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附件 2 :第 801056472091^1 筇專利申請案中文説明書碜正頁 .、年3月丨 Ί 民固82年3月修正 --―挪見· 五、發明説明;ί ) 太發明夕簸蟠 本發明傺1 990年7月24日公布之專利申請糸列 07/557， 289號之追加案。 本發明僳關於具有作為抗凝固劑及抗血小板劑之酱藥 用途之肽類同物。 太發明：> 背景 經濟部中夹標準扃8工消費合作社印製 抗凝固劑及有用之治療劑以藥學性地治療（例如）急 性深部靜脈上栓、肺栓塞、四肢之急性動脈栓塞、心肌梗 塞及散布性血管内凝固。吾人相信，預防性地施用抗凝固 劑乃可預防風濕性或動脈硬化性心臓病病患之栓塞之再發 生且可避免手術之一些血栓栓塞併發症。抗凝固劑之施用 亦顯示可治療冠狀動脈及心臓血管疾病。動脈血栓（尤其 足供應心肌及腦之動脈内）為致死之原因。 抗血小板劑為有用之治療劑以藥學性地治療彼些與血 小板有關之血栓栓塞病（彼之起源為原發動脈性）。例如 ,抗血小板劑可用以預防再發之心肌梗塞及中風。 水蛭素為由水蛭唾腺所分離出之6 5個餘留體多肽。 彼乃抗凝固劑，即凝血酵素之特定抑制劑。雖然相當有效 ,但臨床使用由水姪萃取液所分離出之水蛭素似乎不可能 ，此乃因其量有限、昂貴，且施用此大小之任何外來物質 常導致過致過敏反應。 本申請專利者先前發現水蛭素有一特定區域（至少一 部分）具有抗凝固效力。此區域業已經過化學合成，且有 ^ I . (請先聞讀背面之注意事項再^^本頁) i裝. 訂. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 V 907 \ -3 - 經濟部屮央標準局貝工消費合作社印製 209171 A6 _B_6 五、發明説明2[) 某些其類似物顯現可結合至凝血酵素之認知位上而非空間 分離之酵素裂斷位上。此合成肽之結合作用可競爭性地避 免纖維蛋白原結合至凝血酵素之認知位上，此乃裂造纖維 蛋白及形成血塊之必要條件。 某些文獻已述及寡狀Ar g — G 1 y — As p及相閬 肽抑制血小板依賴性血栓形成之能力。Y. Cadroy, et al • » J. Clin. Invest. 8 4 · 939 — 944(1989 )。本申請專利者業己發現一些將抗血小板Ar g_G 1 y — As p片段及先前已知之水蛭素C 一端Η段抗凝血酵 素類似物合併成具有此兩種作用之單一實體之方法。 本發明之酪要説明 · 下式之肽衍生物 ' 其中X 為由氫，一或兩個具1至6個碩原子之烷基團， 一或兩値具2至1◦値碩原子之醯基團、苄酯基 、H2NC (NH) — 、或特丁氧羰基團中所特 定之胺基終端餘留體； A, 為一個鍵或為含有1至11個任何胺基酸餘留體 之肽； A 2 為下式之一種基團 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂 線. -4 - 209171

66 AB 五、發明説明3()

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g R B 經濟部屮央標準局員工消费合作社印製 為 5 或 o 1 或.，至 2 = ί } ο 鍵園 lHicR 2 II 個基或Nc - ( Η ( 一 ΙΟΙ I ρ Ν cc 為}為為為 I I I 1

