JP6581570B2 - 炮製抽出物を含む組成物 - Google Patents

Description

本発明は、炮製処理高麗人蔘の抽出物および炮製処理緑茶の抽出物を含む組成物に関する。

皮膚の外形は、真皮組織の細胞外基質（ＥＣＭ；ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕａｒ ｍａｔｒｉｘ）成分が担っているが、ＥＣＭ全体の約７０〜８０％を占めているのがコラーゲンである。皮膚のシワの生成は、老化や紫外線等によって誘発されるコラーゲンの生成低下や破壊に起因する。特に、コラゲナーゼ（ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）のような基質メタロプロテアーゼ（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏ ｐｒｏｔｅａｓｅ）の発現により、皮膚内において正常的に生成されたコラーゲンが分解されて、シワが生成されることになる。

このようなシワ生成の原因となるコラーゲンの減少を抑制する目的で、いくつかの物質が開発されて使用されているが、レチノールやレチノイン酸といったレチノイド等は、シワ改善効果を示し（Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ ｔｈｅｒａｐｙ，１９９８，１６，ｐ．３５７〜３６４）、麦芽抽出物（ｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ）等を含む組成物は、コラゲナーゼ（ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）の抑制に応用されている。しかし、これらレチノイドは、わずか少量のみ皮膚に適用しても刺激が現れるという短所を持っており、また、天然物由来の原料の大部分は、単なる抽出物の形態で使用されてきており、その抽出物が示す効能が正確にどの物質によるものであるか明らかにされておらず、その抽出物の活性を持続的に維持、制御することが難しいというのが現実である。

一方、皮膚の水分量が減少すると、乾燥による角質化がよく起こる。また、皮膚のツヤが消え、小ジワができやすくなり、皮膚の老化も早くから始まる。すなわち、改善された皮膚を持つためには、皮膚の水分保持が必須である。

本発明者らは、高麗人蔘の炮製抽出物および緑茶の炮製抽出物の混合物が、皮膚におけるシワの生成の抑制またはシワの改善、および皮膚の保湿において、一般的な高麗人蔘と緑茶の抽出物の混合物よりも、非常に優れたシナジー効果を有することを確認し、本発明を完成させるに至った。

韓国特許公開第１０−２０１１−００９８１２４号公報 韓国特許公開第１０−２０１３−００４８２８２号公報 韓国特許公開第１０−２００９−００５６２９６号公報 韓国特許公開第１０−２０１１−０１３１７８４号公報 韓国特許公開第１０−２００１−００３５４０９号公報 韓国特許公開第１０−２０１４−００４９３４１号公報

本発明の目的は、天然物の炮製抽出物を含む組成物を提供することである。

前記目的を達成するために、本発明は、炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物を含む組成物を提供する。

本発明の組成物は、炮製処理した高麗人蔘抽出物と炮製処理した緑茶抽出物の混合物を含むことから、炮製処理していないそれぞれの抽出物の混合物または炮製処理したそれぞれの抽出物よりも、顕著に優れた抗老化効果または保湿効果を有する。具体的に、本発明の組成物は、それぞれの炮製処理抽出物の混合によりシナジー効果を有するようになることから、プロコラーゲンの生成を促進し、コラゲナーゼの発現を抑制することができる。また、本発明の組成物は、フィラグリンの発現を促進して、皮膚バリア機能を強化させ、皮膚角質形成細胞の分化を誘導することができる。また、本発明の組成物は、天然抽出物を含むことから、毒性および刺激がほとんどなく、長期間の使用時にも副作用がほとんどない。

それゆえ、本発明の組成物は、皮膚の全体的な状態を改善させることができ、表皮の分化不完全によって発生する皮膚乾燥症、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎または乾癬等を予防または改善する皮膚外用剤組成物として有用に使用されてよい。

２０１３年５月３１日に出願された韓国特許出願番号１０‐２０１３‐００６２３７４号は、すべての目的により全体が本明細書に参照として含まれる。また、本出願は、その全体が本明細書で参照として含まれる韓国特許出願番号１０‐２０１３‐００６２３７４号の利益を主張する。

本発明は、一観点において、炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物を含む組成物に関する。

本発明の一観点である組成物において、前記組成物は、皮膚外用剤組成物を含む。

本発明の一観点である組成物でおいて、前記組成物は、炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物を有効成分として含む皮膚抗老化用組成物を含む。

本発明は、一観点において、皮膚抗老化が必要な個体に炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物を投与することを含む皮膚抗老化方法に関するものであってよい。

本発明は、一観点において、炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の皮膚抗老化用途に関するものであってよい。

本発明は、一観点において、皮膚抗老化に用いるための 炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物に関するものであってよい。

本発明の一観点において、炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物は、高麗人蔘と緑茶を混合して抽出して得られた混合抽出物だけでなく、高麗人蔘と緑茶を別個に抽出して得られたそれぞれの高麗人蔘抽出物および緑茶抽出物の混合物も含むものである。

本明細書において、「炮製」とは、韓方理論を根拠として薬剤を加工処理することで薬剤本来の性質を変化させる製薬技術を意味する。炮製は、薬剤の毒性減少や、薬剤の薬性保全、薬性増進、薬剤の服用利便性増進のために、煮たり、蒸したり、火で炒めたり、火で焼いたり、熱したりする過程を含んでよい。併せて、炮製法は、たとえば、薬剤を炒める炒法、薬剤を一定量の液体補助材料とともに炒めることで補助材料を薬物組織内に染み込ませる炙法、薬剤各項目の炮製規定に従って液体補助材料を入れ、混ぜて適当な容器の中で加熱して蒸したり、一定の程度になるまで蒸して乾かしたりする蒸法等がある。

