TWI402039B

TWI402039B - 用於降低免疫壓力之酵素

Info

Publication number: TWI402039B
Application number: TW095147220A
Authority: TW
Inventors: David M Anderson; Humg-Yu Hsiao; Lin Liu
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 2005-12-15
Filing date: 2006-12-15
Publication date: 2013-07-21
Also published as: MX2008007735A; RU2465005C2; US20070141041A1; ES2361819T3; NZ569186A; EP2263685A3; SV2008002942A; US20170156371A1; SI1973561T1; GT200600512A; KR101399205B1; AR057247A1; ZA200805780B; CR10116A; CN105831428A; US20110171345A1; KR101454032B1; HN2008000906A; ATE497779T1; AU2006329927B2

Description

用於降低免疫壓力之酵素

本發明提供一種降低免疫壓力且改良動物生長效能之組合物及方法。詳言之，本發明提供一種包含酵素之組合物，該等酵素有效降低免疫壓力，或有效治療或預防感染，或有效改良動物生長效能。本發明亦提供一種使用該等組合物之方法。

出於眾多原因，動物可能經歷免疫壓力，該等原因包括暴露於動物之免疫系統識別之抗原。抗原可引發免疫反應，該免疫反應為適應性免疫反應或為先天免疫反應。當引發免疫反應時，動物因其免疫系統對所察覺之威脅產生反應而經歷免疫壓力。免疫壓力通常妨礙動物生長效能。

急性期蛋白質(APP)為一組血蛋白質，當動物經歷諸如：感染、發炎、外傷或其他內部挑釁或外部挑釁之壓力時，該血蛋白質之血液濃度發生變化。參見，例如Murata等人，Vet.1 168：28(2004)。咸信APP在動物之先天免疫反應中發揮作用。舉例而言，APP可涉及恢復體內平衡且限制微生物生長直至發展後天免疫性。

APP包括濃度隨壓力而降低之"陰性"蛋白質，及濃度隨壓力而增加之"陽性"蛋白質。參見，例如Murata等人，前述。陰性APP包括白蛋白及轉鐵蛋白。陽性APP包括由肝細胞在受前發炎性細胞激素刺激之後合成的且釋放至血流中的蛋白質，諸如肝球蛋白、C－反應性蛋白、血清澱粉狀蛋白A、血漿銅藍蛋白、血纖維蛋白原及α－1－酸糖蛋白(AGP)。亦已報導大多數哺乳動物物種之肝外產生APP。Id.咸信諸如介白素－6(IL－6)及腫瘤壞死因子α(TNF－α)之前發炎性細胞激素為肝中APP合成之主要介體。發炎、感染或組織損傷引發專門防禦之細胞釋放細胞激素，從而誘導APP合成。陽性APP之誘導亦與陰性APP之合成之降低相關聯。Id.

已建立定量APP之方法，且循環APP濃度(例如，血清APP之含量)已與動物之病狀之嚴重性相關。Id.因此，APP濃度可用作動物之免疫壓力程度之指示劑。

動物之免疫系統可識別並不對動物之健康造成真正威脅的抗原，該等抗原諸如動物飼料組合物中之源自植物之成分及源自動物之成分。該等抗原可引發諸如先天免疫反應之免疫反應，從而使得動物經歷免疫壓力。該壓力反應可經由血清APP濃度來鑑別且監測。

即使當引發免疫之抗原並不對動物之健康造成真正的威脅時，壓力反應亦會產生不利影響。可觀察到(例如)飼料效率之降低、重量增益速率之降低或重量之降低、感染易感性之增加，或體溫之增加之此不利影響。

已描述使用諸如抗磷脂酶A2抗體之抗體降低動物體內之腸胃發炎。參見，例如美國專利第6,383,485號。已描述，為獲得改良之飼料效率，飼料組合物包含能夠降解含β－甘露聚糖之半纖維素的半纖維素酶(例如β－甘露聚糖酶型半纖維素酶)，諸如，內－1,4－β－甘露聚糖酶或諸如磷脂酶A2之磷脂酶。參見，例如WO 97/41739、美國專利第6,162,473號及美國專利第6,183,739號。

又描述包含裂解鍵之酵素(諸如PI－PLC)之飼料組合物，從而實現細胞表面蛋白質或碳水化合物之釋放以治療或預防消化道感染。參見，例如WO 01/41785。Walsh等人，J.Anim.Sci.73：1074(1995)，其討論包含裂解混合聯結葡聚糖受質之葡聚糖酵素之飼料組合物，該等酵素諸如降解混合β－1,3、β－1,4－受質之1,4－β－葡聚糖酶。然而，在吾人之試驗中，PI－PLC與1,4－β－葡聚糖酶均未呈現降低免疫壓力之活性。

迄今，不存在包含酵素之飼料組合物之描述，該酵素非β－甘露聚糖酶型半纖維素酶或磷脂酶且其以有效降低免疫壓力之量存在。

因此，存在對用於降低動物體內免疫壓力之組合物及方法論的需要。

一實施例提供一種適合經口向動物投與之組合物，該組合物包含於經口可接受之載劑中之降低免疫壓力的酵素。該組合物係選自由以下各物組成之群：(i)動物飼料，其包含一定量之酵素，該量之酵素有效降低動物體內陽性急性期蛋白質之含量，增加動物體內陰性急性期蛋白質之含量，及/或改良動物生長效能；(ii)非動物飼料之液體組合物，其包含至少40,000 IU酵素/公升；及(iii)非動物飼料之固體組合物，其包含至少40,000 IU酵素/公斤。該酵素非β－甘露聚糖酶型半纖維素酶或磷脂酶，且若該酵素包含1,3－β－葡聚糖酶，則該組合物係選自由以下各物組成之群：(i)動物飼料，其包含至少20 IU 1,3－β－葡聚糖酶/公斤飼料；(ii)非動物飼料之液體組合物，其包含至少155,000 IU 1,3－β－葡聚糖酶/公升；及(iii)非動物飼料之固體組合物，其包含至少300,000 IU 1,3－β－葡聚糖酶/公斤。

在一實施例中，該組合物為動物飼料，該動物飼料包含至少20 IU酵素/公斤飼料。在另一實施例中，該組合物為非動物飼料之固體組合物，該固體組合物包含至少80,000 IU酵素/公斤，或包含至少160,000 IU酵素/公斤。

在一實施例中，該組合物為包含誘導動物體內免疫反應之成分的動物飼料且該酵素包含降解該成分之酵素。在一實施例中，該成分為由病原微生物呈現之抗原。

在一實施例中，該酵素包含1,3－β－葡聚糖酶。在一實施例中，該酵素包含1,3－β－葡聚糖酶且該組合物係選自由以下各物組成之群：(i)動物飼料，其包含至少30 IU 1,3－β－葡聚糖酶/公斤飼料；(ii)非動物飼料之液體組合物，其包含至少230,000 IU 1,3－β－葡聚糖酶/公升；及(iii)非動物飼料之固體組合物，其包含至少450,000 IU 1,3－β－葡聚糖酶/公斤。

另一實施例中提供一種適合經口向動物投與之組合物，該組合物包含兩種或兩種以上降低免疫壓力之酵素，其中該組合物包含至少一種非1,4－β－甘露聚糖酶及1,3－β－葡聚糖酶之降低免疫壓力之酵素。該組合物係選自由以下各物組成之群：(i)動物飼料，包含一定量之該等降低免疫壓力之酵素，該量之酵素有效降低該動物體內之陽性急性期蛋白質之含量，增加該動物體內陰性急性期蛋白質之含量，及/或改良動物生長效能；(ii)非動物飼料之液體組合物，包含至少一種至少40,000 IU酵素/公升之量的降低免疫壓力之酵素；及(iii)非動物飼料之固體組合物，包含至少一種至少40,000 IU酵素/公斤之量的降低免疫壓力之酵素。

在一實施例中，該組合物為動物飼料，該動物飼料包含至少一種至少20 IU酵素/公斤飼料之量的降低免疫壓力之酵素。在另一實施例中，該組合物為非動物飼料之固體組合物，該固體組合物包含至少一種至少80,000 IU酵素/公斤或至少160,000 IU酵素/公斤之量的降低免疫壓力之酵素。

在特定實施例中，該組合物係選自由以下各物組成之群：(i)包含1,4－β－甘露聚糖酶及殼糖酶之組合物；(ii)包含1,4－β－甘露聚糖酶及木葡聚糖酶之組合物；(iii)包含1,4－β－甘露聚糖酶及阿拉伯聚糖酶之組合物；(iv)包含1,3－β－葡聚糖酶及殼糖酶之組合物；(v)包含1,3－β－葡聚糖酶及木葡聚糖酶之組合物；(vi)包含1,3－β－葡聚糖酶及阿拉伯聚糖酶之組合物；及(vii)包含1,4－β－甘露聚糖酶、1,3－β－葡聚糖酶及阿拉伯聚糖酶之組合物。

另一實施例提供一種適合經口向動物投與之包含1,4－β－甘露聚糖酶及1,3－β－葡聚糖酶之組合物。該組合物係選自由以下各物組成之群：(i)動物飼料，包含1,4－β－甘露聚糖酶及至少20 IU 1,3－β－葡聚糖酶/公斤飼料；(ii)非動物飼料之液體組合物，包含1,4－β－甘露聚糖酶及至少155,000 IU 1,3－β－葡聚糖酶/公升；及(iii)非動物飼料之固體組合物，包含1,4－β－甘露聚糖酶及至少300,000 IU 1,3－β－葡聚糖酶/公斤。在一實施例中，該組合物係選自由以下各物組成之群：(i)動物飼料，包含1,4－β－甘露聚糖酶及至少30 IU 1,3－β－葡聚糖酶/公斤飼料；(ii)非動物飼料之液體組合物，包含1,4－β－甘露聚糖酶及至少230,000 IU 1,3－β－葡聚糖酶/公升；及(iii)非動物飼料之固體組合物，包含1,4－β－甘露聚糖酶及至少450,000 IU 1,3－β－葡聚糖酶/公斤。在一實施例中，該組合物進一步包含一或多種其他降低免疫壓力之酵素。

另一實施例提供一種改良動物生長效能及/或降低動物體內免疫壓力之方法，該方法包含經口向該動物投與任一種上述組合物。

在一實施例中，該動物係經投與誘導動物體內免疫反應之成分及包含至少一種降解該成分之降低免疫壓力之酵素的組合物。在一實施例中，該成分及酵素在同一組合物中投與。在一實施例中，該組合物為動物飼料。在一實施例中，該成分為由病原微生物呈現之抗原。

另一實施例提供一種預防或治療與呈現抗原之病原微生物相關聯之感染的方法，該方法包含經口向需要該方法之動物投與任一種上述組合物，其中該組合物包含至少一種降解抗原之降低免疫壓力之酵素。

如以下討論所使用，應理解，除非另有說明，否則術語"一"涵蓋一或多者。

如本文所使用，術語"動物"係指包括人類及其他動物之任何動物，該等其他動物包括諸如狗及貓之伴侶動物，諸如乳牛及其他反芻動物、水牛、馬、豬、羊的家畜，家禽(例如，雞、鴨、火雞及鵝)及水產動物(例如，魚及蝦及鰻)。

在本說明書中，短語"降解抗原之酵素"及"降解成分之酵素"意謂使抗原或成分轉化為不為動物之免疫系統所識別之形式的酵素。酵素降解抗原或成分之能力可藉由量測動物之血清APP濃度來鑑別，由此血清中陽性APP之濃度之降低或血清中陰性APP之濃度之增加指示酵素已降解抗原或成分。

如上所說明，術語"APP"包括濃度隨壓力降低之"陰性"蛋白質及濃度隨壓力增加之"陽性"蛋白質。本發明包括增加其濃度通常隨壓力降低之陰性急性期蛋白質之濃度的組合物及方法，以及降低其濃度通常隨壓力增加之陽性急性期蛋白質之濃度的組合物及方法。為方便起見，在以下討論中，本發明係參考對於陽性急性期蛋白質之組合物及方法之效應來舉例。因此，以下討論中，術語"APP"通常係指任何一或多種與動物之壓力反應相關聯之陽性急性期蛋白質。應理解，本文以降低"APP"(指陽性急性期蛋白質)之濃度描述之組合物及方法亦適用於增加陰性急性期蛋白質之濃度。

本發明之一態樣係關於包含酵素之組合物，該酵素有效降低動物經歷之免疫壓力。為方便起見，該等酵素在本文中係指"降低免疫壓力"之酵素。如本文所使用，術語"降低免疫壓力之酵素"意謂任何降解由動物免疫系統識別之抗原或分子模式(例如引發免疫反應，從而使動物經歷免疫壓力之抗原或分子模式)的酵素。如本文所使用之術語"分子模式"包括在先天免疫系統情況下經受體限制之一般分子模式，諸如通常與病原體相關聯之分子模式。

根據一實施例，降低免疫壓力之酵素不為β－甘露聚糖酶型半纖維素酶。根據該實施例之一實施例中，降低免疫壓力之酵素不為內－1,4－β－D－甘露聚糖酶。根據另一實施例，該酵素不為磷脂酶。根據另一實施例，該降低免疫壓力之酵素不為1,4－β－D－葡聚糖酶。根據另一實施例，該降低免疫壓力之酵素不為PI－PLC。根據另一實施例，該降低免疫壓力之酵素不為β－甘露聚糖酶型半纖維素酶或磷脂酶。根據又一實施例，該降低免疫壓力之酵素不為β－甘露聚糖酶型半纖維素酶，不為1,4－β－葡聚糖酶，且不為磷脂酶。根據又一實施例，該降低免疫壓力之酵素不為β－甘露聚糖酶型半纖維素酶，不為1,4－β－葡聚糖酶，不為磷脂酶，且不為PI－PLC。根據上述實施例之任一者之一態樣，該酵素不為1,3－β－葡聚糖酶。

