CN105246497A - 包含炮制提取物的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含炮制的人参提取物和炮制的绿茶提取物的组合物。这种组合物由于混合各炮制的提取物而具有协同效应,从而能够促进前胶原的生成且抑制胶原酶的表达。此外,本发明的组合物可以促进丝聚蛋白的表达而能够强化皮肤屏障功能并诱导皮肤角质形成细胞的分化。因此,本发明的组合物能够改善皮肤的整体状态,且可以有效地用作用于预防或改善因表皮分化不完全而引起的干皮症、特应性皮炎、接触性皮炎、牛皮癣等的皮肤外用制剂。

Description

包含炮制提取物的组合物
【技术领域】
本发明涉及一种包含人参提取物和绿茶提取物的组合物,所述人参提取物和绿茶提取物是通过东方草药炮制而成。
【背景技术】
皮肤的外观是由真皮组织内的细胞外基质(ECM)确定的。胶原蛋白占存在于细胞外基质中蛋白质的约70-80%。皮肤皱纹的形成是由老化、紫外线等所引起的胶原蛋白生产抑制和降解。特别地,基质金属蛋白酶如胶原酶的表达导致已在皮肤正常产生的胶原的分解而形成皱纹。
已经开发各种物质并用于抑制会导致皱纹形成的胶原蛋白之减少。类视黄醇(Retinoids)例如视黄醇、视黄酸等表现出改善皱纹的效果(皮肤病治疗,1998年,16期,357-364页)和包含麦芽提取物的组合物系被用于抑制胶原酶。然而,类视黄醇的缺点在于即便少量用于皮肤,它们亦会引起刺激。并且,由于从天然产物衍生的物质已大多用作简单的提取物,但不清楚提取物的那一种组分表现出所期望的效果,也很难连续地维护和控制提取物的活性。
皮肤含水量减少常导致因皮肤干燥所引起的角质化。此外,它会导致皮肤光泽的丧失,很容易地形成细皱纹和早期皮肤老化。因此,改善皮肤必须作皮肤保湿。
本案发明人发现经过东方草药炮制的人参提取物及绿茶提取物的混合物,和简单人参和绿茶提取物的混合物比较起来,对于预防皮肤皱纹形成、改善皱纹和保湿皮肤具有非常优越的协同效应。
【发明内容】
技术问题
本发明在于提供一种包含通过东方草药炮制天然产物而得的提取物的组合物。
技术方案
在一个总的方面,本发明提供一种组合物,该组合物包含经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物。
有益效果本发明的组合物包含经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物,与未经过炮制而成的提取物或分别通过东方草药炮制而成的提取物相比,表现出显著优异的抗老化效果或保湿效果。具体而言,借助由通过东方草药炮制而成的提取物的混合所产生的协同作用,本发明的组合物可促进前胶原的生成并抑制胶原酶的表达。此外,通过促进丝聚蛋白的表达,本发明的组合物可以增强皮肤的屏障功能并诱导角质形成细胞的分化。进一步,由于本发明的组合物中仅包含天然提取物,从而几乎没有毒性或刺激性,且即便长期使用也几乎没有副作用。
因此,本发明的组合物可有效地作为皮肤外用组合物,其可以改善皮肤的整体状态,且防止或改善不完全的表皮分化所引起的皮肤干燥症、特应性皮炎、接触性皮炎、牛皮癣等。
【具体实施方式】
在本发明中引入韩国专利申请号为10-2013-0062374,申请日为2013年5月31日的申请的所有内容。此外,本发明要求主张韩国专利申请号为10-2013-0062374的优先权,并将其中的所有内容引入作为参考。
在一方面,本发明涉及一种包含经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物。
在本发明的一个示例性实施例中,所述组合物可以为皮肤外用组合物。
在本发明的一个示例性实施例中,所述组合物为用于抗皮肤老化的组合物,其包含作为活性成分的经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物。
在一方面,本发明涉及一种用于抗皮肤老化的方法,该方法包括,将包含经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物给药于需要抗皮肤老化的受试者。具体地,在本发明的一个示例性实施例中,所述给药可依据本发明中描述的给药方法或给药剂量而定。
