TWI695839B

TWI695839B - 雙（羥甲基）吡咯并酞嗪混成物、其之製備方法與用途

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Publication number: TWI695839B
Application number: TW107140743A
Authority: TW
Inventors: 李德章; 蘇燦隆; 陳泰霖
Original assignee: 中央研究院
Priority date: 2017-11-17
Filing date: 2018-11-16
Publication date: 2020-06-11
Also published as: EP3710005A4; US11066412B2; JP7093410B2; WO2019099755A1; EP3710005B8; EP3710005B1; TW201922749A; US20200339584A1; JP2021503453A; CN111712246A; EP3710005A1

Abstract

本揭示內容是關於新穎的雙功化合物及其於治療及／或預防癌症之用途。本揭示內容雙功化合物具有式(I)之結構，

其中， A是一有或無取代基之6–10員不飽和碳環； R¹ 是一有或無鹵素、–OR、–OAc、–OSO₂ R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氫、烷基、環烷基或芳基； R² 是氫、烷基、環烷基、芳基或雜芳基； R³ 是–NR^A R^B 、–NHPhR^C 、單或雙醣基，或是一胺基酸基，或是–NR^A R^B 合併形成一有或無取代基之苯胺或環烷基胺，其係選自由嗎啉、吡咯啶、哌啶、1–經取代之哌嗪、1,4’–聯哌啶及4’–經取代之4,4’–聯哌啶所組成的群組；其中哌嗪及4,4’–聯哌啶的取代基是烷基、–(CH₂ )_n CONH(CH₂ )_m NR^A R^B ，其中n及m個別是一介於1至5的整數，且R^A 及R^B 個別是H或C₁ –C₆ 烷基；以及 R^C 是氫、鹵素、烷氧基、–CH₂ OH、–NHCOR_a 、–NHC(O)OR_a ，或是有或無取代基之烷基、烯基、炔基、雜環基或芳基，且R_a 是C_1–6 烷基或芳基；以及非必要地，該芳基或雜芳基具有至少一取代基，其中該至少一取代基係選自由C_1–6 烷基、烷氧基、鹵素、氰基、硝基、–NH₂ 、–NHR_c 、–N(R_c )₂ 、環烷胺基、亞甲二氧基及伸乙二氧基所組成的群組，其中R_c 個別是氫或C_1–10 烷基。

Description

雙(羥甲基)吡咯并酞嗪混成物、其之製備方法與用途

本揭示內容整體來說是關於癌症治療的領域；特別是關於新穎的可展現出抗血管新生及DNA交聯（cross-linking）兩者活性的雙功化合物，以及其於治療及／或預防癌症之用途。

癌症是全世界死亡的主要原因之一。治療癌症通常不外乎外科手術移除及／或投予一化療藥劑或放射治療。已有許多化合物開發來作為抗癌藥劑，然而，大多數的藥物開發商僅藉由標的至一特定的、細胞增生不受控制的細胞機制來設計抗癌藥劑。與其專注於抑制在一特定代謝途徑中的酶，本案發明人藉由將二個活性團簇（moieties）接合成一分子來創造一種具有雙功模式的化合物，具體來說，其中一團簇帶有抗血管新生活性，而另一團簇帶有DNA交聯活性。據此，可預期該混成分子成為一種更具潛力的抗癌藥劑，因其具備兩個可自兩種截然不同的途徑來攻擊癌細胞的官能基。

本案發明人設計並合成新一類的化合物，其是將一VEGF及極光激酶（aurora kinase）抑制團簇與一DNA交聯團簇接合而成。該些新合成的混成化合物在各種不同的人類癌細胞中展現出顯著的抗增生活性，因此，該些化合物是可開發成適合用以治療及／或預防癌症的潛力候選藥物。

據此，本揭示內容的一態樣是提供一種具有式(I)之結構的新穎化合物，以及其藥學上可接受的溶劑合物或立體異構物，

其中， A是一有或無取代基之6–10員不飽和碳環； R¹ 是一有或無鹵素、–OR、–OAc、–OSO₂ R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氫、烷基、環烷基或芳基； R² 是氫、烷基、環烷基、芳基或雜芳基； R³ 是–NR^A R^B 、–NHPhR^C 、單或雙醣基，或是一胺基酸基，或是–NR^A R^B 合併形成一有或無取代基之苯胺（aniline）或環烷基胺（cycloalkylamine），其係選自由嗎啉（morpholine）、吡咯啶（pyrrolidine）、哌啶（piperidine）、1–經取代之哌嗪（1-substituted piperazine）、1,4’–聯哌啶（1,4’-bipiperidine）及4’–經取代之4,4’–聯哌啶（4’-substituted 4,4’-bipiperidine）所組成的群組；其中哌嗪及4,4’–聯哌啶的取代基是烷基、–(CH₂ )_n CONH(CH₂ )_m NR^A R^B ，其中 n及m個別是一介於1至5的整數， R^A 及R^B 個別是H或C₁ –C₆ 烷基；以及 R^C 是氫、鹵素、烷氧基（alkoxy）、–CH₂ OH、–NHCOR_a 、–NHC(O)OR_a ，或是有或無取代基之烷基、烯基、炔基、雜環基或芳基，且R_a 是C_1–6 烷基或芳基；以及非必要地，該芳基或雜芳基具有至少一取代基，其中該至少一取代基係選自由C_1–6 烷基、烷氧基、鹵素、氰基、硝基、–NH₂ 、–NHR_c 、–N(R_c )₂ 、環烷胺基（cycloalkylamino）、亞甲二氧基（methylenedioxy）及伸乙二氧基（ethylenedioxy）所組成的群組，其中R_c 個別是氫或C_1–10 烷基。

依據本揭示內容的某些實施方式，在式(I)中，R³ 是1H–吡唑–3–胺基（1H-pyrazol-3-amino）、1H–咪唑–2–胺基（1H-imidazol-2-amino）或嘧啶–胺基（pyrimidine-amino）。

依據本揭示內容的某些實施方式，在式(I)中，該環烷胺基是選自由吡咯啶基、哌啶基、嗎啉基（morpholino）、哌嗪基及4–哌啶基哌啶基（4-piperidopiperidinyl）所組成的群組。

依據本揭示內容的某些實施方式，特定化合物是式(1–A)，

其中， R¹ 是一有或無鹵素、–OR、–OAc、–OSO₂ R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氫、烷基、環烷基或芳基； R² 是氫、烷基、環烷基、芳基或雜芳基； R³ 是–NR^A R^B 、–NHPhR^C 、單或雙醣基，或是一胺基酸基，或是–NR^A R^B 合併形成一有或無取代基之苯胺或環烷基胺，其係選自由嗎啉、吡咯啶、哌啶、1–經取代之哌嗪、1,4’–聯哌啶及4’–經取代之4,4’–聯哌啶所組成的群組；其中哌嗪及4,4’–聯哌啶的取代基是烷基、–(CH₂ )_n CONH(CH₂ )_m NR^A R^B ，其中 n及m個別是一介於1至5的整數， R^A 及R^B 個別是H或C₁ –C₆ 烷基；以及 R^C 是氫、鹵素、烷氧基、–CH₂ OH、–NHCOR_a 、–NHC(O)OR_a ，或是有或無取代基之烷基、烯基、炔基、雜環基或芳基，且R_a 是C_1–6 烷基或芳基； R⁴ 及R⁵ 個別是氫、–OH、烷氧基或–O(CH₂ )_x N(R_b )₂ ，其中 x是一介於1至5的整數；以及 R_b 是C_1–10 烷基或一環烷胺基；以及非必要地，該芳基或雜芳基具有至少一取代基，其中該至少一取代基係選自由C_1–6 烷基、烷氧基、鹵素、氰基、硝基、–NH₂ 、–NHR_c 、–N(R_c )₂ 、環烷胺基、亞甲二氧基及伸乙二氧基所組成的群組，其中R_c 個別是氫或C_1–10 烷基。

依據一較佳的實施方式，在式(I–A)中，R¹ 是經–OH取代的甲基，R² 是乙基，R³ 是嗎啉，且R⁴ 及R⁵ 個別是氫。

依據一較佳的實施方式，在式(I–A)中，R¹ 是經–OH取代的甲基，R² 是甲基，R³ 是吡咯啶，且R⁴ 及R⁵ 個別是氫。

依據另一較佳的實施方式，在式(I–A)中，R¹ 是經–OH取代的甲基，R² 是甲基，R³ 是1,4’–聯哌啶，且R⁴ 及R⁵ 個別是氫。

依據一進一步的實施方式，在式(I–A)中，R¹ 是經–OCONH(C₂ H₅ )取代的甲基，R² 是甲基，R³ 是吡咯啶，且R⁴ 及R⁵ 個別是氫。

依據本揭示內容的某些實施方式，特定化合物是式(I–B)，

依據一較佳的實施方式，在式(I–B)中，R¹ 是經–OH取代的甲基，R² 是甲基，R³ 是二甲胺，且R⁴ 及R⁵ 個別是氫。

依據另一實施方式，在式(I–B)中，R¹ 是經–OCONH(C₂ H₅ )取代的甲基，R² 是甲基，R³ 是二甲胺，且R⁴ 及R⁵ 個別是氫。

依據一進一步的實施方式，在式(I–B)中，R¹ 是經–OCONH(C₂ H₅ )取代的甲基，R² 是甲基，R³ 是吡咯啶，且R⁴ 及R⁵ 個別是氫。

本揭示內容的第二態樣是提供一種用以治療或預防一罹患或疑似罹患癌症之個體的藥學組合物。該藥學組合物包含一治療或預防有效量之式(I)化合物；以及一藥學上可接受的載體。

該式(I)化合物是以該藥學組合物的總重量為基礎，以重量約0.1％至99％的量存在。在某些實施方式中，該式(I)化合物是以該藥學組合物的總重量為基礎，以重量至少1％的量存在。在特定實施方式中，該式(I)化合物是以該藥學組合物的總重量為基礎，以重量至少5％的量存在。在再其他實施方式中，該式(I)化合物是以該藥學組合物的總重量為基礎，以重量至少10％的量存在。在再又其他實施方式中，該式(I)化合物是以該藥學組合物的總重量為基礎，以重量至少25％的量存在。

較佳地，該化合物具有式(I–A)之結構

其中， R¹ 是一有或無鹵素、–OR、–OAc、–OSO2R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氫、烷基、環烷基或芳基； R² 是氫、烷基、環烷基、芳基或雜芳基； R³ 是–NR^A R^B 、–NHPhR^C 、單或雙醣基，或是一胺基酸基，或是–NR^A R^B 合併形成一有或無取代基之苯胺或環烷基胺，其係選自由嗎啉、吡咯啶、哌啶、1–經取代之哌嗪、1,4’–聯哌啶及4’–經取代之4,4’–聯哌啶所組成的群組；其中哌嗪及4,4’–聯哌啶的取代基是烷基、–(CH₂ )_n CONH(CH₂ )_m NR^A R^B ，其中 n及m個別是一介於1至5的整數， R^A 及R^B 個別是H或C₁ –C₆ 烷基；以及 R^C 是氫、鹵素、烷氧基、–CH₂ OH、–NHCOR_a 、–NHC(O)OR_a ，或是有或無取代基之烷基、烯基、炔基、雜環基或芳基，且R_a 是C_1–6 烷基或芳基； R⁴ 及R⁵ 個別是氫、–OH、烷氧基或–O(CH₂ )_x N(R_b )₂ ，其中 x是一介於1至5的整數；以及 R_b 是C_1–10 烷基或一環烷胺基；以及非必要地，該芳基或雜芳基具有至少一取代基，其中該至少一取代基係選自由C_1–6 烷基、烷氧基、鹵素、氰基、硝基、–NH₂ 、–NHR_c 、–N(R_c )₂ 、環烷胺基、亞甲二氧基及伸乙二氧基所組成的群組，其中R_c 個別是氫或C_1–10 烷基。

任選地或除此外，該式(I–A)化合物是配製成一微脂體。

依據另一較佳的實施方式，在式(I–A)中，R¹ 是經–OH取代的甲基，R² 是甲基，R³ 是吡咯啶，且R⁴ 及R⁵ 個別是氫。

依據一進一步的實施方式，在式(I–A)中，R¹ 是經–OH取代的甲基，R² 是甲基，R³ 是1,4’–聯哌啶，且R⁴ 及R⁵ 個別是氫。

依據再一進一步的實施方式，R¹ 是經–OCONH(C₂ H₅ )取代的甲基，R² 是甲基，R³ 是吡咯啶，且R⁴ 及R⁵ 個別是氫。

依據本揭示內容其他較佳的實施方式，該化合物具有式(I–B)之結構

依據另一較佳的實施方式，在式(I–B)中，R¹ 是經–OCONH(C₂ H₅ )取代的甲基，R² 是甲基，R³ 是二甲胺，且R⁴ 及R⁵ 個別是氫。

依據一進一步較佳的實施方式，在式(I–B)中，R¹ 是經–OCONH(C₂ H₅ )取代的甲基，R² 是甲基，R³ 是吡咯啶，且R⁴ 及R⁵ 個別是氫。

本揭示內容亦涵蓋一種用以治療或預防一罹患或疑似罹患癌症之個體的方法。該方法包含對該個體投予本揭示內容藥學組合物的步驟。

任選地或除此外，該方法更包含在投予本揭示內容藥學組合物之前、同時或之後對該個體投予一化療藥劑。

例示性可用於本揭示內容方法的化療藥劑包括，但不限於，去氧膽草素（deoxyelephantopin，DET）、維羅非尼（Vemurafenib，PLX4032）、多烯紫杉醇（docetaxel）、紫杉醇（paclitaxel）、順鉑（cisplatin）、奧沙利鉑（oxaliplatin）、樺木酸（betulinic acid）、4–S–半胱胺兒茶酚（4–S–cysteaminyl catechol）、4–S–半胱胺酚（4–S–cysteaminyl phenol）、維莫司（everolimus）、硼替佐米（bortezomib）、卡鉑定（carboplatin）、達卡巴嗪（dacarbazine）、塞來昔布（celecoxib）、替莫唑胺（temozolomide）、蕾莎瓦（sorafenib）、沙利多邁（thalidomide）、來那度胺（lenalidomide）、丙戊酸（valproic acid）、長春鹼（vinblastine）、甲磺酸伊馬替尼（imatinib mesylate）、波生坦（bosentan）、阿波胺（apomine）、三氧化砷（arsenic trioxide）、卡莫司汀（carmustine）、拉鉑立茲瑪（lambrolizuma）、抗CTLA-4藥物（anti-CTLA-4 drug）、抗程式性死亡受體-1（PD-1）藥物（anti-programmed death receptor-1（PD-1）drug）、易普利姆瑪（ipilimumab）、崔枚利姆瑪（tremelimumab）、艾黴素（doxorubicin）、MEK抑制劑（MEK inhibitor）、卡培他濱（capecitabine）、聚(ADP-核糖)聚合酶（PARP）抑制劑（poly(ADP-ribose) polymerase（PARP）inhibitor）、磷酸肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）抑制劑、哺乳類雷帕黴素之標靶（mTOR）抑制劑（mammalian target of rapamycin（mTOR）inhibitor）及他莫昔芬（tamoxifen）。

例示性之可利用本揭示內容方法來治療的癌症包括，但不限於，霍杰金氏疾病（Hodgkin’s disease）、非霍杰金氏淋巴瘤（Non–Hodgkin’s lymphomas）、急性骨髓性白血病（acute myelogenous leukemia，AML）、急性淋巴性白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）、慢性骨髓性白血病（chronic myelogenous leukemia，CML）、尤文氏肉瘤（Ewing’s sarcoma）、多發性骨髓瘤（multiple myeloma）、威爾姆斯瘤（Wilms’ tumor）、骨腫瘤（bone tumors）、神經胚細胞瘤（neuroblastoma）、視網膜母細胞瘤（retinoblastoma）、睾丸癌（testicular cancer）、甲狀腺癌（thyroid cancer）、前列腺癌（prostate cancer）、喉癌（larynx cancer）、子宮頸癌（cervical cancer）、鼻咽癌（nasopharynx cancer）、乳癌（breast cancer）、大腸癌（colon cancer）、胰臟癌（pancreatic cancer）、頭頸部癌（head and neck cancer）、食道癌（esophageal cancer）、直腸癌（rectal cancer）、小細胞肺癌（small-cell lung cancer）、非小細胞肺癌（non-small-cell lung cancer）、腦癌（brain cancer）、黑色素瘤（melanoma）、非黑色素瘤皮膚癌（non-melanoma skin cancer）及中樞神經系統腫瘤（CNS neoplasm）。

本揭示內容亦包含一種用以治療或預防一罹患癌症之個體的套組。該套組至少包括一含有該式(I)化合物的第一容器；以及一含有一化療藥劑的第二容器。

下文隨附的說明將詳細闡述本揭示內容的一或多個實施方式。在參閱下文詳細說明以及申請專利範圍之後，本發明的其他特點及優勢當可輕易瞭解。

應當理解的是，前述的一般說明及後文的詳細說明僅是例示性的，且旨在用以解釋本發明。

下文提供了詳細說明及隨附圖式係為了使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，而非代表用以理解或運用本揭示內容的唯一形式。

1. 定義

當列出數值範圍時，其旨在涵蓋該範圍內的每個數值及子範圍。舉例來說，「C_1–10 」是旨在涵蓋C₁ 、C₂ 、C₃ 、C₄ 、C₅ 、C₆ 、C₇ 、C₈ 、C₉ 、C₁₀ 、C_1–10 、C_1–9 、C_1–8 、C_1–7 、C_1–6 、C_1–5 、C_1–4 、C_1–3 、C_1–2 、C_2–10 、C_2–9 、C_2–8 、C_2–7 、C_2–6 、C_2–5 、C_2–4 、C_2–3 、C_3–10 、C_3–9 、C_3–8 、C_3–7 、C_3–6 、C_3–5 、C_3–4 、C_4–10 、C_4–9 、C_4–8 、C_4–7 、C_4–6 、C_4–5 、C_5–10 、C_5–9 、C_5–8 、C_5–7 、C_5–6 、C_6–10 、C_6–9 、C_6–8 、C_6–7 、C_7–10 、C_7–9 、C_7–8 、C_8–10 、C_8–9 及C_9–10 。

