CN101868251B - 含有HIF-1α和HIF-2α表达抑制物质的药物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供在老年性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变等的伴随血管新生的视网膜疾病的治疗中治疗效果更高的药物。是含有特异性抑制HIF-1α表达的物质以及特异性抑制HIF-2α表达的物质的视网膜疾病治疗药。本发明的治疗药中的药效物质——上述的抑制物质是RNAi诱导性核酸、反义核酸或核酶或者它们的表达载体。

Description

含有HIF-1α和HIF-2α表达抑制物质的药物
技术领域
本发明涉及含有HIF-1α和HIF-2α表达抑制物质的药物。具体涉及含有可诱导RNA干扰的核酸等的视网膜疾病的治疗药。
背景技术
低氧诱导因子1和2(HIF-1和HIF-2)是含有α和β亚单元的杂合二聚体，是共通具有碱性螺旋-环-螺旋蛋白(bHLH)结构域和PAS结构域的转录因子。细胞内氧浓度减少，则HIF的表达和转录活性显著增加。已鉴定出由HIF反式激活的靶基因有：编码VEGF(血管内皮细胞生长因子)、促红细胞生成素、葡萄糖转运体、以及糖酵解酶的基因等(参照非专利文献1)。
糖尿病性视网膜病变以及老年性黄斑变性是导致后天失明的原因疾病，目前，人们需求用于抑制两种疾病中可见的新生血管的药物的开发。特别是已知眼内的VEGF的增加是诱发新生血管的原因之一，目前正在开发几种VEGF拮抗药。HIF是控制VEGF的表达的转录因子，HIF抑制剂也有望作为血管新生抑制剂应用。
作为HIF抑制剂，使用siRNA进行的研究中报导：在HeLa细胞、Hep3B细胞和Kelly细胞中，通过HIF-1α的siRNA抑制VEGF的表达(参照非专利文献2)。还有报道称：乳腺癌细胞(MDA468)中，只有HIF-1α的siRNA抑制低氧对VEGF表达的诱导，HIF-2α的siRNA不抑制(参照非专利文献3)。在该实验体系中，即使使用HIF-1α和2α两种异构体的siRNA，与只使用HIF-1α的siRNA时相比，只是同程度抑制VEGF的诱导表达。与此相对，有报道称：肾癌细胞(786-O)中，只有HIF-2α的siRNA抑制低氧对VEGF表达的诱导，以及在具有癌抑制基因VHL(vonHippel-Lindau)的肾癌细胞(Caki-1)中，HIF-1α和2α的各自的siRNA抑制VEGF表达(参照非专利文献4)。这样，关于HIF的哪一种异构体与VEGF产生强烈相关，可认为是根据细胞而不同。
目前报道了老年性黄斑变性或糖尿病性视网膜病变的治疗药使用HIF-1α的siRNA或反义(参照专利文献1-3)，但关于HIF-2α的siRNA和反义的使用，在本发明人所了解的范围内尚未有报导。也未见报道过：如果抑制HIF-1α和HIF-2α两种异构体，与抑制一种异构体相比，VEGF生成抑制作用显著提高；可将含有HIF-1α和HIF-2α两种异构体的siRNA或反义的组合物用于视网膜疾病。
专利文献1：国际公开第2007/002718号说明书
专利文献2：国际公开第2004/042024号说明书
专利文献3：国际公开第2006/050734号说明书
非专利文献1：Semenza GL(1999)，Ann.Rev.Cell.Dev.Biol.15：551-578
非专利文献2：Christina W等人.，(2004)FASEB J12：1462-1464
非专利文献3：Heidi MS等人.，(2004)Cancer Res 63：6130-6134
非专利文献4：Raju RR等人.，(2005)Molecular and Cellular Biology25：5675-5686
发明内容
发明要解决的问题
本发明的目的在于：在老年性黄斑变性或糖尿病性视网膜病变等的伴随血管新生的视网膜疾病的治疗中，提供治疗效果更高的药品。
解决问题的方法
本发明人针对上述问题进行了深入的研究，结果发现：使HIF-1α的siRNA以及HIF-2α的siRNA作用于视网膜色素上皮细胞、抑制两种异构体的表达时，与一种异构体的siRNA作用的情形相比，可显著抑制VEGF的生成，从而完成了本发明。即，本发明如下所示。
[1]视网膜疾病的治疗药，该治疗药含有特异性抑制HIF-1α表达的物质以及特异性抑制HIF-2α表达的物质。
[2]上述[1]所述的视网膜疾病的治疗药，其中，上述抑制物质是RNAi诱导性核酸、反义核酸或核酶或者它们的表达载体。
[3]上述[2]所述的视网膜疾病的治疗药，其中，上述RNAi诱导性核酸是siRNA。
[4]上述[3]所述的视网膜疾病的治疗药，其中，上述HIF-1α的siRNA由含有对应于SEQ ID NO.1的碱基序列的mRNA中17-25个连续的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成；上述HIF-2α的siRNA由含有对应于SEQ ID NO.3的碱基序列的mRNA中17-25个连续的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成。
[5]上述[4]所述的视网膜疾病的治疗药，其中，上述HIF-1α的siRNA是下述(a)或(b)，HIF-2α的siRNA是下述(c)或(d)：
(a)双链RNA，该双链RNA由含有SEQ ID NO.17-20或31的任一个所示的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-1α表达抑制活性；
(b)双链RNA，该双链RNA由含有在SEQ ID NO.17-20或31的任一个所示的碱基序列的5’末端和/或3’末端有1-数个碱基附加和/或缺失的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-1α表达抑制活性；
(c)双链RNA，该双链RNA由含有SEQ ID NO.21、22或35的任一个所示的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-2α表达抑制活性；
(d)双链RNA，该双链RNA由含有在SEQ ID NO.21、22或35的任一个所示的碱基序列的5’末端和/或3’末端有1-数个碱基附加和/或缺失的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-2α表达抑制活性。
[6]上述[4]或[5]所述的视网膜疾病的治疗药，其中，上述HIF-1α的siRNA为下述(1-1)-(1-5)的任意一种，HIF-2α的siRNA为下述(2-1)-(2-3)的任意一种：
(1-1)由含有SEQ ID NO.5所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.11所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-2)由含有SEQ ID NO.6所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.12所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-3)由含有SEQ ID NO.7所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.13所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-4)由含有SEQ ID NO.8所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.14所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-5)由含有SEQ ID NO.29所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.30所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-1)由含有SEQ ID NO.9所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.15所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-2)由含有SEQ ID NO.10含有所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.16所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-3)由含有SEQ ID NO.33所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.34所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA。
[7]上述[1]-[6]中任一项所述的视网膜疾病的治疗药，其中，视网膜疾病为老年性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜动脉阻塞、糖尿病黄斑水肿或青光眼。
[8]上述[7]所述的视网膜疾病的治疗药，其中，视网膜疾病为老年性黄斑变性或糖尿病性视网膜病变。
[9]特异性抑制HIF-1α表达的物质和特异性抑制HIF-2α表达的物质在制备视网膜疾病的治疗药中的应用。
[10]上述[9]所述的应用，其中，上述抑制物质是RNAi诱导性核酸、反义核酸或核酶、或者它们的表达载体。
[11]上述[10]所述的应用，其中，上述RNAi诱导性核酸为siRNA。
[12]上述[11]所述的应用，其中，上述HIF-1α的siRNA由含有对应于SEQ ID NO.1的碱基序列的mRNA中17-25个连续的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链；上述HIF-2α的siRNA由含有对应于SEQ ID NO.3的碱基序列的mRNA中17-25个连续的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成。
[13]上述[12]所述的应用，其中，上述HIF-1α的siRNA为下述(a)或(b)，HIF-2α的siRNA为下述(c)或(d)：
(a)双链RNA，该双链RNA由含有SEQ ID NO.17-20或31的任一个所示的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-1α表达抑制活性；
(b)双链RNA，该双链RNA由含有在SEQ ID NO.17-20或31的任一个所示的碱基序列的5’末端和/或3’末端有1-数个碱基附加和/或缺失的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-1α表达抑制活性；
(c)双链RNA，该双链RNA由含有SEQ ID NO.21、22或35的任一个所示的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-2α表达抑制活性；
(d)双链RNA，该双链RNA由含有在SEQ ID NO.21、22或35的任一个所示的碱基序列的5’末端和/或3’末端有1-数个碱基附加和/或缺失的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-2α表达抑制活性。
[14]上述[12]或[13]所述的应用，其中，上述HIF-1α的siRNA为下述(1-1)-(1-5)的任意一种，HIF-2α的siRNA为下述(2-1)-(2-3)的任意一种：
(1-1)由含有SEQ ID NO.5所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.11所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-2)由含有SEQ ID NO.6所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.12所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-3)由含有SEQ ID NO.7所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.13所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-4)由含有SEQ ID NO.8所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.14所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-5)由含有SEQ ID NO.29所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.30所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-1)由含有SEQ ID NO.9所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.15所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-2)由含有SEQ ID NO.10所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.16所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-3)由含有SEQ ID NO.33所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.34所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA。
[15]上述[9]-[14]中任一项所述的应用，其中，视网膜疾病为老年性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜动脉阻塞、糖尿病黄斑水肿或青光眼。
[16]上述[15]所述的应用，其中视网膜疾病为老年性黄斑变性或糖尿病性视网膜病变。
[17]视网膜疾病的治疗方法，该方法包含以下步骤：对需要进行视网膜疾病治疗的对象给予有效量的特异性抑制HIF-1α表达的物质以及特异性抑制HIF-2α表达的物质。
[18]上述[17]所述的治疗方法，其中，上述抑制物质是RNAi诱导性核酸、反义核酸或核酶、或者它们的表达载体。
[19]上述[18]所述的治疗方法，其中，上述RNAi诱导性核酸为siRNA。
[20]上述[19]所述的治疗方法，其中，上述HIF-1α的siRNA由含有对应于SEQ ID NO.1的碱基序列的mRNA中17-25个连续的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链；上述HIF-2α的siRNA由含有对应于SEQ ID NO.3的碱基序列的mRNA中17-25个连续的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成。
[21]上述[19]所述的治疗方法，其中，上述HIF-1α的siRNA为下述(a)或(b)，HIF-2α的siRNA为下述(c)或(d)：
(a)双链RNA，该双链RNA由含有SEQ ID NO.17-20或31的任一个所示的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-1α表达抑制活性；
(b)双链RNA，该双链RNA由含有在SEQ ID NO.17-20或31的任一个所示的碱基序列的5’末端和/或3’末端有1-数个碱基附加和/或缺失的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-1α表达抑制活性；
