TWI589297B - Use of melon leaf extract for the treatment and / or prevention of alcoholic fatty liver or its complications - Google Patents
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Description
本發明係有關於一種植物萃取物之用途,特別係指香瓜茄葉萃取物用於治療及/或預防酒精性脂肪肝或其併發症之用途。
按,香瓜茄又名為人參果,為一種原產於南美洲之草本植物,於數十年前被引進臺灣,目前於桃園、南投、澎湖皆有種植。香瓜茄果實成熟後雖可以供食用,不過由於其甜度不高,因此民眾對於此植物之接受度不高,而多被作為觀賞之用。不過近年來研究發現香瓜茄係具有極高營養價值,具有高蛋白、低糖份且富含多種維生素、胺基酸、膳食纖維、脂肪、人體必須之微量元素等特性,因而被認為對於人體健康有極佳保健效果。舉例來說,中華民國專利公開第201302213號係指出香瓜茄萃取物具有緩和糖尿病患者之體重減輕、高血糖、發炎等症狀之功效。惟,目前對於香瓜茄之研究仍聚焦於香瓜茄果實對於糖尿病及其併發症之功效上,未有研究針對香瓜茄其他部位及其他適應症進行。
脂肪肝係分為兩大類,其一為非酒精性脂肪肝,多與營養過剩、肥胖、糖尿病有關,另一類係為酒精性脂肪肝,其與長期過度飲酒息息相關。臨床研究指出,若罹患酒精性脂肪肝之患者仍持續飲酒,使肝臟一直處於被破壞之狀態,則會導致酒精性肝炎、肝硬化或肝癌之發生。臨床上目前對於酒精性脂肪
肝之治療方法係為戒酒,換言之,對於罹患酒精性脂肪肝之患者來說,倘若仍持續飲酒,不僅無法治療酒精性脂肪肝,更會使肝臟惡化,罹患更嚴重之肝臟疾病。
有鑑於目前臨床上係缺乏治療及/或預防酒精性脂肪肝及其併發症之組合物,本案發明人係致力於相關研究,終於成功研究出治療及/或預防酒精性脂肪肝及其併發症之有效成份。
本發明之主要目的在於提供一種香瓜茄葉及其萃取物之用途,其係能夠用於有效地預防及/或改善酒精性肝臟疾病,具體來說,該酒精性肝臟疾病係為酒精誘發之肝臟病變,如酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精所引起之肝臟脂質代謝異常。
據此,為能達成上述目的,本發明係揭露一種將香瓜茄葉用於製備治療或/及改善酒精性肝臟疾病之組合物之用途。
較佳地,該香瓜茄葉係先本發明所屬技術領域且具通常知識者所熟知之萃取法進行萃取,獲得一香瓜茄葉萃取物,再將該香瓜茄葉萃取物用於製備成為治療或/及改善酒精性肝臟疾病之組合物,其中,於本發明較佳實施例中,該萃取法中所使用之萃取溶劑係為水。
較佳地,該酒精性肝臟疾病係為酒精性脂肪肝、具有肝臟脂質代謝異常病徵之疾病或酒精性肝炎。
較佳地,該組合物係為一醫藥組合物。
較佳地,該組合物係為一食品。
第一圖係為各組小鼠肝臟切片經H&E染色後之結果。
第二圖係顯示各組小鼠肝臟細胞內TNF-α之表現量。
第三圖係顯示各組小鼠肝臟細胞內IL-6之表現量。
第四圖係為各組小鼠肝臟細胞內NFκB與TLR-4之表現量。
第五圖係顯示各組小鼠肝臟細胞內MDA濃度。
第六圖係顯示各組小鼠肝臟細胞內SOD之表現量。
第七圖係顯示各組小鼠肝臟細胞內觸酶之表現量。
第八圖係顯示各組小鼠肝臟細胞內Gpx之表現量。
第九圖係顯示各組小鼠肝臟細胞內麩胱甘肽之表現量。
