TWI585205B - ＭicroＲＮＡ－３２８反股組合物與其醫療用途 - Google Patents

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MicroRNA-328反股組合物與其醫療用途
本發明係關於MicroRNA-328反股以寡去氧核醣核苷酸或具有鎖核酸修飾和硫代磷酸酯鍵修飾的寡核苷酸的形式呈現，和其用於治療眼部疾病如近視等之治療用途。
近視導致眼球增長，進而促使眼睛之視網膜(retina)和鞏膜(sclera)被拉長及薄化。因此近視的眼睛比正常的眼睛具有較長的眼軸長度。值得注意的是，眼軸長度在個體間呈多樣化。在動物研究中，一隻眼睛被誘導為近視而另一隻眼睛作為對照組，被誘導的近視眼與對照眼之間眼軸長度的差別，可以用來表示近視的嚴重程度。此外，眼軸長度差異的改變也可被用於評估對近視治療成效的依據。眼球的增長被認為是造成近視併發症，如視網膜剝離(retinal detachment)，黃斑部病變(macular degeneration)等的主要關鍵性機制。這也說明了僅做屈光矯正而沒有預防眼軸長度增長(例如配戴眼鏡)是無法避免近視併發症的發生。
PAX6(paired box 6)基因屬於包含配對與同源盒(homebox)DNA結合區之轉錄因子的一高度保留家族。PAX6基因涉及了中樞神經系統與眼睛的發育，其在水晶體(lens)與視網膜分化的誘發中扮演一重要的角色，且被視為眼睛發育的主控基因。在人類中，PAX6基因的突變與多種眼 睛疾病有關，包含無虹膜症(aniridia)、視網膜中央凹發育不良症(foveal hypoplasia)、早發性白內障症(presenile cataract)和無虹膜症相關角膜病變(aniridia-related keratopathy)(來自Tsonis和Fuentes的綜述)。除了生物合理性外，在全基因組關聯研究(genome-wide linkage study)中揭露屈光性異常與PAX6基因座有強烈的關聯性。因此，PAX6被認為是造成近視的候選基因，PAX6表現量低可能是近視的危險因素。
微小RNA(MicroRNAs，miRNAs)為長度約21-23個核苷酸之非編碼、單股的RNA分子。在動物中，一成熟之微小RNA與一個或多個訊息RNA(messenger RNA，mRNA)的3’非轉譯區(untranslated region，UTR)互補。微小RNA對其目標訊息RNA的黏附(annealing)導致蛋白質轉譯的抑制及/或造成訊息RNA的裂解。微小RNA可調節細胞生長、分化與凋亡。
Chen(Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.2012；53：2732-2739)團隊研究指出微小RNA-328(microRNA-328，miR-328)可以藉由調控PAX6基因影響近視的發展。
定義
鎖核酸(locked nucleic acid，LNA)通常被指為難以接近的RNA，是一經修飾過的RNA核苷酸。LNA核苷酸的核醣部分被一連接2號碳上的氧與4號碳之額外架橋所修飾。此架橋將核醣鎖成3’內環構形，這樣的構形常見於A型雙股螺旋體中。LNA核苷酸當有需要時可任意與DNA或RNA殘基被混合在寡核苷酸中。
寡去氧核糖核苷酸(oligodeoxyribonucleotide)於本文所使 用，為具有5-50個鹼基，較優選的是10-30個鹼基，或15-30個鹼基長度的去氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid，DNA)。此DNA於其鹼基或磷酸二酯鍵上可被選擇性地修飾。
寡核糖核苷酸(oligoribonucleotide)於本文所使用，為一具有5-50個鹼基，較優選的是10-30個鹼基，或15-30個鹼基長度的核糖核酸(ribonucleic acid，RNA)。該RNA可被選擇性地修飾。
寡核苷酸(oligonucleotide)於本文所使用，為一寡去氧核糖核苷酸、一寡核糖核苷酸，或為兩者之混合體。
