合，F”'环与G”'环也稠合，E”'环可以为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，F”'环可以为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环、G”'环可以为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环。
在本发明的一些实施例中，E”'环为5-6元饱和或部分不饱和的单环杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种。
在本发明的一些实施例中，F”'环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种。
在本发明的一些实施例中，G”'环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，例如 中的一种。
在本发明的一些实施例中，R4选自：
在本发明另一个实施方式中，R4为10元以上饱和或部分不饱和的三环杂环基，其中所述三环杂环基可以被n个RB取代，n为0-6的整数(例如0、1、2、3、4、5、6)，例如，R4为其中，E””环与F””环稠合，F””环与G””环螺接，E””环可以为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环或杂环，F””环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环或杂环，G””环为3-6元饱和或部分不饱和的单环碳环或杂环。
在本发明的一些实施例中，E””环为5-6元单环杂环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环，例如
在本发明的一些实施例中，F””环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种。
在本发明的一些实施例中，G””环为3-6元饱和的单环碳环，例如中的一种，特别是
在本发明的一些实施例中，R4选自：
具体地，n可以为0、1、2、3、4、5、6，特别是1、2或3。
具体地，各RB可以独立地选自：、＝O、卤素(例如-F)、-CN、-NO2、C1-6烷基(例如-CH3、 )、C1-6卤代烷基(例如-CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3)、-OH、C1-6烷氧基(例如)、C1-6羟基取代烷基(例如)、C1-6烷氧基取代烷基(例如)、-NH2、C1-6烷胺基(例如 )、C1-6烷胺基取代烷基(例如 )、C3-10环烷基(例如 )、C4-8环烷基烷基(例如 )、3-10元饱和杂环基(例如 )、C5-10杂芳基(例如 )、
在本发明的一些实施例中，各RB独立地选自：H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH3、 -CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3、-OH、 特别是H、-F、-CN、-CH3、-CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3、-OH、-NH2、
在本发明的一些实施例中，R4选自：


Z为卤素(例如F、Cl、Br、I)。
在本发明的一些实施例中，所述化合物具有如下结构：








在本发明第二方面，提供第一方面所述化合物的药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物。
在本发明第三方面，提供一种药物组合物，其包含第一方面所述化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物，以及一种或多种药学上可接受的辅料。
具体地，药学上可接受的辅料可选自：崩解剂、粘结剂、润滑剂、悬浮剂、稳定剂、填充剂、吸收促进剂、表面活性剂、矫味剂、抗氧化剂、防腐剂等中的一种或多种。
具体地，在该药物组合物中，第一方面所述化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物，可单独使用，也可与其他种类的活性成分联合使用。
具体地，该药物组合物可以采用任何合适的给药途径，例如胃肠道给药或非胃肠道给药(例如，静脉内、肌内、皮下、器官内、鼻内、皮内、滴注、脑内、直肠内等)途径。
具体地，该药物组合物可以为任何合适的剂型，例如经胃肠道给药剂型，例如，包括，但不限于，片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、锭剂、糖浆剂、液体、乳剂、混悬剂等；非经胃肠道给药剂型，例如，注射给药剂型：如注射剂(例如，用于皮下注射、静脉注射、肌内注射、腹膜内注射)，呼吸道给药剂型：如喷雾剂、气雾剂、粉雾剂等，皮肤给药剂型，如外用溶液剂、洗剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂等，粘膜给药剂型：如滴眼剂、眼用软膏剂、滴鼻剂、含漱剂、舌下片剂等，腔道给药剂型：如栓剂、气雾剂、泡腾片、滴剂、滴丸剂等，用于直肠、阴道、尿道、鼻腔、耳道等。
具体地，上述药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种药学上可接受的辅料混合，然后将其制成所需的剂型。
具体地，上述药物组合物中，第一方面所述化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物的重量百分比可以为0.1-99.5％，例如0.5％，1％，5％，10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，95％，99％。
在本发明第四方面，提供第一方面所述化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物，在制备抑制HPK1活性的药物中的应用。
具体地，所述抑制包括但不限于，抑制HPK1蛋白活性。
在本发明第五方面，提供第一方面所述化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物，在制备预防和/或治疗疾病的药物中的应用。
在本发明的一个实施方式中，上述疾病为与HPK1相关的疾病。
具体地，上述疾病为HPK1异常活性相关的疾病，特别是通过抑制HPK1可有益于其预防和/或治疗的疾病，例如自身免疫性疾病、炎症性疾病、肿瘤。
具体地，上述自身免疫性疾病包括但不限于，器官特异性自身免疫病和系统性自身免疫性疾病，例如，自身免疫性糖尿病(也称为I型糖尿病或胰岛素依赖型糖尿病)、系统性红斑狼疮、系统性血管炎、局限性肠炎、心肌病、溶血性贫血、纤维肌痛、格雷夫斯氏病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏疾病、多发性硬化症、重症肌无力、肌炎、中性粒细胞减少症、银屑病、慢性疲乏综合征、幼年型关节炎、青少年糖尿病、硬皮病、银屑病关节炎、斯耶格伦氏综合征、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、桥本氏病、混合性结缔组织病、间质性膀胱炎、恶性贫血、白质脑炎、斑秃、强直性脊柱炎、原发性胆汁性肝硬变、抗GBM肾炎、抗TBM肾炎、抗磷脂综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、自身免疫性阿狄森氏病、慢性活动性肝炎、白癜风、牛皮癣、自身免疫性高脂血症、自身免疫性心肌炎、颞动脉炎、自身免疫性甲状腺病、轴突和神经元神经病、贝切特氏病、大疱性类天疱疮、变应性哮喘、骨关节炎、恰加斯氏病、葡萄膜炎、慢性炎性脱髓鞘性多神经病(CIDP)、疤痕性类天疱疮/良性黏膜类天疱疮、寇甘氏综合征、先天性心脏传导阻滞、柯萨奇病毒性心肌炎、脱髓鞘性神经病、皮肌炎、盘状狼疮、晶状体抗原性色素层炎、结节性多动脉炎、德雷斯勒氏综合征、特发性混合型冷沉淀球蛋白血症、埃文斯综合征、肺出血肾炎综合征、变应性鼻炎、传染性神经元炎、低丙球蛋白血症、包涵体肌炎、水泡大疱疹(vesiculobullous)皮肤病、韦格纳肉芽肿、梅尼尔氏病、兰伯特-伊顿综合征、莫伦氏溃疡、非典型乳糜泻、眼疤痕性类天疱疮、寻常型天疱疮、静脉周脑脊髓 炎、心包切开术后综合征、巩膜炎、精子睾丸自身免疫、僵人综合征、亚急性细菌心内膜炎(SBE)、交感性眼炎、横贯性脊髓炎和坏死性脊髓病、I型自身免疫性多腺性综合征、II型自身免疫性多腺性综合征、恶性贫血和子宫内膜异位症等，特别是系统性红斑狼疮、系统性血管炎、溃疡性结肠炎、克罗恩氏疾病、多发性硬化症、硬皮病、斯耶格伦氏综合征、类风湿性关节炎中的一种或多种。
具体地，上述炎症性疾病包括但不限于：痛风、慢性阻塞性肺疾病、周期性发热、皮疹、淋巴结肿大、脓血症、哮喘、过敏中的一种或多种。
具体地，上述肿瘤，特别是恶性肿瘤(癌症)，包括但不限于，肾上腺癌、肛门癌、血管肉瘤、阑尾癌、胆道癌、膀胱癌、乳腺癌、脑癌、支气管癌、类癌瘤、宫颈癌、绒毛膜癌、脊索瘤、颅咽管瘤、结肠直肠癌、结缔组织癌、上皮癌、室管膜瘤、内皮肉瘤、子宫内膜癌、食管癌、尤文氏肉瘤、眼癌、胆囊癌、胃癌、胃肠道间质瘤(GIST)、生殖细胞癌、头颈癌、血液系统恶性肿瘤，成血管细胞瘤、下咽癌、炎性肌纤维母细胞瘤、免疫细胞性淀粉样变性、肾癌、肝癌、肺癌、平滑肌肉瘤(LMS)、肌肉癌、间皮瘤、骨髓增生性疾病(MPD)、成神经细胞瘤、神经纤维瘤、神经内分泌癌、骨肉瘤、卵巢癌、乳头状腺癌、胰腺癌、阴茎癌、松果体瘤、原始神经外胚层肿瘤(PNT)、前列腺癌、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、皮肤癌、小肠癌、软组织肉瘤、皮脂腺癌、汗腺癌、滑膜瘤、睾丸癌、甲状腺癌、尿道癌、阴道癌、外阴癌。
更具体地，上述肿瘤为血液系统恶性肿瘤，例如白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤(MM)。
具体地，白血病可以为慢性淋巴细胞性白血病(CLL)(例如，B细胞CLL、T细胞CLL)、慢性髓细胞性白血病(CML)(例如，B细胞CML、T细胞CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)(例如，B细胞ALL、T细胞ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)(例如，B细胞AML、T细胞AML)、急性单核细胞性白血病，特别是急性髓细胞性白血病。具体地，白血病可以为复发性、难治性或耐药性的。
具体地，淋巴瘤可以为霍奇金淋巴瘤(HL)(例如，B细胞HL、T细胞HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)(例如，B细胞NHL诸如弥漫性大细胞淋巴瘤(DLCL)(例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤)、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区B细胞淋巴瘤(例如，粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、结节性边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(即，华氏巨球蛋白血症(macroglobulinemia))、毛细胞白血病(HCL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B成淋巴细胞性淋巴瘤和原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤和T-细胞NHL，诸如前体T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)(例如，皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)(例如，蕈样肉芽肿病、塞扎里综合征(Sezary syndrome))、血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤、结外自然杀伤T细胞淋巴瘤、肠病型T细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤、NK/T细胞淋巴瘤，特别是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
更具体地，上述肿瘤为多发性骨髓瘤(MM)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、急性单核细胞性白血病。
在本发明另一个实施方式中，所述疾病为病原体感染相关的疾病，HPK1是一种免疫抑制调节激酶，能负调控T细胞受体，通过抑制HPK1可引发机体免疫反应，达到抗病原体(特别是病毒)的效果，可有益于病原体感染相关疾病的预防和治疗。
具体地，上述病原体可以为微生物、寄生虫(原虫、蠕虫等)或其他媒介。具体地，上述微生物可选自：病毒、衣原体、立克次体、支原体、细菌、螺旋体、真菌等中的一种或多种。
在本发明的一个实施方式中，上述病原体为病毒，例如，但不限于，腺病毒科(如腺病毒)、疱疹病毒科(如HSV1(口腔疱疹)、HSV2(外生殖器疱疹)、VZV(水痘)、EBV(埃-巴二氏病毒)、CMV(巨细胞病毒))、痘病毒科(如天花病毒、牛痘病毒)、乳多泡病毒科(如乳头瘤病毒(HPV))、细小病毒科(如B19病毒)、嗜肝DNA病毒科(如乙型肝炎病毒)、多瘤病毒科(如多瘤病毒)、呼肠孤病毒科(如呼肠弧病毒、轮状病毒)、小核糖核酸病毒科(如肠道病毒、口蹄疫病毒)、嵌杯样病毒科(如诺沃克病毒、戊型肝炎病毒)、披膜病毒科(如风疹病毒)、沙粒病毒科(如淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒)、逆转录病毒科(HIV-1、HIV-2、HTLV-1)、黄病毒科(如登革热病毒、寨卡病毒、乙型脑炎病毒、基孔肯亚病毒、黄热病病毒、丙型肝炎病毒、西尼罗病毒等)、正粘病毒科(如流感病毒(如甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒等))、副粘病毒科(如1型人副流感病毒(HPIV)、2型HPV、3型HPV、4型HPV、仙台病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、新城疫病毒等)、布尼亚病毒科(如加利福尼亚脑炎病毒、汉坦病毒)、弹状病毒科(如狂犬病毒)、丝状病毒科(如埃博拉病毒、马尔堡病毒)、冠状病毒科(如HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV、SARS-CoV-2等)、星状病毒科(如星状病毒)、博尔纳病毒科(如博尔纳病毒)；特别是逆转录病毒(HIV)、冠状病毒(如HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV、SARS-CoV-2等)、乙型肝炎病毒。
具体地，上述病原体感染相关的疾病包括但不限于，流感、SARS、COVID-19、病毒性肝炎(如甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎等)、AIDS、狂犬病、登革热、埃博拉病毒病等，特别是AIDS、COVID-19、乙型肝炎。
具体地，第一方面所述化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物可单独使用，或与其它种类的药物制剂和/或治疗方法联合使用。
具体地，所述其他种类的药物制剂选自：PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIM-3、TGF-β及其受体、LAG3拮抗剂或TLR4、TLR7、TLR8、TLR9、STING激动剂。
具体地，所述其他种类的治疗方法选自：放射疗法、免疫疗法(例如CAR-T细胞疗法)。
在本发明第六方面，提供第一方面所述化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物，在制备预防和/或治疗癌症中的应用。
具体地，癌症具有本发明第五方面中所述相应定义。
在本发明第七方面，提供第一方面所述化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物，联合PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIM-3、TGF-β及其受体、LAG3拮抗剂或TLR4、TLR7、TLR8、TLR9、STING激动剂在癌症免疫疗法中的应用。