炮製法は、火の強さ、使用する補量に応じてより細分化されるが、そのいくつかの例を挙げると、次のとおりである。清炒法は、文火（炎の弱い火）または武火（炎の強い火）で、規定された程度になるまで薬剤を炒める方法である。酒炙法は、約１５％の酒精を使用して薬剤を炒める方法であり、酒蒸法は、約１５％の酒精を使用して薬剤を蒸す方法である。同一の薬用植物であるとしても、生材と熟材の性質が同じでないか、または作用の違いが出る場合がある。

また、生材と熟材を適切に組み合わせた複合処方は、各薬剤の薬効を相乗させたり毒性を相殺したりすることから、治療効果を極大化させることができる。

本明細書において、「炮製処理」とは、緑茶または高麗人蔘を、前記定義した「炮製」によって前処理することを意味し、具体的に、前記の炮製法のうち蒸法、炙法を利用するが、これらに制限されるものではなく、前記炮製法を制限なしに使用して遂行することができる。具体的に、本明細書において「炮製処理」は、緑茶または高麗人蔘を、ａ）高温高圧を加える工程を含む加工ステップ；およびｂ）前記加工された緑茶または高麗人蔘を乾燥するステップを含む工程で製造されてよいが、これに限定されるものではなく、当業界において一般的に使用する炮製法であれば使用可能である。

本明細書において、「塩炙」とは、薬剤に一定量の塩水を処理した後、またはその処理とともに炒める方法を意味し、たとえば、薬剤を塩水に浸してこれを吸収させた後に炒める方法と、薬剤を一定程度炒めた後に塩水を噴射してさらに炒める方法を含んでよいが、これに限定されるものではない。塩は、天日塩、岩塩、再製塩、精製塩または竹塩を含んでよいが、これらに限定されるものではなく、一般的に入手できる塩の種類を含むものである。

本明細書において、「炒炭」とは、薬剤を炒める方法の一つに該当し、たとえば、薬剤の表面は黒く、中は栗色または濃い黄褐色となるように炒めることを含むが、これに限定されるものではない。

本明細書において、「酢炙」とは、薬剤に一定量の食酢を処理した後、またはその処理とともに炒める方法を意味し、たとえば、薬剤を一定量の米酢とともに混ぜてふやかしてから、次容器内で傷める方法や、薬剤を搗砕して容器に入れ、炒めた後、表面に光沢が出たり嫌な臭いが出てきたりしたら、一定量の米酢を噴射して炒める方法を含むが、これらに限定されるものではない。食酢は、醸造酢、穀物酢、果実酢または合成酢を含んでよいが、これらに限定されるものではなく、一般的に入手できる食酢の種類を含むものである。

本明細書において、「酒蒸」とは、薬剤を一定量の酒とともに蒸す方法を意味し、たとえば、薬剤を一定量の黄酒とともに混合した後、蒸し器で蒸す方法を含むが、これに限定されるものではない。酒は、醸造酒、蒸留酒、混成酒、黄酒、清酒等を含むが、これらに限定されるものではない。

本明細書において、「薑炙」は、薬剤に一定量の生姜汁を処理した後、または、その処理とともに炒めたり煮たりなどして処理する方法を意味し、たとえば、薬剤を一定量の生姜汁と一緒に混ぜてふやかしてから容器内で炒める方法や、生姜を切片して煎湯してから、薬剤を入れて沸かした後、生姜湯が完全に吸収されたら取り出して乾燥する方法を含むが、これらに限定されるものではない。生姜は、一般的に入手できる生姜の種類を含む。

本明細書において、「蜜炙」は、薬剤に一定量の蜜を処理した後、またはその処理とともに炒める方法を意味し、たとえば、薬剤を一定量の煉蜜とともに混ぜて放置してから、蜜が組織内染み込んだら容器内で炒める方法や、薬剤を容器に入れ、炒めてから、一定量の煉蜜を入れ、迅速にかき混ぜながら炒める方法を含むが、これらに限定されるものではない。煉蜜は、弱火で水気がなくなるまで煮詰めた蜜である。蜜は、アカシア蜂蜜、菜の花蜂蜜、地場蜂蜜を含むが、これらに限定されるものではなく、一般的に入手できる蜜の種類を含む。

本明細書において、「高麗人蔘」は、その種類および年根に制限なく使用可能であり、乾燥した、または乾燥していない高麗人蔘ともに使用してよい。また、本明細書において、前記高麗人蔘は、その部位に制限なく使用可能であり、具体的に、根を利用してよい。

本明細書において、「緑茶」もまた、その種類および栽培日数に制限なく使用可能であり、乾燥した、または乾燥していない緑茶ともに使用してよい。また、本明細書において、前記緑茶は、その部位に制限なく使用可能であり、具体的に、緑茶の葉を使用してよい。

本明細書において、「抗老化」とは、シミ、黒ズミまたはそばかすの生成抑制および緩和、皮膚シワの生成抑制又は緩和、又は皮膚シワの改善等を含む意味であり、生物体の時間に伴う変化を遅らせたり、緩和させたりすることができるあらゆる現象を含む。

本発明の一観点である組成物は、「炮製処理」した緑茶抽出物と「炮製処理」した高麗人蔘抽出物を含むことから、一般的な緑茶抽出物と高麗人蔘抽出物の混合物よりも顕著に優れた抗老化効果を有する。

本発明の一観点である組成物において、前記組成物は、皮膚のシワの生成を抑制してよく、または皮膚のシワを改善してよい。本発明の一観点である組成物において、前記組成物は、プロコラーゲンの生成を促進し、コラゲナーゼの発現を抑制して、皮膚のシワの生成を抑制してよく、または皮膚シワを改善させてよい。

本発明は、一観点において、皮膚シワの生成抑制又は皮膚シワの改善が必要な個体に炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物を投与することを含む皮膚シワの生成抑制又は皮膚シワの改善方法に関するものであってよい。

本発明は、一観点において、炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物の皮膚シワの生成抑制又は皮膚シワの改善用途に関するものであってよい。

