TW518225B - Pharmaceutical agents for the treatment of parkinson's disease, ADHD and microadenomas - Google Patents

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經濟部智慧財產局員工消費合阼Fi印製 518225 A7 B7 五、發明說明（1 ) 發明領域 本發明係有關一些又稱爲雙-氮雜二環化合物的吡啶 並〔1 ，2 - a〕-吡嗪衍生物在治療哺乳動物包括人類 •的巴金森氏症、注意力不集中的過度反應症（''ADHD 〃）及微腺瘤方面之用途。其亦有關合倂使用度巴明-2 ( D 2 )受體激動劑和血淸素一 1 A ( 5 Η T i A )受體 激動劑以治療進行巴金森氏症。其亦有關合倂使用阿爾法 - 2 ( α 2 )腎上腺素受體配位體和D 2受體激動劑或 5 Η T i a受體激動劑以治療A D H D。其亦有關合倂使用 D 2受體激動劑及5 Η T i a受體激動劑以治療A D H D。 其亦有關合倂使用阿爾法- 2 ( α 2 )腎上腺素受體配位體 和D 2受體激動劑及5 Η Τ ! a受體激動劑兩者以治療 ADHD。 發明背景 血淸素在許多精神官能症，包括焦慮、阿茲海默症、 抑鬱、噁心和嘔吐、飮食障礙（eating disorder )及偏頭 痛，扮演重要角色（請參閱Rasmussen等人，''Chapter* 1 . Recent Progress in Serotonin (5 Η T) 1 a Receptor Modulators”，in Annual reports in medicinal Chemistry, Section I， 30， pp.1 -9, 1 995 Academic Press, Inc;

Antigas 等人，Trends Neurosci., 19(9)，1 996，pp. 378-383:¾ Wolf ^A,Drug Development Research, 40, 1 9 9 7 pp. 17-34.等文）。在精神分裂症的陽性和陰性症狀中，血 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -4 - --I 11 ^-——11—·^- — 1 I — I I 1 I ·1111—11 --—.4.--^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 518225 A7 B7 五、發明說明（2 ) 淸素亦扮演重要角色（請參閱Sharma等人，Psychiatric Annals·，26(2),1996, 2 月，pp. 88-92.乙文）。血淸素 1 A 受 體激動劑被證實可提昇額葉前部皮質度巴明（D A )之釋 •出。請參閱 Wedzony 等人，Eur. J· Pharmacol. ,305:73-78( 1 996)。丁 螺旋酮（Buspirone，一種 5 Η T ! a 受體激動 劑）被証實在治療多種與A D H D有關之症狀方面有效。 血淸素受體激動劑亦被証實可導正非人類之靈長類的因肌 緊張不足所引發之致類神經病症（一種與人類巴金森氏症 症狀類似之疾病） 。請爹閱 Casey, D. E.，Neuropsychopharmacol.，10:370S(1994)。 實驗證明使用釋出兒茶酚胺之藥物例如 methylphenidate (α —苯基—2 —哌啶醋酸甲酯），及突 觸後α 2腎上腺素受體激動劑例如可樂寧（cl on id ine )可 解除與A D H D相關之症狀。突觸前a 2腎上腺素受體激動 劑亦被證實可提昇去甲腎上腺素（N E )之釋出。 一些1— ( 2 -嘧啶基）一 4 —〔4 —(環一亞胺基 )丁基〕哌啶之衍生物經揭示爲不含鎭定活性之抗焦慮劑 ，其中包括丁螺絲酮（b u s p i r ο n e )，其中該環 一亞胺基爲4 ’ 4 一四伸甲基—派D定一2 ，6 — —*醒一 1 一基（Wu等人，美國專利案號3，717，634及 3，9 0 7，8 0 1 ; Casten等人，美國專利案號 4，1 8 2 ’ 7 6 3 );精螺絲酮（gepirone )，其中該 基團爲4 ’ 4 一二甲基Djgn定—2 ，6 —二酮—1—基（ 丁6巾口丨6,」「_’美國專利案號4，423，049);以及 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -5 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ----- 訂----- 經濟部智慧財產局員X消費合阼注印製 A7 ------- -B7_____ 五、發明說明（3 ) 依S撒螺絲酮（j p s p丨「〇㊀），其中該基團爲1 ，1 —二螺 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 苯並一異噻唑—3 (2H) —酮—1 一基（Dompert等人 ’德國專利案號3 ，3 2 1 ，9 6 9 - A 1 )。亦請參閱 Ishiztimi等人’美國專利案號4，5〇7 ，303和 4 ’ 5 4 3，5 5 ; Freed等人，美國專利案號 4 ’ 5 6 2 ’ 2 5 5 ; Stack等人，美國專利案號 4 ’ 732，983 ; New等人，美國專利案號 4 ’ 524 ’ 026 ;以及Stack’美國專利案號 4 ’ 7 8 8，2 9 〇。 發明總論 本發明係有關治療選自哺乳動物（包括人類）巴金森 氏症、A D H D和微腺瘤等病變之方法，其包含對需要此 類治療的哺乳動物投服以對治療此類病變有效之量之式I 化合物