在一方面,本发明涉及经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物在抗皮肤老化中的用途。
在一方面,本发明涉及用于皮肤老化的经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物。
在本发明的一个示例性实施例中,所述经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物不仅包含人参和绿茶的混合物的提取物,也包含通过分别提取人参和绿茶而得的人参提取物和绿茶提取物的混合物。
在本发明中,“东方草药炮制”是指,基于传统医学知识加工草药来改变药物的固有特性的方法。东方草药炮制可包括煮、蒸、炒、炙或烧,以降低毒性,维持或增强药性或提高服用便利性。例如,东方草药炮制法包括炒草药、草药与液体辅料一起拌炒以使辅料渗入药物内的炙草药、在合适的容器内药草与液体辅料一起进行蒸和/或蒸至一定程度并干燥的蒸草药等。根据所用的火力强度和所用的辅料进一步细分所述炮制法。举几个例子如下。清炒是用文火或武火将药草炒至预定状态的方法。酒炙是用约15%的酒精拌炒草药的方法,且酒蒸是用约15%的酒精蒸草药的方法。即使是相同的草药在生的状态和加工的状态下一般展示不同的药性和功能。生的草药和加工的草药的组合处方可以提供增强各草药的功效的效果,或者可以通过抵消毒性而获得最大的治疗效果。
在本发明中,术语“经过东方草药炮制”是指通过上述定义的“东方草药炮制”对绿茶或人参进行预处理。具体地,东方草药炮制可以为蒸法或炙法,但不限于此。具体而言,在本发明中,所述“经过东方草药炮制”的绿茶或人参可包括:(a)对绿茶或人参施加高温高压的加工步骤;和(b)干燥经上述加工的绿茶或人参的步骤。然而,并不限于此,也可以使用任何本领域常用的炮制方法。
在本发明中,术语“盐炙”是指用盐水处理时或处理后拌炒草药的方法。例如,可将草药沉浸于盐水后进行拌炒,或草药可以炒至预定程度后喷盐水,然后再次拌炒,但并不限于此。可以使用晒干的盐、岩盐、精制食盐、加工盐或竹盐。但并不限于此,可以使用任何通常可购买到的盐。
在本发明中,术语“炒炭”是指,炒草药的方法之一。例如,它包括将草药炒至表面呈黑色,内部呈褐色或深黄褐色的方法,但并不限于此。
在本发明中,术语“醋炙”是指,用醋处理的同时或之后拌炒草药的方法。例如,将草药浸泡在米醋后可以拌炒,或者可以捣碎草药并放入容器内拌炒后、当表面变光滑或臭味消失时喷洒米醋并拌炒,但并不限于此。所述醋可以为酿造醋、谷物醋、果实醋或合成醋。然而,并不局限于此,也任何使用通常可购买到的任何醋。
在本发明中,术语“酒蒸”是指,以酒蒸草药的方法。例如,可以将草药与黄酒混合后进行蒸制,但并不限于此。所述酒包括酿造酒、蒸馏酒、混合酒、黄酒、淸酒等,但不限于此。
在本发明中,“姜炙”是指,用姜汁处理的同时或处理后拌炒或煮制草药的方法。例如,将草药浸泡在姜汁后可以拌炒,或可与姜片一起煮、待姜汁完全吸收后干燥之,但不限于此。所述姜可以为通常可买到的生姜。
在本发明中,术语“蜜炙”是指,用蜂蜜处理的同时或处理后拌炒草药的方法。例如,草药可与精制蜂蜜(炼蜜)混合直到蜂蜜渗入草药后拌炒。又或,炒完草药后、加入精制蜂蜜而后迅速搅拌炒制,但并不限于此。炼蜜(精制蜂蜜)是指用文火煮沸蜂蜜直至水分消失的蜂蜜。所述蜂蜜可以为槐花蜜、油菜蜜或传统蜜。然而,并不限于此,也可以使用通常可购买到的任何蜂蜜。
在本发明中,“人参”可以为任何干燥或未干燥的人参,不管其种类或栽培年限。在本发明中,所述人参可以是人参的任何部分。具体地,可以使用根部。
在本发明中,“绿茶”可以为任何干燥或者未干燥的绿茶,不管其种类或年限。在本发明中,所述绿茶可以是绿茶的任何部分。具体地,可以使用叶子。
在本发明中,术语“抗老化”包括抑制或减轻雀斑、活斑点或雀斑样痣,抑制或减轻皮肤皱纹,改善皮肤皱纹,或延迟或减缓生物随时间的变化。
根据本发明一个示例性实施例的组合物包含“经过东方草药炮制的”绿茶提取物和“经过东方草药炮制的”人参提取物,且与绿茶提取物及人参提取物的一般混合物相比,所述组合物展现出显著优异的抗老化效果。
在本发明的一个示例性实施例中,所述组合物可以抑制皮肤皱纹的形成或改善皮肤皱纹。在本发明的一个示例性实施例中,所述组合物可以通过促进前胶原的生成和抑制胶原酶的表达来抑制皮肤皱纹的形成或改善皮肤皱纹。
