TWI374878B - Phenanthrenone compounds, compositions and methods - Google Patents

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1374878 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明包含糖皮質激素受體調節劑化合物。本發明亦包 含組合物及使用化合物及組合物之方法。 【先前技術】 糖皮質激素受體調節劑係用於治療各種病狀之糖皮質激 素受體配體，此乃因其具有強效的抗炎活性、抗增殖活性 及免疫調節活性。J· Miner 等人，Expert Opin. Investig. Drugs (2005) 14(12):1527-1545 ° 糖皮質激素受體調節劑之實例包含地塞米松 (dexamethasone)、潑尼松(prednisone)、潑尼松龍 (prednisolone)、RU-486，且如 WO 2000/66522 及 WO 2004/005229 中所述 ° 使用糖皮質激素受體調節劑進行治療通常具有副作用， 例如骨丟失及骨質疏鬆。 確定靈驗、有效且副作用較少之糖皮質激素受體調節劑 能滿足醫療需要。 【發明内容】 本發明係關於式I之化合物：

141691.doc iJ74878 或其鹽。本發明包含化合物4b-苄基_6,7-二羥基-6-甲基-N-(2-甲基吡啶_3_基）_1〇_側氧基_7苯基·4匕5,6,78,83,9,1〇_八 氫菲-2·曱醯胺或其醫藥上可接受之鹽。 本發明亦係關於包括治療有效量之式I之化合物及醫藥 上可接受之載劑的組合物。本發明亦提供使糖皮質激素受 體與式I之化合物接觸之方法。本發明另外提供藉由向個 體投與式I之化合物來治療個體中由糖皮質激素受體活性 調介之病狀的方法。 【實施方式】 本文之此詳細闡述僅意欲使其他熟習此項技術者熟悉本 發明、其原理及其實際應用，以使其他熟習此項技術者可 以最適用於特定應用要求的多種形式來修改及應用本發 明。該等發明因此並不限於本說明書中所述之實施例，且 可有所變化。 Α·定義 對於下列所定義之術語，應用該等定義，除非中請專利 範圍内或此說明書中其他處給出不同之定義。 術β。載刎」也述醫藥組合物或調配物十除活性醫藥化 合物外之成份。載劑可為醫藥上可接受之材料或媒劑或一 或多種材料及/或媒劑之組合。實例包含液體或固體填充 劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑、共溶劑、緩衝劑、防腐劑、 抗氧化劑、濁濕劑、崩解劑、黏合劑、懸浮劑、表面活性 劑、潤濕劑、膨脹劑、聚合物、助流劑1色劑、矯味 劑、甜味劑、潤滑劑、保濕劑及壓片或密封材料。 14169l.doc 1374878 片語「接觸糖皮質激素受體」意指與糖皮質激素受體進 行活體内、離體、或活體外接觸，且包含向具有糖皮質激 素受體之個體投與本發明之化合物或鹽’以及（例如）將本 發明之化合物或鹽納入含有具有糖皮質激素受體之細胞、 未純化或經純化製劑的試樣中。舉例而言，接觸包含化合 物及受體發生相互作用，例如結合。 片語「炎症相關性病狀」包含關節炎、纖維肌痛、強直 性脊椎炎、乾癬、系統性紅斑狼瘡、痛風、未分化性脊椎 關節病、青少年型脊椎關節炎、克隆氏病(Cr〇hn,s disease)、潰癌性結腸炎、刺激性腸症候群、炎症性腸病 及與上述病狀相關之疼痛。關節炎之具體實例包含類風濕 性關節炎、骨_、反應性關節炎、感染性關節炎、牛 皮癬關節炎、多關節炎、幼年型關節炎、幼年型類風濕關 節炎、幼年型反應性關節炎及幼年型牛皮癬關節炎。 術語「調節」或「調節劑」包含拮抗劑、激動劑、部分 拮抗劑、部分激動劑、或其以各比率混合之混合物。 術語「個體」係'指任何動物（包.含喷乳動物），例如小 鼠、大鼠、其他齧齒類、兔、狗、貓、豬、牛、羊、馬、 靈長類、或人類。 術語「治療「treating」及相應術語「_」與 「treatment」）包含對個體進行姑息性治療、恢復性治療 及預防性（「防護性 S.,. 」）化療。術語「姑息性治療」係指在 未α癒病狀之If况下可減輕或降低個體病狀之效應或強度 的治療。術語「預以v念 方性療J (及相應術語「防護性治 141691.doc 1374878 療」）係指可預防個體出現病狀的治療。術語「恢復性治 療」（「根治性」）係指可阻止個體之病狀進展、減少病狀 之病理表現或完全消除病狀的治療。可使用治療有效量之 可引起組織'系統或個體之生物或醫學反應的化合物、鹽 或組合物來實施治療，該生物或醫學反應係諸如患者、研 究者、醫生、獸醫或臨床醫師等個體所尋求者。 術語「醫藥有效」或「治療有效」係指足以提供如上所 述有效治療之本發明化合物或其鹽的量。應理解，在化合 物或鹽與另一藥劑組合投與時，包括醫藥或治療有效量之 量可為較單獨使用時為小之化合物或鹽的量。 B.化合物 本發明提供式I之三環化合物。該等化合物係用作糖皮 質激素受體調節劑。 本發明亦包括式II之化合物：

(Π) 或其鹽。 本發明包含化合物4b-苄基_6,7-二羥基-6-甲基-N-(2-曱 基 °比。定基）-10-側氧基-7-苯基-41)，5,6,7,8,8&，9，10-八氫 菲甲酿胺或其醫藥上可接受之鹽。本發明亦包含化合物 141691.doc Γ 1374878 (4bR,6R，7R,8aS)-4b-苄基-6,7-二羥基-6-曱基-N-(2-曱基吡 啶-3-基）-10-側氧基-7-笨基-41)，5,6,7,8,83,9，10-八氫菲-2-甲 醯胺或其醫藥上可接受之鹽。 本發明化合物之醫藥上可接受之鹽包含其酸加成鹽及鹼 性鹽（包含雙鹽）。在一實施例中，本發明包含式I之化合物 之氫氣酸鹽。在另一實施例中，本發明包含式I之化合物 之妈鹽。在另一實施例中，本發明包含式I之化合物之鈉 鹽。 醫藥上可接受之酸加成鹽係由可形成無毒鹽之酸形成。 實例包含乙酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲睃鹽、苯磺酸鹽、碳 酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、硼酸鹽、樟腦磺酸 鹽、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、乙磺酸鹽、曱酸鹽、富馬酸 鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、六氟磷酸 鹽、羥苯醯苯酸鹽、氫氯酸鹽/氯化物、氫溴酸鹽/溴化 物、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸 鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲續酸鹽、甲基硫酸鹽、萘酸 鹽、2 -萘續酸鹽、煙驗酸鹽、硕酸鹽、乳清酸鹽、草酸 鹽、棕橺酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫 鹽、糖二酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、曱苯磺 酸鹽及三氟乙酸鹽。醫藥上可接受之鹼性鹽係由可形成無 毒鹽之鹼形成。實例包含鋁鹽、精胺酸鹽、苄星鹽、鈣 鹽、膽鹼鹽、二乙胺鹽、二醇胺鹽、甘胺酸鹽、離胺酸 鹽、鎂鹽、葡曱胺鹽、醇胺鹽、鉀鹽、鈉鹽、胺丁三醇鹽 及鋅鹽。 141691.doc 1374878 關於適宜鹽之综述參見Stahl及Wermuth之「Handbook of

Pharmaceutical Salts: Properties，Selection，and Use」 (Wiley-VCH，Weinheim，Germany，2002)。 鹽可藉由將本發明化合物之溶液與期望酸或鹼（視需要） 一起混合來容易地製備。可將鹽自溶液中沉激出來且藉由 過遽收集或可藉由蒸發掉溶劑回收。鹽之電離度可在完全 電離至幾乎無電離之間變化。 本發明之化合物可作為前藥投與。因此，某些衍生物本 身可稍有或不具有藥理活性’但當將其投與至身體内部或 表面上時可藉由（例如）水解解離轉化成具有期望活性之本 發明化合物。該等衍生物稱作，前藥，。有關前藥用途的其 他資 sfl 可參見 ’Pro-drugs as Novel Delivery Systems，第 14 卷 ’ ACS Symposium Series(T Higuchi 及 W Stella)與

Bioreversible Carriers in Drug Design'，Pergamon Press， 1987(E B Roche編輯，American Pharmaceutical Association)。 舉例而言，前藥可藉由使用彼等熟習此項技術者所已知 之某些部分（例如，H Bundgaard之「Design of Prodrugs」 (Elsevier ’ 1985)中所述之’前體部分代替本發明化合物中 存在之適宜官能團來產生。 s玄專前藥之一些實例包含： (i) 在化合物含有醇官能團（-OH)時，包含其醚，例如， 使用（C〗-C6)烷醯氧基曱基代替氫；且 (ii) 在化合物含有二級胺基官能團時，包含其醯胺，例 如’使用（CrCw)烷醯基代替氫。 141691.doc 1374878 本發明化合物之磷酸鹽形式可藉由先前技術中已知之方 法來製備，例如彼等揭示於WO 2008/070149、WO 2008/064274 及 WO 2006/078846 中者。化合物（4a_ 节基 _2 3_ 一超基-3-曱基-N-(2-甲基比咬_3_基）·9-側氧基_2_苯 基-1，2,3,4,43,9，10，1〇3-八氫菲-7_甲醯胺基）甲基碌酸二氯 鹽及立體異構體（(2R，3R，4aRi0aS)_4a_苄基_2 3經基_3甲 基-N-(2-甲基吡啶-3-基）-9-側氧基_2_苯基· nnhj， 10,10a-八氫菲-7-甲醯胺基）甲基磷酸二氫鹽可藉由以下反 應圖製備：

最後，本發明之某些化合物本身可用作本發明其他化合 物的前藥。舉例而言，式I或^之某些化合物可視為式丨或工工 所涵蓋之其他化合物的前藥。 所有同分異構體（例如，立體異構體、幾何（順/反或Z/E) 異構體及互變異構形式的化合物或鹽）皆包含於本發明範 141691.doc •10- 1374878 圍中’包含具有-類以上同分異構現象之化合物或鹽及 其一或多種之混合物。舉例而言，下式描繪式„之化合物 及互變異構體。

