TW294722B

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Publication number: TW294722B
Application number: TW082100463A
Authority: TW
Original assignee: Chiron Corp
Priority date: 1991-12-23
Filing date: 1993-01-20
Publication date: 1997-01-01
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^ ： m 82100463 致專利电謗案中文説明菩修正頁轉％2§1咳 294722 R3- >X U. 補充 . 民园83年9乃彦正五、發明説明（1 ) 本發明是核酸雜交分析之領域。特言之，其係有關用於偵測人類免疫缺失病毒（Η I V )之新穎的核酸探針。技藝背景 A I DS及ARC之病因物先前稱之爲LAV、 HTLV — I I I、ARV，及HIV。於文後稱爲 Η I V。經由各種探針序列及雜交型式，則此病毒rNa 或DNA之偵測是可行的。 PCT W 0 88/01302，公告於 1987 年8月1 1日，揭示用於充作HIV DNA或RNA偵測用探針的13種HIV寡核苷酸。PCT W Ο 87 /07906 ，公告於1987年6月22日，揭示， Η I V病毒之變種，及使用其DNA診斷A I DS之用法 ° E P 0 3 2 6 3 9 5 A2，公告於 1989 年 1月2 7日，揭示111¥ DNA探針展延之核替酸 2 4 3 8 _ 2 4 5 7，以偵測與多發性硬化有關之序列。由於聚合酶鏈反應之出現，刺激利用主要來自p〇l 及gag基因區探針之各種分析法。Spector et al. C 1 i ~ π. Chem. 35/8:1581-1587. 1989)及 Kellog et al.( Analytical Biochem 189:202-208，1990)揭示利用聚合十 ^ 酶鏈反應之Η I V原病毒DNA之定量分析法，其中之引 »> 二子來自1^1\^莒&叾基因。1^〇11161161:.&1.( Clin. Chem. ι_ ' ' I 35/9:1 8 26 - 1 83 1 )揭示一種互補於HIV pol基因 mR'N A 保留區（conserved region)之可擴大之 RNA 探 ::.............:·:一:…：:....................{......................':裝:·一…：訂................(琛 |請先νΊΐδ背面之注¾亊項再>irct本頁) 294722

A6 B6 五、發明説明（“）針。Coutlee et al.(Anal. Bin r.bPrn 1 8 1:96 - 1 05, 1 989 )揭示利用聚合酶鏈反應之Η I V DNA免疫偵測法，其中使用的引子組互補於Η I V p〇l及gag基因之序列 ° E P 0 2 7 2 098，公告於 1987 年 12 月 1 5日，揭示利用寡核苷酸探針展延核苷酸8 5 3 8 — 8547 及 8658 — 8677 之 HIV RNA 序列之 PCR擴大作用及偵測。EP 〇 229 701，公告於‘1 9 8 7年1月9日，揭示經由HIV gag Μ DNA之擴大作用來偵測Η I V之方法。P C T W Ο 8 9/1 0 9 7 9揭示一種混合擴大作用及核酸雜交之核酸探針分析法，其中使用捕獲及告知探針，再固化於固相載體上。以此技術擴大Η IV gag p 17面域內。另一策略稱之爲|可逆的標的捕獲〃。如，Thomp.so-n et a 1 . (C 1 i π . Chem . 35/9 :1 78 - 1 88 1. 1 989 )揭示 HIV RNA之'"可逆的標的捕獲# ，其中所提出之商品化的d A_加尾之合成的寡核苷酸，可選擇性純化分析物核酸，互補於Η IV pal基因之經標記之反意Unu-sense) RN A 探針可提供訊號。 Gillespie el: al. (Molecularand Cellular Probes 3:73-86, 1989)揭示用於Η I V RNA可逆式標的捕獲之探針，其中探針係互補於HIV pol基因之2 0 9 4 — 4 6 8 2核苷酸序列 Ο Kumar et al.揭示一種用於Η I V DNA之、探針替換# (probe shift)分析法，利用互補於Η IV (請先閱讀背面之注意事項再蜞ftT本頁) .乐又中J』孓以苹丨CNS)甲4)AhV(2U)x 297公筌1 9^4122 A6 ______ B6_ 3 五、發明説明（） gag及pol基因之D N A序列。探針替換分析法依據經檫記之寡核苷酸與溶液中P C R擴大片段之雜交作用。如此形成之雜雙體（heiniduplex)被偵測，再於未變性凝膠上分級分離。 Keller et al.(Anal. Bine hem. 177:27-32. 1 989 ) 揭示一種微滴定爲基礎之三明治式分析法，以偵測展延在 gag編碼區Pst I位置之Η IV DNA。 Viscidi et al( J, Clin. Micro. 27:120-125, 1 989 )揭示一種Η I V R N A之雜交分析法，利用固相抗一生物素抗體及與DNA- R ΝΑ雜交體具特異性之酵素標記的單株抗體，其中探針幾乎展延在所有的聚合酶基因及gag基因之3 /端。歐洲專利案（EPA) 89311862 ，公告於 1 9 8 9年1 1月1 6日，揭示一種利用固相捕獲工具以偵測核酸之診斷套組及方法，並描述使用互補於Η I V gag基因之D Ν Α序列以偵測Η I V D Ν Α之用法。共有的美國專利案No . 4 ，868 ，105中描述一種溶液相之核酸三明治式雜交分析法，其中欲分析之核酸先於第一容器中，先與溶液中之經標記探針組及捕獲探針組雜交。之後探針-分析物複合物再轉移至第二容器中，其中含有固化在固相上之探針，其實質上與捕獏探針之片段互補。片段與經固化之探針雜交，因此自溶液中移去複合物。令分析物呈經固化複合物之型式後可助於分析中接下來之分離步驟。最後，經過標記探針組之單股片段與 (請先閃讀背面之注意事項再填寫本頁} 汰义中3 3孕丨C\Si中4悅At‘21(lx297公垃1 294722 A6 . B6_ 4 五、發明説明（）經標.記探針雜·交後，可經由直接或間接得自檩記物之訊號偵測含有分析物之複合物。共有的歐洲專利案（EPA) 883096976揭示與美國專利案4，8 6 8，1 0 5中所述分析法不同之變化法。擴大作用中係使用核酸多體。這些核酸多體是分支之聚核苷酸，其經構築具有一段片段係可專一地與分析物核酸雜交，或與結合至分析物上之核酸（分支或線型的 )雜交，並與專一雜交地經標記探針之第二片段交互作用。於應用多體之分析中，係依循於第一容器中分析物與標記物或擴大探針組及捕獲探針組之雜交之第一步驟，再將複合物轉移至另一含有經固化核酸之容器，其係可與捕獲探針之片段雜交。多體再與經固化之複合物雜交，且經標記之探針再依序與多體上之第二片段交互作用雜交。由於多體可提供許多供標記探針粘附之位置，由是擴大訊號。所揭示之擴大子及捕獲探針序列有B型肝炎病原、淋病奈瑟氏球菌、於淋病奈瑟氏球菌中之青徽素及四環徽素抗性、及砂眼衣原體。於1 9 9 0年7月2 7日公告之共有的美國專利案 No . 5 5 8 ，8 9 7，描述可用於上述溶液相分析中之 ; 大的梳狀分支型多核苷酸多體之製備。此梳狀物於分析法中比分子較小的多體提供更多之訊號增强作用。於美國專利案No . 5 ，030 ，557中（ 1 9 87年11月24日公告），揭示一種、輔助子，寡 | 核1&酸’經選擇可結合至分析物核酸，且在標的上置入不一…:-…：Γ.,ί..............................(.....................-…裝：·：........./.........訂...............(線 (U先閱讀背面之：'^意事項再堉寫衣頁)

.Ν 认伥 mtl 中 2 BTiU? 41-1 CXS I 〒 4 規格· I 2 U)X 297公垃 I 294722 A6 ______ B6____ 5 五、發明説明（）同的二級及三級結構，以助探針與標的之結合。發明...之揭示本發明一方面是用於三明治式雜交分析中充作擴大探針之合成的寡核苷酸，其包括第一片段，其具有實質上與Η I V核酸片段互補的核苷酸序列；及第二片段，其具有實質上與核苷酸多體之寡核苷酸單位互補的核苷酸序列。本發明另一方面是於偵測Η I V之三明治式雜交分析中充作捕獲探針之合成的寡核苷酸，其包括第一片段，.其具有寅質上核酸片段互補的核苷酸序列；及第二片段，其具有實質上與被結合在固相上之寡核苷酸互補的核苷酸序列。本發明另一方面是一種可甩於Η I V三明治式雜交法中之空間子寡核替酸。本發明另一方面是用於偵測樣品中有Η I V存在之溶液相三明治式分析法，其包括： (a )於雜交條件下，將樣品與過量的下列物質接觸 :(i )—種擴大探針寡核苷酸，其包括第一片段，其具 \ 有實質上與111乂核酸片段互補的核苷酸序列，以及第二 1' y 片段，其具有實質上與核酸多體之寡核苷酸單位互補的核 ^ 苷酸序列，及（i i )—種捕獲探針寡核苷酸，其包括第一片段，其具有實質上與Η I V核酸片段互補之核苷酸序 (請先閱讀背面之注总事項再填寫本頁) .·裝 •、1Τ A6 ____*_B6_ ,6 五、發明説明（）列，與寅質上與被結合在固相上之寡核苷酸互補之第二片段； (b )在雜交條件下，令（a )步驟之產物與上述被結合至固相上之寡核苷酸接觸反應； (c )然後分出未結合至固相之物質； (d )在雜交條件下，令（c )步驟之經結合產物與核酸多體接觸，該多體包括至少一種寡核苷酸單位，其寅質上互補於擴大探針多核苷酸之第二片段，及至少一個第二寡核苷酸單位，其實質上互補於經標記寡核苷酸； (e )移去未結合之多體； (f )在雜交條件下將（e )步驟之固相複合物產物與經標記之寡核苷酸接觸； (g )移去未結合之經標記之寡核苷酸；及 (h )於（g )步驟之固相複合物產物中偵測標記物之存在。本發明另一方面是用於偵測Η I V之套組，包括用於偵測樣品中Η I V之套組，包括混合 (i ) 一組擴大探針寡核苢酸，其中擴大探針寡核苷酸包括其核苷酸序列實質上與Η I V核酸片段互補之第一片段·，及其核苷酸序列實質上與核酸多體之寡核笹酸單位互補之第二片段； (i i ) 一組捕獲探針寡核苷酸，其中捕獲探針寡核苷酸包括其核苷酸序列實質上與Η I V核酸互補之第一片 .........................................................--......................穿....................*- (請先閱-背面之注意事項再填寫本頁)

UUk 又戊迗:丨丨中 Bi 孓 MU*- < CXS i 甲 4 % IS·; 211) X 297 公货 I 294722 系 82100463 B7 費舞二（A) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製

