TW202042814A - 食慾素（ｏｒｅｘｉｎ）受體拮抗抑制用組成物 - Google Patents

Abstract

本發明之目的為提供可抑制食慾素結合至其受體之新穎的食慾素受體拮抗抑制用組成物及抑制食慾素結合至其受體之方法。 本發明係關於包含吡咯并喹啉醌或其鹽作為有效成分之食慾素受體拮抗抑制用組成物等。

Description

食慾素（ｏｒｅｘｉｎ）受體拮抗抑制用組成物

本發明係關於食慾素受體拮抗抑制用組成物。此外，本發明係關於抑制食慾素結合至其受體(食慾素受體)之方法等。

食慾素(orexin)為由下視丘外側區中所存在之神經細胞所產生之神經胜肽。食慾素受體為食慾素特異性受體，若食慾素作用於食慾素受體，則會發揮提高動物的清醒程度、使攝食量增加等作用。從而，具有抑制食慾素結合至其受體之作用(食慾素受體拮抗抑制作用)之物質被期待有抑制清醒狀態之作用等。

在專利文獻1中，已記載被使用作為食慾素受體拮抗劑之化合物。此外，作為食慾素受體拮抗抑制劑，係已知蘇沃雷生(suvorexant)。然而，屬於源自天然之化合物且持有食慾素受體拮抗抑制作用之化合物尚屬未知。 [先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]日本專利特開2018-135349號公報

[發明所欲解決之課題]

本發明之目的為提供可抑制食慾素結合至其受體之新穎的食慾素受體拮抗抑制用組成物。此外，本發明之目的為提供抑制食慾素結合至其受體之方法。 [解決課題之手段]

本發明者等人為了解決上述課題而致力檢討之結果，發現吡咯并喹啉醌或其鹽具有優異的食慾素受體拮抗抑制作用。吡咯并喹啉醌為包含在多種食用植物中之化合物，其被認為即便長期攝取，安全性亦高。

即，本發明係關於以下食慾素受體拮抗抑制用組成物等。 [1]一種食慾素受體拮抗抑制用組成物，其包含吡咯并喹啉醌或其鹽作為有效成分。 [2]如上述[1]所記載之食慾素受體拮抗抑制用組成物，其中，吡咯并喹啉醌之鹽為吡咯并喹啉醌之鈉鹽。 [3]如上述[1]或[2]所記載之食慾素受體拮抗抑制用組成物，其係飲食品。 [4]如上述[1]～[3]中任一項所記載之食慾素受體拮抗抑制用組成物，其附有藉由食慾素受體拮抗作用所發揮之機能的標示。 [5]一種抑制食慾素結合至其受體之方法，其係投予吡咯并喹啉醌或其鹽。 [6]一種吡咯并喹啉醌或其鹽之用途，其係用於抑制食慾素結合至其受體。 [發明效果]

根據本發明，可提供可抑制食慾素結合至其受體之新穎的食慾素受體拮抗抑制用組成物。本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物具有優異的食慾素受體拮抗抑制作用，且含有安全性較高的物質作為有效成分，因而有用於作為飲食品、醫藥品等。此外，根據本發明，係提供抑制食慾素結合至其受體之方法。

本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物包含吡咯并喹啉醌或其鹽作為有效成分。 食慾素已鑑定出食慾素A及食慾素B，其係在下視丘外側區產生。在食慾素受體中，存在食慾素1受體及食慾素2受體共2種亞型。在本發明中之食慾素受體中，包含所有亞型，較佳為食慾素2受體。在一態樣中，本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物適合使用於抑制食慾素A結合至食慾素2受體。

吡咯并喹啉醌為氧化還原輔酵素。吡咯并喹啉醌或其鹽存在於植物、細菌、動物等多種生物體內，故可萃取自多種生物來調製。吡咯并喹啉醌或其鹽亦可使用市售品。在本發明中，在產生本發明的效果之前提下，在本發明之組成物中亦可含有源自豐富地包含吡咯并喹啉醌或其鹽之植物之原料等。

作為吡咯并喹啉醌之鹽，較佳為能夠使用於飲食品、醫藥品等之鹽，可列舉例如鈉鹽、鉀鹽等鹼金屬鹽；鈣鹽、鎂鹽等鹼土族金屬鹽等。在鹽之中，較佳為鈉鹽。 吡咯并喹啉醌之鹽中之鹽的取代數為1～3，較佳為2。吡咯并喹啉醌之鹽可為1種，亦可為2種以上。作為吡咯并喹啉醌之鹽，較佳為吡咯并喹啉醌之二鈉鹽。

