TWI512108B - 從腐霉屬菌種生產ｏｍｅｇａ－３脂肪酸 - Google Patents

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Description

從腐霉屬菌種生產OMEGA-3脂肪酸
本發明係關於一種三醯甘油脂油(triacylglycerol oil)之生產，且該三醯甘油脂油是生產自一種藻類的腐霉屬菌種(Pythium species of alga)。在一實施例中，此藻類菌種包含至少約百分之二十重量百分比的總脂質，且其總脂肪酸中包含至少約百分之十重量百分比的二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)，以及總脂肪酸中少於約百分之五重量百分比的二十碳四烯酸(arachidonic acid,ARA)。在另一實施例中，本發明係關於從一種藻類的腐霉屬菌種生產二十碳五烯酸(EPA)之多種方法。具體而言，畸雌腐黴(Pythium irregulare )可作為可行的生產生物體。
二十碳五烯酸(EPA,C20：5,n-3)在醫學上已確立其對心血管及其他疾病具有治療能力，因此是omega-3家族中一種重要脂肪酸。魚油做為EPA主要來源有許多限制，例如味道和氣味不佳，重金屬汙染，過度捕撈造成的潛在來源短缺，來源魚類供應隨季節變動和生產成本。因此，能識別並發展新的EPA來源，會是非常有益的。微生物中腐霉屬包含許多有能力生產EPA的菌種。具體言之，畸雌腐黴作為EPA的來源已經被廣泛研 究，但尚未發展出由此來源生產高含量EPA三醯甘油脂油的商業方法。
由於EPA具營養價值(抗發炎特性等)，所以從含高量EPA(總脂肪酸大於10%)的真菌/藻類腐霉屬的一菌種取得三醯甘油脂油，會是有利的。為了取得此種油脂，如果可從在細胞乾重中含有高量(重量百分比大於20%)脂質的腐霉屬生物質(biomass)中萃取出此油脂，會是有利的。
本發明係關於一種三醯甘油脂油之生產，且該三醯甘油脂油是生產自一種藻類的腐霉屬菌種。在一實施例中，此藻類菌種包含至少約百分之二十重量百分比的總脂質，且其總脂肪酸中包含至少約百分之十重量百分比的二十碳五烯酸(EPA)，以及總脂肪酸中少於約百分之五重量百分比的二十碳四烯酸(ARA)。在另一實施例中，本發明係關於從一種藻類的腐霉屬菌種生產二十碳五烯酸(EPA)之多種方法。具體而言，畸雌腐黴可作為可行的生產生物體。
在一實施例中，本發明係關於從腐霉屬生物質中獲取之一種三醯甘油脂油，該三醯甘油脂油包含：大於20%細胞乾重重量百分比的細胞脂質；與總脂肪酸中大於10%為EPA。
在另一實施例中，本發明係關於從腐霉屬生物質中獲取之一種三醯甘油脂油，該三醯甘油脂油包含：大於20%細胞乾重重量百分比的細胞脂質；及/或總脂肪酸中大於10%為二十碳五烯酸(EPA)，而且二十碳四烯酸(ARA)占總脂肪酸量小於5%。
在又另一實施例中，本發明係關於一種生產至少一種三醯甘 油脂油的程序，該程序包含以下步驟：(i)提供一適量的腐霉屬培養物；(ii)利用來自該適量腐霉屬培養物的基底而生長腐霉屬生物質；(iii)從該腐霉屬生物質萃取出一種三醯甘油脂油，其中該三醯甘油脂油包含大於20%細胞乾重重量百分比的細胞脂質，且在該至少一種三醯甘油脂油所包含的總脂肪酸中，大於10%為二十碳五烯酸(EPA)。
圖1為說明在本發明中所解決問題之一面相之一圖表，當腐霉屬中的細胞脂質增加至大於細胞乾重(DCW)的20%時，細胞脂質中的EPA則降低至小於總脂肪酸的10%。因此過去無法從含有經濟上可行量(大於細胞乾重重量百分比20%)細胞脂質之腐霉屬生物質中，得到含有高量(大於其總脂肪酸的10%)EPA的三醯甘油脂油。