號專利申請案中文说明嘗,f正员 -民1〇月甚五、發明说明（7 ) 段，及實質上與結合至固相之寡核替酸互補之第二片段： (ί i ί )核酸多體，該多體包括實質上互補於擴大探針多核苷酸第二片段之至少一種寡核苷酸單位，及實質上互補於經標記寡核苷酸之許多的第二寡核苷酸單位；及 (i ν )—種經標記之寡核μ酸。基於此中所揭示的，這些及其他的具體實例對一般精藝者應是淺顯的。圖式簡單說明附圖·三明治雜交分析法，利用多個分析物特定之捕獲探針及擴大探針。如下所示序列表中符號之意義： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· (Ί - i In»11 i - - - I - - - ...... - -I— - 1^1 : —J. 1 I - - · ---. 丁符號代表意義 R… A 或 G W ... … A 或 T / U S… … C 或 G Y… … C 或 T / U K… … G 或 T / U v ... … A 或 C 或 G 非 T / U Η… … A 或 C 或 T / U : 非 G D " * A 或 G 或 T / U : 非 C Β… C 或 G 或 T / U : 非 A Ν ··· … ( A 或 C 或 G 或 T / U )或 (未知或其它）本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 85.年 7 Ϊ 五、發明説明（7-1) 實行本發明之方法定義 ^溶液相核酸雜交分析'意指於共有的美國專利案 No ·4 ，868，105 及 EPA883096976 中所述及申請專利範園之分析技術。 '經修飾之核苷酸'意指可穩定地納入多核苷酸中之核苷酸單體，且其具有額外的官能基。較好，經修飾之核苷酸是5 < -胞嘧啶核苷，其中Ν4 _位置經修飾以提供官能性羥基。 '擴大子多體"意指一種分支之多核苷酸，其可同時直接或間接地雜交至分析物核酸及許多多核苷酸交互作用上（即是另一多體之交互作用或經標記探針之交互作用）。多體上之分支可由共價鍵結達成，且多體由二型寡核苷酸單位組成，其可分別雜交至分析物核酸或雜交至分析物核酸及許多經標記探針上。此種多體之組合物及製備，描述於ΕΡΑ 883096976及美國系列No· --i.Ί丨-丨裝丨— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央搮準局負工消费合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210x297公釐）-9-1 A6 B6 五、發明説明（〇 ) 558，897 (公告於1990年7月27日），其揭示均列爲本案參考。 ''空間子寡核苷酸#是指一種寡核苷酸，其結合至分析物RNA，但不含可與固相粘附之任何序列，或可爲擴大探針偵測之工具。 '擴大探針# 一語意表分支或線型之多核苷酸，其經構築可具有與分析物核酸可專一性雜交之片段，且可與專一雜交至擴大多體之第二片段交互作用。 1捕獲探針〃意指一種寡核苷酸，其具有可實質上與標的DN A之核苷酸序列互補之片段，及實質上與因此固化在固相之探針核苷酸序列互補之片段。 ~大#於此中所用的係描述本發明之梳狀分支多核苷酸，意指具有至少約1 5個分支位置及至少約2 0個經標記探針結合序列之交互作用之分子。 '梳狀#於此中所用的是描述本發明分支多核苷酸之結構，意指具有線型架構之多核苷酸，並自骨架中伸出許側鏈。 ^可解離之鏈結子分子|意指可穩定納入多核苷酸鏈中之分子，且其包括可爲化學處理或物理處理打斷或解離之共價鏈，如經由照射。此中所揭示的所有核酸片段均以5 /至3 >方向書寫出來。核苷酸之設計依I UPAC — I UB生化命名協會之核Μ酸符須而定。 ..........:: ................................{....................一裝::::訂 {請先聞請背面之注意事項再項寫本頁) 木/人ik八中d彐iU'M*-丨C.VS ) 蚍疥丨210 X 29 7公兑I 10 A6 'B6 五、發明説明（）溶液相雜交分析以下爲溶液相三明治式雜交法之一般策略。分析物核酸與過量的二種單股核酸探針組，共置於微滴定孔洞中： (1 ) 一組捕獲探針，各自具有實質上互補於分析物之第 1結合序列及實質上互補於結合至固相載體上之核酸之第 2結合序列，如孔洞表面或珠粒，及（2 )—組擴大探針 (分支或線型的），各自具有可專一地結合至分析物之第 —結合序列，及可專一地結合至多體片段之第二結合序列。生成的產物是含有三種組份的核酸複合物，其係由二種探針藉其第一結合序列雜交至分析物所組成者。探針之第二結合序列因未同時互補至分析物，故保留呈單股片段。此複合物經由捕獲探針之第二結合序列而雜交至固化在固相表面之探針上。生成之產物包括經由雙體結合至固相表面之複合物，此雙體係由結合至固相表面之寡核苷酸及捕獲探針之第二結合序列所形成的。未結合之物質再自表面中除去，如利用洗滌。之後再於雜交條件下，將擴大作用多體加至經結合之複合物上，使多體可雜交至複合物擴大探針中可應用之第 2結合序列上。再自任何未結合多體中以洗滌分出所生成之複合物。於條件下再加入經標記之寡核苷酸，以雜交至多體之實質上互補的寡核苷酸單位上。再洗滌所生成之經固化經標記核酸複合物，以除去未結合之經標記寡核苷酸〇 .分析物核酸可得自各種來源，如生物流體或固體粒子 :::.·::::.....……：·.....................< ....................:*裝.::”..：：訂 <請先閒讀背面之注意事項再堉寫本頁) 汰尺/2_返川中彐a家漂苹（CXS丨甲4吡洛I 210X 297公垃i -.11 - A6 __B6_ 10 五、發明説明（），且可製備以用於各種方法之雜交分析中，如蛋白酶K/ SDS、離液序列高之塩類，等。同時，減小分析核酸平均大小是有益的，可採用酵素性、物理性或化學方法，如限制酶、音波震盪、化學降解（如金屬離子）等。片段可小至0 . lkb，通常至少約0 . 5kb，且可大於1 k b。於分析時分析物片段呈單股型式。當片段以單股型式自然存在，則變性將不需要。然而，當片段呈雙股型式，序列應予以變性。變性可以各種技術來進行，如鹼，通常爲由約0 . 0 5至0 . 2M之氫氧化物、甲醯胺、塩類、熱、酵素、或其混合。實質上互補於分析物序列之捕獲探針及擴大探針之第一結合序列，各自至少1 5個核苷酸，通常至少2 5個核苷酸，且不多過約5 k b，通常不多過約1 k b，較好不多過約1 0 0個核苷酸。其通常約3 0個核苷酸。其通常經選擇以結合至分析物之不同序列上。第一結合序列可基於各種考慮來選擇。依據分析物之本質，將可著眼於一致序列、與多型性有關之片段、特殊之表現型或基因型、特殊之品系、或其他。所使用之不同擴大及捕獲探針之數目會影響分析之® 敏性，因爲使用愈多的序列，由分析系統提供之訊號愈大。再者，使用愈多之探針片段可使用更爲迫切之雜交條件，由是減少僞陽性結果之發生。因此一組中探針之數目，爲至少一種捕獲探針及至少一種擴大探針，更好是二種捕獲及二種擴大探針，且最好5 — 1 0 0種捕獲探針及5 - ^ ~ . - - · - ....................................·、.·.....................< ......................^......................-叮 I請先¾¾背面之注意事項再填寫本頁)

；'! t ^ r4iH.tfi-(2inx 297^>^· I A6 ____ B6 __ 五、發明説明（11) 1 0 0種擴大探針。用於Η IV之寡核苷酸探針序列之設計，係將來自GenBank的18種HIV DNA序列排列。選出pol基因內有最大同質性之區域爲捕獲探針，而同質性少之區域爲擴大探針。選出異質區爲空間探針。因此，若有更奪的Η I V種被鑑知及定序，則可設計更多之探針，或者提出更好的探針組，係將新種序列或分離物序列與上文1 8種排列，且類似地鑑定出有最大同質性及較少同質性之區域。設計空間寡核苷酸，係欲加入雜交摻合物中，使 RNA不致被降解。設計捕獲探針序列及標記探針序列，如此捕獲探針序列與標記探針序列散佈，或捕獲探針序列與標記探針序列聚集在一起。目前較佳之探針組及其捕獲或擴大區，即可與Η I V 核酸專一地雜交之區，示於實例2中。選擇捕獲探針及擴大探針之第二結合序列，使其實質上分別互補於結合至固相表面之寡核苷酸，及多體之片段，且如此不爲樣品/分析物中之內源序列遇到。第二結合序列可接於第一結合序列，或由中間之非互補序列隔開。若必要時探針可包括其他的非互補序列。這些非互補序列必須不可阻礙結合序列之結合，或造成非專一性結合。捕獲探針及擴大探針可以寡核苷酸合成步驟，或以選殖法製備，較好是前者。要了解，結合序列未必要完全的互補，以生成同二體。在許多狀況下，雜二體已足夠，其中忽略不計算由5個 {請先閱讀背面之注意事項再填Κ本頁) S A & K m'M miU? ΐ (CNS 丨-f 4悅格 I 21(1 X 297公兌 I 13 - 294722 A6 B6 < 五、發明説明（12) (請先閱讀背面之注意事項再"寫本頁) 以上.核苷酸形成之環，有少於1 〇 %之鹸基是配對錯誤。因此，於此中所用的 ' 互補'意指確.實之互補，其中在結合區中的每一鹼基確實地相當，且寅質上互補^意指 9 0 %以上同質。經標記之寡核苷可包括實質上互補於多體重覆寡核苷酸單位之序列。經標記之寡核苷酸包括一種以上之分子（ '標記物'），其直接或間接地提供可偵測之訊號。檩記物可結合至實質上互補序列之個別成員，或可呈末端成員或具許多標記物之末端尾部型式存在。將標記物結合至寡核苷酸序列之各種方法，文獻中已有述。如見，Leary e t al., Proc. Natl. Acad. S c i . USA ( 1 983 ) 80:4045: Renz and Kurz, Nucl. Acids Res. (1984) 12:3435;

Richardson and Guraport, Nucl. Acids Res. ( 1983 ) 1 1 ：616 7; Smith e t al., Nucl. Acids. Res. ( 1 985 ) 1 3 : 2399; Meinkoth and Wahl, Anal. Biochem. (1984) 138 :267。標記物可共價或非共價地結合至實質上互補序列上。可應用之標記物包括放射核種、螢光劑、化學發光劑、染料、酵素、酵素受質、酵素輔因子、酵素抑制劑、酵素亞單位、金屬離子及其他。舉例而言，特殊標記物包括：螢光素、若丹明、德州紅、藻紅朊、辙形酮、魯米諾、 NADPH、α —半乳糖苷酶、璋菜過氧化酶、鹼性磷酸酶等。捕獲探針及擴大探針對預期莫耳分析物之比率，各自至少爲化學計量，且較好過量。此比率較好至少約1 . 5 -14: A6_ ,_ B6__ 13 五、發明説明（） :1，且更好至少2:1。通常在由2:1至106 ： 1 之範圍中。各個探針之濃度通常由約1 〇 -5至1 〇，樣品核酸濃度由1 〇-21變化至1 〇_12 Μ。分析中雜交步驟通常花費1 0分至2 0小時，較好可在1小時內完成。雜交在略升高之溫度下進行，通常由約2 0°C至8 0°C ，更常是由約3 5°C至7 0°C，特別是6 5°C。雜交反應通常於水性介質中進行，特別是經緩衝之水性介質，其中包括有各種添加物。可應用之添加物包括低濃度之去污劑（0 . 0 1_1%)、塩類、如檸檬酸鈉（ 0 . 0 1 7至0 . 1 7M) 、Ficoll'聚乙烯吡咯啶酮、載體.核酸、載體蛋白質等。非水性溶劑可加至水性介質中，如二甲替甲醯胺、二甲亞硪、醇類·、及甲醯胺。這些其他溶劑之含量通常由2至5 0 %。可以溫度、埴濃度、溶劑系統及其他，控制雜交介質之嚴格度（stringency)。因此，依據重點序列之長度及本質，可變化嚴格度。· 依據本發明，進行經擴大核酸雜交分析之套組，包括下列試劑之包裝組合：擴大探針或探針組；捕獲探針或探針組；擴大多體；及適當的經檩記寡核苷酸。這些試劑通常於套組之分別容器之中。套組中也可包括將分析物變性之變性試劑、雜交緩衝溶液、洗液、酵素受質、陰性及陽性控制組、及進行分析之書寫指示。以下實例說明本發明。這些實例不欲以任何方式限制本發明。 -15 -

本坟汰凡川t彐a •diUCXSi _.Ρ·(规疥（21(Jx297公垃I **··-' ...:…一…：：」................................................{ ......................^.......................玎 (請先閲^背面之注意事項再蜞寫本頁}

五、發明説明I 14 A6 B6 KM. 實例梳狀分方多核符酸之合成此實例說明具有15個分支位置及三個經標記探針結合位置之側鏈伸展之梳狀分支多核苷酸之合成。此多核替酸經設計可用於EPA 8 8 3 0 9 6 9 7 6所述之溶液相雜交方法中。寡核奋酸的所有化學合成，均於自動DNA合成儀上進行（A p p 1 i e d B i 〇 s y s t e m s，I n c . , ( A B 1 ) 3 8 Ο B 機型 )。使用/? -氰基乙基型之胺基磷酸酯化學，包括應用 PhostelTM試劑（ABN )之5 < —磷醯化作用。除了另有所.示，使用標準的AB I策略。當指示使用許多循環時 (如1 2個循環），於所示循環中應用由AB I提議之許多標準量之胺基磷酸酯。此中所附加的是於Applied Biosystems 3 8 0B 型 DNA 合成儀上進行 1 . 2 及 6 . 4 循環之程式。先製備以下結構之梳體： 3 -Tn g(TTX- )15GTTTGTGG- 51 (RGTCAGTp-5,)l5 其中X >是分支的單體，且R是高碘酸塩可解離之鏈結子。以1 · 2循環策略，使用3 3 · 8毫克之胺丙基一衍生化之胸苷控制孔玻璃（CPG) ( 2 0 0 0A，每克載體 • - --Γ ~ ..............)................一.....................{......................裝......................訂 (請先閏讀背云之注意"項再項寫本頁) .Κ η ： { ；I] t zi 'ύΐ % ί.Ά (CNS i 'p 4 ti- ( 210 X 297^ -16 - .

A6 __. _B6___ 15 五、發明説明（）有7 . 4微莫耳胸苷），先合成經由15 (ΤΤχβ)重覆子之梳體部份。分支位置之核苷酸具下式： X,j4-OR: 骨架_〇骨架其中R 2代表

於合成梳體（不包括側鏈）時，々-氰基乙基胺基磷酸酯單體於A、C、G及T時之濃度爲0 . 1M，於分支位置單體E爲0 . 1 5M，及Phost:elTM試劑爲0 . 2M 。於去保護作用過程中，利用逐步之流過以3 %三氯醋酸 /二氯甲烷進行去三苯甲基化作用。結論爲5 — DMT以乙醯基取代。如下於每一分支單體位置處合成化式3 — — ii.· 4 RGTCAGTp (SEQ ID NO:1)之可解離 ir ：ί 鏈結子R及六鹼基側鏈伸展作用。手工進行鹸基保護基之 | 去除（於上式中之R2 )，同時保留於合成梳體相同管柱广中之CPG載體。於R2 =乙醯丙酿基之例子時，引入 t ^ CNSi 210X297* ' -17- ..............-....丨 ........................{ ......................^ t請先閱讀背面之注意亊項再填筇本頁| A6 B6 1 c 五、發明説明（） 0 · 5M水合胼於吡啶/冰醋酸（1 : 1 v/v )之溶液，並保持與CPG載體接觸9 0分鐘，並每1 5分鐘更新液體，再以吡啶/冰醋酸（1 : 1 v/v )及後的乙睛充份洗滌。一旦將可解離鏈結子R去保護後，可利用 6 . 4循環加入六鹸基側鏈之伸展。於這些合成中，胺基磷酸酯之濃度爲0 .1M(除了 0 . 2 M R 及PhostelTM 試劑；R 爲 2，3 —二（苄醯氧基）丁氧基）苯基）乙基一 2 -氰乙基一N，N —二異丙基胺基磷酸2 — (4 —（4— (2 —二甲氧基三苯甲基氧基）乙基）苯氧基酯以3 %三氯醋酸/二氯甲烷之溶液，利用連續流過以達成去三苯甲基作用，之後以甲苯/氯甲烷（1 : 1 v / v )溶液潤濕。於3 8 0及中利用、C E N Η 3 #循環，自動地將分支之多核苷酸鏈自固相載體上除去。氫氧化銨溶液收集於4毫升有螺蓋之Wheaton小瓶中，並在 6 〇 °C下加熱1 2小時以除去所有的鹸基保護基。冷卻至室溫後，溶劑於高速眞空蒸發器中除去，殘留物則溶於 1 0 0微升水中。也利用自動合成儀，進行以下結構之3 >骨架伸展（片段A)、側鏈伸展及連接摸板/鏈結子： 3 >架構伸展 S^TCCGTATCCTGGGCACAGAGGTGCp-S’ （SEQ ID N0:2) :;*:...........:::....................................................< .....................一裝…:::::訂 (請先閔讀背面之注意事項再塡苟本頁) 八川 t 3 by 孓j.nuCNS丨1P4从格1210X297公兑 1 -18 - A6 B6 17 五、發明説明（ > 側鏈伸展 3，-GATGCG(TTCATGCTGTTGGTGTAG)3-5，（SEQ ID NO: 3) 用於鏈結 3 ^架構伸展之連接模板 3, -AAAA/UAAiUGCACCTp-5，（SEQ ID N0:4) 用於鏈結側鏈伸展之連接模板 3，-CGCATCACTGAC-5，（SEQ ID N〇 : 5) 粗製的梳體以標準的聚丙烯醯胺凝膠（7 %加上7M 尿素，及IX TBE操作緩衝溶液）方法純化。如下將3 β架構伸展及側鏈伸展連接至梳體上。梳體 ,, (4微微莫耳/微升）、3 /架構伸展（6 . 2 5微微莫 .Γ.· 耳/微升）、側鏈伸展（9 3 · 7 5微微莫耳/微升）、 ^ 側鏈鏈結模板（7 5微微莫耳/微升）及架構鏈結模板（

