TWI584805B

TWI584805B - Prevention and treatment of influenza virus infectious diseases

Info

Publication number: TWI584805B
Application number: TW102121622A
Authority: TW
Inventors: Tohru Tanaka; Motowo Nakajima; Kiwamu Takahashi; Takuya Ishii; Hiroshi Kido; Junji Chida; Kazuhiko Yamane
Original assignee: Sbi Pharmaceuticals Co Ltd; The Univ Of Tokushima
Priority date: 2012-07-19
Filing date: 2013-06-18
Publication date: 2017-06-01
Also published as: US9351949B2; CA2877232C; JP5920901B2; WO2014013664A1; HK1206986A1; CN104487067A; CN104487067B; US20150164838A1; EP2875813A4; EP2875813B1; CA2877232A1; AU2013291455B2; EP2875813A1; HK1205688A1; TW201412306A; JPWO2014013664A1; AU2013291455A1

Description

流感病毒傳染病之預防治療劑

本發明係關於流感病毒傳染病之預防及/或治療劑，進一步而言係關於一種流感病毒傳染病之預防及/或治療劑，其含有5-胺乙醯丙酸(aminolevulinic acid；5-ALA)或者其衍生物或該等鹽，與鐵化合物。

每年造成世界規模的流行之流感病毒傳染病，引起伴隨死亡例的重大感染(mass infection)。在病毒感染初期，雖顯示投與抗流感病毒藥劑所致有效性，但是若誤判投與時期，則效果減半。目前，以臨床上使用於流感治療的流感病毒傳染病之治療藥而言，可例示阻礙存在於流感病毒表面之酵素神經氨酸酶(neuraminidase)之功能的奧司他韋(oseltamivir)或然那麥韋(zanamivir)；阻礙流感病毒之M2蛋白質之金剛烷胺(amantadine)；屬核甘酸(nucleotide)藥的利巴韋林(ribavirin)，除此之外，周知有利用免疫之流感疫苗。對流感病毒傳染病為有效，且安全性高的藥劑少，而且針對該等之抗藥性病毒(resistant virus)之出現等開始被視為問題，吾人期待更新穎的流感病毒傳染病之預防治療藥之開發。

一方面，5-ALA周知為廣泛存在於動物、植物或菌類的四吡咯生物合成途徑之中間體，通常藉由5-胺乙醯丙酸合成酵素，而自琥珀醯基CoA與甘胺酸被生物合成。使用了5-ALA的光線力學(photodynamics)的療法或光動力學(photokinetics)的治療(以下亦稱為「ALA-PDT」)亦被開發，作為侵入性 (invasiveness)低，保持QOL的治療法受到矚目，且使用了ALA等的腫瘤診斷治療劑等之報告被發表。又，周知5-ALA作為成人病、癌症、男性不孕之預防改善劑或治療劑為有用(參照例如專利文獻1至3)。

[先行技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]國際公開第2010/050179號小冊

[專利文獻2]天本特開2011-16753號公報

[專利文獻3]國際公開第2009/139156號小冊

先前流感病毒傳染病治療藥之奏效時機，若為感染早期(48小時以內)則有限定，流感病毒傳染病治療藥之作用點，係阻礙病毒之增殖(multiplication)，對於酮病等成為重病化之起因的感染中後期之血管內皮細胞(vascular endothelial cell)能量代謝不全(insufficiency)並無效果。在香港有在對致病性(virulent)H5N1感染例使用抗流感病毒藥時，即使是4天以內之早期投與例，也有50%之致命率(fatality rate)的報告被發表。本發明之課題，係提供一種對人類之安全性高的流感病毒傳染病之預防治療劑，不僅在流感病毒感染前、感染早期，而且在感染中後期也可奏效。

目前所進行之針對流感病毒傳染病之治療法，主要是投與阻礙在體內之病毒增殖(multiplication)的抗流感病毒藥，但是除非進行感染後48小時以內之早期投與，否則不會奏效。尤其是在嬰幼兒或老人流感發病的情形，除了流感腦病變(influenza encephalopathy)之外，有因多重器官功能異常症候群(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)而發作嚴重的酮病等重病化之例之報告被發表。藉由最近之研究，可列舉作為該重病化要因之血管內皮細胞之能量代謝不全，伴隨此事，吾人已經明膫自末梢性循環衰竭(peripheral circulatory failure)進行至多重器官功能異常症候群。但是，如前述，目前有效的治療法，僅係投與感染早期之抗流感病毒藥，而不存在能阻止感染中後期之能量代謝不全的安全的治療藥。本發明人等，構思藉由投與5-ALA與鐵化合物是否能夠阻止起因於體內能量代謝之受損(rupture)的流感重病化，而實際上使用於流感重病化模型小鼠，可以防止起因於流感病毒感染之攝食量、攝水量、體重、體溫之降低，可迴避流感重病化，結果發現，改善血中酮體量之增加、改善血中ATP量之降低、提高成活率、改善體表面溫度之異常，終而完成本發明。

