CN111712246A - 双(羟甲基)吡咯并酞嗪杂合物、其制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明是关于新颖的双功化合物及其于治疗和/或预防癌症的用途。本发明双功化合物具有式(I)的结构。

Description

双(羟甲基)吡咯并酞嗪杂合物、其制备方法与用途

相关申请案

本发明主张2017年11月17日依据美国第35号法典第119(e)条提出申请的临时申请案62/587,484的优先权，其发明内容并入本文作为参考。

发明背景

1.技术领域

本发明整体来说是关于癌症治疗的领域；特别是关于可展现出抗血管新生及DNA交联(cross-linking)两种活性的新颖双功化合物，以及其于治疗和/或预防癌症的用途。

2.背景技术

癌症是全世界死亡的主要原因之一。治疗癌症通常不外乎外科手术移除和/或施予一化疗药剂或放射治疗。已有许多化合物开发来作为抗癌药剂，然而，大多数的药物开发商仅通过目标至一特定的、细胞增生不受控制的细胞机制来设计抗癌药剂。与其专注于抑制在一特定代谢途径中的酶，本案发明人通过将二个活性团簇(moieties)接合成一分子来创造一种具有双功模式的化合物，具体来说，其中一团簇带有抗血管新生活性，而另一团簇带有DNA交联活性。据此，可预期该杂合分子成为一种更具潜力的抗癌药剂，因其具备两个来自两种截然不同的途径来攻击癌细胞的官能基。

发明内容

本案发明人通过将VEGF及极光激酶(aurora kinase)抑制团簇与DNA交联团簇彼此接合，而设计并合成出新类别的化合物。此类新合成的杂合化合物(hybrid compound)在各种不同的人类癌细胞中展现出显著的抗增生活性，因此，这些化合物是可开发成适合用以治疗和/或预防癌症的潜力候选药物。

据此，本发明一方面是提供一种具有式(I)的结构的新颖化合物，以及其药学上可接受的溶剂合物或立体异构物，

其中，

A是一有或无取代基的6–10员不饱和碳环；

R¹是一有或无卤素、–OR、–OAc、–OSO₂R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氢、烷基、环烷基或芳基；

R²是氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基；

R³是–NR^AR^B、–NHPhR^C、单或双糖基，或是一氨基酸基，或是–NR^AR^B合并形成一有或无取代基的苯胺(aniline)或环烷基胺(cycloalkylamine)，其是选自由吗啉(morpholine)、吡咯啶(pyrrolidine)、哌啶(piperidine)、1–经取代的哌嗪(1-substituted piperazine)、1,4’–联哌啶(1,4’-bipiperidine)及4’–经取代的4,4’–联哌啶(4’-substituted 4,4’-bipiperidine)所组成的群组；其中哌嗪及4,4’–联哌啶的取代基是烷基、–(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中

n及m各自是一介于1至5的整数，

R^A及R^B各自是H或C₁–C₆烷基；以及

R^C是氢、卤素、烷氧基(alkoxy)、–CH₂OH、–NHCOR_a、–NHC(O)OR_a，或是有或无取代基的烷基、烯基、炔基、杂环基或芳基，且R_a是C_1–6烷基或芳基；以及

该芳基或杂芳基可有或无至少一取代基，其中该至少一取代基是选自由C-_1–6烷基、烷氧基、卤素、氰基、硝基、–NH₂、–NHR_c、–N(R_c)₂、环烷氨基(cycloalkylamino)、亚甲二氧基(methylenedioxy)及伸乙二氧基(ethylenedioxy)所组成的群组，其中R_c独立地是氢或C_1–10烷基。

依据本发明的某些实施方式，在式(I)中，R³是1H–吡唑–3–氨基(1H-pyrazol-3-amino)、1H–咪唑–2–氨基(1H-imidazol-2-amino)或嘧啶–氨基(pyrimidine-amino)。

依据本发明的某些实施方式，在式(I)中，该环烷氨基是选自由吡咯啶基、哌啶基、吗啉基(morpholino)、哌嗪基及4–哌啶基哌啶基(4-piperidopiperidinyl)所组成的群组。

依据本发明的某些实施方式，特定化合物具有式(1–A)结构，

其中，

R¹是一有或无卤素、–OR、–OAc、–OSO₂R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氢、烷基、环烷基或芳基；

R²是氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基；

R³是–NR^AR^B、–NHPhR^C、单或双糖基，或是一氨基酸基，或是–NR^AR^B合并形成一有或无取代基的苯胺或环烷基胺，其是选自由吗啉、吡咯啶、哌啶、1–经取代的哌嗪、1,4’–联哌啶及4’–经取代的4,4’–联哌啶所组成的群组；其中哌嗪及4,4’–联哌啶的取代基是烷基、–(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中

n及m各自是一介于1至5的整数，

R^A及R^B各自是H或C₁–C₆烷基；以及

R^C是氢、卤素、烷氧基、–CH₂OH、–NHCOR_a、–NHC(O)OR_a，或是有或无取代基的烷基、烯基、炔基、杂环基或芳基，且R_a是C_1–6烷基或芳基；

R⁴及R⁵各自是氢、–OH、烷氧基或–O(CH₂)_xN(R_b)₂，其中

x是一介于1至5的整数；以及

R_b是C_1–10烷基或一环烷氨基；以及

该芳基或杂芳基可有或无至少一取代基，其中该至少一取代基是选自由C-_1–6烷基、烷氧基、卤素、氰基、硝基、–NH₂、–NHR_c、–N(R_c)₂、环烷氨基、亚甲二氧基及伸乙二氧基所组成的群组，其中R_c独立地是氢或C_1–10烷基。

依据一较佳的实施方式，在式(I–A)中，R¹是经–OH取代的甲基，R²是乙基，R³是吗啉，且R⁴及R⁵各自是氢。

依据一较佳的实施方式，在式(I–A)中，R¹是经–OH取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

依据另一较佳的实施方式，在式(I–A)中，R¹是经–OH取代的甲基，R²是甲基，R³是1,4’–联哌啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

依据一进一步的实施方式，在式(I–A)中，R¹是经–OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

依据本发明的某些实施方式，特定化合物具有式(I–B)结构，

其中，

R¹是一有或无卤素、–OR、–OAc、–OSO₂R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氢、烷基、环烷基或芳基；

R²是氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基；

R³是–NR^AR^B、–NHPhR^C、单或双糖基，或是一氨基酸基，或是–NR^AR^B合并形成一有或无取代基的苯胺或环烷基胺，其是选自由吗啉、吡咯啶、哌啶、1–经取代的哌嗪、1,4’–联哌啶及4’–经取代的4,4’–联哌啶所组成的群组；其中哌嗪及4,4’–联哌啶的取代基是烷基、–(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中

n及m各自是一介于1至5的整数，

R^A及R^B各自是H或C₁–C₆烷基；以及

R^C是氢、卤素、烷氧基、–CH₂OH、–NHCOR_a、–NHC(O)OR_a，或是有或无取代基的烷基、烯基、炔基、杂环基或芳基，且R_a是C_1–6烷基或芳基；

R⁴及R⁵各自是氢、–OH、烷氧基或–O(CH₂)_xN(R_b)₂，其中

x是一介于1至5的整数；以及

R_b是C_1–10烷基或一环烷氨基；以及

该芳基或杂芳基可有或无至少一取代基，其中该至少一取代基是选自由C-_1–6烷基、烷氧基、卤素、氰基、硝基、–NH₂、–NHR_c、–N(R_c)₂、环烷氨基、亚甲二氧基及伸乙二氧基所组成的群组，其中R_c独立地是氢或C_1–10烷基。

依据一较佳的实施方式，在式(I–B)中，R¹是经–OH取代的甲基，R²是甲基，R³是二甲胺，且R⁴及R⁵各自是氢。

依据另一实施方式，在式(I–B)中，R¹是经–OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是二甲胺，且R⁴及R⁵各自是氢。

依据一进一步的实施方式，在式(I–B)中，R¹是经–OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

本发明的第二方面是提供一种用于治疗或预防一罹患或疑似罹患癌症的个体的药学组合物。该药学组合物包括一治疗或预防有效量的式(I)化合物；以及一药学上可接受的载体。

若以该药学组合物总重量为基础计算时，该式(I)化合物约占该药学组合物重量的0.1％至99％。在某些实施方式中，该式(I)化合物约占该药学组合物重量的至少1％。在特定实施方式中，该式(I)化合物约占该药学组合物重量的至少5％。在其他实施方式中，该式(I)化合物约占该药学组合物重量的至少10％。在其他实施方式中，该式(I)化合物约占该药学组合物重量的至少25％。

较佳地，该化合物具有式(I–A)的结构

其中，

R¹是一有或无卤素、–OR、–OAc、–OSO2R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氢、烷基、环烷基或芳基；

R²是氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基；

R³是–NR^AR^B、–NHPhR^C、单或双糖基，或是一氨基酸基，或是–NR^AR^B合并形成一有或无取代基的苯胺或环烷基胺，其是选自由吗啉、吡咯啶、哌啶、1–经取代的哌嗪、1,4’–联哌啶及4’–经取代的4,4’–联哌啶所组成的群组；其中哌嗪及4,4’–联哌啶的取代基是烷基、–(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中

n及m各自是一介于1至5的整数，

R^A及R^B各自是H或C₁–C₆烷基；以及

R^C是氢、卤素、烷氧基、–CH₂OH、–NHCOR_a、–NHC(O)OR_a，或是有或无取代基的烷基、烯基、炔基、杂环基或芳基，且R_a是C_1–6烷基或芳基；

R⁴及R⁵各自是氢、–OH、烷氧基或–O(CH₂)_xN(R_b)₂，其中

x是一介于1至5的整数；以及

R_b是C_1–10烷基或一环烷氨基；以及

该芳基或杂芳基有或无至少一取代基，其中该至少一取代基是选自由C-_1–6烷基、烷氧基、卤素、氰基、硝基、–NH₂、–NHR_c、–N(R_c)₂、环烷氨基、亚甲二氧基及伸乙二氧基所组成的群组，其中R_c独立地是氢或C_1–10烷基。

任选地或除此外，该式(I–A)化合物是配制成一微脂体。

依据一较佳的实施方式，在式(I–A)中，R¹是经–OH取代的甲基，R²是乙基，R³是吗啉，且R⁴及R⁵各自是氢。

依据另一较佳的实施方式，在式(I–A)中，R¹是经–OH取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

依据一进一步的实施方式，在式(I–A)中，R¹是经–OH取代的甲基，R²是甲基，R³是1,4’–联哌啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

依据再一进一步的实施方式，R¹是经–OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

依据本发明其他较佳的实施方式，该化合物具有式(I–B)的结构

其中，

R¹是一有或无卤素、–OR、–OAc、–OSO₂R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氢、烷基、环烷基或芳基；

R²是氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基；

R³是–NR^AR^B、–NHPhR^C、单或双糖基，或是一氨基酸基，或是–NR^AR^B合并形成一有或无取代基的苯胺或环烷基胺，其是选自由吗啉、吡咯啶、哌啶、1–经取代的哌嗪、1,4’–联哌啶及4’–经取代的4,4’–联哌啶所组成的群组；其中哌嗪及4,4’–联哌啶的取代基是烷基、–(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中

n及m各自是一介于1至5的整数，

R^A及R^B各自是H或C₁–C₆烷基；以及

R^C是氢、卤素、烷氧基、–CH₂OH、–NHCOR_a、–NHC(O)OR_a，或是有或无取代基的烷基、烯基、炔基、杂环基或芳基，且R_a是C_1–6烷基或芳基；

R⁴及R⁵各自是氢、–OH、烷氧基或–O(CH₂)_xN(R_b)₂，其中

x是一介于1至5的整数；以及

R_b是C_1–10烷基或一环烷氨基；以及

该芳基或杂芳基有或无至少一取代基，其中该至少一取代基是选自由C-_1–6烷基、烷氧基、卤素、氰基、硝基、–NH₂、–NHR_c、–N(R_c)₂、环烷氨基、亚甲二氧基及伸乙二氧基所组成的群组，其中R_c独立地是氢或C_1–10烷基。

依据一较佳的实施方式，在式(I–B)中，R¹是经–OH取代的甲基，R²是甲基，R³是二甲胺，且R⁴及R⁵各自是氢。

依据另一较佳的实施方式，在式(I–B)中，R¹是经–OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是二甲胺，且R⁴及R⁵各自是氢。

依据一进一步较佳的实施方式，在式(I–B)中，R¹是经–OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

本发明也涵盖一种用于治疗或预防一罹患或疑似罹患癌症的个体的方法。该方法包含对该个体施予本发明药学组合物的步骤。

任选地或除此外，该方法更包括在施予本发明药学组合物之前、同时或之后对该个体施予一化疗药剂。

具体地可用于本发明方法的化疗药剂包括，但不限于，脱氧胆草素(deoxyelephantopin，DET)、维罗非尼(Vemurafenib，PLX4032)、多烯紫杉醇(docetaxel)、紫杉醇(paclitaxel)、顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、桦木酸(betulinicacid)、4–S–半胱胺儿茶酚(4–S–cysteaminyl catechol)、4–S–半胱胺酚(4–S–cysteaminylphenol)、依维莫司(everolimus)、硼替佐米(bortezomib)、卡铂(carboplatin)、达卡巴嗪(dacarbazine)、塞来昔布(celecoxib)、替莫唑胺(temozolomide)、索拉非尼(sorafenib)、沙利度胺(thalidomide)、来那度胺(lenalidomide)、丙戊酸(valproic acid)、长春碱(vinblastine)、甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)、波生坦(bosentan)、阿波胺(apomine)、三氧化二砷(arsenic trioxide)、卡莫司汀(carmustine)、拉铂立兹玛(lambrolizuma)、抗CTLA-4药物(anti-CTLA-4drug)、抗程序性死亡受体-1(PD-1)药物(anti-programmed death receptor-1(PD-1)drug)、易普利姆玛(ipilimumab)、崔枚利姆玛(tremelimumab)、阿霉素(doxorubicin)、MEK抑制剂(MEK inhibitor)、卡培他滨(capecitabine)、聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂(poly(ADP-ribose)polymerase(PARP)inhibitor)、磷酸肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase，PI3K)抑制剂、哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂(mammalian target of rapamycin(mTOR)inhibitor)及他莫昔芬(tamoxifen)。

具体地可利用本发明方法来治疗的癌症包括，但不限于，霍杰金氏疾病(Hodgkin’s disease)、非霍杰金氏淋巴瘤(Non–Hodgkin’s lymphomas)、急性骨髓性白血病(acutemyelogenous leukemia，AML)、急性淋巴性白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)、慢性骨髓性白血病(chronic myelogenous leukemia，CML)、尤文氏肉瘤(Ewing’ssarcoma)、多发性骨髓瘤(multiple myeloma)、威尔姆斯瘤(Wilms’tumor)、骨肿瘤(bonetumors)、神经母细胞瘤(neuroblastoma)、视网膜母细胞瘤(retinoblastoma)、睾丸癌(testicular cancer)、甲状腺癌(thyroid cancer)、前列腺癌(prostate cancer)、喉癌(larynx cancer)、子宫颈癌(cervical cancer)、鼻咽癌(nasopharynx cancer)、乳腺癌(breast cancer)、大肠癌(colon cancer)、胰腺癌(pancreatic cancer)、头颈部癌(headand neck cancer)、食道癌(esophageal cancer)、直肠癌(rectal cancer)、小细胞肺癌(small-cell lung cancer)、非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer)、脑癌(braincancer)、黑色素瘤(melanoma)、非黑色素瘤皮肤癌(non-melanoma skin cancer)及中枢神经系统肿瘤(CNS neoplasm)。

本发明也包括一种用于治疗或预防一罹患癌症的个体的试剂盒。该试剂盒至少包括一含有该式(I)化合物的第一容器；以及一含有一化疗药剂的第二容器。

下文随附的说明将详细阐述本发明的一或多个实施方式。在参阅下文详细说明以及申请专利范围之后，本发明的其他特点及优势当可轻易了解。

应当理解的是，前述的一般说明及后文的详细说明仅是示例性的，且旨在用以解释本发明。

附图说明

随附的图式包含在说明书中，并与说明书构成本说明书的一部分，用于说明本发明的几个实施例、方法及其他示例性的各种不同方面的实施方式。在参照随附图式来阅读以下的详细说明后，本发明将更明显易懂，其中，

图1是依据本发明的一实施方式所得的相片，说明式(I)化合物对形成DNA链间交联(interstrand crosslink，ICL)的影响；

图2是依据本发明的一实施方式所得的结果，说明在H526细胞中BO–2768或顺铂对DNA链间交联的影响；其中(A)代表性影像图呈现利用修改过的彗星分析法(comet assay)所得的个别具有彗星尾的细胞，以及(B)柱状图显示以顺铂或BO–2768处理的细胞尾矩(tail moment)。尾矩较短说明DNA链间交联作用较强。该实验数据是取3次独立试验的平均值；

图3是依据本发明的一实施方式所得的相片，说明(A)BO–2590、(B)BO–2577或(C)瓦他拉尼(vatalanib)对抑制VEGFR-2活化的影响；

图4是依据本发明的一实施方式所得的结果，说明BO–2590、BO–2698及BO–2768对内皮细胞抗血管新生作用的影响，其中(A)是抑制内皮细胞移动的情形，其利用插入式细胞培养皿(transwell)来测量，(B)及(C)相片显示利用血管生成(tube formation)分析来检测该抑制结果，而(D)折线图显示(A)及(B)小图的定量结果；

图5是依据本发明的一实施方式所得的结果，说明BO–2590在H460人类肺癌细胞中干扰细胞周期的情形；

图6是依据本发明的一实施方式所得的结果，说明在(A)24小时、(B)48小时或(C)72小时时，BO–2590在H460人类肺癌细胞中引发产生细胞凋亡的亚G1细胞(sub-G1 cell)的情形；

