CN108721315B - 小分子核酸miR-21在治疗青光眼中的应用 - Google Patents

小分子核酸miR-21在治疗青光眼中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了小分子核酸miR‑21在治疗青光眼中的应用。具体地，本发明提供了一种活性成分的用途，所述的活性成分选自下组：(a)miRNA‑21家族的微小RNA；(b)前体miRNA；(c)多核苷酸；(d)表达载体；(e)(a)中所述的微小RNA的激动剂；其中，所述的活性成分用于制备一药物组合物，所述药物组合物用于预防和/或治疗青光眼和/或降低眼压。本发明的miR‑21小分子核酸降压幅度达20％左右，且降压作用维持48小时，比临床上大多数药物降压维持时间长。

Description

小分子核酸miR-21在治疗青光眼中的应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及小分子核酸miR-21在治疗青光眼中的应用。
背景技术
青光眼是全球第一位不可逆致盲性眼病。本病是一类具有特征性视神经损害和视野改变的不可逆致盲眼病，眼压升高是其发生和病情进展的主要危险因素。对于发病率最高的原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma,POAG)患者眼压升高的确切发病机制尚不清楚。此类患者房水流出通道结构正常，其发病机制可能是由于眼压(intraocular pressure,IOP)自我调节机制失灵而导致眼压升高最终损害视神经。降眼压治疗是唯一被证实有效的青光眼治疗方法，目前临床使用的降眼压手段有三种：药物、激光和手术。由于激光治疗的疗效和作用时间都欠理想；手术治疗是对机体原有生理结构的破坏，同时存在各种潜在术中、术后并发症。因此在POAG治疗中，药物治疗仍是最为重要的治疗手段。
目前临床使用的抗青光眼药物都是通过单一靶点、单一途径来控制眼压，效果有限，往往需要联合多种药物、多次反复用药才能将患者眼压控制在目标眼压范围内。此外，虽然已经明确，小梁网流出通道房水流出阻力异常增加是POAG的最主要致病原因。但目前绝大部分青光眼药物都是围绕减少房水生成、增加葡萄膜巩膜流出这两个方向，并未直接针对病因治疗。
针对POAG小梁网房水流出通道的治疗药物目前仅有刚上市的细胞骨架Rho蛋白激酶抑制剂Ripasudil。但从初步临床应用效果来看，Ripasudi l降眼压效果仅有15.5％，同时患者眼部不良反应较为普遍。
因此，本领域迫切需要开发长效、多靶点、低副作用的新降眼压的方法。
发明内容
本发明的目的就是提供小分子核酸miR-21在治疗青光眼中的应用。
在本发明的第一方面，提供了一种活性成分的用途，所述的活性成分选自下组：
(a).miRNA-21家族的微小RNA，所述miRNA-21家族的微小RNA包括：miRNA-21或经修饰的miRNA-21衍生物；或核心序列为5'uagcuuaucagacugauguuga 3'、长度为22-30nt、功能与miRNA-21相同或基本相同的微小RNA或经修饰的miRNA衍生物；
(b).前体miRNA，所述的前体miRNA能在宿主内加工成(a)中所述的miRNA-21；
(c).多核苷酸，所述的多核苷酸能被宿主转录形成(b)中所述的前体miRNA，并加工形成(a)中所述的微小RNA；
(d).表达载体，所述表达载体含有(a)中所述的miRNA-21、或(b)中所述的前体miRNA、或(c)中所述的多核苷酸；
(e).(a)中所述的微小RNA的激动剂；
其中，所述的活性成分用于制备一药物组合物，所述药物组合物用于预防和/或治疗青光眼和/或降低眼压。
在另一优选例中，所述的药物组合物包括所述的活性成分和药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的miRNA-21的序列如SEQ ID NO.:1所示。
在另一优选例中，所述的miRNA-21来源于哺乳动物，优选地，来源于人、大鼠、或小鼠。
在另一优选例中，所述的miRNA-21是人工合成的。
在另一优选例中，所述的药物组合物还包括额外的用于治疗青光眼或降眼压的辅助活性成分。