亦即本發明係關於： [1]一種流感病毒傳染病之預防及/或治療劑，包含：下述式(I)所示之化合物或其鹽

(式中，R¹表示氫原子或醯基，R²表示氫原子、直鏈或者分支狀烷基、環烷基、芳基或芳烷基)，或[2]上述[1]記載之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑，其中R¹及R²為氫原子，或[3]上述[1]或[2]記載之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑，更包含鐵化合物，或[4]上述[3]記載之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑，其中鐵化合物係選自氯化鐵(III)(ferric chloride)、三氧化二鐵(iron sesquioxide)、硫酸鐵、焦磷酸亞鐵(ferrous pyrophosphate)、檸檬酸亞鐵(ferrous citrate)、檸檬酸鐵鈉、檸檬酸亞鐵鈉、檸檬酸鐵銨、焦磷酸鐵(ferric pyrophosphate)、乳酸鐵、葡萄糖酸亞鐵(ferrous gluconate)、二伸乙三胺五乙酸鐵鈉、二伸乙三胺五乙酸鐵銨、乙二胺四乙酸鐵鈉、乙二胺四乙酸鐵銨、二羧甲基麩胺酸鐵鈉、二羧甲基麩胺酸鐵銨、反丁烯二酸亞鐵(ferrous fumarate)、乙酸鐵、草酸鐵、琥珀酸亞鐵、琥珀酸檸檬酸鐵鈉、血質鐵(heme iron)、葡萄聚糖(dextran)鐵、三伸乙四胺鐵、乳鐵蛋白(lactoferrin)鐵、運鐵蛋白(transferrin)鐵、葉綠酸鐵鈉(sodium iron-chlorophyllin)、鐵蛋白鐵(ferritin iron)、含糖氧化鐵、及硫化甘胺酸鐵之其中一種或二種以上之化合物，或[5]上述[3]記載之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑，其中鐵化合物為檸檬酸亞鐵鈉，或[6]上述[1]至[5]中任一項之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑，其係使用於改善攝食量、攝水量、及/或體重之降低，或[7]上述[1]至[6]中任一項之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑，其係使用於改善血中酮體量之增加、及/或血中ATP量之降低，或[8]上述[1]至[7]中任一項之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑，其係用於改善成活率之降低及/或體表面溫度之異常。

關於這些流感病毒傳染病之預防及/或治療劑之本發明之其他態樣而言，可例示有用以流感病毒傳染病之預防及/或治療之上述式(I)所示之化合物或其鹽，或上述式(I)所示之化合物或其鹽，其係用以流感病毒傳染病之預防及/或治療。

本發明亦關於[9]一種流感病毒傳染病之預防及/或治療方法，其係投與對象上述[1]至[8]中任一項之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑，或[10]一種用以預防及/或治療流感病毒傳染病之套組，包含：a) 上述式(I)所示之化合物或其鹽(式中，R¹表示氫原子或醯基，R²表示氫原子、直鏈或者分支狀烷基、環烷基、芳基或芳烷基)；b)鐵化合物，或[11]一種流感病毒傳染病之預防及/或治療方法，係同時或分前後投與對象：a)上述式(I)所示之化合物或其鹽(式中，R¹表示氫原子或醯基，R²表示氫原子、直鏈或者分支狀烷基、環烷基、芳基或芳烷基)；b)鐵化合物。

本發明亦關於[12]一種預防及/或治療劑之組合，包含：a)上述[1]至[8]中任一項之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑；b)抗流感藥劑，或[13]一種預防及/或治療劑之組合，其包含：a)上述式(I)所示之化合物或其鹽(式中，R¹表示氫原子或醯基，R²表示氫原子、直鏈或者分支狀烷基、環烷基、芳基或芳烷基)；b)鐵化合物；c)抗流感藥劑。

本發明亦又關於[14]一種血中酮體量之增加抑制劑，包含：上述式(I)所示之化合物(式中，R¹表示氫原子或醯基，R²表示氫原子、直鏈或者分支狀烷基、環烷基、芳基或芳烷基)或其鹽。

