KR20240077110A - 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 이상지질혈증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents
청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 이상지질혈증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 이상지질혈증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따르면 헤스페리딘 함량이 현저히 증가된 청귤 과피 추출물을 제조할 수 있다. 본 발명의 방법은 고전압 펄스 전기장 처리를 위해 고압 장치 등 고가의 장비가 구비될 필요가 없고, 처리시간이 수초 또는 수분 미만으로 매우 짧으며, 회분식은 물론 연속식으로 작동하는 것이 가능하므로 지금까지 공지된 기술에 비하여 상용화에 유리하다. 또한 상기 헤스페리딘 함량이 증가된 청귤 과피 추출물은 식품 조성물, 사료 조성물 또는 화장료 조성물의 제조에 유용하게 이용될 수 있다.
본 발명에 따르면 헤스페리딘 함량이 현저히 증가된 청귤 과피 추출물을 제조할 수 있다. 본 발명의 방법은 고전압 펄스 전기장 처리를 위해 고압 장치 등 고가의 장비가 구비될 필요가 없고, 처리시간이 수초 또는 수분 미만으로 매우 짧으며, 회분식은 물론 연속식으로 작동하는 것이 가능하므로 지금까지 공지된 기술에 비하여 상용화에 유리하다. 또한 상기 헤스페리딘 함량이 증가된 청귤 과피 추출물은 식품 조성물, 사료 조성물 또는 화장료 조성물의 제조에 유용하게 이용될 수 있다.
Description
본 발명은 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 이상지질혈증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
비만은 과다한 체지방 축적으로 인해 건강에 위협을 주는 일종의 질병으로 정의될 수 있다. 국제비만전문위원회(International Obesity Task Force, IOTF)의 보고에 의하면 세계인구의 1/4을 차지하는 약 17 억의 인구가 체중을 감량할 필요가 있다고 하여 선진국과 개발도상국 모두에게 심각한 사회문제로 대두되고 있다.
급증하는 생활습관병(성인병)의 30 ~ 60%가 비만에 기인하며 일본의 통계로는 5 Kg 체중을 감소시키는데 의료비가 2조엔 (한화 25조원)이 필요하다는 분석이 나와 있으며, 과체중, 비만의 출현율은 4 ~ 5인당 1명인데 금후에도 증가가 계속될 예상이다. 이런 경향은 미국, 유럽에서는 더욱 심각한 국가적 문제이며, 한국에서도 식생활이 서구화되어 소아비만 출현율이 급격히 증가하고, 생활이 윤택하여 고지방, 고칼로리 식사를 하는 기회는 많아졌으나 운동 부족 등 섭취한 에너지보다 소모하는 에너지가 현저히 작으므로 인해 비만자가 급증하고 있다. 또한, 젊은 여성은 미용효과를 위해, 결혼 후 여성들 또한 체중과다 내지 비만자가 많아 젊었을 때와 같은 몸매를 유지하기 위해 대단히 노력하고 있다.
항비만 소재로는 식욕억제제로 덱스플렌플루라민(Dexflenfluramine), 페닐알라닌(Phenylalanine), 타이로신(Tyrosine)과 메싸이오닌(Methionine), 지방결합제 (흡수억제)로 올리스타트(Orlistat), 키토산, 지방연소제로 실부트라민(Silbutramine), 에페드린(Ephedrine), 카페인과 지실, 가르시니아 캄보지아 과실, L-카르니친, 장기능을 조절하는 식이섬유: 차천자피, 글루코만난 각락토만난, 혈당 안정화 기능을 하는 크롬피콜린산(Chromiumpicolinate) 등이 있다. 그러나, 이들 소재들은 약효가 다소 인정되나, 일시적 체중감소, 신속한 체중손실, 약물들에 의한 심장, 혈압, 신경계에 대한 부작용이 있다.
청귤(unripe citrus unshiu)은 감귤(Citrus unshiu, 온주밀감)의 미성숙 과일을 의미하며, 과실 형성 후 3 내지 5개월이 경과된 미성숙한 과실을 의미한다. 성숙한 감귤은 일반적으로 과피가 노란색에서 주황색을 띠는 것에 비하여 본 발명의 청귤은 과피가 진한 녹색을 띠며, 성숙 감귤에 비하여 과육이 단단하다는 특징이 있다. 본 발명에서 용어 "청귤", "감귤 미성숙과" 및 "미성숙 감귤"은 혼용하여 사용될 수 있다. 청귤에는 폴리페놀 및 플라보노이드 성분이 완숙 감귤에 비해 2 내지 32배 함유되어 있다. 특히, 청귤은 항산화, 항염, 항암, 항비만 효과가 있는 플라보노이드(비타민 P) 성분이 완숙 감귤에 비해 2배 이상 많이 함유되어 있다.
한편, 상기 청귤의 과피에는 다양한 종류의 플라보노이드, 펙틴, 오일 등이 다량 함유된 것으로 알려져 있다.
이 중에서, 헤스페리딘(Hesperidin)은 감귤류 과피에 존재하는 플라보노이드인 비타민 P의 일종으로서, 콜라겐 생성을 돕고 항염증 작용, 노화에 관련된 질병에 효과가 있으며, 관절 및 연골에 영향을 준다고 알려져 있다(일본등록특허 제4838772호, 일본공개특허 제2005-255527호). 또한, 헤스페리딘은 모세혈관 강화, 투과성(permeability) 감소, 혈압 강하, 혈중 콜레스테롤 강하, 항혈소판 응집(antiplatelet aggregation), 항염증 및 항바이러스 작용을 한다고 알려져 있다(Meyer, O. C.,Angiology,45, 579-584(1994); Struckmann J. R., et al.,Angiol.,45, 419-428(1994); Matsubara, Y., et al.,Japan Organic Synthesis Chem. Association Journal.,52, 318-327(1994, Mar.); Galati E. M., et al.,Farmaco.,51(3), 219-221(1996, Mar.); Monforte MT., et al.,Farmaco.,50(9), 595-599(1995, Sep.); JP 95-86929; JP 95-86930; Chung, M. I., et al.,Chin. Pharm. J.(Taipei).,46, 429-437(1994, Nov.); Galati, E. M., et al.,Farmaco.,40(11), 709-712(1994, Nov.); and Emim J. A., et al.,J. Pharm. Pharmacol.,46(2), 118-122(1994)).
이와 같이, 청귤에 대한 연구는 많이 알려져 있으나 청귤 과피에 대한 연구는 미비한 실정이며, 활용도가 매우 낮아 거의 버려지고 있는 실정이다. 특히, 청귤 과피를 활용한 비만 또는 이상지질혈증의 개선, 예방 또는 치료를 효과적으로 개선할 수 있는 조성물에 대해서는 전혀 공지된 바 없다.
따라서, 본 발명자들은 천연물로부터 비만 또는 이상지질혈증을 효과적으로 개선할 수 있는 새로운 조성물을 개발하고자 예의 노력하였고, 그 결과 본 발명자들은 청귤 과피 추출물이 인체에 대해 안정하고 부작용이 없으며, 종래 비만 억제 물질 혹은 이상지질혈증 치료물질과 동등하거나 그 이상의 효능을 갖는 것을 확인함으로서, 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 비만 또는 이상지질혈증의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 비만 또는 이상지질혈증의 예방 또는 개선용 사료 첨가제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 비만 또는 이상지질혈증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 항비만 또는 항이상지질혈증 활성을 나타내는 청귤 과피 추출물의 제조방법을 제공하는 것이다.
