TWI294284B - - Google Patents

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1294284 玫、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本^月係關於醫藥、食品、飲料或飼料，其對於生物體 &島ϋ目Μ ^疾病’例如糖尿病、肥胖症等之治療或 預防有用。 【先前技術】 胰島素係哺乳動物之正常碳水化合物、蛋白質以及脂肪 代謝所必要荷爾蒙。1型糖尿病患者，由於係支持生命之荷 爾豕騰s素生成量不^ ’爲生存須從外界投與胰島素。π 型糖年病患者’為控制由於姨島素生成量不^、胰島素抵 抗丨生等原因所造成之不適量血中葡萄糖量為正常量，需要 投與胰島素或騰島素分泌促進藥。然而，π型糖尿病患者 中’以由高騰島素血症或胰島素受體異常m受體之 下游信號異常等引起之胰島素抵抗性爲原因之糖尿病患者 ’即便投與胰島素或胰島素分泌促進藥，也無明顯 果。 ，、 近年’為解決姨島素副作用與上述問題，有進行與姨島 素有相同生理作用之物質(以下有時簡稱為類胰島素物質) 之開發，並判明合成苯二酮誘導體為類胰島素物質⑽如， 參照國際公開第99/51225號公報)，且紫根衍生之紫草為類 胰島素物質（例如，參照KameiR外7名，Bi〇chem Bi〇phys

Res.C0mmun.，2〇〇2年 ’ v〇1 292 p 642_65i)。該等類胰島 素物貪不僅對I型糖尿病患者，還對π型糖尿病患者，尤其 對胰島素抵抗性爲原因之π型糖尿病患者，藉由其顯示與 87298 1294284 胰島素相同生理活性可期待改善症狀。 明日葉係繳形花科A型多年性草本，被認爲有健 促進效果。例如，明瑩 健康 月日葉所持有生理活性為預防高血壓效 、抗菌作用、抗腫瘤作用、抑制胃酸分泌作 增強神經成長因子產生效果、增強肝細胞增殖因二 乍用專(例如，參照國際公開第〇1/細號公報)。缺而， 糖尿病作用或抗肥胖作用等類胰島素作用尚屬未知。 。=係屬於繳w科’被認爲具有各種生理作用之植物 。"之生理作用為抗血液凝固作用、抗癌作用等。麸而 ，其抗糖尿病作用或抗肥胖作用等類胰島素作用尚屬未知。 何鬧芽係屬於繳形花科，被認爲有各種生理作用之植物 。何鬧芽之生理作用為改善貧血、預防食物中毒作用、止 血作用、恢復疲菩、ψ、、不 α , ’干、利尿、保溫效果等。然而，J： ，糖尿病作用或抗肥胖作用等類騰島素作用尚屬未知/、 【發明内容】 本發明之目的為開發天絲衍生之且安全，攝取簡單， 可適用於食品素材、醫藥σ冬 邊樂。0素材之具有類胰島素作用之植 物衍生之處理物，並裎徂士, I徒仏利用该處理物之醫藥、食品、飲 料或飼料。 以下概括本發明’本發明之^發明為關於以包含繳形花 科植物衍生之處理物兔古< # a ,, 、 為有效成刀作為特徵之伴隨胰島素量 或騰島素反應失常之疾病之治療劑或預防劑。 本發明之第2發明為關於以包含繳形花科植物衍生之處 理物為有效成分作為特徵之類胰島素作用劑。 87298 1294284 本發明之第3發明為關於以包含繳形花科植物衍生之處 理物為有效成分作為特徵之伴隨胰島素量或胰島素反應失 常之疾病之治療用或預防用食品、飲料或飼料。〜 本發明之第4發明為關於以包含繳形花科植物衍生之處 理物為有效成分作為特徵之細胞内葡萄糖吸收促進劑。 本發明之第5發明為關於以包含繳形花科植物衍生之處 理物為有效成分作為特徵之分化為脂肪細胞之誘導劑。 ;本毛月之第1〜5發明中，繳形花科植物係例如，明日 葉、芹菜或荷蘭芹。 【實施方式】 :本I丨巾·散形化科植物為，屬於被子植物類繳形花 科植=，例如，有明曰葉、水序、.山芽菜、重齒毛當歸、 胡蘿U、芽菜、荷蘭芽等。於本發明中，特別適合使用明 日葉、芽菜、荷蘭序。且，於本發明中，該等可以翠獨或2

種以上混合4吏用。日，士 CJD 便用且本發明所使用繳形花科植物，並不 限定，可以使用其果實、種子、種皮、花、葉子、莖、根 、根莖與/或植物全體。 於本發明中作爲有效成分所使用之繳形花科植物衍生之 處理物’只要持有類胰島素作用並不限定，例如可以為萃 取物鳥碎物、榨汁液、破碎物、化學處理物或酵素處理 物-中例如萃取物、粉碎物以及梓汁液特別適合。只要 可以作，本發明之有效成分所使用並不特別限定。各處理 物可以單獨或兩種以上混合使用。 且’本發明中類胰島素作用，只要表示與胰島素相同之 87298 1294284 活丨生，並不限定，例如，促進細 ^ 收；糖原、m丄 氰基酸之吸 原蛋白貝合成以及抑制分解等代謝你 爲本發明之右埒&八 '谢凋即作用。作 誘導作用ΐ ’至少要顯示分化為脂肪細胞之分化 素作用内葡萄糖吸收促進作用。測定有無類胰島 ，、，稭由實施例3或5所記載方法可以簡單測定。 =發明中’萃取物指用萃取溶劑經過萃取操作工程後 、仵物質。萃取可以用正式萃取方法如下進行。例如，可 以將原料粉碎或細斷後，用溶劑以批式或連續式進行。作 爲得到萃取物時所用萃取溶H不限定，可以為水、氯 仿、乙醇、甲醇、異丙醇等醇類’也可以為丙自同、丁酮等 酮類’還可以為乙酸甲_ '乙酸乙醋等親水性或親油性溶 劑，根據需要，可以單獨或適當混合使用。萃取溶劑之量 ，可適當決定，通常使用相對於原料（固體）重量之^丨〜工⑽ 倍置。萃取溫度根據目的適宜決定，用水萃取之情形通常 為在4〜130。(：，更好在25〜1〇(rc。且，溶劑中包含乙醇之 情形適合為4〜60°C範圍。萃取時間，可考慮萃取效率決定 。通常為數秒〜數日；更好為設定原料、萃取溶劑、萃取 溫度等使萃取時間在5分〜24小時之範圍。萃取操作，例如 可以一邊攪拌或靜置進行，且可根據需要反復數回。藉由 以上操作，得到繳形花科植物衍生之萃取物（以下，有時簡 稱爲本發明之萃取物）。萃取物根據需要進行過濾、離心分 離、濃縮、限外過濾、分子篩等處理，調製出目的之濃縮 有類胰島素物質之萃取物。萃取物或濃縮萃取物之類胰島 素作用，可以利用後述實施例3或5所記載方法簡便測定。 87298 -9- 1294284 且，可以將繳形花科植物以正式方法製成茶葉狀，若此萃 取物(例如明日葉茶)有類胰島素作用，可作爲本發明之萃 取物使用。且’可以包含上述萃取物2種以上使用。且，也 可以包含本發明中不同萃取方法所獲得兩種以上萃取物使 用。 且，在本發明中，將繳形花科植物衍生之萃取物藉由正 式方法分晝所得部分，重復分畫操作所得部分也包含在 本發明之萃取物中。上述分畫手段可以為萃取、分別沉殿 、官柱層析、薄層層析p也可以將所得部分，以類騰島 素作用為指標，進一步精製，可以單離類胰島素物質。 繳形花科植物有來萃取物以外繳形花科植物衍生 =處理物之製造方法，有，例如，將植物乾燥、粉碎得到 粉綠^花科衍生之粉碎物最好利心結乾燥。 且了以藉由/東結粉碎獲取粉碎物。 且’繳形花科植物衍生之榨汁液之製造 ::物:::法並不特別限定。例如，可以用螺 ::齒 輪式n切料機或榨汁_汁。且 細斷或磨碎後’再用上述榨汁器或布 里， 破碎物為指，將缴形花科植 #/ ^汁液。 組織片大。例如般比粉碎物 ，並不特❹ 機製造。且，化學處理物為 化= 為將缴形花科植物酸處理、驗處理、酸 处、還原處理後所獲得產物。例如 花科植物浸潰在含越萨放放 乂糟由將繳形 趟辦七亡▲ ㈣酸、摔檬酸、醋酸等盔 機酸或有機酸；錢氧仙、氫氧化_、氨等無機驗=有、 87298 1294284 钱驗之水溶液製造。