TWI302912B - Therapeutic use - Google Patents

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1302912 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係針對N-(3-甲氧基-5-甲基吡畊基）-2_(4-[1，3,4_ 呤二唑-2-基]苯基）吡啶-3-磺醯胺或其醫藥上可接受之鹽， 此後稱為”化合物（1)”及其於治療諸如人類之溫血動物之癌 症之用途。本發明亦係有關利用包含化合物⑴或其醫藥上 可接受之鹽之醫藥組合物，於治療諸如人類之溫血動物之 癌症之方法；以及利用有關化合物⑴或其醫藥上可接受之 鹽，以製造用於治療諸如人類之溫血動物之癌症之方法之 藥物。本發明亦係有關利用包含化合物⑴或其醫藥上可接 受之鹽之醫藥組合物，於治療諸如人類之溫血動物之疼痛 之方法；以及利用有關化合物⑴或其醫藥上可接受之鹽， 用於冶療諸如人類之溫血動物之疼痛之藥物。 【先前技術】 癌症影響全世界約1000萬人。此數字包括發病率、普及 率與致死率。亞洲所通報之癌症病例超過44〇萬，包括源自 東亞之250萬，是全世界致病率最高者。比較之下，歐洲有 280萬個病例源、北美有1百4〇萬個病例，而與非洲則為 627,0〇〇個病例。 例如，在英國與美國每三個人中即有超過一個人在其生 命期中之某一時點會發生癌症。在美國，據估計癌症致死 率每年奪走600,〇〇〇條人命，約每4個死亡者中有1個為癌 症，在所有死亡原因之百分比僅次於心臟病；而且，在丨_14 歲之兒童的死亡原因僅次於意外。目前，據估計在美國每 87123 1302912 年約有1，380,〇〇〇個癌症發病率之新增病例，不含約9〇〇,〇〇〇 個非黑變病（基底的與鱗狀的細胞）皮膚癌的部分。 在英國’癌症亦為主要致病原因，在1997年即有接近 260,〇〇〇個新登記病例（排除非黑色素瘤皮膚癌）。癌症係主 要影響老年人之疾病，有65%病例發生於65歲以上者。因為 自19世紀中葉開始英國人之平均壽命大約增加一倍，故處 於罹患癌症風險之病人也增加。儘管，起因於諸如心臟病 芡其他死亡原因之死亡率在近年已降低；然而，癌症之死 ττ率仍維持穩定。其結果為，每三個人即有一個人在其生 命期中會被診斷出癌症；而且，每4個人中即有丨個會死於 癌症。對於年齡75歲以下者，癌症死亡數目超過包括缺血 性心臟病與中風之循環系統疾病。在2〇〇〇年時，有ΐ5ΐ，2〇〇 人死於癌症。其中有超過五分之一（22%)死於肺癌，有四分 之一（26%)死於大腸癌、乳癌與攝護腺癌。 就全世界而言，某些型態之癌症（例如胃癌、乳癌、攝護 腺癌、皮膚癌等等）之發病率與致死率有很大的地理上差 異，此係因為種族、文化，尤其是環境之影響。在英國與 美國，有超過200種不同型態之癌症，但是肺癌、乳癌、攝 護腺癌與結腸直腸癌佔所有診斷出的癌症病例之一半以 上。攝護腺癌係全球男性之第四大癌症病目，每年約診斷 出4〇〇，刪新病Μ，約佔所有新癌症病例之3.9%。 目前採用之癌症治療方法包括外科手術切除、外部放射 光線治療與/或全身性化療。這些僅在某些型式之癌症有部 分成效，但在其他型式則不成功。因&，對新的治療方式 87123 1302912 有明顯需求。 非類固醇抗發炎藥物（NSAIDS)與鴉片劑係用於緩解疼痛 之主要種類之藥物。然而，二者皆具有不良之副作用。已 知NSAIDS會造成腸胃道刺激，至於鴣片劑則有成瘾性。因 此，對新的有關疼痛之控制與治療方式亦有明顯需求。 最近，已有人辨識出内皮素A受體拮抗劑具有治療癌症之 潛在價值（Cancer Research, 56, 663-668, 1996年 2 月 15 日與

Nature Medicine，第1卷，第 9期，1999年 9 月，944_949)。、 内皮素屬於21個胺基酸之内生性肽之家族，包括三種同 型，即内皮素-l(ET-l)、内皮素_2與内皮素_3。内皮素係因 對應之前内皮素於Trp2i-Val22受内皮素轉化酶切斷所形成。 内皮素屬已知最強之血管收縮劑，並具有特別長之作用期。 他們展現廣X之其他活性，包括細胞增生與有絲分裂、血 液外滲與化學趨性、亦包括與其他血管活性劑之作用。 内皮素係由某些範圍之組織與細胞所釋放，包括血管内 皮細胞、血管平滑肌、腎臟、肝臟、子宮、呼吸道、小腸 與白血球。釋放可能是受血氧過少、剪切壓力、物理傷害 與廣範園之激素與胞動素之刺激。迄今，已在包括癌症之 一些人類疾病發現高量之内皮素。 【發明内容】 本發明係有關一個驚人的發現，即化合物⑴為效力特強 之抗癌藥劑。