本発明は、一観点において、皮膚シワの生成抑制又は皮膚シワの改善に用いるための炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物に関するものであってよい。

本発明の一観点である組成物において、前記組成物は、コラゲナーゼ（ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）の発現を抑制してよい。

本発明の一観点である組成物において、前記組成物は、炮製処理高麗人蔘の抽出物および炮製処理緑茶の抽出物の混合物を有効成分として含む、皮膚保湿用組成物であってよい。本発明の一観点である組成物は、角質形成細胞におけるフィラグリンの発現を促進して皮膚の水分含有量を高めてよく、組成物の処理後、長時間経過しても皮膚が水分を保つようにして、皮膚の保湿効果を維持させることができる。

本発明は、一観点において、皮膚保湿が必要な個体に炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物を投与することを含む皮膚保湿方法に関するものであってよい。

本発明は、一観点において、炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物の皮膚保湿用途に関するものであってよい。

本発明は、一観点において、皮膚保湿に用いるための炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物に関するものであってよい。

本発明の一観点である組成物は、「炮製処理」した緑茶抽出物と「炮製処理」した高麗人蔘抽出物を含むことから、これらのシナジー効果により、一般的な緑茶抽出物と高麗人蔘抽出物の混合物よりも顕著に優れた保湿効果を有する。

併せて、本発明の一観点である組成物は、皮膚バリア機能を強化させ、皮膚角質形成細胞の分化を誘導させてよい。したがって、表皮の分化不完全によって発生する皮膚乾燥症、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎または乾癬等を予防または改善する皮膚外用剤組成物として有用に使用されてよい。

本発明の一観点である組成物において、前記炮製処理高麗人蔘抽出物は、高麗人蔘多糖体を含んでよい。

本発明の一観点である組成物において、前記高麗人蔘多糖体は、高麗人蔘塩炙多糖体、高麗人蔘炒炭多糖体、高麗人蔘酢炙多糖体、高麗人蔘酒蒸多糖体、高麗人蔘薑炙多糖体および高麗人蔘蜜炙多糖体から構成された群より選択された一つ以上であってよい。

本明細書において、「高麗人蔘多糖体」は、分子量が３４，６００であるペクチン（ｐｅｃｔｉｎ）類似物質であって、ガラクツロン酸（ｇａｌａｃｔｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）が６０％程度を占め、その他、アラビノース、ラムノース、グルコースおよびガラクトース等が側鎖を構成している。

本発明の一観点である組成物において、前記炮製処理緑茶抽出物は、緑茶多糖体を含んでよい。

本明細書において、「緑茶多糖体（Ｇｒｅｅｎ ｔｅａ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）」は、緑茶から由来したものであって他の植物において発見された多糖体とは異なり、酸性多糖体群であって、光合成を通じて作成された糖成分とアミノ酸が結合して生成されたものである。

本発明の一観点である組成物において、前記緑茶多糖体は、緑茶塩炙多糖体、緑茶炒炭多糖体、緑茶酢炙多糖体、緑茶酒蒸多糖体、緑茶薑炙多糖体と緑茶蜜炙多糖体から構成された群より選択された一つ以上であってよい。

本発明の多糖体は、当業界に公知となった方法によって製造してよく、その方法を特に限定しない。具体的に、高麗人蔘または緑茶葉を３８〜４２℃で抽出した後に濃縮し、フィルタで不純物を除去した後、ここにエタノールをドロップワイズ（ｄｒｏｐｗｉｓｅ）方式で添加し、熱風乾燥させて高麗人蔘または緑茶多糖体を得てよい。

本明細書において、高麗人蔘または緑茶の塩炙多糖体は、高麗人蔘または緑茶葉を塩水と混合させ、混合物を１００〜１８０℃で１０分〜１時間炒めた後に抽出する。これを濃縮し、フィルタで不純物を除去した後、エタノールをドロップワイズ方式で添加し、乾燥させる方法を通じて得てよい。

本明細書において、高麗人蔘または緑茶の炒炭多糖体は、高麗人蔘または緑茶葉を２３０〜３００℃で外部を炭化させ、冷ました後に抽出してこれを濃縮し、フィルタで不純物を除去した後、エタノールをドロップワイズ方式で添加して乾燥させる方法を通じて得てよい。

本明細書において、高麗人蔘または緑茶の酢炙多糖体は、高麗人蔘または緑茶葉に食酢を吸収させ、１００〜１６０℃で１０分〜１時間炒めてから、乾燥後に抽出してこれを濃縮し、フィルタで不純物を除去した後、エタノールをドロップワイズ方式で添加して乾燥させる方法を通じて得てよい。

本明細書において、高麗人蔘または緑茶の酒蒸多糖体は、高麗人蔘または緑茶葉を酒に漬け置き、これを３０分〜２時間蒸してから、乾燥した後に抽出してこれを濃縮し、フィルタで不純物を除去した後、エタノールをドロップワイズ方式で添加して乾燥させる方法を通じて得てよい。

本明細書において、高麗人蔘または緑茶の薑炙多糖体は、高麗人蔘または緑茶葉に生姜汁を振りかけ、１００〜１８０℃で１０分〜１時間炒めてから、乾燥後に抽出してこれを濃縮し、フィルタで不純物を除去した後、エタノールをドロップワイズ方式で添加して乾燥させる方法を通じて得てよい。

本明細書において、高麗人蔘または緑茶の蜜炙多糖体は、高麗人蔘または緑茶葉に蜂蜜を吸収させ、１００〜１６０℃で１０分〜１時間炒めてから、乾燥後に抽出してこれを濃縮し、フィルタで不純物を除去した後、エタノールをドロップワイズ方式で添加して乾燥させる方法を通じて得てよい。

