TW200417366A - Remedy - Google Patents

Description

200417366 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於醫藥、食品、飲料或飼料，其對於生物體 内與胰島素相關聯疾病，例如糖尿病、肥胖症等之治療或 預防有用。 【先前技術】 胰島素係哺乳動物之正常碳水化合物、蛋白質以及脂肪 代謝所必要荷爾蒙。j型糖尿病患者，由於係支持生命之荷 爾蒙胰島素生成量不足，爲生存須從外界投與胰島素。n 型糖尿病患者，為控制由於胰島素生成量不足、胰島素抵 抗性等原因所造成之不適量血中葡萄糖量為正常量，需要 投與胰島素或胰島素分泌促進藥。然而，n型糖尿病患者 中，以由高胰島素血症或胰島素受體異常、胰島素受體之 下游信號異常等引起之胰島素抵抗性爲原因之糖尿病患者 ’即便投與胰島素或胰島素分泌促進藥，也無明顯治 果。 “ 近年，為解決胰島素副作用與上述問題，有進行與胰島 素有相同生理作用之物質（以下有時簡稱為類胰島素物幻 之開發，並判明合成苯二酮誘導體為類胰島素物質（例如， 參照國際公開第99/51225號公報），且紫根衍生之紫草為類 騰島素物質（例如，參照Kamei R外7名，Bi〇chem =· C〇m_· ’ 2002年，ν〇1· 292, p 642-651)。該等類胰島 ^物貝不僅對I型糖尿病患者，還對㈣糖尿病患者，尤其 對胰島素抵抗性爲原因之η型糖尿病患者，藉由其顯示與 87298 200417366 姨島素相同生理活性可期待改善症狀。 明日葉係繳形花科大型多 促進效果。例如，明曰葉本、，破^有各種健康 ^ ^ r m ^ m 、、有生理/舌性為預防高血壓效 要、碑％、A _ 眉作用、抑制胃酸分泌作用、抗癌效 曰/成長因子產生效果、增強肝細胞增殖因子產 生作用專（例如，參照 八 > 豆浐播屆 不、A汗弟1/76614號公報）〇然而， 具抗糖尿病作用或抗肥胖作 η超 ㈣用寺類胰島素作用尚屬未知。 於繳形花科，被認爲具有各種生理作用之植物 未理作用為抗血液凝固作用、抗癌作用等。狹而 ’，、抗糖尿病仙或抗肥胖作料類胰島素 荷籣斧係屬於繳形花科，被切爲右久猪^ '未矣 H有各種生理作用之植物 。何蘭4之生理作用為改善貧血、預防食物中毒作用、止 血作用、恢復疲勞、出汗、利尿、保溫效果等。然… 抗糖尿病作用或抗肥胖作料類胰島素作用尚屬未知/、 【發明内容】 本發明之目的為開發天然物衍生之且安全，攝取簡單， 可適用於食品素材、醫藥品素材之具有類胰島素作用之植 物何生之處理物’並提供利用該處理物之醫藥、食品 料或飼料。 ~ 以下概括本發明，本發明之第i發明為關於以包含缴开卜 科植物衍生之處理物為有效成分作為特徵之伴隨騰島素量匕 或胰島素反應失常之疾病之治療劑或預防劑。 ’、里 本發明之第2發明為關於以包含繳形花科植物衍生之處 理物為有效成分作為特徵之類胰島素作用劑。 处 87298 200417366 本發明之第3發明^^ 巧马關於以包含繳形花科植物衍生之處

理物為有效成分作A ^ 、、寺徵之伴隨胰島素量或胰島素反應失 吊之疾病之治療用或預防用食品、飲料或飼料。 本I明之第4發明為關於以包含繳形花科植物衍生之處 理物為有效成分作為特徵之細胞内葡萄糖吸收促進齊卜 本叙明之第5發明為關於以包含繳形花科植物衍生之處 里物為有效成分作為特徵之分化為脂肪細胞之誘導劑。 .於本發明之第1〜5發明中，繳形花科植物係、例如，明日 葉、芹菜或荷蘭芹。 【實施方式】 =發明中’缴形花科植物為，屬於被子植物類缴形花 科植物，例如，有明日葉 以、重齒毛當歸、 胡蘿匐、芹采、荷蘭芹箄。 斤寺於本叙明中，特別適合使用明 茱采、荷蘭芽。且，於本發明中，該等可以單獨或 種以上混合制。且，本發明較錢料科植物，並成 限定，可以使用其果實、種子、種皮、花、葉子、莖、根 、根莖與/或植物全體。 於本發明中作爲有效成分所使用之繳形花科植物衍生之 處理物’只要持有類胰島素作用並不限定，例如可以為κ :物碎物、榨汁液、破碎物、化學處理物或酵素二 物：，、中例如萃取物、粉碎物以及榨汁液特別適合 可以作爲本發明之有效成分所使用並不 : 物可以單獨或兩種以上混合使用。 ^限疋。各處理 且’本發明中類腺島素作用’只要表示與胰島素相同之 87298 200417366 生理活性，並不限定，例如， ,, 足進細胞内糖、氨基酸之明 收；糖原、蛋白質合成以及抑 .,, 抑制分解等代謝調節作用。作 馬本舍明之有效成分，至少要磲炎 頊不分化為脂肪細胞之分化 誘導作用或細胞内葡萄糖吸收促 .^ 從進作用。測定有無類胰島 素作用，藉由實施例3或5所夺哉士 * 句 W。己載方法可以簡單測定。 在本發明中，萃取物指用萃一 卞取/合別經過卒取操作工裎 所得物質。萃取可以用正式萃取方法如下進行。例如，可 以將原料粉碎或細斷後，用溶劑以批式或連續式進行。作 爲得到萃取物時所用萃取溶劑，並不限定，可以為水、氣 仿、乙醇、曱醇、異丙醇等醇類，也可以為丙㈣、丁 _類，還可以為乙酸"旨、乙酸乙醋等親水性或親油性溶 劑，根據需要，可以單獨或適當混合使用。萃取溶劑之量 ，可適當決定，通常使用相對於原料（固體）重量之〇丨〜1〇〇 倍量。萃取溫度根據目的適宜決定，用水萃取之情形通常 為在4〜13 0°c，更好在25〜loot：。且，溶劑中包含乙醇之 情形適合為4〜60°C範圍。萃取時間，可考慮萃取效率決定 。通常為數秒〜數日；更好為設定原料、萃取溶劑、萃取 溫度等使萃取時間在5分〜24小時之範圍。萃取操作，例如 可以一邊攪拌或靜置進行，且可根據需要反復數回。藉由 以上操作，得到繳形花科植物衍生之萃取物（以下，有時簡 稱爲本發明之萃取物）。萃取物根據需要進行過濾、離心分 離、濃縮、限外過濾、分子篩等處理，調製出目的之濃縮 有類胰島素物質之萃取物。萃取物或濃縮萃取物之類胰島 素作用，可以利用後述實施例3或5所記載方法簡便測定。 87298 -9 - 20041/Joo 且，可以將繳形花科拮队、 化科植物以正式方法製成 取物（例如明日葉茶）有 t、茶狀右此卒 / 3犬貝姨島素作用，可作禹 取物使用。且 』作舄本务明之卒 可以勺入士义 匕3上述萃取物2種以上使用。且，也 可以本發明中不同筮 用。 卒取方法所獲得兩種以上萃取物使 且’在本發明中，將將 ^ <方 >八金 將、教形化科植物衍生之萃取物藉由正 式方法分畫所得部分，番 重设刀畫刼作所得部分，也包含在 本發明之萃取物中。卜 其 ’L刀旦手段可以為萃取、分別沉澱 、&柱層析、薄層芦狀笙 .^ a析專。也可以將所得部分，以類胰島 素乍用為指標，進-步精製，可以單離類姨島素物質。 除料化科植物有來萃取物以外繳形花科植物衍生 之處理物之製造方法，右 有、例如，將植物乾燥、粉碎得到 粉末狀繳形花科衍生之私垃％ _ .之知碎物。乾燥最好利用凍結乾燥。 且可以藉由凍結粉碎獲取粉碎物。 、且’繳形花科植物衍生之梓汁液之製造方法，只要為正 /植物榨/十方法並不特別限定。例如，可以用螺絲式、齒 輪式：刀片式等榨汁機或榨汁器榨汁。且，作爲前處理， 斷或磨4後，再用上述榨汁器或布等絞出得到梓汁液。 么皮鲆物為私，將繳形花科植物弄碎之物，一般比粉碎物 組織片大。