第十圖係顯示各組小鼠肝臟細胞內TEAC之量。
第十一圖係為各組小鼠肝臟組織內與脂質代謝相關蛋白質之表現。
第十二圖係為各組小鼠肝臟組織內與脂質代謝相關蛋白質之表現量。
第十三圖係為各組小鼠肝臟組織內CYP2E1之表現。
為能更進一步地說明本發明,以下茲舉若干實例,並搭配圖式做詳細說明如后。
以下實例所得數據若未另外說明者,係皆以Sigma plot程式軟體進行統計分析,分析所得數據係以mean±SD表示,統計採用one-way ANOVA,有明顯差異時,再以Duncan's multiple range test進行比較,p<0.05表示各組間具有顯著差異。而於圖表中,「*」表示第一組及第二組間具有顯著差異(p<0.05),「@」表示第二組與第三組或第四組間有顯著差異(p<0.05)「**」或「@@」表示二個
組間具有顯著差異(p<0.01)。
又,先加以說明者,本發明所屬技術領域且具通常知識者皆知透過長期餵食Lieber-DeCarli流質酒精飼料可誘發實驗動物產生酒精性肝病變,而能夠作為酒精性脂肪肝之動物模式,因此,以下實例之動物實驗中係以Lieber-DeCarli流質酒精飼料製備酒精性脂肪肝模式小鼠。
實例一:實驗動物
由國家動物實驗中心購物五週齡40隻雄性C57BL/6J(B6)小鼠,飼養於中山醫學大學實驗動物中心,飼養環境條件為室溫22±2℃、相對濕度55±2%、自動空氣調節(換氣率每小時12次)、自動光照控制(12小時白晝、12小時黑夜),並給予正常飲水及標準飼料#MFG22入室適應一周。試驗前一週負對照組及實驗組逐步增加Lieber-DeCarli飼料中酒精濃度使實驗動物得以適應酒精飼料。
實例二:製備香瓜茄葉水萃取物
取適量之香瓜茄葉,粉碎後加入二次水進行攪拌,其中,又以於加熱條件下進行萃取之效果較佳。過濾出濾液後進行乾燥,得到香瓜茄葉萃取物。
實例三:動物試驗
將實例一中40隻小鼠入室適應環境一週後,隨機分配成四組,其中:第一組係為正常控制組:給予Lieber-DeCarli流質正常飼料任食;第二組係為肝損傷組:給予Lieber-DeCarli流質酒精飼料任食;第三組係為香瓜茄葉萃取物低劑量組:給予Lieber-DeCarli流質酒精飼料並添加1%香瓜茄葉萃取物任食;第四組係為香瓜茄葉萃取物高劑量組:給予Lieber-DeCarli流質
酒精飼料並添加2%香瓜茄葉萃取物任食。
而第三組及第四組中所添加香瓜茄葉萃取物之劑量係為香瓜茄葉萃取物相對於Lieber-DeCarli流質酒精飼料所計算出之重量百分比。
將各組小鼠以上述條件飼養4週,完成後秤重並犧牲,分別採集其血液、肝臟組織供後續分析之用。
實例四:血液生化值檢測
取實例三之各該組小鼠之血液,以本發明所屬技術領域且具通常知識者所周知之方式檢測各該組小鼠血清中天門冬胺酸轉胺酶(Aspartate transaminase,下稱AST)、丙胺酸轉胺酶(Alanine transaminase,下稱ALT)、三酸甘油脂(下稱TG)、總膽固醇(下稱TC)、高密度膽固醇(下稱HDL)、低密度膽固醇(下稱LDL)、極低密度膽固醇(下稱VLDL)之含量,結果如下表一所示。
由表一之結果可知,第二組小鼠檢測結果係於四組間最高者,並且,與第一組間具有顯著差異,顯示第二組小鼠確實地被誘導為酒精性肝病變之動物模式。而由於第三組及第四組小鼠同時有被投予不同劑量之香瓜茄葉萃取物,使得第三組或第四組小鼠血液生化值之檢測結果皆分別明顯低於第二組小鼠,並且,有達到統計上之顯著差異。