本發明係關於一種三醯甘油脂油之生產，且該三醯甘油脂油是生產自一種藻類的腐霉屬菌種。在一實施例中，此藻類菌種包含至少約百分之二十重量百分比的總脂質，且其總脂肪酸中包含至少約百分之十重量百分比的二十碳五烯酸(EPA)，以及總脂肪酸中少於約百分之五重量百分比的二十碳四烯酸(ARA)。在另一實施例中，本發明係關於從一種藻類的腐霉屬菌種生產二十碳五烯酸(EPA)之多種方法。具體而言，畸雌腐黴可作為可行的生產生物體。
熟習本發明所屬技術領域者會認為腐霉屬生物過去被分類 為真菌，但現在已知其已從真菌分離演化，並與褐藻(brown algae)與矽藻(diatoms)有更近緣之關係。其目前的分類為：界：囊泡藻界(Chromalveolata)；門：不等鞭毛門(Heterokontophyta)；綱：卵菌綱(Oomycetes)；目：腐霉目(Pythiales)；科：草苗立枯病菌科(Pythiaceae)；屬：腐霉屬。腐霉屬為一群生理上類似真菌之花絲狀單細胞生物，並且因為其過去的分類，所以常被視為或稱為真菌。本說明書中，該些生物可能被稱為藻類或真菌，或根據較新的分類視為卵菌類。本發明操作可能使用腐霉屬之示例菌種包含，但不限於，畸雌腐黴、終極腐黴(Pythium ultimum )、腐皮病誘發腐黴(Pythium insidiuosum )、德巴利腐黴(Pythium debaryanum )、間型腐黴(Pythium intermedium )、翠菊立枯病菌(Pythium megalacanthum )、側雄腐黴(Pythium paroecandrum )、以及林栖草腐黴(Pythium sylvaticum )。在又另一實施例中，在本說明書所使用之術語「腐霉屬菌種」，係指任何可被用於產生EPA及/或可透過基因改造或其他方式改造以產生EPA之腐霉屬菌種。因此，在一實施例中，本發明之腐霉屬菌種可為藉由經典突變或分子生物/基因工程取得之突變種或轉形體菌株。在另一實施例中，用於生產EPA之腐霉屬菌種為經由經典突變或分子生物/基因工程取得之畸雌腐黴突變種或轉形體菌株。
以商業規模製備富含脂肪酸之腐黴屬生物質，可藉由使用任何合適的工業設備來進行，例如可容納10到100m3 體積之發酵槽或反應容器。熟習本發明所屬技術領域者普遍已知悉此類容器，且此類容器除包含添加和移除培養液之裝置外，亦可包含例如抽樣培養液(例如用於測量pH值)之裝置、監控和調節溫度之裝置；供應氣體(例如空氣、氧氣等)給 培養物之裝置；以及攪拌培養液之裝置等等。
為開始工業規模培養，一般會取得一實質上純腐霉屬培養物(例如取自一菌株儲存所(如美國菌種保存中心)的一株野生種，或其他適當來源，其係透過經典突變產生、或透過分子生物工程製造等)，並用於在有利孢子形成之環境下開始腐霉屬之生長，例如在洋菜斜面培養基生長數天(如3到7天)，而且通常會對該洋菜斜面培養基補充葡萄糖和酵母抽出物，其pH值約5.5到6。為開始連續擴大規模之液體培養，首先製備一腐霉屬孢子的接種物，例如透過以蒸餾水、培養液等沖洗洋菜培養基表面，並把該孢子溶液加入一個適合該生物大規模生長之實驗室規模容器。該腐霉屬接種物中每公升接種的培養液中含有約105 到107 個孢子。接著，藉由起初先接種於一小體積(例如1到2公升)中，再依序轉移至更大的體積以逐漸增加該培養物。
培養腐霉屬時，要攪拌培養液並提供空氣或氧氣(通常為空氣)給生長中的培養物。舉例而言，攪拌可藉由搖動或旋轉在實驗室規模三角瓶培養之培養物(例如150到200rpm，通常約170rpm)進行，或藉由攪拌或攪動裝置，例如槳葉、葉輪、或一發酵罐培養中之另一合適機構裝置。在一發酵罐培養中，培養物生長時，該發酵罐是充氣或充氧的，通常為充氧的。一般而言，整個培養過程中氧氣濃度維持在約10%到80%的程度。熟習本發明所屬技術領域者會認為，提供空氣或氧氣給培養物，當氣體被吹入或形成氣泡穿過培養液時，亦可作為攪拌該培養物之方式。