图7是依据本发明的一实施方式所得的结果，说明BO–2590或顺铂引发膜连蛋白V(Annexin V)+细胞凋亡的情形；

图8是依据本发明的一实施方式所得的结果，说明BO–2768在H526细胞中引发细胞凋亡的情形；

图9是依据本发明的一实施方式所得的折线图，说明BO–2768及顺铂的协同作用，其分别以(A)1：2、(B)1：4、(C)1：8的比例来抑制H211细胞的增生；再利用综合指数(combined index，CI)来计算不同合并剂量之间的协同作用或拮抗作用，其中当CI＝1时说明二种药物具有累加效应，当CI<1时说明优于累加效应(即协同作用)，而CI>1时说明劣于累加效应(即拮抗作用)；

图10是依据本发明的一实施方式所得的结果，说明微脂体的BO–2590L对带有H526异体移植的裸鼠的(A)肿瘤体积，以及(B)体重变化的影响；

图11是依据本发明的一实施方式所得的结果，说明微脂体的BO–2590L、瓦他拉尼及顺铂分别对带有H526异体移植的裸鼠的(A)肿瘤体积，以及(B)体重变化的影响；

图12是依据本发明的一实施方式所得的结果，说明微胞的BO–2590、BO–2768、BO–2792、伊立替康(irinotecan)及顺铂分别对带有H526异体移植的裸鼠的(A)肿瘤体积，以及(B)体重变化的影响；

图13是依据本发明的一实施方式所得的折线图，说明BO–2768对带有H526的小细胞肺癌细胞(SCLC)异体移植的裸鼠的(A)肿瘤体积，以及(B)体重变化呈现剂量依赖性的抑制作用；

图14是依据本发明的一实施方式所得的结果，说明合并使用BO–2768及顺铂对带有H211的SCLC异体移植的裸鼠的(A)肿瘤体积，以及(B)体重变化的影响。施予每千克20毫克于100微升剂量的BO–2768，连续5天及暂停一天，共二次循环。施予每千克2或4毫克剂量的顺铂，4天一次，共3次。在药物治疗后观察体重变化；

图15是依据本发明的一实施方式所得的结果，说明BO–2590L、顺铂或瓦他拉尼对肿瘤CD31标记的量的影响；其中(A)是代表性的IHC染色图，在治疗后第6天利用抗体对抗CD31，以及(B)定量肿瘤CD31的讯号。实验数据以每组15个视野的平均值±标准偏差来代表；以及

图16是依据本发明的一实施方式所得的结果，说明BO–2590L、顺铂或瓦他拉尼对肿瘤γ–H2AX的影响；其中(A)是代表性的IHC染色图，在治疗后第6天利用抗体对抗γ–H2AX，以及(B)定量肿瘤γ–H2AX的讯号。实验数据以每组三只小鼠的平均值±标准偏差来代表。

具体实施方式

下文提供了详细说明及随附图式是为了使本发明的叙述更加详尽与完备，而非代表用以理解或运用本发明的唯一形式。

1.定义

当列出数值范围时，其旨在涵盖该范围内的每个数值及子范围。举例来说，「C_1–10」是旨在涵盖C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C_1–10、C_1–9、C_1–8、C_1–7、C_1–6、C_1–5、C_1–4、C_1–3、C_1–2、C_2–10、C_2–9、C_2–8、C_2–7、C_2–6、C_2–5、C_2–4、C_2–3、C_3–10、C_3–9、C_3–8、C_3–7、C_3–6、C_3–5、C_3–4、C_4–10、C_4–9、C_4–8、C_4–7、C_4–6、C_4–5、C_5–10、C_5–9、C_5–8、C_5–7、C_5–6、C_6–10、C_6–9、C_6–8、C_6–7、C_7–10、C_7–9、C_7–8、C_8–10、C_8–9及C_9–10。

除非另有说明，「烷基」(alkyl)一词是指一种具有1至20(例如1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3、1至2，或是1)个碳原子的直链、支链和/或环状(「环烷基」(cycloalkyl))烃。具有1至4个碳(C_1–4烷基)的烷基团簇称为「低碳数烷基」(lower alkyl)。烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、三级丁基、异丁基、2–异丙基–3–甲基丁基、戊基、戊–2–基、己基、异己基、庚基、庚–2–基、4,4–二甲基戊基、辛基、2,2,4–三甲基戊基、壬基、癸基、十一基及十二基。环烷基团簇可以是单环或是多环，其实例包括环丙基、环丁基、环戊基及环己基。除非另有指明，烷基的每个实例是各自独立地可以是可任选取代的，也就是，无取代基的(一「无取代基的烷基」(unsubstituted alkyl))或以一或多个取代基进行取代的有取代基的(一「有取代基的烷基」(substituted alkyl))。在特定实施方式中，烷基是有取代基的C_2–10烷基。在某些实施方式中，环烷基是一单环、饱和、具有3至6环碳原子(「C_3–6环烷基」)的碳环基。在某些实施方式中，环烷基具有5至6环碳原子(「C_5–6环烷基」)。C_5–6环烷基的实例包括环戊基(C₅)及环己基(C₆)。除非另有指明，环烷基的每个实例是各自独立地可以是无取代基的(一「无取代基的环烷基」(unsubstituted cycloalkyl))或以一或多个取代基进行取代的有取代基的(一「有取代基的环烷基」(substitutedcycloalkyl))。在特定实施方式中，环烷基是无取代基的C_3–10环烷基。在特定实施方式中，环烷基是有取代基的C_3–10环烷基。

「杂环烷基」(heterocycloalkyl)是指一种3–至10–员具有环碳原子及1至4环杂原子的非芳环体系之基团(radical)，其中每个杂原子是各自独立地选自氮、氧、硫、磷及硅(「3–10员杂环烷基」(3–10membered heterocycloalkyl))。内含一或多个氮原子的杂环基，在原子价数允许下，其连接点可以是碳原子或氮原子。除非另有指明，杂环烷基的每个实例是各自独立地可以是可任选取代的，也就是，无取代基的(一「无取代基的杂环烷基」(unsubstituted heterocycloalkyl))或以一或多个取代基进行取代的有取代基的(一「有取代基的杂环烷基」(substituted heterocycloalkyl))。在某些实施方式中，一杂环基是一具有环碳原子及1–4个环杂原子的5–8员非芳环体系，其中每个杂原子是各自独立地选自氮、氧及硫。在某些实施方式中，一杂环烷基是一具有环碳原子及1–4个环杂原子的5–6员非芳环体系，其中每个杂原子是各自独立地选自氮、氧及硫。在某些实施方式中，该5–6员杂环具有1–3个选自氮、氧及硫的环杂原子。在某些实施方式中，该5–6员杂环具有1–2个选自氮、氧及硫的环杂原子。在某些实施方式中，该5–6员杂环烷基具有一个选自氮、氧及硫的环杂原子。具体的含有一个杂原子的5–员杂环基包括，但不限于，四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢噻吩基、吡咯啶基、二氢吡咯基及吡咯基–2,5–二酮。具体的含有二个杂原子的5–员杂环基包括，但不限于，二氧杂环戊基、氧硫杂环戊基(oxasulfuranyl)、二硫杂环戊基及

唑烷–2–酮。具体的含有三个杂原子的5–员杂环基包括，但不限于，三唑啉基(triazolinyl)、氧二唑啉基(oxadiazolinyl)及硫二唑啉基(thiadiazolinyl)。具体的含有一个杂原子的6–员杂环基包括，但不限于，哌啶基、四氢吡喃基、二氢吡啶基及噻烷基(thianyl)。具体的含有二个杂原子的6–员杂环基包括，但不限于，哌嗪基、吗啉基、二噻烷基(dithianyl)及二

烷基。具体的含有二个杂原子的6–员杂环基包括，但不限于，三嗪基(triazinanyl)。具体的含有一个杂原子的7–员杂环基包括，但不限于，氮杂环庚基、氧杂环庚基(oxepanyl)及硫杂环庚基(thiepanyl)。具体的含有一个杂原子的8–员杂环基包括，但不限于，氮杂环辛基(azocanyl)、氧杂环辛基(oxecanyl)及硫杂环辛基(thiocanyl)。

除非另有说明，「芳基」(aryl)一词是指由碳原子及氢原子所构成的芳环或部分的芳环体系。芳基团簇可以包括结合或融合在一起的多环。芳基团簇的实例包括苯基、萘基、芘基、蒽基及菲基。除非另有说明，芳基的每个实例是各自独立地可以是可任选取代的，也就是，无取代基的(一「无取代基的芳基」(unsubstituted aryl))或以一或多个取代基进行取代的有取代基的(一「有取代基的芳基」(substituted aryl))。在特定实施方式中，该芳基是一有取代基的苯基(例如苄基)。

除非另有说明，一词「杂芳基」(heteroaryl)是指一芳基团簇，其中以一杂原子(例如N、O或S)取代其碳原子中的至少一个。在某些实施方式中，一杂芳基是一具有环碳原子及1–4个环杂原子于该芳环体系的5–10员芳环体系，其中每个杂原子是各自独立地选自氮、氧及硫(「5–10员杂芳基」(5–10membered heteroaryl))。在某些实施方式中，一杂芳基是一具有环碳原子及1–4个环杂原子于该芳环体系的5–8员芳环体系，其中每个杂原子是各自独立地选自氮、氧及硫(「5–8员杂芳基」(5–8membered heteroaryl))。在某些实施方式中，一杂芳基是一具有环碳原子及1–4个环杂原子于该芳环体系的5–6员芳环体系，其中每个杂原子是各自独立地选自氮、氧及硫(「5–6员杂芳基」(5–6membered heteroaryl))。在某些实施方式中，该5–6员杂芳基具有1–3个选自氮、氧及硫的环杂原子。在某些实施方式中，该5–6员杂芳基具有1–2个选自氮、氧及硫的环杂原子。在某些实施方式中，该5–6员杂芳基具有1个选自氮、氧及硫的环杂原子。除非另有说明，杂芳基的每个实例是各自独立地可以是可任选取代的，也就是，无取代基的(一「无取代基的杂芳基」(unsubstituted heteroaryl))或以一或多个取代基进行取代的有取代基的(一「有取代基的杂芳基」(substitutedheteroaryl))。在特定实施方式中，该杂芳基是无取代基的5–14员杂芳基。在特定实施方式中，该杂芳基是有取代基的5–14员杂芳基。具体的含有一个杂原子的5–员杂芳基包括，但不限于，吡咯基、呋喃基及噻吩基。具体的含有二个杂原子的5–员杂芳基包括，但不限于，咪唑基、吡唑基、

唑基、异

唑基、噻唑基及异噻唑基。具体的含有三个杂原子的5–员杂芳基包括，但不限于，三唑基、氧二唑基(oxadiazolyl)及硫二唑基(thiadiazolyl)。具体的含有四个杂原子的5–员杂芳基包括，但不限于，四唑基。具体的含有一个杂原子的6–员杂芳基包括，但不限于，吡啶基。具体的含有二个杂原子的6–员杂芳基包括，但不限于，哒嗪基、嘧啶基及吡嗪基。具体的含有三或四个杂原子的6–员杂芳基包括，但不限于，分别是三嗪基及四嗪基。具体的含有一个杂原子的7–员杂芳基包括，但不限于，吖庚因基(azepinyl)、氧杂环庚三烯基(oxepinyl)及硫杂环庚三烯基(thiepinyl)。具体的含有二个杂原子的10–员杂芳基包括，但不限于，喹唑啉基(quinazolinyl)。

除非另有说明，「烷基芳基」(alkylaryl)或「烷基–芳基」(alkyl-aryl)一词是指一烷基团簇结合至一芳基团簇。

除非另有说明，「卤素」(halogen及halo)一词涵盖氟、氯、溴及碘。

「氨基」(amino)一词是指一式：–N(R_c)₂的团簇，其中R_c的每个实例是各自独立地可以是本文所述的取代基，或是R_c的二个实例合并形成有取代基的或无取代基的杂环。在特定实施方式中，该氨基是无取代基的氨基(即–NH₂)。在特定实施方式中，该氨基是有取代基的氨基，其中R_c的至少一个实例不是氢。

「糖基」(saccharide group)一词是指一糖类单基团通过该糖类团簇的任一原子共价连接至另一化合物或原子，例如通过配糖基碳原子。作为说明，代表性的糖包括，已糖，例如D–葡萄糖、D–甘露糖、D–木糖、D–半乳糖、万古胺、3–去甲基–万古胺、3–表–万古胺、4–表–万古胺、3–氨基–2,3,6–脱氧–L–阿拉伯糖–己糖(3–amino–2,3,6–deoxy–L–arabinose–hexose，acosamine)、放线糖胺(actinosamine)、道诺糖胺(daunosamine)、3–表–道诺糖胺、瑞斯托糖胺(ristosamine)、D–葡糖胺、N–甲基–D–葡糖胺、D–葡糖醛酸、N–乙酰基–D–葡萄糖胺、N–乙酰基–D–半乳糖胺、唾液酸(sialyic acid)、艾杜糖醛酸(iduronic acid)、L–岩藻糖等；戊糖，例如D–核糖或D–阿拉伯糖；酮糖，例如D–核酮糖或D–果糖；双糖，例如蔗糖、乳糖、麦芽糖、2–O–(α–L–万古糖胺基)–β–D–吡喃葡萄糖或2–O–(3–去甲基–α–L–万古糖胺基)–β–D–吡喃葡萄糖；衍生物，例如缩醛、胺、酰化、硫酸化与磷酸化的糖。为该定义的目的，这些糖以常规的三字母命名法表示，糖可以是其开放形式，或是较佳为其吡喃糖形式。

「氨基酸基」(amino acid group)一词是指一氨基酸单基团通过该氨基酸团簇的任一原子连接至另一化合物或原子，举例来说，通过氨基或羧基官能基，或任一在侧链上的官能基，例如离氨酸的侧链氨基。

除非另有说明，当用于描述化学结构或团簇时，「有取代基的」(substituted)一词是指该结构或团簇的衍生物，其中以一原子取代其一或多个氢原子、化学团簇或官能基例如，但不限于，–OH、–CHO、烷氧基、烷酰氧基(alkanoyloxy)(例如–OAc)、烯基、烷基(例如、甲基、乙基、丙基、三级丁基)、芳基、芳氧基、卤素或卤代烷基(例如、–CCl₃、–CF₃、–C(CF₃)₃)。除非另有说明，一词「烷氧基」(alkoxy)是指–O–烷基。烷氧基的实例包括，但不限于，–OCH₃、–OCH₂CH₃、–O(CH₂)₂CH₃、-O(CH₂)₃CH₃、–O(CH₂)₄CH₃及–O(CH₂)₅CH₃。「低碳数烷氧基」(loweralkoxy)一词是指–O–(低碳数烷基)，例如–OCH₃及–OCH₂CH₃。

除非另有说明，紧接着前置于一系列名词的一或多个形容词应视为适用于每个名词。举例来说，「有或无取代基的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基」(optionallysubstituted alky,cycloalkyl,heterocycloalkyl,aryl,or heteroaryl)一句与「有或无取代基的烷基、有或无取代基的环烷基、有或无取代基的杂环烷基、有或无取代基的芳基或有或无取代基的杂芳基」(optionally substituted alky,optionally substitutedcycloalkyl,optionally substituted heterocycloalkyl,optionally substitutedaryl,or optionally substituted heteroaryl)意义相同。

本发明并不限于任一种上述具体列示的取代基。

「溶剂合物」(solvate)一词是指通常通过溶剂分解反应与溶剂结合的化合物形式。此物理结合包含氢键。常规溶剂包含水、甲醇、乙醇、乙酸、二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)、四氢呋喃(tetrahydrofuran，THF)、乙醚等。本文所述的化合物例如可以结晶形式制备，且可为溶剂合物形式。适合的溶剂合物包括药学上可接受的溶剂合物(例如水合物)，且进一步包括化学计量溶剂合物和非化学计量溶剂合物两者。在某些情形下，例如当一或多个溶剂分子纳入结晶固体的晶格中时，溶剂合物将能够解离。「溶剂合物」涵盖溶液以及可解离的溶剂合物两者。

当可理解，具有相同分子式但其原子的键合性质或顺序或其原子空间排列不同的化合物称为「同分异构物」(isomer)。其原子空间排列不同的异构物称为「立体异构物」(stereoisomer)。

彼此非镜像的立体异构物称为「非镜像异构物」(diastereomer)，而该些彼此不重迭的镜像的立体异构物称为「镜像异构物」(enantiomer)。当化合物具有不对称中心，例如其键合四个不同的基团时，一对镜像异构物是可能存在的。镜像异构物可以通过其不对称中心的绝对构型来确认，并通过Cahn及Prelog的R-和S-顺序规则来描述，或是通过其中分子旋转偏振光平面的方式来描述并命名为右旋或左旋(即分别为(+)或(–)–异构物)。手性化合物可以以个别的镜像异构物或其混合物存在。含有等比例的镜像异构物混合物称为「外消旋混合物」(racemic mixture)。

应当注意的是，如果结构或结构的一部分的立体化学没有用例如粗体或虚线表示，则该结构或该结构的一部分视为涵盖其所有的立体异构物。同样地，具有一个或多个手性中心的化合物的名称没有标明这些中心的立体化学的话，则涵盖纯立体异构物及其混合物。此外，图中显示具有不饱和价数的任一原子均推定为连接至足够的氢原子以满足其价数。

为本发明的目的，杂原子(例如氮)可具有氢取代基和/或任一适合的本文所述的取代基，其满足该杂原子的价数并形成一稳定的团簇。

除非另有说明，一化合物之一「治疗有效量」(therapeutically effectiveamount)是指在治疗或应对一疾病或病状时，或是推迟或减少与该疾病或病状相关之一或多种病症时，足以产生治疗效益的剂量。一化合物的治疗有效量是指治疗药剂的剂量，其不论是单独施予或与其他治疗合并施予，都能对该疾病或病状的治疗或应对产生治疗效益。「治疗有效量」一词可涵盖能够改善整体治疗、减少或避免该疾病或病状的病症或病因，或是提高另一种治疗药剂的治疗功效的剂量。