상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 이상지질혈증의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 청귤 과피 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출된 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 혼합용매는 20 내지 95 부피%의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 추출은 40 내지 80 ℃의 추출온도로 수행되는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 청귤 과피 추출물은, 풋귤 과피를 액상 매질이 담긴 회분식 또는 연속식 처리 용기에 넣고 고전압 펄스 전기장(high voltage pulsed electric field; PEF) 처리를 수행한 후 추출된 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 PEF 처리는 전기장 세기 0.1 내지 10 kV/cm, 펄스 빈도 50 내지 300 Hz, 에너지 1 내지 50 kJ의 고전압 펄스를 0.1초 내지 100초 동안 1 내지 50회 적용한 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 PEF 처리는 전기장 세기 1.5 내지 3.5 kV/cm, 펄스 빈도 110 내지 150 Hz, 에너지 20 내지 40 kJ로 수행된 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 이상지질혈증의 예방 또는 개선용 사료 첨가제 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 이상지질혈증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 (1) 청귤 과피를 건조하는 단계; 및 (2) 상기 건조된 청귤 과피를 추출하는 단계;를 포함하는 항비만 또는 항이상지질혈증 활성을 나타내는 청귤 과피 추출물의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, (1) 단계의 건조는 청귤 과피의 수분함량이 10 중량% 이하가 되도록 열풍건조하는 것일 수 있다.
본 발명의 조성물은 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 함유하는 것으로써, 상기 조성물은 체중과 체지방의 증가를 감소시키며, 혈중 총콜레스테롤, 중성지방(Triglyceride), LDL 수치를 낮추고, 혈청 내 아디포넥틴 분비를 증가시키며, 혈청 내 렙틴 분비를 감소시키는 효과를 갖는다. 이에 따라 본 발명의 조성물은 비만의 치료와 더불어 이상지질혈증도 예방, 개선 또는 치료할 수 있으므로, 비만 또는 이상지질혈증 예방, 개선 또는 치료를 위한 기능성 식품 및 약제 등의 제조에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에서 청귤 과피 추출물의 헤스페리딘 함량을 측정하기 위한 헤스페리딘 표준품의 표준곡선을 나타내는 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명에서 '비만'이란, 단순히 체중이 많이 나가는 것이 아니라 체지방이 과도하게 축적된 상태를 말한다. 겉으로 정상체중으로 보여도 체지방 비율이 높으면 비만이라고 할 수 있다는 의미이다. 보통 비만을 판정하는 방법은 체질량지수 (BMI)를 이용하게 되는데 23~24.9인 경우에 과체중, 25~29.9까지를 경도비만으로 판정하며, 30~34.9는 중등도비만, 35 이상일 경우는 고도비만으로 판정하고 있다. 비만은 한가지 원인보다는 여러 원인이 복합적으로 작용하여 발생하는데, 서구화된 식습관을 포함하여 잘못된 식습관과 활동량 감소, 정서적 요인, 유전적 요인 등을 들 수 있으며 이렇게 발생한 비만은 결국 고지혈증, 당뇨병, 고혈압 등 만성질환의 발생 위험을 높이게 된다.
본 발명에서 ‘이상지질혈증(dyslipidemia)’이란, 혈중에 총콜레스테롤, LDL(Low density lipoprotein) 콜레스테롤, 중성지방이 증가된 상태이거나, HDL(High density lipoprotein) 콜레스테롤이 감소된 상태를 말한다. 대부분 비만, 당뇨병, 음주와 같은 원인에 의해서 이상지질혈증이 발생할 수 있으나, 유전적 요인으로 혈액 내 특정 지질이 증가 되어 이상지질혈증을 보이는 경우도 있다.
상기 이상지질혈증은 혈장 내 총 콜레스테롤, LDL(Low density lipoprotein) 콜레스테롤 및 트리글리세라이드(Triglyceride)가 증가되거나 HDL(High density lipoprotein) 콜레스테롤의 감소로 유발되는 모든 질환을 의미하고, 구체적으로는 고지혈증, 고콜레스테롤혈증, 및 고중성지방혈증을 포함한다.
상기 총콜레스테롤은 혈장에 포함된 콜레스테롤의 총량을 의미하는 것으로 약 1/3이 유리콜레스테롤이며 나머지가 콜레스테롤에스테르로서 존재한다. 총콜레스테롤은 가족성 고콜레스테롤혈증 외에 당뇨병, 내분비질환, 간·담도계질환, 신장질환, 비만 등의 경우에 증가하고, 갑상선기능항진증, 간경변, 만성간염 등에서 저하되는 것으로 알려져 있다.
상기 LDL(Low density lipoprotein) 콜레스테롤은 저밀도 지질 단백질에 함유된 콜레스테롤의 의미하며, 일반적으로 LDL 콜레스테롤이 170 mg/dL을 넘으면 고LDL 혈증이 있다고 본다.
상기 중성지방(Triglyceride)은 지질의 한 종류로 글리세린 한 분자에 지방산이 3분자가 에스터 결합을 하는 구조를 갖고 있다. 장에서 흡수된 지질에 포함되어 있거나 간에서 생성되며, 이차적인 원인에 의한 상승이 흔하게 나타나는데 비만, 운동부족, 흡연, 과량의 음주, 탄수화물의 다량섭취 등과 당뇨병, 만성신부전, 신증후군 등의 질환 및 베타차단제, 스테로이드, 에스트로겐 등의 약제에 의해서 상승할 수 있다고 알려져 있다.
상기 HDL(High density lipoprotein) 콜레스테롤은 고밀도 지질 단백질에 함유된 콜레스테롤을 의미하며, 혈장의 HDL 콜레스테롤 농도는 보통 40~60 mg/dL이다. 여성이 남성보다 약간 높은 값을 나타내며, 식사, 운동, 각종 질병, 흡연, 약물투여 등이 농도에 영향을 줄 수 있다.
일반적으로, 심장마비나 뇌졸중의 위험요인이 없는 사람들의 콜레스테롤과 중성지방의 정상범위 수치는 총콜레스테롤 200 mg/dL 이하, LDL 콜레스테롤 130 mg/dL 이하, HDL 콜레스테롤 60 mg/dL 이상, 중성지방 150 mg/dL 이하이며, 적어도 2회 이상 측정에서 이 중 하나라도 이상이 발견되면 이상지질혈증에 해당하는 것으로 진단된다.
본 발명의 일 측면은, 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 이상지질혈증의 예방 또는 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서, 청귤은 충분히 익지 않은 감귤 미숙과(未熟果)를 의미하며, “풋귤”이라고 칭할 수도 있다.
상기 청귤 과피 추출물은 청귤 과피를 수분함량이 10 중량% 이하가 되도록 열풍건조한 것일 수 있다.
상기 청귤 과피 추출물은 청귤 과피 및 추출용매를 1 : 5 내지 20, 바람직하게는 1 : 5 내지 15, 더욱 바람직하게는 1 : 8 내지 12의 중량비로 혼합하고 40 내지 80 ℃, 바람직하게는 55 내지 75 ℃, 더욱 바람직하게는 50 내지 70 ℃에서 1 내지 10시간, 바람직하게는 1 내지 5시간 동안 1 내지 3회 추출하여 제조한 것일 수 있다. 상기 청귤 과피와 추출용매의 중량비가 상기 범위를 벗어나는 경우에는 추출물에 청귤 과피의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있다.
