TWI609962B - 細胞培養基之病毒過濾 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於一種自作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑移除病毒污染物之方法。該方法包含經由有效孔徑為最大約75 nm之病毒過濾器對該製劑進行過濾並持續至少約24小時。此外，本發明係關於病毒過濾器在至少約24小時之過濾中自作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑移除病毒污染物之用途，其中該病毒過濾器具有最大約75 nm之有效孔徑。在一些具體實例中，根據本發明之過濾在至少約2000 L/m2之體積容量下操作。此外，本發明係關於根據本發明方法可獲得之作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑之用途，其係用於細胞培養；醫藥、診斷及/或化妝品製備以及食物製備。

Description

細胞培養基之病毒過濾
本發明係關於自製劑移除病毒污染物之方法、病毒過濾器用於自製劑移除病毒污染物之用途以及製劑用於細胞培養、食物、醫藥、診斷及/或化妝品製備之用途，其中該製劑為細胞培養基或至少細胞培養基之一種組分。本發明亦關於根據本發明之方法製備之細胞培養基以及以細胞培養基生產醫藥、診斷及/或化妝品產品之方法。
病毒安全性為生物醫藥行業中的重要關注點。儘管已努力減輕風險，但生物學中涉及大規模病毒污染之偶發事件已在該行業中引起關注。經鮮明描繪之事件包括例如2009年Genzyme偵測到之其CHO(中國倉鼠卵巢)細胞培養物之水泡疹病毒2117污染，其使Cerezyme®及Fabrazyme®之製造中斷；以及2010年由豬環狀病毒1引起之Merck之Rotarix®疫苗的污染。污染之可能來源係在細胞培養階段。除製造公司的經濟損失(一項報導評估了每10000L生物反應器污染加上來自各機構的費用將損失過億)以外，此類事件對患者形成風險且破壞獲得生物醫藥產品之途徑(Liu等人，Biotechnol.Prog.2000,16,425-434)。因此，存在加強之管理監督且需要新的技術來偵測、預防及補救病毒污染。
一般而言，病毒污染物可分為上游及下游病毒污染。下游污染可藉由應用封閉系統來控制，然而，上游污染尤其難以控制且甚至難以用廣泛測試偵測。病毒污染物亦可起源於動物衍生材料在生物醫藥製造中之使用。 當製造細胞株不含外來病毒污染物且製造不涉及使用動物衍生之材料時，病毒污染物仍可藉助於細胞培養基而進入。舉例而言，合成培養基可補充有在補充有血清之系統中所產生的重組生長因子，且不含蛋白質之培養基仍然可能含有經過濾的蛋白質水解產物。然而，病毒污染可甚至發生於完全化學定義之培養基中，因為大量培養基組分可填充於非無菌容器中。習知滅菌級過濾器經設計均不能針對病毒污染物進行防護，因此必須使用其他措施來確保病毒安全性。
在製造製程中的一或多個檢查點處偵測外來病毒為標準規範。然而，單獨偵測為針對生物醫藥產品之病毒污染的不適當措施，尤其當所存在之病毒污染物不受懷疑、未知或為一種新出現的病毒劑時。此類病毒劑可藉由甚至經良好設計之表示定序病毒之大集合的DNA微陣列來逃避偵測。該挑戰因為感染細胞培養物所需之病毒污染物的低含量及當前有限之偵測分析靈敏度而進一步複雜化。
病毒污染物之高效價在所改變之超出正常範圍之細胞培養參數之形式(例如培養密度、蛋白質效價)方面可不明顯。另一方面，傳染性分析具高度特異性且針對各病毒需要不同條件。由於病毒污染，下游設備、流體及產物可受污染，招致分批裝置、廢物處置、銷售損失及去污染方面的數百萬美元損失。歸因於樣品非均質性及生物醫藥製造製程中所涉及之大體積，對病毒而言澈底篩選原料較難。
病毒清除技術可歸類為以下兩組之一：去活化及過濾。去活化方法尋求病毒傳染性之不可逆損失，而過濾方法試圖以機械方式減少病毒污染物。習知去活化方法使用紫外(UV)輻射、γ輻射、加熱、低或高pH值或溶劑/清潔劑暴露。在UV輻射可有效且不可逆地消除病毒活性之情況下，在大規模基礎上可能不切實際或對於所製備之培養基而言不適合。熱壓處理雖然有可能用於熱穩定液體，但可能改變敏感培養基。稱為高溫短時 (HTST)熱處理之替代方法並不嚴格，但需要昂貴的設備、自動化及驗證程序以保存培養基特性。低或高pH值暴露在整個可能的病毒污染物範圍內無效且可負面地影響培養基之品質或容積滲透濃度。溶劑/清潔劑暴露同樣不為廣譜解決方案且僅對具有脂質包膜之病毒有效。因此，理想方法應使成本考慮因素及在原料中實現病毒清除之需要平衡且在不損害生長速率或產量的情況下提供廣譜解決方案。
病毒留持性過濾提供適當之平衡。其不在化學上改變培養基組分且適合於與熱敏性進料/培養基一起使用。此外，病毒留持性過濾為廣譜解決方案，因為其根據尺寸排阻原理操作。然而，病毒留持性薄膜較昂貴(每平方公尺大致約2000至5000EUR)。培養基體積之過濾的低特定流速特性使該方法在適用於大規模生物反應器供應之規模上經濟負擔繁重，此係歸因於所需薄膜面積之成本。舉例來說，當病毒過濾與滅菌級培養基過濾串聯連接時，病毒過濾較佳需要在一個工作日內(亦即最多在製備主體培養基之後2至10小時)進行，以便防止主體培養基之污染。因此，需要大過濾面積保持於此關鍵時間窗口內，此舉又使成本升高。
意外地，已發現該先前技術病毒過濾之缺陷可藉由經由有效孔徑為最大75nm之病毒過濾器過濾各別製劑並持續至少約24小時來克服，該製劑為細胞培養基或至少細胞培養基之組分。若在較長時間範圍期間(亦即持續至少24小時)過濾所需體積之各別製劑，則病毒過濾器之體積容量大大增加。意外地，另外已發現可在此延長之時間段內實現顯著總病毒效價降低。此在細胞培養系統之上游病毒移除中尤其有益。
因此，本發明之方法分別藉由提高通過量及體積容量來提高病毒過濾之經濟效率。根據本發明之方法在至少2000L/m2之體積容量下操作，從而幫助使高容量病毒過濾器之用途達至最大程度，使與其相關之有效成本降低，且呈現一種可大規模操作且可容易地整合至現有製造製程中之解決方 案。
根據本發明之方法及各別病毒過濾器之本發明用途對無菌製造製程、特定言之使用無菌製劑(例如細胞培養基及緩衝液)之製程的巨大影響可藉助於以下實施例來理解。假定一平方公尺病毒過濾器薄膜平均花費約3000EUR且所用細胞培養基中每公升培養基花費約10EUR，則1000L病毒經過濾之培養基之成本為每公升培養基13EUR，這使得培養基製劑製品之成本增加約30%。若用病毒過濾器薄膜可過濾2000L，則成本降低至11.50EUR。進一步增加體積容量(例如超出5000L)使成本降低至每公升培養基小於0.6EUR，此舉使得提供病毒經過濾之培養基的額外成本相當低。因此，特定言之在潛在病毒或病毒污染之上游去污染中使用病毒過濾器之高成本係藉由使病毒過濾方法之體積容量增加而顯著降低。
本發明分別充分闡述病毒過濾器之此高成本及低體積容量的問題。病毒過濾器之體積容量可藉由經由有效孔徑為最大75nm之病毒過濾器執行病毒過濾並持續至少約24小時來增加。意外地，已發現所用昂貴病毒過濾器可較佳採用使得體積容量增加2至100倍同時維持過濾器完整性之體積容量。雖然體積容量增加2至3倍已對製造製程及相關製造成本具有巨大影響，但使用根據本發明之方法可達成體積容量增加高達100倍或甚至更大。此舉提供巨大機會且甚至在昂貴病毒過濾器情況下亦使得病毒移除具成本有效性，該等昂貴病毒過濾器現可用於在細胞培養過程中(特定言之在細胞培養過程之上游病毒移除中)、醫藥、診斷及/或化妝品及食物製程中進一步改良病毒安全性。
本發明提供一種自作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑移除病毒污染物之方法。該方法包含經由有效孔徑為最大75nm之病毒過濾器對該製劑進行過濾並持續至少約24小時。
另外，本發明係關於有效孔徑為最大75 nm之病毒過濾器在至少約24小時的過濾中自作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑移除病毒污染物之用途。
此外，本發明係關於根據本發明之任何方法可獲得之作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑之用途，其係用於細胞培養；醫藥、診斷及/或化妝品製備以及食物製備。
根據本發明之所有方法及用途可在至少約2000 L/m2、較佳至少約3000 L/m2、最佳至少約5000 L/m2之體積容量下操作。此外，對製劑進行過濾且執行過濾分別持續至少24小時或持續至少約48小時至約7個月或約72小時至約3個月。在約2℃至約60℃或約10至約40℃、較佳約15至約37℃之溫度下執行過濾。
在本發明之所有具體實例中，在約100 mbar至約4000 mbar、較佳約200 mbar至約3500 mbar、最佳約1000 mbar至約3000 mbar之範圍內的壓力下執行過濾。
在本發明之所有具體實例中，對於病毒污染物而言，所用病毒過濾器達成至少1 Log10降低值(LRV)。
意外地，已發現當操作過濾製程並持續至少約24小時時，病毒過濾器之體積容量可大大增加。通常，用於細胞培養之製劑(例如主體細胞培養基或緩衝液)是在製備主體製劑之後約2至約10小時內分批過濾，以便避免因細菌或病毒生長造成之製劑污染。結果表明，實際上，在約2至約10小時之時間範圍內過濾各別製劑之過濾製程中所用病毒過濾器並不採用幾乎最大容量。因此，必須使用過量的過濾器面積。與此相反，已發現歸因於使用本發明之方法，所用昂貴病毒過濾器可較佳採用使得體積容量增加2至100倍同時維持過濾器完整性之體積容量。雖然體積容量增加2至3倍已對製造製程及相關製造成本具有巨大影響，但使用根據本發明之方法可達 成增加高達100倍或甚至更大。此舉提供巨大機會且甚至在昂貴病毒過濾器情況下亦使得病毒移除具成本有效性，該等昂貴病毒過濾器現可用於在細胞培養過程中(特定言之在細胞培養過程之上游病毒移除中)、醫藥、診斷及/或化妝品及食物製程中進一步改良病毒安全性。