此發明之其他態樣而言，可例示一種血中酮體量之增加抑制方法，係投與上述式(I)所示之化合物或其鹽於對象或一種上述式(I)所示之化合物或其鹽，用於血中酮體量之增加抑制。

根據本發明，可提供一種安全性高的流感病毒傳染病之預防及/或治療劑，防止對象之攝食量、攝水量、體重、體溫之降低，並迴避流感重病化而提高成活率，除此之外，可提供一種血中酮體量之增加抑制劑。

第1圖表示本發明之5-ALA及檸檬酸亞鐵鈉投與流感重病化模型小鼠時之體重之變化圖。

第2圖表示本發明之5-ALA及檸檬酸亞鐵鈉投與流感重病化模型小鼠時之攝食量之變化圖。

第3圖表示本發明之5-ALA及檸檬酸亞鐵鈉投與流感重病化模型小鼠時之攝水量之變化圖。

第4圖表示本發明之5-ALA及檸檬酸亞鐵鈉投與流感重病化模型小鼠時之血中酮體量之變化圖。

第5圖表示本發明之5-ALA及檸檬酸亞鐵鈉投與流感重病化模型小鼠時之成活率(重病化率高的感染條件)之變遷圖。

第6圖表示本發明之5-ALA及檸檬酸亞鐵鈉投與流感重病化模型小鼠時之體表面溫之變遷圖。

第7圖表示本發明之5-ALA及檸檬酸亞鐵鈉投與流感重病化模型小鼠時之血中ATP量之變化圖。

第8圖表示本發明之5-ALA及檸檬酸亞鐵鈉投與流感重病化模型小鼠時之成活率之變遷圖。

以本發明之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑而言，只要含有上述式(I)所示化合物或其鹽(以下亦可將該等總稱為「ALA類」)作為有效成分，則並無特別限定，除了ALA類，再含有鐵化合物較佳，進一步用以改善(防止)攝食量、攝水量及/或體重降低，或用以改善(予以減少)造成酮病之原因的血中酮體量之增加，或用以改善(防止)血中ATP量降低，或用以改善(予以上升)成活率及/或體表面溫度之異常而可使用之物較佳。本發明之流感病毒傳染病之預防及/或治療方法，其特徵為將上述本發明之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑投與除了人類之外的家畜家禽類或寵物等對象。

又，以用以預防及/或治療本發明之流感病毒傳染病之套組而言，只要是個別含有ALA類與鐵化合物作為有效成分的套組，則並無特別限定，不過用以改善(防止)攝食量、攝水量及/或體重之降低，或用以改善(予以減少)造成酮症之原因的血中酮體量增加，或用以改善(防止)血中ATP量之降低，或用以改善(予以上升)成活率及/或體表面溫度之異常而可使用之物較佳。如此，本發明之套組，係限定於流感病毒傳染病之預防及/或治療用套組之用途。接著，在用於本發明之流感病毒傳染病之預防及/或治療之套組，一般使用於此種預防及/或治療套組之成分，例如除了載體、pH緩衝劑、穩定劑之外，使用說明書等之添附文書通常包含在內。此等用以預防及/或治療本發明之流感病毒傳染病之套組的本發明之流感病毒傳染病之預防及/或治療方法，除了將ALA類與鐵化合物同時或分前後投與人類之外，並投與家畜家禽類或寵物等對象。

接著又以本發明之預防及/或治療劑之組合而言，只要是上述本發明之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑與抗流感藥劑之預防治療學上藥劑之組合，或ALA類及鐵化合物與抗流感藥劑之預防治療學上藥劑之組合，則並無特別限定，藉由投與該等預防治療學上藥劑之組合，而可進行流感病毒傳染病之預防及/或治療。該等組合之各製劑(成分)可同時或個別的投與。

又，以本發明之血中酮體量之增加抑制劑而言，只要是含有ALA類作為有效成分之物，則並無特別限定，較佳為ALA類再加上含有鐵化合物。又，亦可製成個別地含有ALA類與鐵化合物作為有效成分之用以抑制血中酮體量之增加之套組。在此等套組，一般使用於此種套組的成分，例如除了載體、pH緩衝劑、穩定劑之外，通常包含使用說明書等之添附文書。將上述血中酮體量之增加抑制劑投與對象，或使用用以抑制血中酮體量之增加之套組，將ALA類與鐵化合物同時或分前後投與人類，除此之外，藉由投與家畜家禽類或寵物等對象，而可抑制血中酮體量之增加。