在WO96/40681中，其將化合物⑴描述成内皮 素又版之拮抗劑，而且，儘管在w〇96/4〇68l中已認知在包 括某二癌症之一些人類疾病發現高量的内皮素；然而，並 87123 1302912 無線索或暗示說此化合物 特別有利之效率、代謝盘：：其成為強效之抗癌藥之 iit . ^ P人母理學條件。WO96/40681對JL中 所速义内皮素受體申 对八千 如，在簡介中其說明這此=圍僅在於心血管疾病。例 病情包括，，高血壓、肺;^ 用以治療之疾病或醫學 门壓、心臟或腦循環疾病與腎臟 請專利範圍列出下列醫學疾病狀態，”高血壓、肺 同益、无血性心臟衰竭、不良脂血症、動脈粥狀硬化、 再狹窄、急性與慢性腎衰竭、缺血性中風、㈣網膜下出 門跛、緊急肢體缺血、氣喘或全身麻醉手術或器官 移植後之W衰竭”。然而，由之内容，並無 、、泉索或暗示4此化合物具有特別有利之效率、代謝與毒理 子k件可使其成為強效之抗癌藥。事實上，本發明者令 人很％冴地建互化合物⑴係特定之内皮素_a(eTA)拮抗劑， 且對内皮素-B(ETb)未有可測之活性。 、’二·’’、員示’ eta受體藉由各種不同機轉，在兩種腫瘤學上已 辨識出之内皮素受體係更重要之病理受體··除了媒介做為 癌症之一般共致病性之疼痛外，還包括減少正常細胞增生 (Bagnato 等人·，（1995)，Clin Cancer Res 1，1059-1066)、做 為抗細胞调零劑（Wu Wang 等人·，（1997)，Biochem J，· 328, 73 3_73 7)、做為抗血管新生劑（Spineiia等人，（2002)，J· Biol. Chem，227(31)，27850-27855)與做為骨骼轉移之抑制劑 (Guise 等人·，ASCO(2000)摘要 331 與 Nelson 等人.，（1999)，

Urology 53, 1063-1069)。已有人指出（Dahlof等人·，（1990)，J Hypertens，8，811-817)大劑量之内皮素-1會造成疼痛，並造 87123 1302912 成疼痛敏感化，但此可受ΕΤΑ拮抗劑抑制（例如Davai*等人.， (1998)，Neuroreport 9，2279-2283 與 De Mello等人·，（1998)， Pain，77, 261-269)。因而，在本發明之另一方面，施用化合 物（I)係為了預防或治療内皮素系統媒介之疼痛，特別是與 高量内皮素-1有關者。 相反地，有新的證據顯示（例如Cattaruzza等人·，（2002)， FASEB J. 14(7)，991-998 與 Okazawa等人·，（1998)，J· Biol Chem，273，12581-12592)ETB受體涉及細胞凋零之信號傳 遞。阻斷前-細胞凋零路徑在癌症治療上是不良的，因此， 特別針對ETA受體而不影響ETB受體之化合物在癌症治療上 會具有最大功用。化合物（I)即是此類化合物。 藉特定作用於ETA受體，化合物（I)比亦具ETB活性之内皮 素拮抗劑有更多優點。例如，化合物（I)可施用於病人而毋 庸施用者或開處方之醫療人員滴定化合物（I)之有關ETB活性 之症狀（例如水腫）。甚且，因無ETBi副作用而具可施用較 大劑量之潛力。 ETB抑制之另一缺點為其造成血漿内皮素之增高。潛在 地，在治療過程中，對混合性之ETA/E.TB抑制劑，或選擇性 針對ETA受體但是仍具可測之ETB活性之化合物而言，會造 成需要愈來愈高劑量之抑制劑以達到相同eta效果之情形。 專一性之ETA抑制劑則不會遭遇此問題。 因而，根據本發明，其提供化合物（I)或其醫藥上可接受 之鹽，以用於治療諸如人類之溫血動物之癌症。 在一方面，不論提及化合物（I)或其醫藥上可接受之鹽， 87123 -10- 1302912 皆係僅針對該化合物。在令— 醫藥上可0^。 純料化合物⑴之 、_本發明之另-特徵’其提供化合物⑴或其醫藥上可 接受之鹽，以製造用於治療諸如人類之溫血動物之癌 藥物。 根據本發明此方面之進—步特徵，其提供治療癌症之方 法’包括施予有效量之化合物⑴或其醫藥上可接受之鹽， 於諸如人類之溫血動物。 ^ 根據本發明此方面之進一步特徵，其提供一種醫藥組人 物’包括化合物⑴或其醫藥上可接受之鹽，聯合醫藥可： 受之稀釋劑或載體’以做為治療諸如人類之溫血動物 之用途。 ☆在本發明之另一方面，其提供化合物⑴或其醫藥上可接 受之鹽之用途，以在諸如人類之溫血動物，降低癌細胞之 不正常增生或誘發癌細胞之分化。 ☆在本發明之另一方面，其提供化合物⑴或其醫藥上可接 又《鹽〈用途’以製造用於諸如人類之溫血動物，降低癌 細胞之不正常增生或謗發癌細胞之分化之藥物。 _ 在本發明之另-方面’其提供降低癌細胞之不正常增生 或身發頰細胞之分化之方法，包括施予有效量之化合物⑴ 或其醫藥上可接受之鹽於諸如人類之溫血動物。 