CN108014129B

CN108014129B - 铁离子在抑制rna病毒中的应用

Info

Publication number: CN108014129B
Application number: CN201710648162.XA
Authority: CN
Inventors: 孟广勋; 王洪斌
Original assignee: Institut Pasteur of Shanghai of CAS
Current assignee: Shanghai Institute of Immunology and Infection, Chinese Academy of Sciences
Priority date: 2016-11-03
Filing date: 2017-08-01
Publication date: 2022-06-28
Anticipated expiration: 2037-08-01
Also published as: CN108014129A

Abstract

本发明提供了一种铁离子的用途,即在抑制RNA病毒中的应用，具体地，本发明提供了一种铁离子的用途，其特征在于，用于制备抑制RNA病毒的药物组合物。本发明铁离子能够有效地抑制多种RNA病毒，如黄病毒科病毒、正粘病毒等，所产生的效果与复方制剂相同。因此，可以采用多种含有铁离子的物质进行RNA病毒感染的预防，从而使本发明复配活性成分非常易于制备、简单廉价，具有强大的应用前景。

Description

铁离子在抑制RNA病毒中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药治疗领域。具体地，涉及单用铁离子在抑制RNA病毒，尤其是正粘病毒科病毒、黄病毒科病毒中的应用。

背景技术

流行性感冒是流感病毒引起的急性呼吸道感染。流感病毒属于正粘病毒科RNA病毒，易发生突变，且传染性强、传播速度快，极易造成大范围流行。虽然现在市场上已有针对流感病毒的抗病毒药物，但仍然有必要研究出新型廉价高效且抗病毒机理迥异的抗病毒药物。

寨卡病毒（ZIKA virus）是一种通过蚊虫进行传播的黄病毒属、单股正链RNA病毒。成人感染后的典型症状包括低热、斑丘疹、关节疼痛、结膜炎、肌痛、头痛、无力等。孕妇在感染寨卡病毒后会将病毒传递给胎儿，造成严重的新生儿小头症畸形。目前还没有针对寨卡病毒的特异性治疗方法，因此亟需研发特异性的抗寨卡病毒药物。

因此，本领域迫切需要开发一种能够有效抑制RNA病毒，尤其是上述正粘病毒和黄病毒的预防和/或治疗药物。

发明内容

本发明提供了一种有效抑制RNA病毒的组合物。

本发明第一方面，提供了铁离子的用途，用于制备抑制RNA病毒的药物组合物。

在另一优选例中，所述的抑制RNA病毒包括治疗和/或预防RNA病毒的感染和/或复制。

在另一优选例中，所述铁离子包括三价铁离子和/或二价铁离子。

在另一优选例中，所述铁离子是二价铁离子。

在另一优选例中，所述铁离子的来源包括：氯化铁（FeCl₃）、柠檬酸铁、柠檬酸亚铁、硫酸铁铵、或硫酸亚铁铵；优选为氯化铁、柠檬酸铁或硫酸铁铵。

在另一优选例中，所述的药物组合物由亚铁离子和药学上可接受的载体组成。

在另一优选例中，所述药物组合物中还含有提供柠檬酸根离子的物质。

本发明第二方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物由铁离子或其盐组成，且所述的铁离子的含量为1 mM-1000 mM。

在另一优选例中，所述的铁离子在所述药物组合物中的含量为1 mM-1000 mM mM，优选为10 mM-800 mM，20 mM-600 mM，30 mM-400 mM，50 mM-200 mM。

