TWI653989B - 包含藉由東方草藥加工所獲得的草藥萃取物之組成物 - Google Patents

包含藉由東方草藥加工所獲得的草藥萃取物之組成物

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Abstract

本發明涉及一種由東方草藥加工所獲得的人參萃取物和綠茶萃取物的組成物。

Description

包含藉由東方草藥加工所獲得的草藥萃取物之組成物
本發明涉及一種包含藉由東方草藥加工所獲得的人參萃取物和綠茶萃取物之組成物。
皮膚的外觀是由真皮組織內的細胞外基質（extracellular matrix- ECM）確定的。膠原蛋白(Collagen)佔存在於細胞外基質中蛋白質的約70-80％。皮膚皺紋的形成是由老化、紫外線等所引起的膠原蛋白生產抑制和降解。特別地，金屬蛋白酶基質(matrix metalloproteinases，例如膠原酶collagenase)的表達(expression)導致已在皮膚正常地產生的膠原分解而形成皺紋。
已經開發各種物質並用於抑制會導致皺紋形成的膠原蛋白之減少。"類視黃醇"類(Retinoids)例如視黃醇、視黃酸等表現出改善皺紋的效果（皮膚病處理 ，1998年，16期，357-364頁）和包含麥芽萃取物的組成物係被用於抑制膠原酶。然而，類視黃醇類的缺點在於即使少量用於皮膚，它們亦會引起刺激。並且，由於從天然產物衍生的物質已大多用作簡單的萃取物，但不清楚萃取物的那一種組分表現出所期望的效果，也很難連續地維護和控制萃取物的活性。
皮膚含水量減少常導致因皮膚乾燥所引起的角質化(cornification)。此外，它會導致皮膚光澤的喪失，很容易地形成細皺紋和早期皮膚老化。因此，改善皮膚必須作皮膚保濕。
本案發明人發現東方草藥加工所獲得的人參萃取物及綠茶萃取物的混合物，和簡單人參和綠茶萃取物的混合物比較起來，對於預防皮膚皺紋形成、改善皺紋和保濕皮膚具有非常優越的協同效應。
（ 非專利文獻1）皮膚病處理法 ，16期，357-364頁，1998年。
[技術問題]
本發明的目的在於提供一種包含東方草藥加工天然產物所獲得所獲得的萃取物之組成物。
[技術方案]
一般而言，本發明提供包含東方草藥加工所獲得的人參萃取物和東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物的混合物之組成物。
[有利的效果]
本發明的組成物，它包含東方草藥加工所獲得的人參萃取物和東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物的混合物，和未加工處理的萃取物混合物或單獨的東方草藥加工萃取物比較起來，表現出明顯優越的抗衰老作用或保濕效果。具體而言，由於混合東方草藥加工的萃取物所產生的協同作用，故本發明的組成物可促進"前膠原" (procollagen)的產生和抑制膠原酶的表達。此外，通過促進"聚角蛋白絲" (filaggrin)的表達，本發明的組成物可以增強皮膚的屏障功能和誘導"皮膚角質" (keratinocytes)分化(differentiation)。此外，由於本發明的組成物中僅包含天然萃取物，故即使長期使用後，它顯示出很少毒性或刺激性和極少副作用。
因此，本發明的組成物可有效地作為皮膚外用的組成物，其可以改善皮膚的整體狀況，並防止或改善不完整的表皮分化所引起的皮膚乾燥症、特應性皮炎(異位性皮膚炎)、接觸性皮炎、牛皮癬等。
[最佳模式]
在一方面，本發明涉及一種包含東方草藥加工所獲得的人參萃取物和東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物的混合物。
在一典型的本發明的實施方式中，組成物可以是皮膚外用的組成物。
在一典型的本發明的實施方式中，組成物可用於防止皮膚老化，其包含作為活性成分之東方草藥加工所獲得的人參萃取物和東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物的混合物。