亦包含者係酸加成鹽或鹼式鹽，其中抗衡離子具光學活 性（例如，D-乳酸鹽或L-離胺酸），或具外消旋性（例如， DL-酒石酸鹽或dl-精胺酸）。 同刀異構體可藉由彼等熟習此項技術者所習知之習用技 術進行分離。 本發明包含同位素標記的本發明化合物，其中—或多個 =子經具有相同原子數但原子量或質量數與在自然界中通 常發現之原子量或質量數不同之原子代替。 同位素標記的本發明化合物通常可藉由彼等熟習此項技 術者所習知之習用技術來製備、或可藉由與彼等闡述於隨 附實例及製備方法中者相類似的方法使用適宜同位素標記 忒劑代替先前採用的非標記試劑來製備。 為治療下文所提及之病狀，可投與本發明之化合物。亦 可使用本發明化合物之鹽。 C.組合物 141691 .doc Γ 1 1374878 本發明之化合物或鹽可為組合物之一部分。組合物亦可 包含一或多種本發明之化合物或鹽。組合物亦可包含對映 體過量的一或多種本發明化合物。其他藥理活性物質及載 劑可包含於組合物中。 一實施例係包括式I之化合物或其鹽之組合物。另一實 施例係包括式I之化合物或其鹽及載劑之組合物。 例如’載劑可為賦形劑。賦形劑之選擇在很大程度上取 決於諸如以下因素：投與之具體方式、賦形劑對溶解性及 穩定性之影響及劑型之性質。 組合物可為固體、液體、或二者皆可，且可與化合物一 起調配成單位劑量組合物（例如，錠劑），該單位劑量組合 物可含有0.05重量。/β至95重量％之活性化合物。本發明之 化合物或鹽可與適宜聚合物或其他藥物載劑相偶聯。 D.方法 本發明包含使糖皮質激素受體與本發明之化合物或鹽招 觸的方法。 本發明亦包含治療個體中由糖皮質激素受體活性調介之 病狀的方法’其包括向個體投與本發明之化合物或鹽。 由糖皮質激素受體活性調介之病狀包含： 入）内W I亂’例如原發性及繼發性腎上腺皮質功能不 *月上腺增生、非化膿性甲狀腺炎、及與癌症相 關之而飼血症； b)風濕病’例如牛皮癬 * 缉關火 '類風濕性關節炎（包含 幼年型類風濕性關節炎）、 ’強直性脊椎炎、急性及亞急性 141691.doc 1^/4878 滑囊九、急‘丨±非特錢㈣炎、急性痛風性㈣炎、創傷 後月關即炎、骨關節炎之滑膜炎、及上髁炎； c) 膠原病’例如系統性紅斑狼瘡及急性風濕性心臟炎； d) 皮膚病，例如天皰瘡、大皰療樣皮膚炎、嚴重多形性 紅斑（史条文斯·約輪遜症候群（Stevens-Johnson syndrome))、 到脫度皮膚炎、蕈樣真®病、乾癬及脂溢性皮膚炎； /)過敏性狀態’例如季節性或常年性過敏、過敏性鼻 炎:枝氣管哮喘、接觸性皮膚炎 '特應性皮膚炎、血清病 及藥物超敏反應； 〇眼部疾病及病狀，例如過敏性角膜邊緣潰瘍、眼部帶 狀皰殄、前端炎症、擴散性後葡萄膜炎及脈絡膜炎 '慢性 葡萄膜炎、交感性眼炎、過敏性結膜炎、角膜炎、脈絡膜 視網膜炎、視神經炎、虹膜炎及虹膜睫狀體炎； g) 呼吸性疾病，例如症狀性結節病、呂弗勒症候群 (L〇effler’s syndrome)、鈹中毒、暴發性或播散性肺結核及 吸入性肺炎； h) 血液病，例如特發性血小板減少性紫癜、繼發性血小 板減少症、獲得性（自身免疫性）溶血性貧血、幼紅細胞減 少症（紅血細胞貧血（Red Bl00d Cell anemia))及先聽性（紅 血球）再生不良性貧血； i) 腫瘤病，例如白血病及淋巴瘤； j) 水腫狀態’例如在沒有尿毒薇之情況下，在特髮型或 由紅斑狼瘡所致之腎病症候群中誘發多尿或蛋白尿釋放； k) 腸胃病，例如潰瘍性結腸炎、侷限性腸炎、炎症性腸 141691.doc -13- 1374878 病、克隆氏病、胃炎、刺激性腸症候群； l) 混雜病狀，例如結核性腦膜炎及旋毛蟲病；及 m) 神經病狀’例如阿爾茨海默氏病（Alzheimer|s disease)、帕金森氏病（Parkins〇n,s disease)、亨庭頓氏病 (Himtmgtonis disease)、肌萎縮側索硬化、脊髓損傷、精 神嚴重抑鬱症、及周圍神經病變。 由糖皮質激素受體活性調介之病狀亦包含移植排斥（例 如，腎、肝、肺、心、胰（例如島細胞）、骨髓、角質層、 小腸、皮膚異體移植物、皮膚自體移植物（例如燒傷治療 中所採用者）、心臟辦膜異種移植物、血清病及移植物對 抗佰主疾病）；自身免疫性疾病，例如類風濕性關節炎、 牛皮癬關節炎、多發性硬化、j型及11型糖尿病、幼年型糖 尿病、肥胖症、哮喘、炎症性腸病（例如克隆氏病及潰瘍 性結腸炎）、壞疽性膿皮病、狼瘡（全身性紅斑性狼瘡）、重 症肌無力、乾癬、皮膚炎' 皮肌炎、濕疹 '皮脂溢、肺 火、眼部葡萄膜炎、肝炎、格雷夫斯氏病（Gravels disease)橋本氏甲狀腺炎（Hashimoto's thyroiditis)、自身 免疫性甲狀腺炎、貝切特氏或薛格連氏症候群（Behcet，s 〇r Sjorgeis syndrome)(乾眼/ 口）、惡性或免疫溶血性貧血、 動脈粥樣硬化、阿狄森氏病（Addison's disease)(腎上腺之 自身免疫性疾病）、特發性腎上腺機能不全、自身免疫性 多腺疾病（亦稱作自身免疫性多腺症候群）、腎小球腎炎、 硬皮病、硬斑病、扁平苔癬、白斑（皮膚脫色）、斑禿、自 身免疫性脫髮、自身免疫性垂體功能減退症、格-巴氏症 14J69J,doc •14· 1374878 候群（GuiUain_Barre syndrome)及肺泡炎，· τ-細胞介導的過 敏性疾病，包含接觸性過敏、遲髮型過敏、接觸性皮膚炎 - (包含由毒藤產生者）、#麻疹、皮膚過敏、呼吸性過敏（花 _ 畚症、過敏性鼻炎）及鐽質敏感性腸病（腹腔疾病）；炎症性 - 疾病，例如，骨關節炎、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、急性 : 呼吸窘迫症候群、賽雜瑞氏症候群（sezary，s syndrome)及 * 具有炎症性及/或增殖性之血管疾病，例如再狹窄、狹窄 及動脈粥樣硬化》 * 由糖皮質激素受體活性調介之病狀亦包含： a)任何類型、病源學或發病機理之哮喘，尤其係選自由 、下.、且成之群之成員的哮喘：特應性哮喘、非特應性哮 喘、過敏性唪喘 '特應性枝氣管性IgE介導的哮喘、枝氣 管哮喘、特發性哮喘、真哮喘、由病理生理學齋亂所致之 内源性哮。岩、由；裒境因子所致之外源性哮$、未知或隱性 原因之特發性哮喘、非特應性哮喘、枝氣管性哮喘、肺氣 • M性哮喘、運動誘發性哮喘、變應原誘發性哮喘、冷空氣

性氣道疾病：慢性嗜酸細胞性肺炎 I的阻塞性或炎症 慢性阻塞性肺病 I41691.doc 15 1374878 (COPD)、包含慢性技氣管炎之c〇pD、與c〇pD相關或不 相關性肺氣腫或呼吸困難'特徵在於不可逆之進行性氣道 阻塞之COPD、成人型呼吸窘迫症候群（ARDS)、由其他藥 物治療所致之氣道超敏反應加重及與肺動脈高血壓症相關 之氣道疾病； d)任何類型、病源學或發病機理之枝氣管炎，尤其係選 自由下列組成之群之成員之枝氣管炎：急性枝氣管炎、急 性喉氣官枝氣管炎、花生仁吸入性枝氣管炎、卡他性 (catarrhal)枝氣管炎、克魯布性（cr〇upus)枝氣管炎乾性 枝氣笞k、傳染性哮喘性枝氣管炎、增生性枝氣管炎、葡 萄球菌性或鏈球菌性枝氣管炎及肺泡性枝氣管炎、急性肺 損傷；及 e)任何類型、病源學或發病機理之枝氣管擴張症，尤其 係選自由以下組成之群之成員的枝氣管擴張症：柱狀枝氣 管擴張症、袋狀枝氣管擴張症（sacculated br〇nchiectasis)、 梭狀枝氣管擴張症、細枝氣管擴張症、囊狀枝氣管擴張症 (cystic bronchiectasis)、乾性枝氣管擴張症及濾泡性枝氣 管擴張症。 另一實施例包含本發明之化合物或鹽在用於治療以下疾 病中的用途··任何類型、病源學或發病機理之阻塞性或炎 症性氣道疾病’尤其係選自由下列組成之群之成員的阻塞 性或炎症性氣道疾病：慢性嗜酸細胞性肺炎、慢性阻塞性 肺病（COPD)、包含慢性枝氣管炎之c〇pd、與c〇PD相關 或不相關性肺氣腫或呼吸困難、特徵在於不可逆之進行性 141691.doc •16· 1374878 氣道阻塞之C0PD、成人型呼吸窘迫症候群⑽邮）、由其 .他藥物轉所致之氣道超敏反應加重及與肺動脈高血壓症 .相關之氣道疾病，或任何類型、病源學或發病機理之哮 •喘，尤其係選自由以下組成之群之成員的哮喘：特應性唪 • $、非特應性哮喘、過敏性哮喘、特應性枝氣管性IgE介 #的哮喘、枝氣管哮喘、特發性哮喘、真哮喘、由病理生 理學蒼亂所致之内源性哮喘、由環境因子所致之外源性哮 =、未知或隱性制之特發性哮喘、⑽應性哮喘、枝氣 管性哮喘、肺氣腫性哮喘、運動誘發性哮喘、變應原誘發 性哮喘、冷空氣誘發性哮喘、職業性哮喘、由細菌.、真 f、原生動物或病毒感染所狀感純哮喘、非過敏性哮 喘、初始哮喘、喘鳴型嬰兒症候群及枝氣管炎。 本發明包含治療個體之炎症相關性病狀的方法其包括 向個體投與本發明之化合物或鹽。 本發明包含治療個體中諸如下述病狀之方法：哮喘、皮 • 膚炎、炎症性腸病、阿爾茨海默氏病、精神嚴重抑鬱症、 神匕病變、移植排斥、多發性硬化、慢性葡萄膜炎、或慢 性阻塞性肺病，其包括向健投與本發明之化合物或鹽。 本發明包含治療個體類風濕性關節炎的方法，其包括向 個體投與本發明之化合物或鹽。 頒風濕性關節炎係視為可產生發炎關節之慢性自身免疫 性及炎症性疾病，該等發炎關節最後會腫脹、變得疼痛且 關即之軟骨、骨及韌帶發生退化。類風濕性關節炎最終使 關即發生變形、不穩定及僵硬且在關節内出現疼痕。關節 141691.doc •17· 1374878 以較高的可變速率惡化。許多因素（包含遺傳體質）可影變 疾病模式。類風濕性關節炎患者可具有輕度病程、偶然^ 作^半有較長的不發病好轉期、或穩定進行性疾病（其可 係慢性的或快速的）。類風濕性關節炎可突然開始，且許 多關節同時變得發炎。更通常地，其緩緩開始，並逐漸影 響不同的關節。通常，發炎具有對稱性，其令身體兩側之 關節均受到影響。通常，手指、卿趾、手、腳'腕、肘及 踝中之小關節首先變得發炎，然後為膝及臀部。 與類風濕性關節炎有關之疼痛通常係躺體傷害性關節疼 痛1脹之腕可使神經收縮且因腕道症候群而導致麻木或 麻刺感。在受影響的膝後面可形成囊腫，其可破裂並由此 在小腿中引起疼痛及腫脹。 本發明包含治療個體皮膚炎之方法，其包括向個體投與 本發明之化合物或鹽。 本發明包含治療個體慢性阻塞性肺病之方法，其包括向 個體投與本發明之化合物或鹽。 ' 本發明包含治療個體哮喘之方法，其包括向個體投與本 發明之化合物或鹽。 本發明包含治療個體阿爾茨海默庆佐 戍·大氏病之方法，其包括向 個體投與本發明之化合物或鹽。 調節相關之副作用的 〇 關之副作用的方法， 本發明包含減輕與糖皮質激素受體 方法’其包括向個體投與式I之化合物 本發明包含減輕與潑尼松龍治療才目 其包括向個體投與式I之化合物。 J41691.doc 1374878 本發明進一步包括藉由向患有上述病 個體或易患此一病狀之個體投與一或多 或鹽來治療該個體之方法。 在一實施例中，上述治療係預防性治療。 在另一實施例中，上述治療係姑息性治療。 在另一實施例t，上述治療係恢復性治療。 E·劑量及投與