根據本發明此方面之進—步特徵，其提供—種醫藥^ 物’包括化合物⑴或其醫藥上可接受之鹽，聯合醫藥可: 受之稀釋劑或載體，以供諸如人類之溫血動物，做為降低 87123 1302912 癌細胞之不正常增生或謗發癌細胞分化之用途。 在本發明之另一方面，其提供化合物⑴或其醫藥上可接 受《鹽之用途，其係在謗發諸如人類之溫血動物之癌細胞 之細胞凋零。 在本發明之另一方面，其提供化合物⑴或其醫藥上可接 梵 < 鹽之用途，以製造用以謗發諸如人類之溫血動物之癌 細胞之細胞凋零之藥物。 在本％明之另一方面，其提供謗發癌細胞之細胞凋零之 万法，包括施予有效量之化合物⑴或其醫藥上可接受之鹽 於諸如人類之溫血動物。 根據本發明此方面之進一步特徵，其提供一種醫藥組合 物：包括化合物⑴或其醫藥上可接受之M，聯合醫藥上可 接受之稀釋劑或載體’以做為誘發諸如人類之溫血動物癌 細胞之細胞凋零之用途。 在本發明之另-方面’其提供化合物⑴或其醫藥上可接 =鹽之用途，其係料諸如人類之溫血動物做為供給癌 細胞疋血管之抗血管新生劑與血管針對劑。 在本發明之另一方面，豆 #、_、 八如供化合物⑴或其醫藥上可接 =鹽《用途，以製造料諸如人類之溫血動物 給Π之血管之抗血管新生劑與血管針對劑之藥物 在本發明之另一方面，並 一 ^ Λ ^ , η “ 一種做為提供供給癌細胞 (血官柷血管新生劑與血管針游劑之 量之化合物⑴或其醫藥上可接受之睡、人…括施予有效 物。 现*堵如人類之溫血動 87123 -12- 1302912 根據本發明此方面之進一 , 特欲’其提供一種醫藥組合 物’包括化合物（I)或其醫藥 ^ 鹭臬上了接雙之鹽，聯合醫藥上可 K稀釋劑或載體，以做為諸如人類之溫血動物之供給 胞之血管之抗血㈣生劑與血管針對劑之用途。 就”血管針對劑”之用語， 壤衫心 〇 應了解化合物（I)之作用位 置係在血管本身而非腫瘤之上。 在本發明之另一方面，並才口役A人 為、瞒、、 /、、化合物⑴或其醫藥上可接 文乏皿之用途’其係做為諸如 π 生气 一 < 洫血動物之抗血管新 在本發明之另一方面，並 為、 、 /、棱供化3物⑴或其醫藥上可接 文 < 现之用途，以製造用於諸、 ^ . 力員 < 溫血動物做為抗血 管新生劑之藥物。 β < 在本發明之另一方面，並蔣 、、、 /、 ’、 種提供抗血管新生效果 炙万法’包括施予有效量之化人 施、h 又化口物（1)或其醫藥上可接受之 Μ於諸如人類之溫血動物。 根據本發明此方面之進一 A,, 特欲，其提供一種醫藥組合 物，包括化合物（I)或其醫藥上 A、M j接文乏鹽，聯合醫藥可接 又〈稀釋劑或載體，以做為諸如 新生劑之用途。 力員L皿血動物（抗血管 在本發明之另一方面，兑摇 A、略 供化合物⑴或其醫藥上可接 又爻鹽之用途，其係用於諸如 轉移抑制劑與侵襲之抑制劑。“血動物，做為骨胳 =發明之另一方面’其提供化合物⑴或其醫藥上可接 4用途’以製造料諸如人類之溫血動物，做為骨 87123 -13- 1302912 轉移抑制劑與侵襲之抑制劑之藥物。 在本發明少艾 、 之方、 <另—万面，其提供抑制骨骼轉移與抑制侵襲 irt包括施予諸如人類之溫血動物有效量之化合物⑴ 次其醫藥上可接受之鹽。 根，本發明此方面之進—步特徵，其提供—種醫藥組合 ，匕括化合物⑴或其醫藥上可接受之鹽，聯合醫藥上可 ::<稀釋劑或载體，以做為諸如人類之溫血動物之骨路 多轉<抑制劑與侵襲之抑制劑之用途。 心在本發明之另一方面’其提供化合物⑴或其醫藥上可接 =鹽之料，以做為諸如人類之溫血動物之骨赂轉移抑 制劑。 心在本發明之另-方面，其提供化合物⑴或其醫藥上可接 =之鹽之用途’以製造用於諸如人類之溫血動物做為骨路 轉移抑制劑之藥物。 在本發明之另一方面，其提供抑制骨骼轉移之方法，包 括她予諸如人類之溫血動物有效量之化合物⑴或其醫藥上 可接受之鹽。 根據本發明此方面之進一步特冑，其提供一種醫藥組合 物’包括化合物（I)或其醫藥上可接受之鹽，聯合醫藥上可 接受之稀釋劑或載體，以做為諸如人類之溫血動物之骨骼 轉移抑制劑之用途。 口 ☆在本發明之另一方面’其提供化合物(I)或其醫藥上可接 文<鹽之用途，以預防諸如人類之溫血動物之骨骼轉移。 在本發明之另一方Φ，其提供化合物⑴或其醫藥上可接 87123 -14- 1302912 造用於諸如人類之…物預防其骨 在本發明之另-方面’其提供預防骨_移之方法，包 ⑼予諸如人類之溫血動物有效量之化合物⑴或其醫藥上 可接雙之鹽。 根據本發明此4之進—步特徵，其提供—種醫藥組合 ’包括化合物⑴或其醫藥上可接受之鹽，聯合醫藥上可 希釋劑或载體，以做為預防諸如人類之溫血動物骨 胳轉移之用途。 