在一典型的本發明的實施方式中，東方草藥加工所獲得的人參萃取物和東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物的混合物不僅包含人參和綠茶的混合物之萃取物，但也包含已被分別萃取的人參萃取物和綠茶萃取物的混合物。
在本發明中，“東方藥材加工”指的是基於傳統的醫學知識加工草藥來改變藥物的固有特性之方法。東方草藥加工可包括煮、蒸、烤、炙或加熱，以降低毒性，維持或增強自然本性或提高服用便利性。例如，東方草藥的加工方法包括在合適的容器中和液體輔料一起烘烤草藥、炙製，使得輔料滲入藥物，和/或乾燥至所需的程度等等。根據所使用火的強度和所用的輔料進一步細分該加工方法。擧幾個例子如下。焙燒是一種利用溫和的火焰(文火)或劇烈的火焰(武火)烘烤藥材至規定狀態之方法。紅酒酒炙是與約15％的酒精烘烤，和用酒類蒸煮（酒蒸）是用約15％的酒精蒸草藥的方法。即使是相同的草藥出現在生存的狀態和加工狀態下經常有性質和功能的差異。生的草藥和加工草藥的組合處方可以提供各草藥的增強功效，或者可以通過抵消毒性而獲得最大的處理效果。
在本發明說明書中，“東方草藥加工”是指上述定義的“東方草藥加工”預加工的綠茶或人參。具體地說，東方草藥加工可以蒸煮或炙烤，但不限於此。具體而言，在本發明說明書中，獲得“東方草藥加工” 的綠茶或人參之途徑可以包括(a)在高溫和高壓下以東方草藥加工之方式處理綠茶或人參；和(b）乾燥東方草藥加工過的綠茶或人參。然而，也可以使用，但並不限於此，本領域常用的任何加工方法。
在本發明說明書中，“鹽炙”一詞指用鹽水處理時或處理後炙烤草藥之方法。例如草藥，沉浸在鹽水後可以炙烤，或草藥可以炙烤到預定的程度，並噴鹽水後，可以再次炙烤，但並不限於此。可以使用曬乾的鹽、岩鹽、精製食鹽、加工鹽或竹鹽。但並不限於此，可以使用任何常用的鹽。
在本發明說明書中，術語“炒炭”是焙燒草藥的方法之一。例如，它包括焙燒草藥到外部是黑色而裡面是褐色或黃褐色的狀態之方法，但並不限於此。
在本發明說明書中，術語“醋炙”是指用醋處理的同時或其後烘烤草藥的方法。例如，浸泡在米醋後可以烘烤草藥，或者可以粉碎草藥、烘烤，並且當表面變光滑或臭味消失時，烘烤並噴灑米醋，但並不限於此。該醋可以釀造红醋、穀物醋、果實醋或合成醋。但並不局限於此，任何通常醋都可加以使用。
在本發明說明書中，術語“酒蒸”是指以酒類蒸草藥的方法。例如，草藥可以和黃酒混合後進行蒸煮，但並不局限於此。酒類包括釀造的飲料、酒精飲料、雞尾酒、黃酒、米酒（淸酒）等，但不限於此。
在本發明說明書中，“薑炙”指的是薑汁處理之同時或處理後，烘烤或煮沸草藥。例如浸泡在薑汁後，可以烘烤草藥，或可和薑片一起煮沸，在薑汁完全吸收後，乾燥之，但不限於此，薑可以是通常可買到的生薑。
在本發明說明書中，術語“蜜炙”指的是加蜂蜜烘烤草藥，或用蜂蜜處理後烘烤草藥的方法。例如草藥可和精製的蜂蜜（煉蜜）混合，直到蜂蜜浸漬入草藥後，進行炙烤。或者，加入精製蜂蜜後，炙烤草藥，然後迅速攪拌並炙烤之。煉蜜(精製蜂蜜)是指用文火煮沸蜂蜜直至水分消失的蜂蜜。可是槐花蜂蜜、油菜蜂蜜或傳統的蜂蜜。但並不限於此，可以使用任何常見的蜂蜜。
在本發明說明書中，“人參”可以是任何人參，乾燥或未乾燥，不管其種類或栽培年期。在本發明中，人參可以是任何部分的人參。但具體而言，可以使用其根部。
在本發明說明書中，“綠茶”可以是任何綠茶，乾燥或者未乾燥，而不管其種類或年期。但在本發明中，綠茶可以是任何部分的綠茶，但具體地說，可以使用其葉部。
在本發明說明書中，“抗衰老”一詞包含括抑制或減輕雀斑、活斑點或雀斑樣痣，抑制或減輕皺紋，或者延遲或減緩隨時間的生物變化。
根據典型的本發明實施方式之組成物包含“東方草藥加工所獲得的”綠茶萃取物和“東方草藥加工所獲得的”人參萃取物，和一般綠茶萃取物及人參萃取物之混合物比較起來，展現明顯優越的抗衰老作用。
在一典型的本發明的實施方式中，組成物可以抑制皮膚皺紋形成或改善皮膚皺紋。本發明的組成物可以藉由促進前膠原產生和抑制膠原酶的表達，而抑制皮膚皺紋的形成或而改善皮膚皺紋。
在一典型的本發明的實施例中，本組成物可以抑制膠原酶的表達。