由以下對某些具體實例及申請專利範圍之較詳細描述，本發明之特定較佳具體實例將變得顯而易見。
本發明提供一種自作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑移除病毒污染物之方法。該方法包含經由有效孔徑為最大75nm之病毒過濾器對該製劑進行過濾並持續至少約24小時。
另外，本發明係關於有效孔徑為最大75nm之病毒過濾器在至少24小時的過濾中自作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑移除病毒污染物之用途。
另外，本發明係關於根據本發明之任何方法可獲得之作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑之用途，其係用於細胞培養；醫藥、診斷及/或化妝品製備以及食物製備。
在本發明之所有具體實例中，對製劑進行病毒過濾，該病毒過濾或使用病毒過濾器係執行至少約24小時、約48小時、約72小時、約4天、約5天、約6天、約7天、約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月或約7個月。另外，在一個具體實例中，對製劑進行病毒過濾或病毒過濾係執行約1週至約3週、約2週至約3週、約1週至約4週、約2週至約4週、約1週至約7個月、約1個月至約5個月、約2個月至約5個月、約2個月至約4個月、約2個月至約3個月或至少約24小時至約7個月或約48小時至約5個月或約72小時至約3個月。另外，在一個具體實例中，對製劑進行病毒過濾或病毒過濾係執行長於約48小時至約7個月、較佳約一週至約5個月或約3週至約3個月或約2個月至約3個月。
根據本發明之方法可在至少約2000L/m2或至少約3000L/m2或至少約4000L/m2或至少約5000L/m2、至少約7500L/m2、至少約10000L/m2或至少 約20000 L/m2之體積容量下操作。在此方面，「體積容量(volumetric capacity)」係指在由於過濾器薄膜阻塞使得濾液流減少或背壓增加至不合需要的操作條件之前可經指定面積之病毒過濾器薄膜過濾之溶液的體積。
預期包括所有具體實例之本發明可單獨或與此項技術中已知用於使病毒污染減至最低程度之其他方法(例如篩分、選擇來源、偵測、病毒去活化、吸附留持等)結合使用。本發明方法以在製造製程初期不合需要之病毒劑經由作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑進入為目標且提供一種病毒減少機制。本發明之優勢包括在大規模基礎上實施容易、為處理既定體積之作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑所需之過濾器薄膜面積降低、由此引起之成本降低。特定言之，根據本發明之製劑的病毒過濾易於整合至連續製造製程中，例如連續細胞培養過程，如灌注或恆化器，如生物反應器系統。
如本文所使用之術語「溫度(temperature)」係關於根據本發明之所過濾製劑(例如細胞培養基或緩衝液)當穿過病毒過濾器時之溫度。在根據本發明之一個具體實例中，溫度介於約2℃至約60℃範圍內。在一個具體實例中，溫度範圍之下限為約2℃、約4℃、約8℃、約10℃、約15℃、約20℃、約22℃、約25℃、約30℃、約37℃或約40℃。根據本發明之溫度範圍的上限為約10℃、約20℃、約22℃、約25℃、約30℃、約37℃、約40℃、約50℃或約60℃。在一個具體實例中，溫度在約4℃至約45℃範圍內或在約10℃至約40℃或約20℃至約40℃或約30℃至約37℃溫度範圍內。另外，在一個具體實例中，溫度為環境溫度，其為約20℃至約30℃範圍。當然，在不更進一步加熱或冷卻製劑的情況下對製劑進行過濾之具體實例亦較佳。因此，在另一具體實例中，根據執行過濾時所處之各別位置之溫度使用約10℃至約30℃之溫度。在另一具體實例中，例如藉由在過濾之前預加熱液體製劑使用約30℃至約37℃之溫度。由製劑之此過濾產生之濾液可連 續饋入生物反應器中。
在本發明之一個具體實例中，在約100 mbar至約4000 mbar或約200 mbar至約3500 mbar範圍內之壓力下執行過濾。在一個具體實例中，在一壓力範圍下執行病毒過濾，其中下限為約100 mbar、約200 mbar、約500 mbar、約1000 mbar、約1200 mbar、約1500 mbar、約2000 mbar、約2500 mbar或約2800 mbar。上限為約1200 mbar、約1500 mbar、約2000 mbar、約2500 mbar、約2800 mbar或約3000 mbar。在一個具體實例中，在約1000至約4000 mbar、約1500至約3500 mbar、1700 mbar至約3300 mbar或約1000 mbar至約2000 mbar範圍內之壓力下執行過濾。
在本發明之其他具體實例中可使用溫度及壓力調整以調節特定流速及體積容量。在病毒過濾器之使用的體積容量及時間跨度方面的進一步改良可藉由調節其他製程參數(諸如過濾壓力及溫度)來獲得。舉例而言，結果已表明，在一些具體實例中，較佳在約10℃至約40℃之溫度下在約1000 mbar至約2000 mbar之壓力下對製劑進行過濾。
初步過濾實驗已證實欲過濾之製劑的溫度對特定流速之影響。當過濾溫度自根據本發明之製劑的約4℃之儲存溫度增加至約18℃至約37℃之溫度時，觀測到流速增加約50%至約100%。然而，所有此等具體實例均在如下範疇內，即使用過濾並持續至少約24小時，以致所用昂貴病毒過濾器可較佳採用的容量使得體積容量增加2至100倍同時維持過濾器完整性。
在一個較佳具體實例中，自作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑移除病毒污染物之方法包含以下步驟：經由體積容量為至少2000 L/m2之在約1000 mbar至2000 mbar之壓力及10℃至40℃之溫度下有效孔徑為最大75 nm之病毒過濾器對該製劑進行過濾並持續至少約10天至約2個月。當然，所有其他參數亦可與此具體實例組合。另外，作為另一較佳具體實例，該方法係以連續過濾模式執行，其中製劑較佳為細胞培養基，例 如包含大豆水解產物之細胞培養基或包含動物衍生組分之細胞培養基，其中濾液連續饋入生物反應器、尤其恆化器反應器中。在另一具體實例中，此具體實例可另外使用並聯或串聯配置之至少2種病毒過濾器來執行。
預期如本文中所述之病毒過濾方法可用於自作為細胞培養基或細胞培養基之組分(亦即適合於動物細胞及較佳哺乳動物細胞在活體外細胞培養物中生長之培養基及緩衝液)的任何製劑降低病毒污染。典型地，培養基含有緩衝液、鹽、能源、胺基酸、維生素及痕量必需元素。
術語「製劑(preparation)」亦包括在本發明意義上作為細胞培養基之可能部分且能夠支持適當細胞在培養物中之生長的任何組分。該等製劑包括例如緩衝液或至少一種胺基酸或蛋白質之溶液；至少一種維生素之溶液；至少一種有機或無機鹽之溶液；或包含至少一種碳水化合物或糖之來源的溶液。
在本發明之情形中，「對數降低值(Log reduction value)」(LRV)為薄膜在截留粒子(諸如細菌或病毒)方面之效率的量度，定義為進料流中之該粒子計數與病毒過濾器薄膜滲透物中之粒子計數的比率的對數(底數為10)。LRV值係特定針對既定類型之粒子。在根據本發明之一個具體實例中，病毒過濾器達成對於病毒污染物之至少1 Log10降低值(LRV)，或對於病毒污染物之至少2 Log10降低值(LRV)，或對於病毒污染物之至少3 Log10降低值(LRV)，或對於病毒污染物之至少4 Log10降低值(LRV)，或對於病毒污染物之至少5 Log10降低值(LRV)，或對於病毒污染物之至少6 Log10降低值，或對於病毒污染物之至少7 Log10降低值，或對於病毒污染物之至少8 Log10降低值，較佳對於病毒污染物之至少4 Log10降低值(LRV)。當然，對於熟習此項技術者而言，顯而易見的是欲過濾之製劑的病毒或潛在病毒污染物之任何Log10降低值(LRV)均有益於改良製造製程之安全性。因此，尤其此參數可與本發明方法中所用之所有其他參數組合。
如本文所使用之「通量(flux)」與「特定流速(specific flow rate)」或「流速(flow rate)」可互換使用，其為用於特性化薄膜之量度，係指濾液流動之速率(以每過濾面積及時間滲透穿過病毒過濾薄膜之溶液的體積或重量表示，例如L/(m2×hr))。在本發明之情形中，術語「特定(specific)」意謂在規定的時間內，然而，當僅使用「流速」時亦由此參數之單位來看顯然意謂「特定流速」。作為數量之縮寫，以單位「公升」、「l」或「L」給出之「體積」可互換使用。本發明方法內的特定流速可在一範圍內變化或在使用既定病毒過濾器之過濾製程之整個持續時間中保持實質上固定。在本發明的一個具體實例中，特定流速可介於約5 L/(m2×hr)至約500 L/(m2×hr)範圍內，持續至少24小時至約7個月。通量之下限可為約5 L/(m2×hr)或約10 L/(m2×hr)。上限可為約25 L/(m2×hr)、約75 L/(m2×hr)、約100 L/(m2×hr)、約200 L/(m2×hr)、約250 L/(m2×hr)、約300 L/(m2×hr)或約500 L/(m2×hr)。通量可另外介於約5 L/(m2×hr)至約100 L/(m2×hr)、約10 L/(m2×hr)至約100 L/(m2×hr)或約10 L/(m2×hr)至約25 L/(m2×hr)範圍內。