除非另有說明，「烷基」（alkyl）一詞是指一種具有1至20（例如1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3、1至2，或是1）個碳原子的直鏈、支鏈及／或環狀（「環烷基」（cycloalkyl））烴。具有1至4個碳（C_1–4 烷基）的烷基團簇稱為「低碳數烷基」（lower alkyl）。烷基的實例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、三級丁基、異丁基、2–異丙基–3–甲基丁基、戊基、戊–2–基、己基、異己基、庚基、庚–2–基、4,4–二甲基戊基、辛基、2,2,4–三甲基戊基、壬基、癸基、十一基及十二基。環烷基團簇可以是單環或是多環，其實例包括環丙基、環丁基、環戊基及環己基。除非另有指明，烷基的每個實例是各自獨立地可以是可任選取代的，亦即，無取代基的（一「無取代基的烷基」（unsubstituted alkyl））或以一或多個取代基進行取代之有取代基的（一「有取代基的烷基」（substituted alkyl））。在特定實施方式中，烷基是有取代基的C_2–10 烷基。在某些實施方式中，環烷基是一單環、飽和、具有3至6環碳原子（「C_3–6 環烷基」）的碳環基。在某些實施方式中，環烷基具有5至6環碳原子（「C_5–6 環烷基」）。C_5–6 環烷基的實例包括環戊基（C₅ ）及環己基（C₆ ）。除非另有指明，環烷基的每個實例是各自獨立地可以是無取代基的（一「無取代基的環烷基」（unsubstituted cycloalkyl））或以一或多個取代基進行取代之有取代基的（一「有取代基的環烷基」（substituted cycloalkyl））。在特定實施方式中，環烷基是無取代基的C_3–10 環烷基。在特定實施方式中，環烷基是有取代基的C_3–10 環烷基。

「雜環烷基」（heterocycloalkyl）是指一種3–至10–員具有環碳原子及1至4環雜原子的非芳環體系之基團（radical），其中每個雜原子是各自獨立地選自氮、氧、硫、磷及矽（「3–10員雜環烷基」（3–10 membered heterocycloalkyl））。內含一或多個氮原子的雜環基，在原子價數允許下，其連接點可以是碳原子或氮原子。除非另有指明，雜環烷基的每個實例是各自獨立地可以是可任選取代的，亦即，無取代基的（一「無取代基的雜環烷基」（unsubstituted heterocycloalkyl））或以一或多個取代基進行取代之有取代基的（一「有取代基的雜環烷基」（substituted heterocycloalkyl））。在某些實施方式中，一雜環基是一具有環碳原子及1–4個環雜原子的5–8員非芳環體系，其中每個雜原子是各自獨立地選自氮、氧及硫。在某些實施方式中，一雜環烷基是一具有環碳原子及1–4個環雜原子的5–6員非芳環體系，其中每個雜原子是各自獨立地選自氮、氧及硫。在某些實施方式中，該5–6員雜環具有1–3個選自氮、氧及硫的環雜原子。在某些實施方式中，該5–6員雜環具有1–2個選自氮、氧及硫的環雜原子。在某些實施方式中，該5–6員雜環烷基具有一個選自氮、氧及硫的環雜原子。例示性的含有一個雜原子的5–員雜環基包括，但不限於，四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、二氫噻吩基、吡咯啶基、二氫吡咯基及吡咯基–2,5–二酮。例示性的含有二個雜原子的5–員雜環基包括，但不限於，二氧雜環戊基、氧硫雜環戊基（oxasulfuranyl）、二硫雜環戊基及㗁唑烷–2–酮。例示性的含有三個雜原子的5–員雜環基包括，但不限於，三唑啉基（triazolinyl）、氧二唑啉基（oxadiazolinyl）及硫二唑啉基（thiadiazolinyl）。例示性的含有一個雜原子的6–員雜環基包括，但不限於，哌啶基、四氫吡喃基、二氫吡啶基及噻烷基（thianyl）。例示性的含有二個雜原子的6–員雜環基包括，但不限於，哌嗪基、嗎啉基、二噻烷基（dithianyl）及二㗁烷基。例示性的含有二個雜原子的6–員雜環基包括，但不限於，三嗪基（triazinanyl）。例示性的含有一個雜原子的7–員雜環基包括，但不限於，氮雜環庚基、氧雜環庚基（oxepanyl）及硫雜環庚基（thiepanyl）。例示性的含有一個雜原子的8–員雜環基包括，但不限於，氮雜環辛基（azocanyl）、氧雜環辛基（oxecanyl）及硫雜環辛基（thiocanyl）。

除非另有說明，「芳基」（aryl）一詞是指由碳原子及氫原子所構成的芳環或部分的芳環體系。芳基團簇可以包含結合或融合在一起的多環。芳基團簇的實例包括苯基、萘基、芘基、蒽基及菲基。除非另有指明，芳基的每個實例是各自獨立地可以是可任選取代的，亦即，無取代基的（一「無取代基的芳基」（unsubstituted aryl））或以一或多個取代基進行取代之有取代基的（一「有取代基的芳基」（substituted aryl））。在特定實施方式中，該芳基是一有取代基的苯基（例如苄基）。

除非另有說明，一詞「雜芳基」（heteroaryl）是指一芳基團簇，其中以一雜原子（例如N、O或S）取代其碳原子中的至少一個。在某些實施方式中，一雜芳基是一具有環碳原子及1–4個環雜原子於該芳環體系的5–10員芳環體系，其中每個雜原子是各自獨立地選自氮、氧及硫（「5–10員雜芳基」（5–10 membered heteroaryl））。在某些實施方式中，一雜芳基是一具有環碳原子及1–4個環雜原子於該芳環體系的5–8員芳環體系，其中每個雜原子是各自獨立地選自氮、氧及硫（「5–8員雜芳基」（5–8 membered heteroaryl））。在某些實施方式中，一雜芳基是一具有環碳原子及1–4個環雜原子於該芳環體系的5–6員芳環體系，其中每個雜原子是各自獨立地選自氮、氧及硫（「5–6員雜芳基」（5–6 membered heteroaryl））。在某些實施方式中，該5–6員雜芳基具有1–3個選自氮、氧及硫的環雜原子。在某些實施方式中，該5–6員雜芳基具有1–2個選自氮、氧及硫的環雜原子。在某些實施方式中，該5–6員雜芳基具有1個選自氮、氧及硫的環雜原子。除非另有指明，雜芳基的每個實例是各自獨立地可以是可任選取代的，亦即，無取代基的（一「無取代基的雜芳基」（unsubstituted heteroaryl））或以一或多個取代基進行取代之有取代基的（一「有取代基的雜芳基」（substituted heteroaryl））。在特定實施方式中，該雜芳基是無取代基的5–14員雜芳基。在特定實施方式中，該雜芳基是有取代基的5–14員雜芳基。例示性的含有一個雜原子的5–員雜芳基包括，但不限於，吡咯基、呋喃基及噻吩基。例示性的含有二個雜原子的5–員雜芳基包括，但不限於，咪唑基、吡唑基、㗁唑基、異㗁唑基、噻唑基及異噻唑基。例示性的含有三個雜原子的5–員雜芳基包括，但不限於，三唑基、氧二唑基（oxadiazolyl）及硫二唑基（thiadiazolyl）。例示性的含有四個雜原子的 5–員雜芳基包括，但不限於，四唑基。例示性的含有一個雜原子的6–員雜芳基包括，但不限於，吡啶基。例示性的含有二個雜原子的6–員雜芳基包括，但不限於，噠嗪基、嘧啶基及吡嗪基。例示性的含有三或四個雜原子的6–員雜芳基包括，但不限於，分別是三嗪基及四嗪基。例示性的含有一個雜原子的7–員雜芳基包括，但不限於，吖庚因基（azepinyl）、氧雜環庚三烯基（oxepinyl）及硫雜環庚三烯基（thiepinyl）。例示性的含有二個雜原子的10–員雜芳基包括，但不限於，喹唑啉基（quinazolinyl）。

除非另有說明，「烷基芳基」（alkylaryl）或「烷基–芳基」（alkyl-aryl）一詞是指一烷基團簇結合至一芳基團簇。

除非另有說明，「鹵素」（halogen及halo）一詞涵蓋氟、氯、溴及碘。

「胺基」（amino）一詞是指一式：–N(R_c )₂ 的團簇，其中R_c 的每個實例是各自獨立地可以是本文所述之取代基，或是R_c 的二個實例合併形成有取代基的或無取代基的雜環。在特定實施方式中，該胺基是無取代基的胺基（亦即–NH₂ ）。在特定實施方式中，該胺基是有取代基的胺基，其中R_c 的至少一個實例不是氫。

「醣基」（saccharide group）一詞是指一醣類單基團藉由該醣類團簇的任一原子共價連接至另一化合物或原子，例如藉由配糖基碳原子。作為說明，代表性的醣包括，已糖，例如D–葡萄糖、D–甘露糖、D–木糖、D–半乳糖、萬古胺、3–去甲基–萬古胺、3–表–萬古胺、4–表–萬古胺、3–胺基–2,3,6–去氧–L–阿拉伯糖–己糖（3–amino–2,3,6–deoxy–L–arabinose–hexose，acosamine）、放線糖胺（actinosamine）、道諾糖胺（daunosamine）、3–表–道諾糖胺、瑞斯托糖胺（ristosamine）、D–葡糖胺、N–甲基–D–葡糖胺、D–葡糖醛酸、N–乙醯基–D–葡萄糖胺、N–乙醯基–D–半乳糖胺、唾液酸（sialyic acid）、艾杜糖醛酸（iduronic acid）、L–岩藻糖等；戊糖，例如D–核糖或D–阿拉伯糖；酮糖，例如D–核酮糖或D–果糖；雙糖，例如蔗糖、乳糖、麥芽糖、2–O–(α–L–萬古糖胺基)–β–D–吡喃葡萄糖或2–O–(3–去甲基–α–L–萬古糖胺基)–β–D–吡喃葡萄糖；衍生物，例如縮醛、胺、醯化、硫酸化與磷酸化的糖。為該定義的目的，該些醣以常規的三字母命名法表示，醣可以是其開放形式，或是較佳為其吡喃糖形式。

「胺基酸基」（amino acid group）一詞是指一胺基酸單基團藉由該胺基酸團簇的任一原子連接至另一化合物或原子，舉例來說，藉由胺基或羧基官能基，或任一在側鏈上的官能基，例如離胺酸的側鏈胺基。

除非另有說明，當用於描述化學結構或團簇時，「有取代基的」（substituted）一詞是指該結構或團簇的衍生物，其中以一原子取代其一或多個氫原子、化學團簇或官能基例如，但不限於，–OH、–CHO、烷氧基、烷醯氧基（alkanoyloxy）（例如–OAc）、烯基、烷基（例如、甲基、乙基、丙基、三級丁基）、芳基、芳氧基、鹵素或鹵代烷基（例如、–CCl₃ 、–CF₃ 、–C(CF₃ )₃ ）。除非另有說明，一詞「烷氧基」（alkoxy）是指–O–烷基。烷氧基的實例包括，但不限於，–OCH₃ 、–OCH₂ CH₃ 、–O(CH₂ )₂ CH₃ 、-O(CH₂ )₃ CH₃ 、–O(CH₂ )₄ CH₃ 及–O(CH₂ )₅ CH₃ 。「低碳數烷氧基」（lower alkoxy）一詞是指–O–(低碳數烷基)，例如–OCH₃ 及–OCH₂ CH₃ 。

除非另有說明，緊接著前置於一系列名詞的一或多個形容詞應視為適用於每個名詞。舉例來說，「有或無取代基之烷基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基」（optionally substituted alky, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, or heteroaryl）一語與「有或無取代基之烷基、有或無取代基之環烷基、有或無取代基之雜環烷基、有或無取代基之芳基或有或無取代基之雜芳基」（optionally substituted alky, optionally substituted cycloalkyl, optionally substituted heterocycloalkyl, optionally substituted aryl, or optionally substituted heteroaryl）意義相同。

本揭示內容並不限於任一種上述例示性列示的取代基。

「溶劑合物」（solvate）一詞是指通常藉由溶劑分解反應與溶劑結合的化合物形式。此物理結合包含氫鍵。常規溶劑包含水、甲醇、乙醇、乙酸、二甲基亞碸（dimethyl sulfoxide，DMSO）、四氫呋喃（tetrahydrofuran，THF）、乙醚等。本文所述之化合物例如可以結晶形式製備，且可為溶劑合形式。適合的溶劑合物包括藥學上可接受的溶劑合物（例如水合物），且進一步包括化學計量溶劑合物及非化學計量溶劑合物兩者。在某些情形下，例如當一或多個溶劑分子納入結晶固體的晶格中時，溶劑合物將能夠解離。「溶劑合物」涵蓋溶液相及可解離的溶劑合物兩者。

當可理解，具有相同分子式但其原子的鍵合性質或順序或其原子空間排列不同的化合物稱為「異構物」（isomer）。其原子空間排列不同的異構物稱為「立體異構物」（stereoisomer）。

彼此非鏡像的立體異構物稱為「非鏡像異構物」（diastereomer），而該些彼此不重疊的鏡像的立體異構物稱為「鏡像異構物」（enantiomer）。當化合物具有不對稱中心，例如其鍵合四個不同的基團時，一對鏡像異構物是可能存在的。鏡像異構物可以通過其不對稱中心的絕對構型來確認，並藉由Cahn及Prelog的R-和S-順序規則來描述，或是藉由其中分子旋轉偏振光平面的方式來描述並命名為右旋或左旋（即分別為(+)或(–)–異構物）。掌性化合物可以以個別的鏡像異構物或其混合物存在。含有等比例的鏡像異構物混合物稱為「外消旋混合物」（外消旋混合物）。

應當留意的是，如果結構或結構的一部分的立體化學沒有用例如粗體或虛線表示，則該結構或該結構的一部分視為涵蓋其所有的立體異構物。同樣地，具有一個或多個掌性中心的化合物的名稱沒有具明該些中心的立體化學的話，則涵蓋純的立體異構物及其混合物。此外，圖中顯示具有不飽和價數的任一原子均推定為連接至足夠的氫原子以滿足其價數。

為本發明的目的，雜原子（例如氮）可具有氫取代基及／或任一適合的本文所述之取代基，其滿足該雜原子的價數並形成一穩定的團簇。

除非另有說明，一化合物之一「治療有效量」（therapeutically effective amount）是指在治療或應對一疾病或病狀時，或是延緩或減少與該疾病或病狀相關之一或多種病徵時，足以產生治療效益的劑量。一化合物之治療有效量是指治療藥劑的劑量，其不論是單獨投予或與其他治療合併投予，皆能對該疾病或病狀的治療或應對產生治療效益。「治療有效量」一詞可涵蓋能夠改善整體治療、減少或避免該疾病或病狀之病徵或病因，或是提高另一種治療藥劑之治療功效的劑量。

除非另有說明，一化合物之一「預防有效量」（prophylactically effective amount）是指一足以預防一疾病或病狀、一或多種與該疾病或病狀相關之病徵，或是預防其復發的劑量。一化合物之預防有效量是指治療藥劑的劑量，其不論是單獨投予或與其他治療合併投予，皆能對預防該疾病產生預防效益。「預防有效量」一詞可涵蓋能夠改善整體預防或提高另一種預防藥劑之預防功效的劑量。

除非另有說明，「治療」（treat、treating及treatment）一詞是指表示在病患罹患特定疾病或病症時發生的作用，其降低該疾病或病症的嚴重程度，或其一或多種症狀，或延遲或延緩該疾病或病症的進展。

雖然用以界定本發明較廣範圍的數值範圍與參數皆是約略的數值，此處已盡可能精確地呈現具體實施例中的相關數值。然而，任何數值本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差。在此處，「約」（about）一詞通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10％、5％、1％或0.5％之內。或者是，「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實驗例之外，或除非另有明確的說明，當可理解此處所用的所有範圍、數量、數值與百分比（例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例及其他相似者）均經過「約」的修飾。因此，除非另有相反的說明，本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值，且可視需求而更動。至少應將此等數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。

在本文中，單數形式「一」（a）、「一」（an）及「該」（the）包括複數參考值，但依據上下文而另有指示者除外。

2. 新穎的式 (I) 化合物

本揭示內容涵蓋式(I)化合物，以及其藥學上可接受的溶劑合物或立體異構物，

其中， A是一有或無取代基之6–10員不飽和碳環； R¹ 是一有或無鹵素、–OR、–OAc、–OSO₂ R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氫、烷基、環烷基或芳基； R² 是氫、烷基、環烷基、芳基或雜芳基； R³ 是–NR^A R^B 、–NHPhR^C 、單或雙醣基，或是一胺基酸基，或是–NR^A R^B 合併形成一有或無取代基之苯胺或環烷基胺，其係選自由嗎啉、吡咯啶、哌啶、1–經取代之哌嗪、1,4’–聯哌啶及4’–經取代之4,4’–聯哌啶所組成的群組；其中哌嗪及4,4’–聯哌啶的取代基是烷基、–(CH₂ )_n CONH(CH₂ )_m NR^A R^B ，其中 n及m個別是一介於1至5的整數， R^A 及R^B 個別是H或C₁ –C₆ 烷基；以及 R^C 是氫、鹵素、烷氧基、–CH₂ OH、–NHCOR_a 、–NHC(O)OR_a ，或是有或無取代基之烷基、烯基、炔基、雜環基或芳基，且R_a 是C_1–6 烷基或芳基；以及非必要地，該芳基或雜芳基具有至少一取代基，其中該至少一取代基係選自由C_1–6 烷基、烷氧基、鹵素、氰基、硝基、–NH₂ 、–NHR_c 、–N(R_c )₂ 、環烷胺基、亞甲二氧基及伸乙二氧基所組成的群組，其中R_c 個別是氫或C_1–10 烷基。

依據本揭示內容的某些實施方式，在式(I)中，R³ 是1H–吡唑–3–胺基、1H–咪唑–2–胺基或嘧啶–胺基。

依據本揭示內容進一步的實施方式，在式(I)中，該環烷胺基是選自由吡咯啶基、哌啶基、嗎啉基、哌嗪基及4–哌啶基哌啶基所組成的群組。

依據本揭示內容的某些實施方式，特定化合物是式(1–A)，

其中， R¹ 是一有或無鹵素、–OR、–OAc、–OSO₂ R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氫、烷基、環烷基或芳基； R² 是氫、烷基、環烷基、芳基或雜芳基； R³ 是–NR^A R^B 、–NHPhR^C 、單或雙醣基，或是一胺基酸基，或是–NR^A R^B 合併形成一有或無取代基之苯胺或環烷基胺，其係選自由嗎啉、吡咯啶、哌啶、1–經取代之哌嗪、1,4’–聯哌啶及4’–經取代之4,4’–聯哌啶所組成的群組；’其中哌嗪及4,4’–聯哌啶的取代基是烷基、–(CH₂ )_n CONH(CH₂ )_m NR^A R^B ，其中 n及m個別是一介於1至5的整數， R^A 及R^B 個別是H或C₁ –C₆ 烷基；以及 R^C 是氫、鹵素、烷氧基、–CH₂ OH、–NHCOR_a 、–NHC(O)OR_a ，或是有或無取代基之烷基、烯基、炔基、雜環基或芳基，且R_a 是C_1–6 烷基或芳基； R⁴ 及R⁵ 個別是氫、–OH、烷氧基或–O(CH₂ )_x N(R_b )₂ ，其中 x是一介於1至5的整數；以及 R_b 是C_1–10 烷基或一環烷胺基；以及非必要地，該芳基或雜芳基具有至少一取代基，其中該至少一取代基係選自由C_1–6 烷基、烷氧基、鹵素、氰基、硝基、–NH₂ 、–NHR_c 、–N(R_c )₂ 、環烷胺基、亞甲二氧基及伸乙二氧基所組成的群組，其中R_c 個別是氫或C_1–10 烷基。

