TW408125B - New extractive process for the recovery of naturally occurring macrolides - Google Patents

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經濟部肀央橾準局貝工消費合作社印农 A7 408125 B7 五、發明説明（1 ) 本發明傺關於一種從藉由發酵方法獲得之其他天然存 在之成分分離天然存在之巨交酯，特別是三琛巨交酯如 雷帕徽素，32-去甲基雷帕徽素，15-去氧雷帕徽素、或 FK-5 0 6之方法β軍特而言之，本發明葆關於一種從發酵 漿狀萃取濃縮物和從母液濃缩回收三環巨交酯之方法。 以雷柏徽素和KF-506為例之三環巨交酯具有免疫抑制 活性以及抗菌和其他藥理活性且用於治療分枝及移植拂 3 斥、發炎性疾病，和自動免疫疾病如追瘡、風濕性關節 炎、糖尿病和多發性硬化》 三環巨交醋雷帕微素、32-去甲基雷帕徽素，15-去氣 雷帕簾：素和FK-506為藉由 鏈微菌之各種菌株在適當條 件下的發酵而製備且為沒有鹺性胺基、酚酸或羧酸基存 在之中性。雹帕徽素藉由於水性培養基中培養S. hydroscopic us NRRL5491而製得。由生長培養基回收 包含三琛巨交酯之菌絲且用有機溶劑如甲醇萃取以獲得 由所要的巨交酯、相當化合物，酸性化合物如脂肪酸、 〕 鹸性化合物如生物鹼和呔類，及中性親脂性化合物如脂 肪所組成之混合物β典型地，將發酵漿狀萃取物漤縮至 巨交酯可被單離以容易運输及/或儲存。在本發明之前 ，從發酵漿狀举取物的三環巨交酯之單離和純化為費力 昂貴之方法，其俗_用化學和層析技術以獲得純物質β [U.S. 5,091,389;U,S. 3,993,749;W〇 93/11130;

Sehgal, J.of Antibiotics y(10)727 (1375)〕。該 雷柏黴索之發酵漿狀萃取物僅包含5至15¾雷帕徽索及 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨OX297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) *ΤΓ 11 A7 B7 408125 五、發明説明（2 ) 最离約50%酸性成分，例如，雷帕徽素必須從其他成分 分離出來。典型地從發酵漿狀萃取液回收三琛巨交酯之 方法包括吸附活性硪上和從活性碩去吸附，選擇溶解度 步驟、及使用管柱層析及/或高Ε液體層析一或更多次 捎耗和昂貴的層析步驟。迄今，仍避免酸性或龄性條件 ，三環巨交酯和雷帕徽素於酸性或鹼性條件下被認為是 不稼定的。雷帕徽素於水不互溶溶液，邸於甲醇或四氫 ) 呋喃中藉由無機鹼如氫氣化納、有機龄如4-二甲基胺基 吡啶（DMAP)或1,8-重氮雙瓌〔5.4.0〕十一烷-7-烯（DBU) 或水性無機酸如氩氣酸和路易士酸如氣化鋅進行降解作 用〔史提夫等人；Tetrahedron Letters <in press〉， D.Yohanes和 S.J.Danishefshy， Tetrahedron Letters 33(49),7469-7472(1992);魯句等人 Tetrahedron Letters 34( 6i) ,991-994(1993) ,ίΠ D.Yohanes^ A , Tetrahedron Letters 3_4(13) ,2075-2078(1993)] 本發明提供一種由再結晶溶劑、研磨或産物洗液中獲 得之發酵漿狀萃取癟縮物和母液或其滇縮物回收巨次酯 ，特别是三琛巨交酷，更特別是雷柏徽素且避免例如於 U.S. 5 , 0 9 1 , 3 8 9 ; U.S. 3 , 99 3,7 4 9; ¥0 9 3 / 1 1 1 30 ；Sehga 1 J.of Antibiotics L§(10) 727(1975}中之消耗時間和 昂貴層分離的相當快速且有效的方法β該方法包括藉由 將含巨交酯潘縮物溶解於適合之水不互溶溶劑中以從中 性成分分饑出酸性及/或鹼性成分和將該酸性或鹼性成 分分別萃取進入鹺性或酸性水溶液中，應用選擇的溶解 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > Α4規格（210X297公釐〉 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 408125 五、發明説明（3 度或萃取技術以由存在於濃縮物 雔出中性之非極性三環巨交酯。 