例如可以使用破碎機製造。且，化學處理物為 、、’不特別限疋為將繳形花科植物酸處理、驗處理、酸 Μ理、還原處理後所獲得產物。例如，可以藉由將缴形 化科植物浸潰在含鹽酸、硫酸、硝酸、檸檬酸、錯酸等無 機k或有機酸’或氫氧化納、氮氧化钟、氨等無機驗或有 87298 -10- 200417366 機驗之水溶液製造。化學+ 予處理物包括由上述化學處理所獲 得所有植物體衍生之物。酵素處理物為指，例如果膠酶、 纖維質酶、聚木糖酶、礙粉酶、聚甘露糖酶、聚葡萄糖酶 等酵素處理物，微生物衍生之酵素反應物(如發酵物），例 如可以對繳形花科植物用上述酵素，在適當緩衝液中作用 斤裝& ϋ處理物包括’所有衍生之於上述酵素處理植物 體之產物。再者，繳形花科植物衍生之處理物還包括例如 切斷此繳形花科植物莖，從其㈣面所獲得汁液。 在本發明中，繳形花科植物衍生之處理物之形狀，只要 有類胰島素作用，並不转别职^ . 、 ^ I个符別限疋，可以爲粉狀、固體狀、 ㈣>可以將該物質以正式方法造粒成粒 狀固形物，作爲本發明繳形花科植物衍生之處理物使用。 造粒方法，並不特別限定，例如可以為轉動造粒、攪拌造 粒、流動層造粒、氣流造粒、壓制造粒、壓縮成形造粒、 解碎以粒噴射造粒或噴霧造粒。也可以將粉狀該缴形花 科植㈣生之處理物溶解於例如水、乙醇等液體成液狀， 作爲本發明繳形花科植物衍生之處理物使用。 且，本發明可以將有效成分作爲例如本發明説明所記載 伴隨胰島素量或姨島素反應失常之疾病之治療用或預防用 食品、飲料或飼料使用。使用有效成分之形態，例如為將 前述卒取物或粉碎物等製成錠劑形狀。製造錠劑，可以用 正式製錠方法進行。 且本毛明所提供包含高濃度或高純度缴形花科植物衍 生之處理物之食品、飲料或飼料’與習知食品、飲料或飼 87298 -11 - 417366 料相比杈，意味著本發明之食品、飲料或飼料中包含高濃 度及/或南純度類胰島素物質。該食品、飲料或飼料，例如 後述，可以在習知食品等中添加本發明之有效成分製造。 且，本發明中，稱繳形花科植物衍生之處理物為本發明 之有效成分，稱包含本發明有效成分之伴隨胰島素量或胰 島素反應失常之疾病之治療劑或預防劑為本發明之治療 或預防劑。 w 本發明所係有效成分，如後述無毒性檢驗出。且，不必 擔心副作用發生。因此，可以安全且適#進行疾病之治療 或預防°因此’含該有效成分之本發明治療劑、預防劑、 食品、飲料或飼料’對伴隨胰島素量或姨島素反應失常之 疾病之治療或預防有效。 且本七明中，作爲伴隨胰島素量或胰島素反應失常之 疾病’為血中騰島素水平變化1島素或胰島素受體活性 水平變化'胰島素受體下游信號異常、以及由該等組合中 所選擇因子為特徵之疾病，例如，糖尿病、肥胖症、動脈 硬化、古柯驗停藥之脫癩症狀、鬱血性心不全、心臟也管 痙攣大月匈血官痙攣、嗜鉻細胞瘤、副神經瘤、亨丁頓舞 蹈症、高血脂症、高胰島素症等。作爲糖尿病，例如！型糖 :糖尿病。且’作爲11型糖尿病，還包括投與胰島 ^或騰島素分泌促進藥也無治療效果之騰島素抵抗性為原 因之疾病。 素被〜爲促進脂肪前驅細胞分化為脂肪細胞之分化 5，且在成熟脂肪細胞中促進葡萄糖吸收、細胞内儲存 87298 -12· 200417366 三酸甘油脂（Rubin C. S·等，J· Biol· Chem·，Vol· 253, No· 20, P 7570〜7578 (1978年））。即，利用該方法，代替胰島素投 與被檢物質，藉由觀察分化為脂肪細胞或測定細胞中三酸 甘油脂生合成量，測定被檢物質之類胰島素作用。 且，胰島素被認爲有葡萄糖吸收促進作用，在成熟脂肪 細胞中胰島素促進細胞内葡萄糖吸收（Rubin c. S.等，J.

Biol. Chem·，Vol. 253 . No· 20, P7579〜7583 (1 978 年））。即 ’利用该方法’代替胰島素投與被檢物質，藉由測定成熟 脂肪細胞内葡萄糖吸收量，測定被檢物質之類胰島素作用。 作爲本發明之治療劑或預防劑，可以將本發明有關前述 有效成分與正式醫藥擔體組合製劑化之物。 本發明之治療劑或預防劑製造，通常，藉由將前述有效 成分與藥學所容許液狀或固體狀擔體配合進行，還可以根 據需要添加溶劑、分散劑、乳化劑、緩衝劑、安定劑、赋 形劑、結合劑、崩壞劑、潤滑劑等製成錠劑、顆粒劑、散 劑、粉末劑、膠囊劑等固形劑；通常液劑、懸濁劑、乳劑 等液劑。且，也可以製成使用前添加適當擔體成爲液狀之 乾燥品，或其他外用劑。 邊藥用擔體’可以根據治療劑或預防劑投與形態以及劑 型選擇。製成固體組成物所組成口服劑之情形，可以製造 成錠劑、丸劑、膠囊劑、散劑、細粒劑、顆粒劑等，例如 利用澱粉、乳糖、白糖、甘露醇、羧曱纖維素、玉米澱粉 、無機鹽等。且，調製口服劑之情形，可以再配合結合劑 、崩壞劑、界面活性劑、潤滑劑、流動性促進劑、矯味劑 87298 -13- 200417366 、者色劑、香料等。例>，製成鍵劑或丸劑之情形，可以 根據需要用蔗糖、明膠 胗經丙基纖維素寻糖衣或胃溶性或 ，谷性物f膜被覆。製成液體組成物所組成Π服劑之情形 ’：以製成藥理學所允許之乳濁劑、溶液劑、懸濁劑、果 子路^等’例如，可以將精製水、乙醇等作爲擔體利用。 且，再根據需要可以添加濕潤劑、懸濁劑等補助劑、甘味 劑、風味劑、防腐劑等。 、，且，製成非口服劑之情形，遵照正式方法將本發明之前 述有效成分用注射用蒸麻、生理食鹽水、葡萄糖水溶液 射用植物油、香油'花生油、大豆油、玉米油、丙烯 :醇、聚乙烯二醇等稀釋劑溶解或懸濁，根據必要添加殺 菌劑、安定劑、等張化劑.、止痛劑等調製。且，也可以製 造成固體組成物，在使用前用無菌水或無菌注射用溶劑溶 解使用。 作爲外用劑，包含經皮投與或經粘膜（口腔内、鼻腔内） 投與用固體、半固體狀，或液狀製劑。且還包含座:。例 ,，乳劑、洗劑等乳濁劑；外用酊劑、經粘膜投與用液劑 等液狀製齊丨；油性軟膏、親水性軟膏等軟膏劑；膜劑、綳 帶劑、泥罨敷劑等經皮投與或經粘膜投與用貼付劑等。 以上各種製劑，可以分別利用正式醫藥用擔體，適宜， 用常用方法製造。i，製劑所包含有效成分含有量，須考 慮其投與形態，投與方式等，只要該有效成分之可投與量 為後述投與量範圍内，並不特別限定。 本發明之治療劑或預防劑，可以根據製劑形態以適當經 87298 -14· 200417366 路投與。投與方法並不特別 妳鉍 w 』乂馬内用、外用以及 注射。注射劑例如可以在靜脈内 盥·冰田七 J 反下、皮内投 /、，卜用蜊，例如座劑以其適合投與方法投與。 本么明作之治療劑或預防劑 yf 4心仅，、里，根據製劑形態、 、使用目的以及該治療劑或預防劑投與對象之患 者年齡、體重、症狀等所適宜設定，並不_定。_卜製 劑中所包含前述有效成分之投與量為人，（例如成年又人）每 日〇.'〜1 g/kg。當然投與量隨著種種條件變動，有時少 於上述投與量也足夠，有時需要超過範圍。投與可以在允 許投與量範圍内，1日1次或多次進行。且，本發明之治療 劑或預防劑除直接經口投與外，還可以添加到任何飲食品 中日㊉攝取。且’本發明之有效成分，可以通過和與本發 明之有效成分有相同作甩之物質’如騰島素等並用如實 施例20所記載，期待其相乘效果。 且，本發明還提供包含前述有效成分之類胰島素作用劑 。