硫代磷酸酯(Phosphorothioates)為一正常DNA的變形體，於至少一個在磷酸二酯鍵上未鍵結的氧原子被硫原子所取代。此核苷酸間的硫化作用會顯著地減弱核酸內切酶和核酸外切酶的反應。在人類血清中，包含進硫代磷酸酯(phosphorothioate，PS)鍵提升寡核苷酸半衰期，然而，PS鍵的導入亦可能會降低寡核苷酸的鍵結親和力並可能導致毒性。
本發明涉及miR-328的反股之寡核苷酸序列。在一實施例中，寡核苷酸為一具有特定長度的寡去氧核糖核苷酸。在另一實施例中，該寡核苷酸具有LNA修飾以及硫代磷酸酯鍵修飾。本發明的寡核苷酸在預防或治療眼睛疾病(如近視)是有效果的。
人類成熟的miR-328具有CUGGCCCUCUCUGCCCUUCCGU(SEQ ID NO：1)的序列。
於本發明的第一部分，發明人根據成熟的人類miR-328設計出miR-328反股之寡去氧核糖核苷酸(長度為15-22mer)，和根據成熟前的人類miR-328序列設計出miR-328反股之寡去氧核糖核苷酸(長度為 23-30mer)。接著，發明人獲得了具有15-30個鹼基(15-30mer)的miRNA-328反股DNA並測試其活性。15mer-30mer DNA的序列示於表1中。
在活體外試驗中，發明人發現測試的16組反股DNA中，僅16mer和17mer會抑制miR-328的表現。出人意料的是，反股DNA(15mer和18-30mers)在體外並未顯示任何抑制miR-328表現的活性。在動物實驗中，16mer和17mer是安全的，並且它們藉由減少受試老鼠的平均眼軸長度而展示了對治療近視的活性。
本發明涉及DNA 16mer為5’-AGGGCAGAGAGGGCCA-3’ (SEQ ID NO：3)，及DNA 17mer為5’-AAGGGCAGAGAGGGCCA-3’(SEQ ID NO：4)。
本發明的第二部分，發明人根據成熟的人類miR-328序列和接合物原則(gapmer principle)(Kurreck et al,Nucleic Acids Res.,30：1911-1918,2002)設計出LNA修飾及硫代磷酸酯鍵修飾的反股寡核苷酸，其介於17-22mers。LNA修飾之反股寡核苷酸的15和16mers並不包括於其中，因為在15和16mers的5'末端顯示連續的3個G以及自我互補形態，這會導致該寡核苷酸形成二聚體。發明人後續獲得具有17-22個鹼基的LNA修飾之miRNA-328反股寡核苷酸並且測試其活性。被LNA修飾和PS鍵修飾的miR-328反股寡核苷酸序列顯示於表2。它們所對應之非修飾、天然的DNA序列被示於可由電腦認讀的格式之序列表SEQ ID NOs：18-23。
+：表示鎖核酸修飾；*：表示磷酸二酯鍵被硫代磷酸酯鍵取代；^：表示SEQ ID NOs：18-23是天然(未修飾)的寡核苷酸，為在表中以“+”和“*”顯示LNA修飾和PS修飾的對應物。
在表2，該DNA序列的每一個磷酸二酯鍵皆被修飾成一個硫代磷酸酯鍵(PS)。在表2，每一個DNA序列的中央核心之5’和3’兩端皆接上4個LNA修飾的核苷酸。
在活體外試驗中，發明人發現測試6組LNA/PS鍵修飾的反股寡核苷酸，僅403、404和405抑制miR-328的表現。其他LNA/PS鍵修飾的反股DNA在體外對抑制miR-328的表現沒有顯示任何活性。除了於活體外的活性外，403藉由減少受試老鼠的平均眼軸長度而展示了對治療近視的活性。
本發明涉及LNA/PS鍵修飾的反股寡核苷酸403、404、405；以403是較優選的。
本發明的miRNA-328反股組合物對miRNA-328具有良好的雜合活性、在水中具有良好的溶解度，並且是穩定的(耐核酸外切酶)。
PAX6、FMOD和COL1A1是近視發病機制的重要基因，且他們為miR-328的直接目標基因。這些基因已被顯示出在近視發展中扮演重要的角色。在活體外試驗中，本發明的miRNA-328反股組合物在體外提高了PAX6、FMOD和COL1A1的表現水平。
本發明的miRNA-328反股組合物在預防或治療眼睛疾病是有效果的。尤其，本發明的miRNA-328反股組合物在預防或治療近視是有效的。