雖然不願受任何理論限制，但本發明者咸信降低免疫壓力之酵素對抗原或分子模式之降解抑制或降低由抗原或分子模式引發之免疫反應，從而降低動物之免疫壓力。該免疫壓力之降低可使用此項技術已知之定量APP之方法藉由量測動物之血清APP濃度來鑑別且監測。該等方法之實例提及於Murata，等人，前述中，且描述且引用於Hulten等人，Vet.Microbiol. 95：75(2003)及Holt等人，前述中以及下述實例1中。

在一相關實施例中，本發明提供降低動物體內免疫壓力之方法，該方法包含向該動物投與包含一定量之降低免疫壓力之酵素的組合物，該量之酵素有效降低動物體內APP之含量。

已鑑別大量不同陽性急性期蛋白質，包括：α－1－酸性糖蛋白(AGP)、血漿銅藍蛋白(Cp)、膠原蛋白凝集素(collectin)家族之蛋白質(例如，肺表面活性蛋白、黏合素及甘露聚糖結合凝集素)、血纖維蛋白原(Fb)、C－反應性蛋白(CRP)、肝球蛋白、蛋白酶抑制劑(例如，α－1－抗胰蛋白、α－1－抗胰凝乳蛋白酶及α－2－巨球蛋白)及血清澱粉狀蛋白－A(SAA)。其他潛在APP包括脂多醣結合蛋白質(LPB)、諸如膜聯蛋白(annexin)及主要急性期蛋白質(MAP)之磷脂結合蛋白質。Murata等人，前述。根據本發明，血清中該等APP或其他APP之任一種之濃度可用於鑑別、評估且監測酵素活性。

不同APP在不同動物之壓力反應中可能發揮更重要的作用。舉例而言，已知AGP在臨床上對牛很重要，且在豬、狗、貓及雞(包括母雞)中與感染相關聯。已報導Cp在牛、馬及雞中為感染之指示劑。雖然並未證明CRP在牛中為APP，但CRP已在反芻動物、馬、豬、狗及貓中經鑑別。已展示CRP與馬及豬之感染相關聯。Fb在牛及羊中為發炎、細菌感染或外傷之可靠指示劑，且在馬中與感染相關聯。Hp在大量生產及伴侶動物中為APP，該等動物包括諸如牛、羊之反芻動物，豬，馬及狗。SAA在牛中與發炎及感染相關聯，且在馬、豬、諸如狗之伴侶動物及雞中與感染相關聯。已發現在具有乳房炎之乳牛及母羊中乳SAA含量之增加。如同膜聯蛋白之局部含量(受感染之牛之肺之分泌上皮之表面上)一樣，血清LBP在牛中與感染相關聯。報導MAP在豬中為感染指示劑。另外，雖然通常將轉鐵蛋白視為陰性急性期蛋白質，但其在雞中似乎扮演陽性急性期蛋白質的角色。Murata，等人，前述；Holt等人，家禽Sci.81：1295－1300(2002)。其他文獻亦報導：SAA及Hp以及CRP及MAP在豬中與感染相關聯。Hulten等人，前述。

在一些實施例中，本發明之組合物包含一定量之降低免疫壓力之酵素，該量之酵素有效降低動物體內血清APP之濃度。該量可視動物及降低免疫壓力之酵素而變化且可由熟習此項技術者使用此項技術已知之方法容易地測定。舉例而言，動物之血清APP含量可在投與酵素之前及之後量測，或可比較等效治療之動物與對照動物之血清APP含量。(在該方面，因為APP含量可能隨年齡而變化，所以比較相同年齡之治療動物與對照動物可能係有利的。舉例而言，吾人已發現血清AGP含量隨雞之年齡變化而增加。)與酵素之投與相關聯之血清APP濃度之降低指示已投與有效量之酵素。

在其他實施例中，本發明之組合物包含一定量之降低免疫壓力之酵素，該量之酵素有效改良動物生長效能(亦指"活效能"，尤其在家禽領域)。如本文使用，短語"動物生長效能"包括任何反映動物生長之參數，包括飼料轉化率、水吸收率、糞便水含量、一組動物之體重之均勻性、生存力及死亡率。雖然不願受任何理論限制，但咸信在一些情況下，降低免疫壓力之酵素對APP濃度之影響受諸如誘導免疫壓力因子之因子影響，該等誘導免疫壓力因子諸如一組動物之低程度感染之存在或充滿壓力之生活狀況。在該等情況下，降低免疫壓力之酵素仍可有效改良動物生長效能。因此，動物生長效能為本發明之組合物及方法之有效性之替代量度。

組合物可為任何適合向動物投與之組合物。在一實施例中，組合物適合經口投與。在一特定實施例中，通常認為適合經口投與之組合物經口向動物投與為安全的。在另一特定實施例中，適合經口投與之組合物僅含有通常認為可安全地經口投與動物的成分及該等成分量。在另一特定實施例中，適合經口投與之組合物並不含有通常認為非安全地經口投與動物的任何成分或該等成分量。在另一特定實施例中，適合經口投與之組合物僅含有經允許或不被禁止經口投與動物的成分及該等成分量。在另一特定實施例中，適合經口投與之組合物並不含有不允許或被禁止經口投與動物的任何成分或該等成分量。

在一些實施例中，該組合物包含用於酵素之經口可接受之載劑。如本文所使用，"經口可接受之載劑"包括任何適合經口投與之生理學上可接受之載劑。經口可接受之載劑包括(不限於)適合用於動物飼料產品及/或適合經口向動物投與之動物飼料組合物、水性組合物及液體組合物及固體組合物。此項技術已知合適載劑，且該等合適載劑包括美國專利6,780,628所述之彼等載劑。

在一些實施例中，該組合物為動物飼料。如本文所使用，術語"動物飼料"具有其在畜牧領域中習知之意義。舉例而言，動物飼料包括家畜為獲得其營養價值而消耗之食用物質。動物飼料包括例如符合動物營養需求之組合物之飼料飼糧，亦包括並不符合動物營養需求之組合物。

在該實施例之特定實例中，酵素之量為每U.S.噸飼料至少約50,000個國際單位(IU)，每噸飼料至少約60,000 IU，每噸飼料至少約70,000 IU，每噸飼料至少約80,000 IU，每噸飼料至少約90,000 IU，每噸飼料至少約100,000 IU，每噸飼料至少約200,000 IU，或每噸飼料至少約500,000 IU，或更高。

在其他特定實例中，本發明提供包含一定量之降低免疫壓力之酵素的動物飼料，該量為至少約20 IU/公斤飼料，諸如：至少20 IU/公斤飼料、至少25 IU/公斤飼料、至少30 IU/公斤飼料、至少35 IU/公斤飼料、至少40 IU/公斤飼料、至少45 IU/公斤飼料、至少50 IU/公斤飼料或更多。雖然不願受任何理論限制，但咸信包含至少約20 IU/公斤飼料之量之降低免疫壓力之酵素的動物飼料將有效降低該動物體內陽性急性期蛋白質之含量，增加該動物體內陰性急性期蛋白質之含量，及/或改良動物生長效能。

因此，在一些實施例中，本發明提供包含一定量之降低免疫壓力之酵素的動物飼料，該量之酵素可有效降低動物體內陽性急性期蛋白質之含量、增加動物體內陰性的急性期蛋白質之含量，及/或改良動物生長效能。

飼料組合物可由此項技術已知之方法製備。舉例而言，降低免疫壓力之酵素可在製造過程中熟習此項技術者認為適合之任何階段添加至其他飼料成分中。在一實施例中，該酵素係呈溶液提供，諸如在製造過程中添加至其他飼料成分中之液體酵素濃縮物。或者，將含酵素之溶液噴灑於動物飼料之大體上最終之形式上。在另一實施例中，該酵素係呈固體組合物(諸如粉末)提供，諸如在製造過程中添加至其他飼料成分中之固體組合物。製造含酵素飼料之例示性方法係描述於WO 97/41739中。

在一些實施例中，該組合物非動物飼料。舉例而言，組合物可為非動物飼料之液體組合物或非動物飼料之固體組合物。該等組合物可適合直接向動物投與或可用作飼料添加劑(例如在餵食之前添加至飼料中)或用作飼料補充劑(包括餵食之前用其他飼料組分稀釋之補充劑及以自由選擇、單獨提供為原則向動物提供之補充劑)。非動物飼料之液體組合物之實例包括液體酵素濃縮物，包括在經口向動物投與之前，通常用其他成分稀釋或與其他成分組合之液體酵素濃縮物。

在組合物為諸如酵素溶液之非動物飼料之液體組合物的實施例中，該液體組合物或溶液可包含每公升溶液至少約40,000個國際單位(IU)，諸如至少40,000 IU/L、至少50,000 IU/L、至少60,000 IU/L、至少70,000 IU/L、至少80,000 IU/L、至少90,000 IU/L、至少100,000 IU/L、至少約500,000 IU/L、至少約600,000 IU/L、至少約700,000 IU/L、至少約800,000 IU/L、至少約900,000 IU/L、至少約1,000,000 IU/L、至少約2,000,000 IU/L或至少約5,000,000 IU/L。

在一些實施例中，一定量之非動物飼料之液體組合物(諸如約500 mL溶液)係施加於一定量之飼料中或與一定量之飼料組合(諸如施加於一噸飼料中)以達成具有上述酵素含量之飼料調配物。在其他實施例中，一定量之非動物飼料之液體組合物係施加於一定量之飼料中或與一定量之飼料組合以製備具有一定量之酵素之動物飼料，該量之酵素有效降低動物體內陽性急性期蛋白質之含量，增加動物體內陰性急性期蛋白質之含量，及/或改良動物生長效能。

咸信當前可利用之適合經口投與之液體酵素濃縮組合物(非以下討論之1,3－β－葡聚糖酶組合物)包含(即使包含一些，亦)比至少約40,000 IU/L少得多的降低免疫壓力之酵素，且當根據其說明書使用時，其並不有效降低陽性急性期蛋白質之含量，增加陰性急性期蛋白質之含量，及/或改良動物生長效能。

在組合物為非動物飼料之固體組合物之實施例中，該組合物可包含至少約40,000 IU//kg，諸如至少40,000 IU/kg、至少50,000 IU/kg、至少60,000 IU/kg、至少70,000 IU/kg、至少80,000 IU/kg、至少90,000 IU/kg、至少100,000 IU/kg、至少120,000 IU/kg、至少140,000 IU/kg、至少160,000 IU/kg、至少180,000 IU/kg、至少200,000 IU/kg或更多。

在一些實施例中，一定量之非動物飼料之固體組合物係施加於一定量之飼料中或與一定量之飼料組合以產生具有上述酵素含量之飼料調配物。在其他實施例中，一定量之非動物飼料之固體組合物係與一定量之飼料組合以製備具有一定量酵素之動物飼料，該量之酵素有效降低動物體內陽性急性期蛋白質之含量，增加動物體內陰性急性期蛋白質之含量，及/或改良動物生長效能。

咸信當前可利用之適合經口投與之固體酵素粉末組合物包含(即使包含一些，亦)比至少約40,000 IU/kg少得多的降低免疫壓力之酵素，且當根據其說明書使用時，其並不有效降低陽性急性期蛋白質之含量，增加陰性急性期蛋白質之含量，及/或改良動物生長效能。

如此項技術所習知，術語"IU"或"國際單位"係指酵素在最佳條件下每分鐘應催化1微莫耳受質之轉化的酵素的量。此項技術已知降低免疫壓力之酵素之國際單位之重量當量，且該等重量當量可使用標準檢定法測定。用於代表性降低免疫壓力之酵素之例示性標準檢定法概述如下。

在一實施例中，該酵素係由用於動物飼料之植物表現。舉例而言，玉米可經基因工程化以表現降低免疫壓力之酵素且所得之經基因修飾之玉米產品可用於飼料。產品亦可用其他基因修飾之系統或傳統修飾之系統來實現，該等系統諸如：例如大腸桿菌(E.coli )、桿菌屬(Bacillus sp. )、乳桿菌(Lactobacillus )之細菌，例如畢赤酵母(Pichia )、羊舊草(Yarrow )、植酵母(Saccharomyces )、裂殖酵母屬(Schizosaccharomyces )(例如裂殖酵母菌(Schizosaccharomyces pomb )、漢森酵母(Hansenula )、刻魯維拉菌(Kluyveromyces )、念珠菌屬(Candida ))之酵母，及其他諸如麴菌(Aspergillus )、酒麴菌屬(Rhizopus )、木黴菌(Tricoderma )、腐質黴(Humicola )、青黴菌屬(Penicillium )及腐質黴(Humicola )之真菌。

根據另一實施例，該降低免疫壓力之酵素係以用於經口消化之膠囊或錠劑形式提供。本發明亦涵蓋實施例，其中酵素係作為根據已知之藥理學實踐調配以用於該投與之組合物的組分經由諸如經靜脈內、經腹膜或經皮下之其他途徑投與。