在一方面,本发明可以涉及一种用于抑制皮肤皱纹或改善皮肤皱纹的方法,该方法包括,将经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物给药于有需要抑制皮肤皱纹的形成或改善皮肤皱纹的受试者。
在一方面,本发明可以涉及经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物在抑制皮肤皱纹的形成或改善皮肤皱纹中的用途。
在本发明的一个示例性实施例中,本组合物可以抑制胶原酶的表达。
在本发明的一个示例性实施例中,所述组合物可以为用于保湿皮肤的组合物,该组合物包含作为活性成分的经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物。根据本发明一个示例性实施例的组合物可以通过促进角质形成细胞中丝聚蛋白的表达来增加皮肤中的水含量,且甚至用所述组合物处理后经过很长一段时间后,仍可以保持所述皮肤保湿效果。
在一方面,本发明可以涉及用于保湿皮肤的方法,该方法包括,将经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物给药于有需要保湿皮肤的受试者。
在一方面,本发明可以涉及经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物在保湿皮肤中的用途。
在一方面,本发明可以涉及用于保湿皮肤的经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物。
根据本发明的组合物,其包含所述“经过东方草药炮制”的绿茶提取物和所述“经过东方草药炮制”的人参提取物,由于它们的协同效应,与绿茶提取物和人参提取物的一般混合物相比,表现出显著优异的保湿效果。
在本发明的一个示例性实施例中,所述组合物可增强皮肤的屏障功能,并诱导在皮肤中角质形成细胞的分化。因此,所述组合物可有效地用作皮肤外用组合物,该组合物可以防止或改善因不完全的表皮分化所引起的干皮症、特应性皮炎、接触性皮炎、牛皮癣等。
在本发明的一个示例性实施例中,所述经过东方草药炮制的人参提取物可包含括人参多醣。
在本发明的一个示例性实施例中,所述人参多醣可以为选自盐炙人参多醣、炒炭人参多醣、醋炙人参多醣、酒蒸人参多醣、姜炙人参多醣、和蜜炙人参多醣中的一种或多种。
在本发明中,术语“人参多醣”是指,具有约34,600的分子量的果胶状多醣,其中半乳糖醛酸占约60%、此外由阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖等组成侧链(从属残基)。
在本发明的一个示例性实施例中,所述经过东方草药炮制的绿茶提取物可以包括绿茶多醣。
在本发明中,术语“绿茶多醣”是指源自绿茶的多醣,它是一种酸性多醣,与其它植物中发现的多醣不同。它是一种由光合作用产生的糖与氨基酸结合的产物。
在本发明的一个示例性实施例中,所述绿茶多糖可以为选自盐炙绿茶多醣、炒炭绿茶多醣、醋炙绿茶多醣、酒蒸绿茶多醣、姜炙绿茶多醣、和蜜炙绿茶多醣中的一种或多种。
本发明的多醣可以根据本领域中已知的方法来制备,该方法不受特别限制。具体地,所述人参多醣或绿茶多醣可以如下过程获得:在38-42℃下提取人参或绿茶叶,浓缩所得提取物,通过过滤去除杂质,其中滴入乙醇且用热空气干燥而。
在本发明中,所述盐炙人参多醣或盐炙绿茶多醣可以通过以下过程获得:将人参或绿茶叶与盐水混合,在100-180℃下拌炒所得混合物10分钟至1小时,提取并浓缩所得混合物,通过过滤移除杂质,滴入乙醇且干燥该产物。
在本发明中,炒炭人参多醣或炒炭绿茶多醣可以通过如下过程获得:在230-300℃下炭化人参或绿茶叶的表面后,进行冷却、提取和浓缩,通过过滤去除杂质,滴入乙醇,并干燥该产物。
在本发明中,醋炙人参多醣或醋炙绿茶多醣可以通过如下过程获得:使人参或绿茶叶吸收醋后,在100-160℃下炒至10分钟~1小时后,进行干燥、提取并浓缩,通过过滤去除杂质,滴入乙醇,且干燥该产物。
在本发明中,酒蒸人参多醣或酒蒸绿茶多醣可以通过如下过程获得:将人参或绿茶叶浸渍于酒中并蒸制30分钟~2小时后,进行干燥、提取和浓缩,通过过滤去除杂质,滴入乙醇,且干燥该产物。