本發明涉及一醫藥組合物包含本發明的miRNA-328反股寡核苷酸和一醫藥上可接受的載體。治療近視較優選的形式是局部的溶液或局部的軟膏。
含有miRNA-328反股的局部溶液可含一生理上可相容的載 體，如所屬的眼科領域中的人可選擇使用的常規性準則。眼用載體包含但不限於食鹽水溶液、水聚醚如聚乙二醇、聚乙烯類如聚乙烯醇和聚維酮、纖維素衍生物如甲基纖維素和羥丙基甲基纖維素、石油衍生物如礦物油和白色凡士林、動物性脂肪如羊毛脂、丙烯酸聚合物如羧基聚甲烯凝膠、植物性脂肪如花生油和多醣類如右旋糖酐，和糖胺聚糖如玻尿酸鈉以及鹽類如氯化鈉和氯化鉀。
製劑可選擇性地包含防腐劑如氯化芣二甲烴銨和其它非活性成分如乙二胺四乙酸。然而，對於慢性使用(超過2週)，較優選的製劑是不含任何防腐劑，這是由於長期、頻繁接觸防腐劑如氯化芣二甲烴銨對角膜上皮有潛在的傷害的可能性。不含防腐劑的製劑以單位劑量製備並且儲存在單次使用的容器內。
該製劑之pH值以透過加入任何生理上和眼科學上可接受的調節pH的酸、鹼或緩衝劑，調整於範圍約5至7.5，較優選的是6至7。酸的實例包括醋酸、硼酸、檸檬酸、乳酸、磷酸、鹽酸，和其類似物；鹼的實例包括氫氧化鈉、磷酸鈉、硼酸鈉、檸檬酸鈉、醋酸鈉、乳酸鈉、氨基丁三醇、三羥甲基氨基甲烷，和其類似物。鹽類和緩衝劑包括檸檬酸鹽/右旋糖、碳酸氫鈉、氯化銨及上述酸和鹼的混合物。
含水的眼用組合物之滲透壓通常約為200~400毫滲量莫耳濃度(mOsM)，更優選是介於260~340毫滲透莫耳濃度。滲透壓可以藉由使用生理上和眼科上可接受的離子型或非離子型試劑進行適當調整。氯化鈉是較優選的離子型試劑，而氯化鈉的用量範圍為約0.01%~約1%(w/v)，較優選者為約0.05%~約0.45%(w/v)。等量的一種或多種陽離子組成的鹽類， 如鉀、銨和其類似物，以及陰離子如氯化物、檸檬酸鹽、抗壞血酸鹽、硼酸鹽、磷酸鹽、重碳酸鹽、硫酸鹽、硫代硫酸鹽、硫酸氫鹽、硫酸氫鈉、硫酸銨和其類似物可以用來添加或取代氯化鈉以達成上述範圍之滲透壓。此外，非離子型試劑如甘露醇、右旋糖、山梨醇、葡萄糖和其類似物也可以被用來調節滲透壓。
本發明的miRNA-328反股寡核苷酸可藉由任何適用的形式施予病人的眼睛，但以滴劑、噴霧劑、凝膠劑或軟膏為較優選的方式。在一實施例中，此寡核苷酸是以滴劑形式滴到眼的表面。在另一實施例中，此寡核苷酸以被包含在棉片或海綿中的形式實施於眼的表面。在另一實施例中，此寡核苷酸以被包含在液體噴霧劑或軟膏中的形式實施於眼的表面。在另一實施例中，此寡核苷酸被直接注入淚組織或眼睛表面上。更甚者，此寡核苷酸可經由脂質體施加於眼睛。此外，此寡核苷酸可經由泵導管系統注入至淚膜中。於另一個額外的實施例中，此寡核苷酸可藉由被包含在內、攜帶或附著於隱形眼鏡上或其他相容的控制釋放材料被施加於眼睛上。
在局部溶液中之該寡核苷酸的濃度是足以防止和/或治療近視。該寡核苷酸濃度一般是介於約30nM~2.5mM，較優選的是介於約100nM~10μM、約1μM~100μM，或約15μM~1.5mM。“約”，於本文中所使用的是指所述該值的±10%。
本發明進一步涉及一種於個體中預防或治療近視的方法。該方法包括對一所需的個體施予有效劑量之本發明的miRNA-328反股寡核苷酸組合物之步驟。局部給藥是較優選的給藥途徑。「有效劑量」是指能有效 預防或治療近視的用量，亦即，為了防止眼睛的軸長增加，或縮減近視眼睛的軸長。
用來治療或預防近視的每日劑量可被劃分成一個或數個單位劑量施予。每日劑量，例如可依該個體的年齡和狀況每次一滴(約30-50μl)，每日施予1~4次之劑量。一種miR-328反股DNA組合物的治療法為1滴局部溶液，每日使用1~2回。或者是，可以每星期施予一次局部溶液。
當治療或預防近視時，本發明之方法可結合本領域技術人員熟知的其他方法。
本發明也提供一種如本發明所述之去氧核醣核苷酸序列用於製備預防或治療近視之藥物或醫藥組合物的用途。在一個較優選的實施例中，該藥物或醫藥組合物是局部溶液或局部軟膏。
本發明也提供根一種如本發明所述之鎖核酸修飾和硫代磷酸酯鍵修飾的寡核苷酸序列用於製備預防或治療近視之藥物或醫藥組合物的用途據。在一個較優選的實施例中，該藥物或醫藥組合物是局部溶液或局部軟膏。
