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A6 B6

五、發明説明（1 ) 技術範圍 經濟部中央標準局工消費合作社印¾ 本發明是核酸雜交分析之領域。特言之，其係有關用 於偵測HTLV-1 (人類T細胞淋巴病毒—1，human T lymphotropic virus-1)之新穎的核酸探針。 背景技藝 HTLV_ 1是人類親淋巴性之反轉錄病毒，其可造 成成人T細胞白血病/淋巴瘤及熱帶痙擊性下身輕癱/ HTLV—1相關之脊髓病。這些HTLV—1相關疾病 在日本及加勒比人中爲地方病，而在美國零星發生。 HTLV-1之偵測通常以免疫學或聚合酶鏈反應分析法 (如見 Meytes, et al·, Lancet, 3 3 6 ( 8 7 3 0 ) :1533—1535，1990)來進行。 共有的美國專利案No. 4 ，8 6 8，1 0 5中描 述一種溶液相之核酸三明治式雜交分析法，其中欲分析之 核酸先於第一容器中、先與溶液中之經標記探針組及捕獲 探針組雜交。之後探針一分析物複合物再轉移至第二容器 中，其中含有固化在固相上之探針，其實質上與捕獲探針 之片段互補。片段與經固化之探針雜交，因此自溶液中移 去複合物。令分析物呈經固化複合物之型式後可助於分析 中接下來之分離步驟。最後經過標記探針組之單股片段與 經檫記探針雜交後，可經由直接或間接得自標記物之訊號 偵測含有分析物之複合物。 共有的歐洲專利案（EPA) 8 8 3 0 9 6 9 7 6揭 示與美國專利案4，8 6 8，1 0 5中所述分析法不同之 本紙張尺度通用中國囷家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公货） ~ ^ ~ ' (請先閲讀背面之注意事項再墻寫本頁) •丨裝. 訂. 1ψ^ 年J月.祗充 I . A6 B6 經濟部中央標準局8工消費合作社印¾ 五、發明説明（2 變化法。擴大 支之聚核苷酸 物核酸雜交， )雜交，並與 。於應用多體 記物或擴大探 複合物轉移至 針之片段雜交 之探針再依序 體可提供許多 揭示之擴大子 氏球菌、於淋 及砂眼衣原體 於1 9 9 N 〇 . 5 5 8 大的梳狀分支 較較小型多體 發明之掲示 本發明一方面是用於HTLV—1三明治式雜交分析 中充作擴大探針之合成的寡核苷酸，其包括核旮酸序列實 質上與 核酸片段互補之第一片段，及核苷酸序列實質上與 寡核苷酸多體互補之第二片段。 作用中 ，其經 或與結 專一雜 之分析 針組及 另一有 。多慷 與多髋 供標記 及捕獏 病奈瑟 係使用核 構築具有 合至分析 交地經標 中，係依 捕獏探針 經固化核 再與經固 上之第二 探針粘附 探針序列 氏球菌中 酸多體。這些核酸 一段片段係可專一 物上之 記探針 循於第 組之雜 酸之容 化之複 片段交 之位置 有B型 之青黴 核酸（分支 之第二片段 —容器中分 交之第一步 器，其係可 合物雜交， 互作用雜交 ，由是擴大 肝炎病原、 素及四環徽 多髋是分 地與分析 或線型的 交互作用 析物與檩 驟，再將 與捕獏探 且經標記 。由於多 訊號。所 淋病奈瑟 素抗性、 0年7月2 7日公告之共有的美國專利案 ，8 9 7，描述可用於上述溶液相分析中之 型多核苷酸多體之製備。此梳狀物在分析中 可提供更多之訊號粘附作用。 ------------------------裝------，玎------嫁 (請先閲讀背面之>±意事頊再埸寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公楚） 2^844 A6 B6 五、發明説明（3 ) (請先閲讀背面之注意事項再域寫本頁) 本發明另一方面是於HTLV—1三明治式雜交分析 中充作捕獲探針之合成的寡核苷酸，其包括核苷酸序列實 質上與 核酸互補之第一片段，及核苷酸序列賁質上與結合 至固相之寡核苷酸互補之第二片段。 本發明另一方面是用於偵測樣品中有Η T L V — 1存 在之溶液相三明治式分析法，其包括： (a )將樣品於雜交條件下與過量的下列接觸，（i )一種擴大探針寡核苷酸，其包括核苷酸序列實質上與 Η T L V — 1核酸片段互補之第一片段，及核苷酸序列實 質上與核酸多體之寡核苷酸單位片段之第二片段，及（ii )一種捕獲探針寡核苷酸，包括核苷酸序列實質上與 HTLV—1核酸片段互補之第一片段，及實質上與固化 至固相上之寡核苷酸補之第二片段； (b) 在雜交條件下將（a)步驟之産物與結合至固 相上之該寡核苷酸接觸； (c) 之後分出來結合至固相之物質； 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 (d) 在雜交條件下將（c)步驟之經結合産物與核 酸多體接觸，該多體包括實質上互補於擴大探針多核替酸 之第二片段之至少一種寡核Μ酸單位，及實質上互補於經 標記寡核苷酸之許多第二種寡核苔酸單位； (e )移去未結合之多體； (f)在雜交條件下將（e)步驟之固相複合物産物 與經標記之寡核苷酸接觸； 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -5 - 2^3844 府件DE CA) % 82100429 ft專利申請素中丈说明書修£賽 ϋ 85 平 8 Λ 5

五、發明説明（4 ) (g )移去未結合之經標記之寡核苷酸 及 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (h )於（g )步驟之固相複合物產物中偵測標記物 之存在。 本發明另一方面是用於偵測HTLV - 1之套組，包 括用於偵測樣品中Η T L V — 1之套組，包括混合 (i ) 一組擴大探針寡核苷酸，其中擴大探針寡核苷 酸包括核Μ酸序列實質上與HTLV-1核酸片段互補之 第一片段’及核苷酸序列實質上與核酸多體之寡核苷酸單 位互補之第二片段。 (ii) 一組捕獲探針寡核替酸，其中捕獲探針寡核苷 酸包括核苷酸序列實質上與HTLV—1核酸互補之第一 片段，及實質上與結合至固相之寡核替酸互補之第二片段 經濟部中央標準局員工消资合作社印製 (iii) 核酸多體，該多體包括實質上互補於擴大探針 多核苷酸第二片段之至少一種寡核苷酸單位，及實質上互 補於經標記寡核苷酸之許多的第二寡核苷酸單位；及 (iv) —種經標記之寡核苷酸。 基於此中所揭示的，這些及其他的具體實例對一般精 藝者應是淺顯的。 本纸張尺度適用中國阁家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公廣） 經濟部中央橾隼局貝工消费合作社印製 箝件二（A)X 第82100429 鱿專利辛請素中文说明書修壬If 293^44-----------------------------A7.....-氏興 85 子 10 Λ 熹 _____Β7 r—— 五、發明説明（4-1) <10冲7日參止 L 補充 凰丞簡單說明 附圖·三明治雜交分析法，利用多個分析物特定之捕