••J

\ 5微微莫耳/微升）混合於ImM ATP/5mM i: 'I' D τ T / 5 0 m Μ Tris— HCI，PH8.0/ ;i. u 1 0 .m M MgCl2/2mM亞精胺中，並加上0. 5 1---1-. ..............一：：：：-L...............................................{ ......................^......................-玎 (請先閱^背面之注意事項再4¾本頁一巡川中3γ掊半（CNS MP 4 WJV丨210 X 29 7公竑| -19 - 294722 A6 B6 18 五、發明説明（）單位/微升之T 4多核苷核激酶。混合物於3 7 °C下培育 2小時，再於水浴中加熱至9 5 °C，之後緩慢冷卻至3 5 eC以下歷1小時。加入2mM ATP、1 OmM DTT、14%聚乙二醇，及〇.21單位/微升T4連接酶，混合物在2 3 °C下培育1 6 — 2 4小時。DNA沈澱於N a C 乙醇中，懸浮於水中，再接受如下之第二次連接作用。混合物調整至ImM ATP ' 5 m Μ D Τ.Τ、14% 聚乙二醇、50mM Tris— HC 芡、pH7 . 5、1 OmM MgCj?_2 、2mM 亞精胺、 Ο . 5單位/微升T4多核苷酸激酶且加入〇 . 2 1單位 /微升T 4連接酶，·且混合物於2 3 °C下培育1 6〜2 4 小時。連接產物以聚丙烯醯胺凝膠電泳純化。經過鏈接及純化後，部份產物標以32P，並在R位置接受解離，係以N a I 0 4水溶液氧化1小時而達成。樣品有以P A G E分析以決定所納入之側鏈伸展數目，係定量凝膠中帶上之放射活性標記物。發現產物共有4 5個經標記之探針結合位置。實例2 Η I V D Ν Α利用多體之三明治式雜交分析此實例說明於Η I V DNA分析中，本發明之用法 Ο 於此分析中使用5X3#擴大之溶液相核酸三明治式雜交分析型式。、15X3^2設計衍生自此型式應 .........................{ .....................:裝：.::(……訂.................(-f {請先5?讀背面之注意事項再填寫本頁) .卜 A tk Λ 4:i! t a ta 1 CNS )甲·4 規格（2 U) X 297 公,兑丨 -20 - A6 ,_B6__ 19 五、發明説明（）用二種多體之事實：（1)擴大探針具有可結合至Η IV 之第一片段（Α)，及可雜交至（2 )擴大多體之第二片段（B)，此擴大多體具有可雜交至片段（B)之第一片段（B' )，及15個片段（C)之交互作用，其中片段 (C )雜交至三個經標記之寡核苷酸。擴大及捕獲探針片段，及其個別於本分析法中之名稱如下。 Η I V擴大探針 HIV. 104 (SEQ ID N0：5) TTCCTGGCAAAYYYATKTCTYCTAMTACTGTAT HIV. 105 (SEQ ID N0：6) CTCCAATTCCYCCTATCATTTTTGGYTTCCATY HIV. 106 (SEQ ID N0：7) KTATYTGATCRTAYTGTCYYACTTTGATAAAAC HIV. 108 (SEQ ID N0：8) GTTGACAGGYGTAGGTCCTACYAATAYTGTACC HIV.'110 (SEQ ID NO：9) YTCAATAGGRCTAATKGGRAAATTTAAAGTRCA HIV. 112 (SEQ ID N0：10) YTCTGTCAATGGCCATTGYTTRACYYTTGGGCC Η I V . 1 13 (SEQ ID NO : 1 1) TKTACAWATYTCTRYTAATGCTTTTATTTTYTC HIV.114 (SEQ ID NO： 12) ..::...:::-:…….....................(.....................:'.裝;:.........^…訂................碌 <請先閱讀背面之;±.意事項再項寫本頁> 21 A6 B6 20 五、發明説明（） AAYTYTTGAAATYTTYCCTTCCTTTTCCATHTC HIV.115 (SEQ ID NO ： 13) AAATAYKGGAGTATTRTATGGATTYTCAGGCCC HI V.116 (SEQ ID NO： 14) TCTCCAYTTRGTRCTGTCY.TTTTTCTTTATRGC HIV.117 (SEQ ID NO： 15) TYTYYTATTAAGYTCYCTGAAATCTACTARTTT HIV.120 (.SEQ ID N0:16) TKTTYTAAARGGYTCYAAGATTTTTGTCATRCT Η I V.121 (SEQ ID NO ： 17) CATGTATTGATADATRAYYATKTCTGGATTTTG Η I V.122 (SEQ ID NO :18) TATYTCTAARTCAGAYCCTACATACAAATCATC Η I V.123 (SEQ ID NO : 19 ) TCTYARYTCCTCTATTTTTGYTCTATGCTGYYC Η I V.125 (SEQ ID NO : 20 ) AAGRAATGGRGGTTCTTTCTGATGYTTYTTRTC Η I V. 128 (SEQ ID NO : 21 ) TRGCTGCYCCATCTACATAGAAVGTTTCTGCWC Η I V.130 (SEQ ID NO :22) GACAACYTTYTGTCTTCCAYTGTYAGTWASATA HIV.132 (SEQ ID N0：23) YGAATCCTGYAAVGCTARRTDAATTGCTTGTAA HIV.133 (SEQ ID N0：24) 各丨丨中a a孓战4^CNSl甲4规格丨210x297公i - <請先閲^背面之注意亊項再堉窍衣頁) .裝

.*1T A6 B6 五、發明説明（） YTGTGARTCTGTYACTATRTTTACTTCTRRTCC Η I V . 135 (SEQ ID NO ： 25) TATTATTTGAYTRACWAWCTCTGATTCACTYTK HI V.136 (SEQ ID NO : 26) CAGRTARACYTTTTCCTTTTTTATTARYTGYTC Η I V.137 (SEQ ID NO : 27 ) TCCTCCAATYCCTTTRTGTGCTGGTACCCATGM Η I V.138 (SEQ ID NO :28 ) TCCHBBACTGACTAATYTATCTACTTGTTCATT Η I V.139 (SEQ ID NO :29) ATCTATTCCATYYAAAAATAGYAYYTTYCTGAT HIV.141 (SEQ ID N0：30) GTGGYAGRTTAAARTCAYTAGCCATTGCTYTCC HIV .142(SEQ ID NO : 31) CACAGCTRGCTACTATTTCYTTYGCTACYAYRG HIV.144 (SEQ ID N0：32) RYTGCCATATYCCKGGRCTACARTCTACTTGTC Η I V.145 (SEQ ID NO ： 33 ) DGATWAYTTTTCCTTCYARATGTGTACAATCTA HIV.146 (SEQ ID N0：34) CTATRTAKCCACTRGCYACATGRACTGCTACYA HIV.147 (SEQ ID N0：35) CYTGYCCTGTYTCTGCTGGRATDACTTCTGCTT Η I V.149 (SEQ ID NO ： 36 ) ,::...…..：：：.....................(.....................:-裝.：…..：：：：：訂 (熗先間*:ί5背面之注意事項再"寫本頁) 卞Ά汰八砍:4川中4囚孓f’A參（CN’S丨Υ 4从心10 X 297公垃I -23 - A6 . B6 22 五、發明説明（） TGSKGCCATTGTCTGTATGTAYTRYTKTTACTG HIV.151 (SEQ ID N0：37) GAATKCCAAATTCCTGYTTRATHCCHGCCCACC Η I V.152 (SEQ ID NO : 38) ATTCYAYTACYCCTTGACTTTGGGGRTTGTAGG HIV.153 (SEQ ID N0：39) GBCCTATRATTTKCTTTAATTCHTTATTCATAG Η I V.154 (SEQ ID NO ： 40 ) CTSTCTTAAGRTGYTCAGCYTGMTCTCTTACYT HIV.155 (SEQ ID N0：41) TAAAATTGTGRATRAAYACTGCCATTTGTACWG Η I V. 156 (SEQ ID NO : 42) CTGCACTGTAYCCCCCAATCCCCCYTYTTCTTT HIV.157 (SEQ ID N0：43) TGTCTGTWGCTATYATRYCTAYTATTCTYTCCC Η I V.158 (SEQ ID NO : 44)

TTRTRATTTGYTTTTGTARTTCTYTARTTTGTA Η I V捕獲探針 HIV.103 (SEQ ID N0：45) CATCTGCTCCTGTRTCTAATAGAGCTTCYTTTA HIV.Ill (SEQ ID N0：46) ATCCATYCCTGGCTTTAATTTTACTGGTACAGT HI V.118 (SEQ ID NO : 47) /-i/'l ;Λ ^ ΐ f；-'1-(CXSl'|Μ^^ι210χ 297^Αί 24 ........................·.....................{ ........................^.......................玎...............z {請先閲讀背面之注意丰項再4寫本頁} A6 B6 23 五、發明説明（） TATTCCTAAYTGRACTTCCCARAARTCYTGAGT HIV.119 (SEQ ID N0：48) ACWYTGGAATATYGCYGGTGATCCTTTCCAYCC HIV. 126 (SEQ ID N0：49) CCATTTRTCAGGRTGGAGTTCATAMCCCATCCA HIV.127 (SEQ ID N0：50) CTAYTATGGGKTCYKTYTCTAACTGGTACCAYA HIV.134 (SEQ ID N0：51) ATCTGGTTGTGCTTGAATRATYCCYARTGCATA HIV . 143 (SEQ ID NO : 52) CATGCATGGCTTCYCCTTTTAGYTGRCATTTAT HIV.150 (SEQ ID N0：53) AACAGGCDGCYTTAACYGYAGYACTGGTGAAAT Η I V . 159 (SEQ ID NO : 54 ) TGTCYCTGTAATAAACCCGAAAATTTTGAATTT 每一擴大探針除了寅質上互補於Η I V序列之序列外，尙含有互補於擴大多體片段之下列5伸展 AGGCATAGGACCCGTGTCTT(SEQ ID N0：55)° 每一捕獲探針，除了實質上互補於Η I V DNA之序列外，尙含有互補於結合至固相之DNA (ΧΤ1·) 之下游序列： <請先閃^背面之注意亊項再堉驾本頁) .裝訂人乂八 Α 占 $ 丨.:6^- ( C.\S ) Υ .1 觇格（21() X 297公兌 I 25 - 294722 A6 B6 五、發明説明（~ ) CTTCTTTGGAGAAAGTGGTG (SEQ ID N0:56)。除了擴大及捕獲探針。以下的Η I V空間寡核苷酸組也包括在雜交混合物中。 Η I V空間子寡核g酸 Η I V . N0X107 (SEQ ID NO ： 57) TATAGCTTTHTDTCCRCAGATTTCTAYRR, HIV.N0X109 (SEQ ID N0：58) VCCAAKCTGRGTCAACADATTTCKTCCRATTAT, Η I V.N0X124 (SEQ ID NO :59) TGGTGTGGTAARYCCCCACYTYAAYAGATGYYS, HIV..N0X129 (SEQ ID N0：60) TCCTGCTTTTCCYWDTYTAGTYTCYCTRY, Η I V.N0X131 (SEQ ID NO ： 61 ) YTCAGTYTTCTGATTTGTYGTDTBHKTNADRGD, HIV.N0X140 (SEQ ID N0：62) AATTRYTGTGATATTTYTCATGDTCHTCTTGRGCCTT, Η I V . N0X148 (SEQ ID NO : 63) GCCATCTKCCTGCTAATTTTARDAKRAARTATGCTGTYT. 微滴定盤之製備如下。自Dynatech Inc.購得White Microlite 1 Removawel丨長條（聚苯乙烯微滴定盤，9 6 {請先閱讀背面之注意事項再珥寫本頁) .裝 *ΐτ -26 - A6 B6 五、發明説明（）孔洞/盤）。各個孔洞充填並在室溫下培育1 5 — 2 0