狀、疾病及病症之 種本發明之化合物 為選擇最適宜之劑型及投與途徑來治療預定適應症，可 評價本發明之化合物或鹽的生物醫藥性質，例如溶解性及 溶液穩定性（在不同pH下）及滲透性。 本發明之化合物或鹽的口服投與劑量介於〇」mgi1〇〇 mg之間，且吸入投與劑量在2 mg或更小之範圍内。劑量可 以單一劑量或兩次或更多次分次劑量投與，且可在本文給 出之典型範圍之外。 劑量係基於平均體重為約60 kg至70 kg之人類個體。投 藥及投藥方案取決於個體及可影響投藥之多種條件（年 齡 '性別、體重等）。醫師或其他醫學專業人員能夠容易 地確定用於體重超出此範圍之個體（例如嬰兒及老年人）的 劑量。 口服投與 本發明之化合物及其鹽可口服投與《口服投與可涉及吞 °燕（以便化合物或鹽進入胃腸道）、及/或口腔、舌、或舌下 才又與（藉此，化合物或鹽直接自口腔進入血流）。 適於口服投與之調配物包含固體、半固體及液體系統 141691 .doc •19· 1374878 (例如’錠劑）；含有多顆粒或奈米顆粒、液體、或粉劑之 軟質或硬質膠囊；菱形錠劑（包含填充有液體者）；呕嚼 錠；凝膠劑；快速釋放劑型；薄膜；陰道錠；噴霧劑；及 口腔/黏膜黏貼片。另外，本發明之化合物或鹽可於經喷 霧乾燥之分散體形式投與。 液體調配物包含懸浮液、溶液、糖漿劑及驰劑。該等調 配物可作為軟質或硬質膠囊（例如’由明膠或經丙基甲基 纖維素製成）内的填充劑使用且通常包括載劑（例如，水、 乙醇、聚乙二醇、丙二醇、曱基纖維素、或適宜油）及一 或多種乳化劑及/或懸浮劑。液體調配物亦可藉由（例如）對 藥袋中之固體實施復原來製得。 本發明之化合物及其鹽亦可用於快速溶解、快速崩解劑 型中，例如彼等闡述於1^1^及（：1^11之以{)如〇卩^1抓比 Therapeutic Patents，11(6) ’ 981986(2〇〇1)中者。 對於錠劑劑型而s，端視劑量而定，藥物可佔該劑型之 重里/〇至8 0重畺％，更通常佔該劑型之5重量％至的重量 °除藥物外，錠劑通常含有崩解劑。崩解劑之實例包含 L 土乙g文;粉鈉、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、交 聯緩甲基纖維素納、克洛帕維嗣（e—_)、聚乙料 B各咬酮f基纖維素 '微晶纖維素、低碳烧基取代之經丙 土截隹素；^粉、預膠凝殿粉及藻酸納。一般而言，崩解 d佔Μ型之1重量。/。至25重量％、較佳$重量％至2〇重量％。 Ί通*用於賦予錢劑調配物黏著特性。適宜黏合劑包 含微晶纖維素、明膠 ^ ^ 夕醣、聚乙二醇、天然及合成樹膠、 HI69J.doc -20- 1374878 • 聚乙烯吡咯啶酮、預膠凝澱粉、羥丙基纖維素及羥丙基甲 基纖維素。錠劑亦可含有稀釋劑，例如乳糖（單水合物、 - 經喷霧乾燥之單水合物、無水物及諸如此類）、甘露醇、 . 木糖醇、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、微晶纖維素、澱粉及二 水合磷酸氫鈣。錠劑亦可視需要包括表面活性劑（例如月 桂基硫酸鈉及聚山梨醇酯80)及助流劑（例如二氧化矽及滑 石粉）。若存在，則表面活性劑可佔錠劑之〇 2重量％至5重 量％，且助流劑可佔錠劑之〇·2重量％至1重量0/〇。 ® 錠劑通常亦含有潤滑劑，例如，硬脂酸鎂 '硬脂酸鈣、 硬脂酸鋅、硬脂基富馬酸鈉、及硬脂酸鎂與月桂基硫酸鈉 之混合物。潤滑劑通常佔錠劑之0.25重量。/。至丨〇重量％、 較佳0.5重量％至3重量％。 其他可能的成份包含抗氧化劑、著色劑、矯味劑、防腐 劑及遮味劑。 例示性鍵劑含有至多約80重量％之藥物、約丨〇重量％至 φ 約9〇重量％之黏合劑、約〇重量％至約85重量％之稀釋劑、 約2重量％至約1〇重量％之崩解劑、及約〇25重量％至約 重量％之潤滑劑。 _ 口服投與之固體調配物可調配成能直接釋放及/或以改 * 良方式釋放。以改良方式釋放調配物包含延時釋放、持續 釋放、脈動釋放、文控釋放、乾向釋放及程式性釋放。 適用於本發明目的之以改良方式釋放調配物闡述於美國 專利第6，106,864號中。其他適宜釋放技術（例如高能分散 液及滲透性及經塗覆顆粒）之詳細資料參見Verma等人之 141691.doc -21· ^74878