例示性的式(I–A)化合物包括，但不限於，下列化合物：

式(I–A)

依據本揭示內容的某些實施方式，特定化合物是式(I–B)，

例示性的式(I–B)化合物包括，但不限於，下列化合物：

式(I–B)

本揭示內容的化合物含有一或多個立構中心（stereocenter），因此可存在鏡像異構物的外消旋混合物或非鏡像異構物的混合物。本揭示內容因此涵蓋這類化合物的立體異構體純的形式，以及該些形式的混合物。可藉由不對稱合成，或是利用例如結晶法、層析法，以及使用光學分割劑等常規技術進行解析來製備立體異構物。一種較佳的自一外消旋混合物分離鏡像異構物的方式是藉由使用高效液相層析法（high performance liquid chromatography，HPLC）來製備。或者是，在一溶劑中，藉由與一光學活性形式的光學分割劑進行反應來將外消旋化合物分離成其鏡像異構物。取決於光學分割劑的光學形式，可將二個鏡像異構物的其中之一分離成一高產率及高光學純度的不溶性鹽類，而保留另一鏡像異構物在溶液中。

因此，本揭示內容進一步的涵蓋本揭示內容化合物的立體異構物混合物。亦涵蓋本揭示內容化合物的構型異構物（例如順式及反式異構物，無論是否涉及雙鍵），其可以是摻和物（admixture）或是純的或實質上純的形式。

3. 使用方法

本揭示內容涵蓋一種用以治療或預防一罹患癌症之個體的方法。該方法包含對該個體投予一治療或預防有效量之本揭示內容式(I)化合物的步驟，據以抑制癌症生長。

在某些實施方式中，該方法進一步包括在投予該式(I)化合物之前、同時或之後對該個體投予一化療藥劑的步驟。該化療藥劑可選自由去氧膽草素、維羅非尼、多烯紫杉醇、紫杉醇、順鉑、奧沙利鉑、樺木酸、4–S–半胱胺兒茶酚、4–S–半胱胺酚、維莫司、硼替佐米、卡鉑定、達卡巴嗪、塞來昔布、替莫唑胺、蕾莎瓦、沙利多邁、來那度胺、丙戊酸、長春鹼、甲磺酸伊馬替尼、波生坦、阿波胺、三氧化砷、卡莫司汀、拉鉑立茲瑪、抗CTLA-4藥物、抗PD-1藥物、易普利姆瑪、崔枚利姆瑪、艾黴素、MEK抑制劑、卡培他濱、PARP抑制劑、PI3K抑制劑、mTOR抑制劑及他莫昔芬所組成的群組。

在本揭示內容中，該癌症可以是霍杰金氏疾病、非霍杰金氏淋巴瘤、急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病、尤文氏肉瘤、多發性骨髓瘤、威爾姆斯瘤、骨腫瘤、神經胚細胞瘤、視網膜母細胞瘤、睾丸癌、甲狀腺癌、前列腺癌、喉癌、子宮頸癌、鼻咽癌、乳癌、大腸癌、胰臟癌、頭頸部癌、食道癌、直腸癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、腦癌、黑色素瘤、非黑色素瘤皮膚癌或中樞神經系統腫瘤的任何一種。依據一較佳的實施方式，可利用本揭示內容式(I)化合物來治療的癌症的是小細胞肺癌。依據另一較佳的實施方式，可利用本揭示內容式(I)化合物來治療的癌症是急性淋巴性白血病。

該式(I)化合物的量、投藥途徑及投藥時程將視各種因素而定，例如待治療、預防或應對的特定適應症、病患的年齡、性別及病狀。這類因素所起的作用是本領域所熟知的，並且可藉由常規試驗進行調整。

4. 藥學製劑

本揭示內容涵蓋用以治療或預防癌症的藥學組合物。該藥學組合物包含一治療或預防有效量之本揭示內容式(I)化合物。

在某些較佳的實施方式中，該藥學組合物更包含一化療藥劑。該化療藥劑可選自由去氧膽草素、維羅非尼、多烯紫杉醇、紫杉醇、順鉑、奧沙利鉑、樺木酸、4–S–半胱胺兒茶酚、4–S–半胱胺酚、維莫司、硼替佐米、卡鉑定、達卡巴嗪、塞來昔布、替莫唑胺、蕾莎瓦、沙利多邁、來那度胺、丙戊酸、長春鹼、甲磺酸伊馬替尼、波生坦、阿波胺、三氧化砷、卡莫司汀、拉鉑立茲瑪、抗CTLA-4藥物、抗PD-1藥物、易普利姆瑪、崔枚利姆瑪、艾黴素、MEK抑制劑、卡培他濱、PARP抑制劑、PI3K抑制劑、mTOR抑制劑及他莫昔芬所組成的群組。

特定藥學組合物可以是適用於病患口服、黏膜（例如鼻、舌下、陰道、口腔或直腸）、非口服（例如皮下、靜脈內、大劑量注射、肌內或動脈內）或經皮吸收的單一單位劑型。劑型的實例包括，但不限於：片劑、膠囊形片劑；膠囊，例如軟彈性明膠膠囊；扁囊劑（cachets）；錠劑（troches）；含片（lozenges）；分散劑；栓劑；軟膏劑；糊劑（泥敷劑）；泥膏劑；散劑；敷料劑；霜劑；硬膏劑；溶液；貼劑；氣溶膠（例如鼻噴霧劑或吸入劑）；凝膠劑；適用於病患口服或黏膜投予的液體劑型，包括懸浮液（例如水性或非水性的液體懸浮液、水包油乳液或油包水乳液）、溶液和酏劑；適用於病患非口服投藥的液體劑型；以及可進行還原以提供適用於對病患非口服投藥的液體劑型之無菌固體（例如，晶型或非晶型固體）。

製劑應配合投藥方式。舉例來說，口服投藥需要腸溶衣以避免本揭示內容化合物在胃腸道內降解。同樣地，製劑可含有可促進活性成分遞送至作用部位的成分。舉例來說，可以微脂體製劑形式投予化合物，以避免其受降解酶降解、促進在循環系統內的運輸，以及有效穿越細胞膜到達胞內部位的遞送。

同樣地，可在增溶劑、乳化劑和表面活性劑的幫助下將溶解性差的化合物摻入液體劑型（及適用於還原的劑型）中，所述增溶劑、乳化劑和表面活性劑例如，但不限於，環糊精（例如α–環糊精或β–環糊精），以及非水性的溶劑，例如，但不限於，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3–丁二醇、二甲基甲醯胺、二甲基亞碸（DMSO）、生物相容性油（例如棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油）、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇、山梨聚糖的脂肪酸酯及其混合物（例如DMSO：玉米油）、脂肪例如蛋黃卵磷脂（egg york phosphatidylcoline，EPC）、大豆卵磷脂（soybean phosphatidylcholine，SPC）、1,2–油醯基–sn–甘油基–3–磷酸膽鹼（DOPC）、1,2–二硬脂醯基–sn–甘油基–3–磷酸膽鹼（DSPC）、膽固醇（CHO）、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼（DPPC）及PEG–2000。依據一較佳的實施方式，該式(I)化合物（亦即BO–2590）是摻入脂肪以形成適用於口服或非口服投藥的微脂體。

劑型的組成、形狀和類型將隨著其使用的不同而變化。舉例來說，在疾病的急性治療中使用的劑型可以包含相較於在相同疾病的慢性治療中使用的劑型更大量的一或多種其所包含的活性成分。同樣地，非口服劑型可以包含相較於用於治療相同疾病的口服劑型更少量的一或多種其所包含的活性成分。本揭示內容所涵蓋的特定劑型彼此不同的這類以及其他方式，對本領域專業人員來說會是顯而易見的。參照例如Remington’s Pharmaceutical Sciences , 18th ed., Mack Publishing, Easton PA (1990)。

4.1 口服劑型

適用於口服投藥的本揭示內容藥學組合物可以作為離散的劑型提供，例如，但不限於，片劑（例如可咀嚼片劑）、錠劑、膠囊及液體（例如調味糖漿）。這類劑型包含預定量的活性成分，且可藉由本領域專業人員熟知的製藥方法來製備。參照例如Remington’s Pharmaceutical Sciences , 18th ed., Mack Publishing, Easton PA (1990)。

可依據常規藥物合成技術將活性成分與至少一種賦形劑配成密切的摻和物來製備典型的口服劑型。取決於投藥所需的製劑形式，賦形劑可以採取廣泛的各種形式。

由於可易於投藥的緣故，片劑及膠囊成為最具優勢的口服單位劑型的代表。若有需要，可藉由常規的水性或非水性技術將片劑包衣。可藉由常規製藥方法來製備這類劑型。整體來說，藉由將活性成分與液體載體、細分散的固體載體或兩者均勻充分混合，然後若有需要，將產品成形為欲求的外觀，來製備藥學組合物及劑型。可在固體劑型中摻入崩解劑以便於迅速溶出。也可摻入潤滑劑以便於劑型（例如片劑）的製造。

4.2 非口服劑型

可藉由各種不同的途徑對病患投予非口服劑型，這些途徑包括，但不限於，皮下、靜脈內（包括大劑量注射）、肌肉內及動脈內。因為其投藥方式基本上繞過病患對抗污染物的天然防禦機制，因此非口服劑型是要確實無菌或能夠在對病患投藥前可滅菌。非口服劑型的實例包括，但不限於，隨時用於注射的溶液、隨時可溶解或懸浮在注射用的藥學上可接受的載體中的乾產品、隨時用於注射的懸浮液，以及乳劑。

可用於本揭示內容非口服劑型的適合載體，對於本領域專業人員來說是熟知的。實例包括，但不限於，水；水性載體例如，但不限於，氯化鈉溶液、林格氏液及葡萄糖；與水混溶的載體例如，但不限於，乙醇、聚乙二醇及聚丙二醇；以及非水性載體例如，但不限於，脂肪、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯及苯甲酸苄酯。

4.3 經皮、局部及黏膜 劑型

經皮、局部及黏膜劑型包括，但不限於，眼用溶液、噴劑、氣溶膠、霜劑、洗劑、軟膏劑、凝膠劑、溶液、乳劑、懸浮液或本領域專業人員熟知的其他形式。參照例如Remington’s Pharmaceutical Sciences , 18th eds., Mack Publishing, Easton PA (1990)。經皮劑型包括「儲庫型」（reservoir type）或「基質型」（matrix type）貼劑，其可施用於皮膚並使用一段特定時間，使欲求的活性成分的量來穿透。

可用於經皮、局部及黏膜劑型的適合賦形劑（例如載體及稀釋劑）及其他材料對製藥領域的專業人員來說是熟知的，且其取決於給定的藥學組合物或劑型所施用的特定組織。

取決於待治療的特定組織，在使用本揭示內容活性成分進行治療之前、同時或之後，可使用附加的組分。舉例來說，可使用滲透增強劑來輔助遞送活性成分至組織。

亦可調整藥學組合物或劑型、或藥學組合物或劑型所施用的組織之pH，來改進一或多種活性成分的遞送。同樣地，可調整溶劑載體的極性、其離子強度或張力，來改進遞送。亦可添加化合物（例如硬脂酸酯）至藥學組合物或劑型，以利改變一或多種活性成分的親水性或親脂性，據以改進遞送。就此部分來說，硬脂酸酯可用作製劑的脂肪載體，作為乳化劑或表面活性劑，並用作遞送增強劑或滲透增強劑。可使用不同的活性成分的鹽、水合物或溶劑合物，來進一步調整所得組合物的性質。

5. 套組

本揭示內容亦涵蓋用以治療或預防一個體之癌症的套組套組。

依據本揭示內容，該套組至少包括一含有本揭示內容式(I)化合物的第一容器，一含有上述之化療藥劑的第二容器；以及與套組相關的說明書，指導使用者如何使用該套組。該說明書可為小冊子、錄音帶、CD、VCD或DVD的形式。容器的實例包括，但不限於，小瓶、試管等。

本揭示內容將參照下列實施方式更具體地說明，其是作為示範性的目的而非限制性的目的。雖然該些實施方式是典型常用的，亦可用其他步驟、方法學或本領域專業人員熟知的技術來做。

實施例

材料與方法

細胞培養

本研究所使用的每種細胞類型均在37°C下、5％之CO₂ 加濕培養箱中，培養於製造商建議的，補充10％之加熱滅能的胎牛血清、每毫升100單位之青黴素及每毫升100微克之鏈黴素的培養液中。

實驗動物

實驗動物照護已獲得批准，並遵循中央研究院實驗動物照護及使用委員會的規定來辦理。

自國家實驗研究院國家實驗動物中心（臺灣臺北）獲得帶有nu／nu基因的無胸腺裸鼠。使用雄性裸鼠（大於6週或體重為20–24公克或更多）來進行人類腫瘤異體移植。經尾部靜脈進行靜脈內投予測試化合物。藉由測徑器來測量長 × 寬 × 高（或寬）以檢測腫瘤體積。測試化合物所使用的載體是生理食鹽水（0.9％之NaCl等張溶液）。在試驗期間帶有腫瘤的裸鼠％體重變化以下式計算：（讀取日當天的總重量／治療起始日的總重量） × 100。

實施例 1 化學合成 1,2– 雙 ( 羥甲基 ) 吡咯并 [2,1–a ]– 酞嗪衍生物（式 (I–A) ）（流程 1 ）

依據流程1所述步驟來合成式(I–A)化合物。以三氯氧磷處理市售的1–酞嗪酮19 以製備化合物20 ，其進一步以各種不同的w–N,N–二烷基烷基胺、環胺、苯胺、1–甲基哌嗪、1–乙基哌嗪、1–甲基–4,4’–聯哌啶或1–乙基–4,4’–聯哌啶（在乙醇中）處理來製備化合物21 。化合物21 可接著與三甲基氰矽烷（trimethyl silylcyanide，TMSCN）及烷基或芳基氯（在二氯甲烷中）反應以產生化合物22 ，其以氟硼酸（tetrafluoro boric acid，HBF₄ ）（在乙醚中），後續以丁炔二酸二甲酯（dimethyl acetylenedicarboxylate，DMAD）處理來轉換成氫氟硼酸鹽，以製備二酯衍生物23 。在冰浴下，藉由與LiAlH₄ 反應（在乙醚／CH₂ Cl₂ 的混合物中）來將衍生物23 的二酯官能基還原成對應的雙(羥甲基)衍生物24 。同樣地，藉由與各種不同的異氰酸鹽反應來將該雙(羥甲基)衍生物24 轉換成其對應的雙(烷基胺基碳酸鹽)同類物（congener）以製備化合物25 （其中R¹ 是–CH₂ OCONHR，R是烷基或芳基），或是以酸酐處理（在吡啶中）以製備化合物25 （其中R¹ 是–CH₂ OCOR），或是藉由與甲苯–或甲基磺醯氯／Et₃ N反應以製備化合物25 （其中R¹ 是–CH₂ OSO₂ R，R是Me或4–MePh），以及其他良好離去基（leaving group）。

流程 1

式I-A 式I-A 試劑與條件：a)POCl₃ ，回流；b)R³ NH₂ ，乙醇，回流；c)TMSCN，AlCl₃ ，R² COCl，DCM；d)HBF₄ ，AcOH；e)DMAD，DMF，回流；f)LiAlH₄ ，THF；g)RNCO，THF

例示性可獲得的式(I–A)化合物包括下列化合物：

式I-A

1.1 (3– 甲基 –6– 嗎啉基吡咯并 [2,1–a ] 酞嗪 –1,2– 二基 )– 二甲醇（ BO–2571 ）及 (3– 甲基 –6– 嗎啉基吡咯并 [2,1–a ]– 酞嗪 –1,2– 二基 ) 雙 ( 亞甲基 ) 雙 ( 乙基胺基碳酸鹽 ) （ BO–2573 ）

(1) 1– 氯酞嗪

在100°C下，加熱並攪拌市售的酞嗪–1(2H )–酮（5.0公克，34.0毫莫耳）及三氯氧磷（POCl₃ ）（25毫升）的混合物2小時。在冷卻至室溫後，在減壓下，將過量的POCl₃ 完全蒸餾出。將殘留物以甲苯（2 × 25毫升）並後續以THF（100毫升）研磨，以及藉由過濾收集並以THF清洗該固體產物。接著以DCM溶解、以飽和的水性NaHCO₃ 溶液清洗、以硫酸鈉乾燥並減壓蒸發該產物，以製備1–氯酞嗪。產率4.6公克（82％）；熔點119–121°C（文獻報導值：熔點132–134°C）。

¹ H NMR（DMSO–d ₆ ）δ 8.20（2H，t，J = 7.2 Hz，ArH），8.33（2H，t，J = 7.6 Hz，ArH），9.73（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）d 126.1，128.4，128.7，155.3。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₈ H₅ ClN₂ ，165.0220 [M+H]⁺ ，實測值165.0212。

(2) 4–( 酞嗪 –1– 基 ) 嗎啉

對含有三乙胺（6.96毫升，50.0毫莫耳）的1–氯酞嗪（3.64公克，20.0毫莫耳）溶液（在乙醇（120毫升）中）滴入嗎啉（1.89毫升，22.0毫莫耳）。回流加熱反應混合物18小時，並在減壓下移除溶劑至乾燥。將反應冷卻至室溫並將溶劑蒸發。以水稀釋，並以DCM萃取二次所得粗產物。以硫酸鈉乾燥並以真空蒸發分離的有機層，以製備4–(酞嗪–1–基)嗎啉。棕色固體；產率3.8公克（80％）；熔點125–127°C（文獻報導值：熔點82°C）。

¹ H NMR（DMSO–d ₆ ）δ 3.40（4H，t，J = 4.8 Hz，2 × CH₂ ），3.88（4H，t，J = 4.4 Hz，2 × CH₂ ），7.94–7.97（2H，m，ArH），8.09–8.14（2H，m，ArH），9.31（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d ₆ ）d 51.4，51.7，66.5，120.7，124.4，124.5，127.5，128.5，132.4，132.5，148.4，159.7。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₁₂ H₁₃ N₃ O，216.1137 [M+H]⁺ ，實測值216.1094。

(3) 2– 乙醯基 –4– 嗎啉基 –1,2– 二氫酞嗪 –1– 甲腈

對含有AlCl₃ 觸媒量的4–(酞嗪–1–基)嗎啉（2.0公克，9.3毫莫耳）溶液（在DCM（30毫升）中）滴入Me₃ SiCN（2.32毫升，18.6毫莫耳）。在室溫下，接著將乙醯氯（1.0毫升，14.0毫莫耳）滴入至上述之混合物中並攪拌4小時。將反應混合物倒入至冰–水中並將有機層依序以水、5％之NaOH溶液及水清洗。以硫酸鈉乾燥並以真空濃縮該溶液，以製備2–乙醯基–4–嗎啉基–1,2–二氫酞嗪–1–甲腈。產率2.36公克（89％）；熔點140–142°C。