以下實施例中進一步說明本發明。這些實施例僅僅在說明本發明，而不應當被解釋為限制。
圖1顯示視網膜色素上皮細胞(RPE cell)以miR-328反股DNA(15mer-30mer)及控制組轉染後之相對的miR-328的表現量。平均值和標準差顯示其中(n=3)。
圖2顯示視網膜色素上皮細胞，miR-328反股DNA以鎖核酸和硫代磷酸酯鍵修飾(401-406)及控制組轉染後，之相對的miR-328的表現量。平均值和標準差顯示其中(n=3)。
圖3顯示小鼠點生理食鹽水為控制組(NS)、點DNA 16mer、DNA 17mer、LNA403、LNA404和LNA405治療後的右眼(近視)和左眼之間的眼軸長度差。
圖4顯示小鼠點控制組(生理食鹽水)、點1%阿托品、點DNA 16mer和LNA403治療後的右眼(近視)和左眼之間的眼軸長度差。
圖5顯示小鼠點控制組(生理食鹽水)、點1%阿托品、點10nM、100nM與1μM DNA 16mer治療後的右眼(近視)和左眼之間的眼軸長度差。
圖6顯示兔子點控制組(生理食鹽水)、點10μM和50μM DNA 16mer治療後的右眼(近視)和左眼之間的眼軸長度差。
實施例1 反股寡核苷酸(DNA)的合成和純化
miR-328反股寡核苷酸包含根據成熟的人類miR-328和人類成熟前的miR-328序列設計的DNA核苷酸。該反股DNA寡核苷酸是藉由Dr.Oligo192(Biolytic Lab Performance Inc.)之DNA/RNA合成儀，並依據製造商的指示所合成的。長度介於15mers至30mers的反股寡核苷酸所包含的所有去氧核糖核苷酸被製作出來後，其產物藉由HPLC純化。這些反股寡核苷酸的合成和純化是透過基龍米克斯股份有限公司(台灣)所進行的。該DNA的15mer-30mer的序列顯示於表1。
實施例2 反股寡核苷酸(LNA)的合成和純化
長度介於17-22mers的LNA修飾和硫代磷酸酯鍵修飾的反股寡核苷酸是根據 成熟的人類miR-328序列和gapmer principle所設計出來的；修飾後的序列和非修飾的版本顯示於表2。根據此設計，17-22mers的LNA修飾和硫代磷酸酯鍵修飾的反股序列是由Exiqon(丹麥)所合成和純化的。
實施例3 以反股寡核苷酸抑制miR-328表現的活體外試驗
細胞培養、處理和轉染
名為「ARPE-19」的視網膜色素上皮細胞株生長於Dulbecco's modified Eagle's培養基(DMEM)/F12培養基中。該細胞株生長在具有1%青黴素/鏈黴素和10%熱去活化胎牛血清(FBS)中，於37℃，95%空氣/5%二氧化碳(CO2)之潮濕大氣中。為了進行轉染實驗，細胞以1×105細胞/孔的密度接種進一12孔盤中。在每孔生長達到70%滿盤後，使用Lipofectamine 2000(Invitrogen)並依製造商指示轉染反股寡核苷酸(濃度為30、50和100nM)。經24小時培養後，細胞被裂解以進一步研究。
檢測反股寡核苷酸抑制miR-328的效果
使用Trizol並依據製造商指示從培養的細胞中萃取總RNA。RNA純度以A260/A280讀數來確認。使用以下步驟先將miR-328反轉錄成miR-328的cDNA：5ng的RNA以miR-328之特殊引子和MultiScribe reverse transcriptase套組(Applied Biosystems)進行反轉錄。為了檢測miR-328的表現量，以ABI 7500 real-timer PCR機器(Applied Biosystems)依製造商指示用miR-328之特殊探針進行定量即時PCR反應。反股寡核苷酸的抑制效果是以定量即時PCR所測量的miR-328 cDNA的量來評斷。miR-328的表現量藉由非編碼核的小RNA U6來標準化並視為內部控制。
反股寡核苷酸對miR-328表現抑制的活體外試驗結果
a. 反股DNA寡核苷酸