本発明の一観点である組成物において、前記炮製処理高麗人蔘の抽出物と炮製処理緑茶の抽出物間の質量比は、０．１〜１０：１であってよい。前記質量比において二つの成分のシナジー効果を極大化させることができる。前記のような観点から、前記炮製処理高麗人蔘の抽出物と炮製処理緑茶の抽出物間の質量比は、０．５〜９．５：１、１〜９：１または１．５〜８．５：１であってよい。

本発明の一観点である組成物において、前記組成物は、炮製処理高麗人蔘の抽出物および炮製処理緑茶の抽出物を、それぞれ組成物の総質量に対して、０．００１〜１０質量％含んでよい。これは、抽出物の含量が０．００１質量％未満であれば、皮膚のシワ改善および保湿の効果が微々たるものとなり、１０質量％を超えると、含有量増加に伴う明らかな効果の増加が示されないためである。前記のような観点から、前記組成物は、炮製処理高麗人蔘の抽出物および炮製処理緑茶の抽出物を、それぞれ組成物の総質量に対して、０．００５〜９．５質量％、０．０１〜９質量％、０．０３〜８．５質量％、０．０５〜８質量％、０．０７〜７．５質量％、０．０９〜７質量％、０．１〜６．５質量％、０．３〜６質量％、０．５〜５．５質量％、または０．７〜５質量％含んでよい。

本発明の一観点である組成物において、前記組成物は、化粧料組成物を含む。

本発明に係る化粧料組成物は、局所適用に適合したあらゆる剤形で提供されてよい。たとえば、溶液、水相に油相を分散させて得たエマルジョン、油相に水相を分散させて得たエマルジョン、懸濁液、固体、ゲル、粉末、ペースト、泡沫（ｆｏａｍ）またはエアロゾル組成物の剤形で提供されてよい。このような剤形の組成物は、当該分野における通常の方法に従って製造されてよい。

本発明に係る化粧料組成物は、前記物質以外に、主効果を損なわない範囲内で、好ましくは、主効果に相乗効果を与え得る他の成分を含んでよい。また、本発明に係る化粧料組成物は、保湿剤、エモリエント剤、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、有機および無機顔料、香料、冷感製または制汗剤をさらに含んでよい。前記成分の配合量は、本発明の目的および効果を損なわない範囲内で当業者が容易に選定可能であり、その配合量は、組成物全体の質量を基準として０．０１〜５質量％、具体的に０．０１〜３質量％であってよい。

本発明の一観点である組成物において、前記組成物は、薬学組成物を含む。

本発明に係る組成物を医薬品に適用する場合には、前記組成物を有効成分として、常用される無機または有機の担体を加えて、固体、半固体または液状の形で経口投与剤あるいは非経口投与剤として製剤化してよい。

前記経口投与のための剤材としては、錠剤、丸剤、顆粒剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、粉剤、乳濁剤、シロップ剤、ペレット剤等を挙げることができる。また、前記非経口投与のための剤材としては、注射剤、点滴剤、軟膏、ローション、スプレー、懸濁剤、乳剤、坐剤等を挙げることができる。本発明の有効成分を製剤化するためには、常法に従って実施すれば容易に製剤化することができ、界面活性剤、賦形剤、着色料、香辛料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁剤、その他常用する補助剤を適当に使用することができる。

本発明に係る前記薬学組成物は、経口、非経口、直腸、局所、経皮、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下等に投与されてよい。

本発明の医薬組成物の有効成分は、投与される対象の年齢、性別、体重、病理状態およびその深刻度、投与経路、または処方者の判断に応じて変わり得るものである。このような因子に基づく適用量の決定は、当業者の水準内にあり、その１日投与量は、たとえば、０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、より具体的に、５ｍｇ／ｋｇ／日〜５０ｍｇ／ｋｇ／日とされてよいが、これに限定されるものではない。

以下、実施例を通じて本発明をより詳細に説明する。これらの実施例は、もっぱら本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲がこれらの実施例によって制限されるものと解釈されないことは、当業界における通常の知識を有する者にとって自明なことであろう。

［比較例１］高麗人蔘多糖体の製造
乾燥した白蔘１ｋｇをミキサーで粉砕した後、精製水１０Ｌを入れ、４０℃の温水で２４時間攪拌抽出した後、１５℃で１日間浸漬させた。その後、濾過布濾過と遠心分離を通じて残渣と濾液を分離し、分離された濾液を精製水量の１／１０まで減圧濃縮する。ここに、濃縮された量の４倍のエタノールをドロップワイズ（ｄｒｏｐｗｉｓｅ）方式で 添加し、熱風乾燥させて高麗人蔘多糖体６５ｇを得た。

［比較例２］緑茶多糖体の製造
１次加工（煎じ過程）した緑茶葉１ｋｇをミキサーで粉砕した後、精製水１０Ｌを入れ、４０℃の温水に２４時間攪拌抽出した後、１５℃で１日間浸漬させた。その後、濾過布濾過と遠心分離を通じて残渣と濾液を分離し、分離された濾液を精製水量の１／１０まで減圧濃縮する。ここに、濃縮された量の４倍のエタノールをドロップワイズ（ｄｒｏｐｗｉｓｅ）方式で添加し、熱風乾燥させて緑茶多糖体７２ｇを得た。

［比較例３］高麗人蔘多糖体（紅蔘多糖体）を含む高麗人蔘炮製抽出物の製造
乾燥していない水蔘を高圧蒸縮器に入れ、９７℃の温度で約４時間高圧蒸縮した後、前記工程段階が完了した蒸縮された水蔘を熱風乾燥機で６５℃の温度で乾燥させた後、炮製を活用して加工された高麗人蔘１ｋｇをミキサーで粉砕した後、精製水１０Ｌを入れ、４０℃の温水に２４時間攪拌抽出した後、１５℃で１日間浸漬させた。その後、濾過布濾過と遠心分離を通じて残渣と濾液を分離し、分離された濾液を精製水量の１／１０まで減圧濃縮する。ここに、濃縮された量の４倍のエタノールをドロップワイズ（ｄｒｏｐｗｉｓｅ）方式で添加し、熱風乾燥させて韓方加工技術である炮製を活用して加工された高麗人蔘多糖体（紅蔘多糖体）７０ｇを得た。