除非另有说明，一化合物之一「预防有效量」(prophylactically effectiveamount)是指一足以预防一疾病或病状、一或多种与该疾病或病状相关的病症，或是预防其复发的剂量。一化合物的预防有效量是指治疗药剂的剂量，其不论是单独施予或与其他治疗合并施予，都能对预防该疾病产生预防效益。「预防有效量」一词可涵盖能够改善整体预防或提高另一种预防药剂的预防功效的剂量。

除非另有说明，「治疗」(treat、treating及treatment)一词是指表示在病患罹患特定疾病或病症时发生的作用，其降低该疾病或病症的严重程度，或其一或多种症状，或延迟或推迟该疾病或病症的进展。

须知若未明确地以粗体或是虚线来标示出一结构的立体化学或是一结构的一部分时，应将该结构或是该结构的该部分解读成涵盖其全部的立体化学结构。同样的，具有一或多个对掌中心(chial center)的化合物的名称若未明确标示出这些对掌中心时，也应将该化合物的名称解读成涵盖该化合物的纯立体异构物及由纯立体异构物组成的混合物。此外，图标中任何看似未满足化学键价的原子都应将其未满足化学键价处视为已连接了氢原子。

虽然用以界定本发明较广范围的数值范围与参数都是约略的数值，此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所导致的标准偏差。在此处，「约」(about)一词通常是指实际数值在一特定数值或范围的正负10％、5％、1％或0.5％之内。或者是，「约」一词代表实际数值落在平均值的可接受标准误差之内，视本发明所属技术领域中具有通常知识者的考虑而定。除了实验例之外，或除非另有明确的说明，当可理解此处所用的所有范围、数量、数值与百分比(例如用于描述材料用量、时间长短、温度、操作条件、数量比例及其他相似者)均经过「约」的修饰。因此，除非另有相反的说明，本说明书与随附的申请专利范围所公开的数值参数都为约略的数值，且可视需求而更改。至少应将此等数值参数理解为所指出的有效位数与套用一般进位法所得到的数值。

在本文中，单数形式「一」(a)、「一」(an)及「该」(the)包括复数参考值，但依据上下文而另有说明的除外。

2.新颖的式(I)化合物

本发明涵盖式(I)化合物，以及其药学上可接受的溶剂合物或立体异构物，

其中，

A是一有或无取代基的6–10员不饱和碳环；

R¹是一有或无卤素、–OR、–OAc、–OSO₂R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氢、烷基、环烷基或芳基；

R²是氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基；

R³是–NR^AR^B、–NHPhR^C、单或双糖基，或是一氨基酸基，或是–NR^AR^B合并形成一有或无取代基的苯胺或环烷基胺，其是选自由吗啉、吡咯啶、哌啶、1–经取代的哌嗪、1,4’–联哌啶及4’–经取代的4,4’–联哌啶所组成的群组；其中哌嗪及4,4’–联哌啶的取代基是烷基、–(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中

n及m各自是一介于1至5的整数，

R^A及R^B各自是H或C₁–C₆烷基；以及

R^C是氢、卤素、烷氧基、–CH₂OH、–NHCOR_a、–NHC(O)OR_a，或是有或无取代基的烷基、烯基、炔基、杂环基或芳基，且R_a是C_1–6烷基或芳基；以及

该芳基或杂芳基可有或无至少一取代基，其中该至少一取代基是选自由C-_1–6烷基、烷氧基、卤素、氰基、硝基、–NH₂、–NHR_c、–N(R_c)₂、环烷氨基、亚甲二氧基及伸乙二氧基所组成的群组，其中R_c独立地是氢或C_1–10烷基。

依据本发明的某些实施方式，在式(I)中，R³是1H–吡唑–3–氨基、1H–咪唑–2–氨基或嘧啶–氨基。

依据本发明进一步的实施方式，在式(I)中，该环烷氨基是选自由吡咯啶基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基及4–哌啶基哌啶基所组成的群组。

依据本发明的某些实施方式，特定化合物是式(1–A)，

其中，

R¹是一有或无卤素、–OR、–OAc、–OSO₂R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氢、烷基、环烷基或芳基；

R²是氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基；

R³是–NR^AR^B、–NHPhR^C、单或双糖基，或是一氨基酸基，或是–NR^AR^B合并形成一有或无取代基的苯胺或环烷基胺，其是选自由吗啉、吡咯啶、哌啶、1–经取代的哌嗪、1,4’–联哌啶及4’–经取代的4,4’–联哌啶所组成的群组；’其中哌嗪及4,4’–联哌啶的取代基是烷基、–(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中

n及m各自是一介于1至5的整数，

R^A及R^B各自是H或C₁–C₆烷基；以及

R^C是氢、卤素、烷氧基、–CH₂OH、–NHCOR_a、–NHC(O)OR_a，或是有或无取代基的烷基、烯基、炔基、杂环基或芳基，且R_a是C_1–6烷基或芳基；

R⁴及R⁵各自是氢、–OH、烷氧基或–O(CH₂)_xN(R_b)₂，其中

x是一介于1至5的整数；以及

R_b是C_1–10烷基或一环烷氨基；以及

该芳基或杂芳基可有或无至少一取代基，其中该至少一取代基是选自由C-_1–6烷基、烷氧基、卤素、氰基、硝基、–NH₂、–NHR_c、–N(R_c)₂、环烷氨基、亚甲二氧基及伸乙二氧基所组成的群组，其中R_c独立地是氢或C_1–10烷基。

例示性的式(I–A)化合物包括，但不限于，下列化合物：

依据本发明的某些实施方式，特定化合物是式(I–B)，

其中，

R¹是一有或无卤素、–OR、–OAc、–OSO₂R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氢、烷基、环烷基或芳基；

R²是氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基；

R³是–NR^AR^B、–NHPhR^C、单或双糖基，或是一氨基酸基，或是–NR^AR^B合并形成一有或无取代基的苯胺或环烷基胺，其是选自由吗啉、吡咯啶、哌啶、1–经取代的哌嗪、1,4’–联哌啶及4’–经取代的4,4’–联哌啶所组成的群组；其中哌嗪及4,4’–联哌啶的取代基是烷基、–(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中

n及m各自是一介于1至5的整数，

R^A及R^B各自是H或C₁–C₆烷基；以及

R^C是氢、卤素、烷氧基、–CH₂OH、–NHCOR_a、–NHC(O)OR_a，或是有或无取代基的烷基、烯基、炔基、杂环基或芳基，且R_a是C_1–6烷基或芳基；

R⁴及R⁵各自是氢、–OH、烷氧基或–O(CH₂)_xN(R_b)₂，其中

x是一介于1至5的整数；以及

R_b是C_1–10烷基或一环烷氨基；以及

该芳基或杂芳基可有或无至少一取代基，其中该至少一取代基是选自由C-_1–6烷基、烷氧基、卤素、氰基、硝基、–NH₂、–NHR_c、–N(R_c)₂、环烷氨基、亚甲二氧基及伸乙二氧基所组成的群组，其中R_c独立地是氢或C_1–10烷基。

例示性的式(I–B)化合物包括，但不限于，下列化合物：

本发明的化合物含有一或多个立构中心(stereocenter)，因此可存在镜像异构物的外消旋混合物或非镜像异构物的混合物。本发明因此涵盖这类化合物的纯立体异构体的形式，以及这些形式的混合物。可通过不对称合成，或是利用例如结晶法、层析法，以及使用光学分割剂等常规技术进行解析来制备立体异构物。一种较佳的自一外消旋混合物分离镜像异构物的方式是通过使用高效液相层析法(high performance liquidchromatography，HPLC)来制备。或者是，在一溶剂中，通过与一光学活性形式的光学分割剂进行反应来将外消旋化合物分离成其镜像异构物。取决于光学分割剂的光学形式，可将二个镜像异构物的其中之一分离成一高产率及高光学纯度的不溶性盐类，而保留另一镜像异构物在溶液中。

因此，本发明进一步的涵盖本发明化合物的立体异构物混合物。也涵盖本发明化合物的构型异构物(例如顺式及反式异构物，无论是否涉及双键)，其可以是掺和物(admixture)或是纯的或实质上纯的形式。

3.使用方法

本发明涵盖一种用于治疗或预防一罹患癌症的个体的方法。该方法包括对该个体施予一治疗或预防有效量的本发明式(I)化合物的步骤，从而抑制癌症生长。

在某些实施方式中，该方法进一步包括在施予该式(I)化合物之前、同时或之后对该个体施予一化疗药剂的步骤。该化疗药剂可选自由脱氧胆草素、维罗非尼、多烯紫杉醇、紫杉醇、顺铂、奥沙利铂、桦木酸、4–S–半胱胺儿茶酚、4–S–半胱胺酚、依维莫司、硼替佐米、卡铂、达卡巴嗪、塞来昔布、替莫唑胺、索拉非尼、沙利度胺、来那度胺、丙戊酸、长春碱、甲磺酸伊马替尼、波生坦、阿波胺、三氧化二砷、卡莫司汀、拉铂立兹玛、抗CTLA-4药物、抗PD-1药物、易普利姆玛、崔枚利姆玛、阿霉素、MEK抑制剂、卡培他滨、PARP抑制剂、PI3K抑制剂、mTOR抑制剂及他莫昔芬所组成的群组。

在本发明中，该癌症可以是霍杰金氏疾病、非霍杰金氏淋巴瘤、急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病、尤文氏肉瘤、多发性骨髓瘤、威尔姆斯瘤、骨肿瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、睾丸癌、甲状腺癌、前列腺癌、喉癌、子宫颈癌、鼻咽癌、乳腺癌、大肠癌、胰腺癌、头颈部癌、食道癌、直肠癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、脑癌、黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌或中枢神经系统肿瘤的任何一种。依据一较佳的实施方式，可利用本发明式(I)化合物来治疗的癌症的是小细胞肺癌。依据另一较佳的实施方式，可利用本发明式(I)化合物来治疗的癌症是急性淋巴性白血病。

该式(I)化合物的量、投药途径及投药时间将视各种因素而定，例如待治疗、预防或应对的特定适应症、病患的年龄、性别及病状。这类因素所起的作用是本领域所熟知的，并且可通过常规试验进行调整。

4.药学制剂

本发明涵盖用于治疗或预防癌症的药学组合物。该药学组合物包含一治疗或预防有效量的本发明式(I)化合物。

该式(I)化合物是以该药学组合物的总重量为基础，以重量约0.1％至99％的量存在。在某些实施方式中，该式(I)化合物是以该药学组合物的总重量为基础，以重量至少1％的量存在。在特定实施方式中，该式(I)化合物是以该药学组合物的总重量为基础，以重量至少5％的量存在。再在其他实施方式中，该式(I)化合物是以该药学组合物的总重量为基础，以重量至少10％的量存在。再又在其他实施方式中，该式(I)化合物是以该药学组合物的总重量为基础，以重量至少25％的量存在。

在某些较佳的实施方式中，该药学组合物更包括一化疗药剂。该化疗药剂可选自由脱氧胆草素、维罗非尼、多烯紫杉醇、紫杉醇、顺铂、奥沙利铂、桦木酸、4–S–半胱胺儿茶酚、4–S–半胱胺酚、依维莫司、硼替佐米、卡铂、达卡巴嗪、塞来昔布、替莫唑胺、索拉非尼、沙利度胺、来那度胺、丙戊酸、长春碱、甲磺酸伊马替尼、波生坦、阿波胺、三氧化二砷、卡莫司汀、拉铂立兹玛、抗CTLA-4药物、抗PD-1药物、易普利姆玛、崔枚利姆玛、阿霉素、MEK抑制剂、卡培他滨、PARP抑制剂、PI3K抑制剂、mTOR抑制剂及他莫昔芬所组成的群组。

特定药学组合物可以是适用于病患口服、黏膜(例如鼻、舌下、阴道、口腔或直肠)、非口服(例如皮下、静脉内、大剂量注射、肌内或动脉内)或经皮吸收的单一单位剂型。剂型的实例包括，但不限于：片剂、胶囊形片剂；胶囊，例如软弹性明胶胶囊；扁囊剂(cachets)；锭剂(troches)；含片(lozenges)；分散剂；栓剂；软膏剂；糊剂(泥敷剂)；泥膏剂；散剂；敷料剂；霜剂；硬膏剂；溶液；贴剂；气溶胶(例如鼻喷雾剂或吸入剂)；凝胶剂；适用于病患口服或黏膜施予的液体剂型，包括悬浮液(例如水性或非水性的液体悬浮液、水包油乳液或油包水乳液)、溶液和酏剂；适用于病患非口服投药的液体剂型；以及可进行还原以提供适用于对病患非口服投药的液体剂型的无菌固体(例如，晶型或非晶型固体)。

制剂应配合投药方式。举例来说，口服投药需要肠溶衣以避免本发明化合物在胃肠道内降解。同样地，制剂可含有可促进活性成分递送至作用部位的成分。举例来说，可以微脂体制剂形式施予化合物，以避免其受降解酶降解、促进在循环系统内的运输，以及有效穿越细胞膜到达胞内部位的递送。

同样地，可在增溶剂、乳化剂和表面活性剂的帮助下将溶解性差的化合物掺入液体剂型(及适用于还原的剂型)中，所述增溶剂、乳化剂和表面活性剂例如，但不限于，环糊精(例如α–环糊精或β–环糊精)，以及非水性的溶剂，例如，但不限于，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3–丁二醇、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜(DMSO)、生物兼容性油(例如棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇、山梨聚糖的脂肪酸酯及其混合物(例如DMSO：玉米油)、脂肪例如蛋黄卵磷脂(egg york phosphatidylcoline，EPC)、大豆卵磷脂(soybean phosphatidylcholine，SPC)、1,2–油酰基–sn–甘油基–3–磷酸胆碱(DOPC)、1,2–二硬脂酰基–sn–甘油基–3–磷酸胆碱(DSPC)、胆固醇(CHO)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)及PEG–2000。依据一较佳的实施方式，该式(I)化合物(即BO–2590)是掺入脂肪以形成适用于口服或非口服投药的微脂体。

剂型的组成、形状和类型将随着其使用的不同而变化。举例来说，在疾病的急性治疗中使用的剂型可以包括相较于在相同疾病的慢性治疗中使用的剂型更大量的一或多种其所包含的活性成分。同样地，非口服剂型可以包含相较于用于治疗相同疾病的口服剂型更少量的一或多种其所包含的活性成分。本发明所涵盖的特定剂型彼此不同的这类以及其他方式，对本领域专业人员来说会是显而易见的。参照例如Remington’s PharmaceuticalSciences,18th ed.,Mack Publishing,Easton PA(1990)。

4.1口服剂型

适用于口服投药的本发明药学组合物可以作为离散剂型提供，例如，但不限于，片剂(例如可咀嚼片剂)、锭剂、胶囊及液体(例如调味糖浆)。这类剂型包含预定量的活性成分，且可通过本领域专业人员熟知的制药方法来制备。参照例如Remington’sPharmaceutical Sciences,18th ed.,Mack Publishing,Easton PA(1990)。

可依据常规药物合成技术将活性成分与至少一种赋形剂配成密切的掺和物来制备典型的口服剂型。取决于投药所需的制剂形式，赋形剂可以采取广泛的各种形式。

由于可易于投药的缘故，片剂及胶囊成为最具优势的口服单位剂型的代表。若有需要，可通过常规的水性或非水性技术将片剂包衣。可通过常规制药方法来制备这类剂型。整体来说，通过将活性成分与液体载体、细分散的固体载体或两者均匀充分混合，然后若有需要，将产品成形为期望的外观，来制备药学组合物及剂型。可在固体剂型中掺入溶解剂以便于迅速溶出。也可掺入润滑剂以便于剂型(例如片剂)的制造。

4.2非口服剂型

可通过各种不同的途径对病患施予非口服剂型，这些途径包括，但不限于，皮下、静脉内(包括大剂量注射)、肌肉内及动脉内。因为其投药方式基本上绕过病患对抗污染物的天然防御机制，因此非口服剂型是要确实无菌或能够在对病患投药前可灭菌。非口服剂型的实例包括，但不限于，随时用于注射的溶液、随时可溶解或悬浮在注射用的药学上可接受的载体中的干性产品、随时用于注射的悬浮液，以及乳剂。

可用于本发明非口服剂型的适合载体，对于本领域专业人员来说是熟知的。实例包括，但不限于，水；水性载体例如，但不限于，氯化钠溶液、林格氏液及葡萄糖；与水混溶的载体例如，但不限于，乙醇、聚乙二醇及聚丙二醇；以及非水性载体例如，但不限于，脂肪、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯及苯甲酸苄酯。

4.3经皮、局部及黏膜剂型

经皮、局部及黏膜剂型包括，但不限于，眼用溶液、喷剂、气溶胶、霜剂、洗剂、软膏剂、凝胶剂、溶液、乳剂、悬浮液或本领域专业人员熟知的其他形式。参照例如Remington’sPharmaceutical Sciences,18th eds.,Mack Publishing,Easton PA(1990)。经皮剂型包括「储库型」(reservoir type)或「基质型」(matrix type)贴剂，其可施用于皮肤并使用一段特定时间，使期望的活性成分的量来穿透。

可用于经皮、局部及黏膜剂型的适合赋形剂(例如载体及稀释剂)及其他材料对制药领域的专业人员来说是熟知的，且其取决于给定的药学组合物或剂型所施用的特定组织。

取决于待治疗的特定组织，在使用本发明活性成分进行治疗之前、同时或之后，可使用附加的组分。举例来说，可使用渗透增强剂来辅助递送活性成分至组织。

亦可调整药学组合物或剂型、或药学组合物或剂型所施用的组织的pH，来改进一或多种活性成分的递送。同样地，可调整溶剂载体的极性、其离子强度或张力，来改进递送。也可以添加化合物(例如硬脂酸酯)至药学组合物或剂型，以便于改变一或多种活性成分的亲水性或亲脂性，从而改进递送。就此部分来说，硬脂酸酯可用作制剂的脂肪载体，作为乳化剂或表面活性剂，并用作递送增强剂或渗透增强剂。可使用不同的活性成分的盐、水合物或溶剂合物，来进一步调整所得组合物的性质。