¹ H NMR（CDCl₃ ）δ 2.32（3H，s，CH₃ ），3.13–3.18（2H，m，CH₂ ），3.44–3.49（2H，m，CH₂ ），3.81–3.86（2H，m，CH₂ ），3.94–3.99（2H，m，CH₂ ），6.70（1H，s，CH），7.43（1H，d，J = 7.6 Hz，ArH），7.51–7.59（3H，m，ArH）。

¹³ C NMR（CDCl₃ ）d 16.9，49.8，55.8，66.7，116.4，121.5，124.0，123.7，129.2，130.3，132.8,155.5，169.6。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₁₅ H₁₆ N₄ O₂ ，285.1352 [M+H]⁺ ，實測值285.1341。

(4) 二甲基 –3– 甲基 –6– 嗎啉基吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二羧酸

對2–乙醯基–4–嗎啉基–1,2–二氫酞嗪–1–甲腈（2.0公克，7.0毫莫耳）溶液（在溫的乙酸（50毫升）中）滴入HBF₄ （1.55毫升）。在50–60°C下，攪拌混合物30分鐘。在冷卻至室溫後，藉由過濾收集黃色固體鹽類並以乾醚（dryether）清洗濾餅。以DMF（20毫升）溶解固體鹽類並將DMAD（1.6毫升，13毫莫耳）緩慢加入至該溶液中。在90–100°C下，加熱反應混合物16小時。以真空蒸發來移除溶劑。以MeOH結晶殘留物，以製備二甲基–3–甲基–6–嗎啉基吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二羧酸。產率1.5公克（56％）；熔點182–183°C。

¹ H NMR（DMSO–d ₆ ）δ 2.64（3H，s，CH₃ ），3.30–3.31（4H，m，2 × CH₂ ），3.80（3H，s，COOCH₃ ），3.87（3H，s，COOCH₃ ），3.87–3.88（4H，m，2 × CH₂ ），7.64（1H，t，J = 8.0 Hz，ArH），7.81（1H，t，J = 7.5 Hz，ArH），8.06（1H，d，J = 8.0 Hz，ArH），8.25（1H，d，J = 8.5 Hz，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）d 13.9，52.4，52.7，55.6，66.2，106.7，115.8，117.7，121.0，124.6，126.7，128.9，130.3，133.0，156.2，159.7，165.6，165.9；HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₂₀ H₂₁ N₃ O₅ ，406.1379 [M+Na]⁺ ，實測值406.1385。

(5) 二甲基 –3– 甲基 –6– 嗎啉基吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二羧酸

對二甲基–3–甲基–6–嗎啉基吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二羧酸（2.0公克，7.0毫莫耳）溶液（在溫的乙酸（50毫升）中）滴入HBF₄ （1.55毫升）。在50–60°C下，攪拌混合物30分鐘。在冷卻至室溫後，藉由過濾收集黃色固體鹽類並以乾醚清洗濾餅。以DMF（20毫升）溶解固體鹽類並將DMAD（1.6毫升，13毫莫耳）緩慢加入至該溶液中。在90–100°C下，加熱反應混合物16小時。以真空蒸發來移除溶劑。以MeOH結晶殘留物，以製備二甲基–3–甲基–6–嗎啉基吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二羧酸。產率1.5公克（56％）；熔點182–183°C。

(6) (3– 甲基 –6– 嗎啉基吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二基 ) 二甲醇（ BO–2571 ）

在0–5°C下，將二甲基–3–甲基–6–嗎啉基吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二羧酸（1.5公克，3.9毫莫耳）溶液（在DCM（50毫升）中）滴入至攪拌的LAH（0.37公克，9.7毫莫耳）懸浮液（在乙醚（20毫升）中）中。在2小時反應完成後，加入水（2毫升）及NH₄ OH（2毫升）以分解過量的LAH。以矽鈣石墊片過濾並以DCM充分清洗反應混合物。以真空蒸發合併的濾液及洗滌液至乾燥。以乙醇再結晶殘留物，以製備(3–甲基–6–嗎啉基吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二基)二甲醇（BO–2571 ）。產率1.0公克，（80％），熔點184–186°C。

¹ H NMR（DMSO–d ₆ ）δ 2.46（3H，s，CH₃ ），3.23（4H，s，2 × CH₂ ），3.87（4H，s，2 × CH₂ ），4.58（3H，s，1 × OCH₂ and 1 × OH），4.78–4.83（3H，m，1 × OCH₂ and 1 × OH），7.45（1H，t，J = 7.5 Hz，ArH），7.73（1H，t，J = 7.5 Hz，ArH），7.97（1H，d，J = 8.0 Hz，ArH），8.29（1H，d，J = 7.5 Hz，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d ₆ ）d 9.3，51.9，53.8，54.4，66.5，114.4，115.7，118.3，121.6，123.2，123.6，125.3，126.0，130.2，132.3，154.1。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₁₈ H₂₁ N₃ O₃ ，310.1556 [M+H–H₂ O]⁺ ，實測值310.1569。

(7) (3– 甲基 –6– 嗎啉基吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二基 ) 雙 ( 亞甲基 ) 雙 ( 乙基胺基碳酸鹽 ) （ BO–2573 ）

在室溫、氬氣下，攪拌3–甲基–6–嗎啉基吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二基)–二甲醇（0.15公克，0.5毫莫耳）、TEA（0.25毫升，2.0毫莫耳）及異氰酸乙酯（0.15毫升，2.0毫莫耳）的混合物（在無水DMF（dry DMF）中）24–48小時。在反應完成後，以真空蒸發反應混合物至乾燥。以乙醚研磨殘留物並藉由過濾收集欲求的產物，以製備(3–甲基–6–嗎啉基吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二基)雙(亞甲基)雙(乙基胺基碳酸鹽)（BO–2573 ）。產率0.16公克（75％）；熔點171–173°C。

¹ H NMR（DMSO–d ₆ ）δ 0.97（6H，t，J = 6.5 Hz，2 × CH₃ ），2.46（3H，s，CH₃ ），2.97–2.98（4H，m，2 × CH₂ ），3.22（4H，s，2 × CH₂ ），3.85（4H，s，2 × CH₂ ），5.17（2H，s，OCH₂ ），5.38（2H，s，OCH₂ ），7.01（2H，brs，2 × NH），7.49（1H，t，J = 7.5 Hz，ArH），7.76（1H，t，J = 7.0 Hz，ArH），7.99（1H，d，J = 8.0 Hz，ArH），8.10（1H，d，J = 7.0 Hz，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d ₆ ）d 9.35，15.5，35.4，51.9，56.5，57.3，66.4，109.5，116.1，117.6，119.2，122.9，125.2，126.2，129.6，132.7，154.6，156.5，156.6。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₂₄ H₃₁ N₅ O₅ ，294.1606 [M+H–2(OCONHC₂ H₅ ）]⁺ ，實測值294.1602。

1.2 (3– 甲基 –6–( 吡咯啶 –1– 基 ) 吡咯并 [2,1–a ] 酞嗪 –1,2 二基 ) 二甲醇（ BO–2686 ）及 (3– 甲基 –6–( 吡咯啶 –1– 基 ) 吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二基 ) 雙 ( 亞甲基 ) 雙 ( 乙基胺基碳酸鹽 ) （ BO–2716 ）

(1) 1–( 吡咯啶 –1– 基 ) 酞嗪

將吡咯啶（20.0毫升，240.0毫莫耳）緩慢加入至一含有TEA（30.0毫升，200.0毫莫耳）的1–氯酞嗪（10.0公克，60.0毫莫耳）溶液（在乙醇（200毫升）中）中。在室溫下，攪拌反應混合物48小時。在反應完成後，蒸發溶劑，以水稀釋、接著以DCM萃取（2 × 200毫升）殘留物。以硫酸鈉乾燥並以真空蒸發有機層，以製備欲求的1–(吡咯啶–1–基)酞嗪產物。產率10.0公克（83％）；熔點90–91°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）d¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 1.95–1.98（4H，m，2 × CH₂ ），3.82（4H，t，J = 6.5 Hz，2 × CH₂ ），7.80–7.88（2H，m，ArH），7.94–7.95（1H，m，ArH），8.28（1H，d，J = 8.5 Hz，ArH），8.97（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）δ 25.8，51.1，119.2，125.2，126.5，128.7， 130.9，131.6，144.1，155.7。HRMS [ESI+]：計算為C₁₂ H₁₃ N₃ ，200.1188 [M+H]⁺ ，實測值200.1209。

(2) 2– 乙醯基 –4–( 吡咯啶 –1– 基 )–1,2– 二氫酞嗪 –1– 甲腈

對含有AlCl₃ 觸媒量的1–(吡咯啶–1–基)酞嗪（5.0公克，25.0毫莫耳）溶液（在DCM（30毫升）中）滴入Me₃ SiCN（6.3毫升，50.0毫莫耳）。在室溫下，接著將乙醯氯（2.7毫升，37.5毫莫耳）滴入至上述之混合物中並攪拌4小時。將反應混合物倒入至冰–水中並將有機層依序以水、5％之NaOH溶液及水清洗。以硫酸鈉乾燥並以真空濃縮該溶液，以製備2–乙醯基–4–(吡咯啶–1–基)–1,2–二氫酞嗪–1–甲腈。產率5.7公克（85％）；熔點123–125°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）d 1.83（2H，t，J = 6.8 Hz，CH₂ ）2.00（2H，s，CH₂ ），2.21（3H，s，CH₃ ），3.28–3.34（2H，m，CH₂ ），3.70–3.75（2H，m，CH₂ ），7.06（1H，s，CH），7.59–7.66（ 2H，m，ArH），7.81（2H，d，J = 7.4 Hz，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d ₆ ）d 20.8，25.3,49.8，116.9，122.7，126.7，127.3，129.7，130.4，132.3，153.5，170.8。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₁₅ H₁₆ N₄ O，269.1402 [M+H]⁺ ，實測值269.1416。

(3) 二甲基 –3– 甲基 –6–( 吡咯啶 –1– 基 ) 吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二羧酸

對2–乙醯基–4–(吡咯啶–1–基)–1,2–二氫酞嗪–1–甲腈（5.0公克，18.6毫莫耳）溶液（在溫的乙酸（50毫升）中）滴入HBF₄ （3.6毫升）。在50–60°C下，攪拌混合物30分鐘。在冷卻至室溫後，藉由過濾收集黃色固體鹽類並以乾醚清洗濾餅。以DMF（20毫升）溶解固體鹽類並將DMAD（4.5毫升，37.0毫莫耳）緩慢加入至該溶液中。在90–100°C下，加熱反應混合物16小時。以真空蒸發來移除溶劑。以MeOH結晶殘留物，以製備二甲基–3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a ]–酞嗪–1,2–二羧酸。產率2.5公克（48％）；熔點176–178°C。

¹ H NMR（DMSO–d ₆ ）1.92（4H，s，2 × CH₂ ），2.57（3H，s，CH₃ ），3.65（4H，s，2 × CH₂ ），3.78（3H，s，COOCH₃ ），3.86（3H，s，COOCH₃ ），7.55（1H，t，J = 7.7 Hz，ArH），7.73（1H，t，J = 7.7 Hz，ArH），8.14（1H，d，J = 8.2 Hz，ArH），8.20（1H d，J = 8.1 Hz，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d ₆ ）d 10.5， 25.7，51.3，51.9，52.7，106.7，111.7，117.8，120.1，123.0，127.4，127.7，128.1，129.4，132.4，153.7，165.0，167.3。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₂₀ H₂₁ N₃ O₄ ，368.1610 [M+H]⁺ ，實測值368.1581。

(4) (3– 甲基 –6–( 吡咯啶 –1– 基 ) 吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2 二基 ) 二甲醇（ BO–2686 ）

在0–5°C下，將二甲基–3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a ]–酞嗪–1,2–二羧酸（2.2公克，6.23毫莫耳）溶液（在DCM（50毫升）中）滴入至一攪拌的LAH（0.6公克，15.5毫莫耳）懸浮液（在乙醚（50毫升）中）中。在2小時反應完成後，加入水（2毫升）及NH₄ OH（2毫升）以分解過量的LAH。以矽鈣石墊片過濾並以DCM充分清洗反應混合物。以真空蒸發合併的濾液及洗滌液至乾燥。以乙醇再結晶殘留物，以製備(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二基)二甲醇（BO–2686 ）。產率1.6公克（83％），熔點160–162°C。

¹ H NMR（DMSO–d ₆ ）d 1.94（4H t，J = 6.5 Hz，2 × CH₂ ），2.42（3H， s，CH₃ ），3.58（4H ，t，J = 6.4 Hz，2 × CH₂ ），4.51–4.56（3H，m，1 × OH and 1 × OCH₂ ），4.72（1H，t，J = 5.2 Hz，OH），4.80（2H，d，J = 5.1 Hz，OCH₂ ），7.38–7.41（1H， m，ArH），7.68–7.71（1H，m，ArH），8.05（1H，d，J = 8.1 Hz，ArH），8.26（1H，d，J = 8.0 Hz，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d ₆ ）d 9.3，25.3，51.3，53.8，54.5，113.8，116.6，117.9，120.8，122.4，123.3，124.7，126.7，130.3，131.8，152.5。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₁₈ H₂₁ N₃ O₂ 294.1606 [M+H–H₂ O]⁺ ，實測值294.1627。

(5) (3– 甲基 –6–( 吡咯啶 –1– 基 ) 吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二基 )– 雙 ( 亞甲基 ) 雙 ( 乙基 胺基碳酸鹽 ) （ BO–2716 ）

在室溫、氬氣下，攪拌(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二基)–二甲醇（0.15公克，0.5毫莫耳）（0.16公克，0.5毫莫耳）、異氰酸乙酯（0.2毫升，2.0毫莫耳）及TEA（0.3毫升，2.0毫莫耳）的混合物（在無水DMF中）24–48小時。在反應完成後，以真空蒸發反應混合物至乾燥。以乙醚研磨殘留物並藉由過濾收集欲求的產物，以製備(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二基)雙(亞甲基)雙(乙基胺基碳酸鹽)（BO–2716 ）。產率0.13公克，（70％）；熔點140–142°C。

¹ H NMR（DMSO–d ₆ ）d 0.96–0.99（6H，m，2 × CH₃ ），1.93（4H，t，J = 6.5 Hz，2 × CH₂ ），2.43（3H，s，CH₃ ），2.96–3.00（4H，m，2 × CH₂ ），3.60（4H，s，2 × CH₂ ），5.15（2H，s，OCH₂ ），5.36（2H，s，OCH₂ ），6.98–7.03（2H，m，2 × NH），7.46（1H，t，J = 7.3 Hz，ArH），7.72（1H，t，J = 7.3 Hz，ArH），8.06（1H，d，J = 8.4 Hz，ArH），8.10（1H，d，J = 8.2 Hz，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d ₆ ）d 9.3，15.5，25.4，35.5，51.3，56.6，57.5，108.8，116.8，117.0，118.8，122.6，125.6，127.1，129.7，132.2，152.9，156.6，156.7。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₂₄ H₃₁ N₅ O₄ ，278.1657 [M+H–2(OCONHC₂ H₅ ）]⁺ ，實測值278.1660。

1.3 (6–([1,4’– 聯吡啶 ]–1’– 基 )–3– 甲基吡咯并 [2,1–a ] 酞嗪 –1,2– 二基 ) 二甲醇 （ BO–2590 ）

(1) 1–([1,4’– 聯吡啶 ]–1’– 基 ) 酞嗪

將1,4’–聯哌啶（20.0公克，120.0毫莫耳）緩慢加入至一含有TEA（34毫升，240.0毫莫耳）的1–氯酞嗪（10.0公克，60.0毫莫耳）溶液（在乙醇（200毫升）中）中。在室溫下，攪拌反應混合物48小時。在反應完成後，蒸發溶劑，以水稀釋、接著以DCM萃取（2 × 200毫升）殘留物。以硫酸鈉乾燥並以真空蒸發有機層，以製備欲求的1–([1,4’–聯吡啶]–1’–基)酞嗪產物。產率10.2公克(57％)；熔點140–142°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 1.37–1.42（2H，m，CH₂ ），1.48–1.53（4H，m，CH₂ ），1.75–1.81（2H，m，CH₂ ），1.88–1.91（2H，m，CH₂ ），2.43（1H，s，CH），2.57（4H，s，2 × CH₂ ），2.94–3.00（2H，m，CH₂ ），3.87–3.90（2H，m，CH₂ ），7.92–7.94（2H，m，ArH），8.04–8.06（2H，m，ArH），9.25（1H，s，ArH）。HRMS [ESI+]：計算為C₁₈ H₂₄ N₄ ，297.2079 [M+H]⁺ ，實測值297.2092。

(2) 4–([1,4’– 聯吡啶 ]–1’– 基 )–2– 乙醯基 –1,2– 二氫酞嗪 –1– 甲腈

對含有AlCl₃ 觸媒量的1–([1,4’–聯吡啶]–1’–基)酞嗪（2.0公克，6.7毫莫耳）溶液（在DCM（30毫升）中）滴入Me₃ SiCN（1.69毫升，13.5毫莫耳）。在室溫下，接著將乙醯氯（0.88毫升，10.0毫莫耳）滴入至上述之混合物中並攪拌4小時。將反應混合物倒入至冰–水中並將有機層依序以水、5％之NaOH溶液及水清洗。以硫酸鈉乾燥並以真空濃縮該溶液，以製備4–([1,4’–聯吡啶]–1’–基)–2–乙醯基–1,2–二氫酞嗪–1–甲腈。產率1.45公克，（60％）；熔點160–162°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 1.42–1.45（1H，m，CH₂ ），1.70–1.82（6H，m，3 × CH₂ ），2.10–2.26（6H，m，3 × CH₂ ），2.65（3H，s，CH₃ ），2.66–2.73（1H，m，CH），2.95–3.00（3H，m，CH₂ ），3.76（1H，d，J = 7.0 Hz，CH₂ ），3.88（1H，d，J = 4.5 Hz，CH₂ ），7.00（1H，s，CH），7.61–7.69（3H，m，ArH ），7.82（1H，d，J = 7.2 Hz，ArH）。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₂₁ H₂₇ N₅ O，366.2294 [M+H]⁺ ，實測值366.2308。

(3) 二甲基 –6–([1,4’– 聯吡啶 ]–1’– 基 )–3– 甲基吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二羧酸