「批式過濾(Batch filtration)」另外稱為「分批過濾(batch wise filtration)」或以批次模式進行之過濾，在本文中係指一種製程，其中特定總量或體積之作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑視病毒過濾器之容量而定在一個批次中經由病毒過濾器過濾，且其中在將濾液導引至或饋入使用或消耗濾液之製程中之前結束過濾製程。
術語「連續過濾(continuous filtration)」或「線上過濾(online filtration)」或「在線過濾」係指一種過濾製程，其中特定總量或體積之作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑視病毒過濾器之容量而定經由病毒過濾器連續過濾，且其中當已將濾液導引至或饋入使用或消耗濾液之製程中時，過濾製程仍繼續進行。
本發明之所有具體實例均可使用批式或連續過濾來執行。本發明之有 益效果已藉由經由有效孔徑為最大75 nm之病毒過濾器對作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑進行過濾並持續至少24小時以便自該製劑中移除病毒污染物而達成。
在根據本發明之一較佳具體實例中，自作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑移除病毒污染物之方法係以連續過濾形式執行，其中經由有效孔徑為最大75 nm之病毒過濾器對該製劑進行過濾並持續至少約24小時。此操作模式具有以下優勢：製劑所產生之濾液可直接且連續地饋入使用或消耗濾液之製程中。在另一較佳具體實例中，病毒經過濾之作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑可直接且連續地饋入用於連續進料細胞培養過程中之生物反應器、更佳大規模生物反應器中，例如恆化器製程、灌注製程或分批進料製程。在一個具體實例中，此具體實例係使用約1000 mbar至2000 mbar之壓力及10℃至40℃之溫度執行，其中體積容量為至少2000 L/m2或至少5000 L/m2。此外，進一步較佳的是製劑之病毒過濾係執行至少約24小時或約48小時至約7個月，更佳至少約一週至約5個月且最佳至少約一週至約3週或約3週至約3個月且甚至最佳至少約2個月至約3個月。當然，所有其他參數均可與此具體實例組合。此外，較佳欲過濾之製劑為細胞培養基且過濾模式為連續模式過濾。
當然，熟習此項技術者已知，根據任何根據本發明之方法可獲得之病毒經過濾之製劑亦可導引至或饋入與細胞培養有關之其他製造製程；醫藥、診斷及/或化妝品製備以及食物製備中。另外，在彼等具體實例中，製劑之連續過濾為較佳。
因此，本發明亦涉及根據任何根據本發明之方法可獲得之作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑之用途，其係用於細胞培養；醫藥、診斷及/或化妝品製備以及食物製備。
在一些具體實例中，欲進行病毒過濾之細胞培養基為無菌的或以其他 方式經預處理。在一些具體實例中，細胞培養基包含動物蛋白或血清或其他動物衍生組分，或不含動物蛋白或不含血清或不含動物衍生組分，或具有前述特性之任何組合。在其他具體實例中，細胞培養基包含不同濃度及種類之植物或微生物衍生之水解產物，尤其大豆水解產物。在一較佳具體實例中，細胞培養基為包含不同濃度之至少一種大豆水解產物之不含動物蛋白之培養基。然而，必須強調根據本發明之方法尤其適用於對包含動物蛋白或血清或其他動物衍生組分之製劑進行病毒過濾，以便進一步改良彼等製劑特定言之當用於細胞培養過程、醫藥、診斷及/或化妝品製備以及食物製備中時之病毒安全性。
「細胞培養基」出於本發明之目的定義為適用於細胞及較佳動物細胞、更佳哺乳動物細胞在活體外細胞培養物中之生長的培養基。可使用能夠支持適當細胞在細胞培養物中生長之任何培養基。根據本發明之細胞培養基可基於任何基本培養基，諸如熟習此項技術者通常已知之DMEM、漢姆氏F12(Ham's F12)、培養基199、McCoy或RPMI。基本培養基可包含多種成分，包括胺基酸、維生素、有機及無機鹽及碳水化合物來源，各成分係以支持細胞之培養且熟習此項技術者通常已知之量存在。培養基可含有輔助物質，諸如緩衝物質(如碳酸氫鈉)、抗氧化劑、用於抵消機械應力之穩定劑或蛋白酶抑制劑。若需要，可添加非離子界面活性劑(諸如聚乙二醇與聚丙二醇之混合物(例如Pluronic F68.RTM.,SERVA)作為消泡劑。
如本文所使用，「包含動物蛋白之培養基(animal protein-comprising medium)」為包含已衍生自人類來源或動物來源之任何蛋白質之細胞培養基。
如本文所使用，「不含蛋白質之培養基(protein-free medium)」為不含已衍生自人類來源或動物來源之任何蛋白質之細胞培養基。
根據本發明之術語「不含動物蛋白之細胞培養基(animal protein-free cell culture medium)」係指不含來自更高級多細胞非植物真核生物之蛋白質及/或蛋白質組分之培養基。所避免之典型蛋白質為在血清及血清衍生物質中所發現之彼等蛋白質，諸如白蛋白、運鐵蛋白、胰島素及其他生長因子。不含動物蛋白之細胞培養基亦不含任何純化之動物衍生產物及重組動物衍生產物，以及其蛋白質消化物及萃取物或其脂質萃取物或純化組分。動物蛋白及蛋白質組分應與可包括至根據本發明之不含動物蛋白之細胞培養基中之可獲自植物(諸如大豆)及較低級真核生物(諸如酵母)之非動物蛋白、小肽及寡肽(通常長度為10-30個胺基酸)區別開。
術語「水解產物(hydrolysate)」包括動物衍生或植物衍生來源材料之任何消化物或衍生自酵母或細菌之萃取物。在根據本發明之細胞培養基中，可包含可為高度純化之大豆水解產物、純化之大豆水解產物或粗大豆水解產物之「大豆水解產物」。
術語「包含血清(serum-comprising)」當應用於培養基時包括含有血清之任何細胞培養基。
術語「不含血清(serum-free)」當應用於培養基時包括不含血清之任何細胞培養基。藉由「不含血清」應瞭解培養基較佳具有小於0.1%血清且更佳小於0.01%血清。術語「血清(serum)」係指在移除血纖維蛋白凝塊及血細胞之後所獲得之血液的流體部分。
在一些具體實例中，獲自過濾製程之濾液或濾液流分別饋入大規模細胞培養物及生物反應器中。如本文所使用之「大規模」細胞培養物係指在至少約100 L、至少約200 L、至少約300 L、至少約400 L、至少約500 L、至少約1000 L、至少約1500 L、至少約2000 L、至少約2500 L、至少約3000 L、至少4000 L、至少約5000 L、至少約7500 L、至少約10000 L或至少約20000 L之規模下的細胞培養物。在一較佳具體實例中，在根據本發明之任何方法中獲得之濾液流較佳藉由連續過濾饋入用於恆化器製程、灌注製程 或分批進料製程之生物反應器中。
本文中所涵蓋之細胞培養物可為與所培養細胞之種類及性質以及所培養細胞(例如黏著或非黏著細胞；生長中或生長停滯之細胞)之生長期無關之任何細胞培養物。
如根據本發明所使用之術語「無菌(sterile)」係指不含或基本上不含微生物及/或病毒污染之物質。就此而言，「污染物」意謂在作為細胞培養基或至少細胞培養基之組分的製劑中不同於所希望的組分的物質。在「無菌過濾」之情形中，術語無菌過濾為製劑經由無菌過濾器過濾以移除細菌及/或黴漿菌污染物之功能描述。
術語「病毒過濾(virus filtration)」在本文中與術語「奈米過濾(nanofiltration)」可互換使用且意謂對於過濾製程而言，所用病毒過濾器具有規定之有效孔徑。一般而言，彼等過濾器專用於移除病毒。