在一典型的本發明實施方式中，組成物可以是用於保濕皮膚之組成物，其包含東方草藥加工所獲得的人參萃取物和東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物作為活性成分的混合物。本發明的組成物可以藉由促進角蛋白細胞中聚角蛋白絲的表達，而增加皮膚的水含量，並且甚至施用本組成物經過很長一段時間後，仍可以保持皮膚的保濕效果。
根據本發明的組成物，其包含“東方草藥加工所獲得的”綠茶萃取物和“東方草藥加工所獲得的”人參萃取物，由於具有協同效應，和一般綠茶萃取物和人參萃取物的混合物相比，表現出顯著優異的保濕效果。
在一典型的本發明的實施方式中，組成物可增強皮膚的屏障功能，並誘導在皮膚角蛋白細胞的分化。因此，它可有效地作為皮膚外用的組成物，可以防止或改善因不完整的表皮分化所引起的乾皮症、特應性皮炎、接觸性皮炎、牛皮癬等。
在一典型的本發明的實施方式中，東方草藥加工所獲得的人參萃取物可以包含括人參多醣。
在一典型的本發明的實施方式中，人參多醣可以是一種或多種選自由鹽炙人參多醣、炒炭人參多醣、醋炙人參多醣、酒蒸人參多醣、薑炙人參多醣、和人參多醣所組成之群組。
在本發明說明書中，術語“人參多醣”指的是果膠狀多醣，其具有約34,600的分子量，主要是由半乳糖醛酸（約60％）組成的，並且以阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖等，作為附屬的殘基。
在一典型的本發明實施例中，東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物可以包括綠茶多醣。
在本發明說明書中，術語“綠茶多醣”指的是從綠茶衍生的多醣，它是一種酸性多醣，但不同於從其它植物中發現的多醣。它是一種由光合作用產生的糖和氨基酸結合的產物。
在一典型的本發明的實施方式中，鹽炙綠茶多醣、炒炭綠茶多醣、醋炙綠茶多醣、酒蒸綠茶多醣、薑炙綠茶多醣、和蜜炙綠茶多醣所組成之群組。
本發明的多醣可以根據本領域中已知的方法來製備，沒有特別的限制。具體地，人參或綠茶多醣可以通過在38-42ºC萃取人參或綠茶葉，濃縮所得到的萃取物，過濾除去雜質，以滴加方式加入乙醇於其中，並用熱空氣進行乾燥而得之。
在本發明中，鹽炙人參或綠茶多醣可以藉由人參或綠茶葉和鹽水混合，在100-180ºC炙烤所得混合物10分鐘至1小時，萃取並濃縮，通過過濾移除雜質，滴入乙醇，並乾燥該產物。
在本發明中，燒焦人參或綠茶多醣可以在230-300ºC碳化人參或綠茶葉的外側，冷卻，萃取和濃縮，藉由過濾除去雜質，以滴加方式加入乙醇，並乾燥該產物得之。
在本發明中，醋炙人參或綠茶多醣可以藉由於醋中浸泡人參或綠茶葉，在100-160°C下炙烤10分鐘〜1小時，乾燥，萃取和濃縮，藉由過濾除去雜質，以滴加方式加入乙醇，並乾燥該產物可以得之。
在本發明中，酒蒸人參或綠茶多醣可以藉由將人參或綠茶葉浸於酒中，並蒸30分鐘至2小時，乾燥，萃取和濃縮，通過過濾除去雜質，以滴加的方式加入乙醇，並乾燥該產物得之。
在本發明中，薑炙人參或綠茶多醣可以藉由噴塗薑汁於人參或綠茶葉，在100-180°C下炙烤10分鐘〜1小時，乾燥，萃取和濃縮，通過過濾除去雜質，以滴加方式加入乙醇，並乾燥該產物而獲得之。
在本發明中，蜜炙人參或綠茶多醣可以藉由浸泡人參或綠茶葉於蜂蜜中，並在100-160°C下炙烤10分鐘〜1小時，乾燥，萃取和濃縮，通過過濾除去雜質，以滴加方式加入乙醇，並乾燥該產物，可以得之。
在一典型的本發明的實施方式中，東方草藥加工所獲得的人參萃取物和東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物的重量比可以為0.1〜10：1。 在這兩種成分的重量比下協同作用可以最大化。更具體地，東方草藥加工所獲得的人參萃取物和東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物的重量比可為0.5-9.5：1，1-9：1或1.5-8.5：1。