在另一优选例中，所述的RNA病毒包括：流感等正粘病毒和寨卡等黄病毒，或其组合。

在另一优选例中，所述的工作pH值为在室温到生理温度（摄氏20-40度）条件下的pH值。

在另一优选例中，所述的药物组合物的工作pH值为7.0±0.05-7.5±0.05，较佳地，为7.2±0.05-7.4±0.05。

在另一优选例中，所述的正粘病毒包括多种流感病毒。

在另一优选例中，所述流感病毒包括人流感病毒、猪流感病毒、或禽流感病毒。

在另一优选例中，所述人流感病毒包括甲型、乙型或丙型流感病毒。

在另一优选例中，所述的流感病毒包括H1N1、H5N1、或H7N9甲型流感病毒。

在另一优选例中，所述的药物组合物中还含有抗病毒剂，优选地，为抗RNA病毒剂。

本发明第三方面，提供了一种体外非治疗性抑制RNA病毒对细胞侵袭的方法，包括在铁离子的存在下，对RNA病毒和细胞进行共培养，从而抑制RNA病毒对细胞的侵袭。

在另一优选例中，所述的RNA病毒包括流感等正粘病毒、寨卡病毒等黄病毒。

在另一优选例中，所述的细胞为RNA病毒感染细胞，如U251细胞、HELA细胞、人肺上皮细胞系A549、Vero细胞等。

在另一优选例中，所述的铁离子包括三价和/或二价铁离子，优选地，所述的铁离子是二价铁离子。

本发明第四方面，提供了一种抑制RNA病毒、预防和/或治疗RNA病毒感染的方法，包括向所需要的对象施用铁离子，其中，所述需要的对象是感染或易感RNA病毒的对象。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1显示柠檬酸铁铵（FAC）、柠檬酸铁（FeCit）和硫酸亚铁铵（AIS）等带铁离子的化合物能够抑制A型流感病毒PR8株在人肺上皮细胞系A549（图1A）中和HELA细胞系（图1B）中的复制。

图2显示感染流感病毒的小鼠的同时（图2A）或感染后（图2B）30分钟鼻腔滴注铁离子（硫酸亚铁铵，ammonium iron Ⅱ sulphate, AIS）能够抑制病毒感染引发的体重减轻，说明铁离子对流感病毒感染具有治疗作用。

图3说明在寨卡病毒（ZIKA virus）感染后不同时间点(24h、48h、72h)，不同形式的铁离子（柠檬酸铁铵、柠檬酸铁和氯化铁）都能够抑制其在vero细胞系（图3A）和人胶质瘤细胞系U251（图3B）中的复制。

图4A-B说明柠檬酸铁铵（FAC）和硫酸亚铁铵（AIS）能够在实验小鼠体内抑制寨卡病毒的复制。

图5详细地证明了硫酸亚铁铵（AIS）能够在不同时间点抑制流感病毒在小鼠肺组织里的复制及其诱导产生的炎症因子和细胞浸润，以及肺组织炎症反应。其中，图5（A）real-time PCR检测肺组织中病毒RNA载量。（B）real-time PCR检测肺组织中细胞因子的载量。（C）ELISA检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中IL-6、TNF-α和IFN-g的分泌。（D）通过流式细胞仪分析支气管肺泡灌洗液中浸润细胞总数和中性粒细胞（Ly-6G⁺）总数、比例。（E）HE染色观察肺组织炎症。

图6说明硫酸亚铁铵（AIS）能够直接杀灭病毒，使其不再具有感染能力

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现，铁离子尤其是亚铁离子作为活性成分施用时，能够高效地抑制多种RNA病毒，尤其是流感病毒（如禽流感）和寨卡病毒。因此，可以向具有流感、寨卡、登革热病毒高危易感性的对象施用各种能够提供铁离子(尤其是亚铁离子)的铁盐制剂，从而有效地预防或治疗人流感、禽流感等正粘病毒、寨卡和登革热等黄病毒引起的感染。在此基础上，完成了本发明。

铁离子

本发明中，除非另行定义，“铁离子”广义地指的是二价或三价铁离子或其盐。可用于本发明的铁离子没有特别限制，可以为单纯游离的铁离子，或提供铁离子的物质。所述提供铁离子的物质包括任何能够在体外和/或体内特定微环境下解离出铁离子的、适用于体外或体内施用的物质，作为本发明药物组合物中“活性成分”，例如各种铁盐，如氯化铁（FeCl₃）、硫酸铁铵、硫酸亚铁铵、柠檬酸铁、柠檬酸亚铁、异柠檬酸铁、异柠檬酸铁亚铁；优选为氯化铁、硫酸铁铵。