動物之免疫系統可將並不對動物之健康造成真正威脅之飼料組合物之確定成分視為抗原或分子模式。雖然如此，該成分引發免疫反應，該免疫反應使得動物經歷免疫壓力且可由血清中一或多種APP之濃度之增加來鑑別且監測。雖然不願受任何理論限制，但本發明者咸信該"不必且反效果"免疫反應可涉及模式識別受體(PRR)，諸如先天免疫系統所涉及之彼等受體。

先天免疫系統提供並不依賴於特異性抗原識別之免疫反應。參見，例如Tosi,J.Allergy Clin.Immunol. 116：241(2005)。先天免疫系統之一態樣涉及識別且結合與病原體相關聯的分子模式以轉導免疫反應信號之PRR。參見，例如Fabrick等人，J.Biol.Chem.279：26605(2004)。PRR之實例包括識別大量分子模式且產生激活大量宿主反應之細胞內信號之Toll樣受體(TLR)。參見，例如Tosi,前述；Blach－Olszewska,Arch.Immunol.Ther.Exp. 53：245(2005)。已鑑別之PRR/TLR識別甘露糖(例如，Blach－Olszewska,前述 )，1,3－β－葡聚糖(例如，Rice等人，J.Leukoc.Biol. 72：140(2002))，脂多醣及磷酸膽鹼(phosphorylcholine)(例如，Baumgarth等人，Semin.Immunopathol. 26：347(2005))，雙歧桿菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid)、酚可溶調節素(phenol－soluble modulin)、胞壁醯基二肽及肽聚糖(例如，Fournier等人，Clin.Microbiol.Rev. 18：521(2005))。甘露聚糖之免疫調節受體(例如，Klabunde等人，Parasitol Res. 88：113(2002)(甘露聚糖結合之凝集素))，及N－乙醯基－D－葡糖胺及N－乙醯基－D－甘露糖胺(例如，Hansen等人，J.Immunol. 169：5726(2002))。亦已鑑別雙股RNA之TLR(例如，Bell等人，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 102：10976(2005))及不同於內因性DNA之具有甲基化模式之DNA(例如，Huang等人，J.Immunol. 175：3964(2005)；Nonnemacher等人，Infect.Immun. 71：850(2003))。

雖然該等分子模式係與病原微生物(例如，細菌、病毒、真菌及原生動物)相關聯，但其亦由一些非病原分子(諸如動物飼料成分)呈現。對呈現該等分子模式之非病原分子之先天免疫反應不必要地使動物經受免疫壓力，且可能對動物之飼料效率產生不利影響，使動物之重量增益速率減慢或導致重量減輕，使動物更易於感染，使動物體溫增加或另外對動物之健康或食物能量(卡)利用效率產生負面影響。由MBL(甘露糖結合之凝集素)功能所產生之先天免疫反應(例如)誘導強烈反應。亦已展示小鼠中甘露糖結合之蛋白質之基因之一者之突變荒謬地使得自通常致命之急性膿毒性腹膜炎挑釁中倖存(Takahashi,K.等人，Microbes Infect.4(8)：773－784,2002)在此情況下，由侵襲性先天免疫反應產生之免疫反應比感染更致命。

β－甘露聚糖為大豆產品及基於大豆之動物飼料之組分。存在於動物飼料中之β－甘露聚糖之高分子量形式能引發"不必且反效果"先天免疫反應，從而使動物經受免疫壓力。本發明者發現該免疫壓力可使用β－甘露聚糖酶型半纖維素酶、內－1,4－β－D－甘露聚糖酶、降解β－甘露聚糖(從而降低或阻止對β－甘露聚糖之免疫反應)之酵素(例如β－半乳甘露聚糖、β－葡甘露聚糖)來降低或阻止。如下列實例所示，免疫壓力之降低由血清APP濃度之降低反映。

降解α－甘露聚糖之α－甘露聚糖酶適用作根據本發明之降低免疫壓力之酵素。並不認為α－甘露聚糖為半纖維素酶，因為其並不共享半纖維素酶之特徵性質。

在工業酵素領域中，術語"半纖維素酶"已用作β－甘露聚糖酶之商品名稱。又，由本發明者合著之專利及公開案使用術語"半纖維素酶"來指包括內－1,4－β－D－甘露聚糖酶之β－甘露聚糖酶。參見，例如美國專利第6,162,473號。在其他情形下，如下所解釋，術語"半纖維素酶"可拓展，除甘露聚糖酶外，亦涵蓋葡聚糖酶及木聚糖酶。

術語"半纖維素"用以描述藉由用稀鹼性溶液提取所獲得之碳水化合物植物物質，其比纖維素更容易水解。參見，例如Schulze,E,Berichte der Deutschen Botanischen Gesellschaf, 24：2277(1891)；Schulze,E,Z.Physiol.Chem. 16：387(1892)。自此，"半纖維素"已用於指與纖維素相關聯之水不溶性植物多醣，而非植物液汁中之可溶於稀鹼性溶液中的果膠及澱粉及多醣。參見，例如Whisler等人，"Hemicelluloses,"in IV POLYSACCHARIDE CHEMISTRY 112(Academic Press,1953)。雖然一些如刺槐豆膠及瓜爾膠半乳甘露聚糖之β－甘露聚糖可容易地溶解，但通常認為木聚糖、β－甘露聚糖及半乳聚糖為半纖維素。軟木樹具有大量與其纖維素相關聯之β－甘露聚糖且硬木具有大量木聚糖。

與半纖維素形成對比，α－甘露聚糖係與諸如植酵母之真菌細胞壁相關聯，並不為木材之結構組分，且其均勻可見於通常可溶於水中之真核細胞糖蛋白。因此，並不認為α－甘露聚糖為半纖維素，且α－甘露聚糖酶並不為半纖維素酶。因為α－甘露聚糖酶降解由動物之免疫系統識別但並不與病原體相關聯之α－甘露聚糖，所以其適用作根據本發明之降低免疫壓力之酵素。因為在眾多病原體表面上發現含甘露糖之聚合物，所以先天免疫系統係對甘露聚糖敏感。

其他可由動物之免疫系統識別之飼料成分包括β－1,3－葡聚糖(植物物質之共同結構組分)、N－聯結糖蛋白複合物(例如，可見於大豆產品中)、來自植物、動物或微生物之雙股RNA，及具有外來(非內因性)甲基化模式之來自微生物、植物或動物之DNA。因此，根據一實施例，本發明提供包含一或多種降解一或多種該等飼料成分或其他飼料成分之降低免疫壓力之酵素的組合物。在一相關實施例中，本發明提供降低動物體內免疫壓力之方法，該方法包含向該動物投與包含有效量之該或該等酵素之組合物。降低免疫壓力之酵素及其降解之抗原之特定實例陳述於下表中。本發明涵蓋包含其他降解相同或不同抗原之降低免疫壓力之酵素的組合物以及該等其他降低免疫壓力之酵素的用途。

根據一些實施例，本發明提供包含兩種或兩種以上降低免疫壓力之酵素的組合物。在一實施例中，該兩種或兩種以上酵素之至少一種不為1,4－β－甘露聚糖酶或1,3－β－葡聚糖酶。在另一實施例中，組合物包含1,4－β－甘露聚糖酶及1,3－β－葡聚糖酶。

在一特定實施例中，該組合物為動物飼料，該動物飼料包含1,4－β－甘露聚糖酶及1,3－β－葡聚糖酶，該1,3－β－葡聚糖酶之量為至少約20 IU/公斤飼料，諸如至少20 IU/公斤飼料、至少25 IU/公斤飼料、至少30 IU/公斤飼料、至少35 IU/公斤飼料、至少40 IU/公斤飼料、至少45 IU/公斤飼料、至少50 IU/公斤飼料或更多。

在另一特定實施例中，該組合物為非動物飼料之液體組合物，該液體組合物包含1,4－β－甘露聚糖酶及1,3－β－葡聚糖酶，該1,3－β－葡聚糖酶之量為至少約155,000 IU 1,3－β－葡聚糖酶/L，諸如至少155,000 IU/L、至少230,000 IU/L、至少300,000 IU/L、至少380,000 IU/L或更多。

在另一特定實施例中，該組合物為非動物飼料之固體組合物，該固體組合物包含1,4－β－甘露聚糖酶及1,3－β－葡聚糖酶，該1,3－β－葡聚糖酶之量為至少約300,000 IU 1,3－β－葡聚糖酶/公斤，諸如至少300,000 IU/kg、至少450,000 IU/kg、至少600,000 IU/kg、至少750,000 IU/kg、至少900,000 IU/kg或更多。

在另一實施例中，組合物包含1,4－β－甘露聚糖酶及木葡聚糖酶。在另一實施例中，組合物包含1,3－β－葡聚糖酶及木葡聚糖酶。在另一實施例中，組合物包含1,4－β－甘露聚糖酶及殼糖酶。在另一實施例中，組合物包含1,3－β－葡聚糖酶及殼糖酶。在另一實施例中，組合物包含1,4－β－甘露聚糖酶及阿拉伯聚糖酶。在另一實施例中，組合物包含1,3－β－葡聚糖酶及阿拉伯聚糖酶。在另一實施例中，組合物包含1,4－β－甘露聚糖酶、1,3－β－葡聚糖酶及阿拉伯聚糖酶。

應理解，該等組合僅為例示性的，且本發明包括包含降低免疫壓力之酵素之其他組合的組合物。舉例而言，本發明包括包含任一種或多種以上所列及/或以下所討論的降低免疫壓力之酵素及1,4－β－甘露聚糖酶的組合物。

由飼料成分引起之免疫壓力可能不總為先天免疫系統反應。眾所周知，某小部分之餵食基於大豆蛋白之人乳替代品配方乳品之嬰兒出現基於免疫之強有害腸道反應(參見來自營養委員會之報導：American Academy of Pediatrics,Pediatrics 101(1)：第148頁，(1998))。例如β－伴大豆球蛋白之大豆中之N－聯結糖蛋白(有時稱為7S球蛋白)(Ogawa T，等人，Biosci.Biotechnol.Biochem. 59(5)：831－833,1995；Burks AW，等人，J Pediatr.Gastroenterol.Nutr. 8(2)：195－203,1989)可為強抗原且經識別具有抗營養之性質。故意將β－伴大豆球蛋白自用於營養補充劑之分離大豆蛋白製劑中移除，而不論其對總蛋白質之貢獻。水解破壞抗原性。另外，吾人已發現，用於餵食小公雞之富含7S之大豆糖蛋白餾份比另一更低糖基化之大豆蛋白餾份不易消化。

用於降解N－聯結糖蛋白中之碳水化合物之合適酵素的實例包括諸如α－1,2－岩藻糖苷酶及α－1,3－1,4－岩藻糖苷酶之α－岩藻糖苷酶，諸如α－1,6－甘露糖苷酶、α－1,2－甘露糖苷酶及α－1,3－甘露糖苷酶之α－甘露糖苷酶、β－1,4－半乳糖苷酶、內－β－N－乙醯基葡糖胺酶F(endo F)、肽－N－(N－乙醯基－β－葡糖胺基)天冬醯胺酸醯胺酶F(PNGase F)、PNGase A、內－β－N－乙醯基葡糖胺酶H(endoH)、endo D、endo C、α－N－乙醯基半乳糖醯胺酶、β－1,3－半乳糖苷酶、內－N－醯基－神經胺酸酶(endo N)、α－2,3－神經胺酸酶、α－2,6－神經胺酸酶、α－2,8－神經胺酸酶、β－N－乙醯基己醣胺酶、內－β－N－半乳糖苷酶、內－α－N－乙醯基半乳糖胺酶、內－α－1,6－D－甘露聚糖酶、阿拉伯半乳聚糖酶、α－半乳糖苷酶、β－半乳糖苷酶。

此項技術已知該等酵素且一些該等酵素可自商業源獲得。或者，降低免疫壓力之酵素可自產生酵素之微生物(諸如，細菌、真菌及酵母)獲得。另外，該等酵素可使用此項技術已知之重組技術方法藉由(例如)使宿主細胞基因工程化以產生酵素(例如使編碼酵素之基因轉錄且轉譯)來獲得。此項技術已知上述大量酵素之胺基酸序列。使用該等序列或已知之編碼該等序列之核苷酸序列，熟習此項技術者可設計用於酵素之重組表現之合適基因。另外或其他，編碼已知之降低免疫壓力之酵素之核苷酸序列可用於探測一DNA庫以鑑別其他編碼降低免疫壓力之酵素之核苷酸序列。如此項技術所已知，該DNA庫可源自確定的有機體或大量有機體，或可獲自天然源，且因此表示難以培養之微生物之DNA。

在組合物包含酵素之組合的實施例中，酵素可由獨立的有機體個別產生，或兩種或兩種以上酵素可由單個有機體產生。舉例而言，單個有機體可由此項技術已知之技術重組工程化以產生兩種或兩種以上酵素。

如上所討論，動物之免疫系統識別大量由病原微生物呈現之不同分子模式，包括脂多醣(與(例如)革蘭氏陰性菌(gram negative bacteria)相關聯)、含有保留之蛋白質鞭毛蛋白的細菌鞭毛、肽聚糖(與(例如)革蘭氏陽性菌(gram positive bacteria)相關聯)、受C型凝集素L－Ficolin限制之脂磷壁酸(與(例如)革蘭氏陽性菌相關聯)(Lynch,N.J.等人，J.Immunology 172： 1198－1202,2004)、磷酸膽鹼(與(例如)革蘭氏陽性菌及革蘭氏陰性菌相關聯)、DNA(諸如具有CpG非甲基化之基元之細菌DNA，參見Van Uden及Raz,J Allergy Clin Immunol. 104(5)：902－10,1999.)，及雙股RNA及3pRNA(Hornung等人，Science 314：994－997,2006)。對該等分子之免疫反應包括血清APP之增加。