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 或其醫藥上可接受之酸加成鹽，其中 X爲Ν或C Η ; Υ爲 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -6 - 518225 A7 B7 五、發明說明（4 )

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) SCH2、〇CH2、Y1 (CH2) η或其碳原子經多達兩 個甲基團所取代之Υ 1 ( C Η 2 ) η ; η爲1或2，及 Υ 爲 CH2、ΝΗ 或 NCH3。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在如式（I )的化合物中，較佳者，Y爲 〇 -7- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 518225 A7 B7 五、發明說明自) 其中特佳之化合物係當Z爲Y 1 ( c Η 2 ) fl、Y 1爲 CH2、η爲1及X爲N時。 式I之化合物爲D 2受體激動劑，可有效地治療巴金 •森氏症，同時亦呈現5 Η Τ ! a受體激動劑活性。 式I之化合物亦呈現作爲α 2腎上腺素受體激動劑之活 性，可有效地治療A D H D。該化合物可提昇海馬體Ν Ε 之釋出，並可提昇額葉前部皮質DA之釋出。 式I之鹼性化合物可與多種有機和無機酸形成酸加成 鹽。可用來製備前述式I之鹼性化合物的醫藥上可接受之 酸加成鹽的酸必須是可形成無毒性酸加成鹽的酸。即’含 藥理學上可接受之陰離子的鹽例如鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫 碘酸鹽，硝酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，磷酸鹽，酸性磷酸 鹽，醋酸鹽，乳酸鹽，檸檬酸鹽，酸性檸檬酸鹽，酒石酸 鹽，酒石酸氫鹽，琥珀酸鹽，順-丁烯二酸鹽，反-丁烯 二酸鹽，葡萄糖酸鹽，糖二酸鹽，苯甲酸鹽，甲磺酸鹽， 乙磺·酸鹽，苯磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽以及巴莫酸鹽（ pamoate )〔即，1 ，1 一一甲叉一雙對一 （2 —羥基一 3 —萘甲酸鹽）〕。 本文中所使用的治療〃一詞意指可導正、緩和、抑 制適用於此名詞之病變或病情之惡化，或預.防此類病變或 病情之一種或多種症狀。本文中所使用的 ''治療〃 一詞意 指如上述所定義之 ''治療〃之治療行爲。 本發明亦有關哺乳動物（包括人類）巴金森氏症之治 療方法，其包括對需要此類治療之患者合倂投服以D 2受 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -8 - -7 ^ .----裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 518225 Α7 Β7 五、發明說明沒) 體激動劑與5 Η T i a受體激動劑，其中，前述兩者活性劑 係以治療巴金森氏症之倂用劑量形式存在。 本發明亦有關用於治療哺乳動物（包括人類）巴金森 •氏症之醫藥組合物，其包括：（a ) —種D 2受體激動劑 或其醫藥上可接受之鹽；（b) —種5HT1A受體激動劑 或其醫藥上可接受之鹽；及（c)一種醫藥上可接受之載 劑’其中’前述兩者活性劑係以治療巴金森氏症之倂用劑 量形式存在。 本發明亦有關治療哺乳動物（包括人類）A D H D之 方法’其包括對需要此類治療之患者合倂投服以α 腎上腺 素受體配位體或其醫藥上可接受之鹽與D 2受體激動劑或 5 ΗΤ1Α受體激動劑或其醫藥上可接受之鹽，其中，前述 兩者活性劑係以治療A D H D之倂用劑量形式存在。 本發明亦有關治療哺乳動物（包括人類）A D H D之 醫藥組合物，其包括：（a ) —種腎上腺素受體配位.體 或其醫藥上可接受之鹽；（b) —種D 2受體激動劑或 5 Η T i A受體激動劑或其醫藥上可接受之鹽；及（c ) 一 種醫藥上可接受之載劑；其中，前述兩者活性劑係以治療 A D H D之倂用劑量形式存在。 本發明亦有關治療哺乳動物（包括人類）A D H D之 方法，其包括對需要此類治療之患者合倂投服以D 2受體 激動劑或其醫藥上可接受之鹽與5 Η T i a受體激動劑或其 醫藥上可接受之鹽，其中，前述兩者活性劑係以治療 A D H D之倂用劑量形式存在。