5.试剂盒

本发明也涵盖用于治疗或预防一个体的癌症的试剂盒。

依据本发明，该试剂盒至少包括一含有本发明式(I)化合物的第一容器，一含有上述的化疗药剂的第二容器；以及与试剂盒相关的说明书，指导使用者如何使用该试剂盒。该说明书可为小册子、录音带、CD、VCD或DVD的形式。容器的实例包括，但不限于，小瓶、试管等。

本发明将参照下列实施方式更具体地说明，其是作为示范性的目的而非限制性的目的。虽然这些实施方式是典型常用的，也可用其他步骤、方法学或本领域专业人员熟知的技术来做。

实施例

材料与方法

细胞培养

本研究所使用的每种细胞类型均在37℃下、5％的CO₂加湿培养箱中，培养在制造商建议的，补充10％的加热灭活的胎牛血清、每毫升100单位的青霉素及每毫升100微克的链霉素的培养液中。

实验动物

实验动物照护已获得批准，并遵循实验动物照护及使用委员会的规定来办理。

自国家实验研究院国家实验动物中心获得带有nu/nu基因的无胸腺裸鼠。使用雄性裸鼠(大于6周或体重为20–24克或更多)来进行人类肿瘤异体移植。经尾部静脉进行静脉内施予测试化合物。通过测径器来测量长×宽×高(或宽)以检测肿瘤体积。测试化合物所使用的载体是生理盐水(0.9％的NaCl等溶液)。在试验期间带有肿瘤的裸鼠％体重变化按下式计算：(读取日当天的总重量/治疗起始日的总重量)×100。

实施例1化学合成1,2–双(羟甲基)吡咯并[2,1–a]–酞嗪衍生物(式(I–A))(流程1)

依据流程1所述步骤来合成式(I–A)化合物。以三氯氧磷处理市售的1–酞嗪酮19以制备化合物20，其进一步以各种不同的ω–N,N–二烷基烷基胺、环胺、苯胺、1–甲基哌嗪、1–乙基哌嗪、1–甲基–4,4’–联哌啶或1–乙基–4,4’–联哌啶(在乙醇中)处理来制备化合物21。化合物21可接着与三甲基氰硅烷(trimethyl silylcyanide，TMSCN)及烷基或芳基氯(在二氯甲烷中)反应以产生化合物22，其以四氟硼酸(tetrafluoro boric acid，HBF₄)(在乙醚中)，后续以丁炔二酸二甲酯(dimethyl acetylenedicarboxylate，DMAD)处理来转换成氢氟硼酸盐，以制备二酯衍生物23。在冰浴下，通过与LiAlH₄反应(在乙醚/CH₂Cl₂的混合物中)来将衍生物23的二酯官能基还原成对应的双(羟甲基)衍生物24。同样地，通过与各种不同的异氰酸盐反应来将该双(羟甲基)衍生物24转换成其对应的双(烷基氨基甲酸酯)同类物(congener)以制备化合物25(其中R¹是–CH₂OCONHR，R是烷基或芳基)，或是以酸酐处理(在吡啶中)以制备化合物25(其中R¹是–CH₂OCOR)，或是通过与甲苯–或甲基磺酰氯/Et₃N反应以制备化合物25(其中R¹是–CH₂OSO₂R，R是Me或4–MePh)，以及其他良好离去基(leaving group)。

流程1

试剂与条件：a)POCl₃，回流；b)R³NH₂，乙醇，回流；c)TMSCN，AlCl₃，R²COCl，DCM；d)HBF₄，AcOH；e)DMAD，DMF，回流；f)LiAlH₄，THF；g)RNCO，THF

例示性可获得的式(I–A)化合物包括下列化合物：

1.1(3–甲基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)–二甲醇(BO–2571)及(3–甲基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]–酞嗪–1,2–二基)双(亚甲基)双(乙基氨基甲酸酯)(BO–2573)

(1)1–氯酞嗪

在100℃下，加热并搅拌市售的酞嗪–1(2H)–酮(5.0克，34.0毫摩尔)及三氯氧磷(POCl₃)(25毫升)的混合物2小时。在冷却至室温后，在减压下，将过量的POCl₃完全蒸馏出。将残留物以甲苯(2×25毫升)研磨后继续以THF(100毫升)研磨，以及通过过滤收集并用THF清洗该固体产物。接着以DCM溶解、以饱和的水性NaHCO₃溶液清洗、以硫酸钠干燥并减压蒸发该产物，以制备1–氯酞嗪。产率4.6克(82％)；熔点119–121℃(文献报导值：熔点132–134℃)。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ8.20(2H，t，J＝7.2Hz，ArH)，8.33(2H，t，J＝7.6Hz，ArH)，9.73(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ126.1，128.4，128.7，155.3。HRMS[ESI⁺]：计算为C₈H₅ClN₂，165.0220[M+H]⁺，实测值165.0212。

(2)4–(酞嗪–1–基)吗啉

对含有三乙胺(6.96毫升，50.0毫摩尔)的1–氯酞嗪(3.64克，20.0毫摩尔)溶液(在乙醇(120毫升)中)滴入吗啉(1.89毫升，22.0毫摩尔)。回流加热反应混合物18小时，并在减压下移除溶剂至干燥。将反应冷却至室温并将溶剂蒸发。以水稀释，然后用DCM萃取二次所得粗产物。以硫酸钠干燥并以真空蒸发分离的有机层，以制备4–(酞嗪–1–基)吗啉。棕色固体；产率3.8克(80％)；熔点125–127℃(文献报导值：熔点82℃)。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ3.40(4H，t，J＝4.8Hz，2×CH₂)，3.88(4H，t，J＝4.4Hz，2×CH₂)，7.94–7.97(2H，m，ArH)，8.09–8.14(2H，m，ArH)，9.31(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ51.4，51.7，66.5，120.7，124.4，124.5，127.5，128.5，132.4，132.5，148.4，159.7。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₂H₁₃N₃O，216.1137[M+H]⁺，实测值216.1094。

(3)2–乙酰基–4–吗啉基–1,2–二氢酞嗪–1–甲腈

对含有AlCl₃催化量的4–(酞嗪–1–基)吗啉(2.0克，9.3毫摩尔)溶液(在DCM(30毫升)中)滴入Me₃SiCN(2.32毫升，18.6毫摩尔)。在室温下，接着将乙酰氯(1.0毫升，14.0毫摩尔)滴入至上述的混合物中并搅拌4小时。将反应混合物倒入至冰–水中并将有机层依序以水、5％的NaOH溶液及水清洗。以硫酸钠干燥并以真空浓缩该溶液，以制备2–乙酰基–4–吗啉基–1,2–二氢酞嗪–1–甲腈。产率2.36克(89％)；熔点140–142℃。

¹H NMR(CDCl₃)δ2.32(3H，s，CH₃)，3.13–3.18(2H，m，CH₂)，3.44–3.49(2H，m，CH₂)，3.81–3.86(2H，m，CH₂)，3.94–3.99(2H，m，CH₂)，6.70(1H，s，CH)，7.43(1H，d，J＝7.6Hz，ArH)，7.51–7.59(3H，m，ArH)。

¹³C NMR(CDCl₃)δ16.9，49.8，55.8，66.7，116.4，121.5，124.0，123.7，129.2，130.3，132.8,155.5，169.6。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₅H₁₆N₄O₂，285.1352[M+H]⁺，实测值285.1341。

(4)二甲基–3–甲基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二羧酸

对2–乙酰基–4–吗啉基–1,2–二氢酞嗪–1–甲腈(2.0克，7.0毫摩尔)溶液(在温的乙酸(50毫升)中)滴入HBF₄(1.55毫升)。在50–60℃下，搅拌混合物30分钟。在冷却至室温后，通过过滤收集黄色固体盐类并以干醚(dryether)清洗滤饼。以DMF(20毫升)溶解固体盐类并将DMAD(1.6毫升，13毫摩尔)缓慢加入至该溶液中。在90–100℃下，加热反应混合物16小时。以真空蒸发来移除溶剂。以MeOH结晶残留物，以制备二甲基–3–甲基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二羧酸。产率1.5克(56％)；熔点182–183℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ2.64(3H，s，CH₃)，3.30–3.31(4H，m，2×CH₂)，3.80(3H，s，COOCH₃)，3.87(3H，s，COOCH₃)，3.87–3.88(4H，m，2×CH₂)，7.64(1H，t，J＝8.0Hz，ArH)，7.81(1H，t，J＝7.5Hz，ArH)，8.06(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，8.25(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ13.9，52.4，52.7，55.6，66.2，106.7，115.8，117.7，121.0，124.6，126.7，128.9，130.3，133.0，156.2，159.7，165.6，165.9；HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₀H₂₁N₃O₅，406.1379[M+Na]⁺，实测值406.1385。

(5)二甲基–3–甲基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二羧酸

对二甲基–3–甲基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二羧酸(2.0克，7.0毫摩尔)溶液(在温的乙酸(50毫升)中)滴入HBF₄(1.55毫升)。在50–60℃下，搅拌混合物30分钟。在冷却至室温后，通过过滤收集黄色固体盐类并以干醚清洗滤饼。以DMF(20毫升)溶解固体盐类并将DMAD(1.6毫升，13毫摩尔)缓慢加入至该溶液中。在90–100℃下，加热反应混合物16小时。以真空蒸发来移除溶剂。以MeOH结晶残留物，以制备二甲基–3–甲基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二羧酸。产率1.5克(56％)；熔点182–183℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ2.64(3H，s，CH₃)，3.30–3.31(4H，m，2×CH₂)，3.80(3H，s，COOCH₃)，3.87(3H，s，COOCH₃)，3.87–3.88(4H，m，2×CH₂)，7.64(1H，t，J＝8.0Hz，ArH)，7.81(1H，t，J＝7.5Hz，ArH)，8.06(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，8.25(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ13.9，52.4，52.7，55.6，66.2，106.7，115.8，117.7，121.0，124.6，126.7，128.9，130.3，133.0，156.2，159.7，165.6，165.9；HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₀H₂₁N₃O₅，406.1379[M+Na]⁺，实测值406.1385。

(6)(3–甲基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇(BO–2571)

在0–5℃下，将二甲基–3–甲基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二羧酸(1.5克，3.9毫摩尔)溶液(在DCM(50毫升)中)滴入至搅拌的LAH(0.37克，9.7毫摩尔)悬浮液(在乙醚(20毫升)中)中。在2小时反应完成后，加入水(2毫升)和NH₄OH(2毫升)以分解过量的LAH。以硅钙石垫片过滤并以DCM充分清洗反应混合物。以真空蒸发合并的滤液和洗涤液至干燥。以乙醇再结晶残留物，以制备(3–甲基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇(BO–2571)。产率1.0克，(80％)，熔点184–186℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ2.46(3H，s，CH₃)，3.23(4H，s，2×CH₂)，3.87(4H，s，2×CH₂)，4.58(3H，s，1×OCH₂ and 1×OH)，4.78–4.83(3H，m，1×OCH₂ and 1×OH)，7.45(1H，t，J＝7.5Hz，ArH)，7.73(1H，t，J＝7.5Hz，ArH)，7.97(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，8.29(1H，d，J＝7.5Hz，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ9.3，51.9，53.8，54.4，66.5，114.4，115.7，118.3，121.6，123.2，123.6，125.3，126.0，130.2，132.3，154.1。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₈H₂₁N₃O₃，310.1556[M+H–H₂O]⁺，实测值310.1569。

(7)(3–甲基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)双(亚甲基)双(乙基氨基甲酸酯)(BO–2573)

在室温、氩气下，搅拌3–甲基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)–二甲醇(0.15克，0.5毫摩尔)、TEA(0.25毫升，2.0毫摩尔)及异氰酸乙酯(0.15毫升，2.0毫摩尔)的混合物(在无水DMF(dry DMF)中)24–48小时。在反应完成后，以真空蒸发反应混合物至干燥。以乙醚研磨残留物并通过过滤收集期望的产物，以制备(3–甲基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)双(亚甲基)双(乙基氨基甲酸酯)(BO–2573)。产率0.16克(75％)；熔点171–173℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ0.97(6H，t，J＝6.5Hz，2×CH₃)，2.46(3H，s，CH₃)，2.97–2.98(4H，m，2×CH₂)，3.22(4H，s，2×CH₂)，3.85(4H，s，2×CH₂)，5.17(2H，s，OCH₂)，5.38(2H，s，OCH₂)，7.01(2H，brs，2×NH)，7.49(1H，t，J＝7.5Hz，ArH)，7.76(1H，t，J＝7.0Hz，ArH)，7.99(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，8.10(1H，d，J＝7.0Hz，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ9.35，15.5，35.4，51.9，56.5，57.3，66.4，109.5，116.1，117.6，119.2，122.9，125.2，126.2，129.6，132.7，154.6，156.5，156.6。HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₄H₃₁N₅O₅，294.1606[M+H–2(OCONHC₂H₅)]⁺，实测值294.1602。

1.2(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2二基)二甲醇(BO–2686)及(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)双(亚甲基)双(乙基氨基甲酸酯)(BO–2716)

(1)1–(吡咯啶–1–基)酞嗪

将吡咯啶(20.0毫升，240.0毫摩尔)缓慢加入至一含有TEA(30.0毫升，200.0毫摩尔)的1–氯酞嗪(10.0克，60.0毫摩尔)溶液(在乙醇(200毫升)中)中。在室温下，搅拌反应混合物48小时。在反应完成后，蒸发溶剂，以水稀释、接着以DCM萃取(2×200毫升)残留物。以硫酸钠干燥然后用真空蒸发有机层，以制备期望的1–(吡咯啶–1–基)酞嗪产物。产率10.0克(83％)；熔点90–91℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ¹H NMR(DMSO–d₆)δ1.95–1.98(4H，m，2×CH₂)，3.82(4H，t，J＝6.5Hz，2×CH₂)，7.80–7.88(2H，m，ArH)，7.94–7.95(1H，m，ArH)，8.28(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，8.97(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ25.8，51.1，119.2，125.2，126.5，128.7，130.9，131.6，144.1，155.7。HRMS[ESI+]：计算为C₁₂H₁₃N₃，200.1188[M+H]⁺，实测值200.1209。

(2)2–乙酰基–4–(吡咯啶–1–基)–1,2–二氢酞嗪–1–甲腈

对含有AlCl₃催化量的1–(吡咯啶–1–基)酞嗪(5.0克，25.0毫摩尔)溶液(在DCM(30毫升)中)滴入Me₃SiCN(6.3毫升，50.0毫摩尔)。在室温下，接着将乙酰氯(2.7毫升，37.5毫摩尔)滴入至上述的混合物中并搅拌4小时。将反应混合物倒入至冰–水中并将有机层依序以水、5％的NaOH溶液及水清洗。用硫酸钠干燥然后用真空浓缩该溶液，以制备2–乙酰基–4–(吡咯啶–1–基)–1,2–二氢酞嗪–1–甲腈。产率5.7克(85％)；熔点123–125℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ1.83(2H，t，J＝6.8Hz，CH₂)2.00(2H，s，CH₂)，2.21(3H，s，CH₃)，3.28–3.34(2H，m，CH₂)，3.70–3.75(2H，m，CH₂)，7.06(1H，s，CH)，7.59–7.66(2H，m，ArH)，7.81(2H，d，J＝7.4Hz，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ20.8，25.3,49.8，116.9，122.7，126.7，127.3，129.7，130.4，132.3，153.5，170.8。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₅H₁₆N₄O，269.1402[M+H]⁺，实测值269.1416。

(3)二甲基–3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二羧酸

对2–乙酰基–4–(吡咯啶–1–基)–1,2–二氢酞嗪–1–甲腈(5.0克，18.6毫摩尔)溶液(在温的乙酸(50毫升)中)滴入HBF₄(3.6毫升)。在50–60℃下，搅拌混合物30分钟。在冷却至室温后，通过过滤收集黄色固体盐类然后用干醚清洗滤饼。用DMF(20毫升)溶解固体盐类并将DMAD(4.5毫升，37.0毫摩尔)缓慢加入至该溶液中。在90–100℃下，加热反应混合物16小时。以真空蒸发来移除溶剂。用MeOH结晶残留物，以制备二甲基–3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a]–酞嗪–1,2–二羧酸。产率2.5克(48％)；熔点176–178℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)1.92(4H，s，2×CH₂)，2.57(3H，s，CH₃)，3.65(4H，s，2×CH₂)，3.78(3H，s，COOCH₃)，3.86(3H，s，COOCH₃)，7.55(1H，t，J＝7.7Hz，ArH)，7.73(1H，t，J＝7.7Hz，ArH)，8.14(1H，d，J＝8.2Hz，ArH)，8.20(1H d，J＝8.1Hz，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ10.5，25.7，51.3，51.9，52.7，106.7，111.7，117.8，120.1，123.0，127.4，127.7，128.1，129.4，132.4，153.7，165.0，167.3。HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₀H₂₁N₃O₄，368.1610[M+H]⁺，实测值368.1581。

(4)(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2二基)二甲醇(BO–2686)