其他病原分子模式包括含有N－乙醯基葡糖胺之分子及含有N－乙醯基甘露糖胺之分子。雖然所有膠原蛋白凝集素(甘露糖結合之凝集素為膠原蛋白凝集素或C型凝集素)之精確結合特異性可能不為吾人所知，但觀察到(例如)H－纖維膠凝蛋白(H－ficolin)、界面活性劑相關聯之蛋白質A(SP－A)及黏合素結合於大量不同細菌病原體。如N－乙醯基葡糖胺及N－乙醯基甘露糖胺之化合物可抑制該結合且因此假定為該模式識別結合特異性之部分(Haurum,J.S.等人，Biochemical J. 293 (3)：873－878,1993)。

可作為根據本發明之酵素降解之目標的其他抗原及分子模式的實例包括細菌脂蛋白(Hacker,H.等人，J.Exper.Med. 192 (4)：595－600,2000)；由膠原蛋白凝集素Dectin－1結合之β－1,3－葡聚糖(Adachi,Y.,等人，Infection and Immunity 72 (7)：4159－4171,2004)；鞭毛蛋白(其結合TLF5)(Honko,A.N.及Mizel,S.B.,Immunol.Res. 33 (1)：83－101,2005)；岩藻糖基糖結合物；α－Gal－神經醯胺；血纖維蛋白原；硫酸類肝素；硫酸化gal－醣；聚葡萄胺糖、N－乙醯基葡糖胺；去唾液酸糖蛋白及β－半乳糖苷。

該類稱為清道夫受體(scavenger receptor)(SR)之受體在結構上與一些先天免疫反應受體相關，且可產生免疫壓力。咸信SR係涉及細胞凋亡或另外受損細胞之再循環及清理。由巨噬細胞及樹突狀細胞表現之清道夫受體(SR)亦為先天免疫系統之受體。此外，一些SR識別病原體且展示一些先天免疫受體對細胞凋亡而言很重要。因此，根據本發明之一實施例，SR之分子模式結合目標為酵素降解之目標。

一個該SR分子模式結合之目標係經氧化低密度脂蛋白(LDL)。稱為LOX－1(Peiser,L.,等人，Current Opinion in Immunology 14：123－128,2002)、SR－PSOX/CXCL－16(Fukumoto,N.,等人，J.Immunol. 173(3)： 1620－1627,2004)及CD36(Bruni,F.，等人，Clin.Appl.Thromb.Hemost. 119 (4)：417－28,2005)之受體結合可存在於一些飼料(尤其含有諸如血粉料之動物副產品粉料之飼料)中之經氧化之LDL。

另一SP分子模式結合之目標為磷脂醯絲胺酸(PS)及溶血磷脂醯絲胺酸(lyso PS)。PS之SR包括SR－PSOX/CXCL－16及其他PS受體(Schlegel,R.A.及Williamson,P.,Cell Death Differ. 8(6)：545－548,2001)。暴露於磷脂醯絲胺酸磷脂可產生發炎反應且咸信磷脂醯絲胺酸磷脂以一定量存在於大多數飼料中。

雖然玻尿酸在動物之細胞外液中很豐富，但其亦由先天免疫/清道夫系統機制識別，例如在傷口癒合過程。參見，例如Jameson，等人，J.Expt.Medicine 210(8)：1269－1279,2005。雞冠為玻尿酸之商業源，玻尿酸通常以玻尿酸之純化形式使用。因此，來自肉加工之副產品之家禽粉料可含有(通常)大量玻尿酸。降解玻尿酸(hyaluronan及hyaluronic acid)之玻尿酸酶(EC 3.2.1.35)適用作根據本發明之降低免疫壓力之酵素，尤其在餵食家禽粉料之動物之情況下。舉例而言，玻尿酸酶適用於降低與餵食家禽粉料相關聯之免疫壓力。

降解該等分子模式之任一種之酵素因而抑制或降低免疫反應，從而降低動物之免疫壓力。舉例而言，已知降解雙股RNA及細菌DNA之DNAase及非特異性核酸酶。已知限制性核酸內切酶酵素對非哺乳動物DNA之甲基化CG基元具有特異性。降解磷酸膽鹼之酵素包括磷酸膽鹼脫水酶、鹼性磷酸酶、酸性磷酸酶、磷酸膽鹼酯酶及磷酸膽鹼磷酸酶。

如上所述，該壓力降低可藉由量測血清APP之含量來鑑別且監測，其中降低之血清APP濃度反映降低之免疫壓力。

如上所說明，該組合物包含一定量之降低免疫壓力之酵素，該量之酵素有效降低動物體內急性期蛋白質之含量。雖然該量可因動物不同而變化，且因酵素不同而變化，但可由熟習此項技術者容易地確定，例如，如上所述藉由量測APP含量。舉例而言，動物之血清APP含量可在投與酵素之前及之後量測，或可比較治療動物與對照動物之血清APP含量。在有效量係藉由在投與酵素之前及之後量測血清APP含量來評估的實施例中，之後的量測可自最初投與酵素之後至少約1天至至少約幾天或更長之時間進行。與酵素之投與相關聯之血清APP濃度之降低指示已投與有效量之酵素。然而，應理解APP含量通常隨動物之適應性免疫反應產生效應而降低。

根據一些實施例，本發明提供包含一定量之1,3－β－葡聚糖酶的組合物，該量之1,3－β－葡聚糖酶有效降低該動物體內陽性急性期蛋白質之含量，增加該動物體內陰性急性期蛋白質之含量，及/或改良動物生長效能。在一特定實施例中，組合物為包含至少約20 IU 1,3－β－葡聚糖酶/公斤飼料之動物飼料，諸如至少20 IU/公斤飼料、至少25 IU/公斤飼料、至少30 IU/公斤飼料、至少35 IU/公斤飼料、至少40 IU/公斤飼料、至少45 IU/公斤飼料、至少50 IU/公斤飼料或更多之1,3－β－葡聚糖酶。在另一特定實施例中，該組合物為包含至少約155,000 IU 1,3－β－葡聚糖酶/L之非動物飼料之液體組合物，諸如至少155,000 IU/L、至少230,000 IU/L、至少300,000 IU/L、至少380,000 IU/L或更多之1,3－β－葡聚糖酶。在另一特定實施例中，該組合物為包含至少約300,000 IU 1,3－β－葡聚糖酶/kg之非動物飼料之固體組合物，諸如至少300,000 IU/kg、至少450,000 IU/kg、至少600,000 IU/kg、至少750,000 IU/kg、至少900,000 IU/kg或更多之1,3－β－葡聚糖酶。

在一些動物飼料實施例中，其中該酵素包含1,3－β－葡聚糖酶，該酵素可以每噸飼料至少約100,000 IU之量存在。

該等量比商業飼料酵素添加劑及市售飼料之1,3－β－葡聚糖酶含量高得多，該等添加劑及飼料已經本發明者分析且發現提供至多約10,000 IU/噸飼料、約72,500 IU/公升非飼料之液體組合物、或約150,000 IU/公斤非飼料之固體組合物。本發明者並不相信10,000 IU 1,3－β－葡聚糖酶/噸飼料會有效降低APP，且已從實驗上證實該信念。本發明者亦從實驗上確定諸如Avizyme(Danisco A/S,Langebrogade 1,Dk－1001,Copenhagen,Denmark)及Rovobio(Adisseo France SAS,42,Avenue Aristide Briand,BP100,92164 Antony Cedex)之商業產品及包含標準量之β－1,3－1,4－葡聚糖酶(Brewzyme BG plus,Dyadic International,140 Intracoastal Pointe Drive,Suite 404,Jupiter,Florida 33477－5094)、木聚糖酶(Multifect XL,Genencor International,Inc.,925 Page Mill Road,Palo Alto,CA)、PI－PLC(ChemGen Corp.,211 Perry Parkway,Gaithersburg,MD)及澱粉酶(Amylase FRED,Genencor International,Inc.,925 Page Mill Road,Palo Alto,CA)之商業飼料並不降低APP。參見以下實例3及圖3。在存在1,3－β－葡聚糖酶活性之情況下，1,3－β－葡聚糖酶係在以上說明之低範圍內且並不有效降低AGP。

在另一實施例中，該降低免疫壓力之酵素係作為組合物之成分提供，該組合物亦包含含有由該酵素降解之化合物之抗原及分子模式。舉例而言，本發明包括包含β－1,3－葡聚糖及1,3－β－葡聚糖酶之動物飼料；包含DNA或雙股RNA及DNAase或非特異性核酸酶之動物飼料；包含N－聯結之糖蛋白及內糖酶或外糖酶、N－聚糖酶或PNGase或上述其他酵素之任一種的動物飼料。抗原與降低免疫壓力之酵素的其他合適組合對熟習此項技術者而言應顯而易見，且為本發明所涵蓋。

在該實施例中，希望只要投與該組合物，血清APP含量仍將升高。因此，若藉由在投與酵素之前及之後量測血清APP含量評估降低免疫壓力之酵素之有效量，則該之後的量測可在最初投與該酵素之後數天或數週之時間進行。

如以上所說明，本發明包括降低動物體內免疫壓力之方法，該方法包含向該動物投與包含一定量之降低免疫壓力之酵素的組合物，該量之酵素有效降低動物體內急性期蛋白質之含量。該組合物可為任何上述組合物，包括諸如動物飼料、非動物飼料之液體組合物或非動物飼料之固體組合物的口服組合物。該動物可為包括人類之任何動物，且可為健康動物或患感染或其他疾病或病狀之動物。

本發明亦包括改良動物生長效能之方法，該方法包含向該動物投與包含降低免疫壓力之酵素的組合物。在一些實施例中，該組合物包含一定量之降低免疫壓力之酵素，該量之酵素有效改良動物生長效能。該組合物可為任何上述組合物，包括口服組合物、動物飼料、非動物飼料之液體組合物或非動物飼料之固體組合物。該動物可為包括人類之任何動物，且可為健康動物或患感染或其他疾病或病狀之動物。

在一實施例中，該酵素係由用於動物飼料之植物表現。舉例而言，玉米可經基因工程化以表現降低免疫壓力之酵素且所得之經基因修飾之玉米產品可用於飼料。

在一實施例中，動物係經投與降低免疫壓力之酵素且亦經投與抗原(例如，酵素降解之含有模式之分子)。該酵素及抗原可作為相同或不同組合物之部分單獨或同時投與。在一實施例中，動物係經投與包含抗原或含有模式之分子的飼料，且係經單獨投與包含降低免疫壓力之酵素的組合物。在另一實施例中，動物係經投與包含抗原或含有模式之分子的飼料及包含酵素之飼料補充劑。在另一實施例中，動物係經投與包含抗原與酵素之飼料。

本發明之另一態樣提供藉由預防且治療由病原微生物引起之感染來降低免疫壓力的組合物及方法。有時，動物消耗諸如水或動物飼料之包含病原微生物(例如，細菌、病毒、真菌及原生動物)之組合物，或另外動物暴露於該等病原體。本發明提供包含一定量之降解病原微生物之關鍵組分(意即，"病原組分")的酵素的組合物，該量之酵素有效降低感染且因此降低動物體內響應於感染而表現之APP之含量。該組合物適用於藉由預防或最小化感染從而降低直接由病原體引起之免疫壓力來降低免疫壓力。在該實施例之一特殊態樣中，本發明提供預防且治療消化道感染之方法。

藉由降解病原體組分，酵素亦可治療或預防感染。亦即，因為病原組分經降解，所以病原體可能喪失感染宿主之能力。雖然實際感染之降低會因與上述機制不同之機制產生降低之免疫壓力及血清APP之降低，但實際上就所觀察到的APP之降低而言無差別。存在至少三種酵素治療可具有正面結果的情況。若由酵素降解之病原體分子結構涉及病原體於宿主細胞之結合、感染所需之第一步或成功感染所必需之任何其他關鍵步驟，則酵素治療能起作用。或者，宿主細胞之結合結構可經修飾。舉例而言，已展示大量細菌及原生動物病原體與真核宿主細胞之表面之蛋白聚糖(尤其硫酸化蛋白聚糖)相互作用(Flekenstein,J.M.等人，Infection and Immunity 70(3)：1530－1537,2002)。應用諸如肝素酶及N－乙醯基葡糖胺－4－硫酸酯酶或芳基硫酸酯酶之酵素可降低該相互作用及感染。

在第二情況下，降解之病原體分子結構可為破壞目標細胞之代謝功能的毒素。在第三情況下，由酵素降解之病原組分可涉及病原體之逃避宿主免疫反應的機制。病原體中已發展出自模仿宿主細胞之外表至抑制免疫反應之大量免疫反應逃避機制，例如，互補反應或細胞調亡。感染之降低或預防亦可藉由量測血清APP來評估，其中更高的APP含量係與感染相關聯。