該類胰島素作用劑，可以為前述有效成分本身，也可以 為包含前述有效成分之組成物。該類胰島素作用劑，例如 可以將刖述有效成分和與該有效成分有相同用途使用可能 之其他成分（例如胰島素）配合，依據上述治療劑或預防劑 之製造方法，製造成通常使用試藥形態。該類胰島素作用 劑中所含前述有效成分含有量，應考慮該類胰島素作用劑 才又v、方法使用目的專’只要為得到本發明所希望效果 之置即可，並不特別限定。有效成分含有量為，例如〇.〇 i 〜1 00重置％。且，該類胰島素作用劑使用量，只要為得到 87298 -15- 200417366 本發明所希望效果之量並不特別限定。特別為，投與至身 體使用之情形，最好在前述治療劑或預防劑之有效成分之 投與量範圍内投與有效成分即可。類胰島素作用劑，對伴 隨姨島素量或胰島素反應失常之疾病有用。且，該類騰, 素作用劑，還可以使用於製造該等疾病之治療或預防用食 品、飲料或飼料。關於該當食品、飲料或飼料，可以依據 月〇述伴隨胰島素量或胰島素反應失常之疾病之治療用或預 防用食品、飲料或飼料之標準使用。且，該類胰島素作用 劑對筛選對伴隨胰島素量或胰島素反應失常之疾病之藥物 有用。再者該類胰島素作用劑，對細胞内胰島素作用機理 研究、關於其細胞物理變化之機能研究有用。 且’藉由將本發明之類胰島素作用劑投與至人，可期待 血中胰島素量下降。即，本發明之類胰島素作用劑可以作 爲/口療或預防要求降低胰島素量之疾病之治療或預防劑使 用。該當疾病，並不特別限定，例如高胰島素症、老人癡 呆症等。且，依據介於胰島素受體之刺激與延命效果有密 切關係之報告（Science，vol· 299，P 572 〜574 (2〇〇3年）； ，ν〇1· 424，Ρ 277〜284 (2003年）），也可以將本發明 類胰島素作用劑作爲老化防止劑使用。 Χ 於本發明之有關有效成分中，如後述無毒性檢驗出。且 =擔心副作用產生…可以安全並適合表達類胰島 ’、 。所以，含該有效成分之本發明中醫藥、食品、# 料或飼料’對伴隨胰島素量或胰島素反應失常之疾病之户 療或預防有效。 /α 87298 -16- 200417366 且，本發明提供包纟、添加以及/或稀釋前述有效成分而 成對伴隨胰島素量或胰島素反應失常之疾病之治療用或預 防用食品、飲料或飼料。本發明之食品、飲料或飼料藉由 其類胰島素作帛，對伴隨胰島素量或胰島素反應失常之疾 病之症狀改善、預防極其有p再者，本發明之食品或飲 料為有降低血糖值作用之血糖值降低用食品或飲料，對關 心血糖值或m者而言，為有效機驗食品或飲料。 且’本發明内容中，〈包含〉指食品、飲料或飼料中包含 本發明所使用有效成分；〈添加〉指食品、飲料或飼料之原 料中添加有本發明所使用有效成分；<稀釋 >指於本發明所 使用有效成分中添加食品、飲料或飼料之原料。 本發明並不限定食品、飲料或飼料之製造方法。例如， 配合、調理、加工等可以依據—般食品、飲料或飼料之方 法，可以由該等製造方法製造，只要所得食品、飲料或飼 料中包含表現類騰島素作用之本發明有關前述有效成分即 可。 作爲本發明之食品或飲料並不限定，例如’可以為包含 本發明所係前述有效成分之榖物加工品(小麥粉加工品、澱 粉類加工品、預拌粉加工品、面類、通心粉類、麵包類、 豆銘類、蔡麥類、楚、米粉面、粉條、年糕等），油脂加工 品(可塑性油脂、炸油、色拉油、蛋黃醬類、調味汁等）， 大豆加工品(豆腐類、味，、納豆等），食肉加工品(火腿、 躐肉、壓制火腿、香腸等）’水產製品（冷凍魚漿、魚糕、 竹輪、半平、薩摩揚、魚餅、魚子酱、魚肉：：、；腸、 87298 -17- 200417366 鰹魚峁、魚卵加工品、水產罐頭、鹹烹海味等），乳製品 (原料礼、奶油、酸奶、黃油、乾酪、煉乳、奶粉、冰淇淋 等），蔬菜·果貫加工品（果膏類、果醬類、醬菜類、果實飲 料、蔬菜飲料、混合飲料等），點心類（巧克力、餅乾類、 餅、烤米片類），酒精飲料（曰本 帶餡麵包、蛋糕 中國酒、葡萄、酒、威士忌、燒酒、伏特加、白蘭地、杜松 子酒、羊炁酒、啤酒、清涼酒精飲料、果實酒、利久酒等: ，嗜好飲料（綠茶、紅茶、烏龍茶、*啡、清涼飲料、乳酸 飲料等），調味料（醬油、調味汁、醋、味啉等），罐裝瓶 裝·袋裝食品（牛肉蓋飯、什錦炒飯、紅豆儒米飯、咖喔、 其他各種調理食品），半乾燥或濃縮食品（鵝肝醬、其他塗 抹食品、騫麥、切麵湯、濃縮湯類），乾燥食品（速食麵類 、即席咖喱、速溶咖啡、粉末果汁、粉末湯頭、速食湯、 調理食品、調理飲料、調理湯等），冷;東食品（壽喜燒、茶 碗蒸、蒲燒鰻、漢堡牛肉餅、燒麥、餃子、各種麵條、果 ’十雞尾酒等），固形食品、液體食品（湯等），香辣調味料等 農產·林產加工品、畜產加工品、水產加工品等。 =發明之食品或飲料’單獨或複數包含、添加以及/或稀 μ述有效成分，只要其含有量相當於表達類胰島素作 用所必要量並不特別限告|盆 行…限制其形狀’可以包含藥片狀、顆粒 狀、膠囊狀等口服攝取可能形狀物。 ，本發明之飲料，也可以為本發明之有效成分與缴 作：:外植物’例如蔬菜、果實等榨汁液混合或同時榨 爲健康飲料。例如，將明曰葉榨汁液用水稀釋，或盘 87298 -18- 200417366 蘿菌/由菜、蒸菁、青梗菜、西紅柿、橘子、摔樣、葡萄 抽搁狼桃、疲菜、小蘿蔔、蘿葡、白菜、洋白菜、萵苣 、生采：韭菜、秋葵、青椒、黃瓜、菜豆、毛豆、豌豆、 玉米、称、黃花南芬菜、枇杷、酸橙、甘夏橘等榨汁液、 牛奶、豆奶等混合，作爲有類胰島素作用之健康飲料。 本發明之食品或飲料中前述有效成分之含有量並不特別 限定’可從其官能與活性表達觀點適當選擇，例如，食品 ，重量％中可以為〇._01重量％以上，更好為〇〇〇〇1〜1〇 重罝％，再好為〇.〇〇〇6〜6重量％ ;例如飲料⑽重量％中可 以為中0.00001重量％以上，更好為〇 〇〇〇1〜1〇重量再好 為0.0006〜6重；t %。且本發明之食品或飲料，例如人（例如 成人）每日攝取其包含有效成分〇〇〇lmg〜1〇购左右更 好為 0·1 mg〜l g/kg。 且’如前所述’將有效成分以錠劑形式作爲食品提供之 月形，有效成分之含有量為例如0 01〜1〇〇重量。a。另一方 \將榨汁液原液作爲飲料之情形’本發明之有效成分含 有量為例如0 · 〇 1〜1 〇 0重量0/〇。 且，本發明提供包含、添加以及/或稀釋有前述有效成分 =有類騰島素作用之生物用飼料’再者，另一方面，提供 —種以投與前述有效成分給生物為特徵之生物飼育方法。 =作爲本發明飼料之另—方面，提供以包含前二有效成 刀為特徵之生物飼育用劑。 在本發明中，生物指養殖動物、寵物動 A ，a 一一 ^ m.W] m 為例如豕畜、實驗動物、家禽、魚類、甲殼類、或貝類等 87298 -19- 。作爲飼料例如有維持以及/或 爲生物飼育用劑，例如有浸潰用劑身: 添加劑等。 〜幻料添加劑、飲枓用 依據該等發明，重+ 明所使用前述有^ 述所舉例生物，根據本發 或預防劑有相同效果表達。即，前述飼料 二:伴叫量或騰島素反應失常之疾病有治療或預 ，==述有效成:通常投與對象_ Μ、曰人⑴ 式有’例如將該有效成分 1口“到供給對象生物之人工配合飼料原料之；盘人工 Γ=:末原料混合之後’再添加混合到其他原料中。 