在本发明第七方面，提供第一方面所述化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物，与CAR-T免疫疗法相结合在癌症免疫疗法中的应用。
在本发明第八方面，提供一种抑制HPK1活性的方法，其包括向有需要的受试者施用第一方面所述化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物或本发明第三方面所述药物组合物的步骤。
具体地，所述抑制包括，但不限于，抑制HPK1蛋白活性。
具体地，上述受试者可以为哺乳动物，特别是人类。
在本发明第九方面，提供一种预防和/或治疗HPK1相关的疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用第一方面所述化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物或本发明第三方面所述药物组合物的步骤。
具体地，在上述方法中，HPK1相关的疾病具有本发明第五方面中所述相应定义。
具体地，上述受试者可以为哺乳动物，特别是人类。
在本发明第十方面，提供一种预防和/或治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用第一方面所述化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物或本发明第三方面所述药物组合物的步骤。
具体地，在上述方法中，癌症具有本发明第五方面中所述相应定义。
具体地，上述受试者可以为哺乳动物，特别是人类。
具体地，所述方法还可以包括向受试者施用一种或多种其它种类的药物制剂和/或治疗方法。
具体地，所述其他种类的药物制剂选自：PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIM-3、TGF-β及其受体、LAG3拮抗剂或TLR4、TLR7、TLR8、TLR9、STING激动剂。
具体地，所述其他种类的治疗方法选自：放射疗法、免疫疗法(例如CAR-T细胞疗法)。
在本发明的一个实施方式中，所述方法还可以施用CAR-T细胞疗法。
在本发明第十一方面，提供一种增强免疫细胞(例如，T细胞)的细胞毒性、抑制衰竭和/或增强脾和/或肿瘤浸润的方法，其包括向有需要的受试者施用第一方面所述化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物或本发明第三方面所述药物组合物的步骤。
在本发明第十二方面，提供了一种鉴定与CAR-T细胞疗法组合使用的候选试剂的方法。
具体地，该方法可以包括如下步骤：
a)将测试剂和CAR-T细胞与肿瘤细胞一起孵育，其中肿瘤细胞包含可以结合CAR-T细胞并诱导其细胞毒性的抗原；
b)在测试剂存在下测量CAR-T细胞的细胞毒性；
可选地，c)确定与对照相比增强CAR-T细胞的细胞毒性的候选药物。
具体地，用于孵育测试剂、CAR-T细胞和肿瘤细胞的条件包括本领域已知的任何条件，其中一些条件在本文中举例说明。也可以通过本领域已知的任何方法测量细胞毒性。
具体地，本文的筛选方法也不限于肿瘤细胞类型或任何特定的CAR-T细胞群。
在一些实施方式中，测试剂被预筛选为HPK-1激酶抑制剂。
在一些实施方式中，测试剂未在HPK-1激酶抑制测定中进行预筛选。
本发明合成制备了一系列化合物(特别是吡啶并氧杂吖庚因类衍生物)，该化合物可调节(例如抑制)HPK1激酶活性，可用于治疗包括自身免疫性疾病、炎症性疾病、肿瘤在内的多种与HPK1相关的疾病，具有较佳的研究和应用价值。
具体实施方式
除非另有定义，本发明中所使用的所有科学和技术术语具有与本发明涉及技术领域的技术人员通常理解的相同的含义。
在本发明中，术语“脂肪族基团”是指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元的直链或支链的烃链，或完全饱和或含有一个或多个不饱和单元的环烃基(在本文中也称为“碳环”、“脂肪环”、“环烷基”)，其以单键与分子其它部分 连接。合适的脂肪族基团包括但不限于直链或支链的、取代或未取代的烷基、烯基、炔基及其混合物，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基、(环烷基)烯基等。典型的脂肪族基团含有1至10(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)个碳原子，优选含有1至6个碳原子。
术语“烷基”指的是直链或支链的且不含不饱和键的烃链自由基，且该烃链自由基以单键与分子其它部分连接。典型的烷基基团含有1至10(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)个碳原子，优选含有1至6个碳原子，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、正己基、异己基等。如果烷基被环烷基取代，其相应为“环烷基烷基”，如环丙基甲基、环丙基乙基、环丁基甲基、环戊基甲基、环己基甲基等。如果烷基被芳基取代，那么其相应为“芳烷基”，如苄基、二苯甲基或苯乙基。如果烷基被杂环基取代，那么其相应为“杂环基烷基”。在本发明中，C0烷基是指H，即C0-10烷基包括H和C1-10烷基。
术语“亚烷基”指的是烷烃分子失去两个氢原子而成的烃基(二价烷基)，其可以是直链或支链且其以单键与分子其它部分连接。在本文中典型的亚烷基1至10(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)个碳原子，优选含有1至6个碳原子，如亚甲基(-CH2-)、亚乙基、亚丙基、亚丁基等。在本发明中，C0亚烷基是指单键，即C0-10亚烷基包括单键和C1-10亚烷基。
术语“环烷基”指的是脂环烃，如含1至4个单环和/或稠环、含3-18个碳原子，优选3-10(例如3、4、5、6、7、8、9、10)个碳原子，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基或金刚烷基等。
术语“烷氧基”指的是羟基中的氢被烷基取代后形成的取代基，如含有1-10个碳原子的烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。
术语“烷胺基”指的是氨基(-NH2)中的一个或两个氢被烷基取代后形成的取代基，如含有1-10个碳原子的烷胺基，例如
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
术语“卤代烷基”是指烷基中的一个或多个氢被卤素原子(例如氟、氯、溴或碘)取代后形成的基团，例如-CHF2、-CH2F、-CF3、-CH2-CF3、-CH2CH2-CF3、-CH2CH2CH2-CF3。
术语“芳基”指的是单环或多环自由基，包括含单芳基基团和/或稠芳基基团的多环自由基，如包含1-3个单环或稠环及6-18(例如6、8、10、12、14、16、18)个碳环原子，本发明中所述C6-C12的芳基是指含有6-12个碳环原子的芳基，如苯基、萘基、联苯基、茚基等。
术语“杂环基”是指3至18元环基团，其包含2至17个碳原子以及1至10个杂原子，所述杂原子选自N、O或S原子。杂环基可以为单环、双环、三环、或四环等多环系统，多环系统可包含稠合的(两个环共用两个环原子)、螺接的(两个环共用一个环原子)或桥接的(两个环共用三个以上环原子)环系统(不包括联环的情况)。杂环基可以是部分饱和的(杂芳基)或完全饱和的(杂环烷基)。本发明的化合物中的合适的杂芳基含1、2或3种杂原子，所述杂原子选自N、O或S原子，所述杂芳基包括，如，香豆素，包括8-香豆素、喹啉基，包括8-喹啉基、异喹啉基、吡啶基、吡嗪基、吡唑基、嘧啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、四唑基、异恶唑基、恶唑基、咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、恶二唑基、噻二唑基、呋吖基、哒嗪基、三嗪基、噌啉基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋吖基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并恶唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、呋喃并吡啶基、吡啶并氧杂吖庚因基、吡啶并吖庚因基、吡啶并二吖庚因基、吡啶并氧杂环庚烷基、吡啶并环庚烷基、苯并氧杂吖庚因基、苯并吖庚因基、苯并二吖庚因基、苯并氧杂环庚烷基。本发明的化合物中的合适的杂环烷基含1、2或3种杂原子，所述杂原子选自N、O或S原子，所述杂环烷基包括，如，吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃、四氢噻吩基、四氢噻喃基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、氧硫杂环己烷基、哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、高哌啶基、氧杂环丙烷基、硫杂环丙烷基、吖庚因基、氧杂环庚烷基、氧杂吖庚因基、二吖庚因基、三吖庚因基、1,2,3,6-四氢吡啶基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基，二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧杂环己烷基、1,3-二氧戊环基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫戊环基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、3H-吲哚基和喹嗪基。
术语“任选取代的”基团可以为卤素、-CN、-NO2、-OR'、-NR'R”、-S(O)t-R'、-S(O)t-NR'R”、-COR'、-C(O)OR'、-C(O)NR'R”、-C(O)N(R')OR”、-OC(O)R'、-OC(O)NR'R”、-NR'C(O)R”、-N(R')C(O)NR'R'、-N(R')C(NR')NR'R'、-NR'-S(O)t-R'、-NR'-S(O)t-NR'R'、-N＝S(O)R'R”、-S(NR')(O)R”、-N(R')CN、-P(O)(R')NR'R”、-P(O)(R')OR”或-P(O)R'R”、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烯基、C1-6炔基、C3-6环烷基、C4-10环烷基烷基、C6-10芳基、C6-10芳基烷基、C3-8杂环基、C3-8杂环基烷基；t为0、1或2；各R'和R”独立地选自：H、卤素、-CN、-NO2、烷基、卤代烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环基烷基；或，与同一个氮连接的R'和R”与该氮原子一起形成杂环。
术语“药学上可接受的盐”包括酸加成盐和碱加成盐。
术语“酸加成盐”包括但不限于来自无机酸诸如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸和膦酸的盐，以及来自有机酸如脂肪族单羧酸和二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、链烷二酸、芳香酸和脂肪族和芳香族磺酸的 盐。因此，这些盐包括但不限于硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、碘酸盐、乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、异丁酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苦杏仁酸盐、苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、酞酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、马来酸盐、酒石酸盐和甲磺酸盐，还包含氨基酸的盐如精氨酸盐、葡糖酸盐、半乳糖醛酸盐等。酸加成盐可以通过以常规方式使游离碱形式与足够量的所需酸接触形成盐的方式制备。可通过使盐形式与碱接触重新生成游离碱形式，并且以常规方式分离该游离碱。
术语“碱加成盐”是指与金属或者胺形成的盐，诸如碱金属和碱土金属的氢氧化物，或者与有机胺形成。用作阳离子的金属的例子包括但是不限于钠、钾、镁、和钙。适当的胺的例子包括但是不限于N,N′-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺(乙烷-1,2-二胺)、N-甲基葡糖胺和普鲁卡因。碱加成盐可通过以常规方式使游离酸形式与足够量的所需碱接触形成盐的方式制备。可通过使盐形式与酸接触重新生成游离酸形式，并且以常规方式分离游离酸。
术语“立体异构体”包括对映体、非对映体和几何异构体的形式存在。本发明的一些化合物具有环烃基，其可在超过一个碳原子上被取代，在这种情况下，其所有的几何形式，包括顺式和反式，及其混合物，都处在本发明的范围内。
术语“溶剂化物”是指本发明的化合物与一种或多种溶剂分子的物理结合。该物理结合包括各种程度的离子和共价键合，包括氢键合。在某些情况下，溶剂化物可被分离出来，例如当一个或多个溶剂分子掺入到结晶固体的晶格中。溶剂化物包括溶液相和可分离的溶剂化物。代表性的溶剂化物包括乙醇化物、甲醇化物等。
术语“前药”指适于对患者给药的无过分毒性、刺激性和变态反应等的并且对其应用目的有效的式Ⅰ化合物形式，包括缩醛、酯和两性离子形式。前药在体内转化，如通过在血液中水解，得到母体化合物。
术语“氘代化合物”是指被氘取代的化合物，其中，“被氘取代”指的是用相应数量的氘原子取代一个或多个氢原子。
应认识到，取决于合成中使用的化学材料的来源，在合成的化合物中存在天然同位素丰度的一些变化。因此，本发明的化合物将固有地包含少量的氘化的同位素体。尽管存在这种变异，但与本发明化合物的稳定同位素取代的程度相比较，这种天然丰度的稳定氢和碳同位素的浓度还是很低的和无关紧要的。参见例如Wada,E等,Seikagaku,1994,66:15；Gannes,LZ等.,Comp Biochem Physiol Mol Integr Physiol,1998,119:725。
在本发明的化合物中，其中任何不被指明为氘的原子以其天然同位素丰度存在。除非另有说明，当一个位置被特别地指明为“H”或“氢”时，该位置应理解为具有按照其天然丰度同位素组成的氢。同样，除非另有说明，当一个位置被特别地指明为“D”或“氘”时，该位置应理解为具有大于氘的天然丰度(其为0.015％)至少3000倍的丰度的氘(即，至少45％的氘掺入)。
术语“同位素富集系数”是指特定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。
在其它实施方式中，本发明的化合物对于各个指定的氘原子的同位素富集系数为至少3500(在各个指定的氘原子处52.5％的氘掺入)、至少4000(60％的氘掺入)、至少4500(67.5％的氘掺入)、至少5000(75％的氘掺入)、至少5500(82.5％的氘掺入)、至少6000(90％的氘掺入)、至少6333.3(95％的氘掺入)、至少6466.7(97％的氘掺入)、至少6600(99％的氘掺入)或至少6633.3(99.5％的氘掺入)。
术语“同位素体”是指其中化学结构与本发明的特定化合物只在其同位素组成方面不同的物质。
术语“患者”或“受试者”等等在本文中可交换使用，是指根据本文所述的方法治疗的任何动物或其细胞，不论是体外或原位。具体地，前述动物包括哺乳动物，例如，大鼠、小鼠、豚鼠、兔、犬、猴子或人类，特别是人类。
术语“治疗”是指在疾病发作之后预防、治愈、逆转、减弱、减轻、最小化、抑制、制止和/或停止疾病的一种或多种临床症状。
术语“预防”指在疾病发作之前，通过治疗以避免、最小化或令疾病难于发作或发展。
术语“与HPK1相关的疾病”主要是指HPK1异常活性相关的疾病，特别是通过抑制HPK1可有益于其预防和/或治疗的疾病。
术语“肿瘤”指组织的异常块，其中所述块的生长超过正常组织的生长并且不与正常组织的生长相协调。肿瘤可以是“良性的”或“恶性的”，这取决于以下特征：细胞分化程度(包括形态和功能)、生长速率、局部侵袭和转移。“良性肿瘤”通常是分化良好的，其特征在于生长比恶性肿瘤慢，并且保持局限于起源部位。此外，良性肿瘤不具有浸润、侵袭或转移到远处部位的能力。在一些情况下，某些“良性”肿瘤后来可能会导致恶性肿瘤，这可能是由于肿瘤的赘生性细胞的亚群中的额外遗传改变造成的，且这些肿瘤称为“癌前肿瘤”。“恶性肿瘤”通常是低分化的(间变性)，并且具有特征性的快速生长，伴随着周围组织的进行性浸润、侵袭和破坏。此外，恶性肿瘤通常具有转移到远处部位的能力。