基於AST及ALT於臨床上係被作為酒精誘發肝損傷之指標,因此,根據表一結果顯示本發明所揭香瓜茄葉萃取物係具有改善酒精性脂肪肝或其併發症之功效。
實例五:肝臟組織切片
將實例三各該組小鼠犧牲後,分別自其肝臟右葉取約1立方公分之組織塊,再以H&E染色法觀察各該組小鼠之肝臟組織內脂肪堆積之情形,結果係如第一圖所示。
由第一圖之結果顯示,第二組小鼠之肝臟組織係有明顯脂肪空泡。而相較於第二組小鼠,第三組及第四組小鼠之肝臟組織內脂肪油滴堆積情形明顯減少並且空泡變小,並且,第四組小鼠之肝臟組織係與第一組小鼠之肝臟組織相近。
由此可知,本發明所揭香瓜茄葉萃取物係能夠有效地降滴酒精誘導肝臟脂肪堆積之情形,是以,本發明所揭香瓜茄萃取物具有治療或及預防酒精性脂肪肝及其併發症之活性。
實例六:檢測肝臟中發炎相關蛋白質之表現
更進一步地檢測各組小鼠肝臟細胞中類鐸受體(Toll like receptor 4,下稱TLR-4)及發炎因子TNF-α、IL-6、NFκB之表現,結果如第二圖至第四圖所示。
由第二圖至第四圖之結果可知,於第二組小鼠中,其到TLR-4蛋白表現量顯著增加,並且,發炎因子TNF-α、IL-6、NFκB之表現量係顯著高於第一組,顯示攝取酒精會導致腸道中內毒素LPS移轉進入肝臟,與TLR-4結合後促使庫佛氏細胞(kuffer cell)分泌促發炎細胞激素。又,餵食不同劑量之香瓜茄葉
萃取物之第三組及第四組之TLR-4蛋白表現量係分別較第二組顯著降低,並且,分別顯著降低酒精所誘發之TNF-α、IL-6、NFκB之表現。以NFκB之表現來說,第二組小鼠係較第一組小組增加0.9倍,而第三組及第四組小鼠係分別較第二組小鼠降低0.23及0.35倍。
是以,對於經酒精誘發肝臟損傷或是病變之個體來說,投予本發明所揭香瓜茄葉萃取物係能有效地改善或是降低其肝臟發炎或惡化之情形。
實例七:檢測肝臟中脂質過氧化指標及抗氧化酵素之活性
檢測各該組小鼠肝臟之TBARS(2-thiobarbituric acid reacting substances)值及抗氧化酵素,結果如第五圖至第十圖所示。
基於TBARS係用以評估體內脂質過氧化程度之指標,因此,由第五圖之結果可知第二組小鼠肝臟脂質過氧化程度顯著高於第一組,並且,給予本發明所揭香瓜茄葉萃取物係能夠明顯降低小鼠肝臟脂質過氧化程度。又,請參第六圖至第十圖,可知第二組小鼠之抗氧化能力係低於第一組,而餵食香瓜茄葉萃取物後,可使第三組及第四組小鼠之抗氧化能力回升,並且,第四組小鼠之觸酶、麩胱甘肽過氧化酵素(Glutathione peroxidase,下稱GPx)及Trolox抗氧化當量(TEAC)係顯著上升。
據此可知,對於經酒精誘發肝臟損傷或是病變之個體來說,投予本發明所揭香瓜茄葉萃取物係能有效地提昇肝臟抗氧化之能力。
實例八:檢測肝臟中脂質代謝相關蛋白質之表現
檢測各該組小鼠肝臟組織內與脂質代謝相關蛋白質:AMPK(AMP-activated protein kinase)、SREBP-1、乙醯輔酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,下稱ACC)、脂肪酸合成酶(下稱FAS)及PPAR-α之表現,結果如第
十一圖及第十二圖所示。
由第十一圖及第十二圖之結果可知,於第二組小鼠中,AMPK之活化係被抑制,使得FAS及ACC之與脂質生成相關之蛋白質表現量上升,顯示餵食酒精會干擾體內脂質氧化並且增加脂質生成。相較於第二組,第三組及第四組小鼠之磷酸化AMPK之表現量上升,並且,於第三組及第四組小鼠中,其SREBP-1、FAS及ACC等蛋白質之表現量分別大幅下降,更於第四組小鼠中發現其PPAR-α之表現量大幅上升。