在0–5℃下，将二甲基–3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a]–酞嗪–1,2–二羧酸(2.2克，6.23毫摩尔)溶液(在DCM(50毫升)中)滴入至一搅拌的LAH(0.6克，15.5毫摩尔)悬浮液(在乙醚(50毫升)中)中。在2小时反应完成后，加入水(2毫升)和NH₄OH(2毫升)以分解过量的LAH。以硅钙石垫片过滤然后用DCM充分清洗反应混合物。以真空蒸发合并的滤液和洗涤液至干燥。用乙醇再结晶残留物，以制备(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇(BO–2686)。产率1.6克(83％)，熔点160–162℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ1.94(4H t，J＝6.5Hz，2×CH₂)，2.42(3H，s，CH₃)，3.58(4H，t，J＝6.4Hz，2×CH₂)，4.51–4.56(3H，m，1×OH and 1×OCH₂)，4.72(1H，t，J＝5.2Hz，OH)，4.80(2H，d，J＝5.1Hz，OCH₂)，7.38–7.41(1H，m，ArH)，7.68–7.71(1H，m，ArH)，8.05(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，8.26(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ9.3，25.3，51.3，53.8，54.5，113.8，116.6，117.9，120.8，122.4，123.3，124.7，126.7，130.3，131.8，152.5。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₈H₂₁N₃O₂ 294.1606[M+H–H₂O]⁺，实测值294.1627。

(5)(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)–双(亚甲基)双(乙基氨基甲酸酯)(BO–2716)

在室温、氩气下，搅拌(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)–二甲醇(0.15克，0.5毫摩尔)(0.16克，0.5毫摩尔)、异氰酸乙酯(0.2毫升，2.0毫摩尔)及TEA(0.3毫升，2.0毫摩尔)的混合物(在无水DMF中)24–48小时。在反应完成后，以真空蒸发反应混合物至干燥。用乙醚研磨残留物并通过过滤收集欲求的产物，以制备(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)双(亚甲基)双(乙基氨基甲酸酯)(BO–2716)。产率0.13克，(70％)；熔点140–142℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ0.96–0.99(6H，m，2×CH₃)，1.93(4H，t，J＝6.5Hz，2×CH₂)，2.43(3H，s，CH₃)，2.96–3.00(4H，m，2×CH₂)，3.60(4H，s，2×CH₂)，5.15(2H，s，OCH₂)，5.36(2H，s，OCH₂)，6.98–7.03(2H，m，2×NH)，7.46(1H，t，J＝7.3Hz，ArH)，7.72(1H，t，J＝7.3Hz，ArH)，8.06(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，8.10(1H，d，J＝8.2Hz，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ9.3，15.5，25.4，35.5，51.3，56.6，57.5，108.8，116.8，117.0，118.8，122.6，125.6，127.1，129.7，132.2，152.9，156.6，156.7。HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₄H₃₁N₅O₄，278.1657[M+H–2(OCONHC₂H₅)]⁺，实测值278.1660。

1.3(6–([1,4’–联哌啶]–1’–基)–3–甲基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇(BO–2590)

(1)1–([1,4’–联哌啶]–1’–基)酞嗪

将1,4’–联哌啶(20.0克，120.0毫摩尔)缓慢加入至一含有TEA(34毫升，240.0毫摩尔)的1–氯酞嗪(10.0克，60.0毫摩尔)溶液(在乙醇(200毫升)中)中。在室温下，搅拌反应混合物48小时。在反应完成后，蒸发溶剂，用水稀释、接着用DCM萃取(2×200毫升)残留物。用硫酸钠干燥并以真空蒸发有机层，以制备期望的1–([1,4’–联哌啶]–1’–基)酞嗪产物。产率10.2克(57％)；熔点140–142℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ1.37–1.42(2H，m，CH₂)，1.48–1.53(4H，m，CH₂)，1.75–1.81(2H，m，CH₂)，1.88–1.91(2H，m，CH₂)，2.43(1H，s，CH)，2.57(4H，s，2×CH₂)，2.94–3.00(2H，m，CH₂)，3.87–3.90(2H，m，CH₂)，7.92–7.94(2H，m，ArH)，8.04–8.06(2H，m，ArH)，9.25(1H，s，ArH)。HRMS[ESI+]：计算为C₁₈H₂₄N₄，297.2079[M+H]⁺，实测值297.2092。

(2)4–([1,4’–联哌啶]–1’–基)–2–乙酰基–1,2–二氢酞嗪–1–甲腈

对含有AlCl₃催化量的1–([1,4’–联哌啶]–1’–基)酞嗪(2.0克，6.7毫摩尔)溶液(在DCM(30毫升)中)滴入Me₃SiCN(1.69毫升，13.5毫摩尔)。在室温下，接着将乙酰氯(0.88毫升，10.0毫摩尔)滴入至上述的混合物中并搅拌4小时。将反应混合物倒入至冰–水中并将有机层依序以水、5％的NaOH溶液及水清洗。用硫酸钠干燥并以真空浓缩该溶液，以制备4–([1,4’–联哌啶]–1’–基)–2–乙酰基–1,2–二氢酞嗪–1–甲腈。产率1.45克，(60％)；熔点160–162℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ1.42–1.45(1H，m，CH₂)，1.70–1.82(6H，m，3×CH₂)，2.10–2.26(6H，m，3×CH₂)，2.65(3H，s，CH₃)，2.66–2.73(1H，m，CH)，2.95–3.00(3H，m，CH₂)，3.76(1H，d，J＝7.0Hz，CH₂)，3.88(1H，d，J＝4.5Hz，CH₂)，7.00(1H，s，CH)，7.61–7.69(3H，m，ArH)，7.82(1H，d，J＝7.2Hz，ArH)。HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₁H₂₇N₅O，366.2294[M+H]⁺，实测值366.2308。

(3)二甲基–6–([1,4’–联哌啶]–1’–基)–3–甲基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二羧酸

对4–([1,4’–联哌啶]–1’–基)–2–乙酰基–1,2–二氢酞嗪–1–甲腈(1.3克，3.5毫摩尔)溶液(在温的乙酸(50毫升)中)滴入HBF₄(0.7毫升)。在50–60℃下，搅拌混合物30分钟。在冷却至室温后，通过过滤收集黄色固体盐类然后用干醚清洗滤饼。用DMF(20毫升)溶解固体盐类并将DMAD(0.8毫升，6.5毫摩尔)缓慢加入至该溶液中。在90–100℃下，加热反应混合物16小时。以真空蒸发来移除溶剂。用MeOH结晶残留物，以制备二甲基–6–([1,4’–联哌啶]–1’–基)–3–甲基吡咯并[2,1–a]–酞嗪–1,2–二羧酸。产率1.0克(70％)；熔点189–191℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ1.43–1.46(3H，m，CH₂)，1.68–1.72(2H，m，CH₂)，1.88(2H，s，CH₂)，2.02–2.04(2H，m，CH₂)，2.14–2.16(2H，m，CH₂)，2.65(3H，s，CH₃)，3.01(4H，m，2×CH₂)，3.17(1H，s，CH)，3.49–3.51(3H，m，CH₂)，3.81(3H，s，COOCH₃)，3.86–3.88(2H，m，CH₂)，3.89(3H，s，COOCH₃)，7.66(1H，t，J＝8.0Hz，ArH)，7.83(1H，t，J＝7.2Hz，ArH)，8.00(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，8.27(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ12.6，24.5，26.2，28.1，50.4，51.5，58.2，58.9，67.5，70.4，111.6，118.1，123.4，127.6，128.5，129.8，132.8，133.5，147.4，165.9，175.7。HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₆H₃₂N₄O₄，465.2502[M+H]⁺，实测值465.2501。

(4)(6–([1,4’–联哌啶]–1’–基)–3–甲基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇(BO–2590)

在0–5℃下，将二甲基–6–([1,4’–联哌啶]–1’–基)–3–甲基吡咯并[2,1–a]–酞嗪–1,2–二羧酸(0.65克，1.31毫摩尔)溶液(在DCM(50毫升)中)滴入至一搅拌的LAH(0.10克，4.5毫摩尔)悬浮液(在乙醚(50毫升)中)中。在2小时反应完成后，加入水(2毫升)及NH4OH(2毫升)以分解过量的LAH。用硅钙石垫片过滤然后用DCM充分清洗反应混合物。用真空蒸发合并的滤液和洗涤液至干燥。用乙醇再结晶残留物，以制备(6–([1,4’–联吡啶]–1’–基)–3–甲基吡咯并–[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇。产率0.42克，(78％)，熔点183–185℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ1.41(2H，s，CH₂)，1.52(4H，s，2×CH₂)，1.76–1.88(4H，m，2×CH₂)，2.43(3H，s，CH₃)，2.50–2.53(4H，m，2×CH₂)，2.83(2H，t，J＝12.0Hz，CH₂)，3.33(1H，m，CH)，3.63(2H，d，J＝15.0Hz，CH₂)，4.55(3H，s，1×OH and 1×OCH₂)，4.74(1H，s，OH)，4.80(2H，s，OCH₂)，7.43(1H，t，J＝7.2Hz，ArH)，7.71(1H，t，J＝7.2Hz，ArH)，7.89(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，8.26(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ13.5，16.5，24.4，25.9，27.2，49.6，50.8，53.0，53.8，61.7，66.8，113.6，115.6，117.5，120.2，123.0，124.7，125.4，128.1，129.6，131.5，153.8。HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₄H₃₂N₄O₂，409.2604[M+H]⁺，实测值409.2638。

1.4(3–乙基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)–二甲醇(BO–2577)

(1)4–(酞嗪–1–基)吗啉

对含有三乙胺(6.96毫升，50.0毫摩尔)的化合物11(3.64克，20.0毫摩尔)溶液(在乙醇(120毫升)中)滴入吗啉(1.89毫升，22.0毫摩尔)。回流加热反应混合物18小时，并在减压下移除溶剂至干燥。将反应冷却至室温并蒸发溶剂。用水稀释，然后用DCM萃取二次所得粗产物。用硫酸钠干燥然后用真空蒸发分离的有机层，以制备4–(酞嗪–1–基)吗啉。棕色固体；产率3.8克(80％)；熔点125–127℃(文献报导值：熔点82℃)。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ3.40(4H，t，J＝4.8Hz，2×CH₂)，3.88(4H，t，J＝4.4Hz，2×CH₂)，7.94–7.97(2H，m，ArH)，8.09–8.14(2H，m，ArH)，9.31(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ51.4，51.7，66.5，120.7，124.4，124.5，127.5，128.5，132.4，132.5，148.4，159.7。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₂H₁₃N₃O，216.1137[M+H]⁺，实测值216.1094。

(2)4–吗啉基–2–丙酰基–1,2–二氢酞嗪–1–甲腈

对含有AlCl₃催化量的4–(酞嗪–1–基)吗啉(2.0克，9.3毫摩尔)溶液(在DCM(30毫升)中)滴入Me3SiCN(2.32毫升，18.6毫摩尔)。在室温下，接着将丙酰氯(1.2毫升，14.0毫摩尔)滴入至上述的混合物中并搅拌4小时。将反应混合物倒入至冰–水中并将有机层依序以水、5％的NaOH溶液及水清洗。用硫酸钠干燥并以真空浓缩该溶液，以制备4–吗啉基–2–丙酰基–1,2–二氢酞嗪–1–甲腈。产率2.46克(89％)；熔点146–148℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ1.05(3H，t，J＝5.6Hz，CH₃)，2.53–2.58(1H，m，CH₂)，2.71–2.75(1H，m，CH₂)，3.03(2H，s，CH₂)，3.35(2H，s，CH₂)，3.70(2H，s，CH₂)，3.87(2H，s，CH₂)，7.04(1H，s，CH)，7.64(3H，s，CH)，7.80(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ49.8，51.8，65.7，116.4，121.5，124.0，123.7，129.2，130.3，132.8,155.5，169.6。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₆H₁₈N₄O₂，299.1508[M+H]⁺，实测值299.1519。

(3)二甲基3–乙基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二羧酸

对4–吗啉基–2–丙酰基–1,2–二氢酞嗪–1–甲腈(2.0克，7.0毫摩尔)溶液(在温的乙酸(50毫升)中)滴入HBF₄(1.30毫升)。在50–60℃下，搅拌混合物30分钟。在冷却至室温后，通过过滤收集黄色固体盐类然后用干醚清洗滤饼。以DMF(20毫升)溶解固体盐类并将DMAD(1.5毫升，12.0毫摩尔)缓慢加入至该溶液中。在90–100℃下，加热反应混合物16小时。以真空蒸发来移除溶剂。用MeOH结晶残留物，以制备二甲基–3–甲基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]–酞嗪–1,2–二羧酸。产率1.6克(60％)；熔点182–183℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ1.21(3H，s，CH₃)，3.15(2H，d，J＝6.0Hz，CH₂)，3.30(4H，s，2×CH₂)，3.80(3H，s，COOCH₃)，3.89(7H，s，2×CH₂ and 1×COOCH₃)，7.63(1H，s，ArH)，7.80(1H，s，ArH)，8.06(1H，d，J＝7.0Hz，ArH)，8.26(1H，d，J＝7.0Hz，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ13.9，23.0，52.4，52.7，55.6，66.2，106.7，115.8，117.7，121.0，124.6，126.7，128.9，130.3，133.0，156.2，159.7，165.6，165.9。HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₁H₂₃N₃O₅，420.1535[M+Na]⁺，实测值420.1552。

(4)(3–乙基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇(BO–2577)

在0–5℃下，将二甲基3–乙基–6–吗啉基吡咯并[2,1–a]–酞嗪–1,2–二羧酸(1.4克，3.5毫摩尔)溶液(在DCM(50毫升)中)滴入至一搅拌的LAH(0.43克，10.5毫摩尔)悬浮液(在乙醚(20毫升)中)中。在2小时反应完成后，加入水(2毫升)和NH4OH(2毫升)以分解过量的LAH。用硅钙石垫片过滤并以DCM充分清洗反应混合物。以真空蒸发合并的滤液及洗涤液至干燥。用乙醇再结晶残留物，以制备(3–乙基–6–吗啉基吡咯并–[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇(BO–2577)。产率1.2克(90％)；熔点180–182℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ1.21(3H，t，J＝7.5Hz，CH3)，2.93–2.98(2H，m，CH2)，3.21(4H，t，J＝4.5Hz，2×CH₂)，3.86(4H，t，J＝4.5Hz，2×CH₂)，4.57(3H，s，1×OCH₂ and 1×OH)，4.76(1H，t，J＝5.5Hz，OH)，4.82(2H，d，J＝5.0Hz，OCH₂)，7.43(1H，t，J＝8.5Hz，ArH)，7.72(1H，t，J＝8.0Hz，ArH)，7.95(1H，d，J＝7.5Hz，ArH)，8.29(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d6)δ13.5，16.5，51.3，53.1，53.8，65.8，113.7，115.2，117.5，120.4，123.0，124.7，125.4，128.3，129.7，131.7，153.4。HRMS[ESI+]：计算为C₁₉H₂₃N₃O₃，364.1637[M+Na]+，实测值364.1638。

实施例2化学合成苯并[g]吡咯并[2,1–α]酞嗪衍生物(式(I–B))(流程2)

以流程2所示步骤来合成式(I–B)。以水合肼(在乙酸中)处理市售的2,3–萘二羧酸酐26以产生化合物27，其与三氯氧磷反应以制备化合物28。以各种不同的ω–N,N–二烷基烷基胺、环胺、苯胺、1–甲基哌嗪、1–乙基哌嗪、1–甲基–4,4’–联哌啶或1–乙基–4,4’–联哌啶及碳酸钾(在乙腈中)处理化合物28来产生化合物29，其在甲醇、H₂下，与10％的Pd/C反应以制备化合物30。化合物30进一步的与三甲基氰硅烷及烷基或芳基氯(在二氯甲烷中)反应以产生化合物31。同样地，如前文所述，以氟硼酸/丁炔二酸二甲酯(DMAD)处理，来将化合物31转换成二酯衍生物32。在冰浴下，通过与LiAlH₄反应(在乙醚/CH₂Cl₂的混合物中)来将衍生物32的二酯官能基还原成对应的双(羟甲基)衍生物33(式I–B)。可接着以各种不同的异氰酸盐处理双(羟甲基)衍生物33来转换成其对应的双(烷基氨基甲酸酯)同类物以制备化合物34(其中R¹是–CH₂OCONHR，R是烷基或芳基)，或是以酸酐处理(在吡啶中)以制备化合物34(其中R¹是–CH₂OCOR)，或是通过与甲苯–或是甲基磺酰氯/Et₃N反应以制备化合物34(其中R¹是–CH₂OSO₂R，R是Me或是4–MePh)，以及其他良好离去基。

流程2

试剂与条件：a)水合肼/乙酸，100℃；b)POCl₃/吡啶，回流；c)R³NH，K₂CO₃，ACN，回流；d)Pd/C，甲醇，回流；e)TMSCN，AlCl₃，R²COCl，MDC，室温；f)HBF₄，AcOH；g)DMAD，DMF，100℃；h)LiAlH₄，乙醚/MDC，0-30℃；i)RNCO，TEA，THF，回流

例示性可获得的式(I–B)化合物包括下列化合物：

2.1(6–(二甲基胺基)–3–甲基苯并[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇(BO–2768)及(6–(二甲基胺基)–3–甲基苯并[g]–prolog[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)–双(亚甲基)双(乙基氨基甲酸酯)(BO–2772)

(1)2,3–二氢苯并[g]酞嗪–1,4–二酮

将水合肼(80％的溶液，63毫升)加入至一搅拌的萘–2,3–二羧酸酐(39.7克，200.0毫摩尔)悬浮液(在冰醋酸(600毫升)中)中。回流加热并搅拌混合物6小时。在冷却之后，以过滤收集、用水清洗并干燥该固体产物，以制备2,3–二氢苯并[g]酞嗪–1,4–二酮。产率：40.2克(94％)；熔点344–346(文献报导值：熔点344℃)。

¹H NMR(DMSO–d₆)：δ7.75–7.78(2H，m，ArH)，8.29–8.31(2H，m，ArH)，8.76(2H，s，ArH)，11.52(2H，s，2×NH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)：δ123.8，126.2，128.5，129.1，134.1。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₂H₈N₂O₂，213.0664[M+H]⁺，实测值213.0681。