化聲# 子處理物包括由上述化學處理所獲 传所有植物體衍生之物。 + 、 生心物酵素處理物為指，例如果膠酶、 纖維質酶、聚木糖酶、丨殿私給 知每、聚甘露糖酶、聚葡萄糖酶 4酵素處理物，微生物衍味 何生之酵素反應物（如發酵物），例 如可以對繳形花科植物用μ、++ 村植物用上述酵素，在適當緩衝液中作用 =製造’處理物包括’所有衍生之於上述酵素處理植物 體之產物。再者’繳形花科植物衍生之處理物還包括例如 切斷此繳形花科植物莖，從其切斷面所獲得汁液。 在本發明中’繳形花科植物衍生之處理物之形狀，只要 有類姨島素作用，並不特別限定，可以爲粉狀、固體狀、 液狀中任意形狀。i ’可以將該物質以正式方法造粒成粒 狀固形物’作爲本發明繳形花科植物衍生之處理物使用。 造粒方法，並不特別限冑，例&可以為轉動造粒、搜掉造 粒、流動層造粒、氣流造粒、壓制造粒、壓縮成形造粒、 解碎造粒、喷射造粒或喷霧造粒。也可以絲狀該缴形花 科植物衍生之處理物溶解於例如纟'乙醇等液體成液狀， 作爲本發明繳形花科植物衍生之處理物使用。 且’本發明可以將有效成分作爲例如本發明&明所記載 伴隨胰島素量或騰島素反應失常之疾病之治療用或預防用 食品、飲料或飼料使用。使用有效成分之形態，例如為將 前述萃取物或粉碎物等製成錠劑形狀。製造錠劑可以用 正式製錠方法進行。 且，本發明所提供包含高濃度或高純度繳形花科植物衍 生之處理物之食品、飲料或飼料，與習知食品、飲料或飼 87298 -11 - 1294284 枓相“味著本發明之食品、飲料或飼料中… 度及/或高純度類胰島素 匕3南濃 後述，可以在習知食。等中V 飲韵料’例如 且，本發明中，二广添加本發明之有效成分製造。 之有效成分，稱包含本 处里物為本發明 島素反應失常之疾病之J卞成刀之伴隨姨島素量或胰 或預防劑。、…1或預防劑為本發明之治療劑 本發明所係有效成分，如後述無毒性檢驗出。且 擔心副作用發生。因此， 不必 ㈣防❹ 安全且適當進行疾病之治療 或預防。因此，令贫古从上、\ m 食σ、飲料之本發明治療劑、預防劑、 ^ ^ 料，對伴隨姨島素量或騰島素反應失常之 疾病之治療或預防有效。 明中，作爲伴隨胰島素量或胰島素反應失常之 疾病，為血中胰島素水平變 水平變化、胰島素受體下游素或勝島素受體活性 下游仏諕異常、以及由該等組合中 所選擇因子為特徵之疾病，例 届例如糖尿病、肥胖症、動脈 =、古柯驗停藥之脫瘾症狀、鬱也性心不全、心臟血管 L、大腦血官痙攣、嗜鉻細胞瘤、副神經瘤、亨丁噸舞 蹈症、高血脂症、高騰島素症等。作爲糖尿病，例如ί型糖 、Π型糖尿病。且，作爲Π型糖尿病，還包括投與胰島 ^或姨島素分泌促進藥也無治療效果之胰島素抵抗 因之疾病。 :胰島素被認爲促進脂肪前驅細胞分化為脂肪細胞之分化 誘導，且在成熟脂肪細胞中促進葡萄糖吸收、細胞内健存 87298 -12- 1294284 三酸甘油脂（Rubin C· S.等，J· Biol. Chem·，Vol· 253, No· 20, P 7570〜75 78 (1978年））。即，利用該方法，代替胰島素投 與被檢物質，藉由觀察分化為脂肪細胞或測定細胞中三酸 甘油脂生合成量，測定被檢物質之類胰島素作用。 且，胰島素被認爲有葡萄糖吸收促進作用，在成熟脂肪 細胞中胰島素促進細胞内葡萄糖吸收（Rubin C· S.等，j.

Biol· Chem·’ Vol. 253· No. 20, P7579〜7583 (1978 年））。即 ，利用該方法，代替胰島素投與被檢物質，藉由測定成熟 脂肪細胞内葡萄糖吸收量，測定被檢物質之類胰島素作用。 作爲本發明之治療劑或預防劑，可以將本發明有關前述 有效成分與正式醫藥擔體組合製劑化之物。 本發明之治療劑或預防劑製造，通常，ϋ由將前述有效 % 成分與藥學所容許液狀或固 據需要添加溶劑、分散劑、 幵> 劑、結合劑、崩壞劑、潤 劑、粉末劑、膠囊劑等固形 等液劑。且，也可以製成使 乾燥品，或其他外用劑。 體狀擔體配合進行，還可以根 乳化劑、緩衝劑、安定劑、賦 滑劑等製成錠劑、顆粒劑、散 劑；通常液劑、懸濁劑、乳劑 用前·添加適當擔體成爲液狀之

,醫藥用擔體’可以根據治療劑或預防劑投與形態以及劑 型選擇。製成固體組成物所組成口服劑之情形，可以製告 成錠劑、丸劑、膠囊劑、散劑、細粒劑、顆粒 二 利用澱粉、乳糖、白糖、甘露醇、羧甲纖維素、玉米澱二 、：機鹽等。i，調製口服劑之情形，可以再配合处：: 、崩壞劑、界面活性劑、潤滑劑、流動性促進劑：：：:; 87298 -13- 1294284 、著色劑、香料等。 根據需要用蔗糖、日：如’製成錠劑或丸劑之情形，可以 腸溶性物"被覆明Γ:㈣基纖維素特衣或胃溶性或 ，製成藥理物所…服劑之情形 子露劑等，^ km溶液劑、懸濁劑、果 s ，可以將精製水、乙醇等作爲#俨剎a 且，再根攄f：亜~r 寸F馬擔體利用。 劑、風味劑、防腐„。 麵劑、甘味 且，製成非口服劑之衿 述有效成八用 ”’遲照正式方法將本發明之前 、注射t 1 溶液 二醇、平7咕 化生油、大豆油、玉米油、丙烯 :A烯二醇等稀釋劑溶解或懸濁，根據必要添加役 菌劑、安定劑、等張化劑.、止痛劑等調[且，也可以製 造成固體细成物，在使用前用無菌水或無菌注射用溶劑溶 解使用。 作爲外用劑，包含經皮投與或經粘膜（口腔内、鼻腔内） 投與用固H、半固體狀，或液狀製劑。且還包含座劑。例 如，乳劑、洗劑等乳濁劑；外用酊劑、經粘膜投與用液劑 等液狀製劑；油性軟膏、親水性軟膏等軟膏劑；膜劑、綳 f劑、泥罨敷劑等經皮投與或經粘膜投與用貼付劑等。 以上各種製劑，可以分別利用正式醫藥用擔體，適宜， 用常用方法製造。且，製劑所包含有效成分含有量，須考 慮其投與形態，投與方式等，只要該有效成分之可投與量 為後述投與量範圍内，並不特別限定。 本發明之治療劑或預防劑，可以根據製劑形態以適當經 87298 -14· 1294284 路投與。投與方法並不特別限定，可以為内用、外用以及 庄射。注射劑例如可以在靜脈内 盥·々k田十丨,, 反下、皮内投 …外用诏，例如座劑以其適合投與方法投盥。 :發明作之治療劑或預防劑之投與量，根據製劑形能、 者";Γ體Γ目的以及該治療劑或預防劑投與對象之患 者年齡、體重、症狀等所適宜設定，並不一定。一卜 劑中所包含前述有效成分之投與量為人，（例如成年又人）每 日0·1 〜1 g/kg。當然投與量隨著種種條件變動有時少 於上述，與量也足夠，有時需要超過範圍。投與可以在允 許投與Μ圍内，!次或多次進行。^，本發明之治療 劑或預防劑除直接經口投與外，還可以添加到任何飲食品 中曰常攝取…本發明之有效成分，可以通過和盥本發 明之有效成分有相同作用之物質，如胰島素等並用’如奋 施例20所記載，期待其相乘效果。 只 且，本發明還提供包含前述有效成分之類胰島素作用劑 。該類騰島素作用劑，可以為前述有效成分本身，也可以 為包3刖述有效成分之組成物。該類肤島素作用劑，例如 可以將前述有效成分和與該有效成分有相同用途使用可能 之’、他成刀(例如胰島素)配合，依據上述治療劑或預防劑 之製造方法’製造成通常使用試藥形態。該類騰島素作用 劑中所含前述有效成分含有量，應考慮該類騰島素作用劑 之投與方法、使用目的等，只要為得到本發明所希望效果 之量即可，並不特別限定。有效成分含有量為，例如〇別 1 〇〇重1 /〇。