I 獲探針及擴大探針。 如下所示序列表中符號之意義： 符號 代表意義 R ...... A 或 G w...... A 或 T / U S ...... C 或 t G ♦ Y ...... C 或 T / U K ...... G 或 τ / U V ...... A 或 C 或 G ; 非 T / U Η ...... A 或 C 或 T / U ; 非 G D ...... A 或 G 或 T / U 非 C Β ...... C 或 G 或 T / U 非 A fsj ...... ( A 或 C 或 G 或 T / U )或（未知或其它） 實行本發明之方法 定義 1溶液相核酸雜交分析意指於共有的美國專利案 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐） 1- ! - I - - - -- - n n m· ^^1 ......I h 1^1 —LI (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（5 ) Νο·4, 868, 105 及 EPA 883096976 中所述及申請專利範圍之分析技術。 ★經修飾之核苷酸〃意指可穩定地納入多核苷酸中之 核苷酸單體，且其具有額外的官能基。較好，經修飾之核 苷酸是5· —胞嘧啶核苷，其中N4 —位置經修飾以提供 官能性羥基。 ”擴大子多體〃意指一種分支之多核苷酸，其可同時 直接或間接地雜交至分析物核酸及許多多核苷酸交互作用 上（即是另一多髏之交互作用或經標記探針之交互作用） 。多體上之分支可由共價鍵結達成，且多體由二型寡核苷 酸單位組成，其可分別雜交至分析物核酸或雜交至分析物 核酸及許多經標記探針上。此種多體之組成物及製備，描 述於EPA 883096976及美國糸列No. 558, 897 (公告於1990年7月27日），其掲 示均列本案參考。. a擴大探針〃一語意表分支或線型之多核苷酸，其經 構築可具有與分析物核酸可專一性雜交之片段，且可與專 一雜交至擴大多體之第二Μ段交互作用。 >捕獲探針"意指一種寡核苷酸，其具有可實質上與 標的D N A之核苷酸序列互補之片段，及實質上與固化在 固相之探針核苷酸序列互補之片段。 w大〃於此中所用的係描述本發明之梳狀分支多核替 酸，意指有至少約1 5個分支位置及至少約2 0個經標記 探針結合序列之交互作用之分子。 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） 一 Ί _ JI!------.---^----{-------裝-----卜.玎 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A6 B6 293844 五、發明説明（6 ) (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) 、、梳狀〃於此中所用的是描述本發明分支多核替酸之 結構，意指具有線型架構之多核苷酸，並自骨架中伸出許 多側鍵。 、、可解離之鏈結子分子〃意指可穩定纳入多核苷酸鍵 中之分子，且其包括可為化學處理或物理處理打斷或解離 之共價鍵，如經由照射。 此中所掲示的所有核酸序列均以5 ’至3 ’方向書寫 出來。核苷酸之設計依IUPAC_IUB生化命名協會 之核Μ酸符號而定。 -—裝. 溶液相雜夺分析 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 以下為溶液相三明治式雜交法之一般策略。分析物核 酸與過量的二種單股核酸探針組，共置於微滴定孔洞中·· (1)一組捕獲探針，各自具有實質上互補於分析物之第 一結合序列及實質上互補於結合至固相載體上之核酸之第 二結合序列，如孔洞表面或珠粒，及（2 ) —組擴大探針 (分支或線型的），各自具有可專一地結合至分析物之第 一結合序列，及可專一地結合至多體片段之第二結合序列 。生成的産物是經由其第一結合序列，二探針雜交至分析 物之三組份核酸複合物。探針之第二結合序列因未同時互 補至分析物，故保留呈單股片段。此複合物經由捕獲探針 之第二結合序列而雜交至固化在固相表面之探針上。生成 之産物包括經由雙體結合至固相表面之複合物，此雙體係 由結合至固相表面之寡核苷酸及捕獲探針之第二結合序列 本紙张尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公辁) -β - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 _B6_ 五、發明説明（7 ) 所形成的。未結合之物質再自表面中除去，如利用洗滌。 之後再於雜交條件下，將擴大作用多體加至經結合之 複合物上，便多體可雜交至複合物擴大擴針中可應用之第 二結合序列上。再自任何未結合多體中以洗滌分出所生成 之複合物。於條件下再加入經標記之寡核苷酸，以雜交 分至多體之實質上互補的寡核苷酸單位上。再洗滌所生成 之經固化經標記核酸複合物，以除去未結合之經標記寡核 苷酸。 分析物核酸可得自各種來源，如生物流體或固體粒子 ，且可製備以用於各種方法之雜交分析中，如蛋白酶K/ S D S、離液序列高之鹽類，等。同時，減小分析核酸平 均大小是有益的，可採用酵素性、物理性或化學方法，如 限制酶、音波莪盪，化學降解（如金靥離子）等。片段可 小至0. lkb,通常至少約0. 5kb,且可大於1 k b。於分析時分析物序列呈單股型式。當序列以單股型 式自然存在，則變性將不需要。然而，當序列呈雙股型式 ，序列應予以變性。變性可以各種技術來進行，如鹼，通 常為由約◦. 05至0. 3M之氫氧化物、甲醯胺、鹽類 、熱、酵素、或其混合。 實質上互補於分析物序列之捕獲探針及擴大探針之第 一結合序列，各自至少15値核苷酸，通常至少25値核 轻酸，且不多過約5kb,通常不多過約1 kb,較好不 多過約1 ◦ 0値核轻酸。其通常約3 0個核苷酸。其通常 經選擇以結合至分析物之不同序列上。第一結合序列可基 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公货〉 ~ 9 ~ (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) 裝· l·訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 __B6 五、發明説明（8) 於各種考慮來選擇。依據分析物之本質，將可著眼於一致 序列、與多型性有闋之序列，持殊之表現型或基因型，待 殊之品糸，或其他。 所使用之不同擴大及捕獲探針之數目會影響分析之靈 敏性，因為使用愈多的序列，由分析糸統提供之訊號愈大 。再者，使用愈多之探針序列可使用更為迫切之雜交條件 ,由是減少偽陽性結果之發生。因此一組中探針之數目， 為至少一種捕獲探針及至少一種擴大探針，更好是二種捕 獲及二種擴大探針，且最好5—100種捕獲探針及5_ 1 0 0種擴大探針。 HTLV-1寡核替酸探針之設計，傺將Η T L V _ 1曰本及加勒比人分離物及來自Gene Bank之Η T L V — 2之Ρ〇 1基因核苷酸序列排列而得。選擇有最高同質性區 為捕獲探針，而較少同質性區為擴大探針。因此可應用更 多額外的HTLV—1株或分離物，由新株或分離物之序 列與用來設計本發明探針之核苷酸序列排列，選出最高同 質性區為捕獲探針，較少同質性區為擴大探針。本發明捕 獲探針之較佳構型形成二群，係擴大探針聚集於二捕獲探 針群間。目前較佳之探針組核替酸序列示於下表中。 選擇捕獲探針及擴大探針之第二結合序列，使其實質 上分別互補於結合至固相表面之寡核苷酸，及多體之片段 ，且如此不為樣品/分析物中之内源序列遇到。第二結合 序列可接於第一結合序列，或由中間之非互補序列隔開。 若必要時探針可包括其他的非互補序列。這些非互補序列 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公縫） 一 10 — (請先閲讀背面之注意事项再填寫本頁)

L -裝. Γ訂. 經濟部中央標準屬員工消费合作社印製 A6 B6 五、發明説明（9 ) 必須不可阻礙結合序列之結合，或造成非專-7性結合。 捕獲探針及擴大探針可以寡核苷酸合成步驟，或以選 殖法製備，較好是前者。 要了解，結合序列未必要完美的互補，以生成同二體 。在許多狀況下，雜二體已足夠，其中少於10%之鹸基 配對錯誤，可忽視5個以上核苷酸之環。因此，於此中所 用的 > 互補〃意指確實之互補，其中在結合區中的每一鹼 基確實地相當，且"'實質上互補"意指9 ◦ %以上同質。 經標記之寡核苷可包括實質上互補於多體重覆寡核苷 酸單位之序列。經標記之寡核替酸包括一種以上之分子（ a標記物〃），其直接或間接地提供可偵測之訊號。標記 物可結合至實質上互補序列之個別成員，或可呈末端成員 或具許多標記物之末端尾部型式存在。將標記物結合至寡 核苷酸序列之各種方法，文獻中已有述。如見，Leary et a 1 · , Proc« Natl· Acad· Sc i USA (1983) 8〇： 4 0 4 5 ϊ Renz and Kurz» N uc I « Acids· Res· ( 1984) , 1 2 ： 3 4 3 5 ； Richardson and Gumpor- t，Nuc1· Ac i ds. Res · ( 1 9 8 3) 1 1 :6 1 6 7 ； Smith e t a 1 . > Nuc1 · Ac i d s Re s . ( 1 9 8 5) 13: 2 3 9 9； Meinkoth and Wahl，Anal· B 丨 ochem·( 1 9 8 4) 1 3 8 : 2 6 7。標記物可共價或非共債地結 合至實質上互補序列上。可應用之標記物包括放射核種、 螢光劑、化學發光劑、染料、酵素、酵素受質、酵素輔因 子、酵素抑制劑、酵素亞單位、金屬離子及其他。可說明 ------------,---^-----------裝------一-訂 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國S家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -11 - 223844 A6 B6 經濟部中央標準居A工消費合作社印5取 五、發明説明（10) 之待殊標記物包括：螢光素、若丹明、德州红、藻紅肮、 缴形酮、魯米諾、NADPH、ct 一 /9 一半乳糖替酶、η 菜過氧化酶、鹼性磷酸酶等。 捕獲探針及擴大探針對預期莫耳分析物之比率，各自 至少為化學計量，且較好過量。此比率較好至少約1. 5 :1,且更好至少2:1。通常在由2:1至10δ :1 之範圍中。各個探針之濃度通常由約1 0_5至1 0·3Μ, 樣品核酸濃度由l〇_2i變化至ΙΟ—2 Μ。分析中雜交 步驟通常花費1 0分至2 0小時，較好可在1小時内完成 。雜交在略升高之溫度下進行，通常由約2 0 °C至8〇°C ，更常是由約35¾至7010,特別是65°C。 雜交反應通常於水性介質中進行，特別是經緩衝之水 性質，其中包括有各種添加物。可應用之添加物包括低濃 度之去污劑（0 . 0 1 - 1 %),鹽類，如檸檬酸鈉（ 〇.0 17至◦. 17M) 、Ficoll,聚乙烯吡咯啶酮， 載體核酸，載體蛋白質等。非水性溶劑可加至水性介質中 ，如二甲替甲醛胺、二甲亞硕、醇類、及甲醯胺。這些其 他溶劑之含量通常由2至5 0%。 可以溫度、鹽濃度、溶劑糸統及其他，控制雜交介質 之迫切度。因此，依據重點序列之長度及本質，可變化迫 切度。 依據標記物之本質，可應用各種技術以偵測標記物之 存在。於螢光劑時，可應用各種不同的螢光計。配合酵素 ，可提供螢光、化學發光或有色産物，且以螢光、化學發 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公发） 一12 _ (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 丨裝. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（11) 光、分光光度或目視法決定。已應用於免疫分析中之各種 標記物，及可應用至免疫分析之技術，均可應用於本分析 中。 依據本發明，進行經擴大核酸雜交分析之套組，包括 下列試劑之包裝組合：擴大探針或探針組；捕獲探針或探 針組；擴大多體；及適當的經標記寡核苷酸。這些試劑通 常於套組之分別容器之中。套組中也可包括將分析物變性 之變性試劑、雜交缓衝溶液，洗液，酵素受質，陰性及陽 性控制組，及進行分析之書寫指示。 以下實例說明本發明。這些實例不欲以任何方式限制 本發明。