上述ALA類之中，可合適地例示式(I)之R¹及R²均為氫原子之情形的5-ALA或其鹽。5-ALA係亦稱為δ-胺乙醯丙酸的胺基酸之一種。又，以5-ALA衍生物而言，可例示式(I)之R¹為氫原子或醯基，式(I)之R²為氫原子、直鏈或者分支狀烷基、環烷基、芳基或芳烷基之5-ALA以外之化合物。

以式(I)中之醯基而言，可例示甲醯基、乙醯基、丙醯基、丁醯基、異丁醯基、戊醯基、異戊醯基、三甲基乙醯基、己醯基、辛醯基、苄基羰基等之直鏈或分支狀之碳數1至8之烷醯基或苄基、1-萘甲醯基(naphthaoly)、2-萘甲醯基等之碳數7至14之芳醯基(aroyl)。

以式(I)中之烷基而言，可例示甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、戊基、異戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等之直鏈或分支狀之碳數1至8之烷基。

以式(I)中之環烷基而言，可例示環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、環十二基、1-環己烯基等之飽和，或可存在一部分不飽和鍵之碳數3至8之環烷基。

以式(I)中之芳基而言，可例示苯基、萘基、蒽基(anthryl)、菲基(phenanthryl)等之碳數6至14之芳基。

以式(I)中之芳烷基而言，芳基部分可例示與上述芳基相同，烷基部分可例示與上述烷基相同，具體言之，可列舉苄基、苯乙基、苯基丙基、苯基丁基、二苯甲基(benzhydryl)、三苯甲基、萘基甲基、萘基乙基等之碳數7至15之芳烷基。

以上述ALA衍生物而言，可例示R¹為甲醯基、乙醯基、丙醯基、丁醯基等之化合物，或上述R²為甲基、乙基、丙基、丁基、戊基等之化合物較佳，上述R¹與R²之組合，可適當例示甲醯基及甲基、乙醯基及甲基、丙醯基及甲基、丁醯基及甲基、甲醯基及乙基、乙醯基及乙基、丙醯基及乙基、丁醯基及乙基之組合等。

ALA類在生物體內，以式(I)之5-ALA或其衍生物之狀態作為有效成分作用較佳，因應投與之形態，可投與作為用以提高溶解性之各種鹽、酯、或以生物體內酵素所分解之前藥(先質)。例如以5-ALA及其衍生物之鹽而言，可例示藥理學上可容許之酸加成鹽、金屬鹽、銨鹽、有機胺加成鹽等。以酸加成鹽而言，可例示例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、碘化氫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽等之各無機酸鹽；甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、甲苯磺酸鹽、琥珀酸鹽、草酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、硫乙醇酸鹽、甲烷磺酸鹽、丁酸鹽、戊酸鹽、檸檬酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、蘋果酸鹽等之各有機酸加成鹽。以金屬鹽而言，可例示鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽等之各鹼金屬鹽；鎂、鈣鹽等之各鹼土類金屬鹽；鋁、鋅等之各金屬鹽。以銨鹽而言，可例示銨鹽、四甲銨鹽等之烷基銨鹽等。以有機胺鹽而言，可例示三乙基胺鹽、哌啶鹽、嗎福林鹽、甲苯胺鹽等之各鹽。此外，該等鹽在使用時亦可作為溶液使用。

在以上之ALA類中，較為理想者，有5-ALA、及5-ALA甲基酯、5-ALA乙基酯、5-ALA丙基酯、5-ALA丁基酯、5-ALA戊基酯等之各種酯類，以及該等之鹽酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽，特佳可例示5-ALA鹽酸鹽或5-ALA磷酸鹽。

上述ALA類，可藉由化學合成、微生物所致生產、酵素所致生產之任一種周知之方法來製造。又，上述ALA類，亦可形成水合物或溶劑化物(solvate)，又任一種可單獨使用，或適合組合二種以上使用。