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -9 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 零 n I «ϋ m 11« an ·ϋ 一 0, i I Ban n 11 經齊部智慧犲i局員11省費合咋-£印製 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 518225 Α7 _______ Β7 五、發明說明（7 ) 本發明亦有關用於治療哺乳動物（包括人類） A D H D之醫樂組合物’其包括：（a ) 一種d 2受體激 動劑或其醫藥上可接受之鹽；（b ) 一種5 Η τ , A受體激 •動劑或其醫藥上可接受之鹽；及（c ) 一種醫藥上可接受 之載劑；其中，_述兩者活性劑係以治療A D H D之倂用 劑量形式存在。 本發明亦有關治療哺乳動物（包括人類）A D H D之 方法’其包括對需要此類治療之患者投服以α 2腎上腺素受 體配位體或其醫藥上可接受之鹽與D 2受體激動劑或其醫 藥上可接受之鹽和5 Η Τ ία受體激動劑或其醫藥上可接受 之鹽，其中，前述兩者活性劑係以治療A D H D之倂用劑 量形式存在。 本發明亦有關用於治療哺乳動物（包括人類） A D H D之醫藥組合物，其包括：（a ) —種α 2腎上腺素 受體配位體或其醫藥上可接受之鹽；（13)—種02受體 激動劑或其醫藥上可接受之鹽；（c ) 一種5 Η T i a受體 激動劑或其醫藥上可接受之鹽；及（d ) —種醫藥上可接 受之載劑；其中，前述三者活性劑係以治療A D H D之倂 用劑量形式存在。 式I之化合物可能包含一個不對稱中心，因此可能存 在不同之鏡像異構型和非鏡像異構型。在本文中所使用的 、、式I之化合物〃一詞意指所有的光學異構物和所有其他 依前述中所定義之如式I之立體異構物，及其所有消旋物 和其他混合物，以及所有依前述中所定義之包含或運用此 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） _ 1 〇 _ • I *---- h I — Ί I -----------訂----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 華. 經濟部智慧財產局員工消費合阼注印製 518225 A7 _______________ B7 i、發明說明（8 ) 類異構物或混合物之醫藥組合物和治療方法。 前述之式I包括與所述相同之化合物，除了該等化合 物之一個或多個氫或碳原子以其同位素取代之外。此類化 •合物可用在硏究方面及作爲代謝藥物動力學硏究和結合分 析用之診斷工具。在硏究方面的特殊應用包括放射性結合 分析，自動放射顯影及活體內結合硏究。 可應用在本發明的方法中之D 2受體激動劑之實例包 括（但不局限於）如式I之化合物及其醫藥上可接受之鹽 、波佛立德意 （perfolide )、溴克立波坦 （ bromocriptane )、柔皮諾羅（ro p i n e rl 〇 )和波拉米披索 (pramipexole )。 可應用在本發明的方法中之5 Η T ! a受體激動劑之實 例包括（但不局限於）：（a )如式I之化合物及其醫藥 上可接受之鹽，（b) 丁螺旋酮（buspirone)(美國專 利案號3，717，638;3，9〇7，801和 4，182，763) ; (c)精螺旋酮（gepirone)( 美國專利案號4，4 2 3，0 4 9 ) ; ( d )衣普沙螺旋 酮（ipsapirone )(德國專利出版案號3,32 1,969-A1); 以及（e )佛列西諾山（flexinoxan )。 可應用在本發明的方法中之腎上腺素受體拮抗劑之 實例包括（但不局限於）如式I之化合物及其醫藥上可接 受之鹽、優因拜（yohimbine )及衣達柔山（idazoxan ) 〇 本發明中更特殊之具體的體系爲上述有關治療 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -11- -----^---.-------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 518225 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明@ ) A D H D之方法和使用α 2腎上腺素受體配位體治療 A D H D之醫藥組合物，其中此類配位體係爲一種胞突接 合前α 2 腎上腺素受體拮抗劑或一種胞突接合後α 2腎上腺 •素受體激動劑。 本發明中較佳之方法係爲一種治療哺乳動物（包括人 類）巴金森氏症之方法，其包括對需此類治療之哺乳動物 投服以對治療巴金森氏症有效之如下所示之式I之化合物