本发明的活性成分可以通过将液态或固态的含铁离子的化合物(如铁盐)进行溶解，从而获得制备本发明药物组合物的活性成分；也可以将铁离子与药学上可接受的载体(如溶剂)再进行混合制备而成。

RNA病毒

可用于本发明的RNA病毒没有特别限制，可以为任何遗传物质由核糖核酸组成的病毒，如单链RNA病毒或双链RNA病毒，优选地，本发明所述的RNA病毒包括多种流感病毒等正粘病毒科病毒、寨卡等黄病毒科病毒，或其组合。

正粘病毒科：

正粘病毒科（Orthomyxoviridae）是与粘液蛋白有特殊亲和性病毒中的一科，又称流感病毒群。所述的正粘病毒科病毒包括各种来源的流感病毒，例如人流感病毒、猪流感病毒、禽流感病毒等，如H1N1，H5N1、H7N9等甲型流感病毒及其变种，各种乙型、丙型流感病毒及其变种等。

黄病毒科：

黄病毒属（Flavivirus）是指具有包膜的单正链RNA病毒，呈小球形，直径多数为40-70nm，该病毒表面有脂质包膜，其上镶有糖蛋白组成的刺突，包膜内为20面体对称的核衣壳蛋白，中性含病毒RNA，通常为虫媒传播。所述的黄病毒科病毒包括各种寨卡病毒变种及黄病毒属的各种病毒如乙型脑炎病毒、森林脑炎病毒和登革病毒、西尼罗病毒、黄热病病毒等。大多数的病毒引起人畜共患的、自然疫源性疾病，临床表现主要包括脑炎或脑脊髓炎以及全身性感染等。

药物组合物

本发明还提供了一种含有活性成分的药物组合物，其中，所述药物组合物除了含有安全有效量的本发明活性成分以外，所述的药物组合物还含有药学上可接受的载体。

“安全有效量”指的是：活性成分的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg活性成分/剂，更佳地，含有10-200mg活性成分/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个药片。

“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如吐温®)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

在另一优选例中，本发明活性成分可与大分子化合物或高分子通过非键合作用形成复合物。在另一优选例中，本发明活性成分作为小分子还可通过化学键与大分子化合物或高分子相连接。所述大分子化合物可以是生物大分子如高聚糖、蛋白、核酸、多肽等。

本发明的活性成分或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、舌下、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)鼻腔喷雾、局部涂抹等。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、喷雾剂和颗粒剂。

在这些固体剂型中，活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a) 填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b) 粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c) 保湿剂，例如，甘油；(d) 崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e) 缓溶剂，例如石蜡；(f) 吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g) 润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h) 吸附剂，例如，高岭土；和(i) 润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

所述的固体剂型还可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性成分的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性成分外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性成分外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他治疗药物(如抗生素和/或其他的治疗流感等正粘病毒、或寨卡等黄病毒科病毒的药物，包括但不限于溴麦角环肽（Bromocriptine）、索非布韦(Sofosbuvir)、金刚烷胺(Amantadine)、金刚乙胺(Rimantadine)、奥司他韦 (Oseltamivir)、苏拉明（Suramin）、利巴韦林 (Ribavirin))联合给药。

优选地其它联合用药如下：

溴麦角环肽（Bromocriptine，多巴胺D2/D3受体激动剂），结构式为：

。

索非布韦(Sofosbuvir)，结构式为：

。

金刚烷胺(Amantadine)，结构式为：

。

金刚乙胺(Rimantadine)，结构式为：

。

奥司他韦 (Oseltamivir)，结构式为：

。

苏拉明（Suramin），结构式为：

利巴韦林 (Ribavirin)，结构式为：

。

使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的人或非人哺乳动物。

在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物，如小鼠、大鼠、兔；灵长目动物，如猴、猩猩；偶蹄目家畜，如猪、牛、羊；奇蹄目家畜，如马、驴、骡；猫科动物，如家猫；犬科动物，如家犬。