以上述鐵化合物而言，可為有機鹽亦可為無機鹽，以無機鹽而言，可例示氯化鐵(III)(ferric chloride)、三氧化二鐵(iron sesquioxide)、硫酸鐵、焦磷酸亞鐵，以有機鹽而言，可例示羧酸鹽，例如屬羥羧酸鹽之檸檬酸亞鐵、檸檬酸鐵鈉、檸檬酸亞鐵鈉、檸檬酸鐵銨等之檸檬酸鹽或焦磷酸鐵、乳酸鐵、葡萄糖酸亞鐵、二伸乙三胺五乙酸鐵鈉、二伸乙三胺五乙酸鐵銨、乙二胺四乙酸鐵鈉、乙二胺四乙酸鐵銨、二羧甲基麩胺酸鐵鈉、二羧甲基麩胺酸鐵銨、反丁烯二酸亞鐵、乙酸鐵、草酸鐵、琥珀酸亞鐵、琥珀酸檸檬酸鐵鈉等之有機酸鹽或血質鐵、葡萄聚糖鐵、三伸乙四胺鐵、乳鐵蛋白鐵、運鐵蛋白鐵、葉綠酸鐵鈉、鐵蛋白鐵、含糖氧化鐵、硫化甘胺酸鐵，其中較佳為檸檬酸亞鐵鈉或檸檬酸鐵鈉。

上述鐵化合物可各自單獨使用，亦可混合二種以上使用。以鐵化合物之投與量而言，若為相對於ALA類之投與量(換算5-ALA)，以莫耳比為0.01至100倍則佳，0.05倍至10倍為所望，0.1倍至8倍更理想。

在本發明之流感病毒傳染病之預防及/或治療方法，作為含有ALA類及鐵化合物之組成物，或者可各自單獨在同時或前後投與。在各自單獨投與之情形，較佳為同時投與，在各自單獨前後投與之情形，ALA類與鐵化合物之投與可達到相加的效果，較佳為兩者間不隔出相當的間隔投與，以達成相乘的效果。

本發明之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑或用以預防及/或治療流感病毒傳染病之套組，進一步可將奧司他韋、然那麥韋、金剛烷胺、波羅麥韋(peramivir)、浪尼那麥韋(Laninamivir)、法隻拉韋(favipiravir)等抗流感藥劑之一種或二種以上加以組合而併用。本發明之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑或用以預防及/或治療流感病毒傳染病之套組，因與該等既有之抗流感藥劑作用機構為不同，故若使用本發明之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑之組合時，可期待相加的效果，而視情形，有相乘的效果。

以抑制血中酮體量之增加之方法而言，作為含有 ALA類與鐵化合物之組成物，或者可例示各自單獨投與、同時或前後投與之方法。在各自單獨投與之情形，較佳為同時投與，各自單獨且前後投與之情形，ALA類與鐵化合物之投與可達成相加的效果，較佳為在兩者間不隔出相當之間隔投與，以達成相乘的效果。

以本發明之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑或用以預防及/或治療之套組之各成分或預防治療學上藥劑之組合之各成分、或者血中酮體量增加之抑制劑或、抑制增加套組之各成分之投與途徑而言，可列舉：包含舌下投與之經口投與、或者點鼻投與、吸入投與、包含點滴之靜脈內投與、泥罨劑(cataplasm)等之經皮投與、栓劑或使用經鼻胃管、經鼻腸管、胃瘻管(gastrostomy tube)或者腸瘻管(intestinal fistula)之強制的腸道營養法(enteral nutrition)之投與等之非經口投與等。此外，在預防治療學上藥劑之組合中抗流感藥劑之投與途徑，較佳為採用在各藥劑中已經確認的投與途徑。

本發明之流感病毒傳染病之預防及/或治療劑或用以預防及/或治療之套組之各成分之劑形，或者以血中酮體量增加之抑制劑或抑制增加之套組各成分之劑型而言，可因應上述投與途徑而適宜決定，可列舉溶解於注射劑、點鼻劑、點滴劑、錠劑、膠囊劑、細粒劑、散在(sporadic)、液劑、糖漿等的水劑(solutions)、泥罨劑、栓劑等。本發明之流感病毒傳染病預防及/或治療劑或用以預防及/或治療之套組之各成分、或者血中酮體量增加之抑制劑或增加之抑制套組之各成分，除了醫藥用途之外，亦可製成錠劑或膠囊劑之補充劑之形態。又尤其是，對嚥下有困難的高齡者或嬰幼兒等，口中快速崩解性之崩解錠之形態或經鼻胃管(Nasogastric intubation)投與為合適的液劑之形態較佳。

本發明之流感病毒傳染病預防及/或治療劑或，用以預防及/或治療之套組、或者為了調整血中酮體量增加之抑制劑或增加抑制套組，則可依照需要，添加藥理學上可容許的載體、成形劑、稀釋劑、添加劑、崩解劑(disintegrator)、結合劑、被覆劑、潤滑劑、表面滑行劑、潤滑劑、風味劑、甜味劑、可溶化劑、溶劑、凝膠化劑、營養劑等，具體言之，可例示水、生理食鹽水、動物性脂肪及油、植物油、乳糖、澱粉、明膠、結晶性纖維素、橡膠、滑石、硬脂酸鎂、羥丙基纖維素、聚烯烴二醇、聚乙烯醇、甘油。此外，在調製本發明之流感病毒傳染病預防劑作為水溶液之情形，為了防止ALA類之分解，有必要留意使水溶液不再為鹼性，在成為鹼性之情形，藉由除去氧，而可防止分解。

