JP3264283B2 - 血小板凝集阻害活性を有するヒルディンの類似体 - Google Patents
血小板凝集阻害活性を有するヒルディンの類似体Info
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/815—Protease inhibitors from leeches, e.g. hirudin, eglin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は血液凝固防止剤及び血小
板凝集阻害剤（抗血小板剤）として医薬用途を有するペ
プチド類似体に関する。血液凝固防止剤は、例えば急性
深静脈血栓症、肺塞栓症、四肢の急性動脈塞栓症、心筋
梗塞、及び散在性血管内凝固の薬理学的処置に有用な治
療剤である。血液凝固防止剤の予防的投与は、リュウマ
チ性又は動脈硬化性心臓病患者の塞栓再発を予防し、外
科手術のある血栓塞栓合併症を予防すると考えられる。
また、血液凝固防止剤の投与は、冠状動脈及び脳血管病
の処置にも指示されている。動脈血栓症、特に心筋と脳
に供給する動脈のそれは、一つの有力な死因となってい
る。血小板凝集阻害剤は、起源が主として動脈に由来す
る血栓栓塞病に関連した血小板の薬理学的処理に有用な
治療剤である。例えば血小板凝集阻害剤は再発心筋梗塞
及び脳卒中を予防するのに使用できる。
板凝集阻害剤（抗血小板剤）として医薬用途を有するペ
プチド類似体に関する。血液凝固防止剤は、例えば急性
深静脈血栓症、肺塞栓症、四肢の急性動脈塞栓症、心筋
梗塞、及び散在性血管内凝固の薬理学的処置に有用な治
療剤である。血液凝固防止剤の予防的投与は、リュウマ
チ性又は動脈硬化性心臓病患者の塞栓再発を予防し、外
科手術のある血栓塞栓合併症を予防すると考えられる。
また、血液凝固防止剤の投与は、冠状動脈及び脳血管病
の処置にも指示されている。動脈血栓症、特に心筋と脳
に供給する動脈のそれは、一つの有力な死因となってい
る。血小板凝集阻害剤は、起源が主として動脈に由来す
る血栓栓塞病に関連した血小板の薬理学的処理に有用な
治療剤である。例えば血小板凝集阻害剤は再発心筋梗塞
及び脳卒中を予防するのに使用できる。
【０００２】
【従来の技術】ヒルジンはヒルの唾液腺から単離された
65残基のポリペプチドである。これはトロンビンの特異
的抑制剤である血液凝固防止剤である。極めて強力であ
るが、ヒル抽出物から単離されたヒルジンの臨床使用
は、量的に限定されていて高価であり、この大きさの異
種タンパクの投与にには一般にアレルギー反応を伴うた
め見込みがないと思われる。
65残基のポリペプチドである。これはトロンビンの特異
的抑制剤である血液凝固防止剤である。極めて強力であ
るが、ヒル抽出物から単離されたヒルジンの臨床使用
は、量的に限定されていて高価であり、この大きさの異
種タンパクの投与にには一般にアレルギー反応を伴うた
め見込みがないと思われる。
【０００３】ヒルジンの特異的領域で、少なくとも部分
的にその血液凝固防止剤活性を担当している領域を先に
出願人らは発見した。この領域は、化学的に合成され、
その類似体のあるものはトロンビンの認識部位に結合す
るように見えるが、空間的に離れている酵素開裂部位に
は結合しないようである。合成ペプチド類の結合は、フ
ィブリン生産と凝塊形成への前提条件であるトロンビン
の認識部位へのフィブリノーゲンの結合を競争的に妨げ
る。
的にその血液凝固防止剤活性を担当している領域を先に
出願人らは発見した。この領域は、化学的に合成され、
その類似体のあるものはトロンビンの認識部位に結合す
るように見えるが、空間的に離れている酵素開裂部位に
は結合しないようである。合成ペプチド類の結合は、フ
ィブリン生産と凝塊形成への前提条件であるトロンビン
の認識部位へのフィブリノーゲンの結合を競争的に妨げ
る。
【０００４】幾つかの報告はオリゴペプチドArg-Gly-As
p及び関連するペプチド類が血小板に依存する血栓形成
を抑制する能力があることを記載している。Ｙ.カドロ
イ等、J. Clin. Invest. 84, 939-944 (1989)。
p及び関連するペプチド類が血小板に依存する血栓形成
を抑制する能力があることを記載している。Ｙ.カドロ
イ等、J. Clin. Invest. 84, 939-944 (1989)。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明者は、抗血栓Ar
g-Gly-Asp断片及び前に注目したヒルディンのＣ-末端断
片抗トロンビン類似体の両方を、両者の作用を有する単
一物中に組入れる幾つかの手段を発見した。
g-Gly-Asp断片及び前に注目したヒルディンのＣ-末端断
片抗トロンビン類似体の両方を、両者の作用を有する単
一物中に組入れる幾つかの手段を発見した。
【０００６】
【課題を解決する手段】式 X-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-Y 〔式中、ＸはＨ又はサクシニルであり、Ａ2はＸがサク
シニルであるときに結合であるか、又はＡ2は式
シニルであるときに結合であるか、又はＡ2は式
【化３】 ｛ここでＲ'は−ＮＨ−Ｃ(＝ＮＨ)ＮＨ2又は−ＮＨ2、
Ｚは−ＮＨ−又は結合であり、ｑは１〜５の整数であ
り、Ｂは−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ−である｝であるか、又は
Ｚは−ＮＨ−又は結合であり、ｑは１〜５の整数であ
り、Ｂは−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ−である｝であるか、又は
【化４】 ｛ここでＲ'、Ｚ、及びｑは上に定義の通りであり、Ｐ
はフェニレン又はシクロヘキサジイルであるか、又はＰ
はＲ'が−ＮＨ2で、Ｚが結合で、ｑが１で、Ａ3がTrp
で、Ａ5がProで、Ａ8がGluで、Ａ9がGluで、Ａ10が-Ala
-Cha-のとき結合でもあり得る｝のいずれかを表わ
し、；Ａ3はTyr、Tyr(Me)又はTrpであり；Ａ4はGluであ
り；Ａ5はGlu又はProであり；Ａ6はIleであり；Ａ7はPr
oであり；Ａ8はGlu又はArgであり；Ａ9はGlu又はGlyで
あり；Ａ10は-Ala-Cha-又は-Asp-Phe-であり；Ａ11はD-
Gluであり；そしてＹはOHである〕のペプチド誘導体、
及び製薬上受け入れられるその塩は有用な血液凝固防止
剤である。
はフェニレン又はシクロヘキサジイルであるか、又はＰ
はＲ'が−ＮＨ2で、Ｚが結合で、ｑが１で、Ａ3がTrp
で、Ａ5がProで、Ａ8がGluで、Ａ9がGluで、Ａ10が-Ala
-Cha-のとき結合でもあり得る｝のいずれかを表わ
し、；Ａ3はTyr、Tyr(Me)又はTrpであり；Ａ4はGluであ
り；Ａ5はGlu又はProであり；Ａ6はIleであり；Ａ7はPr
oであり；Ａ8はGlu又はArgであり；Ａ9はGlu又はGlyで
あり；Ａ10は-Ala-Cha-又は-Asp-Phe-であり；Ａ11はD-
Gluであり；そしてＹはOHである〕のペプチド誘導体、