术语“癌症”是指恶性肿瘤(Stedman’s Medical Dictionary,25th ed.；Hensyl ed.；Williams&Wilkins:Philadelphia,1990)。
术语“自身免疫性疾病”是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。
术语“炎症”是机体对于刺激的防御反应，表现为红、肿、热、痛和功能障碍等；其可以为感染引起的感 染性炎症，也可以为不是由于感染引起的非感染性炎症，例如免疫反应引起的炎症(如各种类型的超敏反应、一些自身免疫性疾病引起的炎症)。术语“炎症性疾病”是指具有炎症的疾病。
术语“与病原体感染相关的疾病”主要是指由病原体感染所致疾病，其包括在病原体侵袭下造成的机体损伤症状及感染应答表现。
术语“CAR-T免疫疗法”是指：嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，是目前较为有效的恶性肿瘤的治疗方式之一，其基本原理是利用病人自身的免疫细胞来清除癌细胞，属于一种细胞疗法。
术语“HPK1抑制剂”、“HPK1激酶抑制剂”、“HPK1拮抗剂”具有相同含义，均是指降低、抑制或以其他方式减少HPK1的一种或多种生物活性(例如丝氨酸/苏氨酸激酶活性、与接头蛋白(如SLP76家族，Gads、HIP-55、GRB2家族)结合)的分子。使用HPK1抑制剂的抑制作用未必指示完全消除HPK1活性。与对照相比，HPK1活性可降低显著量，例如HPK1活性降低至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一些实施例中，HPK1抑制剂降低、抑制或以其他方式减少HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在一些实施例中，HPK1抑制剂降低、抑制或以其他方式减少HPK1介导SLP76和/或Gads的磷酸化。本发明所述化合物直接与HPK1结合并抑制其激酶活性。
本文所引用的各种出版物、专利和公开的专利说明书，其公开内容通过引用整体并入本文。
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：化合物A1的合成
实验步骤：
步骤1:
向2-氨基丁二酸二甲酯溶液；盐酸(20.5g，104mmol)的THF(100mL)溶液中加入NaHCO3(17.4g，207mmol，8.06mL)和2，6-二氯-3-硝基-吡啶(10.0g，51.8mmol)。将混合物在40℃下搅拌16小时。反应结束后，将反应混合物用200mL水稀释，并用EtOAc 600mL(200mL×3)萃取。将合并的有机层用1000mL盐水(500mL×2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝0/1至17/3)纯化残余物。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2/1，产物1Rf＝0.70)。得到2-[(6-氯-3-硝基-2-吡啶基)氨基]丁二酸二甲酯(1.56g，4.85mmol，9.35％产率，98.7％纯度)，为黄色液体，其通过LCMS和H NMR确认。
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)
δ8.99(d,J＝8.0Hz,1H),8.49(d,J＝8.8Hz,1H),6.92(d,J＝8.8Hz,1H),5.23(dt,J＝8.0,5.6Hz,1H),3.65(d,J＝17.2Hz,6H),2.96-3.16(m,2H)
LCMS:m/z＝316.0(M-H)-,Rt＝1.388min
步骤2:
在20℃下向2-[(6-氯-3-硝基-2-吡啶基)氨基]丁二酸二甲酯(1.35g，4.25mmol)的丙-2-醇(13.5mL)和H2O(5.00mL)溶液中加入Fe(1.20g，21.5mmol)。将混合物加热至40℃，并在40℃下加入AcOH(128mg，2.13mmol，122μL)。将混合物在70℃下搅拌1小时。反应结束后，将反应混合物冷却至20℃，通过硅藻土过滤，并用EtOAc 600mL (200mL*3)和MeOH 600mL(200mL*3)洗涤。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝0/1至1/1)纯化残余物。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2/1，产物1Rf＝0.43)。得到2-(6-氯-2-氧代-3，4-二氢-1H-吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸甲酯(300mg，1.13mmol，26.6％产率，96.5％纯度)，为黄色固体，其通过LCMS和H NMR确认。
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)
δ10.54(br s,1H),7.34(s,1H),6.92(d,J＝8.0Hz,1H),6.57(d,J＝8.0Hz,1H),4.42(t,J＝4.4Hz,1H),3.57(s,3H),2.69-2.88(m,2H)
LCMS:m/z＝255.9(M+H)+,Rt＝0.973min
步骤3:
将2-(6-氯-2-氧代-3，4-二氢-1H-吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸甲酯(300mg，1.17mmol)在THF(3.0mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，然后在0℃和N2气氛下将混合物滴加到LiAlH4(2.5M，4.50mL)中。将混合物在70℃下搅拌2小时。反应结束后，将反应混合物用100mL水稀释，并用DCM 500mL(100mL×5)和EtOAc 300mL(100mL×3)萃取。将合并的有机层用1000mL盐水(500mL×2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。将黄色固体的粗产物2-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇(302mg，粗品)用于下一步骤，无需进一步纯化。
LCMS:m/z＝214.3(M+H)+,Rt＝0.726min
步骤4:
在0℃和N2气保护下，向2-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇(250mg，1.17mmol)和TEA(474mg，4.68mmol，651μL)的DCM(5.0mL)溶液中滴加POCl3(280mg，1.82mmol，170μL)的DCM(0.3mL)溶液。加入后，将混合物在25℃下搅拌2小时。通过在0℃下加入40mL 1.2M NaHCO3溶液淬灭反应混合物，然后用100mL水稀释并用150mL DCM萃取(50mL×3)。将合并的有机层用盐水200mL(100mL×2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。作为黄色固体的粗产物5-氯-1，6，8-三氮杂三环[7.2.1.02,7]十二碳-2(7)，3，5-三烯(205mg，粗品)用于下一步骤，无需进一步纯化，其通过LCMS确认。
LCMS:m/z＝196.3(M+H)+,Rt＝0.599min
步骤5:
向5-氯-1，6，8-三氮杂三环[7.2.1.02,7]十二碳-2(7)，3，5-三烯(205mg，1.05mmol)的THF(8.0mL)溶液中加入Boc2O(1.14g，5.24mmol，1.2mL)和DMAP(150mg，1.23mmol)。将混合物在65℃下搅拌6小时。反应结束后，将反应混合物用20mL水稀释，并用DCM 90mL(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水200mL(100mL×2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1至2/5)纯化残余物。TLC(乙酸乙酯/石油醚＝2/1，产物1＝0.47)。得到5-氯-1，6，8-三氮杂三环[7.2.1.02,7]十二碳-2(7)，3，5-三烯-8-羧酸叔丁酯(207mg，581μmol，55.4％产率，83.0％纯度)，为黄色固体，其通过LCMS和H NMR确认。
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)
δ7.43(d,J＝8.0Hz,1H),7.01(d,J＝8.0Hz,1H),4.96(dd,J＝6.0,3.2Hz,1H),3.04-3.14(m,1H),2.91-3.03(m,
2H),2.77-2.86(m,1H),2.13(dddd,J＝13.6,10.0,6.0,3.6Hz,1H),1.74-1.86(m,1H),1.49(s,9H)
LCMS:m/z＝295.9(M+H)+,Rt＝0.703min
步骤6:
将6-溴吡唑并[1，5-a]吡啶(4.00g，20.30mmol)、2，4，6-三甲基-1，3，5，2，4，6-三氧杂三硼烷(10.2g，40.8mmol，11.4mL)、K2CO3(5.61g，40.6mmol)在二恶烷(86.0mL)和H2O(16.0mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，然后在N2气下向该混合物中加入RuPhos Pd G3(1.79g，2.03mmol)。将混合物在N2气下在100℃搅拌4小时。反应结束后，将反应混合物用100mL水稀释，并用300mL EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水400mL(200mL×2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱(SiO2，石油醚/二氯甲烷＝0/1至17/3)纯化残余物。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝5/1，产物1Rf＝0.43)。得到6-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶(1.42g，8.68mmol，42.8％产率，80.8％纯度)，为黄色固体，其通过LCMS和H NMR确认。
1H NMR:(400MHz,CDCl3)
δ8.28(s,1H),7.88(s,1H),7.44(d,J＝9.2Hz,1H),6.96(d,J＝8.8Hz,1H),6.46(s,1H),2.33(s,3H)LCMS：EB11563-3-P1x40，m/Z＝132.9(M+H)+，RT＝1.147min
LCMS:m/z＝132.9(M+H)+,Rt＝1.147min
步骤7:
向6-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶(1.30g，9.84mmol)的DMF(13.0mL)溶液中加入NIS(2.44g，10.9mmol)。将混合物在25℃下搅拌5小时。反应结束后，将反应混合物用50ml水稀释，并用150ml乙酸乙酯萃取(50ml*3)。将合并的有机层用盐水400mL(200mL×2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。通过制备-HPLC(柱：Welch Xtimate C18 250*50mm*10um；流动相：[水(FA)-ACN]；梯度:10％-65％B，20分钟内)纯化残余物。得到化合物3-碘-6-甲基-吡唑并[1，5-a]吡啶(1.47g，5.42mmol，55.1％产率，95.1％纯度)，为黄色固体，其通过LCMS和HNMR确认。
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)
δ8.57(s,1H),8.01(s,1H),7.41(d,J＝9.2Hz,1H),7.20(dd,J＝9.2,1.2Hz,1H),2.31(s,3H)
LCMS:m/z＝258.8(M+H)+,Rt＝0.883min
步骤8:
在0℃下向4-氯异吲哚啉-1-酮(10.0g，59.7mmol)的H2SO4(20.0mL)溶液中，滴加HNO3(5.04g，78.4mmol，3.60mL，98.0％纯度)的H2SO4(20.0mL)溶液。将所得混合物缓慢升温至20℃，并在20℃下搅拌4小时。反应结束后，将溶液倒入冰冷的水中(300ml)。将反应混合物用700ml水稀释，并用二氯甲烷3.0L(1.0L*3)萃取。将合并的有机层用盐水2.0L(2.0L*2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。得到化合物4-氯-7-硝基-异吲哚啉-1-酮(12.1g，粗品)，为黄色固体，其通过LCMS和H NMR确认。
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)
δ9.17(br s,1H),7.86-8.00(m,2H),4.46(s,2H)
LCMS:m/z＝212.8(M+H)+,Rt＝1.084min
步骤9:
向4-氯-7-硝基-异吲哚啉-1-酮(2.00g，9.41mmol)的二恶烷(20.0mL)溶液中加入DMAP(115mg，941μmol)和TEA(2.91g，28.7mmol，4.00mL)，然后在25℃下向混合物中加入(Boc)2O(3.14g，14.4mmol，3.30mL)。将混合物在25℃下搅拌0.5小时。反应结束后，将反应混合物用50ml水稀释，并用150ml二氯甲烷(50ml*3)萃取。将合并的有机层用盐水400mL(200mL×2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。通过柱色谱法(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝0/1至4/1)纯化残余物。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝3/1，产物1Rf＝0.46)。得到化合物4-氯-7-硝基-1-氧代-异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(2.93g，6.25mmol，66.5％产率，66.7％纯度)，为棕色固体，其通过LCMS和H NMR确认。
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)
δ8.03(s,1H),4.80(s,2H),1.52(s,9H)
步骤10:
向4-氯-7-硝基-1-氧代-异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(1.00g，3.20mmol)的EtOAc(8.00mL)溶液中滴加AcOH(2.00mL)，并将反应混合物冷却至0℃。分批加入Zn(1.46g，22.4mmol)，并将反应混合物在20℃下搅拌36小时。反应结束后，将反应混合物用碳酸氢钠溶液碱化pH＝9.0，然后过滤，用150ml(3×50ml)乙酸乙酯萃取，将合并的有机萃取液用200ml(2×100ml)盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝0/1至17/3)纯化残余物。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5/1，产物1Rf＝0.36)。得到化合物7-氨基-4-氯-1-氧代-异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(713mg，2.03mmol，63.5％产率，80.5％纯度)，为白色固体，其通过LCMS和H NMR确认。
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)
δ7.29-7.34(m,1H),6.65(d,J＝8.8Hz,1H),6.47(s,2H),4.58(s,2H),1.51(s,9H)
LCMS:m/z＝226.8(M-56+H)+,Rt＝1.527min
步骤11:
将7-氨基-4-氯-1-氧代-异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(280mg，990μmol)、次硼酸(355mg，3.96mmol)、AcOK(292mg，2.98mmol)和乙二醇(185mg，2.98mmol，166μL)在EtOH(3.00mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，然后在N2气下向混合物中加入Xphos(148.0mg，101μmol)和[2-(2-氨基苯基)苯基]钯(1+)；二环己基-[2-(2，4，6-三异丙基苯基)苯基]膦；甲磺酸盐(84.0mg，99.2μmol)。将混合物在N2气下在80℃下搅拌45分钟。粗产物(7-氨基-2-叔丁氧基羰基-1-氧代-异吲哚啉-4-基)硼酸(290mg，粗品)为黑褐色油状物，用于下一步骤，无需进一步纯化。
LCMS:m/z＝236.8(M-56+H)+,Rt＝0.620min
步骤12:
将3-碘-6-甲基-吡唑并[1，5-a]吡啶(384mg，1.49mmol)、(7-氨基-2-叔-丁氧基羰基-1-氧代-异吲哚啉-4-基)硼酸(290mg，993μmol)、Cs2CO3(970mg，2.98mmol)在二恶烷(8.00mL)和H2O(2.00mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，然后在N2气下向混合物中加入Pd(dppf)Cl2。将混合物在N2气下在80℃搅拌3小时。反应结束后，将反应混合物用20mL水稀释，并用60mL乙酸乙酯萃取(20mL*3)。将合并的有机层用100ml盐水(50ml*2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1至2/5)纯化残余物。TLC(乙酸乙酯/石油醚＝1/1，产物1Rf＝0.38)，残余物通过快速硅胶色谱(48gSilica Flash Column，洗脱液0～50％H2O/ACN@30mL/min)。得到化合物7-氨基-4-(6-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)-1-氧代-异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(170mg，436μmol，43.9％产率，97.0％纯度)，其为黄色固体，通过LCMS和H NMR确认。
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)
δ8.54(s,1H),8.13(s,1H),7.61(d,J＝9.2Hz,1H),7.46(d,J＝8.4Hz,1H),7.13(dd,J＝9.2,1.2Hz,1H),6.75(d,J＝8.4Hz,1H),6.43(s,2H),4.71(s,2H),2.31(s,3H),1.49(s,9H)
LCMS:m/z＝379.3(M+H)+,Rt＝1.477min
步骤13:
将7-氨基-4-(6-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)-1-氧代-异吲哚啉-2-羧酸叔丁酯(60.0mg，158μmol)、5-氯-1，6，8-三氮杂三环[7.2.1.02,7]十二碳-2(7)，3，5-三烯-8-羧酸叔丁酯(120mg，406μmol)、Cs2CO3(399mg，1.23mmol)在二恶烷中的混合物脱气并用N2吹扫3次，然后N2气下向混合物中加入RuPhos Pd G3(339mg，406μmol)。将混合物在80℃下搅拌3小时。反应结束后，将反应混合物用3mL水稀释，并用15mL乙酸乙酯萃取(3mL×5)。将合并的有机层用盐水20mL(10mL*2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。通过制备TLC(SiO2，乙酸乙酯/石油醚＝6/1)纯化残余物。TLC(乙酸乙酯/石油醚＝5/1，产物1Rf＝0.53)。得到化合物5-[[2-叔丁氧羰基-7-(6-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)-3-氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]-1，6，8-三氮杂三环[7.2.1.02,7]十二碳-2(7)，3，5-三烯-8-羧酸叔丁酯(140mg，192μmol，47.3％产率，87.4％纯度)，为黄色固体，其通过LCMS确认。
LCMS:m/z＝638.2(M+H)+,Rt＝0.883min
步骤14:
向5-[[2-叔丁氧羰基-7-(6-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)-3-氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]-1，6，8-三氮杂三环[7.2.1.02,7]十二碳-2(7)，3，5-三烯-8-羧酸叔丁酯(70.0mg，110μmol)的DCM(1.00mL)溶液中加入HCl/二恶烷(2M，1.00mL)。将该混合物在30℃下搅拌1小时。反应结束后，将反应混合物在减压下浓缩以在30℃得到残余物。通过制备HPLC(柱：Welch Xtimate C18 40*200mm 7um；流动相：[水(HCl)-ACN]；梯度:0％-40％B，20分钟内)纯化残余物。得到化合物4-(6-甲基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)-7-(1，6，8-三氮杂三环[7.2.1.02,7]十 二碳-2(7)，3，5-三烯-5-基氨基)异吲哚啉-1-酮(7.70mg，15.7μmol，14.3％收率，96.5％纯度，HCl)，为黄色固体，其通过LCMS、HPLC和HNMR确认。
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)
δ12.46-12.81(m,1H),10.05(s,1H),8.86(s,1H),8.56-8.64(m,2H),8.25(s,1H),7.84(br d,J＝9.2Hz,1H),7.70(d,J＝9.2Hz,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,1H),7.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.19(dd,J＝9.2,1.2Hz,1H),6.17(d,J＝8.4Hz,1H),4.50(s,2H),4.23-4.30(m,1H),3.73-3.84(m,2H),3.64(br s,2H),2.35-2.41(m,1H),2.33(s,3H),2.24-2.30(m,1H)
LCMS:m/z＝438.2(M+H)+,Rt＝0.977min
实施例2：化合物A2的合成
实验步骤：
步骤1:
氮气保护下，将化合物1(2g,1.02mmol)，化合物2(5ml,2.04mmol,3.5mol/L)，碳酸钾(2.81g,2.04mmol)和RuPhosPd3(415mg,0.05mmol)的dioxane(30ml)和H2O(5ml)溶液在100℃搅拌反应3小时。向混合物中加水，水相用EA萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝4:1)得到化合物3(900mg,收率:66.67％，白色固体)。LC-MS:133.1[M+H]+
步骤2:
室温下，向化合物3(500mg,3.78mmol)的氯仿(10mL)溶液中加入NIS(937mg,4.16mmol),混合物在室温下搅拌1h。向混合物中加水，水相用DCM萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝4:1)得到化合物4(750mg，收率:76.45％，棕色固体)。
LC-MS:259.0[M+H]+
步骤3:
氮气保护下，将化合物4(190mg,0.75mmol)，化合物5(200mg,0.68mmol)，X-Phos(32mg,0.07mmol)，X-PhosPdG2(53mg,0.07mmol)和K3PO4(720mg,3.4mmol)的dioxane(10mL)和水(2mL)的混合溶液加热至100度搅拌反应2h。反应结束后，向混合物中加水，水相用EA萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝1:4)得到化合物6(120mg，收率:46.51％，黄色固体)。LC-MS:279.1[M-Boc]+，
步骤4:
氮气保护下下，将化合物6(100mg,0.265mmol)，化合物7(75mg,0.397mmol)，Ru-PhosPdG3(20mg,0.025mmol)和CS2CO3(170mg,0.53mmol)的dioxane(10mL)的混合溶液加热至100度搅拌反应2h。向反应液中加水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)得到化合物8(70mg，收率:49.29％，黄色固体)。LC-MS:541.4[M+H]+，
步骤5:
室温下，向溶有化合物8(60mg,0.111mmol)的DCM(6mL)中加入TFA(2mL)，并在室温下搅拌1h。然后将反应液浓缩得到粗品。粗品经反相色谱柱纯化得化合物A2(37.35mg,收率：76.41％，黄色固体)。LC-MS:441.2[M+H]+，
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.93(s,1H),8.77(s,1H),8.56(d,J＝8.8Hz,2H),8.24(s,1H),8.23-8.20(m,0.29H),7.77(d,J＝9.3Hz,1H),7.68(d,J＝8.5Hz,1H),7.32(d,J＝8.6Hz,1H),7.17(d,J＝9.2Hz,1H),6.83(d,J＝8.6Hz,1H),4.50-3.97(m,2H),4.01(s,2H),3.83(s,2H),2.98-2.86(m,2H),2.38(s,3H),2.33(s,3H).
实施例3：化合物A3的合成
实验步骤：
步骤1:
氮气保护下，将化合物1(150mg,0.75mmol)，化合物2(200mg,0.68mmol)，X-Phos(32mg,0.07mmol)，X-PhosPdG3(53mg,0.07mmol)和K3PO4(720mg,3.4mmol)的dioxane(10mL)和水(2mL)的混合溶液加热至100度搅拌反应2h。反应结束后，向混合物中加水，水相用EA萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝1:4)得到化合物3(120mg，收率:46.51％，黄色固体)。LC-MS:379.1[M+H]+，
步骤2:
氮气保护下下，将化合物3(100mg,0.265mmol)，化合物4(75mg,0.397mmol)，Ru-PhosPdG3(20mg,0.025mmol)和CS2CO3(170mg,0.53mmol)的dioxane(10mL)的混合溶液加热至100度搅拌反应2h。向反应液中加水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)得到化合物5(70mg，收率:49.29％，黄色固体)。LC-MS:541.3[M+H]+，
步骤3:
室温下，向溶有化合物5(60mg,0.111mmol)的DCM(6mL)中加入TFA(2mL)，并在室温下搅拌1h。然后将反应液浓缩得到粗品。粗品经反相色谱柱纯化得化合物A3(32.39mg,收率：66.26％，黄色固体)。LC-MS:441.2[M+H]+，
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.10(s,1H),8.80(s,1H),8.63(d,J＝8.5Hz,1H),8.31(d,J＝4.9Hz,1H),8.14-8.12(m,0.04H),7.74(d,J＝8.6Hz,1H),7.58(d,J＝3.5Hz,1H),7.38(d,J＝8.7Hz,1H),7.26(d,J＝4.9Hz,1H),6.92(d,J＝8.7Hz,1H),6.47(d,J＝3.5Hz,1H),4.46(s,2H),4.12-3.82(m,7H),3.09(s,2H),2.62-2.50(m,3H).
实施例4：化合物A4的合成
实验步骤：
步骤1:
氮气保护下下，将化合物1(300mg,0.78mmol)，化合物2(153mg,0.78mmol)，Ru-PhosPdG3(67mg,0.008mmol)和CS2CO3(505mg,1.56mmol)的dioxane(10mL)的混合溶液加热至100℃搅拌反应16h。向反应液中加水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)得到化合物3(120mg,28％),LCMS:542.2[M+H]+.
步骤2:
室温下，向溶有化合物3(120mg,0.22mmol)的DCM(10mL)中加入HCl/dioxane(4M,5mL)，并在室温下搅拌3h。然后将反应液浓缩得到粗品。粗品经反相色谱柱纯化得化合物A4(9mg,9％)，白色固体。LC-MS:442.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.76(s,1H),8.75(s,1H),8.59(d,J＝8.6Hz,1H),8.40–8.35(m,1H),7.79(s,1H),7.61(d,J＝8.6Hz,1H),7.51(dd,J＝10.0,2.5Hz,1H),7.06–7.02(m,2H),6.98–6.94(m,1H),6.01(d,J＝8.0Hz,1H),4.34(s,2H),3.93–3.85(m,1H),3.16–3.05(m,1H),3.06–2.94(m,1H),2.86–2.71(m,2H),2.06–1.93(m,1H),1.91-1.88(m,1H).
实施例5：化合物A5的合成
实验步骤：
步骤1:
在氮气保护下，将化合物1(3g,18.7mmo8)，化合物2(1.6g,22.6mmol)，PhSiH3(2.03g,18.8mmol)和n-Bu2SnCl2(6.86g,22.6mmol)的四氢呋喃(50ml)溶液加热至80度搅拌反应16h。向反应液中加水，水相用乙酸乙酯萃取五次，浓缩水相得到化合物3(3g,粗品，淡黄色油状)。直接投入下一步LC-MS:219.1[M+H]+
步骤2:
在冰浴下，向化合物3(2.5g,11.46mmol)的DMF(20mL)中缓慢加入氢化钠(60％，1.14g,28.6mmol)。然后将混合物加热至100度搅拌反应2h。反应结束后，将反应液倒入冰水中，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝1:2)得到化合物4(1.1g，两步收率:48.55％，棕色固体)。
LC-MS:199.1[M+H]+
步骤3:
氮气保护下，将化合物5(20g,117.64mmol)，碘甲烷(33.4g，235.3mmol)和碳酸钾(32.5g，235.3mmol)的DMF(30mL)溶液在室温下搅拌反应过夜。向反应液中加水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝5:1)得到化合物6(20g，收率:90.9％，黄色油状)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.69(dd,J＝7.8,1.0Hz,1H),7.49(dd,J＝8.0,1.0Hz,1H),7.16(t,J＝7.9Hz,1H),3.90(s,3H),2.60(s,3H).
步骤4:
在室温下，将化合物6(7.0g,38.04mmol)溶于CCl4(50.00mL)中，加入NBS(7.45g，41.85mmol)，BPO(920mg，3.80mmol)。混合物在90℃下搅拌3h。反应液浓缩得粗品，粗品经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝5:1)得到化合物7(8.00g,收率：80.24％，淡黄色油状)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.85(dd,J＝7.9,1.2Hz,1H),7.57(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),7.32-7.22(m,1H),5.11(s,2H),3.95(d,J＝0.8Hz,3H).