通常，為了使富含脂肪酸生物質之生產最大化，腐霉屬的培養會分兩階段進行。在該微生物接種入培養液後，即在約20℃到30℃之溫 度中進行生長期，以促進生物質累積。一般而言，會使該培養維持在此溫度範圍約3到6天的時間。此後，為促進腐霉屬細胞中之脂肪酸累積，溫度會降低至約20℃或更低。持續在較低溫度中培養約1到3天的時間。因此，從開始接種至腐霉屬生物質之收成，總天數通常約為5至7天。
此後，腐霉屬生物質之收成，是藉由任何熟習本發明所屬技術領域者所知之多種合適裝置和方法中之任何一種來進行，舉例而言，藉由離心及/或過濾方式。該生物質依其預期用途進行後續加工，例如脫水和乾燥。
依本說明書所述培養之腐霉屬，生產出一種富含各種脂肪酸的生物質，該生物質可用於多種應用。在本發明一些實施例中，依本發明方法由腐霉屬生產的富含脂肪酸生物質，係以其「原狀(as is)」方式作使用，亦即在使用前未把脂肪酸自該生物質析出或分離。在此類實施例中，可把該生物質收集起來並直接使用(例如作為一濕的真菌團)，但更常是先予以作處理，即去除該生物質水分之一部分、大部分或全部。因此，本發明也含有多種形式之由腐霉屬生產之全脫水或部分脫水(乾燥)生物質，且該腐霉屬已受本說明書所述之培養而富含脂肪酸(如EPA)。此完整乾燥腐霉屬生物質可被用於例如作為食物來源或食品添加劑以餵養各種生物，如魚類(尤其是生長在水產養殖魚類「養殖場」之魚類)；雞和其他家禽(火雞、珠雞等等)；牛、綿羊、山羊、馬、以及其他通常飼養在「農場」環境之馴養動物(如狗、貓和家養寵物)等等。對於能因飲食攝取脂肪酸(尤其是EPA)而獲益之任何生物，該生物質能作為其食物或飲食補充品。特別讓人注意之處是，對蛋雞餵食該生物質，可提高雞蛋中脂肪酸的品質(種類)， 或提高雞蛋中較佳之脂肪酸量。同樣地，可對食用動物餵食該生物質，以提高肉中脂肪酸的品質(種類)，或增加肉中較佳脂肪酸量。一般而言，此類較佳之脂肪酸包含多元不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)，特別是指omega-3脂肪酸，例如EPA。
在本發明其他實施例中，該些脂肪酸，由其是EPA，可從生物質中析出，亦即實質上純化至不同程度，然後再作使用，如作為食物補充品或食品添加劑。此類脂肪酸配製品可能含有源自本發明腐霉屬生物質之一種或多種脂肪酸的一混合物，或者，可把該些脂肪酸分離出來，以提供一種或多種實質上純脂肪酸。
依本發明之方法所製備之生物質及/或脂肪酸可用於食物以外的用途。舉例而言，各種皮膚製劑、化妝品、肥皂、皮膚清潔劑、乳液、防曬乳、頭髮用品及其他製劑之配製，可包含該生物質本身，或一種或多種取自該生物質的脂肪酸。具體而言，各種「天然」或「環保」產品可被製備成及行銷為富含「天然」珍貴脂肪酸之生物質。
如上所述，腐霉屬為一種自然生產二十碳五烯酸(20：5,EPA)之絲狀真菌(藻類)。當總細胞脂質量為低量時(少於或等於細胞乾重重量百分比的10%)，細胞脂質中EPA量為高量，通常該EPA量的範圍在總脂肪酸的12至18%間。然而，當總細胞脂質量為低量時(少於或等於細胞乾重重量百分比的10%)，其可用己烷(hexane)萃取之脂質，包含三醯甘油脂(食物和營養補充品中常用的脂質形式)非常少量。可能可以藉由改變培養條件，而增加腐霉屬中細胞脂質總量至超過20%(細胞乾重重量百分比)。在這些條件下，細胞中的三醯甘油脂量為高量，並可合乎經濟效 益地被萃取(例如用己烷或其他溶劑)，以生產一種富含三醯甘油脂的油，其係適合作為食品成分或營養補充品。然而，當腐霉屬中細胞脂質量為高量時(例如至少約20%細胞乾重重量百分比)，EPA量減少至低量(少於總脂肪酸的10%)，如圖1中示例所示。富含EPA的三醯甘油脂油，如要作為一種適合用於食品成分或營養補充品之油脂，其EPA含量在較佳情況下應大於10%。應注意的是，某些腐霉屬菌種也會伴隨較高含量的二十碳四烯酸(如含量大於總細胞脂質的5%)。二十碳四烯酸(ARA)是一種omega-6多元不飽和脂肪酸20：4(ω-6)，其為一關鍵發炎反應中間物，也可作為血管舒張劑。因此對成人和動物食用上，ARA常被視為一種不好的脂肪酸。