典在本發明《另-万面’其提供化合物⑴或其醫藥上可接 又〈鹽《用途’以治療諸如人類之溫血動物之骨轉移。 為在本發明（另一万面，其提供化合物⑴或其醫藥上可接 、義〈用途’以製造用於諸如人類之溫血動物 骼轉移之藥物。 微八月 ^ = ¾明4另-万面’其提供治療骨骨各轉移之方法，包 她丁諸如人類〈溫血動物有效量之化合物⑴或其醫藥上 可接受之鹽。 據本I明此方面〈進一步特徵，其提供一種醫藥組合 、心匕括化合物⑴或其醫藥上可接受之鹽，聯合醫藥上可 接雙之稀釋劑或卷踢 二 m ’以做為治療諸如人類之溫血動物之 骨骼移轉之用途。 疋 在本發明之；佳_ 土、 、 v万面，其提供如本文所述之抑制、户 療與/或預防骨骼隸銘；、 ^ 轉移<万法，其中該骨骼轉移係腎臟、甲 狀腺、肺、乳房或攝護腺之癌症之結果。 87123 -15- 1302912 心本1明《另-万面’其提供化合物(i)或其醫藥上可接 =鹽之用途，以預防或治療諸如人類之溫血動物之與高 葛〈内皮素-1之生產有關之疼痛。 ☆在本1明〈另一万面，其提供化合物⑴或其醫藥上可接 =鹽之料，以製造用於諸如人類之溫血動物做為預防 或>口療與高量之内皮素」之生產有關之疼痛之藥物。 4本毛月《另一万面，其提供治療與高量之内皮素-1之 ，有關之疼痛之方法’包括施予諸如人類之溫血動物有 政I之化合物⑴或其醫藥上可接受之鹽。 根據本發明此方面之進—步特徵，其提供一種醫藥組合 P包括化合物⑴或其醫藥上可接受之鹽，聯合醫藥上可 預“稀釋剡或載體，以供給諸如人類之溫血動物，做為 預防或治療與高量之内皮素_1之生產有關之疼痛之用途。 …本毛明之3 7面，其提供化合物⑴或其醫藥上可接 文之鹽之用途，其係在預防或治療諸如人類之溫血動物之 疼痛。 在本發明之另 雙之鹽之用途， 物之疼痛之藥物 方面，其提供化合物⑴或其醫藥上可接 以氣U用於預防或治療諸如人類之溫血動 其和:供治療疼痛之方法，包括施 效量之化合物⑴或其醫藥上可接 在本發明之另一方面， 丁諸如人類之溫血動物有 受之鹽。 在本發明之另 受之鹽之用途，

方面，其提供化合物⑴或其醫藥上可接 乂預防或治療諸如人類之溫血動物之與ET

A 87123 -16- 1302912 受體之刺激有關之疼痛。 在本發明之另一方面，t ^ ^ 其棱供化合物（I)或其醫藥上可接 又之狐之用途以t造用於預防或治療諸如人類之溫血動 物之與eta受體之刺激有關之疼痛之藥物。 在本發明之另一方面，並 、、、 、 囬其楗供一種與ETA受體之刺激有關 《疼痛（扣療万法，包括施予諸如人類之溫血動物有效量 之化合物（I)或其醫藥上可接受之鹽。 當提及癌症時，其係特別針對食道癌、骨髓瘤、肝癌、 胰臟癌、子宮頸癌、尤汉氏瘤（内皮性骨髓瘤）、神經母細胞 瘤、卡波西氏肉瘤、卵巢癌、乳癌、結腸直腸癌、攝護腺 癌月万胱癌黑色素瘤、肺癌_非小細胞肺癌（NSCLC)與小 細胞肺癌（SCLC)胃癌、頭頸癌、腎臟癌、淋巴癌與白血病。 更特別地，其係針對攝護腺癌。此外，更特㈣，其係針 、子SCLC NSCLC、結腸直腸癌、印巢癌與/或乳癌。此外， 更特別地，其係針對SCLC。此外，更特別地，其係針對 NSCLC。此外，更特別地，其係針對結腸直腸癌。此外， 更特別地’其係針對卵巢癌。此外，更特別地，其係針對 礼癌。甚且’更特別地，其係針對膀胱癌、食道癌、胃癌、 二色素瘤子会頸癌與/或腎臟癌。此外，其係針對子宮内 膜癌、肝癌、胃癌、甲狀腺癌、直腸癌與/或腦癌。在本發 明之另一方面，該癌症非為黑色素瘤。在本發明之另一個 八ta： λ訑例，特別是該癌症為轉移狀態時，而且更特別的 是該癌症已經產生骨骼轉移。在本發明之進一步具體實施 例’特別是該癌症為轉移狀態時’更特別的是該癌症已經 87123 -17- 1302912 產生皮膚轉移。在本發明之進一步具體實施例，特別是該 癌症為轉移狀態時’更特別的是該癌症已經產生淋巴轉移。 在本發明 < 進一步之具體實施例，該癌症是為非轉移狀態。 應了％ ^癌症為轉移狀態時，化合物（I)可做用於初級 腫瘤位置與轉移處。化合物⑴既可預防亦可治療與抑制轉 移。 在本發明义一方面，當提及疼痛時，此係與增量之内皮 素-1有關之疼痛。在本發明之另一方面，此係與ETa受體之 刺激有關 < 疼痛，其係由已發生之ETb之向下調控造成不正 Φ之ETA刺激與/或内皮素_ i量之增加之刺激所造成。特別 的疋，此疼痛係與癌症有關。更特別的是，此係與攝護腺 癌有關之疼痛。 根據本發明此方面之進一步特徵，其提供一種醫藥組合 物包括化合物⑴或其醫藥上可接受之鹽，聯合醫藥上可 接受之稀釋劑或載體，以供給諸如人類之溫血動物，做為 預防或治療與ETa受體之刺激有關之疼痛之用途。 