在一典型的本發明的實施方式中，組成物可包含0.001-10重量％東方草藥加工所獲得的人參萃取物和東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物，該百分率係分別對組成物的總重量而言。如果萃取物的含量小於0.001重量％時，則改善皮膚皺紋和保濕的效果可能很小。並且，若含量超過10重量％，則期望的效果未顯著增加。更具體地，本發明的組成物可分別包含0.005-9.5重量％，0.01-9重量％，0.03-8.5重量％，0.05-8重量％，0.07-7.5重量％，0.09-7重量％，0.1-6.5 重量％，0.3-6重量％，0.5-5.5重量％或0.7-5重量％的東方草藥加工所獲得的人參萃取物的和東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物，該百分率係對組成物的總重量而言。
在一典型的本發明的實施方式中，組成物可以是化妝品組成物。
根據本發明的化妝品組成物可以作成適於局部應用的任何製劑。例如，它可以作成溶液、油在水中的乳液、水在油中的乳液、懸浮液、固體、凝膠、粉末、糊劑、泡沫劑或噴霧劑的形式。此等製劑可根據本領域常用的方法製備之。
根據本發明的化妝品組成物還可包含其它成分，它在不產生不利影響的用量範圍內可能對主要作用提供協同效應。此外，根據本發明的化妝品組成物可進一步包含保濕劑、潤膚劑、紫外線吸收劑、防腐劑、消毒劑、抗氧化劑、pH調節劑、有機或無機顏料、香料、清涼劑或除臭劑。這些成分的添加量可以由對此領域之熟悉技藝者容易地確定之，在其添加量範圍內不會對本發明的效果產生不利影響。具體地說，其添加量可以係0.01〜5重量％，更具體地0.01-3重量％，該百分率係對組成物的總重量而言。
在典型的本發明的實施方式中，組成物可以是藥物組成物。
根據本發明的藥物組成物可藉由添加通常使用的無機或有機載體於活性成分而製備成固體、半固體或液體狀態的口服或非腸道給藥製劑。
口服製劑可包括片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、粉劑、細粉劑、粉劑、乳劑、糖漿、丸粒等。並且，胃腸外給藥製劑可包括注射劑、滴劑、軟膏、洗劑、噴霧劑、懸浮液劑、乳劑、栓劑等。根據通常使用的方法可以容易地調配製劑，而且適當地配用表面活性劑、賦形劑、著色劑、香料、防腐劑、穩定劑、緩沖劑、助懸劑或其它常用的輔助劑。
據本發明的藥物組成物可以口服或胃腸外給藥，例如，經由直腸、局部、經皮、靜脈內、肌肉內、腹膜內、皮下等途徑給藥。
所述藥物組成物的活性成分給藥劑量將根據患者的年齡、性別和體重、病理狀況和嚴重程度、給藥途徑或診斷者的判斷不同而不同。基於這些因素，對此領域之熟悉技藝者根據此等因素即可確定施用劑量。每日給藥劑量可以是，例如，0.1〜100毫克/千克/天，更具體地為5-50毫克/千克/天，然而不僅限於此。
在下文中，本發明將藉由實施例詳細地描述。然而，下列實施例僅用於說明之目的，並且對此領域之熟悉技藝者顯而易見地知悉本發明的範圍並不受這些實施例的限制。
[比較例1]人參多醣的製備
用攪拌機粉碎1公斤的乾白參是。加入10升純水後，並用40ºC溫水萃取24小時，同時進行攪拌，在15°C將所得萃取物放置一天。然後，通過濾布過濾並離心分離後，使殘餘物和濾液分離。將已分離的濾液減壓濃縮至十分之一純化水的體積。然後，以滴加的方式加入4倍濃縮物體積的乙醇後，將產物用熱空氣乾燥，從而獲得65克人參多醣。
[比較例2]綠茶多醣的製備
用攪拌機粉碎1公斤初步加工（熱鍋清蒸）之綠茶葉。加入10升純水，並用40ºC溫水萃取24小時，同時進行攪拌後，將所得萃取物在15°C放置一天。然後，通過濾布過濾和離心分離後，使殘餘物和濾液分離。減壓濃縮已分離的濾液至十分之一純化水的體積。然後，以滴加的方式加入4倍濃縮物體積的乙醇，將產物用熱空氣乾燥，從而獲得72克綠茶多醣。
[比較例3] 含有人參多醣（紅參多醣）的東方草藥加工人參萃取物之製備