추출온도가 상기 하한치 미만인 경우에는 청귤 과피의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있으며, 상기 상한치 초과인 경우에는 독성물질이 발생할 수 있다.
상기 각 추출물을 추출하는 추출용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매일 수 있다. 상기 저급알코올로는 20 내지 95 부피%, 바람직하게는 20 내지 80 부피%, 더욱 바람직하게는 20 내지 40 부피%의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올을 들 수 있다.
상기 추출용매로는 특별히 한정하는 것은 아니지만 20 내지 40%의 에탄올 수용액으로 추출된 추출물이 비만 또는 이상지질혈증의 예방, 개선 또는 치료에 바람직하게 작용한다.
상기 청귤 과피 추출물은 청귤 과피를 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물을 제2의 유기용매로 재분획한 분획물일 수 있다. 바람직하게는, 청귤 과피 추출물은 청귤 과피의 추출물을 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올 또는 물로 재분획한 분획물일 수 있다.
본 명세서에서 청귤 과피를 언급하면서 사용되는 용어 “추출물”은 추출용매를 처리하여 얻은 조추출물뿐만 아니라 청귤 과피 추출물의 가공물도 포함한다. 예를 들어, 청귤 과피 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
또한, 본 발명의 청귤 과피 추출물은 광의로는 청귤 과피를 동물에게 투여할 수 있도록 제형화된 청귤 과피 가공물, 예컨대, 청귤 과피 분말도 포함하는 의미를 갖는다. 비록 본 발명에서 청귤 과피 추출물로 실험을 진행하긴 하였으나, 청귤 과피 가공물과 같은 형태로도 목적하는 효과를 달성할 수 있음은 당업자라면 예상 가능할 것이다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 청귤 과피 추출물은, 풋귤 과피를 액상 매질이 담긴 회분식 또는 연속식 처리 용기에 넣고 고전압 펄스 전기장(high voltage pulsed electric field; PEF) 처리를 수행한 후 추출된 것일 수 있다.
상기 PEF 처리는 전기장 세기 0.1 내지 10 kV/cm, 펄스 빈도 50 내지 300 Hz, 에너지 1 내지 50 kJ의 고전압 펄스를 0.1초 내지 100초 동안 1 내지 50회 적용한 것일 수 있고, 바람직하게는 전기장 세기 1.5 내지 3.5 kV/cm, 펄스 빈도 110 내지 150 Hz, 에너지 20 내지 40 kJ로 수행된 것일 수 있다.
PEF 처리 조건이 상기 범위를 만족하는 경우, 청귤 과피 추출물의 비만 또는 이상지질혈증에 대한 개선 또는 치료 효능이 현저히 높아지게 되고, 상기 PEF 처리 조건 중 하나라도 만족하지 않는 경우에는 그러한 효과가 나타나지 않게 된다.
하기 본 발명의 실시예에서는, 본 발명의 청귤 과피 추출물을 섭취하는 경우 체중과 체지방의 증가가 감소되고, 혈중 총콜레스테롤, 중성지방(Triglyceride), LDL 수치가 낮아지며, 혈청 내 아디포넥틴 분비가 증가하고, 렙틴 분비는 감소함으로써, 비만 또는 이상지질혈증의 예방, 개선 또는 치료에 바람직하게 작용하는 것을 확인하였다.
한편, 본 명세서에서 용어 “유효성분으로 함유하는”이란 청귤 과피 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명의 청귤 과피 추출물의 1일 투여량은, 10 내지 2000 mg/kg일 수 있으며, 바람직하게는 20 내지 1500 mg/kg일 수 있고, 더욱 바람직하게는 20 내지 1000 mg/kg일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 30 내지 500 mg/kg일 수 있고, 더욱 바람직하게는 50 내지 500 mg/kg일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 50 내지 250 mg/kg일 수 있다. 본 발명의 청귤 과피 추출물의 투여량의 상기 하한치 미만인 경우에는 비만 또는 이상지질혈증의 개선 또는 치료 효과가 원하는 정도로 나타나지 않을 수 있고, 상기 상한치를 초과하는 경우에는 투여량이 증가하는 만큼 비만 또는 이상지질혈증의 개선 또는 치료 효과가 증가하지 않을 수 있다. 청귤 과피 추출물은 천연물로서 과량 투여하여도 인체에 부작용이 없으므로 본 발명의 조성물 내에 포함되는 청귤 과피 추출물의 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.
본 발명의 용어 "예방"이란, 상기 비만 또는 이상지질혈증을 억제시키거나 또는 지연시키는 모든 것을 의미한다.
본 발명의 용어 "치료"란, 달리 언급되지 않는 한, 상기 비만 또는 이상지질혈증의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미한다.
본 발명의 용어 "개선"이란, 본 발명의 청귤 과피 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 것을 의미한다.
본 발명에 따른 식품 조성물은 식품학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 분말, 과립, 정제, 캡슐 등으로 제제화하여 기능성 식품으로 이용조할 수 있다. 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 식품 조성물은 예를 들어, 음료류, 알코올 음료류, 과자류, 다이어트바, 유제품, 육류, 초코렛, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류 등일 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 유효성분으로서 청귤 과피 추출물뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제와 음료류로 제조되는 경우에는 본 발명의 청귤 과피 추출물 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 및 각종 식물 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
또한, 본 발명의 다른 측면은 상기 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 이상지질혈증의 개선, 예방 또는 치료용 식품 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공한다. 건강기능식품이란, 청귤 과피 추출물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있다. 이와 같이 하여 얻어지는 본 발명의 건강기능식품은, 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 매우 유용하다. 이와 같은 건강기능식품에 있어서의 청귤 과피 추출물의 첨가량은, 대상인 건강기능식품의 종류에 따라 달라 일률적으로 규정할 수 없지만, 식품 본래의 맛을 손상시키지 않는 범위에서 첨가하면 되며, 대상 식품에 대하여 통상 0.01 내지 50 중량%, 바람직하기로는 0.1 내지 20 중량%의 범위이다. 또한, 환제, 과립제, 정제 또는 캡슐제 형태의 건강기능식품의 경우에는 통상 0.1 내지 100 중량% 바람직하기로는 0.5 내지 80 중량%의 범위에서 첨가하면 된다. 한 구체예에서, 본 발명의 건강기능식품은 환제, 정제, 캡슐제 또는 음료의 형태일 수 있다.
또한, 본 발명의 또 다른 측면은 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 또는 이상지질혈증의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 약학 조성물은 상기 유효 성분 이외에 약학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.
상기 약학 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약학 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.
상기 약학 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다.
액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여이다.
본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 약학 조성물의 1일 투여량은 0.001-10 g/㎏일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 이상지질혈증의 예방 또는 개선용 사료 첨가제 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 용어, '사료 첨가제'는 영양소 보충 및 체중감소 예방, 사료 내 섬유소의 소화 이용성 증진, 유질개선, 번식장애 예방 및 수태율 향상, 하절기 고온 스트레스 예방 등 다양한 효과를 목적으로 사료에 첨가하는 물질을 포함한다. 본 발명의 사료 첨가제 조성물은 사료 관리법상의 보조 사료에 해당하며, 탄산수소나트륨, 벤토나이트(bentonite), 산화마그네슘, 복합광물질 등의 광물질제제, 아연, 구리, 코발트, 셀레늄 등의 미량 광물질인 미네랄제제, 케로틴, 비타민 A D, E, 니코틴산, 비타민 B 복합체 등의 비타민제, 메티오닌, 라이신 등의 보호아미노산제, 지방산 칼슘염 등의 보호지방산제, 생균제(유산균제), 효모배양물, 곰팡이 발효물 등의 생균, 효모제 등이 추가로 포함될 수 있다.