即，其中之X爲氮，其中之Υ爲如下式之基團

(、、速立波重（suniPetron ) 〃 ） ’或其醫藥上可接受之 m 〇 JH3- 本發明另一項較佳之體系係爲一種治療哺乳動物（包 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）-12 - I---- -------^^^裝--------訂--------- 0, (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合阼往印製 518225 A7 B7 _ 五、發明說明（1〇 ) 括人類）A D H D之方法，其包括對需此類治療之哺乳動 物投服以治療A D H D有效之速立波重（sunipetron )或 其醫藥上可接受之鹽。 • 本發明另一項較佳之體系係爲一種治療哺乳動物（包 括人類）微腺瘤之方法，其包括對需此類治療之哺乳動物 投服以治療微腺瘤有效之速立波重（sunipetron )或其醫 藥上可接受之鹽。 圖式之簡單說明 圖1顯示由以0 . 5毫克/公斤或1 · 0毫克/公斤 之式I之化合物治療之猴子的巴金森氏症評分表。 發明之詳細說明 本文中所列之所有專利，專利申請案，及論文全文內 容在此以參考方式列入本文。 式I之化合物及其醫藥上可接受之鹽可依據美國專利 案號5，1 2 2，5 2 5，美國專利案號 5 ，185 ，449 ，美國專利案號5 ，455 ，35〇 ，美國專利申請案號08/47〇，377 (於1995 年6月6日提出申請），以及國際專利申請案號 PCT/IB97/0〇7〇4(指定美國及於1997 年6月1 6曰提出申請）等文中所述之方法予以製備。· 式I之化合物可與多種不同之有機酸和無機酸形成許 多不同種之鹽。可用來製備本發明中之鹼化合物之醫藥上 本紙張尺度適用中國國豕標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公爱） -13- L---^ J--------裝--------訂--------- S— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 518225 A7 B7 五、發明說明（11 ) 可接受之加成鹽的酸，必須是可形成無毒性酸加成鹽的酸 ，即，含藥理學上可接受之陰離子的鹽例如鹽酸鹽，氫溴 酸鹽，氫碘酸鹽，硝酸鹽，硫酸鹽或硫酸氫鹽，磷酸鹽或 •酸性磷酸鹽，醋酸鹽，乳酸鹽’檸檬酸鹽或酸性檸檬酸鹽 ，酒石酸鹽或酒石酸氫鹽’琥珀酸鹽，順- 丁烯二酸鹽， 反-丁烯二酸鹽，葡萄糖酸鹽，糖二酸鹽，苯甲酸鹽，甲 磺酸鹽，乙磺酸鹽，苯磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽以及巴莫酸 鹽（pamoate)〔即，1 ，1 —甲叉一雙對一（2 —經 基- 3 -萘甲酸鹽）〕。雖然此類鹽在投服於動物時必須 是爲醫藥上可接受者，但實際上可先自反應混合物中單離 出式I化合物之醫藥上不接受的鹽，接著僅需以鹼性試劑 處理，將其轉變回其自由鹼化合物，再將該自由鹼化合物 轉化成其醫藥上可接受之酸加成鹽即可。本發明中的鹼性 化合物之酸加成鹽可經由於水性溶劑基質或合適之有機溶 劑（如甲/醇或乙醇）中以實質上等量的礦物酸或有機酸處 理該鹼性化合物而製備。在小心地蒸發該溶劑之後，即可 得到所要之固態鹽。 在治療人類之巴金森氏症、ADHD或微腺瘤的應用 方面’可以單一或分量劑量的方式每天投服以2 - 3 0〇 毫克的式I之化合物或其醫藥上可接受之鹽的方法進行。 在一些特殊案例之中，在負責的醫師指導之下可使用超出 劑量範圍之藥劑。較佳之投服途徑一般爲經由口服，但在 一些案例中以非經腸投服（例如，經由肌內，靜脈內，皮 T投服）爲佳’例如，當患者因該疾病而無法吞嚥或吸收 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公釐）_ 14 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂----- 經濟部智慧財產局員工消費合作钍印製 518225 A7 __-__ B7 五、發明說明（12 ) 時。在一個具體實例之中，該式I之化合物以每天約3次 ，每次約1 · 0毫克/公斤之個別劑量方式投服。可使用 控制釋出型調合物取代每天投服的方式。在另一個具體貫 •例之中’該化合物以一種經由特別途徑所需之量投服，使 投服後2至3小時間，該藥劑在血漿中之濃度爲1 0 0至 5〇0毫微克之間，較佳者，約爲2 0 0毫微克/毫升。 本發明中所使用之化合物一般係以包含至少一種如式 I之化合物與一種醫藥上可接受之載體或稀釋劑的醫藥組 合物的形式投服。此類醫藥組合物一般採用適於所欲之投 服方式之固體或液體載體或稀釋劑並以習知之方法調配： 在經口投服方面，可使用錠劑、硬或軟明膠膠囊、懸浮劑 、粒劑、粉劑等；在非經腸的投服方面，可使用注射水溶 液或懸浮液等。 D 2受體與化合物之結合可使用下列之D 2受體結合 測試法予以測試。 在含1 0%胎牛血淸之含D -葡萄糖的最簡培養基（ DMEM)中培養（T 一 1 7 5培養瓶）可表現人類D 2 長型（D2L)受體之LTK細胞。以含5mM EDTA 之P B S緩衝液剝出該細胞，經收集’使用Brinkman Polytron離心機（位置6作用2 0秒）在含5πίΜ “忌3〇4之丁「丨3[~1(：丨（5〇111^1’？117.4)中形成勻 漿。經重複離心後’單離並收集細胞膜’將收集之細胞膜 再懸浮於新鮮的冰冷緩衝液之中。將組織（濕重約2毫克 )加至含培養緩衝液（5 OmM TrisHCI J 1 2 0 m Μ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） -15 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