次， N a 再次。此均分酸之肽溶 /毫至各育一液體 XT 毫克甲醯至1 7 . 以磁 m Μ D S 且吸取孔 Ο Η 2 Ο 以1 X Ρ 聚（苯丙多肽具1 子量爲每平均長度液與2 Μ 升（Ρ Η 孔洞。盤夜。之後洞以移 0微升 B S洗胺酸一 :1莫莫耳4 ，且含 N a 6 . 0 再覆以盤以1 去液體，並於 4次，賴胺酸耳濃度 7 ， 9 1 5 5 C又/ )之終塑膠膜 X Ρ Β 使用以下步驟以偶合寡 1 '之合成述於Ε Ρ A 的辛二酸二琥珀醯亞胺胺（D M F )中。2 6 〇〇微升的偶合緩衝溶 8)。再將偶合混合物性搅拌器攪拌3 0分鐘 WIN HCJ2200 微升，分。之後以1XPBS洗盤4 。孔洞再充塡以1 N 室溫下培育1 5 — 2 0分。盤且吸取孔洞以移去液體。 )購自 S i g in a C h e m i c a 1，I π c . 比率之phe : 1 ys，且平 0 0克。其具有3 0 9個胺基胺/莫耳。1毫克/毫升之多 1XPBS混合至0.1毫克濃度。取此溶液1 0 0微升加以避免乾燥，並於3 0°C下培 S洗4次，並吸取孔洞以除去核苷酸XT 1 ·至盤中。 883096976°20 基酯溶於3 0 0微升的二甲替 OD260單位之XT 1 '加液中（5 OmM磷酸鈉，pH 加至DSS— DMF溶液，並。NAP— 2 5 管柱，以 1 〇 .........................一........一....................i ........................t......................•玎.................ί·%. {汁先"請背面之：;ί意事項再填寫本頁) 磷酸鈉ρ Η 平衡於4 °C下，將偶合混合物 S — DMF溶液加至2毫升1 〇mM磷酸鈉，pH 5中。旋轉攪拌混合物至其混合，並塡料至已平衡之木认怅尺/1遇;丨1中囚四家戍準（〇化）甲4規格（210><297公发1 -27 - 咬濟部中央一ϊ毕/.jn工消伢合作社印¾ Α6 Β6 五、發明說明（ NAP~~2 5管柱中。以DSS —活化之XT1-DNA以3 . 5毫升1 酸鈉，pH6 . 5溶離出管柱。5 . 6 0 D 2 6。單位之經溶離的D .S S -活化之 XT1_DNA加至1 5 0 0毫升5 OmM磷酸鈉，pH 7 . 8中。此溶液取50微升加至各孔洞，且盤培育—夜。盤再以1 XPBS洗4次，且吸取孔洞以除去液體。盤最終之洗條完成如下。含0.5%(w/v) SDS之2 0 0微升0 . 2N NaOH加至各孔洞。盤再覆以塑膠膜並於6 5。(：下培育6 0分。之後以1 X P B S洗盤4次，再吸取孔洞以除去液體。經洗滌之盤加上乾燥劑小珠貯於2 — 8 Ό下。 Η I V DNA之標準曲線製備，係將經選殖之 Η I V DNA稀釋於Η I V陰性人類血清中，再將相當於 1 0 至 2 0 0 tmο 1 e = ( 1 0 2 分子或 1 〇_21莫耳）之稀釋液加至如上製備之微滴定皿孔洞中 Ο 樣品之製備包括將1 2 . 5微升之P_K緩衝溶液（ 2毫克/毫升蛋白酶Κ於1 OmM Tr i s— HCi?， p Η 8 . 0/0 . 1 5 M NaCi2/10mM EDTA，pH8 . 0/1% SDS/4 0 微克/毫升經音波震盪之鮭魚精子DNA )遞送至各孔洞。盤加蓋，且搅動以混合樣品，並於6 5 °C下培育以釋出核酸，再於桌上冷卻5分鐘。將Η I V專一性擴大及捕獲探針（上述）之摻合液加本纸張尺度適用+因S家標準（CNS)T4规格（210x297公釐> .....................................................................................裝......................訂.....................線 f請先閱讀背面之注意事項再埸寫本頁) -28 - A6 _. B6 27 五、發明説明（）至各孔洞（5 0毫微微莫耳/孔洞，於IN NaOH中 )。盤加蓋，緩和搅動以混合試劑，再於6 5 eC下培育 3 0分。再加中和作用緩衝溶液至各孔洞（0 . 7 7M的3 — (N —嗎福啉基）丙烷磺酸/1.8 4 5M N a C / 〇 1 8 5M檸檬酸鈉）。盤加盖，並於6 5°C下培育 1 2 - 1 8小時。攪動各孔洞之內容物，以移去所有流體，孔洞再以洗滌緩衝溶液（〇.l%SDS/0.015M NaCi /0 . 0 0 1 5M檸檬酸鈉）洗滌2次。再加擴大多體至各孔洞（4 0微升的2 . 5毫微微莫耳/微升溶液，於5 0%馬血清/0 . 0 6M NaC又 /0 . 0 6M檸檬酸鈉/0 . 1%SDS以1 : 1混以4 X .SSC/0 . l%SDS/0 · 5%、阻斷試劑 V ( Boehringer Mannheim, Cat No. 1096176))。盤子加盖後攪動以混合孔洞之內容物，盤再於6 5 °C下培育1 5分鐘0 經室溫下再5-10分鐘後，孔洞如上述般洗滌。之後將揭示於EP 8 8 3 0 9 6 9 7 6中之鹸性磷酸酶標記探針加至各孔洞（2 · 5毫微微莫耳於4 0微升

/孔洞）°經5 5°C下培育15分鐘後及室溫下5 — 10 分鐘後，孔洞如上述地洗二次，再以0 .015M

NaCp/Ο . 0 0 1 5M檸檬酸鈉洗3次。應用得自L u m i g e η , I n c之酵素啓動之d i ο X e t a π e ( .......................................................{ ........................^........................玎................《# ί;ί先'""·"面之：;xt事項再4寫本頁} : :tl 中；y d 苯敁 4l-1 CNS 丨 r 4 规格（211) X 297 公兑 I -29 - .A6 __.___B6_ 28 五、發明説明（）

Schaap e t a 1 . , Tet. Lett. ( 1 9 8 7 ) 2 8 ： 1159-1162 及 EPA Pub. No. 〇 2 5 4 0 5 1 )。偵測步驟如下。力卩2 0微升之1^1!11?-h〇s 5 3 0 ( Lumigen )至各孔洞。孔洞輕拍使試劑落至底部，再緩和旋轉以將試劑均勻分佈於底部。孔洞加蓋，並在3 7 °C下培育4 0分鐘。盤於Dynatech ML 1 0 0 0發光計中讀取。於反應中當產生之光完全稹分則示出產量。結果示於下表。以陰性控制組之平均加2個標準偏差及樣品之平均減2個標準偏差（^)間之差異來表示各檫準樣品之結果。若β大於0 ，樣品被視爲陽性。 Η I V探針標準曲線結果示於表I。結果顯示這些探針組偵測5 0 Ttino 1 e HIV DNA標準品之能力。 30 - :.:-!:......................{ ......................裝.：'::訂................< π ~請先¾¾背面之注意亊項再堉寫本頁} A6 B6 五、發明説明(

表I 分析物Η I V t m ο 1 e /孔洞 Ο 1 Ο 2 Ο 5 Ο 10 0 2 Ο Ο -Ο 5 5 6 5 1 3 9 9 3 4 8 <ifr先閲ΪΑ背面之注意事項再填窍本頁一 .裝實例 Η I V病毒RNA之偵測利用基本上和上文相同之步驟，但有以下變化來偵測 Η I V R N A ° 製備HIV RNA之標準曲線，係將HIV病毒貯品連續稀釋於正常人類血清中，使達1 2 5至5 0 0 0 TC I d5〇 /毫升之範圍（TC I D5〇是5 0 %組織培養 @染劑量之終點）。製備蛋白酶K溶液，係將10毫克蛋白酶匕加至5毫升111¥捕獲稀釋劑中（5 3〇1^4 1^3 〜HC 芡，pH8/l〇 . 6mM EDTA/1 . 3% SdS/1 6微克/毫升音波震盪之鮭魚精子DNA/ Ί 14川中彐d m丨CNS ί f 4柷仏（2 U) X 297公垃 -31 - 30 A6 B6 五、發明説明（ 5 . 3XSSC/1毫克/毫升蛋白酶K)，於甲醢胺中製成7 %溶液，再貯於—2 0°C下。等莫耳澳度之捕獲探針、標記探針及空間寡核苷酸之混合物加至蛋白酶上溶液中，如此各探針之終濃度爲1 6 7 0毫微微莫耳/毫升。加3 0微升探針/蛋白酶K溶液至上述製備之微滴定盤各孔洞後，加1 0微升適當的病毒稀釋液至各孔洞。盤加蓋，窠盪混合再於6 5 °C下培育1 6小時。盤自培育箱中移出，置桌上冷卻10分鐘。孔洞如上實例2般洗2次。15X3多體稀釋於Amp/標記物稀釋劑中（其製備是混合2 . 2 2毫升DEPC處理過的 H2〇 (DEPC是焦碳酸二乙酯），1 . 3 5毫升1 0 %SDS，2 4 0 微升 1M Tris, pH8 . 0，2 0 微升馬血清混合，於蛋白酶K中調至2毫克/毫升，並於6 5 °C下加熱2小時，再加至2 4 0微升〇 . 1 Μ P M S F 中，3 7°C下加熱1小時，此中再加入4毫升經DEPC 處理之水，4毫升1 0%SDS及8毫升2 0XSSC) 使達1毫微微莫耳/微升。經稀釋之1 5X3多體以4 0 微升/孔洞加入，封盤震盪，再於5 5 °C下培育3 0分鐘盤於室溫下冷卻10分鐘，再如上洗滌。鹼性磷酸酶檫記探針，於Amp/檫記物稀釋劑中稀釋至2 .5毫微微莫耳/微升，再加4 0微升至各孔洞。封盤，MM，再於5 5°C下培育1 5分。盤於室溫下冷卻1 0分鐘，如上洗滌兩次，再以 - - - , Γ -.........................................................{ .......................I......................玎................ί ^ {請先閉ii背面之)±意苹碩再堉寫本頁一 • 屮 d y 孓G4UCXS1 甲4規 ίΜ21()χ 297公兌 -32 A6 __. B6 31 五、發明説明（） 0..15M NaCi/〇.〇15M檸檬酸鈉洗滌三次。加入受質並如上偵測發光。分析之靈敏度爲約1 · 2 5 TC I Ds◦，如下表所示。.

表I I

T C I D 5 〇 S (請先聞詁背面之注意事項再4寫大Μ貝一

實例4 比較聚集的及散佈的探針紺利用基本上和實例3相同之步驟偵測Η I V R N A ，除了以下變化。R N A標準品之製備，係利用T 7 RNA聚合酶將9 . OKB HIV轉錄子自質體 pBHBKl 0 S 中轉錄（chang, P.S., et al Clin. Biotech. 2:23, 1990)。此 HIV RNA 以 gag 及 pol探針雜交而定量，並由HAP層析法捕獲。RNA標準品如上述般連續稀釋於蛋白酶K稀釋劑中，使達每毫升 -33 - 294722 A6 B6 32 五、發明説明（）約2 . 5至1 0 0 土 raole之間。並將等莫耳濃度之捕獲探針，標記探針，及空間寡核苻酸之混合物加入，如此各探針的澳度爲約1 6 7 0毫微微莫耳/毫升。試驗捕獲及標記探針的二種安排：散開式捕獲探針，如此捕獲探針與標記探針散置，及聚集之捕獲探針，如此捕獲探針與標記探針排列於連續群中。成群聚集之探針組示於下。成群聚集之捕獲探針 HIV.116 (SEQ ID NO: 14) TCTCCAYTTRGTRCTGTCYTTTTTCTTTATRGC HIV.117 (SEQ ID NO： 15) TYTYYTATTAAGYTCYCTGAAATCTACTARTTT Η I V . 118 (SEQ ID NO : 47) TATTCCTAAYTGRACTTCCCARAARTCYTGAGT HIV.119 (SEQ ID N0：48) ACWYTGGAATATYGCYGGTGATCCTTTCCAYCC HIV. 120 (SEQ ID NO: 16) .if. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁一 TKTTYTAAARGGYTCYAAGATTTTTGTCATRCT Η I V . 155 (SEQ ID NO : 41) TAAAATTGTGRATRAAYACTGCCATTTGTACWG Η I V . 156 (SEQ ID NO : 42 ) CTGCACTGTAYCCCCCAATCCCCCYTYTTCTTT HIV. 157 (SEQ ID N0:43) N -；k rl ；tl S by 'ic 4'-1 CNS I ψ 4 hi i,v ( 2 Π) X 297 ^ ) -34 * 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（33 TGTCTGTWGCTATYATRYCTAYTATTCTYTCCC HI V.158 (SEQ ID NO：44) TTRTRATTTGYTTTTGTARTTCTYTARTTTGTA HIV.159 (SEQ ID NO：54)

TGTCYCTGTAATAAACCCGAAAATTTTGAATTT 成群聚集之Η I V擴大探針 HIV .103 (SEQ ID NO ：45) CATCTGCTCCTGTRTCTAATAGAGCTTCYTTTA HIV.104 (SEQ ID N0：5) TTCCTGGCAAAYYYATKTCTYCTAMTACTGTAT HIV.105 (SEQ ID N0：6) CTCCAATTCCYCCTATCATTTTTGGYTTCCATY HIV.106 (SEQ ID NO：7) KTATYTGATCRTAYTGTCYYACTTTGATAAAAC HIV.108 (SEQ ID N0：8) GTTGACAGGYGTAGGTCCTACYAATAYTGTACC HIV.110 (SEQ ID NO：9) YTCAATAGGRCTAATKGGRAAATTTAAAGTRCA HIV.Ill (SEQ ID N0：46) ATCCATYCCTGGCTTTAATTTTACTGGTACAGT HIV.112 (SEQ ID N0：10) YTCTGTCAATGGCCATTGYTTRACYYTTGGGCC HIV.113 (SEQ ID NO ： 11 ) 一本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公發） _ 35 — (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