作為根據本發明之所有方法藉由過濾移除之目標的病毒污染物可為目前此項技術中已知或將來欲發現之任何病毒。此定義亦包括欲藉由過濾移除之潛在病毒污染物且亦包括藉由本發明之方法移除之一種以上病毒。舉例來說，病毒污染物或潛在病毒污染物可為以下病毒家族之成員：正黏病毒科(Orthomyxoviridae)、沙粒病毒科(Arenaviridae)、副黏病毒科(Paramyxoviridae)、彈狀病毒科(Rhabdoviridae)、冠狀病毒科(Coronaviridae)、黃病毒科(Flaviviridae)、小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)、披膜病毒科(Togaviridae)、動脈炎病毒科(Arteriviridae)、細小病毒科(RetParvoviridae)、布尼亞病毒科(Bunyaviridae)、杯狀病毒科(Caliciviridae)、逆轉錄病毒科(Retroviridae)、呼腸孤病毒科(Reoviridae)、環狀病毒科(Circoviridae)、腺病毒科(Adenoviridae)、痘病毒科(Poxviridae)、疱疹病毒科(Herpesviridae)、虹彩病毒科(Iridoviridae)或呼腸孤病毒科。更特定言之，病毒污染物可為由以下組成之群中之任一者：犬細小病毒(CPV)、小鼠微小病毒(MVM)、 卡奇谷病毒(Cache Valley virus)、布尼安維拉病毒(Bunyamwera virus)、諾斯維腦炎病毒(Northway encephalitis virus)、A/B型流感病毒、胡寧病毒(Junin virus)、副流感病毒1/2/3、猴病毒5、腮腺炎病毒、牛呼吸道融合病毒、仙台病毒(Sendai virus)、新城病病毒(Newcastle disease virus)、小鼠肺炎病毒、水泡性口炎病毒、狂犬病病毒、牛冠形病毒、鼠肝炎病毒、黃熱病病毒、西尼羅河病毒(West Nile virus)、登革熱病毒、蜱傳腦炎病毒(Tick borne encephalitis virus)、聖路易斯腦炎病毒(St.Louis encephalitis virus)、水泡疹病毒2117、腦心肌炎病毒、科沙奇病毒B-3(Coxsackie virus B-3)、蒂勒氏小鼠腦炎病毒(Theiler's mouse encephalitis virus)、口蹄病病毒、牛腸道病毒、豬腸道病毒、聖利基森林病毒(Semliki Forest virus)、辛德畢斯病毒(Sindbis virus)、風疹病毒、日本腦炎病毒、東部馬腦炎病毒、豬生殖及呼吸道症候群病毒、泡沫病毒、呼腸孤病毒1/2/3、禽呼腸孤病毒、輪狀病毒、豬環狀病毒1、腺病毒、偽狂犬病病毒、鼠γ疱疹病毒68、單純性疱疹病毒1、蛙病毒3、小鼠微小病毒切割子(minute virus of mice-cutter，MVMc)、藍舌病病毒(BTV)、動物流行性出血性疾病病毒(EHDV)、牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)、豬細小病毒(PPV)、腦心肌炎病毒(EMGV)、呼腸孤病毒3及鼠白血病病毒(MuLV)、A型肝炎、小兒麻痹或細小病毒科B19。
術語「病毒過濾器(virus filter)」在本文中與術語「病毒留持過濾器(virus retentate filter)」、「病毒過濾器(viral filter)」及「奈米過濾器(nanofilter)」可互換使用，且通常係指整體特性使得適用於病毒留持且具有滿足此功能之有效孔徑之過濾器。此等特性包括例如薄膜屬性(諸如形態)、孔隙形狀、孔隙密度及均一性、有效孔徑、薄膜厚度等。適用於本發明中之病毒過濾器薄膜涵蓋根據尺寸排阻及電荷、可能與吸附留持組合操作之薄膜。尺寸排阻及吸附留持機制未必彼此排斥且過濾器可良好地使用一或多種機制。
如本發明中所定義且用於本發明之一個具體實例中之病毒過濾器之特 性為具有有效孔徑為最大75 nm之薄膜。在根據本發明之一個具體實例中，有效孔徑之下限為約5 nm、約10 nm、約15 nm、約20 nm、約25 nm、約30 nm、約35 nm、約50 nm或約60 nm。在根據本發明之該具體實例中，有效孔徑之上限為約10 nm、約15 nm、約20 nm、約25 nm、約35 nm、約50 nm、約60 nm或約75 nm。在本發明的一些具體實例中，病毒過濾器之有效孔徑為約5至約75 nm或約10至約75 nm或約15至約75 nm或約20至約75 nm或約15至約50 nm或約15至約35 nm。
如本文所使用之有效孔徑為薄膜之特性且係指藉由薄膜可有效截留之粒子的尺寸，其中考慮到有效性之程度係藉由具有該種尺寸之粒子的對數降低因子來描述。
用於本發明方法中之病毒過濾器可為任何過濾器，其構造足以承受以下體積容量：至少約2000 L/m2或至少約3000 L/m2或至少約4000 L/m2或至少約5000 L/m2或至少約7500 L/m2或至少約10000 L/m2或至少約20000 L/m2；或其可操作以下時間跨度：大於約24小時至約7個月或較佳至少約48小時、約72小時、約4天、約5天、約6天、約7天、約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月或約7個月。
當然，若一種以上過濾器用於根據本發明之方法中，則亦可在過濾製程中較佳並聯或串聯地使用及合併不同類型之病毒過濾器。
例示性病毒過濾器包含單層或多層薄膜且由諸如聚偏二氟乙烯(PVDF)、纖維素、經改質之纖維素(例如銅銨再生纖維素中空纖維)或聚醚碸之材料構造。病毒過濾器之薄膜可具有中性、負或正電荷。薄膜可為離子型薄膜，亦即其可含有陽離子或陰離子基團，但中性薄膜可較佳，視pH值條件而定。病毒過濾器薄膜可選自疏水性及親水性薄膜。在一較佳具體實例中，用於根據本發明之方法中之病毒過濾器之薄膜係由聚偏二氟乙 烯(PVDF)或聚醚碸製成。
已證實移除病毒之能力的例示性過濾器之製造商不具排它性地包括Asahi/Planova、PALL、Millipore、Sartorius、Gambro及Amersham/AG Technology。適合用於本發明中之過濾器包括但不限於Asahi之Planova 15 N過濾器(Asahi Kasei公司，Planova Division)、Planova 20 N過濾器(Asahi Kasei公司，Planova Division)、Planova 35 N過濾器(Asahi Kasei公司，Planova Division)及BioEX過濾器(Asahi Kasei公司，Planova Division)。
當然，需要一種本發明方法中所用之過濾器為可熱壓處理的及/或在使用之前經熱壓處理及/或以其他方式滅菌。然而，確保所用病毒過濾器之無菌性的所有其他可能方法亦適合於執行本發明。此外，需要過濾器在使用之前及/或使用之後可經完整性測試。在一較佳具體實例中，在根據本發明之方法中，所用之經熱壓處理、經完整性測試之病毒過濾器具有聚偏二氟乙烯(PVDF)或聚醚碸之薄膜。
在本文中與術語「滲透物(permeate)」可互換使用之「濾液(Filtrate)」係指穿過過濾器或薄膜之溶液以及已穿過過濾器或薄膜之溶液。
如本文所使用之「留持物(Retentate)」係指溶液中經截留且不會穿過過濾器或薄膜以及未穿過過濾器或薄膜之組分。
適用於本發明中之病毒過濾設備包含至少一種將進料劃分成過濾器前部分及過濾器後部分之病毒過濾薄膜元件。過濾設備典型地亦包括用於控制壓力及流量之構件，諸如泵及閥門及流量及壓力計及密度計。該設備亦可包括呈不同組合形式之以並聯或串聯或兩種形式配置之若干過濾薄膜元件。
過濾通量根據壓力變化。一般而言，在正常操作範圍內，壓力愈高，通量愈高。通量亦隨溫度變化。操作溫度增加使通量增加。然而，在較高溫度及較高壓力下，薄膜破裂之傾向增加。對於無機薄膜，可使用與聚合 薄膜相比較高之溫度及壓力以及較高之pH範圍。
對於熟習此項技術者而言，顯而易見的是可使用分子量截斷小於約5000道爾頓或小於約1000道爾頓以便亦移除病毒之過濾器替代根據本發明之病毒過濾器。在此情形下，「分子量截斷」(MWCO)為過濾器之薄膜特性，其指定溶質以及將不滲透此過濾器之薄膜的粒子或病毒之平均分子量。
本發明之病毒過濾製程之pH值可設定在為保持所過濾製劑、較佳細胞培養基或緩衝液之穩定性及功能性所必需之任何範圍。舉例來說，pH值可設定為約1至約10、較佳約2至約8或約3至約7、較佳約6.8至約8或最佳約7.0至約7.45(生理pH值)。
亦預期根據本發明之方法可整合至移除細菌污染物之滅菌級過濾器之系統下游中，且從而產生製劑之無菌進料流，該無菌進料流可為「起始製劑」，亦即用於根據本發明之任何方法中之製劑。
在一個具體實例中，本發明之方法可使用經串聯配置之兩種或兩種以上過濾器來執行。此舉具有增加病毒清除能力及針對潛在病毒過濾器失效或突破進行防護之優勢。在替代具體實例中，使用經並聯配置之兩種或兩種以上病毒過濾器執行過濾，從而允許在不破壞連續製程的情況下進行病毒過濾器更換且防止未預見之例如歸因於堵塞之培養基保持。
在其他具體實例中，使用在包含Y形接合之管道系統中並聯配置之至少兩種過濾器來執行過濾，其中各過濾器與Y形接合之分支及製劑供應來源呈流體連通。在一些具體實例中，Y形接合包含連接器。在其他具體實例中，使用含有複數個串聯與並聯配置之過濾器之裝置執行過濾。如下配置尤其適用於本發明之情形，其中至少第二過濾器與其他並聯過濾器或串聯配置之過濾器結合並聯配置以便有可能在不停止過濾製程的情況下出於維護原因更換過濾器中之一者。
在一些具體實例中，在使用之前對過濾器進行完整性測試。完整性測 試可採取基於空氣-水擴散之測試的形式，其中將空氣導引至過濾器中且接著將過濾器浸沒於無菌水中並檢驗氣泡，氣泡將表明過濾器中之滲漏。
在一個具體實例中，病毒過濾器或病毒過濾器薄膜可在病毒過濾程序之前經預處理，例如藉由用洗滌劑、特定言之用酸性洗滌劑、鹼性洗滌劑及/或乙醇洗滌。