>18225 A7 B7 五、發明說明（13 )

NaCl’2mM M g C 1 2 > 5 m M KCl，5mM c a c 1 2，p Η 7 · 2 )、和多種不同濃度之測試藥物、 以及〔3H〕—司拜波農（spiperone)(最終濃度 〇 .〇 6 η Μ， Amersh am,Arlington Heights IL )之試管 中。在2uM ( + ) — butaclamo丨的存在之下測定其非專 一性結合。在3 0 °C下，培養4 5分鐘之後，使用布來德 (Brandel )細胞收集器，經由快速通過Whatman GF/B _紙的方式終止培養。該細胞膜以4毫升冰冷緩衝液淸洗 3次，將濾紙置於Ready-Safe閃爍液（氚化的配位體計數 用）中以閃爍計數器測定其與膜結合之配位體。事先經由 飽和分析法已得到該放射性配位體之K d ( 0 . 0 6 η Μ ) 値，由該K d値利用C h e n g - P r u s o f f方程式法計算得到其 K i，s 値。 可使用下列3種分析方法測定化合物在D 2受體上之激 動劑或拮抗劑活性。 (1 )人類D 2受體對G Η 4 C i細胞中c A Μ P形成之調 節作用法 將衍生自大鼠腦下垂體並可表現長或短型之人類D 2受 體之GHUCUffl胞置於含10%FBS、2mM 1—縠 胺醯胺和1 0U/毫升之盤尼西林一鏈黴素之（HAM) F — 1 〇營養混合物（Gibco )的T — 1 7 5培養瓶中培 養至群集。以含5mM乙二胺四乙酸（EDTA)之磷酸 鹽緩衝液（P B S )將細胞自培養皿分離出’並再：懸浮於 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -16- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) —訂---------. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合阼fi印製 518225 A7 B7 五、發明說明（14 ) 含5mM MgC 12，30mM羥乙基呱嗪一N —乙磺酸 (HEPES)和5 OmM異丁基甲基黃嘌呤（I BMX )之P B S之中。將細胞曝露在5 m M forskolin或 .10 0 η M quinpirole 或 forskolin 力□ quinpirole 加拮 抗劑之下1 1分鐘。在使用拮抗劑的實驗中，以quinpiorle 挑戰之前，先將細胞曝露於拮抗劑1 1分鐘。在激動劑 q u i n p i r ο I e不存在的條件下，測試化合物對由f 〇 r s k ο丨i η所 激發的c A Μ Ρ累積之影響以評估其激動活性。加入6 Ν 之過氯酸以終止該反應，使用5 Ν之氫氧化鉀和2 Μ Tris緩衝液中和該樣品。使用可購得之競爭性結合套組（ Amersham )測量環化腺苷酸之量。使用線性回歸分析法計 算濃度反應曲線以得到其I C 5 Q之値。使用平衡式：K 1 =I C 5 0 / ( 1 +〔激動劑〕/〔激動劑E C 5 Q〕）計算 其顯現之K 1値。 (2 )大鼠腦切片之電生理學法