因此，在一實施例中，本發明係關於自腐霉屬細胞獲取之一種三醯甘油脂油，其含有大於20%(細胞乾重重量百分比)且富含EPA(超過總脂肪酸10%)之細胞脂質。
本發明解決了問題，亦即讓人得以自腐霉屬真菌/藻類萃取出一種富含EPA且本質上不含DHA的營養三醯甘油脂油。儘管其他人曾藉由生長腐霉屬，以聚積高量的細胞脂質，但是無人成功自腐霉屬取得一種含有高量EPA(超過總脂肪酸的10%)的三醯甘油脂油，且其生物質含有大於細胞乾重重量百分比20%之細胞脂質。
腐霉屬細胞之培養，要在能容許顯著細胞生長(測量最終細胞乾重)和脂質累積(測量總脂質)之環境(降低之生長溫度)，該環境並能同時誘導細胞累積一種含有高量EPA(超過總脂肪酸10%)之細胞脂質。而且此油含有非常低含量的二十碳四烯酸(ARA)。
在一非限制性示例中，一50mL培養液產生超過10g/L之細 胞乾重，並生產一種含有超過25%重量百分比之脂質之腐霉屬生物質，且該脂質含有超過(總脂肪酸)10%的EPA。
本說明書中附件圖一詳述當細胞脂質增加至超過細胞乾重(DCW)20%時，細胞脂質中的EPA降低至少於總脂肪酸的10%。
下表1顯示依據本發明可取得之一種生物質，該生物質含有超過25%的細胞脂質且其細胞脂質中的EPA超過10%。富含EPA之三醯甘油脂油即可取自該生物質。
鑑於上述，在一實施例中，本發明讓人能生產一種獲取自一含腐霉屬之生物質之三醯甘油脂油，該三醯甘油脂油包含：大於20%細胞乾 重重量百分比的細胞脂質；總脂肪酸中大於10%為二十碳五烯酸(EPA)。在另一實施例中，本發明係關於從腐霉屬生物質中獲取之一種三醯甘油脂油，該三醯甘油脂油包含：大於20%細胞乾重重量百分比的細胞脂質；總脂肪酸中大於10%為二十碳五烯酸(EPA)，而且其中二十碳四烯酸(ARA)占總脂肪酸量小於5%。因此，在某些實施例中，本發明能夠生產一種含一獨特脂質及/或脂肪酸含量之三醯甘油脂油，並同時產生一種含有較少量ARA之三醯甘油脂油。
在又另一實施例中，本發明係關於一生產至少一種三醯甘油脂油的程序，該程序係自甘油(天然或精製的)、葡萄糖/右旋糖、乳糖、木糖、蔗糖、果糖、或其中任何合適的兩者種或更多者之組合中選擇一原料，並使用一發酵步驟作為完成之方法。在又另一實施例中，本發明係關於一生產至少一種三醯甘油脂油的程序，該程序使用一包含合適的氮源如酵母抽出物、DAP、尿素、NaNO3 、CSL等之合適培養液，培養液中含有足夠的氮含量有利於生物質的生長，其氮濃度每公升至少30g。
以下示例應作概括解釋且本質上係非限制性。
培養富含脂質之生物質
畸雌腐黴ATCC 10951被培養在含有50mL M#1(YE)培養液的250mL錐形瓶中。該培養液含有30g/L葡萄糖、3.0g/L酵母抽出物、7.0g/L KH2 PO4 、1.5g/L MgSO4 ˙7H2 O、0.1g/L CaCl2 ˙2H2 O、1.0g/L NaCl、4.8mg/L FeCl3 、1mg/L ZnSO4 ˙7H2 O、0.1mg/L CoCl2 ˙6H2 O、0.1mg/L CuCl2 ˙2H2 O、及0.1mg/L MnSO4 ˙H2 O。該搖瓶以1mL的菌絲懸浮液接種，該菌絲懸浮液之生產，係藉由在一含有10mL無菌蒸餾水以及約20個直徑5mm無菌玻璃球 之無菌管中，渦動一塊包含一層畸雌腐黴之1.5cm x 1.5cm M#1(YE)瓊脂平皿[M#1(YE)加入20g/L瓊脂]截面。