在另一优选例中，所述的经修饰的miRNA衍生物，其修饰选自下组的一种或多种修饰形式：核苷酸的糖基修饰、核苷酸之间连接方式的修饰、胆固醇修饰、锁核苷酸修饰、肽段修饰、脂类修饰、卤素修饰、烃基修饰、和核酸修饰。
在另一优选例中，所述的核苷酸的糖基修饰包括2-O-甲基的糖基修饰、2-O-甲氧乙酯的糖基修饰、2-O-烷基的糖基修饰、2-氟代的糖基修饰、糖环修饰、锁核苷酸修饰；和/或
所述的核苷酸之间连接方式的修饰包括硫代磷酸修饰、磷酸烷基化修饰；和/或
所述的核酸修饰包括“TT”修饰。
在另一优选例中，(a)中所述经修饰的miRNA衍生物是具有式I所示结构的化合物单体或其多聚体：
(X)n-(Y)m (I)
式中，
各X为(a)中所述的微小RNA；
各Y独立地为促进微小RNA施药稳定性的修饰物；
Y连接于X的左侧、右侧或中间；
n为1-100的(较佳地1-20)正整数(较佳地n为1、2、3、4或5)；
m为1-1000的(较佳地1-200)正整数；
各“-”表示接头、化学键、或共价键。
在另一优选例中，所述的接头是长度为1-10个碱基的核酸序列。
在另一优选例中，所述的Y包括(但不限于)胆固醇、类固醇、甾醇、醇、有机酸、脂肪酸、酯、单糖、多糖、氨基酸、多肽、单核苷酸、多核苷酸。
在另一优选例中，(b)所述的前体miRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.:2所示(前体序列)：
5’-UGUACCACCUUGUCGGAUAGCUUAUCAGACUGAUGUUGACUGUUGAAUCUCAUGGCAACAGCAGUCGAUGGGCUGUCUGACAUUUUGGUAUC-3’。
在另一优选例中，(c)中所述的多核苷酸具有式II所示的结构：
Seq正向-X-Seq反向
式II，
式II中，
Seq正向为能在宿主中被加工成所述的微小RNA核苷酸序列；
Seq反向为与Seq正向基本上互补或完全互补的核苷酸序列；
X为位于Seq正向和Seq反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq正向和Seq反向不互补；
并且式II所示的结构在转入宿主细胞后，形成式III所示的二级结构：
Figure BDA0001653659530000031
式III，
式III中，Seq正向、Seq反向和X的定义如上述，
||表示在Seq正向和Seq反向之间形成的碱基互补配对关系。
在另一优选例中，(d)中所述的表达载体包括：病毒载体和非病毒载体。
在另一优选例中，(e)中所述miRNA-21的激动剂选自下组：促进miRNA-21表达的物质、提高miRNA-21活性的物质。
在另一优选例中，所述的药学上可接受的载体选自下组：水、盐水、脂质体、脂质、蛋白、蛋白-抗体缀合物、肽类物质、纤维素、纳米凝胶、或其组合。
在另一优选例中，所述的活性成分负载于纳米材料。
在另一优选例中，所述的活性成分为纳米药物颗粒形式。
在另一优选例中，所述的纳米药物颗粒包括位于外部的包裹层，以及被所述包裹层包裹的、位于内部的所述活性成分。
在另一优选例中，所述的包裹层连接有或吸附有靶向分子(如靶向眼部或眼部细胞)。
在另一优选例中，所述的纳米药物颗粒为靶向型纳米药物颗粒。
在另一优选例中，所述的纳米药物颗粒为特异性靶向于眼球前房的纳米药物颗粒。
在本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物含有活性成分，和药学上可接受的载体，其中，所述的活性成分选自：
(a).miRNA-21家族的微小RNA，所述miRNA-21家族的微小RNA包括：miRNA-21或经修饰的miRNA-21衍生物；或核心序列为5'uagcuuaucagacugauguuga 3'、长度为22-30nt、功能与miRNA-21相同或基本相同的微小RNA或经修饰的miRNA衍生物；
(b).前体miRNA，所述的前体miRNA能在宿主内加工成(a)中所述的miRNA-21；
(c).多核苷酸，所述的多核苷酸能被宿主转录形成(b)中所述的前体miRNA，并加工形成(a)中所述的微小RNA；
(d).表达载体，所述表达载体含有(a)中所述的miRNA-378、或(b)中所述的前体miRNA、或(c)中所述的多核苷酸。
(e)(a)中所述的微小RNA的激动剂；