將雄性Sprague-Sawley大鼠（2〇0 — 2 5 0克重， Charles River Laboratories, Wilmington, ΜΑ )以氟院（ halothane )輕微麻醉，斬首之後迅速地將其腦移至冰冷之 已充氧的培養基（95%〇2/5%C〇2; 124mM N a C 1 ，2m M KC1 ，1 . 25mMNaH2P〇4， 2 6 m M NaHC〇3，l〇mM d —葡萄糖，2niM MgS〇4. 7H2〇及 2mM C a C 1 2 ； p H 7 · 4 )中。該腹面被膜區以氰基丙烯酸鹽（cyanoacrylate )阻 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -17- n ϋ n ϋ n- Γ— HI an ί n n ί 1 H_1 n ϋ— 一I ·_ϋ ·ϋ n i ϋ n Mmmmmmm I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 518225 Α7 __ Β7 五、發明說明（15 ) 絕並黏至充滿冰冷培養基之Lancer Vi bra tome ( 1 〇〇〇 系列）之台上。切出冠狀切片（3 5 0 u )並置入充氧培 養基（2 2 t )之中，一小時後開始記錄。進行記錄時， 將切片放置在記錄盒之尼龍網之上並完全浸泡在持續流動 的培養基（約1毫升/分鐘，3 5 t )之中。以含藥物之 水·溶液取代灌流培養基的方式施用所有藥物。使用裝滿 〇 · 9 %鹽水之玻璃吸量管（6 - 8 M W )記錄其自發性 細胞外作用潛能。將每1 0或2 0秒收集的結果線上作圖 點出其燃燒速率（firing rate )，其燃燒速率之變化則採 用藥物施用前後超過2分鐘時段之平均速率予以計算。製 作其濃度效應曲線並以直線回歸方式分析。 (3 )微量透析法 使用一端以環氧樹酯封閉並接附至融合的矽膠微管之 透析纖維（分子量截斷點爲18，000，外徑300微 米，豪斯坡，荷蘭）製成I型集中性微量分析用探針。將 包括2毫米長曝露性透析膜之9毫米長的探針殖入於以氯 胺酮（7 5毫克/公斤）及甲苯噻嗪（1 〇毫克/公斤） 麻醉之雄性Sprague Dawley大鼠（約3 0〇一3 5 0公克 重）的伏隔核（nucleusaccumbens) (AP 1 · 7， M L — 1 · 2 ，D V — 8 · 0 )中。手術之後，將大鼠置 入隔離箱的透明塑膠籠中，該探針插管則以具彈性之 Ρ Ε Ε Κ管經由雙槽管液轉換系統連接至一個 CMA/1 0 0之微灌流幫浦（CMA/微量透析，愛克 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） -18 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -— 訂---------線i 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 518225 A7 B7 五、發明說明（16 ) 頓 ’麻塞 諸塞州 )之上 。以人工腦脊髓液 (1 4 7 m Μ N 2 1 C 1 ： 2，2 . 7 m Μ K C 1 ，1 · 3 m Μ C C 1 C 1 : 2，1 · 〇m Μ M g C 1 2和〇. 1 m M抗壞血 酸在〇. 5毫升/分鐘的速度之下通宵灌流該探針。第二 天’由增加該流速至1.5毫升/分鐘並以PEEK管將 該探針出口管連接至D E C A D E電化學偵測器（A N T E C ’ Leiden，荷蘭）的3 0毫米長之樣品迴路上開始進行一 組實驗。連線收集微量透析之樣本（3 0毫升），並且每 隔2 0或2 5分鐘自動注射至管柱之中。在3 5 t下以 BDS Hypersil C183m 管柱（150x3 毫米），使用含 0.8111^[之辛磺酸鹽和8%甲醇與3111“三乙胺之7 5 mM磷酸鉀移動相（ΡΗ5·0)，將流速固定在 〇·35毫升/分鐘之下以ESA 580幫浦輸送。經 由逆相HP L C分離該待分析物。使用設定在5 5 OmV v s A g / A g C 1之下的D E C A D E偵測器之玻·璃 碳電極進行度巴明之電流分析。度巴明之細胞外含量則在 與標準物之細胞外含量之尖峰高度比較後定量。

在取得穩定基線後（每2 0或2 5分鐘收集5 - .7個 樣本）予以投服藥物，監控度巴明之釋出達4至7小時。 透析物之濃度以基線之百分比的方式表現。度巴明的透析 物濃度不因其穿越透析纖維之回收量而予以校正。使用 SuperANova 車欠體（Abacus concepts ，力口州，柏克萊）對 重複測量的値進行時間之變化量的多變分析’以決定是否 每一種劑量的藥物對伏隔核（n u c I e u s a c c u m b e n s ) D A 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） -19 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