步骤5:
室温下，将化合物7(8.00g,30.53mmol)溶于MeOH(50mL)溶液中，加入NH3.MeOH(5.20g,305.3mmol)。反应液室温搅拌过夜。反应液浓缩得粗品，粗产品经过硅胶柱层析纯化(PE：EA＝1:1to 0:1)得化合物8(5.00g,收率：98.04％，白色固体)。LC-MS:168.0[M+H]+
步骤6:
在-10℃下，将化合物8(5g,29.76mmol)溶于H2SO4(40.0mL)溶液中，加入HNO3(3.0mL)。反应液-10℃搅拌2h。反应液缓慢升至室温，室温搅拌2h。反应结束，反应液倒入冰水里，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过硅胶柱层析纯化(DCM：MeOH＝10：1)纯化得化合物9(3.0g,收率：47.02％，白色固体)。LC-MS:212.9[M+H]+
步骤7:
室温下，向化合物9(2g,9.43mmol)的DCM(30mL)溶液中，加入TEA(2.85g,28.3mmol)，(Boc)2O(4.11g,18.8mmol)和DMAP(115mg,0.94mmol)。反应液在室温搅拌2h。反应结束，向反应液中加水，水相用DCM萃取三次，合并有机相，并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝5：1)纯化得化合物10(2.2g,收率：74.83％，淡黄色固体)。LC-MS:213.1[M+H-Boc]+
步骤8:
室温下，将化合物10(2g,6.4mmol)和锌粉(8.59g，128mmol)的THF(50mL)和饱和NH4Cl水溶液(50mL)室温下搅拌反应3h。向反应液中加水，水相用DCM萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝1:1)得到化合物11(1.5g，收率:83.38％，黄色固体)。LC-MS:183.1[M+H-Boc]+，
步骤9:
氮气保护下下，将化合物11(500mg,1.77mmol)，化合物12(797mg,8.86mmol)，X-Phos(84mg,0.177mmol)，X-PhosPdG3(138mg,0.177mmol)和K3PO4(1.87g,8.86mmol)的乙醇(10mL)和二乙二醇二甲醚(2mL)的混合溶液加热至100度搅拌反应2h。将反应液浓缩得到粗品经反相色谱柱纯化得化合物13(250mg，收率:48.84％，黄色固体)。LC-MS:193.1[M+H-Boc]+，
步骤10:
氮气保护下，将化合物13(200mg,0.68mmol)，化合物14(350mg,1.36mmol)，X-Phos(32mg,0.006mmol)，X-PhosPdG3(53mg,0.006mmol)和K3PO4(720mg,1.4mmol)的dioxane(10mL)和水(2mL)的混合溶液加热 至100度搅拌反应2h。将反应液浓缩得到粗品经反相色谱柱纯化得化合物15(120mg，收率:45.97％，黄色固体)。LC-MS:383.1[M+H]+，
步骤11:
氮气保护下下，将化合物15(100mg,0.26mmol)，化合物4(110mg,0.52mmol)，Ru-PhosPdG3(20mg,0.026mmol)和CS2CO3(170mg,0.52mmol)的dioxane(10mL)的混合溶液加热至100度搅拌反应2h。向反应液中加水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)得化合物16(60mg，收率:42.25％，棕色固体)。LC-MS:545.1[M+H]+，
步骤12:
室温下，向溶有化合物16(50g,2.42mmol)的DCM(10mL)中加入TFA(3mL)，并在室温下搅拌1h。然后将反应液浓缩得到粗品。粗品经反相色谱柱纯化得化合物A5(17.9mg,收率：43.76％，白色固体)。LC-MS:445.1[M+H]+，
1H-NMR(400MHz,MeOD)δ8.77(d,J＝8.6Hz,1H),8.38–8.28(m,1H),7.70(s,1H),7.69(d,J＝8.6Hz,1H),7.40-7.30(m,2H),6.95(td,J＝7.4,2.5Hz,1H),6.86(d,J＝8.6Hz,1H),4.38(s,2H),4.15–4.09(m,2H),3.98(s,2H),3.15-3.02(m,2H),2.52(s,3H).
实施例6：化合物A6的合成
实验步骤：
步骤1:
在冰浴下，将化合物1(3g,17.045mmol)，化合物2(1.92g,25.57mmol)，溶于DCM溶液(85ml)中，并向溶液中滴加醋酸(0.1ml，1.7045mmol)。预搅拌1h后缓慢向混合液中加入NaBH(OAC)3(7.227g,34.09mmol)缓慢升至室温搅拌反应16h。向反应液中滴加饱和NaHCO3溶液(5ml)淬灭醋酸后再加水，水相用DCM萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE:EA＝1:1)得到化合物3(3.4g，收率:87.75％，无色油状液体)。LC-MS:235[M+H]+
步骤2:
氮气保护下，将化合物3(3.4g,14.53mmol)，叔丁醇钠(2.094g,21.79mmol)的DMF(10mL)的混合溶液加热至40度搅拌反应1h。向反应液中加冰水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用水反洗三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)得到化合物4(1.4g，收率:48.67％，黄色固体)。LC-MS:199.1[M+H]+，
步骤3:
氮气保护下，将化合物4(94mg,0.5mmol)，化合物5(100mg,0.25mmol)，Ru-PhosPdG3(20mg,0.025mmol)和CS2CO3(170mg,0.53mmol)的dioxane(10mL)的混合溶液加热至100度搅拌反应2h。向反应液中加水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)得到化合物6(70mg，收率:49.29％，黄色固体)。LC-MS:545.3[M+H]+。
步骤4:
室温下，向溶有化合物6(70mg,0.128mmol)的DCM(10mL)中加入TFA(1mL)，并在室温下搅拌1h。然后将反应液浓缩得到粗品。粗品经反相色谱柱纯化得化合物A6(40.25mg,收率：70.82.％，黄色固体)。LC-MS:445.2[M+H]+，
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.06(s,1H),8.83(s,1H),8.66(d,J＝8.6Hz,1H),8.48–8.40(m,1H),7.83(s,1H),7.76(d,J＝8.6Hz,1H),7.68-7.49(m,2H),6.99-6.93(m,1H),6.68(d,J＝7.9Hz,1H),4.40(s,2H),4.14-4.11(m,2H),3.58(s,2H),2.89-2.85(m,2H),2.32(s,3H).
实施例7：化合物A7的合成
实验步骤：
步骤1:
氮气保护下，将化合物1(10g,51.02mmol)，化合物2(30mL,102.04mmol,3.5mol/L)，碳酸钾(14g,102.04mmol)和RuPhosPd3(2.1g,0.05mmol)的dioxane(120mL)和H2O(20mL)溶液在100℃搅拌反应2小时。向混合物中加水，水相用EA萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝5:1)得到化合物3(6.5g，收率:96.5％，黄色固体)。LC-MS:133.2[M+H]+
步骤2:
室温下，向化合物3(6.5g,49.2mmol)的氯仿(80mL)溶液中加入NIS(12.2g,54.2mmol),混合物在室温下搅拌1h。向混合物中加水，水相用DCM萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝10:1)得到化合物4(10.5g，收率:82.68％，黄色固体)。LC-MS:258.9[M+H]+
步骤3:
氮气保护下，将化合物4(1.5g,5.8mmol)，化合物5(1.7g,5.8mmol)，X-Phos(277mg,0.6mmol)，X-PhosPdG2(460mg,0.6mmol)和K3PO4(5.56g,26.2mmol)的dioxane(15mL)和水(3mL)的混合溶液加热至100℃搅拌反应2h。反应结束后，向混合物中加水，水相用EA萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝1:4)得到化合物6(1.38g，收率:62.7％，棕色固体)。LC-MS:379.1[M+H]+，
步骤4:
氮气保护下下，将化合物6(100mg,0.26mmol)，化合物7(115mg,0.53mmol)，Ru-PhosPdG3(22mg,0.026mmol)和CS2CO3(172mg,0.53mmol)的dioxane(2mL)的混合溶液加热至100℃搅拌反应5h。向反应液中加水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)得到化合物8(120mg，收率:81.9％，黄色固体)。LC-MS:555.1[M+H]+，
步骤5:
室温下，向溶有化合物8(120mg,0.217mmol)的DCM(3mL)中加入HCl/dioxane(3mL)，并在室温下搅拌1h。然后将反应液浓缩得到粗品。粗品经反相色谱柱纯化得化合物A7(27.19mg,收率：27.65％，白色固体)。LC-MS:455.0[M+H]+，
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.13(s,1H),8.83(s,1H),8.79(d,J＝8.6Hz,1H),8.58(s,1H),8.26(s,1H),7.79(d,J＝9.0Hz,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.43(d,J＝8.7Hz,1H),7.16(d,J＝9.2Hz,1H),7.10(d,J＝8.8Hz,1H),4.52(s, 2H),4.32(t,J＝5.2Hz,2H),3.58(t,J＝5.2Hz,2H),3.14(s,3H),2.33(s,3H).
实施例8：化合物A8的合成
实验步骤：
步骤1:
将化合物2(33.4g,207.27mmol)溶于200毫升四氢呋喃中，在加入化合物1(34.8g,414.54mmol)和碳酸氢钠(33.4g,207.27mmol)。40度下反应16小时，过滤，加水200毫升，乙酸乙酯(3×100mL)萃取，合并有机相，有机相用饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干柱层析得到化合物3(13g,39.5％),LCMS:318.1[M+H]+.
步骤2:
室温下，将化合物3(13.0g,40.92mmol)溶于异丙醇/水(200mL/60mL)中,在加入铁粉(13.3g,204.6mmol),加热到40度，再加入醋酸(2mL)，升温至70度，反应1小时，冷却至室温，过滤，滤饼用乙酸乙酯(3×60mL)洗涤，滤液旋干经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝10:1)得到化合物4(4.5g,43％),LCMS(m/z)256.1[M+H]+.
步骤3:
室温下，将化合物4(4.5g,17.60mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，冰浴冷却，滴加氢化铝锂的四氢呋喃溶液(1M,26.4mL,26.4mmol)，滴加完后升温至70度反应3小时，再冷却至0度，加入水(16mL)，搅拌15分钟，再加如氢氧化钠水溶液(15％W/W，20mL)，再搅拌15分钟，在加入水(24mL)，室温搅拌1小时，抽滤，滤饼用四氢呋喃(3*40mL)洗涤，滤液减压旋干，柱层析得到产物5(3.4g,90％),LCMS：214.1[M+H]+.
步骤4:
室温下，将化合物5(3.6g,16.9mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，冰浴冷却，加入三乙胺(1.7g,16.9mmol)，再滴加三氯氧磷(5.2g,33.8mmol)，滴加完后室温反应2小时，加入碳酸氢钠(20mL,1.2M)水溶液淬灭，搅拌15分钟，二氯甲烷(3*40mL)萃取，有机相依次用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压旋干柱层析得到产物6(2.5g,76％)。LC-MS:196.1[M+H]+
步骤5:
室温下，将化合物6(500mg,2.6mmol)溶于DMF(10mL)中，冰浴冷却，加入氢化钠60％,208mg,5.2mmol)，冰浴下搅拌30分钟，再滴加MeI/DMF(406mg/1mL,2.9mmol)，滴加完后室温反应2小时，加入水溶液淬灭，搅拌15分钟，二氯甲烷(3*40mL)萃取，有机相依次用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压旋干柱层析得到产物6(200mg,40％)。LC-MS:210.1[M+H]+
步骤6:
氮气保护下下，将化合物8(300mg,0.78mmol)，化合物7(165mg,0.78mmol)，Ru-PhosPdG3(67mg,0.008mmol)和CS2CO3(505mg,1.56mmol)的dioxane(10mL)的混合溶液加热至100℃搅拌反应16h。向反应液中加水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)得到化合物9(200mg,46％),LCMS:556.2[M+H]+.
步骤7:
室温下，向溶有化合物9(200mg,0.26mmol)的DCM(10mL)中加入HCl/dioxane(4M,5mL)，并在室温下搅拌3h。然后将反应液浓缩得到粗品。粗品经反相色谱柱纯化得化合物A8(20mg,12％)，白色固体。LC-MS:456.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.82(s,1H),8.76(s,1H),8.56(d,J＝8.6Hz,1H),8.45–8.38(m,1H),7.80(s,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.51(d,J＝10.1Hz,1H),7.05(d,J＝7.8Hz,1H),6.99–6.94(m,1H),5.99(d,J＝7.9Hz,1H),4.36(s,2H),3.94–3.89(m,1H),3.11(s,3H),3.07–2.98(m,3H),2.80–2.74(m,1H),2.12–2.02(m,1H),1.95–1.87(m,1H).
实施例9：化合物A9的合成
实验步骤：
步骤1:
将化合物1(10.0g,92.60mmol)和Selectfulor(II)(16.38g,46.29mmol)用CHCl3/H2O(230mL,1:1)溶解，30摄氏度封管反应过夜。反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，干燥，减压浓缩得到粗品，粗品反相色谱柱纯化得化合物2(150mg，1.28％，淡黄色固体)。LC-MS:127.0.[M+H]+
步骤2:
氮气保护下，将化合物2(140mg,1.11mmol)，氯乙醛(433mg,5.55mmol)和碳酸氢钠(186mg,2.22mmol)的乙醇(10mL)加热至60℃。反应结束后，将反应液浓缩得到粗品。粗品经反相色谱柱纯化得化合物4(100mg，收率:60.24％，白色固体)。LC-MS:151.3[M+H]+。
步骤3:
室温下，向化合物4(95mg,0.63mmol)的氯仿(10mL)溶液中加入NIS(156mg,0.69mmol),混合物在室温下搅拌1h。向混合物中加水，水相用EA萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗品经反相色谱柱纯化得化合物5(70mg，收率:40.23％，棕色固体)。
步骤4:
氮气保护下，将化合物5(67mg,0.24mmol)，化合物6(65mg,0.22mmol)，X-Phos(10mg,0.02mmol)，X-PhosPdG2(14mg,0.02mmol)和K3PO4(230mg,1.1mmol)的dioxane(5mL)和水(1mL)的混合溶液加热至100度搅拌反应2h。反应结束后，向混合物中加水，水相用EA萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝1:4)得到化合物7(60mg，收率:50.02％，黄色固体)。LC-MS:397.1[M+H]+，
步骤5:
氮气保护下下，将化合物7(55mg,0.13mmol)，化合物8(41mg,0.20mmol)，Ru-PhosPdG3(11mg,0.013mmol)和CS2CO3(91mg,0.26mmol)的dioxane(10mL)的混合溶液加热至100度搅拌反应2h。向反应液中加水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)化合物9(50mg，收率:51.61％，黄色固体)。LC-MS:559.2[M+H]+。
步骤6:
将化合物9(35mg,0.062mmol)溶于DCM(6mL)中滴加TFA(2mL)，反应液室温搅拌1小时，反应结束，反应液减压浓缩得到粗品，粗产品经过减法反相色谱(acetonitrile with 0.1％of FA in water 5％to 95％)柱纯化得化合物A9(5.45mg，收率:19.46％，类白色固体)。LC-MS:459.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.75(d,J＝8.6Hz,1H),8.27(d,J＝5.0Hz,1H),7.73-7.62(m,2H),7.48(d,J＝7.0Hz,1H),7.34(d,J＝8.6Hz,1H),6.86(d,J＝8.6Hz,1H),4.38(s,2H),4.11–4.08(m,2H),3.95(s,2H),3.06–3.01(m,2H),2.49(s,3H),2.42(s,3H).