二二：述有效成分含有量並不特別限定，可以根據 、I且°又定，大約為0.001〜15重量y 本::月飼料之製造方法並不特別限定。，。且配合也可以根 據一般飼料標準進行 σ要制 Μ右雜眩“飼料中包含與本發明相 關有類騰島素作用之前料效成分即可。 本發明可適用生物並不特別_，作爲養殖動物，馬、 牛:豬、綿平、山羊、路乾、美洲乾等家畜，小氣、大鼠 、干獺、兔子等實驗動物’莫隹、鴨、火雞、轮烏等家禽， 狗、貓等寵物動物等，可以廣泛使用。 藉由使攝取包含有類騰島素作用之本發明所使用前述有 效成分之飼料’或將對象生物浸潰於包含有類胰島辛作用 之本發明所使用前述有效成分含有液中，可以維持或改盖 87298 -20 - 200417366 豕畜貫驗動物、豕禽、寵物動物等良好身體狀況。該當 例子’包含在本發明之飼育方法之中。 且’本發明還提供包含前述有效成分之細胞内葡萄糖吸 收促進劑。該葡萄糖吸收促進劑，可以為前述有效成分， 也可以為包含前述有效成分之組成物。該葡萄糖吸收促進 劑’例如，可以和與前述有效成分有相同用途使用可能之 其他成分（例如胰島素）等配合使用，以上述治療劑或預防 劑之製造方法為準製造成通常使用試藥形態。該葡萄糖吸 收促進劑所包含前述有效成分含有量，應該考慮該葡萄糖 吸收促進劑之投與方法、使用目的等，只要為能獲得本發 明所希望效果之量，並不特職I有效成分含有量可以 為例:δ 0.0 1 1 〇〇重里％。且，該葡萄糖吸收促進劑使用量 ’只要為能獲得本發明所希望效果之量，並不特別限定。 特別，投與於生物體使用之情形，可以將可投於有效成分 量規定在前述治療劑或預防劑之有效成分投與量範圍内使 用。該葡萄糖吸收促進劑，對治療或預防需要細胞内葡萄 糖吸收促進仙之疾病之治療或預防有用。該等疾病為， 例如除上述伴隨胰島素量或胰島素反應失常之疾病外還有 ’:臟疾病，特別是心肌梗梗塞、虛血後心臟損傷等。且 該葡萄糖吸收促進劑’根據其促進細胞内葡萄糖吸收，使 該作用在肌肉細胞中發揮，可以誘發肌肉增強作用，疲勞 恢復作用。且，該葡萄糖吸收促進劑可以使用在該等疾病 之治療或預防用食品、飲料或飼料之製造中。該等食品， 飲料或飼料，可以根據前述伴隨胰島素量或胰島素反應失 87298 -21 - 200417366 常病用或治療用食品’飲料或飼料之標準使用。且， 该葡萄糖吸收促進劑對;登μ — ]^師^上述治療或預防需要細胞内葡 萄糖吸收促進作用之疾病用遂％女 展届用樂物有用。再者，該葡萄糖吸 收促進劑’對細胞葡萄糖吸收作 楓及收作用機理研究或細胞物理變 化等機能研究有用。 且’本發明還提供包俞沐古 各引这有效成分之分化為脂肪細胞 ^分化誘導劑。該分化誘導劑可以分化誘導至脂肪細胞之 前驅細胞，只要可以分化為脂肪細胞並不特別限定。例如 ’除月丨J驅脂肪細胞外，還右總祕# Γ退有纖維牙細胞、間葉系幹細胞等 、。該分化誘導劑，可以為前述有效成分，也可以為包含前 述有效成分之組成物。該分化誘導劑，例如，彳以和與該 有效成分有相同用途使用可能之其他成分（例如騰島素等） 配合，以上述治療劑或預防劑之製造方法為準，製造成通 常使用試藥形態。該分化誘導劑所含前述有效成分含有量 ’應考慮該分化誘導劑投與方法、使用目的等，只要為可 以得到本發明所希望效果之量，並不特別限定。有效成分 之^有量，大約為ο.(Π〜1()()重量％。且，該分化誘導劑使 用篁，只要為可以得到本發明所希望效果之量，並不特別 限定:特別’投與生物體使用之情形，有效成分投與量應 該在前述治療劑或預防劑之有效成分投與量範圍之内使用 。該分化誘導劑，對治療或預防需要脂肪細胞分化誘導作 用之疾病之治療或預防有用。該等疾病，例如，除上述伴 隨胰島素量或胰島素反應失常之疾病外，還有，痛風、脂 肪肝、膽石症、月經異常、不孕症等。且該分化誘導劑， 87298 -22- 200417366 SI以使用/製造該當疾病之治療或預防用食品、飲料或 、；:、、。該等食品、飲料或飼料可以根據前述伴隨胰島素量 或胰島素反應失常之疾病之治療用或預防用食品、飲料或 :料為準使用。且’該分化誘導劑，㈣選治療或預防需 要上述脂肪細胞分化誘導作用之疾病用藥物有用。再者， :分化誘導劑，對分化為脂肪細胞之分化誘導作用機理研 究或其物理變化等機能研究有用。 2發明所使用前述有效成分，投與其作用發揮有效量也 無毒性檢驗出。例如，經口投與之情形，將明日葉、芹菜 或荷蘭芹乙醇萃取物各i g/kg 一回投與至小鼠，也無死亡例 出現。且，將前述有效成分，經口投與至大鼠i g/kg經口單 回投與也無死亡例出現。 實施例 下面以實施例進一步具體説明本發明，本發明並不局限 於該等記載。且，實施例中％若無特別説明均意味容量％。 實施例1調製明日葉根萃取部分 (1) 於10 g明日葉（Angelica Keiskei)根部冷凍乾燥後粉 碎物中加入1 〇0 mL亂仿’在室溫萃取3 〇分鐘。吸引過淚後 ’對其殘渣進行相同操作。合併該等氯仿萃取液，以旋轉 洛德器減壓濃縮後’將乾综物溶解於2.5 m L二曱基亞中， 調製明日葉根氣仿萃取部分。 (2) 加入1〇〇 mL乙醇於實施例1-(1)之氣仿萃取後殘渣中 ，在室溫萃取30分鐘。吸引過濾後，對其殘渣進行相同操 作。合併該等乙醇萃取液，以旋轉蒸餾器減壓濃縮後，將 87298 -23- 200417366 乾燥物溶解於2 · 5 mL二曱基亞中，調製明日葉根乙醇萃取 部分。 實施例2分畫明日％根萃取部分 於5.8 kg明日葉根部乾燥粉末中加入24升乙酸乙酯，在室 溫提煉3個小時’吸引過濾後，分別為乙酸乙酯萃取液與殘 渣。將所獲得乙酸乙醋萃取液200 mL以旋轉蒸餾器減壓濃 縮後，溶解於氯仿，並用矽膠層析分晝。下面表示其條件 。矽膠用BW-300SP(富士 Silysia化學社製：i〇〇 mL)。以氯 仿（5 00 mL)，氯仿：甲醇（體積比，以下相同卜ι〇〇:1 (3〇〇社) ，乙酸乙酯（200 mL)順序進行溶出。溶出液以分晝1 (28〇 mL) ，分晝 2 (200 mL)，分晝 3 (280 mL)，分晝 4 (240 mL)之順 序分晝，回收，並分別減壓濃縮、乾燥後，溶解於2 mL乙 醇中’得到碎膠層析分部分德液1〜4。 貫施例3藉由明日葉根萃取物分化誘導為脂肪細胞 (1)分化誘導為脂肪細胞 分化誘導為脂肪細胞，部分改變前述C. S等之方 法進行。於包含200 μΜ抗壞血酸酸，含有10%小牛血清 (Gibco 社製）A-D-MEM 培養基（DulbeCC〇，s Modified Eagle，s Mediiim)(Sigma社製，D6046)(下面簡稱為A-D-MEM培養基） 中懸濁前驅脂肪細胞株3丁3-L1 (ATCC CCL-92.1)為4 χ 103 個/mL ’加樣於12穴微量滴定盤加樣孔中各2 mL，於5%二 氧化碳存在下，3 7°C培養7曰。並，第2、4日用同培養基交 換培養基。第7日，交換於含0·25 μΜ地塞米松-MEM培 養基後，並添加終濃度為〇·1 %實施例1-(1)中所調製明曰葉 87298 -24- 200417366 根氯仿萃取部分或實施例丨_⑺中所調製明日葉根乙醇萃取 口P刀且’ 5又疋添加4 μΐ之5 mg/mL胰島素（TaKaRa Bio社製） 水/合液區分為陽性對照，添加水區分為陰性對照。