根據實施例1備製的16組長度介於15-30mers的反股DNA寡核苷酸，被用來測試在視網膜色素上皮細胞內對miR-328表現的抑制效果。相對的miR-328表現量顯示於圖1。僅DNA 16mer和DNA 17mer抑制miR-328的表現。DNA 16mer於濃度為30、50和100nM下的抑制效果分別為39%、35%和49%。而DNA 17mer於濃度為30、50和100nM下的抑制效果分別為43%、41%和48%。其餘的反股寡核苷酸(15mer和18-30mers)對miR-328基因表現不具抑制效果。
b. LNA修飾的反股寡核苷酸
六組LNA修飾的反股序列命名為LNA401至LNA406，被用來測試在視網膜色素上皮細胞內對miR-328表現的抑制效果。相對的miR-328表現量顯示於圖2。僅LNA403、LNA40和LNA405制抑miR-328的表現。LNA403於濃度為30、50和100nM下的抑制效果分別為97%、97%和90%。LNA404和LNA405於濃度為30、50和100nM下具有相同的抑制效果，分別為98%、98%和90%。其餘的LNA寡核苷酸對miR-328不具抑制效果。
實施例4 於活體內試驗之反股寡核苷酸在近視治療上的效果評估
動物模式
實驗用的21日齡的C57BL/6J小鼠購自國家實驗動物中心(台灣)。所有動物實驗均遵守ARVO聲明中對在眼科和視覺研究的動物使用規範。近視誘導的過程簡要描述如下：將23日齡的小鼠右眼覆蓋以誘導近視，而左眼沒有被覆蓋。然後，小鼠之被誘導近視的右眼在第30、第37和第44天時點30μl生理食 鹽水(即對照組)、點1μM DNA 16mer、DNA 17mer、LNA403、LNA404或LNA405治療。小鼠在第51天被犧牲並收集眼球。採集的眼球在解剖顯微鏡下被攝影，並使用ImageJ量測眼軸長度。近視導致眼軸長度增長，此為近視的主要病理改變。相同一隻老鼠之被覆蓋的右眼和非覆蓋的左眼之眼軸長度差異(即眼軸長度差，delta axial length)表示近視的嚴重性。結果總結於表3和圖3。使用Mann-Whitney U teat完成統計評價。p值<0.05被視為有顯著差異的。
DNA 16mer和DNA 17mer
點DNA 16mer和DNA 17mer治療的小鼠之平均眼軸長度差在統計學上顯著地小於對照組老鼠。DNA 16mer和DNA 17mer相較於對照組分別顯著地縮減眼軸長度差達0.077mm和0.065mm。該結果顯示，DNA 16mer和DNA 17mer對於近視老鼠的治療是有效果的。
LNA修飾的反股寡核苷酸
點LNA403-405治療的小鼠之平均眼軸長度差小於對照組老鼠。相對於對照 組，LNA403縮減眼軸長度差達0.054mm，LNA404縮減眼軸長度差達0.025mm和LNA405縮減眼軸長度差達0.035mm。然而，僅LNA403顯示具有統計學差異(P值<0.05)。該結果顯示，LNA403對於近視老鼠的治療是有效果的。
實施例5 DNA 16mer和LNA403的驗證
動物模式
實驗用的21日齡的C57BL/6J小鼠購自國家實驗動物中心(台灣)。所有動物實驗均遵守ARVO聲明中對在眼科和視覺研究的動物使用規範。近視誘導的過程簡要描述如下：將23日齡的小鼠右眼覆蓋4週以誘導近視，而左眼沒有被覆蓋。然後，小鼠之被誘導近視的右眼在第30、第37和第44天時點30μl生理食鹽水(即負對照組)、點1%阿托品(即正對照組)和點1μM DNA 16mer或LNA403治療。小鼠在第51天被犧牲並收集眼球。採集的眼球在解剖顯微鏡下被攝影，並使用ImageJ和專用軟體進行眼軸的自動量測。近視導致眼軸長度增長，此為近視的主要病理改變。相同一隻老鼠之被覆蓋的右眼和非覆蓋的左眼之眼軸長度差異(即眼軸長度差，delta axial length)表示近視的嚴重性。結果總結於表4和圖4。使用Mann-Whitney U teat完成統計評價。p值<0.05被視為有顯著差異的。
AXL：眼球的軸長
為了進一步與臨床證據充分之抗近視藥物(阿托品，atropine)比較DAN 16mer和LNA403的效果，我們測試這三種眼藥水。需要注意的是，我們使用了1%阿托品為高於臨床濃度的10倍，且1%阿托品已顯示比低濃度的阿托品更有效果。由於DNA 16mer和LNA403被溶解於一般的生理食鹽水，我們使用生理食鹽水作為負控制組。上面的數據顯示DNA 16mer和LNA403比1%阿托品對於縮減眼球的增長更具有效果。