实施例10：化合物A10的合成
实验步骤：
步骤1:
氮气保护下，将化合物1(1g,6.28mmol)和化合物2(942mg,12.57mmol)的THF(20ml)溶液在室温下搅拌反应1h。然后在冰浴下加入三乙酰基硼氢化钠(3.78g,17.8mmol)。混合物在室温下搅拌反应16h。反应结束后，向混合物中加包和碳酸氢钠水溶液，水相用EA萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(MeOH：DCM＝1:10)得到化合物3(600mg，收率:43.79％，白色固体)。LC-MS:219.0[M+1]+，
步骤2:
室温下，将化合物3(550mg,2.5mmol)，多聚甲醛(500mg)和醋酸(20mg,0.0009mmol)的甲醇(10mL)的混合溶液搅拌反应30min。然后向反应液中加入氰基硼氢化钠(311mg，5.02mmol)。混合物在室温下搅拌反应16h。反应结束后，向混合物中加包和碳酸氢钠水溶液，水相用EA萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝1:2)得到化合物4(350mg，收率:59.82％，无色油状)。LC-MS:233.0[M+1]+，
步骤3:
冰浴下，向溶有化合物4(300mg,1.29mmol)的DMF(10mL)中加入NaH(103mg,2.6mmoL)。混合物加热至90度搅拌反应30min。反应结束后，反应液倒入冰水中，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE:EA＝1:2)得到化合物5(150mg，收率:54.74％，白色固体)。LC-MS:213.1[M+1]+。
步骤4:
氮气保护下下，将化合物5(110mg,0.5mmol)，化合物6(100mg,0.25mmol)，Ru-PhosPdG3(20mg,0.025mmol)和CS2CO3(170mg,0.5mmol)的dioxane(10mL)的混合溶液加热至100度搅拌反应2h。向反应液中加水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)化合物7(70mg，收率:47.49％，黄色固体)。LC-MS:559.4[M+1]+。
步骤5:
将化合物7(25mg,0.045mmol)溶于DCM/TFA(6mL，1:1)混合溶液中，反应液室温搅拌1小时，反应结束，反应液减压浓缩得到粗品，粗产品经过减法反相色谱(acetonitrile with 0.1％of NH3.H2O in water 5％to 95％)柱纯化得化合物A10(10.15mg，收率:49.46％，淡黄色固体)。LC-MS:459.2[M+1]+。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.77(d,J＝8.6Hz,1H),8.50–8.23(m,1H),7.81–7.61(m,2H),7.44-7.26(m,2H),6.98-6.92(m,1H),6.87(d,J＝8.6Hz,1H),4.39(s,2H),4.13–3.99(m,2H),3.91(d,J＝13.8Hz,1H),3.04(d,J＝13.6Hz,1H),2.89-2.77(m,1H),2.50(s,3H),1.36(d,J＝6.4Hz,3H).
实施例11：化合物A11的合成
实验步骤：
步骤1:
氮气保护下，将化合物1(1g,6.28mmol)和化合物2(942mg,12.57mmol)的THF(20ml)溶液在室温下搅拌反应1h。然后在冰浴下加入三乙酰基硼氢化钠(3.78g,17.8mmol)。混合物在室温下搅拌反应16h。反应结束后，向混合物中加包和碳酸氢钠水溶液，水相用EA萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(MeOH：DCM＝1:10)得到化合物3(600mg，收率:43.79％，白色固体)。LC-MS:219.0[M+1]+，
步骤2:
室温下，将化合物3(550mg,2.5mmol)，多聚甲醛(500mg)和醋酸(20mg,0.0009mmol)的甲醇(10mL) 的混合溶液搅拌反应30min。然后向反应液中加入氰基硼氢化钠(311mg，5.02mmol)。混合物在室温下搅拌反应16h。反应结束后，向混合物中加包和碳酸氢钠水溶液，水相用EA萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝1:2)得到化合物4(350mg，收率:59.82％，无色油状)。LC-MS:233.0[M+1]+，
步骤3:
冰浴下，向溶有化合物4(300mg,1.29mmol)的DMF(10mL)中加入NaH(103mg,2.6mmoL)。混合物加热至90度搅拌反应30min。反应结束后，反应液倒入冰水中，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE:EA＝1:2)得到化合物5(150mg，收率:54.74％，白色固体)。LC-MS:213.1[M+1]+，
步骤4:
氮气保护下下，将化合物5(110mg,0.5mmol)，化合物6(100mg,0.25mmol)，Ru-PhosPdG3(20mg,0.025mmol)和CS2CO3(170mg,0.5mmol)的dioxane(10mL)的混合溶液加热至100度搅拌反应2h。向反应液中加水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)化合物7(70mg，收率:47.49％，黄色固体)。LC-MS:559.4.[M+1]+。
步骤4:
将化合物7(70mg,0.13mmol)溶于DCM/TFA(6mL，1:1)混合溶液中，反应液室温搅拌1小时，反应结束，反应液减压浓缩得到粗品，粗产品经过减法反相色谱(acetonitrile with 0.1％of NH3.H2O in water 5％to 95％)柱纯化得化合物A11(54.26mg，收率:94.43％，白色固体)。LC-MS:459.3.[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.98(s,1H),8.80(s,1H),8.61(d,J＝8.6Hz,1H),8.49-8.41(m,1H),7.82(s,1H),7.71(d,J＝8.6Hz,1H),7.58-7.46(m,1H),7.32(d,J＝8.6Hz,1H),7.00-6.93(m,1H),6.86(d,J＝8.6Hz,1H),4.39(s,2H),4.15–4.01(m,2H),3.94(d,J＝15.2Hz,1H),3.86-3.74(m,1H),3.15–3.02(m,1H),2.28(s,3H),1.09(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例12：化合物A12的合成
实验步骤：
步骤1:
将化合物1(200mg,1.09mmol)溶解于THF(14ml)溶液中，HOAc(131mg,2.18mmol)和acetone(76mg,1.31mmol)滴加进反应液中，反应液于室温下搅拌2h后，加入NaBH(OAc)3(693mg,3.27mmol)，然后反应液于室温下搅拌16h。反应结束，用适量的NaHCO3(aq)调pH接近8。水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝1:1)得到化合物2(140mg，收率:56.91％，黄色油状)。LC-MS:227.3.[M+H]+
步骤2:
在氮气保护下，将化合物2(36mg,0.158mmol)溶解于Dry 1,4-dioxane(2mL)溶液中，Ru PhOS-Pd-G3(7mg,0.0079mmol)，Cs2CO3(52mg,0.158mmol)和化合物3(30mg,0.079mmol)加入到反应液中。反应液于100℃下搅拌3h。反应结束，反应混合物通过硅藻土过滤，固体经EA洗涤，滤液真空浓缩，PTLC(PE/EA＝1:2)纯化，得到化合物4(45mg，收率:99.82％，黄色固体)。LC-MS:569.3.[M+H]+
步骤3:
室温下，将化合物4(45mg,0.079mmol)置于DCM(5mL)中，加入TFA(15d)，反应液搅拌2h。反应结束后，减压浓缩后得到粗产品，粗产品经过酸法反相色谱柱(acetonitrile with 0.1％of FA in water 5％to 95％)纯化得到化合物A12(19.13mg，收率：51.59％，淡黄色固体)。LC-MS:469.2.[M+H]+
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.68(d,J＝8.5Hz,1H),8.39(s,1H),8.08(s,1H),7.66(t,J＝9.2Hz,2H),7.43(d,J＝8.7Hz,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,1H),6.95(d,J＝8.8Hz,1H),4.49(s,4H),4.30(s,2H),3.60(s,2H),3.29–3.26(m,1H),2.38(s,3H),1.42(d,J＝6.6Hz,6H).
实施例13：化合物A13的合成
实验步骤：
步骤1:
氮气保护下，在冰浴环境下将化合物1(5g,35.46mmol)溶解于DCM(30mL)溶液中，加入DAST(12mL)，混合物在室温下反应过夜。反应结束后，向混合物中加饱和碳酸氢钠水溶液，使混合物pH>7，水相用DCM萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(DCM：MeOH＝10:1)得到化合物2(4g，收率:69.20％，黄色油状)。LC-MS:164.0.[M+1]+，
步骤2:
氮气保护下，将化合物2(3g,18.4mmol)，化合物3(6.66,36.8mmol)，XantPhos(438mg,0.92mmol)，Pd2(dba)3(842mg,0.92mmol)和叔丁醇钠(3.83g,36.8mmol)的甲苯(100mL)的混合溶液加热至110度搅拌反应3h。向反应液中加水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE:EA＝4:1)得到化合物4(2.7g，收率:47.70％，棕色油状)。LC-MS:309.0[M+1]+，
步骤3:
室温下，向溶有化合物4(2.7,8.76mmol)的THF(100mL)中加入2MHCl(50mL)，并在室温下搅拌16h。反应结束后，用饱和碳酸氢钠水溶液调PH＝9，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE:EA＝1:1)得到化合物5(800mg，收率:63.49％，白色固体)。LC-MS:144.1[M+1]+，
步骤4:
氮气保护下，将化合物5(700mg,4.86mmol)，氯乙醛(1.89g,24.3mmol)和碳酸氢钠(816mg,9.7mmol)的乙醇(10mL)加热至60℃。反应结束后，将反应液浓缩得到粗品。粗品经反相色谱柱纯化得化合物7(500mg，收率:61.27％，白色固体)。LC-MS:169.1[M+1]+。
步骤5:
室温下，向化合物7(500mg,2.97mmol)的氯仿(10mL)溶液中加入NIS(736mg,3.27mmol),混合物在室温下搅拌1h。向混合物中加水，水相用EA萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗粗品经反相色谱柱纯化得化合物8(350mg，收率:41.68％，棕色固体)。
LC-MS:294.8[M+H]+
步骤6:
氮气保护下，将化合物8(220mg,0.75mmol)，化合物9(200mg,0.68mmol)，X-Phos(32mg,0.07mmol)，X-PhosPdG3(53mg,0.07mmol)和K3PO4(720mg,3.4mmol)的dioxane(10mL)和水(2mL)的混合溶液加热至100度搅拌反应2h。反应结束后，向混合物中加水，水相用EA萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝1:4)得到化合物10(120mg，收率:42.40％，黄色固体)。LC-MS:415.1[M+1]+，
步骤7:
氮气保护下下，将化合物10(100mg,0.24mmol)，化合物11(75mg,0.36mmol)，Ru-PhosPdG3(20mg,0.024mmol)和CS2CO3(155mg,0.55mmol)的dioxane(10mL)的混合溶液加热至100度搅拌反应2h。向反应液中加水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后粗产品经过经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)化合物12(70mg，收率:50.35％，黄色固体)。LC-MS:577.2[M+1]+。
步骤8:
将化合物12(30mg,0.24mmol)溶于DCM/TFA(6mL，1:1)混合溶液中，反应液室温搅拌1小时，反应结束，反应液减压浓缩得到粗品，粗产品经过减法反相色谱(acetonitrile with 0.1％of NH3.H2O in water 5％to 95％)柱纯化得化合物A13(9.60mg，收率:38.73％，淡黄色固体)。LC-MS:477.2[M+1]+。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.77(d,J＝8.6Hz,1H),8.41(d,J＝7.2Hz,1H),7.83(d,J＝4.6Hz,2H),7.71(d,J＝8.6Hz,1H),7.35(d,J＝8.6Hz,1H),7.13(d,J＝7.2Hz,1H),7.06–6.74(m,2H),4.38(s,2H),4.16–4.04(m,2H),3.95(s,2H),3.09–2.95(m,2H),2.49(s,3H).
实施例14：化合物A14的合成
实验步骤：
步骤1:
将化合物1(200mg,1.09mmol)溶解于THF(14ml)溶液中，HOAc(131mg,2.18mmol)和C3H4O2(78mg,1.09mmol)滴加进反应液中，反应液于室温下搅拌2h后，加入NaBH(OAc)3(693mg,3.27mmol)，然后反应液于室温下搅拌16h。反应结束，用适量的NaHCO3(aq)调pH接近8。水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝1:1)得到化合物2(203mg，收率:77.78％，黄色油状)。LC-MS:241.3.[M+H]+
步骤2:
在氮气保护下，将化合物2(38mg,0.158mmol)溶解于Dry 1,4-dioxane(2mL)溶液中，Ru PhOS-Pd-G3(7mg,0.0079mmol)，Cs2CO3(52mg,0.158mmol)和化合物3(30mg,0.079mmol)加入到反应液中。反应液于100℃下搅拌3h。反应结束，反应混合物通过硅藻土过滤，固体经EA洗涤，滤液真空浓缩，PTLC(PE/EA＝1:4)纯化，得到化合物4(40mg，收率:86.96％，黄色固体)。LC-MS:583.3.[M+H]+
步骤3:
室温下，将化合物4(40mg,0.069mmol)置于DCM(5mL)中，加入TFA(15d)，反应液搅拌3h。反应结束后，滴加适量TEA,使得pH接近7，减压浓缩后得到粗产品，粗产品经过酸法反相色谱柱(acetonitrile with 0.1％of FA in water 5％to 95％)纯化得到化合物A14(2.30mg，收率：6.94％，淡黄色固体)。LC-MS:483.2.[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.93(s,1H),8.80(s,1H),8.58(s,1H),8.52–8.40(m,6H),8.24(s,1H),7.76(d,J＝9.2Hz,1H),7.68(d,J＝8.5Hz,1H),7.34(d,J＝8.6Hz,1H),7.18(dd,J＝9.3,1.4Hz,1H),6.86(d,J＝8.6Hz,1H),4.59(t,J＝6.4Hz,2H),4.52–4.46(m,4H),4.02(s,2H),3.80(d,J＝6.5Hz,1H),3.75(s,2H),2.86(s,2H),2.34–2.32(m,3H).