(c)双链RNA，该双链RNA由含有SEQ ID NO.21、22或35的任一个所示的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-2α表达抑制活性；
(d)双链RNA，该双链RNA由含有在SEQ ID NO.21、22或35的任一个所示的碱基序列的5’末端和/或3’末端有1-数个碱基附加和/或缺失的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-2α表达抑制活性。
[22]上述[19]所述的治疗方法，其中，上述HIF-1α的siRNA为下述(1-1)-(1-5)的任意一种，HIF-2α的siRNA为下述(2-1)-(2-3)的任意一种：
(1-1)由含有SEQ ID NO.5所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.11所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-2)由含有SEQ ID NO.6所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.12所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-3)由含有SEQ ID NO.7所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.13所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-4)由含有SEQ ID NO.8所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.14所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-5)由含有SEQ ID NO.29所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.30所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-1)由含有SEQ ID NO.9所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQID NO.15所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-2)由含有SEQ ID NO.10所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.16所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-3)由含有SEQ ID NO.33所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.34所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA。
[23]上述[17]所述的治疗方法，其中，视网膜疾病为老年性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜动脉阻塞、糖尿病黄斑水肿或青光眼。
[24]上述[23]所述的治疗方法，其中，视网膜疾病为老年性黄斑变性或糖尿病性视网膜病变。
发明效果
根据本发明的视网膜疾病的治疗药，通过特异性抑制HIF-1α和HIF-2α两者的表达，与抑制其中任一种的表达的情形相比，可有效抑制视网膜细胞中VEGF的生成。该VEGF生成的抑制效果是协同性的。本发明视网膜疾病的治疗药与通常的核酸药物相比，有望获得优异的效果。
附图简述
图1是表示RPE细胞中的HIF-1α表达量的图表。
图2是表示RPE细胞中的HIF-2α表达量的图表。
图3是表示RPE细胞中的VEGF表达量的图表。
图4是表示RPE细胞中的HIF-1α表达量的图表。
图5是表示RPE细胞中的HIF-2α表达量的图表。
图6是表示RPE细胞中的VEGF表达量的图表。
图7是表示RPE细胞中的VEGF表达量的图表。
具体实施方式
VEGF与存在于血管内皮细胞表面的受体(Flt-1、KDR/Flk-1等)特异性作用。是促进血管内皮细胞的增殖、游走、通过管腔形成来构建毛细血管网的因子，血管新生的发生过程中起着非常重要的作用(Ferrara，N.等人.，Kidney Int.1999，56，794-814)。还已知VEGF是眼组织中的血管形成或血管透过性的重要的控制因子，与抑老年性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变等的视网膜疾病有关(Shams，N.等人.，Ophthalmol.Clin.North.Am.2006，19，335-344)。本发明的治疗药可以在视网膜色素上皮细胞或放射状胶质(米勒)细胞等来自视网膜的细胞中，特异性抑制在上游控制VEGF表达的HIF-1α和HIF-2α的表达。本发明的治疗药通过抑制VEGF生成、控制血管新生的发生，作为视网膜疾病的治疗药、特别是伴随血管新生的视网膜疾病的治疗药有效。伴随血管新生的视网膜疾病的具体疾病有：老年性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜动脉阻塞、糖尿病黄斑水肿、青光眼(特别是新生血管性青光眼)等。已知视网膜色素上皮细胞中的VEGF的增加是老年性黄斑变性中可见的血管形成的原因之一(Katrina等人.，Am.J.Pathol.2000，157，135-144)，因此本发明的治疗药通过在视网膜色素上皮细胞发挥优异的VEGF生成抑制作用，作为老年性黄斑变性的治疗药特别有效。
本发明中，HIF-1α和HIF-2α是来自任意的哺乳动物的转录因子。哺乳动物有：人以及除人以外的哺乳动物，除人以外的哺乳动物例如有：小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠等啮齿类或兔等的实验动物，猪、牛、山羊、马、绵羊等家畜，狗、猫等宠物，猴、猩猩、黑猩猩等灵长类。在用于人的疾病的治疗方面，优选来自人的HIF-1α和HIF-2α。HIF-2α也称为EPAS1或HLF。人HIF-1α和HIF-2α的碱基序列和氨基酸序列是公知的，例如，HIF-1α的碱基序列(SEQ ID NO.1)和氨基酸序列(SEQ ID NO.2)(GenBank Accession No.NM 001530)、以及HIF-2α的碱基序列(SEQ IDNO.3)和氨基酸序列(SEQ ID NO.4)(GenBank Accession No.NM_001430)等在GenBank中登记、发表。
本发明的治疗药的特征在于：含有特异性抑制HIF-1α表达的物质和特异性抑制HIF-2α表达的物质。
本发明的治疗药中作为有效成分含有的特异性抑制HIF-1α表达的物质只要是作用于HIF-1α的转录过程、特异性抑制其表达的物质即可，没有特别限定。本发明的治疗药中作为有效成分含有的特异性抑制HIF-2α表达的物质只要是作用于HIF-2α的转录过程、特异性抑制其表达的物质即可，没有特别限定。所述抑制物质有：RNAi诱导性核酸、反义核酸或核酶、或者它们的表达载体。
上述RNAi诱导性核酸是指可导入到细胞内、诱导RNA干扰的多核苷酸，优选为RNA或者RNA与DNA的嵌合分子。RNA干扰是指含有与mRNA同一碱基序列(或其部分序列)的双链结构的RNA抑制该mRNA表达的效果。为了获得该RNAi效果，例如优选使用与至少19个碱基的连续的靶mRNA具有同一碱基序列(或其部分序列)的双链结构的RNA。不过，只要具有HIF-1α或HIF-2α的表达抑制作用即可，可以被几个碱基置换，也可以是比19个碱基长度短的RNA。双链结构可以由有义链和反义链这样不同的链构成，也可以是由一个RNA的茎环结构产生的双链(shRNA)。RNAi诱导性核酸例如有：siRNA、miRNA等。
从转录抑制活性强的角度考虑，RNAi诱导性核酸优选siRNA。HIF-1α或HIF-2α的siRNA可以以HIF-1α或HIF-2α的mRNA的任意部分作为靶。HIF-1α或HIF-2α的siRNA分子只要可诱导RNAi效果即可，没有特别限定，例如为17-25个碱基长度，优选17-23个碱基长度，进一步优选17-21个碱基长度。HIF-1α或HIF-2α的siRNA是含有有义链和反义链的双链。具体来说，HIF-1α的siRNA由含有对应于SEQ IDNO.1的碱基序列的mRNA中17-25个(优选17-23个，进一步优选17-21个)连续的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成。优选由含有以SEQ ID NO.1的第906号-第1478号为靶的17-25个(优选17-23个，进一步优选17-21个)连续的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成。HIF-2α的siRNA由含有对应于SEQ ID NO.3的碱基序列的mRNA中17-25个(优选17-23个，进一步优选17-21个)连续的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成。优选由含有以SEQ ID NO.3的第580号-第4242号为靶的17-25个(优选17-23个，进一步优选17-21个)连续的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链。HIF-1α或HIF-2α的siRNA可以在有义链、反义链的一方或双方的5’末端或3’末端具有突出端(overhang)。突出端通过有义链和/或反义链的末端的1-数个(例如1、2或3个)碱基的附加形成。siRNA的设计方法是本领域技术人员公知的，可以使用siRNA的各种设计软件或算法，由上述碱基序列中选择适当的siRNA的碱基序列。HIF-1α和HIF-2α的mRNA的同源性高，因此可以选择可同时敲除两者的mRNA的siRNA。这种情况下，本发明的治疗药中所含的核酸可以只是1种。
(1)HIF-1α的siRNA
HIF-1α的siRNA的具体序列优选为以下述SEQ ID NO.17-20或31的碱基序列为基准，由下述(a)或(b)定义的双链RNA。
(a)双链RNA，该双链RNA由含有SEQ ID NO.17-20或31的任一个所示的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-1α表达抑制活性；
(b)双链RNA，该双链RNA由含有在SEQ ID NO.17-20或31的任一个所示的碱基序列的5’末端和/或3’末端有1-数个碱基附加和/或缺失的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-1α表达抑制活性。这里，从HIF-1α表达抑制活性的保持的角度考虑，在SEQ ID NO.17-20或31的任一个所示的碱基序列的5’末端和/或3’末端有1-数个(例如1-5个，优选1-3个，更优选1或2个)碱基附加和/或缺失可实现与编码HIF-1α基因的有义链及其反义链的部分碱基序列确保同一性。
[表1]
  siRNA   有义链(SEQ ID NO.)   反义链*(SEQ ID NO.)
  HIF-1α   5’-ggaac cugau gcuuu aacu-3’(17)   5’-aguua aagca ucagg uucc-3’(23)
  HIF-1α   5’-gggua aagaa caaaa caca-3’(18)   5’-ugugu uuugu ucuuu accc-3’(24)
  HIF-1α   5’-ggcag cagaa accua cugc-3’(19)   5’-gcagu agguu ucugc ugcc-3’(25)
  HIF-1α   5’-gcacg acuug auuuu cucc-3’(20)   5’-ggaga aaauc aaguc gugc-3’(26)
  HIF-1α   5’-ccuca gugug gguau aaga-3’(31)   5’-ucuua uaccc acacu gagg-3’(32)
*反义链的序列表示与左栏的有义链序列对应的一个具体例子。
优选HIF-1α的siRNA内，具有突出端的siRNA为下述(1-1)-(1-5)的任意一种(下划线表示突出端)
(1-1)由含有SEQ ID NO.5(5’-ggaac cugau gcuuu aacutt-3’)所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.11(5’-aguua aagca ucagguucctt-3’)所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-2)由含有SEQ ID NO.6(5’-gggua aagaa caaaa cacatt-3’)所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.12(5’-ugugu uuugu ucuuuaccctt-3’)所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-3)由含有SEQ ID NO.7(5’-ggcagcagaaaccuacugctt-3’)所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.13(5’-gcaguagguuucugcugcctt-3’)所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-4)由含有SEQ ID NO.8(5’-gcacgacuugauuuucucctt-3’)所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.14(5’-ggagaaaaucaagucgugctg-3’)所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-5)由含有SEQ ID NO.29(5’-ccucaguguggguauaagatt-3’)所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.30(5’-ucuuauacccacacugaggtt-3’)所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA。
(2)HIF-2α的siRNA
HIF-2α的siRNA的具体的序列优选为以下述SEQ ID NO.21、22或35的任一个为基准、由下述(c)或(d)定义的双链RNA。
(c)双链RNA，该双链RNA由含有SEQ ID NO.21、22或35的任一个所示的碱基序列有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-2α表达抑制活性；
(d)双链RNA，该双链RNA由含有在SEQ ID NO.21、22或35的任一个所示的碱基序列的5’末端和/或3’末端有1-数个碱基附加和/或缺失的碱基序列的有义链、以及含有其互补序列的反义链构成，该有义链和/或反义链的末端任选具有突出端，且具有HIF-2α表达抑制活性。这里，从保持HIF-2α表达抑制活性的角度考虑，在SEQ ID NO.21、22或35的任一个所示的碱基序列的5’末端和/或3’末端有1-数个(例如1-5个，优选1-3个，更优选1或2个)碱基附加和/或缺失可实现与编码HIF-2α基因的有义链及其反义链的部分碱基序列确保同一性。
[表2]
  siRRA   有义链(SEQ ID NO.)   反义链*(SEQ ID NO.)