(2)1,4–二氯苯并[g]酞嗪

在100℃下，加热一含有吡啶(24.0毫升)的2,3–二氢苯并[g]酞嗪–1,4–二酮(40.0克，188.0毫摩尔)悬浮液(在三氯氧磷(400毫升)中)5小时。使反应混合物冷却至40℃，接着在减压下浓缩至干燥。以乙醚研磨、过滤，并以乙醚清洗固体残留物。研磨该固体产物并以冰–水搅拌30分钟，以及以过滤收集、以水清洗并干燥该固体产物，以制备1,4–二氯苯并[g]酞嗪。产率40.8克(85％)；熔点217–219℃(文献报导值：熔点217–220℃)。

¹H NMR(DMSO–d₆)：δ7.91–7.93(2H，m，ArH)，8.50–8.52(2H，m，ArH)，9.09(2H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ124.3，124.6，126.2，126.9，128.0，130.1，137.4，155.5。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₂H₆Cl₂N₂，248.9986[M+H]⁺，实测值249.0000。

(3)4–氯–N,N–二甲基苯并[g]酞嗪–1–胺

在室温下，将二甲胺(30毫升，60.0毫摩尔)缓慢加入至一搅拌的1,4–二氯苯并[g]酞嗪(10克，40.0毫摩尔)及无水碳酸钾(55克，400.0毫摩尔)的悬浮液(在无水乙腈(400毫升)中)中。在室温下，搅拌反应混合物72小时，接着过滤来移除碳酸钾。减压蒸发该滤液，并以乙醚再结晶固体残留物，以制备4–氯–N,N–二甲基苯并[g]酞嗪–1–胺。产率9.3克(90％)；熔点90–92℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ3.25(6H，s，2×NCH₃)，7.79–7.83(2H，m，ArH)，8.37–8.40(2H，m，ArH)，8.84(1H，s，ArH)，8.93(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ42.5，118.9，123.2，125.0，126.6，128.6，128.9，129.0，129.3，133.9，134.0，147.8，159.8。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₄H₁₂ClN₃，258.0798[M+H]⁺，实测值258.0791。

(4)N,N–二甲基苯并[g]酞嗪–1–胺

对4–氯–N,N–二甲基苯并[g]酞嗪–1–胺(5.15克，20.0毫摩尔)溶液(在MeOH(200毫升)中)加入10％的Pd/C(1.03克)。在室温下，将以35psi进行氢化4小时，接着以硅钙石垫片过滤反应混合物。以MeOH充分清洗滤饼。在减压下，浓缩合并的滤液及洗涤液，以及以DCM(200毫升)溶解、以饱和的水性NaHCO₃溶液清洗、以无水硫酸钠干燥、以真空蒸发该残留物至干燥。以层析法(SiO₂，溶析梯度为0–40％之乙酸乙酯(在己烷中))纯化该产物，以制备N,N–二甲基苯并[g]酞嗪–1–胺。产率2.8克(64％)；熔点115–117℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ3.23(6H，s，2×NCH₃)，7.72–7.76(2H，m，ArH)，8.24(1H，dd，J＝6.8and 2.2Hz，ArH)，8.35(1H，dd，J＝6.8and 2.2Hz，ArH)，8.69(1H，s，ArH)，8.85(1H，s，ArH)，9.26(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ42.4，117.4，125.1，125.2，126.3，127.7，128.2，128.4，129.4，133.7，133.8，146.8，159.0。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₄H₁₃N₃，224.1188[M+H]⁺，实测值224.1198。

(5)2–乙酰基–4–(二甲基氨基)–1,2–二氢苯并[g]酞嗪–1–甲腈

对含有AlCl₃催化量的N,N–二甲基苯并[g]酞嗪–1–胺(2.22克，10.0毫摩尔)溶液(在DCM(30毫升)中)滴入Me₃SiCN(2.5毫升，20.0毫摩尔)。在室温下，接着将乙酰氯(1.1毫升，15.0毫摩尔)滴入至上述的混合物中并搅拌4小时。将反应混合物倒入至冰–水中并将有机层依序以水、5％的NaOH溶液及水清洗。以硫酸钠干燥并以真空浓缩该溶液，以制备2–乙酰基–4–(二甲基胺基)–1,2–二氢苯并[g]酞嗪–1–甲腈。产率2.7克(92％)；熔点125–127℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ2.29(3H，s，COCH₃)，2.99(6H，s，2×NCH₃)，7.23(1H，s，CH)，7.67–7.73(2H，m，ArH)，8.01(1H，d，J＝7.7Hz，ArH)，8.20(1H，d，J＝7.6Hz，ArH)，8.34(1H，s，ArH)，8.35(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ20.6，40.9，116.4，118.2，125.8，126.3，127.3，127.7，127.8，128.8，129.4，132.8，133.7，155.7，170.9。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₇H₁₆N₄O，293.1402[M+H]⁺，实测值293.1407。

(6)二甲基6–(二甲基氨基)–3–甲基苯并[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二羧酸

对2–乙酰基–4–(二甲基氨基)–1,2–二氢苯并[g]酞嗪–1–甲腈(2.95克，10.0毫摩尔)溶液(在温的乙酸(80毫升)中)滴入HBF₄(2.2毫升，12.0毫摩尔)。在50–60℃下，搅拌混合物30分钟。在冷却至室温后，通过过滤收集黄色固体盐类并以干醚清洗滤饼。以DMF(20毫升)溶解固体盐类并将DMAD(3.1毫升，25.0毫摩尔)缓慢加入至该溶液中。在90–100℃下，加热反应混合物16小时。以真空蒸发来移除溶剂。以MeOH再结晶该残留物，以制备二甲基6–(二甲基氨基)–3–甲基苯并[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二羧酸。产率1.7克(43％)；熔点180–182℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ2.66(3H，s，CH₃)，3.08(6H，s，2×NCH₃)，3.81(3H，s，COOCH₃)，3.97(3H，s，COOCH₃)，7.64(1H，t，J＝7.8Hz，ArH)，7.71(1H，t，J＝7.2Hz，ArH)，8.06(1H，d，J＝8.2Hz，ArH)，8.24(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，8.65(1H，s，ArH)，8.73(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ10.2，42.6，51.6，52.5，107.9，111.2，115.6，119.9，121.0，123.9，127.0，127.9，128.0，129.0，129.4，130.9，131.3，134.0，156.8，164.4，166.9。HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₂H₂₁N₃O₄，392.1610[M+H]⁺，实测值392.1590。

(7)(6–(二甲基氨基)–3–甲基苯并[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇(BO–2768)

在0–5℃下，将二甲基6–(二甲基氨基)–3–甲基苯并[g]吡咯并[2,1–a]–酞嗪–1,2–二羧酸(1.6克，4.0毫摩尔)溶液(在DCM(50毫升)中)滴入至一搅拌的LAH(0.39克，10.0毫摩尔)悬浮液(在乙醚(100毫升)中)中。在2小时反应完成后，加入水(2毫升)及NH4OH(2毫升)以分解过量的LAH。以硅钙石垫片过滤并以DCM充分清洗反应混合物。以真空蒸发合并的滤液及洗涤液至干燥。以乙醇再结晶残留物，以制备(6–(二甲基胺基)–3–甲基苯并[g]–吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇(BO–2768)。产率1.1克(80％)；熔点156–158℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ2.46(3H，s，CH₃)，2.99(6H，s，2×NCH₃)，4.56(2H，d，J＝5.1Hz，OCH₂)，4.62(1H，t，J＝5.4Hz，OH)，4.90–4.91(3H，m，OCH₂ and OH)，7.52(1H，t，J＝7.5Hz，ArH)，7.63(1H，t，J＝7.3Hz，ArH)，8.00(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，8.14(1H，d，J＝8.2Hz，ArH)，8.58(1H，s，ArH)，8.66(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ8.9，42.8，53.4，54.2，115.6，115.7，117.5，120.4，120.4，123.6，125.5，126.3，126.6，127.5，128.1，129.3，130.1，134.6，154.7。HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₀H₂₁N₃O₂，318.1606[M+H–H₂O]⁺，实测值318.1620。

(8)(6–(二甲基氨基)–3–甲基苯并[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)–双(亚甲基)双(乙基氨基甲酸酯)(BO–2772)

在室温、氩气下，搅拌(6–(二甲基氨基)–3–甲基苯并[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇(0.2克，0.6毫摩尔)(0.16克，0.5毫摩尔)、异氰酸乙酯(0.2毫升，2.4毫摩尔)及TEA(0.55毫升，4.0毫摩尔)的混合物(在无水DMF中)24–48小时。在反应完成后，以真空蒸发反应混合物至干燥。以乙醚研磨残留物并通过过滤收集期望的产物，以制备(6–(二甲基氨基)–3–甲基苯并[g]prolog–[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)–双(亚甲基)双(乙基氨基甲酸酯)(BO–2772)。产率0.15克(53％)；熔点132–134℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ0.98–1.01(6H，m，2×CH₃)，2.48(3H，s，CH₃)，2.98–3.04(10H，m，2×CH₂及2×NCH₃)，5.18(2H，s，OCH₂)，5.49(2H，s，OCH₂)，7.06(1H，t，J＝5.2Hz，NH)，7.10(1H，t，J＝5.5Hz，NH)，7.56(1H，t，J＝7.9Hz，ArH)，7.66(1H，t，J＝7.4Hz，ArH)，7.97(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，8.17(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，8.51(1H，s，ArH)，8.64(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆).δ8.9，15.1，15.2，35.0，35.1，42.8，56.2，57.0，110.6，115.5，116.2，118.5，120.3，125.5，125.6，126.0，127.0，127.6，128.4，129.3，130.3，134.5，155.3，156.1，156.3。HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₆H₃₁N₅O₄，302.1657[M+H–2(OCONHC₂H₅)]⁺，实测值302.1667。

2.2(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)苯并[g]吡咯并[2,1–a]–酞嗪–1,2–二基)二甲醇(BO–2762)及(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)–苯并[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)–双(亚甲基)双(乙基氨基甲酸酯)(BO–2763)

(1)1–氯–4–(吡咯啶–1–基)苯并[g]酞嗪

将吡咯啶(3.5毫升，42.0毫摩尔)缓慢加入至一搅拌的1,4–二氯苯并[g]酞嗪(7.0克，28.0毫摩尔)及一无水碳酸钾(55克，400.0毫摩尔)的悬浮液(在无水乙腈(400毫升)中)中。在室温下，搅拌反应混合物72小时，接着过滤来移除碳酸钾。减压蒸发该滤液，并以乙醚再结晶固体残留物，以制备1–氯–4–(吡咯啶–1–基)苯并[g]酞嗪。产率6.8克(85％)；熔点112–114℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ2.02(4H，brs，2×CH₂)，3.96(4H，brs，2×CH₂)，7.76–7.79(2H，m，ArH)，8.33–8.38(2H，m，ArH)，8.75(1H，s，ArH)，9.06(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ25.4，51.1，118.7，123.1，124.0，126.8，128.1，128.6，128.9，129.5，133.7，144.6，155.5。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₆H₁₄ClN₃，284.0955[M+H]⁺，实测值284.0948。

(2)1–(吡咯啶–1–基)苯并[g]酞嗪

对1–氯–4–(吡咯啶–1–基)苯并[g]酞嗪(5.1克，18.0毫摩尔)溶液(在MeOH(200毫升)中)加入10％的Pd/C(1.03克)。在室温下，以35psi进行氢化4小时，接着过滤以硅钙石垫片反应混合物。以MeOH充分清洗滤饼。在减压下，浓缩合并的滤液及洗涤液，以及以溶解DCM(200毫升)、以饱和的水性NaHCO₃溶液清洗、以无水硫酸钠干燥、以真空蒸发该残留物至干燥。以层析法(SiO₂，溶析梯度为0–40％的乙酸乙酯(在己烷中))纯化该产物，以制备1–(吡咯啶–1–基)苯并[g]酞嗪。产率3.3克(73％)；熔点150–152℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ2.00–2.03(4H，m，2×CH₂)，3.94–3.97(4H，m，2×CH₂)，7.66–7.73(2H，m，ArH)，8.18(1H，d，J＝8.2Hz，ArH)，8.31(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，8.55(1H，s，ArH)，8.97(1H，s，ArH)，9.04(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ25.5，50.8，117.2，125.3，125.4，127.2，128.0，128.1，129.6，133.5，144.1，154.8。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₆H₁₅N₃，250.1344[M+H]⁺，实测值250.1362。

(3)2–乙酰基–4–(吡咯啶–1–基)–1,2–二氢苯并[g]酞嗪–1–甲腈

对含有AlCl₃催化量的1–(吡咯啶–1–基)苯并[g]酞嗪(3.25克，13.0毫摩尔)溶液(在DCM(50毫升)中)滴入Me₃SiCN(3.26毫升，26.0毫摩尔)。在室温下，接着将乙酰氯(1.4毫升，19.6毫摩尔)滴入至上述的混合物中并搅拌4小时。将反应混合物倒入至冰–水中并将有机层依序以水、5％之NaOH溶液及水清洗。以硫酸钠干燥并以真空浓缩该溶液，以制备2–乙酰基–4–(吡咯啶–1–基)–1,2–二氢苯并[g]酞嗪–1–甲腈(33b)(BO–2760)。产率3.2克(77％)；熔点162–164℃。

¹H NMR(CDCl₃)δ1.92–2.00(2H，m，CH₂)，2.08–2.10(2H，m，CH₂)，2.31(3H，s，COCH₃)，3.44–3.47(2H，m，CH₂)，3.83–3.89(2H，m，CH₂)，6.90(1H，s，CH)，7.58–7.64(2H，m，ArH)，7.85(1H，s，ArH)，7.90(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.93(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，8.17(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(CDCl₃)δ20.7，15.4，41.5，50.1，115.8，120.1，125.7，126.3，127.0，127.7，127.9，128.5，129.0，133.1，133.8，154.1.171.1。HRMS[ESI⁺]：计算为C₁₉H₁₈N₄O，319.1559[M+H]⁺，实测值319.1557。

(4)二甲基3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)苯并[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二羧酸

对2–乙酰基–4–(吡咯啶–1–基)–1,2–二氢苯并[g]酞嗪–1–甲腈(3.2克，10.0毫摩尔)溶液(在温的乙酸(90毫升)中)滴入HBF₄(2.2毫升，12.0毫摩尔)。在50–60℃下，搅拌混合物30分钟。在冷却至室温后，以过滤收集黄色固体盐类并以干醚清洗滤饼。以DMF(20毫升)溶解固体盐类并将DMAD(3.1毫升，25.0毫摩尔)缓慢加入至该溶液中。在90–100℃下，加热反应混合物16小时。以真空蒸发来移除溶剂。以MeOH结晶该残留物，以制备二甲基3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)苯并[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二羧酸。产率2.0克(48％)；熔点190–192℃。

¹H NMR(CDCl₃)δ2.02–2.05(4H，m，2×CH₂)，2.68(3H，s，CH₃)，3.76–3.78(4H，m，2×CH₂)，3.89(3H，s，COOCH₃)，4.04(3H，s，COOCH₃)，7.49(1H，t，J＝7.1Hz，ArH)，7.57(1H，t，J＝6.9Hz，ArH)，7.90(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.92(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，8.52(1H，s，ArH)，8.77(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(CDCl₃)δ10.4，25.6，51.4，51.5，52.4，107.6，111.2，117.1，120.7，121.9，124.8，126.3，127.1，128.1，128.1，128.8，131.2，131.4，134.3，153.8，165.6，168.1。HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₄H₂₃N₃O₄，440.1586[M+Na]⁺，实测值440.1569。

(5)(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)苯并[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇(BO–2762)

在0–5℃下，将二甲基3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)苯并[g]吡咯并[2,1–a]–酞嗪–1,2–二羧酸(1.7克，4.0毫摩尔)溶液(在DCM(50毫升)中)滴入至一搅拌的LAH(0.39克，10.0毫摩尔)悬浮液(在乙醚(100毫升)中)中。在2小时反应完成后，加入水(2毫升)及NH₄OH(2毫升)以分解过量的LAH。以硅钙石垫片过滤并以DCM充分清洗反应混合物。以真空蒸发合并的滤液及洗涤液至干燥。以乙醇再结晶残留物，以制备(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)苯并[g]prolog–[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇(BO–2762)。产率1.1克(82％)；熔点160–162℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ1.98–1.99(4H，m，2×CH₂)，2.43(3H，s，CH₃)，3.68–3.70(4H，m，2×CH₂)，4.52–4.55(3H，m，OCH₂ and OH)，4.82(1H，t，J＝5.0Hz，OH)，4.90(2H，d，J＝5.1Hz，OCH₂)，7.50(1H，t，J＝7.4Hz，ArH)，7.61(1H，t，J＝7.3Hz，ArH)，7.98(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，8.14(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，8.64(1H，s，ArH)，8.67(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ8.9，25.0，50.9，53.4，54.2，115.2，116.4，117.2，119.9，120.0，123.0，125.3，126.4，126.7，127.3，128.1，129.3，129.9，134.3，152.2。HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₂H₂₃N₃O₂，344.1763[M+H–H₂O]⁺，实测值344.1754。

(6)(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)苯并[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)–双(亚甲基)双(乙基氨基甲酸酯)(BO–2763)

在室温、氩气下，搅拌(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)苯并[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)二甲醇(0.36克，1.0毫摩尔)、异氰酸乙酯(0.32毫升，4.0毫摩尔)及TEA(0.55毫升，4.0毫摩尔)的混合物(在无水DMF中)24–48小时。在反应完成后，以真空蒸发反应混合物至干燥。以乙醚研磨残留物并通过过滤收集欲求的产物，以制备(3–甲基–6–(吡咯啶–1–基)苯并–[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪–1,2–二基)–双(亚甲基)双(乙基氨基甲酸酯)(BO–2763)。产率0.28克(56％)；熔点142–144℃。