在本发明中,姜炙人参多醣或姜炙绿茶多醣可以通过如下过程获得:将姜汁喷洒于人参或绿茶叶上并在100-180℃下拌炒至10分钟~1小时后,进行干燥、提取和浓缩,通过过滤去除杂质,滴入乙醇,且干燥该产物。
在本发明中,蜜炙人参多醣或蜜炙绿茶多醣可以通过如下过程获得:使人参或绿茶叶吸收蜂蜜,并在100-160℃下拌炒至10分钟~1小时后,进行干燥、提取和浓缩,通过过滤去除杂质,滴入乙醇,且干燥该产物。
在本发明的一个示例性实施例中,所述经过东方草药炮制的人参提取物与所述经过东方草药炮制的绿茶提取物的重量比可以为0.1~10:1。这两种成分在该重量比下可最大程度地发挥协同作用。更具体地,所述经过东方草药炮制的人参提取物与所述经过东方草药炮制的绿茶提取物的重量比可以为0.5-9.5:1、1-9:1或1.5-8.5:1。
在本发明的一个示例性实施例中,所述组合物可分别包含占所述组合物总重量的0.001-10wt%的所述经过东方草药炮制的人参提取物和所述经过东方草药炮制的绿茶提取物。当所述提取物的含量小于0.001wt%时,改善皮肤皱纹和保湿的效果可甚微。而且,即便所述含量超过10wt%,所期望的效果不会有显著增加。更具体地,本发明的组合物可分别包含占所述组合物总重量的0.005-9.5wt%、0.01-9wt%、0.03-8.5wt%、0.05-8wt%、0.07-7.5wt%、0.09-7wt%、0.1-6.5wt%、0.3-6wt%、0.5-5.5wt%或0.7-5wt%的所述经过东方草药炮制的人参提取物和所述经过东方草药炮制的绿茶提取物。
在本发明的一个示例性实施例中,所述组合物可以为化妆品组合物。
根据本发明的化妆品组合物可以为适于局部应用的任何剂型。例如,它可以为溶液、水包油乳液、油包水乳液、悬浮液、固体、凝胶、粉末、糊剂、泡沫剂或喷雾剂。根据本领域常用的方法制备,可以制备这种制剂。
根据本发明的化妆品组合物还可包含其它成分,所述其它成分在不对主要效果产生不利影响的范围内可向主要效果提供协同效应。此外,根据本发明的化妆品组合物可进一步包含保湿剂、润肤剂、紫外线吸收剂、防腐剂、消毒剂、抗氧化剂、pH调节剂、有机或无机颜料、香料、清凉剂或除臭剂。这些成分的添加量在其添加量不会对本发明的效果产生不利影响的范围内可由本领域的技术人员容易确定。具体地,所述其它成分的含量可以为基于所述组合物总重量的0.01~5wt%、更具体为0.01-3wt%。
在本发明的一个示例性实施例中,所述组合物可以为药物组合物。
根据本发明的药物组合物可通过向所述活性成分添加常用的无机或有机载体来制备成固体、半固体或液体状态的口服或肠胃外给药剂型。
口服剂型可包括片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊、粉剂、细粉剂、粉剂、乳剂、糖浆、丸粒等。而且,肠胃外给药剂型可包括注射剂、滴剂、软膏、洗剂、喷雾剂、悬浮液剂、乳剂、栓剂等。根据常用的方法可以容易地制备所述剂型,且适当地使用表面活性剂、赋形剂、着色剂、香料、防腐剂、稳定剂、缓冲剂、悬浮剂或其它常用的辅料。
根据本发明的药物组合物可通过口服或胃肠外给药,例如,直肠给药、局部给药、经皮给药、静脉内给药、肌肉内给药、腹膜内给药、皮下给药等。
所述药物组合物的活性成分的给药剂量可根据患者的年龄、性别和体重、病理状况和严重程度、给药途径或诊断者的判断不同而不同。基于这些因素,本领域的技术人员可确定所述给药剂量。每日给药剂量可以为,例如,0.1~100mg/kg/天、更具体为5-50mg/kg/天,但不限于此。
【实施例】
下面,将通过实施例详细地描述本发明。然而,下列实施例仅作为说明为目的而使用,并且对本领域技术人员来说显而易见的是,本发明的范围并不受这些实施例的限制。
[对比实施例1]人参多醣的制备
用搅拌机粉碎1公斤的干白参。待加入10升纯净水后,用40℃温水提取24小时,同时进行搅拌,在15℃下将所得提取物静置一天。然后,通过滤布过滤并离心分离后,将残余物与滤液分离。将分离的滤液减压浓缩至所述纯净水体积的十分之一。然后,滴入所述浓缩物体积的4倍的乙醇后,将产物用热空气干燥,从而获得65克人参多醣。
[对比实施例2]绿茶多醣的制备