由上述結果可知,對於經酒精誘發肝臟損傷或是病變之個體來說,額外餵食本發明所揭香瓜茄葉萃取物能夠有效地活化AMPK,達到抑制脂肪合成及促進脂肪代謝之功效。
實例九:檢測肝臟中藥物代謝酵素之表現
檢測各該組小鼠之藥物代謝酵素:CYP2E1(Cytochrome P450 2E1)之表現量,結果如第十三圖所示。
由第十三圖之結果可知,第二組小鼠CYP2E1之表現係明顯高於第一組小鼠,而第三組及第四組小鼠CYP2E1之表現係分別較第二組降低。
由此結果顯示,對於經酒精誘發肝臟損傷或是病變之個體來說,餵食本發明所揭香瓜茄葉萃取物係使CYP2E1之表現提昇,減少因酒精代謝所產生之自由基,達到降低體內氧化壓力之功效。因此,本發明所揭香瓜茄葉萃取物係具有降低酒精所引起之氧化壓力之活性。
藉由上述實例之說明係可證實本發明所揭香瓜茄葉萃取物係具有降低或改善酒精所引起之氧化壓力及發炎之活性,並且,能夠調控肝臟內脂肪合成。因此,本發明所揭香瓜茄葉萃取物係能夠有效地達到預防或/及治療改善酒
精性脂肪肝及其併發症之功效。
以上僅是藉由各該實例詳細說明本發明,熟知該技術領域者於不脫離本發明精神下,而對於說明書中之實施例所做的任何簡單修改或是變化,均應為本案申請專利範圍所得涵攝者。
Claims (7)
- 一種將香瓜茄葉水萃取物用於製備治療或/及改善酒精性肝臟疾病之醫藥組合物之用途。
- 依據申請專利範圍第1項所述用途,其中,該香瓜茄葉水萃取物係由將一香瓜茄葉由萃取法製備而形成。
- 依據申請專利範圍第1項所述用途,其中,該酒精性肝臟疾病係為酒精性脂肪肝。
- 依據申請專利範圍第1項所述用途,其中,該酒精性肝臟疾病係具有肝臟脂質代謝異常之病徵。
- 依據申請專利範圍第1項所述用途,其中,該酒精性肝臟疾病係為酒精性肝炎。
- 依據申請專利範圍第1項所述用途,其中,該組合物係為一醫藥組合物。
- 依據申請專利範圍第1項所述用途,其中,該組合物係為一食品。
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CN111527195A (zh) * | 2017-09-28 | 2020-08-11 | Ko生物技术有限公司 | 用产生短链脂肪酸的肠道细菌群落的改变诊断和治疗酒精性肝病的组合物 |
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CN111527195B (zh) * | 2017-09-28 | 2023-11-03 | Ko生物技术有限公司 | 用产生短链脂肪酸的肠道细菌群落的改变诊断和治疗酒精性肝病的组合物 |
US11903980B2 (en) | 2017-09-28 | 2024-02-20 | Kobiolabs, Inc. | Composition for diagnosis and treatment of alcoholic liver disease, using change in short-chain fatty acid producing gut bacterial community |
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