在另一优选例中，所述鸟类包括鸡、鸭、鹅、和/或鸽。其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

应用

本发明还提供了一种治疗或非治疗性的抑制RNA病毒的方法。

其中，体外的非治疗性的方法是抑制RNA病毒对侵袭的感染，其包括：在铁离子，尤其是亚铁离子的存在下，对RNA病毒和细胞进行共培养，从而抑制RNA病毒对细胞的侵袭。

此外，当用于需要的对象时，本发明抑制RNA病毒的方法包括向需要的对象共同施用铁离子或本发明药物组合物，其中，所述需要的对象是感染或易感RNA病毒(尤其是流感等正粘病毒和寨卡等黄病毒)的对象。

如本文所用，术语“抑制RNA病毒”包括对RNA病毒感染和/或复制进行治疗和/或预防。当应用于体外非治疗性方法时，本发明细胞包括各种易感RNA病毒的细胞，例如人肌肉瘤RD (Rhabdomyosarcoma)细胞、人单核细胞系THP-1细胞、人肺上皮细胞系A549、Vero细胞、U251细胞、HELA细胞等。当应用于体内治疗性方法时，本发明感染或易感RNA病毒的对象为人或非人哺乳动物及鸟类：所述非人哺乳动物包括啮齿动物，如小鼠、大鼠、兔；灵长目动物，如猴、猩猩；偶蹄目家畜，如猪、牛、羊；奇蹄目家畜，如马、驴、骡；猫科动物，如家猫；犬科动物，如家犬；所述鸟类包括鸡、鸭、鹅、和/或鸽。

本发明有益效果

本发明铁离子能够有效地抑制多种RNA病毒，尤其是正粘病毒科的多种病毒、黄病毒科的多种病毒，且各种含铁离子的盐均可以用于本发明，成分非常易于制备、简单廉价，具有强大的应用前景。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York: Cold Spring HarborLaboratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。

通用方法

细胞

Vero、U251和HELA细胞系使用DMEM培养基（含10% FBS, 100 IU/ml青霉素, 1 mg/ml链霉素, and 50μM 2-巯基乙醇）培养。A549细胞使用RPMI 1640培养基（含10% FBS, 100IU/ml青霉素, 1 mg/ml链霉素, 和50μM 2-巯基乙醇）培养。细胞培养在5% CO₂的37°C培养箱。

病毒

流感病毒PR8株、禽流感病毒G7株、寨卡病毒、登革热2型病毒NGC株均来自中国科学院上海巴斯德研究所。

实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）

细胞用TRIzol试剂(Invitrogen)抽取总RNA，并用反转录试剂盒（Promega）反转成cDNA后使用SYBR Green qPCR Master Mix (TOYOBO)和7900HT Real-time PCR系统(Applied Biosystems)检测基因的相对表达。GAPDH基因的作为内参。用于检测基因相对表达的引物可以通过常规方法获取并筛选（Primer5.0），优选的引物序列如下所示：

GAPDH:Forward，5-GGTATCGTGGAAGGACTCATGAC-3(SEQ ID NO.: 1)

Reverse，5-ATGCCAGTGAGCTTCCCGTTCAGC-3(SEQ ID NO.: 2)

PR8： Forward，5-AAGACCAATCCTGTCACCTCTGA-3(SEQ ID NO.: 3)

Reverse，5-CAAAGCGTCTACGCTGCAGTCC-3(SEQ ID NO.: 4)

寨卡 :Forward，5- CAACCACTGCAAGCGGAAGGGT-3(SEQ ID NO.: 5)

Reverse，5- AAGTGATCCATGTGATCAGTTGA-3(SEQ ID NO.: 6)

G7: Forward，5′-AGTGAATTGGAATATGGTAACTG-3′(SEQ ID NO.: 7)