Pharmaceutical Technology 〇n_iine，25(2) , 1-14，（2001)。 口服技與之劑里破圍亦包含〇. 1 mg至80 mg、1 5 mg至80 mg ' 〇. 1 mg至 25 mg。 非經腸投與 本發明之化合物或鹽亦可直接投與至血流、肌肉、或内 部器官中。實例2可投與至血流中。適於非經腸投與之方 式包含靜脈内、動脈内、腹膜腔内 '鞘内 '心室内、尿道 内、胸骨内、顱内、肌内、滑囊腔内及皮下投與。適用於 非經腸投與之裝置包含針式（包含微型針）注射器、無針式 注射器及輸注技術。非經腸調配物通常係水溶液，其可含 有賦形劑（例如鹽、碳水化合物）及緩衝劑（較佳至3至9之 PH)，但對於某些應用而言，可能更適合將其調配為無菌 非水性溶液或乾燥形式以與適宜媒劑（例如無菌、無致熱 源的水）組合使用。 非經腸調配物在無菌條件下之製備（例如藉由冷凍乾燥 法）可容易地使用彼等熟習此項技術者所熟知的標準醫藥 技術達成。 用於製備非經腸溶液之本發明化合物及其鹽之溶解性可 藉由使用適宜調配技術（例如納入增溶劑）來增加。 非經腸投與之調配物可經調配而能直接釋放及/或以改 良方式釋放。以改良方式釋放調配物包含延時釋放、持續 釋放、脈動釋放、受控釋放、靶向釋放及程式性釋放。因 此，本發明之化合物可調配成懸浮液或固體、半固體或 觸變液體，進而以植入的儲積物形式投與來提供活性化合 141691.doc -22- 1374878 物之改良釋放。㈣調配物之實例包含藥物塗覆支架及包 括載有樂物之聚（di-乳酸·共乙醇酸）(pGLA)微球體之半固 體及懸浮液。 局部投與 本發明之化合物或鹽亦可經局部、皮（内）、或經皮投與 至皮膚或黏膜。實例1可投與至皮膚。用於此目的之典型 調配物包含凝膠、水凝膠、洗劑、溶液、乳霜、軟膏、撒 施粉、敷料、發泡體、膜劑、皮膚貼片、標米紙囊劑、植 入物海綿、纖維、繃帶及微型乳劑。亦可使用脂質體。 典型載劑包含乙醇、水、礦物油、液體凡士林、白色凡士 林甘油裝乙一醇及丙二醇。可納入增滲劑_參見（例 如）J Pharm Sci，88(10)，955-958，Finnin及Morgan ’ 1999 年10月）。 其他局部投與方式包含藉由電穿孔、離子電渗法、聲透 法、超音促滲法及微型針或無針（例如，p〇wderjectTM、 BiojectTM等）注射來遞送。 局部投與之調配物可經調配而能直接釋放及/或以改良 方式釋放。以改良方式釋放霞物包含 放、脈動《、受㈣放、㈣釋放及程式性釋放U 吸入/鼻内投與 本發明之化合物或鹽亦可經鼻内投與或藉由吸入投與， :等投與之典型形式為：來自乾粉吸入器之乾燥粉劑、(或 單獨的，作為混合物（例如，與乳糖的乾燥摻合物），或作 為混合之組份顆粒（例如，與磷脂（如磷脂醯膽鹼）混合））， Γ 5Tf 14169I.doc -23- 1374878 作為來自加壓容器、幫浦、喑身 雷、““ 幫南喷射器、霧化器（較佳係使用 電机組動力之霧化器以生成細霧）' φ估田々+ at霧态之噴霧劑（其 中使=未使用適宜推進劑，例如u山2·四氟乙烧或 二：，1，3’3'七氣丙院)，或作為滴鼻劑。對於鼻内應用而 5，粉劑可包括生物黏附劑，例如， 彳仰取乙醯殼多糖或環糊 積0 加[冷益、幫浦、喷射器、霧化器或噴霧器含有本發明 之化合物之溶液或懸浮液，其包括（例如）乙醇乙醇水溶 液、或用於活性物質分散、增溶或延長釋放的適宜替代 劑、作^容劑之推進劑及視需要之表面活性劑（例如三油 酸山梨坦 '油酸、或寡聚乳酸）。 在乾燥粉劑或懸浮液調配物中使用之前，將該藥品微米 尺寸化至適於藉由吸入遞送之尺寸（通常小於5微米）。此可 藉由任一適宜粉末化方法（例如螺旋喷射研磨、流化床喷 射研磨、超臨界流體處理）來形成奈米粒子、高壓均化、 或喷霧乾燥而達成。 用於吸入器或吹藥器中之膠囊（例如，藉由明膠或羥丙 基f基纖維素製成者）、泡罩及藥筒可經調配而含有本發 明化合物之粉末混合物、適宜粉末基質（例如乳糖或殿粉） 及性能改良劑（例如L-白胺酸、甘露醇、或硬脂酸鎂）。乳 糖可為無水的或呈單水合物形式，較佳為後者。其他適宜 賦形劑包含葡聚糖、葡萄糖、麥芽糖、山梨醇、木糖醇、 果糖、蔗糖及海藻糖。 適用於使用電流體動力學之霧化器中的適宜溶液調配物 141691.doc •24- 1374878 可包括本發明之化合物、丙二醇、無菌水、乙醇及氣化 鈉。可用於代替丙二醇之替代性溶劑包含甘油及聚乙二 醇。 吸入/鼻内投與之調配物可使用（例如）PGLA調配成能直 接釋放及/或以改良方式釋放。以改良方式釋放調配物包 含延時釋放、持續釋放、脈動釋放、受控釋放、靶向釋放 及程式性釋放。 S使用乾粉吸入劑及氣溶膠時，劑量單位藉助可遞送計 1E數3：之閥來喊定。本發明單位通常經佈置而投與計量劑 量或「噴霧（puff)」，其可以單一劑量投與或更通常在一天 中以分次劑量投與。 及入技與之劑量範圍為2 mg至更少量或1 mg至更少量。 組合 本發明之化合物或鹽可與一或多種其他治療劑（例如藥 物）組合投與。本發明之化合物或其鹽可與一或多種其他 治療劑同時或非同時投與。 舉例而言’「組合」包含：向個體同時投與本發明之化 合物或鹽與治療劑之此組合，此時該等組份在—起調配成 早一劑型，實質上同時向該個體釋放該等組份；向需要治 療之個體實質上同時投與本發明之化合物或鹽與治療劑之 、且二此時忒等組份彼此分別調配成單獨的劑型，其實質 上同時由該個體服用’藉此該等組份實質上同時向該個體 釋放，向個體依序投與本發明之化合物或鹽與治療劑之組 合’此時該等組份彼此分別調配成單獨的劑型，其在連續 141691.doc -25- 1374878 時間内由該個體服用’且在每次投與期間有明顯的時間間 隔，藉此該等組份在實質上不同時間内向該個體釋放；及 向個體依序投與本發明之化合物或鹽與治療劑之此組合， 此時該等組份在一起調配成單一劑型，以受控方式釋放該 專組份’藉此在相同及/或不同時間内由該個體同時、連 續及/或重複投與’其甲每一部分可由相同或不同途徑投 與。 舉例而言’本發明之化合物或鹽可與其他抗炎藥一起部 分地或完全地組合使用。可與本文所述之化合物及鹽組合 使用之藥劑的實例包含TNF-α抑制劑、COX-2抑制劑、5_ 脂氧酶抑制劑、白三烯類受體拮抗劑、PDE4抑制劑、抗 組胺藥H!抑制劑、胃保護性&受體拮抗劑、胰島素樣生長 因子型（IGF-1)模擬物、基質金屬蛋白酶抑制劑、非類固醇 抗炎藥、p38抑制劑、P2X7抑制劑、a2△抑制劑、抗病毒 藥劑及WO 20〇4/〇〇5229之第32_38頁中所述之其他藥劑。 F.在製備組合物或藥物中的用途 在貫她例中，本發明包括用於治療由糖皮質激素受體 活性調介之病狀且包括本發明之化合物或鹽之組合物或藥 物的製備方法。 在另一實施例中，本發明包括本發明之一或多種化合物 或鹽在製備用於以下疾病之組合物或藥物中的用途：炎 症、炎症相關性病狀、類風濕性關節炎、皮膚炎、阿爾茨 海默氏病。 本發月亦包含本發明之—或多種化合物或鹽在製備用於 141691.doc -26- 1374878 治療方法部分中詳細間述之 中的用途。 一或多種病狀之組合物或藥物 G.反應圓 • 本發明化合物可使P般合成反應圖及下文詳細閣述之 冑驗程序中所闡釋之方法來製備。本文合成方法之反岸俜 纟熟悉有機合成者可易於選擇之適宜溶劑中實施，該等適 宜溶劑通常係在實施該反應之溫度下基本上與起始材料 (反應物）、中間體或產物不發生反應的任-溶劑。給定反 應可在一種溶劑或一種以上溶劑之混合物中實施。端視且 體反應步驟，可對具體反應步驟之適宜溶劑進行選擇。 本發明化合物之製備可涉及各種化學基團之保護及去保 護。對保護及去保護之需要以及對適當保護基團之選擇可 由熟習此項技術者容易地確定。保護基團之化學性質可參 見（例如）T.W. Greene及 p.G.M Wuts，p崎ctive Gr〇ups in

Organic Synthesis，第 3 版，Wiley & s〇ns，公司，〜评 • Y〇rk(1999)，其全部内容以引用方式併入本文中e 反應可根據所屬領域中已知的任一適宜方法加以監控。 舉例而言，可藉由光譜法（例如核磁共振光譜法（例如，】η 或13c)、紅外光譜法、分光光度法（例如υν可見光卜或質 譜法）或藉由層析法（例如高效液相層析法（HpLc)或薄層層 析法）監測產物形成。 本文所用之起始材料係自市場購得或可藉由常用合成方 法來製備。 展示一般合成反應圖係用於闡釋目的且並非意欲加以限 141691.doc -27- 1374878 制。

反應圖A

使用反應圖A中闡述之中方案（其通常揭示於WO 00/66522 中）來製備式 A-8 之 1(R)-苄基 _5·溴-9(S)-氫- l〇(R) 羥基-10(R)-曱基-三環[7.3.1.02,7]十三_2,4,6_三烯-13-酮。 Ph表示苯基。Bn表示苄基。可購得化合物A_ 1 (例如， (Sanmar，Vuf，Kingchem))。化合物 a-2 : 6-溴·3,4-二 氫-2(1Η)-萘酮（Chem· Abstr. Reg.第 4133-35-1 號）可如〇% Syn. 1971，51，1〇9-112中所述進行製備。化合物A-3 : 141691.doc •28· 1374878 1-(6->臭-1，2,3,4-四氫-2-蔡基）-°比洛咬（Chem. Abst. Reg·第 863925-40-0 號）如 WO 2007/105053(McHardy 等人）中所 述。化合物A-4 : 1-[6-溴-3,4-二氫-1-(苯基曱基）-2-(1Η)-亞 萘基]-。比咯啶鑌溴化物（Chem. Abstr. Reg.第418772-22-2 號）亦闡述於美國專利第2〇〇2/01〇7235號（Liu等人）及美國 專利第M52,719號（Liu等人）中。

反應圖B

化合物B-1 : 7-溴-2-乙氧基-3,4,4a，9-四氫-4a-(苯基曱 基）-(4aS)-菲可如歐洲專利申請案EP 1201649及EP 1201660(二者均頒予Liu等人）及EP 1201665(Murry等人）中 所述進行製備。 製備1 : (S)-4a-苄基-7-溴-2-乙氧基-3,4,4α，9-四氫菲

14l691.doc 1374878 ▲在環境溫度下將起始材料A_8(450 g;丨17莫耳）溶於乙 酵（4.5 L)中。添加存於乙醇中之21%乙醇鈉（44 mL m 莫耳）且將混合物加熱至回流保持3小時。起始材料耗 盡後立即將反應混合物冷卻至-251。向混合物中緩慢 添加乙醯氯（250 mL ’· 3.51莫耳）同時將溫度維持在接 近_25t❶添加完成後，將混合物升溫至且保持於此溫 度下直至中間體烯酮耗盡。混合物此時為漿液。向混合物 中添加存於乙醇中之21%乙醇鈉（131 L ; 351莫耳）同時將 溫度維持於-5t：與5°C之間。若混合物並非鹼性，則再次 添加乙醇鈉。將混合物溫度升至251且然後使用水（5 9 L) 稀釋。過濾該混合物，且使用水（3 X)洗滌固體。獲得灰棕 色固體狀標題化合物（440 g ; 85面積％)。NMR (DMSO) δ ppm: 1.27 (t, 3H), 1.65 (dt, 1H), 2.06 (d, 1H), 2.21 (dd, 1H), 2.49 (m, 1H), 2.65 (m, 2H), 2.89 (m, 2H), 3.85 (q, 2H), 5.45 (m, 2H), 6.44 (d, 2H), 6.98 (t, 2H), 7.06 (m, 2H), 7.25 (d，1H), 7.33 (dd, 1H)。 製備2 : (s)-4a-苄基-7-漠-2,2-(1,2-伸乙基二氧基）_ 1，2,3,4,4(*，9-六氫菲

將（S)-4a-苄基-7-溴-2-乙氧基-3,4,4α，9-四氫菲（1270 g ; 141691.doc -30, 1374878 3.2莫耳，85面積％，其可如製備】中所述進行製備）溶於甲 苯（6.45 L)中。添加乙二醇（謂‘；16」莫耳）及對_

磺酸（6_1 g; 0.03莫耳）且將反應物加熱至回流。自混合物 中蒸顧掉溶flU L)j_#代為新鮮曱苯（1 L)。重複此蒸:過 程兩次以上。再次添加對苯續酸（61 g)，每次添加新鮮 甲苯。在反應期間’隨著底物轉化成產物，形成兩種中間 體（由L C檢測）。反應終點係兩種中間體與產物間之平衡 點。到達終點後，立即將混合物冷卻至環境溫度。使用 0.5 M NaOH (2 L)洗滌混合物。迅速分離各相且兩相皆為 深色並具有小渾濁層。用水（2 L)洗務該混合物。相分離極 緩慢。藉由共沸蒸餾乾燥混合物。向混合物中添加甲醇（4 L)且自混合物中蒸餾出溶劑（4 L)。重複曱醇添加及溶劑蒸 餾兩次以上。向混合物中添加曱醇且數分鐘後出現沉澱。 再次向混合物中添加曱醇（4 L)且然後對其實施回流。3〇分 鐘後，將混合物冷卻至〇t。過濾混合物且使用經冷凍之