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2 H c R /»v N 2 H c 2 H c H c II H c s- 2 H c 2 〇 S 2 Η c o- 2 H c o s 2 H c c 或 Η 為 R 中 其 或 基 烷 太姑·後；e泞惝出Φ因@3 ^:找讲（CN5)银格00x297公分） -5 - 209171 Λ 6 Β6 經濟部屮央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（4) P 為鄰位一、間位一、或對位一苯撑或為1、 2— 、：L、3 —、或 1、4 —環己二基； A a 為 Phe、SubPhe、点 _ (2_ 及 3 — 1¾ 嚕基）丙胺酸、/3 — （ 2 —及3 —呋喃基）丙胺 酸、点一 （2 —、3 —及4 一吡啶基）丙胺酸、 冷一(苯並《噍基一2 —及3 —基）丙按酸、/3 一（1 一及2 -棻基）丙胺酸、Tyr或Trp « A·* 為 Glu、Asp、Ser (OSOaH)、 S e r ( Ο P 0 3 H ) 、hSer ( 0 S Ο 3 H )、磺基丙胺酸或高磺基丙胺酸； A 5為任何胺基酸； As 為 I le、Val、Leu、Nl’e、或 P h e ; A7 為 Pro、Hyp、3, 4 —脱氫基 Pro、睡 睡院一 4 一袋酸酯、Sar、NMePg 1或 D - A 1 a ； A s為任何胺基酸； A s為任何胺基酸； A/。為由 Tyr、Trp、Phe、Leu、Nle 、I le、Val、Cha及Pro中所擇定之 親脂性胺基酸或為含有這些親脂性胺基酸中之至 少一者之二肽； A〃為一個鍵或為含有一至五個任何胺基酸餘留體之 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 太R 泞 iA ffl + K ra ΐ：捣m ί CNS) Ψ 4m格〖210 X 297公 Ji·) -6 - 209171 A6 ___B_6 五、發明説明（5) 肽片段；且 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Y 為由〇H、C:_Ce烷氣基、胺基、經——或 二一 （Ci —C4)烷基取代之胺基，或苄肢基 中所擇定之羧基端餘留體； 及其製藥上可接受性塩類為有效之抗凝固劑。 太發明；> 詳細説明 本專利說明書中乃採用下列慣用之胺基酸簡寫： G 1 y —甘胺酸 A 1 a —丙胺酸 V a 1 —纈胺酸 L e u —白胺酸 I 1 e —異白胺酸 ' 經濟部中央標準局貝工消t合作社印製 C h a —環己基丙胺酸 〇 r η _鳥胺酸 P r 〇 —脯胺酸 Phe-苯基丙胺酸 T r p —色胺酸 M e t —蛋胺酸 S e r —絲胺酸 T h r —蘇胺酸 C y s —半胱胺酸 T y r —酪胺酸 As η —門冬醯胺 /ίίΛ 丨格（210x297公货） ~ 7 - 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 2〇9饥 Λ 6 _B6_ 五、發明説明（J ， 〇 G 1 η —谷醒胺 Asp —門冬醯酸 G 1 u —谷胺酸 L y s _賴胺酸 Η 1 y —高賴胺酸 A r g —精胺酸 Har —高精胺酸 H i s _組胺酸 N 1 e _己胺酸 Hyp —翔基脯胺酸 G 1 t -戊二醯基 M a 1 -馬來醯基 Npa —泠一 （2 —棻基）丙胺酸 ' 3 , 4 — dehydroPro — 3 , 4 —脱氫基脯胺酸 T y r ( S Ο 3 Η ) —酪胺酸硫酸酯 Pg 1 —苯基甘胺酸 NMePg1—N—甲基一苯基甘胺酸 S a I* —肌胺酸（N —甲基甘胺酸） P S ub Ph e —對位之經取代苯基丙胺酸 SubPhe—鄰位、間位、或對位、——或二一經 取代之苯基丙胺酸 DA 1 a_D —丙胺酸 A c —乙醒基 S u c —琥拍醯基 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂· 線- 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公釐） -8 - 2091^1 Λ 6 Β6 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（7) PC 1 Phe —對位一氣基一苯基丙胺酸 P N〇2P h e —對位一硝基一苯基丙胺酸 Tyr (Me) — —甲基一 4 -酪胺酸 5GP — 5 —胍基戊基 5 A P — 5 —胺基戊基 烷基國及烷氣基圃中之烷基部份乃包括直鍵、支鏈、 或環狀烷基圃，例如，甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基 、異丁基、特丁基、戊基、異戊基、另戊基、琛戊基、己 基、異己基、環己基及慢戊基甲基。具2至10個碩原子 之醛基團乃包括直鍵、支鍵、環狀飽和及未飽和之每基團 中具1或2個羰基部分之醯基圃，例如乙醛基、苯醛基、 琥珀醯基、馬來醯基及戊二醯基。鹵基圃為龙基、氣基、 溴基或碘基圃。 本文所謂^任何胺基酸〃乃包括天然之胺基酸以及肽 化學技蓊中製備天然肽之合成類似物時所慣用之其它> 非 蛋白質胺基酸、天然胺基酸為甘胺酸、丙胺酸、缀 胺酸、白胺酸、異白胺酸、絲胺酸、蛋胺酸、蘇胺酸、苯 基丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、半胱胺酸、脯胺酸、組胺酸 、門冬胺酸、門冬醯胺、谷胺酸、谷醛胺、精胺酸、鳥胺 酸及賴胺酸。a非蛋白質〃 α —胺基酸之實例為己胺酸、 戊胺酸、別異白胺酸、高精胺酸睡脯胺酸、脱氫基脯胺酸 、羥基脯胺酸（Hyp)、高絲胺酸、 S e r ( Ο S 0 3H ) ^ hSer (OSO^H)、儀基 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公货） 209m A 6 B6 五、發明説明（8) 丙胺酸、高磺基丙 胺基一正丁酸（A 基苯基丁酸（P h 位上彼一或兩個（ 氣基、鹵素、或硝 基丙胺酸、/3 — 2 呋喃基丙胺酸、/3 胺酸、環己基甘胺酸（C h g )、α — ba)、環己基丙胺酸（Cha)、胺 a)、在苯基部分之鄰位、間位、或對

C C·# )院基、（C·! 一 C·* )院 /3 — （苯並睡噍基 及2 —棻基）丙胺 基化衍生物、S — 酷、3， 5 -二碘 基圃取代、或被甲撑二氧基園取代之苯 一及3 —睡嗯基丙胺酸、々一 2及3 — —2-、3_、及4 一吡啶基丙胺酸、 —2—及3 —基）丙胺酸、/3— （1一 酸、絲胺酸、蘇胺酸或酪胺酸之0 —烷 烷基化之半胱胺酸、酪胺酸之0-硫酸 基酪胺酸及天然胺基酸之D—異構鼸， 所諝a任何胺基酸〃亦包括下式之彼些天然及非蛋白質2 _胺基酸，