Reverse，5′-AACTGAGTGTTCATTTTGTCAAT-3′(SEQ ID NO.: 8)；

登革热2型NGC株：

Forward，5′-CCTGGCATACACCATAGGAACGAC-3′(SEQ ID NO.: 9)

Reverse，5′-TCAGCCAGGACTTGAGATGTCC-3′(SEQ ID NO.: 10)

如无特别说明，则本发明说明书中的材料和试剂均为市售产品。

实施例1 铁离子对流感病毒的抑制作用

方法：

柠檬酸铁铵（FAC）、柠檬酸铁（FeCit）和硫酸亚铁铵（AIS）等以100 mM的浓度加入到流感PR8株感染（MOI=0.1）的人肺上皮细胞系A549细胞上清中，12h后Trizol裂解细胞，抽提RNA，反转录成cDNA后通过Real-Time PCR检测流感病毒RNA拷贝数（图1A）。图1B，与图1A采取相同的处理方式在HELA细胞中加入FAC和AIS。

结果：铁离子能够抑制流感病毒PR8株在A549细胞中和HELA细胞中的复制。

实施例2铁离子在小鼠体内对流感病毒的抑制作用

方法：流感病毒PR8株通过鼻腔滴注的方式感染6-8周大的C57BL/6雌性小鼠（60PFU/只）。分别在感染病毒的同时（图2A）或感染后30分钟(图2B)鼻腔滴注30 μl AIS（5 mg/ml）。感染后连续15天称量小鼠体重。

结果：铁离子施用后，能够显著抑制病毒感染引发的体重减轻，说明铁离子对流感病毒感染具有治疗作用。

实施例3铁离子对寨卡病毒的抑制作用

方法：寨卡病毒感染Vero细胞和U251细胞（MOI=0.1）的同时加入FAC、FeCl₃或AIS（100 mM），24h、48h、72h后Trizol裂解细胞，抽取RNA，反转录成cDNA后通过Real-Time PCR检测寨卡病毒RNA拷贝数（图3）。

结果：不同形式的铁离子都能够抑制寨卡病毒的复制。

实施例4. 柠檬酸铁铵（FAC）和硫酸亚铁铵（AIS）抑制寨卡病毒对小鼠的感染

方法：（A）6-8周龄雌性AG6（干扰素信号缺失）小鼠腹腔注射感染寨卡病毒（40PFU）（每个组5只小鼠）。将病毒稀释至200 mL PBS中并与600 mL FAC（5 mM）溶液混合后注射小鼠。连续15天记录小鼠体重变化和生存率。（B）6-8周龄雌性AG6小鼠腹腔注射感染寨卡病毒（40 PFU）（每个组5只小鼠）。将病毒稀释至200 mL PBS后注射小鼠腹腔，接着再注射600 mL AIS（5 mM）。连续15天记录小鼠体重变化和生存率（G）。

结果：图4显示柠檬酸铁铵（FAC）和硫酸亚铁铵（AIS）能够在干扰素信号缺失的实验小鼠体内抑制寨卡病毒引起的体重丢失和死亡，因而对寨卡病毒感染具有治疗作用。

实施例5. 硫酸亚铁铵（AIS）抑制小鼠体内流感病毒复制及其诱导的炎症反应

方法：

6-8周龄雌性C57BL/6小鼠滴鼻感染甲型流感病毒PR8（1x LD50）稀释至25 mL PBS或AIS（5 mM）（每个组7只小鼠）。在感染后第三天或第六天分别收集小鼠肺组织匀浆和支气管肺泡灌洗液（BALF）。图5（A）real-time PCR检测肺组织中病毒RNA载量。（B）real-timePCR检测肺组织中细胞因子的载量。（C）ELISA检测支气管肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α和IFN-g的分泌。（D）通过流式细胞仪分析支气管肺泡灌洗液中浸润细胞总数和中性粒细胞（Ly-6G⁺）总数、比例。（E）HE染色观察肺组织炎症。比例尺，100 mm。对照，无感染和无药物处理的小鼠。