A6 B6 五、發明説明（34) TKTACAWATYTCTRYTAATGCTTTTATTTTYTC HIV.114 (SEQ ID NO：12) AAYTYTTGAAATYTTYCCTTCCTTTTCCATHTC HIV .115 (SEQ ID NO:13) AAATAYKGGAGTATTRTATGGATTYTCAGGCCC HI V.121 (SEQ ID NO：17) CATGTATTGATADATRAYYATKTCTGGATTTTG HIV.122 (SEQ ID NO：18) TATYTCTAARTCAGAYCCTACATACAAATCATC HIV.123 (SEQ ID NO：19) TCTYARYTCCTCTATTTTTGYTCTATGCTGYYC HIV.125 (SEQ ID N0：20) AAGRAATGGRGGTTCTTTCTGATGYTTYTTRTC HIV .126 (SEQ ID NO：49) CCATTTRTCAGGRTGGAGTTCATAMCCCATCCA HIV.127 (SEQ ID N0：50) CTAYTATGGGKTCYKTYTCTAACTGGTACCAYA HIV.128 (SEQ ID NO ： 21 ) 經滴部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) TRGCTGCYCCATCTACATAGAAVGTTTCTGCWC HIV.130 (SEQ ID N0：22) GACAACYTTYTGTCTTCCAYTGTYAGTWASATA HIV.132 (SEQ ID N0:23) YGAATCCTGYAAVGCTARRTDAATTGCTTGTAA HIV . 133 (SEQ ID NO：24) 一本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -36 - A6 B6 五、發明説明（35) YTGTGARTCTGTYACTATRTTTACTTCTRRTCC HIV.134 (SEQ ID NO：51) ATCTGGTTGTGCTTGAATRATYCCYARTGCATA HIV .135 (SEQ ID NO ： 25) TATTATTTGAYTRACWAWCTCTGATTCACTYTK HIV .136 (SEQ ID NO ： 26) CAGRTARACYTTTTCCTTTTTTATTARYTGYTC HIV.137 (SEQ ID NO：27) TCCTCCAATYCCTTTRTGTGCTGGTACCCATGM HIV.138 (SEQ ID NO：28) TCCHBBACTGACTAATYTATCTACTTGTTCATT HIV.139 (SEQ ID N0：29) ATCTATTCCATYYAAAAATAGYAYYTTYCTGAT HIV .141 (SEQ ID NO：30) GTGGYAGRTTAAARTCAYTAGCCATTGCTYTCC HIV.142(SEQ ID NO ： 31) CACAGCTRGCTACTATTTCYTTYGCTACYAYRG HIV .143 (SEQ ID NO ： 52) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝_ CATGCATGGCTTCYCCTTTTAGYTGRCATTTAT HIV.144 (SEQ ID NO：32) RYTGCCATATYCCKGGRCTACARTCTACTTGTC HIV.145 (SEQ ID N0：33) DGATWAYTTTTCCTTCYARATGTGTACAATCTA HIV.146 (SEQ ID N0:34)— 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -37 - A6 B6 五、發明説明（36) CTATRTAKCCACTRGCYACATGRACTGCTACYA HIV.147 (SEQ ID N0：35) CYTGYCCTGTYTCTGCTGGRATDACTTCTGCTT HIV.149 (SEQ ID N0：36) TGSKGCCATTGTCTGTATGTAYTRYTKTTACTG HIV.150 (SEQ ID N0：53) AACAGGCDGCYTTAACYGYAGYACTGGTGAAAT HIV.151 (SEQ ID N0：37) GAATKCCAAATTCCTGYTTRATHCCHGCCCACC HIV.152 (SEQ ID N0:38) ATTCYAYTACYCCTTGACTTTGGGGRTTGTAGG HIV.153 (SEQ ID N0：39) GBCCTATRATTTKCTTTAATTCHTTATTCATAG HIV.154 (SEQ ID N0：40)

CTSTCTTAAGRTGYTCAGCYTGMTCTCTTACYT 於加3 0微升分析物/探針/蛋白酶K溶液至各孔洞後，加入1 ◦微升正常人類血清，且如實例3酸進行分析。如表I I I所示，以散佈及成群之捕獲排列所得分析物之靈敏度是相似的。使用散佈式捕獲添加物之靈敏度為 5 0至1 0 0 tmole，而成群聚集之捕獲添加物，靈敏度為 1 0 0 — 5 0 0 tmole。張尺度適用中國國家標毕(CNS〉甲4規格（210 X 297公货） (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) •丨裝_ 訂· 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -38 - A6 B6 五、發明説明（37) ^_3 探針安排分析物t m ο 1 e δ 成群聚集 0 ― - ― 2 5 -0 . 16 5〇〇. 3 6 10 0 0 . 6 5 5 0 0 4 . 4 5 10 0 0 6 . 2 4 散置的〇 _. ― 2 5 -0 . 2 4 5〇 0 . 2 5 1 0 0 -0 . 11 5 0 0 2 . 5 2 10 0 0 4 . 7 9 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) —裝. '17. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製上述進行本發明模式之變化，對精於生化學、核酸雜交分析及相關領域之人士是淺顯的，且意欲在以下的申請專利範圍之内。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -39 -

—q附件二A : 第82100463號專利申請案中文說明書修正頁 71 A7 B7 民國84年4月修正五、發明説明（w-/) 如下所示序列表中符號之意義. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝_ R. W S. V. K. V. H. D. B. N.

A 或.G A 或 T/U -

C或G C 或 T/U '

G 或 T7U A或C或G:「非T/U A或C摄T/U::非G A 截 G. iT/U: :非 C . C，^G^T/U:#A — (A或C或G或T/i〇或（赤知或其杉

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印装本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（38) 序列表 (1 ) 一般資料 (i )串請人'Irvine,Bruce D. Horn， Thomas Chang，Chu-An (i i )發明標題：用於溶液相三明治式雜交分析内之 Η I V探針 (i i i)序列數目：6 3 (iv)通訊住址 (A )收信人 *· Morrison & Foerster (B )街：755 Page Mill Road (C)市：Palo Alto (D )州：加州 (E )國家：U S A (F ) ZIP ： 94304-1018 (v )電腦可讀型式 (A)介質型式：Floppy disk (B )電腦：I B Μ P C可相容 (C) 操作糸統：PC — DOS/MS — DOS (D) 軟骨豊:Patent In Release #1.0， Vers ion #1·25 (v i)目前申請資料 (A)申請编號—：0 7/ 813，583 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) .裝. 訂. .4, 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉甲4規格（210 X 297公釐〉 -40 - A6 B6 294722 五、發明説明（39) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (B) 立檔日期：23 — DEC — 1991 (C )分類： (vi Π)法律事務資料 (A)名稱：Thomas E. Ciotti (B )註冊號：2 1 , ◦ 1 3 (C) 參考/索引：22300— 2 0 1 5 0.〇〇 (ix)電傳資料： (A) 電話：415 — 813-56 0 0 (B) 電報：415— 494-0 792 (C) 電傳：7 0 6141 (2 ) S E Q, ID N〇：l之資料 (i )序列特性 (A)長度：24鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 U i)序列說明：S E Q ID N 0 ： 1 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

CGTGGAGACA CGGGTCCTAT GCCT (2 ) S E Q ID N〇:2 之資料 (i )序列待性 (A)長度：6_0鹼基對本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -41 - A6 _B6_ 五、發明説明（40) (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (Xi)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 2 ：

GATGTGGTTG TCGTACTTGA TGTGGTTGTC GTACTTGATG TGGTTGTCGT ACTTGCGTAG (2 ) S E a ID N0:3 之資料 (i )序列特性 (A )長度：1 6鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列説明：S E Q ID N〇：3 :

TCCACGAAAA AAAAAA 經濟部中央標準局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -42 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6_ 五、發明説明（41) (2) SEQ ID N〇：4之資料 (i )序列特性 (A )長度：1 2鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 4 ： CAGTCACTAC GC (2) SEQ ID N〇:5之資料 (i )序列待性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(χ〇序列說明：SEQ ID N 0 ： 5 ： TTCCTGGCAA AYYYATKTCT YCTAMTACTG TAT (2 ) S E Q ID N〇:6 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核i (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) i .裝. 訂. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -43 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印制衣 A6 B6 五、發明説明（42) (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列説明：S E Q ID N 0 ： 6 ：

CTCCAATTCC YCCTATCATT TTTGGYTTCC ATY (2 ) S E Q ID N〇:7 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列説明：S E Q ID N 0 ： 7 ：

KTATYTGATC RTAYTGTCYY ACTTTGATAA AAC (2 ) S E Q ID N0:8 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列說明：SEQ ID N 0 ： 8 ： ----------*---------------裝------.玎------^ (請先閲讀背面之注意事項再塡本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）一44 — 經濟邡中央標準居員工消費合作社印製 A6 _B6 _ 五、發明説明（43)

GTTGACAGGY GTAGGTCCTA CYAATAYTGT ACC (2 ) S E Q ID N0:9 之資料 (i )序列特性 (A)長度：’33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 9 ： YTCAATAGGR CTAATKGGRA AATTTAAAGT RCA (2 ) S E Q ID N0:10 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(X i)序列說明：S E Q ID NO： 10* YTCTGTCAAT GGCCATTGYT TRACYYTTGG GCC (2 ) S E Q. ID NO:ll 之資料 (i )序列特性 _ (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 裝· 、可, 本紙張尺度適用中囷國家標準（CNS〉甲4規格（210 X 297公釐） -45 — 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（ (Α)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID NO: 11:

.TKTACAWATY TCTRYTAATG CTTTTATTTT YTC (2 ) S E Q ID N 0 : 1 2 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID NO： 12：

AAYTYTTGAA ATYTTYCCTT CCTTTTCCAT HTC (2 ) S E Q ID NO:13 之資料 (i )序列待性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：高型 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 丨裝· 訂. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公* ) -46 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（45)

(X i)序列說明：S E Q ID NO： 13： AAATAYKGGA GTATTRTATG GATTYTCAGG CCC (2 ) S E Q ID NO: 14之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(X i)序列說明：S E Q ID NO： 14： TCTCCAYTTR GTRCTGTCYT TTTTCTTTAT RGC (2 ) S E Q ID N O : 1 5 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

U ί)序列説明：S E Q ID NO： 15： TYTYYTATTA AGYTCYCTGA AATCTACTAR TTT (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) _裝· *π. 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公;¢) —47 - A6 B6 五、發明説明（46) (2) SEQ ID N0:16之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID NO： 16：

TKTTYTAAAR GGYTCYAAGA TTTTTGTCAT RCT (2 ) SEQ ID N〇:17 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID NO： 17：經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁)

CATGTATTGA TADATRAYYA TKTCTGGATT TTG (2 ) SEQ ID N〇:18 之資料 (i )序列特性

(A)長度：33鹼基對 (B )型式：核S 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公坌） -48 - 294722 A6 B6 五、發明説明（47) (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (χί)序列說明：SEQ ID NO： 18：

TATYTCTAAR TCAGAYCCTA CATACAAATC ATC (2 ) S E Q ID NO:19 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID NO： 19：

TCTYARYTCC TCTATTTTTG YTCTATGCTG YYC (2 ) S E Q. ID N0:20 之資料 (i )序列特性經濟部中央標準局負工消費合作社印製 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 U i)序列説明：S E Q ID Ν Ο ： 2 0 ： -49 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) —裝· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉甲4規格（210 X 297公釐） A6 B6 五、發明説明（48)

AAGRAATGGR GGTTCTTTCT GATGYTTYTT RTC (2 ) S E Q ID N0:21 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(X i)序列說明：S E Q ID N 0 ： 2 1 ： TRGCTGCYCC ATCTACATAG AAVGTTTCTG CWC (2) SEQ ID N0:22之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D)拓撲學：線型經濟部中央標準局員工消费合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 2 2 ： GACAACYTTY TGTCTTCCAY TGTYAGTWAS ΑΤΑ (2 ) SEQ ID N0:23 之資料 (i )序列特性 — 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -50 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 _B6_ 五、發明説明（49) (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 2 3 ：

YGAATCCTGY AAVGCTARRT DAATTGCTTG TAA (2) SEQ ID N0:24之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 2 4 ：

YTGTGARTCT GTYACTATRT TTACTTCTRR TCC (2 ) S E Q ID N0:25 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：备型 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) —裝. 訂. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -51 - A6 B6 五、發明説明（50 ) (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁)

(xi)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 2 5 ： TATTATTTGA YTRACWAWCT CTGATTCACT YTK (2 ) S E Q ID N0:26 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 2 6 ： CAGRTATACY TTTTCCTTTT TTATTARYTG YTC (2 ) S E Q ID N0:27 之資料 (i )序列特性經濟部中央標準局8工消費合作社印3衣 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 2 7 ：

TCCTCCAAYT CCTTTRTGTG CTGGTACCCA TGM 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公坌） -52 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（51 ) (2 ) S E Q ID N0:28 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列説明：S E Q ID N 0 ： 2 8 ： TCCHBBACTG ACTAATYTAT CTACTTGTTC ATT (2 ) S E Q. ID N0:29 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 2 9 ： ATCTATTCCA TYYAAAAATA GYAYYTTYCT GAT (2 ) S E a ID N0:33 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）一 53 - A6 B6 294722 五、發明説明（52 ) (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列説明：S E Q ID N 0 ： 3 0 ：

GTGGYAGRTT AAARTCAYTA GCCATTGCTY TCC (2 ) S E Q ID NO :31 之資料 (i )序列特性 (A)長度：3 3驗基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D)拓撲學：線型 (X i)序列説明：S E Q ID Ν Ο ： 3 1 ：

CACAGCTRGC TACTATTTCY TTYGCTACYA YRG (2 ) S E Q ID NO:32 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列説明：3£(^ ID Ν Ο ： 3 2 ：本紙張尺度通用中國國家標华（CNS>甲4規格（210 X 297公货〉 _ ρ-Λ _ ------；---·'·-------^-----裝------訂------'"1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製經濟部中央標準居員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（53 )

RYTGCCATAT YCCKGGRCTA CARTCTACTT GTC (2 ) S E Q ID N0:33 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列説明·· S E Q ID Ν Ο : 3 3 ··

DGATWAYTTT TCCTTCYARA TGTGTACAAT CTA (2 ) S E Q ID N〇:34之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 3 4 ：

CTATRTAKCC ACTRGCYACA TGRACTGCTA CYA (2 ) S E Q, ID N〇：35 之資料 (i )序列特性__ 本紙張尺度適用中园國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公；^ _ !·ιι-ι·ι-ιν·ι·-------人-----裝.——-ί-訂------線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A6 B6 五、發明説明（54 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 3 5 ： CYTGYCCTGT YTCTGCTGGB ATDACTTCTG CTT (2 ) S E Q ID NO :36 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33齡基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(χί)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 3 6 ： TGSKGCCATT GTCTGTATGT AYTRYTKTTA CTG 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2 ) S E Q ID N〇:37 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：S型本紙張又度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）一 56 - 經濟部中央標準局®:工消費合作社印¾