在本發明之一個具體實例中，亦可在根據本發明之方法中執行切向流過濾。在本發明之情形中，「切向流過濾(tangential flow filtration)」在本文中與術語「橫流過濾(crossflow filtration)」可互換使用。在切向流模式中，過濾器上游側之液體流動路徑經導引大致與過濾器表面平行或相切或橫跨過濾器表面。滲透物之穿過係藉由相對於進料限制留持物之流量來促進，從而對系統產生背壓且允許滲透物遷移穿過過濾器薄膜。橫跨薄膜表面之恆定掃描電流具有將由所過濾產物中之污染物引起之堵塞減至最小的作用。達成針對病毒污染物之至少1 Log10降低值(LRV)或針對病毒污染物之至少2 Log10降低值(LRV)或針對病毒污染物之至少3 Log10降低值(LRV)或針對病毒污染物之至少4 Log10降低值(LRV)或針對病毒污染物之至少5 Log10降低值(LRV)或針對病毒污染物之至少6 Log10降低值或針對病毒污染物之至少7 Log10降低值或針對病毒污染物之至少8 Log10降低值、較佳針對病毒污染物之至少4 Log10降低值(LRV)的任何病毒過濾器均適合。所有對數降低因子均可適用於病毒過濾器之最大75 nm之有效孔徑中之任一者。在根據本發明之一個具體實例中，病毒過濾器之有效孔徑之下限為約5 nm、約10 nm、約15 nm、約20 nm、約25 nm、約30 nm、約35 nm、約50 nm或約60 nm。在根據本發明之該具體實例中，病毒過濾器之有效孔徑之上限為約10 nm、約15 nm、約20 nm、約25 nm、約35 nm、約50 nm、約60 nm或約75 nm。在本發明的一些具體實例中，病毒過濾器之有效孔徑為約5至約75 nm或約10至約75 nm或約15至約75 nm或約20至約75 nm或約15 至約50 nm或約15至約35 nm。
在本發明之一些具體實例中，使用正常流過濾。在本文中與術語「閉端(dead end)」、「單通道(single pass)」及「定向流過濾(direct flow filtration)」可互換使用之「正常流過濾(Normal flow filtration)」係指一種病毒過濾器過濾製程，其中液體流動路徑經導引通常與過濾器表面垂直，視過濾器模組之構造而定，該流體流亦可經導引與過濾器薄膜相切，然而與橫流過濾不同，不施加留持物之再循環，這意謂過濾器之前及之後之特定流速相同。達成針對病毒污染物之至少1 Log10降低值(LRV)或針對病毒污染物之至少2 Log10降低值(LRV)或針對病毒污染物之至少3 Log10降低值(LRV)或針對病毒污染物之至少4 Log10降低值(LRV)或針對病毒污染物之至少5 Log10降低值(LRV)或針對病毒污染物之至少6 Log10降低值或針對病毒污染物之至少7 Log10降低值或針對病毒污染物之至少8 Log10降低值、較佳針對病毒污染物之至少4 Log10降低值(LRV)的任何病毒過濾器均適合。所有對數降低因子均可適用於病毒過濾器之最大75 nm之有效孔徑中之任一者。在根據本發明之一個具體實例中，病毒過濾器之有效孔徑之下限為約5 nm、約10 nm、約15 nm、約20 nm、約25 nm、約30 nm、約35 nm、約50 nm或約60 nm。在根據本發明之該具體實例中，病毒過濾器之有效孔徑之上限為約10 nm、約15 nm、約20 nm、約25 nm、約35 nm、約50 nm、約60 nm或約75 nm。在本發明的一些具體實例中，病毒過濾器之有效孔徑為約5至約75 nm或約10至約75 nm或約15至約75 nm或約20至約75 nm或約15至約50 nm或約15至約35 nm。
如一般技術者應瞭解，本發明之所有具體實例均可藉助於技術上適用於該目的之任何可用系統來執行，例如變速或定速蠕動泵、離心泵等。可使用任何種類之加壓容器或其他容器在過濾製程期間以恆定或可變壓力產生穿過病毒過濾器之流。
一般技術者應瞭解過濾器類型及模式(閉端過濾或切向流過濾)之選擇應取決於以下因素，諸如組成、蛋白質含量、分子量分佈、欲加工之進料中之雜質/微粒加載量或任何其他生物化學或物理性質、製程要求及限制(可允許的壓力、製程時間、欲過濾之體積)或潛在病毒污染物之特性，例如病毒尺寸。亦必須考慮製程內完整性測試之可用性及病毒清除研究之數理邏輯。閉端過濾應典型地用於具有高純度之進料流以產生合理的製程通量，而在一些具體實例中，切向流過濾可適應具有高微粒加載量之進料流。在一些較佳具體實例中，正常流過濾較佳與使用至少一種有效孔徑為最大75 nm之病毒過濾器之連續過濾模式組合。當然，此具體實例亦可與本發明之所有其他參數組合。
當然，應瞭解本發明不限於所描述之特定具體實例，該等具體實例當然可變化。亦應瞭解，本文中所用之術語僅出於描述特定具體實例之目的，而並不意欲具限制性，因為本發明之範疇將僅由隨附申請專利範圍限制。
當提供值之範圍時，應理解在該範圍的上限與下限之間的各介入值(除非本文另外明確指明，否則精確至下限單位之十分之一)及該所述範圍中之任何其他所述值或介入值均涵蓋在本發明內。此等較小範圍之上限及下限可獨立地包括於較小範圍內且亦涵蓋於本發明內，受到所述範圍內之任何特定排除之限度限制。當所述範圍包括一個或兩個限度時，排除彼等所包括之限度中之任一者或兩者之範圍亦包括於本發明中。
除非另外規定，否則本文中所用之所有技術及科學術語均具有與本發明所屬領域之一般技術者通常所理解相同之含義。儘管在本發明之實踐或測試中亦可使用與本文中所描述之方法及材料類似或等效之任何方法及材料，但現描述代表性說明性方法及材料。
本說明書中所引用之所有公開案及專利均係以引用的方式併入本文中，就如同特定地且個別地指示各個別公開案或專利以引用的方式併入一 般，且以引用之方式併入本文中以結合所引用之公開案揭示及描述方法及/或材料。對任何公開案之引用均係關於其在申請日期之前的揭示內容，且不應理解為承認本發明無權憑藉先前發明而早於該公開案。另外，所提供之公開日期可能不同於可能需要獨立確認之實際公開日期。
應注意，除非本文另外明確指明，否則如本文中及隨附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個指示物。應進一步注意，申請專利範圍可經起草排除任何視情況選用之要素。因此，此陳述意欲與對申請專利範圍要素之引述結合充當使用諸如「僅僅(solely)」、「僅(only)」及其類似術語之排斥性術語或使用「負性」限制之前提基礎。
如熟習此項技術者在閱讀本發明之後將顯而易見，本文中所描述及說明之個別具體實例中之每一者均具有個別組分及特徵，其可在不背離本發明之範疇或精神之情況下容易地與其他若干具體實例中之任一者的特徵分離或與其組合。任何所述方法均可以所述事件之順序或以邏輯上可能的任何其他順序來進行。
實施例
以下提供實施例以說明本發明。此等實施例不意欲限制本發明於任何特定應用或操作理論。
實施例1：使用不同病毒過濾器及細胞培養基之按比例縮小之病毒過濾
分析來自不同製造商之病毒過濾薄膜(參見表2)在具有含有4 g/L濃度之來自不同批次及供應商之大豆水解產物(參見表3)之細胞培養基的不同過濾器尺寸中之過濾動力學。細胞培養基組成及製備描述於實施例2中。藉由用加壓容器控制壓力(圖3、圖4、圖5，及圖7中之外加實驗，圖8及圖9)或藉由例如藉由蠕動泵控制流速(圖1、圖2、圖3及圖6)來進行過濾實驗。用於實驗之溫度及壓力控制之其他設備描述於表4中。
Figure TWI609962BD00001
Figure TWI609962BD00002
Figure TWI609962BD00003
實施例2：細胞培養基製備
對細胞培養基組成之整體描述提供於下表5中，且不同大豆水解產物之組成列於上表3中。不同批次之細胞培養基在實施例中所描述之不同病毒過濾之前經無菌級過濾器(例如Pall Fluorodyne® II DJL薄膜過濾器濾筒0.1μ)無菌過濾。本文中描述之培養基製備用於圖1至圖11中所描述及顯示之所有實驗。
Figure TWI609962BD00004
實施例3：過濾器準備：
根據病毒過濾器製造商之產品手冊準備病毒過濾器。除非過濾器為無菌遞送及組裝的，否則在>121℃下將過濾器熱壓處理20分鐘。
實施例4：完整性測試
使用之後，根據各別製造商建議洗滌具有適當尺寸之過濾器(表2之過濾器A、C、E及F)。用Palltronic Flowstar XC(Pall,US)根據製造商之說明書執行順流測試。在本文中所描述之過濾實驗之後執行的所有完整性測試均符合指定限度。
實施例5：差壓與通量之間的比例關係
為研究壓差與體積流速之間的關係，在環境溫度下使用經熱壓處理之病毒過濾器對細胞培養基進行過濾。將培養基填充至壓力容器及與壓力容器連接之病毒過濾器中，接著在不同程度下對其加壓。用天平及壓力轉換器量測特定流速及差壓且隨時間進行記錄(圖3)。
實施例6：10 L按比例縮小之醱酵系統模型
使用表現重組蛋白之CHO細胞醱酵系統來比較經及未經病毒過濾之細胞培養基(圖6)。研究在生長速率及產量方面之效能。製備如實施例2中所描述之細胞培養基。實驗之一部分係僅以無菌過濾之培養基來進行，而另一部分係以相同培養基及使用Sartorius Virosart CPV 180 cm2的額外病毒過濾來進行。在2-8℃下進行過濾。在具有在線控制之pH值、pO2及溫度之 Rushton型攪拌10 L台式生物反應器中進行醱酵實驗。醱酵之參數設定點及範圍如下：pH：7.05(6.8-7.3)
T：37.0℃(35-39℃)
DO：20%(空氣飽和)(10-60%)
使用經及未經額外病毒過濾之培養基依次以批次模式及恆化器培養培養細胞。恆化器模式之數據(生長速率及產率)產生自4週連續細胞培養。藉由CASY量測測定細胞計數。在恆化器培養中，藉由下式計算特定生長速率(μ)：μ=D+ln(Xt1/X10)/(t1-t0)
其中D為以每天培養基進料速率與工作體積之比率形式計算之稀釋比率[1/d]。由CASY均質化細胞計數計算生長速率。
對於生物化學分析，在Heraeus Multifuge 1 S-R中以400 x g將均質懸浮液離心10 min且在艾本德管(Eppendorf tube)中準備1.0 mL等分試樣且儲存於
Figure TWI609962BD00005
-20℃下。根據標準操作程序藉由顯色分析對不含細胞之上清液進行關於所表現之重組蛋白之活性的分析。
在此實驗中藉由下式計算體積產率P：P[U/(L×d)]=活性[mU/mL]*稀釋比率[d-1]