指出可使用於具有發酵漿狀萃取 液所使用之溶劑或溶劑混合物的 狀萃取物或母液、金部萃取溶液 有責任的且溶劑之體積不是累聱 濃縮減少。本發明方法中之任何 酯之濃缩物。 藉由該方法所得之産物可藉由 化至可接受之純度。 本發明之方法概述於下列圖示 掲示中，非極性溶劑為非芳香 己烷、庚烷等。與非芳香烴 制為乙腈和二甲基甲醛胺β術 溶液舆其他不互溶溶液，使不互 且以物理方法從另一相中除去一 洗當有關溶液時係指萃取步驟中 中之非搔性中性物質分 同時本文所掲示之方法 物或再結晶，研磨或洗 本發明方法中之發酵漿 或母液溶液對該方法是 的。溶劑體積可以部分 溶液可指示作為含巨交 此技萑所習知之技術纯 u於本發明方法之下 烴溶劑如環己烷、環己 不互溶之溶劑包括但不 語萃取僳指徹底混合-溶溶液由其他溶液分離 層或相之步驟。術語淸 之溶液和當有關固體時 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 化3 f ' 列s Y烯' \限讳 經濟部令夬橾準局員工消費合作社印製 術回溶溶但交結 β 之酯或溶巨或 溶液交劑不 β晶 不洗巨溶上物結 上和。之質合再 值液液分實混態 實取溶成中劑狀 體萃劑性其溶形 固性溶鹼於或定 中水機或酯劑不 其和有性交溶之 ,液之酸巨的磨 體洗得.如為溶研 固、獲質劑可由 該液磨雜溶為可 洗濾研含非肪酯 清晶之且酯脂交 劑結體酯交如巨 溶由固交巨分為 1 指集巨 C 成劑 用係收解物性溶 為液及溶合中晶 意母取為混中结 ，語萃劑劑其酯 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 408125 at B7 五、發明説明（4 ) 晶之溶劑或溶劑混合物。而該方法箱要之濃液濃度，其 較佳為溶劑或溶劑混合物具有足夠之揮發性以使於非降 解條件之溫度和壓力下蒸皤掉。 圖示1

經濟部中央標準局員工消費合作社印装 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 根據該方法，包含巨交酯之濃縮物，不論是從發酵漿 狀萃取濃縮物得到或由再結晶及/或清洗溶劑得到之濃 縮物，瘠解於水不互溶之經選擇溶劑濃縮物之能力且容 易除去的溶劑或溶劑混合物，包括但不限制為二氛甲烷 、'第三丁基甲基醚、醋酸乙酯、甲苯、卜丁醇、醋酸乙酯/甲 苯混合物，庚烷/醋酸乙酯混合物或己烷/二氣甲烷混 合物。鹼性水溶液，包括氫氣化納、碩酸氫納、硪酸納 、氫氣化銨等，較佳為氫氣.化鈉，於〇 . 1至5 N之濃度範 圃，較佳約0.1至1.0N,且最佳為約0.1至0.5N,特別用 以萃取酸性成分。有機鹼如三乙胺於除去酸性成分上不 如強無機鹼水溶液有效^無機酸水溶液，包括氫氣酸、 磷酸單納、硫酸單鈉等，較佳為氫氣酸，於0.1至5H之 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2[〇X297公釐） _408125五、發明説明（5 ) 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 用分性 P 完二足環 液法{以計鹼的分進完液例PH有 別成鹼30U 刻鹼可三 溶方鹼定學性需之可之溶。後所 特性或約 Η 立和取出 之取性測化水所得取驟的取最去 ,鹺 \ 至 Η 地酸萃離 物萃水及的的液取萃步液萃有除 5Ν去及°0_遲要獨單 缩於用分置需溶所之取縮離.