» I I I I 線f 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 518225 A7 B7 五、發明說明（η ) 之釋出具有明顯的效果。 可依據 Greenemyre 等人在 Ann. Neurol.，3 5 : 655—661 ， 1994 及 Klockgether 等人在 Ann. ’ 3〇：717 — 723 ，1991文中所述之方 法來測定特定化合物之拮抗非人類靈長物巴金森氏症效應 β 會b Λ 。 可採用依據下述單一飽和濃度之方法測定本發明中之 特定化合物在5 Η T i Α受體之激動和拮抗活性。將雄性哈 特立（Hartley )天筑鼠斬頭，解剖後取出其海馬體之5 -HT1A受體。將各個組織置於含imM EGTA之 Η E P E S ( 5 m Μ，p Η 7 · 5 )緩衝液中以手動型玻 璃一鐵弗龍製勻漿器形成勻漿，接著以3 5 ，0 0 0 X g之離心力在4 ° C之下離心1 0分鐘。該沉澱物以含1 mM EGTAilOOmM HEPES緩衝液（pH 7 · 5 )再懸浮直到每管最終蛋白質濃度達2 0毫克（海 馬體）或5毫克（黑質區）。加入下列藥劑使每支試管中 的反應混合物含2 · OmM MgC 12，〇 . 5mM ATP，l.〇mM cAMP，〇.5m IBMX， 1〇m M磷肌酸，0 · 3 1毫克/毫升之肌酸磷酸激酶， 1 〇 0 m M GTP和〇· 5 — 1微居里之〔32ρ〕一 ΑΤΡ (30 居里 / 毫莫耳：NEG — 〇〇3 — New E n g丨a n d N u c 1 e a r )。將組織加入以矽膠塗覆之微離心管中 開始在3 0 °C之下培養1 5分鐘（三組）。在每一支試管 中加入2 0毫升組織、1 〇毫升藥物或緩衝液（其1 〇倍 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公爱） -20- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -· n am n n n i I— · mammae n n «ϋ 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 經濟部智慧財產局員工消費合泎社印製 518225 A7 — ____ B7 五、發明說明（18 ) 最終濃度）、1 0毫升3 2 η Μ激動劑或緩衝液（其]_〇 倍最終濃度）、2 0毫升弗斯可林（forskolin )(最終濃 度3mM)和4 0毫升前述之反應混合物。加入1 〇 〇毫 •升含4〇 ，〇〇〇dpm之〔3H〕一cAMP (3〇居里 / 耄莫耳：N E T — 2 7 5 — New England Nuclear )、 2%SDS、1 . 3mM cAMP 和 45mM ATP 之水溶液以監控管柱中c A Μ P的回收量之方式終止培養 。可使用 Salmon 等人在 Analytical Biochemistry， 1974，58 ，541 — 548乙文中所述之方法分離 〔3 2 P〕— A T P和〔3 2 P〕— c A Μ P。使用液態閃爍 計數器測量其放射性。對5 - Η T ^ a受體之最大抑制性定 義爲 10mM(R) — 8 —〇H — DPAT。經由與（R )一 8 -〇Η — D P A T之抑制功效進行比較計算所測試 之化合物的抑制性百分比。採用與3 2 η Μ激動劑功效比 較的方式計算弗斯可林（forskolin )引發腺苷酸環化酶活 性之由激動劑所引起之抑制性逆轉現象。 本發明係有關兩種或三種活性劑以同一醫藥組合物的 形式同時投服以治療巴金森氏症和A D H D之方法，以及 經由設計用來得到倂用治療利益之適當劑型的形式分別投 服活性劑以治療巴金森氏症和A D H D之方法。該適當劑 量之攝取法、每次投服之劑量以及兩次投服之特定間距均 依據治療的對象、可承受藥物的程度和病情之嚴重性而定 。一般而言，在執行本發明中上述之倂用方法上，該 5 Η Τ ! a將以單一或等份劑量方式每天以約5 — 9 〇毫克

If---,卜---------------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -21 - 經齊部智慧財產局員工消費合阼注印製 518225 A7 ___B7 五、發明說明（19 ) 之量投服’該α 2腎上腺素受體配位體將以單一或等份劑量 方式每天以約1 . 〇 — 1〇〇毫克之量投服，在α2腎上腺 素受體拮抗劑方面則將以單一或等份劑量方式每天以約 ’ 0 · 1 — 1 0 0毫克之量投服，在α 2腎上腺素受體激動劑 方面則將以單一或等份劑量方式，以及在D 2受體拮抗劑 方面則將以單一或等份劑量方式每天以約〇 · 5 — 2 5毫 克之量投服。（在本發明合倂方法中所使用之經F D Α許 可之藥物方面，醫師將會依據此類藥物在Physician’s Desk Reference中所指定之劑量範圍下處方。）然而，根 據接受治療之動物種別和個體對該藥物反應，以及所選用 之醫藥配方種類和進行投服期間和間隔之不同可能產生差 異。在一些案例中，使用低於上述劑量範圍下限之劑量可 能已超過所需，然而在其他案例中，使用較高劑量之藥物 亦不會引起任何有害之副作用，先決條件是必須事先將此 較高劑量之藥物分成小量在一天之內投服。 本發明之倂用的方法係包括所需要之倂用的活性存在 於一種化合物或其醫藥上可接受之鹽中的方法。呈現多於 一種藥學活性（例如5 Η T i a激動劑及D 2激動劑）之本 發明的醫藥組合物包括所需之倂用的活性存在於一種化合 物或其醫藥上可接受之鹽中之醫藥組合物。 在本發明醫藥組合物和方法中所使用的D 2受體激動 劑、5 Η T i A受體激動劑和α z受體拮抗劑在此之後皆稱 之爲”治療劑”。該治療劑可以經口或非經腸的途徑投服。包 含D 2受體激動劑和5 Η T i a受體激動劑兩者，或包含 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -22 - I. -卜--*-------------訂---------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 518225 Α7 Β7 五、發明說明¢0 ) D 2受體激動劑，5 Η T i A受體激動劑和α ^受體捨抗劑 三者的組合物一般以每天單一或分量方式和經口的或非經 腸的方式投服，因此每一種活性劑之投服總量必須在上述 •的指示範圍之內。 該等治療劑可經由上述所指示途徑單獨投服或與醫藥 上可接受之載劑或稀釋劑合倂投服，而且可以單〜或多重 劑量方式進行投服。進一步而言，本發明中的治療劑可以 多種不同劑量型投服，例如其可與多種醫藥上可接受之惰 性載劑結合製成錠劑、膠囊、片劑、糖錠、硬糖、栓劑、 水性懸浮液、注射水溶液、酏劑、糖漿等。此類載劑包括 固體稀釋劑或塡充劑、無菌水性介質和多種無毒性有機溶 劑等。此外，口服醫藥組合物可適當地增甜及/或調味。 一般而言，本發明中之治療化合物當分別投服時（例如不 存在於同一個醫藥組合物時），其以濃度爲約5 · 〇重量 %至約7 0重量％之劑量型存在。 在經口投服方法面，可使用包含多種賦形劑，例如微 晶纖維素、檸檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸二鈣和甘胺酸、與多 種崩散劑’例如澱粉（較佳者爲玉米澱粉、馬鈴薯澱粉和 樹薯澱粉）、海藻酸及一些複合矽酸鹽、以及粒化黏合劑 ’例如聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明膠和阿拉伯膠製成之錠 劑。除此之外，潤滑劑如硬酯酸鎂，月桂基硫酸鈉和滑石 粉在錠劑製作方面亦非常有用。亦可將類似型態之固體組 合物作爲明膠膠囊之塡充劑，因此亦可包括乳糖或牛奶糖 及高分子量之聚乙二醇等較佳之物質。若要使用水性懸浮 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規袼（210 X 297公釐）-23 - j.—*-------------訂--------- $ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 A7