  HIF-2α   5’-cggag guguu cuaug agcu-3’(21)   5’-agcuc auaga acacc uccg-3’(27)
  HIF-2α   5’-gguuu uguug cuagc ccuu-3’(22)   5’-aaggg cuagc aacaa aacc-3’(28)
  HIF-2α   5’-ggaca uagua ucuuu gacu-3’(35)   5’-aguca aagau acuau gucc-3’(36)
*反义链的序列表示与左栏的有义链序列对应的一个具体例子。
HIF-2α的siRNA内，具有突出端的siRNA优选为下述(2-1)-(2-3)的任意一种(下划线表示突出端。)：
(2-1)由含有SEQ ID NO.9(5’-cggag guguu cuaug agcutt-3’)所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.15(5’-agcuc auaga acaccuccgtc-3’)所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-2)由含有SEQ ID NO.10(5’-gguuu uguug cuagc ccuutt-3’)所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.16(5’-aaggg cuagc aacaaaacctt-3’)所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-3)由含有SEQ ID NO.33(5’-ggaca uagua ucuuu gacutt-3’)所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO.34(5’-aguca aagau acuaugucctg-3’)所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA。
HIF-1α的反义核酸或HIF-2α的反义核酸是指，由在表达HIF-1α或HIF-2α的转录产物(mRNA或初期转录产物)的细胞的生理条件下可与该转录产物杂交的碱基序列构成，且在杂交的状态下，可抑制该转录产物所编码的多肽的翻译的多核苷酸。反义核酸的种类可以是DNA，也可以是RNA，或者是DNA/RNA嵌合。反义核酸可以具有天然型的磷酸二酯键，也可以是对分解酶稳定的硫代磷酸型(磷酸键P＝O取代为P＝S)或2’-O-甲基型等的修饰核苷酸。反义核酸的设计中很重要的其它要素有：提高水溶性和细胞膜透过性等，这可通过使用脂质体或微球体等剂型的改进来克服。反义核酸的长度只要是可与HIF-1α或HIF-2α的转录产物(例如对应于SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3碱基序列的mRNA)特异性杂交即可，没有特别限定，可以是含有短至约15个碱基左右、长至与转录产物的全序列互补的序列的序列。基于的容易程度或抗原性的问题等，可列举例如含有约15个碱基以上、优选约15-约30个碱基、更优选约18个碱基-约30个碱基的寡核苷酸。并且反义核酸不仅与HIF-1α或HIF-2α的转录产物杂交，抑制翻译，还与双链DNA结合，形成三链(三链体)，可抑制转录为mRNA。HIF-1α的反义核酸优选包含SEQ IDNO.17-20、23-26、31、32的任一个所示的碱基序列(反义核酸为DNA时，U为T)。HIF-2α的反义核酸优选包含SEQ ID NO.21、22、27、28、35、36的任一个所示的碱基序列(反义核酸为DNA时，U为T)。
本说明书中，“互补的”是指碱基序列之间具有约70％以上、优选约80％以上、更优选约90％以上、进一步优选约95％以上、最优选100％的互补性。本说明书中的碱基序列的同源性可以使用同源性计算算法NCBI BLAST(National Center for Biotechnology Information Basic LocalAlignment Search Tool)，按以下的条件(期望值＝10；允许空位；过滤＝ON；匹配得分＝1；错配得分＝-3)计算。
上述“核酶”是指具有切断核酸的酶活性的RNA，最近已明确，该具有酶活性部位的碱基序列的寡DNA也同样具有核酸切断活性，因此，本说明书中，只要具有序列特异性的核酸切断活性，也作为包含DNA的概念使用。具体来说，核酶可在编码区的内部(为初期转录产物时包含内含子部分)特异性切断编码HIF-1α或HIF-2α的mRNA或者初期转录产物。作为核酶，常用性最高的有类病毒或拟病毒等的感染性RNA中可见的自剪切RNA，已知有锤头型或发夹型等。锤头型以约40个碱基左右发挥酶活性，通过使与锤头结构的部分相邻的两端的数个碱基(共约10个碱基左右)制成为与mRNA的所需切断部位互补的序列，可以只特异性切断靶mRNA。并且，以含有编码该核酶的DNA的表达载体的形式使用核酶时，为了促进转录产物向细胞质转移，可以制成进一步与使tRNA改变了的序列连接得到的杂交核酶(Nucleic Acids Res.，29(13)：2780-2788(2001))。
HIF-1α和HIF-2α特异性抑制物质也可以以表达载体的形式提供。所述表达载体含有编码HIF-1α和HIF-2α特异性抑制物质的多核苷酸、以及可与该多核苷酸功能性连接的启动子。
上述启动子可根据在其控制下的表达对象核酸的种类适当选择，例如有：polIII启动子(例如tRNA启动子、U6启动子、H1启动子)、哺乳动物用启动子(例如、CMV启动子、CAG启动子、SV40启动子)。
本发明的表达载体可进一步含有选择标志基因(产生对四环素、氨苄青霉素、卡那霉素、潮霉素、膦丝菌素等药物的抗性的基因、使营养突变互补的基因等)。
本发明的表达载体的主链(backbone)只要是可在人等的哺乳动物细胞中产生HIF-1α和HIF-2α特异性抑制物质即可，没有特别限定，例如有质粒载体、病毒载体。适合给予哺乳动物的载体有：反转录病毒、腺病毒、腺伴随病毒、疱疹病毒、痘苗病毒、痘病毒、脊髓灰质炎病毒、新培斯病毒、仙台病毒等的病毒载体。其中优选来自反转录病毒、腺病毒、腺伴随病毒、痘苗病毒的病毒载体。
本发明的治疗药的给予量根据有效成分的种类或活性、作为给予对象的动物种类、给予对象的病症的严重程度、药物接受性、体重、年龄等而不同，通常成人每天的有效成分量可列举约0.0001-约1000mg/kg。
本发明的治疗药的给予对象有人以及除人之外的哺乳动物，除人之外的哺乳动物例如有小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠等啮齿类，或兔等的实验动物，猪、牛、山羊、马、绵羊等家畜，狗、猫等宠物，猴、猩猩、黑猩猩等的灵长类。
本发明的治疗药可以对患者口服或非口服给予，给予形式有：口服给予、眼部局部给予(滴眼给予、玻璃体内给予、结膜下给予、眼球肌膜囊下给予等)、静脉内给予、透皮给予等，还可根据需要，与制药学可接受的添加剂一起，制成适合给予的制剂。适合口服给予的剂型例如有：片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂等，适合非口服给予的剂型例如有：滴眼剂、眼软膏、注射剂、贴剂、洗剂、乳膏剂等。它们可采用该领域常用的常规技术制备。本发明的治疗药只要可发挥上述治疗效果即可，其给予途径和剂型没有特别限定，优选给予途径是眼部局部给予，其剂型是注射剂或滴眼剂。
本发明的治疗药除这些制剂之外，还可以制成眼内植入用制剂或微球体等的DDS(药物传递系统)化的制剂。
例如使用本发明的治疗药作为注射剂或滴眼剂时，可以加入稳定剂(例如有亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、乙二胺四乙酸钠、柠檬酸钠、抗坏血酸、二丁基羟基甲苯等)、溶解助剂(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇、聚氧乙烯氢化蓖麻油等)、悬浮剂(例如聚乙烯基吡咯烷酮、羟丙甲基纤维素、羟基甲基纤维素、羧基甲基纤维素钠等)、乳化剂(例如聚乙烯基吡咯烷酮、大豆卵磷脂、卵黄卵磷脂、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚山梨酯80等)、缓冲剂(例如磷酸缓冲液、乙酸缓冲液、硼酸缓冲液、碳酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、Tris缓冲液、谷氨酸、ε-氨基己酸等)、增稠剂(例如甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟基丙甲基纤维素、羧甲基纤维素等水溶性纤维素衍生物，软骨素硫酸钠、透明质酸钠、羧基乙烯基聚合物、聚乙烯基醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙二醇等)、防腐剂(例如有苯扎氯铵、苄索氯胺、葡萄糖酸氯己定、氯丁醇、苄醇、脱氢乙酸钠、对羟基苯甲酸酯类、乙二胺四乙酸钠、硼酸等)、等渗剂(例如氯化钠、氯化钾、甘油、甘露醇、山梨醇、硼酸、葡萄糖、丙二醇等)、pH调节剂(例如盐酸、氢氧化钠、磷酸、乙酸等)、清凉剂(例如、1-薄荷醇、d-樟脑、d-冰片、薄荷油等)、软膏基质(白色凡士林、精制羊毛脂、液体石蜡、植物油(橄榄油、香椿油、花生油等)等)等作为添加剂。这些添加剂的添加量根据要添加的添加剂的种类、用途等而不同，可以添加可达到添加剂的目的的浓度。
本发明的治疗药可以采用脂转染法将siRNA等核酸制成制剂。脂转染法中通常使用磷脂酰丝氨酸制成的脂质体。磷脂酰丝氨酸具有负电荷，因此，优选使用更容易制成稳定的脂质体、被称为N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基氯化铵(DOTMA)的阳离子性脂质(商品名：トランスフエクタム、Lipofectamine(脂转染胺试剂))作为磷脂酰丝氨酸的代用品。这些阳离子性脂质与带负电荷的siRNA等核酸形成复合物，则整体带正电荷的脂质体可吸附在带负电荷的细胞的表面，与细胞膜融合，由此可以将核酸导入细胞内。
实施例
以下给出实施例，进一步详细说明本发明，但本发明并不受此限定。
制剂例1：玻璃体内给予用注射剂
按照常规方法制备如下所示的玻璃体内给予用注射剂。
HIF-1αsiRNA：
有义-GGA ACC UGA UGC UUU AAC UTT(SEQ ID NO.5)    1mg
反义-AGU UAA AGC AUC AGG UUC CTT(SEQ ID NO.11)   1mg
HIF-2αsiRNA：
有义-CGG AGG UGU UCU AUG AGC UTT(SEQ ID NO.9)    1mg
反义-AGC UCA UAG AAC ACC UCC GTC(SEQ ID NO.15)   1mg
磷酸二氢钠                                       0.1g
氯化钠                                           0.9g
氢氧化钠                                         适量
无菌纯净水                                       适量
                                             总量100mL
                                                 (pH7)
制剂例2：玻璃体内给予用注射剂
按照常规方法制备以下所示的玻璃体内给予用注射剂。
HIF-1αsiRNA：
有义-GGG UAA AGA ACA AAA CAC ATT(SEQ ID NO.6)    0.1mg
反义-UGU GUU UUG UUC UUU ACC CTT(SEQ ID NO.12)   0.1mg
HIF-2αsiRNA：
有义-GGU UUU GUU GCU AGC CCU UTT(SEQ ID NO.10)   0.1mg
反义-AAG GGC UAG CAA CAA AAC CTT(SEQ ID NO.16)   0.1mg
磷酸二氢钠                                       0.1g
甘油                                             2.5g
氢氧化钠                                         适量
无菌纯净水                                       适量
                                             总量100mL
                                                 (pH 7)
制剂例3：眼球肌膜囊下给予用注射剂
按照常规方法制备以下所示的眼球肌膜囊下给予用注射剂。
HIF-1αsiRNA：
有义-GGC AGC AGA AAC CUA CUG CTT(SEQ ID NO.7)    5mg
反义-GCA GUA GGU UUC UGC UGC CTT(SEQ ID NO.13)   5mg
HIF-2αsiRNA：
有义-GGA CAU AGU AUC UUU GAC UTT(SEQ ID NO.33)   5mg
反义-AGU CAA AGA UAC UAU GUC CTG(SEQ ID NO.34)   5mg
磷酸二氢钠                                       0.1g
氯化钠                                           0.9g
氢氧化钠                                         适量
无菌纯净水                                       适量
                                             总量100mL
                                                 (pH7)
试验例1：HIF siRNA对于诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞中的VEGF表达的效果
1.方法
1)HIF siRNA对RPE细胞的转染
在6孔板中接种RPE细胞(ATCC制备，细胞名：ARPE-19，目录编号：CRL-2302)，培养至30-50％的细胞密度后更换为低血清培养基(含有0.1％FBS的DMEM/F12培养基，Invitrogen制备)。下述的各HIF siRNA使用Ambion公司的产品(下划线表示由脱氧体构成的突出端)。
HIF-1αsiRNA：
有义-GGA ACC UGA UGC UUU AAC UTT(SEQ ID NO.5)、
反义-AGU UAA AGC AUC AGG UUC CTT(SEQ ID NO.11)、
HIF-2αsiRNA：
有义-CGG AGG UGU UCU AUG AGC UTT(SEQ ID NO.9)、以及
反义-AGC UCA UAG AAC ACC UCC GTC(SEQ ID NO.15)
转染试剂(RNAi MAX，Invitrogen制备)的复合物的形成是通过将各种siRNA和转染试剂在Opti-MEM(Invitrogen制备)中搅拌，然后温育25分钟来制备。然后，在调节成各siRNA的终浓度为5nM的培养基中将RPE细胞培养24小时，进行siRNA的转染。分组情况如下所述。
(a)正常组
(b)低氧组
(c)低氧+药物组(HIF-1αsiRNA 5nM)
(d)低氧+药物组(HIF-2αsiRNA 5nM)
(e)低氧+药物组(HIF-1αsiRNA 5nM+HIF-2αsiRNA 5nM)
2)低氧系统中的RPE细胞的培养
将HIF siRNA转染RPE细胞后，使用AnaeroPack for Cell(三菱气体株式会社制备)进行1天的低氧培养。另外以正常氧浓度下培养的细胞作为正常组。
3)RNA提取和实时PCR
使用1mL TRIzol溶液(Invitrogen制备，目录编号：15596-026)，从接种于6孔板的RPE细胞中提取总RNA。提取方法按照TRIzol溶液中附属的说明书流程进行。接着使用DNA-free(Ambion制备)除去混在提取后的总RNA中的基因组DNA，然后使用SuperScript II(Invitrogen制备)和Random primer(Ambion制备)进行反转录反应。然后使用TaqManUniversal PCR master mix(Applied Biosystems制备)将所得cDNA溶液进行实时PCR反应。引物使用Applied Biosystems制备的TaqMan实时PCR引物(HIF-1α：Hs00153153_m1，HIF-2α：Hs01026142_m1，VEGF：Hs00173626_m1)。
2.结果和考察
分别添加HIF-1αsiRNA、HIF-2αsiRNA和由两者构成的异构体的混合siRNA，使用RPE细胞，对于是否抑制低氧处理导致的VEGF表达亢进进行研究。
图1表示HIF-1α的表达量。通过添加单独的HIF-1αsiRNA、或者由两者异构体构成的混合siRNA，观察到HIF-1α表达的抑制。图2表示HIF-2α的表达量，通过添加单独的HIF-2αsiRNA、或者由两者异构体构成的混合siRNA，可见HIF-2α表达的抑制。在相同条件下可见VEGF表达的抑制的是图3。单独添加HIF-1αsiRNA可见VEGF表达的抑制效果，但其抑制效果不充分，抑制率为35％。而单独添加HIF-2αsiRNA时则完全未见抑制效果。不过，在添加HIF-1α和2α两者的异构体的组中，单独添加时可见未予想到的显著的VEGF表达的抑制效果，其抑制率显示为89％。以上结果表明，通过抑制HIF来抑制视网膜中的血管新生时，与其它的细胞不同，抑制两种异构体是理想的。
试验例2：HIF siRNA对于诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞中的VEGF表达的效果
1.方法
1)HIF siRNA对RPE细胞的转染
在96孔板中接种RPE细胞(ATCC制备，细胞名：ARPE-19，目录编号：CRL-2302)，为了进行siRNA的转染，将细胞培养至30-50％的细胞密度。接着，将siRNA和转染试剂(RNAi MAX，Invitrogen制备)在Opti-MEM(Invitrogen制备)中搅拌，然后温育20分钟，制备siRNA-RNAiMax复合物。
HIF siRNA使用下述的Ambion公司的产品(下划线表示由脱氧体构成的突出端)。
HIF-1αsiRNA：
有义-CCU CAG UGU GGG UAU AAG ATT(SEQ ID NO.29)、
反义-UCU UAU ACC CAC ACU GAG GTT(SEQ ID NO.30)、
HIF-2αsiRNA：
有义-GGA CAU AGU AUC UUU GAC UTT(SEQ ID NO.33)、以及
反义-AGU CAA AGA UAC UAU GUC CTG(SEQ ID NO.34)
将培养基更换为无血清培养基(DMEM培养基或DMEM/F12培养基，Invitrogen制备)，然后向RPE细胞中加入各siRNA，使终浓度为10nM，进行转染。分组情况如下所述。
(a)正常组
(b)低氧组
(c)低氧+药物组(HIF-1αsiRNA 5nM)
(d)低氧+药物组(HIF-2αsiRNA 5nM)
(e)低氧+药物组(HIF-1αsiRNA 5nM+HIF-2αsiRNA 5nM)
2)低氧系统中的RPE细胞的培养
对RPE细胞转染HIF siRNA，然后使用AnaeroPack for Cell(三菱气体株式会社制备)，为了诱导VEGF的表达而进行1天的低氧培养。以在正常氧浓度下培养的细胞作为正常组。
3)RNA提取和实时PCR
低氧培养结束后，使用50μL的Lysis溶液(TaqMan Gene ExpressionCell-to-CT试剂盒，Applied Biosystems制备，目录编号：AM1728)，从RPE细胞中提取总RNA。提取方法按照TRIzol溶液所附的说明书的流程进行。接着，使用1xRT缓冲液和1xRT酶Mix(与上述试剂盒在同一包装中)进行反转录反应，所得cDNA溶液使用TaqMan Gene ExpressionMaster Mix(与上述试剂盒在同一包装中)进行实时PCR反应。引物使用Applied Biosystems公司的TaqMan  实时PCR引物(HIF-1α：Hs00153153_m1，HIF-2α：Hs01026142_m1，VEGF：Hs00173626_m1)。
2.结果和考察：
分别添加HIF-1αsiRNA、HIF-2αsiRNA以及由两者的异构体构成的混合siRNA，使用RPE细胞对于是否抑制低氧处理导致的VEGF表达亢进进行研究。图4表示HIF-1α的表达量。通过添加单独的HIF-1αsiRNA、或者由两者的异构体构成的混合siRNA，观察到显著的HIF-1α表达的抑制。图5表示HIF-2α的表达量，通过添加单独的HIF-2αsiRNA、或者由两者的异构体构成的混合siRNA，可见HIF-2α表达的抑制。在相同条件下可见VEGF表达的抑制的是图6。HIF-1α在单独添加siRNA或HIF-2αsiRNA的组中，未见VEGF表达抑制的效果。与此相对，在添加了由两者的异构体构成的混合siRNA的组中，可见显著的VEGF表达抑制效果。
试验例3：HIF siRNA对于诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞中的VEGF表达的效果
1.方法
1)HIF siRNA对RPE细胞的转染
试验方法按照试验例2进行，使用下述的Amibon制备的siRNA实施试验(下划线表示由脱氧体构成的突出端)。
HIF-1αsiRNA：
有义-gca cga cuu gau uuu cuc cTT(SEQ ID NO.8)、
反义-gga gaa aau caa guc gug cTT(SEQ ID NO.14)、
HIF-2αsiRNA：
有义-ggu uuu guu g cu agc ccu uTT(SEQ ID NO.10)、以及
反义-aag ggcuag caa caa aac cTC(SEQ ID NO.16)
2.结果和考察：