实施例15：化合物A15的合成
实验步骤：
步骤1:
将化合物1(200mg,1.09mmol)溶解于THF(14ml)溶液中，HOAc(131mg,2.18mmol)和C5H15NO3(189mg,1.09mmol)滴加进反应液中，反应液于室温下搅拌2h后，加入NaBH(OAc)3(693mg,3.27mmol)，然后反应液于室温下搅拌16h。反应结束，用适量的NaHCO3(aq)调pH接近8。水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝1:1)得到化合物2(343mg，收率:92.45％，黄色油状)。LC-MS:342.2.[M+H]+
步骤2:
在氮气保护下，将化合物2(87mg,0.254mmol)溶解于Dry 1,4-dioxane(3mL)溶液中，Ru PhOS-Pd-G3(11mg,0.0127mmol)，Cs2CO3(83mg,0.254mmol)和化合物3(48mg,0.127mmol)加入到反应液中。反应液于100℃下搅拌3h。反应结束，反应混合物通过硅藻土过滤，固体经EA洗涤，滤液真空浓缩，PTLC(PE/EA＝1:3)纯化，得到化合物4(54mg，收率:62.07％，黄色固体)。LC-MS:684.3.[M+H]+
步骤3:
室温下，将化合物4(54mg,0.079mmol)置于DCM(5mL)中，加入TFA(15d)，反应液搅拌4h。反应结束后，减压浓缩后得到粗产品，粗产品经过碱法反相色谱柱(acetonitrile with 0.05％of NH3·H2O in water 5％to 95％)纯化得到化合物A15(16.53mg，收率：43.28％，淡黄色固体)。LC-MS:484.2.[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.93(s,1H),8.79(s,1H),8.61–8.56(m,2H),8.24(s,1H),7.75(d,J＝9.0Hz,1H), 7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.33(d,J＝8.6Hz,1H),7.18(d,J＝9.3Hz,1H),6.82(d,J＝8.6Hz,1H),4.50(s,2H),4.01(s,2H),3.95(s,2H),3.05(s,2H),2.62(d,J＝5.0Hz,2H),2.59(d,J＝5.2Hz,2H),2.33(s,3H),2.28(s,3H).
实施例16：化合物A16的合成
实验步骤：
步骤1:
在25mL圆底烧瓶中，将化合物1(200mg,1.09mmol)溶解于ACN(8ml)溶液中，加入K2CO3(451mg,3.27mmol)、KI(181mg,1.09mmol)和C3H7BrO(379mg,2.73mmol)，在70℃及氮气气氛下搅拌16h。反应结束，将反应液浓缩，加水，水相用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩后得到粗产品，粗产品经过经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝1:1)得到化合物2(238mg，收率:90.49％，黄色油状)。LC-MS:243.3.[M+H]+
步骤2:
在氮气保护下，将化合物2(38mg,0.158mmol)溶解于Dry 1,4-dioxane(2mL)溶液中，Ru PhOS-Pd-G3(7mg,0.0079mmol)，Cs2CO3(52mg,0.158mmol)和化合物3(30mg,0.079mmol)加入到反应液中。反应液于100℃下搅拌3h。反应结束，反应混合物通过硅藻土过滤，固体经EA洗涤，滤液真空浓缩，PTLC(PE/EA＝1:2)纯化，得到化合物4(45mg，收率:97.09％，黄色固体)。LC-MS:585.3.[M+H]+
步骤3:
室温下，将化合物4(45mg,0.077mmol)置于DCM(5mL)中，加入TFA(25d)，反应液搅拌2h。反应结束后，减压浓缩后得到粗产品，粗产品经过酸法反相色谱柱(acetonitrile with 0.1％of FA in water 5％to 95％)纯化得到化合物A16(13.74mg,收率:36.85％，淡黄色固体)。LC-MS:485.2.[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.96(s,1H),8.79(s,1H),8.59(d,J＝11.3Hz,2H),8.24(s,1H),7.75(d,J＝9.1Hz, 1H),7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.34(d,J＝8.4Hz,1H),7.18(d,J＝9.2Hz,1H),6.85(d,J＝7.6Hz,1H),4.50(s,2H),4.04(s,4H),3.54(s,2H),3.27(s,3H),3.13(s,2H),2.71(d,J＝29.3Hz,2H),2.33(s,3H).
其他代表性实施例化合物如下所示，但并不限于这些。
活性测试实施例1：HPK1ADP-Glo酶活实验
酶活实验使用的缓冲液含有5mM MOPS(pH＝7.2)，2.5mMβ-Glycerol Phosphate，0.4mM EDTA，1mM EGTA，0.05mM DTT，5mM MgCl2。化合物溶于100％DMSO，母液浓度为10mM。测试起始浓度为5uM，三倍梯度稀释，十个数据点，每个点重复两次。HPK1蛋白购买自Thermo(货号：PV6355)，稀释至2X母液，浓度为10nM(酶活测定最终蛋白浓度为5nM)。2.5μl 2X HPK1蛋白分别加至含有待测化合物的平板各孔中，1000rpm离心30秒，然后在25℃孵育15分钟。MBP蛋白购买自Millipore(货号：13-110)，ATP购买自Sigma(货号：A7699-5G)，将二者配成2X工作液，浓度为4uM和80uM。加入2.5μl 2X MBP和ATP的混合物，1000rpm离心30秒，然后在25℃孵育90分钟。之后加入5ul ADP-GloTM(Promega，货号：V9102)到实验平板中，1000rpm离心30秒25℃孵育60分钟。最后，加入10ul激酶检测试剂(Promega，货号：V9102)到实验平板中，1000rpm离心30秒25℃孵育60分钟，测定最终的荧光读数。依据该读数，计算化合物的IC50。实验结果如下表所示：
表1 HPK1ADP-Glo酶活实验结果


由表1结果可知，本发明的化合物对HPK1具有较高的抑制活性。
活性测试实施例2：GLK酶学实验
1、实验材料
GLK酶学试剂盒购自Promega(Cat#VA7177)。ATP购自Sigma(Cat#A7699-5G)，BSA购自Miltenyi Biotec(Cat#130-091-376)，ADP-GLO试剂盒购自Promega(Cat#V9102)。
2、实验方法
使用ADP-GLO的方法可以检测GLK酶学试剂盒中GLK的活性和化合物对GLK活性的抑制作用。实验反应在384孔板(Conrning,Cat#4512)中进行，总反应体系为20ul。反应体系主要包括1×激酶缓冲液，0.1mg/ml BSA,500μM DTT,12.5nM GLK,0.1ug/ul PKA substrate和30uM ATP。将化合物用DMSO连续稀释10个浓度点，转移50nl至实验测定板。在加入12.5nM GLK后实验反应开始，25℃反应90分后，实验通过加入5μL ADP‐GloTM试剂终止。60分钟后，加入10μL激酶检测试剂。室温孵育60分钟后，实验板通过envision进行读数。
3、数据分析
将发光信号值转变为百分抑制率。抑制率％＝(样品值-最大值)/(最小值-最大值)×100。最小值是指不加GLK但是加入DMSO和底物(PKA substrate和ATP)的孔测定的值，最大值是指加入DMSO、GLK和底物(PKA substrate和ATP)的孔测定的值。通过excel中XLFit(版本5.3.1.3)计算IC50值。方程式：Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+(IC50/X)^HillSlope)。
化合物的GLK对HPK1的选择性(Fold Selectivity over HPK1)＝(IC50of GLK)/(IC50of HPK1)
4、实验结果
根据以上实验方法，测得的化合物的选择性如下表所示：
表2化合物的GLK对HPK1的选择性实验结果
活性测试实施例3：KHS1酶学实验
1、实验材料
KHS1酶学试剂盒购自Promega(Cat#V4108)。ATP购自Sigma(Cat#A7699-5G),staurosporine购自MedChemExpress(Cat#HY-15141)，BSA购自Miltenyi Biotec(Cat#130-091-376)，ADP-GLO试剂盒购自Promega(Cat#V9102)。
2、实验方法
使用ADP-GLO的方法可以检测KHS1酶学试剂盒中KHS1的活性和化合物对KHS1活性的抑制作用。实验反应在384孔板(Conrning,Cat#4512)中进行，总反应体系为20ul。反应体系主要包括1×激酶缓冲液，0.1mg/ml BSA,50μM DTT,0.8ug/ml KHS1,0.1ug/ul MBP protein和10uM ATP。将化合物用DMSO连续稀释10个浓度点，转移50nl至实验测定板。在加入0.8ug/ml KHS1后实验反应开始，25℃反应120分后，实验通过加入5μL ADP‐GloTM试剂终止。60分钟后，加入10μL激酶检测试剂。室温孵育60分钟后，实验板通过envision进行读数。
3、数据分析
将发光信号值转变为百分抑制率。抑制率％＝(样品值-最大值)/(最小值-最大值)×100。最小值是指不 加KHS1但是加入DMSO和底物(MBP protein和ATP)的孔测定的值，最大值是指加入DMSO、KHS1和底物(MBP protein和ATP)的孔测定的值。通过excel中XLFit(版本5.3.1.3)计算IC50值。方程式：Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+(IC50/X)^HillSlope)。
化合物的KHS1对HPK1的选择性(Fold selectivity over HPK1)＝(IC50 of KHS1)/(IC50 of HPK1)
4、实验结果
根据以上实验方法，测得的化合物的选择性如下表所示：
表3化合物的KHS1对HPK1的选择性实验结果
由实施例2和3的实验结果可知，本发明的化合物对HPK1具有较高的选择性。
活性测试实施例4：化合物对PBMC分泌IL-2的影响
实验步骤如下：
1)复苏hPBMC，过夜培养；
2)收集细胞悬液离心，将得到的细胞沉淀用10％FBS 1640培养基重悬，并调整细胞浓度1×106/ml，200μl/孔加到96孔板中，备用；
3)化合物储存浓度为10mM，用DMSO依次进行3倍稀释至8个浓度梯度，再用PBS稀释10倍稀释，每孔加2uL不同浓度的已稀释好的化合物，混合均匀；
4)每孔加入1μL anti-CD3/CD28磁珠激活处理24小时后离心收集上清液；将上清液稀释200倍，通过ELISA方法检测IL-2水平。
实验结果如下表所示：
表4化合物对PBMC分泌IL-2的影响结果
由实施例4结果可知，本发明的化合物可有效增加PBMC中IL-2的产生，Fold change＝1.5时化合物的浓度可低于4000nM，进一步地，可低于2000nM，低于1000nM，甚至可低于500nM，对于提高机体免疫能力，治疗肿瘤、炎症性疾病等疾病非常有利。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换等，均应包含在本发明的保护范围之内。
本发明中描述的前述实施例和方法可以基于本领域技术人员的能力、经验和偏好而有所不同。
本发明中仅按一定顺序列出方法的步骤并不构成对方法步骤顺序的任何限制。

Claims (21)

  1. 一种化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物，其特征在于，所述化合物具有如下式(I)结构：
    其中，
    Y为C(R')或N；
    X选自：共价键、-O-、-S-、-NR'-、-S(O)2-、-S(O)2NR'-、-S(O)-、-S(O)NR'-、-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)NR'-、-C(O)N(R')O-、-OC(O)-、-OC(O)NR'-、-N(R')C(O)O-、-N(R')C(O)-、-N(R')S(O)2-；或者，X为C1-4二价饱和或不饱和直链或支链烃链，其中烃链的一个或两个亚甲基单元任选且独立地被-C(R'R”)-、-N(R')-、-N(R')C(O)-、-C(O)N(R')-、-N(R')S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-或-S(O)2取代；
    R1为11元以上饱和或部分不饱和的双环杂环基、11元以上饱和或部分不饱和的三环杂环基，其中所述杂环基可以被m个RA取代，m为0-6的整数；
    R2和R3独立地选自以下基团：H、卤素、-CN、-NO2、-OR'、-NR'R”、-S(O)t-R'、-S(O)t-NR'R”、-COR'、-C(O)OR'、-C(O)NR'R”、-C(O)N(R')OR”、-OC(O)R'、-OC(O)NR'R”、-NR'C(O)R”、-N(R')C(O)NR'R'、-N(R')C(NR')NR'R'、-NR'-S(O)t-R'、-NR'-S(O)t-NR'R'、-N＝S(O)R'R”、-S(NR')(O)R”、-N(R')CN、-P(O)(R')NR'R”、-P(O)(R')OR”或-P(O)R'R”、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环基烷基，其中所述基团中的一个或多个H可以被选自以下的取代基取代：卤素、-CN、-NO2、-OR'、-NR'R”、-S(O)t-R'、-S(O)t-NR'R”、-COR'、-C(O)OR'、-C(O)NR'R”、-C(O)N(R')OR”、-OC(O)R'、-OC(O)NR'R”、-NR'C(O)R”、-N(R')C(O)NR'R'、-N(R')C(NR')NR'R'、-NR'-S(O)t-R'、-NR'-S(O)t-NR'R'、-N＝S(O)R'R”、-S(NR')(O)R”、-N(R')CN、-P(O)(R')NR'R”、-P(O)(R')OR”或-P(O)R'R”；或，R2和R3与其连接的碳原子一起形成碳环或杂环；或，R2和X与其连接的碳原子一起形成碳环或杂环；所述碳环或杂环上的一个或多个H可以被选自以下的取代基取代：卤素、-CN、-NO2、-OR'、-NR'R”、-S(O)t-R'、-S(O)t-NR'R”、-COR'、-C(O)OR'、-C(O)NR'R”、-C(O)N(R')OR”、-OC(O)R'、-OC(O)NR'R”、-NR'C(O)R”、-N(R')C(O)NR'R'、-N(R')C(NR')NR'R'、-NR'-S(O)t-R'、-NR'-S(O)t-NR'R'、-N＝S(O)R'R”、-S(NR')(O)R”、-N(R')CN、-P(O)(R')NR'R”、-P(O)(R')OR”或-P(O)R'R”；
    R4为脂肪环、芳环或杂环基团，其中所述基团可以被n个RB取代，n为0-6的整数；或，R3和R4与其连接的碳原子一起形成碳环或杂环，所述碳环或杂环上的一个或多个H可以被选自以下的取代基取代：卤素、-CN、-NO2、-OR'、-NR'R”、-S(O)t-R'、-S(O)t-NR'R”、-COR'、-C(O)OR'、-C(O)NR'R”、-C(O)N(R')OR”、-OC(O)R'、-OC(O)NR'R”、-NR'C(O)R”、-N(R')C(O)NR'R'、-N(R')C(NR')NR'R'、-NR'-S(O)t-R'、-NR'-S(O)t-NR'R'、-N＝S(O)R'R”、-S(NR')(O)R”、-N(R')CN、-P(O)(R')NR'R”、-P(O)(R')OR”或-P(O)R'R”；