¹H NMR(DMSO–d₆)δ0.95–1.02(6H，m，2×CH₃)，1.98(4H，brs，2×CH₂)，2.45(3H，s，CH₃)，2.97–3.05(4H，m，2×CH₂)，3.72(4H，brs，2×CH₂)，5.16(2H，s，OCH₂)，5.48(2H，s，OCH₂)，7.02(1H，t，J＝5.7Hz，NH)，7.07(1H，t，J＝5.2Hz，NH)，7.54(1H，t，J＝7.7Hz，ArH)，7.65(1H，t，J＝7.4Hz，ArH)，7.94(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，8.17(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，8.47(1H，s，ArH)，8.72(1H，s，ArH)。

¹³C NMR(DMSO–d₆)δ8.9，15.1，15.2，25.1，35.0，35.1，51.0，56.2，57.1，110.0，115.7，116.3，118.2，119.8，124.8，125.7，127.1，127.3，128.3，129.3，130.1，134.2，152.6，156.1，156.3。HRMS[ESI⁺]：计算为C₂₈H₃₃N₅O₄，328.1814[M+H–2(OCONHC₂H₅)]⁺，实测值328.1816。

实施例3制备以微脂体封装的式(I)化合物

式(I)化合物基本上是疏水性的。为了以高药物浓度递送活性化合物至特定的肿瘤细胞或器官目标，使用一种修改过的脱水–复水方法并以下文所述的步骤重复进行挤压，将该式(I)化合物(特别是BO–2590)封装在微脂体中以制备微脂体药物。

(1)微脂体封装

在CHCl₃中，通过混和大豆卵磷脂(SPC)、1,2–二硬脂酰基–sn–甘油基–3–磷酸胆碱(DSPC)、胆固醇(CHO)及PEG–2000(以50：45：4：1的摩尔比例)来制备以微脂体封装的BO–2590。将混合物置于一圆底烧瓶中，接着将BO–2590加入至反应混合物(每毫升4毫克)中。在减压下，以旋转蒸发来移除有机溶剂。以磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline)(137毫体积摩尔浓度的NaCl、2.7毫体积摩尔浓度的KCl、10毫体积摩尔浓度的Na₂HPO₄及1.8毫体积摩尔浓度的KH₂PO₄)水合化(hydrated)并以手摇动来分散所得的干的脂肪薄膜。将悬浮液冻融数次，后续在60℃下，利用高压挤压装置(high-pressure extrusion equipment)(Lipex Biomembranes,Vancouver,Canada)以孔径为0.8、0.6、0.4、0.2–微米的聚碳酸酯(polycarbonate)膜滤器(Costar,Cambridge,MA)重复进行挤压。在4℃下保存该产物溶液。

(2)HPLC分析

以高压液相层析法(Agilent Technologies)(RP–18管柱、流动相条件为[乙腈/MeOH/H₂O(0.5％的TFA)(45/50/5)，(滞留时间4.6分钟，流速每分钟0.5毫升)]来定量微脂体的BO–2590(BO–2590L)。将微脂体的BO–2590(100微升)加入流动相(100微升)，以涡旋震荡(vortex)完全地混和，并作用10分钟。离心所得的牛奶状样本，并取澄清的上清液来进行HPLC定量分析。在我们的制备物(n>5)中，BO–2590微脂体含有每毫升3.12至2.94毫克(封装率为浓度每毫升4毫克的起始材料的76至70％)。

(3)稳定性分析

在4℃下保存以微脂体封装的BO–2590L三周。通过HPLC分析，其自封装76％至66.3％，约呈现10％之衰变。

实施例4式(I)化合物的体外表征

4.1式(I)化合物具备对癌细胞的细胞毒性

首先评估所有的式(I–A)及(I–B)代表性化合物活体外对人类淋巴性白血病细胞株(CCRF–CEM)及其耐长春碱的衍生细胞株(CCRF–CEM/VBL)的细胞毒性(参照表1)。将具有显著细胞毒性的所选化合物对一系列的实性瘤(solid tumor)细胞株，也就是，大肠癌HCT–116、非小细胞肺癌H460、小细胞肺癌H526及胰脏癌PacaS1(表2)进一步进行评估。

简言之，在37℃下、5％的CO₂加湿环境中，将测试细胞以每毫升3×10³细胞的初始密度培养在一含有青霉素(每毫升100单位)、链霉素(每毫升100微克，GIBCO/BRL)和5％的加热灭活FBS的RPMI培养液1640(GIBCO/BRL)中。再以各种不同浓度的新合成化合物作用72小时之后，利用

(Invitrogen)分析及一微量盘光谱仪来检测其对所有细胞株的细胞毒性影响。简言之，在药物处理终止时，加入一等分试样的

溶液，接着在37℃下使细胞作用1–2小时。以一微量盘读值仪测量570及600奈米的吸光值。借助于Chou及Martin(Pharmacol Rev 2006,58:621-681)所开发的半效应原理(CompuSyn software,version 1.0.1；CompuSyn,Inc.,Paramus,NJ)，将每个化合物的6或7种浓度的剂量–效应关系用于计算IC₅₀值。IC₅₀定义为抑制肿瘤细胞生长达50％的所需浓度。实验数据是取每个化合物的三至六次独立试验所得的平均值±标准偏差。

表1总结活体外1,2–双(羟甲基)吡咯并[2,1–a]酞嗪衍生物(式I–A)及苯并[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪衍生物(式I–B)对人类淋巴性白血病CCRF–CEM及其耐长春碱的衍生细胞株CCRF–CEM/VBL的细胞毒性。实验数据显示这些化合物呈现显著对抗CCRF–CEM的细胞毒性，且不会交叉抵抗长春碱。将所选化合物用于评估其对抗各种不同的类型的实性瘤(即，大肠癌HCT–116、非小细胞肺癌H460、小细胞肺癌H526及胰腺癌PacaS1)的细胞毒性。值得注意的是，该测试化合物基本上活跃地抑制所有实性瘤细胞株的细胞生长(表2)。其中，以小细胞肺癌H526细胞对测试化合物最为敏感。

进一步地，比较式(I–B)化合物与已知的抗增生药剂(例如伊立替康、依托泊苷(etoposide)、顺铂及卡铂)对人类小细胞肺癌细胞(SCLC)的细胞毒性，其结果总结于表3。如表3的实验数据所示，整体来说，本发明式(I–B)化合物较伊立替康、依托泊苷、顺铂及卡铂更具潜力。

表1.式(I–A)及(I–B)化合物对人类淋巴性白血病(CCRF)及其耐长春碱的衍生细胞株(CCRF–CEM/VBL)的细胞毒性。

^a实验数据是取每个化合物的三至六次独立试验所得的平均值±标准偏

差。^bCCRF–CEM/VBL是CCRF–CEM的衍生细胞株。^c中括号内的数

值是通过比较相应的亲代细胞株IC₅₀所得的抵抗力因子。^dIC₅₀值以纳

体积摩尔浓度表示。

表2.体外1,2–双(羟甲基)吡咯并[2,1–a]酞嗪衍生物(式(I–A))及苯并[g]吡咯并[2,1–a]酞嗪衍生物(式(I–B))对人类实性瘤细胞株的细胞毒性。

表3.比较式I–B化合物与治疗药剂对一系列的人类小细胞肺癌(SCLC)细胞的细胞毒性。

4.2式(I)化合物引发的DNA链间交联

在本实施例中，测试BO–2590、BO–2577(式I–A)及BO–2698，BO–2755、BO–2762及BO–2768(式I–B)的DNA交联活性，以碱性琼脂糖凝胶电泳法来分析交联情形。简言之，将纯化的pEGFP–N1质体DNA(1,500纳克)以各种不同浓度(1–20微体积摩尔浓度)的测试化合物混和在40微升的结合缓冲液(3毫体积摩尔浓度的氯化钠/1毫体积摩尔浓度的磷酸钠，pH7.4，以及毫体积摩尔浓度的EDTA)中。在37℃下，使反应混合物作用2小时。在反应终止时，以BamHI消化质粒DNA使其成为线性化，后续以乙醇沉淀。将DNA团块溶解并以碱性的缓冲液(0.5当量浓度的NaOH–10毫体积摩尔浓度的EDTA)进行变性。以4微升的6×碱性的上样染剂混和一等分试样的20微升的DNA溶液(1,000纳克)，接着在4℃下，以含有NaOH–EDTA缓冲液的0.8％的碱性琼脂糖凝胶进行电泳分析。以18V进行电泳分析22小时。之后以溴化乙锭(ethidiumbromide)溶液将凝胶染色，以UV光来观察DNA。实验结果显示于图1。

如图1的相片所示，BO–2590、BO–2577、BO–2698、BO–2755、BO–2762及BO–2768分别引发DNA链间交联，且其效应似乎呈现剂量依赖性。进一步地，在这些测试化合物中，发现相较于马法兰(Melphalan)，BO–2590具有相对较强力的交联。

进一步地，进行单一细胞电泳分析(SCGE，或称「彗星分析法」)来评估BO–2768引发的DNA损伤，该方法是一种简单的测量细胞内DNA链断裂的方法。为此目的，将细胞包埋至载玻片上一低熔点的琼脂糖悬浮液中，接着将其裂解于中性或碱性(pH>13)条件下，以及将悬浮且裂解的细胞进行电泳。「彗星」(comet)一词是指DNA经电泳凝胶所移动的图案，其通常与彗星相似，且彗星尾相对于彗星头部的强度反映出DNA断裂的数值。实验结果显示于图2，确认BO–2768与顺铂相同，能够以剂量依赖性的方式引发DNA断裂。

4.3BO–2590及BO–2577抑制血管新生

在本实施例中，以蛋白质印迹法分析来进行BO–2590及BO–2577于抑制VEGFR-2活性的测试。简言之，将内皮细胞EA.hy926与各种不同浓度的BO–2590或BO–2577作用12小时。分别将抗VEGFR-2及抗p–VEGFR-2的一级抗体用于检测VEGFR-2及p–VEGFR-2总蛋白。实验结果显示于图3。

如图3所示，以BO–2590或BO–2577处理可明显的抑制p–VEGFR-2蛋白量，且BO–2590较BO–2577更有利于减少p–VEGFR-2。进一步地，由于BO–2590或BO–2577并未显著地改变VEGFR-2的总蛋白量，因此推测BO–2590或BO–2577可能作为VEGFR活化的抑制剂。本实验以瓦他拉尼作为控制组。意外的是，BO–2590有效抑制p–VEGFR-2的剂量，大约10倍低于瓦他拉尼。其显示BO–2590是一具潜力的VEGFR-2抑制剂。

4.4BO–2590降低内皮细胞的移动

在本实施例中，利用插入式细胞培养皿进行移动分析来研究化合物BO–2590是否能够抑制细胞移动。

简言之，将内皮细胞置于上层的细胞可透膜(cell permeable membrane)，并将一含有BO–2590的溶液置于该细胞可透膜的下方。在培养期间(8小时)过后，将通过膜移动的细胞进行染色并利用荧光镜检来计数。明显地，化合物BO–2590抑制VEGFR途径也伴随着细胞移动的减损(图4-A)。

4.5BO–2590阻断血管新生

血管新生是指衍生自已存在的血管分布延伸来生成新血管的过程。观察血管行为或监控血管生成可用于检测化合物是否能够阻断血管新生。在本实施例中，利用血管生成分析来研究式(I)化合物是否阻断血管新生。

简言之，以各种不同浓度的BO–2590处理EA.hy926细胞24小时。之后，将细胞(每孔5×10⁵细胞)悬浮于100微升含有1％的FCS的培养液，接着种于以基质胶(matrigel)在37℃下预先涂布1小时的96孔盘。在培养48小时之后，以相位差显微镜来检测血管生成能力。

如图4-B的相片所示，未加入BO–2590前，可形成健全的管状结构，以纳体积摩尔浓度范围的BO–2590作用后，明显且呈现剂量依赖性地破坏管状结构的血管生成。瓦他拉尼也可抑制血管生成，但需要在更高的浓度下。实验结果说明以BO–2590来抑制血管生成，是与BO–2590所引发的VEGFR-2抑制密切相关。因此，可合理总结BO–2590通过抑制p–VEGFR2表现来触发抗血管新生活性。BO–2768及BO–2698也以剂量依赖性的方式，在血管生成上呈现相似的抑制效应(图4-C，图4-D)。

4.6BO–2590干扰细胞周期

进一步以肺癌细胞H460，在浓度为0、0.125、0.25、0.5、1及2微体积摩尔浓度，以及于24、48及72小时来研究BO–2590在细胞周期进行上的影响。以流式细胞仪来分析细胞周期分布。如图5所示，BO–2590以剂量依赖性的方式干扰细胞周期的进行。当BO–2590浓度增加，首先观察到G2期显著终止，其后续终止S期进行，且最后在24小时节点上G1呈现终止。然而，继续作用48或72小时，此时细胞周期缓慢进行，开始出现大量的亚G1细胞(图6)。亚G1细胞也代表细胞凋亡的细胞。因此，发现BO–2590以剂量依赖性的方式引发亚G1细胞产生，说明BO–2590可通过DNA损伤来触发细胞凋亡性的细胞死亡(apoptotic cell death)。

4.7BO–2590引发细胞凋亡性的细胞死亡

在本实施例中，膜连蛋白V染色图分析用于评估H460细胞株中BO–2590引发的细胞凋亡性的细胞死亡。简言之，以浓度为0.5、1及2微体积摩尔浓度的BO–2590处理H460细胞48小时，接着以膜连蛋白V–FITC及碘化丙啶(propidium iodide，PI)进行染色。以流式细胞仪分析染色的细胞。在处理48小时后，发现BO–2590以剂量依赖性的方式显著增加膜连蛋白V⁺细胞的比例(图7)。

4.8BO–2768引发细胞凋亡性的细胞死亡

在本实施例中，除了是利用H526细胞株来检测细胞凋亡性的细胞死亡之外，依据实施例4.7的步骤来评估BO–2768的效应。简言之，以浓度为0.01、0.02、0.04及0.08微体积摩尔浓度的BO–2768或以浓度为2、4、8及16微体积摩尔浓度的顺铂处理H526细胞24，48或是72小时，接着以膜连蛋白V–FITC及碘化丙啶进行染色。以流式细胞仪分析染色的细胞。在处理72小时后，发现BO–2768以剂量依赖性的方式显著增加膜连蛋白V⁺细胞的比例(图8)。

4.9BO–2768与顺铂协同抑制细胞增生

在本实施例中，研究BO–2768及顺铂在抑制细胞增生上是否具有协同性的增效作用(synergistic effect)。为此目的，以BO–2768或顺铂，单独或合并来处理H211细胞，并以PrestoBlue^TM分析H211细胞的增生率。实验结果绘示于图9。

如图9的实验数据所示，分别以1：2，1：4及1：8的比例合并施予BO–2768及顺铂可协同性地降低H211细胞增生数。

实施例5体内确认式(I)化合物的特性

如前文实施例4所述，式(I)化合物对测试的肿瘤细胞株基本上具有细胞毒性。在本实施例中，研究所选的式(I)化合物在带有人类SCLC的裸鼠上的治疗功效。

5.1实施例3的BO–2590(BO–2590L)微脂体可有效地抑制SCLC H526异体移植

由于BO–2590的溶解性较差，因此本实施例使用实施例3的BO–2590的微脂体(即，BO–2590L)来研究其在带有人类SCLC H526异体移植的裸鼠上的治疗功效。

在所有试验中，将肿瘤细胞以皮下植入裸鼠中，且当肿瘤体积达到大约100毫米立方时，通过尾部静脉施予BO–2590L。首先以每千克2.5、5及10毫克的BO–2590L剂量处理带有H526异体移植的小鼠，每隔一天投药共计六次(Q2D×6)。如图10-A所示，在第30天时，每千克10毫克的BO–2590L抑制H526肿瘤体积达55％。在所有测试的剂量中，BO–2590L并未造成体重损失，说明BO–2590L的毒性很低(图10-B)。

为确认BO–2590L的治疗活性，将已知的化疗药剂(例如瓦他拉尼及顺铂)进行比较性试验。简言之，将带有H526异体移植的小鼠分成4组，分别处理载体、BO–2590L(每千克10毫克，QD×9)、瓦他拉尼(每千克100毫克，QD×9)及顺铂(每千克4毫克，Q2D×3)。实验结果绘示于第11图。

实验结果发现BO–2590L远较瓦他拉尼更具潜力，且其在第33天、在抑制H526异体移植的生长上，几乎与顺铂同样有效；观察到BO–2590L大约抑制60％的肿瘤(图11-A)。值得注意的是，连续9天给予每千克10毫克之的BO–2590L并未造成体重损失(图11-B)，支持先前有关BO–2590L毒性很低的发现。相反地，在测试的实验动物中，使用每千克4毫克的剂量的顺铂会导致严重的体重损失。

5.2BO–2590、BO–2768或BO–2792的微胞可有效地抑制SCLC H526异体移植

依据与实施例5.1相似的步骤来探讨BO–2590、BO–2768、BO–2792、伊立替康及顺铂，在带有人类SCLC H526异体移植的裸鼠上的治疗功效。分别将BO–2590、BO–2768、BO–2792、伊立替康及顺铂配制于20％的

10％的TWEEN80、10％的PEG400、30％的乙醇及40％的D5W的溶液中以形成微胞。实验结果绘示于图12和13。

实验结果发现BO–2590及BO–2792与伊立替康及顺铂在降低肿瘤体积上同样有效(图12-A)；然而，每千克20毫克(每天二次)的BO–2768剂量意外地较BO–2590、BO–2792、伊立替康或顺铂任一种药物更具潜力，其在整个研究期间完全抑制肿瘤生长(即，无生长)，而在其他组(即，以BO–2590、BO–2792、伊立替康或顺铂处理的组)的肿瘤随时间增加而体积缓慢增加。进一步地，没有测试化合物(即，BO–2590、BO–2768、BO–2792、伊立替康及顺铂)在测试动物的体重上呈现任何有害的影响(图12-B)。