(ii)任选的第二活性成分，所述第二活性成分为其他的降眼压的药物；和(iii)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的药物组合物包括：眼用制剂。
在另一优选例中，所述的眼用制剂包括：眼药水、眼药膏。
在另一优选例中，所述的药物组合物包括缓释剂型。
在本发明的第三方面，提供了一种筛选降眼压的候选化合物的方法，包括步骤：
(a)将加入测试化合物的培养体系作为实验组；将不加入测试化合物的培养体系作为空白对照组，其中，所述的培养体系中含有培养的眼部细胞；和
(b)测试实验组和空白对照组中所述眼部细胞中miR-21的表达量；
其中，当实验组中miR-21的表达量显著高于对照组时，则表明该测试化合物为降眼压的候选化合物。
在另一优选例中，所述“显著高于”指在实验组中miR-21的表达量E1与空白实验组中miR-21的表达量E0之比(E1/E0)≥1.5，较佳地≥2.0，更佳地≥3。
在另一优选例中，所述方法还包括：(c)将上一步骤确定的候选化合物施用动物模型，并观察眼压下降程度和/或房水流出率。
在另一优选例中，当施用所述候选化合物后，导致眼压下降程度和房水流出率，则进一步表明该候选化合物为具有降眼压功能(或预防和/或治疗青光眼)的活性成分。
在本发明的第四方面，提供了一种体外非治疗性的增加细胞的通透性的方法，包括步骤：
在miRNA-21簇的微小RNA存在下，培养Schlemm管细胞或其内皮细胞，从而增加所述细胞的通透性。
在另一优选例中，所述的内皮细胞包括Schlemm管内皮细胞。
在本发明的第五方面，提供了一种降低眼压或预防和/或治疗青光眼的方法，包括步骤：向需要的对象施用权利要求2所述的药物组合物，或施用一活性成分，所述活性成分选自下组：
(a).miRNA-21家族的微小RNA，所述miRNA-21家族的微小RNA包括：miRNA-21或经修饰的miRNA-21衍生物；或核心序列为5'uagcuuaucagacugauguuga 3'、长度为22-30nt、功能与miRNA-21相同或基本相同的微小RNA或经修饰的miRNA衍生物；
(b).前体miRNA，所述的前体miRNA能在宿主内加工成(a)中所述的miRNA-21；
(c).多核苷酸，所述的多核苷酸能被宿主转录形成(b)中所述的前体miRNA，并加工形成(a)中所述的微小RNA；
(d).表达载体，所述表达载体含有(a)中所述的miRNA-21、或(b)中所述的前体miRNA、或(c)中所述的多核苷酸；
(e).(a)中所述的微小RNA的激动剂。
在另一优选例中，所述对象为哺乳动物，较佳地，为人、小鼠、或大鼠。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了在显微镜下小鼠前房给药。
图2显示了灌注时的离体小鼠眼球。
图3显示了小鼠前房给药眼压下降的幅度。
图4显示了小鼠前房给药在24小时内的房水流出率。
图5显示了细胞转染病毒过表达miR-21mimics后Schlemm(巩膜静脉窦)管内皮细胞的通透性。
图6显示了miR-21mimics抑制/增加酶的表达。
图7显示了房水循环的过程。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，通过大量筛选，首次意外地发现，一类特定的小分子物质即miR-21及其类似物可有效地降低眼压。具体地，实验表明，本发明的miR-21小分子核酸降压幅度达20％左右，且降压作用维持48小时，比临床上大多数药物降压维持时间长。本发明的miR-21可以增加小梁网房水流出，并在较长时间内降压，可成为用于治疗青光眼的新型药物，在此基础上完成了本发明。
小RNA
小RNA(MicroRNA，miRNA)是一种小分子高度保守的核酸片段(19-23bp)，广泛存在于生物体中，在细胞增殖、分化、代谢、功能等方面发挥重要的调节作用。一种miRNA可与多种mRNA相互结合起作用，导致对应的mRNA降解或者沉默表达，进而引起内源性蛋白水平改变而调节生物学功能，实现多靶点调控不同通路的目的，同时减少外源性给药造成的副作用。目前，使用病毒或者纳米材料，均能使miRNA在一定时间内稳定上调或者下调，能够在较长时间内起到一定的生物学调节功能。因此，能够解决传统青光眼药物因有效时间较短而反复多次用药带来的副作用。
药物组合物及施用方法