如图7所示，在单独添加HIF-1αsiRNA或HIF-2αsiRNA的组中，未见VEGF表达抑制效果。而在添加由两者的异构体构成的混合siRNA的组中，显著可见VEGF的抑制效果。
产业实用性
本发明的视网膜疾病的治疗药可以有效地抑制视网膜细胞中的VEGF的生成，在老年性黄斑变性或糖尿病性视网膜病变等的伴随血管新生的视网膜疾病的治疗中，与通常的核酸药物相比有望获得优异的量效关系。
本申请是以在日本提出的特愿2007-204585(申请日：2007年8月6日)为基础，其内容全部包含在本说明书中。
序列表自由文本
SEQ ID NO.5：人HIF-1α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.6：人HIF-1α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.7：人HIF-1α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.8：人HIF-1α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.9：人HIF-2α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.10：人HIF-2α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.11：人HIF-1α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.12：人HIF-1α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.13：人HIF-1α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.14：人HIF-1α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.15：人HIF-2α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.16：人HIF-2α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.17：人HIF-1α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.18：人HIF-1α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.19：人HIF-1α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.20：人HIF-1α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.21：人HIF-2α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.22：人HIF-2α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.23：人HIF-1α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.24：人HIF-1α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.25：人HIF-1α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.26：人HIF-1α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.27：人HIF-2α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.28：人HIF-2α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.29：人HIF-1α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.30：人HIF-1α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.31：人HIF-1α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.32：人HIF-1α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.33：人HIF-2α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.34：人HIF-2α的siRNA的反义链
SEQ ID NO.35：人HIF-2α的siRNA的有义链
SEQ ID NO.36：人HIF-2α的siRNA的反义链
序列表
<110>千寿制药株式会社
<120>含有HIF-1α和HIF-2α表达抑制物质的药物
<130>091269
<150>JP-2007-204585
<151>2007-08-06
<160>36
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>3958
<212>DNA
<213>人类
<220>
<221>CDS
<222>(285)..(2765)
<400>1
gtgctgcctc gtctgagggg acaggaggat caccctcttc gtcgcttcgg ccagtgtgtc     60
gggctgggcc ctgacaagcc acctgaggag aggctcggag ccgggcccgg accccggcga    120
ttgccgcccg cttctctcta gtctcacgag gggtttcccg cctcgcaccc ccacctctgg    180
acttgccttt ccttctcttc tccgcgtgtg gagggagcca gcgcttaggc cggagcgagc    240
ctgggggccg cccgccgtga agacatcgcg gggaccgatt cacc atg gag ggc gcc     296
                                                 Met Glu Gly Ala
                                                 1
ggc ggc gcg aac gac aag aaa aag ata agt tct gaa cgt cga aaa gaa      344
Gly Gly Ala Asn Asp Lys Lys Lys Ile Ser Ser Glu Arg Arg Lys Glu
5                   10                  15                  20
aag tct cga gat gca gcc aga tct cgg cga agt aaa gaa tct gaa gtt      392
Lys Ser Arg Asp Ala Ala Arg Ser Arg Arg Ser Lys Glu Ser Glu Val
                25                  30                  35
ttt tat gag ctt gct cat cag ttg cca ctt cca cat aat gtg agt tcg      440
Phe Tyr Glu Leu Ala His Gln Leu Pro Leu Pro His Asn Val Ser Ser
            40                  45                  50
cat ctt gat aag gcc tct gtg atg agg ctt acc atc agc tat ttg cgt      488
His Leu Asp Lys Ala Ser Val Met Arg Leu Thr Ile Ser Tyr Leu Arg
        55                  60                  65
gtg agg aaa ctt ctg gat gct ggt gat ttg gat att gaa gat gac atg      536
Val Arg Lys Leu Leu Asp Ala Gly Asp Leu Asp Ile Glu Asp Asp Met
    70                  75                  80
aaa gca cag atg aat tgc ttt tat ttg aaa gcc ttg gat ggt ttt gtt      584
Lys Ala Gln Met Asn Cys Phe Tyr Leu Lys Ala Leu Asp Gly Phe Val
85                  90                  95                  100
atg gtt ctc aca gat gat ggt gac atg att tac att tct gat aat gtg      632
Met Val Leu Thr Asp Asp Gly Asp Met Ile Tyr Ile Ser Asp Asn Val
                105                 110                 115
aac aaa tac atg gga tta act cag ttt gaa cta act gga cac agt gtg      680
Asn Lys Tyr Met Gly Leu Thr Gln Phe Glu Leu Thr Gly His Ser Val
            120                 125                 130
ttt gat ttt act cat cca tgt gac cat gag gaa atg aga gaa atg ctt      728
Phe Asp Phe Thr His Pro Cys Asp His Glu Glu Met Arg Glu Met Leu
        135                 140                 145
aca cac aga aat ggc ctt gtg aaa aag ggt aaa gaa caa aac aca cag      776
Thr His Arg Asn Gly Leu Val Lys Lys Gly Lys Glu Gln Asn Thr Gln
    150                 155                 160
cga agc ttt ttt ctc aga atg aag tgt acc cta act agc cga gga aga      824
Arg Ser Phe Phe Leu Arg Met Lys Cys Thr Leu Thr Ser Arg Gly Arg
165                 170                 175                 180
act atg aac ata aag tct gca aca tgg aag gta ttg cac tgc aca ggc      872
Thr Met Asn Ile Lys Ser Ala Thr Trp Lys Val Leu His Cys Thr Gly
                185                 190                 195
cac att cac gta tat gat acc aac agt aac caa cct cag tgt ggg tat      920
His Ile His Val Tyr Asp Thr Asn Ser Asn Gln Pro Gln Cys Gly Tyr
            200                 205                 210
aag aaa cca cct atg acc tgc ttg gtg ctg att tgt gaa ccc att cct      968
Lys Lys Pro Pro Met Thr Cys Leu Val Leu Ile Cys Glu Pro Ile Pro
        215                 220                 225
cac cca tca aat att gaa att cct tta gat agc aag act ttc ctc agt     1016
His Pro Ser Asn Ile Glu Ile Pro Leu Asp Ser Lys Thr Phe Leu Ser
    230                 235                 240
cga cac agc ctg gat atg aaa ttt tct tat tgt gat gaa aga att acc     1064
Arg His Ser Leu Asp Met Lys Phe Ser Tyr Cys Asp Glu Arg Ile Thr
245                 250                 255                 260
gaa ttg atg gga tat gag cca gaa gaa ctt tta ggc cgc tca att tat     1112
Glu Leu Met Gly Tyr Glu Pro Glu Glu Leu Leu Gly Arg Ser Ile Tyr
                265                 270                 275
gaa tat tat cat gct ttg gac tct gat cat ctg acc aaa act cat cat     1160
Glu Tyr Tyr His Ala Leu Asp Ser Asp His Leu Thr Lys Thr His His
             280                 285                 290
gat atg ttt act aaa gga caa gtc acc aca gga cag tac agg atg ctt     1208
Asp Met Phe Thr Lys Gly Gln Val Thr Thr Gly Gln Tyr Arg Met Leu
        295                 300                 305
gcc aaa aga ggt gga tat gtc tgg gtt gaa act caa gca act gtc ata     1256
Ala Lys Arg Gly Gly Tyr Val Trp Val Glu Thr Gln Ala Thr Val Ile
    310                 315                 320
tat aac acc aag aat tct caa cca cag tgc att gta tgt gtg aat tac     1304
Tyr Asn Thr Lys Asn Ser Gln Pro Gln Cys Ile Val Cys Val Asn Tyr
325                 330                 335                 340
gtt gtg agt ggt att att cag cac gac ttg att ttc tcc ctt caa caa     1352
Val Val Ser Gly Ile Ile Gln His Asp Leu Ile Phe Ser Leu Gln Gln
                345                 350                 355
aca gaa tgt gtc ctt aaa ccg gtt gaa tct tca gat atg aaa atg act     1400
Thr Glu Cys Val Leu Lys Pro Val Glu Ser Ser Asp Met Lys Met Thr
            360                 365                 370
cag cta ttc acc aaa gtt gaa tca gaa gat aca agt agc ctc ttt gac     1448
Gln Leu Phe Thr Lys Val Glu Ser Glu Asp Thr Ser Ser Leu Phe Asp
        375                 380                 385
aaa ctt aag aag gaa cct gat gct tta act ttg ctg gcc cca gcc gct     1496
Lys Leu Lys Lys Glu Pro Asp Ala Leu Thr Leu Leu Ala Pro Ala Ala
    390                 395                 400
gga gac aca atc ata tct tta gat ttt ggc agc aac gac aca gaa act     1544
Gly Asp Thr Ile Ile Ser Leu Asp Phe Gly Ser Asn Asp Thr Glu Thr
405                 410                 415                 420
gat gac cag caa ctt gag gaa gta cca tta tat aat gat gta atg ctc     1592
Asp Asp Gln Gln Leu Glu Glu Val Pro Leu Tyr Asn Asp Val Met Leu
                425                 430                 435
ccc tca ccc aac gaa aaa tta cag aat ata aat ttg gca atg tct cca     1640
Pro Ser Pro Asn Glu Lys Leu Gln Asn Ile Asn Leu Ala Met Ser Pro
            440                 445                 450
tta ccc acc gct gaa acg cca aag cca ctt cga agt agt gct gac cct     1688
Leu Pro Thr Ala Glu Thr Pro Lys Pro Leu Arg Ser Ser Ala Asp Pro
        455                 460                 465
gca ctc aat caa gaa gtt gca tta aaa tta gaa cca aat cca gag tca     1736
Ala Leu Asn Gln Glu Val Ala Leu Lys Leu Glu Pro Asn Pro Glu Ser
    470                 475                 480
ctg gaa ctt tct ttt acc atg ccc cag att cag gat cag aca cct agt     1784
Leu Glu Leu Ser Phe Thr Met Pro Gln Ile Gln Asp Gln Thr Pro Ser
485                 490                 495                 500
cct tcc gat gga agc act aga caa agt tca cct gag cct aat agt ccc     1832
Pro Ser Asp Gly Ser Thr Arg Gln Ser Ser Pro Glu Pro Asn Ser Pro
                505                 510                 515
agt gaa tat tgt ttt tat gtg gat agt gat atg gtc aat gaa ttc aag     1880
Ser Glu Tyr Cys Phe Tyr Val Asp Ser Asp Met Val Asn Glu Phe Lys
             520                 525                 530
ttg gaa ttg gta gaa aaa ctt ttt gct gaa gac aca gaa gca aag aac     1928
Leu Glu Leu Val Glu Lys Leu Phe Ala Glu Asp Thr Glu Ala Lys Asn
        535                 540                 545
cca ttt tct act cag gac aca gat tta gac ttg gag atg tta gct ccc     1976
Pro Phe Ser Thr Gln Asp Thr Asp Leu Asp Leu Glu Met Leu Ala Pro
    550                 555                 560
tat atc cca atg gat gat gac ttc cag tta cgt tcc ttc gat cag ttg     2024
Tyr Ile Pro Met Asp Asp Asp Phe Gln Leu Arg Ser Phe Asp Gln Leu
565                 570                 575                 580