具上 ο除酸-5Μ 延需單以 濃¾)由部裝所之此分举濃分以質 至在取約 ^ 可不分質 酯^ 藉的之物量由成瘕之之足實 .1酸萃於 U 不可成雜 交旧可液PS取分和 W 多酯酸用以 W醋液佳為法，性的 巨鹼量溶定萃自液^¾)交性，足 Msi 溶較ΪΟ方量險夠 含fi之之測分取溶(SS㈣ 1Π1水液是 U 三酷，以取之或足 從過“物拖部取取酸旧含及溶取 I 如交間III萃分取去 中使si®縮其的萃萃此鹼包鹼之萃 -最間 或 afl，巨之έΓ該成萃除 驟以(=濃或值以需因性由性物之 7 Β酸含 ,驗獨中 步。鹸酯計ΡΗ後所 c水分水缩液-Ν,機從450°甩或單液 取分性交量的然與例用成用濃溶 .0有 <,約約作\ 分溶 萃成水巨測效。積比於鹼別素水 ^ 。效和至解及成之 時a)需含ΡΗ有定體成勝或分徽納 1 分有°cp 降酸性酯 省 Η 所包用是而之率驟酸成帕化 0.成酸-5-5能之酸交 値⑼其自使¾)積¾)比步其完雷氣 佳性機約約可在且巨 一⑺的取一 _體_ 的作地，含氫 較鹺無於於的存取含。以性效取有 S 之 Μ 積操然去包的 ,取如便佳酯視萃包酯於酸有萃具驗t)鹼髑値顳除與12 度萃不分最交。之從交便去是酸到過 _ 性的 一 β被，為 濃以上成 ，巨成者以巨 除中或得量(¾水量行成中如值 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X297公釐） 408125 Α7 Β7 五、發明説明（6 ) 的的酸成分。 使用上述方法從溶液中回收之巨交酯可藉由此技S人 士所習用的純化技術來純化至所要的純度的程度。若需 要濂液和洗液可收回以回收另外之巨交酯β X 於從包含巨交酯之水不互溶之溶劑除去酸及/或鹼成 分之萃取步驟完成後，藉由下列方法，巨交酯可由非掻 性中性成分中分離出來： ) (1)將足夠量之與該包含經萃取酸成分及/或鹺成分之 溶液的該水不互溶之溶劑互溶之巨交酯非溶劑（或溶劑 > 混合物）加至包含巨交酯之溶液以使巨交酯或可能之相 當巨交酯産物不溶於所得溶液中且形成分離相，為油狀 物或固體，然後其可藉由此技藝人士所習知之分離技術 分離。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 不 水 的 液 溶 之 分 成 0 或 \ 及 分 成 酸 取 萃 經 含. 包 縮 濃 溶 可 酯 交 巨 於 解 溶 質 物 留 殘 之 酯 交 巨 含 包 漿 及 劑 溶 溶 互 環可之 如酯酯 劑交交 溶巨巨 烴縮含 香濃將 芳及 tr aai 用分 且 〇 中取 胺举 醛烯交 甲己巨 基環該 或若 烷後 或庚然 睛 、〇 乙烷層 如己劑 劑、溶 溶烷之 之'己溶 甲 二 則 體 固 為 酯 經濟部中央梯準局貝工消費合作社印袋 酯該 交 ， 巨者 該或 若 〇 或化 酯純 交術 巨技 得之 獲知 以習 磨所 研士 起人 1 0 劑技 溶此 晶以 結則 與物 物狀 留油 殘為 劑 溶 之 溶 互 以 可 後 之 取 萃 劑 溶 烴 香 芳 非 用 溶 互 〇 不 理水 處的 劑液 溶溶 之之 溶分 可成 酯驗 交或 巨/ 非及 的酸 中取 1)萃 SK( . 含 溶步 3 可述® 缩 酯上 交如 巨之 濃 或 醚 丙 異 / 醚 乙 如 劑 溶 晶 結- faH s8 交- 巨 與 質 物 留 殘 且 液 溶 之 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 408125 A7 B7 五、發明説明（7 ) 正丁基甲基醚一起研磨0 或者，首先根據上述方法（1)至（3)之一萃取含巨交酯 滠缩物以除去非極性成分，然後將包含巨交酯之殘留物 溶解於水不互溶之溶劑中且用鹼性及/或酸性水溶液萃 r 取以除去酸性及/或鹺性成分。 上述方法具有非預期發現之優點，當進行從包含巨交 酯濃縮物之不互溶之溶劑溶液萃取水性酸或鹼之步驟時 ，巨交酯如雷帕徽素不會分解》 基於觀察自酸或鹼曝露於溶液中所造成的雷帕徽素之 降解作用，先前認為降解作用會發生β 此萃取方法一般縮短由該濃縮物回收巨交酯所裔之時 間且避免時間之消耗和昂貴的層析方法。 三環巨交酯雷柏徽素為溶解於甲醇、丙醜、二甲基甲 醛胺，徹溶於乙醚及稍溶於己烷或石油醚且不溶於水之 結晶固體。雷帕徽素具下示結構。原子數目条统為化學 摘要所使用者β (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消资合作社印製 9 本紙張尺度適用中國國家樣华·（ CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 408125 五、發明説明（8 )