對4–([1,4’–聯吡啶]–1’–基)–2–乙醯基–1,2–二氫酞嗪–1–甲腈（1.3公克，3.5毫莫耳）溶液（在溫的乙酸（50毫升）中）滴入HBF₄ （0.7毫升）。在50–60°C下，攪拌混合物30分鐘。在冷卻至室溫後，藉由過濾收集黃色固體鹽類並以乾醚清洗濾餅。以DMF（20毫升）溶解固體鹽類並將DMAD（0.8毫升，6.5毫莫耳）緩慢加入至該溶液中。在90–100°C下，加熱反應混合物16小時。以真空蒸發來移除溶劑。以MeOH結晶殘留物，以製備二甲基–6–([1,4’–聯吡啶]–1’–基)–3–甲基吡咯并[2,1–a ]–酞嗪–1,2–二羧酸。產率1.0公克（70％）；熔點189–191°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 1.43–1.46（3H，m，CH₂ ），1.68–1.72（2H，m，CH₂ ），1.88（2H，s，CH₂ ），2.02–2.04（2H，m，CH₂ ），2.14–2.16（2H，m，CH₂ ），2.65（3H，s，CH₃ ），3.01（4H，m，2 × CH₂ ），3.17（1H，s，CH），3. 49–3.51（3H，m，CH₂ ），3.81（3H，s，COOCH₃ ），3.86–3.88（2H，m，CH₂ ），3.89（3H，s，COOCH₃ ），7.66（1H，t，J = 8.0 Hz， ArH），7.83（1H，t，J = 7.2 Hz，ArH ），8.00（1H，d，J = 8.4 Hz，ArH），8.27（1H，d，J = 8.4 Hz，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）d 12.6，24.5，26.2，28.1，50.4，51.5，58.2，58.9，67.5，70.4，111.6，118.1，123.4，127.6，128.5，129.8，132.8，133.5，147.4，165.9，175.7。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₂₆ H₃₂ N₄ O₄ ，465.2502 [M+H]⁺ ，實測值465.2501。

(4) (6–([1,4’– 聯吡啶 ]–1’– 基 )–3– 甲基吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二基 ) 二甲醇（ BO–2590 ）

在0–5°C下，將二甲基–6–([1,4’–聯吡啶]–1’–基)–3–甲基吡咯并[2,1–a ]–酞嗪–1,2–二羧酸（0.65公克，1.31毫莫耳）溶液（在DCM（50毫升）中）滴入至一攪拌的LAH（0.10公克，4.5毫莫耳）懸浮液（在乙醚（50毫升）中）中。在2小時反應完成後，加入水（2毫升）及NH4OH（2毫升）以分解過量的LAH。以矽鈣石墊片過濾並以DCM充分清洗反應混合物。以真空蒸發合併的濾液及洗滌液至乾燥。以乙醇再結晶殘留物，以製備(6–([1,4’–聯吡啶]–1’–基)–3–甲基吡咯并–[2,1–a ]酞嗪–1,2–二基)二甲醇。產率0.42公克，（78％），熔點183–185°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 1.41（2H，s，CH₂ ），1.52（4H，s，2 × CH₂ ），1.76–1.88（4H，m，2 × CH₂ ），2.43（3H，s，CH₃ ），2.50–2.53（4H，m，2 × CH₂ ），2.83（2H，t，J = 12.0 Hz，CH₂ ），3.33（1H，m，CH），3.63（2H，d，J = 15.0 Hz，CH₂ ），4.55（3H，s，1 × OH and 1 × OCH₂ ），4.74（1H，s，OH），4.80（2H，s，OCH₂ ），7.43（1H，t，J = 7.2 Hz，ArH），7.71（1H，t，J = 7.2 Hz，ArH），7.89（1H，d，J = 8.4 Hz，ArH），8.26（1H，d，J = 8.4 Hz，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）d 13.5，16.5，24.4，25.9，27.2，49.6，50.8，53.0，53.8，61.7，66.8，113.6，115.6，117.5，120.2，123.0，124.7，125.4，128.1，129.6，131.5，153.8。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₂₄ H₃₂ N₄ O₂ ，409.2604 [M+H]⁺ ，實測值409.2638。

1.4 (3– 乙基 –6– 嗎啉基 吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二基 )– 二甲醇 （ BO–2577 ）

(1) 4–( 酞嗪 –1– 基 ) 嗎啉

對含有三乙胺（6.96毫升，50.0毫莫耳）的化合物11 （3.64公克，20.0毫莫耳）溶液（在乙醇（120毫升）中）滴入嗎啉（1.89毫升，22.0毫莫耳）。回流加熱反應混合物18小時，並在減壓下移除溶劑至乾燥。將反應冷卻至室溫並蒸發溶劑。以水稀釋，並以DCM萃取二次所得粗產物。以硫酸鈉乾燥並以真空蒸發分離的有機層，以製備4–(酞嗪–1–基)嗎啉。棕色固體；產率3.8公克（80％）；熔點125–127°C（文獻報導值：熔點82°C）。

(2) 4– 嗎啉基 –2– 丙醯基 –1,2– 二氫酞嗪 –1– 甲腈

對含有AlCl₃ 觸媒量的4–(酞嗪–1–基)嗎啉（2.0公克，9.3毫莫耳）溶液（在DCM（30毫升）中）滴入Me3SiCN（2.32毫升，18.6毫莫耳）。在室溫下，接著將丙醯氯（1.2毫升，14.0毫莫耳）滴入至上述之混合物中並攪拌4小時。將反應混合物倒入至冰–水中並將有機層依序以水、5％之NaOH溶液及水清洗。以硫酸鈉乾燥並以真空濃縮該溶液，以製備4–嗎啉基–2–丙醯基–1,2–二氫酞嗪–1–甲腈。產率2.46公克（89％）；熔點146–148°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 1.05（3H，t，J = 5.6 Hz，CH₃ ），2.53–2.58（1H，m，CH₂ ），2.71–2.75（1H，m，CH₂ ），3.03（2H，s，CH₂ ），3.35（2H，s，CH₂ ），3.70（2H，s，CH₂ ），3.87（2H，s，CH₂ ），7.04（1H，s，CH），7.64（3H，s，CH），7.80（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d ₆ ）d 49.8，51.8，65.7，116.4，121.5，124.0，123.7，129.2，130.3，132.8,155.5，169.6。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₁₆ H₁₈ N₄ O₂ ，299.1508 [M+H]⁺ ，實測值299.1519。

(3) 二甲基 3– 乙基 –6– 嗎啉基吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二羧酸

對4–嗎啉基–2–丙醯基–1,2–二氫酞嗪–1–甲腈（2.0公克，7.0毫莫耳）溶液（在溫的乙酸（50毫升）中）滴入HBF₄ （1.30毫升）。在50–60°C下，攪拌混合物30分鐘。在冷卻至室溫後，藉由過濾收集黃色固體鹽類並以乾醚清洗濾餅。以DMF（20毫升）溶解固體鹽類並將DMAD（1.5毫升，12.0毫莫耳）緩慢加入至該溶液中。在90–100°C下，加熱反應混合物16小時。以真空蒸發來移除溶劑。以MeOH結晶殘留物，以製備二甲基–3–甲基–6–嗎啉基吡咯并[2,1–a]–酞嗪–1,2–二羧酸。產率1.6公克（60％）；熔點182–183°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 1.21（3H，s，CH₃ ），3.15（2H，d，J = 6.0 Hz，CH₂ ），3.30（4H，s，2 × CH₂ ），3.80（3H，s，COOCH₃ ），3.89（7H，s，2 × CH₂ and 1 × COOCH₃ ），7.63（1H，s，ArH），7.80（1H，s，ArH），8.06（1H，d，J = 7.0 Hz，ArH），8.26（1H，d，J = 7.0 Hz，ArH ）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）d 13.9，23.0，52.4，52.7，55.6，66.2，106.7，115.8，117.7，121.0，124.6，126.7，128.9，130.3，133.0，156.2，159.7，165.6，165.9。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₂₁ H₂₃ N₃ O₅ ，420.1535 [M+Na]⁺ ，實測值420.1552。

(4) (3– 乙基 –6– 嗎啉基吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二基 ) 二甲醇（ BO–2577 ）

在0–5°C下，將二甲基3–乙基–6–嗎啉基吡咯并[2,1–a]–酞嗪–1,2–二羧酸（1.4公克，3.5毫莫耳）溶液（在DCM（50毫升）中）滴入至一攪拌的LAH（0.43公克，10.5毫莫耳）懸浮液（在乙醚（20毫升）中）中。在2小時反應完成後，加入水（2毫升）及NH4OH（2毫升）以分解過量的LAH。以矽鈣石墊片過濾並以DCM充分清洗反應混合物。以真空蒸發合併的濾液及洗滌液至乾燥。以乙醇再結晶殘留物，以製備(3–乙基–6–嗎啉基吡咯并–[2,1–a ]酞嗪–1,2–二基)二甲醇（BO–2577）。產率1.2公克（90％）；熔點180–182°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 1.21（3H，t，J = 7.5 Hz，CH3），2.93–2.98（2H，m，CH2），3.21（4H，t，J = 4.5 Hz，2 × CH₂ ），3.86（4H，t，J = 4.5 Hz，2 × CH₂ ），4.57（3H，s，1 × OCH₂ and 1 × OH），4.76（1H，t，J = 5.5 Hz，OH），4.82（2H，d，J = 5.0 Hz，OCH₂ ），7.43（1H，t，J = 8.5 Hz，ArH），7.72（1H，t，J = 8.0 Hz，ArH），7.95（1H，d，J = 7.5 Hz，ArH），8.29（1H，d，J = 8.0 Hz，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d6）δ 13.5，16.5，51.3，53.1，53.8，65.8，113.7，115.2，117.5，120.4，123.0，124.7，125.4，128.3，129.7，131.7，153.4。HRMS [ESI+]：計算為C₁₉ H₂₃ N₃ O₃ ，364.1637 [M+Na]+，實測值364.1638。

實施例 2 化學合成苯并 [g] 吡咯并 [2,1–a ] 酞嗪衍生物（式 (I–B) ）（流程 2 ）

以流程2所示步驟來合成式(I–B)。以水合肼（在乙酸中）處理市售的2,3–萘二羧酸酐26 以產生化合物27 ，其與三氯氧磷反應以製備化合物28 。以各種不同的w–N,N–二烷基烷基胺、環胺、苯胺、1–甲基哌嗪、1–乙基哌嗪、1–甲基–4,4’–聯哌啶或1–乙基–4,4’–聯哌啶及碳酸鉀（在乙腈中）處理化合物28 來產生化合物29 ，其在甲醇、H₂ 下，與10％之Pd／C反應以製備化合物30 。化合物30 進一步的與三甲基氰矽烷及烷基或芳基氯（在二氯甲烷中）反應以產生化合物31 。同樣地，如前文所述，以氟硼酸／丁炔二酸二甲酯（DMAD）處理，來將化合物31 轉換成二酯衍生物32 。在冰浴下，藉由與LiAlH₄ 反應（在乙醚／CH₂ Cl₂ 的混合物中）來將衍生物32 的二酯官能基還原成對應的雙(羥甲基)衍生物33 （式I–B）。可接著以各種不同的異氰酸鹽處理雙(羥甲基)衍生物33 來轉換成其對應的雙(烷基胺基碳酸鹽)同類物以製備化合物34 （其中R¹ 是–CH₂ OCONHR，R是烷基或芳基），或是以酸酐處理（在吡啶中）以製備化合物34 （其中R¹ 是–CH₂ OCOR），或是藉由與甲苯–或是甲基磺醯氯／Et₃ N反應以製備化合物34 （其中R¹ 是–CH₂ OSO₂ R，R是Me或是4–MePh），以及其他良好離去基。

流程 2

式I-B 試劑與條件：a)水合肼／乙酸，100°C；b)POCl₃ ／吡啶，回流；c)R³ NH，K₂ CO₃ ，ACN，回流；d)Pd／C，甲醇，回流；e)TMSCN，AlCl₃ ，R² COCl，MDC，室溫；f)HBF₄ ，AcOH；g)DMAD，DMF，100°C；h)LiAlH₄ ，乙醚／MDC，0-30°C；i)RNCO，TEA，THF，回流

例示性可獲得的式(I–B)化合物包括下列化合物：

式I-B

2.1 (6–( 二甲基胺基 )–3– 甲基苯并 [g ] 吡咯并 [2,1–a ] 酞嗪 –1,2– 二基 ) 二甲醇（ BO–2768 ）及 (6–( 二甲基胺基 )–3– 甲基苯并 [g ]–prolog[2,1–a ] 酞嗪 –1,2– 二基 )– 雙 ( 亞甲基 ) 雙 ( 乙基胺基碳酸鹽 ) （ BO–2772 ）

(1) 2,3– 二氫苯并 [g] 酞嗪 –1,4– 二酮

將水合肼（80％之溶液，63毫升）加入至一攪拌的萘–2,3–二羧酸酐（39.7公克，200.0毫莫耳）懸浮液（在冰醋酸（600毫升）中）中。回流加熱並攪拌混合物6小時。在冷卻之後，以過濾收集、以水清洗並乾燥該固體產物，以製備2,3–二氫苯并[g ]酞嗪–1,4–二酮。產率：40.2公克（94％）；熔點344–346（文獻報導值：熔點344°C）。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）：δ 7.75–7.78（2H，m，ArH），8.29–8.31（2H，m，ArH），8.76（2H，s，ArH），11.52（2H，s，2 × NH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）：δ 123.8，126.2，128.5，129.1，134.1。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₁₂ H₈ N₂ O₂ ，213.0664 [M+H]⁺ ，實測值213.0681。

(2) 1,4– 二氯苯并 [g] 酞嗪

在100°C下，加熱一含有吡啶（24.0毫升）的2,3–二氫苯并[g ]酞嗪–1,4–二酮（40.0公克，188.0毫莫耳）懸浮液（在三氯氧磷（400毫升）中）5小時。使反應混合物冷卻至40°C，接著在減壓下濃縮至乾燥。以乙醚研磨、過濾，並以乙醚清洗固體殘留物。研磨該固體產物並以冰–水攪拌30分鐘，以及以過濾收集、以水清洗並乾燥該固體產物，以製備1,4–二氯苯并[g ]酞嗪。產率40.8公克（85％）；熔點217–219°C（文獻報導值：熔點217–220°C）。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）：δ 7.91–7.93（2H，m，ArH），8.50–8.52（2H，m，ArH），9.09（2H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）δ 124.3，124.6，126.2，126.9，128.0，130.1，137.4，155.5。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₁₂ H₆ Cl₂ N₂ ，248.9986 [M+H]⁺ ，實測值249.0000。

(3) 4– 氯 –N,N– 二甲基苯并 [g] 酞嗪 –1– 胺

在室溫下，將二甲胺（30毫升，60.0毫莫耳）緩慢加入至一攪拌的1,4–二氯苯并[g ]酞嗪（10公克，40.0毫莫耳）及無水碳酸鉀（55公克，400.0毫莫耳）的懸浮液（在無水乙腈（400毫升）中）中。在室溫下，攪拌反應混合物72小時，接著過濾來移除碳酸鉀。減壓蒸發該濾液，並以乙醚再結晶固體殘留物，以製備4–氯–N ,N –二甲基苯并[g ]酞嗪–1–胺。產率9.3公克（90％）；熔點90–92°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 3.25（6H，s，2 × NCH₃ ），7.79–7.83（2H，m，ArH），8.37–8.40（2H，m，ArH），8.84（1H，s，ArH），8.93（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）δ 42.5，118.9，123.2，125.0，126.6，128.6，128.9，129.0，129.3，133.9，134.0，147.8，159.8。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₁₄ H₁₂ ClN₃ ，258.0798 [M+H]⁺ ，實測值258.0791。

(4) N,N– 二甲基苯并 [g] 酞嗪 –1– 胺

對4–氯–N ,N –二甲基苯并[g ]酞嗪–1–胺（5.15公克，20.0毫莫耳）溶液（在MeOH（200毫升）中）加入10％之Pd／C（1.03公克）。在室溫下，將以35 psi進行氫化4小時，接著以矽鈣石墊片過濾反應混合物。以MeOH充分清洗濾餅。在減壓下，濃縮合併的濾液及洗滌液，以及以DCM（200毫升）溶解、以飽和的水性NaHCO₃ 溶液清洗、以無水硫酸鈉乾燥、以真空蒸發該殘留物至乾燥。以層析法（SiO₂ ，溶析梯度為0–40％之乙酸乙酯（在己烷中））純化該產物，以製備N ,N –二甲基苯并[g ]酞嗪–1–胺。產率2.8公克（64％）；熔點115–117°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 3.23（6H，s，2 × NCH₃ ），7.72–7.76（2H，m，ArH），8.24（1H，dd，J = 6.8 and 2.2 Hz，ArH），8.35（1H，dd，J = 6.8 and 2.2 Hz，ArH），8.69（1H，s，ArH），8.85（1H，s，ArH），9.26（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）δ 42.4，117.4，125.1，125.2，126.3，127.7，128.2，128.4，129.4，133.7，133.8，146.8，159.0。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₁₄ H₁₃ N₃ ，224.1188 [M+H]⁺ ，實測值224.1198。

(5) 2– 乙醯基 –4–( 二甲基胺基 )–1,2– 二氫苯并 [g] 酞嗪 –1– 甲腈

對含有AlCl₃ 觸媒量的N ,N –二甲基苯并[g ]酞嗪–1–胺（2.22公克，10.0毫莫耳）溶液（在DCM（30毫升）中）滴入Me₃ SiCN（2.5毫升，20.0毫莫耳）。在室溫下，接著將乙醯氯（1.1毫升，15.0毫莫耳）滴入至上述之混合物中並攪拌4小時。將反應混合物倒入至冰–水中並將有機層依序以水、5％之NaOH溶液及水清洗。以硫酸鈉乾燥並以真空濃縮該溶液，以製備2–乙醯基–4–(二甲基胺基)–1,2–二氫苯并[g ]酞嗪–1–甲腈。產率2.7公克（92％）；熔點125–127°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 2.29（3H，s，COCH₃ ），2.99（6H，s，2 × NCH₃ ），7.23（1H，s，CH），7.67–7.73（2H，m，ArH），8.01（1H，d，J = 7.7 Hz，ArH），8.20（1H，d，J = 7.6 Hz，ArH），8.34（1H，s，ArH），8.35（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）δ 20.6，40.9，116.4，118.2，125.8，126.3，127.3，127.7，127.8，128.8，129.4，132.8，133.7，155.7，170.9。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₁₇ H₁₆ N₄ O，293.1402 [M+H]⁺ ，實測值293.1407。

(6) 二甲基 6–( 二甲基胺基 )–3– 甲基苯并 [g] 吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二羧酸