五、發明說明0 ) 液及/或醜劑進行經〇投服，該活性劑可與多種不同之增 甜剤、調味劑、色料或染料，及若需要亦可添加乳化劑及 /或g浮劑’加上稀釋劑如水、乙醇、丙二醇、甘油及其 多種類似組合物合倂使用。 在非經腸的投服方面，可使用由治療劑於芝麻油或花 生油或水性丙二醇中形成之溶液。若需要，該水溶液可適 當地予以緩衝’而且須事先使該水性稀釋劑變成等張溶液 。該水性溶液適宜作爲靜脈注射之用。該油性溶液適宜作 爲關節內注射、肌內注射和皮下注射之用。可採用諳此藝 者已知之標準醫樂技藝在無菌條件之下製備該等溶液。 下列實例僅用來闡釋本發明，不可用來限制其範圍。 實例： 採用前文中Greenmyre等人和Klockgether等人所揭 示之文獻中的方法， 測定於以MPTP— (1—甲基—4 —苯基一1 ，2 ，3 ’ 6 -四氫吡啶）處理的猴子在投服速立波重（ sunipet「〇n )後對巴金森氏症評估的行爲影響。 簡言之，對患巴金森氏症之猴子投服以0 . 5毫克/ 公斤或1 . 0毫克/公斤之速立波重（sunipetron )，投 服之後，在與投服以對照組水溶液（載體）的比較之下， 取4個不同的時間點評估其巴金森氏症症狀之嚴重性。 硏究所得之巴金森氏症評分結果陳述於圖1。合倂投 服後血漿中化合物含量之評估値，結果顯示在血漿含量約 爲2 0 0毫微克/毫升時巴金森氏症分數降低程度可達到 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱) -24 - ~ ----,卜—--------------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合阼杜印製 518225 A7B7 約 爲 量 含 漿 血 之 > 效 2 有 Θ低 洲曰取 锕大 五最 克 微 毫 〇 〇 升 毫 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) l·. 經濟部智慧財產局員工消費合泎钍印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） -25 -

Claims (1)

1. -< 518225 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 附件A 第881 1 5941號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國91年4月修正 1·一種用以治療哺乳動物選自巴金森氏症、 ADHD (注意力不集中的過度反應症）和微腺瘤之病變之 醫藥組合物，其包含治療此類病變有效量之速立波重（ sunipetron)，即如下式所示之化合物 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

   或其醫藥上可接受之酸加成鹽。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 2 .根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其用以治 療哺乳動物之巴金森氏症，包括治療巴金森氏症有效量之速 立波重。 3 ·根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其用以治 療哺乳動物之ADHD，包括治療ADHD有效量之速立波 重。 4 .根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，·其用以治 療哺乳動物之微腺瘤，包括治療微腺瘤有效量之速立波重。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）