본 발명에서 용어 '사료'는, 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분으로, 본 발명에 따른 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 사료 첨가제 조성물은 당업계에 공지된 다양한 형태의 사료로 제조가능하며, 바람직하게는 농후 사료, 조사료 및/또는 특수사료가 포함될 수 있으나, 이로 한정되지 않는다.
농후사료에는 밀, 귀리, 옥수수 등의 곡류를 포함하는 종자열매류, 곡물을 정제하고 얻는 부산물로서 쌀겨, 밀기울, 보릿겨 등을 포함하는 겨류, 콩, 유체, 깨, 아마인, 코코야자 등을 채유하고 얻는 부산물인 깻묵류와 고구마, 감자 등에서 녹말을 뺀 나머지인 녹말찌꺼기의 주성분인 잔존녹말질류 등의 찌꺼기류, 어분, 물고기찌꺼기, 어류에서 얻은 신선한 액상물(液狀物)을 농축시킨 것인 피시솔루블(fish soluble), 육분(肉粉), 혈분, 우모분, 탈지분유, 우유에서 치즈, 탈지유에서 카제인을 제조할 때의 잔액인 훼이(whey)를 건조한 건조훼이 등의 동물질사료, 효모, 클로렐라, 해조류가 있으나 이에 제한되지 않는다.
조사료에는 야초, 목초, 풋베기 등의 생초(生草)사료, 사료용 순무, 사료용 비트, 순무의 일종인 루터베어거 등의 뿌리채소류, 생초, 풋베기작물, 곡실(穀實) 등을 사일로에 채워 놓고 젖산발효시킨 저장사료인 사일리지(silage), 야초, 목초를 베어 건조시킨 건초, 종축용(種畜用) 작물의 짚, 콩과 식물의 나뭇잎이 있으며, 이에 제한되지 않는다. 특수사료에는 굴껍데기, 암염 등의 미네랄 사료, 요소나 그 유도체인 디우레이드이소부탄 등의 요소사료, 천연사료원료만을 배합했을 때 부족하기 쉬운 성분을 보충하거나, 사료의 저장성을 높이기 위해서 배합사료에 미량으로 첨가하는 물질인 사료첨가물, 식이보조제가 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 상기 비만 또는 이상지질혈증의 예방 또는 개선용 사료 첨가제 조성물 당업계에 공지된 다양한 사료 제조방법에 따라 적절한 유효 농도 범위에서 청귤 과피 추출물을 첨가하여 제조 가능하다.
본 발명에 따른 사료 첨가제 조성물은 비만 또는 이상지질혈증의 예방 또는 개선을 목적으로 하는 개체이면 제한 없이 적용가능하다. 예를 들면, 소, 말, 돼지, 염소, 양, 개, 고양이, 토끼 등과 같은 비인간동물, 조류 및 어류 등 어느 개체에도 적용이 가능하다.
또한, 본 발명의 또 다른 측면은, (1) 청귤 과피를 건조하는 단계; 및 (2) 상기 건조된 청귤 과피를 추출하는 단계;를 포함하는 항비만 또는 항이상지질혈증 활성을 나타내는 청귤 과피 추출물의 제조방법에 관한 것이다.
(1) 청귤 과피 건조 단계
먼저, 청귤 과피를 건조한다.
상기 청귤 과피는 건조하기 전에 세척 단계를 거칠 수 있다. 상기 세척 단계는 청귤 과피의 외부면에 묻어 있는 흙 등 이물질을 제거하는 단계이며, 청귤 과피에 이물을 제거하는 통상적인 방법이 사용될 수 있다. 세척된 청귤 과피는 물기를 제거한 후 그대로 사용하거나, 형태의 제한 없이 적절한 크기로 절단하여 사용할 수 있다.
상기 건조는 청귤 과피의 수분함량이 10 중량% 이하, 바람직하게는 1 내지 10 중량%, 더욱 바람직하게는 4 내지 8 중량% 이하가 되도록 열풍건조하여 수행될 수 있다.
상기와 같이 청귤 과피를 건조한 후 PEF 처리 또는 추출을 하는 경우 청귤 과피에 함유된 헤스페리딘 함량이 더욱 증대되고, 비만 또는 이상지질혈증에 대한 효능이 더욱 증진되는 효과가 있다.
(1-1) 고전압 펄스 전기장(PEF) 처리 단계
(1) 단계와 (2) 단계의 사이에, (1-1) 상기 건조된 풋귤 과피를 액상 매질이 담긴 회분식 또는 연속식 처리 용기에 넣고 고전압 펄스 전기장(high voltage pulsed electric field; PEF) 처리를 수행하는 단계;를 추가하여 수행할 수 있다.
상기 건조된 청귤 과피를 액상 매질이 담긴 회분식 또는 연속식 처리 용기에 넣고 PEF 처리할 수 있다. 상기 PEF 처리는 미생물의 살균 및 생육억제 효과가 있고, 식물의 세포막에 모공을 형성시켜 세포벽의 파괴를 비가역적으로 유도함으로써 추출 수율과 유효성분 함량을 증대시키는 효과가 있다.
상기 처리 용기에 넣는 청귤 과피는 분쇄 또는 마쇄 공정을 거치지 않은 것이 바람직하다.
상기 액상 매질은 물, 에탄올 또는 이들의 혼합액인 것이 바람직하다.
상기 액상 매질에는 아세트산, 구연산, 젖산 등의 유기산이나 소금 등의 무기염류가 더 첨가될 수 있다.
상기 PEF 처리는 전기장 세기 0.1 내지 10 kV/cm, 펄스 빈도 50 내지 300 Hz, 에너지 1 내지 50 kJ의 고전압 펄스를 0.1초 내지 100초 동안 1 내지 50회 수행될 수 있고, 바람직하게는 전기장 세기 1.5 내지 3.5 kV/cm, 펄스 빈도 110 내지 150 Hz, 에너지 20 내지 40 kJ로 1 내지 30초 동안 1 내지 10회, 더욱 바람직하게는 전기장 세기 2.1 내지 2.9 kV/cm, 펄스 빈도 110 내지 130 Hz, 에너지 25 내지 35 kJ로 5 내지 15초 동안 1 내지 3회 수행될 수 있다.
청귤 과피를 상기 조건으로 PEF 처리하는 경우 청귤 과피에 함유된 헤스페리딘의 함량을 획기적으로 증가시킬 수 있을 뿐만 아니라 비만 또는 이상지질혈증에 대한 효능이 현저히 증진된다. 상기 PEF 처리 시의 전기장 세기, 펄스 빈도, 에너지 및 PEF 처리시간 중 어느 하나라도 상기 하한치 미만인 경우에는 청귤 과피의 비만 또는 이상지질혈증에 대한 효능 증대 효과가 나타나지 않고, 상기 상한치를 초과하는 경우에는 청귤 과피의 비만 또는 이상지질혈증에 대한 효능이 오히려 감소하는 효과가 나타났다.
(2) 추출 단계
다음으로, 상기 PEF 처리를 한 청귤 과피를 추출한다.