藉由下式計算細胞特定產率qP：qP[mU/(10E06個細胞×d)]=P[U/(L×d)]/細胞計數[10E06個細胞/mL]
實施例7：120 L按比例縮小之醱酵系統模型
在將培養基添加至表現重組蛋白之CHO細胞醱酵系統中之前，對於對120 L工作體積之培養基執行之連續病毒過濾技術進行關於其對生長速率及產量之影響的研究(圖6A、圖6B及圖6C)。該研究對使用相同細胞培養基之三種變化形式之製造製程進行比較：a)標準培養基；b)使用Virosart CPV 病毒過濾器過濾之標準培養基；及c)使用Millipore Viresolve NFP病毒過濾器過濾之標準培養基。
在連續製造製程期間，對於不同時間間隔交替使用兩種不同的病毒過濾器(Virosart CPV Midicap尺寸2000 cm2及Millipore Viresolve NFP尺寸850 cm2)。自培養日K00-K14、K23-K30及K39-K63使用Sartorius CPV過濾器且自培養日K14-K23及K30-K39使用Millipore NFP過濾器。
醱酵之參數設定點及範圍如下：pH：7.05(6.8-7.3)
T：37.0℃(35-39℃)
DO：20%(空氣飽和)(10-60%)
取樣及分析
藉由CASY®細胞計數及分析儀系統測定細胞計數。對於生物化學分析，在Heraeus Multifuge 1 S-R(Thermo Scientific,USA)中以400 x g將均質懸浮液離心10 min。藉由顯色分析對不含細胞之上清液進行關於所表現之重組蛋白之活性的分析。
在恆化器培養中，藉由下式計算特定生長比率(μ)：μ=D+ln(Xt1/Xt0)/(t1-t0)
其中D為以每天培養基進料速率與工作體積之比率形式計算之稀釋比率[1/d]。由CASY均質化細胞計數計算生長速率。
在此實驗中藉由下式計算體積產率P：P[U/(L*d)]=活性[mU/mL]*稀釋比率[d-1]
藉由下式計算細胞特定產率qP：qP[mU/(10E06個細胞×d)]=P[U/(L*d)]/細胞計數[10E06個細胞/mL]
實施例8：使用ASAHI Planova 15N病毒過濾器之病毒過濾
對含有大豆水解產物之培養基(DOMO SE50 MAF #5)外加MMV且置 放至與加壓氮氣供應器連接之槽中。使外加MMV之材料在1100 mbar(設定點)之恆定壓力下穿過以閉端模式在線組裝之10 cm2ASAHI Planova 15N病毒過濾器。量測且連續記錄以下參數之最小及最大值：進料壓力；進料、濾液及環境溫度及濾液重量(其變化用於計算濾液流速)。每天獲取樣品持續多達7天且分析MMV病毒效價(圖7)。
實施例9：使用ASAHI Planova BioEX病毒過濾器之病毒過濾
對含有大豆水解產物之培養基(操作#1含有大豆水解產物DMV SE50 MAF UF #5；操作#2含有大豆水解產物SDMV SE50 MAF UF #4)外加MMV且置放至與加壓氮氣供應器連接之槽中。使外加MMV之材料在2000 mbar(設定點)之恆定壓力下穿過以閉端模式在線組裝之10 cm2 ASAHI Planova BioEX病毒過濾器。量測且連續記錄以下參數之最小及最大值：進料壓力；進料、濾液及環境溫度及濾液重量(其變化用於計算濾液流速)。每天獲取樣品持續5天且分析MMV病毒效價(圖8)。
實施例10：病毒過濾概述
對含有不同大豆水解產物之細胞培養基外加MMV且置放至與加壓氮氣供應器連接之槽中。不同病毒過濾器與表6中所列之不同大豆水解產物組合使用：
Figure TWI609962BD00006
對於所有操作，在2巴(設定點)之恆定壓力下以閉端模式組裝過濾，除了操作實驗#5及6在1.1巴(設定點)之恆定壓力下執行。量測且連續記錄以下參數之最小及最大值：進料壓力；進料、濾液及環境溫度及濾液重量(其變化用於計算濾液流速)。在實驗之操作時間期間獲取樣品且分析MMV病毒效價。由濾液中之總病毒傳染性加載量與過濾之前總病毒傳染性加載量之差異計算總對數降低情況(圖9)。
實施例11：外加MMV病毒之長期過濾
對如實施例2中所描述之細胞培養基外加MMV至效價為5.0[log10(TCID50/mL)]且經20 nm孔徑病毒過濾器(Sartorius Visrosart CPV 5 cm2)對其進行30天之長期過濾。以與實施例9及實施例10相當之裝置進行過濾，但具有1.1巴(指定範圍：0.8巴至1.2巴)之恆定壓力且具有常規壓力及流量中斷以挑戰病毒過濾器。在實驗過程中記錄流速且維持在4 L/(m2×hr)以上(圖10)。
獲取20個濾液樣品(每週多達5次)且測定MMV病毒效價及加載量。在所分析之20個溶離份中之任一者中均未觀測到病毒突破。視溶離份體積而定，病毒加載量介於<0.9[log10(TCID50)]至<2.8[log10(TCID50)]範圍內。濾液中之總病毒加載量<3.0[log10(TCID50)]，當自外加材料之初始病毒加載量(即8.5[log10(TCID50)])中扣除時產生>5.5 log10之總病毒降低因子。此可見為有效且完全的(圖11)。
儘管已出於清楚理解之目的藉助於說明及實施例相當詳細地描述前述發明，但根據本發明之教示一般技術者顯而易見的是，可在不背離所附申請專利範圍之精神或範疇的情況下對其作出某些改變及修改。
參考本發明之某些例示性具體實例對本發明進行更特定描述，該等例示性具體實例說明於附圖中。此等圖式形成本說明書之一部分。然而，應注意，該等附圖說明本發明之例示性具體實例且因此不應視為限制其範疇。
圖1顯示使用全部與補充有3種不同大豆水解產物批料(Kerry HyPep1510 #1、DOMO SE50 MAF UF #1及#2)之細胞培養基組合之不同過濾器施加流量控制病毒過濾(圖1C)所表現出之病毒過濾動力學。
所應用之過濾器及實驗條件(亦參見實施例1至實施例4)：過濾器A：Sartorius Virosart CPV，180 cm2；在30℃下且流速為約30 L/(m2×hr)
過濾器B：Millipore Viresolve NFP 3.1 cm2；在30℃下且流速為約40-60 L/(m2×hr)。過濾進行最多達9天或直至超過2000 mbar之最大壓力。圖1A顯示呈每薄膜表面積之過濾體積形式之體積容量針對時間繪製之曲線，在約最小4000 L/m2至約12000 L/m2範圍內。視過濾器類型而定，過濾結束時之最大壓力在約600 mbar與2400 mbar之間(圖1B)。一般而言，關於體積容量及最大壓力，大豆水解產物之間的差異相當小。
圖2顯示使用不同過濾器及補充有3種不同大豆水解產物批料(Kerry HyPep 1510 #1、DOMO SE50 MAF UF#1及#2)之細胞培養基施加流量控制病毒過濾(圖2C)所表現出的病毒過濾動力學。
所應用之過濾器及實驗條件(亦參見實施例1至實施例4)：
過濾器A：Sartorius Virosart CPV，180cm2；在30℃下且流速為約30L/(m2×hr)
過濾器D：Asahi BioEX 10cm2；在環境溫度(約22℃)下且流速為約20L/(m2×hr)。與圖1中所述之實驗相比，過濾進行多達81天之較長時間跨度或直至達至2000mbar之壓力。圖2A顯示呈每薄膜表面積之過濾體積形式之體積容量針對時間繪製之曲線，在約最小16000L/m2(對於過濾器A及DOMO SE50 MAF #2)至約35000L/m2(對於過濾器D及所有3種不同水解產物批料)範圍內。視過濾器類型而定，過濾結束時之最大壓力在約1200mbar與2000mbar之間(圖2B)。一般而言，關於體積容量及最大壓力，大豆水解產物之間的差異相當小。
圖3為顯示如在約22℃下使用過濾器A(Sartorius Virosart CPV 180cm2)及含有大豆水解產物DOMO SE50 MAF UF批號2(參見實施例5)之培養基觀測到的通量與差壓之間關係的圖。
需要約100mbar之最小差壓以達成最小可偵測特定流速，其接著在特定流速與差壓之間明顯線性成比例相關之情況下逐漸增加。
圖4顯示使用過濾器A(Sartorius CPV，180cm2)及具有大豆水解產物Kerry HyPep 1510 #2(參見實施例1至實施例4)之培養基時壓力控制過濾與流速控制過濾之間的差異。過濾進行19天且在此時間內達至約6000-7000L/m2之體積容量(參見圖4A)。流量控制過濾之最終壓力與壓力控制過濾之壓力相當(參見圖4B)，且壓力控制過濾之最終特定流速與流速控制過濾之流速相當(參見圖4C)。此表明用於病毒過濾之兩種控制策略可產生相當之體積容量。
圖5顯示相較於實施例6中所述之非病毒經過濾之培養基，使用病毒經過濾之培養基進行的10L生物反應器實驗之結果。細胞培養基係在實驗起始之前用過濾器A分批過濾病毒。各實驗使用補充有3種不同大豆水解 產物(Kerry HyPep 1510，批號1；DOMO SE50 MAF UF，批號1及DOMO SE50 MAF UF，批號2)之細胞培養基並聯進行。自4週連續細胞培養之最後3週進行數據計算。關於特定產率(圖5A)、體積產率(圖5B)及特定生長速率(圖5C)，各別病毒經過濾之培養基(大豆1NF、大豆3NF及大豆2NF)與其未經過濾之參考物(大豆1、大豆3及大豆2)之間未能偵測到差異。