如後述實施例所示，吡咯并喹啉醌或其鹽具有抑制食慾素結合至食慾素受體之作用。從而，吡咯并喹啉醌或其鹽係作為食慾素受體拮抗劑而發揮作用。吡咯并喹啉醌或其鹽可使用於在對象中抑制食慾素結合至其受體。

吡咯并喹啉醌或其鹽係包含在天然物或飲食品中，其係具食用經驗之化合物。因此，由安全性之觀點而言，吡咯并喹啉醌或其鹽被認為在例如每日攝取上問題較少。根據本發明，可提供包含安全性較高的成分作為有效成分之食慾素受體拮抗抑制用組成物。

本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物可應用於治療用途(醫療用途)或非治療用途(非醫療用途)中之任何者。所謂非治療，係不含醫療行為，即人類的手術、治療或診斷之概念。 本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物可製成飲食品、醫藥、醫藥部外品、飼料等形態。本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物可其本身為用於拮抗抑制食慾素受體之飲食品、醫藥、醫藥部外品、飼料等，亦可為摻合至該等中而使用之素材或製劑等。 作為一例，本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物可以劑的形態提供，但並不限定於本形態。可將該劑依原樣作為組成物，或以包含該劑之組成物之形式提供。在一態樣中，本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物亦可稱為食慾素受體拮抗抑制劑。 由充分地獲得本發明的效果之觀點而言，本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物較佳為經口用組成物。作為經口用組成物，可列舉飲食品、經口用醫藥、醫藥部外品、飼料，較佳為飲食品或經口用醫藥，更佳為飲食品。

本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物在無損本發明的效果之前提下，除了本發明中之有效成分(吡咯并喹啉醌或其鹽)以外，亦可含有任意的添加劑、任意的成分。此等添加劑及成分可因應組成物的形態等而選擇，一般而言可使用能夠使用於飲食品、醫藥、醫藥部外品、飼料等者。在將本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物製成飲食品、醫藥、醫藥部外品、飼料等之情況，其製造方法並無特別限定，可藉由一般的方法予以製造。

例如，在將本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物製成飲食品之情況，可將能夠使用於飲食品之成分(例如食品素材、視需要使用之食品添加物等)摻合至本發明中之有效成分中，而製成多種飲食品。飲食品並無特別限定，可列舉例如一般的飲食品、健康食品、健康飲料、機能性標示食品、特定保健用食品、病者用飲食品等。上述健康食品、機能性標示食品、特定保健用食品等可製成例如細粒劑、錠劑、顆粒劑、散劑、膠囊劑、嚼錠劑、糖漿劑、液劑、流質食物等各種製劑型態而使用。

在將本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物製成醫藥或醫藥部外品之情況，可例如將藥理學上可容許的載體、視需要添加之添加劑等摻合至本發明中之有效成分中，而製成各種劑型的醫藥或醫藥部外品。該種載體、添加劑等只要是能夠使用於醫藥或醫藥部外品且藥理學上可容許者即可，可列舉例如賦形劑、黏合劑、崩解劑、潤滑劑、抗氧化劑、著色劑等中之1種或2種以上。作為醫藥或醫藥部外品的投予(攝取)形態，可列舉經口或非經口(經皮、經黏膜、經腸、注射等)，由更充分地獲得本發明的效果之觀點而言，較佳為經口投予。在將本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物製成醫藥或醫藥部外品之情況，較佳係製成經口用醫藥或醫藥部外品。作為用於經口投予之劑型，可列舉液劑、錠劑、散劑、細粒劑、顆粒劑、糖衣錠、膠囊劑、懸浮液、乳劑、嚼錠劑等。醫藥亦可為非人類動物用醫藥。

在將本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物製成飼料之情況，只要將本發明中之有效成分摻合至飼料中即可。在飼料中亦包含飼料添加劑。作為飼料，可列舉例如用於牛、豬、雞、羊、馬等之家畜用飼料；用於兔、大鼠、小鼠等之小動物用飼料；用於犬、貓、小鳥等之寵物食品等。

