TW398977B - The use of vWF(von Willebrand factor)-containing concentrates as a therapy which is employed in combination with antithrombotic and fibrinolytic therapy - Google Patents

Description

A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（1 ) ΐίϊί ΓίίΓ(ν〇Π Wi，，ebrand ^} “療―途結合，而以其本身或與溶 ΐ:在用：的是為了降低病患出血的危險:、: 解處理之同時或之後施用。本發明係 况明-㈣療劑的原理’其在治療過程中能將想要凝 或溶血纖維蛋白作用與不想要的傾向出血之副ΐ用 上-=ί:=ίΓ白成份之不均衡顯示其在臨床 曰嗜 另—方面則會有出血傾向。兩 =里^騎能造成威脅生命㈣果。在嗜血栓形成的 ^形如舉例而τ與急性心肌梗塞結合的情況下，五人 多實例中企圖調控溶解與凝集不均衡中佔優勢者:例如' 精由施用鏈球菌激酶(SK)或血纖維蛋白溶酶原之活化予(t PA =-ΡΑ，適當時抑重⑷靖溶錢維蛋白之系統以求 冷解任何已存在的血減塊。血塊㈣#、制藉由例如肝 素或低分子綺素(LMWH)或凝蝴抑·的方式完全 制或者阻滯下來，諸如舉例而言以合成的抑制劑M c丨 9〇38(Tama〇等人在凝命峡上賴，56⑴，28_34頁，1987 年）或重組的水蛭素（r-Hir)，或藉由Xa因子抑制劑如重組的 扁蝨抗凝血劑蛋白質（r-TAP)，或藉由血小板拮抗物如阿斯 匹靈或7E3抗體導向對抗凝血細胞的方式予以抑制。這會 造成血栓阻滯的血管被打開，進而會防止血栓形成。不過 ，、在血管損害上仍需要一定的血栓形成能力以防止這些部 位出血。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） n- n 1· In . ^^^—1^———!——— τ /-> · ;· (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 B7 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 五、發明説明（2) 依照本技藝之情況，吾人企圖對抗任何威脅生命的出 血現象，其可能發生在與抗凝血治療劑或溶解性治療劑合 併之抗凝血治療劑相結合的情形下，藉由打破該治療劑並 施用凝血啓動子（解毒劑）的方式進行。此種凝血啓動子包 含Vl丨丨因子(FVIII)或能在血液中使FVII丨之内分泌濃度增加的物 負如穩變加壓素（desmopressin ; DDAVP)(Mannucci PM, Ruggeri ZM, Pareti FI, CapitanoA, Lancet, 1,869-872頁，1977年；EPO 367 713 B1，1992年，·美國專利案的5,2〇4323號，1993年），或一 種抗血纖維蛋白溶解劑如阿普羅地寧（aprotjnjn)，與穩變加 壓素’傳載米克酸(tranexamic acid)、ε -胺基己酸和4_胺基 甲基苯甲酸混合(W〇 922〇361，1992年）。其他凝血啓動子係 由凝血因予所組成，其中有些已被活化，比如含在商品 FEIBA®(lmmuno AG公司出品）之中者，或是由一種凝血驗 原濃縮物所組成，比如含在商品Beriplex®(Behring werke AG公司出品）之中或商品Autoplex®(Baxter Inc.公司出品）之 中者。這些解毒劑原則上都會造成該活性化合物之治療效 力減低並且也因此降低了這些化合物的副作用。然而，以 上提到的解毒劑的產生的效果會涉及使先前的治療結果（ 抗凝血)失效的危險’結果造成血栓形成的嚴重危機。 在臨床實習中，部分促凝血酶原激酶被活化的時間（a ρ τ τ)被用作為抗凝血劑輿血纖維蛋白溶解效果的定量性測 量’而流血時間（BT)則被用作為出血傾向的測量。有一種 測定流血時間而在人體的臨床實習上具相當複現性的方法 是利用Simplate氏法測量皮膚的流血時間（Lethagem S.和Kling. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注項再填寫本頁) 装· 訂 經濟部中央標率局員工消費合作社印裝 A7 _____B7 五、發明説明（3) S. 1993年，於血栓形成與止血，70，第595-597頁）。大體而 言，aPTT和BT彼此的相關性相當良好，此意義即在於該增 進之效果如量測所得到之增加的aPTT値，也帶來增加的副 作用亦即其隨附之較長流血時間。