此外，我們預期化合物⑴具有治療與/或預防不同來源與 原因之疼痛之用途，包括急性與慢性疼痛狀態。其實例為 由化學性、機械性、輻射（包括陽光）、熱（包括燒傷）、感染 或發，性組織創傷、或癌症、手術後疼痛、分娩後疼痛、 與關即病情相關（疼痛（諸如類風濕性關節炎與骨關節炎）、 與牙齒病情相關之疼痛（諸如姓牙與牙銀炎）、肌筋膜與下背 痛m病症相關之疼痛（諸如骨質疏鬆症、癌症之高飼 血症W Paget s(柏哲德氏）症）以及與運動傷害和扭傷相關之 87123 -18 - 1302912 疼痛。 包括中樞或周圍神經起源之神經病變性疼痛病情亦可用 化合物（I)加以治療或預防。這些疼痛病情之實例為與三叉 神經有關之疼痛、與泡疹後神經痛有關之疼痛（PHN)、與糖 尿病之單/多元神經病變有關之疼痛、與神經創傷有關之疼 痛、與脊索損傷有關之疼痛、與中樞神經中風後有關之疼 痛、與多發性硬化症有關之疼痛，以及與巴金森氏症有關 之疼痛。 其他臟腑來源之疼痛狀態，諸如潰瘍、痛經、子宮内膜 異位、刺激性腸症候群、消化不良等造成者，亦可利用化 合物（I)加以治療或預防。 本發明之進-步方面係使用化合物⑴供口服治療神經病 變或中樞神經疼痛狀態。 適當之醫藥上可接受之鹽包括，例如與驗金屬金屬(諸如 納、鉀或鋰)、鹼土金屬(諸如舞或鎂)之鹽類，銨鹽；以及 提供生理上可接受之陽離子之與有機驗之鹽，諸如與甲胺、 二甲胺、三曱胺、六氫吡啶與嗎福啉。此外，適當之醫藥 上可接受之鹽包括，與氫鹵化物、㈣、鱗酸，以及與諸 如擰檬酸、順丁晞二酸.、甲燒續酸與對_甲苯績酸之有機酸 之醫藥上可接受之酸加成鹽。 【實施方式】 下列之活體内與活體外研究可用以決定化合物⑴在腫瘤 學上之效率。 1)内皮素人類受體結合分析 87123 -19- 1302912 人S、重、、且eta或etb雙體係在小鼠紅白血病（mel)細胞表 現，至於製備供競爭性結合研究之細胞膜，則利用^丨-標示 之ET-1做為放射性配位體。培育係在含化合物⑴、 1 〇 - 1 〇莫耳;辰度之半對數增加量之情形下三重複進行，而 ET-1結合 < 抑制則表示為具95%信賴區間限制之幾何平均 P I C 5 〇 值。 結果 在ETA文體《化合物⑴之pIC：5G(取代5〇%配位體所需要之 化合物之濃度之負對數值）為8.27[8 23-8 32](11=4)。取代曲 線很正常且斜率接近一致。化合物（1)在10—4莫耳濃度之濃 度之平均取代為1·2±〇·7%(η=3)時，對ΕΤβ受體無可測得之 親和力，且此數字完全係在分析之靈敏度内。 結論 化合物⑴係人類ETA受體之高親和力配位體，並具εΤα專 一性，且無明顯之ετβ受體親和力。 2)化合物（I)做為轉移性癌症之治療方式：骨母細胞資料一 利用化合物（I)之抑制ΕΤ-1謗發之ΜΑρκ刺激 化合物（I)可能不僅對初級腫瘤之治療，甚至是對轉移性 腫瘤與在轉移沉著之内或附近之新骨格之病理生產有良好 角色。下文之說明係顯示化合物⑴在治療骨骼母細胞骨頭 病理上之用途。 在後期之攝護腺癌患者之骨骼轉移區域所見之重要的臨 床病理代表不適當之骨料細胞刺激，亦即存在於骨愁之 攝護腺腫瘤轉移’造成新骨盤之淨生產，且事實上在轉移 87123 -20 - 1302912 /儿著附近之骨法、度之增加（其回顧請參照Cancer Metastasis Rev· 2001 ; 20(3-4) : 333_49)。在此病理背後之假設之機制 為在二級骨赂腫瘤建立初期之由轉移之攝護腺細胞之ET-i 釋出。 經顯示，骨母細胞之ET-1刺激為攝護腺骨骼轉移之新骨 形成病理之主要步驟（lnvest New Drugs· 2002; 20(2):173-82)。經顯示，ET-1之作用係直接謗發骨母細胞增生與分化， 以及藉刺激ETA受體與後續之MAP激酶之磷酸化，刺激骨母 細胞生產其他生長因子（Bone. 1999; 24(4):315-20與J Bone Miner Res· 2002; 17(10):1774_84)。以此方式，刺激ETa受 體造成骨骼之生長以及轉移之腫瘤細胞之存活與生長，後 者藉生長因子之釋放入局部環境。因而，在轉移沉著之腫 瘤細胞與骨母細胞乃參與，，惡性循環”，此時其增生反應支 持彼此，征服控制與限制骨骼形成之正常調控機轉（Nat Rev Cancer· 2002; 2(8):584-93)。 在下述實驗中，本發明者首先顯示ET—i刺激骨母細胞之 MAP激酶之能力。此刺激促成細胞增生，而且經顯示該路 徑之活化對骨母細胞之釋放生長因子很重要。 然後，本發明者顯示化合物（I)與ETa拮抗劑，係此Επ 刺激之有效拮抗劑。 方法 MC3T3.E1/J1細胞株係分離自親代細胞株，MC3T3_E1 (講 自Invitrogen)則是反過來衍生自新生之C57BL/6小藏之顱 頂。