［比較例４］緑茶多糖体を含む緑茶炮製抽出物の製造
１次加工（煎じ過程）した緑茶葉を高圧蒸縮機に入れ、９７℃の温度で約４時間高圧蒸縮した後、前記工程段階が完了した蒸縮された緑茶葉を熱風乾燥機で６５℃の温度で乾燥させた後、炮製を活用して加工された緑茶葉１ｋｇをミキサーで粉砕した後、精製水１０Ｌを入れ、４０℃の温水に２４時間攪拌抽出した後、１５℃で１日間浸漬させた。その後、濾過布濾過と遠心分離を通じて残渣と濾液を分離し、分離された濾液を精製水量の１／１０まで減圧濃縮する。ここに、濃縮された量の４倍のエタノールをドロップワイズ（ｄｒｏｐｗｉｓｅ）方式で添加し、熱風乾燥させて韓方加工技術である炮製を活用して加工された緑茶多糖体７０ｇを得た。

［比較例５］高麗人蔘抽出物と緑茶抽出物の混合物の製造
比較例１と比較例２において製造した高麗人蔘多糖体と緑茶多糖体を、１：１の割合で単純混合した。

［実施例１］混合塩炙多糖体の製造
乾燥した高麗人蔘５０質量％および１次加工（煎じ過程）した緑茶５０質量％を塩水（２〜３％）に十分に混合させた後、密閉させて完全に吸収されるように放置し、塩水が完全に吸収された高麗人蔘および緑茶混合物を炒製容器に入れてから１４０℃で４０分間炒めた後、日陰で乾燥させた。加工された高麗人蔘および緑茶混合物１ｋｇをミキサーで粉砕した後、精製水１０Ｌを入れて３回還流抽出した後、１５℃で１日間浸漬させた。その後、濾過布濾過と遠心分離を通じて残渣と濾液を分離し、分離された濾液を精製水量の１／１０まで減圧濃縮する。ここに、濃縮された量の４倍のエタノールをドロップワイズ（ｄｒｏｐｗｉｓｅ）方式で添加し、熱風乾燥させて高麗人蔘多糖体・緑茶多糖体混合物７０ｇ（混合塩炙多糖体）を得た。

［実施例２］混合炒炭多糖体の製造
乾燥した高麗人蔘５０質量％および１次加工（煎じ過程）した緑茶５０質量％の混合物を２７０℃で外部を炭化させて、黒色になったら加熱を停止し、室温で冷ました。加工された高麗人蔘および緑茶混合物１ｋｇをミキサーで粉砕した後、精製水１０Ｌを入れて３回還流抽出した後、１５℃で１日間浸漬させた。その後、濾過布濾過と遠心分離を通じて残渣と濾液を分離し、分離された濾液を精製水量の１／１０まで減圧濃縮する。ここに、濃縮された量の４倍のエタノールをドロップワイズ（ｄｒｏｐｗｉｓｅ）方式で添加し、熱風乾燥させて高麗人蔘多糖体・緑茶多糖体混合物７２ｇ（混合炒炭多糖体）を得た。

［実施例３］混合酢炙多糖体の製造
乾燥した高麗人蔘５０質量％および１次加工（煎じ過程）した緑茶５０質量％の混合物に酢２５０ｇを十分に吸収させた後、１３０℃で４０分間炒めた後、日陰で乾燥させた。加工された高麗人蔘および緑茶混合物１ｋｇをミキサーで粉砕した後、精製水１０Ｌを入れて３回還流抽出した後、１５℃で１日間浸漬させた。その後、濾過布濾過と遠心分離を通じて残渣と濾液を分離し、分離された濾液を精製水量の１／１０まで減圧濃縮する。ここに、濃縮された量の４倍のエタノールをドロップワイズ（ｄｒｏｐｗｉｓｅ）方式で添加し、熱風乾燥させて高麗人蔘多糖体・緑茶多糖体混合物７０ｇ（混合酢炙多糖体）を得た。

［実施例４］混合酒蒸多糖体の製造
乾燥した高麗人蔘５０質量％および１次加工（煎じ過程）した緑茶５０質量％の混合物を黄州に湿らせるように浸け置き、これを蒸器に入れて１時間２０分蒸した後、日陰で乾燥させた。加工された高麗人蔘および緑茶混合物１ｋｇをミキサーで粉砕した後、精製水１０Ｌを入れて３回還流抽出した後、１５℃で１日間浸漬させた。その後、濾過布濾過と遠心分離を通じて残渣と濾液を分離し、分離された濾液を精製水量の１／１０まで減圧濃縮する。ここに、濃縮された量の４倍のエタノールをドロップワイズ（ｄｒｏｐｗｉｓｅ）方式で添加し、熱風乾燥させて高麗人蔘多糖体・緑茶多糖体混合物７７ｇ（混合酒蒸多糖体）を得た。

［実施例５］混合薑炙多糖体の製造
新鮮な生姜を磨砕した後、２倍の水を入れて混合して圧搾した後、汁を絞り出す。これを２〜３回繰り返し行って生姜汁を準備し、乾燥した高麗人蔘５０質量％および１次加工（煎じ過程）した緑茶５０質量％の混合物に、一定量（高麗人蔘比１０〜１５％質量）の生姜汁を振りかけて均一に湿らせた後、生姜汁が染み込んだら容器に入れて１４０℃で４０分間炒めた後、日陰で乾燥させた。加工された高麗人蔘および緑茶混合物１ｋｇをミキサーで粉砕した後、精製水１０Ｌを入れて３回還流抽出した後、１５℃で１日間浸漬させた。その後、濾過布濾過と遠心分離を通じて残渣と濾液を分離し、分離された濾液を精製水量の１／１０まで減圧濃縮する。ここに、濃縮された量の４倍のエタノールをドロップワイズ（ｄｒｏｐｗｉｓｅ）方式で添加し、熱風乾燥させて高麗人蔘多糖体・緑茶多糖体混合物７０ｇ（混合薑炙多糖体）を得た。