對於血管受損後出血過程的機制研究指出在初始的止 血期間，血小板主要藉VWF(von Willebrand因子）連結至内皮 下的膠原蛋白纖維。vWF是唯一能在高剪速度（例如：在動 脈、冠狀區或斑塊決定之血管變狹）和低剪速度（例如：在 靜脈區)均能有效地結合至曝露的膠原蛋白之因子(Ruggeri Z 、Μ，全魔學研討，31,229-239頁，1"4年）。接下來血小板 的凝集和由於凝血酶涉及其中而使結集的血小板收回與收 縮則會在第二止血期間形成止血阻塞（Hemker HC和p〇|jw〇da Η, 1"3年，1-Ί8頁，Barthels Μ和P|jd〇wa η著，Thjeme verlag. 校訂，於德國Stuttgart出版）。 vWF是目前所知最大的可溶性原生質蛋白。其為具有 ，種生物性質的多元體醣蛋白。它居間促成血小板附著'接 著形成血栓而與局部的血管傷口結合，並且其可作為凝固 原之凝固因子VIII (Ruggeri EM，1993年， Μ，5，898_9〇6頁）之載體。一定量之vWF存在於内皮下， 並且VWF亦以不含VIII因子的形式貯存於血小板的^顆铲中 。血小板具有二個vWF的受體：1.存在於Gp |b丨χ_ν複體 中的GPIb和2.GP丨丨6_川a(RuggeriZM, 1"4年，血液輿 : ’ 229-239頁）。藉由先前提到到之受體，·居間促成血31、 皮在血管傷口處附著。然後藉由GP丨丨M丨丨3受體支持緊接著 〜5〜 本紙張尺度適用中國國家樣準（〇呢）八4规格（210'/297公釐） --- s. I - 1- - -I --1 11 ' I - I - i ^^1' 《請先閲讀背面之注^^項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（4) 的血小板凝集’雖然此凝集作用主要是靠血纖維蛋白原結 合至GP lib-Ilia受體所維持的。與此背景相對的一方面，一 項有關利用vWF結合之抑制劑作為抗凝結劑的原理正在文 獻中進行討論(Ale— BR，Moake JL, Turner να, Ruggeri zm, Folie BJ, Phillips MP, Schreiber AB, Hrinda ME, Mclntire. IV, 1993 年於查座，81，第 1263_1276頁發表；Gra丨nick HR, _iams s, Mckeown L, Kramer W, Krutzsch H, Gorecki M, Pinet A, Garfinkel. LI, 1992年於秀國國家科學院進展，89 ’第7880-7884頁發表） 〇 令人驚奇的是已發現當我們將原生質vWF添加性地施 用於例如正在利用r-水經素進行抗凝固治療方法的豬隻身 上並不會損害其系統的抗凝固作用（aPTT)，而其流血的副 作用（BT)則降低至少於出血時間延長兩倍的程度然後保持 固定。在一沒有vWF注入的對照實驗中，町升至大約正常 流血時間之三倍的値(圖1)。 附圖之說明 圖1 : vWF在豬體中對於卜水蛭素引發之皮膚出血時間的 作用：0·3毫克/(公斤X小時卜水蛭素（安慰劑組， 籲）’ 0.3¾克/(公斤X小時)「_水經素再加上三小時後 以66vWF單位/公斤作為靜脈内大丸劑和187 vwp：單 位/(公斤X小時)作vWF之靜脈内注射(vWF組，△)。 因此’本發明的目標乃是藉由與抗凝固治療劑闞聯且 適當情況下與血纖維蛋白溶解治療劑合併的方法達成的， 〜6〜 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） ------ ----------襄— (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