MC3 T3 E1 / J1細胞株係經描述成骨母細胞株。為起始下 87123 -21 - 1302912 述實驗，將MC3T3.E1/J1細胞以2.4乂104細胞/槽（24槽培養 盤）鋪含血清之培養液中，並培育48小時。以PBS洗該細胞 兩次，並於不含血清之培養液中，再培育約1 7小時。 在此階段，然後將細胞於含或不含化合物（I)條件培育30 分鐘；然後，以生長因子刺激3分鐘。然後，去除所有培養 液，融解細胞並貯存於-20°C供電泳/西方污潰使用，其係以 抗-磷酸-p44/42MAPK(Thr 202/204)與抗-磷酸 AKT(Ser 473) 抗體（二者皆購自Cell Signalling Technology)為探針，以定 位磷酸化之MAPK與磷酸化之Akt。蛋白質帶係藉密度儀定 量，並繪成任意之密度方法單位。將磷酸化之MAPK量正常 化成總MAPK量。 結果 以ET-1刺激細胞3分鐘造成骨母細胞株MC3T3.E1/J1之 MAPK磷酸化增加。以標準生長因子PDGF刺激細胞亦造成 MAPK磷酸化增加。化合物（I)抑制骨母細胞之ET-1謗發之 MAPK之磷酸化。 87123 22- 1302912 表1.以化合物⑴抑制ΕΤ_1謗導之骨母細胞株MC3T3.E1/J1之 ΜΑΡΚ磷酸化。 環境 平均 完全培養液 151.70 無血清培養液 100.00 ET-1 100毫微莫耳濃度 312.78 ET-1 100毫微莫耳濃度 369.85 +化合物(1)20微莫耳濃度 109.18 +化合物(1)10微莫耳濃度 105.15 +化合物(1)1微莫耳濃度 157.41 +化合物(1)0.1微莫耳濃度 422.11 此資料列於圖1與2。 註記：上述實驗在利用特別之MC3T3.E1/J1細胞株並不可信 賴，其可例如利用市售之MC3T3-E1細胞株來進行。 3)化合物（I)做為血管新生之抑制劑 藉ΕΤ-1之ΕΤΑ受體之活化貢獻腫瘤生長與進展，在文獻中 係由不同機轉媒介，此暗示專一性抑制ΕΤΑ，會產生對其在 骨骨各移轉之效果分別很大之對初級腫瘤的有利效果。這些 機轉包括抗細胞凋零、直接與間接之生長促進與促成細胞 運動（Nat Rev Cancer· 2003; 3(2):110-6)。 目前，更新與更有利益的是經ETA受體媒介之ET-1之角色 為腫瘤血管新生之主要份子（J Cardiovasc Pharmacol· 2000; 36:S135-9)。有關機轉之研究顯示ETA受體藉直接謗發血氧 過低所謗發之因子，HIF-1 a (J Biol Chem. 2002; 277:27850_5) 87123 23- 1302912 對強效之血管新生子VEGf之生產很重要（Life Sci. 1998; 63(6):477-84)。愈來愈多文獻支持内皮素與eta受體在腫瘤 血管新生之角色，最近已由Bagnat〇與Spinella做回顧（Trends

Endocrinol Metab. 2003; 14(1):44-50)。 在下述實驗中，我們顯示化合物⑴在動物模式之接種人 類腫瘤細胞後，對由新形成腫瘤誘發之血管新生之效果。 方法 腫瘤細胞係接種在裸小鼠内皮，每天經口服給予化合物 (1)25或50¾克/公斤或載體1次，首次劑量係在細胞植入後 萬天給，並於5天候犧牲小鼠。檢驗以腫瘤在中間之1平方 公分區域，並計算該區域内供給腫瘤之血管分叉數目。將 接文文測藥物與載體治療之動物供給腫瘤之血管數目做比 較，並將化合物⑴之效果計算成血管數目減低百分比。 結果 與載體對照組比較，化合物⑴造成治療動物腫瘤周圍之 血管密度減低。化合物（I)造成之血管數目減低可在5個以結 腸與攝護腺細胞株誘發腫瘤之活體内研究之腫瘤周圍發 現。 87123 -24 - 1302912 表2由化合物（I)造成之初級腫瘤之血管新生之抑制 細胞株 腫瘤型態 化合物（I)劑量 (毫克/公斤） 血管數目抑制1 LOVO 結腸 50 20%(p=0.001) LOVO 結腸 50 28%(p< 0.001) LOVO 結腸 25 28%(p< 0.001) DU145 攝護腺 50 30%(p<0.05) DU145 攝護腺 25 38%(p<0.001) 1與載體對照組比較之ANOVA統計分析。 上述細胞株皆有市售。來源之一為ATCC(美國式培養收 集站）。LOVO 之 ATCC 編號=CCL-229，DU145 之 ATCC 編號 =HTB-81。 討論 我們顯示，在活體外化合物（I)係有效之ET-1媒介之骨母 細胞之MAP激酶活化之抑制劑，以及在活體内可有效抑制 初級腫瘤之血管新生。