審例 奮例I 梳狀分支多核锊酿^合成 此實例說明具有1 5個分支位置及三個經標記探針結 合位置之側鏈伸展之梳狀分支多核替酸之合成。此多核替 酸經設計可用於EPA 883096976所述之溶液 相雜交方法中。 寡核苷酸的所有化學合成，均於自動D N A合成儀上 進行（Applied Biosystems， Inc., (ABI) 380B 機型）。使用点一氡基乙基型之胺基磷酸酯化學，包括應 用Phostel7·«試劑（ABN)之5· —磷醯化作用。除了 另有所示，使用標準的A B I策略。當指示使用許多循環 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公货> _ 13 一 (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) .裝· 卜訂. 293844 A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（12) 時（如12個循環），於所示循環中應用由ABI提議之 許多標準量之胺基磷酸酯。此中所附加的是於Applied Biosystems 3 8 ◦ B型D N A合成儀上進行1 . 2及 6.4循環之程式。 先製備以下結構之梳體： 3'T/8(TTX' )1s GTTTGTGG-5 ' I (RGTCAGTp-5 ' ) ； 5 其中X’是分支的單體，且R是高碘酸鹽可解雜之鏈結子 。以1. 2循環策略，使用33. 8毫克之胺丙基—衍生 化之胸苷控制孔玻璃（CPG) (2000A,每克載體 有7. 4微莫耳胸替），先合成經由15 ( T T X ')重 覆子之梳體部份。分支位置之核苷酸具下式： X!)r0Rl 其中R 2代表 (請先閲讀背面之注意事項再堉寫本頁) -裝. 卜訂.

骨“ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） 經濟部中央標準局8工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（13) 於合成梳體（不包括側鏈）時，/3 —氰基乙基胺基礎 酸酯單體於A、C、G及T時之濃度為Ο. 1M,於分支 位置單體E為0 . 1 5 Μ ,及Phostel7^試劑為0 . 2 Μ 。於去保護作用過程中，利用逐步之流過以3 %三氯醋酸 /二氣甲烷進行去三苯甲基化作用。結論為5 · DMT以 乙醯基取代。 如下於每一分支單體位置處合成化式3’ 一 RGTCAGTp ( S E Q ID NO: 1)之可解離 鏈結子R及六鹼基側鐽伸展作用。手工進行鹼基保護基之 去除（於上式中之R2 ),同時保留於合成梳體相同管柱 中之CPG載體。於R2二乙醯丙醯基之例子時，引入 〇.5 Μ水合肼於吡啶/冰醋酸（1 : 1 V/V )之溶液 ，並保持與CPG載體接觸9◦分鐘，並每15分鐘更新 液體，再以吡啶/冰醋酸（1 : 1 V/V )及後的乙腈充 份洗滌。一旦將可解離鐽結子R去保護後，可利用6. 4 循環加入六鹼基側鏈之伸展。 於這些合成中，胺基磷酸酯之濃度為0. 1Μ (除了 0 . 2 M R 及 Ph〇stelTW試劑；R 為 2, 3 — 二（笮醯 氧基）丁氧基）苯基）乙基一 2—氡乙基一 N, N—二異 丙基胺基磷酸2 — （4 一 （4 一 （2 —二甲氣基三苯甲基 氧基）乙基）苯氣基酯）。 以3 %二氯醋酸/二氛甲烷之溶液，利用連續流過以 達成去三苯甲基作用，之後以甲苯/氯甲烷（1:1 V / V )溶液潤濕。於3 8 0 B中利用'' C E N Η 3 〃 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝i 訂. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公坌） 一 15 - 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製

A6 B6 _ 五、發明説明（14) 循環，自動地將分支之多核苷酸鏈自固相載體上除去。氫 氧化銨溶液收集於4毫升有螺蓋之Wheaton小瓶中，並在 6 〇 t：下加熱1 2小時以除去所有的鹼基保護基。冷卻至 室溫後，溶劑於高速真空蒸發器中除去，殘留物則溶於 1 〇 〇微升水中。 也利用自動合成儀，進行以下結構之3 ’骨架伸展（ 片段A)、側鍵伸展及連接模板/鏈結子： 3’架構 伸展 3，-TCCGTATCCTGGGCACAGAGGTGCp-5 . (SEQ ID No：2) 側鏈 伸展 3 'GATGCG(TTCATGCTGTTGGTGTAG) 3-5， (SEQ ID No：3) 用於鏈結 3 ’架構伸 展之連接 3，-AAAAAAAAAAGCACCTp-5· (SEQ ID No:4) 模板 用於鐽結 側鏈伸展 之連接楔 3'-CGCATCACTGAC-5，（SEQ ID N〇:5) 板 粗製的梳體以標準的聚丙烯醯胺凝驄（7 %加上7 M (請先閱讀背面之注意事項再項寫本頁) .裝· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公货） A6 B6 293844 五、發明説明（15) 尿素，及IX TBE操作缓衝溶液）方法純化。 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 如下將3 ·架構伸展及側鏈伸展連接至梳體上。梳體 (4微微莫耳/微升）、3·架構伸展（6. 25微微莫 耳/微升）、側鏈伸展（93. 75微徹莫耳/微升）、 側鐽鍵結模板（7 5微微莫耳/微升）及架構鏈結模板（ 5徹徹莫耳/徹升）混合於ImM ATP/5mM DTT/50mM Tris— HC1, pH8. Q / 經濟部中央標準局g工消f合作社印製 1 OmM MgC 1 2 /2mM亞精胺中，並加上〇. 5 單位/微升之T 4多核苷核激酶。混合物於3 7 °C下培育 2小時，再於水浴中加熱至9 5 °C ,之後緩慢冷卻至3 5 C以下歴1小時。加入2mM ATP、1 0 m Μ DTT、 14%聚乙二醇，及Ο. 21單位/徽升T4連 接酶，混合物在23t：下培育16 — 24小時。DNA沈 殿於N a C 1 /乙醇中，懸浮於水中，再接受如下之第二 次連接作用。混合物調整至ImM ATP, 5 m Μ DTT、 14%聚乙二醇，50mM T r i s - H C 1 、pH7. 5、1 0 m M MgCl2、2mM 亞精胺、 Ο. 5單位/微升T4多核苷酸激酶且加入Ο. 21單位 /微升Τ4連接酶，且混合物於23 °C下培育16 — 24 小時。連接産物以聚丙烯醯胺凝膠電泳純化。 經過連接及純化後，部份産物榡以3 5 P ,並在R位置 接受解離，傜以N a I 0 4水溶液氣化1小時而達成。樣 品再以P A G E分析以決定所納入之側鏈伸展數目，偽定 量凝膠中帶上之放射活性標記物。發現産物共有4 5個經 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公» ) -17 - A6 B6 五、發明説明（16) 標記之探針結合位置。 實例2 : Η T L V _ 1分析步驟 於此分析中使用、、1 5 X 3 "擴大之溶液相核酸三明 治式雜交分析型式。* 1 5 X 3 〃之設計衍生自此型式應 用二種多體之事實：（1)擴大探針具有可結合至CMV 之第一片段（A)，及可雜交至（2)擴大多體之第二片 段（B)，此擴大多體具有可雜交至片段（B)之第一片 段（B* )，及15個片段（C)之交互作用，其中片段 (C )雜交至三個經標記之寡核苷酸。 擴大及捕獲探針片段，及其個別於本分析法中之名稱 如下。 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) i裝. 卜訂. 經濟部中央標準屬員工消f合作社印？衣 -18 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公梦） A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

五、發明説明（17) Η T L V — 1擴大探針 HTLV.7 (SEQ ID Ν〇：6) GGTCTGGGTGTCAAYCTGGGCTTTAATTACGGG HTLV.8 (SEQ ID N0:7) ATCTAGTARAGCTTCGATAGTCTTTGGGTGGCT HTLV.9 (SEQ ID N0:8) : 1 GGCTATCGGAAGGACTGTCATGTCTGCTCCTGT HTLV.10 (SEQ ID NO:9) TGTRTTTTTGAGGGGAGTATTACTTGAGAACAA HTLV.ll (SEQ ID NO :10) ATCTTGGGTTTGGCCCCCTGCCCCTAAYACGGA HTLV.12 (SEQ ID N〇：11) TATTAGCACAGGAAGGGAGGTGAGCTTAAAGTG HTLV.13 (SEQ ID NO :12) TAAAACAATAGGCGTYGTCCGGAAAGGGAGGCG HTLV.14 (SEQ ID NO :13) CYAGTTX5TTTTTGGTATCAACTAGGCAAGATGT KTLV.15 (SEQ ID NO :14) , GCATTGTTGTAAGGCATCRCGACCTATGATGGC HTLV.16 (SEQ ID NO :15) CCYTTTTGCCTCAGGGAGGTACAGGACGCCYTG HTLV.17 (SEQ ID N〇：16) RGCTGGCGCCTGTATTGGCAAGATTACAGGCGG HTLV.18 (SEQ ID N〇：17) GGGGGGCCTTGGGAGGTGTTCTAGYCCAAGGAC HTLV.19 (SEQ ID NO:18) GGCGTTCTGGTTTAAAGGGAACTGGCTGATTTS HTLV.2 0 (SEQ ID NO :19) GGGCCTTCCGGACCAAGTGTTGCAAGGCCTGGA HTLV.21 (SEQ ID N〇：20). GCCCGGTGTAGGRTTCGATATGGCCTGCCTCCA HTLV.22 (SEQ ID N〇：21) CYTTTTTAACTGGGAATACTGGGTTATTYCCTG HTLV.23 (SEQ ID NO :22) GCA.GGTCGTGGATGAATCGCCAGGTTCCATTGG HTLV.24 (SEQ 工D NO:23) ATGAGAGRTCTATGGTTAGAGAGTTAGTGGC CC -----------.----.----f -------裝-----l· # (請先閲讀背面之注意事項再項寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公發） -19 - A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