在97ºC壓力容器蒸煮未經乾燥的鮮人參約4小時。用65ºC熱空氣乾燥蒸過的新鮮人參，和使用混合機粉碎1公斤的東方草藥加工人參。 加入10升純水中，並用40ºC溫水攪拌萃取24小時後，將所得萃取物在15°C放置一天。然後，通過濾布過濾和離心分離後，使殘餘物和濾液分離。將已分離的濾液減壓濃縮至十分之一純化水的體積。然後，以滴加的方式加入4倍乙醇體積的濃縮物後，將產物用熱空氣乾燥，而得到70克東方草藥加工人參多醣（紅參多醣）。
[比較例4] 含有綠茶多醣的東方草藥加工綠茶萃取物之製備
使經初步加工（熱鍋清蒸）綠茶葉在97ºC壓力容器蒸煮約4小時。用65ºC熱空氣乾燥該蒸過的綠茶葉子後，用混合器粉碎1kg該經加工的綠茶葉。加入10升純水，並在40ºC用溫水萃取24小時，同時進行攪拌後，將所得萃取物在15°C放置一天。然後，通過濾布過濾和離心分離後，使殘餘物和濾液分離。將已分離的濾液減壓濃縮至純化水的體積的十分之一。然後，以滴加的方式加入濃縮物的4倍體積之乙醇後，將產物用熱空氣乾燥，得到70克東方草藥加工的綠茶多醣。
[比較例5]人參萃取物和綠茶萃取物的混合物之製備
以1：1的比例簡單地混合比較例1中所製備的人參多醣和比較例2中所製備的綠茶多醣。
[實施例1]鹽炙的混合多醣之製備
使50重量％乾燥的人參和50重量％初步加工（熱鍋清蒸）的綠茶和鹽水（2-3％）充分混合，並使其密封靜置，直至鹽水完全被吸收。在140°C炙烤所得人參和綠茶的混合物40分鐘，然後在陰涼處乾燥。用攪拌機粉碎1公斤東方草藥加工所獲得的人參和綠茶之混合物。添加10升的純化水，並回流萃取3次後，將所得萃取物在15°C放置一天。然後，通過濾布過濾和離心分離後，使殘餘物和濾液分離。減壓濃縮已分離的濾液至十分之一純化水的體積。然後，以滴加的方式加入4倍濃縮物體積的乙醇後，用熱空氣乾燥產物，得到70克人參多醣和綠茶多醣的混合物（鹽炙混合多醣）。
[實施例2] 燒焦混合多醣之製備
在270ºC碳化50重量％乾燥的人參和50重量％初步加工（熱鍋清蒸）的綠茶。當顏色變成黑色時，停止加熱並將產物冷卻至室溫。用攪拌機粉碎1公斤人參和綠茶之加工混合物。添加10升的純化水，並回流萃取3次後，將所得萃取物在15°C放置一天。然後，通過濾布過濾和離心分離後，使殘餘物和濾液分離。將已分離的濾液減壓濃縮至十分之一純化水的體積。然後，以滴加的方式加入4倍濃縮物體積的乙醇後，將產物用熱空氣乾燥，從而獲得72克人參多醣和綠茶多醣（燒焦的混合多醣）之混合物。
[實施例3]醋炙混合多醣的製備
在50重量％乾燥的人參和50重量％初步加工（熱鍋清蒸）綠茶的混合物中， 250克醋充分地被吸收。在130ºC炙烤40分鐘後，將產物在陰涼處乾燥。用攪拌機粉碎1公斤人參和綠茶的加工混合物。添加10升的純化水，並回流萃取3次後，將所得萃取物在15°C放置一天。然後，通過濾布過濾和離心分離後，使殘餘物和濾液分離。減壓濃縮已分離的濾液至十分之一純化水的體積。然後，以滴加的方式加入4倍濃縮物體積的乙醇後，用熱空氣乾燥產物，得到70克人參多醣和綠茶多醣（醋炙混合多醣）的混合物。
[實施例4]酒蒸混多醣之製備
在黃酒中浸泡50重量％乾燥人參和50重量％初步加工（熱鍋清蒸）綠茶的混合物，蒸煮1小時20分鐘，然後在陰涼處乾燥。用攪拌機粉碎1公斤人參和綠茶的加工混合物。添加10升的純化水，並回流萃取3次後，將所得萃取物在15°C放置一天。然後，通過濾布過濾和離心分離後，使殘餘物和濾液分離。將已分離的濾液減壓濃縮至十分之一純化水的體積。然後，以滴加的方式加入4倍濃縮物體積的乙醇後，將產物用熱空氣乾燥，從而獲得77克人參多醣和綠茶多醣（酒蒸混合多醣）的混合物。
[實施例5]薑炙混合多醣之製備
磨碎生薑，並用2倍體積的水混合後，壓榨混合物。重複2-3次這個過程以製備薑汁。噴灑薑汁（佔人參的10-15重量％）於50重量％乾燥的人參和50重量％初步加工（熱鍋清蒸）綠茶之混合物後，在140ºC炙烤該浸漬薑汁的混合物40分鐘，然後在陰涼處乾燥。用攪拌機粉碎1公斤人參和綠茶的加工混合物。添加10升的純化水，並回流萃取3次後，將所得萃取物在15°C放置一天。然後，通過濾布過濾和離心分離後，使殘餘物和濾液分離。將已分離的濾液減壓濃縮至十分之一純化水的體積。然後，以滴加的方式加入4倍濃縮物體積的乙醇後，將產物用熱空氣乾燥，得到70克人參多醣和綠茶多醣（薑炙混合多醣）的混合物。