圖6顯示相較於實施例7中所述之非病毒經過濾之培養基，使用病毒經過濾之培養基進行的120L生物反應器實驗之結果。細胞培養基係在生物反應器之培養基進料管線之管線內替代地使用過濾器E(Sartorius Virosart CPV，2000cm2)及過濾器F(Millipore Viresolve NFP 850cm2)以連續模式過濾病毒約58天。病毒經過濾之培養基進料的時間間隔及體積容量顯示於圖6A中。對於使用不同過濾器的間隔進行數據計算。關於特定生長速率(圖6B)及體積產率(圖6C)，在各別病毒經過濾之培養基與未經過濾之參考物之間未能偵測到差異。
圖7顯示在用過濾器G(ASAHI Planova 15N)病毒過濾器過濾含有大豆水解產物DOMO SE50 MAF#5 UF之外加MMV之培養基過程中所獲取的連續濾液樣品中發現之MMV傳染性效價[TCID50/mL]之變化(參見實施例8)。未觀測到病毒突破且所見病毒移除為有效且完全的。
圖8顯示在用過濾器D(Asahi BioEX)病毒過濾器過濾含有大豆水解產物(操作#1含有大豆水解產物DMV SE50 MAF UF #5；操作#2含有大豆水解產物DMV SE50 MAF UF #4)之外加MMV之培養基過程中所獲取的連續濾液樣品中發現之MMV傳染性效價[TCID50/mL]之變化(參見實施例9)。在2至3天內觀測到低程度病毒突破。儘管如此，所見病毒移除仍有效。
圖9顯示在如實施例10中所描述過濾外加MMV之培養基過程中所獲取的連續濾液樣品中發現之MMV傳染性效價[TCID50/mL]之變化。對於操 作#1及#2(過濾器D)而言，未觀測到病毒突破，從而自含有大豆水解產物之培養基有效且完全地移除病毒。對於操作#3及操作#4(過濾器I)以及操作#5及#6(過濾器G)而言，觀測到低程度病毒突破，從而自含有大豆水解產物之培養基有效但不完全地移除病毒。對於操作#7(過濾器B)及操作#8(過濾器H)而言，觀測到較顯著病毒突破，從而產生處於顯著極限之降低之病毒移除因子。
然而，在所有過濾器情況下，至少在一個實驗中，可達成大於約1 log TCID50/mL之最小總效價降低。
Figure TWI609962BD00007
圖10顯示如實施例11中所描述執行之病毒過濾之動力學。壓力維持在0.8與1.2巴之間(平均1.1巴)，除了模擬操作條件之最差情況的有意壓力及流量中斷。達成約38L/(m2×hr)之初始流速，其逐漸降低直至實驗結束，然而，可維持4L/(m2×hr)之最小流速。包括壓力中斷之總持續時間為30天。約6500L/m2在過濾器上穿過。
圖11顯示在如實施例11中所描述過濾外加MMV之培養基之過程中所獲取的連續濾液樣品中發現之MMV傳染性效價[log10(TCID50/mL)]之變化。在所分析之20個溶離份中之任一者中均未觀測到病毒突破。視溶離份體積而定，病毒加載量介於<0.9[log10(TCID50)]至<2.8[log10(TCID50)]範圍內。濾液中之總病毒加載量<3.0[log10(TCID50)]，當自外加材料之初始病毒加載 量(亦即8.5[log10(TCID50)])中扣除時產生>5.5 log10之總病毒降低因子。此可見為有效且完全的。

Claims (39)

  1. 一種自製劑移除病毒污染物之方法，其中該製劑為細胞培養基或細胞培養基之至少一種組分，該方法包含經由有效孔徑為最大75nm之病毒過濾器對該製劑進行過濾持續至少約24小時，其中該過濾在至少約2000L/m2之體積容量下操作。
  2. 如申請專利範圍第1項之方法，其中對該製劑進行過濾持續至少約48小時至多約7個月。
  3. 如申請專利範圍第1項之方法，其進一步包含將濾液饋至細胞培養基或細胞培養基之至少一種組分中。
  4. 如申請專利範圍第1項或第2項之方法，其中該過濾為連續過濾。
  5. 如申請專利範圍第1項或第2項之方法，其中該過濾係在約2℃至約60℃之溫度下執行。
  6. 如申請專利範圍第1項或第2項之方法，其中該病毒過濾器達成針對病毒污染物之至少1Log10降低值(LRV)。
  7. 如申請專利範圍第1項或第2項之方法，其中該過濾係使用串聯、並聯或以兩者之混合形式配置之兩個或兩個以上過濾器執行。
  8. 如申請專利範圍第7項之方法，其中該過濾係使用在包含Y形接合之管系統中並聯配置之兩個過濾器執行，且其中各過濾器與該Y形接合之分支及製劑供應來源呈流體連通。
  9. 如申請專利範圍第1項或第2項之方法，其中該過濾係在約100mbar至約4000mbar範圍內之壓力下執行。
  10. 如申請專利範圍第1項或第2項之方法，其中該病毒過濾器為可熱壓處理的。
  11. 如申請專利範圍第1項或第2項之方法，其中該細胞培養基包含大豆水解產物。
  12. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該過濾在至少約3000L/m2之體積容量下操作。
  13. 如申請專利範圍第12項之方法，其中該過濾在至少約5000L/m2之體積容量下操作。
  14. 如申請專利範圍第2項之方法，其中對該製劑進行過濾持續至少約72小時至多約3個月。
  15. 如申請專利範圍第5項之方法，其中該過濾係在約10℃至約40℃之溫度下執行。
  16. 如申請專利範圍第15項之方法，其中該過濾係在約15℃至約37℃之溫度下執行。
  17. 如申請專利範圍第6項之方法，其中該病毒過濾器達成針對病毒污染物之至少4LRV。
  18. 如申請專利範圍第17項之方法，其中該病毒過濾器達成針對病毒污染物之至少6LRV。
  19. 如申請專利範圍第9項之方法，其中該過濾係在約100mbar至約3500mbar範圍內之壓力下執行。
  20. 如申請專利範圍第19項之方法，其中該過濾係在約1000mbar至約3000mbar範圍內之壓力下執行。
  21. 一種有效孔徑為最大75nm之病毒過濾器之用途，其用於在至少約24小時的過濾中自製劑移除病毒污染物，該製劑為細胞培養基或細胞培養基之至少一種組分，其中該過濾在至少約2000L/m2之體積容量下操作。
  22. 如申請專利範圍第21項之用途，其中該過濾係執行至少約48小時至多約7個月。
  23. 如申請專利範圍第21項之用途，其中該過濾為連續過濾。
  24. 如申請專利範圍第21項或第22項之用途，其中該過濾係在約2℃ 至約60℃之溫度範圍下執行。
  25. 如申請專利範圍第21項或第22項之用途，其中該病毒過濾器達成針對病毒污染物之至少1Log10降低值(LRV)。
  26. 如申請專利範圍第21項或第22項之用途，其中該過濾係使用串聯、並聯或以兩者之混合形式配置之兩個或兩個以上過濾器執行。
  27. 如申請專利範圍第26項之用途，其中該過濾係使用在包含Y形接合之管系統中並聯配置之兩個過濾器執行，且其中各過濾器與該Y形接合之分支及製劑供應來源呈流體連通。
  28. 如申請專利範圍第21項或第22項之用途，其中該過濾係在約100mbar至約4000mbar範圍內之壓力下執行。
  29. 如申請專利範圍第21項或第22項之用途，其中該病毒過濾器為可熱壓處理的。
  30. 如申請專利範圍第21項或第22項之用途，其中該細胞培養基包含大豆水解產物。
  31. 如申請專利範圍第21項之用途，其中該過濾在至少3000L/m2之體積容量下操作。
  32. 如申請專利範圍第31項之用途，其中該過濾在至少5000L/m2之體積容量下操作。
  33. 如申請專利範圍第22項之用途，其中該過濾執行至少約72小時至多約3個月。
  34. 如申請專利範圍第24項之用途，其中該過濾係在約10℃至約40℃之溫度範圍下執行。
  35. 如申請專利範圍第34項之用途，其中該過濾係在約15℃至約37℃之溫度範圍下執行。
  36. 如申請專利範圍第25項之用途，其中該病毒過濾器達成針對病毒污 染物之至少4LRV。
  37. 如申請專利範圍第36項之用途，其中該病毒過濾器達成針對病毒污染物之至少6LRV。
  38. 如申請專利範圍第28項之用途，其中該過濾係在約100mbar至約3500mbar範圍內之壓力下執行。
  39. 如申請專利範圍第38項之用途，其中該過濾係在約1000mbar至約3000mbar範圍內之壓力下執行。
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Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY173835A (en) * 2012-06-21 2020-02-24 Baxter Int Virus filtration of cell culture media
AR095196A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
SG10201507931QA (en) * 2014-12-22 2016-07-28 Emd Millipore Corp Removal of microorganisms from cell culture media
US20180072769A1 (en) * 2015-03-23 2018-03-15 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Virus filtration
EP3015542A1 (de) * 2015-05-07 2016-05-04 Bayer Technology Services GmbH Modulare anlage und verfahren zur kontinuierlichen, keimreduzierten produktion und/oder aufbereitung eines produktes