五、發明説明（18) HTLV.25 (SEQ ID NO:24) GGCTGGACAAGTCAGGGGGCCCGGGGGAAGATG HTLV.26 (SEQ ID NO :25) CTATAGTTTGYAAGTGGGCTAGTGTRGTTGGCA HTLV.27 (SEQ ID NO :26) GTARGGGGATTTGGAAAAAGGCGTCTYTAAGGT HTLV.28 (SEQ ID NO :27) CAGTGAAAGCAAAGTAGGGCTGGAACTGTTTAG HTLV.29 (SEQ ID NO:28) TAGTGCCGGGGCCGTAGTTACACTGCTGTGGGA HTLV.30 (SEQ ID N〇：29) TAAACCCTTGGGGTAGTACTYTCCAGGCGTATC HTLV.31 (SEQ ID NO :3 0) CCAGCTGCATTTCGAACAGGGTGGGACTATTTT HTLV.32 (SEQ ID NO:31〉 GGAARGCTTGCC'GAATGGGCTGCAGGATATGGG HTLV.33 (SEQ 工D NO :32) TGTCATCCATGTACTGAAGAATAGTGCATTGGG HTLV.34 (SEQ ID NO :33) GYAGGTCCKCATGGGAGGGGCTTGCYAGGAGAA HTLV.35 (SEQ ID NO :34) TTAGGGAAGCCATTGTGGCCTCTGAGAGTAGTW HTLV.36 (SEQ ID NO:35) TTTTGTTTTCGGACACAGGCAACCCATGGGAGA HTLV. 3 7 (SEQ ID N〇：36)-_ CTAGGAACTTAATTGTTCCA.GGGGTTTGCTGGG HTLV.38 (SEQ ID NO:37) ' CATAAGTGAGGTGATTRGGTGAAATTATYTGCC HTLV.39 (SEQ 工D N〇：38) AGCGGGACCGTATAGGTACCKTGGGGACTGCAT HTLV.40 (SEQ ID N〇：39) CGCCAAGTAGGGCTTGAAGTTCAGGTAGCGCCC HTLV.41 (SEQ ID NO:40) AGGTAGGAGTTCCTTTGGAGACCCACTGAATCT HTLV.42 (SEQ ID NO :41) AGGCACAGTAGAGACTGTGAAGGGGCTGGCGTA (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) i裝- 訂. 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -20 - 293844 A6 B6