A6 B6_ 五、發明説明（55 ) (Xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 3 7 ： GAATKCCAAA TTCCTGYTTR ATHCCHGCCC ACC (2 ) S E Q. ID N0:38 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (Xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 3 8 ： ATTCYAYTAC YCCTTGACTT TGGGGRTTGT AGG (2 ) S E Q ID N0:39 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 3 9 ： GBCCTATRAT TTKCTTTAAT TCHTTATTCA TAG (請先閲讀背面之注意事項再^寫本頁) -4 i裝. 訂. .丨線本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公藿）經濟部中央標準局8工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（56 ) (2 ) S E Q ID N〇:40 之資料 (i )序列待性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 4 0 ： CTSTCTTAAG RTGYTCAGCY TGMTCTCTTA CYT (2 ) S E Q ID N〇:41 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 4 1 ： TAAAATTGTG RATRAAYACT GCCATTTGTA CWG (2) S E Q ID N0:42 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 2耵公釐）一 58 一 _ — _|*— — ！ —-----(-----裝！ ’矿------S ’ (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（57) (C )股性：單股 (D )拓撲學··線型 (xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 4 2 ： CTGCACTGTA YCCCCCAATCCCCCYTYTTC TTT (2 ) S E Q ID NO :43 之資料 (i )序列待性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列說明：S E Q ID N 0 ： 4 3 ： TGTCTGTWGC TATYATRYCT AYTATTCTYT CCC (2 ) S E Q ID N0:44之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性··單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列說明：S E Q ID Ν Ο ： 4 4 ： (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 本紙張又度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐> _ -59- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（58)

TTRTRATTTG YTTTTGTART TCTYTARTTT GTA (2 ) S E Q ID N0:45 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 4 5 ： CATCTGCTCC TGTRTCTAAT AGAGCTTCYT TTA (2 ) S E Q ID N〇:46 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33齡基對 (B )型式：核酸： (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(X i)序列說明：S E Q ID N 0 ： 4 6 ： ATCCATYCCT GGCTTTAATT TTACTGGTAC AGT (2) SEQ ID N0:47之資料 (i )序列特性 — (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .丨裝- 訂本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐> 一 60 — 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 294722 A6 B6 五、發明説明（59) (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 4 7 ： TATTCCTAAY TGRACTTCCC ARAARTCYTG AGT (2) SEQ ID N0:48之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 Ui)序列說明：SEQ ID N 0 ： 4 8 ： ACWYTGGAAT ATYGCYGGTG ATCCTTTCCA YCC (2) SEQ ID N0:49之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：療"型 ------J----·--------------裝------訂------#1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國园家標準（CNS>甲4規格（210 X 297公蔆） -61 - Α6 Β6 五、發明説明（6())

(xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 4 9 ： CCATTTRTCA GGRTGGAGTT CATAMCCCAT CCA (2 ) S E Q ID N〇：50之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(Xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 5 0 ： CTAYTATGGG KTCYKTYTCT AACTGGTACC AYA (2 ) S E Q ID N〇:51 之資料 (ί )序列特性經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再寫本頁) 丨裝· (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 5 1 ： ATCTGGTTGT GCTTGAATRA TYCCYARTGC ΑΤΑ 本紙張尺度適用中國®家標準（CNS>甲4規格（210 X 297公* > 一 62 _ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（61 ) (2) SEQ ID N〇：52之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 5 2 ： CATGCATGGC TTCYCCTTTT AGYTGRCATT TAT (2 ) SEQ ID N〇:53 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學··線型

(xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 5 3 ： AACAGGCDGC YTTAACYGYA GYACTGGTGA AAT (2) SEQ ID N〇:54之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核， ------J---' -I ----------^-----裝------、订------% 1 (諳先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用申國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）一 63 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（62 ) (C )股性：單股 (D )拓撲學··線型

Ui)序列説明：SEQ ID N 0 ： 5 4 ：

TGTCYCTGTA ATAAACCCGA AAATTTTGAA TTT (2 ) S E Q ID N〇:55 之資料 (i )序列特性 (A)長度：2◦鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列說明：SEQ ID N 0 ： 5 5 ：

AGGCATAGGA CCCGTGTCTT (2 ) S E Q ID NO :56 之資料 (i )序列待性 (A)長度：20鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 5 6 ： ——rlllll.LI!------~-----裝^---Ι:!:ΤΓ·------線' , I* (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -β4 ~ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（63)

CTTCTTTGGA GAAAGTGGTG (2) SEQ ID N0:57之資料 (i )序列特性 (A)長度：29鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列說明：SEQ ID N 0 ： 5 7 ： TATAGCTTTH TDTCCRCAGA TTTCTAYRR (2 ) S E Q ID N〇:58 之資料 (i )序列特性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(X i)序列說明：S E Q ID N 0 ： 5 8 ： VCCAAKCTGR GTCAACADAT TTCKTCCRAT TAT (2 ) S E Q ID N0:59 之資料 (i )序列待性本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） ~ 65 ~ ------·---^---------S -----裝------訂·ίΑ (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局R工消費合作社印製 A6 _B6_ 五、發明説明（64) (A )長度：3 3鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列說明：S E Q ID N 0 ： 5 9 ：

TGGTGTGGTA ARYCCCCACY TYAAYAGATG YYS (2 ) S E Q ID N0:60 之資料 (i )序列持性 (A)長度：29鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列說明：S E Q ID N〇：6〇：

TCCTGCTTTT CCYWDTYTAG TYTCYCTRY (2 ) S E Q ID N〇:61 之資料 (i )序列待性 (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：^型 -------,---'--------* ------装------訂------%1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -66 - A6 B6 五 '發明説明（65)

Ui)序列說明：SEQ ID N 0 ： 6 1 ： YTCAGTYTTC TGATTTGTYG TDTBHKTNAD RGD (2 ) S E Q. ID N0:62 之資料 (i )序列特性 (A)長度：37鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：·單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 6 2 ： AATTRYTGTG ATATTTYTCA TGDTCHTCTTGRGCCTT (2) SEQ ID N0:63之資料 (i )序列恃性經濟部中央標準局S工消費合作社印5衣 (A)長度：39鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

U i)序列說明：S E Q ID N 0 ： 6 3 ： GCCATCTKCC TGCTAATTTT ARDAKRAART ATGCTGTYT 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -67 -