［実施例６］混合蜜炙多糖体の製造
乾燥した高麗人蔘５０質量％および１次加工（煎じ過程）した緑茶５０質量％が混ざった混合物に、一定量（高麗人蔘比２０〜３０％質量）の蜜を十分吸収させた後、１３０℃で４０分間炒めた後、日陰で乾燥させた。加工された高麗人蔘および緑茶混合物１ｋｇをミキサーで粉砕した後、精製水１０Ｌを入れて３回還流抽出した後、１５℃で１日間浸漬させた。その後、濾過布濾過と遠心分離を通じて残渣と濾液を分離し、分離された濾液を精製水量の１／１０まで減圧濃縮する。ここに、濃縮された量の４倍のエタノールをドロップワイズ（ｄｒｏｐｗｉｓｅ）方式で添加し、熱風乾燥させて高麗人蔘多糖体・緑茶多糖体混合物７５ｇ（混合蜜炙多糖体）を得た。

［試験例１］コラゲナーゼ発現抑制効能測定
前記比較例および実施例のコラゲナーゼ生成阻害能を、対照群であるトコフェロール、ＥＧＣＧと比較して測定した。

試験は、２．５％のウシ胎児血清が含有されたＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ´ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ´ｓ Ｍｅｄｉａ）培地が入っている９６ウェル（ｗｅｌｌ）プレートに、ヒト線維芽細胞を５，０００細胞／ウェル（ｗｅｌｌ）となるように入れ、９０％程度成長するまで培養した。その後、無血清ＤＭＥＭ培地で２４時間培養した後、無血清ＤＭＥＭ培地に、前記比較例１〜５および実施例１〜６の韓方加工技術である炮製を活用して加工された高麗人蔘多糖体・緑茶多糖体混合物を１０^−４モル濃度で２４時間処理した後、細胞培養液を採取した。

採取した細胞培養液を商業的に利用可能なコラゲナーゼ測定器具（アメリカ、アマシャム・ファルマシア社）を利用して、コラゲナーゼ生成程度を測定した。まず、１次コラゲナーゼ抗体が均一に塗布された９６ウェル（ｗｅｌｌ）プレートに採取された細胞培養液を入れ、抗原‐抗体反応を恒温槽で３時間実施した。

３時間後、発色団が結合された２次コラーゲン抗体を９６ウェル（ｗｅｌｌ）プレートに入れ、さらに１５分間反応させた。１５分後、発色誘発物質を入れて、室温で１５分間発色を誘発させ、さらに１Ｍ硫酸を入れて反応（発色）を中止させると、反応液の色は黄色を帯び、反応進行の程度に応じて、黄色の程度が異なって発現された。

黄色を帯びた９６ウェル（ｗｅｌｌ）プレートの吸光度を、吸光計を利用して４０５ｎｍで測定し、下記数学式１によってコラゲナーゼの合成程度を計算した。このとき、組成物を処理していない群の採取された細胞培養液の反応吸光度を対照群とした。

［数学式１］
コラゲナーゼ発現程度（％）＝１００−｛（比較例または実施例を処理した細胞群の吸光度÷対照群の吸光度）×１００｝

前記ヒト線維芽細胞において前記試験物質のコラゲナーゼ発現抑制効能を測定した結果を、コラゲナーゼ発現程度をもって下記表１に示した。これは、非処理群のコラゲナーゼ発現程度を１００として対比したものである。

その結果、本発明による高麗人蔘炮製抽出物と緑茶炮製抽出物の混合物が、試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）においてコラゲナーゼの発現を阻害することを確認することができた。
併せて、前記表１から見られるように、それぞれの炮製抽出物を含む実施例１〜６は、それぞれの比較例よりもコラゲナーゼ抑制効果により優れることを確認することができ、特に、比較例５よりも優れたコラゲナーゼ抑制効果を有することを確認することができた。また、それぞれの炮製抽出物を含む実施例１〜６は、陽性対照群であるトコフェロールよりも高いコラゲナーゼ発現抑制効果を有することを確認した。

［試験例２］プロコラーゲン生成促進効果実験
前記比較例および実施例のプロコラーゲン生成能を、ビタミンＣと比較して測定した。

試験は、２．５％のウシ胎児血清が含有されたＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ´ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ´ｓ Ｍｅｄｉａ）培地が入っている９６ウェル（ｗｅｌｌ）プレートに、ヒト線維芽細胞を５，０００細胞／ウェル（ｗｅｌｌ）となるように入れ、９０％程度成長するまで培養した。その後、無血清ＤＭＥＭ培地で２４時間培養した後、無血清ＤＭＥＭ培地に、前記比較例１〜５および実施例１〜６の韓方加工技術である炮製を活用して加工された高麗人蔘多糖体・緑茶多糖体混合物とビタミンＣを１０^−４モル濃度で２４時間処理した後、細胞培養液を採取した。２４時間後、培地中に遊離されたプロコラーゲンの量を、１型プロコラーゲンＣ−ペプチドＥＩＡキット（ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ ｔｙｐｅ−１ Ｃ−ｐｅｐｔｉｄｅ ＥＩＡ ｋｉｔ）（ＭＫ１０１，Ｔａｋａｒａ，Ｊａｐａｎ）を使用して測定した。