對2–乙醯基–4–(二甲基胺基)–1,2–二氫苯并[g ]酞嗪–1–甲腈（2.95公克，10.0毫莫耳）溶液（在溫的乙酸（80毫升）中）滴入HBF₄ （2.2毫升，12.0毫莫耳）。在50–60°C下，攪拌混合物30分鐘。在冷卻至室溫後，藉由過濾收集黃色固體鹽類並以乾醚清洗濾餅。以DMF（20毫升）溶解固體鹽類並將DMAD（3.1毫升，25.0毫莫耳）緩慢加入至該溶液中。在90–100°C下，加熱反應混合物16小時。以真空蒸發來移除溶劑。以MeOH再結晶該殘留物，以製備二甲基6–(二甲基胺基)–3–甲基苯并[g ]吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二羧酸。產率1.7公克（43％）；熔點180–182°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 2.66（3H，s，CH₃ ），3.08（6H，s，2 × NCH₃ ），3.81（3H，s，COOCH₃ ），3.97（3H，s，COOCH₃ ），7.64（1H，t，J = 7.8 Hz，ArH），7.71（1H，t，J = 7.2 Hz，ArH），8.06（1H，d，J = 8.2 Hz，ArH），8.24（1H，d，J = 8.3 Hz，ArH），8.65（1H，s，ArH），8.73（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）δ 10.2，42.6，51.6，52.5，107.9，111.2，115.6，119.9，121.0，123.9，127.0，127.9，128.0，129.0，129.4，130.9，131.3，134.0，156.8，164.4，166.9。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₂₂ H₂₁ N₃ O₄ ，392.1610 [M+H]⁺ ，實測值392.1590。

(7) (6–( 二甲基胺基 )–3– 甲基苯并 [g] 吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二基 ) 二甲醇（ BO–2768 ）

在0–5°C下，將二甲基6–(二甲基胺基)–3–甲基苯并[g ]吡咯并[2,1–a ]–酞嗪–1,2–二羧酸（1.6公克，4.0毫莫耳）溶液（在DCM（50毫升）中）滴入至一攪拌的LAH（0.39公克，10.0毫莫耳）懸浮液（在乙醚（100毫升）中）中。在2小時反應完成後，加入水（2毫升）及NH4OH（2毫升）以分解過量的LAH。以矽鈣石墊片過濾並以DCM充分清洗反應混合物。以真空蒸發合併的濾液及洗滌液至乾燥。以乙醇再結晶殘留物，以製備(6–(二甲基胺基)–3–甲基苯并[g ]–吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二基)二甲醇（BO–2768 ）。產率1.1公克（80％）；熔點156–158°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 2.46（3H，s，CH₃ ），2.99（6H，s，2 × NCH₃ ），4.56（2H，d，J = 5.1 Hz，OCH₂ ），4.62（1H，t，J = 5.4 Hz，OH），4.90–4.91（3H，m，OCH₂ and OH），7.52（1H，t，J = 7.5 Hz，ArH），7.63（1H，t，J = 7.3 Hz，ArH），8.00（1H，d，J = 8.3 Hz，ArH），8.14（1H，d，J = 8.2 Hz，ArH），8.58（1H，s，ArH），8.66（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）δ 8.9，42.8，53.4，54.2，115.6，115.7，117.5，120.4，120.4，123.6，125.5，126.3，126.6，127.5，128.1，129.3，130.1，134.6，154.7。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₂₀ H₂₁ N₃ O₂ ，318.1606 [M+H–H₂ O]⁺ ，實測值318.1620。

(8) (6–( 二甲基胺基 )–3– 甲基苯并 [g] 吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二基 )– 雙 ( 亞甲基 ) 雙 ( 乙基胺基碳酸鹽 ) （ BO–2772 ）

在室溫、氬氣下，攪拌(6–(二甲基胺基)–3–甲基苯并[g ]吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二基)二甲醇（0.2公克，0.6毫莫耳）（0.16公克，0.5毫莫耳）、異氰酸乙酯（0.2毫升，2.4毫莫耳）及TEA（0.55毫升，4.0毫莫耳）的混合物（在無水DMF中）24–48小時。在反應完成後，以真空蒸發反應混合物至乾燥。以乙醚研磨殘留物並藉由過濾收集欲求的產物，以製備(6–(二甲基胺基)–3–甲基苯并[g ]prolog–[2,1–a ]酞嗪–1,2–二基)–雙(亞甲基)雙(乙基胺基碳酸鹽)（BO–2772 ）。產率0.15公克（53％）；熔點132–134°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 0.98–1.01（6H，m，2 × CH₃ ），2.48（3H，s，CH₃ ），2.98–3.04（10H，m，2 × CH₂ 及2 × NCH₃ ），5.18（2H，s，OCH₂ ），5.49（2H，s，OCH₂ ），7.06（1H，t，J = 5.2 Hz，NH），7.10（1H，t，J = 5.5 Hz，NH），7.56（1H，t，J = 7.9 Hz，ArH），7.66（1H，t，J = 7.4 Hz，ArH），7.97（1H，d，J = 8.3 Hz，ArH），8.17（1H，d，J = 8.3 Hz，ArH），8.51（1H，s，ArH），8.64（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）.δ 8.9，15.1，15.2，35.0，35.1，42.8，56.2，57.0，110.6，115.5，116.2，118.5，120.3，125.5，125.6，126.0，127.0，127.6，128.4，129.3，130.3，134.5，155.3，156.1，156.3。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₂₆ H₃₁ N₅ O₄ ，302.1657 [M+H–2(OCONHC₂ H₅ ）]⁺ ，實測值302.1667。

2.2 (3– 甲基 –6–( 吡咯啶 –1– 基 ) 苯并 [g ] 吡咯并 [2,1–a ]– 酞嗪 –1,2– 二基 ) 二甲醇（ BO–2762 ）及 (3– 甲基 –6–( 吡咯啶 –1– 基 )– 苯并 [g] 吡咯并 [2,1–a ] 酞嗪 –1,2– 二基 )– 雙 ( 亞甲基 ) 雙 ( 乙基胺基碳酸鹽 ) （ BO–2763 ）

(1) 1– 氯 –4–( 吡咯啶 –1– 基 ) 苯并 [g] 酞嗪

將吡咯啶（3.5毫升，42.0毫莫耳）緩慢加入至一攪拌的1,4–二氯苯并[g]酞嗪（7.0公克，28.0毫莫耳）及一無水碳酸鉀（55公克，400.0毫莫耳）的懸浮液（在無水乙腈（400毫升）中）中。在室溫下，攪拌反應混合物72小時，接著過濾來移除碳酸鉀。減壓蒸發該濾液，並以乙醚再結晶固體殘留物，以製備1–氯–4–(吡咯啶–1–基)苯并[g ]酞嗪。產率6.8公克（85％）；熔點112–114°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 2.02（4H，brs，2 × CH₂ ），3.96（4H，brs，2 × CH₂ ），7.76–7.79（2H，m，ArH），8.33–8.38（2H，m，ArH），8.75（1H，s，ArH），9.06（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）δ 25.4，51.1，118.7，123.1，124.0，126.8，128.1，128.6，128.9，129.5，133.7，144.6，155.5。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₁₆ H₁₄ ClN₃ ，284.0955 [M+H]⁺ ，實測值284.0948。

(2) 1–( 吡咯啶 –1– 基 ) 苯并 [g] 酞嗪

對1–氯–4–(吡咯啶–1–基)苯并[g ]酞嗪（5.1公克，18.0毫莫耳）溶液（在MeOH（200毫升）中）加入10％之Pd／C（1.03公克）。在室溫下，以35 psi進行氫化4小時，接著過濾以矽鈣石墊片反應混合物。以MeOH充分清洗濾餅。在減壓下，濃縮合併的濾液及洗滌液，以及以溶解DCM（200毫升）、以飽和的水性NaHCO₃ 溶液清洗、以無水硫酸鈉乾燥、以真空蒸發該殘留物至乾燥。以層析法（SiO₂ ，溶析梯度為0–40％之乙酸乙酯（在己烷中））純化該產物，以製備1–(吡咯啶–1–基)苯并[g ]酞嗪。產率3.3公克（73％）；熔點150–152°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 2.00–2.03（4H，m，2 × CH₂ ），3.94–3.97（4H，m，2 × CH₂ ），7.66–7.73（2H，m，ArH），8.18（1H，d，J = 8.2 Hz，ArH），8.31（1H，d，J = 8.3 Hz，ArH），8.55（1H，s，ArH），8.97（1H，s，ArH），9.04（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）δ 25.5，50.8，117.2，125.3，125.4，127.2，128.0，128.1，129.6，133.5，144.1，154.8。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₁₆ H₁₅ N₃ ，250.1344 [M+H]⁺ ，實測值250.1362。

(3) 2– 乙醯基 –4–( 吡咯啶 –1– 基 )–1,2– 二氫苯并 [g] 酞嗪 –1– 甲腈

對含有AlCl₃ 觸媒量的1–(吡咯啶–1–基)苯并[g ]酞嗪（3.25公克，13.0毫莫耳）溶液（在DCM（50毫升）中）滴入Me₃ SiCN（3.26毫升，26.0毫莫耳）。在室溫下，接著將乙醯氯（1.4毫升，19.6毫莫耳）滴入至上述之混合物中並攪拌4小時。將反應混合物倒入至冰–水中並將有機層依序以水、5％之NaOH溶液及水清洗。以硫酸鈉乾燥並以真空濃縮該溶液，以製備2–乙醯基–4–(吡咯啶–1–基)–1,2–二氫苯并[g ]酞嗪–1–甲腈（33b）（BO–2760）。產率3.2公克（77％）；熔點162–164°C。

¹ H NMR（CDCl₃ ）δ 1.92–2.00（2H，m，CH₂ ），2.08–2.10（2H，m，CH₂ ），2.31（3H，s，COCH₃ ），3.44–3.47（2H，m，CH₂ ），3.83–3.89（2H，m，CH₂ ），6.90（1H，s，CH），7.58–7.64（2H，m，ArH），7.85（1H，s，ArH），7.90（1H，d，J = 7.9 Hz，ArH），7.93（1H，d，J = 7.9 Hz，ArH），8.17（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（CDCl₃ ）δ 20.7，15.4，41.5，50.1，115.8，120.1，125.7，126.3，127.0，127.7，127.9，128.5，129.0，133.1，133.8，154.1. 171.1。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₁₉ H₁₈ N₄ O，319.1559 [M+H]⁺ ，實測值319.1557。

(4) 二甲基 3– 甲基 –6–( 吡咯啶 –1– 基 ) 苯并 [g] 吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二羧酸

對2–乙醯基–4–(吡咯啶–1–基)–1,2–二氫苯并[g ]酞嗪–1–甲腈（3.2公克，10.0毫莫耳）溶液（在溫的乙酸（90毫升）中）滴入HBF₄ （2.2毫升，12.0毫莫耳）。在50–60°C下，攪拌混合物30分鐘。在冷卻至室溫後，以過濾收集黃色固體鹽類並以乾醚清洗濾餅。以DMF（20毫升）溶解固體鹽類並將DMAD（3.1毫升，25.0毫莫耳）緩慢加入至該溶液中。在90–100°C下，加熱反應混合物16小時。以真空蒸發來移除溶劑。以MeOH結晶該殘留物，以製備二甲基3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)苯并[g ]吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二羧酸。產率2.0公克（48％）；熔點190–192°C。

¹ H NMR（CDCl₃ ）δ 2.02–2.05（4H，m，2 × CH₂ ），2.68（3H，s，CH₃ ），3.76–3.78（4H，m，2 × CH₂ ），3.89（3H，s，COOCH₃ ），4.04（3H，s，COOCH₃ ），7.49（1H，t，J = 7.1 Hz，ArH），7.57（1H，t，J = 6.9 Hz，ArH），7.90（1H，d，J = 8.5 Hz，ArH），7.92（1H，d，J = 8.4 Hz，ArH），8.52（1H，s，ArH），8.77（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（CDCl₃ ）δ 10.4，25.6，51.4，51.5，52.4，107.6，111.2，117.1，120.7，121.9，124.8，126.3，127.1，128.1，128.1，128.8，131.2，131.4，134.3，153.8，165.6，168.1。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₂₄ H₂₃ N₃ O₄ ，440.1586 [M+Na]⁺ ，實測值440.1569。

(5) (3– 甲基 –6–( 吡咯啶 –1– 基 ) 苯并 [g] 吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二基 ) 二甲醇（ BO–2762 ）

在0–5°C下，將二甲基3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)苯并[g ]吡咯并[2,1–a ]–酞嗪–1,2–二羧酸（1.7公克，4.0毫莫耳）溶液（在DCM（50毫升）中）滴入至一攪拌的LAH（0.39公克，10.0毫莫耳）懸浮液（在乙醚（100毫升）中）中。在2小時反應完成後，加入水（2毫升）及NH4OH（2毫升）以分解過量的LAH。以矽鈣石墊片過濾並以DCM充分清洗反應混合物。以真空蒸發合併的濾液及洗滌液至乾燥。以乙醇再結晶殘留物，以製備(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)苯并[g ]prolog–[2,1–a ]酞嗪–1,2–二基)二甲醇（BO–2762 ）。產率1.1公克（82％）；熔點160–162°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 1.98–1.99（4H，m，2 × CH₂ ），2.43（3H，s，CH₃ ），3.68–3.70（4H，m，2 × CH₂ ），4.52–4.55（3H，m，OCH₂ and OH），4.82（1H，t，J = 5.0 Hz，OH），4.90（2H，d，J = 5.1 Hz，OCH₂ ），7.50（1H，t，J = 7.4 Hz，ArH），7.61（1H，t，J = 7.3 Hz，ArH），7.98（1H，d，J = 8.3 Hz，ArH），8.14（1H，d，J = 8.3 Hz，ArH），8.64（1H，s，ArH），8.67（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）δ 8.9，25.0，50.9，53.4，54.2，115.2，116.4，117.2，119.9，120.0，123.0，125.3，126.4，126.7，127.3，128.1，129.3，129.9，134.3，152.2。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₂₂ H₂₃ N₃ O₂ ，344.1763 [M+H–H₂ O]⁺ ，實測值344.1754。

(6) (3– 甲基 –6–( 吡咯啶 –1– 基 ) 苯并 [g] 吡咯并 [2,1–a] 酞嗪 –1,2– 二基 )– 雙 ( 亞甲基 ) 雙 ( 乙基胺基碳酸鹽 ) （ BO–2763 ）

在室溫、氬氣下，攪拌(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)苯并[g ]吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二基)二甲醇（0.36公克，1.0毫莫耳）、異氰酸乙酯（0.32毫升，4.0毫莫耳）及TEA（0.55毫升，4.0毫莫耳）的混合物（在無水DMF中）24–48小時。在反應完成後，以真空蒸發反應混合物至乾燥。以乙醚研磨殘留物並藉由過濾收集欲求的產物，以製備(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)苯并–[g ]吡咯并[2,1–a ]酞嗪–1,2–二基)–雙(亞甲基)雙(乙基胺基碳酸鹽)（BO–2763 ）。產率0.28公克（56％）；熔點142–144°C。

¹ H NMR（DMSO–d₆ ）δ 0.95–1.02（6H，m，2 × CH₃ ），1.98（4H，brs，2 × CH₂ ），2.45（3H，s，CH₃ ），2.97–3.05（4H，m，2 × CH₂ ），3.72（4H，brs，2 × CH₂ ），5.16（2H，s，OCH₂ ），5.48（2H，s，OCH₂ ），7.02（1H，t，J = 5.7 Hz，NH），7.07（1H，t，J = 5.2 Hz，NH），7.54（1H，t，J = 7.7 Hz，ArH），7.65（1H，t，J = 7.4 Hz，ArH），7.94（1H，d，J = 8.1 Hz，ArH），8.17（1H，d，J = 8.3 Hz，ArH），8.47（1H，s，ArH），8.72（1H，s，ArH）。

¹³ C NMR（DMSO–d₆ ）δ 8.9，15.1，15.2，25.1，35.0，35.1，51.0，56.2，57.1，110.0，115.7，116.3，118.2，119.8，124.8，125.7，127.1，127.3，128.3，129.3，130.1，134.2，152.6，156.1，156.3。HRMS [ESI⁺ ]：計算為C₂₈ H₃₃ N₅ O₄ ，328.1814 [M+H–2(OCONHC₂ H₅ ）]⁺ ，實測值328.1816。

實施例 3 製備以微脂體封裝的式 (I) 化合物

式(I)化合物基本上是疏水性的。為了以高藥物濃度遞送活性化合物至特定的腫瘤細胞或器官標的，使用一種修改過的脫水–復水方法並以下文所述之步驟重複進行擠壓，將該式(I)化合物（特別是BO–2590 ）封裝在微脂體中以製備微脂體藥物。

(1) 微脂體封裝

在CHCl₃ 中，藉由混和大豆卵磷脂（SPC）、1,2–二硬脂醯基–sn–甘油基–3–磷酸膽鹼（DSPC）、膽固醇（CHO）及PEG–2000（以50：45：4：1的莫耳比例）來製備以微脂體封裝的BO–2590。將混合物置於一圓底燒瓶中，接著將BO–2590 加入至反應混合物（每毫升4毫克）中。在減壓下，以旋轉蒸發來移除有機溶劑。以磷酸鹽緩衝液（phosphate-buffered saline）（137毫體積莫耳濃度之NaCl、2.7毫體積莫耳濃度之KCl、10毫體積莫耳濃度之Na₂ HPO₄ 及1.8毫體積莫耳濃度之KH₂ PO₄ ）水合化（hydrated）並以手搖動來分散所得之乾的脂肪薄膜。將懸浮液凍融數次，後續在60°C下，利用高壓擠壓裝置（high-pressure extrusion equipment）（Lipex Biomembranes, Vancouver, Canada）以孔徑為0.8、0.6、0.4、0.2–微米的聚碳酸酯（polycarbonate）膜濾器（Costar, Cambridge, MA）重複進行擠壓。在4°C下保存該產物溶液。

(2) HPLC 分析

以高壓液相層析法（Agilent Technologies）（RP–18管柱、流動相條件為[乙腈／MeOH／H₂ O（0.5％之TFA）（45／50／5），（滯留時間4.6分鐘，流速每分鐘0.5毫升）]來定量微脂體之BO–2590 （BO–2590L ）。將微脂體之BO–2590（100微升）加入流動相（100微升），以渦動（vortex）完全地混和，並作用10分鐘。離心所得之牛奶狀樣本，並取澄清的上清液來進行HPLC定量分析。在我們的製備物（n ＞ 5）中，BO–2590 微脂體含有每毫升3.12至2.94毫克（封裝率為濃度每毫升4毫克之起始材料的76至70％）。

(3) 穩定性分析

在4°C下保存以微脂體封裝的BO–2590L 三週。藉由HPLC分析，其自封裝76％至66.3％，約呈現10％之衰變。

實施例 4 活體外確認式 (I) 化合物的特性

4.1 式 (I) 化合物具備對癌細胞的細胞毒性

首先評估所有的式(I–A)及(I–B)代表性化合物活體外對人類淋巴性白血病細胞株（CCRF–CEM）及其耐長春鹼之衍生細胞株（CCRF–CEM／VBL）的細胞毒性（參照表1）。將具有顯著細胞毒性之所選化合物對一系列之實性瘤（solid tumor）細胞株，亦即，大腸癌HCT–116、非小細胞肺癌H460、小細胞肺癌H526及胰臟癌PacaS1（表2）進一步進行評估。