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Η I N O IIc

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H (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 及 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (CH2)PI co2r (CH2)qI nh2 (CH2), 2 3 C = NI nh2 4 其中，P、 q及r乃個自為1至5之整數，且其中R為氫 或（Ci— C4)烷基團。 所諝★親脂性胺基酸〃包括Tyr、 Phe、 Leu 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS)甲4規格(210x297公發） -10 - 209171 A 6 B6 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（9) 、Nle、I le、Val、His 及 Pro。 除了甘胺酸以外之天然胺基酸乃含有一痼對掌型磺原 子，除非另有說明，否則本文之旋光性胺基酸乃具有L— 構型，包括式2、 3及4所示之彼些胺基酸。例如，A: 或Au基園中之任何胺基酸可具有D—或L一構型。依慣 例，本文所書寫之肽結構為胺基終端位在鍵之左侧而羧基 終端位在鍵之右側者。亦依慣例，當使用三字母之密碼代 表胺基酸時，則以大寫字母開始之三字母密碼代表L一構 型，以小寫宇母開始之三字母密碼代表D—構型。 式1之多肽可使用任何非毒性、有機或無.機酸以形成 製藥上可接受性堉類。可形成適當垴之無機酸包括氫氱酸 、氩溴酸、硫酸及磷酸及酸式金屬塩諸如磷酸一氫納及硫 酸氪鉀。可形成適當塩之有機酸實例包括一'元、二元及三 元羧酸。此酸之實例為（例如）乙酸、乙醇酸、乳酸、丙 酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、蘋果酸、酒石 酸、檸檬酸、抗壊血酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯甲酸、 羥基苯甲酸、苯基乙酸、肉桂酸、水楊酸、2 —苯氣基苯 甲酸及磺酸諸如甲烷磺酸及2—羥基乙烷磺酸。羧基終端 胺基酸部分中之塩類則包括使用適當無機或有機齡所形成 之無毒性羧酸塩。這些塩之實例包括鹼金屬例如鈉及鉀； 齡土金臑諸如鈣及鎂；IA族之輕金屬諸如鋁；及有機一 级、二级及三级胺例如三烷胺諸如三乙胺、普魯卡團、二 苄胺、1—乙烯胺、N，N*· —二苄基乙撑二胺、二氫基 松香胺、N-(低级）烷基哌啶、及任何其它之適當胺。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂_ 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公煃） -11 209m Λ 6 _B6_ 五、發明説明（id 在化學化合物之任何定屬基園中，以某些基園較為理 想。本申請專利者喜好之式I肽衍生物為其中之 X為氫、乙醛基或琥珀醛基者。 亦理想之式1化合物為其中之 A !為Thr-Pro-Lys-Pro-Gln-Ser-His-Asn-Asp-Gly-Asp, _Ser-Thr-Pro_Asn_Pr〇-Glu_Ser-His-Asn-Asn-Gly_Asp_, -H i s-Asn-Asp-Gly-Asp-， -Asn-Asp-Gly-Asp-* (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 -Asp—G1y一Asp-， — G1 y- As P 一 9 — As P 一 9 或為 個 鍵 A 2 乃如上所述 且 其 中 R 為 一 N ( H ) C ( = N H ) N Η 2 9 Z 為 — N Η — 或 一 個 鍵 B 為 一 C ( = 0 ) 一 N ( H ) — f A 3 最 好為 P h e β — 2 — 或 3 一 PS 丙胺酸 T y r T r P N P a P C 1 P h e或 T y r ( M e ) g 9 2 至 4 之 整 數 t A 4 ,G 1 u 9 A 5 ，G 1 u A s P P r ο 或 A 1 a f A 6 ,I 1 e 、 L e u 5 A 7 ,P r o S a r > D — A 1 a 、 H y P 或 -12 - 本紙張尺度边用中國a家標準(CNS)曱4規格（210x297公煃) Λ 6 B 6 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（Η N M e P g 1 i A 8 $ G 1 u G 1 n A s P 或 A 1 a ； A 9 , G 1 u A s P 或 A 1 a 9 A i 〇 9 P r o A 1 a — T y r A 1 a _ c h a、 T y r 一 C h a > T y r 一 L e u、 A 1 a P h e N T y r — T y r ) A 11， G 1 u N s 1 u A s n 、 A s p — G 1 u、 P r o G 1 n N A 1 a \ 一 個 鍵、 D — L y s L y s Λ a s P 或 Or n t 且 Y 9 〇 H 或 N H 2 者 0 本申請專利者亦喜好彼些化合物，其中 X 為 氫 9 A l 為 一 個 鍵 A 2 為具有 第 二 種 代 表 性 結 構且 Z 為 -* 個 鍵 ,q 為 〇 9 且 R 一 及 P 乃如 上 所述 s A 3 最 好為 P h e 、 β — 2 一 或 3 一 睡嗯 基 丙胺 酸 τ y r 、 T Γ P 、 N P a P c 1 P h e 或 T y r ( M e ) 9 q y 2 至 4 之 整 數 i A 4 ,G 1 u 9 A 5 ，G 1 u A s P N P r ο 或 A 1 a 9 A 6 ，I 1 e L e u 9 A 7 ，P Γ o N S a Γ D — A 1 a \ H y P 或 (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) 本紙張尺度边用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公澄） -13 - 66 ΛΒ 2091^1 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五 、發明説明 (ιέ N M e P s 1 f A 8 , G 1 u 、 G 1 n 、 A s P 或 A 1 a • A 9 t G 1 u 、 A S P 或 A 1 a A 10, P Γ o 、 A 1 a — T y r A 1 a — c h a T y r 一 C h a 、 T y r — L e u N A 1 a 一 P h e 、 T y r — T y r A 1 1 $ G 1 u g 1 u 、 A s n > A s P — G 1 u P Γ o G 1 n 、 A 1 a N 一 個 鍵 D 一 L y s \ L y S a s P 或 0 Γ n • f 且 Y 0 H 或 N H 2 者 0 特別理 想 者為式 1 之肽衍生物其 中 X 為琥珀 醛 基 或 氫 且 A i 為G 1 y — A s P 或 A s P 或 者 X 為'號珀 基 且 A 1 為 一 個 鍵且其 中 z 1 為 — N H — 或 一 個 鍵 R 為 H 2N c (=N Η ) N H - — q i 3 B 一 C ( = 〇 ) N Η — A 3 f P h e T y Γ 、 T y r ( M e ) 或 τ r P t A 4 9 G 1 u A 5 $ G 1 u 或 P Γ ο * A 6 9 I 1 e A 7 | P Γ o A 8 f G 1 u 裝- .可， 線- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公釐) 14 - 2091^1 Λ 6 Β 6 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 五、發明説明（d A 9 , G 1 U 或 A S P ; A 10, T y Γ — L e U T y Γ 、 A 1 a — P Γ 〇 A 1 1 » G 1 η A S Ρ f D 一 A S P D — — G 1 U 9 且 Y 〇 Η 或 N H 2 者 〇 本 申韻 i專 利者尤其 喜 好式 X 為 氫 A 1 為 一 個 鍵 • A 2 為 第 二 種 之 代 表 性 t Ρ 為 對 位苯撑 或 為 — N Η 2 或 一 N A 3 * 為 Ρ h e 或 T Γ P A 4 為 G 1 u 或 P Γ 〇 A 5 為 G 1 u 或 P Γ 〇 A 6 為 I 1 e A 7 為 Ρ Γ o A 8 為 G 1 u A 9 為 G 1 u 或 A S P A 10 為 A 1 a 或 C h a