Claims

ABCD 294722 六、申請專利範圍 |年月曰修正附件一（A ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 第82100463號專利申請案中文申請專利範圍修正本民國85年11月呈 1 . 一種合成的寡核苷酸，其係充作Η I V三明治雜交分析中之擴大探針，其中該寡核苷酸係由下列片段所組成：第一片段，其核苷酸序列係至少9 0%同質於Η I V 核酸片段；及第二片段，其係由至少9 0%同質於一核酸多體之寡核苷酸片段的核苷酸序列所組成’其中該第二片段係不與 Η I V核酸互補；其中該至少9 0%同質於Η I V核酸片段之核苷酸序列係選自： ·* .-··. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 CATCTGCTCCIXJTRTCTAATAGAGCTTCYTTTA (SEQ ID NO : 45), TTCCTGGCAAAYYYATKTCTYCTAMTACTCTAT (SEQ ID NO : 5 ), CTCCAATTCCYCCTATCATTTTTGGYTTC'1A.TY (SEQ ID NO: 6), m.riTGATCRTAYTGTCYYACTTTGATAAAAC (SEQ ID NO: 7), GTTGACAGGYGTAGGTCCTACYAATAYTGTACC (SEQ ID ffO:8), YTCAATAGGP.CTAj\TKCGPJVAATrTAAAGTRCA (SEQ ID MO :9), Λ 丁 f:CM-YCCrcGCTn7UVrrrn\CTGGTA':AGT (SEQ ID HO:‘16 I, YTCTGTCAATGGCavrrGYTTRAC.rfTTTGGGCC (SEQ ID NO :10), TKTACAWATTTCTRrrAATGCTTrnvmTYTC (SEQ ID NO: 11), AA‘n’’nTGAA/VrnTTYCCTTCCTTTTCC八·ΠΓΠ： (SEQ ID UO : 12), AAAWiKGC；AGTATTRTVVTGG；yrj:(T,CAGGCCC (SEQ ID NO: 13), 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -1 - 六、申請專利祀圍 CATGTATTGATADATRAYYATKTCTGGATnTG (SEQ TTATTTCTAARTCAGAYCCTACATACAAATCATC (SEQ TCTTAR'rrCCTCTATTTTTGYTCTATGCTGYYC (SEQ AAGRAATGGRGGTTCTTTCTGATGYTTYTTRTC (SEQ CCATTTRTCAGGRTGCAGTTCATAMCCCATCCA (SEQ CTAYT ATGGG KTC Y KTYTCTAACTGGTACCAYA (SEQ TRG CTG C YCGATCTACATAG AAyGTTTCTGCWC (SEQ GACAACYTTYTGTCTTCCAYTGTYAGTWASATA (S EQ ♦ ♦ YGAATCCTGYAAVGCTARRTDAATTGCTTGTAA. (SEQ YTGTGAilTCTGTYACTATRTTTACTTCTRRTCC · (SEQ ATCTGGTTGTGCTTGAATRATYCCYARTGCATA (SEQ ID NO :17); ID NO: 18)*, 工D NO:19), 工D NO :20), ID NO :49), 工D NO:50), ID NO :21), ID NO :22), ID NO :23), ID NO : 2.4), ID NO :51), (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) > 經濟部中央梯準局男工消費合作社印袈 TATTATTfGAYTRACWAWCTCTGATTCACTYTK (SEQ ID NO :25), CAGRTAilACYTTTTCCTTTTTTATTARYTGYTC (SEQ ID NO:2S), TCCTCCAATYCCTTTRTGTGCTGGTACCCATGM (SEQ ID NO:27), TCCH3曰ACTGACTAATYTATCTACTTGTTCATT (SEQ ID MO : 28 ), ATCTATTCCATYYAAAAATAGYAYYTTYCTGAT (SEQ ID NO : 29 > , GTGGYAGRTTAAARTCAYTAGCCATTGCTYTCC (SEQ ID NO :30), CACAGCTRGCTACTATTTCYTTYGCTACYAYRG (SEQ ID NO :31), CATGCATGOCTTCYCCTTTTAGYTGRCATTTAT (SEQ ID NO ·· 52), RYTGCCATATYCCKGGRCTACARTCTACTTGTC (SEQ ID NO:32), DGATWA^TTTTCCTTCYARATGTGTACAATCTA (SEQ ID NO : 33 ), CTATRTAJ：CGACTRGCYACATGRACTGCTACYA (SEQ ID NO :34), CYTGYCCTGTYTCTGCTGGRATDACTTCTGCTT (SEQ ID HO: 3 5), TGSKGCCATTGTCTGT^TGTAYTRYTKTTACTG (SEQ ID NO :36), A-A.CAG<3CDGCYTTAACYGYAGYACTGGTGAAAT (SEQ ID NO:53), GAATKCCAAATTCCTGYTTRATHCCHGCCCACC (SEQ ID NO :37), ATTCYAYTACYCCTrGACTTTGGGGRTrGTAGG (SEQ ID NO ： 3 8 ), GaCCTATPJVrTTKCrrTAATTCHTTATTCA.TAG (SEQ ID HO :39),及 CTSTCTTAAGRTGYTCAGCYTGMTCTCTTA.CYT (SEQ ID MO :40) 〇本紙法尺度適用中《國家楳準（CNS > A4現格（210X297公釐）六、申請專利範圍 2 ·如申請專利範圍第1項之合成的寡核苷酸，其中該第二片段係 AGGCATAGGACCCGTGTCTT ((SEQ ID N0:55)。 3 ·—種合成的寡核苷酸，其係充作Η I V三明治雜交分析中之捕獲探針，其中該合成的寡核苷酸係由下列片段所組成：' , 第一片段，其核苷酸序列係至少9 0 %同質於Η I V 核酸片段；及第二片段，其係由至少9 0%同質於經結合在固相上之寡核苷酸的核苷酸序列所組成，其中該第二片段係不與 Η I V核酸互補；其中該至少9 0%同質於Η I V核酸片段之核苷酸序列係選自： TCTCCAYTTRGTRCTGTCYTTTTTCTTTATRGC (SEQ ID NO:14), TYTjrrTAITAAGYTCYCTGAAATCTACTARTTT (SEQ ID NO : 15 ), 經濟部中央梂率局身工消費合作社印袈 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) TATTCCTAA'YTGRACTTCCCAilAARTCYTGAGT (SEQ ID HO :47) # ACVfYTGGAATATYGCYGGTGATCCTTTCCAYCC (S EQ ID fiO : 4 日）， TXrrrrAAARGGYTCYAAGATTTTTGTCATRCT (SEQ ID NO: IS), TAAAATTGTGPJVTRAAYACTGCCATTTGTACWG (SEQ ID MO : 4 1), CTGCAC.rGTA.jfCCCCCAATCCCCCYTYTTCTTT (SEQ ID ff〇： 4 2 ), TTrrCTGTT/GCr/VT丫ATP/iCTAYTATTCTYTCCC (SEQ ID NO : 4 3 ), TTRTPJ\rrTGrTrrrGT/VRTTCTYTARTTI'GTA (SEQ ID HO : 4‘t),及 TGTCYCTGTAATAAACCCGAAAATmGAATTT (SEQ ID tfO ： 5〇 4 ·如申請專利範圍第3項之合成的寡核苷酸，其中該第二片段係本紙张尺度逋用中國國家標羋（CNS ) A4現格（210 X 297公釐） A8 B8 C8 D8 經濟部中央標隼局員工汫費合作社印裝申請專利範圍 CTTCTTTGGAGAAAGTGGTG (SEQ ID NO:56)。 5 . —種合成的寡核苷酸，其係充作Η I V三明治雜交分析中之擴大探針，其中該寡核苷酸係由下列片段所組成：第一片段，其核苷酸序列係至少9 0%同質於Η I V 核酸片段；及第二片段，其係由至少9 0%同質於一核'酸多體之寡核苷酸片段的核苷酸序列·所組成，其中該第二片段係不與 Η I V核酸互補；其中.該至少9 0%同質於Η I V核酸片段之核苷酸序列係選自： TCTCCAYTTRGTRCTGTCYrrrrrCTrrATRGC (SEQ ID ; TYTYYTA.rrAAGYTCYCTGAAATCTACTARTrr (SEQ ID MO-lS), TAAAArrGTGP^TR^YACTGCCATITGTACWG (SEQ ID NO： 41), CTGCACTGTAYCCCCCAATCCCCCYTYTTCnT (SEQ ID ^ ^ ) TGTCTC-r^CCTATYATR-imYTATTCTYTCCC (SEQ ID MO ： 4 3 ) , M TTRTRATTTGVTnTGTAilTrCTYTMiriTGTA (SliQ ID ) ° 6 .如申請專利範圍第5項之合成的寡核苷酸，其中該第二片段係 AGGCATAGGACCCGTGTCTT (SEQ ID NO：55) 1--ΊΗ--;----^袈-------.訂 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙伕尺度適用中國國家梯準（CNS ) A4規格（210X297公釐厂4 經濟部中央標準局属工消资合作社印*. Β8 C8 D8 六'申請專利範圍 7 .—種合成的寡核苷酸，其係充作Η I V三明治雜交分析中之捕獲探針，其中該合成的寡核苷酸係由下列片段所組成：第一片段，其核苷酸序列係至少9 〇%同質於Η I V 核酸片段；及第二片段，其係由至少9 0 %同質於經結合在固相上之寡核苷酸的核苷酸序列所組成，其中該第二片段係不與 H I V核酸互補：其中該至少9 0%同質於Η I V核酸片段之核苷酸序列係選自： CATCTGCTCCTGTRTCTAATAGAGCTTCmTA (Sp：Q ID NO:4S) , j ATCCATYCCTGGCTTTAATTTTACTGGTACAGT (SEQ ID NO： 46). | CCATTTRTCAGGRTGGAGTTCATAJMCCCATCCA (SEQ ID NO :49), CTAYTATGGGKTCYKTYTCTAACTGGTACCAY^ (SEQ ID WO :50), ATCTGGTTCTGCTTGAATRATYCCYARTGCATA (SEQ ID ffO: 51), CATGCATGGCTTC丫CCTTTTAGYTGRCATITAT (S EQ ID fiO : 5 2 ) y 及 AACAGGCDGCYTTAAC.iGYAGYACTGGTGAAAT (SEQ ID f’〇:5]) 〇 8 .如申請專利範圍第7項之合成的寡核苷酸，其中該第二片段係 CTTCTTTGGAGAAAGTGGTG (SEQ ID NO ： 56 ) · 9 .—種合成的寡核苷酸，其係充作Η I V三明治雜交分析中之空間子寡核苷酸，其中該合成的寡核苷酸係由至少9 0%同質於Η I V核酸片段之核苷酸序列所組成. 本紙浪尺度適用中國國家梯準（CNS ) Α4規格（2丨0X297公釐厂^ ~ J. Ί.--Γ---^、'、裟-------^訂 (請先閲讀背*.之注意事項再填窝本頁) 294722 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍且其中該至少9 0%同質於Η 係選自 V核酸片段的核苷酸序列 TATAGCTTTHTDTCCRCAGATTTCTAYRR (SEQ ID NO :57), VCCAAKCTGRGTCAACADATTTCKTCCPATTAT (SEQ 工D : 50 }, • * · —. · · >a · ··« * TGGTGTGGTAARYCCCCACYTYAAYAGATGYYS (SEQ ID NO :59), TCCTGCTTTTCCYWDTYTAGTYTCYCTRY (SEQ ID NO：60), YTCAGTYTTCTGATTTGTYGTDTBHKTNADRGD (SEQ ID NO：SI), AATTRYTGTGATATTTYTCATGDTCHTCTTGRGCCTT (SEQ ID NO: 62) ,El. GCCATCTKCCTGCTAATTTTARDAKRAARTATCCTGTYT (SEQ ID NO: 63) « (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 1 0 · —種合成的寡核苷酸組，其係充作H I V三明治雜交分析中之擴大探針，包含至少二種不同的寡核; 探針，其中組內各成員係由下列片段所組成：第一片段，其核苷酸序列係至少9 〇%同質於η I V 核酸片段；及第二片段，其係由至少9 0%同質於一核酸多體之寡核苷酸片段的核苷酸序列所組成，其中該第二片段係不與 Η I V核酸互補；及其中該至少9 0%同質於Η I V核酸片段之核苷酸序列係選自：本紙張尺度適用中國國家棣準（CNS ) Α4规格（210Χ297公釐） A8 B3 C8 D8 經濟部中夬標窣局只工消费合作社印装七、申請專利範圍 CATCTGCTCCTGTRTCTAATAGAGCTTC'rrrTA (SEQ ID K〇：4S), TTCCTGGCAAAYYYATKTCTYCTAMTACTGTAT (SEQ ID NO:S), CTCCΑΛΤΤCCΫcCTATCATTTTTGGYTTCf：ATY (SEQ ID NO： 6), KTATYTGATCRTAYTGTCrfACTITGATAiVAAC (SEQ ID NO :7), GTTGACAGGYGTAGGTCCTACYAATAYTGTACC (SEQ ID ΝΟ:'θ), YTCAAIAGGRCTAATKGGRAAATTTAAAGTRCA (SEQ ID NO:9), ATCCATYCCTGGCTTTAATnTACTGGTACAGT (SEQ ID NO :45), ,YTCTGTCj\ATGGCCAITGY1TRACYYTTG(；GCC (SEQ ID NO :10), j TKTAt^WATrTCTRYTAATGClTTTATTrrYTC (SEQ ID NO :11),； AAYTYTl^AAATYTrYCCTrCCTTTTCCATHTC (SEQ ID NO :12),： AAATA'^K：GGAGTATTRTATGGATTYTCAGi3CCC (SEQ ID NO :13),： CATGTATTGATADATRAYYATKTCTGGATrTTG (SEQ ID NO :17), TATYTCTAARTCAGAjfCCTACATACAAA.TCATC (SEQ ID NO :18), TCTYAR'rrcCTCTATTTTTGYTCTATGCTGYYC (S£Q ID NO :19 ), ；.AAGRAATGGRGGTTCnTCTGATGrrTYTrRTC (SEQ ID NO :20), · CCATTTRTCAGGRTGGAGTTCATAMCCCATCCA (SEQ ID NO :49 ), CTAYTATGGGKTCYKTYTCTAACTGGTAC'ZAYA (SEQ ID NO :50)-, ' TRGCTGCrCCATCTACATAGAAVGTTTCTGCrfC (SEQ ID NO :21),: '. . · 1 · · - - · 1 -J * GACAACTTTYTGTCTTCCAYTGTYAGTWASATA (SEQ ID NO: 22), YGAATCCTGYAAVGCTAJIRTDAATTGCTTCTAA (SEQ ID HO :23), YTGTGAin-CTGTYACTWnmTACTTCTRRTCC (SEQ ID NO :24), ATCTGOTTGTGCTrrGAATRATYCCYARTGC：ATA (SEQ ID ifO: Si), TA'ITATTTGAYTRAa-iAWCTCTGATTCACTYTK (SEQ ID NO : 25), CAGRTAJLA.CYTrrTCCTTTTTTATTARYT(；YTC (SEQ ID NO : 26), TCCTCCAATYCCTTTRTGTGCTGGTACCCATGM (SEQ ID NO:27), TCCHBB7\CTGACTAATYTATCTACrTGTTCATT (SEQ ID NO :28 ), ATCTA-rrCCATYYAAAAATAGYAYYTTYCTGAT (SEQ ID NO : 29), GTGGYAGRTTAAAJVTCAYTAGCCATTGCTrrCC (SEQ ID NO : 30), CACAGCTRGCTACTATTTCrrTYGCTACY八YRG (SEQ ID NO:31), CATGCATGCCTTCYC CTTTTAG YTG R CATTTAT (SEQ ID.NO :52), RYTGCCATATYGCfCGGRCTACARTCTACTTGTC (SEQ ID' ff〇 : 3 2 ), DGATWAYTTTTCCTTCYARATGTGTACAATCTA (SEQ ID NO :33),: CTATRTAJCCCACTRGCYACATGRACTGCT八CYA (SEQ ID NO :34 ), | CYTGYCCTGTfTCTGCTGGPJVTDACTTCTCJCTT (SEQ ID WO: 35), | TGSKGCCA'ITGTCTtJTATGTAYTRYTKTTJVCTG (SEQ ID NO : 3 6 ) , | AACACJGCDGC.iTTrAACYGYAGYACrGGTG/VAAT (SEQ ID NO : 5 3 ), GAATKCCAAATrCCTGrtTfUVTHCCHGCCCACC (SEQ ID ^0:37), ATTC ΪΛ ΥΤΛΟ YCfrn'G ΛΟΤΙΤσΟ^ RTTGTAGG (SEQ ID NO: 3Θ ), GBCCrATilATrm:TTTAATTCHTT/VTTCiVrAG (SEQ ID NO: 39),及 CTSTCTrAAGRTG'iTCAGCYTGMTCTCTTACYT (SEQ ID MO: 40) 〇 ^--.J---i----^ 裝--------•-訂 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙浪尺度適用t國國家標準（CNS ) A4规格（21 〇 X 297公釐）經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 A8 B8 C8 _ D8 六、申請專利範圍 1 1 ·如申請專利範圍第1 〇項之合成的寡核苷酸組，其中各成員之第二片段係： AGGCATAGGACCCGTGTCTT (SEQ ID NO:55)。 1 2 . —種合成的寡核苷酸組，其係充作η i V三明治雜交分析法中之捕獲探針，包含至少二種不同的寡核替酸探針’其中組內各成員係由下列片段所組成：第一片段，其核苷酸序列係至少9 0%同質於η I V 核酸片段：及第二片段，其係由至少9 0%同質於經結合在固相上之寡核替酸的核苷酸序列所組成，其中該第二片段係不與 Η I V核酸互補；及其中該至少9 0%同質於Η I V核酸片段之核;g：酸序列係選自： TCTCCAYTTRGTRCTGTCYTTTTTCTTTATRGC (SEQ ID NO: 14), TYTYYTATTAAGYTCYCTGAAATCTACTARTTT (SEQ ID NO: 15), TATTCCTAAYTGPJVCTTCCCAPJVAilTCYTGAGT (SEQ ID NO :47), ACKYTGGAATWTYGCYGGTGATCCTTTCCAYCC (SEQ 工D ΜΟ:4θ},! TKrrrTAAARGGYTCYAAGATI'TTTGTCATRCT (SEQ ID NO: 16),； I TAAAAlTGTGRATRAAYACTGCCATTrGTACWG (SEQ ID NO: 41) , ! CTGCACTGTAYCGCCCAATCCCCCYTYTTCTTT (SEQ ID NO :42}, TGTCTGTWGCTATYATRYCTAYT/aTCTYTCCC (SEQ ID NO :43), ITRTRATri'GYTTTTGTARTTCTYTARTTTGTA (SEQ ID NO : 44 ) , ^ TGTCYCTGTAATAAACCCGAAAATTTTGAATTT (SEQ ID NO: 54) ·* 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) M規格（210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝. ’訂 -8 - A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 1 3 .如申請專利範圍第1 2項之合成的寡核苷酸組，其中各成員之該第二片段係 CTTCTTTGGAGAAAGTGGTG (SEQ ID NO:56)。 1 4 · 一種合成的寡核苷酸組，其係充作Η I V三明治雜交分析中之擴大探針，包含至少二種不同的寡核苷酸探針，其中組內各成員係由下列片段所組成：第一片段，其核苷酸序列係至少9 0%同質於Η I V 核酸片段；及第二片段，其係由至少9 0%同質於一核酸多體之寡核苷酸片段的核苷酸序列所組成，其中該第二片段係不與 Η I V核酸互補；及其中該至少9 0%同質於Η I V核酸片段之核苷酸序列係選自：經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) TCTCCAYTTRGTRCTGTCYTTnTCTTTATRGC (SEQ ID NO:14), TYTYYTATTAAGYTCYCTGAAA.TCTACTAJITTT (SEQ ID NO :15), TAAAATTGTGRATRAAYACTCCCATTTGTACWG (SEQ ID NO:41)' CTGCACTGTAYCCCCCAATCCCCCYTYTTCTTT (SEQ ID NO :42), TGTCTGTWGCTATYATRYCTAYTATTCTYTCCC (SEQ 工D NO :43),及 TTRTRATTTGrmTGT/ViVrrCTYTAilTTTGTA .(SEQ ID HQ:44) 〇本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -9 - 經濟部中央標準局員工消资合作社印製 A8 BS C8 D8六、申請專利範圍 1 5 .如申請專利範圍第1 4項之合成的寡核苷酸組，其中各成員之第二片段係 AGGCATAGGACCCGTGTCTT (SEQ ID N0:55)。 1 6 .—種合成的寡核苷酸組，其係充作Η I V三明治雜交分析中之捕獲探針，包含至少二種不同的寡核苷酸探針，其中組內各成員係由下列片段所組成：第一片段，其核苷酸序列係至少9 0%同質於Η I V 核酸片段：及 _ 第二片段，其係由至少9 0%同質於經結合在固相上之寡核苷酸的核苷酸序列所組成，其中該第二片段係不與 Η I V核酸互補；及其中該至少9 0%同質於Η I V核酸片段之核苷酸序列係選自： CATCTGCTCCTGTRTCTAATAGAGCTTCYTTTA (SEQ ID NO :45), ! ( ATCCATYCCTGOCl'l'TAATTrTACTGGTACAGT · (SEQ ID NO :46), CCATTTRTCAGGRTGOAGTTCATAMCCCATCCA (SEQ ID NO :49), CTAYTATGGGKTCYRTTifTCTAACTGGTACCAYA (SEQ ID NO :50), ATCTGGlTGTGClTGAATPJVTjfCCYARTGCATA (SEQ ID NO :51), CATGCATGGCTrCYCCTTTTAGYTGRCATTTAT (SEQ ID NO :52),及 AACAGGCDGCYTTAACYGYAGYACTGGTGAAAT (SEQ ID NO :53) 〇 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝. 訂泉本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) A4规格（210X297公釐） -10- C8 D8 六、申請專利範圍 1 7 .如申請專利範圔第1 6項之寡核苷酸組，其中名成負之第二片段係 CTTCTTTGGAGAAAGTGGTG (SEQ ID N0：56) 1 8 .—種合成的寡核苷酸組，其係充作η I V三明治雜交分析中之空間子寡核苷酸，包含至少二種不同的寡核替酸，其中組內各成員係由至少9 〇%同質I V核酸片段之核苷酸序列所組成，且其中該至少9 0%同質於 Η I V核酸片段之核苷酸序列係選自： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) • I - ί 1' IJ· - :-1— - J·— I , 訂 TATAGCTTTHTDTCCRCAGATTTCTAYRR (SEQ ID NO :57), VCCAAKCTGRGTCAACAJDATTTCKTCCRATrAT (SEQ ID NO : 58 ), TGGTGTGGTAARYCCCCACYTYAAYAGATGYYS (SEQ ID NO :59), TCCTGCTTITCCYWDTYTAGTYTCYCTRY (SEQ ID NO:60), YTCAGTYTrCTGATTTGTYGTDTBHKTNADRGD (SEQ ID NO ： 61), AATTRYTGl'GATATTTYTCATGDTCHTCTTGRGCCTT (SEQ 工DNO:S2},及- GCCATCTKCCTGCTAAnTTARDAKRAARTATGCTGTTr (SEQ ID N0:S3) ° 1 9 .—種於樣品中偵測Η I V存在之溶液相三明治式雜交分析法，此方法包括 (a )於雜交條件下，將樣品與下列接觸：（1 )擴大探針，其係如申請專利範圍第1 0項之合成的寡核奋酸組，及（i i )捕獲探針，其係如申請專利範困第1 2項本紙伕尺度逋州中困困家標华（CNS > Λ4洗格（210X297公釐Γ 11 - 1.. 經濟部中央揉準局貝工消費合作社印x 經濟部中夬梂準局負工消費合作杜印11 A8?S · D8六、申請專利範圍 ~ 之合成的寡核苷酸組’其中擴大探針與捕獏探針之濃度·均超過樣品中分析物核酸1莫耳濃度； (b )在雜交條件下，將（a )步驟產物與結合至固相之寡核苷酸接觸； (c)然後分出未結合在固相上之物質； (d )在雜交條件下將（c )步驟之結合產物與核酸多镫接觸，該多體包括至少一種寡核奋酸片段，其至少 9 0 %同質於該擴大探針多核苷酸之第二片段，以及至少 —個第二寡核苷酸片段，其至少9 〇%同質於經標記之寡核苷酸； (e).移去未結合之多體； (f )在雜交條件下，將（e )步驟之固相複合物產物與經檫記之寡核苷酸接觸； (g )移去未結合之經標.記寡核苷酸：及 (h )偵測存在於（g )步疑[之固相複合物產物中的標記物· 2 0 . —種於樣品中偵測Η I V存在之溶液相三明治式雜交分析法，此方法包括 (a )在雜交條件下，將樣品與下列接觭·· （ 1 )擴大探針，其係如申請專利範圍第1 4項之合成的寡核苷酸組*及（i i )捕獲探針•其係如申請專利範圍第1 2項之合成的寡核苷酸組，其中擴大探針與捕獲探針之滇度均超過樣品中分析物核酸1莫耳滇度： :i I Ϊ- ί * - 1 111 4— I fci-i 1 I— ——--I I--I : - - n I (請先M讀背面之注意事項再填寫本頁) l·訂本紙浪尺度適用_國國家梯準（CNS ) Λ4说格（210X297公釐厂i：i B8 CS 08 294722 、申請專利範圍 (b )在雜交條件下，將（3 )步思[產物與結合至固相之寡核苷酸接觸： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (c )然後分出未結合在固相上之物質； (d )在雜交條件下，將（c )步驟之結合產物與核酸多體接觸，該多體包掊至少一種寡核苷酸片段，其至少 9 〇%同質於該擴大探針多核苷酸之第二片段，以及至少一個第二寡核苷酸片段，其至少9 0%同質於經檫記之寡核苷酸： (e )移去未結合之多體： (f )在雜交條件下，將（e )步驟之固相複合物產物與經標記之寡核苷酸接觸； (g)移去未結合之經檫記寡核替酸；及的 h )偵測存在於（g ).步驟之固相複合物產 1 rv ：