本發明之流感病毒傳染病預防及/或治療劑、或用以預防及/或治療之套組、或者血中酮體量增加之抑制劑或用以抑制增加之套組，除了人類之外，亦可在家畜家禽類或寵物等獸醫領域使用。以此等預防及/或治療劑等投與之量、頻率、期間而言，在對象為人類之情形，因流感病毒傳染病患者之年齡、體重、症狀等而不同，而以ALA類之投與量而言，換算ALA莫耳，成人每一人為0.01mmol至25mmol/天，較佳為0.025mmol至7.5mmol/天，更佳為0.075mmol至5.5mmol/天、再更佳為0.2mmol至2mmol/天，其中可列舉0.45mmol至1.3mmol/天，以投與頻率而言，可例示一天一次至複數次投與或藉由點滴等之連續地投與。投與期間，亦可以該技術領域之藥理學者或臨床醫師所知之方法來決定，而此時亦可將血中酮體量或血中ATP量當做指標。

茲根據實施例，進一步具體說明本發明，但本發明之技術範圍並非限定於該等例示。

[實施例1]

調查使用流感重病化模型小鼠的因投與5-ALA鹽酸鹽及檸檬酸亞鐵鈉之對體重、攝食量、攝水量、生化學參數之影響。亦即，就伴隨流感病毒感染發病小鼠病態之進行，而引起之攝水量、攝食量減少及自葡萄糖代謝轉變成脂質代謝等的現象，驗證ALA+Fe投與所致抑制效果。

[實驗方法]

(1)動物及飼育條件

自日本SLC股份有限公司購入4週齡C57BL/6J小鼠之雌鼠，進貨當天將視診上健康的小鼠供作試驗。進貨第二天，根據體重，以隨意抽出，而以1群10隻分為3群，進一步每一籠將1群分為3隻、3隻、4隻。東方酵母股份有限公司製之基礎飼料MF與自來水一起自由地攝取，在室溫23至24℃、濕度30至40%、12小時螢光燈照明之飼育室中加以飼育。

(2)試驗群

如下述所示，分成有無病毒感染或投與藥劑不同之1)至3)之3群。

1)群；無病毒感染群(CMC經口投與) 10隻

2)群；病毒感染群(CMC經口投與) 10隻

3)群；病毒感染+ALA+Fe投與群 10隻

(3)流感病毒感染

在氯胺酮(Ketalar)及甲苯噻嗪(celactal)之麻醉下，將流感病毒PR8株溶液自兩鼻腔投與至肺。病毒量，每1隻量為100PFU。本病毒感染日設為第0天。

(4)藥劑之投與

每天在AM 10：00及PM 17：00，於上述1)群及2)群，投與0.1mL甲基纖維素溶液(0.5w/v%甲基纖維素400cP溶液，Sterilized：和光純藥)；在3)群，則在剛投與5-ALA鹽酸鹽、檸檬酸亞鐵鈉之前，在甲基纖維素溶液中予以溶解調製，使用探測器(sonde)在胃內強制投與0.1mL。在3)群中5-ALA鹽酸鹽之投與量，設定為體重每1kg以15mg作為1次量，一天體重每1kg設為30mg量。又，檸檬酸亞鐵鈉之投與量，以莫耳比成為5-ALA鹽酸鹽之0.5倍量，體重每1kg以23.54mg作為1次量，體重每 1kg以47.08mg作為1天量。

(5)體重攝食量攝水量

每天觀察各籠，在AM 10：00之藥劑投與前，測定各個體之體重、各籠每籠之攝食量及攝水量。

(6)解剖及生化學檢査

在第四天及第七天，解剖各5隻。小鼠在無麻醉下加以斷頭予以採血，實施血液生化學檢査(酮體量)。血中酮體量之測定係使用「Precision Xceed 3-羥丁酸套組(Abbott公司)」之測定套組。

[結果]