添加各 成分後在45小時時點交換A-D_MEM培養基，各加樣孔中各 添加4 μΐ明日葉根氯仿萃取部分或明日葉根乙醇萃取部分 ，陽性對照添加2 W之5 mg/mL胰島素水溶液，陰性對照添 加水，再培養7日。並，第2、4日交換培養基，並在各加樣 孔中添加4 μΐ明日葉根氣仿萃取部分或明日葉根乙醇萃取 部分，陽性對照添加2 μΐ之5 mg/mL胰島素水溶液，陰性對 照添加水。 (2)測定三酸甘油脂生合成量 作爲分化為成熟脂肪細胞之分化誘導指標和類胰島素作 用之評價，測定細胞中三酸甘油脂生合成量。培養結束後 ’除去培養基，於磷酸緩衝液中洗2回細胞，添加1 mL己烧 :異丙醇= 3:2溶劑在室溫放置30分鐘後回收上清。此操作 反復再做一次，將所得2 mL上清濃縮乾燥。將沉澱溶解於 1〇〇 μ1異丙醇後，用三酸甘油脂G測試（和光純藥社製，c〇de 276-69801)測定1〇 μι溶液中所含三酸甘油脂量。測定兩次。 其結果，與添加水區分相比較，明日葉根氣仿萃取部分 或月日葉根乙醇萃取部分添加區分得到與添加胰島素區分 相同之二酸甘油脂生合成誘導。即，證明了明日葉根氣仿 萃取部分與明日葉根乙醇萃取部分有分化為脂肪細胞之分 化誘導作用。將之表示於圖丨。圖丨之橫軸表示各樣品，縱 軸表示二酸甘油脂生合成量（pg/mLl)。 87298 -25- 200417366 實施例4 細胞 精由明曰葉根萃取物分部分餾液分化誘導為脂肪 實施例2所調製明曰葉根萃取部分各分餾液 肪細胞之分化誘導活性以音#加1 為月曰 活陡以貫靶例3所記載方法為準測定。 :…口，添加4 μΐ之2.875 mg/mL石夕勝層析分部分館液3 或1〇.825 mg/mL石夕膠層析分部分館㈣。且設定添力 之5 mg/mL胰島素水溶液為陽性對照，添加水為陰性對昭。 其後、’與實施例3所記載方法相同，進行培養基與樣品交換 ’於添加樣品7日後測定細胞中三酸甘油脂量。 其結果，與添加水區分相比較，矽膠層析分部分餾液3 與矽膠層析分部分餾液4添加區分得到與添加胰島素區分 相同之二酸甘油脂生成誘導。即，證明了矽膠層析分部分 餾液3與矽膠層析分部分餾液4之分化為脂肪細胞之分化誘 導作用。將之表示於圖2。圖2之橫軸表示各樣品，縱軸表 示二酸甘油脂生合成量（pg/mL)。 貫施例5明曰葉根部萃取部分之葡萄糖吸收促進作用 (1)調製成熟脂肪細胞

分化為成熟脂肪細胞之分化誘導，將前述Rubin C. S.等 方法部分改變，進行。於包含200 μΜ抗壞血酸，含有1 〇% 小牛血清（Gibco社製）A-D_MEM培養基（Sigma社製，D6046) 中懸濁 3T3-L1 細胞（ATCC CCL-92.1)為 4 X 103個 /mL，加樣 於1 2穴微量滴定盤加樣孔中各2 mL，於5 %二氧化碳存在下 ，37°C培養7日。第7日，交換於含200 μΜ抗壞血酸，0.25 μΜ 地塞米松以及10 pg/niL胰島素（TaKaRa Bio社製），0.5 mM 87298 -26- 200417366 3-丙丁基-1-甲基頁。票呤（Nacaia][ teSqUe社製，19624-44)， 10%小牛血清（Gibc〇社製）之A-D_meM培養基2 mL。45小時 後交換於含有200 μΜ抗壞血酸以及5 μ§/ιη]ί胰島素，1〇%小 牛血清之A-D-MEM培養基2 mL，再培養2日後，4日後交換 相同培養基，藉由培養7日調製出成熟脂肪細胞。 (2)測定對成熟脂肪細胞之葡萄糖吸收促進作用 作爲葡萄糖吸收促進作用之評價和類胰島素作用之評價 ，測足以樣品刺激時成熟脂肪細胞之細胞内2_脫氧-葡萄糖 吸收量。 培養結束後，除去培養基，用含〇1 Wy/v〇/。牛型血清白蛋 白（Sigma社製，A8022) A_D-MEM培養基洗2次細胞後，在 各加樣孔各添加1 mL含終濃度為0·025%，〇〇〇8%明日葉根 氣仿萃取部分二甲基亞溶液或明日葉根乙醇萃取部分二曱 基亞溶液畫之相同培養基，於5%二氧化碳存在下，37t培 養1晚。且，設定不添加樣品區分為陰性對照。培養丨晚後 ，以 HEPES緩衝液（140mMNaC 卜 5mMKCU, 2.5 mMMgS04 ’ 1 mMCaCl2，20mMHEPES-Na(pH7.4))洗 2次細胞，在 各加樣孔中各添加0.9 mL含終濃度為0·025%，〇〇〇8%明日 葉根氣仿萃取部分二曱基亞溶液或明日葉根乙醇萃取部分 二曱基亞溶液之同緩衝液，於37t培養75分鐘。設定其陽 性對照為，經過45分鐘時點在不添加樣品之加樣孔中添加 終濃度為1 gg/mL胰島素。其後，添加1〇〇 μβ〇·5 μ(：ί/ηα 脫氧-[1，2-3Η(Ν)μ 葡萄糖（PerkinElmer Life 以‘⑽社製， NET549A)，ImM 2-脫氧葡萄糖（Nacalai加样社製， 87298 -27- 200417366 10722-1 1)之HEPES缓衝液，進一步在37°C培養10分鐘。培 養結束後，除去上清，於4°C冷卻之磷酸緩衝液洗3次細胞 ，添加含1°/。乙基苯基聚乙二醇P-40磷酸緩衝液0.5 mL以溶 解細胞，溶出細胞中所吸收之2-脫氧-[1，2-3Η(Ν)μ葡萄糖。 用其上清 25 μΐ，以 Aquasol-2 (PerkinElmer Life Sciences社 製，6NE9529)為閃爍體用液體閃爍計數器LS6500 (Beckman 社製）測定放射活性。 其結果，添加各濃度明日葉根氯仿萃取部分與明日葉根 乙醇萃取部分區分與陰性對照相比較，得到與添加胰島素 區分相同2-脫氧-[1，2-3H(N)]_葡萄糖吸收之促進作用。即， 證明明日葉根氣仿萃取部分與明日葉根乙醇萃取部分有葡 萄糖吸收之促進活性。將之表示為圖3。圖3之橫軸表示各 樣品，縱轴表示2-脫氧-[l，2-3H(N)]_葡萄糖量（dpm)。 實施例6調製明日葉葉子萃取部分 於每2 g明曰葉葉子粉末中添加4〇瓜乙蒸餾水乙醇或乙 酸乙酯萃取30分鐘，離心分離分爲萃取液與殘渣。之後對 其殘渣用30 mL各溶劑反復萃取操作2回。且，水萃取在6〇 C，乙醇萃取與乙酸乙酯萃取在室溫進行。收集所得萃卑 液以旋轉㈣器濃縮。最終’將水萃取液溶解於1〇社^ =中’得到明日葉葉子水萃取部分。乙醇萃取液溶解於8m】 二曱基亞中，得到明日葉葉子乙醇萃取部分。乙酸乙酯萃 取液溶解於5灿二甲基亞巾，得到明日葉葉子乙酸乙 取部分。 實施例7 藉由明 日葉葉子萃取部分分化誘導為脂肪細胞 87298 -28- 200417366 實施例6中所調製明曰葉葉子水萃取部分與明日葉葉子 乙醇萃取部分之分化為成熟脂肪細胞之分化誘導作用（類 胰島素活性），以實施例3之方法為準測定。 即’作爲樣品，各加樣孔中添加終濃度為〇. 4 %，〇 2 %， 0·1 %明日葉葉子水萃取部分水溶液或添加終濃度為〇,〇66% ，0.022%明日葉葉子乙醇萃取部分二甲基亞溶液。且，設 疋添加4 μΐ之5 mg/mL胰島素（TaKaRa Bio社製）水溶液為陽 性對照，添加二甲基亞區分為陰性對照。其後，與實施例3 所記載方法相同，進行培養基與樣品交換，於添加樣品7 曰後測定細胞中三酸甘油脂量。 