及び製薬上受け入れられるその塩は有用な血液凝固防止
剤である。
【０００７】アミノ酸類の以下の一般的な略字が本明細
書を通じて使用されている。 Gly - グリシン Ala - アラニン Val - バリン Leu - ロイシン Ile - イソロイシン Cha - シクロヘキシルアラニン Orn - オルニチン Pro - プロリン Phe - フェニルアラニン Trp - トリプトファン Met - メチオニン Ser - セリン Thr - スレオニン Cys - システイン Tyr - チロシン Asn - アスパラギン Gln - グルタミン Asp - アスパラギン酸 Glu - グルタミン酸 Lys - リジン Hly - ホモシステイン Arg - アルギニン Har - ホモアルギニン His - ヒスチジン Nle - ノルロイシン Hyp - ヒドロキシプロリン Glt - グルタリル Mal - マレイル Npa - β-(2-ナフチル)アラニン 3,4-デヒドロPro - 3,4-デヒドロプロリン Tyr(SO3H) - チロシン硫酸塩 Pgl - フェニルグリシン NMePgl - N-メチル-フェニルグリシン Sar - サルコシン(N-メチルグリシン) pSuPhe - パラ置換フェニルアラニン SubPhe - オルト、メタ、又はパラ、モノ-又はジ-置換
フェニルアラニン D-Ala - D-アラニン Ac - アセチル Suc - サクシニル pClPhe - パラ-クロロ-フェニルアラニン pNO2Phe - パラ-ニトロ-フェニルアラニン Tyr(Me) - O'-メチル-4-チロシン 5GP - 5-グアニジノペンチル 5AP - 5-アミノペンチル
書を通じて使用されている。 Gly - グリシン Ala - アラニン Val - バリン Leu - ロイシン Ile - イソロイシン Cha - シクロヘキシルアラニン Orn - オルニチン Pro - プロリン Phe - フェニルアラニン Trp - トリプトファン Met - メチオニン Ser - セリン Thr - スレオニン Cys - システイン Tyr - チロシン Asn - アスパラギン Gln - グルタミン Asp - アスパラギン酸 Glu - グルタミン酸 Lys - リジン Hly - ホモシステイン Arg - アルギニン Har - ホモアルギニン His - ヒスチジン Nle - ノルロイシン Hyp - ヒドロキシプロリン Glt - グルタリル Mal - マレイル Npa - β-(2-ナフチル)アラニン 3,4-デヒドロPro - 3,4-デヒドロプロリン Tyr(SO3H) - チロシン硫酸塩 Pgl - フェニルグリシン NMePgl - N-メチル-フェニルグリシン Sar - サルコシン(N-メチルグリシン) pSuPhe - パラ置換フェニルアラニン SubPhe - オルト、メタ、又はパラ、モノ-又はジ-置換
フェニルアラニン D-Ala - D-アラニン Ac - アセチル Suc - サクシニル pClPhe - パラ-クロロ-フェニルアラニン pNO2Phe - パラ-ニトロ-フェニルアラニン Tyr(Me) - O'-メチル-4-チロシン 5GP - 5-グアニジノペンチル 5AP - 5-アミノペンチル
【０００８】アルキル基と、アルコキシ基のアルキル部
分は、直鎖状、分枝状、又は環式アルキル基、例えばメ
チル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソ
ブチル、第三ブチル、ペンチル、イソペンチル、第二ペ
ンチル、シクロペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、シ
クロヘキシル、及びシクロペンチルメチルを包含するも
のとして扱われる。2-10個の炭素原子のアシル基は、基
当たり1又は2個のカルボニル部分をもった直状、分枝
状、環式、飽和及び不飽和アシル基、例えばアセチル、
ベンゾイル、サクシニル、マレイル、及びグルタリルを
包含するものとして扱われる。ハロゲン基はフルオロ、
クロロ、ブロモ又はヨード基である。
分は、直鎖状、分枝状、又は環式アルキル基、例えばメ
チル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソ
ブチル、第三ブチル、ペンチル、イソペンチル、第二ペ
ンチル、シクロペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、シ
クロヘキシル、及びシクロペンチルメチルを包含するも
のとして扱われる。2-10個の炭素原子のアシル基は、基
当たり1又は2個のカルボニル部分をもった直状、分枝
状、環式、飽和及び不飽和アシル基、例えばアセチル、
ベンゾイル、サクシニル、マレイル、及びグルタリルを
包含するものとして扱われる。ハロゲン基はフルオロ、
クロロ、ブロモ又はヨード基である。
【０００９】本明細書で使用される用語「任意のアミノ
酸」は天然のアミノ酸、並びに天然のペプチド類の合成
類似体をつくる時にペプチド化学の当業者に一般的に利
用されるその他の「非タンパク」α-アミノ酸類を包含
する。天然のアミノ酸類は、グリシン、アラニン、バリ
ン、ロイシン、イソロイシン、セリン、メチオニン、ス
レオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファ
ン、システイン、プロリン、ヒスチジン、アスパラギン
酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アルギ
ニン、オルニチン、及びリシンである。「非タンパク」
α-アミノ酸類の例はノルロイシン、ノルバリン、アロ
イソロイシン、ホモアルギニン、チアプロリン、デヒド
ロプロリン、ヒドロキシプロリン(Hyp)、ホモセリン、S
er(OsO3H)、hSer(OSO3H)、システイン酸、ホモシステイ
ン酸、シクロヘキシルグリシン、α-アミノ-n-酪酸(Ab
a)、シクロヘキシルアラニン(Cha)、アミノフェニル酪
酸(Pba)、フェニル部分のオルト、メタ、又はパラ位置
が次のもの、すなわち(C1-C4)アルキル、(C1-C4)アルコ
キシ、ハロゲン、又はニトロ基の一つないし二つで置換
されたフェニルアラニン類、又はメチレンジオキシ基で
置換されたフェニルアラニン、β-2-及び3-チエニルア
ラニン、β-2-及び3-フラニルアラニン、β-2-、3-、及
び4-ピリジルアラニン、β-(ベンゾチエニル-2-及び3-
イル)アラニン、β-(1-及び2-ナフチル)アラニン、セリ
ン、スレオニン又はチロシンのO-アルキル化誘導体類、
S-アルキル化システイン、チロシンのO-硫酸エステル、
3,5-ジヨードチロシン、及び天然のアミノ酸類のD-異性
体類である。また任意のアミノ酸という用語には式
酸」は天然のアミノ酸、並びに天然のペプチド類の合成
類似体をつくる時にペプチド化学の当業者に一般的に利
用されるその他の「非タンパク」α-アミノ酸類を包含
する。天然のアミノ酸類は、グリシン、アラニン、バリ