I t 央 標 準 局 % 工 消 費 合 作 社 印 五、發明説明（5) 及方法乃利用適當地補充⑯ 和不想要的出== 危丄：;離而=2保持著，也就是血拾形成的 出的副作用則集劑或溶血纖維蛋白劑之作酬 假解:=發Γ關利用VWF以製備—種與出血關聯之 維二：則係由施用抗血栓形成劑和/或血纖 成劍和μ所產生者。此外’本發明係關包含抗血栓形 成劑和/或血卿蛋白溶_作為成份 VWF活性之片段作為成份⑽藥物組成。 或/、有 所知用之VWF濃縮物可為例如商品Haemate@ HS weke AG公司出品），其除了 VWF以外尚包含曜。 篇虹：流血時間和注人水贿後及共同注人―種VWF 溶液（Haemate® HS,相當於Haematep®者）後之 aPTT之進行過程。 對總共七隻去勢的公豬以七小時作含〇 3毫克重組水蛭 素（r-水經素）/公斤X小時的靜脈内注射。注射開始三小時 以後，將其中三隻另外地以靜脈内大丸劑的方式施以包含 VWF的濃縮物(66 vWF單位/公斤)接著以w vWF單位/公斤X 小時作二小時注射（VWF組）。其他四隻則予以相等體積的 氯化鈉溶液以取代vWF(安慰劑组）。在實驗期間，利用 Simplate®法（Organon-Teknika公司）測定皮膚的出血時間， 並依照Neothromtin办法(Behringwerke AG公司）量測原生質中 的aPTT。如圖一所示，最初兩組的流血時間均升高，而7 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 請 先 聞 it 之 注 意 事 項 再 尝 装 訂 Α7 Β7 五、發明説明（6 ) 小時後，安慰劑組已升高刻正常値的大約3倍。在vWF組， 在以vWF處理後流血時間減低並且在7小時後再次達到幾乎 正常値（這兩組的差異在6小時和7小時於統計上很顯著）。 因此，vWF能使由於施用凝血酶抑制物「_水蛭素所增加的 出血之危險重新正常化。 在相同的實驗中，aPTT被量測以作為「_水蛭素之抗凝 固活性的指示。如表1所指示，在安慰劑組和vWF組之間無 法測得顯著的差異，而在兩組中均觀察到aPTJ呈大約2倍 的增加。 ** 注射開始 之後的1+時 (小時） aPTT (秒） 安慰劑組 vWF組 0 124.3± 56.0 101 ·0±34.3 6 185.7±1〇3.2 213·7±80.8 7 165.0± 83,7 214.8±32.3 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 丁 經濟部中央擦準局貝工消費合作杜印製 以下的抗凝固劑可與VWF合併：肝素；低分子量肝素 ;合成的（重組的)凝血酶抑制物如r_hir，及其衍生物如聚乙 二醇水蛭素或Himlog，·合成的低分予量凝血酶抑制劑如 gartroban (MCI 9〇98 ’見於Tamao Y.等人所著本發明引用者） :合成或重組的FVII抑制劑比如組織因子途徑抑制物(TFp丨) ，血小板拮抗物如乙醯柳酸或合成的血纖維蛋白原受體抑 制物和凝血細胞抗體（例如：7E3);維生素κ之括抗物如殺 〜8〜 本紙張尺度適用 CNS )~4mr ( 210~29T^F) A7 B7 發明说明（7) 鼠靈(Warfar丨n)，芬普羅蔻蒙(phe叩r〇c〇um〇n)及苊香豆醇。 以下的血纖維蛋白溶解劑非常適於和以上所提過的抗 凝固劑和vWF合併：鏈球菌激酶；血纖維蛋白溶酶原活化 子(rt-PA和uPA)及其衍生物如舉例言之apsac。 寬盡龙L2_: *vWF溶液Haemate®與水蛭素和阿斯匹靈之組 合相結合時其對於流血時間的作用。 在這項貫驗當中，凝血酶抑制物水蛭素與血小板抑制 物阿斯匹靈合併而利用到總共4隻豬。先將阿斯匹靈以2〇 毫升/公斤的濃度注射半小時，然後將水蛭素以〇 3毫克/公 斤X小時的濃度注射(M))7小時。 三小時後’對其中2隻豬施avWF溶液（Haemate® HS) ，更特定而言，是施以66vWF單位/公斤之靜脈内大丸劑， 然後以2小時進行Ί87 vWF早位/公斤X小時之靜脈内注射。 賸下的豬隻則予以相等量之氣化鈉溶液。表2顯示三小時 後流血時間已升高至約為原初値（零値）的2 5倍。雖然施用 vWF 4液於6小時能導致流血時間顯著地減低（減低至原初 値的1·8倍）’而以NaCI處理的豬隻之流血時間卻更増加至 原初値的2.9倍。 n 1« n I n . n i^i i n T (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張胁（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消费合作社印装 A7 —--------— B7 五、發明説明（8 ) 表2·由於水蛭素和阿斯匹靈所造成的抗凝固作用 :由於 vWF濃縮物而使流血時間縮減 流血時間 (為零値的乘倍） 處理方式 零値 3小時 6小時 抗凝固作用 (水蛭素+阿斯匹雷 + NaCI) 2_9±0.4 抗凝固作用 (水蛭素+阿斯匹雷 + vWF)* 虚 ---— 1 2.5±0.4 1 ·8±0·5

*Haemate®HS 因為所使用的vWF溶液除了 vWjZ之外亦包含凝固因子 VIII(FVIII) ’所以我們進行試驗以測定是否含低量FVII丨的vWF 濃縮物之施用亦可被利用在減少r水蛭素引發的流血時間 延長上。我們對7隻豬以0.3毫克r-水蛭素/公斤X小時注射7 小時。3小時以後，將其中3隻豬以含低量FV川的vWF濃縮 ，處理|以66_：單位/公斤作靜脈内大丸劑，接著用i8?vWF ，位/公斤X小時作靜脈内注射）。另4隻豬則予以相等量之 氯化鋼落液。表3顯示含低FVII丨之vWF之濃縮物亦可縮減 由於r-水蛭素而增加的流血時間。 〜10〜 尽紙狀狀心關*標準（CNS) A4^ (21GX297公董） (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) 、言

A7 B7 五、發明説明（9 ) 表3 :含低量FVIII的vWF濃縮物對由於r-水蛭素而增加的皮 膚流血時間之效果 流血時間 (為零値之乘倍） 處理方式 零値 3小時 6小時 r-水經素+ NaC 1 2.9±0.75 1 2.6土1 _0 r-水蛭素+ vWF 1 _9±0_5 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

Claims (1)

1. 公告本 f — -一 11—^ % A8 B8 C8 D8 六、申請專利範E F----- 專利申請案第84110150號 ROC Patent AppIn. No. 84110150 修正之申請專利範圍中文本-附件— fended Claims in Chinese - Fn^| j (民國88年5月17日送呈） (Submitted on May 17，1999) L-種祕降低病患“絲之醫_成物，其係包含抗血检 形成劑和/或血纖維蛋白溶解劑為其成份A以及爾(職 Willebrand因子）或具有vWF活性之片段為其 。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -s. -沪丨· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 12 - 本紙張从適用中 81 国(.CNS ) Μ 胁（21〇X297公釐）—8-9-'Claim/EC(9BEHRIN)