如本文所用，术语“活性成分”指的是可用于本发明的miRNA-21、miRNA-21衍生物或其前体序列、或含有其的表达载体。优选地，所述的活性成分选自下组：
(a).miRNA-21家族的微小RNA，所述miRNA-21家族的微小RNA包括：miRNA-21或经修饰的miRNA-21衍生物；或核心序列为5'uagcuuaucagacugauguuga 3'、长度为18-26nt、功能与miRNA-21相同或基本相同的微小RNA或经修饰的miRNA衍生物；
(b).前体miRNA，所述的前体miRNA能在宿主内加工成(a)中所述的miRNA-21；
(c).多核苷酸，所述的多核苷酸能被宿主转录形成(b)中所述的前体miRNA，并加工形成(a)中所述的微小RNA；
(d).表达载体，所述表达载体含有(a)中所述的miRNA-21、或(b)中所述的前体miRNA、或(c)中所述的多核苷酸；
(e).(a)中所述的微小RNA的激动剂。
如本文所用，术语“有效量”或“有效剂量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。
如本文所用，术语“药学上可接受的”的成分是适用于人和/或哺乳动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即具有合理的效益/风险比的物质。术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。
本发明的药物组合物含有安全有效量的本发明的活性成分以及药学上可接受的载体。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。通常药物制剂应与给药方式相匹配，本发明的药物组合物的剂型为注射剂、口服制剂(片剂、胶囊、口服液)、透皮剂、缓释剂。例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。所述的药物组合物宜在无菌条件下制造。
本发明所述的活性成分的有效量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度等而变化。优选的有效量的选择可以由本领域普通技术人员根据各种因素来确定(例如通过临床试验)。所述的因素包括但不限于：所述的活性成分的药代动力学参数例如生物利用率、代谢、半衰期等；患者所要治疗的疾病的严重程度、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径等。通常，当本发明的活性成分每天以约0.00001mg-50mg/kg动物体重(较佳的0.0001mg-10mg/kg动物体重)的剂量给予，能得到令人满意的效果。例如，由治疗状况的迫切要求，可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。
本发明所述的药学上可接受的载体包括(但不限于)：水、盐水、脂质体、脂质、蛋白、蛋白-抗体缀合物、肽类物质、纤维素、纳米凝胶、或其组合。载体的选择应与给药方式相匹配，这些都是本领域的普通技术人员所熟知的。
眼用制剂
本发明提供了一种眼用制剂，通过选用合适的药物组合物，不仅成功满足了眼部用药的特殊要求(如渗透压)，还显著提高或增加了活性成分的浓度。
本发明的眼用制剂包括药学上可接受的载体和作为活性成分的有效量的miRNA-21，并且按制剂的总体积计，miRNA-21的浓度为0.1～1000ng/ml(实验中用的是58.33ng/ml，但是没有做过浓度梯度，因此不确定是否在多大的药物浓度范围内均可有作用)。
通常，本发明的眼用制剂包括水或水性溶剂以及溶解于所述溶剂中的活性成分。所述眼用制剂还可任选地添加药学上可接受的其他组分，上述其他药学上可接受的组分包括但不限于，渗透压调节剂、缓冲剂等。
本发明的主要优点包括：
1)本发明使用转染miRNA内源性调节蛋白表达水平，发挥网络化调控下游靶点行为，能够平稳降压，并且降压效果持续时间具有明显优势。
2)本发明对比于传统抗青光眼药物，降压维持时间长，可以减少用药次数、增加降压幅度、提高患者依从性。
3)本发明利用miRNA调控下游靶点的功能，可实现多靶点降眼压。
4)本发明的活性成分直接针对小梁网流出通路，因此起效快，副作用小。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
实施例1.