ン、ロイシン、イソロイシン、セリン、メチオニン、ス
レオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファ
ン、システイン、プロリン、ヒスチジン、アスパラギン
酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アルギ
ニン、オルニチン、及びリシンである。「非タンパク」
α-アミノ酸類の例はノルロイシン、ノルバリン、アロ
イソロイシン、ホモアルギニン、チアプロリン、デヒド
ロプロリン、ヒドロキシプロリン(Hyp)、ホモセリン、S
er(OsO3H)、hSer(OSO3H)、システイン酸、ホモシステイ
ン酸、シクロヘキシルグリシン、α-アミノ-n-酪酸(Ab
a)、シクロヘキシルアラニン(Cha)、アミノフェニル酪
酸(Pba)、フェニル部分のオルト、メタ、又はパラ位置
が次のもの、すなわち(C1-C4)アルキル、(C1-C4)アルコ
キシ、ハロゲン、又はニトロ基の一つないし二つで置換
されたフェニルアラニン類、又はメチレンジオキシ基で
置換されたフェニルアラニン、β-2-及び3-チエニルア
ラニン、β-2-及び3-フラニルアラニン、β-2-、3-、及
び4-ピリジルアラニン、β-(ベンゾチエニル-2-及び3-
イル)アラニン、β-(1-及び2-ナフチル)アラニン、セリ
ン、スレオニン又はチロシンのO-アルキル化誘導体類、
S-アルキル化システイン、チロシンのO-硫酸エステル、
3,5-ジヨードチロシン、及び天然のアミノ酸類のD-異性
体類である。また任意のアミノ酸という用語には式
【化５】 〔式中ｐ、ｑ及びｒは各々独立に1〜5の整数であり、こ
こでＲは水素又は(Ｃ1〜Ｃ4)アルキル基である。〕の天
然の及び非蛋白質α-アミノ酸を包含することが意図さ
れる。
こでＲは水素又は(Ｃ1〜Ｃ4)アルキル基である。〕の天
然の及び非蛋白質α-アミノ酸を包含することが意図さ
れる。
【００１０】用語「親油性アミノ酸」は、Tyr、Phe、Le
u、 Nle、Ile、Val、His、及びProを包含する。グリシ
ンを例外として天然アミノ酸類はキラル炭素原子を含有
する。他に特定的に注意がなければ、本明細書で引用さ
れる光学活性アミノ酸類は、式２、３及び４に描かれる
アミノ酸を含めてL-立体配置のものである。例えば、Ａ
1ないしＡ10基のアミノ酸の任意のものはD-又はL-配置
のものでありうる。慣例により、本明細書に描かれるペ
プチド類の構造では、アミノ末端が連鎖の左側にあり、
カルボキシ末端が連鎖の右側にある。また慣例の通りア
ミノ酸に三文字コ−ドを使用するときは、大文字で始る
三文字コ−ドはL-立体配置を表し、小文字で始る三文字
コ−ドはD-立体配置を表す。
u、 Nle、Ile、Val、His、及びProを包含する。グリシ
ンを例外として天然アミノ酸類はキラル炭素原子を含有
する。他に特定的に注意がなければ、本明細書で引用さ
れる光学活性アミノ酸類は、式２、３及び４に描かれる
アミノ酸を含めてL-立体配置のものである。例えば、Ａ
1ないしＡ10基のアミノ酸の任意のものはD-又はL-配置
のものでありうる。慣例により、本明細書に描かれるペ
プチド類の構造では、アミノ末端が連鎖の左側にあり、
カルボキシ末端が連鎖の右側にある。また慣例の通りア
ミノ酸に三文字コ−ドを使用するときは、大文字で始る
三文字コ−ドはL-立体配置を表し、小文字で始る三文字
コ−ドはD-立体配置を表す。
【００１１】式１のポリペプチド類は任意の無毒性の有
機酸又は無機酸と薬学的に受け入れられる塩類を形成で
きる。適当な塩類を形成する無機酸類の例は塩酸、臭化
水素酸、硫酸及び燐酸、並びにオルト燐酸一水素ナトリ
ウムと硫酸水素カリウムのような酸金属塩類を包含す
る。適当な塩類を形成する有機酸の例はモノ、ジ、及び
トリカルボン酸類を包含する。このような酸類の例は、
例えば酢酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン
酸、コハク酸、グルタール酸、フマール酸、リンゴ酸、
酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒド
ロキシマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、フ
ェニル酢酸、桂皮酸、サリチル酸、2-フェノキシ安息香
酸、及びメタンスルホン酸と2-ヒドロキシエタンスルホ
ン酸のようなスルホン酸類である。カルボキシ末端アミ
ノ酸部分の塩類は、任意適当な無機又は有機塩基ととも
に形成される無毒性カルボン酸塩類を包含する。例示的
には、これらの塩類はアルカリ金属、例えばナトリウム
とカリウム；アルカリ土類金属、例えばカルシウムとマ
グネシウム；アルミニウムを含めた第IIIＡ族の軽金
属；及び有機第一級、第二級及び第三級アミン類、例え
ばトリエチルアミンを含めたトリアルキルアミン類、プ
ロカイン、ジベンジルアミン、1-エテナミン、N,N'-ジ
ベンジルエチレンジアミン、ジヒドロアビエチルアミ
ン、N-(低級)アルキルピペリジン、及びその他任意適当
なアミンを包含する。
機酸又は無機酸と薬学的に受け入れられる塩類を形成で
きる。適当な塩類を形成する無機酸類の例は塩酸、臭化
水素酸、硫酸及び燐酸、並びにオルト燐酸一水素ナトリ
ウムと硫酸水素カリウムのような酸金属塩類を包含す
る。適当な塩類を形成する有機酸の例はモノ、ジ、及び
トリカルボン酸類を包含する。このような酸類の例は、
例えば酢酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン
酸、コハク酸、グルタール酸、フマール酸、リンゴ酸、
酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒド
ロキシマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、フ
ェニル酢酸、桂皮酸、サリチル酸、2-フェノキシ安息香
酸、及びメタンスルホン酸と2-ヒドロキシエタンスルホ
ン酸のようなスルホン酸類である。カルボキシ末端アミ
ノ酸部分の塩類は、任意適当な無機又は有機塩基ととも
に形成される無毒性カルボン酸塩類を包含する。例示的
には、これらの塩類はアルカリ金属、例えばナトリウム
とカリウム；アルカリ土類金属、例えばカルシウムとマ
グネシウム；アルミニウムを含めた第IIIＡ族の軽金
属；及び有機第一級、第二級及び第三級アミン類、例え
ばトリエチルアミンを含めたトリアルキルアミン類、プ
ロカイン、ジベンジルアミン、1-エテナミン、N,N'-ジ
ベンジルエチレンジアミン、ジヒドロアビエチルアミ
ン、N-(低級)アルキルピペリジン、及びその他任意適当
なアミンを包含する。
【００１２】化合物類の任意の一般群の場合と同様、あ
る基が好ましい。出願人らは式１のペプチド誘導体類を
好ましいと考える。
る基が好ましい。出願人らは式１のペプチド誘導体類を
好ましいと考える。
【００１３】本発明のタンパク類は当業者に容易に知ら
れる種々の手順によって調製できる。このような手順は