簡言之，在37°C下、5％之CO₂ 加濕環境中，將測試細胞以每毫升3 × 10³ 細胞的初始密度培養於一含有青黴素（每毫升100單位）、鏈黴素（每毫升100微克，GIBCO／BRL）及5％之加熱滅能FBS的RPMI培養液1640（GIBCO／BRL）中。在以各種不同濃度的新合成化合物作用72小時之後，利用PrestoBlue^® （Invitrogen）分析及一微量盤光譜儀來檢測其對所有細胞株的細胞毒性影響。簡言之，在藥物處理終止時，加入一等分試樣之PrestoBlue^® 溶液，接著在37°C下使細胞作用1–2小時。以一微量盤讀值儀測量570及600奈米的吸光值。借助於Chou及Martin（Pharmacol Rev 2006, 58:621-681）所開發之半效應原理（CompuSyn software, version 1.0.1; CompuSyn, Inc., Paramus, NJ），將每個化合物的6或7種濃度之劑量–效應關係用於計算IC₅₀ 值。IC₅₀ 定義為抑制腫瘤細胞生長達50％之所需濃度。實驗數據是取每個化合物之三至六次獨立試驗所得的平均值 ± 標準差。

表1總結活體外1,2–雙(羥甲基)吡咯并[2,1–a ]酞嗪衍生物(式I–A)及苯并[g ]吡咯并[2,1–a ]酞嗪衍生物(式I–B)對人類淋巴性白血病CCRF–CEM及其耐長春鹼之衍生細胞株CCRF–CEM／VBL的細胞毒性。實驗數據顯示這些化合物呈現顯著對抗CCRF–CEM的細胞毒性，且不會交叉抵抗長春鹼。將所選化合物用於評估其對抗各種不同的類型之實性瘤（亦即，大腸癌HCT–116、非小細胞肺癌H460、小細胞肺癌H526及胰臟癌PacaS1）的細胞毒性。值得注意的是，該測試化合物基本上活躍地抑制所有實性瘤細胞株的細胞生長（表2）。其中，以小細胞肺癌H526細胞對測試化合物最為敏感。

進一步地，比較式(I–B)化合物與已知的抗增生藥劑（例如伊立替康、依託泊苷（etoposide）、順鉑及卡鉑定）對人類小細胞肺癌細胞（SCLC）的細胞毒性，其結果總結於表3。如表3的實驗數據所示，整體來說，本揭示內容式(I–B)化合物較伊立替康、依託泊苷、順鉑及卡鉑定更具潛力。

表 1 . 式(I–A)及(I–B)化合物對人類淋巴性白血病（CCRF）及其耐長春鹼之衍生細胞株（CCRF–CEM／VBL）的細胞毒性。

^a 實驗數據是取每個化合物之三至六次獨立試驗所得的平均值 ± 標準差。^b CCRF–CEM／VBL是CCRF–CEM的衍生細胞株。^c 中括號內的數值是藉由比較對應的親代細胞株IC₅₀ 所得之抵抗力因子。^d IC₅₀ 值以奈體積莫耳濃度表示。

表 2. 活體外1,2–雙(羥甲基)吡咯并[2,1–a ]酞嗪衍生物（式(I–A)）及苯并[g ]吡咯并[2,1–a ]酞嗪衍生物（式(I–B)）對人類實性瘤細胞株的細胞毒性。

表 3. 比較式I–B化合物與治療藥劑對一系列之人類小細胞肺癌（SCLC）細胞的細胞毒性。

4.2 式 (I) 化合物引發的 DNA 鏈間交聯

在本實施例中，測試BO–2590 、BO–2577 （式I–A）及BO–2698 ，BO–2755 、BO–2762 及BO–2768 （式I–B）的DNA交聯活性，以鹼性瓊脂糖凝膠電泳法來分析交聯情形。簡言之，將純化的pEGFP–N1質體DNA（1,500奈克）以各種不同濃度（1–20微體積莫耳濃度）的測試化合物混和在40微升的結合緩衝液（3毫體積莫耳濃度之氯化鈉／1毫體積莫耳濃度之磷酸鈉，pH7.4，以及毫體積莫耳濃度之EDTA）中。在37°C下，使反應混合物作用2小時。在反應終止時，以BamHI消化質體DNA使其成為線性化，後續以乙醇沉澱之。將DNA團塊溶解並以鹼性的緩衝液（0.5當量濃度之NaOH–10毫體積莫耳濃度之EDTA）進行變性。以4微升之6 × 鹼性的上樣染劑混和一等分試樣之20微升的DNA溶液（1,000奈克），接著在4°C下，以含有NaOH–EDTA緩衝液的0.8％之鹼性瓊脂糖凝膠進行電泳分析。以18V進行電泳分析22小時。之後以溴化乙錠（ethidium bromide）溶液將凝膠染色，以UV光來觀察DNA。實驗結果顯示於第1圖。

如第1圖之相片所示，BO–2590 、 BO–2577 、 BO–2698 、BO–2755 、BO–2762 及BO–2768 分別引發DNA鏈間交聯，且其效應似乎呈現劑量依賴性。進一步地，在該些測試化合物中，發現相較於馬法蘭（Melphalan），BO–2590 具有相對較強力的交聯。

進一步地，進行單一細胞電泳分析（SCGE，或稱「彗星分析法」）來評估BO–2768 引發的DNA損傷，該方法是一種簡單的測量細胞內DNA鏈斷裂的方法。為此目的，將細胞包埋至載玻片上一低熔點的瓊脂糖懸浮液中，接著將其裂解於中性或鹼性（pH ＞ 13）條件下，以及將懸浮且裂解的細胞進行電泳。「彗星」（comet）一詞是指DNA經電泳凝膠所移動的圖案，其通常與彗星相似，且彗星尾相對於彗星頭部的強度反映出DNA斷裂的數值。實驗結果繪示於第2圖，確認BO–2768 與順鉑相同，能夠以劑量依賴性的方式引發DNA斷裂。

4.3 BO–2590 及 BO–2577 抑制血管新生

在本實施例中，以西方印漬法分析來進行BO–2590 及BO–2577 於抑制VEGFR-2活性的測試。簡言之，將內皮細胞EA.hy926與各種不同濃度的BO–2590 或BO–2577 作用12小時。分別將抗VEGFR-2及抗p–VEGFR-2的一級抗體用於偵測VEGFR-2及p–VEGFR-2總蛋白。實驗結果顯示於第3圖。

如第3圖所示，以BO–2590 或BO–2577 處理可明顯的抑制p–VEGFR-2蛋白量，且BO–2590 較BO–2577 更有利於減少p–VEGFR-2。進一步地，由於BO–2590 或BO–2577 並未顯著地改變VEGFR-2的總蛋白量，因此推測BO–2590 或BO–2577 可能作為VEGFR活化的抑制劑。本實驗以瓦他拉尼作為控制組。意外的是，BO–2590 有效抑制p–VEGFR-2的劑量，大約10倍低於瓦他拉尼。其顯示BO–2590 是一具潛力的VEGFR-2抑制劑。

4.4 BO–2590 降低內皮細胞的移動

在本實施例中，利用插入式細胞培養皿進行移動分析來研究化合物BO–2590 是否能夠抑制細胞移動。

簡言之，將內皮細胞置於上層之細胞可透膜（cell permeable membrane），並將一含有BO–2590 之溶液置於該細胞可透膜的下方。在培養期間（8小時）過後，將通過膜移動的細胞進行染色並利用螢光鏡檢來計數。明顯地，化合物BO–2590 抑制VEGFR途徑亦伴隨著細胞移動的減損（第4圖，小圖A）。

4.5 BO–2590 中斷血管新生

血管新生是指衍生自已存在的血管分佈延伸來生成新血管的過程。觀察血管行為或監控血管生成可用於檢測化合物是否能夠中斷血管新生。在本實施例中，利用血管生成分析來研究式(I)化合物是否中斷血管新生。

簡言之，以各種不同濃度的BO–2590 處理EA.hy926細胞24小時。之後，將細胞（每孔5 × 10⁵ 細胞）懸浮於100微升含有1％之FCS的培養液，接著種於以基質膠（matrigel）在37°C下預先塗佈1小時的96孔盤。在培養48小時之後，以相位差顯微鏡來檢測血管生成能力。

如第4圖（小圖B）之相片所示，未加入BO–2590 前，可形成健全的管狀結構，而以奈體積莫耳濃度範圍之BO–2590 作用後，明顯且呈現劑量依賴性地破壞管狀結構的血管生成。瓦他拉尼亦可抑制血管生成，但需要在更高的濃度下。實驗結果說明以BO–2590 來抑制血管生成，是與BO–2590 所引發的VEGFR-2抑制密切相關。因此，可合理總結BO–2590 藉由抑制p–VEGFR2表現來觸發抗血管新生活性。BO–2768 及BO–2698 亦以劑量依賴性的方式，在血管生成上呈現相似的抑制效應（第4圖，小圖C及D）。

4.6 BO–2590 干擾細胞週期

進一步以肺癌細胞H460，在濃度為0、0.125、0.25、0.5、1及2微體積莫耳濃度，以及於24、48及72小時來研究BO–2590 在細胞週期進行上的影響。以流式細胞儀來分析細胞週期分布。如第5圖所示，BO–2590 以劑量依賴性的方式干擾細胞週期的進行。當BO–2590 濃度增加，首先觀察到G2期顯著終止，其後續終止S期進行，且最後在24小時時點上G1呈現終止。然而，繼續作用48或72小時，此時細胞週期緩慢進行，開始出現大量的次G1細胞（第6圖）。次G1細胞亦代表細胞凋亡的細胞。因此，發現BO–2590 以劑量依賴性的方式引發次G1細胞產生，說明BO–2590 可藉由DNA損傷來觸發細胞凋亡性的細胞死亡（apoptotic cell death）。

4.7 BO–2590 引發細胞凋亡性的細胞死亡

在本實施例中，膜連蛋白V染色圖分析用於評估H460細胞株中BO–2590 引發的細胞凋亡性的細胞死亡。簡言之，以濃度為0.5、1及2微體積莫耳濃度的BO–2590 處理H460細胞48小時，接著以膜連蛋白V–FITC及碘化丙啶（propidium iodide，PI）進行染色。以流式細胞儀分析染色的細胞。在處理48小時後，發現BO–2590 以劑量依賴性的方式顯著增加膜連蛋白V⁺ 細胞的比例（第7圖）。

4.8 BO–2768 引發細胞凋亡性的細胞死亡

在本實施例中，除了是利用H526細胞株來檢測細胞凋亡性的細胞死亡之外，依據實施例4.7的步驟來評估BO–2768 的效應。簡言之，以濃度為0.01、0.02、0.04及0.08微體積莫耳濃度的BO–2768 或以濃度為2、4、8及16微體積莫耳濃度的順鉑處理H526細胞24，48或是72小時，接著以膜連蛋白V–FITC及碘化丙啶進行染色。以流式細胞儀分析染色的細胞。在處理72小時後，發現BO–2768 以劑量依賴性的方式顯著增加膜連蛋白V⁺ 細胞的比例（第8圖）。

4.9 BO–2768 及順鉑協同抑制細胞增生

在本實施例中，研究BO–2768 及順鉑在抑制細胞增生上是否具有協同效應。為此目的，以BO–2768 或順鉑，單獨或合併來處理H211細胞，並以PrestoBlue™分析H211細胞的增生率。實驗結果繪示於第9圖。

如第9圖的實驗數據所示，分別以1：2，1：4及1：8的比例合併投予BO–2768 及順鉑可協同降低H211細胞增生數。

實施例 5 活體內確認式 (I) 化合物的特性

如前文實施例4所述，式(I)化合物對測試的腫瘤細胞株基本上具有細胞毒性。在本實施例中，研究所選的式(I)化合物在帶有人類SCLC的裸鼠上的治療功效。

5.1 微脂體之實施例 3 的 BO–2590 （ BO–2590L ）有效抑制 SCLC H526 異體移植

由於BO–2590 的溶解性較差，因此本實施例使用微脂體之實施例3的BO–2590 （BO–2590L ）來研究其在帶有人類SCLC H526異體移植之裸鼠上的治療功效。

在所有試驗中，將腫瘤細胞以皮下植入裸鼠中，且當腫瘤體積達到大約100毫米立方時，藉由尾部靜脈投予BO–2590L 。首先以每公斤2.5、5及10毫克之的BO–2590L 劑量處理帶有H526異體移植的小鼠，每隔一天投藥共計六次（Q2D × 6）。如第10圖（小圖A）所示，在第30天時，每公斤10毫克之BO–2590L 抑制H526腫瘤體積達55％。在所有測試的劑量中，BO–2590L 並未造成體重損失，說明BO–2590L 的毒性甚低（第10圖，小圖B）。

為確認BO–2590L 的治療活性，將已知的化療藥劑（例如瓦他拉尼及順鉑）進行比較性試驗。簡言之，將帶有H526異體移植的小鼠分成4組，分別處理載體、BO–2590L （每公斤10毫克，QD × 9）、瓦他拉尼（每公斤100毫克，QD × 9）及順鉑（每公斤4毫克，Q2D × 3）。實驗結果繪示於第11圖。

實驗結果發現BO–2590L 遠較瓦他拉尼更具潛力，且其在第33天、在抑制H526異體移植的生長上，幾乎與順鉑同樣有效；觀察到BO–2590L 大約抑制60％之腫瘤（第11圖，小圖A）。值得注意的是，連續9天給予每公斤10毫克之BO–2590L 並未造成體重損失（第11圖，小圖B），支持先前有關BO–2590L毒性甚低的發現。相反地，在測試的實驗動物中，使用每公斤4毫克之劑量的順鉑會導致嚴重的體重損失。

5.2 微胞之 BO–2590 、 BO–2768 、 BO–2792 有效抑制 SCLC H526 異體移植

依據與實施例5.1相似的步驟來研究BO–2590 、BO–2768 、BO–2792 、伊立替康及順鉑在帶有人類SCLC H526異體移植之裸鼠的治療功效。分別將BO–2590 、BO–2768 、BO–2792 、伊立替康及順鉑配製於20％之Kolliphor15^® 、10％之TWEEN80、10％之PEG400、30％之乙醇及40％之D5W的溶液中。實驗結果繪示於第12及13圖。

實驗結果發現BO–2590 及BO–2792 與伊立替康及順鉑在降低腫瘤體積上同樣有效（第12圖，小圖A）；然而，每公斤20毫克（每天二次）之BO–2768 劑量意外地較BO–2590 、BO–2792 、伊立替康或順鉑任一種藥物更具潛力，其在整個研究期間完全抑制腫瘤生長（亦即，無生長），而在其他組（亦即，以BO–2590 、BO–2792 、伊立替康或順鉑處理的組）的腫瘤隨時間增加而體積緩慢增加。進一步地，沒有測試化合物（亦即，BO–2590 、BO–2768 、BO–2792 、伊立替康及順鉑）在測試動物的體重上呈現任何有害的影響（第12圖，小圖B）。

5.3 BO–2768 以劑量依賴性的方式抑制 SCLC H526 異體移植

回顧在實施例5.2的發現，進一步詳細研究BO–2768 的抗腫瘤功效，如所預期的，BO–2768 以劑量依賴性的方式抑制腫瘤生長，且在整個研究期間，每公斤20毫克（每天二次）之劑量可完全地抑制腫瘤生長（第13圖，小圖A）且在測試動物的體重上無任何有害影響（第13圖，小圖B）。

5.4 BO–2768 及順鉑協同降低 SCLC H211 異體移植的體積且無不利影響於測試個體的體重

在本實施例中，研究BO–2768及順鉑在抑制腫瘤體積及測試個體的體重變化上的協同作用。為此目的，將等分試樣之H211細胞（5 × 10⁶ ，50微升）以皮下植入裸鼠中。接著，以BO–2768 或順鉑，單獨或合併來處理測試動物。投予每公斤20毫克於100微升之劑量的BO–2768（溶解於20％之Kolliphor^® HS15、10％之Tween80、10％之PEG400、30％之乙醇及40％之蒸餾水）連續5天，接著暫停一天；且重複該循環一次（亦即，共計兩個循環）。給予每公斤2或4毫克之劑量的順鉑4天一次，共計3次。實驗結果繪示於第14圖。

如第14圖的實驗數據所示，合併投予BO–2768 及順鉑可協同降低腫瘤體積（第14圖，小圖A），且無不利影響測試動物的體重（第14圖，小圖B）。

5.5 免疫組織化學染色證明在 SCLC H526 的組織切片中 BO–2590L （式 IA ） 的抗血管新生及 DNA 損傷活性

將載玻片上的腫瘤異體移植組織切片以二甲苯去除石蠟，每次7分鐘，共二次。接著將載玻片以乙醇梯度（依序自100％至70％）進行復水，後續以dH₂ O潤濕。在一加熱盒（cooker）中，以檸檬酸緩衝液（0.01M，pH6.0）作用50分鐘，後續在室溫下冷卻30分鐘來進行抗原恢復（antigen retrieval）。接著以dH₂ O潤濕。之後將載玻片以獲自Abcam^® 的一級抗體（抗兔之CD31抗體及抗小鼠之γ–H₂ AX抗體），並依據製造商的說明書（Novolink Polymer Detection system, Leica Biosystems, Wetzlar, Germany）來進行免疫組織化學（immunohistochemical，IHC）染色。在IHC處理之後，利用Panoramic 250 Flash II全載玻片掃描器來將載玻片進行數位掃描並以3DHISTECH Panoramic檢視軟體（3DHISTECH Ltd., Budapest, Hungary）進行分析。

以免疫螢光染色並利用抗CD31（一種內皮細胞標記）來評估腫瘤內的血管密度（第15圖，小圖A）。相較於載體控制組，以BO–2590L 、瓦他拉尼或順鉑處理腫瘤，整體來說觀察到血管顯著降低（第9圖，小圖A）。在IHC之後，以Panoramic 250 Flash II全載玻片掃描器來掃描載玻片。自3個腫瘤切片的15個不同視野來檢視組織切片中的CD31表現並利用3DHISTECH Panoramic檢視軟體（3DHISTECH Ltd., Budapest, Hungary）來取計數平均值。如第15圖（B）所示，在未治療的腫瘤中CD31標記隨時間增加。然而，在第9天，相較於控制組，以BO–2590L 或瓦他拉尼處理的腫瘤，其CD31標記強度減少至4％（第15圖，小圖B）。由於順鉑以所使用的劑量可顯著抑制腫瘤生長，在順鉑處理的腫瘤中亦觀察到CD31標記減少。在第9天，在順鉑處理的腫瘤中，CD31標記強度僅有控制組的19％，其低於BO–2590L 或瓦他拉尼。這些結果說明，BO–2590L 在活體內系統內在抑制血管新生上具有與瓦他拉尼相當的潛力。