曱醇（2x2 L)洗滌固體。在65。(：下於真空烘箱中乾燥固體。 獲得灰棕色固體狀標題化合物（882 g ; 98面積％)。 NMR (DMSO) δ ppm: 1.71 (m, 2H), 2.06 (m, 2H), 2.31 (dd, 1H), 2.39 (m5 1H), 2.68 (d, 1H), 2.77 (m, 1H), 2.86 (dd, 1H), 3.36 (d, 1H), 3.86 (m3 4H), 5.45 (m, 1H), 6.50 (m, 2H), 7.00 (m，4H), 7.37 (dd，1H)，7.44 (d，1H)。 製備 3 : (S)-4p-苄基-7,7-(1,2-伸乙基二氧基）_4p,5,6,7,81〇_ 六氫菲-2-甲酸甲酯 141691.doc 1374878

將（S)-4a-苄基-7-溴-2,2-(1，2-伸乙基二氣美）1234 Μ六氫菲(719η.75莫耳，其可如製備2中：述 備）溶於四氫呋喃（7_19 L)中且冷卻至_7(Γγ 、 衣 ,. 以—定速率添 加存於己烷中之丨.6 Μ正丁基鋰（227〇 mL; 2 27莫耳）以便 將溫度維持在低於-6(TC。在該添加後將混合物再保持Μ 分鐘。添加二氧化碳(108 g ; 2·45莫耳)同時維持溫度低 於-6(TC。在添加後將混合物再保持15分鐘。將混合物升 溫至環境溫度。在大氣壓下自混合物中蒸餾溶劑（7 l)。向 混合物中添加DMF (7 L)。將混合物冷卻至環境溫度。添 加碘代甲烷（152 mL ; 2.45莫耳）且保持混合物直至反應完 成（約1小時）。將混合物加熱至7〇〇c且藉由將壓力逐漸降至 70 mmHg來蒸餾溶劑。蒸餾停止後，立即將混合物冷卻至 室孤。向混合物中緩慢添加水（6 5 L)以沉澱出產物。過濾 混合物且使用水（3 X)洗滌固體。在過濾器上乾燥固體。獲 得灰標色固體狀粗製產物（736 g ; 74面積％)。藉由層析法 純化產物。通過層析回收463 g產物。通過正庚烷（613〇 mL)分離此材料。回收394 g標題化合物。藉由層析自母液 中再次回收70 g標題化合物。iH NMR (DMSO) δ ppm: 1.74 (m, 2H), 2.10 (mj 2H), 2.33 (dd, 1H), 2.45 (m, 1H), 2.72 (d, 141691.doc •32· 1374878 1H)5 2.79 (m, 1H), 2.94 (dd, 1H), 3.40 (d, 1H), 3.87 (m, 7H), 5.49 (m, 1H), 6.47 (m, 2H), 6.93 (m, 2H), 7.01 1H), 7.42 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.79 (dd, 1H) 〇 ， 製備 4 : (4PS，8aR)_4p_ 节基 _7,7-(1，2•伸 6 基二氧基）4p，5, 6’7,8,8a，9，l〇-八氫菲_2_甲酸甲酯

在高壓釜中將⑻-4β-节基_7,7_(1，2_伸乙基二氧基Μβ，5 6,7,8，10-六氫菲.2_甲酸曱酿（2〇1 g; 〇 5i5莫耳，其可如製 備3中所述進行製備）及5〇…乙二醇溶於甲苯（2〇 l)中。向' 此混合物中添加10克5% Pd/C(乾觸媒）。然後密封高壓釜 且使用氮氣（三個循環）隨後使用氫氣（三個循環）進行吹 掃。在80 psig壓力及5〇。〇溫度下實施反應18小時。藉由 HPLC分析完成情況及選擇性（典型選擇性為：95:5(反式： 順式））。經由Celite⑧過濾懸浮液以去除觸媒且在5〇<t下於 真空中將甲苯溶液濃縮至約2〇〇 。在保持於5〇£>c下時， 添加1 L 1 - 丁醇且將溶液加熱至6〇〇c直至澄清。冷卻後， 藉由真空過濾分離所得固體狀標題化合物（196克；97% ; 反式：順式為95.75 : 4.24)。咕 NMR (300 MHz, CDC13) δ ppm： 7.79 (bs, 1H, Ar-H), 7.47 (d, J=9 Hz, 1H, Ar-H), 7.13-7.05 (cm, 3H, Ar-H), 6.56-6.53 (cm, 2H, Ar-H), 6.43 (d, J=9 141691.doc -33· 1374878

Hz, 1H, Ar-H), 4.04-3.93 (cm, 4H, 2-CH2), 3.89 (s, 3H, CH3), 3.08-3.03 (cm, 3H, CH2, CH-H), 2.63 (d, J=15 Hz, CH-H), 2.22-1.72 (cm, 8H, 4-CH2), 1.57 (cm, 1H, CH-H); 13CNMR (CDC13j δ): 167.7, 149.2, 137.7, 136.4, 13 1.1, 130.5, 127.8, 127.7, 127.4, 126.3, 125.5, 108.9, 64.6, 64.5, 52·1, 40.5, 39.8, 38.3, 35.8, 3 1.6, 30.3, 27·9, 24.6 °

反應圖C

製備 5 : (4bS，8aR)-4b-苄基-7-側氧基-4b,5,6,7,8,8a，9，10-八 氫菲-2-甲酸

141691.doc -34- 1374878 ‘ 將（咐，減)斗节基_7,7_(12•伸乙基二氧基）·4ρ，5 6 7, • 8’8a’9’1G_八氫菲 _2-甲酸甲叫。g，25.5 mm。"、ΙΡΑ (75 -mL)及2 M HC1水溶液（25机，51』起混合且加熱 -至回流。混合物在加熱期間變得均勾。將混合物保持在回 流下直至縮酮發生水解（約3(M5 min卜停止反應，同時剩 餘約3%的縮銅。向混合物中添加2 5 m Na〇H(4〇社，

m.9 mmol)且㈣加熱1混合物保持細流下直至酿發 生水解（約30 min)。添加2 M HC1水溶液（4〇 mL)且將混合 物冷卻至40t。隨著酸的添加形成兩種液相。添加晶種以 開始結晶。在開始結晶3G分鐘後，再次添加2 Μ Ηα水溶 液（40 mL) ^將混合物冷卻至2〇t：且保持6〇分鐘。過濾混 合物，且用水洗蘇固體。在7〇t下於真空烘箱中乾燥固 體。獲得淡黃色固體（7.86 g ’產率為92%)。NMR (DMSO): δ 1.50 (m, 1H)，1.65 (m，1H)，1.90 (m，1H), 2.05 (m, 1H), 2.20 (d, 1H), 2.30 (d, 1H), 2.40 (dd, 1H), 2.65 (d, • !»), 2.80 (d, 1H), 3.00 (m, 3H), 4.30 (d, 1H), 6.40 (d, 1H), 6.60 (d，2H)，7.10 (m, 3H), 7.35 (d，ih)，7.65 (s，1H), 12.75 (s, 1H)。 製備6 : (4bR,6E，8aR)-4b-苄基·6·亞苄基_7_側氧基4b56, 7,8,83,9，10-八氫菲-2-甲酸

〇 f ?； i 14169l.doc -35- 1374878 將（4bS，8aR)-4b-苄基-7·側氧基-4b，5,6,7,8,8a，9，10-八氫 菲-2-甲酸（6.5 g，19.44 mmol)懸浮於水（65 mL)中。添加 2.5 M NaOH (11.7 mL，29.16 mmol)隨後添加苯甲醛（2.16 mL，21.38 mmol)。經一定時間（在5〇°C下經4小時或在 25°C下過夜）混合物變得均勻。在剩餘小於2%之（4bS,8aR)-4b-苄基-7-側氧基-4b，5,6,7,8,8a，9，10-八氫菲-2-曱酸（製備 5)時’反應視為已完成。若混合物已不在2 5 °c下，則將其 冷卻至25°C。向混合物中添加EtOAc (65 mL)隨後添加2 Μ HC1水溶液（29 mL)。結晶通常在酸添加期間或其後不久出 現。將混合物攪拌60分鐘。添加庚烷（65 mL)且將混合物 再攪拌60分鐘。無需擔心水相之分離；過濾整個混合物且 使用水隨後使用庚烷洗滌固體。獲得淡黃色固體（6 55 g， 產率為 80%)。NMR (DMSO): δ L70 (m，1H)，i 85 (m 1H), 2.45 (m, 3H), 2.65 (d5 3H), 2.95 (m, 2H), 3.50 (d, 1H), 6.15 (d, 2H), 6.25 (d, 1H), 6.70 (t, 2H)5 6.90 (t, 1H), 7.30 (d，1H)，7.50 (m，5H)，7.70 (d，2H), 12.75 (s，1H)。 製備7 : (#心6£，78,8化)-41)-苄基_6_亞苄基_7_經基_7_苯 基 _4»3,5,6,7,8,83,9，10-八氫菲-2-曱酸

141691.doc •36- 1374878 在50 C下將氣化鈽（111)(5.00 g，20.29 mmol)於四氫〇夫味 (50 mL)中混合16小時。使用JKEM從内部監控反應溫度。 將所得白色乳狀溶液冷卻至-75°C並劇烈攪拌。在維持溫 度低於-70°C下，經15分鐘向冷漿液中逐滴添加苯基溴化 鎮（1.0 Μ ’存於THF中’ 19.1 mmol)。將溶液在_73°C下保 持15分鐘，且在維持反應溫度低於，經2〇分鐘逐 滴添加存於四氫。夫味（40 mL)中之（4bR，6E，8aR)-4b-苄基-6-亞苄基-7-側氧基-415,5,6,7,8,8&，9，10-八氫菲_2-甲酸（3.5§， 8.311 mm〇l)溶液。獲得HPLC/MSa顯示剩餘起始材料。 將反應物再混合3小時，並獲得HPLC/MS且起始材料有剩 餘。經10分鐘另外添加2 mL苄基溴化鎂溶液（2·〇 mm〇i)且 獲得HPLC/MS。經1 〇分鐘另外添加1 mL苄基溴化鎂溶液 (1.0 mmol)且獲得HPLC/MS。將溶液在-73T：下混合30分鐘 並將其升溫至10 C且然後冷卻至0 °C。在維持溫度低於 10 C下，藉由逐滴添加飽和KHSO4水溶液來終止反應。總 共添加50 ml飽和溶液。在溶液中形成固體且藉由真空過 濾去除。使用四氫呋喃（4〇 mL)及水（40 mL)洗滌濾餅。添 加乙酸乙酯（1 〇〇毫升）且分離各層。使用飽和氯化銨（丨〇〇 mL)洗滌有機層’藉由硫酸鈉進行乾燥’且在減壓下去除 溶劑。藉由HPLC/MS檢驗水層且其中不含任何產物。使殘 餘物吸收於曱醇（15 ml)中並添加水。溶液變渾濁且最終形 成 >儿漏i。添加少量甲醇及水以改善沉殿之品質及數量。藉 由真玉過/慮收集固體且將其風乾約2小時。獲得3.4克淺黃 色固體狀標題化合物，產率為81 〇/〇。 141691.doc -37- 1374878 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 12.65 (1 H s) 7.44-7.56 (7 H, m), 7.34-7.39 (2 H, m), 7.30 (2 H, t, J=7.7 Hz), 7.12-7.22 (2 H, m), 6.78 (1 H, t, J=7.4 Hz), 6.50 (2 H, t, J=7.8 Hz), 6.12 (1 H, d, J=8.3 Hz), 5.86 (2 H, d, J=7.3 Hz), 5.44 (1 H, s), 3.61 (1 H, d, J=14.2 Hz), 2.96 (1 H, dd, J=17.6, 7.9 Hz), 2.80-2.91 (1 H, m), 2.66-2.74 (1 H, m), 2.50-2.65 (2 H, m), 2.08 (1 H, t, J=13.3 Hz), 1.82-1.93 (1H, m, J=13.2 Hz), 1.75-1.82 (1 H, m), 1.59-1.74 (2 H, m)； LC/MS，tr=3.77分鐘（5%至95%之乙猜/水，經5分鐘，i ml/min，254 nm，50〇C)。 製備8 : (4bR，7R，8aR)-4b-苄基-7羥基_6_側氧基_7_苯基-4b，5,6,7,8,8a，9，10-八氫菲-2-甲酸