其結果，添加各濃度明日葉葉子水萃取部分與明日葉葉 子乙醇萃取部分，均誘導三酸甘油脂之生合成。即，明曰 葉葉子水萃取物與明日葉葉子乙醇萃取部分均有分化為成 熟脂肪細胞之分化誘導作用。將之表示為圖4。圖4之橫軸 表示各樣品，縱軸表示三酸甘油脂生合成量（pg/mL)。 實施例8調製芹菜葉子萃取物 於每2 g芹菜葉子乾燥粉末中添加4〇 mL蒸餾水，乙醇或 乙酸乙酯，萃取30分鐘，離心分離分爲萃取液與殘渣。之 後對其殘渣用30 mL各溶劑反復萃取操作2回。且，水萃取 在60t：，乙醇萃取與乙酸乙酯萃取在室溫進行。收集所得 萃取液以奴轉条餾器濃縮。最終，將水萃取液溶解於丨〇㈤乙 瘵餾水中，得到芹菜葉子水萃取部分。乙醇萃取液溶解於5 mL二甲基亞中，得到芹菜葉子乙醇萃取部分。乙酸乙酯萃 取物溶解於5 mL二甲基亞中，得到芽菜葉子乙酸乙§旨萃取 87298 -29- 200417366 部分。 貝=例9肖由序菜葉萃取部分之分化誘導脂肪細胞 ““列8中所凋製芹菜葉子水萃取部分、芹菜葉乙醇萃取 :分與芽菜葉葉子乙酸乙醋萃取部分之分化為成熟脂肪細 …化誘導作用(類胰島素活性)，以實施例3之方法為準 測定。 ^子 即’作爲樣品，各加樣孔中添加各終濃度狀1%芽菜葉 子=取部分’終濃度狀2%，〇 ()66%，〜们糾菜葉子 乙醇卒取部分二f基亞溶液或芽菜葉子乙酸乙自旨萃取部分 二甲基亞溶液。且，収添加4 μ1之5叫就胰島素⑽山 杜製)水溶液為陽性對照’添加二甲基亞區分為陰性對 照。其後’與實施例3所記載方法相同，進行培養基與樣品 之交換’於添加樣品7日後測定細胞中三酸甘油脂量。 其結果，添加各濃度芽菜葉子水萃取部分，芽菜葉子乙 醇萃取部分與芽菜葉子乙酸乙醋萃取部分，均誘導：酸甘 油脂之生合成。即，芽菜葉子水萃取部分，菜葉葉子乙醇 卒取部分衫菜葉子乙酸乙s旨萃取部分均有分 肪細胞之分化誘導作用。將之表示為圖5。圖5之橫㈣示 各樣扣，縱軸表示三酸甘油脂生合成量bg/mL)。 實施例1〇芽菜葉子萃取部分促進葡萄糖吸收作用 作爲實施例8所調製芽菜葉子乙醇萃取部分與芽菜葉子 乙酸乙S旨萃取部分之㈣糖吸收促進作用之評價以及類肤 島素作用之評價’以實施例5所記載方法為準測定以樣品刺 激時成熟脂肪細胞時細胞内2_脫氧葡萄糖吸收量。 87298 -30- 200417366 即，作爲樣品，各加樣孔中各添加含終漢度為〇·2%， 0.066%芹菜某子乙醇萃取部分二曱基亞溶液或芹菜葉子乙 酸乙醋萃取部分二甲基亞溶液…設定不添加樣品區分 為陰性制’添加終濃度至1 Kg/mL胰島素為陽性對照。其 後，於上述相同，測定細胞中所吸收2_脫氧-葡萄糖量。 /、、、、σ果添加各/辰度芹菜葉子乙醇萃取部分與芹菜葉子 乙酸乙酯萃取部分區分與陰性對照相比較，得到與添加胰 島素區分相同2-脫氧—[丨，2·3Η(Ν)]·葡萄糖吸收之促進作用 。即，證明芹菜葉子乙醇萃取部分與芹菜葉子乙酸乙酯萃 取部分均有葡萄糖吸收之促進活性。將之表示為圖…❹ 之橫軸表示各樣品，縱軸表示2_脫氧_π，2_3η(ν)]_葡萄糖量 (dpm) ° 貫施例11調製荷蘭芹萃取部分 於每2 g荷蘭芹乾燥粉末中添加4〇 mL蒸餾水，乙醇或乙 S复乙酉旨’萃取30分鐘，離心分離分爲萃取液與殘渣。之後 對其殘渣用30 mL各溶劑反復萃取操作2回。且，水萃取在 60°C，乙醇萃取與乙酸乙酯萃取在室溫進行。收集所得萃 取液以旋轉蒸餾器濃縮。最終，將水萃取液溶解於1〇 mL 蒸餾水中，得到荷蘭芹水萃取部分。乙醇萃取液溶解於5 mL 二曱基亞中，得到荷蘭芹乙醇萃取部分。乙酸乙酯萃取部 分溶解於5 mL二甲基亞中，得到荷蘭芹乙酸乙酯萃取部分。 實施例12藉由荷蘭芹萃取部分分化誘導為脂肪細胞 將實施例11中所調製荷蘭芹水萃取部分之分化為成熟脂 87298 •31- 200417366 以實施例3之方法 肪細胞之分化誘導作用（類胰島素所用 為準測定。 即，作爲樣品’各加樣孔中各添加終濃度為0.4%，02% ，〇.1%荷蘭序水萃取部分水溶液。且，設定添加4μ1之5 MW胰島素（TaKaRa Bi0社製）水溶液為陽性對照，添加二 甲土亞區刀為陰性對照。其後，與實施例3所記載方法相同 1進行培養基與樣品之交換，於添加樣品7日後測定細胞中 二酸甘油脂量。 、了°果Τ添加各農度荷蘭斧水萃取部分，均誘導三酸甘 /由月曰^成、。即’何蘭芽水萃取部分有分化為成熟脂肪細胞 之刀化誘導作用。將之表示為圖7。圖7之橫軸表示各樣品 丄縱轴表示三酸甘油脂生合成量&g/mL)。 貫加*例1 3荷蘭芹萃取部分促進葡萄糖吸收作用 :士實施例11所調製荷蘭芽乙醇萃取部分與荷蘭芽乙酸 •曰萃取液之葡萄糖吸收促進作用之評價和類胰島素作用 =K貝以實施例5所記載方法為準測定以樣品刺激時成熟 月曰肪細胞之細胞内2_脫氧葡萄糖吸收量。 —^卩’作爲樣品，各加樣孔各添加終濃度為0 2%，〇 f蘭芽乙醇萃取部分二甲基亞溶液或荷蘭；f乙酸乙S旨萃取 部分二甲基亞溶液。且，設定不添加樣品區分為陰性對照 添加終濃度至1 pg/mL胰島素為陽性對照。其後，於上述 相同，測定細胞中所吸收2_脫氧_Π，2_3Η(Ν)]_葡萄糖量。 其結果，添加各濃度荷蘭芹乙醇萃取部分和荷蘭芹乙酸 乙S旨萃取部分與陰性對照相比較，得到與添加胰島素區分 87298 -32- 200417366 相同2-脫氧]i，2-3H(N)]-葡萄糖吸收之促進作用。即，證明 荷蘭芹乙醇萃取部分和荷蘭芹乙酸乙酯萃取部分均有葡萄 糖吸收之促進活性。將之表示為圖8。圖8之橫軸表示各樣 品’縱軸表示2_脫氧-[1，2_3H(N)]_葡萄糖（dpm)。 貫施例1 4調製明日葉根乙醇萃取部分與乙酸乙酯萃取部 分 於每2 g明曰葉根乾燥粉末中添加4〇 乙醇或乙酸乙醋 在室溫萃取30分鐘，離心分離分爲萃取液和殘渣。之後對 其殘渣用30 mL各溶劑反復萃取操作2回。收集所得萃取液 以旋轉瘵餾器濃縮。最終，乙醇萃取液溶解於1二甲基 亞中’得到明日葉根乙醇萃取部分。乙酸乙酯萃取部分溶 =於1 mL_甲基亞_，得到明日葉根乙酸乙醋萃取部分。 實鈀例15藉由明日葉根乙醇萃取部分與乙酸乙酯萃取部 刀为化誘導為脂肪細胞 /錢U中所調製明日葉根乙料取部分與明日葉根: '乙S曰萃取部分之分化為成熟脂肪細胞之分化誘導作戶 (類胰島素所用），以實施例3之方法為準測定。 二作爲樣品」各加樣孔中各添加終濃度為。㈣。θα 萃取邱八 基亞溶液或明曰葉根乙酸乙® 二:基亞溶液。且，設定添加 分為陰性1 水㈣為陽性對照，添加二甲基亞這 ，‘，、去丨照。其後，與實施例3所記載方法相η谁/ 養基與樣品之交換，於^样 MW目同’進心 脂量。 換於添加樣品7日後敎細胞中三酸㈣ 87298 -33 - 200417366 其結果’添加各濃度明日葉根乙醇萃取部分與明 乙酸乙醋萃取部分，均誘導三酸乾油脂合成。,ρ，明 根乙醇萃取部分盥明日螢相 m ▲ /、 葉根乙s欠乙酯萃取部分有分化為# 熟脂肪細胞之分化誘導作用。將之表示為圖9。圖 表不各樣品’縱軸表示三酸甘油脂生合成量bg/mL)。 實施㈣明曰葉根乙醇萃取部分與明曰葉根乙酸… 取部分促進葡萄糖吸收作用 十 作爲實施例14所調製明日葉根乙醇萃取部分與明曰葉根 乙酸乙S旨萃取部分之葡萄糖吸收促進作用之評價和類騰^ 素作用之評價，以實施例5所記載方法為準測定以樣品刺激 時成熟脂肪細胞之細胞内2，氧葡萄糖吸收量。 