且，該類胰島素作用劑使用量，只要為得到 87298 -15- 1294284 本發明所希望效果之量衫制限定 體使用之情形，最好I 5、+.、Λ ’、、，投與至身 ϋ 一 H療劑或預防劑之有效成分之 又里範圍内投與有效成分即可。 隨姨島素量或騰島素反岸失常之島素作用劑’對伴 茂句I汉應矢㊉之疾病有用。且， 素作用劑，還可以使用於製造該等疾病之 品、飲料或飼料。關於該當食品、料…“ 乂、+、处岐4= Α 寸4幻料’可以依攄 別述“姨島素量或姨島素反應失常之疾病 :方用食品、飲料或飼料之標準使用…該類胰島辛作用員 ^對師選對賴胰島素量錢島素反應失常之疾病之藥物 有用。再者該類姨㈣作用齊卜對細胞内騰島素作用機理 研究、關於其細胞物理變化之機能研究有用。 且’藉由將本發明之類胰島素作用劑投與至人，可期待 血中胰島素量下降。即，本發明之類胰島素作用劑可以作 爲治療或㈣要求降低姨島素量之疾病之治療或預防劑使 用。該當疾病，並不特別限定，例如高姨島素症、老人癌 呆症等。J_，依據介於胰島素受體之刺激與延命效果有密 切關係之報告（Science，ν〇1· 299，p 572〜574 (2〇〇3年）；

Nature，vol· 424, Ρ 277 〜284 (2〇〇3 年）），也可以將本發明 類胰島素作用劑作爲老化防止劑使用。 於本發明之有關有效成分中，如後述無毒性檢驗出。且 ，不必擔心副作用產生。且，可以安全並適合表達類胰島 素作用。所以，含該有效成分之本發明中醫藥、食品、飲 料或飼料，對伴隨胰島素量或胰島素反應失常之疾病之治 療或預防有效。 87298 -16 - 1294284 、且’本發明.提供包含、添加以及/或稀釋前述有效成分而 成對伴隨姨島素量或胰島素反應失常之疾病之治療用或預 防用食品、飲料或飼料。本發明之食品、飲料或飼料藉由 其類胰島素作用，對伴隨胰島素量或胰島素反應失常：疾 病之症狀改善、預防極其有用。再者，本發明之食品或飲 料為有降低血糖值作甩之血糖值降低用食品或飲料，對關 心血糖值或體脂肪者而言，為有效機能性食品或飲料。 且，本發明内容中，< 包含 >指食品、飲料或飼料中包含 本發明所使用有效成分；<添加 >指食品、飲料或飼料之原 料中添加有本發明所使用有效成分； <稀釋>指於本發明所 使用有效成分中添加食品、飲料或飼料之原料。 本發明並不限定食品、飲料或飼料之製造方法。例如， 配合、調理、加工等可以依據一般食品、飲料或飼料之方 法，可以由該等製造方法製造，只要所得食品、飲料或飼 料中包含表現類胰島素作用之本發明有關前述有效成分即 可。 作爲本發明之食品或飲料並不限定，例如，可以為包含 本發明所係前述有效成分之穀物加工品（小麥粉加工品、澱 粉類加工品、預拌粉加工品、面類、通心粉類、麵包類、 豆餡類、蕎麥類、麩、米粉面、粉條、年糕等），油脂加工 品（可塑性油脂、炸油、色拉油、蛋黃醬類、調味汁等）， 大豆加工品（豆腐類、味噌、納豆等），食肉加工品（火腿、 臘肉、壓制火腿、香腸等），水產製品（冷凍魚漿、魚糕、 竹輪、半平、薩摩揚、魚餅、魚子醬、魚肉火腿、香腸、 87298 -17- 1294284 經魚節、房軔士 (原料乳、奶油7 = 、水產罐頭、鹹烹海味等），乳製品 等)，蔬菜·果實Γ奶：黃油、乾路、煉乳、奶粉、冰淇淋 料、蔬菜飲料…人俨Θ類、果醬類、醬采類、果實飲 帶銘麵包、二二Γ等)，點心類(巧克力、餅乾類、 中國酒、葡萄二：、烤米片類)，酒精飲料(曰本酒、 子酒、羊“、哮酒、ΐ:燒酒、：特加、白蘭地、杜松 ，嗜好飲料'、酒精飲料、果實酒、利久酒等) 裝.袋裝食品（牛1蓋飯*ΓΓ 等裝.瓶 .^ (午内盍飯、什錦炒飯、紅豆糯米飯、咖喱、 抹食ί種：：食品)，半乾燥或濃縮食品(鵝肝醬、其他塗 、即二:麵湯、濃縮湯類），乾燥食品(速食麵類 ° 、速溶咖啡'粉末果汁、粉末湯頭、速食湯、 Ρ理食品、調理飲料、調理湯等)，冷凍食壽直 =、_、漢堡牛肉餅、燒麥、較子、各種麵二； =尾酒等），固形食品、液體食品（湯等），香辣調味料Ϊ 林產加工品、畜產加工品、水產加工品等。 ::明之食品或飲料，單獨或複數包含、添加以及/或稀 則述有效成分’只要其含有量相當於表達類胰島素作 :所必要量並不特別限制其形狀’可以包含藥片Α、顆粒 狀、膠囊狀等口服攝取可能形狀物。 从且，本發明之飲料，也可以為本發明之有效成分與繳形 化科以外植物，例如蔬菜、果實等搾汁液混合或同時摔汁 作爲健康飲料。例如，將明曰葉榨汁液用水稀釋，或與胡 87298 -18- 1294284 蘿蔔、油菜、蕪菁、青梗菜、西紅柿、橘子、檸檬、葡萄 柚、獼猴桃、菠菜、小蘿蔔、蘿萄、白菜、洋白菜、萵苣 、生菜、韭菜、秋葵'青椒、黃瓜、菜豆、毛豆、豌豆、 玉米、蒜、黃花南荠菜、枇把、酸燈、甘夏橘等梓汁液、 牛奶、豆奶等混合，作爲有類胰島素作用之健康飲料。 本發明之食品或飲料中前述有效成分之含有量並不特別 限定’可從其官能與活性表達觀點適當選擇，例如，食口 100重量％中可以為㈣謝重量％以上，更好為。』州二 重量％，再好為0._6〜6重量例如飲料1〇〇重量。中可 以為中0.00001重量％以上，更好為〇〇〇〇1〜1〇重量％，再好 為0.0006〜6重量％。且本發明之食品或飲料，例如人（例: 成人）每曰攝取其包含有效成分〇 〇〇1 mg〜1〇左右， 好為 0.1 mg〜1 g/kg。 且，如前所述，將有效成分以鍵劑形式作爲食品提供之 情形，有效成分之含有量為例如〇〇1〜1〇〇重量。Z。。 一 面，將榨汁液原液作爲飲料之情形，# ^ 么月之有效成分含 有量為例如0·01〜100重量％。 且，本發明提供包含、添加以及/ 4柿釋有别述有效成分 之有類胰島素作用之生物用飼料，Α本 寸丹f，另一方面，提供 一種以投與前述有效成分給生物為特 土切馮符徵之生物飼育方法。 且，作爲本發明飼料之另一方面， \ 1 巴含剐述有效成 分為特徵之生物飼育用劑。 為 在本發明中’生物指養殖動物、寵物動物等， 例如家畜、實驗動物、家禽、魚類、甲殼類、 養殖動物 或貝類等 87298 -19- 1294284 有維持以及/或改善身 ’例如有浸潰用劑、 體狀況用飼料等。作 飼料添加劑、飲料用 作爲飼料例如 爲生物飼育用劑 添加劑等。 明所對於適用之前述所舉例生物，根據本發 明之效成分之類騰島素作用，可以期待與本發 等療劑或預防劑有相同效果表達。即，前述飼料 防效果》"胰島素置或胰島素反應失常之疾病有治療或預 本發明所使用前述有效成分通常投與對象生物體重！ 4 天為0.01 2000 mg。投與方式有，例如將該有效成分 添加混合到供給對象生物之人工配合㈣原料之；盘人工 配合飼料粉末原料混合之後，再添加混合到其他原料中。 且，飼料中前述有效成分含有量並不特別限定，可以根據 目的適宜設定，大約為〇·〇〇1〜15重量％。 本發明飼料之製造方法並不特別限定，且配合也可以根 據-般飼料標準進行’只要製造之飼料中包含與本發明相 關有類胰島素作用之前述有效成分即可。 本發明可適用生物並不特別限定，作爲養殖動物馬、 牛、諸、綿羊、山羊、路乾、美洲乾等家畜，小鼠、大鼠 、旱類、兔子等實驗動物，雞、鴨、火雞、乾鳥等家禽， 狗、貓等寵物動物等，可以廣泛使用。 藉由使攝取包含有類姨島素作用之本發明所使用前述有 效成分之飼料，或將對象生物浸潰於包含有類騰島素作用 之本發明所使用前述有效成分含有液中，可以維持戍改蓋 87298 -20- 1294284 灵驗動物家禽、寵物動物等良好身體狀況。