將（4bR，6E，7S，8aR)-4b-苄基-6-亞苄基_7羥基_7苯 基-朴，5,6,7,8,8&，9，10-八氫菲-2-甲酸（37.7克，75.7111111〇1) 溶於丨2〇0 mL二氯甲烧中。將反應物冷卻至_78°c且使氮氣 鼓泡經過反應混合物15分鐘。然後使臭氧鼓泡經過混合物 且出現微藍色。使臭氧持續鼓泡經過反應物3小時。少， ~ 在1小 時時獲得HPLC/MS且起始材料有剩餘。繼續添加臭氣 2小時時獲得HPLC/MS且起始材料有剩餘。繼續添为自 141691.doc • 38 - 1374878 =。在3小時時獲得HpLC/MS。起始材料之消耗未改變。 停止添加臭氡且使氮氣鼓泡經過反應物直至藍色消散。添 加二甲硫謎（2G mL)及甲醇（2Q mL)且將反應升溫至室溫。 在減壓下去除溶劑且將所得稠油狀物溶於乙酸乙酯（ι〇〇 mL)中。向溶液中添加庚烷（1〇〇 mL)且搖動混合物。所得 溶液稍顯渾濁。將溶液在不混合之情況下於室溫下儲存過 仗。形成白色晶體。收集5 7克晶體，獲得HPLC/MS*】H NMR。自母液中去除溶劑。獲得44克橘黃色油狀物。獲得 HPLC/MS »使用製備型反相層析純化母液以另外獲得22g 標題化合物（總共回收27.5 g，產率為85%)。MH+[m/z] 501 M+Na [m/z] 523 ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2.00 (s, 4 H) 2.10-2.21 (m, 3 H) 2.51 (q, 3 H) 2.73-2.85 (m, 4 H) 2.96-3.10 (m, 3 H) 6.15 (dd, 1 H) 6.60 (dd5 2 H) 7.09-7.15 (m, 3 H) 7.25 (d, 1 H) 7.30 (d, 1 H) 7.34-7.40 (m，4 H) 7.69 (s，1 H) 〇 製備9 : (4bR，7R，8aR)-4b-苄基-7-羥基-N-(2-甲基吡啶-3-基）-6_側氧基-7-苯基-4b，5,6,7,8,8a，9，10-八氫菲-2-曱醯胺

將（4bR，7R，8aR)-4b-苄基-7羥基-6-側氧基-7-苯基-4b，5, 6,7,8,8&，9，10-八氫菲-2-曱酸（21§，49.2 111111〇1)、3-胺基-2- 141691.doc •39· 1374878 曱基吡啶（5.8 g ’ 52.2 mmol)及 1-曱基咪唑（20 mL，246.2 mmol)溶於無水乙腈（105 mL)中。緩慢添加ι_丙烷膦酸環 酐（50 wt%，存於乙酸乙酯中）（47 mL，78.8 mmol)以控制 輕度放熱。在25°C下攪拌混合物直至反應完成（小於1小 時）。向混合物中添加乙酸乙醋（86 mL)。使用水（4 X 1 〇〇 mL)洗滌混合物。使用MgS〇4乾燥有機相且將其濃縮至乾 燥狀態。獲得淺黃色發泡體狀標題產物（22.3g，產率為 89%)。4 NMR (DMSO): δ 1.95 (m，2H)， 2.10 (m， 3H)， 2.35 (s，3H)，2.75 (m，3H)，3.0 (d，1H)，3.05 (m，2H)，5·70 (s，1H)，6.15 (d 1H)，6·60 (m，2H)，7.10 (m，3H)，7.25 (m， 2H), 7.30 (m, 5H), 7.65 (d, 1H), 7.70 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 9.85 (s, 1H) 〇 製備1〇:(4匕厌，61^，711，8311)-41)-苄基-6,7-二羥基-6-甲基-^ (2-甲基咐啶-3-基）-7-苯基-41)，5,6,7,8,83,9，10_八氫菲-2-甲 醯胺

向經火焰乾燥之50 mL圓底燒瓶中添加存於THF(5 mL) 中之（4bR，7R，8aR)-4b-苄基-7羥基-N-(2-甲基吡啶-3-基）-6-側氧基-7-苯基-41),5,6,7,8,8&,9，10-八氫菲-2-曱醯胺（0.28 g，0.54 mmol)。將溶液在冰/丙酮浴中冷卻至_17°C。向反 141691.doc •40- 1374878 應物中添加MeLi*LiBr (0.1 mL)。1小時後，LCMS顯示起 始材料仍有剩餘’因此再添加0.15 mL。將反應物經2小時 授掉至室溫。自HPLC可知，剩餘2.5%之起始材料。向反 應物中緩慢添加NH4C1且觀察到排氣。使用乙腈及水將反 應物稀釋至12 5 mL。藉由反相層析純化反應物然後凍乾。 將所得乾燥粉末再次溶於乙腈及水中且添加兩滴濃HC1。 將溶液凍乾至乾燥狀態。此可獲得HC1鹽形式之標題產物 (231.4 mg)(產率為 73%)e [RMS ES + 533.1 1H NMR (300 MHz ’ 甲醇_(}4)δ ppm 1.23-1.28 (m，3 Η) 1.53-1.62 (m, 1 Η) ^90-2.20 (m, 3 Η) 2.70-2.74 (m, 3 Η) 2.84 (d, J=14.90 Hz, 1 H) 2.92-3.22 (m, 2 H) 3.28-3.40 (m, 4 H) 3.91 (d, J=12.08 1 H) 6.50 (d, J=8.26 Hz, 2 H) 6.84-6.92 (m, 2 H) 6.99-7.10 (m，3 H) 7.13-7.29 (m，3 H) 7.45 (dd，J=8.15, 1.91 Hz， 1 H) 7.56-7.65 (m, 2 H) 7.77 (d, J=1.81 Hz, 1 H) 7.88 (dd, J=8.26, 5.84 Hz, 1 H) 8.51-8.63 (m, 2 H) ° 實例 1 : (4bR,6R，7R，8aS)-4b-苄基-6,7-二羥基-6-甲基-N-(2-曱基吡啶-3-基）-10-側氧基-7-苯基-4b，5,6,7,8,8a，9，10-八 氫菲-2-甲醯胺

141691.doc •41 · 1374878 在室溫下將試樣固體（4bR,6R，7R，8aR)-4b-，*-6,7-:· 基-6-曱基-N-(2-曱基吡啶-3-基）-7-苯基-4b,5,6,7,8,8a,9，10-八氫菲-2-甲醯胺（2 200 mg，4.130 mmol)溶於二氯甲烧（10 mL)與甲醇（100 mL)之溶液中。使用10 mL存於MeOH中之 2 N HC1溶液處理該所得溶液，且將其另外攪拌10分鐘。 此時，目測檢查反應液以確保所有固體皆溶解且然後將其 冷卻至-78°C。使用穩定臭氧流（5 cc流速，使用Azcozon生 成器（AZCO Industries有限公司，RMU16-8型，且〇2壓力 設置為30 psi)產生）處理冷卻之溶液。在穩定流入臭氧5小 時後，反應接近完成而獲得期望標題化合物，藉由LCMS 進行分析（M+H LRMS 547.2 amu)。溶液呈現深藍色。使用 氮氣沖洗冷反應液5分鐘以驅散大部分臭氧，且反應物顯 示藍色顯著減少。此時，以並不使内部反應溫度升至高 於-70°C之方式添加20 mL二曱硫醚。隨後去除冷卻浴且使 反應物自動升溫至室溫（1小時），並在此溫度下另外維持3 小時。此時，將反應液濃縮至殘餘物狀態並溶於25 mL THF中，且然後對所得THF溶液直接實施C-18反相層析（運 行1 5分鐘梯度，5%乙腈流動相至95%乙腈流動相及水）。 經由交換樹脂（Stratosphere SPE，PL-HC03 MP樹脂，產品 編號為3540-C603)過濾所得標題化合物以去除任何TFA鹽 並提供標題產物作為其母體化合物。藉由下列程序使所得 固體結晶：使用MeOH (7 mL)將固體製成漿液，1小時後 收集固體且使用額外之2 mL MeOH進行洗滌以提供1802 mg標題化合物（79%)。分析數據如下：NMR (500 MHz, I41691.doc -42· 1374878 D6DMSO) δρριη 1.18 (s, 3 Η) 1.51 (dd, J=12.66, 1.96 Hz, 1 H) 1.99 (d, J=14.96 Hz, 1 H) 2.40 (dd, J=18.88, 4.85 Hz, 1 H) 2.43-2.49 (m, 1 H) 2.49 (br. s., 3 H) 2.56 (t, J=12.82 Hz, 1 H) 2.61 (d, J=12.53 Hz, 1 H) 2.75 (d, J=15.12 Hz, 1 H) 2.92 (dd, J=18.59, 12.74 Hz, 1 H) 4.05 (d, J=12.45 Hz, 1 H) 6.65 (d, J=8.27 Hz, 1 H) 6.79 (dd, J=7.69, 1.59 Hz, 2 H) 7.05-7.13 (m, 3 H) 7.15-7.21 (m，1 H) 7.25 (t，J=7.69 Hz，2 H) 7.49 (dd, J=7.94, 5.10 Hz, 1 H) 7.62 (dd, J=7.44, 1.25 Hz, 2 H) 7.87 (dd, J=8.23, 2.13 Hz, 1 H) 8.01 (dd, J=7.78, 1.00 Hz, 1 H) 8.46 (dd, J=5.01, 1.50 Hz, 1 H) 8.54 (d, J=2.09 Hz, 1 H) 10.18-10.58 (m，1 Η, NH)。端視DMSO之 水含量，在4.78及5.44 ppm處可發現兩個OH質子。HRMS m/z 547.2619 (C35H35N204 :對於 M+H 之計算值， 547.2591)。 I·生物數據 脂多糖（LPS)誘導之人類全血 將來自人類供體之靜脈血（以10 ml等分試樣形式）收集在 έ 有肝素納之试官（BD Vacutainer ，Becton Dickinson 及 公司’ Franklin Lakes，NY)中。以180 μ1/孔將血液添加至 無菌小本乙稀圓底96孔組織培養板（Corning Costar)中。將 血液置於具有5% C〇2之潮濕之3 7°C培育箱中同時製備化合 物（接近60分鐘）。 自存於二曱亞颯（DMSO, Sigma-Aldrich)中之10 mM原液 製備化合物。在DMSO中稀釋母料化合物以獲得適宜起始 14I691.doc •43· 1374878 濃度，然後在DMSO中連續稀釋至ι/3(亦即，15 μΐ化合物 + 30 μΐ DMSO) ’隨後在媒劑溶液（存於磷酸鹽緩衝鹽水 (Dulbecco之磷酸鹽緩衝鹽水’不含氯化鈣及氯化鎂，