35 (請先M請背面之注意事項异填寫表頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 下列實施例僅為從發酵漿狀物和母液！濃縮物中單離雷帕 徽素之本發明方法的説明且不以任何方式解釋為用以限 制本發明之範圍。於下列實施例中，經單離之産物經由 物理、光譜和層析性質與真正雷帕徽素比較被確認為雷 帕徽素。産物（未結晶）之純度以高壓層析分析法測定。 實施例1 經嬝缩發酵漿狀萃取物（157.G克，10.4%雷帕徽素含 量）溶解於二氣甲烷（60Q毫升）中之溶液以150毫升於0-5°C之0,5N NaOH溶液清洗三次，用水清洗至洗液呈中性 ，然後用食鹽水清洗。濃缩該二氣甲烷溶液且殘留物（ 70.5克）與乙醚（140毫升）一起研磨。收集結晶固體，用 乙醚清洗及乾燥以獲得雷帕徽素（6.3克，91.7%純度， *10-本紙浪尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） A7 B7 408125 五、發明説明（9 ). 35.4%産率）。乙醚瀘液之濃縮産生63.5克之具有13.1% 雷帕徽素含量之油狀物。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實施例2 將經濃縮發酵漿狀萃取物（2G6.0克，11.8%雷柏徽素 含量）之溶液溶解於第三丁基甲基醚（8G0毫升）中且以400 I . - .· 毫升於0-5°C之Q.5H NaOH溶液清洗三次，然後用水清洗 至洗液呈中性。濃縮正丁基甲基醚溶液且殘留物（75.0 克）舆乙醚（150毫升）一起研磨。牧集结晶固體，用乙醚 清洗，且乾燥以獲得雷帕徽素（11.4克，92.2%純度， 43.3%産率乙醚濾液之濃缩産生58.7克之具有11.3% 雷帕徽素物量的油狀物<> 實施例3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 經濃縮發酵漿狀萃取物（10.58克，10.4%雷柏徽素含 量）溶解於乙腈（23毫升）中之溶液以23毫升環己烷清洗2 次且濃缩之。殘留物溶解於二氣甲烷中且随後以23毫升 於0-5°C之Q.5N HaOH清洗3次，然後用水清洗至洗液呈 中性。濃缩該二氣甲烷溶液且將殘留物（4.07克）與乙醚 (15G毫升）一起研磨收集結晶固體，用乙醚清洗，且 乾燥以獲得雷帕徽素（0.64克，83.5%純度，58.2%産 率）^乙醚濾液之濃縮産生3 . 3 6克具有9 . 8 96雷帕徽素含 量之油狀物β 實施例4 經濃縮發酵漿狀萃取物（1 0 (] . 0克，11 . 8 %雷帕徽素含 量）溶解於醋酸乙酯（4QQ毫升）之溶液甩一部扮200毫升 -1 1 -本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > Α4規格（210Χ297公釐） 經濟部中夬標隼局貝工消費合作社印製 408125 a? _B7 ______ 五、發明说明（10 ) 和二部份1㈣毫升於0-5°C之0.5N NaOH溶液清洗’然後 用2 0 0牽升於〇 - 5 -C之0 . 5 N氳氛酸淸洗2次，最後用水 清洗至洗液呈中性。水性洗液回,至用醋酸乙08^01^#) 萃取且合併醋酸乙醱溶液〇將醏酸乙_溶液港縮且殘留 物（43.2克）與異丙酷-(45毫升）一起研磨。 體，用異丙醚清洗且乾燥以産生9· 5克雷帕徽素（8δ*3% 純度，68.7%産率）。