Ala — Tyr、T y r — Phe、Ala—Cha 或 P r o ; —個鍵； Lys、 glu 或一Asp 1之肽衍生物，其中 結構且Z為一'個鍵，q為Ο 1，4_環己二基，且R (H) C ( = Ν Η ) N Η 2 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 裝· .IT, 線. 本紙張尺度边用中國國家標準（CNS)曱4規格（210x297公茇) -15 - £09171 A 6 B6 五、發明説明（ Αιι 為 glu;且 Y 為OH或ΝΗ2者。 本發明之蛋白質可藉由技蕤中已知之各種不同步驟製 得。此些步驟包括固相序列及嵌段合成法，基團植株法及 這些技術之結合法。固相序列步驟可使用已確立之自動化 方法諸如藉使用自動化肽合成機來進行。此步驟中，C(— 胺基經保護之胺基酸乃結合至樹脂載體上。所用之樹脂載 體可為供多肽之固相製備之技蕕中所惯用之任何適當樹脂 ,最好為已與約0. 5至3百分比百乙烯基苯交聯之聚苯 乙烯，彼業已經過色層分離或羥甲基化以提供位置以供與 初始置入之cc 一胺基經保護之胺基酸共同形成酯。 經甲基樹脂之實例乃述於Bodanszky，et a 1 . , Che~ m. I nd . (London) 3 8 , 1597 — 98 (1966)中 ，已色層分離化之樹脂則由加州Richmond之Bio Rad實驗 室出售，而此樹脂之製法乃述於SteWart et al.，、、Sd-id Phase Peptide Synthesis 〃 Freeman & Co. ，舊金山 經濟部中央標準局员工消費合作社印驳 1 969)第1章，第1 一 6頁中。經保護之胺基酸可藉 G i s i η，He 1 ν. Chem Acta， 5 6 , 1 4 7 6 (1 9 7 3 )之步驟結合至樹脂上。許多已結合至樹脂上之經保護胺 基酸僳市售。例如，欲製備羧基終端為Thr餘留體之本 發明多肽，則可使用結合至笮基化、羥甲基化之苯基乙醯 胺基甲基（PAM)樹脂上之經特丁氣羰基（Bo c)保 護之Thr,且其條為市售。 -16 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度边用中國國家標準（CNS)曱4規格(210x297公釐) 209171 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（ 將C(一胺基經保護之胺基酸偶合至樹脂載饈上後，再 使用任何適當之步驟諸如藉使用三氟乙酸之二氮甲烷液， 單獨使用三氟乙酸，或使用HC5之二噁烷液以移去保護 基團，去保護作用係於Ot：至室溫間進行。供移除特定α —胺基保護基團之其它標準裂斷試劑及狀況可予使用。移 去α-胺基保護基圄後，將其它胺基經保護之胺基酸依期 望之次序逐步地偶合，此外，以樹脂支撑性胺基酸序列偶 合之前，多重胺基酸基團可藉由溶液方法偶合。 與直入多肽序列中之每一胺基酸共同使用之ct 一胺基 保護基圄可為技蓊中已知之任何保護基圃。所期望之α— 胺基保護基團為（1)醯基型保護基園諸如：甲醯基、三 氟乙醯基、酞醯基、甲苯磺醯基、苯磺醯基、硝基苯亞磺 醛基、三苯甲基亞磺醛基、鄰位硝基苯氣基'乙醛基及c(-氯基丁醯基；（2)芳族尿烷型保護基圄諸如苄氣羰基等 及經取代之苄氧羰基，諸如對位一氯基笮氧羰基、對位一 硝基苄基一羰基、對位一溴基苄氣羰基、對位一甲氣基苄 氣羰基、1一 （對位一聯苯基）—1—甲基乙氣羰基、α ,α—二甲基一3， 5—二甲氣基苄氧羰基及二苯甲氧羰 基等；（3)脂族尿烷保護基圍諸如特丁氣羰基（Bo c )、二異丙基甲氣羰基、異丙氧羰基、乙氧羰基及烯丙氧 羰基等；（4)環烷基尿烷型保護基團諸如環戊氣羰基、 金剛氣羰基及環己氣羰基；（5)硫化尿烷型保護基園諸 如苯硫羰基等；（6 )烷基型保護基團諸如三苯甲基及苄 基等；及（7)三烷基硅烷基圍諸如三甲基硅烷等，理想 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂- 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公茇） -17 - 209171 Λ 6 Β6 五、發明説明（ 之（X —胺基保護基團為特丁氧玻基。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 適當偶合劑之選擇乃在熟知技蕕内。將待加入之胺基 酸為Gln、Asn或Arg時之特別適當偶合劑為N, N / -二異丙基碩化二亞胺及1 一羥基苯並三唑。使用這 些試劑可避免睛及内醯胺之形成。其它偶合劑為（1)碩 化二亞胺（例如，N, -二環己基硪化二亞胺及N — 乙基一NZ— （Y—二甲胺基丙基碩化二亞胺）；（2) 胺基氰（例如N,N< —二苄基胺基氰）；（3)烯酮亞 胺；（4)異噁唑塩（例如N-乙基一 5 —苯基一異噁唑 —3 ~ —磺酸酯；（5)含有單環氮且於環中.含有一至四 個氮原子之芳族雜環醛胺諸如眯唑烷、吡唑烷、及1, 2 ,4一三唑烷。特別有用之雜環醯胺包括N,N—羰基二 昧唑及N, N—羰基-二-1, 2，4-三虺；（6 )烷 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 氧基化之乙炔（例如乙氧基乙炔）；（7)與胺基酸之羧 基部分共同形成混合酐之試劑（例如乙基氯基甲酸酯及異 丁基氣基甲酸酯）或待偶合胺基酸之對稱酐（例如Bo c 一 A1 a - 0 — A1 a — Boc)及（8)在一環氣上具 有一羥基画之含氮之雜環化合物（例如N —羥基酞醛亞胺 、N -羥基琥珀醯亞胺及1 一羥基苯並三唑）。其它活化 劑及彼等於肽偶合作用中之用途乃述於Kapoor，J. Phar-m. Sci ., 5 9, pp. 1— 27 (1970)。本專利 申請者喜好使用對稱酐作為偶合劑以供所有胺基酸用，惟 Arg、 Asn及Gin除外。 每一種經保護之胺基酸或胺基酸序列乃以約四倍之過 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS)甲4規格（210X297公¢) -18 - 209171 Λ 6 Β 6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（^ 量置入固相反應器中，且偶合作用僳於二甲替甲醛胺：二 氣甲烷（1 : 1)或單獨於二甲替甲醯胺或最好單獨於二 氣甲烷之介質中進行。當偶合作用不完全時，則於令下一 値胺基酸於固相反應器中進行偶合之前，並於移去《—胺 基保護基團之前，再重覆偶合之步驟。在一合成階段之偶 合反應成功與否乃藉E.Kaiseretal.，Analyt.Bioch-ern. 34, 595 (1970)所述之芘滿三酮反應加以 監視。 當獲得待期望之胺基酸序列後，將肽由樹脂中移出。 其像藉水解作用，諸如藉將結合至樹脂上之多肽以二甲基 硫、對位一甲酚及硫化甲酚之稀水性氫氟酸溶液處理而達 成。 如同固相肽合成技藝中已知，有許多胺'基酸在鋪之製 備期間乃帶有需要保護之官能基團。適當保護基團之使用 及選擇乃在熟知技藝者之能力範圍内。且僳依待保護之胺 基酸及依肽上之其它經保護之胺基酸餘留體之存在而定。 此側鍵保護基團之選擇必需苛定，其必需為在α-胺基部 分之保護基圄之裂解期間不會被裂解作用所移去者。例如 ,供賴胺酸所用之適當側鏈保護基團為苄氧羰基及經取代 之苄氧璩基，上述取代基俗由鹵基（例如氣基、溴基、氟 基）及硝基（例如2 —氯基苄氯羰基、對位一硝基苄氧基 一羰基、3,4—二氣基苄氧羰基）、甲苯磺醯基、特戊 氣羰基、特丁氧羰基及二異丙基甲氣羰基中所擇定。蘇胺 酸及絲胺酸之醇性羥基團可被乙醛基、苯醯基、特丁基、 (請先閲讀背面之注意事項再磺寫本頁) 本紙張尺度边用中國國家標準<CNS)甲4規格（210x297公茇） -19 - A 6 B6 2091^1