Invitrogen公司，Carlsbad CA)中之 2% DMSO)中將每一連 續稀釋液稀釋至1/167。按一式三份將化合物或媒劑添加 至呈10 μΐ等分試樣之血液中，省去外側孔以將可能之邊緣 效應降至最低。在分析中’每一化合物的最終最高濃度介 於3 μΜ至Ο·3 μΜ之間。在分析中，最終DMSO濃度為 0.1 %。將含有试樣之板輕輕滿旋混合並重新放回培育箱 中。將LPS母料（大腸桿菌血清型0111:B4，Sigma_ Aldrich’在-20C下儲存’呈存於RPMI中之1 〇〇 pg/mi等分 試樣形式）在RPMI中稀釋至1/50以製備工作原液。培育6〇 分鐘後，將10 μΐ所製備之LPS工作母料添加至血液中至最 終濃度為100 ng/ml。使用含有RPMI培養基但不含LPS之孔 作為陰性對照。再次將板輕輕渦旋混合且將板培育過夜22 小時。培育後’以1 500xg將血液離心5分鐘且取出血聚 在-2 0 °C下康乾或用於細胞因子釋放之分析。 細胞因子釋放之量測及分析 使用 Meso Scale 分析套組（Mes〇 scale DiSC0Very，

Gaithersburg，MD，U.S.A.)量測 IL-Ιβ、IFNY及 TNFct蛋白質 含里。使s式劑到達至溫。使用15〇 μΐ Me so Scale Block B 稀釋劑封阻Meso Scale板’在室溫下輕微搖動6〇分鐘。使 用洗滌緩衝液（PBS，Invitrogen公司，含有 〇.05〇/〇 Tween_2〇, Sigma-Aldrich)將板洗滌3次。以1/5連續稀釋之方式在人類 14169l.doc •44- 1374878 血漿/血清分析稀釋劑中製備用以獲得標準曲線之校準液 以達成介於50000 pg/ml至3.2 pg/ml之間之最終濃度。以 10-20 μΐ/孔添加試樣且以20 μΐ/孔添加校準液，然後將其 在室溫下於輕微搖動下培育2小時。使用洗滌緩衝液將板 再次洗滌3次。在人類血漿/血清抗體稀釋劑中將檢測抗體 稀釋至1 pg/ml且以20 μΐ/孔添加至板中。如上所述將板培

育2小時並再次洗滌。使用mqH20將讀取緩衝液Τ(4χ)稀釋 (1:1)至2χ濃度且向每一孔添加150 μΐ。在SECTOR顯像儀 6000 (Meso Scale Discovery)上對板進行讀數以產生原始信 號值。 將各試樣信號值與陽性及陰性對照（分別為含有LPS之經 媒劑處理的血液及不含LPS之經媒劑處理的血液）對比以得 到％抑制。計算每一供體之三個值的平均值。計算3個或4 個供體之值的平均值且使用Microsoft Excel應用程式之 Lab Stats plug-in中的4參數擬合曲線進行繪圖。

自 Sigma-Aldrich (Saint Louis，MO)獲得潑尼松龍。 表1.潑尼松龍抑制之平均值 濃度(nM) IFNy (%抑制） TNFa (%抑制） IL-Ιβ (%抑制） 1000 96.41887 90.42849 91.81285 333.3333 94.80171 86.9239 87.6417 111.1111 85.21585 67.08184 61.87842 37.03704 70.72071 49.23688 36.70005 12.34568 34.71695 19.56738 7.168145 4.115226 25.24299 8.949503 0.83998 1.371742 9.7537 6.36281 -1.2607 0.457247 1.188799 2.756104 -0.57073 141691.doc -45- 1374878 表2.實例1抑制之平均值 濃度(nM) IFNy (%抑备J) TNFa (%抑制） IL-Ιβ (%抑制） 300 72.90548 42.80632 38.01507 100 72.50547 42.18648 37.61988 33.33333 66.18697 30.67716 26.41755 11.11111 50.99181 18.11116 15.35196 3.703704 26.94135 7.08568 5.139857 1.234568 18.37372 0.8113 1.175317 0.411523 15.63071 -3.618 -1.0797 0.137174 -3.92851 0.604014 -0.93988 對比物Α係（4ps,7S，8aR)-4P-苄基-7-羥基-Ν-((2-甲基吡 啶-3-基）曱基）-7-(3,3,3-三氟丙基）-40，5,6,7,8,8〇1,9，1〇-八氫 菲-2-甲醯胺，其合成如WO 00/66522(Dow等人）之第241頁 之第771C-3號實例所述，且具有下列結構：

下列對比化合物：對比物B、C及D可藉由本文所述之方 法、業内已知之彼等方法及下文反應圖D來製備。 141691.doc -46- 1374878

對比物B

(扑11，611，711，8311)-41)-苄基-仏(6-溴-2-甲基吡啶-3-基)-6,7-二羥基-6曱基-7苯基 -4b，5,6,7,8,8a,9,10-八氫菲-2-曱醯胺

(扑11，6氏711，8311)-41>苄基-6,7-二羥基-6-甲基-：^-(2-甲基'>比啶-3-基)-7-(。比啶-2-基） -4b，5,6,7,8,8a,9，10-八氫菲-2-甲酿胺

-4b，5,6,7,8,8a,9，10-八氫菲-2-曱醯胺

反應圖D 141691.doc -47- 1374878

C-5(X=C，R=3-甲基吡啶)

下列對比化合物：對比物E可藉由業内已知之一般方法 及下文反應圖E來製備。

反應圖E

(4bR，6R，7S，8aR)-4b-苄基-6,7-二羥基-6-曱基-N-(2-曱基吡啶-3-基)-7-(三氟曱基) -4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氫菲-2-曱醯胺

141691.doc 48- 1374878

PPAA

對比物 F 係（2R，3S，4aR,10aR)-4a-苄基-2-苯基-1，2,3,4, 4丑，9，10,1(^-八氫菲-2,3,7-三醇，其合成如國際申請案\¥〇 2004/005229(Chantigny等人）之第106頁之實例30所述，且 具有下列結構：

對比物〇係（211，38,4&尺，10&11)-4&-苄基-7(2-曱基吡啶-3-基 甲氧基）-2-苯基-1，2,3,4,4&，9，10，1(^-八氫菲-2,3二醇，其合 成如國際申請案WO 2004/005229(Chantigny等人）之第107 頁之實例32所述，且具有下列結構：