該當 例子，包含在本發明之飼育方法之中。 且，本發明還提供包含前述有效成分之細胞内葡萄糖吸 ^足進劑。該葡萄糖吸收促進劑，可以為前述有效成分， 為包含前述有效成分之組成物。該葡萄糖吸收促進 7 ’例如’可以和與前述有效成分有相同用途使用可能之 二他：分(例如膜島素)等配合使用，以上述治療劑或預防 之4方法為準製造成通常使用試藥形態。該葡萄糖吸 收促進劑所包含前述有效成分含有量，應該考慮該葡萄糖 吸收促進劑之投與方法'使用目的等’只要為能獲得本發 明所希望效果之量’並不特別限定。有效成分含有量可以 為Η如G.G1 _重$ ，該葡萄糖吸收促進劑使用量 ’只要為能獲得本發明所希望效果之量，並不特別限定。 =別二投與於生物體使用之情形，可以將可投於有效成分 篁規定在前述治療劑或預防劑之有效成分投與量範圍内使 用。該葡萄糖吸收促進劑’對治療或預防需要細胞内葡萄 糖吸收促進作用之疾病之治療或預防有用。該等疾病為’ 例如除上述伴隨騰島素量或騰島素反應失常之疾病外還有 ’心臟疾病’特別是心肌梗梗塞、虛血後心臟損傷等。且 該葡萄糖吸收促進劑，根據其促進細胞内葡萄糖吸收，使 該作用在肌肉細胞中發揮’可以誘發肌肉增強作用，疲勞 恢復作用。且，該葡萄糖吸收促進劑可以使 之治療或預防用食品、飲料或飼料之製造[該等2病 飲料或飼料’可以根據前述伴隨騰島素量或胰島素反應失 87298 -21- 1294284 常=病用或治療用食品，飲料或飼料之標準使用。且， “葡萄糖吸收促進劑對篩選上述治療或預防需要細胞内葡 萄糖吸收促進作用之疾病用藥物有用。再者，肖葡萄糖吸 收促進劑’對細胞葡萄糖吸收作用機理研究或細胞物理變 化等機能研究有用。 且’本發明還提供包含前述有效成分之分化為脂肪細胞 之分化誘導劑。該分化誘導劑可以分化誘導至脂肪細胞之 前驅細胞，只要可以分化為脂肪細胞並不特別限定。例如 ’除前驅脂肪細胞外’還有纖維芽細胞、間葉系幹細胞等 、。該分化誘導劑，心為前述有效成分，也可以為包含前 述有效成分之組成物。該分化誘導劑，例如彳以和與該 有效成分有相同用it使用可能之其他成分（例如月夷島素等） 配合，以上述治療劑或預防劑之製造方法為準，製造成通 常使用試藥形態。該分化誘導劑所含前述有效成分含有量 ，應考慮該分化誘導劑投與方法、使用目的等，只要為可 以得到本發明所希望效果之量，並不特別限定1效成分 之^有量’大約為0.(H〜⑽重量％。且，該分化誘導劑使 用量’只要為可以得到本發明所希望效果之量並不特別 限定。特別’投與生物體使用之情形，有效成分投與量應 該在前述治療劑或預防劑之有效成分投與量範圍之内使用 。該分化誘導劑，對治療或預防需要脂肪細胞分化誘導作 用之疾病之治療或預防有用。該等疾病，例如，除上述伴 隨胰島素量或胰島素反應失常之疾病外，還 肪肝、膽石症、月經異常、不孕症等。且該分化誘；齊/，曰 87298 •22- 1294284 還可以使用在製造該當疾病之治療或預防用食品、飲料或 飼料。該等食品、飲料或飼料可以根據前述伴隨胰島素量 或胰島素反應失常之疾病之治療用或預防用食品、飲料或 飼料為準使用。且，該分化誘導劑，對篩選治療或預防需 要上述脂肪細胞分化誘導作用之疾病用藥物有用。再者， 該分化誘導劑，對分化為脂肪細胞之分化誘導作用機理研 究或其物理變化等機能研究有用。 本發明所使用前述有效成分，投與其作用發揮有效量也 無毒性檢驗出。例如，經口投與之情形，將明日葉、芹菜 或荷蘭芹乙醇萃取物各1 g/kg—回投與至小鼠，也無死亡例 出現。且，將前述有效成分，經口投與至大鼠i g/kg經口單 回投與也無死亡例出現。 貫施例 下面以實施例進一步具體説明本發明，本發明並不局限 於該等記載。且，實施例中％若無特別説明均意味容量0/0。 實施例1調製明日葉根萃取部分 (1) 於10 g明曰葉（Angelica Keiskei)根部冷凍乾燥後粉 碎物中加入100 mL氯仿，在室溫萃取30分鐘。吸引過濾後 ’對其殘渣進行相同操作。合併該等氣仿萃取液，以旋轉 蒸餘器減壓濃縮後，將乾燥物溶解於2 · 5 mL二甲基亞中， 調製明日葉根氣仿萃取部分。 (2) 加入100 mL乙醇於實施例1-(1)之氣仿萃取後殘渣中 ’在室溫萃取3 0分鐘。吸引過渡後，對其殘潰進行相同操 作。合併該等乙醇萃取液，以旋轉蒸餾器減壓濃縮後，將 87298 •23- 1294284 乾燥物溶解於2.5 mL二甲基亞中，調製明日葉根乙醇萃取 部分。 實施例2分晝明日葉根萃取部分 於5.8 kg明曰葉根部乾燥粉末中加入24升乙酸乙酯，在室 溫提煉3個小時，吸引過濾後，分別為乙酸乙酯萃取液與殘 渣。將所獲得乙酸乙酯萃取液200 mL以旋轉蒸鶴器減壓濃 縮後，溶解於氯仿，並用矽膠層析分畫。下面表示其條件 。石夕膠用BW-300SP(富士 Silysia化學社製：l〇〇mL)。以氣 仿（5 00 mL)，氯仿：曱醇（體積比，以下相同）=100:1 (3〇〇 mL) ，乙酸乙酯（200 mL)順序進行溶出。溶出液以分畫1 (28〇 mL) ’分畫 2 (200 mL)，分晝 3 (280 mL)，分畫 4 (240 mL)之順 序分晝’回收，並分別減壓濃縮、乾燥後，溶解於2 mL乙 醇中，得到矽膠層析分部分餾液1〜4。 實施例3藉由明日葉根萃取物分化誘導為脂肪細胞 (1)分化誘導為脂肪細胞 分化誘導為脂肪細胞，部分改變前述Rubin C · S ·等之方 法進行。於包含200 μΜ抗壞血酸酸，含有1 〇%小牛金清 (Gibco 社製）A-D-MEM 培養基（DulbecC〇，S Modified Eagle,s Medium)(Sigma社製，D6046)(下面簡稱為A-D-MEM培養基） 中懸濁前驅脂肪細胞株3T3-L1 (ATCC CCL-92.1)為4 x 103 個/mL，加樣於12穴微量滴定盤加樣孔中各2 mL，於5%二 氧化碳存在下，37°C培養7日。並，第2、4日用同培養基交 換培養基。第7日，交換於含0·25 μΜ地塞米松a_d — M]EM培 養基後，並添加終濃度為0.1%實施例1-(1)中所調製明曰葉 87298 -24- 1294284 ，乳仿萃取部分或實施例卜⑺中所調製明日葉根乙醇萃取 部分。且，設定添加4 μ1之5 mg/mL胰島素（加心㈣社製） 水溶液區分為陽性對照，添加水區分為陰性對照。添加各 成分後在45小時時點交換A_D_MEM培養基，各加樣孔中各 添加4 μΐ明日葉根氯仿萃取部分或明日葉根乙醇萃取部分 ，陽性對照添加2μ1之5mg/mL胰島素水溶液，陰 加水、，再培養7日。並，第W日交換培養基，並在各: 孔中添加4 μΐ明日葉根氣仿卒取部分或明日葉根乙醇萃取 部分，陽性對照添加2 μΐ之5 mg/mL胰島素水溶液，陰性對 照添加水。 (2)測定三酸甘油脂生合成量 作爲分化為成熟脂肪細胞之分化誘導指標和類胰島素作 用之評價，測定細胞中三酸甘油脂生合成量。培養結束後 ，除去培養基，於磷酸緩衝液中洗2回細胞，添加丨m]L己烷 :異丙醇= 3:2溶劑在室溫放置30分鐘後回收上清。此操作 反復再做一次，將所得2 mL·上清濃縮乾燥。將沉澱溶解於 1〇〇 μΐ異丙醇後，用三酸甘油脂G測試（和光純藥社製，c〇de 276 69 8 01)測定1 〇 μΐ溶液中所含三酸甘油脂量。