[實施例6]蜜炙混合多醣之製備
使50重量％乾燥的人參和50重量％初步加工（熱鍋清蒸）綠茶的混合物充分地吸收蜂蜜（佔人參的20-30重量％）後，將混合物在在130°C炙烤40分鐘，然後在陰涼處乾燥。用攪拌機粉碎1公斤人參和綠茶的加工混合物。添加10升的純化水，並回流萃取3次後，將所得萃取物在15°C放置一天。然後，通過濾布過濾和離心分離後，使殘餘物和濾液分離。將已分離的濾液減壓濃縮至十分之一純化水的體積。然後，以滴加的方式加入4倍濃縮物體積的乙醇後，將產物用熱空氣乾燥，從而獲得75克人參多醣和綠茶多醣的混合物（蜜炙混合多醣）。
[試驗例1]膠原酶表達抑制效果之測量
比較例和實施例中物質的膠原酶生產抑制活性，和作為對照物的生育酚和兒茶素(EGCG)進行比較。
將人類纖維細胞接種到96孔板，其中保持含有2.5％胎牛血清的"達爾伯克改質的伊格爾培養基"（DMEM- Dulbecco's modified Eagle's medium），每孔5,000個細胞，並培養至〜90％匯合(confluency)。將細胞進一步培養於在達爾伯克改質的伊格爾培養基(DMEM)培養24小時，並以比較例1-5和實施例1-6製備的東方草藥加工人參多醣和綠茶多醣的混合物處理，該混合物係在無血清的達爾伯克改質的伊格爾培養基(DMEM)中佔10-4 摩爾濃度，並培養24小時。然後收集細胞培養物。
使用可商購的膠原酶試劑盒（Amersham製藥公司，美國）進行測定所收集的細胞培養物的膠原酶生產程度。首先，將細胞培養物加入到96孔板上，在該細胞培養物上均勻塗佈主膠原酶抗體，並在恆溫培養箱進行抗原-抗體反應3小時。
3個小時後，將具有發色團之二次膠原抗體加入到96孔板中，並進行15分鐘的反應。十五分鐘後，在室溫下加入顯色劑，以誘導顯色15分鐘。然後，加入1M硫酸溶液，以停止反應（顯色）。在96孔板表現出黃色，而且黃色程度的變化端賴於反應的進度。
使用分光光度計在405奈米測定吸光度，和根據公式1計算膠原酶的表達程度。
計算相對於未加工處理的對照組的表達程度
[公式1] 膠原酶（％）的表達程度= 100 - {（以比較例或實施例物質處理過的細胞的吸光度÷對照物的吸光度）×100}
人類纖維細胞中測試物質的膠原酶表達抑制影響，相對於未處理組為100的膠原酶表達程度顯示於表1中。
經證實在體外，本發明東方草藥加工所獲得的人參萃取物和東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物之混合物可以抑制膠原酶的表達。
另外，如從表1中可知，包含括兩種東方草藥加工萃取物的實施例1-6顯示有比比較例更好的膠原酶抑制效果。特別是，它們比比較例5表現出更好的膠原酶抑制的效果。另外，實施例1-6的膠原酶表達抑制效果甚至比陽性對照的生育酚更好。
[試驗例2]前膠原生產促進效果之測試
將比較例和實施例的前膠原產生促進物質的活性與維生素C進行比較
將人類纖維細胞接種到96孔板，該孔板保持有達爾伯克改質的伊格爾培養基（DMEM），其中含有2.5％胎牛血清，5,000個細胞/孔，並培養至〜90％匯合。將細胞進一步培養於無血清的達爾伯克改質的伊格爾培養基（DMEM）24小時，並以比較例1-5和實施例1-6製備的東方草藥加工人參多醣和綠茶多醣和在無血清的達爾伯克改質的伊格爾培養基(DMEM) 中溶解至10-4 充分子濃度的維生素C的混合物處理。24小時後，使用前膠原1型C-肽EIA試劑盒（MK101，寶酒公司，日本）測定游離的前膠原之量。
前膠原生產的程度列於表2，相對於訂為100之未處理組。
前膠原生產的程度越高，則膠原蛋白的生產程度越高，而能防止皮膚皺紋的形成。
可以確認，實施例1-6的物質促進前膠原的體外生產，而其效果比得上維生素C，已知維生素C在膠原合成上是必需的。特別是，和比較例1-5相比，實施例1-6物質表現出更優異的促進前膠原生產效果。
[試驗例3]對人類角質形成細胞的分化誘導作用之試驗