此項技術已知降解病原組分之酵素，諸如以上所述之酵素。舉例而言，展示源自噬菌體之內唾液酸酶(endosialidase)藉由降解細菌表面之PSA(聚唾液酸)莢膜來阻止大鼠之大腸桿菌K1全身感染之致死性。雖然降解莢膜碳水化合物不對大腸桿菌活體外之生存力產生影響，但在活體內，莢膜之損失允許由宿主免疫系統識別且控制感染以消除致死性(Mushtaq,N.，等人，Antimicrobial Agents and ChemoTherapy 48(5)：1503－1508,2004)。PSA莢膜使大腸桿菌表面看似宿主細胞，因此逃避宿主之先天免疫反應。另一適用於本發明之已知酵素為肝素酶I(Neutralase,Ibex Technologies,Canada)。如以上所討論，眾多酵素可獲自商業源或可獲自產生酵素之諸如細菌及包括酵母之真菌的微生物，或可重組產生。

當已知編碼酵素之基因時，所需酵素可由重組DNA技術產生。快速DNA定序方法論之發展已產生蛋白質及其基因編碼序列之豐富公用資料庫，諸如NCBI Genbank。使用來自(例如)454 Life Sciences(454 Life Sciences,20 Commercial Street,Branford,CT 06405)之快速定序技術，可在4小時內定序一典型細菌基因體。來自基因體之新穎所需酵素的先前未知之基因可使用(例如)之前鑑別之來自商業或公用資料庫所述之相同類型或相似類型之酵素的編碼序列藉由探測基因體使用容易獲得之電腦程式(諸如Blast)來獲得。熟習此項技術者可鑑別基因體中具有關鍵程度之與已知序列之同源性及其他基因編碼區之性質的DNA，且隨後使用(例如)聚合酶鏈反應(PRC)技術將該基因分離且放大。隨後，該基因可在宿主中經表現且可確認其所需的蛋白質酵素性質。

若之前並不已知所需之酵素活性，則可使用選擇於受質上生長之標準微生物富集技術將該活性定位。使用受質作為唯一碳源或氮源之微生物必須表現能夠降解目標化合物之酵素。為發展經濟產品，有機會使用微生物之經典突變/選擇或富集方法或藉由此項技術熟知之重組DNA之表現方法改良酵素之生產。

如上所述，包含降解病原微生物之降低免疫壓力之酵素的組合物可為任何適合向動物投與之組合物，包括適合經口向動物投與之組合物。如上所說明，該組合物可包含一定量之酵素，該量之酵素有效降低動物體內陽性急性期蛋白質之含量(或增加陰性急性期蛋白質之含量)及/或改良動物生長效能。雖然該量可因動物不同而變化，且因酵素不同而變化，但可由熟習此項技術者容易地確定，例如，如上所述且如此項技術所已知，藉由量測APP含量及/或監測動物生長效能。

在一實施例中，以病原抗原為目標之降低免疫壓力之酵素係作為動物飼料之組分提供。在該實施例之一實例中，酵素之量為至少約100,000 IU/噸飼料。

在另一實施例中，以病原抗原為目標之降低免疫壓力之酵素係以組合物之組分形式提供，該組合物亦包含病原抗原。舉例而言，本發明包括包含以下各物之動物飼料：(A)呈現諸如脂多醣、肽聚糖、脂磷壁酸、磷酸膽鹼、雙股RNA及DNA之抗原之病原微生物，及(B)降解該抗原之酵素。歸因於由生產狀況中動物之密集生長所引起之不衛生條件的固有性質，病原微生物可找到進入飼料之途徑。

如上所說明，本發明包括降低動物體內免疫壓力及/或改良動物生長效能之方法，該方法包含向該動物投與包含降低免疫壓力之酵素之組合物。在一實施例中，該動物係經投與降解病原抗原之降低免疫壓力之酵素且亦經投與病原抗原。該酵素及抗原可作為相同或不同組合物之部分單獨或同時投與。在一實施例中，動物係經投與包含抗原之飼料，且係經單獨投與包含酵素之組合物。在另一實施例中，動物係經投與包含抗原之飼料及包含酵素之飼料補充劑。在另一實施例中，動物係經投與包含抗原與酵素之飼料。

雖然下列實例進一步說明本發明，但本發明並侷限於該等特定例示性實施例。

實例1

製備包含半纖維素酶(內－1,4－β－甘露聚糖酶)之動物飼料且將該動物飼料投與雞，且量測AGP含量，其更詳細描述如下。

將總計4000隻1天大的雄Cobb×Cobb雞隨機分配給8種實驗治療，且各治療重複10次：實驗設計：8種治療畜舍之總數目：80治療之總數目：8每個畜舍之鳥之數目：50每種治療之畜舍之數目：10每種治療之鳥之數目：500

該8種治療之兩種包含根據本發明之降低壓力之酵素：治療3(基本飼糧中施加約100 MU/噸的遲緩芽孢桿菌(B.lentus )醱酵之蒸發全細胞肉湯形式的甘露聚糖酶)及治療6(基本飼糧中施加約30 MU/噸的遲緩芽孢桿菌醱酵肉湯之無細胞之離心上清液形式的甘露聚糖酶)。治療8為無添加之酵素之對照。(1 MU＝4000 IU)

將基本粉料飼料分批平均分成8份且各隨適量試驗物質噴灑。啟始及生長飼料含有90公克/噸Cobon(離子載體型抗球蟲藥)加50公克/噸BMD(抗生素)。肥育飼料未加入藥物。

自1天大時直至21天大時向所有鳥提供啟始飼糧(Starter Diet)，22－35天提供生長飼糧(Grower Diet)，且36－42天提供肥育飼糧(Finisher Diet)。隨意提供該等飼糧及水。在所有餵食期間，該等飼糧以碎粒/小球形式提供於該等鳥。自來水用作飲用水且由一內部水系統網路供應。

基本實驗飼糧之組成及分析

在該42天之末期，自治療3、6及8之10個畜舍之每一者中隨機選擇兩隻鳥以在稱重後用於血液分析，總計每種治療(500隻)中20隻。將樣品收集於含有抗凝肝素之血液收集試管中之冰上，且由離心獲得血漿。

使用基於免疫擴散之來自Cardiotech Services,Inc.(Louisville,K.Y)之檢定套組就雞α－1－酸糖蛋白檢定血漿樣品。將取自兩隻鳥/畜舍之血清樣品添加至試驗板(每孔5 μL)且向一些孔中以至多1000 μg/mL範圍之濃度添加標準純AGP。使用最接近0.1 mm直徑之沉澱素環量度標準量測沉澱素環。

如圖1所示，使用多項式以用該等數據提供最佳曲線擬合且其允許快速計算血漿樣品中之AGP濃度。

所有回收之雞血清樣品之沉澱素環直徑的量測及各鳥之計算AGP濃度展示於下表中。與對照鳥相比，餵食甘露聚糖酶之鳥之平均AGP濃度平均具有統計上極顯著之降低。

實例2

執行使用半纖維素酶(內－1,4－β－甘露聚糖酶)之另一實驗。在該實驗中，各組雞(各10個畜舍，其中每畜舍50隻鳥)各餵食四種飼糧之一種：治療1(對照)：成粒後噴灑之包含BMD抗生素之飼料，且其中對照配方包含35%具有棕色食用色素之山梨糖醇，其以100 ml/噸飼料施加。

治療2(對照)：成粒後噴灑之無BMD之飼料，其中對照配方包含35%具有棕色食用色素之山梨糖醇，其以100毫升/噸飼料施加。

治療3：成粒後噴灑之飼料，其中配方包含源自遲緩芽孢桿菌之半纖維素酶(內－1,4－β－甘露聚糖酶)，其以100毫升/噸飼料施加。

治療4：以粉末組合物調配之飼料(成粒之前添加於混合器中)，該組合物包含454公克/添加組合物/噸飼料之源自遲緩芽孢桿菌之半纖維素酶(內－1,4－β－甘露聚糖酶)以提供100 MU/噸飼料。(1 MU＝4000 IU)

實驗起始，雞為1天大。飼糧係隨意提供的。使用具有下列組成之啟始飼料(0－21天)、生長飼料(21－35天)及肥育飼料(35－42天)，作為基本飼料：

在第21天時，自3隻鳥/畜舍收集約3 mL血液(每組30隻)。將血液置放於一肝素化試管中且輕輕混合。將試管緩慢離心且隨後將血清移除。將血清樣品置放於具有蓋子之試管中且以畜舍號標記。將血清冷凍以用於以上實例1所述之隨後之AGP分析。用於定量雞α1酸糖蛋白之免疫擴散環係容易地經量測，其可高度重現且展示4%或更低的變化係數。

每種治療之30隻鳥之21天的平均結果展示於下表中且圖示於圖2中。可見，使飼糧不含抗生素(BMD)導致血漿AGP含量極大且顯著地增加(比較治療1及治療2)。無BMD之飼糧(治療3及4)中半纖維素酶(內－1,4－β－甘露聚糖酶)調配物之添加使AGP恢復至使用抗生素所見之含量，此指示免疫壓力顯著降低。

亦評估雞之生長效能，其中結果概述於下表中。

¹ FCR＝飼料轉化率² Wt.Adj.FCR＝重量經調整之飼料轉化率ID之³ CV＝個體重量之變化係數

因此，接受β－甘露聚糖酶之雞之飼料轉化率與重量經調整之飼料轉化率在21天中統計顯著性地改良。此指示血清AGP之降低可轉變為動物效能之真正顯著性。

實例3

就普遍用於動物飼料之其他酵素對AGP之可能的影響，評估該等酵素之能力。將商業型雞啟始飼糧(低代謝能量)與美國普遍使用之飼料混合。自雞到達之日直至研究之第21天，隨意餵食該等飼糧(以粉料或碎粒形式)。實驗治療飼料係由該基本啟始飼料製備。將治療飼料混合以確保各試驗物件均勻分佈。

將50 g/t BMD及60 g/t鹽黴素添加至所有飼料中。

酵素製劑之其他資訊 ChemGen MU＝4000 IU；AXC－由Adisseo定義之木聚糖酶單位；AGL－由Adisseo定義之葡聚糖酶單位；^＊－由ChemGen Corp.經還原糖檢定量測之大約含量

在整個試驗中可隨意使用飼料及水。在第15天時，治療17、18、19、20及21中之鳥係經口接種混合接種液，該混合接種液含有每鳥約30,000卵囊之堆型艾美球蟲(E.acervulina )、每鳥約2,500卵囊之巨型艾美耳球蟲(E.maxima )及每鳥25,000卵囊之柔嫩艾美爾球蟲(E.tenella )。球蟲卵囊接種程序係描述於SPR SOP：IN 1.002。

測定籠重量增益、飼料消耗及飼料轉化率之平均值。結果陳述如下。僅接受樣品17之動物受感染。

吾人發現，包含標準量之澱粉酶、1,3－葡聚糖酶、1,4－葡聚糖酶、木聚糖酶及PI－PLC之商業飼料並不降低AGP含量。實際上，僅半纖維素酶(內－1,4－β－甘露聚糖酶)展示對AGP含量之顯著影響。另外，比較治療1及17清楚展示AGP在雞中為高度反應性APP，因為感染使AGP含量增加82 μg/mL。亦參見圖3。

實例4

包含1,3－β－葡聚糖之試驗動物飼料係經調配以包括濃度為每噸飼料400,000 IU(100 ChemGen MU)之1,3－β－葡聚糖酶。向試驗雞投與試驗動物飼料，同時使對照雞接受無1,3－β－葡聚糖酶之相同動物飼料(包含1,3－β－葡聚糖)。該方案21天及42天之後，如上所述評估血清AGP含量。接受經酵素調配之動物飼料之雞具有比對照動物顯著低的AGP含量。與對照雞相比，試驗雞亦展示更高的飼料效率及改良之重量增益。

實例5

包含細菌DNA源(例如Biolys離胺酸或其他含有細胞產物之醱酵產品)之試驗動物飼料係經調配以包括源自藍藻菌魚腥藻屬7120(CyanobacteriumAnabaena sp. 7120)(NucA)之非特異性核酸酶，該核酸酶為所已知之最具活性之非特異性核酸酶的一種(Meiss,G.等人，Eur.J.Biochem. 251(3)：924－934,1998)。以每公斤飼料1×10⁷ Kunitz單位酵素或每公斤飼料約1 mg(純基本成分)之濃度添加該酵素。將試驗動物飼料投與試驗雞，同時使對照雞接受無非特異性核酸酶之相同動物飼料(包含細菌DNA)。該方案21天或42天之後，如上所述評估血清AGP含量。接受經酵素調配之動物飼料之雞具有比對照動物顯著低的AGP含量。

實例6

包含肉及骨頭粉料、血粉料或其他源自動物之副產品的試驗動物飼料經調配包括濃度為每噸飼料400,000 IU之磷脂醯絲胺酸脫羧基酶。將試驗動物飼料投與試驗雞，同時使對照雞接受無磷脂醯絲胺酸脫羧基酶之相同動物飼料。該方案21天或42天之後，如上所述評估血清AGP含量。接受經酵素調配之動物飼料之雞具有比對照動物顯著低的AGP含量。

實例7

試驗動物大豆粉料或其他源自植物之粉料係經調配以包括源自遲緩芽孢桿菌之α－甘露聚糖酶及/或1,3－β－葡聚糖酶酵素，各自之濃度為每噸飼料400,000 IU。將試驗動物飼料投與試驗雞，同時使對照雞接受無α－甘露聚糖酶或1,3－β－葡聚糖酶之相同動物飼料。該方案21天或42天之後，如上所述評估血清AGP含量。接受經酵素調配之動物飼料之雞具有比對照動物顯著低的AGP含量。