測定兩次。 其結果，與添加水區分相比較，明日葉根氣仿萃取部分 或明日葉根乙醇萃取部分添加區分得到與添加胰島素區分 相同之三酸甘油脂生合成誘導。即，證明了明日葉根氣仿 萃取部分與明日葉根乙醇萃取部分有分化為脂肪細胞之分 化誘導作用。將之表示於圖1。圖1之橫軸表示各樣品，縱 軸表示三酸甘油脂生合成量bg/mL1)。 87298 -25- 1294284 實施例4 細胞 藉由明曰葉根萃 取物分部㈣m誘導為脂肪 實：：2、所調製明曰葉根萃取部分各分館液之分化為脂 之》化誘導活性以實施例3所記载方法為準測定。作 爲樣品，各添加4 w之2 87s / ^lns„ ^之2·87 WmL石夕膠層析分部分餾液3 或82—夕朦層析分部分館液4。且，設定添加4μ1 之5mg/mL騰島素水溶液為陽性對照，添加水為陰性對昭。 其後，與實施例3所記載方法相同，進行培養基與樣品交換 ，於添加樣品7日後測定細胞中三酸甘油脂量。 其結果’與添加水區分相比較，矽膠層析分部分餾液3 與石夕膠層析分部分館液4添加區分得到與添加騰島素區分 相同之三酸甘油脂生成料。，證明了石夕膠層析分部分 餾液3與矽膠層析分部分餾液4之分化為脂肪細胞之分化誘 導作用。將之表示於圖2。圖2之橫軸表示各樣品，縱轴表 示三酸甘油脂生合成量bg/mL)。 實施例5明曰葉根部萃取部分之葡萄糖吸收促進作用 (1 )調製成熟脂肪細胞 分化為成熟脂肪細胞之分化誘導，將前述尺心化c· s等 方法部分改變，進行。於包含200 μΜ抗壞血酸，含有1〇〇/〇

小牛血清（Gibco社製）A-D-MEM培養基(Sigma社製，D6046) 中懸濁3T3-L1 細胞（ATCC CCL-92.1)為 4 X 103 個/mL，加樣 於12穴微量滴定盤加樣孔中各2 mL，於5%二氧化碳存在下 ，37°C培養7日。第7日，交換於含200 μΜ抗壞血酸，0.25 μΜ 地塞米松以及10 pg/mL胰島素（TaKaRa Bio社製），0.5 mM 87298 -26- 1294284 3-丙丁基 _1-曱基黃嘌呤（Nacalai tesque 社製，i9624_44)， 10%小牛血清（Gibco社製）之a_D_MEM培養基2 mL。45小時 後交換於含有200 μΜ抗壞血酸以及5 pg/mL胰島素，10%小 牛血清之A-D-MEM培養基2 mL，再培養2日後，4日後交換 相同培養基，藉由培養7日調製出成熟脂肪細胞。 (2)測定對成熟脂肪細胞之葡萄糖吸收促進作用 作爲葡萄糖吸收促進作用之評價和類胰島素作用之評價 ，測定以樣品刺激時成熟脂肪細胞之細胞内2 ·脫氧-葡萄糖 吸收量。 培養結束後，除去培養基，用含〇·! w/v%牛型血清白蛋 白（Sigma社製，A8022) A-D-MEM培養基洗2次細胞後，在 各加樣孔各添加1 mL含終濃度為0.025%，0.008%明日葉根 亂仿萃取部分二甲基亞溶液或明日葉根乙醇萃取部分二甲 基亞溶液畫之相同培養基，於5❶/。二氧化碳存在下，3 7。〇培 養1晚。且’設定不添加樣品區分為陰性對照。培養1晚後 ，以 HEPES緩衝液（140 inM NaC 卜 5mM KCM，2.5 mM MgS04 ，1 mM CaCl2，20 mM HEPES-Na (pH 7.4))洗 2次細胞，在 各加樣孔中各添加0·9 mL含終濃度為〇·〇25%，〇.〇〇8。/〇明曰 葉根氣仿萃取部分二甲基亞溶液或明日葉根乙醇萃取部分 二甲基亞溶液之同緩衝液，於37°C培養75分鐘。設定其陽 性對照為，經過45分鐘時點在不添加樣品之加樣孔中添加 終濃度為1 gg/mL胰島素。其後，添加100 μι含〇·5 μ(：ί/ιη]： 2_ 脫氧-[1，2-3H(N)] -葡萄糖（perkinElmer Life Sciences社製， NET549A)，ImM 2-脫氧葡萄糖（Nacalai tesque 社製， 87298 -27· 1294284 10722-11)之HEPES緩衝液，進一步在37°C培養10分鐘。培 養結束後，除去上清，於4°C冷卻之磷酸緩衝液洗3次細胞 ，添加含1%乙基苯基聚乙二醇P-40磷酸緩衝液0.5 mL以溶 解細胞，溶出細胞中所吸收之2-脫氧-[1，2」H(N)]_葡萄糖。 用其上清 25 μΐ，以 Aquasol-2 (PerkinElmer Life Sciences社 製，6NE9529)為閃爍體用液體閃爍計數器LS6500 (Beckman 社製）測定放射活性。 其結果，添加各濃度明日葉根氣仿萃取部分與明日葉根 乙醇萃取部分區分與陰性對照相比較，得到與添加胰島素 區分相同2-脫氧-[1，2-3H(N)]_葡萄糖吸收之促進作用。即 證明明日葉根氣仿萃取部分與明日葉根乙醇萃取部分有葡 萄耱吸收之促¥活性。將之表示為圖3。圖3之橫軸表示各 樣品，縱轴表示2_脫氧-[1，2_3H(N)]_葡萄糖量（dpm)。 實施例6調製明日葉葉子萃取部分 於每2 g明日葉葉子粉末中添加4〇 mL蒸餾水，乙醇或乙 酸乙酯萃取30分鐘，離心分離分爲萃取液與殘渣。之後對 其殘渣用30 mL各溶劑反復萃取操作2回。且，水萃取在6〇 C，乙醇萃取與乙酸乙酯萃取在室溫進行。收集所得萃取 液以旋轉蒸餾器濃縮。最終，將水萃取液溶解於i〇mL蒸餾 水中’得到明曰葉葉子水萃取部分。乙醇萃取液溶解於8 — 二甲基亞中，得到明曰葉葉子乙醇萃取部分。 取液溶解於5 mL二甲基亞中，得到明日葉葉子 取部分。 乙酸乙酯萃 乙酸乙酯萃 誘導為脂肪細胞 實施例7藉由明日葉葉子萃取部分分化 87298 -28- 1294284 實2例6中所調製明日葉葉子水萃取部分與明日葉葉子 乙醇萃取部分之分化為成熟脂肪細胞之分化誘導作 胰島素活性），以實施例3之方法為準測定。 、 即，作爲樣品，各加樣孔中添加終濃度為〇·4%，n 〇·1/。明日葉葉子水萃取部分水溶液或添加終濃度為〇 GW% 丄0.022%明日葉葉子乙醇萃取部分二甲基亞溶液。且，設 定添加4 5 mg/mL胰島素⑽心Bi〇社製）水溶液為: 性對照’添加二甲基亞區分為陰性對照。其後，與實施例3 所記載方法㈣’進行培養基與樣品交換，於添加樣品7 曰後測定細胞中三酸甘油脂量。 其結果，添加各濃度明日葉葉子水萃取部分與明日葉葉 子乙醇萃取部分’均誘導三酸甘油脂之生合成。即，明日 葉葉子水萃取物與明日葉葉子乙醇萃取部分均有分化為成 熟脂肪細胞之分化誘導作用。將之表示為圖4。圖4之橫轴 表示各樣品，縱轴表示三酸甘油脂生合成量wg/mL)。 實施例8調製芹菜葉子萃取物 於每2 g芹菜葉子乾燥粉末中添加4〇 mL蒸餾水，乙醇或 乙酸乙酯，萃取30分鐘，離心分離分爲萃取液與殘渣。之 後對其殘渣用30 mL各溶劑反復萃取操作2回。且，水萃取 在60°C，乙醇萃取與乙酸乙酯萃取在室溫進行。收集所得 萃取液以旋轉蒸餾器濃縮。最終，將水萃取液溶解於i〇mL 蒸餾水中，得到芹菜葉子水萃取部分。乙醇萃取液溶解於5 mL —甲基亞中，得到芹菜葉子乙醇萃取部分。乙酸乙酯萃 取物溶解於5 mL二甲基亞中，得到芽菜葉子乙酸乙酯萃取 87298 -29- 1294284 部分。 