濃縮異丙_濾液以産生具6.6%雷 1 帕徽素含量之油狀物（31.6克）β 實施例5 經濃縮發酵漿狀萃取物（25.2克· 量）溶解於甲苯（120毫升）和醋酸乙_ <25毫升）之混合物 中的溶液顒序地用50毫升於0-5*C之〇·5Ν NaOH清洗3次 ，用50毫升於0-5 "C之0.5N氮氣酸淸洗2次，然後用水 清洗至洗液呈中性》將該甲苯/醋酸乙醋丨容液（128^^10 分成相等2部份以進一步藉由下列方法處理： 方法A:濃縮甲苯/醋酸乙酯溶液（64毫升）月·將殘留 物（5.7克）與乙醚（11毫升）一起研磨。收集结晶固膜， 用另外之乙醚清洗，乾燥以産生〇.Μ克雷柏徽素（92.7¾ 純度，64.1%産率}。乙醚濾液之濃縮産生4.3克之具有 6.8%雷帕徽素含量之油狀物。 方法B:濃縮甲苯1醋酸乙酯溶液（β4毫升）且將殘留 物（9.0克）溶解於乙腈（5 0毫升）中。用25毫升之環己院 清洗該乙腈溶疲》然後濃缩乙腈溶液且殘留物（4· 3克） 舆乙醚（11毫升）一起研磨。收集结晶固體•用乙继清洗 ^ 1 2 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (请先Μ讀背面之注意事項再填寫本莨) '1Τ 408125 經濟部t央標準局員工消費合作社印製 A7 _________ 五、發明説明（11 ) ，乾燥以産生0.81克雷柏徽素（94.6%純度，6 1.8%産 率）。乙醚濾液之獏缩産生3.Q克之具有5.¾%雷柏徽素 含量之油狀物。 實施例6 母液濃缩物（ 3 9 6 . 0克，21.6%雷柏徽素含量）舆第三丁 基甲基醚（4000毫升）一起研磨。收集結晶固體，用第三丁 基甲基醚（500毫升），乾燥以産生36. 2克雷帕嫌素（95.1 %純度，13.8%産率）。用一份2Q00毫升和2部份1000 毫升於〇-5ec之〇.5Ν氫氣化m容液清洗。經合併鹼性萃 取液用第三丁基甲基醚醚（5 0 0毫升）清洗一次。合併第三丁基 基甲基醚和萃取液且用水清洗至洗液呈中性。合併水萃 取液且用第三丁基甲基醚（ 5 0 0毫升）萃取。合併第三丁基甲 基醚溶液，漠缩，且將殘留物（3 7 7 . 1克）與異丙醚（3 5 (3 毫升）一起研磨。收集結晶固體，用異丙醚清洗，乾燥 以産生126.7克雷帕徽素（82.4%純度，58.9%産率）β 如此由 母液濃縮物中雷柏徽素之總固牧率為162.9克 (7 2 . 7 % ) β異丙醚濾液之濃缩産生1 5 7 · 9克 具有20.3¾雷帕徽素含量之油狀物。 實施例7 母液濃縮物<562.1克，21.6%雷帕徽素含量Π容解於 二氯甲烷（2000毫升）中之溶液用500毫升於0〜5 °C之0.5 N氫氧化鈉溶液清洗三次且經合併水性鹼性萃取液用200 毫升二氣甲烷萃取一次。合併有機溶液且用5M毫升於 0-5°G之0.5K氫氣酸清洗β經合併之水性酸性萃取液 -13- 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背*之注意事項再填寫本頁)

408125 A7 B7 五、發明説明（12 ) - 、用200毫升二氣甲烷萃取一次。.經合併之有機萃取液用水淸洗至 洗液呈中样。潘縮有機溶液且殘啻物（255.0克）舆異丙 醚（25G毫升）一起研磨◎收集结晶固髏，甩異丙醚清洗 且乾燥以産生1〇8_6克雷帕徽素（86.6%純度，77.4%回 收）。異丙醚瀘液之港编産生1〇β·2克具有23.1%雷帕徵 素之油狀物〇 實施例8 以可以保持〇-5°C溫度的速度，將於- 〇5·0之0.5Ν水性 氫氣化納（400毫升）加至經猛烈攪拌冷凍（0-5°C)之經潘 缩發酵漿狀萃取物<.198.5克，8.3%雷柏徽素含量）於 800毫升第三丁基甲基醚之溶液中。再猛烈攪拌5分鐘， --- -, 移去較低鹼性水層且儲存於Q-5°C e有機層用200毫升於 fl-5°C之0.5JI氫氧化銷溶液再萃取2次。合併齡性水層 且用第三丁基甲基醚（200毫升〉再萃取。合併第三丁基甲基 _溶液且用水清洗至洗液為中性（pB=7)e合併水洗液 且用第三丁基甲基醚（100毫升）淸洗。