該搖瓶在5℃中培養(不攪拌)4至8周。該生物質係以15000 x g離心5分鐘之方式收成，並立即去除上清液。該生物質以40mL蒸餾水沖洗後冷凍乾燥。
萃取高EPA含量的油脂
該冷凍乾燥生物質以研缽和杵搗研磨，形成細粉末。該粉末被置入一預先秤重的錐形瓶，並以重量分析測定生物質質量。在該乾燥生物質中每公克加入五毫升的己烷，接著再週期性地攪拌該生物質/己烷漿液，並在實驗室溫度培養至少16小時。該生物質經由過濾從己烷抽出物(微團)去除，在重力作用下通過Whatman No.1濾紙後，該乾燥生物質再另以每公克2mL之己烷予以沖洗。該微團在旋轉揮發儀中(rotavap)被縮減至乾燥，接著三醯甘油脂(TAG)再溶解在乙酸乙酯(ethyl acetate)中。該TAG溶液通過玻璃絨濾器(玻璃絨塞入玻璃滴管中)過濾至一個預先秤重的管中。乙酸乙酯在氮氣流下去除，而萃取的TAG量則以重量分析測定。
脂質分析
取一萃取出之TAG樣品(約20mg)，並用含有2mL MeOH和0.15mL氯化乙醯(acetylchloride)之反應混合物予以酯化。該反應混合物被加熱至55℃達4小時後冷卻。該甲基酯化脂肪酸(FAME)配製品以乾燥的Na2 CO3 予以中和，並通過一0.45m尼龍過濾器予以過濾。該濾過液係用於氣相色層分析(GC analysis)。
該脂肪酸特性係利用Zebrum ZB Wax層析柱(長30公尺，直 徑0.25mm)做氣相色層分析予以測定。恆溫箱起始溫度為160℃，並以每分鐘10℃上升至250℃。該層析柱接著在250℃維持9分鐘。注入器與偵測器溫度為250℃。該FAMEs係用火焰遊離偵測器(flame ionization detector)偵測，並根據滯留時間以及與可信標準比對結果予以識別。
儘管依專利成文法，本發明之最佳模式及某些實施例均已在此作闡述說明，但本發明範圍不限於本說明書，而是受後附專利申請範圍之限制。因此，在本發明的實質精神與範圍內可以有其他的變化型，而且該其他變化型將會為熟習本發明所屬技術領域者所知悉。

Claims (9)

  1. 從腐霉屬生物質中獲取之一種三醯甘油脂油，該三醯甘油脂油包含：大於20%細胞乾重重量百分比的細胞脂質；及總脂肪酸中大於10%為二十碳五烯酸(EPA)。
  2. 如申請專利範圍第1項之三醯甘油脂油，其中用於使腐霉屬生物質生長之基質係選自葡萄糖、右旋糖、乳糖、木糖、蔗糖、果糖、或其中任兩者之適當組合。
  3. 如申請專利範圍第1項之三醯甘油脂油，其中該生物質更包含至少一氮源，且該氮源係選自酵母抽出物、DAP、尿素、NaNO3 、CSL、或其中兩者或更多者之組合。
  4. 從腐霉屬生物質中獲取之一種三醯甘油脂油，該三醯甘油脂油包含：大於20%細胞乾重重量百分比的細胞脂質；及總脂肪酸中大於10%為二十碳五烯酸(EPA)，而且二十碳四烯酸(ARA)占總脂肪酸量小於5%。
  5. 如申請專利範圍第4項之三醯甘油脂油，其中用於使腐霉屬生物質生長之基質係選自葡萄糖、右旋糖、乳糖、木糖、蔗糖、果糖、或其中任兩者之適當組合。
  6. 如申請專利範圍第4項之三醯甘油脂油，其中該生物質更包含至少一氮源，且該氮源係選自酵母抽出物、DAP、尿素、NaNO3 、CSL、或其中兩者或更多者之組合。
  7. 一種生產至少一種三醯甘油脂油的程序，該程序包含以下步驟：(i)提供一適量的腐霉屬培養物；(ii)利用來自該適量腐霉屬培養物的基質生長一腐霉屬生物質；(iii)從該腐霉屬生物質萃取出一種三醯甘油脂油，其中該至少一種三醯甘油脂油包含大於20%細胞乾重重量百分比的細胞脂質，且在該至少一種三醯甘油脂油所包含的總脂肪酸中，大於10%為二十碳五烯酸(EPA)。