κ把例9肖由芽菜葉萃取部分之分化誘導脂肪細胞 實施例8中所調製芹菜葉子 部分與芽菜葉葉子乙酸_取:二 &夕八„ 4 % 卞取邛刀之分化為成熟脂肪細 二刀’V作用(類胰島素活性)，以實施例3之方法為準 子品’各加樣孔中添力^終濃度為g.i%芽菜葉 1 ^分，終濃度為〇.2%，0.066%，-0.022%芹菜葉子 ^酵卒取部分二甲基亞溶液或序菜葉子乙酸乙酯萃取部分 7甲it溶液。且’設定添加4 W之5叫就胰島素（TaKaRa M水溶液為陽性對照，添加二甲基亞區分為陰性對 照=後’與實施例3所記龄法㈣，進行培養基與樣品 之父換’於添加樣品7日後測定細胞中三酸甘油脂量。 ^、、°果添加各濃度芹菜葉子水萃取部分，芹菜葉子乙 醇萃取部分與芽菜葉子乙酸乙料取部分，均誘h酸甘 :由脂之生合成。即，芽菜葉子水萃取部分，菜葉葉子乙醇 卒取部分與芽菜葉子乙酸乙醋萃取部分均有分化為成孰脂 肪細胞之分化誘導㈣。將之表示為圖5。圖5之橫軸表示 :樣品，縱軸表示三酸甘油脂生合成量㈣就)。 實細例1 0序菜葉子萃取部分促進葡萄糖吸收作用 作爲實施例8所調製芽菜葉子乙醇萃取部分與芽菜葉子 乙酸乙醋萃取部分之葡萄糖吸收促進作用之評價以及類胰 島素作用之評價’以實施例5所記載方法為準測定以樣品刺 激時成熟脂肪細胞時細胞内2脫氧葡萄糖吸收量。 87298 -30- 1294284 即’作爲樣品，各加樣孔中各添加含終濃度為〇.2〇/〇 , 〇·〇66/〇芹菜葉子乙醇萃取部分二甲基亞溶液或芹菜葉子乙 吹^ S曰萃取部分二甲基亞溶液。且，設定不添加樣品區分 為陰14對照，添加終濃度至1 gg/mL胰島素為陽性對照。其 後，於上述相同，測定細胞中所吸收2-脫氧-[l，2-3H(N)]_ 匍萄糖量。 八、、°果’添加各漢度芹菜葉子乙醇萃取部分與芹菜葉子 乙酉文乙S曰萃取部分區分與陰性對照相比較，得到與添加胰 島素區分相同2_脫氧-Π，2_3Η(Ν)]·葡萄糖吸收之促進作用 。即，證明芹菜葉子乙醇萃取部分與芹菜葉子乙酸乙酯萃 取部分均有葡萄糖吸收之促進活性。將之表示為圖6。圖6 之橫轴表示各樣品，縱軸表示2-脫氧-[1，2-3Η(Ν)]_葡萄糖量 (dpm) 〇 實施例11調製荷蘭芹萃取部分 ;母g荷蘭芹乾燥粉末中添加40 mL·蒸館水，乙醇或乙 酸乙醋’萃取30分鐘，離心分離分爲萃取液與殘潰。之後 對其殘渣用30 mL各溶劑反復萃取操作2回。i，水萃取在 60 C，乙醇萃取與乙酸乙s旨萃取在室溫進行。A集所得萃 取液以旋轉瘵餾器濃縮。最終，將水萃取液溶解於W mL …、館巾得到荷蘭芽水萃取部分。乙醇萃取液溶解於$ mL -甲基亞+ #到荷蘭芽乙醇萃取部分。乙酸乙_萃取部 分溶解於5 mL二甲基亞中，得到荷蘭芽乙酸乙醋#取部分。 實施例12藉由荷蘭序萃取部分分化誘導為脂肪細胞 將實施例11中所調製荷蘭芽水萃取部分之分化為成熟脂 87298 -31 - 1294284 以實施例3之方法 肪細胞之分化誘導作用（類胰島素所用）， 為準測定。 即，作爲樣品，各加樣孔中各添加終濃度為〇屬，〇.2% ，〇.1%荷蘭芽水萃取部分水溶液。且，設定添加4 μ1之5 mg/mL胰島素（TaKaRa Bi〇社製）水溶液為陽性對照添加二 甲基亞區分為陰性對照。其後，與實施例3所記載方法相同 ，進行培養基與樣品之交換，於添加樣品7日後測定細胞中 二酸甘油脂量。 其結果，添加各濃度荷蘭芽水萃取部分，均誘導三酸甘 油脂合成。即’荷蘭；f水萃取部分有分化為成熟脂肪細胞 之分化誘導作用。將之表示為圖7β圖7之橫Μ示各樣品 ，縱轴表示三酸甘油脂生合成量（μ§/ιηΙ^。 實施例13荷蘭芹萃取部分促進葡萄糖吸收作用 作爲實施例u所調製荷蘭芽乙醇萃取部分與荷蘭芽乙酸 乙醋萃取液之㈣糖吸收促進作用之評價和類騰島素作用 之評價，以實施例5所記載方法為準測定以樣品刺激時成熟 脂肪細胞之細胞内2-脫氧葡萄糖吸收量。 … 即，作爲樣品，各加樣孔各添加終濃度為〇.2%，〇.〇66% 荷蘭芽乙醇萃取部分二甲基亞溶液或荷蘭芽乙酸乙酿萃取° 部分二甲基亞溶液。且，設定不添加樣品區分為陰性對照 ，添加終濃度至1 pg/mL胰島素為陽性對照。其後，於上述 相同，測定細胞中所吸收2-脫氧-[ι，2-3Η(Ν)μ葡萄糖量。 其結果，添加各濃度荷蘭芹乙醇萃取部分和y托甘 v々何闌斤乙酸 乙醋萃取部分與陰性對照相比較’得到與添加騰島素區分 87298 -32- 1294284 相同2_脫氧-[^^(Ν)]-葡萄糖吸收之促進作用。即，證明 何蘭序乙醇萃取部分和荷蘭芹乙酸乙酯萃取部分均有葡萄 糖吸收之促進活性。將之表示為圖8。圖8之橫軸表示各樣 品’縱轴表示2-脫氧·Π，2」Η(Ν)]_葡萄糖（dpm)。 貫施例14調製明日葉根乙醇萃取部分與乙酸乙酯萃取部 分 於每2 g明日葉根乾燥粉末中添加4〇 乙醇或乙酸乙酯 在至溫萃取30分鐘，離心分離分爲萃取液和殘渣。之後對 八殘渣用30 mL各溶劑反復萃取操作2回。收集所得萃取液 以旋轉蒸館H濃縮。最終，乙料取液溶解於丨社二甲基 亞中，传到明日葉根乙醇萃取部分。乙酸乙醋萃取部分溶 =於1 mL二甲基亞中，得到明曰葉根乙酸乙酯萃取部分。 實^例1 5藉由明日葉根乙醇萃取部分與乙酸乙酯萃取部 分分化誘導為脂肪細胞 貫^例14中所調製明日葉根乙醇萃取部分與明日葉根乙 -曰萃取刀之分化為成熟脂肪細胞之分化誘導作用 (類胰島素所用），以實施例3之方法為準測.定。 Ρ作爲樣口口各加樣孔巾各添加終濃度為〇 〇 〇25% :曰葉根乙醇卒取部分二甲基亞溶液或明曰葉根乙酸乙酯 萃取部分二甲基亞溶n設定添加4敵—就騰島 素（TaKaRa Bi0社幻水溶液為陽性對照，添加二μ亞區 分為陰性對照°其後’與實施例3所記載方法相同，進行培 養基與樣品之交換，於添加樣品7曰後測定 脂量。 87298 -33- 1294284 其結果，添加各濃度明日葉根乙醇萃取部分與明日葉根 乙酸乙醋萃取部分，均誘導三酸乾油脂合成。即，明日葉 根乙醇萃取部分與明日葉根乙酸乙酉旨萃取部分有分化為成 熟脂肪細胞之分化誘導作用。將之表示為圖9。圖9之㈣ :示各樣品，縱軸表示三酸甘油脂生合成量(一)。 實施例16明日葉根乙醇萃取部分與明日葉根乙酸乙醋萃 取部分促進葡萄糖吸收作用 作爲實施例14所調製明日葉根乙醇萃取部分舆明日葉根 乙酸乙目旨萃取部分之㈣糖吸收促進作狀評價和類騰島乂 素作用之評價，以實施例5所記載方法為準測定以樣品刺激 時成熟脂肪細胞之細胞内2_脫氧葡萄糖吸收量。 即，作爲樣品，各加樣孔各添加終濃度為〇 1%，〇〇5% ，日葉根乙醇萃取部分二甲基亞溶液或明日葉根乙酸乙醋 萃取。Ρ刀一甲基亞溶液。且，設定不添加樣品區分為陰性 對照，添加終濃度至i Kg/mL胰島素為陽性對照。其後，於 上同，測定細胞中所吸收2_脫氧_π，2_3η(ν)]_葡萄糖量。 =結果，添加各濃度明日葉根乙醇萃取部分和明日葉根 旨萃取部分’與陰性對照相比較，得到與添加胰島 分相同2-脫氧-[uJHiN)]-葡萄糖吸收之促進作用。即 二證明明日葉根乙醇萃取部分和明日葉根乙酸乙酯萃取部 二均有葡萄糖吸收之促進活性。將之表示為圖1〇。圖⑺之 ^轴表不各樣品，縱轴表示2·脫氧葡萄糖（dpm)。 明日葉葉子萃取部分之葡萄糖吸收促進作用 爲貫知例6中所調製明日葉葉子乙醇萃取部分與明日 87298 -34- 1294284 葉葉子乙酸乙酯萃取部分之葡萄糖吸收促進作用之評價和 類胰島素作用之評價，以實施例5所記載方法為準測定以樣 刺激時成熟脂肪細胞之細胞内2_脫氧葡萄糖吸收量。 