miR-21对眼压的影响
将miR-21mimics与体内转染试剂结合，经过前房注射的方法将药物注射到正常小鼠前房，对侧眼则给予阴性对照(Negative Control，NC)(阴性对照为验证无义的随机序列)。显微镜下小鼠前房给药如图1所示。
给药前、给药后使用眼压计测量眼压的变化。在确认眼压改变最明显时，完整取出老鼠眼球，使用小鼠离体眼球灌注模型测量房水流出率。具体操作方式如下：
使用33G针穿刺前房，并保持恒压(12mmHg)灌注30分钟，再测量不同压力状态下(8、12、16、20mmHg)，正常小鼠房水流出量与流出率的改变，每个压力测量两次。灌注时离体小鼠眼球如图2所示。
结果如图3A和3B所示：6-48小时小鼠眼压有显著下降，其中24-48小时p<0.01，眼压下降幅度约在20％左右。
如图4A和4B所示：在24小时的房水流出率(实验组0.0236，对照组0.0149，单位μl/(min·mmHg)，p<0.01)。
实施例2.
miR-21对细胞通透性的影响
使用猪房角静脉丛(angular aqueous plexus，AAP)细胞模拟人小梁网通路中Schlemm管细胞，使用病毒转染上调细胞内miR-21量，测量细胞的跨膜电阻(transendothelial electric resistence，TEER)，根据跨膜电阻反比于细胞通透性，反应房水流出通路中的阻力大小。
结果如图5所示：细胞转染病毒过表达miR-21mimics后，通透性增加。5A、5B通过病毒转染过表达miR-21mimics，转染效率为70％；5C相比于转染空病毒(Negative Control组)，miR-21mimics跨膜细胞电阻显著降低。即上调miR-21mimics可以增加猪Schlemm管内皮细胞的通透性(p<0.01)，减少房水流出通路的阻力。
实施例3.
miR-21针对小梁通路实现多靶点降压
取房角组织：将转染24h的小鼠颈椎脱臼处死，立即将眼球取出。用眼科显微剪刀沿眼球赤道部剪开，取出晶体，用显微镊轻轻拉出虹膜，虹膜根部尽量取出，沿角膜缘仔细剪除角膜，角膜缘后约0.5mm剪除后部结构，取角膜缘与后部之间的结构，即为房角组织。组织学上包含小梁网、Schlemm管，以及极少部分角膜、虹膜根部、外部巩膜。
蛋白通路验证：取转染miR-21mimics与NC转染过眼球的新鲜房角组织，使用RIPA裂解液冰上裂解1小时，超声震碎。经过BCA法测定蛋白浓度之后，将相同数量的蛋白裂解液加入上样缓冲液变性后，加入配好的SDS-PAGE中进行电泳，再经过转膜封闭之后，一抗4°孵育过夜，清洗三次，二抗常温孵育1小时，清洗三次，加入显影液，暗房中曝光显影，保存照片，并使用ImageJ对结果灰度值进行计算。
结果如图6所示：图6(A)中已知Rho激酶抑制剂是一种新型的抗青光眼降眼压的药物，miR-21能够显著抑制Rho B的表达。图6(B)中组织基质金属蛋白抑制剂(TIMP)是一种基质金属蛋白酶(MMP)的抑制剂，已知MMP能够减少基质堆积，增加房水流出，降低眼压，也是目前抗青光眼的新型药物。miR-21mimics能够减少TIMP，内源性增加MMP。图6(C)(D)(E)中PTEN/Akt/eNOS通路是miR-21mimics发挥作用较为经典的通路。同时内皮型一氧化氮合酶(eNOS)是内源性释放NO舒张血管降低防水流出阻力的重要因子。目前已有NO外源性给药制剂新上市。miR-21mimics能够增加的eNOS表达，进而发挥降眼压作用。
实施例4.