五、發明説明（J 三苯甲基、苄基、2, 6 —二氣苄基或笮氣羰基園。理想 之保護基圃為苄基。 這些基園可藉技菘中詳知之步驟移去。保護基鼷通常 係於肽鍵完金合成後移去，但亦可於任何其它之適當時間 移去。 本發明肽類似物之抗血小板劑量乃依病患，待治療血 栓狀況之駸重性及所擇定之肽類似物而在◦. 2mg/ kg至250mg/kg病患體重/天之間。供特定病患 所用之適當剤量可輕易決定。最好每日施用1至4次劑量 ，而每份劑量通常為5mg至lOOmg有效化合物。 抗血小板之治療乃可預防心肌梗塞及中風以及其它與 血小板集結有關之病況之再發。實地經驗者可輕易地注意 到需要抗凝固及抗血小板療法之狀況。本文雨諝a病患# 乃意指哺乳類包括人類、羊、馬、牛、豬、狗、貓、鼠及 篇鼠。 雖然某些肽衍生物經口服後可通過腸而存在，但本申 請專利者偏好非口部施用，例如，可藉儲存注射剤；藉移 植製劑而由皮下、靜脈内或腹膜内施用；或以含有噴霧或 乾粉末形式之本發明肽衍生物之氣溶膠罐施至（諸如）鼻 、喉嚨及支氣管之黏膜上。 供非經腸部施用方面，化合物可以可注射劑量之溶於 或懸浮於生理上可接受性稀釋劑中且含有製藥載體之溶液 或懸浮液形式施用，此製藥載體可為無菌液體諸如水及油 等且乃加入或未加入表面活化劑及其它製藥上可接受性輔 本紙張尺度逍用中圉國家標準（CNS)甲4規格（2丨0x297公货) (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局負工消費合作社印製