用搅拌机粉碎1公斤初制加工(炒制过程)的绿茶叶。加入10升纯净水,并用40℃温水提取24小时,同时进行搅拌后,将所得提取物在15℃下静置一天。然后,通过滤布过滤和离心分离后,将残余物与滤液分离。将分离的滤液减压浓缩至所述纯净水体积的十分之一。然后,滴入所述浓缩物体积的4倍的乙醇,将产物用热空气干燥,从而获得72克绿茶多醣。
[对比实施例3]含有人参多醣(红参多醣)的经过东方草药炮制的人参提取物的制备
在97℃压力容器内蒸熟未干燥的新鲜人参约4小时。用65℃热空气干燥蒸过的新鲜人参后,使用搅拌机粉碎1公斤的经过东方草药炮制的人参。加入10升纯净水,并用40℃温水搅拌提取24小时后,将所得提取物在15℃下静置一天。然后,通过滤布过滤和离心分离后,将残余物与滤液分离。将分离的滤液减压浓缩至所述纯净水体积的十分之一。然后,滴入所述浓缩物体积的4倍的乙醇后,将产物用热空气干燥,从而得到70克经过东方草药炮制的人参多醣(红参多醣)。
[对比实施例4]含有绿茶多醣的经过东方草药炮制的绿茶提取物的制备
将经过初制加工(炒制过程)的绿茶叶在97℃压力容器内蒸熟约4小时。用65℃热空气干燥该蒸过的绿茶叶后,用搅拌器粉碎1kg的经过东方草药炮制的绿茶叶。加入10升纯净水,并在40℃用温水提取24小时,同时进行搅拌后,将所得提取物在15℃下静置一天。然后,通过滤布过滤和离心分离后,将残余物与滤液分离。将分离的滤液减压浓缩至所述纯净水体积的十分之一。然后,滴入所述浓缩物体积的4倍的乙醇后,将产物用热空气干燥,得到70克经过东方草药炮制的绿茶多醣。
[对比实施例5]人参提取物和绿茶提取物的混合物的制备
以1:1的比例简单地混合对比实施例1中所制备的人参多醣和对比实施例2中所制备的绿茶多醣。
[实施例1]盐炙混合多醣的制备
将50wt%的干燥人参和50wt%的经初制加工(炒制过程)的绿茶与盐水(2-3%)充分混合,将其密封并静置,直至盐水完全被吸收。在140℃下将所得人参和绿茶的混合物拌炒40分钟,然后在阴凉处干燥。用搅拌机粉碎1公斤的所述经过东方草药炮制的人参和绿茶的混合物。添加10升的纯净水,并回流萃取3次后,将所得提取物在15℃下静置一天。然后,通过滤布过滤和离心分离后,将残余物与滤液分离。将分离的滤液减压浓缩至所述纯净水体积的十分之一。然后,滴入所述浓缩物体积的4倍的乙醇后,用热空气干燥产物,得到70克人参多醣和绿茶多醣的混合物(盐炙混合多醣)。
[实施例2]炒炭混合多醣的制备
在270℃下对50wt%的干燥人参和50wt%的经初制加工(炒制过程)的绿茶进行炭化。当表面颜色变成黑色时,停止加热并将产物冷却至室温。用搅拌机粉碎1公斤的所述经加工的人参和绿茶的混合物。添加10升的纯净水,并回流萃取3次后,将所得提取物在15℃下静置一天。然后,通过滤布过滤和离心分离后,将残余物与滤液分离。将分离的滤液减压浓缩至所述纯净水体积的十分之一。然后,滴入所述浓缩物体积的4倍的乙醇,将产物用热空气干燥,从而获得72克的人参多醣和绿茶多醣的混合物(炒炭混合多醣)。
[实施例3]醋炙混合多醣的制备
在50wt%的干燥人参和50wt%的经初制加工(炒制过程)绿茶的混合物中,充分吸收250克醋。在130℃下拌炒40分钟后,将产物在阴凉处干燥。用搅拌机粉碎1公斤的所述经加工的人参和绿茶的混合物。添加10升的纯净水,并回流萃取3次后,将所得提取物在15℃下静置一天。然后,通过滤布过滤和离心分离后,将残余物与滤液分离。将分离的滤液减压浓缩至所述纯净水体积的十分之一。然后,滴入所述浓缩物体积的4倍的乙醇后,用热空气干燥产物,得到70克的人参多醣和绿茶多醣的混合物(醋炙混合多醣)。
[实施例4]酒蒸混合多醣的制备
在黄酒中浸泡50wt%的干燥人参和50wt%的经初制加工(炒制过程)绿茶的混合物后,蒸制1小时20分钟,然后在阴凉处干燥。用搅拌机粉碎1公斤的所述经加工的人参和绿茶的混合物。添加10升的纯净水,并回流萃取3次后,将所得提取物在15℃下静置一天。然后,通过滤布过滤和离心分离后,将残余物与滤液分离。将分离的滤液减压浓缩至所述纯净水体积的十分之一。然后,滴入所述浓缩物体积的4倍的乙醇后,将产物用热空气干燥,从而获得77克的人参多醣和绿茶多醣的混合物(酒蒸混合多醣)。
[实施例5]姜炙混合多醣的制备