본 발명의 청귤 과피는 추출용매와 1 : 5 내지 20, 바람직하게는 1 : 5 내지 15, 더욱 바람직하게는 1 : 8 내지 12의 중량비로 혼합하여 40 내지 80 ℃, 바람직하게는 55 내지 75 ℃, 더욱 바람직하게는 50 내지 70 ℃에서 1 내지 10시간, 바람직하게는 1 내지 5시간 동안 추출한 후 감압농축을 수행하여 추출물을 제조한다. 상기 청귤 과피와 추출용매의 중량비가 상기 범위를 벗어나는 경우에는 추출물에 청귤 과피의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있다.
상기 추출물을 추출하는 추출용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매이다. 상기 저급알코올로는 20 내지 95 부피%, 바람직하게는 20 내지 80 부피%, 더욱 바람직하게는 20 내지 40 부피%의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올을 들 수 있다.
상기 추출용매로는 특별히 한정하는 것은 아니지만 20 내지 40%의 에탄올 수용액으로 추출된 추출물이 비만 또는 이상지질혈증에 대한 효능 증대에 바람직하게 작용한다.
상기 청귤 과피 추출물은 청귤 과피를 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물을 제2의 유기용매로 재분획한 분획물일 수 있다. 바람직하게는, 청귤 과피 추출물은 청귤 과피의 에탄올 추출물을 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올 또는 물로 재분획한 분획물일 수 있다.
본 명세서에서 청귤 과피를 언급하면서 사용되는 용어 “추출물”은 추출용매를 처리하여 얻은 조추출물뿐만 아니라 청귤 과피 추출물의 가공물도 포함한다. 예를 들어, 청귤 과피 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
본 발명의 방법에 따라 PEF 처리를 한 후 추출하여 제조된 본 발명의 청귤 과피 추출물은, 상기 PEF 처리를 하지 않고 추출한 청귤 과피 추출물에 비하여 헤스페리딘 함량이 중량기준으로 2배 이상, 바람직하게는 2 내지 4배, 더욱 바람직하게는 2.5 내지 3.5배 증가된다.
상기와 같이 헤스페리딘 함량이 증가된 본 발명의 청귤 과피 추출물은 특히 비만 또는 이상지질혈증의 예방, 개선 또는 치료에 탁월한 효과가 있다.
또한, 본 발명은 비만 또는 이상지질혈증의 예방, 개선 또는 치료용 의약 또는 식품의 제조를 위한 상기 청귤 과피 추출물의 용도를 제공한다. 상기한 바와 같이 본 발명의 청귤 과피 추출물은 비만 또는 이상지질혈증의 예방, 개선 또는 치료를 위한 용도로 유용하게 이용될 수 있다.
이하, 실시예에 의하여 본 발명을 상세히 설명하겠으나, 다음 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<실시예>
실시예 1: 청귤 과피 추출물의 제조
(1) 세척한 후 물기를 제거한 청귤 과피를 55 ℃에서 48시간 동안 열풍건조하여 수분함량 6.8 중량%가 되도록 하였다.
(2) 상기 건조된 청귤 과피 및 30 %(v/v) 에탄올을 1 : 10의 중량비로 혼합한 혼합물을 60 ℃에서 3시간 동안 추출한 후 여과하였다.
(3) 상기 청귤 과피 추출물을 25 brix로 감압농축한 후 동결건조하였다.
실시예 2: PEF 처리
실시예 1과 동일하게 실시하되, (1) 단계와 (2) 단계의 사이에, (1-1) 상기 건조된 청귤 과피를 고전압 펄스 전기장 처리 장치의 물이 담긴 회분식 처리 용기에 넣고 전기장 2.5 kV/cm, 펄스 빈도 120 Hz, 에너지 30 kJ 및 처리시간 5초의 처리조건에서 1회 PEF 처리하는 단계를 추가하여 청귤 과피 추출물을 제조하였다.
비교예 1: 청귤 과육
실시예 1과 동일하게 실시하되, 청귤 과피 대신 3-5 mm 두께로 슬라이스된 청귤 과육을 이용하여 청귤 추출물을 제조하였다.
비교예 2: 완숙과 과피
실시예 1과 동일하게 실시하되, 청귤 과피 대신 감귤 완숙과 과피를 이용하여 과피 추출물을 제조하였다.
비교예 3: PEF 처리 - 전기장 세기 1.2 kV/cm
실시예 2와 동일하게 실시하되, 전기장 세기를 2.5 kV/cm 대신 1.2 kV/cm로 설정하여 청귤 과피 추출물을 제조하였다.
비교예 4: PEF 처리 - 전기장 세기 3.8 kV/cm
실시예 2와 동일하게 실시하되, 전기장 세기를 2.5 kV/cm 대신 3.8 kV/cm로 설정하여 청귤 과피 추출물을 제조하였다.
비교예 5: PEF 처리 - 에너지양 10 kJ
실시예 2와 동일하게 실시하되, 에너지양을 30 kJ 대신 10 kJ로 설정하여 청귤 과피 추출물을 제조하였다.
비교예 6: PEF 처리 - 에너지양 70 kJ
실시예 2와 동일하게 실시하되, 에너지양을 30 kJ 대신 70 kJ로 설정하여 청귤 과피 추출물을 제조하였다.
<시험예>
시험예 1 : 헤스페리딘 함량 측정
본 발명에 따른 청귤 과피 추출물의 헤스페리딘 함량을 측정하기 위해 HPLC 분석을 실시하였다. 분석시료의 성분을 특정/정량하기 위해 헤스페리딘 표준품(≥ 91.1% HPLC 분석용)을 준비하고, 측정 샘플로 실시예 및 비교예의 추출물을 사용하였다. 상기 표준품 0.1 g을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mL로 정량한 용액을 표준용액으로 하였다. 그리고, 상기 표준용액을 희석하여 1 ~ 50 ㎍/mL가 되도록 한 용액을 검량선용 표준용액으로 하였다. 또한, 상기 측정 샘플 20 mg을 정밀하게 달아 메탄올 1 mL를 가하고 초음파 추출기를 사용하여 30분간 용해시킨 후 PTFE 필터(0.45 ㎛)로 여과하여 HPLC 분석에 사용하였다. 상기 측정 샘플 용액 및 검량선용 표준용액을 하기 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고 얻어진 면적으로부터 검체 중의 유효성분 함량을 산출하였다(도 1).
| 구분 | HPLC 조건 |
| 검출기 | PDA detector (283 nm, 287 nm) |
| 칼럼 | Shim-pack GIS C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) |
| 칼럼 온도 | 35 ℃ |
| 주입량 | 10 ㎕ |
| 이동상 유량 | 1 mL/min |
| 이동상 | 아세토니트릴 : 0.1% 트리플루오로아세트산(water) (Gradient) |
| 표준물질(ppm) | 면적 |
| 3.90625 | 167,092 |
| 15.625 | 659,426 |
| 62.5 | 2,694,834 |
| 125 | 5,389,668 |
| 구분 | 면적 | 농도 | 희석비율(배) | ppm | 함량(%) |
| 실시예 1 | 1123495 | 26.17 | 500 | 13087 | 1.30869 |
| 실시예 2 | 2925500 | 67.94 | 500 | 33969 | 3.39691 |
| 비교예 1 | 101124 | 2.41 | 500 | 1205 | 0.12046 |
| 비교예 2 | 591747 | 14.64 | 500 | 6568 | 0.70682 |
| 비교예 3 | 1152893 | 26.50 | 500 | 13322 | 1.33216 |
| 비교예 4 | 1316475 | 30.57 | 500 | 15287 | 1.52874 |
| 비교예 5 | 1111690 | 25.82 | 500 | 12908 | 1.29086 |
| 비교예 6 | 1603174 | 37.23 | 500 | 18616 | 1.86156 |
상기 표 1을 살펴보면, 본 발명의 실시예 1에 따른 청귤 과피 추출물은 청귤 과육에 대한 비교예 1 및 감귤 완숙과 과피에 대한 비교예 2에 비해 헤스페리딘 함량이 현저히 높은 것을 확인할 수 있다. 또한, 본 발명의 실시예 2에 따른 청귤 과피 추출물은 실시예 1에 비해 헤스페리딘 함량이 현저히 높은 것을 확인할 수 있다.