經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 209m A 6 ___B6_ 五、發明説明（ 劑。可用於這些製劑中之油類實例為石油、動物油、植物 油、或合成原油，例如花生油、大豆油及礦油等。通常以 水、塩水、水性右旋糖及相關糖溶液、乙醇及二醇諸如丙 二醇及聚乙二醇等為理想之液態載髏，尤其是供可注射性 溶液所用。 化合物可以儲存注射剤或移植製劑之形式而以能令有 效成分缓釋之方式施用。有效成分可壓縮成丸劑或小圓筒 且以儲存注射劑或移植劑之形式由皮下或肌内移植。移植 劑可採用惰性物質諸如生物體可降解性聚合物或合成硅酮 ，例如桂橡朦，亦即由Dow-Corning公司製造.之桂酮橡膠 Ο 奮例 ' 本發明乃藉由下列之非限制性實例加以說明。 奮例1 5GP — Gly — Asp — Τγρ — Glu — Pro —I 1 e — Pro— G I u— G 1 u — A1 a — Cha — g 1 u — OH之製備 此肽係使用0.1毫莫耳0. 66莫耳/g Boc _ (BZ 1) D_-G 1 u_樹脂經由固相方法予以合成、 雙重對稱酐之偶合作用則使用2. 0毫莫耳Nct — Boc 一胺基酸（Peptides International)進行。所用之側鍵 保護作用為：Asp (Chx)、 Trp (CHO)、 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂- 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS)甲4規格(210x297公潑) -21 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 209171 A 6 ___JB6_ 五、發明説明（ G 1 u (Bz 1)。待合成完全後，使用50%三氣乙酸 之二氣甲烷液以移去Να—Boc保護基園。將樹脂以二 氯甲烷清洗三次，以三次10%二異丙基乙胺之二氦甲烷 清洗液中和，以二氣甲烷清洗三次，繼而於真空中乾燥， 而後將肽予以去保護，再於0Ό下使用含2%茴香醚之 HF以由樹脂中裂解。趙而於OC下，於真空中移去H F ，再使用乙醚以令肽沈澱，而後使用30%水性乙酸以由 樹脂中萃取，並予低壓凍乾。 將一半之此粗製5 — ΑΡ類似物於51C下以0 —甲基 異脲處理，以得粗製之5—GP類似物。 將此肽藉於 92X2. 6cm Sephadex G — 1 5 柱 上，於5%水性乙酸中脱塩而予以純化。製備性HPLC 則於 V 2 8 Vydac 218TP1010 (2'5 0X10 mm)柱上進行，並使用24%乙睛之0.1%水性三氟 乙酸以5mi/分鐘之速洗提。而後收集主要之尖峰並予 低壓凍乾。均質性乃藉HPLC及TLC予以测定。 奮例2 5AP — G1 y — Asp — Τγρ — GI u — G1 u 一 I le — Pro — Glu — Glu — Ala ~~ C h a ~~ g 1 u - Q H 奮例3 Arg— Gly — Asp — Trp— Glu — Pro (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公龙) -22 -