磨碎新鲜的生姜后,混合2倍体积的水,而后压榨混合物。这个过程重复2-3次以制备姜汁。将所述姜汁(占人参的10-15wt%)喷洒在50wt%干燥人参和50wt%的经初制加工(炒制过程)绿茶的混合物后,在140℃拌炒该浸渍有姜汁的混合物40分钟,然后在阴凉处干燥。用搅拌机粉碎1公斤的所述经加工的人参和绿茶的混合物。添加10升的纯化水,并回流萃取3次后,将所得提取物在15℃下静置一天。然后,通过滤布过滤和离心分离后,将残余物与滤液分离。将分离的滤液减压浓缩至所述纯净水体积的十分之一。然后,滴入所述浓缩物体积的4倍的乙醇后,将产物用热空气干燥,得到70克的人参多醣和绿茶多醣的混合物(姜炙混合多醣)。
[实施例6]蜜炙混合多醣的制备
使50wt%干燥人参和50wt%的经初制加工(炒制过程)绿茶的混合物充分地吸收蜂蜜(占人参的20-30wt%)后,将混合物在130℃下拌炒40分钟,然后在阴凉处干燥。用搅拌机粉碎1公斤的所述经加工的人参和绿茶的混合物。添加10升的纯化水,并回流萃取3次后,将所得提取物在15℃放置一天。然后,通过滤布过滤和离心分离后,将残余物与滤液分离。将分离的滤液减压浓缩至所述纯净水体积的十分之一。然后,滴入所述浓缩物体积的4倍的乙醇后,将产物用热空气干燥,从而获得75克的人参多醣和绿茶多醣的混合物(蜜炙混合多醣)。
[测试实施例1]抑制胶原酶表达的效果的测量
将对比实施例和实施例中的物质的胶原酶生成抑制活性与作为对照组的生育酚和儿茶素(EGCG)进行比较。
将人成纤维细胞接种于96孔板上,其中包含含有2.5%胎牛血清的DMEM培养基,每孔5,000个细胞,并培养至约90%汇合(confluency)。将细胞进一步在无血清DMEM培养基内培养24小时,并用10-4M的对比实施例1-5和实施例1-6中制备的经东方草药炮制的人参多醣和绿茶多醣的混合物处理无血清DMEM培养基24小时。然后收集细胞培养液。
使用可购买的胶原酶试剂盒(Amersham制药公司,美国)对所收集的细胞培养物中的胶原酶生成的程度进行测定。首先,将细胞培养液加入到均匀涂抹有初次胶原酶抗体的96孔板上,并在恒温孵化器内进行抗原-抗体反应3小时。
待3个小时后,将结合有发色团的二次胶原抗体加入到96孔板中,并进行15分钟的反应。十五分钟后,在室温下加入显色剂,以诱导显色15分钟。然后,加入1M硫酸,以停止反应(显色)。在所述96孔板上表现出黄色,且黄色深浅程度的变化依赖于反应的进度。
使用分光光度计在405nm下测定吸光度,且根据公式1计算胶原酶的表达水平。
计算相对于所述未处理的对照组的表达水平。
[公式1]
胶原酶(%)的表达水平=100-{(用对比实施例或实施例的物质处理过的细胞的吸光度÷对照组的吸光度)×100}
在表1中展示了相对于未处理组的胶原酶表达水平设定为100时的、作为所述胶原酶表达水平的人成纤维细胞中所述测试物质的胶原酶表达抑制效果。
[表1]
物质 (%)胶原酶表达水平
未处理组 100
生育酚(阳性对照) 76
儿茶素(阳性对照) 63
对比实施例1 79
对比实施例2 77
对比实施例3 77
对比实施例4 74
对比实施例5 77
实施例1 66
实施例2 67
实施例3 66
实施例4 64
实施例5 69
实施例6 64
由此确认,本发明的经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物可以在体外抑制胶原酶的表达。
另外,从表1中可知,包含两种经东方草药炮制的提取物的实施例1-6与对比实施例相比显示出更好的胶原酶抑制效果。尤其,它们比对比实施例5表现出更好的胶原酶抑制的效果。另外,实施例1-6的胶原酶表达抑制效果甚至比作为所述阳性对照的生育酚更好。
[测试实施例2]前胶原生成促进效果的测试
将对比实施例和实施例的前胶原生成促进物质的活性与维生素C进行比较。
将人成纤维细胞接种到96孔板上,其中包含含有2.5%胎牛血清的DMEM培养基,且5,000个细胞/孔,并培养至约90%汇合。将细胞进一步在无血清DMEM培养基内培养24小时,并用以10-4M的浓度溶解于无血清DMEM培养基内的对比实施例1-5和实施例1-6中所制备的经过东方草药炮制的人参多醣和绿茶多醣的混合物、以及维生素C处理24小时。待24小时后,通过使用所述前胶原1型C-肽EIA试剂盒(MK101,Takara,日本)测定游离的前胶原的量。