即，作爲樣品，各加樣孔各添加終濃度為〇1%，〇〇5% =日葉根乙醇萃取部分二曱基亞溶液或明曰葉根乙酸乙騎。 萃取邛刀一甲基亞溶液。且，設定不添加樣品區分為陰性 對照，添加終濃度至i ^/mL胰島素為陽性對照。其後，於 上述相同，測定細胞中所吸收2-脫氧-[1，2-3H(N)]_葡萄糖量。 其結果，添加各濃度明曰葉根乙醇萃取部分和明曰葉根 乙酸乙酯萃取部分，與陰性對照相比較，得到與添加胰島 素區分相同2-脫氧-葡萄糖吸收之促進作用。即 從明明日葉根乙醇萃取部分和明日葉根乙酸乙酯萃取部 刀均有葡萄糖吸收之促進活性。將之表示為圖丨〇。圖丨〇之 2軸表示各樣品，縱轴表示2-脫氧-[1，2-3Η(Ν)]-葡萄糖（dpm)。 貫她例17明日葉葉子萃取部分之葡萄糖吸收促進作用 作爲實施例6中所調製明曰葉葉子乙醇萃取部分與明曰 87298 -34- 200417366 义乙酉日卒取部分之U萄糖吸收促 類胰島素作用夕1_ 1下用之貝和 .乍用之砰彳貝，以貫施例5所記載方法 品刺激B主4、气 句早’貝i疋以樣 艮夺成熟脂肪細胞之細胞内2_脫氧葡萄糖吸收量。 曰二：舄樣品’各加樣孔各添加終濃度為0_2%，0.1%明 曰：茶子乙醇萃取部分二甲基亞溶液或明曰葉葉 曱基亞溶液。且，設定不添加樣品區分為& 神斜日g .jr ^ Ι^Γ 、…、、加終濃度至1 Mg/mL胰島素為陽性對照。苴 於上述相同，、、目丨I仝々 …、 ’、 ’ θ Π測疋細胞中所吸收2-脫氧·π，2·3Η(Ν)]-葡萄糖 置 〇 ★其紇：，添加各濃度明日葉葉子乙醇萃取部分和明日葉 葉子W乙6旨卒取部分與陰性對照相比較，得到與添加膜 島素區刀相同2-脫氧葡萄糖吸收之促進作用 一即也明明日葉葉子乙醇萃取部分和明日葉葉乙酸乙酯 卒取部=均有葡萄糖吸收之促進活性。將之表示為圖11。 圖之毛、軸表不各樣品，縱軸表示2-脫氧-[i，2-3H(N)]_葡萄 糖量（dpm)。

貫施例1 8 明日签4日'W TX- U 日葉根卒取物分部分餾液之葡萄糖吸收促進 作用 作爲貫^例2中所調製明日葉根萃取部分各分餾液之葡 萄糖吸收促進作用之評價和類胰島素作用之評冑，以實施 載方法為準測定以樣品刺激時成熟脂肪細胞之細 胞内2-脫氧葡萄糖吸收量。 P 乍爲樣’各加樣孔各添加終濃度為〇 · 〇3 mg/mL石夕 膠層析分部分館液1，終濃度為0·013 mg/mL矽膠層析分部 87298 -35- 566 :故：2，’終濃度為0·0077 mg/mL矽膠層析分部分餾液3， 5 ::濃度為0.0096 mg/mL矽膠層析分部分餾液4。且，設定 ::加樣品區分為陰性對照，添加終濃度至1 Kg/rnL胰島素 马陽性對昭。JL你 , ^ ；上述相同，測定細胞中所吸收2-脫 氧-[1，2-3Η(Ν)]-葡萄糖量。 其”結果’添加明日葉根各萃取部分各分餾液區分與陰性 、3相比車乂，得到與添加胰島素區分相同2-脫氧 葡萄糖吸收之促進作用。_，證明明日葉根萃 取部分石夕膠層析分部分鶴液有葡萄糖吸收之促進 活性。將之表示為圖12。圖12之橫軸表示各樣品，縱轴表 示2-脫氧-[1，2-3H(N)]_葡萄糖量（dpm)。 實施例19細胞鬆弛素B對明日葉根乙醇萃取部分之葡萄 糖吸收促進作用之妨礙作用 為驗證實施例16中所表示明日葉根乙醇萃取部分之葡萄 糖吸收促進作用被葡萄糖運輸蛋白阻礙劑細胞鬆弛素6所 阻礙，以實施例5所記載方法為準測定以樣品刺激時細胞鬆 弛素B對成熟脂肪細胞之細胞内2_脫氧葡萄糖吸收量之影 響。 即，作爲樣品，添加終濃度為〇 ·丨％明日葉根乙醇萃取部 分二甲基亞溶液。且，設定不添加樣品區分為陰性對照， 添加終濃度至1 pg/mL騰島素為陽性對照。進一步，對各區 分，與設定添加胰島素相同時間裏設定添加終濃度為4〇 μΜ 細胞鬆弛素B (Nacalai tesque社製，ι〇435-81)區分。其後， 於上述相同’測定細胞中所吸收2-脫氧-葡萄糠 87298 •36- 200417366

其結果，即便添加明日葉根乙醇 比較，得到與添加胰島素區分相同2 _脫//刀與陰性對照相 糖吸收之促進作用，而各區分2_ 乳3fl，2'Η(Ν)]-葡萄 收被添加細胞鬆弛素Β所抑制 ：Η(Ν)]-葡萄糖残 部分之葡萄糖吸收促進活性，二夷：曰葉根乙醇萃取 運輸，白進订。將之表示為圖13。圖13之橫軸表示各樣品 ’縱軸表不2-脫氧-，2_3Η(Ν)]_葡萄糖量(㈣。 實施例2"月曰葉根部乙醇萃取部分與胰島素葡萄糖吸 收促進作用之相乘效果 為評價實施们4中所調製明日葉根乙醇萃取部分盘低濃 度胰島素葡萄糖吸收促進作之相乘效果，以實施例5所記載 方法為部分標準敎以樣品刺激時成熟脂肪細胞之細胞内 2-脫氧葡萄糖吸收量。 調製成熟脂肪細胞以實施例5 •⑴所記載方法進行。 培養結束後，除去培養基，用包含〇1%(w/v)牛型血清白 蛋白（Sigma社製A8022) A_D_MEM培養基洗2次細胞，添加丄 mL包含終濃度為0〇2%明日葉根乙醇萃取部分二甲基亞溶 液之相同培養基，在5%二氧化碳存在下，37t培養一個晚 上。且，设疋不添加明日葉根乙醇萃取部分區分為陰性對 照。培養一晚後，以HEPES缓衝液（140 mM NaC卜5 mM KC1 ’ 2·5 mM MgS04，1 mM CaCl2，20 mM HEPES-Na (pH 7.4)) 洗2次細胞’添加〇·9 mL含終濃度為〇〇2%明日葉根部乙醇 萃取部分之同緩衝液，於37。(：培養45分鐘。其後，添加終 87298 -37- 200417366 》辰度為0.001 睡ώ 叫/niL胰島素，再培養3〇分鐘。其間， A?、’在不添加明日葦4 ..... 、 桊根乙醇卒取部分之加樣孔中加入铁# 度為0.001 Kg/mL胰島素區分凡 、、/辰 问亍、匕刀。且，又疋不添加樣品爲陰 照。其後’於實施例5_(2、所#都古土知门 ()所a己載方法相同，測定細 吸收2_脫氧-葡萄糖量。 斤 其結果，添加明曰葉根乙醇萃取部分區分與陰性對照相 比1父’得到與添加騰島素區分相同2_脫氧_Π，2」η(ν) 糖吸收之促進作用。而，同時添加胰島素區分比單獨添加 騰島素區分與單獨添加明曰葉根乙醇萃取部分區分，有促 進動萄糖吸收。即’同時添加明日葉根乙醇萃取部分和騰 島素’可相乘增加葡萄糖吸收促進作用。將之表示為圖" 。圖14之橫軸表示各樣品，縱軸表示2·脫氧_Π，2_3Η(Ν 葡萄糖量（dpm)。 實施例21騰島素刺激被明日葉根部乙料取部分分化誘 導之脂肪細胞促進葡萄糖吸收 得到實施例14所調製明曰葉根乙醇萃取部分分化誘之脂 肪細胞後，認證可否在騰島素刺激下促進該細胞葡萄糖吸 收0 即’作爲樣品，設定添加终濃度為〇 〇5%明曰葉根乙醇萃 取部分二甲基亞溶液區分。且，設定添加^之^㈣月夷 島素（TaKaRa Bi。社製）為陽性對照。其後，除與添加地塞 米松同時間添加終濃度為〇·5福3_丙丁基·"基黃嗓呤 外，按照實施例3之方法為準進行培養基和樣品之交換得 到明日葉根乙醇萃取部分或騰島素所分化誘導之成熟脂肪 87298 -38- 200417366 細胞。 