tca cca tta gaa agc agt tcc gca agc cct gaa agc gca agt cct caa     2072
Ser Pro Leu Glu Ser Ser Ser Ala Ser Pro Glu Ser Ala Ser Pro Gln
                585                 590                 595
agc aca gtt aca gta ttc cag cag act caa ata caa gaa cct act gct     2120
Ser Thr Val Thr Val Phe Gln Gln Thr Gln Ile Gln Glu Pro Thr Ala
            600                 605                 610
aat gcc acc act acc act gcc acc act gat gaa tta aaa aca gtg aca     2168
Asn Ala Thr Thr Thr Thr Ala Thr Thr Asp Glu Leu Lys Thr Val Thr
        615                 620                 625
aaa gac cgt atg gaa gac att aaa ata ttg att gca tct cca tct cct     2216
Lys Asp Arg Met Glu Asp Ile Lys Ile Leu Ile Ala Ser Pro Ser Pro
    630                 635                 640
acc cac ata cat aaa gaa act act agt gcc aca tca tca cca tat aga     2264
Thr His Ile His Lys Glu Thr Thr Ser Ala Thr Ser Ser Pro Tyr Arg
645                 650                 655                 660
gat act caa agt cgg aca gcc tca cca aac aga gca gga aaa gga gtc     2312
Asp Thr Gln Ser Arg Thr Ala Ser Pro Asn Arg Ala Gly Lys Gly Val
                665                 670                 675
ata gaa cag aca gaa aaa tct cat cca aga agc cct aac gtg tta tct     2360
Ile Glu Gln Thr Glu Lys Ser His Pro Arg Ser Pro Asn Val Leu Ser
            680                 685                 690
gtc gct ttg agt caa aga act aca gtt cct gag gaa gaa cta aat cca     2408
Val Ala Leu Ser Gln Arg Thr Thr Val Pro Glu Glu Glu Leu Asn Pro
        695                 700                 705
aag ata cta gct ttg cag aat gct cag aga aag cga aaa atg gaa cat     2456
Lys Ile Leu Ala Leu Gln Asn Ala Gln Arg Lys Arg Lys Met Glu His
    710                 715                 720
gat ggt tca ctt ttt caa gca gta gga att gga aca tta tta cag cag     2504
Asp Gly Ser Leu Phe Gln Ala ValGly Ile Gly Thr Leu Leu Gln Gln
725                 730                 735                 740
cca gac gat cat gca gct act aca tca ctt tct tgg aaa cgt gta aaa     2552
Pro Asp Asp His Ala Ala Thr Thr Ser Leu Ser Trp Lys Arg Val Lys
                745                 750                 755
gga tgc aaa tct agt gaa cag aat gga atg gag caa aag aca att att     2600
Gly Cys Lys Ser Ser Glu Gln Asn Gly Met Glu Gln Lys Thr Ile Ile
            760                 765                 770
tta ata ccc tct gat tta gca tgt aga ctg ctg ggg caa tca atg gat     2648
Leu Ile Pro Ser Asp Leu Ala Cys Arg Leu Leu Gly Gln Ser Met Asp
        775                 780                 785
gaa agt gga tta cca cag ctg acc agt tat gat tgt gaa gtt aat gct     2696
Glu Ser Gly Leu Pro Gln Leu Thr Ser Tyr Asp Cys Glu Val Asn Ala
    790                 795                 800
cct ata caa ggc agc aga aac cta ctg cag ggt gaa gaa tta ctc aga     2744
Pro Ile Gln Gly Ser Arg Asn Leu Leu Gln Gly Glu Glu Leu Leu Arg
805                 810                 815                 820
gct ttg gat caa gtt aac tga gctttttctt aatttcattc ctttttttgg        2795
Ala Leu Asp Gln Val Asn
                825
acactggtgg ctcactacct aaagcagtct atttatattt tctacatcta attttagaag   2855
cctggctaca atactgcaca aacttggtta gttcaatttt tgatcccctt tctacttaat   2915
ttacattaat gctctttttt agtatgttct ttaatgctgg atcacagaca gctcattttc   2975
tcagtttttt ggtatttaaa ccattgcatt gcagtagcat cattttaaaa aatgcacctt   3035
tttatttatt tatttttggc tagggagttt atcccttttt cgaattattt ttaagaagat   3095
gccaatataa tttttgtaag aaggcagtaa cctttcatca tgatcatagg cagttgaaaa   3155
atttttacac cttttttttc acattttaca taaataataa tgctttgcca gcagtacgtg   3215
gtagccacaa ttgcacaata tattttctta aaaaatacca gcagttactc atggaatata   3275
ttctgcgttt ataaaactag tttttaagaa gaaatttttt ttggcctatg aaattgttaa   3335
acctggaaca tgacattgtt aatcatataa taatgattct taaatgctgt atggtttatt   3395
atttaaatgg gtaaagccat ttacataata tagaaagata tgcatatatc tagaaggtat   3455
gtggcattta tttggataaa attctcaatt cagagaaatc atctgatgtt tctatagtca   3515
ctttgccagc tcaaaagaaa acaataccct atgtagttgt ggaagtttat gctaatattg   3575
tgtaactgat attaaaccta aatgttctgc ctaccctgtt ggtataaaga tattttgagc   3635
agactgtaaa caagaaaaaa aaaatcatgc attcttagca aaattgccta gtatgttaat   3695
ttgctcaaaa tacaatgttt gattttatgc actttgtcgc tattaacatc ctttttttca   3755
tgtagatttc aataattgag taattttaga agcattattt taggaatata tagttgtcac   3815
agtaaatatc ttgttttttc tatgtacatt gtacaaattt ttcattcctt ttgctctttg   3875
tggttggatc taacactaac tgtattgttt tgttacatca aataaacatc ttctgtggac   3935
caggaaaaaa aaaaaaaaaa aaa                                           3958
<210>2
<211>826
<212>PRT
<213>人类
<400>2
Met Glu Gly Ala Gly Gly Ala Asn Asp Lys Lys Lys Ile Ser Ser Glu
1               5                   10                  15
Arg Arg Lys Glu Lys Ser Arg Asp Ala Ala Arg Ser Arg Arg Ser Lys
            20                  25                  30
Glu Ser Glu Val Phe Tyr Glu Leu Ala His Gln Leu Pro Leu Pro His
        35                  40                  45
Asn Val Ser Ser His Leu Asp Lys Ala Ser Val Met Arg Leu Thr Ile
    50                  55                  60
Ser Tyr Leu Arg Val Arg Lys Leu Leu Asp Ala Gly Asp Leu Asp Ile
65                  70                  75                  80
Glu Asp Asp Met Lys Ala Gln Met Asn Cys Phe Tyr Leu Lys Ala Leu
                85                  90                  95
Asp Gly Phe Val Met Val Leu Thr Asp Asp Gly Asp Met Ile Tyr Ile
            100                 105                 110
Ser Asp Asn Val Asn Lys Tyr Met Gly Leu Thr Gln Phe Glu Leu Thr
        115                 120                 125
Gly His Ser Val Phe Asp Phe Thr His Pro Cys Asp His Glu Glu Met
    130                 135                 140
Arg Glu Met Leu Thr His Arg Asn Gly Leu Val Lys Lys Gly Lys Glu
145                 150                 155                 160
Gln Asn Thr Gln Arg Ser Phe Phe Leu Arg Met Lys Cys Thr Leu Thr
                165                 170                 175
Ser Arg Gly Arg Thr Met Asn Ile Lys Ser Ala Thr Trp Lys Val Leu
            180                 185                 190
His Cys Thr Gly His Ile His Val Tyr Asp Thr Asn Ser Asn Gln Pro
        195                 200                 205
Gln Cys Gly Tyr Lys Lys Pro Pro Met Thr Cys Leu Val Leu Ile Cys
    210                 215                 220
Glu Pro Ile Pro His Pro Ser Asn Ile Glu Ile Pro Leu Asp Ser Lys
225                 230                 235                 240
Thr Phe Leu Ser Arg His Ser Leu Asp Met Lys Phe Ser Tyr Cys Asp
                245                 250                 255
Glu Arg Ile Thr Glu Leu Met Gly Tyr Glu Pro Glu Glu Leu Leu Gly
            260                 265                 270
Arg Ser Ile Tyr Glu Tyr Tyr His Ala Leu Asp Ser Asp His Leu Thr
        275                 280                 285
Lys Thr His His Asp Met Phe Thr Lys Gly Gln ValThr Thr Gly Gln
    290                 295                 300
Tyr Arg Met Leu Ala Lys Arg Gly Gly Tyr ValTrp Val Glu Thr Gln
305                 310                 315                 320
Ala Thr ValIle Tyr Asn Thr Lys Asn Ser Gln Pro Gln Cys Ile Val
               325                 330                 335
Cys ValAsn Tyr Val Val Ser Gly Ile Ile Gln His Asp Leu Ile Phe
           340                 345                 350
Ser Leu Gln Gln Thr Glu Cys Val Leu Lys Pro ValGlu Ser Ser Asp
        355                 360                 365
Met Lys Met Thr Gln Leu Phe Thr Lys Val Glu Ser Glu Asp Thr Ser
    370                 375                 380
Ser Leu Phe Asp Lys Leu Lys Lys Glu Pro Asp Ala Leu Thr Leu Leu
385                 390                 395                 400
Ala Pro Ala Ala Gly Asp Thr Ile Ile Ser Leu Asp Phe Gly Ser Asn
                405                 410                 415
Asp Thr Glu Thr Asp Asp Gln Gln Leu Glu Glu Val Pro Leu Tyr Asn
            420                 425                 430
Asp Val Met Leu Pro Ser Pro Asn Glu Lys Leu Gln Asn Ile Asn Leu
        435                 440                 445
Ala Met Ser Pro Leu Pro Thr Ala Glu Thr Pro Lys Pro Leu Arg Ser
    450                 455                 460
Ser Ala Asp Pro Ala Leu Asn Gln Glu Val Ala Leu Lys Leu Glu Pro
465                 470                 475                 480
Asn Pro Glu Ser Leu Glu Leu Ser Phe Thr Met Pro Gln Ile Gln Asp
                485                 490                 495
Gln Thr Pro Ser Pro Ser Asp Gly Ser Thr Arg Gln Ser Ser Pro Glu
            500                 505                 510
Pro Asn Ser Pro Ser Glu Tyr Cys Phe Tyr Val Asp Ser Asp Met Val
        515                 520                 525
Asn Glu Phe Lys Leu Glu Leu Val Glu Lys Leu Phe Ala Glu Asp Thr
    530                 535                 540
Glu Ala Lys Asn Pro Phe Ser Thr Gln Asp Thr Asp Leu Asp Leu Glu
545                 550                 555                 560
Met Leu Ala Pro Tyr Ile Pro Met Asp Asp Asp Phe Gln Leu Arg Ser
                565                 570                 575
Phe Asp Gln Leu Ser Pro Leu Glu Ser Ser Ser Ala Ser Pro Glu Ser
            580                 585                 590
Ala Ser Pro Gln Ser Thr Val Thr Val Phe Gln Gln Thr Gln Ile Gln
        595                 600                 605
Glu Pro Thr Ala Asn Ala Thr Thr Thr Thr Ala Thr Thr Asp Glu Leu
    610                 615                 620
Lys Thr Val Thr Lys Asp Arg Met Glu Asp Ile Lys Ile Leu Ile Ala
625                 630                 635                 640
Ser Pro Ser Pro Thr His Ile His Lys Glu Thr Thr Ser Ala Thr Ser
                645                 650                 655
Ser Pro Tyr Arg Asp Thr Gln Ser Arg Thr Ala Ser Pro Asn Arg Ala
            660                 665                 670
Gly Lys Gly Val Ile Glu Gln Thr Glu Lys Ser His Pro Arg Ser Pro
        675                 680                 685
Asn Val Leu Ser Val Ala Leu Ser Gln Arg Thr Thr Val Pro Glu Glu
    690                 695                 700