固体相逐次及びブロック合成、遺伝子クローニング、及
びこれらの手法の組合わせを包含する。固体相逐次手順
は自動化ペプチド合成機の使用など、確立された自動化
方法を用いて実施できる。この手順では、α-アミノ保
護アミノ酸は樹脂支持体に結合される。使用の樹脂支持
体はペプチド類の固体相調製にこの技術で慣用的に使用
される任意適当な樹脂で、好ましくは0.5ないし約3%の
ジビニルベンゼンで架橋されたポリスチレンであって、
これをクロロメチル化又はヒドロキシメチル化させる
と、初めに導入されたα-アミノ保護アミノ酸とのエス
テル形成用の位置が提供される。
れる種々の手順によって調製できる。このような手順は
固体相逐次及びブロック合成、遺伝子クローニング、及
びこれらの手法の組合わせを包含する。固体相逐次手順
は自動化ペプチド合成機の使用など、確立された自動化
方法を用いて実施できる。この手順では、α-アミノ保
護アミノ酸は樹脂支持体に結合される。使用の樹脂支持
体はペプチド類の固体相調製にこの技術で慣用的に使用
される任意適当な樹脂で、好ましくは0.5ないし約3%の
ジビニルベンゼンで架橋されたポリスチレンであって、
これをクロロメチル化又はヒドロキシメチル化させる
と、初めに導入されたα-アミノ保護アミノ酸とのエス
テル形成用の位置が提供される。
【００１４】ヒドロキシメチル樹脂の一例は、ボダンス
ズキ(Bodanszky)ら、Chem. Ind. (London) 38巻1597-98
頁(1966年)に記述されている。クロロメチル化樹脂は、
バイオラド研究所(カリフォルニア州リッチモンド)から
市販されており、このような樹脂の調製はスチュワート
(Stewart)ら、「固体相ペプチド合成」(フリーマン社、サ
ンフランシスコ、1969年)第1章1-6頁に記述されてい
る。保護されたアミノ酸はギシン(Gisin)、Helv. Chem.
Acta,56巻1476頁(1973年)の手順によって樹脂に結合さ
せることができる。樹脂に結合された多くの保護アミノ
酸が市販されている。一例として、カルボキシ末端がTh
r残基である場合の本発明のポリペプチドをつくるに
は、ベンジル化ヒドロキシメチル化フェニルアセトアミ
ドメチル(PAM)樹脂へ結合された第三ブチロキシカルボ
ニル(Boc)保護されたThrが使用可能であり、市販されて
いる。
ズキ(Bodanszky)ら、Chem. Ind. (London) 38巻1597-98
頁(1966年)に記述されている。クロロメチル化樹脂は、
バイオラド研究所(カリフォルニア州リッチモンド)から
市販されており、このような樹脂の調製はスチュワート
(Stewart)ら、「固体相ペプチド合成」(フリーマン社、サ
ンフランシスコ、1969年)第1章1-6頁に記述されてい
る。保護されたアミノ酸はギシン(Gisin)、Helv. Chem.
Acta,56巻1476頁(1973年)の手順によって樹脂に結合さ
せることができる。樹脂に結合された多くの保護アミノ
酸が市販されている。一例として、カルボキシ末端がTh
r残基である場合の本発明のポリペプチドをつくるに
は、ベンジル化ヒドロキシメチル化フェニルアセトアミ
ドメチル(PAM)樹脂へ結合された第三ブチロキシカルボ
ニル(Boc)保護されたThrが使用可能であり、市販されて
いる。
【００１５】樹脂支持体へのα-アミノ保護アミノ酸の
カップリング後、保護基は塩化メチレン中のトリフルオ
ロ酢酸、トリフルオロ酢酸のみ、又はジオキサン中のHC
lを使用するなどの任意適当な手順を用いて除去され
る。脱保護は、0℃と室温の間の温度で実施される。特
定的なα-アミノ保護基の除去用のその他の標準的開裂
試薬及び条件を使用できる。α-アミノ保護基の除去
後、その他のアミノ保護アミノ酸類は所望の順序で段階
的に結合される。その代わりに、樹脂支持されたアミノ
酸配列とのカップリングに先立って、複数のアミノ酸群
を溶液法によって結合させることができる。
カップリング後、保護基は塩化メチレン中のトリフルオ
ロ酢酸、トリフルオロ酢酸のみ、又はジオキサン中のHC
lを使用するなどの任意適当な手順を用いて除去され
る。脱保護は、0℃と室温の間の温度で実施される。特
定的なα-アミノ保護基の除去用のその他の標準的開裂
試薬及び条件を使用できる。α-アミノ保護基の除去
後、その他のアミノ保護アミノ酸類は所望の順序で段階
的に結合される。その代わりに、樹脂支持されたアミノ
酸配列とのカップリングに先立って、複数のアミノ酸群
を溶液法によって結合させることができる。
【００１６】ポリペプチド配列へ導入される各アミノ酸
と共に使用されるα-アミノ保護基は、この技術で知ら
れた任意のこのような保護基でありうる。考えられるα
-アミノ保護基の部類としては以下のものがある。(1)ア
シル型保護基、例えばホルミル、トリフルオロアセチ
ル、フタリル、トルエンスルホニル(トシル)、ベンゼン
スルホニル、ニトロ-フェニルスルフェニル、トリチル
スルフェニル、o-ニトロフェノキシアセチル、及びα-
クロロブチリル；(2)芳香族ウレタン型保護基、例えば
ベンジロキシカルボニル及び置換ベンジロキシカルボニ
ル、例えばp-クロロベンジロキシカルボニル、p-ニトロ
ベンジルカルボニル、p-ブロモベンジロキシカルボニ
ル、p-メトキシベンジロキシカルボニル、1-(p-ビフェ
ニリル)-1-メチルエトキシカルボニル、α,α-ジメチル
-3,5-ジメトキシベンジロキシカルボニル、及びベンズ
ヒドリロキシカルボニル；(3)脂肪族ウレタン保護基、
例えば第三ブチロキシカルボニル(Boc)、ジイソプロピ
ルメトキシカルボニル、イソプロピロキシカルボニル、
エトキシカルボニル及びアリロキシカルボニル；(4)シ
クロアルキルウレタン型保護基、例えばシクロペンチロ
キシカルボニル、アダマンチロキシカルボニル、及びシ
クロヘキシロキシカルボニル；(5)フェニルチオカルボ
ニルのようなチオウレタン型保護基；(6)トリフェニル
メチル(トリチル)及びベンジルのようなアルキル型保護
基；及び(7)トリメチルシランのようなトリアルキルシ
ラン基。好ましいα-アミノ保護基は第三ブチロキシカ
ルボニルである。
と共に使用されるα-アミノ保護基は、この技術で知ら
れた任意のこのような保護基でありうる。考えられるα
-アミノ保護基の部類としては以下のものがある。(1)ア
シル型保護基、例えばホルミル、トリフルオロアセチ
ル、フタリル、トルエンスルホニル(トシル)、ベンゼン
スルホニル、ニトロ-フェニルスルフェニル、トリチル
スルフェニル、o-ニトロフェノキシアセチル、及びα-
クロロブチリル；(2)芳香族ウレタン型保護基、例えば
ベンジロキシカルボニル及び置換ベンジロキシカルボニ
ル、例えばp-クロロベンジロキシカルボニル、p-ニトロ
ベンジルカルボニル、p-ブロモベンジロキシカルボニ
ル、p-メトキシベンジロキシカルボニル、1-(p-ビフェ
ニリル)-1-メチルエトキシカルボニル、α,α-ジメチル
-3,5-ジメトキシベンジロキシカルボニル、及びベンズ
ヒドリロキシカルボニル；(3)脂肪族ウレタン保護基、