    各RA和RB独立地选自：H、＝O、卤素、-CN、-NO2、-OR'、-NR'R”、-S(O)t-R'、-S(O)t-NR'R”、-COR'、-C(O)OR'、-C(O)NR'R”、-C(O)N(R')OR”、-OC(O)R'、-OC(O)NR'R”、-NR'C(O)R”、-N(R')C(O)NR'R'、-N(R')C(NR')NR'R'、-NR'-S(O)t-R'、-NR'-S(O)t-NR'R'、-N＝S(O)R'R”、-S(NR')(O)R”、-N(R')CN、-P(O)(R')NR'R”、-P(O)(R')OR”或-P(O)R'R”、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环基烷基；
    t为0、1或2；
    各R'和R”独立地选自：H、卤素、-CN、-NO2、烷基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环基烷基；或，与同一个氮连接的R'和R”与该氮原子一起形成杂环。
  2. 如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自如下结构：
    其中，R5和R6独立地选自：H、任选取代的C1-6脂肪族基团，或者，R5和R6与其中间的原子一起形成任选取代的杂环基。
  3. 如权利要求1-2任一项所述的化合物，其特征在于，Y为C(R')，例如，CH、CCl、CF、CCH3，特别是CH。
  4. 如权利要求1-3任一项所述的化合物，其特征在于，X为-NR'-，R'为H、C1-6烷基、C3-6环烷基；
    优选地，X为-NH-。
  5. 如权利要求1-4任一项所述的化合物，其特征在于，R1为11元以上饱和或部分不饱和的稠合双环杂环基、11元以上饱和或部分不饱和的螺接双环杂环基、11元以上饱和或部分不饱和的桥接双环杂环基、11元以上饱和或部分不饱和的稠合三环杂环基或11元以上饱和或部分不饱和的部分 稠合(其他环螺接或桥接)三环杂环基，其中所述杂环基可以被m个RA取代，m为0-6的整数。
  6. 如权利要求5所述的化合物，其特征在于，R1为其中，A环与B环稠合，A环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，B环为7-10元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环；
    优选地，A环为5-6元单环杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种；
    优选地，B环为7-8元饱和或部分不饱和的单环碳环或杂环或桥接杂环，例如 中的一种；
    更优选地，R1选自：
  7. 如权利要求5所述的化合物，其特征在于，R1为其中，A'环与B'环稠合，B'环与C'环稠合，A'环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，B'环为7-10元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，C'环为4-8元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环；
    优选地，A'环为5-6元单环杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种；
    优选地，B'环为7-8元饱和或部分不饱和的单环碳环或杂环，例如 中的一种；
    优选地，C'环为5-6元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，例如 中的一种；
    更优选地，R1选自：
  8. 如权利要求5所述的化合物，其特征在于，R1为其中，A”环与 B”环稠合，B”环与C”环螺接，A”环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，B”环为7-10元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，C”环为3-6元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环；
    优选地，A”环为5-6元单环杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种；
    优选地，B”环为7-8元饱和或部分不饱和的单环碳环或杂环，例如 中的一种；
    优选地，C”环为3-6元饱和的单环碳环，例如中的一种；
    更优选地，R1选自：
  9. 如权利要求6-8任一项所述的化合物，其特征在于，m为0、1、2、3、4、5、6，特别是1、2或3；
    各RA可以独立地选自：H、＝O、卤素(例如-F)、-CN、-NO2、C1-6烷基(例如-CH3、 )、C1-6卤代烷基(例如-CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3)、-OH、C1-6烷氧基(例如)、C1-6羟基取代烷基(例如 )、C1-6烷氧基取代烷基(例如)、-NH2、C1-6烷胺基(例如)、C1-6烷胺基取代烷基(例如)、C3-10环烷基(例如 )、C4-8环烷基烷基(例如)、 3-10元饱和杂环基(例如 )、C5-10杂芳基(例如 )、
    优选地，各RA独立地选自：H、-F、-Cl、-Br、-I、-CH3、 -CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3、-OH、 -NH2、
  10. 如权利要求1-4任一项所述的化合物，其特征在于，R1选自：

  11. 如权利要求1-10任一项所述的化合物，其特征在于，R4为3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环、8-12元饱和或部分不饱和的双环碳环、8-12元饱和或部分不饱和的双环杂环、10元以上饱和或部分不饱和的三环碳环、10元以上饱和或部分不饱和的三环杂环、苯环、萘环或蒽环基团，其中所述基团可以被n个RB取代，n为0-6的整数。
  12. 如权利要求11所述的化合物，其特征在于，R4为E环为4-6元饱和或部分不饱和的单环杂环基团，例如 中的一种；
    优选地，R4选自：
  13. 如权利要求11所述的化合物，其特征在于，R4为其中，E'环与F'环稠合，E'环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，F'环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环；
    优选地，E'环为5-6元饱和或部分不饱和的单环杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种；
    优选地，F'环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种；
    更优选地，R4选自：
  14. 如权利要求11所述的化合物，其特征在于，R4为其中，E”环与F”环稠合，F”环与G”环稠合，E”环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，F”环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环、G”环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环；
    优选地，E”环为5-6元饱和或部分不饱和的单环杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种；
    优选地，F”环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种；
    优选地，G”环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，例如 中的一种；
    更优选地，R4选自：
  15. 如权利要求11所述的化合物，其特征在于，R4为其中，E”'环与F”'、G”'环均稠合，F”'环与G”'环也稠合，E”'环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，F”'环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环、G”'环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环；
    优选地，E”'环为5-6元饱和或部分不饱和的单环杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种；
    优选地，F”'环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种；
    优选地，G”'环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，例如 中的一种；
    更优选地，R4选自：
  16. 如权利要求11所述的化合物，其特征在于，R4为其中，E””环与F””环稠合，F””环与G””环螺接，E””环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环或杂环，F””环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环或杂环，G””环为3-6元饱和或部分不饱和的单环碳环或杂环；
    优选地，E””环为5-6元单环杂环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环，例如
    优选地，F””环为5-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、杂环或苯环，特别是5-6元部分不饱和的单环杂环或苯环，例如 中的一种；
    优选地，G””环为3-6元饱和的单环碳环，例如中的一种；
    更优选地，R4选自：
  17. 如权利要求12-16任一项所述的化合物，其特征在于，n为0、1、2、3、4、5、6，特别是1、2或3；
    各RB可以独立地选自：H、＝O、卤素(例如-F)、-CN、-NO2、C1-6烷基(例如-CH3、 )、C1-6卤代烷基(例如-CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3)、-OH、C1-6烷氧基(例如)、C1-6羟基取代烷基(例如 )、C1-6烷氧基取代烷基(例如)、-NH2、C1-6烷胺基(例如)、C1-6烷胺基取代烷基(例如 )、C3-10环烷基(例如 )、C4-8环烷基烷基(例如)、3-10元饱和杂环基(例如 )、C5-10杂芳基(例如 )、
    优选地，各RB独立地选自：H、-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH3、 -CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3、-OH、 -NH2、
  18. 如权利要求1-10任一项所述的化合物，其特征在于，R4选自：


    Z为卤素。
  19. 如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自如下结构：









  20. 一种药物组合物，其包含权利要求1-19任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物，以及一种或多种药学上可接受的辅料。
  21. 权利要求1-19任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、酯、前药、溶剂化物、氘代化合物，在制备预防和/或治疗疾病的药物中的应用；
    优选地，所述疾病为与HPK1相关的疾病；
    优选地，所述与HPK1相关的疾病选自：自身免疫性疾病、炎症性疾病、肿瘤；
    优选地，所述自身免疫性疾病选自：自身免疫性糖尿病、系统性红斑狼疮、系统性血管炎、局限性肠炎、心肌病、溶血性贫血、纤维肌痛、格雷夫斯氏病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏疾病、多发性硬化症、重症肌无力、肌炎、中性粒细胞减少症、银屑病、慢性疲乏综合征、幼年型关节炎、青少年糖尿病、硬皮病、银屑病关节炎、斯耶格伦氏综合征、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、桥本氏病、混合性结缔组织病、间质性膀胱炎、恶性贫血、白质脑炎、斑秃、强直性脊柱炎、原发性胆汁性肝硬变、抗GBM肾炎、抗TBM肾炎、抗磷脂综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、自身免疫性阿狄森氏病、慢性活动性肝炎、白癜风、牛皮癣、自身免疫性高脂血症、自身免疫性心肌炎、颞动脉炎、自身免疫性甲状腺病、轴突和神经元神经病、贝切特氏病、大疱性类天疱疮、变应性哮喘、骨关节炎、恰加斯氏病、葡萄膜炎、慢性炎性脱髓鞘性多神经病(CIDP)、疤痕性类天疱疮/良性黏膜类天疱疮、寇甘氏综合征、先天性心脏传导阻滞、柯萨奇病毒性心肌炎、脱髓鞘性神经病、皮肌炎、盘状狼疮、晶状体抗原性色素层炎、结节性多动脉炎、德雷斯勒氏综合征、特发性混合型冷沉淀球蛋白血症、埃文斯综合征、肺出血肾炎综合征、变应性鼻炎、传染性神经元炎、低丙球蛋白血症、包涵体肌炎、水泡大疱疹皮肤病、韦格纳肉芽肿、梅尼尔氏病、兰伯特-伊顿综合征、莫伦氏溃疡、非典型乳糜泻、眼疤痕性类天疱疮、寻常型天疱疮、静脉周脑脊髓炎、心包切开术后综合征、巩膜炎、精子睾丸自身免疫、僵人综合征、亚急性细菌心内膜炎(SBE)、交感性眼炎、横贯性脊髓炎和坏死性脊髓病、I型自身免疫性多腺性综合征、II型自身免疫性多腺性综合征、恶性贫血和子宫内膜异位症中的一种或多种；
    优选地，所述炎症性疾病选自：痛风、慢性阻塞性肺疾病、周期性发热、皮疹、淋巴结肿大、脓血症、哮喘、过敏中的一种或多种；
    优选地，所述肿瘤选自：肾上腺癌、肛门癌、血管肉瘤、阑尾癌、胆道癌、膀胱癌、乳腺癌、脑癌、支气管癌、类癌瘤、宫颈癌、绒毛膜癌、脊索瘤、颅咽管瘤、结肠直肠癌、结缔组织癌、上皮癌、室管膜瘤、内皮肉瘤、子宫内膜癌、食管癌、尤文氏肉瘤、眼癌、胆囊癌、胃癌、胃肠道间质瘤(GIST)、生殖细胞癌、头颈癌、血液系统恶性肿瘤，成血管细胞瘤、下咽癌、炎性肌纤维母细胞瘤、免疫细胞性淀粉样变性、肾癌、肝癌、肺癌、平滑肌肉瘤(LMS)、肌肉癌、间皮瘤、骨髓增生性疾病(MPD)、成神经细胞瘤、神经纤维瘤、神经内分泌癌、骨肉瘤、卵巢癌、乳头状腺癌、胰腺癌、阴茎癌、松果体瘤、原始神经外胚层肿瘤(PNT)、前列腺癌、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、皮肤癌、小肠癌、软组织肉瘤、皮脂腺癌、汗腺癌、滑膜瘤、睾丸癌、甲状腺癌、尿道癌、阴道癌、外阴癌中的一种或多种；
    更优选地，所述血液系统恶性肿瘤选自：白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤；
    优选地，所述疾病为病原体感染相关的疾病；
    优选地，所述病原体感染相关的疾病选自：流感、SARS、COVID-19、病毒性肝炎(如甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎等)、AIDS、狂犬病、登革热、埃博拉病毒病。
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