시험예 2: 동물모델을 이용한 청귤 과피 추출물의 효능 분석
시험방법
(1) 시험목적
6주령 C57BL/6 마우스(수컷) 60 마리를 Samtako Korea로부터 입수한 후 60 % high fat diet(HFD)로 비만을 유도하면서 실시예 및 비교예에 따른 추출물의 투여에 따른 항비만 또는 이상지질혈증 관련 효능을 평가하고자 하였다.
(2) 시험군 구성
각 시험군의 구성은 하기 표 4와 같다.
| 군 | 시험군 | 동물수 | 동물번호 | High Fat Diet (HFD) 농도 | 투여물질(농도) | 투여액량 (μL/g) |
| G1 | 대조군 | 6 | 01 - 06 | control | N/S | 28 |
| G2 | HFD군 | 6 | 07 - 12 | HFD 60 % | N/S | 28 |
| G3 | 실시예 1 | 6 | 13 - 18 | HFD 60 % | 50 mg/kg | 28 |
| G4 | 실시예 2 | 6 | 19 - 24 | HFD 60 % | 50 mg/kg | 28 |
| G5 | 비교예 1 | 6 | 25 - 30 | HFD 60 % | 50 mg/kg | 28 |
| G6 | 비교예 2 | 6 | 31 - 36 | HFD 60 % | 50 mg/kg | 28 |
| G7 | 비교예 3 | 6 | 37 - 42 | HFD 60 % | 50 mg/kg | 28 |
| G8 | 비교예 4 | 6 | 43 - 48 | HFD 60 % | 50 mg/kg | 28 |
| G9 | 비교예 5 | 6 | 49 - 54 | HFD 60 % | 50 mg/kg | 28 |
| G10 | 비교예 6 | 6 | 55 - 60 | HFD 60 % | 50 mg/kg | 28 |
(3) 체중 측정 및 사료섭취량 측정
실험동물의 체중 및 사료섭취량 측정은 7일 간격(D1, D8, D15, D22, D29, D36, D43, D50, D57)으로 측정하였다.
G1 시험군은 일반 사료를 급여하고, 나머지 시험군은 60% HFD를 1회당 100g씩 급여하였다.
(4) 투여물질 투여
투여물질은 생리식염수로 녹여 56일간 매일 경구투여하였고, 투여용량은 체중 측정 후 평균 체중에 맞춰 증가시켰다.
(5) 부검
부검 4시간 전에 절식 후 부검을 진행하였고, 혈액 채취 후 간과 지방을 채취하여 무게를 측정하였다.
(6) 분석
1) 혈액 분석
채혈한 샘플은 12,000 rpm으로 15분간 원심분리하여 혈청을 분리 한 후 분석에 사용하였다. 혈중 지질 대사 및 간독성에 관련된 인자들을 분석하기 위하여, 총콜레스테롤(total cholesterol), 중성지방(triglycerides), HDL, LDL, 글루코스(glucose) 및 크레아티닌(Creatinine)에 대한 상용 진단 시약들 (Bayer, USA)을 활용하여 생화학분석기(DRI-CHEM NX500i, FUJIFILM, Japan)로 측정하였다.
2) 혈청 분석(아디포넥틴, 렙틴)
아디포넥틴 ELISA : Standard와 sample을 희석하여 100 μL를 넣고, Plate cover를 덮은 후 37 ℃에서 1시간 동안 배양하였다. 이후, 각 웰에 있는 액체를 제거하고 3번 세척하였다. 각 웰에 Adiponectin Detection Antibody solution 100 μL를 추가하고, Plate cover를 덮은 후 1시간 동안 배양하였다. 각 웰에 있는 액체를 제거하고 3번 세척하였다. 각 웰에 HRP 100 μL를 추가하고, Plate cover를 덮은 후 1시간 동안 배양하였다. 각 웰에 있는 액체를 제거하고 5번 세척하였다. 각 웰에 Substrate Solution을 100 μL씩 넣고, Plate cover를 덮은 후 암소에서 20분 동안 배양하였다. 각 웰에 stop solution을 100 μL 넣고 450 nm에서 측정하였다.
렙틴 ELISA : Standard와 sample을 희석하여 준비하고 각 웰에 Assay diluent RD 1W를 50 μL씩 넣었다. 각 웰에 Standard, control, sample을 50 μL씩 추가로 넣고, Plate cover를 덮은 후 37 ℃ 에서 2시간 동안 배양하였다. 각 웰에 있는 액체를 제거하고 5번 세척하였다. 각 웰에 Mouse/rat Leptin conjugate을 100 μL씩 넣고, Plate cover를 덮은 후 37 ℃에서 2시간 동안 배양하였다. 각 웰에 있는 액체를 제거하고 5번 세척하였다. 각 웰에 Substrate Solution을 100 μL씩 넣고, Plate cover를 덮은 후 암소에서 30분 동안 배양하였다. 각 웰에 stop solution을 100 μL 넣고 450 nm에서 측정하였다.
(7) 통계
각 시험은 3번에 걸쳐 반복 수행되었으며, 그 결과를 3개 측정값의 평균 ± 표준편차로 나타내었다. 통계적 유의성을 검토하기 위해 대조값에서의 변동을 one-way ANOVA test에 의해 판정하였다.
구체적으로, #, ##, 및 ###는 각각 정상식이군(대조군)과 비교하여 P < 0.05, P < 0.01, 및 P < 0.001에서 유의적 차이가 있음을 의미하고, *, **, 및 ***는 각각 고지방식이군(HFD)과 비교하여 P < 0.05, P < 0.01, 및 P < 0.001에서 유의적 차이가 있음을 의미한다.
시험결과
2-1: 청귤 과피 추출물의 체중 감소 효과
마우스에 57일간 HFD를 급여하면서 7일 간격으로 체중을 측정한 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
| 구분 | D1 | D8 | D15 | D22 | D29 | D36 | D43 | D50 | D57 |
| G1(대조군) | 24.3 | 25.9 | 26.7 | 26.9 | 27.4 | 28.6 | 30.2 | 30.4 | 30.7 |
| G2(HFD) | 24.2 | 26.5 | 29.4 | 32.6 | 35.8# | 36.0# | 40.8# | 42.9# | 45.5# |
| G3 | 24.3 | 25.8 | 26.7 | 28.4 | 28.5* | 30.1 | 33.5* | 35.6* | 37.3* |
| G4 | 24.2 | 25.7 | 26.7 | 27.8 | 27.9* | 29.5* | 31.7* | 32.3* | 33.6* |
| G5 | 24.3 | 26.4 | 29.4 | 32.6 | 35.8 | 36.0 | 40.8 | 42.9 | 45.1 |
| G6 | 24.3 | 26.5 | 29.4 | 32.6 | 35.7 | 35.9 | 40.7 | 41.1 | 41.9 |
| G7 | 24.3 | 25.8 | 26.7 | 28.4 | 28.5 | 30.1 | 33.5 | 35.6 | 37.5* |
| G8 | 24.2 | 25.8 | 26.7 | 28.3 | 28.4 | 30.0 | 33.4 | 35.5 | 37.1* |
| G9 | 24.1 | 25.8 | 26.7 | 28.4 | 28.5 | 30.1 | 33.5 | 35.6 | 36.9* |
| G10 | 24.3 | 25.8 | 26.7 | 28.3 | 28.4 | 30.0 | 33.5 | 35.5 | 36.8* |
상기 표 5를 살펴보면, 고지방식이군(HFD, G2)은 고지방식이로 인해 정상식이군(대조군, G1)에 비해 체중이 유의하게 증가하였고, 본 발명의 유효성분인 청귤 과피 추출물 투여군(G3, G4)은 고지방식이군에 비해 체중이 유의적으로 감소함을 확인할 수 있다.