即’作爲樣品’各加樣孔各添加終濃度為〇·2%，〇·丨％明 日葉葉子乙醇萃取部分二曱基亞溶液或明日葉葉子乙酸乙 酉旨萃取部分：甲基亞溶^。1，設定不添加樣品區分為陰 性對照，添加終濃度至丨gg/mL胰島素為陽性對照。其後， 於上述相同，測定細胞中所吸收2_脫氧-[1，2-3H(N)]_葡萄糖 量。 *其結果，添加各濃度明日葉葉子乙醇萃取部分和明曰葉 葉子乙酸乙酯萃取部分與陰性對照相比較，.得到與添加胰 島素區刀相同2-脫氧_[ι，2_3h(N)] -葡萄糖吸收之促進作用 一即也明明日葉葉子乙醇萃取部分和明日葉葉乙酸乙酯 萃取部分均有㈣糖吸收之促進活性。將之表示為圖1卜 圖11之扶軸表示各樣品，縱軸表示2_脫氧-葡萄 糖量（dpm)。 實％例1 8明日葉根萃取物分部分餾液之葡萄糖吸收促進 作用 」乍爲實施例2中所調製明日葉根萃取部分各分餾液之葡 萄糖吸收促進作用之評價和類胰島素作用之評價，以實施 例5所σ己載方法為準測定以樣品刺激時成熟脂肪細胞之細 胞内2-脫氧葡萄糖吸收量。 、 ?乍爲樣°°，各加樣孔各添加終濃度為0.03 mg/mL·矽 膠層析'刀部分餘液1 ’終濃度為G.G13 mg/mL石夕膠層析分部 87298 -35- 1294284

分館液2，《欠、、曲rfe 4 D 〜/辰度為0.0077 mg/mL石夕膠層析分部分儲液3， 或、、’辰度為0.0096 mg/mL矽膠層析分部分餾液4。且，設定 "樣區分為陰性對照，添力σ終濃度至148/1111^胰島素 為陽丨生對照。其後’於上述相同，測定細胞中所吸收2-脫 氧_[1，2-311(]^)]·葡萄糖量。 /、果’添加明日葉根各萃取部分各分餾液區分與陰性 對照相比較’得到與添加胰島素區分相同2_脫氧 Π’2_ Η(Ν)]-葡萄糖吸收之促進作用。即，證明明曰葉根萃 取卩刀石夕移層析分部分德液丨，2,3,4均有葡萄糖吸收之促進 活丨生。將之表不為圖12。圖12之橫軸表示各樣品，縱軸表 示 2_脫氧-[ι，2_3Η(Ν)]1 萄糖量（dpm)。 實施例19細胞鬆弛素b對明曰葉根乙醇萃取部分之葡萄 糖吸收促進作用之妨礙作用 為驗證實施例16中所表示明日葉根乙醇萃取部分之葡萄 糖吸收促進作用被葡萄糖運輸蛋白阻礙劑細胞鬆弛素3所 阻礙，以實施例5所記載方法為準測定以樣品刺激時細胞鬆 弛素B對成熟脂肪細胞之細胞内2_脫氧葡萄糖吸收量之影 響。 。 即，作爲樣品，添加終濃度為〇·1%明日葉根乙醇萃取部 分二曱基亞溶液。且，設定不添加樣品區分為陰性對照， 添加終濃度至1 >g/mL胰島素為陽性對照。進一步，對各區 分，與設定添加胰島素相同時間裏設定添加終濃度為4〇 μΜ 細胞黎弛素6(仙〇&1&〖1639\^社製，1〇43 5-81)區分。其後， 於上述粗同，測定細胞中所吸收2-脫氧葡萄糖 87298 -36- 1294284 量。 其結果.，即便添加明日葉根乙醇萃取部分盥陰性對昭相 比較，得到與添加膜島素區分相同2_脫氧_π 糖吸收之促進作肖，而各區分2-脫氧-n，2JH(N)]1萄糖吸 收被添加細胞鬆弛素B所抑制。即，證明明日葉根乙醇萃取 部分之葡萄糖吸收促進活性，與胰島素同樣，#由葡萄糖 運輸蛋白進行。將之表示為圖13。圖13之橫軸表示各樣品 ，縱軸表示2-脫氧-[1，2-3H(N)]_葡萄糖量（dpm)。 實施例20明曰葉根部乙醇萃取部分與胰島素葡萄糖吸 收促進作用之相乘效果 為評價實施例14中所調製明日葉根乙醇萃取部分與低濃 度胰島素葡萄糖吸收促進作之相乘效果，以實施例5所記載 方法為部分標準測定以樣品刺激時成熟脂肪細胞之細胞内 2-脫氧葡萄糖吸收量。 調製成熟la肪細胞以實施例5 - (1)所記載方法進行。 培養結束後’除去培養基，用包含〇1 % (w/v)牛型血清白 蛋白（Sigma社製A8〇22) A-D-MEM培養基洗2次細胞，添加1 mL包含終濃度為〇_〇2%明日葉根乙醇萃取部分二甲基亞溶 液之相同培養基，在5%二氧化碳存在下，37°c培養一個晚 上。且’设定不添加明日葉根乙醇萃取部分區分為陰性對 照。培養一晚後’以HEPES緩衝液（140 mM NaCM，5 mM KC1 ’ 2·5 mM MgS04，1 mM CaCl2，20 mM HEPES-Na (pH 7.4)) 洗2次細胞’添加〇·9 mL含終濃度為〇·〇2%明日葉根部乙醇 萃取部分之同緩衝液，於37°C培養45分鐘。其後，添加終 87298 -37- 1294284 濃度為 0.001 έ ι 昭，在不wgL騰島素，再培養30分鐘。其間，作為對 乂 在不添加明日螢栖r F馬對 产A 0 00 1 ' ，卒取部分之加樣孔中加入钦$ 度為0.001 Hg/mL胰島素區分。且 < 、”辰 昭。呈後，於音> "又 4、口樣〇口爲陰性對 於貫施例5_(2)所記載方法相同，測定心/ 吸收2-脫氧-Η(Ν)]_葡萄糖量。 ^田胞中所 其結果，添加明日螢姮 月曰葉根乙醇卒取部分區分與陰性對 比車父’付到與添加胰島音 …、相 糖吸收之促進作用。而， ）]葡苟 Ν ^添加胰島素區分比單獨禾士 胰島素區分與單獨添加明日 街 早獨添加 茶根乙醇卒取部分區分，右 進葡萄即’同時添加明日葉根乙料取部分 島素’可相乘增加葡萄糖吸收促進作用。將之表示為_ 。圖Η之検軸表示各樣品’縱軸表示2_脫氧， 葡萄糖量（dpm)。 實知例21胰島素刺激被明日葉根部乙醇萃取部分分化誘 導之脂肪細胞促進葡萄糖吸收 得到實施例U所調製明日葉根乙醇萃取部分分化誘之脂 肪細胞後，認證可否在胰島素刺激下促進該細胞㈣糖吸 收0 即，作爲樣品，設定添加終濃度為〇 〇5%明日葉根乙醇萃 取部分一甲基亞溶液區分。且，設定添加4 μΐ之5 mg/mL姨 島素（TaKaRa Bi〇社製）為陽性對照。其後，除與添加地塞 米松同時間添加終濃度為〇 · 5 mM 3 -丙丁基-1-甲基黃嘌呤 外，按照實施例3之方法為準進行培養基和樣品之交換，得 到明日葉根乙醇萃取部分或胰島素所分化誘導之成熟脂肪 87298 • 38 - 1294284 細胞。 其後，以實施例5所記載之方法為準，測定所得成熟脂肪 細胞中胰島素刺激下細胞内2-脫氧葡萄糖吸收量。 即，對各個成熟脂肪細胞，設定不添加胰島素區分或添 加終濃度為1 pg/mL胰島素區分。然後，同樣測定細胞内所 吸收2-脫氧-葡萄糖量。 其結果，於明日葉根乙醇萃取部分所分化誘導之成熟脂 肪、”田胞，與胰島素所分化誘導之成熟脂肪細胞一樣，在胰 島素刺激下，均促進2_脫氧吖葡萄糖吸收。即， 證明由明日葉根乙醇萃取部分分化誘導之成熟脂肪細胞， 有胰島素刺激葡萄糖吸收之促進。將之表示為圖15。圖15 之k轴表不各樣品，縱軸表示2_脫氧葡萄糖量 (dpm) 〇 實施例22調製明日葉莖葉萃取部分 於g月日葉莖葉乾燥粉末中添加40 mL乙醇，在室溫萃 取刀名里離〜为離分爲萃取液和殘渣。之後對其殘渣以 3 0 mL同*劑反復萃取操作2回。收集所得萃取液以旋轉蒸 館器濃縮。最終，溶組私， ，合解於1 mL二甲基亞中，得到明日葉莖 葉乙醇萃取部分。 & 實施例2 3藉由明日葦贫笹贫 门《茶里葉卒取部分分化誘導為脂肪細胞 貫施例22中所調製明a签— ^ 氣月日葉災葉乙醇萃取部分之分化為成 熟月日肪細胞之分化讀道AL. r〇 / . 為導作用（類胰島素所用），以實施例3之 方法為準測定。 