合併第三丁基甲基醚 洗研 清起 液)-溶> 水 納 i 8 化t 氯継 和丙 飽異 用與 ，物 升 毫 留 殘 0 缩 0 下 空 真 ρ ο 4 於 經濟部中央橾隼局負工消費合作社印裝 2 X 於(5 用洗 0-及清 至髏物 卻固合 冷晶混 物结:1 合集 4 混收之 將斗醚 於i C升1 磨5·毫生 少 最Ρ 且 時 小 漏基 甲 纳基 冑ΗΤ 布第 璃一 玻醚 结丙 燒異 用之 結 ο \ty 色 無 呈 液 逋 至 或 %缩 2·湊 91之 素电 了# ^ ^ ^ fi .0¾ 含 ί 基^ 0 基徽 產Τ帕 以三雷 量第 ％ — 03 9 )r 6 定收3. 恒回有 至%具 燥.4克 乾66.9 體，63 固度生 晶純産 豊 fiB 0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印笨 A7 B7 五、發明説明（13) 實施例9 於室溫中將母液濃縮物（2 0 0克，2 5 %雷柏徽素含量） 摄拌溶解於、第三丁基甲基醚（800毫升）中。經攪拌溶液冷 卻至0-5 eC且立刻用270毫升之0.65N氫氣化鈉溶液萃取 ,預冷至0-5 °C，同時保持混合物之溫度於0-5 °C (於萃 取液中必須具有最後PH為12之水性氫氧化納的量決定於 經濃縮母液之能整除之數）。 鹼性水層儲存於0-5 °C,同時有機層用5%氣化納溶液 清洗而保持混合物於0-5 °C。齡性水層回至用第三丁基甲 基醚（100毫升）萃取β合併有機層且用2Q0毫升5%氯化 納溶液清洗3次（最後洗液之pH為7.4)20-25 °C溫度。於 減魘（6Q-13Q毫米汞柱）下濃縮有機溶液。於室溫下30分 鐘期間慢慢地將環己烷（80毫升）加至殘留物中並攪拌及 搜拌至結晶完成（3小時）。混合物攪拌於室溫再1小時 且混合物冷凍至0-5Ό並闱拌過夜。然後於燒結玻璃布 赫纳漏斗收集灰白色結晶固體《該固體用4G毫升之第三丁 基甲基醚和環己烷之2: 3混合物清洗5次。該固體於35 -4ITC真空烘箱乾燥至恒定重量以獲得22. 7克之雷帕徽 素（90.6%純度，41·4%回收濾液和洗液（第三丁基甲 基醚和環己烷）之濃度産生具有37.5%雷帕徽素含量之 油狀物β -1 5 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4说格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

Claims (1)

1. 填請委員明示*本案修必後是否變更承實f内容 經濟部中夬標準局員工消費合作社印裝 第83109959號「回收天然巨交酯之新穎萃取法」專利案 (87年1月修正） 巧申請專利範圍 1. 一種由存在於包含中性巨交酯之發酵漿狀萃取濃縮物 或母液濃縮物中的酸性、鹼性和非極性雜質分離該中 / - ^ . I . > · . 性巨交酯之方審取>驟（3)以去除酸性雜質及 視情況需要施#(b)及（C)步驟之二者或其中之 —,其中步驟（b)的功能為去除_性雜質，（c)為去除 中性非極性雜質： (a) 該濃縮物在水不互溶之溶劑或溶劑混合物中之溶 筱，其中該溶劑包含但不限於二氣甲烷、甲苯、苯 、乙酸乙酯、第三丁基甲基醚、1-丁_、乙酸乙酯 /己烷混合物、乙酸乙酯X庚烷混合物或二氯甲烷 /己烷混合物，於0勺至30 C之溫度，以0. 1K〜5H 之氫氣化鈉或氫氧化鉀類之鹼之水溶液萃取一或數 次以除去實質所有之酸性雜質； (b) 該濃縮物在水不互溶之溶劑或溶劑混合物中之溶 液，其中該溶劑包含但不限於二氣甲烷、甲苯、苯 、乙酸乙酯、第三丁基甲基醚、1-丁醇、乙酸乙酯 /己烷混合物，乙酸乙酯/庚烷混合物或二氮甲烷 /己烷混合物，於0 t至30 C之溫度，以0 . ’1N〜5 N 之氫氣酸、硫酸或礎酸之類的酸之水溶液萃取一或 -1 - 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS〉A4規格（2丨0X297公t ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