例えば第三ブチロキシカルボニル(Boc)、ジイソプロピ
ルメトキシカルボニル、イソプロピロキシカルボニル、
エトキシカルボニル及びアリロキシカルボニル；(4)シ
クロアルキルウレタン型保護基、例えばシクロペンチロ
キシカルボニル、アダマンチロキシカルボニル、及びシ
クロヘキシロキシカルボニル；(5)フェニルチオカルボ
ニルのようなチオウレタン型保護基；(6)トリフェニル
メチル(トリチル)及びベンジルのようなアルキル型保護
基；及び(7)トリメチルシランのようなトリアルキルシ
ラン基。好ましいα-アミノ保護基は第三ブチロキシカ
ルボニルである。
【００１７】適当なカップリング試薬の選択はこの技術
の範囲内にある。付加アミノ酸がGln、Asn又はArgの場
合の特に適したカップリング試薬は、N,N'-ジイソプロ
ピルカルボジイミドと1-ヒドロキシベンゾトリアゾール
である。これらの試薬の使用はニトリル及びラクタムの
形成を予防する。その他のカップリング剤は(1)カルボ
ジイミド(例えばN,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミド
とN-エチル-N'-(γ-ジメチルアミノプロピルカルボジイ
ミド)；(2)シアナミド類(例えばN,N'-ジベンジルシアナ
ミド)；(3)ケテンイミン類；(4)イソキサゾリウム塩(例
えばN-エチル-5-フェニル-イソキサゾリウム-3'-スルホ
ネート)；(5)環中に1-4個の窒素を含有する芳香族性で
単環の窒素含有複素環式アミド類、例えばイミダゾリド
類、ピラゾリド類及び1,2,4-トリアゾリド類。有用な特
定的な複素環式アミド類はN,N'-カルボニルジイミダゾ
ールとN,N'-カルボニル-ジ-1,2,4-トリアゾールを包含
する；(6)アルコキシル化アセチレン(例えばエトキシア
セチレン)；(7)アミノ酸のカルボキシル部分と混合無水
物を形成する試薬(例えばエチルクロロフォルメートと
イソブチルクロロフォルメート)又はカップリングしよ
うとするアミノ酸の対称無水物(例えば(Boc-Ala-O-Ala-
Boc)；及び(8)一つの環窒素上に1個のヒドロキシ基をも
った窒素含有複素環式化合物類(例えばN-ヒドロキシフ
タルイミド、N-ヒドロキシサクシンイミド及び1-ヒドロ
キシベンゾトリアゾール)である。その他の活性化試薬
と、ペプチドのカップリングにおけるそれらの使用は、
ケイパー(Kapoor)、J. Pharm. Sci.59巻1-27頁(1970年)
に記述されている。出願人らは、Arg、Asn及びGlnを除
き、すべてのアミノ酸に対するカップリング試薬とし
て、対称的無水物の使用を好ましいと考える。
の範囲内にある。付加アミノ酸がGln、Asn又はArgの場
合の特に適したカップリング試薬は、N,N'-ジイソプロ
ピルカルボジイミドと1-ヒドロキシベンゾトリアゾール
である。これらの試薬の使用はニトリル及びラクタムの
形成を予防する。その他のカップリング剤は(1)カルボ
ジイミド(例えばN,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミド
とN-エチル-N'-(γ-ジメチルアミノプロピルカルボジイ
ミド)；(2)シアナミド類(例えばN,N'-ジベンジルシアナ
ミド)；(3)ケテンイミン類；(4)イソキサゾリウム塩(例
えばN-エチル-5-フェニル-イソキサゾリウム-3'-スルホ
ネート)；(5)環中に1-4個の窒素を含有する芳香族性で
単環の窒素含有複素環式アミド類、例えばイミダゾリド
類、ピラゾリド類及び1,2,4-トリアゾリド類。有用な特
定的な複素環式アミド類はN,N'-カルボニルジイミダゾ
ールとN,N'-カルボニル-ジ-1,2,4-トリアゾールを包含
する；(6)アルコキシル化アセチレン(例えばエトキシア
セチレン)；(7)アミノ酸のカルボキシル部分と混合無水
物を形成する試薬(例えばエチルクロロフォルメートと
イソブチルクロロフォルメート)又はカップリングしよ
うとするアミノ酸の対称無水物(例えば(Boc-Ala-O-Ala-
Boc)；及び(8)一つの環窒素上に1個のヒドロキシ基をも
った窒素含有複素環式化合物類(例えばN-ヒドロキシフ
タルイミド、N-ヒドロキシサクシンイミド及び1-ヒドロ
キシベンゾトリアゾール)である。その他の活性化試薬
と、ペプチドのカップリングにおけるそれらの使用は、
ケイパー(Kapoor)、J. Pharm. Sci.59巻1-27頁(1970年)
に記述されている。出願人らは、Arg、Asn及びGlnを除
き、すべてのアミノ酸に対するカップリング試薬とし
て、対称的無水物の使用を好ましいと考える。
【００１８】各々の保護アミノ酸又はアミノ酸配列は、
約4倍過剰量で固体相反応器に導入され、ジメチルホル
ムアミド：塩化メチレン(1:1)又はジメチルホルムアミ
ドのみ、又は好ましくは塩化メチレンのみの媒体中でカ
ップリングが行なわれる。不完全なカップリングが起こ
る場合は、α-アミノ保護基の除去前に、固体相反応器
中で次のアミノ酸のカップリングに先立って、カップリ
ング手順を繰り返す。各合成段階でのカップリング反応
の成功は、イー・カイザー(E. Kaiser)ら、Analyt. Bio
chem.34巻595頁(1970年)に記述されたとおりに、ニンヒ
ドリン反応によって監視される。
約4倍過剰量で固体相反応器に導入され、ジメチルホル
ムアミド：塩化メチレン(1:1)又はジメチルホルムアミ
ドのみ、又は好ましくは塩化メチレンのみの媒体中でカ
ップリングが行なわれる。不完全なカップリングが起こ
る場合は、α-アミノ保護基の除去前に、固体相反応器
中で次のアミノ酸のカップリングに先立って、カップリ
ング手順を繰り返す。各合成段階でのカップリング反応
の成功は、イー・カイザー(E. Kaiser)ら、Analyt. Bio
chem.34巻595頁(1970年)に記述されたとおりに、ニンヒ
ドリン反応によって監視される。
【００１９】所望のアミノ酸配列が得られた後、ペプチ
ドは樹脂から除去される。これは樹脂結合ポリペプチド
をフッ化水素酸希水溶液中の硫化ジメチル、p-クレゾー
ル、及びチオクレゾールの溶液で処理するなど加水分解
によって行なうことができる。
ドは樹脂から除去される。これは樹脂結合ポリペプチド
をフッ化水素酸希水溶液中の硫化ジメチル、p-クレゾー
ル、及びチオクレゾールの溶液で処理するなど加水分解
によって行なうことができる。
【００２０】固体相ペプチド合成の技術に知られている
ように、アミノ酸類の多くは連鎖生成中に保護を必要と
するような官能基をもっている。適当な保護基の選定と
使用は当業者の能力の範囲内にあり、保護しようとする
アミノ酸と、ペプチド上の他の保護アミノ酸残基の存在
に依存しよう。このような側鎖保護基の選択は、α-ア
ミノ部分の保護基の開裂中にそれが除去されてはならな
いという点で決定的重要性をもっている。例えば、リジ
ンに適した側鎖保護基はベンジロキシカルボニル及び置
換ベンジロキシカルボニル［この置換基はハロゲン(例
えばクロロ、ブロモ、フルオロ)及びニトロ(例えば2-ク
ロロベンジロキシカルボニル、p-ニトロベンジロキシカ