即’作爲樣品，各力媒^丨士 刀樣孔中添加終濃度為0.2%，0.066% 87298 -39· 1294284 二.022%明日葉莖葉乙醇萃取部分二曱基亞溶液。且，設 疋％加4 μΐ之5 mg/mL胰島素（抓山則。社 «照，添加二甲基亞區分為陰性對照。其後，與實 斤/己載方去相同，進行培養基與樣品之交換，於添加樣品7 日後測定細胞中三酸甘油脂量。 其結果，添加各濃度明曰葉莖葉乙醇萃取部分，均誘導 三酸甘油脂合成明曰葉莖葉乙醇萃取部分有分化為 士熟脂肪細胞之分化誘導作用。將之表示為圖16。圖16之 橫軸表示各樣品，縱軸表示三酸甘油脂生合成量叫。 實施例24調製明日葉根乙醇萃取部分 於200 g明日葉根乾燥粉末中添加i升：醇，在室溫萃取 3〇分鐘’吸引過濾、後分爲乙料取液與殘之後對其殘 渣以1升同溶劑反復萃取操作。收集所得乙醇萃取液以 旋轉蒸館器濃縮》所得濃縮物溶解於⑽机撤稅油，調製 明曰葉根乙醇萃取部分。 貫W例2 5調製明日葉黃色汁液衍生之試料 切斷明日葉莖部，從切斷面採取黃色汁液。將所得黃色 汁液過濾，.冷凍乾燥，得到2g乾燥粉末。添加撖欖油至i〇 mL ，調製明日葉黃色汁液衍生之試料。 實施例26明日葉衍生之處理物之糖尿病改善效果 用II型糖尿病模型小鼠研究實施例24所得明日葉根部乙 醇萃取部分以及實施例25所得明日葉黃色汁液衍生之試料 之病態改善效果。將雌性丨丨週齡KK_Ay小鼠（日本ciea社製） 每群5只，進行實驗。-日i回強制經口投與5mL/kg懸濁溶 87298 -40- 1294284 解於撖禮油之各樣品.對照群同樣投與5 mL/kg撖欖油。投 與開始前日和7曰後從小鼠尾靜脈採血，用簡易血糖特定^ 統 ACCU-CHEK Compact (Roche Diagn〇stics株式會社）測定 血糖值。投與明日葉根部乙醇萃取部分與明日葉黃色汁= 衍生之試料均明顯下降血糖值。且，實驗期間，並無體= 以及其他一般症狀之變化。 產業上之利用可能性 由本發明’提供包含繳形花科植物衍生之處理物為有效 成分’伴隨騰島素量或姨島素反應失常之疾病之治療用， 預防用醫藥、食品、飲料或飼料。該醫藥作爲對糖尿病或 肥滿症等伴心胰島素量或胰島素反應失常之疾病之治療劑 或預、防劑有用。且’該食品或飲料，可作爲曰常飲食品攝 =，使改善伴隨胰島素量或姨島素反應失常之疾病症狀成 爲可能。所以，包含繳形花科植物衍生之處理物之機能性 飲食品藉由其類姨島素作用’為可維持生命體恒常性之有 用機能性飲食品。且，本發明還提供包含繳形花科植物衍 士之處理物之類姨島素作用劑，該類騰島素作用劑對姨島鲁 ,、機月b研Λ $選與胰島素相關疾病用醫藥有價值。且， ^發明還提供包含繳形花科植物衍生之處理物之細胞内葡 糖吸收促進劑，該葡萄糖吸收促進劑對治療或預防需要 H葡萄糖吸收促進作用之疾病之治療或預防，該疾病 之’。療或預防用食品、飲料或詞料之製造，筛選需要葡萄 糖及收促進作用之相關疾病之藥物有價值。且本發明還 提供包含缴形花科植物衍生之處理物之脂肪細胞分化誘導 87298 I294284 劑，該分化誘導劑對治療或預防需要脂肪細胞分化作用之 疾病之治療或預防，該疾病治療或預防用食品、飲料或飼 料之製造，篩選需要該分化誘導作用之相關疾病之藥物有 價值。 【圖式簡單說明】 圖1為表示明日葉根萃取部分分化誘導之脂肪細胞三酸 甘油脂生合成量。 圖2為表示明曰葉根部萃取部分分部分餾液3、4分化誘導 之脂肪細胞三酸甘油脂生合成量。 圖3為表示明日葉根萃取部分之葡萄糖吸收促進作用。 圖4為表示明日葉葉子萃取部分分化誘導之脂，肪細胞三 酸甘油脂生合成量。 圖5為表示序菜葉子萃取部分分化誘導之脂肪細胞三酸 甘油脂生合成量。 圖6為表示芹菜葉子萃取部分之葡萄糖吸收促進作用。 圖7為表示荷蘭芹萃取部分分化誘導之脂肪細胞三酸甘 油脂生合成量。 夂 圖8為表示荷蘭芹萃取部分之葡萄糖吸收促進作用。 圖9為表示明日葉根萃取部分分化誘導之脂肪細 甘油脂生合成量。 圖1〇為表示明日葉根萃取部分之葡萄糖吸收促進作用。 圖11為表示明日葉葉子萃取部分之萄糖吸收促進作用。 圖丨2為表示明日葉根萃取部分分餾液之葡萄糖吸收促進 作用。 87298 -42- 1294284 圖13為表示細胞鬆弛素B對明日葉根乙醇萃取部分於葡 萄糖吸收促進作用之妨礙作用。 圖1 4為表示明日葉根乙醇萃取部分與胰島素於葡萄糖吸 收促進作用之相乘效果。 圖1 5為表示胰島素刺激對明日葉根乙醇萃取部分分化誘 導之脂肪細胞中葡萄糖吸收促進作用。 圖1 6為表示明日葉莖葉萃取部分分化誘導之脂肪細胞三 酸甘油脂生合成量。 87298 -43 -

Claims (1)

1. 號專利申躲 中文申請專利範圍替換本 擎1幽欠拾、申請專利範 2. 3. 4. 5. 6. 96.m 1，一，1 一種糠尿病、肥胖症、動脈硬化、高血脂症或高胰島素 症用醫藥組合物，其特徵在於含有選自由明日葉衍生之 醇類萃取物、乙酸乙酯萃取物、水萃取物、由彼等之萃 取物級分而得之部份、榨汁液及粉碎物所組成之群中之 至少一種處理物為有效成分。 一種類胰島素作用劑，其特徵在於含有選自由明日葉衍 生之醇類萃取物、乙酸乙酯萃取物、水萃取物、由彼等 之萃取物級分而得之部份、榨汁液及粉碎物所組成之群 中之至少一種處理物為有效成分。 種糖尿病、肥胖症、動脈硬化、高血脂症或高騰島素 症用食品、飲料或飼料，其特徵在於包含選自由明日葉 二生，醇類萃取物、乙酸乙萃取物、水萃取物、由彼 等之萃取物級分而得之部份、榨汁液及粉碎物所組成之 群中之至少一種處理物為有效成分。 -種細胞内葡萄糖吸收促進劑，其特徵在於包含選自由 明曰葉衍生之醇類萃取物、乙酸乙料取物、水萃取物 、由彼等之萃取物級分而得之部份、榨汁液及粉碎物所 、且成之群中之至少一種處理物為有效成分。 一種脂肪細胞分化誘導劑， ^ W具特被在於包含選自由明E 葉衍生之醇類萃取物、乙酸 〇敵乙酯卒取物、水萃取物、这 彼等之萃取物級分而得 之邛伤、榨汁液及粉碎物所組居 之群中之至少-種處理物為有效成分。 一種糖尿病或高胰島幸、片田較^ 馬素症用醫藥組合物，其特徵在於令 87298-961002.doc 1294284 有選自由芹菜（gMVe〇/e則）衍生之醇類萃取物 、乙酸乙酯萃取物、水萃取物、由彼等之萃取物級分而 得之部份、榨汁液及粉碎物所組成之群中之至少一種處 理物為有效成分。 7· 一種類胰島素作用劑，其特徵在於含有選自由芹菜（ grav⑼衍生之醇類萃取物、乙酸乙酯萃取 物、水萃取物、由彼等之萃取物級分而得之部份、榨汁 液及粉碎物所組成之群中之至少一種處理物為有效成 分。 8. —種糖尿病或高騰島素症用食品、飲料或飼料，其特徵 在於包含選自由芹菜（Jpiwm 似）衍生之醇類 卒取物、乙酸乙S旨卒取物、水萃取物、由彼等之萃取物 級分而得之部份、榨汁液及粉碎物所組成之群中之至少 一種處理物為有效成分。 9 · 一種細胞内葡萄糖吸收促進劑，其特徵在於包含選自由 芹菜衍生之醇類萃取物、乙酸乙 酯萃取物、水萃取物、由彼等之萃取物級分而得之部份 、榨汁液及粉碎物所組成之群中之至少一種處理物為有 效成分。 1 0 · —種脂肪細胞分化誘導劑，其特徵在於包含選自由斧菜 ()衍生之醇類萃取物、乙酸乙 — Θ曰卒 取物、水卒取物、由彼專之卒取物級分而得之部份 _ 汁液及粉碎物所組成之群中之至少一種處理物i ’有致 成分。 87298-961002.doc