2-2: 청귤 과피 추출물의 간 및 지방 조직 무게 감소 효과
마우스를 57일간 일반 사료 또는 HFD 사료를 급여하면서 사육한 후 희생시키고, 이를 부검하여 간과 지방 무게를 측정한 결과를 하기 표 6에 나타내었다.
| 구분 | 간 조직 무게(g) | 지방 조직 무게 (g) |
| G1, 대조군 | 1.34±0.67 | 0.64±0.16 |
| G2, HFD | 2.13±1.32# | 2.31±0.67## |
| G3, 실시예 1 | 1.31±0.78* | 1.93±0.24 |
| G4, 실시예 2 | 1.17±0.78* | 0.89±0.15** |
| G5, 비교예 1 | 2.11±0.54 | 2.30±0.34 |
| G6, 비교예 2 | 2.08±0.62 | 2.12±0.23 |
| G7, 비교예 3 | 1.33±0.33* | 1.91±0.11 |
| G8, 비교예 4 | 1.29±0.15* | 1.89±0.17 |
| G9, 비교예 5 | 1.32±0.21* | 1.92±0.08 |
| G10, 비교예 6 | 1.28±0.36* | 1.86±0.19 |
상기 표 6을 살펴보면, 간 조직 및 지방 조직 무게가 정상식이군(대조군, G1)에 비하여 고지방식이군(HFD, G2)에서 유의적으로 증가하였고, 본 발명의 유효성분인 청귤 과피 추출물 투여군(G3, G4)은 간 조직 및 지방 조직 무게가 고지방식이군에 비해 유의적으로 감소함을 확인할 수 있었다.
2-3: 청귤 과피 추출물의 혈액 생화학 분석 결과
마우스를 57일간 일반 사료 또는 HFD 사료를 급여하면서 사육한 후 희생시키고, 혈액을 채취한 후 생화학 분석한 결과를 하기 표 7에 나타내었다.
| 구분 | 총콜레스테롤 (mg/dl) |
Triglyceride (mg/dl) |
HDL(mg/dl) | LDL(mg/dl) | Glucose(mg/dl) |
| G1, 대조군 | 98.7±12.4 | 71.6±23.1 | 59.4±9.7 | 23.5±12.6 | 61.2±16.3 |
| G2, HFD | 182.4±33.6### | 118.7±14.2## | 68.6±32.1# | 66.4±26.1### | 99.8±22.7## |
| G3, 실시예 1 | 147.8±25.2** | 82.6±23.7* | 89.4±12.7* | 42.6±11.9* | 89.4±15.8 |
| G4, 실시예 2 | 115.3±26.1*** | 51.3±18.6*** | 116.3±36.1** | 26.1±15.7*** | 80.1±18.2* |
| G5, 비교예 1 | 180.3±11.5 | 115.6±22.9 | 65.7±21.6 | 65.2±11.4 | 95.1±17.9 |
| G6, 비교예 2 | 175.8±16.8 | 111.7±9.4 | 64.9±12.8 | 64.6±23.6 | 96.3±20.5 |
| G7, 비교예 3 | 142.1±13.5** | 80.4±10.6* | 88.6±16.2* | 41.6±13.2* | 90.5±19.6 |
| G8, 비교예 4 | 138.4±19.7** | 79.3±9.1* | 91.2±10.8* | 39.5±18.4* | 87.4±11.2 |
| G9, 비교예 5 | 150.8±20.6** | 81.6±11.8* | 85.6±12.7* | 43.3±21.5* | 89.9±16.7 |
| G10, 비교예 6 | 136.8±12.3** | 78.2±19.2* | 92.1±20.3* | 38.4±12.7* | 88.2±15.3 |
상기 표 7을 살펴보면, 혈중 총콜레스테롤 함량, 중성지방(Triglyceride) 함량, HDL, LDL, 및 글루코스 함량은 정상식이군(대조군, G1)에 비하여 고지방식이군(HFD, G2)에서 유의적으로 증가하였고, 본 발명의 유효성분인 청귤 과피 추출물 투여군(G3, G4)은 HDL을 제외하고 혈중 총콜레스테롤 함량, 중성지방(Triglyceride) 함량, LDL, 및 글루코스 함량이 고지방식이군에 비해 유의적으로 감소하였다. 특히, 본 발명의 실시예 2에 따른 청귤 과피 추출물 투여군(G4)은 혈중 총콜레스테롤 함량, 중성지방(Triglyceride) 함량, LDL, 및 글루코스 함량이 실시예 1 투여군(G3)에 비해서도 유의적으로 감소함을 확인할 수 있었다.
이와 같은 결과로부터, 본 발명에 따른 청귤 과피 추출물이 이상지질혈증에 대한 예방 또는 개선 효과가 우수함을 알 수 있었다.
2-4: 청귤 과피 추출물의 혈청 내 아디포넥틴 및 렙틴 감소 효과
마우스를 57일간 일반 사료 또는 HFD 사료를 급여하면서 사육한 후 희생시키고, 혈청 분석을 통해 혈청 내 아디포넥틴 및 렙틴 함량을 측정한 결과를 하기 표 8에 나타내었다. 참고로, 렙틴(Leptin)은 주로 지방세포에서 생성, 분비되는 단백질로 여러 가지 대사활동으로 에너지 소비를 증가시켜 비만을 조절한다. 지방세포 내 지방축적량이 높을수록 렙틴의 분비량이 증가하는 것으로 알려져 있으며, 인 비트로(In vitro)에서도 지방세포의 지방축적에 비례하여 렙틴의 분비가 증가한다고 보고되고 있다.
| 구분 | 아디포넥틴 (ng/mL) |
렙틴 (pg/mL) |
| G1, 대조군 | 2.15±0.46 | 121.6±13.2 |
| G2, HFD군 | 1.34±1.26## | 5864.5±952.4### |
| G3, 실시예 1 | 1.67±0.23* | 2913.5±168.7** |
| G4, 실시예 2 | 2.11±0.23** | 1754.3±236.4*** |
| G5, 비교예 1 | 1.38±0.37 | 5614.6±542.6 |
| G6, 비교예 2 | 1.35±0.11 | 5768.4±269.5 |
| G7, 비교예 3 | 1.66±0.43* | 2859.5±461.2** |
| G8, 비교예 4 | 1.52±0.35* | 2763.7±312.8** |
| G9, 비교예 5 | 1.68±0.19* | 2964.8±208.4** |
| G10, 비교예 6 | 1.59±0.28* | 2649.5±421.9** |
상기 표 8을 살펴보면, 혈청 내 렙틴 농도는 정상식이군(대조군, G1)에 비하여 고지방식이군(HFD, G2)에서 유의적으로 증가하였고, 본 발명의 유효성분인 청귤 과피 추출물 투여군(G3, G4)은 혈청 내 렙틴 농도가 고지방식이군에 비해 유의적으로 감소함을 확인할 수 있다. 특히, 본 발명의 실시예 2에 따른 청귤 과피 추출물 투여군(G4)은 혈청 내 렙틴 농도가 실시예 1 투여군(G3)에 비해서도 유의적으로 감소함을 확인할 수 있다.