   填請委員明示*本案修必後是否變更承實f内容 經濟部中夬標準局員工消費合作社印裝 第83109959號「回收天然巨交酯之新穎萃取法」專利案 (87年1月修正） 巧申請專利範圍 1. 一種由存在於包含中性巨交酯之發酵漿狀萃取濃縮物 或母液濃縮物中的酸性、鹼性和非極性雜質分離該中 / - ^ . I . > · . 性巨交酯之方審取>驟（3)以去除酸性雜質及 視情況需要施#(b)及（C)步驟之二者或其中之 —,其中步驟（b)的功能為去除_性雜質，（c)為去除 中性非極性雜質： (a) 該濃縮物在水不互溶之溶劑或溶劑混合物中之溶 筱，其中該溶劑包含但不限於二氣甲烷、甲苯、苯 、乙酸乙酯、第三丁基甲基醚、1-丁_、乙酸乙酯 /己烷混合物、乙酸乙酯X庚烷混合物或二氯甲烷 /己烷混合物，於0勺至30 C之溫度，以0. 1K〜5H 之氫氣化鈉或氫氧化鉀類之鹼之水溶液萃取一或數 次以除去實質所有之酸性雜質； (b) 該濃縮物在水不互溶之溶劑或溶劑混合物中之溶 液，其中該溶劑包含但不限於二氣甲烷、甲苯、苯 、乙酸乙酯、第三丁基甲基醚、1-丁醇、乙酸乙酯 /己烷混合物，乙酸乙酯/庚烷混合物或二氮甲烷 /己烷混合物，於0 t至30 C之溫度，以0 . ’1N〜5 N 之氫氣酸、硫酸或礎酸之類的酸之水溶液萃取一或 -1 - 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS〉A4規格（2丨0X297公t ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ABCD 408125 六、申請專利範圍 數次以除去實質所有之酸性雜質； (C)該發酵漿狀濃縮物或母液潺縮物視情況已經上述 (a)及/或（b)步驟萃取以去除酸及/或鹼性雜質以 後，「 ' ⑴於與巨交酯實質不溶而中性雜質實質可溶之二乙 醚或二異丙醚類溶劑或溶劑混合物中予以研磨， 使巨交酯藉由不可溶之巨交酯與溶劑層之分離而 従可溶之中性雜質分離，其中巨交酯若為固體則 以過濾回收，若非固體則以傾析回收；或， (2) 在巨交酯可溶之甲醇、丙酮或二甲基甲醯胺類中 溶解及以足量巨交酯不可溶之己烷、庚烷、環己 烷或戊烷類溶劑予以稀釋，引起巨交酯自溶液分 離，其中巨交酯若為固體則以過濾回收，若弗固 體則以傾析固收；或 (3) 以不可混溶之己烷或環己烷類之烴類溶劑萃取發 酵漿狀物或母液之乙腾溶液，藉以萃取中性非極 性雜質至烴類溶液，其可與含中性巨交酯之乙腠 溶液分離。 2.如申請專利範圍第1項之方法，其中萃取係在◦〜5 υ下進行。 3 .如申請專利範圍第1項之方法，其中所用之鹼或酸之 水溶液的濃度為0 . 5 Ν 。， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公浼） (請先閣讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局Κ工消費合作社印製 經濟部中央標率局貞工消費合作社印製 AS 408125 I 六、申請專利範園 4. 如申請專利範圍第1項之方法，其中（a)所用之鹼水 溶液為氫氧化鈉。- 5. 如申請專利範圍第1項之方法，其中（b)所用之酸水 溶液為氫氮酸。 6. 如申請專利範圍第1項之方法，其中中性巨交酯為三 環巨交酯。 7. 如申請專利範圍第6項之方法，其中該中性三環巨交 酯為雷帕徽素（rapamycin)或其天然存在之同系物或 類似物或其異構物，或FK- 5 06或其天然存在之同条钧 、類似物或異構物。 / 8. 如申請專利範圍第7項之方法，其中該中性三環巨交 酯為雷帕徽素，32-去甲基雷帕徽素或15-去氧雷帕徽 素〇 / 9. 如申請專利範圍第7項之方法，其中該中性三環巨交 酯為雷帕徽素。Γ 10, 如申請專利範圍第7項之方法，其中該中性三琛巨交 酯 F K - 5 0 6。 11. 如申請專利範圍第1項之方法，其中用以萃取酸性雜 質之鹼之水溶液的最终p Η值為12。, -3- 表紙張尺度逋用t國國家榇準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) Α. 釘