ルボニル、3,4-ジクロロベンジロキシカルボニル)から
選ばれる]、トシル、t-アミロキシカルボニル、t-ブチ
ロキシカルボニル、及びジイソプロピルメトキシカルボ
ニルである。スレオニンとセリンのアルコール性ヒドロ
キシル基はアセチル、ベンゾイル、第三ブチル、トリチ
ル、ベンジル、2,6-ジクロロベンジル又はベンジロキシ
カルボニル基で保護できる。好ましい保護基はベンジル
である。
ように、アミノ酸類の多くは連鎖生成中に保護を必要と
するような官能基をもっている。適当な保護基の選定と
使用は当業者の能力の範囲内にあり、保護しようとする
アミノ酸と、ペプチド上の他の保護アミノ酸残基の存在
に依存しよう。このような側鎖保護基の選択は、α-ア
ミノ部分の保護基の開裂中にそれが除去されてはならな
いという点で決定的重要性をもっている。例えば、リジ
ンに適した側鎖保護基はベンジロキシカルボニル及び置
換ベンジロキシカルボニル［この置換基はハロゲン(例
えばクロロ、ブロモ、フルオロ)及びニトロ(例えば2-ク
ロロベンジロキシカルボニル、p-ニトロベンジロキシカ
ルボニル、3,4-ジクロロベンジロキシカルボニル)から
選ばれる]、トシル、t-アミロキシカルボニル、t-ブチ
ロキシカルボニル、及びジイソプロピルメトキシカルボ
ニルである。スレオニンとセリンのアルコール性ヒドロ
キシル基はアセチル、ベンゾイル、第三ブチル、トリチ
ル、ベンジル、2,6-ジクロロベンジル又はベンジロキシ
カルボニル基で保護できる。好ましい保護基はベンジル
である。
【００２１】これらの基はこの技術で周知の手順によっ
て除去できる。典型的には、保護基の除去はペプチド鎖
合成が完了してから行なわれるが、保護基はその他の任
意適当な時に除去できる。
て除去できる。典型的には、保護基の除去はペプチド鎖
合成が完了してから行なわれるが、保護基はその他の任
意適当な時に除去できる。
【００２２】本発明のペプチド誘導体の血小板凝集阻害
投与量は、患者と、処置される血栓症状の程度、及び選
択されるペプチド誘導体にもよるが、患者体重kg当たり
0.2mgないし250 mgである。特定患者に適した投与量は
容易に決定できる。典型的には、投与量当たり活性化合
物5 mgないし100 mgを１日1-4回投与するのが好まし
い。
投与量は、患者と、処置される血栓症状の程度、及び選
択されるペプチド誘導体にもよるが、患者体重kg当たり
0.2mgないし250 mgである。特定患者に適した投与量は
容易に決定できる。典型的には、投与量当たり活性化合
物5 mgないし100 mgを１日1-4回投与するのが好まし
い。
【００２３】血小板凝集阻害療法は心筋梗塞及び脳卒中
の再発ならびに血小板疑集と関連する他の病気の防止に
効果があると示されている。この分野の経験者には、血
液凝固防止及び血小板凝集阻害療法を要する状況が容易
に認められよう。本明細書で使用される用語の「患者」
は、ヒトを含めた霊長類、羊、馬、牛、豚、犬、猫、ラ
ット及びハツカネズミのような哺乳類を意味するものと
して扱われる。
の再発ならびに血小板疑集と関連する他の病気の防止に
効果があると示されている。この分野の経験者には、血
液凝固防止及び血小板凝集阻害療法を要する状況が容易
に認められよう。本明細書で使用される用語の「患者」
は、ヒトを含めた霊長類、羊、馬、牛、豚、犬、猫、ラ
ット及びハツカネズミのような哺乳類を意味するものと
して扱われる。
【００２４】ペプチド誘導体類の幾つかは経口投与後、
腸を通過して生き残ることもあるが、出願人らは非経口
投与、例えば皮下、静脈内、筋肉内又は腹膜内；デポー
注射による投与；移植製剤；又は鼻、咽喉、気管などの
粘膜へ、噴霧液又は乾燥粉末型の本発明のペプチド誘導
体を含有するアエロゾル缶での適用が好ましいと考え
る。
腸を通過して生き残ることもあるが、出願人らは非経口
投与、例えば皮下、静脈内、筋肉内又は腹膜内；デポー
注射による投与；移植製剤；又は鼻、咽喉、気管などの
粘膜へ、噴霧液又は乾燥粉末型の本発明のペプチド誘導
体を含有するアエロゾル缶での適用が好ましいと考え
る。
【００２５】非経口投与には、化合物類は薬学担体を伴
った生理学的に受入れられる希釈剤中の化合物の溶液又
は懸濁液の注射可能な適量として投与でき、担体は、表
面活性剤その他の薬学的に受け入れられる助剤を伴っ
て、又は伴っていない水や油類のような無菌液体であり
うる。これらの製剤に使用できる油類の例は、石油、動
植物、又は合成起源のもの、例えば落花生油、大豆油、
及び鉱油である。概して、水、食塩水、デキストロース
水溶液、及び関連する糖溶液、エタノールやグリコール
類、例えばプロピレングリコールやポリエチレングリコ
ールが、特に注射液用に好ましい液体担体である。
った生理学的に受入れられる希釈剤中の化合物の溶液又
は懸濁液の注射可能な適量として投与でき、担体は、表
面活性剤その他の薬学的に受け入れられる助剤を伴っ
て、又は伴っていない水や油類のような無菌液体であり
うる。これらの製剤に使用できる油類の例は、石油、動
植物、又は合成起源のもの、例えば落花生油、大豆油、
及び鉱油である。概して、水、食塩水、デキストロース
水溶液、及び関連する糖溶液、エタノールやグリコール
類、例えばプロピレングリコールやポリエチレングリコ
ールが、特に注射液用に好ましい液体担体である。
【００２６】化合物類は、デポー注射剤又は移植製剤の
形で投与でき、これらは活性分の持続的放出を可能とす
るような方法で処方できる。活性成分はペレットや小円
筒形に圧縮されて、皮下又は筋肉内にデポー注射剤又は
移植剤として移植できる。移植剤は生物分解可能な重合
体類や合成シリコーン類、例えばダウコーニング・コー
ポレーションで製造されるシリコンゴムのシラスチック
のような不活性材料を使用できる。
形で投与でき、これらは活性分の持続的放出を可能とす
るような方法で処方できる。活性成分はペレットや小円
筒形に圧縮されて、皮下又は筋肉内にデポー注射剤又は
移植剤として移植できる。移植剤は生物分解可能な重合
体類や合成シリコーン類、例えばダウコーニング・コー
ポレーションで製造されるシリコンゴムのシラスチック
のような不活性材料を使用できる。
【００２７】
【実施例】本発明は、以下の非限定的な実施例によって
例示されている。 実施例１ 5GP-Gly-Asp-Trp-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-
Ala-Cha-glu-OHの製造 0.66ミリモル/gのBoc-(Bzl)D-Glu-樹脂0.1ミリモルを使
用する固相方法によってペプチドを合成した。2.0ミリ
モルNα-Boc-アミノ酸（ペプチド・インターナショナル
社）によって、二重対称性無水物カップリングを実施し
た。利用した側鎖の保護はAsp(Chx)、Trp(CHO)、Glu(Bz
l)であった。合成完了後、Nα-Boc保護は塩化メチレン
中の50%トリフルオロ酢酸で除去された。樹脂は塩化メ
チレンで３回洗い、塩化メチレン中10%ジイソプロピル
エチルアミンの洗浄液３回分で中和し、塩化メチレンで