(1)體重之變化

使用於檢査的試驗群之體重變化如第1圖所示。1)無病毒感染群、2)病毒感染群、3)病毒感染、ALA+Fe投與群一起，至第三天可觀察到相同之體重增加。但是，就2)病毒感染群，自第四天可觀察到急遽體重之減少，在觀察最終天之第七天，可觀察到相較於第三天約20%之體重減少。一方面，在1)無病毒感染群，可觀察到至第五天之體重增加，其後維持至觀察最終天之第七天。在3)病毒感染、ALA+Fe投與群，至第四天，可觀察到體重增加，其後至第七天可觀察到緩緩地減少。但是，觀察最終天之第七天之體重減少，相較於第四天限於約6%。

(2)攝食量之變化

使用於檢査之試驗群之攝食量變化如第2圖所示。1)無病毒感染群、2)病毒感染群、3)病毒感染、ALA+Fe投與群一起，至第二天可觀察到相同之攝食量增加。但是就2)病毒感染群，在第三天，其增加率相較於其他2群傾向於停滯，且自第四天開始觀察到攝食量急遽減少。在觀察最終天之第七天，可觀察到與第三天相比減少約90%之攝食量。一方面，在1)無病毒感染群，可觀察到至Day-5為增加。在3)病毒感染、ALA+Fe投與群，至第四天可見到攝食量增加，其後至第七天可見到緩緩地減少。但是在觀察最終天之第七天，與第四天比較，攝食量減少限於約35%之減少。

(3)攝水量之變化

使用於檢査的試驗群之攝水量之變化如第3圖所示。就2)病毒感染群，至第二天攝水量之增加停止，在第四天一度減少。在第五天，雖然一度恢復，但其後可見到急遽減少。在觀察最終天之第七天，與第三天比較，可見到約60%之攝水量減少。在3)病毒感染、ALA+Fe投與群，至第六天可見到攝水量增加，在第七天可見到緩緩地減少，但與第六天比較，限於約12%之減少。

(4)血中酮體量之變化

使用於檢查的試驗群之血中酮體量變化如第4圖所示。就血中酮體量，第七天之值，與第四天比較，在1)無病毒感染群並無變化，在3)病毒感染、ALA+Fe投與群，僅限於25%之增加，但2)病毒感染群之值，可見到242%之增加與顯著的上升。

[實施例2]

調查使用流感重病化模型小鼠的因5-ALA鹽酸鹽及檸檬酸亞鐵鈉投與所致對成活率及體表面溫之影響。亦即，在上述實施例1所見，針對在流感重病化模型小鼠引起的攝水量、攝食量及體重減少、以及血中酮量增加等的現象之藉由ALA+Fe投與之抑制效果，除了小鼠之成活率或體溫之外，是否對血中ATP量有影響，加以驗證。

[實驗方法]

(1)動物及飼育條件、試驗群及藥劑之投與

就動物及飼育條件、試驗群以及藥劑之投與，與實施例1同樣地進行。

(2)流感病毒感染

在氯胺酮及甲苯噻嗪所致麻醉下，將剛雞卵培養之後之新鮮病毒且顯示強致命率的流感病毒PR8株溶液，自兩鼻腔投與肺(雖是病毒實驗株中PR8株最具致死性的病毒株，但其中剛培養後之病毒株顯示強病原性)。病毒量每1隻設為100PFU或150PFU。本病毒感染日設為第0天。

(3)成活率及體表面溫測定

每天觀察各籠，相對於總個體之生存個體數之比率設為成活率。又，測定第六天後續之17：00中生存個體之體表面溫。

(4)解剖及生化學檢査

第四天及第七天各解剖5隻。在小鼠之無麻醉下以斷頭進行採血，實施血液生化學檢査(ATP量)。在血中ATP量之測定，係使用「XL-ATP kit(APRO科學公司)」之測定套組。

[結果]

(1)成活率之變遷

成活率之變遷如第5圖所示。以病毒量150PFU予以感染時，在無投與ALA之2)病毒感染群中，於第九天，在3)病毒感染、ALA+Fe投與群中，於第十天，全部死亡。就用病毒量100PFU予以感染之情形，因有無投與ALA，而自第九天，成活率發生差異，無投與ALA之2)病毒感染群，在第十三天之前全部死亡，而3)病毒感染、ALA+Fe投與群，在試驗期間內有3隻生存。由此結果可知，即使在使用表示強大致命率的流感病毒PR8株之情形，也可提高成活率。

(2)體溫之變遷

生存著的小鼠體表面溫度之變遷如第6圖所示。在無投與ALA之2)病毒感染群，感染後體溫繼續降低。就死亡個體，在呈大致24℃的第二天死亡。一方面，在3)病毒感染、ALA+Fe投與群，第九天之後，緩緩地恢復。如此可知，在投與ALA+Fe 之情形，可改善體表面溫度之異常。