  8. 如申請專利範圍第7項之方法，其中用於使腐霉屬生物質生長之基質係選自葡萄糖、右旋糖、乳糖、木糖、蔗糖、果糖、或其中任兩者之適當組合。
  9. 如申請專利範圍第7項之三醯甘油脂油，其中該生物質更包含至少一氮源，且該氮源係選自酵母抽出物、DAP、尿素、NaNO3 、CSL、或其中兩者或更多者之組合。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105506008A (zh) * 2015-12-03 2016-04-20 福建师范大学 一种富含ω-3脂肪酸单甘脂的制备方法
FR3085962B1 (fr) 2018-09-14 2021-06-18 Fermentalg Procede d'extracton d'une huile riche en pufa
FR3111912A1 (fr) 2020-06-24 2021-12-31 Fermentalg Procédé de culture de microorganismes pour l’accumulation de lipides

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090286292A1 (en) * 2008-05-19 2009-11-19 Zhiyou Wen Producing eicosapentaenoic acid (epa) from biodiesel-derived crude glycerol

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6255505B1 (en) 1996-03-28 2001-07-03 Gist-Brocades, B.V. Microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
CN101434908B (zh) * 2008-12-10 2010-12-01 华中科技大学 产二十碳五烯酸油脂的腐霉及该油脂的发酵制备方法
EP2519332B1 (en) * 2009-12-30 2014-03-05 BASF Pharma (Callanish) Limited Simulated moving bed chromatographic separation process for the purification of polyunsaturated fatty acids
AU2011293180B2 (en) * 2010-08-26 2017-03-02 E. I. Du Pont De Nemours And Company Recombinant microbial host cells for high eicosapentaenoic acid production
JP2014510166A (ja) * 2011-02-11 2014-04-24 イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー 短行程蒸留を使用する微生物源からのトリグリセリド油の精製

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090286292A1 (en) * 2008-05-19 2009-11-19 Zhiyou Wen Producing eicosapentaenoic acid (epa) from biodiesel-derived crude glycerol

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