此證實此藥劑除了對初級腫瘤之抗 血管新生效應外，做為治療轉移性攝護腺癌之潛力，正如 其可能具有預防由MAPK路徑媒介之病理性骨密度增加之效 果（藉抑制骨母細胞增生），以及抑制支持腫瘤細胞在骨骼環 境中存活與生長之生長因子之釋放。 4)化合物（I)做為人類内皮素系統之内皮素受體拮抗劑 人類前臂血流可藉於上臂使用氣袖，然後其會膨脹至僅 大於靜脈壓力，而利用暫時的阻礙由手臂之靜脈流出進行 評估。所造成之動脈流入手臂而無對應之靜脈流出會造成 87123 -25 - 1302912 收^^血與膨脹，此可藉敏隸力閥㈣。將動脈血管 =Γ灌注入肱動脈，因為動脈流入減少造成前臂之 肌上1 咸。此血管收縮係經由血管内皮細胞與有關之平滑 上<内皮素受體所媒介。 方法 ，我們進仃一種研冗以調查在此模式中，在年齡歲之 ，性受測者體内1合物⑴經由内皮素受體拮抗eim之血 e收'%叙效果。令8位受測者以逢機、雙盲並且研究天數 至：間隔7天之方式接受單一口服劑量之1〇毫克化合物⑴、 3〇毫克化合物⑴以及安慰劑。#臂對购反應之血管收縮 係在給予化合物⑴劑量後2至4小時間進行評估。 結果 大to上，與士慰劑比較（ρ=0·〇21 〇)，以調查之劑量間之劑 里反應證據而言，化合物⑴對灌注之ELi之反應，對前臂 血机產生統計上顯著之減少。此顯示，在人類内皮素系統 中’化合物（I)為内皮素受體拮抗劑。 5)化合物（I)於劑量增高之研究以評估每天給予具轉移性攝 護腺癌之病患口服一次之化合物（I)之耐受性與藥物動態學 可進行下列研究以決定具有轉移性攝護腺癌之病患之化 合物（I)之最大可容忍劑量（MWTD)。此研究可允許吾人觀察 化合物⑴對攝護腺專一性抗原（PSA)之效果，觀察化合物⑴ 對骨骼轉移之血清生物標示之效果，並提供吾人化合物⑴ 在具轉移性攝護腺癌之病患之藥理特徵 方法 87123 -26 - 1302912 此研究可利用具有文獻記載之骨骼轉移之攝護腺癌病患 (由進入研先後3個月内之骨骼掃描證實）。化合物⑴可採錠 J式每天給予口服一次。起始劑量可使用12〇毫克。可給 了文測者研究物藥28天，或直至符合抽離之基準為止。每 個劑ΐ可徵用達三位具有轉移性攝護腺癌之受測者。 對每位文測者之耐受性之正式評估可在施用化合物（ι)ι週 後進行。當在任何組別之兩位受測者於連續施用化合物⑴ 一周後並未經驗劑量限制之毒性（DLT)時，劑量增高即會發 生。在每一步驟可將劑量升高兩個次方。若受測者在特定 量有DLT時’肖在此劑量之另夕卜兩位受測者必不可經驗 DLTs以便增高至下一劑量。 除非付合抽離之基準，否則受測者可繼續接受治療達28 天。當任合組別有最少兩位受測者於施用後之任何時點已 被〜足並非接受可容忍劑量時，劑量增高即終止；至於在 此之下之最高劑量則做為MWTD。 可觀察到下列結果。 a. 不良反應之發病率與嚴重性， b. 接文化合物⑴治療之受測者於卜2、4週時之psA濃度（總 里與自由態與總量之比率）， c·施用化合物⑴之前至施用化合物（1)1、2、4週後之psA 變化（總量與自由態與總量之比率）， d·施用化合物⑴之前至施用化合物（1)1、2、4週後之骨骼 轉移狀況（骨骼鹼性磷酸水解酶）之血清標示物量之變化，與 e·於穩足狀態時之單一劑量與多重劑量後，化合物⑴之血 87123 -27- 1302912 漿濃度與變量。 疼痛緩解之測試 化合物⑴之鎮痛效果可利用例如Wacnik等人於Journal of Neim)SCienCe(2001)，21，9355·之癌症疼痛之大鼠模式做測 定0 在本發明之進一步具體實施例中，其係將化合物（I)或其 醫藥上可接焚之鹽在癌症發生之前施於細胞或個體。例如， 以化合物（I)或其醫藥上可接受之鹽處理有發生癌症危險之 病人，以預防或抑制癌症之發生與/或預防轉移之發生。 可將化合物⑴或其醫藥上可接受之鹽，利用此藝熟諳之 方法施用於諸如人之溫血動物，做為治療或預防用途。施 用可直接於腫瘤位置或為特別之全身性施用。 可採慣用之醫藥組合物型式，將化合物⑴戋並醫 接受之鹽施料諸如人之溫血動物，做為治療或預防用途。 該組合物可為例如錠劑或膠囊之適於口服施用型式，諸如 滅菌溶液、懸浮液或乳液之非經腸注射(包括靜脈内、皮下、 肌内、血管内或灌注）型式，如油膏或乳霜之供局部施用刑 式，或是如栓劑之直腸施用型式。通常，上述組合物^ 用慣用賦形劑藉慣用方式成。 万式製成例如’可利用下列賦形為丨