또한, 혈청 내 아디포넥틴 농도는 정상식이군(대조군, G1)에 비하여 고지방식이군(HFD, G2)에서 유의적으로 감소하였고, 본 발명의 유효성분인 청귤 과피 추출물 투여군(G3, G4)은 혈청 내 아디포넥틴 농도가 고지방식이군에 비해 유의적으로 증가함을 확인할 수 있었다.
이와 같은 결과로부터, 본 발명에 따른 청귤 과피 추출물이 항비만 효과가 우수함을 알 수 있었다.
하기에 본 발명의 청귤 과피 추출물을 함유하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 산제의 제조
실시예에서 얻은 추출물 분말 200 mg
유당
100 mg
탈크
10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
제제예 2. 정제의 제조
실시예에서 얻은 추출물 분말 200 mg
옥수수전분
100 mg
유당
100 mg
스테아린산 마그네슘
2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
제제예 3. 캅셀제의 제조
실시예에서 얻은 추출물 분말 200 mg
결정성 셀룰로오스
3 mg
락토오스
14.8 mg
스테아린산 마그네슘
0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
제제예 4. 주사제의 제조
실시예에서 얻은 추출물 분말 600 mg
만니톨
180 mg
주사용 멸균 증류수
2974 mg
Na2HPO4,12H2O
26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플 당 상기의 성분 함량으로 제조한다.
제제예 5. 액제의 제조
실시예에서 얻은 추출물 분말 1 g
이성화당
10 g
만니톨
5 g
정제수
적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100g으로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 6. 과립제의 제조
실시예에서 얻은 추출물 분말 500 mg
비타민 혼합물
적량
비타민 A 아세테이트
70 ㎍
비타민 E
1.0 mg
비타민 B1
0.13 mg
비타민 B2
0.15 mg
비타민 B6
0.5 mg
비타민 B12
0.2 ㎍
비타민 C
10 mg
비오틴
10 ㎍
니코틴산아미드
1.7 mg
엽산
50 ㎍
판토텐산 칼슘
0.5 mg
무기질 혼합물
적량
황산제1철
1.75 mg
산화아연
0.82 mg
탄산마그네슘
25.3 mg
제1인산칼륨
15 mg
제2인산칼슘
55 mg
구연산칼륨
90 mg
탄산칼슘
100 mg
염화마그네슘
24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 과립제에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 과립제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예 7. 기능성 음료의 제조
실시예에서 얻은 추출물 분말 500 mg
구연산
1,000 mg
올리고당
100 g
매실농축액
2 g
타우린
1 g
정제수를 가하여
전체 900 mL
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 기능성 음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한, 첨부된 특허청구범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.
Claims (18)
- 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 이상지질혈증의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 청귤 과피 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출된 것을 특징으로 하는 식품 조성물. - 제2항에 있어서,
상기 혼합용매는 20 내지 95 부피%의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올인 것을 특징으로 하는 식품 조성물. - 제2항에 있어서,
상기 추출은 40 내지 80 ℃의 추출온도로 수행되는 것을 특징으로 하는 식품 조성물. - 제2항에 있어서,
상기 청귤 과피 추출물은,
풋귤 과피를 액상 매질이 담긴 회분식 또는 연속식 처리 용기에 넣고 고전압 펄스 전기장(high voltage pulsed electric field; PEF) 처리를 수행한 후 추출된 것을 특징으로 하는 식품 조성물. - 제5항에 있어서,
상기 PEF 처리는 전기장 세기 0.1 내지 10 kV/cm, 펄스 빈도 50 내지 300 Hz, 에너지 1 내지 50 kJ의 고전압 펄스를 0.1초 내지 100초 동안 1 내지 50회 적용한 것을 특징으로 하는 식품 조성물. - 제5항에 있어서,
상기 PEF 처리는 전기장 세기 1.5 내지 3.5 kV/cm, 펄스 빈도 110 내지 150 Hz, 에너지 20 내지 40 kJ로 수행된 것을 특징으로 하는 식품 조성물. - 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 이상지질혈증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 이상지질혈증의 예방 또는 개선용 사료 첨가제 조성물.
- (1) 청귤 과피를 건조하는 단계; 및
(2) 상기 건조된 청귤 과피를 추출하는 단계;를 포함하는 항비만 또는 항이상지질혈증 활성을 나타내는 청귤 과피 추출물의 제조방법. - 제10항에 있어서,
(1) 단계의 건조는 청귤 과피의 수분함량이 10 중량% 이하가 되도록 열풍건조하는 것임을 특징으로 하는 청귤 과피 추출물의 제조방법. - 제10항에 있어서,
상기 (1) 단계와 (2) 단계의 사이에, (1-1) 상기 건조된 풋귤 과피를 액상 매질이 담긴 회분식 또는 연속식 처리 용기에 넣고 고전압 펄스 전기장(high voltage pulsed electric field; PEF) 처리를 수행하는 단계;를 추가하여 수행하는 것을 특징으로 하는 청귤 과피 추출물의 제조방법. - 제12항에 있어서,
(1-1) 단계의 액상 매질은 물, 에탄올 또는 이들의 혼합액인 것을 특징으로 하는 청귤 과피 추출물의 제조방법. - 제12항에 있어서,
(1-1) 단계의 PEF 처리는 전기장 세기 0.1 내지 10 kV/cm, 펄스 빈도 50 내지 300 Hz, 에너지 1 내지 50 kJ의 고전압 펄스를 0.1초 내지 100초 동안 1 내지 50회 적용하는 것을 특징으로 하는 청귤 과피 추출물의 제조방법. - 제12항에 있어서,
(1-1) 단계의 PEF 처리는 전기장 세기 1.5 내지 3.5 kV/cm, 펄스 빈도 110 내지 150 Hz, 에너지 20 내지 40 kJ로 수행되는 것을 특징으로 하는 청귤 과피 추출물의 제조방법. - 제10항에 있어서,
(2) 단계의 추출용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매인 것을 특징으로 하는 청귤 과피 추출물의 제조방법. - 제10항에 있어서,
(2) 단계의 추출용매는 20 내지 40 부피%의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올 수용액인 것을 특징으로 하는 청귤 과피 추출물의 제조방법. - 제10항에 있어서,
(2) 단계의 추출은 40 내지 80 ℃의 추출온도로 수행되는 것을 특징으로 하는 청귤 과피 추출물의 제조방법.
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220159251A KR20240077110A (ko) | 2022-11-24 | 2022-11-24 | 청귤 과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 이상지질혈증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |
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|---|---|---|---|
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|---|---|
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20210081298A (ko) | 2019-12-23 | 2021-07-01 | 웅진식품주식회사 | 항비만 조성물 및 이의 제조 방법 |
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2022
- 2022-11-24 KR KR1020220159251A patent/KR20240077110A/ko unknown
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