在表2中提供了相对于未处理组的前胶原生成水平设定为100时的经组合物处理的前胶原生成水平。
[表2]
物质 前胶原生成水平(%)
未处理 100
维生素C 121
对比实施例1 110
对比实施例2 106
对比实施例3 111
对比实施例4 108
对比实施例5 108
实施例1 119
实施例2 119
实施例3 120
实施例4 123
实施例5 118
实施例6 122
前胶原生成水平越高,胶原蛋白的生成水平也越高,从而能防止皮肤皱纹的形成。
由此可确认,实施例1-6的物质促进前胶原的体外生成,而其效果与被知晓为胶原合成所必需的维生素C相当。特别是,与对比实施例1-5相比,实施例1-6的物质表现出更优异的促进前胶原生成效果。
[测试实施例3]对人角质形成细胞的分化诱导效果的测试
通过测定吸光度来评估对比实施例和实施例中的物质的皮肤屏障功能和皮肤的保湿能力。
将初次培养的人角质形成细胞(从海德堡德国癌症研究中心Fusenig博士获得,德国)粘附在培养瓶的底部上,并添加如表3中所述的测试物质后,培养5天,直到形成约70-80%汇合。收集细胞,用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗,加入1毫升的含有2%SDS和20mM DTT的10mM Tris-HCl缓冲液(pH7.4)之后用超声波处理3分钟,然后煮10分钟。紧接着,用1,200rpm离心30分钟后,将所得沉淀物重新悬浮于1毫升的PBS中,并在340nm处测定吸光度。另外,待超声波处理后取部分的所述溶液,并测定蛋白含量作为细胞分化的量度基准。低钙(0.03mM)组和高钙(1.2mM)组分别作为阴性组和阳性组。将对比实施例1-5和实施例1-6中的物质加入到所述低钙组用作试验组。试验结果显示于表3中。
[表3]
结果表明,通过测定在分化过程中产生的角化包膜(CE)的量,可确定实施例1-6的经东方草药炮制的提取物的混合物能够促进角质形成细胞的分化。另外,可以确定,实施例的经过东方草药炮制的提取物的混合物与对比实施例相比表现出更优异的诱导角质形成细胞的分化的效果。由此可见,本发明的组合物的增强皮肤的屏障功能和保湿皮肤的效果更佳。
[测试实施例4]通过RT-PCR分析测定丝聚蛋白的表达
测定丝聚蛋白的表达水平,以评估对比实施例和实施例的物质的皮肤保湿能力。
从德国癌症研究中心N.E.Fusenig博士取得的人角质形成细胞HaCaT细胞株。将1×105个细胞分布于60mm培养皿上。待培养一天后,用表4中所述的测试物质处理细胞,然后培养24小时。通过使用试剂(美国Gibco公司实验室)从培养的细胞中提取总RNA,然后一步法反转录PCR试剂盒(AMV,日本Takara Bio公司)进行RT-PCR分析。使用丝聚蛋白引物(韩国Bioneer公司),且用β-肌动蛋白作为内对照组对表达水平进行比较。结果列于表4,其中对照组设为100。
[表4]
如从表4中可见,可以确认的是实施例1-6的物质促进在角质形成细胞中丝聚蛋白的表达。特别是,与对比实施例1-5中的物质相比,实施例1-6中的物质表现出显著优异的促进丝聚蛋白表达的效果。由此可见,本发明的组合物可有效地促进天然皮肤保湿因子的生成,并强化皮肤的保湿能力。
[测试实施例5]皮肤保湿效果的测量
在表5和表6中描述剂型实施例1-6(表5)和对比实施例1-5(表6)的滋养面霜。成分单位为wt%。
[表5]
[表6]
为了评估实施例1-6物质的皮肤保湿效果,使用表5和表6的实施例1-6和对比实施例1-5的滋养霜进行如下测试。将110名的30岁至30多岁健康女性分成11组,每组各10名,并在24-26℃和75%湿度的条件下,一天用实施例1-6和对比实施例1-5的滋养霜两次,持续使用4周。在恒温和恒湿(24-26℃和75%湿度)的条件下,通过使用皮肤测试仪测量使用前、开始使用后经过1,2和4周及停止使用2周(总共经过6周)后的皮肤水分含量。基于使用前用皮肤测试仪测得的值,在表7中展示了其结果。
[表7]
从表7可知,与对比实施例1-5相比,含有本发明实施例1-6的经过东方草药炮制的提取物的滋养霜显著地增加皮肤中的水含量。在停止使用2周后,即6周后测得的水含量与开始使用1~2周后的水含量相似,由此可确认,即使停止使用测试物质,实施例1-6仍可使皮肤保湿效果保持一定时间。由此可知,本发明的组合物可提供改进的皮肤保湿效果。