將化合物（I)調配成錠劑： N 化合物（I)， 乳糖單水合物（填充劑）， 文聯羧甲基纖維素鋼（分解劑）， 普維酮（povidone)(接著劑）， 87123 -28- 1302912 硬脂酸鎂（潤滑劑）， 羥丙甲纖維素（膜塗覆成分）， 聚乙二醇300(膜塗覆成分），與 一氧化敛（膜塗覆成分）。 施用之化合物（I)或其醫藥上可接受之鹽之量必須足以提 供所需之藥效。例如，可將化合物⑴以單位劑量每天小於 -克口服施予溫血動物。特別是，可將化合物⑴採每天小 於250毫克之單位劑量施予溫血動物。在本發明之另一方 面’可將化合物（I)採每天小於13〇毫克之單位劑量施予溫血 動物。在本發明之進一步方面，可將化合物⑴採每天小於5〇 毫克之單位劑量施予溫血動物。 【圖式簡單說明】 圖1 ·此為西方污潰圖，顯示利用化合物⑴對來自下文研 究2之骨母細胞株謗發之ΜΑρκ磷酸化 之抑制。令蛋白質在膠上跑，然後轉移至硝基纖維素膜， 在此利用初級與二級抗體探測。所用縮寫如下： SCM :含血清之培養液 S F Μ :無血清之培養液 圖2 :此圖亦是顯示在下文之研究2中，利用化合物⑴對 骨母細胞株MC3T3.E1/J1之ΕΤ-1謗發之ΜΑρκ磷酸化之抑制 情形。 87123 -29-

Claims (1)

1. 號專利申請案 拾、申請專利範圍： 甲-^ζ-ίτ 吞青專·矛!/勒* 圍 4參本^(97 年' 2 月） -|:::;!g^saaaa^m，_j；tiaMgiaa酿咖.jBTt^aawtodMujMwaM^齡 Α、Λ从由心•从一 ，7# >靡^>_修(龙_：卷: 1· 一種Ν-(3-甲氧基_5_甲基吡_ 才 基）-2-(4-[1，3,4-啰二唑-2- 本基风。定-3_續醯胺或其醫藥上可接受之鹽之用途，其 係用於製造用以治療諸如人類之溫血動物之癌症之藥物。 2. 根據申請專利範圍第1項之化合物或其醫藥上可接受之鹽 之用途，其係用於製造在諸如人類之溫血動物減低癌細胞 之不正常增生或誘發癌細胞之分化之藥物。 3. 根據申請專利範圍第!項之化合物或其醫藥上可接受之鹽 之用途，其係用於製造在諸如人類之溫血動物誘發癌細胞 之細胞凋零之藥物。 4·根據中請專利範圍第1項之化合物或其醫藥上可接受之鹽 之用途’其係用於製造在諸如人類之溫血動物做為供給癌 細胞的血管之抗-血管新生劑與血管針對劑之藥物。 5. 根據申請專利範圍第i項之化合物或其醫藥上可接受之鹽 之用途，其係用於製造在諸如人類之溫血動物做為抗·血管 新生劑之藥物。 6. 根據申請專利範圍第旧之用途，其中該癌症為食道癌、骨 髓瘤、肝癌、騰臟癌、子宮頸癌、尤汉氏瘤（时性骨鑛瘤）、 神經母細胞瘤、卡波西氏肉瘤、印巢癌、乳癌、結腸直腸 癌、攝護腺癌、膀胱癌、黑色素瘤、肺癌_非小細胞肺癌 (NSCLC)與小細胞肺癌（SCLC)_胃癌、頭頸癌、腎臟癌、淋 巴癌與白血病。 7. 根據中請專利範圍第旧之用途，其中該癌症為攝護腺癌。 8. 根據申請專利範圍第丨項之用途，其中該癌症為sclc、 87123-970220.doc 1302912 NSCLC、結腸直腸癌、印巢癌與/或乳癌。 9·根據申請專利範圍第i項之用途，其中該癌症為膀脱癌、食 道癌、胃癌、黑色素瘤、子宮頸癌與/或腎臟癌。 10·根據申請專利範圍第㈣之用途，其中該癌症為子宮内膜 癌、肝癌、胃癌、曱狀腺癌、直腸癌與/或腦癌。 11. 根據中請專利範圍第W之用途，其中該癌症為似。。 12. 根據申，月專利範圍第i項之用途，其中該癌症為nsclc。 13·根據f請專利範圍第1項之用途，其中該癌症為結腸直腸 癌。 14. 根據中請專利範圍第旧之用途，其中該癌症為㈣癌。 15. 根據申請專利範圍第1項之用途，其中該癌症為乳癌。 16. 根據申請專利範圍第1與6至15項中任-項之用it，其中該 癌症為轉移狀態。 •根據申吻專利範圍第i與6至丨5項中任一項之用途，其中該 癌症為非轉移狀態。 18·根據申δ月專利範圍第i與6至i 5項中任一項之用途，其中該 癌症為產生骨骼轉移之腎臟癌、曱狀腺癌、肺癌、乳癌或 攝護腺癌。 19·根據申明專利範圍第i項之化合物或其醫藥上可接受之鹽 之用途其係用於製造在諸如人類之溫血動物做為骨骼轉 移抑制劑與侵襲抑制劑之藥物。 20·根據申請專利範圍第1項之化合物或其醫藥上可接受之鹽 之用述，其係用於製造在諸如人類之溫血動物做為骨骼轉 移抑制劑之藥物。 87123-970220.doc 1302912 21·根據申請專利籍圍笛 之用：合物或其醫藥上可接受之越 之用逆，其係用於製造在諸如人類之温血 ^孤 轉移之藥物。 預防其月骼 22·根據申請專利範圍第i項之化 ^ m A具醫樂上可接受之赜 之用途，其係在製造用於諸如人 孤 轉移之藥物。 -血動物治療其骨骼 23· —種用於在諸如人類 .物冶療癌症之醫藥組合 物，其包含义(3-甲氧基_5_甲基 G 开_2_基）-2-(4-[1，3,4-唠二 唑-2-基]苯基）吡啶_3-磺醯胺或 — 请糸上可接受之鹽及醫 樂上可接受之稀釋劑或載劑。 87123-970220.doc