八後，以貫施例5所記載之方法為準，測定所得成熟脂肪 細胞中胰島素刺激下細胞内2_脫氧葡萄糖吸收量。 P對各個成熟脂肪細胞，設定不添加胰島素區分或添 〜辰度為1 gg/mL胰島素區分。然後，同樣測定細胞内所 吸收2-脫氧葡萄糖量。 其結果’於明日葉根乙醇萃取部分所分化誘導之成熟脂 肪、屈胞’與胰島素所分化誘導之成熟脂肪細胞一樣，在胰 島素刺激下，均促進2-脫氧…葡萄糖吸收。即， 也明由明日葉根乙醇萃取部分分化誘導之成熟脂肪細胞， 有胰島素刺激葡萄糖吸收之促進。將之表示為圖丨5。圖i 5 之h轴表不各樣品，縱軸表示2_脫氧葡萄糖量 (dpm) 〇 實施例22調製明曰葉莖葉萃取部分 於2 g明曰葉莖葉乾燥粉末中添加4〇化乙乙醇，在室溫萃 取3 0分鐘’離心分離分爲萃取液和殘渣。之後對其殘渣以 3 0 mL同溶劑反復萃取操作2回。收集所得萃取液以旋轉蒸 館器/辰縮。最終，溶解於1 mL二曱基亞中，得到明日葉莖 葉乙醇萃取部分。 貫％例23藉由明日葉莖葉萃取部分分化誘導為脂肪細胞 貫知例2 2中所調製明日葉莖葉乙醇萃取部分之分化為成 熟脂肪細胞之分化誘導作用（類胰島素所用），以實施例3之 方法為準測定。 即’作爲樣品，各加樣孔中添加終濃度為〇 2%，0.066% 87298 -39- 200417366 ^•022%明日葉莖葉乙醇萃取部分二甲基亞溶液。且，設 疋添：4 μΑ 5 mg/mL胰島素(TaK心趴棟製)水溶液為陽 1*生對’添加二甲基亞區分為陰性對照。其後，與實施例3 所記載方法相同，進行培養基與樣品之交換，於添加樣品7 曰後測定細胞中三酸甘油脂量。 其結果，添加各濃度明日葉莖葉乙醇萃取部分，均誘導 三酸甘油脂合成十明曰葉莖葉乙醇萃取部分有分化為 成熟脂肪細胞之分化誘導作用。將之表示為圖16。圖16之 橫軸表示各樣品，縱軸表示三酸甘油脂生合成量（㈣叫。 實施例24調製明日葉根乙醇萃取部分 於2〇〇 g明日葉根乾燥粉末中添加i升乙醇，在 73 及引過濾後分爲乙醇萃取液與殘渣。之後對其殘 潰以1升同溶劑反復萃取操作…。收集所得乙醇萃取液以 旋轉蒸餾器漢縮。所得濃縮物溶解於100mL橄欖油，調製 明曰葉根乙醇萃取部分。 實施例25調製明曰葉黃色汁液衍生之試料 切斷明日葉莖部’從切斷面採取黃色汁液。將所得黃色 汁液過遽，.冷;東乾燥’得到城燥粉末。添加橄禮油至1〇社 ’調製明日葉黃色汁液衍生之試料。 實施例26明日葉衍生之處理物之糖尿病改善效果 用πf糖尿病模型小鼠研究實施例24所#寻明日葉根部乙 醇萃：部分以及實施例25所得明日葉黃色汁液衍生之試料 之病態改善效果。將雌性丨丨週齡KK_Ay小鼠（日本aea社製） 每群5只’進行實驗。-日強制經口投與5mL/kg懸濁溶 87298 -40- 200417366 解於撖棍油之各樣品.對照群同樣投與5社々撖欖油。投 與開始前日和7日後從小鼠尾靜脈採血，用簡易血糖特定系 統 ACCU-CHEKC〇mr)acti"Ri^i> ^. p (R〇che Diagnostics株式會社）測定 企糖值。投與明曰葉根部乙醇萃取部分與明曰葉普色汁液 衍生之試料均明顯下降血糖值。且，實驗期間，並無體重 以及其他一般症狀之變化。 產業上之利用可能性 由本發明，提供包含繳形花科植物衍生之處理物為有效 成分，伴隨胰島素量或腌lie 句I里次胰島素反應失常之疾病之治療用或% 預防用醫藥、食品、飲料或飼料。該醫藥作爲對糖尿病或 肥滿症等伴隨騰島素量或騰島素反應失常之疾病之治療劑 或豫防劑有用。且，該食品或飲料，可作爲曰常飲食品攝 取’使改善伴隨騰島素量或騰島素反應失常之疾病症狀成 爲可能。所以’包含繳形花科植物衍生之處理物之機能性 飲食品藉由其類騰島素作用，為可維持生命體恆常性之有 用機能性飲食品。且’本發明還提供包含繳形花科植物衍 生之處理物之類騰島素作用劑，該類騰島素作用劑對騰島 素機能研究，篩選與騰島素相關疾病用醫藥有價值。且， 本發明還提供包含繳形花科植物衍生之處理物之細胞内葡 词糖吸收促進劑’該葡萄糖吸收促進劑對治療或預防需要 細胞内葡萄糖吸收促進作用之疾病之治療或預防，該疾病 之治療或預防用食品、飲料或飼料之製造，篩選需要葡萄 糖吸收促進作用之相關疾病之藥物有價值。且，本發明還 提供包含繳形花科植物衍生之處理物之脂肪細⑯分化誘導 87298 -41- 200417366 劑，该分化誘導劑對治療或預防需要脂肪細胞分化作用 疾病之治療或預防，該疾病治療或預防用食品、飲料=7 料之製造，篩選需要該分化誘導作用之相關疾病 2 價值。 市物有 【圖式簡單說明】 圖1為表示明日葉根萃取部分分化誘導之脂肪細胞三酽 甘油脂生合成量。 —次 圖2為表示明日葉根部萃取部分分部分餾液3、*分化誘導 之脂肪細胞三酸甘油脂生合成量。 圖3為表示明日葉根萃取部分之葡萄糖吸收促進作用。 圖4為表示明曰葉葉子萃取部分分化誘導之脂.肪細胞三 酸甘油脂生合成量。 圖5為表示芹菜葉子萃取部分分化誘導之脂肪細胞三酸 甘油脂生合成量。 圖ό為表示芹菜葉子萃取部分之葡萄糖吸收促進作用。 圖7為表示荷蘭芹萃取部分分化誘導之脂肪細胞三酸甘 油脂生合成量。 圖8為表示荷蘭芹萃取部分之葡萄糖吸收促進作用。 圖9為表示明曰葉根萃取部分分化誘導之脂肪細胞三酸 甘/由脂生合成量。 圖10為表示明日葉根萃取部分之葡萄糠吸收促進作用。 圖11為表示明日葉葉子萃取部分之萄糖吸收促進作用。 圖12為表示明日葉根萃取部分分餾液之葡萄糖吸收促進 作用。 87298 -42- 200417366 圖13為表示細胞鬆弛素B對明曰葉根乙醇萃取部八 萄糖吸收促進作用之妨礙作用。 ;^ 圖14為表㈣日隸乙料取部分與 收促進作用之相乘效果。 葡减及 導：:旨5:Γ示胰島素刺激對明曰葉根乙醇萃取部分分化誘 曰、”田胞中葡萄糖吸收促進作用。 圖1 6為表- 心廿、Α匕&不明日葉莖葉萃取部分分化誘導之脂肪細胞三 /由知生合成量。 %

87298 -43-

Claims (1)

1. 200417366 拾、申請專利範圍：

   2. 3. 一種伴隨胰島素量或胰島$ ^ 鬲京反應失常之疾病之治療劑 或預防劑，其特徵在於含有 ^ ^ 虿、，散形化科植物衍生之處理物 為有效成分。 如申請專利範圍第1項之治療 欲y α預防劑，其中繳形花 科植物為明曰葉、芹菜或荷蘭芹。 -種類姨島素作用劑，其特徵在於含有缴形花科植物衍 生之處理物為有效成分。 4.如申請-專利範圍第3項之類胰島素作用劑，其中繳形花 科植物為明曰葉、芹菜或荷蘭芹。 5· -種伴隨胰島素量或胰島素反應失常之疾病之治療用 或預防用食品、飲料或飼料’其特徵在於包含繳形花科 植物衍生之處理物為有效成分。 6·如申凊專利範圍第5項之食品、飲料或飼料，其中繳形 花科植物為明曰葉、芹菜或荷蘭芹。 ' 7· 一種細胞内葡萄糖吸收促進劑，其特徵在於包含繳形花 科植物衍生之處理物為有效成分。 8 ·如申％專利範圍第7項之細胞内葡萄糖吸收促進劑，其 中繳形花科植物為明日葉、芹菜或荷蘭芹。 9· 一種脂肪細胞分化誘導劑，其特徵在於包含繳形花科植 物衍生之處理物為有效成分。 iO·如申請專利範圍第9項之分化誘導劑，其中繳形花科植 物為明曰葉、芹菜或荷蘭芹。 87298