測定吸光度評估比較例和實施例中物質的皮膚屏障功能和皮膚的保濕能力。
在培養瓶的底部附著起初培養的人類角質形成細胞（從海德堡德國癌症研究中心Fusenig博士獲得），並添加如表3中所述的試驗物質後，培養5天，直到約70-80％匯合。收穫細胞，用磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）清洗，以超音波處理3分鐘，加入1毫升的10mM(毫摩爾濃度) 含有2％十二烷基硫酸鈉（SDS）和20mM二硫蘇糖醇（DTT）之三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽 (Tris-HCl)緩衝液（pH7.4），然後煮沸10分鐘。接著，以1,200rpm(每分鐘轉數)進行離心30分鐘後，將所得沉澱物重新懸浮於1毫升的磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）中，並在340奈米處測定吸光度。 另外，將部分溶液經高頻聲波分裂和測定蛋白含量作為細胞分化的量度基準後，予以服用。一種低鈣（0.03毫摩爾）基和一種高鈣（1.2毫摩爾）基分別作為陰性和陽性基團。將比較例1-5和實施例1-6中的物質加入到該低鈣基團作為試驗組。試驗結果顯示於表3中。
可以確認的是，實施例1-6的東方草藥加工萃取物的混合物，測定從分化過程中產生的角化外殼（CE）的量，可知產生促進角質形成細胞的分化。另外，可以確認，實施例的東方草藥加工所獲得的萃取物的混合物，和比較例相比，表現出更優異的誘導角質形成細胞的分化之效果。因此，可以看出本發明的組成物表現出增強皮膚的屏障功能和更佳的保濕皮膚效果。
[試驗例4]通過RT-PCR分析測定聚角蛋白絲的表達
測定聚角蛋白絲的表達程度，以評估比較例和實施例物質的皮膚 保濕能力。
從德國癌症研究中心N.E. Fusenig博士取得的人類角質形成細胞系。將1×105 個細胞分配到60毫米培養皿。培養一天後，用表4中所述的試驗物質處理細胞，然後培養24小時。使用TRIzol® 試劑（美國Gibco公司實驗室）從培養的細胞中萃取總RNA(核糖核酸)，和使用單步驟RNA PCR(核糖核酸聚合酶鏈反應)試劑盒（日本AMV寶生物有限公司）進行逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）分析。使用聚角蛋白絲引物（韓國Bioneer公司），並用β-肌動蛋白作為內對照比較表達程度。結果列於表4，其中對照組訂為100。]
如從表4中可見，可以確認的是實施例1-6的物質促進聚角蛋白絲在角質形成細胞中的表達。特別是，和比較例1-5中的物質比較，實施例1-6中的物質表現出顯著優異促進聚角蛋白絲表達的效果。因此，可以看出本發明的組成物可有效地促進天然保濕因子的生產，並強化皮膚的保濕能力。
[試驗例5]皮膚保濕作用之測量
如表5和表6中所描述地製備例1-6（表5）和比較例1-5（表6）的滋養面霜。成分的單位為重量％。
為了評估實施例1-6物質的皮膚保濕效果，使用表5和表6之實施例1-6和比較例1-5的滋養霜進行如下試驗。使110名30多歲健康女性分成11組，並在24-26ºC和75％濕度的條件下，一天施用實施例1-6和比較例1-5的滋養霜兩次，經歷4個星期。恆溫和恆濕(24-26ºC和75％濕度) 的條件下，開始施用後1，2和4個星期和停止施用2個星期（6週）後，藉由皮膚測試儀測定皮膚的水含量。相對於施用之前，水含量的增加，列於表7中(以百分率表示)。
從表7可知，和比較例1-5相比，含有本發明實施例1-6東方草藥萃取物加工萃取物的滋養霜導致在皮膚顯著地增加水含量。由於停止施用2個星期後，即6週後，所測定水含量和施用1~2個星期後的水含量可以比擬，故可確認即使停止施用被檢測物質後，實施例1-6仍可保持皮膚保濕效果經歷預定時間。因此，可以看出本發明的組成物可提供改進的皮膚保濕效果。
在下文中，本發明將被詳細地通過製劑實施例說明。但是，下面的製劑實施例僅用於說明之目的，並且本發明的範圍並不局限於製劑實施例，這對所屬技術領域中具有通常知識者而言係顯而易。