實施例6 由一個獨立的第三方對DNA 16mer的確認
我們也使用了合同研究組織(CRO)來證實我們DNA 16mer的結果。
動物模式
近視誘導的步驟：實驗用的21日齡的C57BL/6J小鼠購自國家實驗動物中心(台灣)。所有動物實驗均遵守ARVO聲明中對在眼科和視覺研究的動物使用規範。近視誘導的過程簡要描述如下：將23日齡的小鼠右眼覆蓋4週以誘導近視，而左眼沒有被覆蓋。然後，被近視誘導的小鼠之右眼在第30、第37和第44天時點30μl生理食鹽水(即負對照組)、點1%阿托品(即正對照組)和點10nM、100nM和1μM DNA 16mer治療。小鼠在第51天被犧牲並收集眼球。採集的眼球在解剖顯微鏡下被攝影，並使用ImageJ和專用軟體進行眼軸長度的自動量測。近視導致眼軸長度增長，此為近視的主要病理改變。相同一隻老鼠之被覆蓋的右眼和非覆蓋的左眼之眼軸長度差異(即眼軸長度差，delta axial length)表示近視的嚴重性。
該CRO實驗結果顯示於表5和圖5。第三方的結果完全重現 我們的數據。
實施例7 證實DNA 16mer在第二種動物之成效
動物模式
近視誘導的步驟：實驗用的3日齡有色兔購自DA-ZONG家畜農場(台灣)。所有動物實驗均遵守ARVO聲明中對在眼科和視覺研究的動物使用規範。在7日齡時，兔子的右眼被覆蓋8週以誘導近視，而左眼沒有被覆蓋。雙眼眼軸長度(AXL)自第21天開始藉由A-scan(Sonomed®,PACSCAN 300A,USA)每週量測一次。當在第35天時，右眼眼軸長度長於左眼眼軸長度0.2mm或更長，我們即定義為近視。若是兔子達到此定義標準，自第35天開始直到第63天，每隔一天近視兔點右眼20μL的生理食鹽水(即對照組)，或點濃度為10μM或50μM的DNA 16mer(20μL)治療。在第61天進行最終的眼軸長度量測，用來計算右眼眼軸長度和左眼眼軸長度之間的差距(即眼軸長度差，delta AXL)。假如沒有治療成效，眼軸長度差將會是正值。
該結果指出縮減近視眼睛的眼軸長度為劑量依賴性反應(見表6和圖6)
本發明及該製作和使用它的方式和過程，現在被如此完整、清楚、簡明和確切的術語描述出來，使得任何一個熟知該所屬領域的技術人員可相同地製作和使用。但是應當理解，前文描述本發明較優選的實施例，和可做的修改應不背離本發明的範圍如權利項所述之申請專利範圍內。為了特別指出並清楚地主張該專利標的為本發明，以下申請專利範圍總結該說明書。
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Claims (8)

  1. 一種SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之去氧核醣核苷酸序列。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之去氧核醣核苷酸序列，其係SEQ ID NO：3。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之去氧核醣核苷酸序列，其係SEQ ID NO：4。
  4. 一種醫藥組合物，其係包含如申請專利範圍第1項所述之去氧核醣核苷酸序列和一醫藥上可接受載體。
  5. 一種如申請專利範圍第1項所述之去氧核醣核苷酸序列用於製備預防或治療近視之醫藥組合物的用途。
  6. 一種具有鎖核酸修飾和硫代磷酸酯鍵修飾之SEQ ID NO：21的寡核苷酸序列，其中從SEQ ID NO：21的5'端至3'端，位置1、2、3、4、17、18、19和20被鎖核酸修飾，和在SEQ ID NO：21上的每個磷酸二酯鍵被修飾為硫代磷酸酯鍵。
  7. 一種醫藥組合物，其係包含如申請專利範圍第6項所述之寡核苷酸序列和一醫藥上可接受載體。
  8. 一種如申請專利範圍第6項所述之寡核苷酸序列用於製備預防或治療近視之醫藥組合物的用途。
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