Glu Leu Asn Pro Lys Ile Leu Ala Leu Gln Asn Ala Gln Arg Lys Arg
705                 710                 715                 720
Lys Met Glu His Asp Gly Ser Leu Phe Gln Ala Val Gly Ile Gly Thr
                725                 730                 735
Leu Leu Gln Gln Pro Asp Asp His Ala Ala Thr Thr Ser Leu Ser Trp
            740                 745                 750
Lys Arg Val Lys Gly Cys Lys Ser Ser Glu Gln Asn Gly Met Glu Gln
        755                 760                 765
Lys Thr Ile Ile Leu Ile Pro Ser Asp Leu Ala Cys Arg Leu Leu Gly
    770                 775                 780
Gln Ser Met Asp Glu Ser Gly Leu Pro Gln Leu Thr Ser Tyr Asp Cys
785                 790                 795                 800
Glu Val Asn Ala Pro Ile Gln Gly Ser Arg Asn Leu Leu Gln Gly Glu
                805                 810                 815
Glu Leu Leu Arg Ala Leu Asp Gln Val Asn
            820                 825
<210>3
<211>5186
<212>DNA
<213>人类
<220>
<221>CDS
<222>(489)..(3101)
<400>3
gccacacggg tccggtgccc gctgcgcttc cgccccagcg ctcctgaggc ggccgtacaa     60
tcctcggcag tgtcctgaga ctgtatggtc agctcagccc ggcctccgac tccttccgac    120
tcccagcatt cgagccactt ttttttttct ttgaaaactc agaaaagtga ctccttttcc    180
agggaaaaag gaacttgggt tcccttctct ccgtcctctt ttcgggtctg acagcctcca    240
cccactcctt ccccggaccc cgcctccgcg cgcaggttcc tcccagtcac ctttctccac    300
ccccgccccc gcacctagcc cgccgcgcgc caccttccac ctgactgcgc ggggcgctcg    360
ggacctgcgc gcacctcgga ccttcaccac ccgcccgggc cgcggggagc ggacgagggc    420
cacagccccc cacccgccag ggagcccagg tgctcggcgt ctgaacgtct caaagggcca    480
cagcgaca atg aca gct gac aag gag aag aaa agg agt agc tcg gag agg     530
         Met Thr Ala Asp Lys Glu Lys Lys Arg Ser Ser Ser Glu Arg
         1               5                   10
agg aag gag aag tcc cgg gat gct gcg cgg tgc cgg cgg agc aag gag      578
Arg Lys Glu Lys Ser Arg Asp Ala Ala Arg Cys Arg Arg Ser Lys Glu
15                  20                  25                  30
acg gag gtg ttc tat gag ctg gcc cat gag ctg cct ctg ccc cac agt      626
Thr Glu Val Phe Tyr Glu Leu Ala His Glu Leu Pro Leu Pro His Ser
                35                  40                  45
gtg agc tcc cat ctg gac aag gcc tcc atc atg cga ctg gca atc agc      674
Val Ser Ser His Leu Asp Lys Ala Ser Ile Met Arg Leu Ala Ile Ser
            50                  55                  60
ttc ctg cga aca cac aag ctc ctc tcc tca gtt tgc tct gaa aac gag      722
Phe Leu Arg Thr His Lys Leu Leu Ser Ser Val Cys Ser Glu Asn Glu
        65                  70                  75
tcc gaa gcc gaa gct gac cag cag atg gac aac ttg tac ctg aaa gcc      770
Ser Glu Ala Glu Ala Asp Gln Gln Met Asp Asn Leu Tyr Leu Lys Ala
    80                  85                  90
ttg gag ggt ttc att gcc gtg gtg acc caa gat ggc gac atg atc ttt      818
Leu Glu Gly Phe Ile Ala Val Val Thr Gln Asp Gly Asp Met Ile Phe
95                  100                 105                 110
ctg tca gaa aac atc agc aag ttc atg gga ctt aca cag gtg gag cta      866
Leu Ser Glu Asn Ile Ser Lys Phe Met Gly Leu Thr Gln Val Glu Leu
                115                 120                 125
aca gga cat agt atc ttt gac ttc act cat ccc tgc gac cat gag gag      914
Thr Gly His Ser Ile Phe Asp Phe Thr His Pro Cys Asp His Glu Glu
            130                 135                 140
att cgt gag aac ctg agt ctc aaa aat ggc tct ggt ttt ggg aaa aaa      962
Ile Arg Glu Asn Leu Ser Leu Lys Asn Gly Ser Gly Phe Gly Lys Lys
        145                 150                 155
agc aaa gac atg tcc aca gag cgg gac ttc ttc atg agg atg aag tgc     1010
Ser Lys Asp Met Ser Thr Glu Arg Asp Phe Phe Met Arg Met Lys Cys
    160                 165                 170
acg gtc acc aac aga ggc cgt act gtc aac ctc aag tca gcc acc tgg     1058
Thr Val Thr Asn Arg Gly Arg Thr Val Asn Leu Lys Ser Ala Thr Trp
175                 180                 185                 190
aag gtc ttg cac tgc acg ggc cag gtg aaa gtc tac aac aac tgc cct     1106
Lys Val Leu His Cys Thr Gly Gln Val Lys ValTyr Asn Asn Cys Pro
                195                 200                 205
cct cac aat agt ctg tgt ggc tac aag gag ccc ctg ctg tcc tgc ctc     1154
Pro His Asn Ser Leu Cys Gly Tyr Lys Glu Pro Leu Leu Ser Cys Leu
            210                 215                 220
atc atc atg tgt gaa cca atc cag cac cca tcc cac atg gac atc ccc     1202
Ile Ile Met Cys Glu Pro Ile Gln His Pro Ser His Met Asp Ile Pro
        225                 230                 235
ctg gat agc aag acc ttc ctg agc cgc cac agc atg gac atg aag ttc     1250
Leu Asp Ser Lys Thr Phe Leu Ser Arg His Ser Met Asp Met Lys Phe
    240                 245                 250
acc tac tgt gat gac aga atc aca gaa ctg att ggt tac cac cct gag     1298
Thr Tyr Cys Asp Asp Arg Ile Thr Glu Leu Ile Gly Tyr His Pro Glu
255                 260                 265                 270
gag ctg ctt ggc cgc tca gcc tat gaa ttc tac cat gcg cta gac tcc     1346
Glu Leu Leu Gly Arg Ser Ala Tyr Glu Phe Tyr His Ala Leu Asp Ser
                275                 280                 285
gag aac atg acc aag agt cac cag aac ttg tgc acc aag ggt cag gta     1394
Glu Asn Met Thr Lys Ser His Gln Asn Leu Cys Thr Lys Gly Gln Val
            290                 295                 300
gta agt ggc cag tac cgg atg ctc gca aag cat ggg ggc tac gtg tgg     1442
Val Ser Gly Gln Tyr Arg Met Leu Ala Lys His Gly Gly Tyr Val Trp
        305                 310                 315
ctg gag acc cag ggg acg gtc atc tac aac cct cgc aac ctg cag ccc     1490
Leu Glu Thr Gln Gly Thr Val Ile Tyr Asn Pro Arg Asn Leu Gln Pro
    320                 325                 330
cag tgc atc atg tgt gtc aac tac gtc ctg agt gag att gag aag aat     1538
Gln Cys Ile Met Cys Val Asn Tyr Val Leu Ser Glu Ile Glu Lys Asn
335                 340                 345                 350
gac gtg gtg ttc tcc atg gac cag act gaa tcc ctg ttc aag ccc cac     1586
Asp Val Val Phe Ser Met Asp Gln Thr Glu Ser Leu Phe Lys Pro His
                355                 360                 365
ctg atg gcc atg aac agc atc ttt gat agc agt ggc aag ggg gct gtg     1634
Leu Met Ala Met Asn Ser Ile Phe Asp Ser Ser Gly Lys Gly Ala Val
            370                 375                 380
tct gag aag agt aac ttc cta ttc acc aag cta aag gag gag ccc gag     1682
Ser Glu Lys Ser Asn Phe Leu Phe Thr Lys Leu Lys Glu Glu Pro Glu
        385                 390                 395
gag ctg gcc cag ctg gct ccc acc cca gga gac gcc atc atc tct ctg     1730
Glu Leu Ala Gln Leu Ala Pro Thr Pro Gly Asp Ala Ile Ile Ser Leu
    400                 405                 410
gat ttc ggg aat cag aac ttc gag gag tcc tca gcc tat ggc aag gcc     1778
Asp Phe Gly Asn Gln Asn Phe Glu Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Lys Ala
415                 420                 425                 430
atc ctg ccc ccg agc cag cca tgg gcc acg gag ttg agg agc cac agc     1826
Ile Leu Pro Pro Ser Gln Pro Trp Ala Thr Glu Leu Arg Ser His Ser
                435                 440                 445
acc cag agc gag gct ggg agc ctg cct gcc ttc acc gtg ccc cag gca     1874
Thr Gln Ser Glu Ala Gly Ser Leu Pro Ala Phe Thr Val Pro Gln Ala
            450                 455                 460
gct gcc ccg ggc agc acc acc ccc agt gcc acc agc agc agc agc agc     1922
Ala Ala Pro Gly Ser Thr Thr Pro Ser Ala Thr Ser Ser Ser Ser Ser
        465                 470                 475
tgc tcc acg ccc aat agc cct gaa gac tat tac aca tct ttg gat aac     1970
Cys Ser Thr Pro Asn Ser Pro Glu Asp Tyr Tyr Thr Ser Leu Asp Asn
    480                 485                 490
gac ctg aag att gaa gtg att gag aag ctc ttc gcc atg gac aca gag     2018
Asp Leu Lys Ile Glu Val Ile Glu Lys Leu Phe Ala Met Asp Thr Glu
495                 500                 505                 510
gcc aag gac caa tgc agt acc cag acg gat ttc aat gag ctg gac ttg     2066
Ala Lys Asp Gln Cys Ser Thr Gln Thr Asp Phe Asn Glu Leu Asp Leu
                515                 520                 525
gag aca ctg gca ccc tat atc ccc atg gac ggg gaa gac ttc cag cta     2114
Glu Thr Leu Ala Pro Tyr Ile Pro Met Asp Gly Glu Asp Phe Gln Leu
            530                 535                 540
agc ccc atc tgc ccc gag gag cgg ctc ttg gcg gag aac cca cag tcc     2162
Ser Pro Ile Cys Pro Glu Glu Arg Leu Leu Ala Glu Asn Pro Gln Ser
        545                 550                 555
acc ccc cag cac tgc ttc agt gcc atg aca aac atcttc cag cca ctg     2210
Thr Pro Gln His Cys Phe Ser Ala Met Thr Asn Ile Phe Gln Pro Leu
    560                 565                 570
gcc cct gta gcc ccg cac agt ccc ttc ctc ctg gac aag ttt cag cag     2258
Ala Pro Val Ala Pro His Ser Pro Phe Leu Leu Asp Lys Phe Gln Gln
575                 580                 585                 590
cag ctg gag agc aag aag aca gag ccc gag cac cgg ccc atg tcc tcc     2306
Gln Leu Glu Ser Lys Lys Thr Glu Pro Glu His Arg Pro Met Ser Ser
                595                 600                 605
atc ttc ttt gat gcc gga agc aaa gca tcc ctg cca ccg tgc tgt ggc     2354
Ile Phe Phe Asp Ala Gly Ser Lys Ala Ser Leu Pro Pro Cys Cys Gly
            610                 615                 620
cag gcc agc acc cct ctc tct tcc atg ggg ggc aga tcc aat acc cag     2402
Gln Ala Ser Thr Pro Leu Ser Ser Met Gly Gly Arg Ser Asn Thr Gln
        625                 630                 635
tgg ccc cca gat cca cca tta cat ttt ggg ccc aca aag tgg gcc gtc     2450
Trp Pro Pro Asp Pro Pro Leu His Phe Gly Pro Thr Lys Trp Ala Val
    640                 645                 650
ggg gat cag cgc aca gag ttc ttg gga gca gcg ccg ttg ggg ccc cct     2498
Gly Asp Gln Arg Thr Glu Phe Leu Gly Ala Ala Pro Leu Gly Pro Pro
655                 660                 665                 670
gtc tct cca ccc cat gtc tcc acc ttc aag aca agg tct gca aag ggt     2546
Val Ser Pro Pro His Val Ser Thr Phe Lys Thr Arg Ser Ala Lys Gly