五、發明説明（19)Η T L V - 1捕糟探針 HTLV.l (SEQ 工D Ν0:42) TCTGGTTCTGGGATAGTGGGCTTTAGGCGGGGG HTLV.2 (SEQ ID ΝΟ:43). GGGAGRTCTAATAGGAGGGCATCYTCCTCTGGC HTLV.3 (SEQ ID Ν0:44) CCTATGRAGTTTTTTGGGTGTGGRATGTCRGCG HTLV.4 (SEQ ID N〇：45) CTGTAATGTGGGGGGGGAGGTTAAACCTCCCCC HTLV.5 (SEQ ID N〇：46) AATAGATCYTGGGTCTTGGTTARGAARGACTTG HTLV.6 (SEQ ID NO:47) CCGACGGGCGGGATCTAACGGTATAACTGGCAG HTLV.43 (SEQ ID N〇：48) ATATTTGGTCTCGGGGATCAGTATGCCTTTGTA HTLV. 44 (SEQ 工:p NO:49> GCACTAATGATTGAACTTGAGAAGGATTTAAAT HTLV.45 (SEQ ID N〇：50) TGCGGCAGTTCTGTGACAGGGCCTGCCGCAGCT HTLV.46 (SEQ ID N〇：51) CCCCTAGGAGGGGCAGGGTTTGGACTAGTCTAC HTLV.47 (SEQ ID N〇：52) CAGTRGTGGIXSCCAGTGAGGGTCAGCATAATAG HTLV.48 (SEQ ID N〇：53) CAAGTGGCCACTGCTSCTTGGACTGGAACACYA (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印*'衣 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉甲4规格（210 X 297公釐） -21 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Α6 Β6 五、發明説明（20) 每一擴大探針除了實質上互補於HTLV_1序列之 序列外，尚含有以下互補於擴大多體片段之5 ’伸展 AGGCATAGGACCCGTGTCTT (SEQ ID No：54)〇 每一捕獲探針除了實質上互補於HTLV — 1 DΝΑ之序列外，尚含有互補於結合至固相之DNA ( X T 1 * )之下列下游序列， CTTCTTTGGAGAAAGTGGTG (SEQ ID No：55)〇 微滴定盤之製備如下。自Dynatech Inc.購得Whit-e Microlite 1 Removawell長條（聚苯乙燃微滴定盤， 9 6孔洞/盤）。各個孔洞充填以1 N H C 1 2 0 0微 升，並在室溫下培育1 5 — 20分。之後以IX PBS 洗盤4次，且吸取孔洞以移去液體。孔洞再充瑱以1 Ν N a Ο Η 200微升，並於室溫下培育1 5 — 20分。 盤再次以1 X P B S洗4次，且吸取孔洞以移去液體。 多（P he— lys)購自 Sigma Chemical Inc·。 此多肽具1:1莫耳濃度比率之phe:1ys,且平均 分子量為每莫耳47, 900克。其具有309個胺基酸 之平均長度，且含155胺/某耳。：l毫克/徹升之多肽 溶液與2M NaCl/lX PBS混合至0.1毫克 /微升（Η 6 . 0 )之終濃度。取此溶液1 ◦◦微升加至 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 2W公货） -22 - (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 丨裝· 訂. 經濟部中央標準局8工消#合作社印制衣 A6 B6 五、發明説明（21) 各孔洞。盤再覆以塑膠膜以避免乾燥，並於3 Ot：下培育 一夜。之後盤以IX PBS洗4次，並吸取孔洞以除去 液體。 使用以下步驟以偶合寡核苷酸XT 1 #至盤中。 XT1*之合成述於EPA 883096976。 20 毫克的辛二酸二琥珀醯亞胺基酯溶於3 0 0微升的二甲替 甲醯胺（DMF)中。26 〇D2e。單位之XT1*加 至1 ◦◦微升的偶合缓衝溶液中（5 0 m Μ磷酸鈉，p Η 7. 8)。再加偶合混合物至DSS — DMF溶液，並以 磁性攪拌器攪拌30分。NAP — 25管柱，以10mM 礎酸鈉pH6. 5平衡。於4 °C下，偶合混合物DSS — DMF溶液加至2毫升16mM磷酸鈉，pH6. 5中。 混合物渦旋以混合，並填料至已平衡之NAP—25管柱 中。以DSS —活化之XT1*DNA以3. 5毫升10 mM磷酸鈉，pH6. 5溶離出管柱。5. 6 0 D 2β〇 單位之經溶離的DSS —活化之XT 1* DNA加至 150 ◦毫升50mM磷酸鈉、pH7. 8中。此溶液取 5 0微升加至各孔洞，且盤培育一夜。盤再以1 X P B S洗滌4次，且吸取孔洞以除去液體。 盤最終之汽滌完成如下。含0. 5%(W/V) SDS之200微升◦. 2N Na〇H加至各孔洞。再 覆以塑膠膜而於65 °C下培育60分鐘。之後以IX PBS洗4次，再吸取孔洞以除去液體。經汽滌之盤加上 乾燥劑小珠，貯於2 — 8它下。 (請先閲讀背面之注意事项再場寫本頁) i裝. 訂_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公發） -23 - 293844 A6 B6 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 五、發明説明（22) 受試樣品之製備如下。1X1 0s HTLV — 1感染 之MT — 2細胞或未感染之HuT細胞（人類T細胞淋巴 瘤細胞）直接用於下分析中，或標準的酚：氯仿萃取步驟 萃取（如見，Sambrook，et al.，Molecular. Cloning: A Laboratory Manual, 1989， Cold Spring Harbor p-ress，Cold Spring.Harbor，NY)。陰性對照組為〇1111>-ecco’s Modified Eagle’s 培養基（DMEM),陰性的人類 血清（neg. HS)、緩衝溶液（1 〇 m Μ T r i s -HC1，pH8. 0)、及蒸餾水。60微升的p_K缓 衝溶液加至微管中（2毫克/毫升蛋白酶K於lOmM Tris-HCl, pH8. 0 / 0 . 15M N a C 1 / 1 〇 m M EDTA，pH8. 0/l%SDS/40 微克/毫升經音波震盪之鮭精子DNA),以供各樣品分 析。加50微升受試樣品至各管中。 將HTLV — 1專一性擴大及捕獲探針之摻合物加至 各孔洞（1 0毫微微莫耳各探針/管於2 5微升，稀釋於 1 N NaOH中）。管再於65°C下培育30分鐘。 之後加入6 0微升的中和缓衝溶液至各管中（ 0. 77M 3 - （N —嗎福啉基）丙烷磺酸/ 1. 845M N a C \ / 0 . 185M 檸檬酸鈉）。經 混合後，管於6 5 °C下培育一夜。濃縮物離心後自各管壁 中除去，且管之内含量轉移至上述製備之微滴定孔洞中。 徹滴定盤於6 5 °C下培育4小時。 室溫下再經10分鐘後，各孔洞内容物吸出以除去所 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公货） -24 ~ (請先閲讀背面之注意事項再堉寫本頁) 裝· l·訂· A6 B6 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（23) 有流體，且孔洞以洗滌緩衝溶液（◦ . 1 % S D S / 0.015M NaCl/0.0015M 檸檬酸鈉）洗 2次。 再加擴大多體至各孔洞（20毫微微莫耳於50微升 ，於 5 0 % 馬血清/ (0.06M NaCl/〇.〇6 Μ檸樣酸鈉/0.1%SDS,以1:1與4XSSC/ 〇.1 % S D S / 〇.5 %、、阻斷試劑"（Boehr i nger Mannheim, catalog No. 1 0 9 6 1 7 6 混合）。盤加 蓋後，攪動以混合内容物，盤再於5 51C下培育3 ◦分鐘 。經室溫下又5分鐘後，孔洞如上述地洗滌。 再加掲示於EP 883096976中之鹸性磷酸 酶標記探針至各孔洞（2 0毫微微莫耳於5 ◦微升/孔洞 )。經55¾下培育1 5分鐘後及室溫下5分鐘後，孔洞 如上洗2次，再以0. 015MNaCl/0. 0015 Μ檸檬酸鈉洗3次。 使用得自Lumigen， Inc.,之酵素啓動的dioxetane (Schaap et a 1 · . Tet. Lett. ( 1 9 8 7) 2 8 : 1 159 — 1 162 及 EPA Pub. No.〇 2 5 4 0 5 1 ) 。加5 ◦微升Lumiphos 5 3 0 (Lumigen)至各孔洞。孔 洞輕拍如此試劑可落至底部，且緩和旋轉以將試劑分佈均 句於底部。孔洞加蓋，並於3 7 °C下培育4 0分鐘。 再於Dynatech ML 1 ◦〇◦發光計上讀取盤。以反 應中産生光之完全積分為産量。 結果示於下表。這些結果顯示可於經萃取及未萃取之 (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) .裝_ 訂. 本纸張尺度適用中因國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公發） -25 - A6 B6__ 五、發明説明（24) 感染細胞中偵測HTLV—l DNA之能力，且與未感 染控制組之組份無交叉雜交作用。 樣品 細胞_樣品製備 發光計鳙數 MT-2 105 經萃取 48.68 HuT-78 106 經萃取 1.92 MT-2 10e 未萃取 27.39 HuT-78 106 未萃取 2.37 DMEM 0 未萃取 1.75 Neg . HS 0 未萃取 1.07 T r i s 0 未萃取 1.39 h2〇 0 夫萃取 1.02 啻例3 Η T L V - 1 R Ν Α ^偵測 HTLV—1 RNA之偵測基本上如上文步驟，除 了以下變化。 經濟部中央標準局S工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 將HTLV - 1病毒貯液連缜稀釋於正常人類血清中 ，使濃度範圍介於125—5〇〇〇丁〇105〇/毫升 中，而製備HTLV — 1 RNA之標準曲線。蛋白S§K 溶液之製備係加10毫克蛋白酶Κ至5毫升HTLV-1 捕獲稀釋劑中（53mM Tr i s — HC 1，pH8/ 10. 6 m M EDTA/1. 3%SDS/16 微克/ 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公梦） -26 - 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 A6 ______B6 _ 五、發明説明（25) 毫升經音波震盪之鲑魚精子DNA/5. 3XSSC/1 毫克/毫升蛋白酶K)製成於甲醯胺之7%溶液，再貯於 一 2 0 t：下。等莫耳濃度之捕獲探針及標記探針混合物， 加至蛋白酶Κ溶液中，如此各探針之終濃度為（6 7 0毫 微微莫耳/毫升。3 0微升探針/蛋白酶Κ溶液加至上述 製備之微滴定盤各孔洞後，加i 〇微升適當的病毒稀釋液 至各孔洞。盤加蓋，震盪混合，再於6 5 °C下培育1 6小 時。 盤自培育箱中移去，並於工作樁上冷卻1 〇分鐘。孔 洞如上實例2般洗滌2次。15X3多體稀釋於Amp/ 標記物稀釋劑中使達1毫微微莫耳/微升（稀釋劑之製備 傜將2. 22毫升經DEPC處理的水（DEPC是焦碩 酸二乙酯）、1. 35毫升10%SDS、 240微升 1M T r i s PH8. 0,2 ◦微升馬血清混合，調 至2毫克/毫升於蛋白酶K中，再加熱至6 5 °C歴2小時 ，之後加4毫升DEPC-H2O，4毫升1〇%SDS 及8毫升20XSSC)。經稀釋之15X3多體以40 微升/孔洞加入，封盤，震盤，再於5 5。〇下培育3〇小 時。之後盤於室溫下冷卻1 0分鐘，再如上述般洗滌。鹼 性磷酸酶標記探針稀釋至2 . 5毫微微某耳/微升於 A m p /標記物稀釋劑中，再加4 ◦微升至各孔洞。封盤 、震盪，再於55 °C下培育15分鐘。 盤於室溫下冷卻1 0分鐘，如以洗2 X ,再以 0. 1 5 M NaCl/〇. 015Μ檸檬酸鈉洗 3Χ。 本紙張尺度適用中固國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） I I I ^^1 ^^1 ^^1 ^^1 1^1 ^ I i ^^1 ^^1 al· I tn ^^1 It (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A6 B6 五、發明説明（26) 加入受質並如上偵測發光。 上述進行本發明之方法之變化對精於生化學，核酸雜 交，及相關領域者是淺顯的，且意欲包括在以下申請專利 範圍之内。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -丨裝· 訂. 經濟部中央標準局員工消費合作社印制衣 -28 - 本紙張尺度適用中國园家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） 附件三A :弟82100429號專利申請案中文說明書修正頁 293844 A/ B7 ，國84年4月修正 五、發明説明（4-丨） 如下所示序列表中符號之意義： 符號- 代表意義 ' R...................................... Α或G W................. A 或 T/U S.................. C或G Y.................. C 或 T/U K.................. G或 T/U s V.................. A或C或G:非T/U i Η.................. A或C或T/U;非G 1 D.................. A或G或T/U;非C Β....···............ C或G或T/U:俳丨A Ν.................. (A或C或G或T/U)赛（未，知，或其它、） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

J '1Τ '經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（27) 序列表 (1 ) 一般資料 (i )申請人：Kolberg，Janice A·

Urdea， Michael S .- (i i )發明標題：用於溶液相三明治式雜交分析内之 Η T L V — 1探針 (i i i)序列數目：5 5 (iv)通訊住址 (A )收信人：Morrison & Foerster (B )街：755 Page Mill Road (C )市：Polo A1to (D )州：加州 (E )國家：U S A (F ) ZIP:943 0 4-1018 (v )電腦可讀型式 (A)介質型式：Floppy disk (B )電腦：I B M P C可相容

(C) 操作糸統：PC — DOS/MS — DOS (D) 軟體：Paten In Release #1 . 0，Ver sion # 1 . 2 5 (v i)目前申請資料 (A) 申請編號：07/8 13, 585 (B) 立檔日期：18 — DEC— 1991 (C )分類： (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) .裝， 、ΤΓ. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公笼） -29 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印？衣 A6 B6 五、發明説明（28) (V i i i )法律事務資料 (A) 名稱：Thomas E. Ciotti (B) 註册號：21， 013 (C) 參考/索引：2230G— 2 0 2 3 8.〇 0 (ix)電傳資料： (A) 電話：415 — 813-56 0 0 (B) 電報：415-494 - 0 792 (C) 電傳：706141 (2 ) S E Q ID No:l 之資料 (i )序列特性： (A)長度：7鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(X i)序列說明：S E Q ID N 〇 ： 1 ： TGACTGR (2 ) S E Q ID No:2 之資料 (i )序列特性： (A)長度：24鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 ------1--------^----{ -------裝------^訂------^ (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公楚） -30 - 233844 A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（29) (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID N 〇 ： 2 ： CGTGGAGACA CGGGTCCTAT GCCT (2 ) S E Q ID No:3 之資料 (i )序列特性： (A)長度：60鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID No:3:

GATGTGGrrG TCGTACITGA TGTGGTTGTC GTACTTGATG TGGTTGTCGT ACTTGCGTAG (2 ) S E Q ID No:4 之資料 (i )序列特性： (A )長度：1 6鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 4 ： TCCACGAAAA AAAAAA (2 ) S E Q ID N〇:5 之資料 (i )序列特性： (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) 丨裝. 訂， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -31 A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印- 五、發明説明（30) (A )長度：1 2鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列説明：S E Q ID N 〇 ： 5 ： CAGTCACTAC GC (2 ) S E Q ID No:6 之資料 (i )序列特性： (A )長度：3 3鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID N 〇 ： 6 ： GGTCTGGGTG TCAAYCTGGG CTTTAATTAC GGG (2) SEQ ID No:7之資料 (i )序列特性： (A )長度：3 3鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 Ui)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 7 ： ATCTAGTARA GCTTCGATAG TCTTTGGGTG GCT 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） _ 32 ~ (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) ’裝. 訂. 經濟部中央標準局員工消費合作社印制衣 293844 A6 _B6_ 五、發明説明（31) (2 ) S E Q ID No:8 之資料 (i )序列特性： (A )長度：3 3鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性··單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 8 ： GGCTATCGGA AGGACTGTCA TGTCTGCTCC TGT (2 ) S E Q ID No:9 之資料 (i )序列待性： (A )長度：3 3鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID N 〇 ： 9 ： TGTRTTTTTG AGGGGAGTAT TACTTGAGAA CAA (2 ) S E Q ID Ν ο : 1 0 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) —裝. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公;^ ) -33 - 經濟部中央標準局I®工消费合作社印製 A6 B6 五、發明説明（32) (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID No: 10:

ATCTTGGGTT TGGCCCCCTG CCCCTAAYAC GGA (2 ) S E Q ID No:ll 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(X i)序列説明：S E Q ID N 〇 : 1 1 : TATTAGCACA GGAAGGGAGG TGAGCTTAAA GTG (2 ) S E Q ID No:12 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID No: 12: TAAAACAATA GGCGTYGTCC GGAAAGGGAG GCG (2 ) S E Q ID No:13 之資料 (i )序列特性： ί.---;----.---:----{-------裝------- 訂 — 卜---4 (請先閲讀脅面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（21〇 X 297公釐） -34 - 2b'3844 A6 B6 五、發明説明（33) (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID No: 13: CYAGTTGTTT TTGGTATCAA CTAGGCAAGA TGT (2 ) S E Q ID No :14 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID No: 14:

GCATTGTTGT AAGGCATCRC GACCTATGAT GGC (2 ) SEQ ID No:15 之資料 (i )序列特性： 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) •裝. (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID No: 15:

CCYTTTTGCC TCAGGGAGGT ACAGGACGCC YTG 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公轮） 一 35 _ —— ............................ ——- ' ,I , II 圃 I1IIIII————— .......... I ................—————— A6 B6_ 五、發明説明（34) (2 ) S E Q ID No:16 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(X i)序列說明：S E CT I D N 〇 ： 1 6 ： RGCTGGCGCC TGTATTGGCA AGATTACAGG CGG (2 ) S E Q ID No:17 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列說明：SEQ ID No： 17： GGGGGGCCTT GGGAGGTGTT CTAGYCCAAG GAC 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· (2 ) S E Q ID No:18 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 本纸張又度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -36 - A6 B6 五、發明説明（35) (D )拓撲學：線型

(X i)序列說明：S E Q ID N 〇 ： 1 8 ： GGCGTTCTGG TTTAAAGGGA ACTGGCTGAT TTS (2 ) S E Q ID No:19 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID No： 19：

GGGCCTTCCG GACCAAGTGT TGCAAGGCCT GGA (2 ) S E Q ID No:20 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再靖寫本頁) 丨裝·

Ui)序列說明：SEQ ID No:2〇：

GCCCGGTGTA GGRTTCGATA TGGCCTGCCT CCA (2 ) S E Q ID No:21 之資料 (i )序列特性： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公货〉 -37 - 293844 A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（36) (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 Ui)序列說明：SEQ ID N 〇 ： 2 1 ： CYTTTTTAAC TGGGAATACT GGGTTATTYC CTG (2 ) S E Q ID No:22 之資料 (i )序列特性： (A )長度：3 3鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 Ui)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 2 2 ： GCAGGTCGTG GATGAATCGC CAGGTTCCAT TGG (2) SEQ ID No:23之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 2 3 ： ATGAGAGRTC TATGGTTAGA GAGTTAGTGG CCC 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公坌） -38 - ----------.---一----i -------裝-----1.ΤΓ-Ι·---JU (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局員工消#:合作社印製 A6 B6_ 五、發明説明（37) (2 ) S E Q ID No:24 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列說明：S E Q ID N 〇 ： 2 4 ： GGCTGGACAA GTCAGGGGGC CCGGGGGAAG ATG (2 ) S E Q ID N〇:25 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列説明：S E Q ID N 〇 ： 2 5 ： CTATAGTTTG YAAGTGGGCT AGTGTRGTTG GCA (2 ) S E Q ID No:26 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 ------1·-------------~ -------裝-----|訂 (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） 39 ~ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6_ 五、發明説明（38) (D )拓撲學：線型

(X i)序列説明：S E Q ID N 〇 : 2 6 : GTARGGGGAT TTGGAAAAAG GCGTCTYTAA GGT (2 ) S E Q ID No:27 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 2 7 ： CAGTGAAAGC AAAGTAGGGC TGGAACTGTT TAG (2 ) S E Q ID No:28 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 2 8 ： TAGTGCCGGG GCCGTAGTTA CACTGCTGTG GGA (2) SEQ ID No:29之資料 (i )序列特性： ------^---I---.----f -------裝-----—訂 — h---J (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -40 - 293844 A6 B6 經濟部中央標準局員工消#合作社印製 五、發明説明（39) (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID N 〇 ： 2 9 ： TAAACCCTTG GGGTAGTACT YTCCAGGCGT ATC (2) SEQ ID No:30之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列説明：S E Q ID N 〇 ： 3 0 ： CCAGCTGCAT TTCGAACAGG GTGGGACTAT TTT (2 ) S E Q ID No:31 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 3 1 ： GGAARGCTTG CCGAATGGGC TGCAGGATAT GGG 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） _ 41 - (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 丨裝. l·訂. 乂 經濟部中央標準局3工消费合作社印製 A6 B6 五、發明説明（40) (2) SEQ ID No:32之資料 (i )序列特性： (A)長度：33驗基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：S E Q ID N 〇 : 3 2 : TGTCATCCAT GTACTGAAGA ATAGTGCATT GGG (2 ) S E Q ID No:33 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33驗基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學··線型

(xi)序列説明：SEQ ID No:33: GYAGGTCCKC ATGGGAGGGG CTTGCYAGGA GAA (2 ) SEQ ID No:34 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 .—----Γ.---:1·---.----一 -------裝-----卜訂-----从 (請先閲讀背面之注意事項再項寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -42 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6__ 五、發明説明（41) (D )拓撲學：線型

(X i)序列說明：S E Q ID N 〇 ： 3 4 ： TTAGGGAAGC CATTGTGGCC TCTGAGAGTA GTW (2 ) S E Q ID No :35 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID N 〇 ： 3 5 ： TTTTGTTTTC GGACACAGGC AACCCATGGG AGA (2) SEQ ID No:36之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 3 6 ： CTAGGAACTT AATTGTTCCA GGGGTTTGCT GGG (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 丨裝， —訂 233844 經濟部中央標準局員工消费合作社印*'|衣 A6 B6 五、發明説明（42) (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(X i)序列說明：S E Q ID N 〇 : 3 7 : CATAAGTGAG GTGATTRGGT GAAATTATYT GCC (2 ) S E Q ID No:38 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 3 8 ： AGCGGGACCG TATAGGTACC KTGGGGACTG CAT (2 ) SEQ ID No:39 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 3 9 ： CGCCAAGTAG GGCTTGAAGT TCAGGTAGCG CCC 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公梦〉 -44 - ,L——l·.---i.--------ί -------裝-----I·訂 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A6 B6 經濟部中央標準局員工消#合作社印製 五、發明説明（43) (2 ) S E Q ID No:40 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID N 〇 ： 4 0 ： AGGTAGGAGT TCCTTTGGAG ACCCACTGAA TCT (2 ) S E Q ID No:41 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列說明：S E Q ID N 〇 ： 4 1 ： AGGCACAGTA GAGACTGTGA AGGGGCTGGC GTA (2) SEQ ID No:42之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) i裝. 訂, 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公坌） _ 46 _ 經濟部中央標準局Η工消t合作社印製 293844 A6 __B6_ 五、發明説明（44) (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID N 〇 ： 4 2 ： TCTGGTTCTG GGATAGTGGG CTTTAGGCGG GGG (2)SECl ID No:43 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID N 〇 ： 4 3 ： GGGAGRTCTA ATAGGAGGGC ATCYTCCTCT GGC (2 ) S E Q ID No:44之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID No :44: CCTATGRAGT TTTTTGGGTG TGGRATGTCR GCG (2 ) S E Q ID No:45 之資料 (i )序列特性： l紙5&纽適用中國國家標準（CNS〉Τ 4規格（210 x 297公货） 一 46 一 -----:---1;---,----·*-.,------裝------：.玎 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝

五、發明説明（45) (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID N 〇 ： 4 5 ： CTGTAATGTG GGGGGGGAGG TTAAACCTCC CCC (2 ) S E Q ID Ν ο : 4 6 之資料 (i )序列特性： (A)長度：3 3鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID Ν 〇 ： 4 6 ： AATAGATGYT GGGTCTTGGT TARGAARGAC TTG (2 ) S E Q ID No:47 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列說明：S E Q ID Ν 〇 ： 4 7 ： CCGACGGGCG GGATCTAACG GTATAACTGG CAG (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 丨裝· 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS)甲4规格（210 X 297公坌） -47 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