非処理群におけるプロコラーゲン生成程度を１００とし、これと対比した、組成物を処理した群におけるプロコラーゲン生成程度を求め、その結果を表２に示した。

その結果、プロコラーゲンの生成程度が高いほど、コラーゲンの生成程度が高くなり、よって、皮膚のシワの生成を防ぐことができた。

併せて、本発明による実施例１〜６は、試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）においてプロコラーゲンの生成を促進することを確認し、このような効果は、コラーゲンの合成に必須的な成分として知られているビタミンＣ程度に優れることを確認することができた。特に、本発明による実施例１〜６は、比較例１〜５と比較して顕著に高い程度のプロコラーゲン生成促進効果を有することを確認した。

［試験例３］ヒト角質形成細胞の分化誘導試験
前記比較例および実施例の皮膚バリア機能と皮膚の保湿機能を確認するために、吸光度を用いた試験を実施した。

まず、一次培養したヒト角質形成細胞（入手先：Ｄｒ．Ｎ．Ｅ． Ｆｕｓｅｎｉｇ，Ｄｅｕｔｓｃｈｅｓ Ｋｒｅｂｓｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓｚｅｎｔｒｕｍ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を培養用フラスコに入れて底に付着させた後、下記表３のように組成された培養液に添加して、細胞が底面積の７０〜８０％程度成長するまで５日間培養した。この細胞を収穫（ｃｅｌｌ ｈａｒｖｅｓｔ）してＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）で洗浄した後、２％ＳＤＳ（Ｓｏｄｉｕｍ Ｄｏｄｅｃｙｌ Ｓｕｌｆａｔｅ）と２０ｍＭ濃度のＤＴＴ（Ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）を含有した１０ｍＭ濃度のトリス‐塩酸緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．４）１ｍｌを加えて３分間ソニケーション（ｓｏｎｉｃａｔｉｏｎ）を遂行した後、１０分間煮た。これを１２００ｒｐｍで３０分間遠心分離して、分離した沈殿物をさらにＰＢＳ１ｍｌに懸濁させて、３４０ｎｍにおける吸光度を測定した。

これとは別に、前記ソニケーション後の溶液の一部を採取して、タンパク質含量を測定して、細胞分化程度評価の際の基準とした。低カルシウム（０．０３ｍＭ）処理群と高カルシウム（１．２ｍＭ）処理群を、それぞれ陰性／陽性対照群とし、低カルシウム濃度に前記比較例１〜５および実施例１〜６をそれぞれ濃度別に添加して実施した試験結果を表３に示した。

その結果、角質形成細胞の分化時に生成されるＣＥ（Ｃｏｒｎｉｆｉｅｄ Ｅｎｖｅｌｏｐ）の量を測定して細胞分化促進効果を比較すると、実施例１〜６の炮製抽出物の混合物が、角質形成細胞において分化を促進するということを確認することができた。併せて、本発明の実施例それぞれの炮製抽出物の混合物は、一般抽出物を含む比較例よりも顕著に高い角質形成細胞の分化能を有することを確認した。そのため、本発明の組成物は、より優れた皮膚バリア機能の強化と皮膚水分保護能を有することを確認した。

［試験例４］ＲＴ‐ＰＣＲ分析を通じたフィラグリン（ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）の発現測定
前記比較例および実施例それぞれの皮膚保湿能を試験するために、フィラグリンの発現程度を測定した。

実験に使用した細胞株は、ドイツ癌研究センターのＤｒ．Ｆｕｓｅｎｉｇから分譲を受けたＨａＣａＴ細胞株（Ｈｕｍａｎ ｋｅｒａｔｉｏｎｏｃｙｔｅ ＨａＣａＴ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ）であって、前記細胞を６０ｍｍディッシュに１×１０^５個分株し、１日間培養した後、試験物質を下記表４のように処理した後、２４時間培養した。前記方法で培養および試験した細胞から、トリゾール（Ｔｒｉｚｏｌ，Ｇｉｂｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＵＳＡ）を利用してトータルＲＮＡを抽出した後、ワンステップＲＮＡ ＰＣＲキット（ＡＭＶ）（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ Ｉｎｃ．，Ｊａｐａｎ）で提供される方法に準じて、ＲＴ‐ＰＣＲ（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）分析を施行した。このとき、プライマー（ｐｒｉｍｅｒ）としては、フィラグリン（ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）に対するプライマー（バイオニア社、韓国）を使用し、内部対照群（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ）としては、βアクチン（β‐ａｃｔｉｎ）を利用して発現量を比較した。イメージ分析後、対照群を１００とした比較値を下記表４に示した。

前記表４に示すように、本発明の実施例１〜６は、角質形成細胞においてフィラグリンの発現を促進することを確認することができた。特に、本発明の実施例１〜６は、比較例１〜５に比べてフィラグリンの発現を顕著に促進させることを確認した。そのため、本発明の組成物は、皮膚の天然保湿因子の生成を促進し、皮膚保湿能を強化する効果があることを確認した。

［試験例５］皮膚保湿改善効果の測定
下記表５および表６の組成比に従って、栄養クリーム剤形の外用剤である剤形例１〜６（表５）および比較剤形例１〜５（表６）を製造した。下記配合成分の含量比の単位は、質量％である。

前記実施例１〜６の、ヒトに対する皮膚保湿効果を確認するために、前記の表５および表６の剤形例および比較剤形例を使用して、次のような実験を実施した。

３０代の健康な女性１１０人を１０人ずつ１１組に分け、それぞれ剤形例１〜６および比較剤形例１〜５の栄養クリームを、温度２４〜２６℃、湿度７５％の条件で、毎日２回ずつ４週間顔面に塗布させた後、塗布開始前と、塗布後１週、２週、４週経過した時点、そして塗布停止後２週経過（計６週経過）後に、恒温、恒湿条件（２４℃、相対湿度４０％）においてコニオメーターで皮膚水分量を測定した。試験開始直前に測定したコニオメーターの値を基準として、各測定時の測定値増加分をパーセント表示した後、その結果を下記表７に示した。