209ΓΜ A 6 _B6_ 五、發明説明（ 一 I 1 e — G 1 u — G 1 u — A1 a — C h a — g 1 u — OH 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 奮例4 5AP-Gly-Asp-Try ( Q C H 3 )- Glu~Pro~I 1 e~Pro~Gl u~Gl u~ A1 a — Cha — g 1 u~OH 審例5 Sue — Tvr— G I u — Pro— I le — Pro ~Ar g— G 1 y~As p — Phe — « 1 u ~ Ο H 奮例6 ' 5GP-Gly-Asp-Tyr ( 0 C H 3 )- G1 r~Pr〇— I 1 e~Pr〇— G 1 u~G 1 u — A1 a — Cha — g 1 u — Ο H 奮例7 A —胺甲基苯醯基~~As p — T r p — G 1 u — Pro — I 1 e — Pro — G 1 u — G 1 u ~ A 1 a — C h a — g 1 u — 0 H 富例8 4 —胍甲基苯醒基~~As p — T r p — G 1 u — (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS)甲4規格(210x297公釐) -23 - 1 09 2

66 AB 經濟部中央標準局員工消f合作社印製 五、發明説明（ Pro— I le — Pro — Glu — Glu — Ala — C h a ~ g 1 u ~ 0 H 奮例9 4—胺甲基一As p — T r p — G 1 u — Pr ο- ΐ 1 e — Pro — G1 u ~ G 1 u ~ A 1 a ~ C h a ~ g 1 u - Ο H 奮例1 0 4 —胍甲某環己羰基一As p — Tr p — G 1 u — Pro- I 1 e — Pr o~G 1 u ~ G I u — A 1 a — Cha — « 1 u — OH 奮例1 1 4 —胺甲基環己锻基一G 1 y — As p — Phe — Glu — Pro — I 1 e~Pr o~G 1 u~G 1 u~ A1 a — Cha — « 1 u — OH 啻例1 2 4 —胍甲基環己羰基一G 1 y — As p — Phe — Glu~Pro~I 1 e~Pro~Gl u~Gl u~ A1 a — Cha — κ 1 u — OH 實例1 一 1 2之肽具有下列之性質： (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 線. 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS)甲4規格(210x297公 -24 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 2〇9i^i- Λ 6 B6 五、發明説明（y 實例 號碼 胺基酸分析 (6N B Z A r g Pro Ala G 1 y lie 1 0.64 4.06 1.07 2.01 1.01 0.96 0.96 2 0.60 4.07 1.08 1.85 1.08 0.99 0.84 3 0.66 4.08 1.02 1.97 1.02 0.99 0.96 4 0.98 4.09 1.04 1.95 1.04 0.98 0.96 5 1.02 4.09 0.97 1.97 0.97 0.98 1.01 6 0.99 1.96 1-02 1.98 1.02 0.99 0.97 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公澄） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂- 線- -25 - A 6 B6 五、發明説明（2立 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 物理特性 實例號碼 F A B - M S (Μ + Η ) 1 1 5 6 4.5 2 1 5 2 3.3. 3 1 5 8 0. 0 4 15 14. 1 5 1 3 2 2. 9 6 1 5 5 6.4 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂- 線- 本紙張尺度边用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公¢) -26 - iM 9 20 A 6 B 6 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（ 實例號碼 牛之抗凝 血酵素 I C 50 ( w Μ ) 狗之抗 血小板 I C 50 ( w Μ ) 1 1 . 6 6 2 1 . 7 2 5 0 3 2 . 8 7 4 5 . 4 2 8 0 5 15 4 2 6 5 . 9 10 7 2 . 1 8 1 . 3 9 3 . 5 10 2 . 3 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂' 線· 本紙張尺度边用中國國家標準(CNS)甲4規格(210x297公釐) -27 -

Claims (1)

1. 附件四A : 第80105647號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國82年3月修正 1 . 一種治療與血小板集結作用有關病況之藥學組成 物，其包括有效量之下式肽類似物 X-八！八2八3八4八5八6八7八3八3八2 〇A! J 其中X 為由氫、琥珀醯基或一個鍵； A 2 為一個鍵； h 2 為下式之一種基團 (請先W讀背面之注意事項再填寫本頁j .經浒部+央櫺準局貝工消"合作社印製 Z -