                675                 680                 685
ttt ggg gct cga ggc cca gac gtg ctg agt ccg gcc atg gta gcc ctc     2594
Phe Gly Ala Arg Gly Pro Asp Val Leu Ser Pro Ala Met Val Ala Leu
            690                 695                 700
tcc aac aag ctg aag ctg aag cga cag ctg gag tat gaa gag caa gcc     2642
Ser Asn Lys Leu Lys Leu Lys Arg Gln Leu Glu Tyr Glu Glu Gln Ala
        705                 710                 715
ttc cag gac ctg agc ggg ggg gac cca cct ggt ggc agc acc tca cat     2690
Phe Gln Asp Leu Ser Gly Gly Asp Pro Pro Gly Gly Ser Thr Ser His
    720                 725                 730
ttg atg tgg aaa cgg atg aag aac ctc agg ggt ggg agc tgc cct ttg     2738
Leu Met Trp Lys Arg Met Lys Asn Leu Arg Gly Gly Ser Cys Pro Leu
735                 740                 745                 750
atg ccg gac aag cca ctg agc gca aat gta ccc aat gat aag ttc acc     2786
Met Pro Asp Lys Pro Leu Ser Ala Asn Val Pro Asn Asp Lys Phe Thr
                755                 760                 765
caa aac ccc atg agg ggc ctg ggc cat ccc ctg aga cat ctg ccg ctg     2834
Gln Asn Pro Met Arg Gly Leu Gly His Pro Leu Arg His Leu Pro Leu
            770                 775                 780
cca cag cct cca tct gcc atc agt ccc ggg gag aac agc aag agc agg     2882
Pro Gln Pro Pro Ser Ala Ile Ser Pro Gly Glu Asn Ser Lys Ser Arg
        785                 790                 795
ttc ccc cca cag tgc tac gcc acc cag tac cag gac tac agc ctg tcg     2930
Phe Pro Pro Gln Cys Tyr Ala Thr Gln Tyr Gln Asp Tyr Ser Leu Ser
    800                 805                 810
tca gcc cac aag gtg tca ggc atg gca agc cgg ctg ctc ggg ccc tca     2978
Ser Ala His Lys Val Ser Gly Met Ala Ser Arg Leu Leu Gly Pro Ser
815                 820                 825                 830
ttt gag tcc tac ctg ctg ccc gaa ctg acc aga tat gac tgt gag gtg     3026
Phe Glu Ser Tyr Leu Leu Pro Glu Leu Thr Arg Tyr Asp Cys Glu Val
                835                 840                 845
aac gtg ccc gtg ctg gga agc tcc acg ctc ctg caa gga ggg gac ctc     3074
Asn Val Pro Val Leu Gly Ser Ser Thr Leu Leu Gln Gly Gly Asp Leu
            850                 855                 860
ctc aga gcc ctg gac cag gcc acc tga gccaggcctt ctacctgggc           3121
Leu Arg Ala Leu Asp Gln Ala Thr
        865                 870
agcacctctg ccgacgccgt cccaccagct tcactctctc cgtctgtttt tgcaactagg   3181
tatttctaac gccagcacac tatttacaag atggacttac ctggcagact tgcccaggtc   3241
accaagcagt ggcctttttc tgagatgctc actttattat ccctattttt aaagtacaca   3301
attgttttac ctgttctgaa atgttcttaa attttgtagg atttttttcc tccccacctt   3361
caatgacttc taatttatat tatccatagg tttctctccc tccttctcct tctcacacac   3421
aactgtccat actaacaagt ttggtgcatg tctgttcttc tgtagggaga agctttagct  3481
tcattttact aaaaagattc ctcgttattg ttgttgccaa agagaaacaa aaatgatttt  3541
gctttccaag cttggtttgt ggcgtctccc tcgcagagcc cttctcgttt cttttttaaa  3601
ctaatcacca tattgtaaat ttcagggttt tttttttttt gtttaagctg actctttgct  3661
ctaattttgg aaaaaaagaa atgtgaaggg tcaactccaa cgtatgtggt tatctgtgaa  3721
agttgcacag cgtggctttt cctaaactgg tgtttttccc ccgcatttgg tggatttttt  3781
attattattc aaaaacataa ctgagttttt taaaagagga gaaaatttat atctgggtta  3841
agtgtttatc atatatatgg gtactttgta atatctaaaa acttagaaac ggaaatggaa  3901
tcctgctcac aaaatcactt taagatcttt tcgaagctgt taatttttct tagtgttgtg  3961
gacactgcag acttgtccag tgctcccacg gcctgtacgg acactgtgga aggcctccct  4021
ctgtcggctt tttgccatct gtgatatgcc ataggtgtga caatccgagc agtggagtca  4081
ttcagcggga gcactgcgcg ctatcccctc acattctcta tgtactatgt atgtatgtat  4141
tattattatt gctgccaaga gggtctgatg gcacgttgtg gggtcggggg gtggggcggg  4201
gaagtgctct aacttttctt aaggttttgt tgctagccct tcaagtgcac tgagctatgt  4261
gactcggatg gtctttcaca cggcacattt ggacatttcc agaactacca tgagatggtt  4321
tagacgggaa ttcatgcaaa tgaggggtca aaaatggtat agtgaccccg tccacgtcct  4381
ccaagctcac gaccttggag ccccgtggag ctggactgag gaggaggctg cacagcggga  4441
gagcagctgg tccagaccag ccctgcagcc cccactcagc cggcagccag atggccccgc  4501
aaggcctcca gggatggccc ctagccacag gccctggctg aggtctctgg gtcggtcagt  4561
gacatgtagg taggaagcac tgaaaatagt gttcccagag cactttgcaa ctccctgggt  4621
aagagggacg acacctctgg tttttcaata ccaattacat ggaacttttc tgtaatgggt  4681
acaatgaaga agtttctaaa aacacacaca aagcacattg ggccaactat ttagtaagcc  4741
cggatagact tattgccaaa aacaaaaaat agctttcaaa agaaatttaa gttctatgag  4801
aaattcctta gtcatggtgt tgcgtaaatc atattttagc tgcacggcat taccccacac  4861
agggtggcag aacttgaagg gttactgacg tgtaaatgct ggtatttgat ttcctgtgtg  4921
tgttgccctg gcattaaggg cattttaccc ttgcagtttt actaaaacac tgaaaaatat  4981
tccaagcttc atattaaccc tacctgtcaa cgtaacgatt tcatgaacgt tattatattg  5041
tcgaattcct actgacaaca ttataactgt atgggagctt aactttataa ggaaatgtat  5101
tttgacactg gtatcttatt aaagtattct gatcctaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa  5161
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa                                        5186
<210>4
<211>870
<212>PRT
<213>人类
<400>4
Met Thr Ala Asp Lys Glu Lys Lys Arg Ser Ser Ser Glu Arg Arg Lys
1               5                   10                  15
Glu Lys Ser Arg Asp Ala Ala Arg Cys Arg Arg Ser Lys Glu Thr Glu
            20                  25                  30
Val Phe Tyr Glu Leu Ala His Glu Leu Pro Leu Pro His Ser Val Ser
        35                  40                  45
Ser His Leu Asp Lys Ala Ser Ile Met Arg Leu Ala Ile Ser Phe Leu
    50                  55                  60
Arg Thr His Lys Leu Leu Ser Ser Val Cys Ser Glu Asn Glu Ser Glu
65                  70                  75                  80
Ala Glu Ala Asp Gln Gln Met Asp Asn Leu Tyr Leu Lys Ala Leu Glu
                85                  90                  95
Gly Phe Ile Ala Val Val Thr Gln Asp Gly Asp Met Ile Phe Leu Ser
            100                 105                 110
Glu Asn Ile Ser Lys Phe Met Gly Leu Thr Gln Val Glu Leu Thr Gly
        115                 120                 125
His Ser Ile Phe Asp Phe Thr His Pro Cys Asp His Glu Glu Ile Arg
    130                 135                 140
Glu Asn Leu Ser Leu Lys Asn Gly Ser Gly Phe Gly Lys Lys Ser Lys
145                 150                 155                 160
Asp Met Ser Thr Glu Arg Asp Phe Phe Met Arg Met Lys Cys Thr Val
                165                 170                 175
Thr Asn Arg Gly Arg Thr Val Asn Leu Lys Ser Ala Thr Trp Lys Val
            180                 185                 190
Leu His Cys Thr Gly Gln Val Lys Val Tyr Asn Asn Cys Pro Pro His
        195                 200                 205
Asn Ser Leu Cys Gly Tyr Lys Glu Pro Leu Leu Ser Cys Leu Ile Ile
    210                 215                 220
Met Cys Glu Pro Ile Gln His Pro Ser His Met Asp Ile Pro Leu Asp
225                 230                 235                 240
Ser Lys Thr Phe Leu Ser Arg His Ser Met Asp Met Lys Phe Thr Tyr
                245                 250                 255
Cys Asp Asp Arg Ile Thr Glu Leu Ile Gly Tyr His Pro Glu Glu Leu
            260                 265                 270
Leu Gly Arg Ser Ala Tyr Glu Phe Tyr His Ala Leu Asp Ser Glu Asn
        275                 280                 285
Met Thr Lys Ser His Gln Asn Leu Cys Thr Lys Gly Gln Val Val Ser
    290                 295                 300
Gly Gln Tyr Arg Met Leu Ala Lys His Gly Gly Tyr Val Trp Leu Glu
305                 310                 315                 320
Thr Gln Gly Thr Val Ile Tyr Asn Pro Arg Asn Leu Gln Pro Gln Cys
                325                 330                 335
Ile Met Cys Val Asn Tyr Val Leu Ser Glu Ile Glu Lys Asn Asp Val
            340                 345                 350
Val Phe Ser Met Asp Gln Thr Glu Ser Leu Phe Lys Pro His Leu Met
        355                 360                 365
Ala Met Asn Ser Ile Phe Asp Ser Ser Gly Lys Gly Ala Val Ser Glu
    370                 375                 380
Lys Ser Asn Phe Leu Phe Thr Lys Leu Lys Glu Glu Pro Glu Glu Leu
385                 390                 395                 400
Ala Gln Leu Ala Pro Thr Pro Gly Asp Ala Ile Ile Ser Leu Asp Phe
                405                 410                 415
Gly Asn Gln Asn Phe Glu Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Lys Ala Ile Leu
            420                 425                 430
Pro Pro Ser Gln Pro Trp Ala Thr Glu Leu Arg Ser His Ser Thr Gln
        435                 440                 445
Ser Glu Ala Gly Ser Leu Pro Ala Phe Thr Val Pro Gln Ala Ala Ala
    450                 455                 460
Pro Gly Ser Thr Thr Pro Ser Ala Thr Ser Ser Ser Ser Ser Cys Ser
465                 470                 475                 480
Thr Pro Asn Ser Pro Glu Asp Tyr Tyr Thr Ser Leu Asp Asn Asp Leu
                485                 490                 495
Lys Ile Glu Val Ile Glu Lys Leu Phe Ala Met Asp Thr Glu Ala Lys
            500                 505                 510
Asp Gln Cys Ser Thr Gln Thr Asp Phe Asn Glu Leu Asp Leu Glu Thr
        515                 520                 525
Leu Ala Pro Tyr Ile Pro Met Asp Gly Glu Asp Phe Gln Leu Ser Pro
    530                 535                 540
Ile Cys Pro Glu Glu Arg Leu Leu Ala Glu Asn Pro Gln Ser Thr Pro
545                 550                 555                 560
Gln His Cys Phe Ser Ala Met Thr Asn Ile Phe Gln Pro Leu Ala Pro
                565                 570                 575
Val Ala Pro His Ser Pro Phe Leu Leu Asp Lys Phe Gln Gln Gln Leu
            580                 585                 590
Glu Ser Lys Lys Thr Glu Pro Glu His Arg Pro Met Ser Ser Ile Phe
        595                 600                 605
Phe Asp Ala Gly Ser Lys Ala Ser Leu Pro Pro Cys Cys Gly Gln Ala
    610                 615                 620
Ser Thr Pro Leu Ser Ser Met Gly Gly Arg Ser Asn Thr Gln Trp Pro
625                 630                 635                 640
Pro Asp Pro Pro Leu His Phe Gly Pro Thr Lys Trp Ala Val Gly Asp