A6 B6 _ 五、發明説明（46) (2 ) S E Q ID No:48 之資料 (i )序列特性： (A)長度：3 3鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列説明：S E Q ID N 〇 : 4 8 : ATATTTGGTC TCGGGGATCA GTATGCCTTT GTA (2 ) S E Q ID No:49 之資料 (i )序列特性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID N 〇 ： 4 9 ： GCACTAATGA TTGAACTTGA GAAGGATTTA AAT (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂. D 性度式性 I特長型股 %^)/ Q序 A B C E )((( si /IV \1/ 2 料 資 之 ο 對 5 基 : 鹼 ο 3 酸股 N 3 核單 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公货> -48 - 經滴部中央標準局員工消费合作社印製 A6 B6_·_ 五、發明説明（47) (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 5 0 ： TGCGGCAGTT CTGTGACAGG GCCTGCCGCA GCT (2 ) S E Q ID No:51 之資料 (i )序列持性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 5 1 ： CCCCTAGGAG GGGCAGGGTT TGGACTAGTC TAC (2 ) S E Q ID No:52 之資料 (i )序列待性： (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 5 2 ： CAGTRGTGGT GCCAGTGAGG GTCAGCATAA TAG (2 ) SEQ ID No:53 之資料 (i )序列特性： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公货） ~ 49 ~ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝· 293844 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（48) (A)長度：33鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 5 3 ： CAAGTGGCCA CTGCTSCTTG GACTGGAACA CYA (2 ) S E Q ID No :54 之資料 (i )序列特性： (A)長度：2◦鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID N 〇 ： 5 4 ： AGGCATAGGA CCCGTGTCTT (2 ) S E Q ID No :55 之資料 (i )序列特性： (A)長度：20鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID N 〇 ： 5 5 ： CTTCTTTGGA GAAAGTGGTG (請先閲讀背面之注意事項再蜞寫本頁) -裝. *ΤΓ. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公發） -50 -

Claims (1)