TW202330904A (zh) 2015-08-04 2023-08-01 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法
SG11201809051YA (en) * 2016-04-15 2018-11-29 Boehringer Ingelheim Int Cell retention device and method
EP3535047A1 (en) * 2016-12-09 2019-09-11 Lonza Ltd Method for the reduction of viral titer in pharmaceuticals
CN114075269A (zh) * 2017-07-06 2022-02-22 菲仕兰坎皮纳荷兰私人有限公司 用于制备糖蛋白的细胞培养工艺
TWI846694B (zh) * 2018-05-04 2024-07-01 美商健臻公司 具有過濾系統的灌注式生物反應器
CA3132977A1 (en) * 2019-03-11 2020-09-17 Genzyme Corporation Tangential viral filtration
WO2021231956A1 (en) * 2020-05-14 2021-11-18 North Carolina State University Fast automated approach for the derivation of acellular extracellular matrix scaffolds from tissues
EP4221858A1 (en) * 2020-10-02 2023-08-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Continuous virus retentive filtration

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1457497A1 (en) * 2003-03-06 2004-09-15 Probitas Pharma, S.A. Process for removing viruses in fibrinogen solutions and fibrinogen obtained by said process
EP1775016A1 (en) * 2005-10-14 2007-04-18 Millipore Corporation Ultrafiltration membranes rendered hydrophilic by hydroxyalkyl cellulose and method of making and use of such membranes

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0422874A (ja) * 1990-05-16 1992-01-27 Matsushita Electric Ind Co Ltd 波形表示装置
GB2352652A (en) * 1999-08-06 2001-02-07 Fsm Technologies Ltd Pre-treating hollow fibre membranes for micro-organism detection
US6485686B1 (en) * 1999-09-17 2002-11-26 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Method and apparatus for counting submicron sized particles
WO2001040448A1 (en) 1999-12-02 2001-06-07 The General Hospital Corporation Methods for removal, purification, and concentration of viruses, and methods of therapy based thereupon
US6485688B1 (en) 2000-04-24 2002-11-26 General Electric Company On-line sparging sampling and monitoring systems and methods
US6835311B2 (en) * 2002-01-31 2004-12-28 Koslow Technologies Corporation Microporous filter media, filtration systems containing same, and methods of making and using
US6630016B2 (en) * 2002-01-31 2003-10-07 Koslow Technologies Corp. Microporous filter media, filtration systems containing same, and methods of making and using
CN1890257A (zh) * 2003-12-01 2007-01-03 诺和诺德医疗保健公司 液体因子ⅶ组合物的病毒过滤
DE102005047301B4 (de) * 2005-09-30 2009-04-16 Sartorius Stedim Biotech Gmbh Verfahren zum Nachweis der Virenabreicherung für die Validierung von Filtern und Filtrationsprozessen
US8309029B1 (en) * 2009-03-26 2012-11-13 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Virus and particulate separation from solution
US8945895B2 (en) * 2009-07-31 2015-02-03 Baxter International Inc. Methods of purifying recombinant ADAMTS13 and other proteins and compositions thereof
AU2010284116B9 (en) * 2009-08-20 2015-03-26 Takeda Pharmaceutical Company Limited Purification of VWF for increased removal of non-lipid enveloped viruses
MY173835A (en) * 2012-06-21 2020-02-24 Baxter Int Virus filtration of cell culture media

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1457497A1 (en) * 2003-03-06 2004-09-15 Probitas Pharma, S.A. Process for removing viruses in fibrinogen solutions and fibrinogen obtained by said process
EP1775016A1 (en) * 2005-10-14 2007-04-18 Millipore Corporation Ultrafiltration membranes rendered hydrophilic by hydroxyalkyl cellulose and method of making and use of such membranes

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Liu S et al., "Development and Qualification of a Novel Virus Removal Filter for Cell Culture Applications", Biotechnol. Prog., vol.16, p.425-434, 2000/03/05 *

Also Published As

Publication number Publication date
MY173835A (en) 2020-02-24
HK1198335A1 (zh) 2015-04-02
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PT3103861T (pt) 2020-11-16
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TW201816105A (zh) 2018-05-01
EP2732020B1 (en) 2016-08-10
US20130344535A1 (en) 2013-12-26
SG10201701721TA (en) 2017-04-27
US9670456B2 (en) 2017-06-06
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