F 141691.doc -49- 1374878 表3.對比物A抑制之平均值 濃度(nM) IFNy (%抑制） TNFa (%抑制） IL-Ιβ (%抑制） IL-6 (%抑制） 3000 28.02163 -3.03631 16.37219 -1.97032 1000 16.52981 -5.43701 14.96801 -0.88954 333.3333 -6.31952 -4.61436 12.23526 -2.8341 111.1111 8.737671 -3.82374 8.59594 -3.49518 37.03704 -9.80677 -4.19291 17.27236 -3.52461 12.34568 0.016012 0.030908 22.84851 -1.12581 4.115226 -1.69672 -0.86051 22.01534 -4.3436 1.371742 18.09167 18.1316 31.97474 1.459164 表4.對比物F抑制之平均值 濃度(nM) IFNy (%抑制） TNFa (%抑制） IL-Ιβ (%抑制） 3000 21.95778 3.808591 3.308508 1000 14.6234 4.138398 0.21981 333.3333 -3.30077 -3.43225 -2.45189 111.1111 -4.60435 -6.35337 -4.59067 37.03704 -13.3589 -4.22595 -6.15082 12.34568 -8.35374 -6.79409 -5.49194 4.115226 -15.284 -8.12294 -6.1571 1.371742 -12.4462 -2.51053 -4.16143 141691.doc -50· 1374878 表5.對比物G抑制之平均值 濃度(nM) IFNy (%抑制） TNFa (%抑制） IL-Ιβ (%抑制） 3000 41.3796 16.28448 15.47551 1000 13.20202 -8.47459 -1.19319 333.3333 2.019883 -13.7986 -6.75215 111.1111 2.655063 -8.76041 -5.37397 37.03704 -2.5794 -13.8733 -7.35195 12.34568 -9.15435 -14.0438 -7.52021 4.115226 12.82205 -2.89901 -2.63902 1.371742 16.69609 3.216606 -0.11505 實例1、對比物F、對比物G及潑尼松龍皆係糖皮質激素 受體之配體.，然而，每一者在抑制來自離體經LPS刺激之 人類全血之細胞因子時皆呈現不同特徵。潑尼松龍（GR之 完全激動劑）顯示完全抑制IFNy、TNFa及IL-Ιβ。實例1亦 以濃度依賴性方式抑制細胞因子釋放。作為部分激動劑/ 拮抗劑，實例1顯示抑制程度不如潑尼松龍。另外，針對 實例1所觀測之抑制程度在所觀測之細胞因子之間有所不 同，亦即，IFNy=73%，TNFa=43%，且 IL-ip=38%。與實 例1相比，對比物F及對比物G並不顯著抑制TNFa或 IL-Ιβ(在3000 nM下小於20%)且對IFNy顯示低得多的有效 抑制（在3000 nM下分別僅為22%或41%抑制）。因此，儘管 實例1、對比物F、對比物G及潑尼松龍結合相同受體，但 其顯示顯著不同的活性。 141691.doc •51 · 1374878 活體内數據 小鼠膠原誘導性關節炎(mCIA) 小鼠膠原誘導性關節炎係類風濕性關節炎之常用長期臨 床前模型’其中在使用II型膠原免疫後出現關節腫脹及骨 破壞^先前發現’發病率及嚴重程度之降低在臨床環境中 可分別預測疾病改良及病徵與症狀之減輕。 在治療性mCIA模型中，經由LPS刺激可同步誘導發病率 及嚴重程度。在第0天，使用1〇〇叫牛π型膠原（bCII)對雄 性DBA/J小鼠實施免疫。在第28天使所有小鼠皆接受2〇 LPS之腹膜腔内注射且容許到第34天發生疾病。在第34 天’所有小鼠皆患有疾病（發病率=1〇〇〇/0)，且平均嚴重程 度分值為7。在第34天開始以治療模式投與化合物且持續 至第49天。藉由量測發病率降低（亦即’疾病之消退）及爪 腫脹嚴重程度隨時間之降低來比較不同治療。 28天小鼠副作用模型 根據貫驗動物管理及使用委員會（Instituti〇nai Animal Care and Use Committee)之導則並根據實驗動物福利 (laboratory animal welfare)之NIH導則，使用重27_29克之 10-12 週齡雌性 Swiss Webster 小鼠（Tac〇nic，Germant〇wn, NY，U.S.A.)。使小鼠適應pfizer動物設施3_7天然後進行研 究。藉由口服管飼投與潑尼松龍及DA(}R化合物且總共持 ’·’兵2 8天。母一冶療組通常含有8 _ 1 〇只小鼠。為確定研究之 投藥方案，實施試驗藥效動力學時程實驗來量化在單一 EDso劑里（根據急性lps内毒素▲症小鼠模型碟定）後之 141691.doc •52· 1374878 TNFa阻抑。為在24小時時間内顯著阻抑TNFa，經測定潑 尼松龍需要b.i.d.投藥。DAGR化合物所需之劑量頻率有所 不同。 在每一實驗之第一天及最後一天量測體重。在投藥約3 周後’獲取血液試樣用於穩態藥代動力學分析。為評價化 合物對於LPS誘導之TNF-a的效應，在第28天最後一次劑 量後2.5 hr，使所有小鼠皆接受LPS (Salmonella Typhosa， Sigma，St. Louis，L-7895)之腹膜腔内注射。在投與lpS 9〇 分鐘後’宰殺小鼠。使用Linco多重分析（St. Charles，MO) 及Luminex 100 (Austin，TX)分析血清試樣之骨鈣素及 TNFa。以1:20稀釋試樣且根據製造商說明實施分析。骨詞 素標準品係單獨購自Biomedical Technologies公司 (Stoughton, ΜΑ)。量測jk清胰島素以評價化合物對胰島素 抗性之效應。根據製造商方案使用來自AlpC0 Diagnostics (Salem，NH)之Ultrasensitive小鼠EIA套組量測胰島素。 皮質骨組織計量學 在小鼠於每一研究之存活期間，使小鼠在第丄天及第26 天接受：兩次溶於2°/。碳酸氫鈉中之螢光染料鈣黃綠素（c· 0875 ; Sigma-AIdrich ; 20 mg/kg ; 200 μί/小鼠）的 ip注射， 以供進行骨組織計量學量測。螢光染料標記納入骨鹽中且 容許量測骨形成速率。在組織收穫期間，切除左脛骨且清 洗以用於皮質組織計量學量測。去除所有皮膚及肌肉後， 將脛骨置於70〇/。乙醇（4。〇）中於黑暗中保持至少24小時。 使用經磨橫截面切片進行皮質骨之組織計量學分析！。 141691.doc -53· 1374878 使用配備有金剛石晶圓刀片之低速鋸（Isomet，Buehler， Lake Bluff，IL)切割骨。去除靠近脛骨_腓骨連結處每一脛 骨之端部且切割75 mm之橫截面。使用毛玻璃板及軟木 塞’將切片研磨至約25 mm直至透明且所有標誌在螢光顯 微鏡下皆可辨識為止。使用下列溶液對切片實施至少2分 鐘脫水，各溶液係：1) 70°/。乙醇、2) 95°/。乙醇、3) 1〇〇〇/0 乙醇、4) 50/50乙醇/二甲苯及5)二甲苯（兩次）（Sigma，以

Louis，534056)。使用 Eukitt Quick 封固劑（Eukitt Quick

Mounting Medium)(Sigma，St_ Louis，03989)封固切片且蓋 上蓋玻片。使用Osteomeasure骨分析程式（〇steomeasure Bone Analysis Program) (Decatur，Ge〇rgia)，藉由除追蹤骨 之内周邊及外周邊亦追縱第一及第二螢光標記來計算骨形 成速率。藉由下列等式來計算骨形成速率：（標記間寬度/ 才ή? δ己間隔）* (經標記周長/骨周長）。在每一研究中，對每一 治療組’量測至少5個試樣。 製備用於ΡΚ分析及LC/MS/MS系統之標準品及試樣 量測所有血清試樣中之皮質酮、潑尼松龍、及化合物的 含量。在來自存於DMSO中之母料的對照小鼠血清中製備 下列標準品：5 叫/虹、2.5 jig/mL、1.25 pg/mL、0.3125

Mg/mL、0.078 Mg/mL、0.0195 pg/mL、0.00488 pg/mL、 0.00122 pg/mL、0.00305 叩就、〇 〇〇〇〇76 pg/mL。將 3〇 HL血清試樣（未知試樣及標準血清試樣）轉移至新％孔板 中。添加乙腈（170 nU，含有【μΜ甲苯磺丁脲作為内部標 準物）以沉澱血清並提供内部標準物以進rms/ms分析。 141691.doc -54- 1374878 在4000 rpm、25 C下將板離心5 min。轉移90 pL上清液用 於注射且在LC/MS/MS系統中注入5 pL用於分析。將低於 定量限值（LOQ)的濃度報告為零（0)且用於評價平均濃度及 估算AUC。使用線性梯形法來確定自時間〇至最終定量濃 度之時間⑴之濃度-時間曲線下面積[AUC(O-t)]。 統計學評價 使用數據之4-參數邏輯擬合獲得各參數之ed5G及ED8〇 值。對於每一實驗/劑量組，藉由計算每一小鼠值偏離其 組平均值之標準偏差數值且然後除以該組標準偏差來檢測 離群值。在該計算中所用之平均值及標準偏差省略了所檢 驗之值，以便在其為離群值時不產生影響。若所檢驗之值 比平均值大2.5倍標準偏差，則在其餘計算中不使用該 值0 然後使用媒劑及1 0 mpk潑尼松對照組之平均值計算每一 動物之抑制百分比值。然後使用每一組之曲線下面積平均 值將各小鼠抑制百分比值擬合至4_參數邏輯模型中。因全 部4個參數皆係估算所得且下平臺並不固定於〇%及上平臺 並不固定於故藉由使用逆校準公式計算響應等於 50%或嶋時之心及现❶值。符號「仏意指未測定。 141691-1010528.doc -55· 1374878 清TNFa來分別預測骨形成及抗炎功效。 離解指數係基於下列準則： 1) 離解要求在炎症及副作用生物標記[例如骨鈣素（0C)、 胰島素、或骨形成速率]之間具有劑量餘量，且使用骨鈣 素抑制（0C)作為副作用實例藉由下式來定義： DI=副作用終點 抗炎性終點 舉例而言：DI =骨鈣素抑制(0C) EDJ或EAUCd TNFa抑制(TNFa)EDiG(或EAUC50) 〇 2) 化合物之DI可視為與針對其臨床對比物潑尼松龍所觀測 者相關。經校正或標準化之DI定義為化合物DI除以潑尼松 龍DI。 離解指數

化合物 名稱 OC/TNF (ED50劑量） OC/TNF (EDso劑量） BFR/TNF (ED50劑量） BFR/TNF (Ε〇80劑量） 胰島素/TNF (ED50劑量） 姨島素/TNF. (EDs〇劑量） 實例1 2.8 3.2 4.1 7.9 44.1 5.5 對比物 B 2.5 2.2 nd nd 12.5 16.8 對比物 C 1.2 >2 1.2 0.8 >6.5 >2 對比物 D >5.3 >4.1 3.1 >4.1 >5.3 >4.1 對比物 E <0.8 <1 <0.3 <0.3 無法計算 無法計算 141691.doc -57- 1374878 經校正之籬解指數 化合物 名稱 OC/TNF (ED5。劑量） OC/TNF (ED8〇劑量） ；BFR/TNF (ED5G劑量） BFR/TNF (ED8〇劑量） 胰島素/TNF (EDSQ劑量） 胰島素/TNF (EDsd劑量） 實例1 3.1 1.6 5.1 6.1 4.8 11.1 對比物 B 2.8 1.1 nd nd 1.4 3.5 對比物 C 1.3 >2 1.5 0.6 >0.7 >0.4 對比物 D >5.9 >2.1 3.9 >3.2 >0.6 >0.9 對比物 E <0.9 <0.5 <0.4 <0.2 無法計算 無法計算 141691.doc 58-

Claims (1)

1374878 七

請專利範圍: 種式I之化合物 日修正太| 第〇卯丨25265號專利申請案 ’ 申請專利範圍替換本(101年5月） | 口

如。月求項1之化合物，其中該化合物係（4bR 6R 7R 8aS)_ 物苄基-6,7-二羥基-6-甲基-；^-(2-甲基吡啶_3-基）_1〇_側 氧土 7本基-41),5,6,7,8,83,9，10-八氫菲-2-甲酿胺；或其 醫藥上可接受之鹽。 3 ’ 種如請求項2之化合物的的鹽。 4 ’ 種如睛求項2之化合物的鈉鹽。 種組合物，其包括如請求項丨之化合物或其鹽及醫藥 上可接受之載劑。 如。月求項5之組合物，其包括醫藥有效量之（4bR，6R，7R， 8aS)_4b-苄基·6,7·二羥基-6-甲基-N-(2-甲基吡啶-3-土）1 〇側氡基_7·苯基-4b，5,6,7,8,8a,9，10-八氩菲-2 -甲醯 胺、或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑。 7..—種活體外方法，其包括使糖皮質激素受體與如請求項 1之化合物或其醫藥上可接受之鹽接觸。 8. 一種如睛求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽在製備 14169M010528.doc 1374878 9. 10.11.12.13.14.15. 藥物中的用途，該藥物係用於治療個體之由糖皮 文體活性調介的病狀。 如清求項8之用途，其中該病狀係炎症相關性病狀 如请求項8之用途，其中該病狀係哮喘、皮膚炎 陡腸病、移植排斥、多發性硬化、慢性葡萄膜炎 性阻塞性肺病。 如凊求項8之用途’其中該病狀係類風濕性關節炎 如δ青求項8之用途’其中該病狀係皮膚炎。 如請求項8之用途，其中該病狀係哮喘。 如清求項8之用途’其中該病狀係炎症性腸病。 種如請求項1之化合物在製備藥物中的用途，. 係用於減輕與糖皮質激素受體激動劑相關之副作月 貝敎素 '炎症 '或慢 藥物 141691-1010528.doc