   本紙張尺度適用中國Η家櫺準（CNS)甲4規格（210X297公#) -1 — A7 B7 C7 D7 六、申請專利範面 其 中 Z 為 __- 個 鍵 或 為 一 Ν q 為 0 或 3 至 5 之 整 R - 為 N Η 2 或 — Ν B 為 一 C ( = 〇 ) — P 為 對 位 — 苯撑或為 A 3 為 P h e τ y A 4 為 G 1 U f A 5 為 G 1 U 或 Ρ Γ A 6 為 I 1 e A 7 為 P Γ ο A 8 為 G 1 u A 9 為 G 1 u 或 A s A 1 為 — A 1 a — C A l 1 為 8 1 u Ο 2 • 根據 串 請 專 利 範 圍 類 似 物 條 5 G P — G 1 y — P Γ o 一 I 1 e — P r ο — C h a — 8 1 U — 〇 Η ο 3 * 根 據 甲 請 專 利 範 圍 類 似物係 5 A P — G 1 y G 1 u 一 I 1 e 一 P Γ ο — C h a —— g 1 U 〇 Η 0 4.根據申請專利範圍 Η ；數； (H ) C ( = Ν Η ) Ν Η 2 ; Ν ( Η )-、 1、4 一環己二基； r、Tyr (Me)或 Trp 〇 ； P ； h a ;及 第1項之藥學組成物，其中肽 Asp-·Τγρ— G1 u — Glu — Glu— Ala — 第1項之藥學組成物，其中肽 Asp — Trp — G1 u — G1 u — G1 u— A1 a —第1項之藥學組成物，其中肽 (請先W磧背&之注意事項再填"本頁} 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)T4規格（210x297公釐） -2 - A7 • B7 -----— 六、申請專利範面 類似物像H — Ar g— G 1 y — As p — T r p — G 1 u -Pro-I l e-Pro-Gl u-Gl u-Al a-Cha - g 1 u — OH〇 5. 根據申請專利範圍第i項之藥學組成物，其中肽 類似物俗 5AP — Gly - Asp — Tyr (Me) - G1 y— Pro— I 1 e— Pro —Glu—Glu— A1 a— Cha — g 1 u — 0H〇 6. 根據申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中肽 類似物像 5GP — Gly — Asp — Tyr(Me) — G1 u — Pro— I 1 e — Pro — G 1 u — G 1 u — A1 a— Cha — g 1 u — OH。 7. 根據申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中肽 類似物像4 一胺甲基苯酸基一 As p — T r p — G 1 ii-pro— I le— Pro— Glu— Glu— Ala— Cha — g 1 u — OH〇 經濟部十央搮準局貝工消贽合作社印製 (請先閱請背面之注意事項再填寫本頁) 8. 根據申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中肽 類似物僳4 一胍甲基苯酿基一 As p_Tr p — G 1 u — Pro — I 1 e — Pro — G 1 u — G 1 u — Al a — Cha~~g 1 u — 0H〇 9. 根據申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中肽 類似物係4 —胺甲基一As p — T r p— G 1 u — P r 〇 —I le — Pro— Glu — Glu — Ala — Cha — g 1 u — 0 H 〇 1 0 .根據申_請專利範圍第1項之藥學組成物，其中 本纸張尺度適用中困Η家搮準（CNS)甲4規格(210x297公釐） -3 一 A7 ㈣ 1 C7 ________D7_ 六、申請專利範圊 肽類似物傜4 一胍甲基環己羰基一 As p — Tr p_ Glu — Pro— I le — Pro- Glu~Glu — A1 a — Cha — g 1 u — OH〇 1 1 .根據申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中 肽類似物僳4 一胺甲基環己羰基一G 1 y — As P — Phe — Glu — Pro— I le — Pro — Glu — G 1 u— A1 a — Cha — g 1 u — OH〇 12.根據申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中 肽類似物傜4 —胍甲基環己羰基一 G 1 y — As P — Phe— G 1 u — Pro— I 1 e — Pro— G1 u — G 1 u — A1 a — Cha — g 1 u — OH〇 1 3 .如下式之肽類似物 X-AiAaAaA^AiAeArAeAaAi 〇Aii 其中X 為由氫、琥珀醛基或一個鍵； A 1 為一個鍵； 經濟部屮夬標準局员工消费合作社印製 (請先聞讀背面之注老事項再填其本頁) A 2 為下式之一種基圃 Ζ

   Η 本紙張尺度適用中Η Η家樣準（CNS)甲4規格(210x297公釐） -4 - 六、申請專利範園 或

   AT B7 C7 D7 co2h 八/II 0 R, 其中Z 為一個鍵或為一NH_; q 為◦或3至5之整數； R / 為一 NH2. — N (H) C ( = NH) NH2 ； B 為-C(=0)-N(H)-、 P 為對位一苯撑或為1、 4_環己二基； A 3 為 Phe、Tyr、Tyr (Me)或 Τγρ (-先聞請背面之注意事項再填寫本页) 經濟部屮央櫺準^β工消费合作社印裝 A 4 為 G 1 u ; A 5 為 Glu 或 Pro; A 6 為 I 1 e ; A 7 為 P r o ; Δ 8 為 G 1 u ; A 9 為 Glu 或 Asp; A i 〇 為一 A1 a—Cha ·» 及 A i i 為 g 1 u ; 及其製藥上可接受性塩，俗用以製備藥學組成物，以供治 療與血小板集結作用相關之病況使用。 .打* 本纸張尺度適用中圉國家標準（CNS)甲4規格（2丨0父297公嫠） -5 -