前記表７に示したところのように、本発明の炮製抽出物を含む剤形例１〜６は、比較剤形例１〜５を塗布した群よりも皮膚の水分保有量が顕著に増加したことが分かった。また、試験物質の塗布中止２週後である６週経過後の数値が、試験物質塗布中である１週〜２週経過後の数値と類似して示されたことから、試験物質を塗布しなくても、剤形例１〜６の塗布によって皮膚の水分保有量が一定期間継続的に維持されることを確認することができた。そのため、本発明の組成物は、皮膚保湿能力を強化させることが分かった。

以下、本発明に係る組成物の製剤例について説明するが、薬学組成物および化粧料組成物は、複数の剤形に応用可能であり、これらの剤形例は、本発明を限定しようとするものではなく、単に具体的に説明しようとするためのものである。

［製剤例１］軟質カプセル剤
炮製処理高麗人蔘抽出物１５０ｍｇ、炮製処理緑茶抽出物１５０ｍｇ、パーム油２ｍｇ、パーム硬化油８ｍｇ、黄蝋４ｍｇおよびレシチン６ｍｇを混合し、通常の方法に従って、１カプセルあたり４００ｍｇずつ充填して軟質カプセルを製造した。

［製剤例２］錠剤
炮製処理高麗人蔘抽出物１５０ｍｇ、炮製処理緑茶抽出物１５０ｍｇ、ブドウ糖１００ｍｇ、紅蔘抽出物５０ｍｇ、澱粉９６ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム４ｍｇを混合し、３０％エタノール４０ｍｇを添加して顆粒を形成した後、６０℃で乾燥し、打錠機を利用して錠剤に打錠した。

［製剤例３］顆粒剤
炮製処理高麗人蔘抽出物１５０ｍｇ、炮製処理緑茶抽出物１５０ｍｇ、ブドウ糖１００ｍｇ、紅蔘抽出物５０ｍｇおよび澱粉６００ｍｇを混合し、３０％エタノール１００ｍｇを添加して顆粒を形成した後、６０℃で乾燥して顆粒を形成した後、包に充填した。内容物の最終質量は１ｇとした。

［製剤例４］柔軟化粧水（スキンローション）
下記表８に記載された組成に従い、通常の方法で柔軟化粧水を製造した。

［製剤例５］栄養化粧水（ミルクローション）
下記表９に記載された組成に従い、通常の方法で栄養化粧水を製造した。

［製剤例６］栄養クリーム
下記表１０に記載された組成に従い、通常の方法で栄養クリームを製造した。

［製剤例７］マッサージクリーム
下記表１１に記載された組成に従い、通常の方法でマッサージクリームを製造した。

［製剤例８］パック
下記表１２に記載された組成に従い、通常の方法でパックを製造した。

［製剤例９］軟膏
下記表１３に記載された組成に従い、通常の方法で軟膏を製造した。

以上、本発明の内容の特定部分について詳細に記述したところ、当業界における通常の知識を有する者において、このような具体的記述は、単に好ましい実施態様であるに過ぎず、これにより本発明の範囲が制限されるものではない点は明らかなことである。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付された請求項とそれらの等価物によって定義されると言える。

Claims (12)

1. 高麗人蔘塩炙多糖体および緑茶塩炙多糖体の混合物；高麗人蔘炒炭多糖体および緑茶炒炭多糖体の混合物；高麗人蔘酢炙多糖体および緑茶酢炙多糖体の混合物；高麗人蔘酒蒸多糖体および緑茶酒蒸多糖体の混合物；高麗人蔘薑炙多糖体および緑茶薑炙多糖体の混合物；ならびに、高麗人蔘蜜炙多糖体および緑茶蜜炙多糖体の混合物から構成された群より選択された一つ以上の炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物を含む組成物であって、
   前記組成物は、炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物を有効成分として含む、皮膚の抗老化用である、組成物。
2. 前記組成物は、皮膚のシワ生成を抑制し、または皮膚のシワを改善する、請求項１に記載の組成物。
3. 前記組成物は、コラゲナーゼの発現を抑制する、請求項１又は２に記載の組成物。
4. 前記炮製処理高麗人蔘抽出物と炮製処理緑茶抽出物間の質量比は、０．１〜１０：１である、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の組成物。
5. 前記組成物は、炮製処理高麗人蔘抽出物と炮製処理緑茶抽出物を組成物の総質量に対してそれぞれ０．００１〜１０質量％含む、請求項１乃至４のいずれか１項に記載の組成物。
6. 前記組成物は、化粧料組成物である、請求項１乃至５のいずれか１項に記載の組成物。
7. 前記組成物は、薬学組成物である、請求項１乃至５のいずれか１項に記載の組成物。
8. 高麗人蔘塩炙多糖体および緑茶塩炙多糖体の混合物；高麗人蔘炒炭多糖体および緑茶炒炭多糖体の混合物；高麗人蔘酢炙多糖体および緑茶酢炙多糖体の混合物；高麗人蔘酒蒸多糖体および緑茶酒蒸多糖体の混合物；高麗人蔘薑炙多糖体および緑茶薑炙多糖体の混合物；ならびに、高麗人蔘蜜炙多糖体および緑茶蜜炙多糖体の混合物から構成された群より選択された一つ以上の炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物を含む組成物であって、
   前記組成物は、炮製処理高麗人蔘抽出物および炮製処理緑茶抽出物の混合物を有効成分として含む、皮膚保湿用である、組成物。
9. 前記炮製処理高麗人蔘抽出物と炮製処理緑茶抽出物間の質量比は、０．１〜１０：１である、請求項８に記載の組成物。
10. 前記組成物は、炮製処理高麗人蔘抽出物と炮製処理緑茶抽出物を組成物の総質量に対してそれぞれ０．００１〜１０質量％含む、請求項８又は９に記載の組成物。
11. 前記組成物は、化粧料組成物である、請求項８乃至１０のいずれか１項に記載の組成物。
12. 前記組成物は、薬学組成物である、請求項８乃至１０のいずれか１項に記載の組成物。