３回洗い、真空で乾燥した。ペプチドを脱保護し、２%
アニソールを含有するHFにより、0℃で35分間かけて、
樹脂から開裂させた。HFを0℃の真空中で除去し、ペプ
チドをエチルエ−テルで沈殿させ、30%酢酸水溶液で樹
脂から抽出し、凍結乾燥した。
例示されている。 実施例１ 5GP-Gly-Asp-Trp-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-
Ala-Cha-glu-OHの製造 0.66ミリモル/gのBoc-(Bzl)D-Glu-樹脂0.1ミリモルを使
用する固相方法によってペプチドを合成した。2.0ミリ
モルNα-Boc-アミノ酸（ペプチド・インターナショナル
社）によって、二重対称性無水物カップリングを実施し
た。利用した側鎖の保護はAsp(Chx)、Trp(CHO)、Glu(Bz
l)であった。合成完了後、Nα-Boc保護は塩化メチレン
中の50%トリフルオロ酢酸で除去された。樹脂は塩化メ
チレンで３回洗い、塩化メチレン中10%ジイソプロピル
エチルアミンの洗浄液３回分で中和し、塩化メチレンで
３回洗い、真空で乾燥した。ペプチドを脱保護し、２%
アニソールを含有するHFにより、0℃で35分間かけて、
樹脂から開裂させた。HFを0℃の真空中で除去し、ペプ
チドをエチルエ−テルで沈殿させ、30%酢酸水溶液で樹
脂から抽出し、凍結乾燥した。
【００２８】この粗製5-AP類似体の半分を5℃で16時間
Ｏ-メチルイソ尿素で処理して粗製5-GP類似体を生成し
た。5%酢酸水溶液中で92x2.6cmセファデックスG-15カラ
ム上で脱塩し、凍結乾燥することによりペプチドを精製
した。分離用ＨＰＬＣをＣ18Ｖydac218TP1010（250x10m
m）カラム上で5ml/分の0.1%水性トリフルオロ酢酸中の2
4%アセトニトリルで実施した。主ピークを集め、凍結乾
燥した。HPLCとTLCで均質性を決定した。
Ｏ-メチルイソ尿素で処理して粗製5-GP類似体を生成し
た。5%酢酸水溶液中で92x2.6cmセファデックスG-15カラ
ム上で脱塩し、凍結乾燥することによりペプチドを精製
した。分離用ＨＰＬＣをＣ18Ｖydac218TP1010（250x10m
m）カラム上で5ml/分の0.1%水性トリフルオロ酢酸中の2
4%アセトニトリルで実施した。主ピークを集め、凍結乾
燥した。HPLCとTLCで均質性を決定した。
【００２９】同様に、以下の実施例２〜６のペプチドを
調製した。 実施例２ 5AP-Gly-Asp-Trp-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-
Ala-Cha-glu-OH 実施例３ Arg-Gly-Asp-Trp-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-
Ala-Cha-glu-OH 実施例４ 5AP-Gly-Asp-Tyr(OCH3)-Glu-Pro-Ile-Pro-Gl
u-Glu-Ala-Cha-glu-OH 実施例５ Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Arg-Gly-Asp-Phe-
glu-OH 実施例６ 5GP-Gly-Asp-Tyr(OCH3)-Glu-Pro-Ile-Pro-Gl
u-Glu-Ala-Cha-glu-OH 実施例７ 4-アミノメチルベンゾイル-Asp-Trp-Glu-Pro
-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-OH 実施例８ 4-グアニジノメチルベンゾイル-Asp-Trp-Glu
-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-OH 実施例９ 4-アミノメチル-Asp-Trp-Glu-Pro-Ile-Pro-G
lu-Glu-Ala-Cha-glu-OH 実施例１０ 4-グアニジノメチルシクロヘキシルカルボ
ニル-Asp-Trp-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-O
H 実施例１１ 4-アミノメチルシクロヘキシルカルボニル
-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-O
H 実施例１２ 4-グアニジノメチルシクロヘキシルカルボ
ニル-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-g
lu-OH
調製した。 実施例２ 5AP-Gly-Asp-Trp-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-
Ala-Cha-glu-OH 実施例３ Arg-Gly-Asp-Trp-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-
Ala-Cha-glu-OH 実施例４ 5AP-Gly-Asp-Tyr(OCH3)-Glu-Pro-Ile-Pro-Gl
u-Glu-Ala-Cha-glu-OH 実施例５ Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pro-Arg-Gly-Asp-Phe-
glu-OH 実施例６ 5GP-Gly-Asp-Tyr(OCH3)-Glu-Pro-Ile-Pro-Gl
u-Glu-Ala-Cha-glu-OH 実施例７ 4-アミノメチルベンゾイル-Asp-Trp-Glu-Pro
-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-OH 実施例８ 4-グアニジノメチルベンゾイル-Asp-Trp-Glu
-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-OH 実施例９ 4-アミノメチル-Asp-Trp-Glu-Pro-Ile-Pro-G
lu-Glu-Ala-Cha-glu-OH 実施例１０ 4-グアニジノメチルシクロヘキシルカルボ
ニル-Asp-Trp-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-O
H 実施例１１ 4-アミノメチルシクロヘキシルカルボニル
-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-O
H 実施例１２ 4-グアニジノメチルシクロヘキシルカルボ
ニル-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-g
lu-OH
【００３０】実施例１〜１２のペプチドは次の性質を有
していた。 アミノ酸分析 実施例 （6N HCl加水分解：24時間、105℃） 番号 Ｂ Ｚ Arg Pro Ala Gly Ile １ 0.64 4.06 1.07 2.01 1.01 0.96 0.96 ２ 0.60 4.07 1.08 1.85 1.08 0.99 0.84 ３ 0.66 4.08 1.02 1.97 1.02 0.99 0.96 ４ 0.98 4.09 1.04 1.95 1.04 0.98 0.96 ５ 1.02 4.09 0.97 1.97 0.97 0.98 1.01 ６ 0.99 1.96 1.02 1.98 1.02 0.99 0.97