交 r:' 標記物· 翅濟部t夬棣準局®:工消費合作社印装 2 1 .如'申請專利範圍第1 9項之溶液相三明分析法，其中（a )步驟進一步包含將樣品與充作Η I V 之三明治雜交分析中之空間子寡核苷酸的合成之寡核苷酸組接觸，該組包含至少二種不同的寡核苷酸’其中每一個合成的寡核苷酸係由至少9 0%於Η I V核酸片段之核替酸序列所組成，.且其中該至少9 〇 %同質於Η 1 ν核酸片段之核苷酸序列係選自本紙張尺度逋用t國國家標準（CNS ) 格（210Χ29?公聲Γ TT 申請專利範圍 AS B8 C8 08 TATAGCTTTHTDTCCRCAGATTTCTAYRR (SEQ ID NO :57), VCCAAKCTGRGTCAACADATTTCKTCCRATTAT (SEQ ID NO :58), TGGTGTGGTAARYCCCCACYTYAAYAGATGYYS (SEQ ID MO :59 ), TCCTGCTrrrCC'fWDTYTAGTYTCYCTR'iT (SEQ ID NO： 6〇) / YTCAGTYTTCTGiVrTTGTYGTDTBKKTTf/VjDElGD (SEQ ID NO: SI) , _ /UVTTRYTG'rGATArmTCATGDTCHTCTTGRGCCTT (SEQ ID MO： 62) , S. GCCATCTPCCCTGCTAATTTTARDAK：RAAJITATGCT<3TYT (SEQ ID MO：

2 2 .如申請專利範圍第2 〇項之溶液相三明_交分析法，其中（a )步驟進一步包含將樣品與茺作3 I v 之三明治雜交分析中之空間子寡核苷酸的合成之寡核苷酸組接觸’該組包含至少二種不同的寡;^苷酸，其中毎一個合成的寡核替酸係由至少9 0 %於Η I V核酸片段之核苷酸序列所組成，且其中該至少9 〇%同質於Η I V核酸片段之核苷酸序列係選自 J ^ ^ ^^-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -訂經濟部中央揉準局員工消费合作社印«. TATAGCTTTHTDTCCRCAGATTTCTAYRR (SEQ ID NO： 57), VCCAAJCCTGRGTCAACAJDATTTCKTCCRATTAT (SEQ ID NO : 58 ), TGGTGTGGTAARYCCCCACYTYAAYAGATGYYS (SEQ ID NO：59), TCCTGCTTTTCCYWDTYTAGTYTCYCTRY (SEQ 工D NO:SO), YTCAGTYTTCTGATTTGTYGTDTBHFITNADRGD (SEQ ID N〇>: 61)）及 AATTRYTGTGATATTTYTCATGDTCHTCTTGRGCCTT (SEQ 1° N〇 * J ~ 〇 GCCATCTKCCTGCTAATTTTARDAJCRAARTATGCTGTYT (SEQ 丄 2 3 ·—種於樣品中偵測Η I V存在之溶液相式雜交分析法，此方法包括明治本紙浪尺度適用t國國家梯準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐f 1 經濟部中夬標隼局員X消費合作社印S- C8 D8 六、申請專利範圍 (a )在雜交條件下，將樣品與下列接觸：（i )擴大探針，其係如申請專利範圍第1 〇項之合成的寡核一酸組’及（i i)捕獏探針，其係如申請專利範圍第16項之合成的寡核苷酸組：其中擴大探針與捕獲探針之濃度均超過樣品中分析物核酸1莫耳澳度； (b )在雜交條件下，將（a )步驟產物與結合至固相之寡核苷酸接觸： (c)然後分出未結合在固相上之物質；、 (d )在雜交條件下，將（c )步驟之結合產物與核酸多體接觸，該多體包括至少一種寡核苷酸片段，其至少 9 0 %同質於該擴大探針多核苷酸之第二片段，以及至少一個第二寡核苷酸片段，其至少9 〇%同質於經標記之寡核苷酸； (e )·移去未結合之多體.； (ί )在雜交條件下，將（e )步驟之固相複合物產物與經標記之‘寡核苷酸接觸； (g)移去未結合之經標記寡核苷酸；及 (h )偵測存在於（g )步驟之固相複合物產物中的標記物* 2 4 . —種於樣品中偵測Η I V存在之溶液相三明治式雜交分析法，此方法包括 (a )在雜交條件下，將樣品與下列接觸：（i )擴大探針•其係如申請專利範困第14項之合成的寡核苷酸本祇浪尺度逋用中國a家標準^ ( CNS ) A4*iue· ( 210X297公廣):1:1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) V裝. 訂 C8 D8 六、申請專利範園組’及（i i)捕獲探針，其係如申請專利範困第16項之合成的寡核替酸組；其中擴大探針與捕獲探針之濃度均超過樣品中分析物核酸1莫耳濃度： (b )在雜交條件下，將（a )步驟產物與結合至固相之寡核苷酸接觸： (c )然後分出未結合在固相上之物質； (d )在雜交條件下，將（c)步驟之結合產物與核酸多體接觸，該多體包括至少一種寡核苷酸片其至少 9 0 %同質於該擴大探針多核苷酸之第二片段，以及至少一個第二寡核苷酸片段，其至少9 〇 %同質於經標記之寡核奋酸；. (e) 移去未結合之多證； (f) 在雜交條件下，將（e)步驟之固相複合物產物與經穰記之寡核苷酸接觸；- (g )移去未結合之經標記寡核苷酸；及· (h )偵測存在於（g )步驟之固相複合物產的標記物。 t ; I ^ 2 5 ·如申請專利範圍第2 3項之溶液相三明交分析法，其中（a )步驟進一步包含將樣品與充作® V 之三明治雜交分析中之空間子寡核替酸的合成之寡核替酸組接觭•該組包含至少二種不同的寡核苷酸，其中每一個合成的寡核苷酸係由至少9 0%於Η I V核酸片段之核苷酸序列所組成，且其中該至少9 〇%同質於Η I V核酸片本紙浪尺度通用+國國家梯準（CNS > Λ4現格（2丨0Χ297公釐） J ΤΜ--1---1·' '袈-- (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) 订 S·. 經濟部中央標準局負工消资合作社印«. 294722 B8 C8 D8 、申請專利範圍段之核苷酸序列係選自 TATAGCTTTHTDTCCRCAGATTTCTAYRR (SEQ ID NO :57), VCCAAKCTGRGTCAACADATTTCKTCCRJVTTAT (SEQ ID NO : 5 3 ), TGGTGTGOTAARYCCCCACYTYAAYAGATGYYS· (SEQ ID NO:S9), TCCTGCTTn'CC'fWDTYTAGTYTCYCTRY (SEQ ID NO: 60) , ·

(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) rrCAGT’ifTTCrGATTTGTYGTDTBHKTNADRGD (SEQ ID :61)., AATTRYTGTGATArrTYTCATGDTCHTCTTGRGCCTT (SEQ ID NO： GCCATCTKCCTGC丁AATTTTAiUDA^RAAimvrGCrGTYT (SEQ ID ff， 2 6 .如申請專利範圍第2 4項之溶液相三明治分析法’其中（a )步驟進一步包含將樣品與充作Η 之三明治雜交分析中之空間子寡核苷酸的合成之寡核苷酸組接觸，該組包含至少二種不同的寡核苷酸，其中每一個合成的寡核苷酸係由至少9 0%於Η I V核酸片段之核苷酸序列所組成，且其中該至少9 0%同質於Η I V核酸片段之核苷酸序列係選自 TATAGqTTTHTDTCCRCAGATTTCTAYRR (SEQ ID NO： 57),· VCCAA^CTGRGTCAACADATTTCKTCCRATTAT (SEQ 工D NO: 58)’ TGGTGTGGTAAkYCCCCACYTYAAYAGATGYYS (SEQ ID·NO :59)' TCCTGCTTTTCCYWDTYTAGTYTCYCTRY· (SEQ ID NO :60)，經濟部辛央標孳局月工消費合作社印袈 YT*tAGTmCTGATTTGTYGTDTBHKTNADRGD (SEQ ID N〇-6l) f _ rn N〇:/ AATTRYTGTGATAnTYTCATGDTCHTCTTGRGCCTT (SEQ ^ ^〇·63)? GCCATCTKCCTGCTAATTTTARDAJCRAAilTATGCTGTYT (SEQ I〇 I V之套組，其包含下 2 7 .—種用於偵測樣品中H 列之組合： (i )擴大探針，其係如申請專利範豳第1 項之合成的寡核Μ酸組：本紙法尺度適用t國國家梂準（CNS ) Α4規格（2丨0Χ297公釐) 4 294722 A8 BS C8 D8 、申請專利範圍 (11)捕獲探針’其係如申請專利範圔第12或工 6項之合成的寡核替酸組： (1 i i )—種核酸多體，該多體包括至少一種寡核替酸片段’其至少9 0%同質於擴大探針多核苷酸之第二片段’以及一個以上的第二寡核苷酸片段，其至少9 〇% 同質於經標記的寡核苷酸_；及 (iv)經標記之寡核苷酸· 2 8 .如申請專利範圍第2 7項之套組，資係進一步包含一組空間子寡核苷酸’該組包含至少兩種不同的空間子寡核苷酸，其中該空間子寡核苷酸係選自： TATAGCTTTKTDTCCRCAGATTTCTAYR-R. (SEQ ID NO：57), VCCAAJCCTGRGTCAACADATTTCKTCCRATTAT (S EQ ID NO : 5 8), TGGTGTGGTAARYCCCCACYTYAAYAGATGYYS (SEQ ID NO :59), TCCTGCTTTTCCTWDTYTAGTYTCYCTRY (SEQ II〕NO: SO) , | YTCAGTYTTCTGATTTGTYGTDT曰HKTNADRGD (SEQ ID NO : Si), . AATTRYTCTGATAriTYTCATGDTCHTCTTGRGCCTT (SEQ ID NO: 62) , & GCCATCTKCCTGCTAAnTTARDAKRAARTATGCTGTYT (SEQ ID NO: S3) p: 2 9 .如申請專利範圍第2 7項之套組，其中該擴大探針寡核苷酸組是申請專利範圍第1〇項之組， 3 0 .如申請專利範圍第2 7項之套組，其中該擴大探針寡核苷酸組是申請專利範圍第1 4項之組· 3 1 .如申請專利範圔第2 7項之套組，其中該捕獲探針寡核苷酸組是申請專利範圍第12項之組· 3 2 .如申請專利範圍第2 7項之套組，其中該捕獲探針寡核苷酸組爲申請專利範圈第16項之組· 本紙法尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公廣厂