實例8

在該實例中，展示添加於飼料(習知之玉米大豆飼糧)中之Hemicell甘露聚糖酶降低火雞血清中α1酸糖蛋白(AGP)，同時亦改良活生長效能。實驗由48個畜舍組成，每畜舍11隻雄火雞(初始布局)。6種治療在8個區塊中重複，該6種治療在各6個畜舍之區塊中隨機分配。

每種治療之鳥之數目 88每種治療重複之次數 8總治療數 6畜舍總數 48鳥之總數 528

就AGP分析一種包含根據本發明之降低壓力之酵素的治療，亦即治療1(每噸飼料具有100 MU商業Hemicell)。(1 MU＝4000 IU)治療2為無添加酵素之對照飼料。

將飼料混合以確保基本飼料在治療中均勻分佈。將所有酵素混合(噴灑)以確保試驗酵素均勻分佈且確保治療之間相似的飼料狀況。每次製造治療飼料，將各治療飼料之開始、中期及末期之樣品混合以形成複合樣品。自複合物取一個樣品用於各治療及用於酵素含量之核實。

該研究中，治療1及2中所餵食之火雞飼糧詳細描述於下表中。諸表展示組分之組成、計算養分含量及最後一些量測之回收飼料之養分值。該等飼糧代表可用於商業火雞生長操作之飼糧且因此在整個20週之時期內數次調整該飼糧。在6、9、12、15及18週時改變飼糧組合物。

各時期之飼糧組合物就治療1及2而言稍有不同。眾所週知，Hemicell甘露聚糖酶具有使飼料之有效能含量增加之效應(參見，美國專利6,162,473)。出於該原因，治療1之飼糧係經調整以具有比治療2之飼糧低的能量以最小化治療1與治療2之間的生長差異以達到該研究之目的。

糖蛋白量測： 在試驗末期，自在治療1、2及5中隨機選擇之4隻鳥/畜舍獲得血液。將血液收集於含EDTA抗凝劑之試管中，混合，隨後離心以使全細胞沉澱。

火雞AGP試驗板係獲自Cardiotech Services(Louisville,KY)。AGP試驗為基於免疫擴散之試驗。如製造商所推薦，將相同體積之試驗樣品或血清樣品添加於免疫擴散板孔中，隨後，在室溫下培育兩天後，量測所產生之免疫沉澱環之直徑。

將提供於套組中之標準純化火雞AGP之樣品以數種濃度試驗以產生如圖4所示之標準曲線。使用由該等標準發展之曲線擬合多項式計算火雞之試驗樣品中之血漿AGP含量。

>2倍平均值標準偏差的離群值係經移除酵素治療組之平均血漿AGP比未治療之對照顯著低。就該分析而言，自來自各組之分析中移除一個離群值。該等鳥可為歸因於外傷或感染而經歷異常量之壓力的鳥。如治療1(甘露聚糖酶)相對治療2如下所示，由酵素飼料引起之降低之AGP係與統計上顯著改良之鳥活效能相關聯。

接受具有甘露聚糖酶之飼料之鳥的平均重量增益大3.7%，飼料轉化率降低2.3%且體重均勻性之CV(變化係數＝標準偏差/平均值)降低。由降低之AGP血清含量指示之免疫壓力之降低係與生長改良之數個量度相關。

實例9

在該實例中，將來自遲緩芽孢桿菌之1,4－β－甘露聚糖酶及來自遲緩芽孢桿菌之1,3－β－葡聚糖酶，及該兩種酵素之組合添加至飼料(習知之玉米－大豆飼糧)中。各酵素治療改良6週大的Nicholas 700雌火雞之活生長效能，其中出乎意料地，由組合達成之結果比使用該等酵素之僅一種達成之結果大。

該實驗使用80個畜舍，每畜舍40隻雌火雞。治療在十(10)個區塊中重複，其中8種治療(7種酵素治療及1種陰性對照)在各區塊中隨機分配。

治療3使用包含根據本發明之降低免疫壓力之酵素(100 MU 1,4－β－甘露聚糖酶/噸飼料)的組合物。治療6亦使用包含根據本發明之降低免疫壓力之酵素(60 MU 1,3－β－葡聚糖酶/噸飼料)的組合物。治療8使用包含根據本發明之組合組合物，該組合組合物包含100 MU 1,4－β－甘露聚糖酶/噸飼料及60 MU 1,3－β－葡聚糖酶/噸飼料。治療1為無添加酵素之對照飼料。(1 MU＝4000 IU)

將飼料混合以確保基本飼料在治療中均勻分佈。將所有酵素混合(噴灑)以確保試驗酵素均勻分佈且確保治療之間相似的飼料狀況。每次製造治療飼料，將來自各治療飼料開始、中期及末期之樣品混合以形成複合樣品。自複合物取一個樣品用於各治療及用於酵素含量之核實。

在該研究中，所餵食之火雞飼糧為典型商業火雞飼料。該等飼糧代表可用於商業火雞生長操作之飼糧且因此3週後調整該飼糧。治療1、3、6及8之生長結果展示於下表中。

與治療1(對照)相比，接受治療3(餵食1,4－β－甘露聚糖酶)之雌火雞具有數字上改良之平均活重及數字上改良(降低)之飼料轉化率。相似地，接受治療6(餵食1,3－β－葡聚糖酶)之雌火雞具有統計上顯著改良之平均活重及統計上顯著改良(降低)之飼料轉化率。

令人驚訝地，接受治療8(餵食1,4－β－甘露聚糖酶及1,3－β－葡聚糖酶之組合)之雌火雞具有異常大的統計上顯著改良之平均活重及異常大的統計上顯著改良(降低)之飼料轉化率。治療8所觀察到的結果比可由個別投與該兩種酵素之添加效應所解釋之結果大。因此，包含1,4－β－甘露聚糖酶及1,3－β－葡聚糖酶之組合治療在生長效能方面產生出乎意料大的改良。

實例10

在該實例中，將來自遲緩芽孢桿菌之1,3－β－葡聚糖酶、來自遲緩芽孢桿菌之木葡聚糖酶，及該兩種酵素之組合添加至飼料(習知玉米－大豆飼糧)。各酵素治療改良35天大之雄肉雞之活生長效能，其中由組合達成之結果比僅使用該等酵素之一者的治療所達成之結果大。

該實驗使用49個畜舍，每畜舍44隻Cobb×Cobb雄雞。治療在7個區塊中重複，其中7種治療(6種酵素治療及1種陰性對照)在各區塊中隨機分配。

治療4使用包含根據本發明之降低免疫壓力之酵素(70 MU 1,3－β－葡聚糖酶/噸飼料)的組合物。治療5亦使用包含根據本發明之降低免疫壓力之酵素(100 MU木葡聚糖酶/噸飼料)之組合物。治療6使用根據本發明之組合組合物，該組合組合物包含100 MU木葡聚糖酶/噸飼料及60 MU 1,3－β－葡聚糖酶/噸飼料。治療1為無添加酵素之對照飼料。(1 MU＝4000 IU)。

在該研究中所餵食之飼糧為典型肉雞飼料。該等飼糧代表可用於商業肉雞生長操作之飼糧且因此3週後調整該飼糧。生長35天後，治療1、4、5及6之生長結果展示於下表中：

與治療1(對照)相比，接受治療4(1,3－β－葡聚糖酶)之雞具有數字上改良之平均活重及數字上改良(降低)之飼料轉化率。相似地，接受治療5之雞(餵食木葡聚糖酶)具有數字上改良之平均活重及數字上改良(降低)飼料轉化率。

受治療6之雞(1,3－β－葡聚糖酶及木葡聚糖酶之組合)達成比個別投與該等酵素時所觀察到的效應大的平均活重及飼料轉化率的改良。因此，包含1,3－β－葡聚糖酶及木葡聚糖酶之組合治療在生長效能方面達成顯著改良。

實例11

因在飼料中施加酵素所產生之雞血清APP之降低肉雞自第1天生長至第14天且餵食具有各種添加之酵素(如以下酵素表所概述)之典型玉米－大豆啟始飼糧(如以下飼糧組成表所展示)。各酵素類型之樣品大小包括3個籠，每籠8隻鳥。

治療J中之"酯酶"為來自與木聚糖酶相同之操作子中之遲緩芽孢桿菌基因的未表徵酵素。該酵素之受質未經鑑別。其指定為"酯酶"係基於該基因之DNA序列與其他已知之酯酶基因的相似性。雖然酯酶活性未經測定，但若該兩種蛋白質具有相似特異活性，則其應與木聚糖酶含量相似。

1,4－β－半乳聚糖酶及1,3－半乳聚糖酶係以果膠受質使用還原糖檢定量測。

第14天時，自所有鳥收集血清且就α1－酸糖蛋白(AGP)含量如上所述分析樣品。來自各治療組之α－1－酸糖蛋白之平均含量展示於上表中。

如該表所反映，與治療A(無酵素)相比，治療H、I及J產生血清AGP之降低。

治療H(殼糖酶加1,4－β－甘露聚糖酶)在僅兩週之生長後產生顯著結果。雖然酵素之量為在其他治療(與用可比量之殼糖酶之治療G及用可比量之1,4－β－甘露聚糖酶之治療治療E及F相比)中不展示反應的含量，殼糖酶及1,4－β－甘露聚糖酶之組合產生AGP之顯著降低，該降低不能由使用僅一種酵素所獲得之結果預測。

雖然治療I(1,3－β－葡聚糖酶及1,4－β－甘露聚糖酶)產生顯著結果，但該等結果在該實驗(P值為0.125)中統計上並不具有明顯的顯著性。在其他更長持續時間之試驗中，用1,3－β－葡聚糖酶及1,4－β－甘露聚糖酶之治療並不對AGP含量產生顯著影響。

比較治療J(木聚糖酶、1,4－β－甘露聚糖酶、酯酶；相對對照治療A，P＝0.083)與治療F(木聚糖酶＋1,4－β－甘露聚糖酶，無"酯酶")，揭露治療J產生顯著效應，其中治療F並不展示AGP降低。

實例12

該實例檢驗假說：改變飼料組合物以包括刺激先天免疫系統之成分將使血清APP含量增加。

以大豆油高能量飼糧作為對照，使用基本玉米－大豆飼糧執行21天肉雞之試驗。為獲得試驗飼糧，修改對照飼糧以使其含有估計具有免疫刺激組分之實用材料，同時維持相同的大致等效之營養價值。試驗飼糧包括下列變化：玉米/大豆/大豆油對照；AV摻合油(動物植物摻合油)內含物；大豆卵磷脂內含物；家禽粉料內含物；具有大豆殼佔5%之DDGS(來自乙醇製造之蒸餾顆粒及可溶副產物)內含物；無大豆殼佔15%之DDGS內含物。

飼糧係更詳細地描述於下表中。

期望AV摻合物及大豆卵磷脂含有包含先天免疫系統刺激劑磷脂醯絲胺酸之磷脂。家禽粉料可含有磷脂醯絲胺酸、玻尿酸及多種微生物刺激劑，該等微生物刺激劑源自雜屑或加工之前可能發生之後續微生物生長。期望DDGS含有豐富酵母殘餘物，該殘餘物包括包含α－甘露聚糖、1,3－β－葡聚糖及殼聚糖的細胞壁及來自初始醱酵基質之潛在刺激性非醱酵碳水化合物聚合物。

^a 家禽BPM(副產品粉料)；^b DDGS(乾酒糟及可溶物)；^c AV摻合物(動物植物摻合油)；^d 向家禽粉料飼糧中添加大豆殼使甘露聚糖含量均衡以補償降低之大豆粉料。

對各飼糧而言，肉雞(Cobb×Cobb)在3個Petersime層疊籠中生長，每籠8隻鳥(每鳥0.631 sq.ft.)。21天後，如先前實例所述分析各鳥之血清AGP含量。

如下表所示，經修改之飼糧基於第21天血清AGP的顯著增加展示先天免疫系統刺激之明顯跡象。資料亦強調(諸如)藉由使用包含降解誘導免疫壓力之成分之酵素的組合物來降低由根據本發明之飼糧組分引起之免疫壓力的可能性。

實例13

該實例證明包含1,3－β－葡聚糖酶之組合物降低與1,3－β－葡聚糖相關聯之免疫壓力的功效，該1,3－β－葡聚糖存在於飼料中且由於其與真菌細胞壁相關聯，所以其為完全由動物之先天免疫系統輕易識別之分子模式。結果展示，如同1,4－β－甘露聚糖酶，1,3－β－葡聚糖酶降低血清APP之含量且改良動物生長效能。

肉雞(Cobb×Cobb)以展示於下表中之典型低脂肪玉米/大豆粉料飼糧為食自第1天生長至第21天。在兩種情況下，飼糧係經均勻噴灑由遲緩芽孢桿菌醱酵製備之液體酵素之濃溶液補充以施加400,000 IU 1,4－β－甘露聚糖酶/噸或264,000 IU 1,3－β－葡聚糖酶/噸。(在該情況下，噸表示2000 lbs或907.4 kg。)

對各飼糧類型而言，鳥在3個Petersime層疊籠中生長，每籠8隻鳥(每鳥0.631 sq.ft.)。21天後，如之前實例所述分析各鳥之血清AGP含量。利用標準程序測定鳥重量及所消耗之飼料且計算飼料轉化率。結果展示於下表中。