在下文中,本发明将被详细地通过制剂实施例说明。但是,下面的制剂实施例仅用于说明之目的,并且本发明的范围并不局限于制剂实施例,这对所属技术领域中具有通常知识者而言系显而易。
[剂型实施例1]软胶囊
混合150毫克经过东方草药炮制的人参提取物、150毫克经过东方草药炮制的绿茶提取物、2毫克棕榈油、8毫克氢化棕榈油、4毫克黄蜡和6毫克卵磷脂,然后填充到胶囊中,每胶囊400毫克。
[剂型实施例2]片剂
通过混合150毫克经过东方草药炮制的人参提取物、150毫克经过东方草药炮制的绿茶提取物、100毫克葡萄糖、50毫克红参提取物、96毫克淀粉和4毫克硬脂酸镁,并加入40毫克30%的乙醇,来形成颗粒。在60℃干燥所述颗粒,并加工成片剂。
[剂型实施例3]颗粒剂
通过混合150毫克经过东方草药炮制的人参提取物、150毫克经过东方草药炮制的绿茶提取物、100毫克葡萄糖、50毫克的红参提取物和600毫克的淀粉,并加入100毫克30%的乙醇,来形成颗粒。将颗粒装袋,每袋1克。
[剂型实施例4]柔肤水(化妆水)
按照常用的方法,用表8所述的组合物制备柔肤化妆水。
[表8]
[剂型实施例5]滋养化妆水(营养乳液)
按照常用的方法,用表9中所描述的组合物制备成滋养化妆水。
[表9]
[剂型实施例6]滋养霜
根据常用的方法,用表10中所述的组合物制备成滋养霜。
[表10]
[剂型实施例7]按摩霜
根据常用的方法,用表11中所述的组合物制备按摩霜。
[表11]
[剂型实施例8]面膜
按照常用的方法,用表12中所述的组合物制备面膜。
[表12]
[剂型实施例9]软膏
根据常用的方法,用表13中所述的组合物制备软膏。
[表13]
尽管已经列出和描述典型实施例,但是对此领域之熟悉技艺者可以理解在形式和细节上的各种变化,均不脱离本发明的精义和所附的发明申请专利范围。此外,依据本发明的教导,可以作许多修改,以符合特定情况或材料,而不偏离其基本范围。因此,本发明不限于作为最佳模式的特定典型实施例,而是本发明将包括落入所附发明申请专利范围内的所有实施方式。

Claims (9)

1.一种组合物,其包含一种或多种选自以下的经过东方草药炮制的人参提取物和绿茶提取物的混合物:盐炙人参多醣和盐炙绿茶多醣的混合物;炒炭人参多醣和炒炭绿茶多醣的混合物;醋炙人参多醣和醋炙绿茶多醣的混合物;酒蒸人参多醣和酒蒸绿茶多醣的混合物;姜炙人参多醣和姜炙绿茶多醣的混合物;以及蜜炙人参多醣和蜜炙绿茶多醣的混合物。
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述组合物为用于抗皮肤老化的组合物,该组合物包含作为活性成分的所述经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物。
3.根据权利要求2所述的组合物,其特征在于,所述组合物为用于抑制皮肤皱纹形成或改善皮肤皱纹的组合物。
4.根据权利要求2所述的组合物,其特征在于,所述组合物抑制胶原酶的表达。
5.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述组合物为用于皮肤保湿的组合物,该组合物包含作为活性成分的所述经过东方草药炮制的人参提取物和经过东方草药炮制的绿茶提取物的混合物。
6.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述经过东方草药炮制的人参提取物与所述经过东方草药炮制的绿茶提取物的重量比为0.1〜10:1。
7.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述组合物分别包含占所述组合物总重量的0.001-10wt%的所述经过东方草药炮制的人参提取物和所述经过东方草药炮制的绿茶提取物。
8.根据权利要求1~7中任一项所述的组合物,其特征在于,所述组合物为化妆品组合物。
9.根据权利要求1~7中任一项所述的组合物,其特征在于,组合物为药物组合物。
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