していた。 アミノ酸分析 実施例 （6N HCl加水分解：24時間、105℃） 番号 Ｂ Ｚ Arg Pro Ala Gly Ile １ 0.64 4.06 1.07 2.01 1.01 0.96 0.96 ２ 0.60 4.07 1.08 1.85 1.08 0.99 0.84 ３ 0.66 4.08 1.02 1.97 1.02 0.99 0.96 ４ 0.98 4.09 1.04 1.95 1.04 0.98 0.96 ５ 1.02 4.09 0.97 1.97 0.97 0.98 1.01 ６ 0.99 1.96 1.02 1.98 1.02 0.99 0.97
【００３１】
【００３２】実施例番号 ウシトロンビン阻害ＩＣ 50 (μM) イヌ血小板凝集阻害ＩＣ 50 (μM) １ 1.6 6 ２ 1.7 250 ３ 2.8 7 ４ 5.4 280 ５ 15 42 ６ 5.9 10 ７ 2.1 ８ 1.3 ９ 3.5 １０ 2.3
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ロバ−ト ジェ−ムス ブロア−スマ ジュニア アメリカ合衆国 46060 インディアナ 州 ノベルスビレ ウィロウ ウェイ 1233 (56)参考文献 特開 昭63−215698（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−313500（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−120297（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−218692（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 38/55 C07K 7/06 ZNA C07K 7/08 ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)
Claims (14)
- 【請求項１】 式 X-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9
-A10-A11-Y 〔式中、 ＸはＨ又はサクシニルであり、 Ａ2はＸがサクシニルであるときに結合であるか、又は
Ａ2は式 【化１】 ｛ここでＲ'は−ＮＨ−Ｃ(＝ＮＨ)ＮＨ2又は−ＮＨ2、
Ｚは−ＮＨ−又は結合であり、ｑは１〜５の整数であ
り、Ｂは−Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ−である｝であるか、又は 【化２】 ｛ここでＲ'、Ｚ、及びｑは上に定義の通りであり、Ｐ
はフェニレン又はシクロヘキサジイルであるか、又はＰ
はＲ'が−ＮＨ2で、Ｚが結合で、ｑが１で、Ａ3がTrp
で、Ａ5がProで、Ａ8がGluで、Ａ9がGluで、Ａ10が-Ala
-Cha-のとき結合でもあり得る｝のいずれかを表わ
し、； Ａ3はTyr、Tyr(Me)又はTrpであり； Ａ4はGluであり； Ａ5はGlu又はProであり； Ａ6はIleであり； Ａ7はProであり； Ａ8はGlu又はArgであり； Ａ9はGlu又はGlyであり； Ａ10は-Ala-Cha-又は-Asp-Phe-であり； Ａ11はD-Gluであり；そしてＹはOHである〕のペプチド
類似体又はその製薬上受け入れられる塩の有効量を含む
血小板凝集阻害剤又は血小板凝集が関与する血栓塞栓症
の治療剤。 - 【請求項２】 Ａ3がTyrである請求項１に記載の阻害剤
又は治療剤。 - 【請求項３】 Ｒ'が−ＮＨ−Ｃ(＝ＮＨ)ＮＨ2、Ｂが−
ＣＯＮＨ−、ｑが2〜4の整数である請求項１に記載の阻
害剤又は治療剤。 - 【請求項４】 ペプチド類似体が5GP-Gly-Asp-Trp-Glu-
Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-OHである請求項１に
記載の阻害剤又は治療剤。 - 【請求項５】 ペプチド類似体が5AP-Gly-Asp-Trp-Glu-
Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-OHである請求項１に
記載の阻害剤又は治療剤。 - 【請求項６】 ペプチド類似体がH-Arg-Gly-Asp-Trp-Gl
u-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-OHである請求項１
に記載の阻害剤又は治療剤。 - 【請求項７】 ペプチド類似体が5AP-Gly-Asp-Tyr(Me)-
Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-OHである請求項
１に記載の阻害剤又は治療剤。 - 【請求項８】 ペプチド類似体が5GP-Gly-Asp-Tyr(Me)-
Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-OHである請求項
１に記載の阻害剤又は治療剤。 - 【請求項９】 ペプチド類似体が4-アミノメチルベンゾ
イル-Asp-Trp-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-O
Hである請求項１に記載の阻害剤又は治療剤。 - 【請求項１０】 ペプチド類似体が4-グアニジノメチル
ベンゾイル-Asp-Trp-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha
-glu-OHである請求項１に記載の阻害剤又は治療剤。 - 【請求項１１】 ペプチド類似体が4-アミノメチル-Asp
-Trp-Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-OHである
請求項１に記載の阻害剤又は治療剤。 - 【請求項１２】 ペプチド類似体が4-グアニジノメチル
シクロヘキシルカルボニル-Asp-Trp-Glu-Pro-Ile-Pro-G
lu-Glu-Ala-Cha-glu-OHである請求項１に記載の阻害剤
又は治療剤。 - 【請求項１３】 ペプチド類似体が4-アミノメチルシク
ロヘキシルカルボニル-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-Pro-G
lu-Glu-Ala-Cha-glu-OHである請求項１に記載の阻害剤
又は治療剤。 - 【請求項１４】 ペプチド類似体が4-グアニジノメチル
シクロヘキシルカルボニル-Gly-Asp-Phe-Glu-Pro-Ile-P
ro-Glu-Glu-Ala-Cha-glu-OHである請求項１に記載の阻
害剤又は治療剤。
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