WAFC(重量經調整之飼料轉化率)計算如下：WAFC＝FC－2.204*((W－Wa)/3)其中FC＝所消耗之飼料之重量/增益之重量Wa＝試驗中所有鳥之平均重量W＝每籠之平均活重增益

1,4－β－甘露聚糖酶與1,3－β－葡聚糖酶降低血清α1－酸糖蛋白(AGP)含量。該兩種酵素治療降低重量經調整之飼料轉化率，且餵食1,3－β－葡聚糖酶之組之降低在統計上為顯著的。

實例14

肉雞試驗係在Petersine層疊籠中用除酵素治療不同外如實例13所述之飼料及方法執行，如下表所概述。

由藤黃節桿菌(Arthrobacter luteus )之醱酵獲得之細胞溶解酶(粗1,3－β－葡聚糖酶產品)係獲自Sigma Chemical Company,St.Louis Mo。細胞溶解酶活性係藉由下述還原糖方法測定，且施加60 MU/噸(等效於240,000 IU/噸)。根據製造商，該產品亦含有其他活性，包括未量測之殼糖酶活性。

1,3－β－葡聚糖酶之至多約30 MU/噸(120,000 IU/噸)之增加之含量導致對AGP含量(例如劑量反應)的增加之效應。提供動物飼料以約30 MU/噸(120,000 IU/噸)之1,3－β－葡聚糖酶預期會降低免疫壓力，此如血清AGP之降低之含量及/或改良之動物生長效能所反映。

結果亦展示木葡聚糖酶有效降低血清AGP含量。木葡聚糖酶(EC 3.2.1.151)為對木葡聚糖(植物中之結構聚合物)具有特異性之1,4－β－葡聚糖酶。

除細胞溶解酶外，所有用於該實例之酵素均由遲緩芽孢桿菌產生。細胞溶解酶係由藤黃節桿菌(A.luteus )產生，該藤黃節桿菌重新分類為纖維化纖維微細菌。已展示藤黃節桿菌之醱酵產生多種形式之1,3－β－葡聚糖酶。參見，例如(Ferrer,P.Microb Cell Factories 5：10,2006，2006年3月17日在線公開，doi ：10.1186/1475－2859－5－10)。上述結果展示細胞溶解酶至少與遲緩芽孢桿菌1,3－β－葡聚糖酶製劑一樣降低雞血清AGP，此指示酵素之源並不重要。亦即，根據本發明可使用來自任何源之酵素。亦可能，殼糖酶(Sigma報導其存在於細胞溶解酶中)可能已改良細胞溶解酶治療之效能。

實例15

下列檢定可用於評估酵素活性(I)木葡聚糖酶 木葡聚糖酶活性可使用以下協定檢定：DNS試劑： 每日製備10 g/L NaOH、2 g/L苯酚、10 g/L二硝基水楊酸、1200 g/L酒石酸鉀鈉四水合物。恰在使用之前，添加0.5 g/L無水亞硫酸鈉。

標準溶液及標準曲線： 製備一系列濃度範圍在0.1公克/公升至0.5公克/公升之溶解於水中之D－(＋)－甘露糖標準溶液。將各0.6 mL之標準甘露糖(一式兩份或一式三份)添加至於13×100 mm玻璃試管中之1.5 mL DNS使用溶液中。具有0.6 mL等分水試樣之樣品可用作光譜光度計零值之空白試劑。將溶液在沸水浴中加熱5分鐘，冷卻至周圍溫度且在550 nm處讀取吸光度。所期望之結果為0.20 O.D.與1.2 O.D.單位之間的線性劑量反應。標準曲線(O.D 550/公克/公升甘露糖)之斜率係僅由曲線之線性部分計算。酵素反應中之還原糖之g/L值係用該斜率確定。

木葡聚糖受質： 獲自Megazyme International Ireland Ltd.,Bray,Co.,Ireland之木葡聚糖(Tamarind)係以5 g/L溶解於50 mM Tris緩衝液(pH 7.5，具有0.05%葡萄糖)中。

反應條件： 0.25 mL 5 g/L之木葡聚糖受質係與以50 mM Tris緩衝液稀釋之0.05 mL酵素一起使用，且將反應混合物在40℃下培育。添加0.75 mL DNS試劑以使反應停止，且將所停止之反應混合物在沸水浴中加熱5分鐘，且隨後冷卻，之後在550 nm下讀取吸光度。使用酵素溶液之零時間點確定背景含量。

計算值： ChemGen木葡聚糖酶MU係定義為每分鐘產生0.72公克還原糖的能力(使用純甘露糖(還原糖)作為標準)。一個ChemGen MU等效於4000 IU。換言之，一個CGU等效於250 IU(IU＝1.0微莫耳/分鐘)。

(II)β－1,3－葡聚糖酶 β－1,3－葡聚糖酶活性可使用以下協定檢定：該檢定使用與上述木葡聚糖酶之檢定相同的DNS試劑、標準溶液、標準曲線及酵素單位計算及稀釋量。所使用之緩衝液為50 mM MOPS(4－嗎啉丙烷磺酸，FW＝209.26)緩衝液，pH 6.5。

CM茯苓聚糖受質： 羧基甲基茯苓聚糖(CM茯苓聚糖，CMP)係獲自Megazyme International Ireland Ltd.,Bray,Co.,Ireland。CMP受質係以5 g/L在約90℃下藉由將CMP緩慢添加至快速攪拌之50 mM MOPS緩衝溶液(pH 6.5)中來製備。將酵素粉末極佳地分散且將容器覆蓋或緊密密封，同時將分散液緩慢加熱至沸騰且在一加熱攪拌板上攪拌之情況下徐沸30分鐘以獲得無溶液中可見之非水合凝膠之小凝塊的極佳水合凝膠。將溶液冷卻至室溫，不使用時儲存於4℃下，且儲存後，在使用之前均勻混合。

反應條件： 0.25 mL 5 g/L CM茯苓聚糖受質係與稀釋於MOPS緩衝液中之0.05 mL酵素一起使用，且將反應混合物在40℃下培育各種時間，至多45分鐘。添加0.75 mL DNS試劑以停止反應。將所停止之反應混合物在沸水浴中加熱5分鐘，且隨後冷卻，之後在550 nm處讀取吸光度。使用酵素溶液之零時間點確定背景含量。

(III)殼糖酶 殼糖酶活性可使用如Thompson等人，Appl.Environ.Microbiol.67：4001－008(2001)所述之螢光殼糖受質測定，4－甲基傘形基－β－D－N,N',N'"N"'－四乙醯基殼質四氧化物。將受質以2.5 mM溶解於DMSO中。

在一例示性檢定中，20 μL殼糖受質(2.5 mM)係與150 μL三胺基甲烷鹽酸緩衝液(tris)(20.0 mM，pH 7.5)一起使用。將受質混合物置放於一黑色98孔微量滴定盤中且預加熱至37℃歷時10分鐘。多次重複反應係藉由添加30 μL稀酵素啟始且在37℃下繼續培育。個別反應係在2、4、6、8及10分鐘時用50 μL 3 M Na₂ CaO₃ 停止。使用355 nm帶通濾波器激發波長及460 nm帶通濾波器發射波長在微量滴定盤讀取器(Fluoroscan II)中讀取螢光。將酵素稀釋以致就該反應而言，4－甲基傘形酮以線性速率產生且在與酵素檢定相同但不存在酵素及受質之條件下產生之標準曲線範圍內。每分鐘1微莫耳4－甲基傘形酮之釋放定義為1 IU。標準曲線係由介於0與1×10^－ ⁴ 微莫耳之間之數種濃度的200 μL反應緩衝溶液中之4－甲基傘形酮，隨後添加50 μL 3 M Na₂ CaO₃ 來產生。

雖然本發明已經充分詳細地描述且例示以使熟習此項技術者製造且使用本發明，但在不脫離本發明之精神及範疇之情況下，多種變化、修改及改良應顯而易見。本文所提供之實例代表較佳實施例，為例示性的，且不意欲限制本發明之範疇。本發明之修改及其他用途應為熟習此項技術者所知。該等修改涵蓋於本發明之精神中且由申請專利範圍所界定。

熟習此項技術者應顯而易見，在不脫離本發明之範疇及精神之情況下，可對本文揭示之本發明進行不同替代及修改。

說明書中所提及之所有專利及公開案均表示本發明所屬之技術領域中之普通熟習者之水平。所有專利及公開案係以引用的方式併入本文中，該引用的程度就如同已特定地及個別地將所指示之各個別公開案以引用的方式併入一般。

圖1展示用於用實例1所獲得之數據計算試驗雞之血漿樣品中雞α－1－酸性糖蛋白(AGP)之濃度的最佳曲線擬合(及附屬多項式)。

圖2之Box及Wisker圖圖示性地展示如實例2所述之來自試驗雞之雞血清中AGP之含量。數據之範圍由垂直線表示。方框表示平均值之一個標準偏差內的數據範圍。水平線指示數據平均值。