(3)血中ATP量之變化

使用於檢查的試驗群之血液中ATP量之第四天及第七天之變化如第7圖所示。2)病毒感染群之第七天之血液中ATP量之值，相較於1)無病毒感染群，顯示低值。一方面，3)病毒感染、ALA+Fe投與群之第七天之血液中ATP量之值，即使在第七天也無降低，顯示高值。又，與第四天比較，血液中ATP量之值也增加。

[參考例]

其後，調查感染了病原性低的流感病毒PR8株的流感重病化模型小鼠中成活率。亦即，使用培養後在-80℃條件下經過3至6個月保存，並無顯示強致命率流感病毒PR8株，來替代以剛經雞卵培養之後之新鮮病毒且顯示強致命率的實施例2之流感病毒PR8株，研討成活率。

將試驗群設為1)無病毒感染群與2)病毒感染群，與實施例2之流感病毒PR8株比較，除了使用無顯示強大致命率的流感病毒PR8株以外，其他就動物及飼育條件、流感病毒感染、以及藥劑之投與，則與實施例2相同地進行。又，每天觀察各籠，將相對於全個體之生存個體數之比率，設為成活率。

成活率之變遷如第8圖所示。在一用病毒量100PFU予以感染，則在2)病毒感染群，於第八天出現死亡例，而其後續則維持成活率80%。吾人可知，將在該參考例中成活率之結果(在第14天成活率80%)，與使用實施例2之流感病毒PR8株之情況之成活率之結果(在Day-14成活率0%；參照第5圖)比較，則以實施例2之流感病毒PR8株者，顯示強大致命率。由此可知，即使在使用顯示強大致命率的實施例2之流感病毒PR8株之情形，在3)病毒感染(100PFU)、ALA+Fe投與群，可觀察到成活率恢復至30%(參照第5圖)。

[產業上可利用性]

本發明之流感病毒傳染病預防治療劑，可在醫療領域有利地利用。

Claims

一種使用下述式(I)所示之化合物或其鹽以及鐵化合物製造流感病毒傳染病之治療劑之用途，該治療劑係用於改善流感病毒傳染病所導致的攝食量、攝水量及/或體重之降低；血中酮體量之增加；血中ATP量之降低；存活率；及/或體表面溫度之異常，其中，R¹表示氫原子或醯基，R²表示氫原子、直鏈或者分支狀烷基、環烷基、芳基或芳烷基。
如請求項1之用途，其中R¹及R²為氫原子。
如請求項1之用途，其中鐵化合物係選自氯化鐵、三氧化二鐵、硫酸鐵、焦磷酸亞鐵、檸檬酸亞鐵、檸檬酸鐵鈉、檸檬酸亞鐵鈉、檸檬酸鐵銨、焦磷酸鐵、乳酸鐵、葡萄糖酸亞鐵、二伸乙三胺五乙酸鐵鈉、二伸乙三胺五乙酸鐵銨、乙二胺四乙酸鐵鈉、乙二胺四乙酸鐵銨、二羧甲基麩胺酸鐵鈉、二羧甲基麩胺酸鐵銨、反丁烯二酸亞鐵、乙酸鐵、草酸鐵、琥珀酸亞鐵、琥珀酸檸檬酸鐵鈉、血質鐵、葡萄聚糖鐵、三伸乙四胺鐵、乳鐵蛋白鐵、運鐵蛋白鐵、葉綠酸鐵鈉、鐵蛋白鐵、含糖氧化鐵、及硫化甘胺酸鐵之其中一種或二種以上之化合物。
如請求項1之用途，其中鐵化合物為檸檬酸亞鐵鈉。
如請求項1至4中任一項所述之用途，其中該式(I)所示之化合物或其鹽及鐵化合物係同時或分前後投與對象。
一種組合用於製造流感病毒傳染病之治療劑之用途，該治療劑係用於改善流感病毒傳染病所導致的攝食量、攝水量及/或體溫之降低；血中酮體量之增加；血中ATP量之降低；存活率；及/或體表面溫度之異常，該組合包含：a)下述式(I)所示之化合物或其鹽，其中，R¹表示氫原子或醯基，R²表示氫原子、直鏈或者分支狀烷基、環烷基、芳基或芳烷基；b)鐵化合物；及c)抗流感藥劑，係選自奧司他韋、扎那米韋、金剛烷胺、帕拉米韋、辛酸拉尼米韋及法匹拉韋中的一種或二種以上。