结果：硫酸亚铁铵（AIS）能够在不同时间点抑制流感病毒在小鼠肺组织中的复制，并抑制病毒诱导产生的炎症因子和细胞浸润，还相应地抑制肺组织的炎症反应，因而对流感病毒感染有治疗作用。

实施例6. 硫酸亚铁铵（AIS）通过直接杀灭机制抑制禽流感/登革热病毒

方法：（A）G7病毒加入不同浓度的AIS（mM）在室温孵育1 h，然后将病毒混合物加入A549细胞上清（AIS终浓度<5 mM），CO₂培养箱中感染12 h，实时定量PCR分析禽流感病毒G7的RNA载量。（B）G7±AIS（100 mM）在室温下孵育45 min，离心，用负染色电子显微镜分析。比例尺，100 nm。参照同样的方法对登革热病毒也进行了混合培养和RNA载量检测。

结果：禽流感病毒与硫酸亚铁铵孵育以后会失去活性，不能再在目标细胞（A549）中增殖（A）；原因是硫酸亚铁铵能够直接破坏流感病毒的结构，使病毒颗粒破裂死亡（B）。而在采用硫酸亚铁铵孵育的登革热病毒中，也观察到了病毒颗粒的裂解死亡，可见含铁的制剂对RNA病毒均采用了直接破坏其病毒颗粒结构从而使其死亡的机制。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

序列表

<110> 中国科学院上海巴斯德研究所

<120> 铁离子在抑制RNA病毒中的应用

<130> P2017-1370

<150> CN201610956271.3

<151> 2016-11-03

<160> 10

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物

<400> 1

ggtatcgtgg aaggactcat gac 23

<210> 2

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物

<400> 2

atgccagtga gcttcccgtt cagc 24

<210> 3

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物

<400> 3

aagaccaatc ctgtcacctc tga 23

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物

<400> 4

caaagcgtct acgctgcagt cc 22

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物

<400> 5

caaccactgc aagcggaagg gt 22

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物

<400> 6

aagtgatcca tgtgatcagt tga 23

<210> 7

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物

<400> 7

agtgaattgg aatatggtaa ctg 23

<210> 8

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物

<400> 8

aactgagtgt tcattttgtc aat 23

<210> 9

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物

<400> 9

cctggcatac accataggaa cgac 24

<210> 10

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物

<400> 10

tcagccagga cttgagatgt cc 22

Claims

1.铁离子的用途，其特征在于，用于制备抑制RNA病毒的药物组合物，其中，所述的铁离子的来源为：氯化铁、柠檬酸铁铵或硫酸亚铁铵，并且所述的RNA病毒为黄病毒科病毒，所述黄病毒科病毒为寨卡病毒。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的抑制RNA病毒包括治疗和/或预防RNA病毒的感染和/或复制。

3. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的铁离子的浓度为1 mM-1000 mM。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物的工作pH值为7.0±0.05-7.5±0.05。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的工作pH值为在室温到生理温度条件下的pH值。

6. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物由铁离子或其盐组成，且所述的铁离子的含量为1 mM-1000 mM。

7. 如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的铁离子在所述药物组合物中的含量为10 mM-800 mM。

8. 如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的铁离子在所述药物组合物中的含量为20 mM-600 mM。

9. 如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的铁离子在所述药物组合物中的含量为30 mM-400 mM。

10. 如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的铁离子在所述药物组合物中的含量为50 mM-200 mM。

11.一种体外非治疗性抑制RNA病毒对细胞侵袭的方法，其特征在于，包括在铁离子的存在下，对RNA病毒和细胞进行共培养，从而抑制RNA病毒对细胞的侵袭，其中，所述的铁离子的来源为：氯化铁、柠檬酸铁铵或硫酸亚铁铵，所述的RNA病毒为黄病毒科病毒，所述黄病毒科病毒为寨卡病毒。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述的细胞为RNA病毒感染细胞，所述的细胞选自下组：U251细胞、Vero细胞。