由於BO–2590L 是一種DNA損傷型的抗癌藥劑，因此利用免疫組織化學染色來研究BO–2590L 對一種DNA損傷的標記（γ–H₂ AX）在量上的影響。

如所預期的，觀察到以順鉑或BO–2590L 處理的腫瘤會明顯增加γ–H₂ AX，而觀察到以瓦他拉尼處理的腫瘤γ–H₂ AXs的量甚低（第16圖，小圖A）。定量分析顯示幾乎沒有γ–H₂ AX訊號發現在控制組的腫瘤。然而，發現到以處理順鉑或BO–2590 處理的腫瘤隨時間增加γ–H₂ AX訊號。在以瓦他拉尼處理的腫瘤中，觀察到中等量的γ–H₂ AX（第16圖，小圖B）。

總結來說，BO–2590L 可藉由DNA損傷及抑制血管生成來殺死癌細胞。

雖然上文實施方式中揭露本揭示內容的具體實施例，本發明所屬技術領域中具有通常知識者當可對其進行各種更動與修飾。上文的說明書、實施例及實驗數據對本揭示內容作為例示性實施方式中的結構及使用方式做出完整的描述。儘管上文已描述本揭示內容中各種實施方式有一定程度的特性，或參照一或多個各別實施方式，本發明所屬領域技術具有通常知識者仍能在不悖離本揭示內容精神及範圍情形下，對已揭示的實施方式進行眾多修改。

無

隨附的圖式包含在說明書中，並與說明書構成本說明書的一部分，用以說明本發明的幾個實施例、方法及其他例示性之各種不同態樣的實施方式。在參照隨附圖式來閱讀以下的詳細說明後，本揭示內容將更明顯易懂，其中，

第1圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之相片，說明式(I)化合物對形成DNA鏈間交聯（interstrand crosslink，ICL）的影響；

第2圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之結果，說明在H526細胞中BO–2768 或順鉑對DNA鏈間交聯的影響；其中(A)代表性影像圖呈現利用修改過的彗星分析法（comet assay）所得之個別具有彗星尾的細胞，以及(B)柱狀圖顯示以順鉑或BO–2768 處理的細胞尾矩（tail moment）。尾矩較短說明DNA鏈間交聯作用較強。該實驗數據是取3次獨立試驗的平均值；

第3圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之相片，說明(A)BO–2590 、(B)BO–2577 或(C)瓦他拉尼（vatalanib）對抑制VEGFR-2活化的影響；

第4圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之結果，說明BO–2590 、 BO–2698 及 BO–2768 對內皮細胞抗血管新生作用的影響，其中(A)是抑制內皮細胞移動的情形，其利用插入式細胞培養皿（transwell）來測量，(B)及(C)相片顯示利用血管生成（tube formation）分析來檢測該抑制結果，而(D)折線圖顯示(A)及(B)小圖的定量結果；

第5圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之結果，說明BO–2590 在H460人類肺癌細胞中干擾細胞週期的情形；

第6圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之結果，說明在(A)24小時、(B)48小時或(C)72小時時，BO–2590 在H460人類肺癌細胞中引發產生細胞凋亡的次G1細胞（sub-G1 cell）的情形；

第7圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之結果，說明BO–2590 或順鉑引發膜連蛋白V（Annexin V）+細胞凋亡的情形；

第8圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之結果，說明BO–2768 在H526細胞中引發細胞凋亡的情形；

第9圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之折線圖，說明BO–2768 及順鉑的協同作用，其分別以(A)1：2、(B)1：4、(C)1：8的比例來抑制H211細胞的增生；再利用綜合指數（combined index，CI）來計算不同合併劑量之間的協同作用或拮抗作用，其中當CI = 1時說明二種藥物具有累加效應，當CI ＜ 1時說明優於累加效應（即協同作用），而CI ＞ 1時說明劣於累加效應（即拮抗作用）；

第10圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之結果，說明微脂體之BO–2590L 對帶有H526異體移植的裸鼠之(A)腫瘤體積，以及(B)體重變化的影響；

第11圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之結果，說明微脂體之BO–2590L 、瓦他拉尼及順鉑分別對帶有H526異體移植的裸鼠之(A)腫瘤體積，以及(B)體重變化的影響；

第12圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之結果，說明微胞之BO–2590 、BO–2768 、BO–2792 、伊立替康（irinotecan）及順鉑分別對帶有H526異體移植的裸鼠之(A)腫瘤體積，以及(B)體重變化的影響；

第13圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之折線圖，說明BO–2768 對帶有H526之小細胞肺癌細胞（SCLC）異體移植的裸鼠之(A)腫瘤體積，以及(B)體重變化呈現劑量依賴性的抑制作用；

第14圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之結果，說明合併使用BO–2768 及順鉑對帶有H211之SCLC異體移植的裸鼠之(A)腫瘤體積，以及(B)體重變化的影響。投予每公斤20毫克於100微升之劑量的BO–2768 ，連續5天及暫停一天，共二次循環。給予每公斤2或4毫克之劑量的順鉑，4天一次，共3次。在藥物治療後觀察體重變化；

第15圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之結果，說明BO–2590L 、順鉑或瓦他拉尼對腫瘤CD31標記的量的影響；其中(A)是代表性的IHC染色圖，在治療後第6天利用抗體對抗CD31，以及(B)定量腫瘤CD31的訊號。實驗數據以每組15個視野的平均值 ± 標準差來代表；以及

第16圖是依據本揭示內容的一實施方式所得之結果，說明BO–2590L 、順鉑或瓦他拉尼對腫瘤γ–H2AX的影響；其中(A)是代表性的IHC染色圖，在治療後第6天利用抗體對抗γ–H2AX，以及(B)定量腫瘤γ–H2AX的訊號。實驗數據以每組三隻小鼠的平均值 ± 標準差來代表。

Claims

一種式(I)化合物，以及其藥學上可接受的溶劑合物或立體異構物，
其中，A是一有或無取代基之6-10員不飽和碳環；R¹是一有或無鹵素、-OR、-OAc、-OSO₂R或-OCONHR取代的烷基，其中R是氫、烷基或環烷基；R²是氫、烷基、環烷基或芳基；R³是-NR^AR^B、-NHPhR^C、單或雙醣基，或是一胺基酸基，或是-NR^AR^B合併形成一有或無取代基之苯胺(aniline)或環烷基胺(cycloalkylamine)，其係選自由嗎啉(morpholine)、吡咯啶(pyrrolidine)、哌啶(piperidine)、1-經取代之哌嗪(1-substituted piperazine)、1,4’-聯哌啶(1,4’-bipiperidine)及4’-經取代之4,4’-聯哌啶(4’-substituted 4,4’-bipiperidine)所組成的群組；其中哌嗪及4,4’-聯哌啶的取代基是烷基、-(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中n及m個別是一介於1至5的整數，且R^A及R^B個別是H或C₁-C₆烷基；以及R^C是氫、鹵素、烷氧基(alkoxy)、-CH₂OH、-NHCOR_a、-NHC(O)OR_a，或是有或無取代基之烷基、烯基、炔基、雜環基或芳基，且R_a是C_1-6烷基或芳基；以及該芳基或雜芳基具有至少一取代基，其中該至少一取代基係選自由C_1-6烷基、烷氧基、鹵素、氰基、硝基、-NH₂、-NHR_c、-N(R_c)₂、環烷胺基(cycloalkylamino)、亞甲二氧基(methylenedioxy)及伸乙二氧基(ethylenedioxy)所組成的群組，其中R_c個別是氫或C_1-10烷基。
如請求項1所述之化合物，其中R³是1H-吡唑-3-胺基(1H-pyrazol-3-amino)、1H-咪唑-2-胺基(1H-imidazol-2-amino)或嘧啶-胺基(pyrimidine-amino)。
如請求項1所述之化合物，其中該環烷胺基是選自由吡咯啶基、哌啶基、嗎啉基(morpholino)、哌嗪基及4-哌啶基哌啶基(4-piperidopiperidinyl)所組成的群組。
如請求項1所述之化合物，其中該化合物具有式(I-A)之結構
其中，R¹是一有或無鹵素、-OR、-OAc、-OSO₂R或-OCONHR取代的烷基，其中R是氫、烷基或環烷基；R²是氫、烷基、環烷基或芳基；R³是-NR^AR^B、-NHPhR^C、單或雙醣基，或是一胺基酸基，或是-NR^AR^B合併形成一有或無取代基之苯胺或環烷基胺，其係選自由嗎啉、吡咯啶、哌啶、1- 經取代之哌嗪、1,4’-聯哌啶及4’-經取代之4,4’-聯哌啶所組成的群組；其中哌嗪及4,4’-聯哌啶的取代基是烷基、-(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中n及m個別是一介於1至5的整數，R^A及R^B個別是H或C₁-C₆烷基；以及R^C是氫、鹵素、烷氧基、-CH₂OH、-NHCOR_a、-NHC(O)OR_a，或是有或無取代基之烷基、烯基、炔基、雜環基或芳基，且R_a是C_1-6烷基或芳基；R⁴及R⁵個別是氫、-OH、烷氧基或-O(CH₂)_xN(R_b)₂，其中x是一介於1至5的整數；以及R_b是C_1-10烷基或一環烷胺基；以及該芳基或雜芳基具有至少一取代基，其中該至少一取代基係選自由C_1-6烷基、烷氧基、鹵素、氰基、硝基、-NH₂、-NHR_c、-N(R_c)₂、環烷胺基、亞甲二氧基及伸乙二氧基所組成的群組，其中R_c個別是氫或C_1-10烷基。
如請求項4所述之化合物，其中R¹是經-OH取代的甲基，R²是乙基，R³是嗎啉，且R⁴及R⁵個別是氫。
如請求項4所述之化合物，其中R¹是經-OH取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵個別是氫。
如請求項4所述之化合物，其中R¹是經-OH取代的甲基，R²是甲基，R³是1,4’-聯哌啶，且R⁴及R⁵個別是氫。
如請求項4所述之化合物，其中R¹是經-OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵個別是氫。
如請求項1所述之化合物，其中該化合物具有式(I-B)之結構
其中，R¹是一有或無鹵素、-OR、-OAc、-OSO₂R或-OCONHR取代的烷基，其中R是氫、烷基或環烷基；R²是氫、烷基、環烷基或芳基；R³是-NR^AR^B、-NHPhR^C、單或雙醣基，或是一胺基酸基，或是-NR^AR^B合併形成一有或無取代基之苯胺或環烷基胺，其係選自由嗎啉、吡咯啶、哌啶、1-經取代之哌嗪、1,4’-聯哌啶及4’-經取代之4,4’-聯哌啶所組成的群組；其中哌嗪及4,4’-聯哌啶的取代基是烷基、-(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中n及m個別是一介於1至5的整數，R^A及R^B個別是H或C₁-C₆烷基；以及R^C是氫、鹵素、烷氧基、-CH₂OH、-NHCOR_a、-NHC(O)OR_a，或是有或無取代基之烷基、烯基、炔基、雜環基或芳基，且R_a是C_1-6烷基或芳基；R⁴及R⁵個別是氫、-OH、烷氧基或-O(CH₂)_xN(R_b)₂，其中x是一介於1至5的整數；以及R_b是C_1-10烷基或一環烷胺基；以及該芳基或雜芳基具有至少一取代基，其中該至少一取代基係選自由C_1-6烷基、烷氧基、鹵素、氰基、硝基、-NH₂、-NHR_c、-N(R_c)₂、環烷胺基、亞甲二氧基及伸乙二氧基所組成的群組，其中R_c個別是氫或C_1-10烷基。
如請求項9所述之化合物，其中R¹是經-OH取代的甲基，R²是甲基，R³是二甲胺，且R⁴及R⁵個別是氫。
如請求項9所述之化合物，其中R¹是經-OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是二甲胺，且R⁴及R⁵個別是氫。
如請求項9所述之化合物，其中R¹是經-OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵個別是氫。
一種如請求項1所述之化合物於製備一藥物之用途，其中該藥物係用以治療一個體之癌症，其中係對該個體投予一治療有效量之該藥物。
如請求項13所述之用途，其中該化合物具有式(I-A)之結構
其中，R¹是一有或無鹵素、-OR、-OAc、-OSO₂R或-OCONHR取代的烷基，其中R是氫、烷基或環烷基；R²是氫、烷基、環烷基或芳基；R³是-NR^AR^B、-NHPhR^C、單或雙醣基，或是一胺基酸基，或是-NR^AR^B合併形成一有或無取代基之苯胺或環烷基胺，其係選自由嗎啉、吡咯啶、哌啶、1-經取代之哌嗪、1,4’-聯哌啶及4’-經取代之4,4’-聯哌啶所組成的群組；其中哌嗪及4,4’-聯哌啶的取代基是烷基、-(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中n及m個別是一介於1至5的整數， R^A及R^B個別是H或C₁-C₆烷基；以及R^C是氫、鹵素、烷氧基、-CH₂OH、-NHCOR_a、-NHC(O)OR_a，或是有或無取代基之烷基、烯基、炔基、雜環基或芳基，且R_a是C_1-6烷基或芳基；R⁴及R⁵個別是氫、-OH、烷氧基或-O(CH₂)_xN(R_b)₂，其中x是一介於1至5的整數；以及R_b是C_1-10烷基或一環烷胺基；以及該芳基或雜芳基具有至少一取代基，其中該至少一取代基係選自由C_1-6烷基、烷氧基、鹵素、氰基、硝基、-NH₂、-NHR_c、-N(R_c)₂、環烷胺基、亞甲二氧基及伸乙二氧基所組成的群組，其中R_c個別是氫或C_1-10烷基。
如請求項14所述之用途，其中R¹是經-OH取代的甲基，R²是乙基，R³是嗎啉，且R⁴及R⁵個別是氫。
如請求項14所述之用途，其中R¹是經-OH取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵個別是氫。
如請求項14所述之用途，其中R¹是經-OH取代的甲基，R²是甲基，R³是1,4’-聯哌啶，且R⁴及R⁵個別是氫。
如請求項14所述之用途，其中R¹是經-OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵個別是氫。
如請求項13所述之用途，其中該化合物具有式(I-B)之結構
其中，R¹是一有或無鹵素、-OR、-OAc、-OSO₂R或-OCONHR取代的烷基，其中R是氫、烷基或環烷基；R²是氫、烷基、環烷基或芳基；R³是-NR^AR^B、-NHPhR^C、單或雙醣基，或是一胺基酸基，或是-NR^AR^B合併形成一有或無取代基之苯胺或環烷基胺，其係選自由嗎啉、吡咯啶、哌啶、1-經取代之哌嗪、1,4’-聯哌啶及4’-經取代之4,4’-聯哌啶所組成的群組；其中哌嗪及4,4’-聯哌啶的取代基是烷基、-(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中n及m個別是一介於1至5的整數，R^A及R^B個別是H或C₁-C₆烷基；以及R^C是氫、鹵素、烷氧基、-CH₂OH、-NHCOR_a、-NHC(O)OR_a，或是有或無取代基之烷基、烯基、炔基、雜環基或芳基，且R_a是C_1-6烷基或芳基；R⁴及R⁵個別是氫、-OH、烷氧基或-O(CH₂)_xN(R_b)₂，其中x是一介於1至5的整數；以及R_b是C_1-10烷基或一環烷胺基；以及該芳基或雜芳基具有至少一取代基，其中該至少一取代基係選自由C_1-6烷基、烷氧基、鹵素、氰基、硝基、-NH₂、-NHR_c、-N(R_c)₂、環烷胺基、亞甲二氧基及伸乙二氧基所組成的群組，其中R_c個別是氫或C_1-10烷基。
如請求項19所述之用途，其中R¹是經-OH取代的甲基，R²是甲基，R³是二甲胺，且R⁴及R⁵個別是氫。
如請求項19所述之用途，其中R¹是經-OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是二甲胺，且R⁴及R⁵個別是氫。
如請求項19所述之用途，其中R¹是經-OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵個別是氫。
如請求項13所述之用途，更包含在投予如請求項1所述之藥物之前、同時或之後對該個體投予一化療藥劑。
如請求項23所述之用途，其中該化療藥劑是選自由去氧膽草素(deoxyelephantopin，DET)、維羅非尼(Vemurafenib，PLX4032)、多烯紫杉醇(docetaxel)、紫杉醇(paclitaxel)、順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、樺木酸(betulinic acid)、4-S-半胱胺兒茶酚(4-S-cysteaminyl catechol)、4-S-半胱胺酚(4-S-cysteaminyl phenol)、維莫司(everolimus)、硼替佐米(bortezomib)、卡鉑定(carboplatin)、達卡巴嗪(dacarbazine)、塞來昔布(celecoxib)、替莫唑胺(temozolomide)、蕾莎瓦(sorafenib)、沙利多邁(thalidomide)、來那度胺(lenalidomide)、丙戊酸(valproic acid)、長春鹼(vinblastine)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)、波生坦(bosentan)、阿波胺(apomine)、三氧化砷(arsenic trioxide)、卡莫司汀(carmustine)、拉鉑立茲瑪(lambrolizuma)、抗CTLA-4藥物(anti-CTLA-4 drug)、抗程式性死亡受體-1(PD-1)藥物(anti-programmed death receptor-1(PD-1)drug)、易普利姆瑪(ipilimumab)、崔枚利姆瑪(tremelimumab)、艾黴素(doxorubicin)、MEK抑制劑(MEK inhibitor)、卡培他濱(capecitabine)、聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制劑(poly(ADP-ribose)polymerase(PARP)inhibitor)、磷酸肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase，PI3K)抑制劑、哺乳類雷帕黴素之標靶(mTOR)抑制劑(mammalian target of rapamycin(mTOR)inhibitor)及他莫昔芬(tamoxifen)所組成的群組。
如請求項13所述之用途，其中該癌症是選自由霍杰金氏疾病 (Hodgkin’s disease)、非霍杰金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphomas)、急性骨髓性白血病(acute myelogenous leukemia，AML)、急性淋巴性白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)、慢性骨髓性白血病(chronic myelogenous leukemia，CML)、尤文氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、多發性骨髓瘤(multiple myeloma)、威爾姆斯瘤(Wilms’tumor)、骨腫瘤(bone tumors)、神經胚細胞瘤(neuroblastoma)、視網膜母細胞瘤(retinoblastoma)、睾丸癌(testicular cancer)、甲狀腺癌(thyroid cancer)、前列腺癌(prostate cancer)、喉癌(larynx cancer)、子宮頸癌(cervical cancer)、鼻咽癌(nasopharynx cancer)、乳癌(breast cancer)、大腸癌(colon cancer)、胰臟癌(pancreatic cancer)、頭頸部癌(head and neck cancer)、食道癌(esophageal cancer)、直腸癌(rectal cancer)、小細胞肺癌(small-cell lung cancer)、非小細胞肺癌(non-small-cell lung cancer)、腦癌(brain cancer)、黑色素瘤(melanoma)、非黑色素瘤皮膚癌(non-melanoma skin cancer)及中樞神經系統腫瘤(CNS neoplasm)所組成的群組。