5.3BO–2768抑制SCLC H526异体移植效果与剂量相关

回顾在实施例5.2的发现，进一步详细研究BO–2768的抗肿瘤功效，如所预期的，BO–2768以剂量依赖性的方式抑制肿瘤生长，且在整个研究期间，每千克20毫克(每天二次)的剂量可完全地抑制肿瘤生长(图13-A)且在测试动物的体重上未出现任何有害的影响(图13-B)。

5.4BO–2768及顺铂协同降低SCLC H211异体移植的体积且无不利影响于测试个体的体重

在本实施例中，研究BO–2768及顺铂在抑制肿瘤体积及测试个体的体重变化上的协同作用。为此目的，将等分试样的H211细胞(5×10⁶，50微升)以皮下植入裸鼠中。接着，以BO–2768或顺铂，单独或合并来处理测试动物。施予每千克20毫克于100微升的剂量的BO–2768(溶解于20％的

HS15、10％的Tween80、10％的PEG400、30％的乙醇及40％的蒸馏水)连续5天，接着暂停一天；且重复该循环一次(即，共计两个循环)。给予每千克2或4毫克的剂量的顺铂4天一次，共计3次。实验结果绘示于图14。

如图14的实验数据所示，合并施予BO–2768及顺铂可协同降低肿瘤体积(图14-A)，且无不利影响测试动物的体重(图14-B)。

5.5免疫组织化学染色证明在SCLC H526的组织切片中BO–2590L(式IA)的抗血管新生及DNA损伤活性

将载玻片上的肿瘤异体移植组织切片以二甲苯去除石蜡，每次7分钟，共二次。接着将载玻片以乙醇梯度(依序自100％至70％)进行复水，后续以dH₂O润湿。在一加热盒(cooker)中，以柠檬酸缓冲液(0.01M，pH6.0)作用50分钟，后续在室温下冷却30分钟来进行抗原恢复(antigen retrieval)。接着以dH₂O润湿。之后将载玻片以获自

的一级抗体(抗兔的CD31抗体及抗小鼠的γ–H₂AX抗体)，并依据制造商的说明书(Novolink PolymerDetection system,Leica Biosystems,Wetzlar,Germany)来进行免疫组织化学(immunohistochemical，IHC)染色。在IHC处理之后，利用Panoramic 250Flash II全载玻片扫描仪来将载玻片进行数字扫描并以3DHISTECH Panoramic观察软件(3DHISTECH Ltd.,Budapest,Hungary)进行分析。

以免疫荧光染色并利用抗CD31(一种内皮细胞标记)来评估肿瘤内的血管密度(图15-A)。相较于载体对照组(或称控制组)，以BO–2590L、瓦他拉尼或顺铂处理肿瘤，整体来说观察到血管显著降低(图9-A)。在IHC之后，以Panoramic 250Flash II全载玻片扫描仪来扫描载玻片。从3个肿瘤切片的15个不同视野来观察组织切片中的CD31表现并利用3DHISTECHPanoramic观察软件(3DHISTECH Ltd.,Budapest,Hungary)来取计数平均值。如图15(B)所示，在未治疗的肿瘤中CD31标记随时间增加。然而，在第9天，相较于对照组，以BO–2590L或瓦他拉尼处理的肿瘤，其CD31标记强度减少至4％(图15-B)。由于顺铂以所使用的剂量可显著抑制肿瘤生长，在顺铂处理的肿瘤中也观察到CD31标记减少。在第9天，在顺铂处理的肿瘤中，CD31标记强度仅有对照组的19％，其低于BO–2590L或瓦他拉尼。这些结果说明，BO–2590L在体内系统内在抑制血管新生上具有与瓦他拉尼相当的潜力。

由于BO–2590L是一种DNA损伤型的抗癌药剂，因此利用免疫组织化学染色来研究BO–2590L对一种DNA损伤的标记(γ–H₂AX)在量上的影响。

如所预期的，观察到以顺铂或BO–2590L处理的肿瘤会明显增加γ–H₂AX，而观察到以瓦他拉尼处理的肿瘤γ–H₂AXs的量很低(图16-A)。定量分析显示几乎没有γ–H₂AX讯号发现在对照组的肿瘤。然而，发现到以处理顺铂或BO–2590处理的肿瘤随时间增加γ–H₂AX讯号。在以瓦他拉尼处理的肿瘤中，观察到中等量的γ–H₂AX(图16-B)。

总结来说，BO–2590L可通过DNA损伤及抑制血管生成来杀死癌细胞。

虽然上文实施方式中公开本发明的具体实施例，本发明所属技术领域中具有通常知识者当可对其进行各种更动与修饰。上文的说明书、实施例及实验数据对本发明作为具体的实施方式中的结构及使用方式做出完整的描述。尽管上文已描述本发明中各种实施方式有一定程度的特性，或参照一或多个各别实施方式，本发明所属领域技术具有通常知识者仍能在不悖离本发明精神及范围情形下，对已公开的实施方式进行众多修改。

Claims (25)

1.一种式(I)化合物，以及其药学上可接受的溶剂合物或立体异构物，

其中，

A是一有或无取代基的6–10员不饱和碳环；

R¹是一有或无卤素、–OR、–OAc、–OSO₂R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氢、烷基、环烷基或芳基；

R²是氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基；

R³是–NR^AR^B、–NHPhR^C、单或双糖基，或是一氨基酸基，或是–NR^AR^B合并形成一有或无取代基的苯胺(aniline)或环烷基胺(cycloalkylamine)，其是选自由吗啉(morpholine)、吡咯啶(pyrrolidine)、哌啶(piperidine)、1–经取代的哌嗪(1-substituted piperazine)、1,4’–联哌啶(1,4’-bipiperidine)及4’–经取代的4,4’–联哌啶(4’-substituted 4,4’-bipiperidine)所组成的群组；其中哌嗪及4,4’–联哌啶的取代基是烷基、–(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中n及m各自是一介于1至5的整数，且R^A及R^B各自是H或C₁–C₆烷基；以及

R^C是氢、卤素、烷氧基(alkoxy)、–CH₂OH、–NHCOR_a、–NHC(O)OR_a，或是有或无取代基的烷基、烯基、炔基、杂环基或芳基，且R_a是C_1–6烷基或芳基；以及

该芳基或杂芳基有或无至少一取代基，其中该至少一取代基是选自由C-_1–6烷基、烷氧基、卤素、氰基、硝基、–NH₂、–NHR_c、–N(R_c)₂、环烷氨基(cycloalkylamino)、亚甲二氧基(methylenedioxy)及伸乙二氧基(ethylenedioxy)所组成的群组，其中R_c独立地是氢或C_1–10烷基。

2.如权利要求1所述的化合物，其中R³是1H–吡唑–3–氨基(1H-pyrazol-3-amino)、1H–咪唑–2–氨基(1H-imidazol-2-amino)或嘧啶–氨基(pyrimidine-amino)。

3.如权利要求1所述的化合物，其中该环烷氨基是选自由吡咯啶基、哌啶基、吗啉基(morpholino)、哌嗪基及4–哌啶基哌啶基(4-piperidopiperidinyl)所组成的群组。

4.如权利要求1所述的化合物，其中该化合物具有式(I–A)的结构

其中，

R¹是一有或无卤素、–OR、–OAc、–OSO₂R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氢、烷基、环烷基或芳基；

R²是氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基；

R³是–NR^AR^B、–NHPhR^C、单或双糖基，或是一氨基酸基，或是–NR^AR^B合并形成一有或无取代基的苯胺或环烷基胺，其是选自由吗啉、吡咯啶、哌啶、1–经取代的哌嗪、1,4’–联哌啶及4’–经取代的4,4’–联哌啶所组成的群组；其中哌嗪及4,4’–联哌啶的取代基是烷基、–(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中

n及m各自是一介于1至5的整数，

R^A及R^B各自是H或C₁–C₆烷基；以及

R^C是氢、卤素、烷氧基、–CH₂OH、–NHCOR_a、–NHC(O)OR_a，或是有或无取代基的烷基、烯基、炔基、杂环基或芳基，且R_a是C_1–6烷基或芳基；

R⁴及R⁵各自是氢、–OH、烷氧基或–O(CH₂)_xN(R_b)₂，其中

x是一介于1至5的整数；以及

R_b是C_1–10烷基或一环烷氨基；以及

该芳基或杂芳基有或无至少一取代基，其中该至少一取代基是选自由C-_1–6烷基、烷氧基、卤素、氰基、硝基、–NH₂、–NHR_c、–N(R_c)₂、环烷氨基、亚甲二氧基及伸乙二氧基所组成的群组，其中R_c独立地是氢或C_1–10烷基。

5.如权利要求4所述的化合物，其中R¹是经–OH取代的甲基，R²是乙基，R³是吗啉，且R⁴及R⁵各自是氢。

6.如权利要求4所述的化合物，其中R¹是经–OH取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

7.如权利要求4所述的化合物，其中R¹是经–OH取代的甲基，R²是甲基，R³是1,4’–联哌啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

8.如权利要求4所述的化合物，其中R¹是经–OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

9.如权利要求1所述的化合物，其中该化合物具有式(I–B)的结构

其中，

R¹是一有或无卤素、–OR、–OAc、–OSO₂R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氢、烷基、环烷基或芳基；

R²是氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基；

R³是–NR^AR^B、–NHPhR^C、单或双糖基，或是一氨基酸基，或是–NR^AR^B合并形成一有或无取代基的苯胺或环烷基胺，其是选自由吗啉、吡咯啶、哌啶、1–经取代的哌嗪、1,4’–联哌啶及4’–经取代的4,4’–联哌啶所组成的群组；其中哌嗪及4,4’–联哌啶的取代基是烷基、–(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中

n及m各自是一介于1至5的整数，

R^A及R^B各自是H或C₁–C₆烷基；以及

R^C是氢、卤素、烷氧基、–CH₂OH、–NHCOR_a、–NHC(O)OR_a，或是有或无取代基的烷基、烯基、炔基、杂环基或芳基，且R_a是C_1–6烷基或芳基；

R⁴及R⁵各自是氢、–OH、烷氧基或–O(CH₂)_xN(R_b)₂，其中

x是一介于1至5的整数；以及

R_b是C_1–10烷基或一环烷氨基；以及

该芳基或杂芳基有或无至少一取代基，其中该至少一取代基是选自由C-_1–6烷基、烷氧基、卤素、氰基、硝基、–NH₂、–NHR_c、–N(R_c)₂、环烷氨基、亚甲二氧基及伸乙二氧基所组成的群组，其中R_c独立地是氢或C_1–10烷基。

10.如权利要求9所述的化合物，其中R¹是经–OH取代的甲基，R²是甲基，R³是二甲胺，且R⁴及R⁵各自是氢。

11.如权利要求9所述的化合物，其中R¹是经–OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是二甲胺，且R⁴及R⁵各自是氢。

12.如权利要求9所述的化合物，其中R¹是经–OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

13.一种用于治疗个体癌症的方法，包含对该个体施予一治疗有效量的如权利要求1所述的化合物。

14.如权利要求13所述的方法，其中该化合物具有式(I–A)的结构

其中，

R¹是一有或无卤素、–OR、–OAc、–OSO₂R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氢、烷基、环烷基或芳基；

R²是氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基；

R³是–NR^AR^B、–NHPhR^C、单或双糖基，或是一氨基酸基，或是–NR^AR^B合并形成一有或无取代基的苯胺或环烷基胺，其是选自由吗啉、吡咯啶、哌啶、1–经取代的哌嗪、1,4’–联哌啶及4’–经取代的4,4’–联哌啶所组成的群组；其中哌嗪及4,4’–联哌啶的取代基是烷基、–(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中

n及m各自是一介于1至5的整数，

R^A及R^B各自是H或C₁–C₆烷基；以及

R^C是氢、卤素、烷氧基、–CH₂OH、–NHCOR_a、–NHC(O)OR_a，或是有或无取代基的烷基、烯基、炔基、杂环基或芳基，且R_a是C_1–6烷基或芳基；

R⁴及R⁵各自是氢、–OH、烷氧基或–O(CH₂)_xN(R_b)₂，其中

x是一介于1至5的整数；以及

R_b是C_1–10烷基或一环烷氨基；以及

该芳基或杂芳基有或无至少一取代基，其中该至少一取代基是选自由C-_1–6烷基、烷氧基、卤素、氰基、硝基、–NH₂、–NHR_c、–N(R_c)₂、环烷氨基、亚甲二氧基及伸乙二氧基所组成的群组，其中R_c独立地是氢或C_1–10烷基。

15.如权利要求14所述的方法，其中R¹是经–OH取代的甲基，R²是乙基，R³是吗啉，且R⁴及R⁵各自是氢。

16.如权利要求14所述的方法，其中R¹是经–OH取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

17.如权利要求14所述的方法，其中R¹是经–OH取代的甲基，R²是甲基，R³是1,4’–联哌啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

18.如权利要求14所述的方法，其中R¹是经–OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

19.如权利要求13所述的方法，其中该化合物具有式(I–B)之结构

其中，

R¹是一有或无卤素、–OR、–OAc、–OSO₂R或–OCONHR取代的烷基，其中R是氢、烷基、环烷基或芳基；

R²是氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基；

R³是–NR^AR^B、–NHPhR^C、单或双糖基，或是一氨基酸基，或是–NR^AR^B合并形成一有或无取代基的苯胺或环烷基胺，其是选自由吗啉、吡咯啶、哌啶、1–经取代的哌嗪、1,4’–联哌啶及4’–经取代的4,4’–联哌啶所组成的群组；其中哌嗪及4,4’–联哌啶的取代基是烷基、–(CH₂)_nCONH(CH₂)_mNR^AR^B，其中

n及m各自是一介于1至5的整数，

R^A及R^B各自是H或C₁–C₆烷基；以及

R^C是氢、卤素、烷氧基、–CH₂OH、–NHCOR_a、–NHC(O)OR_a，或是有或无取代基的烷基、烯基、炔基、杂环基或芳基，且R_a是C_1–6烷基或芳基；

R⁴及R⁵各自是氢、–OH、烷氧基或–O(CH₂)_xN(R_b)₂，其中

x是一介于1至5的整数；以及

R_b是C_1–10烷基或一环烷氨基；以及

该芳基或杂芳基有或无至少一取代基，其中该至少一取代基是选自由C-_1–6烷基、烷氧基、卤素、氰基、硝基、–NH₂、–NHR_c、–N(R_c)₂、环烷氨基、亚甲二氧基及伸乙二氧基所组成的群组，其中R_c独立地是氢或C_1–10烷基。

20.如权利要求19所述的方法，其中R¹是经–OH取代的甲基，R²是甲基，R³是二甲胺，且R⁴及R⁵各自是氢。

21.如权利要求19所述的方法，其中R¹是经–OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是二甲胺，且R⁴及R⁵各自是氢。

22.如权利要求19所述的方法，其中R¹是经–OCONH(C₂H₅)取代的甲基，R²是甲基，R³是吡咯啶，且R⁴及R⁵各自是氢。

23.如权利要求13所述的方法，更包含在施予如权利要求1所述的化合物之前、同时或之后对该个体施予一化疗药剂。

24.如权利要求23所述的方法，其中该化疗药剂是选自由脱氧胆草素(deoxyelephantopin，DET)、维罗非尼(Vemurafenib，PLX4032)、多烯紫杉醇(docetaxel)、紫杉醇(paclitaxel)、顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、桦木酸(betulinicacid)、4–S–半胱胺儿茶酚(4–S–cysteaminyl catechol)、4–S–半胱胺酚(4–S–cysteaminylphenol)、依维莫司(everolimus)、硼替佐米(bortezomib)、卡铂(carboplatin)、达卡巴嗪(dacarbazine)、塞来昔布(celecoxib)、替莫唑胺(temozolomide)、索拉非尼(sorafenib)、沙利度胺(thalidomide)、来那度胺(lenalidomide)、丙戊酸(valproic acid)、长春碱(vinblastine)、甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)、波生坦(bosentan)、阿波胺(apomine)、三氧化二砷(arsenic trioxide)、卡莫司汀(carmustine)、拉铂立兹玛(lambrolizuma)、抗CTLA-4药物(anti-CTLA-4drug)、抗程序性死亡受体-1(PD-1)药物(anti-programmed death receptor-1(PD-1)drug)、易普利姆玛(ipilimumab)、崔枚利姆玛(tremelimumab)、阿霉素(doxorubicin)、MEK抑制剂(MEK inhibitor)、卡培他滨(capecitabine)、聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂(poly(ADP-ribose)polymerase(PARP)inhibitor)、磷酸肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase，PI3K)抑制剂、哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂(mammalian target of rapamycin(mTOR)inhibitor)及他莫昔芬(tamoxifen)所组成的群组。

25.如权利要求13所述的方法，其中该癌症是选自由霍杰金氏疾病(Hodgkin’sdisease)、非霍杰金氏淋巴瘤(Non–Hodgkin’s lymphomas)、急性骨髓性白血病(acutemyelogenous leukemia，AML)、急性淋巴性白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)、慢性骨髓性白血病(chronic myelogenous leukemia，CML)、尤文氏肉瘤(Ewing’ssarcoma)、多发性骨髓瘤(multiple myeloma)、威尔姆斯瘤(Wilms’tumor)、骨肿瘤(bonetumors)、神经母细胞瘤(neuroblastoma)、视网膜母细胞瘤(retinoblastoma)、睾丸癌(testicular cancer)、甲状腺癌(thyroid cancer)、前列腺癌(prostate cancer)、喉癌(larynx cancer)、子宫颈癌(cervical cancer)、鼻咽癌(nasopharynx cancer)、乳腺癌(breast cancer)、大肠癌(colon cancer)、胰腺癌(pancreatic cancer)、头颈部癌(headand neck cancer)、食道癌(esophageal cancer)、直肠癌(rectal cancer)、小细胞肺癌(small-cell lung cancer)、非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer)、脑癌(braincancer)、黑色素瘤(melanoma)、非黑色素瘤皮肤癌(non-melanoma skin cancer)及中枢神经系统肿瘤(CNS neoplasm)所组成的群组。

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