10 V 8 1)888 ABC0 293844 六、申請專利範圍 u~ - 附件一（A):第82100429號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國85年1 0月修正 1.—種合成的寡核苷酸，可充作HTLV—1 (人 類 T 細胞淋巴病毒—1，human T lymphotropic virus-1 )三明治式雜交分析法中之擴大探針，其中該寡核苷酸係 由下列片段所組成： —種第一片段，其核苷酸序列至少9 0%同質於 HTLV—1核酸片段；及 一種第二片段，其包含與核酸多體之寡核苷酸片段至 少9 0%同質之核苷酸序列，其中該核酸多體爲分枝之多 核苷酸，具有與該第二片段至少9 0%同質之至少一個寡 核苷酸片段，且其中該第二片段不互補於HTLV — 1核 酸， 其中該與HTLV — 1核酸片段至少9 0%同質之核 酸序列係選自： rn m n^it nn ^ fm m (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 訂 •線 經濟部中央標筚局負工消費合作社印装 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2丨0X297公釐） 1 經濟部中央揉準局貞工消費合作社印製 A8 B8 C8 _ D8 六、申請專利範圍 GGTCTGGGTGTCAAYCTGGGCTTTAATTACGGG (SEQ ID NO： 6)," ATCTAGTARAGCTTCGATAGTCTTTGGGTGGCT (SEQ ID NO： 7), GGCTATCGGAAGGACTCTCATGTCTGCTCCTGT (SEQ ID NO: 8), TGTRTTTTTGAGGGGAGTATTACTTGAGAACAA (这EQ ID NO:9), ATCTTGGGTTTGGCCCCCTGCCCCTAAYACGGA (SEQ ID NO: 10), TATTAGCACAGGAAGGGAGGTGAGCTTAAAGTG (SEQ ID NO: 11), , TAAAACAATAGGCGTYGTCCGGAAAGGGAGGCG (SEQ ID NO： 12), 0 : CYAGTTGTTTTTGGTATCAACTAGGCAAGATGT (SEQ ID NO:.13), 、' GCATTGTT'GTAAGGCATCRCGACCTATGATGGC (SEQ ID NO:14), ' CCYTTTTGCCTCAGGGAGGTACAGGACGCCYTG (SEQ ID NO: 15) ,| — RGCTGGCGCCTGTATTGGCAAGATTACAGGCGG (SEQ ID NO: IS) ,1 GGGGGGCCTTGGGAGGTGTTCTAGYCCAAGGAC (SEQ ID NO:17) t GGCGTTCTGGTTTAAAGGGAACTGGCTGATTTS (SEQ ID NO: 18), GGGCCTTCCGGACCAAGTGTTGCAAGGCCTGGA (SEQ ID NO :19), GCCCGGTGTAGGRTTCGATATGGCCTGCCTCCA (SEQ ID NO: 20), CYTTTTtAACTGGGAATACTGGGTTATTYCCTG (SEQ ID NO: 21), GCAGGTCGTGGATGAATCGCCAGGTTCCATTGG (SEQ ID .NO: 22), ATGAGAGKTCTATGGTTAGAGAGTTAGTGGCCC (SEQ ID NO： 23),, GGCTGGACAAGTCAGGGGGCCCGGGGGAAGATG (SEQ .ID NO:24), CTATACTTTGYAAGTGGGCTAGTGTRGTTGGCA (SEQ ID NO:25), GTARGGGGATTTGGAAAAAGGCGTCTYTAAGGT (SEQ ID NO: 26) CAGTGAAAGCAAAGTAGGGCTGGAACTGTTTAG (SEQ id NO: 2 7) TAGTGCCGGGGCCGTAGTTACACTGCTGTGGGA (SEQ ID HO： 28)； TAAACCciTTGGGGTAGTACTYTCCAGGCGTATC (SEQ ID NO: 29), CCAGCTGCATTTCGAACAGGGTGGGACTATTTT (SEQ ID NO: 3 0) Λ GGAARGC'tTGCCGAATGGGCTGCAGGATATGGG (SEQ ID NO;31), TGTCATCCATGTACTGAAGAATAGTGCATTGGG (SEQ ID NO: 32), GYAGGTCCKCATGGGAGGGGCTTGCYAGGAGAA (SEQ ID NO:33), TTAGGGAAGCCATTGTGGCCTCTGAGAGTAGTW (SEQ ID NO：34), TTTTGTTTTCGGAGACAGGCAACCCATGGGAGA (SEQ ID NO:35), CTAGGAACTTAATTGTTCCAGGGGTTTGCTGGG (SEQ ID.NO：36), CATAAGT9AGGTGATTRGGTGAAATTATYTGCC (SEQ ID N〇:37), AGCGGGACCGTATAGGTACCKTGGGGACTGCAT (SEQ ID NO :38), CGCCAAGTAGGGCTTCAAGTTCAGGTAGCGCCC (SEQ ID NO：33) / AGGTAGGAGTTCCTTTGGAGACCCACTGAJ\TCT (SEQ ID NO: 40},及 AGGCACAGTAGAGACTGTGAAGGGGCTGGCGTA (SEQ ID NO Μα), 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） l· T —裝^------訂丨，丨丨卜丨N線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A8 B8 C8 · D8 六、申請專利範圍 2. 如申請專利範圍第1項之合成的寡核苷酸，其中 該第二片段包含以下序列 ,.AGGCATAGGACCCGTGTCTT (SEQ ID NO. 54)° 3. —種合成的寡核苷酸，可用作HTLV — 1三明 治式雜交分析中之捕獲探針，其中合成的寡核苷酸係由下 列片段所組成I 一種第一片段，其核替酸序列至少9 0%同質於 HTLV—1核酸片段；及 一種第二片段，其包含與結合至固相之寡核苷酸至少 90%同質之核苷酸序列，其中該第二片段不互補於 Η T L V — 1 核酸， 其中該與HTLV— 1核酸片段至少9 0%同質之核 酸序列係選自= TCTGGTiCTGGGATAGTGGGCTTTAGGCGGGGG (SEQ ID NO:42), » GGGAGRTCTAATAGGAGGGCATCYTCCTCTGGC (SEQ ID NO :43), CCTATGRAGTTTTTTGGGTGTGGRATGTCRGCG (SEQ ID NO : 4 4 ), CTGTAATGTGGGGGGGGAGGTTAAACCTCCCCC (SEQ ID NO :45), AATAGAtGYTGGGTCTTGGTTAHGAARGACTTG (SEQ ID NO :46), CCGACGGGCGGGATCTAACGGTATAACTGGCAG (SEQ ID NO：47), ATATTTGGTCTCGGGGATCAGTATGCCTTTGTA (SEQ 工D N0M8), GCACTAATGATTGAACTTGAGAAGGATTTAAAT (SEQ ID N〇：49), TGCGGCAGTTCTGTGACAGGGGCTGCCGCAGCT (SEQ ID NO :50), CGCCTAGGAGGGGCAGGGTTTGGACTAGTCTAC (SEQ ID MO :51), CAGTRGTC；GTGCCAGTGAGGGTCAGCATAATAG (SEQ ID :52 及 CAAGTGGCCACTGCTSCTTGGACTGGAACACYA (SEQ ID NO :53). 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇><297公釐） -3 - J--------1 -裝-------訂—·-----*.線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A8 B8 C8 · D8 ☆、申請專利範圍 4.如申請專利範圍第3項之合成的寡核苷酸，其中 該第二片段包含 二 CTTCTTTGGAGAAAGTGGTG (SEQ I D N0. 55 )。 5 .—組合成的寡核苷酸，可充作HTLV — 1三明 治式雜交分析中之擴大探針，包含至少二種不同之寡核苷 酸探針’其中每一寡核苷酸探針係由下列片段所組成·· 一種第一片段，其核苷酸序列至少9 0 %同質於 HTLV— 1核酸片段；及 一種第二片段，其包含與核苷酸多體之寡核苷酸片段 至少9 0%同質之核苷酸序列，其中該核苷酸多體爲分枝 之多核苷酸，具有與該第二片段至少9 0 %同質之至少一 個寡核苷酸片段，且其中該第二片段不互補於HTLV-1核酸， 其中與HTLV— 1核酸片段至少9 0%同質之每一 該核苷酸序列係選自： U--------< I裝^------訂丨，----ί 線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 本紙張尺度逋用中國國家標隼（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 293844 A8 B8 C8 D8 經濟部中央標準局負工消费合作社印策 六、申請專利範圍 GGTCTGGGTGTCAAYCTGGGCTTTAATTACGGG (SEQ ID NO ATCTAGTARAGCTTCGATAGTCTTTGGGTGGCT (SEQ ID NO GGCTATCGGAAGGACTGTCATGTCTGCTCCTGT (SEQ ID NO TGTRTTTTTGAGGGGAGTATTACTTGAGAACAA (SEQ ID NO ATCTTGGGTTTGGCCCCCTGCCCCTAAYACGGA (SEQ ID NO TATTAGCACAGGAAGGGAGGTGAGCTTAAAGTG (SEQ ID no I taaaacaIataggcgtygtccggaaagggaggcg (SEQ ID NO CVAGTTGtTTTTGGTATCAACTAGGGAAGATGT *(SEQ ID NO GCATTGTTGTAAGGCATCRCGACCTATGATGGC (SEQ ID NO CCVTTTTGCCTCAGGGAGGTACAGGACGCCYTG (SEQ ID NO RGCTGGCGCCTGTATTGGCAAGATTACAGGCGG (SEQ ID NO GGGGGGCCTTGGGAGGTGTTCTAGYCCAAGGAC (SEQ 工Di NC GGCGTTCTGGTTTAAAGGGAACTGGCTGATTTS (SEQ *'ID NC GGGCCTTCCGGACCAAGTGTTGCAAGGCCTGGA (SEQ ID NC GCCCGGTGTAGGRTTCGATATGGCCTGCCTCCA (SEQ ID NC CYTTTTTAACTGGGAATACTGGGTTATTYCCTG (SEQ ID NC GCAGGTCGTGGATGAATCGCCAGGTTCCATTGG (SEQ ID NC ATGAGAGRTCTATGGTTAGAGAGTTAGTGGCCC (SEQ ID NC GGCTGGACAAGTCAGGGGGCCCGGGGGAAGATG (SEQ ID NC CTATAGTTTGYAAGTGGGCTAGTGTRGTTGGCA (SEQ ID NC GTAKGCGGATTTGGAAAAAGGCGTCTYTAAGGT (SEQ ID NC CAGTGAAAGCAAAGTAGGGCTGGAACTGTTTAG (SEQ ID NC ITAGTGCCGGGGGCGTAGTTACACTGCTGTGGGA (SEQ ID NO iTAAACCCTTGGGGTAGTACTYTCCAGGCGTATC (SEQ ID NC •CCAGCTGCATTTCGAACAGGGTGGGACTATTTT (SEQ ID NO l3GAARGCTTGCCGAATGGGCTGCAGGATATGGG (SEQ 工D NO tT’GTCATCCATGTACTGAAGAATAGTGCATTGGG (SEQ ID NO GYAGGTCCKCATGGGAGGGGCTTGCYAGGAGAA (SEQ ID NO TTAGGGAAGCCATTGTGGCCTCTGAGAGTAGTW (SEQ 工D NO TTTTGTTTTCGGACACAGGCAACCCATGGGAGA (SEQ ID NO CTAGGAACTTAATTGTTCCAGGGGTTTGCTGGG (SEQ ID HO CATAAGTGAGGTGATTRGGTGAAATTATVTGCC (SEQ ID NO AGCGGGACCGTATAGGTACCKTGGGGACTGCAT (SEQ ID HO CGCCAAGTAGGGCTTGAAGTTCAGGTAGCGCCC (SEQ ID NO AGGTAGGAGTTCCTTTC.GAGACCCACTGAATCT (SEQ ID H〇 AGGCACAGTAGAGACTGTGAAGGGGCTGGCGTA (SEQ ID NO / f / f Mi o \/ \I/ )- \—/ ) ) ) 1- \/ -) ) \/ ) \/ \/ ) ) ) \/ ) ) ^ ) ) -^^ ____ ))) 6)7)8)9)lOll121314151617la192021222324252627?s29303132n)4351617181901 //#*//////·/#· / / ^ 及 -f I 裝.-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 線 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨〇X297公釐） 5 - 293844 A8 B8 C8 D8 經濟部中央揉準局貝工消费合作社印製 六、申請專利範圍 6. 如申請專利範圍第5項之合成的寡核替酸，其中 該第二片段包含 - AGGCATAGGACCCGTGTCTT ( SEQ I D NO · 5 4 )。 7. —組合成的寡核苷酸，可充作HTLV-iL三明 治式雜交分析中之捕獲探針，其包含至少二種寡核替酸探 針，其中每—寡核苷酸探針係由下列片段所組成： —種第一片段’其核苷酸序列至少9 〇%同質於 HTLV-1核酸片段；及 —種第二片段’其包含與結合至固相之寡核苷酸至少 9 0%同質之核替酸序列，其中該第二片段不互補於 Η T L V — 1 核酸， 其中該與HTLV— 1核酸片段至少9 〇%同質之每 —該核苷酸序列係選自： TCTGGTTCTGGGATAGTGGGCTTTAGGCGGGGG (SEQ ID N0：42), GGGAGRTCTAATAGGAGGGCATCYTCCTCTGGC (SEQ ID NO:43), ^ CCTATGRAGTTTTTTGGGTGTGGRATGTCRGCG (SEQ ID NO：44), CTGTAATGTGGGGGGGGAGGTTAAACCTCCCCC (SEQ ID NO :45), • ^ AATAGATGYTGGGTCTTGGTTARGAAJ^GACTTG (SEQ ID Ν〇：Λ6); CCGACGGGCGGGATCTAACGGTATAACTGGCAG (SEQ ID NO：47), VTATTTGGTCTCGGGGATCAGTATGCCTTTGTA (SEQ ID NO:4B), 2CACTAATGATTGAACTTGAGAAGGATTTAAAT (SEQ ID NO:49), TGCGGCAGTTCTGTGACAGGGCCTGCCGCAGCT (SEQ ID NO：5〇), CCCCTAGGAGGGGCAGGGTTTGGACTAGTCTAC (SEQ ID NO：51), CAGTRGTGGTGCCAGTGAGGGTCAGCATAATAG (SEQ ID ”0:52)」^ CAAGTGGCCACTGCTSCTTGGACTGGAACACYA (SEQ ID NO：53). 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） K f—裝------訂 I---.--f 線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ' 6 - 293844 is8 _ D8 六、申請專利範圍 8.如申請專利範圍第7項之合成的寡核苷酸，其中 該第二片段包含 &'、 CTTCTTTGGAGAAAGTGGTG ( SEQ I D N0 . 5 5 )。 11\ —J 9 _ 一種於樣品中偵測HT L V— 1存在之溶液相三 明治式雜交分析法，此方法包含 (a )在雜交條件下，將樣品與下列接觸：（i )擴 大探針，包含如申請專利範圍第5項之合成的寡核苷酸， 及（ii)捕獲探針，含有如申請專利範圍第7項之一組合 成的寡核苷酸，其中擴大探針與捕獲探針對樣品中之欲分 析物核酸爲莫耳過量的； (b )在雜交條件下*將（a )步驟產物與結合至固 相上之該寡核苷酸接觸； (c)之後分離出未結合至固相之物質； 經濟部中央標準局貞工消费合作社印装 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (d )在雜交條件下，將（c )步驟之結合產物與一 核酸多體接觸，該多體包含與擴大探針多核苷酸第二片段 至少9 0%同質的至少一種寡核苷酸片段，及與經標記寡 核苷酸至少9 0 %同質之許多的第二寡核苷酸單位； (e )移去未結合之多體； (f )在雜交條件下，將（e )步驟之固相複合物產 物與經標記之寡核替酸接觸； (g)移去未結合之經標記的寡核砮酸； 及 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） n 293844 A8 B8 C8 D8 七、申請專利範圍 (h)於（g)步驟之固相複合物產物中偵測標記物 之存在。 i 0 .—種可用於樣品中偵測HTLV — 1之套組， 其係包含如下所不之組合： (i ) 一組擴大探針寡核苷酸，包含如申請專利範圍 第5項之一組合成的寡核替酸； (ii) 一組捕獲探針寡核苷酸，包含如申請專利範圍 第7項之一組合成的寡核苷酸； (iii) 一種核酸多體，該多體包含與擴大探針多核替 酸至少9 0 %同質之至少一種寡核苷酸片段，及與經標記 之寡核替酸至少9 0 %同質之許多的第二寡核苷酸片段； 及 (iv) —種經標記之寡核苷酸。 I I n I i I n X I m n n m In n T J 、\5 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央橾準局貝工消費合作社印裝 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -8 ~