[製備例1]軟膠囊
混合150毫克東方草藥加工所獲得的人參萃取物、150毫克東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物、2毫克棕櫚油、8毫克氫化棕櫚油、4毫克黃色蜂蠟和6毫克卵磷脂，並填充到膠囊中，每膠囊400毫克。
[製備例2] 片劑
混合150毫克東方草藥加工所獲得的人參萃取物、150毫克東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物、100毫克葡萄糖、50毫克紅人參萃取物、96毫克澱粉和4毫克硬脂酸鎂，並加入40毫克30％的乙醇溶液以形成顆粒。在60ºC乾燥顆粒，並加工成片劑。
[製備例3]顆粒
混合150毫克東方草藥加工所獲得的人參萃取物、150毫克東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物、100毫克葡萄糖、50毫克的紅參萃取物和600毫克的澱粉，並加入100毫克30％的乙醇溶液中以形成顆粒。將顆粒填充於膠囊中，每個膠囊1克。
[製備例4]柔膚水（化妝水）
按照通常使用的方法，將表8所述的組成物製備柔膚化妝水。
[製備例5]滋養化妝水（營養乳液）
按照通常使用的方法，以表9中所描述的組成物製備滋養化妝水。
[製備例6]滋養霜
根據通常使用的方法，以表10中所述的組成物製備滋養霜。
[製備例7]按摩霜
根據通常使用的方法，以表11中所述的組成物製備按摩霜。
[製備例8] 化妝包
按照通常使用的方法，用表12中所述的組成物製備化妝包。
[製備例9]軟膏
根據通常使用的方法，用表13中所述的組成物製備軟膏。
儘管已經列出和描述典型實施例，但是對此領域之熟悉技藝者可以可以理解在形式和細節上的各種變化，均不脫離本發明的精義和所附的發明申請專利範圍。此外，依據本發明的教導，可以作許多修改，以符合特定情況或材料，而不偏離其基本範圍。因此，本發明不限於作為最佳模式的特定典型實施例，而是本發明將包括落入所附發明申請專利範圍內的所有實施方式。

Claims (9)

  1. 一種組成物，包含一種或多種東方草藥加工所獲得的人參萃取物和綠茶萃取物的的混合物：選自由鹽炙人參多醣和鹽炙綠茶多醣的混合物；炒炭人參多醣和炒炭綠茶多醣的混合物；醋炙人參多醣和醋炙綠茶多醣的混合物；酒蒸人參多醣和酒蒸綠茶多醣的混合物；薑炙人參多醣和薑炙綠茶多醣的混合物；以及和蜜炙人參多醣和蜜炙綠茶多醣的混合物所組成之群組。
  2. 如請求項1所述之組成物，其中組成物是用於預防皮膚老化，該組成物包含東方草藥加工所獲得的人參萃取物和東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物的混合物作為活性成分。
  3. 如請求項2所述之組成物，其中組成物是用於抑制皮膚皺紋形成或改善皮膚皺紋的組成物。
  4. 如請求項2所述之組成物，其中組成物抑制膠原酶的表達。
  5. 如請求項1所述之組成物，其中組成物是用於保濕皮膚，該組成物包含作為活性成分之東方草藥加工所獲得的人參萃取物和東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物之混合物。
  6. 如請求項1所述之組成物，其中東方草藥加工所獲得的人參萃取物和東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物的重量比為0.1〜10：1
  7. 如請求項1所述之組成物，其中組成物包含0.001-10重量％的東方草藥加工所獲得的人參萃取物和0.001-10重量％的東方草藥加工所獲得的綠茶萃取物，該百分率係分別對組成物的總重量而言。
  8. 如請求項1至7任一項所述之組成物，其中組成物係一種化妝品組成物。
  9. 如請求項第1至7任一項所述之組成物，其中組成物係一種藥物組成物。
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