圖3展示如實例3所述之來自接受數種不同飼料之一種之雞之血清的AGP含量，該等不同飼料包括根據本發明之飼料及先前技術飼料。

圖4展示用於用實例8所獲得之數據計算試驗火雞之血漿樣品中AGP之濃度的最佳曲線擬合(及附屬多項式)。

Claims

一種適合經口投與動物之動物飼料組合物，其包含經口可接受之載劑中降低免疫壓力之酵素，該酵素量可有效降低該動物體內陽性急性期蛋白質之含量，增加該動物體內陰性急性期蛋白質之含量，及/或改良動物生長效能，其中：(i)該有效量為至少20 IU酵素/公斤飼料；(ii)該酵素並非β-甘露聚糖酶型半纖維素酶或磷脂酶；(iii)該酵素係選自下列組成之群：1,3-β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、木葡聚糖酶、核糖核酸酶(RNAse)L、雙鏈核糖核酸(dsRNA)特異性腺核苷去胺酶、CG特異性限制性核酸內切酶、N-聚糖酶、α-1,2-岩藻糖苷酶、α-1,3-1,4-岩藻糖苷酶、α-1,6-甘露糖苷酶、α-1,2-甘露糖苷酶、α-1,3-甘露糖苷酶、β-1,4-半乳糖苷酶、內-β-N-乙醯基葡糖胺酶F(內切糖苷酶(endo)F)、肽-N-(N-乙醯基-β-葡糖胺基)天冬醯胺酸醯胺酶F(肽N-糖苷酶F)、肽N-糖苷酶A、內-β-N-乙醯基葡糖胺酶H(內切糖苷酶H)、內切糖苷酶D、內切糖苷酶C、α-N-乙醯基半乳糖醯胺酶、β-1,3-半乳糖苷酶、內-N-醯基-神經胺酸酶(內切糖苷酶N)、α-2,3-神經胺酸酶、α-2,6-神經胺酸酶、α-2,8-神經胺酸酶、β-N-乙醯基己醣胺酶、內-β-N-半乳糖苷酶、內-α-N-乙醯基半乳糖胺酶、內-α-1,6-D-甘露聚糖酶、阿拉伯半乳聚糖酶、α-甘露聚糖酶、α-甘露糖苷酶、神經鞘磷脂酶、殼糖酶、殼糖去乙醯基酶、碳水化合物去乙醯基酶、N-乙醯基葡糖胺酶、磷脂醯絲胺酸脫羧基酶、硫酸酯酶、β-半乳糖苷酶、阿拉伯聚糖酶、玻尿酸酶、α-阿拉伯呋喃糖苷酶、軟骨素酶、葡糖腦苷脂酶、甲酯酶、阿魏酸酯酶、阿魏醯基(furuloyl)酯酶、乙醯基酯酶、碳水化合物去乙醯基酶、磷酸膽鹼脫水酶、鹼性磷酸酶、酸性磷酸酶、磷酸膽鹼酯酶及磷酸膽鹼磷酸酶。
一種適合經口投與動物之液體組合物，其包含經口可接受之載劑中降低免疫壓力之酵素，其中：(i)該組合物包含至少40,000 IU酵素/公升；(ii)該酵素並非β-甘露聚糖酶型半纖維素酶或磷脂酶；(iii)該酵素係選自下列組成之群：1,3-β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、木葡聚糖酶、RNAse L、dsRNA特異性腺核苷去胺酶、CG特異性限制性核酸內切酶、N-聚糖酶、α-1,2-岩藻糖苷酶、α-1,3-1,4-岩藻糖苷酶、α-1,6-甘露糖苷酶、α-1,2-甘露糖苷酶、α-1,3-甘露糖苷酶、β-1,4-半乳糖苷酶、內-β-N-乙醯基葡糖胺酶F(內切糖苷酶F)、肽-N-(N-乙醯基-β-葡糖胺基)天冬醯胺酸醯胺酶F(PNGase F)、PNGase A、內-β-N-乙醯基葡糖胺酶H(內切糖苷酶H)、內切糖苷酶D、內切糖苷酶C、α-N-乙醯基半乳糖醯胺酶、β-1,3-半乳糖苷酶、內-N-醯基-神經胺酸酶(內切糖苷酶N)、α-2,3-神經胺酸酶、α-2,6-神經胺酸酶、α-2,8-神經胺酸酶、β-N-乙醯基己醣胺酶、內-β-N-半乳糖苷酶、內-α-N-乙醯基半乳糖胺酶、內-α-1,6-D-甘露聚糖酶、阿拉伯半乳聚糖酶、α-甘露聚糖酶、α-甘露糖苷酶、神經鞘磷脂酶、殼糖酶、殼糖去乙醯基酶、碳水化合物去乙醯基酶、N-乙醯基葡糖胺酶、磷脂醯絲胺酸脫羧基酶、硫酸酯酶、β-半乳糖苷酶、阿拉伯聚糖酶、玻尿酸酶、α-阿拉伯呋喃糖苷酶、軟骨素酶、葡糖腦苷脂酶、甲酯酶、阿魏酸酯酶、阿魏醯基(furuloyl)酯酶、乙醯基酯酶、碳水化合物去乙醯基酶、磷酸膽鹼脫水酶、鹼性磷酸酶、酸性磷酸酶、磷酸膽鹼酯酶及磷酸膽鹼磷酸酶；且(iv)若該酵素包含1,3-β-葡聚糖酶，該液體組合物包含至少155,000 IU 1,3-β-葡聚糖酶/公升。
一種適合經口投與動物之固體組合物，其包含經口可接受之載劑中降低免疫壓力之酵素，其中：(i)該組合物包含至少40,000 IU酵素/公斤；(ii)該酵素並非β-甘露聚糖酶型半纖維素酶或磷脂酶；(iii)該酵素係選自下列組成之群：1,3-β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、木葡聚糖酶、RNAse L、dsRNA特異性腺核苷去胺酶、CG特異性限制性核酸內切酶、N-聚糖酶、α-1,2-岩藻糖苷酶、α-1,3-1,4-岩藻糖苷酶、α-1,6-甘露糖苷酶、α-1,2-甘露糖苷酶、α-1,3-甘露糖苷酶、β-1,4-半乳糖苷酶、內-β-N-乙醯基葡糖胺酶F(內切糖苷酶F)、肽-N-(N-乙醯基-β-葡糖胺基)天冬醯胺酸醯胺酶F(PNGase F)、PNGase A、內-β-N-乙醯基葡糖胺酶H(內切糖苷酶H)、內切糖苷酶D、內切糖苷酶C、α-N-乙醯基半乳糖醯胺酶、β-1,3-半乳糖苷酶、內-N-醯基-神經胺酸酶(內切糖苷酶N)、α-2,3-神經胺酸酶、α-2,6-神經胺酸酶、α-2,8-神經胺酸酶、β-N-乙醯基己醣胺酶、內-β-N-半乳糖苷酶、內-α-N-乙醯基半乳糖胺酶、內-α-1,6-D-甘露聚糖酶、阿拉伯半乳聚糖酶、α-甘露聚糖酶、α-甘露糖苷酶、神經鞘磷脂酶、殼糖酶、殼糖去乙醯基酶、碳水化合物去乙醯基酶、N-乙醯基葡糖胺酶、磷脂醯絲胺酸脫羧基酶、硫酸酯酶、β-半乳糖苷酶、阿拉伯聚糖酶、玻尿酸酶、α-阿拉伯呋喃糖苷酶、軟骨素酶、葡糖腦苷脂酶、甲酯酶、阿魏酸酯酶、阿魏醯基(furuloyl)酯酶、乙醯基酯酶、碳水化合物去乙醯基酶、磷酸膽鹼脫水酶、鹼性磷酸酶、酸性磷酸酶、磷酸膽鹼酯酶及磷酸膽鹼磷酸酶；且(iv)若該酵素包含1,3-β-葡聚糖酶，該液體組合物包含至少300,000 IU 1,3-β-葡聚糖酶/公斤。
如請求項1之組合物，其中該組合物為包含誘導動物體體內免疫反應之成分的動物飼料且其中該酵素包含降解該成分之酵素。
如請求項4之組合物，其中該成分為由病原微生物呈現之抗原。
如請求項3之組合物，其包含至少一降低免疫壓力之酵素，其含量為至少80,000 IU酵素/公斤。
如請求項3之組合物，其包含至少一降低免疫壓力之酵素，其含量為至少160,000 IU酵素/公斤。
如請求項1至3中任一項之組合物，其中該酵素包含1,3- β-葡聚糖酶。
如請求項1之組合物，其包含至少30 IU 1,3-β-葡聚糖酶/公斤飼料。
如請求項2之組合物，其包含至少230,000 IU 1,3-β-葡聚糖酶/公升。
如請求項3之組合物，其包含至少450,000 IU 1,3-β-葡聚糖酶/公斤。
一種動物飼料組合物，其包含二種或二種以上選自下列組成之群之降低免疫壓力之酵素：1,4-β-甘露聚糖酶、1,3-β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、木葡聚糖酶、RNAse L、dsRNA特異性腺核苷去胺酶、CG特異性限制性核酸內切酶、N-聚糖酶、α-1,2-岩藻糖苷酶、α-1,3-1,4-岩藻糖苷酶、α-1,6-甘露糖苷酶、α-1,2-甘露糖苷酶、α-1,3-甘露糖苷酶、β-1,4-半乳糖苷酶、內-β-N-乙醯基葡糖胺酶F(內切糖苷酶F)、肽-N-(N-乙醯基-β-葡糖胺基)天冬醯胺酸醯胺酶F(PNGase F)、PNGase A、內-β-N-乙醯基葡糖胺酶H(內切糖苷酶H)、內切糖苷酶D、內切糖苷酶C、α-N-乙醯基半乳糖醯胺酶、β-1,3-半乳糖苷酶、內-N-醯基-神經胺酸酶(內切糖苷酶N)、α-2,3-神經胺酸酶、α-2,6-神經胺酸酶、α-2,8-神經胺酸酶、β-N-乙醯基己醣胺酶、內-β-N-半乳糖苷酶、內-α-N-乙醯基半乳糖胺酶、內-α-1,6-D-甘露聚糖酶、阿拉伯半乳聚糖酶、α-甘露聚糖酶、α-甘露糖苷酶、神經鞘磷脂酶、殼糖酶、殼糖去乙醯基酶、碳水化合物去乙醯基酶、N-乙醯基葡糖胺酶、磷脂醯絲胺酸脫羧基酶、硫酸酯酶、β-半乳糖苷酶、阿拉伯聚糖酶、玻尿酸酶、α-阿拉伯呋喃糖苷酶、軟骨素酶、葡糖腦苷脂酶、甲酯酶、阿魏酸酯酶、阿魏醯基(furuloyl)酯酶、乙醯基酯酶、碳水化合物去乙醯基酶、磷酸膽鹼脫水酶、鹼性磷酸酶、酸性磷酸酶、磷酸膽鹼酯酶及磷酸膽鹼磷酸酶，條件為若該組合物含有1,4-β-甘露聚糖酶及1,3-β-葡聚糖酶，其含有至少20 IU 1,3-β-葡聚糖酶/公斤飼料。
一種液體組合物，其包含二種或二種以上選自下列組成之群之降低免疫壓力之酵素：1,4-β-甘露聚糖酶、1,3-β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、木葡聚糖酶、RNAse L、dsRNA特異性腺核苷去胺酶、CG特異性限制性核酸內切酶、N-聚糖酶、α-1,2-岩藻糖苷酶、α-1,3-1,4-岩藻糖苷酶、α-1,6-甘露糖苷酶、α-1,2-甘露糖苷酶、α-1,3-甘露糖苷酶、β-1,4-半乳糖苷酶、內-β-N-乙醯基葡糖胺酶F(內切糖苷酶F)、肽-N-(N-乙醯基-β-葡糖胺基)天冬醯胺酸醯胺酶F(PNGase F)、PNGase A、內-β-N-乙醯基葡糖胺酶H(內切糖苷酶H)、內切糖苷酶D、內切糖苷酶C、α-N-乙醯基半乳糖醯胺酶、β-1,3-半乳糖苷酶、內-N-醯基-神經胺酸酶(內切糖苷酶N)、α-2,3-神經胺酸酶、α-2,6-神經胺酸酶、α-2,8-神經胺酸酶、β-N-乙醯基己醣胺酶、內-β-N-半乳糖苷酶、內-α-N-乙醯基半乳糖胺酶、內-α-1,6-D-甘露聚糖酶、阿拉伯半乳聚糖酶、α-甘露聚糖酶、α-甘露糖苷酶、神經鞘磷脂酶、殼糖酶、殼糖去乙醯基酶、碳水化合物去乙醯基酶、N-乙醯基葡糖胺酶、磷脂醯絲胺酸脫羧基酶、硫酸酯酶、β-半乳糖苷酶、阿拉伯聚糖酶、玻尿酸酶、α-阿拉伯呋喃糖苷酶、軟骨素酶、葡糖腦苷脂酶、甲酯酶、阿魏酸酯酶、阿魏醯基(furuloyl)酯酶、乙醯基酯酶、碳水化合物去乙醯基酶、磷酸膽鹼脫水酶、鹼性磷酸酶、酸性磷酸酶、磷酸膽鹼酯酶及磷酸膽鹼磷酸酶，條件為若該組合物含有1,4-β-甘露聚糖酶及1,3-β-葡聚糖酶，其含有至少155,000 IU 1,3-β-葡聚糖酶/公升。
一種固體組合物，其包含二種或二種以上選自下列組成之群之降低免疫壓力之酵素：1,4-β-甘露聚糖酶、1,3-β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、木葡聚糖酶、RNAse L、dsRNA特異性腺核苷去胺酶、CG特異性限制性核酸內切酶、N-聚糖酶、α-1,2-岩藻糖苷酶、α-1,3-1,4-岩藻糖苷酶、α-1,6-甘露糖苷酶、α-1,2-甘露糖苷酶、α-1,3-甘露糖苷酶、β-1,4-半乳糖苷酶、內-β-N-乙醯基葡糖胺酶F(內切糖苷酶F)、肽-N-(N-乙醯基-β-葡糖胺基)天冬醯胺酸醯胺酶F(PNGase F)、PNGase A、內-β-N-乙醯基葡糖胺酶H(內切糖苷酶H)、內切糖苷酶D、內切糖苷酶C、α-N-乙醯基半乳糖醯胺酶、β-1,3-半乳糖苷酶、內-N-醯基-神經胺酸酶(內切糖苷酶N)、α-2,3-神經胺酸酶、α-2,6-神經胺酸酶、α-2,8-神經胺酸酶、β-N-乙醯基己醣胺酶、內-β-N-半乳糖苷酶、內-α-N-乙醯基半乳糖胺酶、內-α-1,6-D-甘露聚糖酶、阿拉伯半乳聚糖酶、α-甘露聚糖酶、α-甘露糖苷酶、神經鞘磷脂酶、殼糖酶、殼糖去乙醯基酶、碳水化合物去乙醯基酶、N-乙醯基葡糖胺酶、磷脂醯絲胺酸脫羧基酶、硫酸酯酶、β-半乳糖苷酶、阿拉伯聚糖酶、玻尿酸酶、α-阿拉伯呋喃糖苷酶、軟骨素酶、葡糖腦苷脂酶、甲酯酶、阿魏酸酯酶、阿魏醯基(furuloyl)酯酶、乙醯基酯酶、碳水化合物去乙醯基酶、磷酸膽鹼脫水酶、鹼性磷酸酶、酸性磷酸酶、磷酸膽鹼酯酶及磷酸膽鹼磷酸酶，條件為若該組合物含有1,4-β-甘露聚糖酶及1,3-β-葡聚糖酶，其含有至少300,000 IU 1,3-β-葡聚糖酶/公升。
如請求項12至14中任一項之組合物，其包含1,4-β-甘露聚糖酶及1,3-β-葡聚糖酶中至少一種。
如請求項12至14中任一項之組合物，其中該組合物係選自下列組成之群：(i)包含1,4-β-甘露聚糖酶及殼糖酶之組合物；(ii)包含1,4-β-甘露聚糖酶及木葡聚糖酶之組合物；(iii)包含1,4-β-甘露聚糖酶及阿拉伯聚糖酶之組合物；(iv)包含1,3-β-葡聚糖酶及殼糖酶之組合物；(v)包含1,3-β-葡聚糖酶及木葡聚糖酶之組合物；(vi)包含1,3-β-葡聚糖酶及阿拉伯聚糖酶之組合物及(vii)包含1,4-β-甘露聚糖酶、1,3-β-葡聚糖酶及阿拉伯聚糖酶之組合物。
如請求項12之組合物，其包含1,4-β-甘露聚糖酶及1,3-β-葡聚糖酶。
如請求項17之組合物，其包含至少30 IU 1,3-β-葡聚糖酶/公斤飼料。
如請求項13之組合物，其包含1,4-β-甘露聚糖酶及1,3-β-葡聚糖酶。
如請求項19之組合物，其包含至少230,000 IU 1,3-β-葡聚糖酶/公升。
如請求項14之組合物，其包含1,4-β-甘露聚糖酶及1,3-β-葡聚糖酶。
如請求項21之組合物，其包含至少450,000 IU 1,3-β-葡聚糖酶/公斤。
如請求項17至22中任一項之組合物，進一步包含一或多種其他降低免疫壓力之酵素。
一種如請求項1至23中任一項之組合物之用途，其係用於製備降低動物體內免疫壓力之藥物。
如請求項24之用途，其中該動物係投予誘導動物體體內免疫反應之成分且其中該組合物包含至少一種降解該成分之降低免疫壓力之酵素。
如請求項25之用途，其中該成分及該酵素於相同之組合物投予。