                645                 650                 655
Gln Arg Thr Glu Phe Leu Gly Ala Ala Pro Leu Gly Pro Pro Val Ser
            660                 665                 670
Pro Pro His Val Ser Thr Phe Lys Thr Arg Ser Ala Lys Gly Phe Gly
        675                 680                 685
Ala Arg Gly Pro Asp Val Leu Ser Pro Ala Met Val Ala Leu Ser Asn
    690                 695                 700
Lys Leu Lys Leu Lys Arg Gln Leu Glu Tyr Glu Glu Gln Ala Phe Gln
705                 710                 715                 720
Asp Leu Ser Gly Gly Asp Pro Pro Gly Gly Ser Thr Ser His Leu Met
                725                 730                 735
Trp Lys Arg Met Lys Asn Leu Arg Gly Gly Ser Cys Pro Leu Met Pro
            740                 745                 750
Asp Lys Pro Leu Ser Ala Asn Val Pro Asn Asp Lys Phe Thr Gln Asn
        755                 760                 765
Pro Met Arg Gly Leu Gly His Pro Leu Arg His Leu Pro Leu Pro Gln
    770                 775                 780
Pro Pro Ser Ala Ile Ser Pro Gly Glu Asn Ser Lys Ser Arg Phe Pro
785                 790                 795                 800
Pro Gln Cys Tyr Ala Thr Gln Tyr Gln Asp Tyr Ser Leu Ser Ser Ala
                805                 810                 815
His Lys Val Ser Gly Met Ala Ser Arg Leu Leu Gly Pro Ser Phe Glu
            820                 825                 830
Ser Tyr Leu Leu Pro Glu Leu Thr Arg Tyr Asp Cys Glu Val Asn Val
        835                 840                 845
Pro Val Leu Gly Ser Ser Thr Leu Leu Gln Gly Gly Asp Leu Leu Arg
    850                 855                 860
Ala Leu Asp Gln Ala Thr
865                 870
<210>5
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的有义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(21)
<223>n＝脱氧胸苷
<400>5
ggaaccugau gcuuuaacun n                                   21
<210>6
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的有义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(21)
<223>n＝脱氧胸苷
<400>6
ggguaaagaa caaaacacan n                                   21
<210>7
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的有义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(21)
<223>n＝脱氧胸苷
<400>7
ggcagcagaa accuacugcn n                                   21
<210>8
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的有义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(21)
<223>n＝脱氧胸苷
<400>8
gcacgacuug auuuucuccn n                            21
<210>9
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-2α的siRNA的有义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(21)
<223>n＝脱氧胸苷
<400>9
cggagguguu cuaugagcun n                            21
<210>10
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-2α的siRNA的有义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(21)
<223>n＝脱氧胸苷
<400>10
gguuuuguug cuagcccuun n                            21
<210>11
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的反义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(21)
<223>n＝脱氧胸苷
<400>11
aguuaaagca ucagguuccn n                            21
<210>12
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的反义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(21)
<223>n＝脱氧胸苷
<400>12
uguguuuugu ucuuuacccn n                            21
<210>13
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的反义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(21)
<223>n＝脱氧胸苷
<400>13
gcaguagguu ucugcugccn n                            21
<210>14
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的反义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(20)
<223>n＝脱氧胸苷
<220>
<221>misc_feature
<222>(21)..(21)
<223>n＝脱氧鸟苷
<400>14
ggagaaaauc aagucgugcn n                            21
<210>15
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-2α的siRNA的反义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(20)
<223>n＝脱氧胸苷
<220>
<221>misc_feature
<222>(21)..(21)
<223>n＝脱氧胞苷
<400>15
agcucauaga acaccuccgn n                            21
<210>16
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-2α的siRNA的反义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(21)
<223>n＝脱氧胸苷
<400>16
aagggcuagc aacaaaaccn n                            21
<210>17
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的有义链
<400>17
ggaaccugau gcuuuaacu                               19
<210>18
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的有义链
<400>18
ggguaaagaa caaaacaca                               19
<210>19
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的有义链
<400>19
ggcagcagaa accuacugc                               19
<210>20
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的有义链
<400>20
gcacgacuug auuuucucc                            19
<210>21
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-2α的siRNA的有义链
<400>21
cggagguguu cuaugagcu                            19
<210>22
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-2α的siRNA的有义链
<400>22
gguuuuguug cuagcccuu                            19
<210>23
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的反义链
<400>23
aguuaaagca ucagguucc                            19
<210>24
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的反义链
<400>24
uguguuuugu ucuuuaccc                            19
<210>25
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的反义链
<400>25
gcaguagguu ucugcugcc                            19
<210>26
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的反义链
<400>26
ggagaaaauc aagucgugc                            19
<210>27
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-2α的siRNA的反义链
<400>27
agcucauaga acaccuccg                            19
<210>28
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-2α的siRNA的反义链
<400>28
aagggcuagc aacaaaacc                            19
<210>29
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的有义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(21)
<223>n＝脱氧胸苷
<400>29
ccucagugug gguauaagan n                          21
<210>30
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的反义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(21)
<223>n＝脱氧胸苷
<400>30
ucuuauaccc acacugaggn n                            21
<210>31
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的有义链
<400>31
ccucagugug gguauaaga                               19
<210>32
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-1α的siRNA的反义链
<400>32
ucuuauaccc acacugagg                               19
<210>33
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-2α的siRNA的有义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(21)
<223>n＝脱氧胸苷
<400>33
ggacauagua ucuuugacun n                            21
<210>34
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-2α的siRNA的反义链
<220>
<221>misc_feature
<222>(20)..(20)
<223>n＝脱氧胸苷
<220>
<221>misc_feature
<222>(21)..(21)
<223>n＝脱氧鸟苷
<400>34
agucaaagau acuauguccn n                            21
<210>35
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-2α的siRNA的有义链
<400>35
ggacauagua ucuuugacu                                        19
<210>36
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<223>人HIF-2α的siRNA的反义链
<400>36
agucaaagau acuaugucc                                        19

Claims (6)

1.视网膜疾病的治疗药，该治疗药含有特异性抑制HIF-1α表达的、HIF-1α的siRNA以及特异性抑制HIF-2α表达的、HIF-2α的siRNA，其中，上述HIF-1α的siRNA为下述(1-1)-(1-5)的任意一种，上述HIF-2α的siRNA为下述(2-1)-(2-3)的任意一种：
(1-1)由含有SEQ ID NO：5所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：11所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-2)由含有SEQ ID NO：6所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：12所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-3)由含有SEQ ID NO：7所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：13所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-4)由含有SEQ ID NO：8所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：14所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-5)由含有SEQ ID NO：29所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：30所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-1)由含有SEQ ID NO：9所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：15所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-2)由含有SEQ ID NO：10所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：16所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-3)由含有SEQ ID NO：33所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：34所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA。
2.权利要求1所述的视网膜疾病的治疗药，其中，上述视网膜疾病为老年性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜动脉阻塞、糖尿病黄斑水肿或青光眼。
3.权利要求2所述的视网膜疾病的治疗药，其中，上述视网膜疾病为老年性黄斑变性或糖尿病性视网膜病变。
4.特异性抑制HIF-1α表达的、HIF-1α的siRNA和特异性抑制HIF-2α表达的、HIF-2α的siRNA在制备视网膜疾病的治疗药中的应用，其中，上述HIF-1α的siRNA为下述(1-1)-(1-5)的任意一种，上述HIF-2α的siRNA为下述(2-1)-(2-3)的任意一种：
(1-1)由含有SEQ ID NO：5所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：11所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-2)由含有SEQ ID NO：6所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：12所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-3)由含有SEQ ID NO：7所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：13所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-4)由含有SEQ ID NO：8所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：14所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(1-5)由含有SEQ ID NO：29所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：30所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-1)由含有SEQ ID NO：9所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：15所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-2)由含有SEQ ID NO：10所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：16所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA；
(2-3)由含有SEQ ID NO：33所示的碱基序列的有义链、以及含有SEQ ID NO：34所示的碱基序列的反义链构成的双链RNA。
5.权利要求4所述的应用，其中，上述视网膜疾病为老年性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜静脉阻塞、视网膜动脉阻塞、糖尿病黄斑水肿或青光眼。
6.权利要求5所述的应用，其中，上述视网膜疾病为老年性黄斑变性或糖尿病性视网膜病变。
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