眼压制剂
配制眼用凝胶：
卡波姆 0.2％
西曲溴铵 0.01％
miR-21转染液体 0.06％(按miR-21的质量计算)
无菌无酶PBS溶液定容至10mL
给药方式：眼部直接滴加，保证药物完全滴入眼内。
讨论
综上所述，目前唯一经证明有效的治疗青光眼的方式就是降眼压，目前的药物降眼压策略主要包括减少房水生成与增加房水流出两个方面。
房水(aqueous humor)循环如图7所示(箭头)，由睫状体产生，经过后房、瞳孔到达前房，经过与Schlemm管邻接的小梁网流出。90％左右的房水经过这个通路流出，75％的流出阻力位于小梁网与Schlemm管壁。
经猪等位于人Schlemm管细胞的AAP细胞验证，本发明的miR-21能够增加该细胞的通透性，也就是房水流出阻力减少。而在动物功能上验证表明，miR-21确实能在较长时间内维持较大幅度的降眼压。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院
<120> 小分子核酸miR-21在治疗青光眼中的应用
<130> P2018-0596
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
uagcuuauca gacugauguu ga 22
<210> 2
<211> 92
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
uguaccaccu ugucggauag cuuaucagac ugauguugac uguugaaucu cauggcaaca 60
gcagucgaug ggcugucuga cauuuuggua uc 92

Claims (10)

1.一种活性成分在制备用于预防和/或治疗青光眼和/或降低眼压的药物组合物中的用途，其中，所述的活性成分选自下组：
(a).miRNA-21家族的微小RNA，所述miRNA-21家族的微小RNA包括：miRNA-21；
(b).前体miRNA，所述的前体miRNA能在宿主内加工成(a)中所述的miRNA-21；
(c).多核苷酸，所述的多核苷酸能被宿主转录形成(b)中所述的前体miRNA，并加工形成(a)中所述的微小RNA；
(d).表达载体，所述表达载体含有(a)中所述的miRNA-21、或(b)中所述的前体miRNA、或(c)中所述的多核苷酸；
其中，所述的活性成分用于制备一药物组合物，所述药物组合物用于预防和/或治疗青光眼和/或降低眼压。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的miRNA-21的序列如SEQ ID NO.:1所示。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物还包括额外的用于治疗青光眼或降眼压的辅助活性成分。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，(c)中所述的多核苷酸具有式II所示的结构：
Seq正向-X-Seq反向
式II，
式II中，
Seq正向为能在宿主中被加工成所述的微小RNA核苷酸序列；
Seq反向为与Seq正向基本上互补或完全互补的核苷酸序列；
X为位于Seq正向和Seq反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq正向和Seq反向不互补；
并且式II所示的结构在转入宿主细胞后，形成式III所示的二级结构：
Figure FDA0003357913180000011
式III中，Seq正向、Seq反向和X的定义如上述，
||表示在Seq正向和Seq反向之间形成的碱基互补配对关系。
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的活性成分负载于纳米材料。
6.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物含有活性成分，和药学上可接受的载体，其中，所述的活性成分选自：
(a).miRNA-21家族的微小RNA，所述miRNA-21家族的微小RNA包括：miRNA-21；
(b).前体miRNA，所述的前体miRNA能在宿主内加工成(a)中所述的miRNA-21；
(c).多核苷酸，所述的多核苷酸能被宿主转录形成(b)中所述的前体miRNA，并加工形成(a)中所述的微小RNA；
(d).表达载体，所述表达载体含有(a)中所述的miRNA-21、或(b)中所述的前体miRNA、或(c)中所述的多核苷酸；和
(ii)药学上可接受的载体。
7.一种筛选降眼压的候选化合物的方法，其特征在于，包括步骤：
(a)将加入测试化合物的培养体系作为实验组；将不加入测试化合物的培养体系作为空白对照组，其中，所述的培养体系中含有培养的眼部细胞；和
(b)测试实验组和空白对照组中所述眼部细胞中miR-21的表达量；
其中，当实验组中miR-21的表达量显著高于对照组时，则表明该测试化合物为降眼压的候选化合物；所述“显著高于”指在实验组中miR-21的表达量E1与空白实验组中miR-21的表达量E0之比(E1/E0)≥1.5。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述“显著高于”指在实验组中miR-21的表达量E1与空白实验组中miR-21的表达量E0之比(E1/E0)≥2.0。
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述“显著高于”指在实验组中miR-21的表达量E1与空白实验组中miR-21的表达量E0之比(E1/E0)≥3。
10.一种体外非治疗性的增加细胞的通透性的方法，其特征在于，包括步骤：
在miRNA-21的微小RNA存在下，培养Schlemm管细胞或其内皮细胞，从而增加所述细胞的通透性。
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