本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物中所包含之吡咯并喹啉醌或其鹽的含量並無特別限定，可因應其形態等而設定。 本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物中之吡咯并喹啉醌或其鹽的含量就吡咯并喹啉醌而言，例如，在組成物中較佳為0.0001重量%以上，更佳為0.001重量%以上，此外，較佳為90重量%以下，更佳為50重量%以下。在一態樣中，吡咯并喹啉醌或其鹽的含量就吡咯并喹啉醌而言，在食慾素受體拮抗抑制用組成物中較佳為0.0001～90重量%，更佳為0.001～50重量%。在又一態樣中，吡咯并喹啉醌或其鹽的總含量在食慾素受體拮抗抑制用組成物中可為0.0001～97重量%，亦可為0.001～55重量%。在一態樣中，在將本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物製成飲食品、醫藥、醫藥部外品、飼料等之情況，較佳係將吡咯并喹啉醌或其鹽的含量設為上述範圍。

本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物可藉由因應其形態之適當的方法進行攝取或投予。由充分地獲得本發明的效果之觀點而言，本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物較佳係經口攝取(經口投予)。

本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物的攝取量(亦可稱為投予量)並無特別限定，只要是可獲得抑制食慾素結合至食慾素受體之效果之量(有效量)即可，只要因應投予形態、投予方法而適宜設定即可。

在一態樣中，在以人類(成人)為對象使其經口攝取或對其投予食慾素受體拮抗抑制用組成物之情況，吡咯并喹啉醌或其鹽的攝取量就吡咯并喹啉醌而言，每1日以體重60kg計，較佳為1～200mg，更佳為5～60mg。較佳係1日1次以上，例如1日1次～分成數次(例如2～3次)攝取上述量。

本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物係有用於預防或改善可期待藉由抑制食慾素結合至食慾素受體而加以預防或改善之症狀或疾患。已知食慾素係與睡眠清醒、攝食行為、情緒有所關連。此外，已報導食慾素係與失眠症、高血糖、阿茲海默症(Alzheimer’s disease)等症狀或疾患相關。例如，已報導藉由攝取屬於食慾素受體拮抗抑制劑之蘇沃雷生，而縮短睡眠潛時，縮短客觀的中途清醒時間，增加總睡眠時間，增加睡眠效率(Sleep. 2013 Feb 1; 36(2):259-267.)。此外，已知在蘇沃雷生中具糖負荷試驗時之血糖值上升抑制效果(Endocrinology. 2016 Nov; 157(11):4146-4157. Epub 2016 Sep 15.)。此外，已報導在小鼠中，類澱粉β水平會因睡眠不足及注入食慾素胜肽而上升(Science. 2009 Nov 13; 326(5955):1005-1007.)。另一方面，已報導類澱粉β水平、老人斑的形成在類澱粉前驅物蛋白質基因重組小鼠中係藉由注入屬於食慾素受體拮抗劑之阿莫倫特(almorexant)而減少。此外，除了此等以外，已暗示藉由拮抗抑制食慾素受體，而獲得抗肥胖、食慾抑制、抗憂鬱、抗不安作用之可能性。從而，若攝取或投予本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物，則可期待藉由食慾素受體拮抗抑制作用而獲得例如改善睡眠(例如縮短睡眠潛時、縮短中途清醒時間、減少中途清醒次數等睡眠品質的改善)、預防或改善血糖值異常、預防或改善阿茲海默症等效果。藉由改善睡眠，便能夠例如預防或改善睡眠障礙。 在本說明書中，症狀或疾患的預防含括防止症狀或疾患的發病、延遲症狀或疾患的發病、降低症狀或疾患的發病率、減輕症狀或疾患的發病的風險等。症狀或疾患的改善含括使對象自症狀或疾患中恢復、緩和症狀或疾患、延遲或防止症狀的惡化或疾患的進行等。恢復包含至少部分地恢復。

使其攝取或對其投予本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物之對象(亦可稱為投予對象)並無特別限定。較佳為人類或非人類哺乳動物，更佳為人類。 作為使其攝取或對其投予本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物之對象，較佳為需要或希望抑制食慾素結合至其受體之對象。作為此種對象，可列舉例如具有失眠、高血糖、阿茲海默症等症狀之人類等。本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物亦可例如以預防可期待藉由抑制食慾素結合至其受體而加以預防或改善之症狀或疾患等為目的，而對健常者使用。

在本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物中，亦可附有藉由食慾素受體拮抗抑制作用所發揮之機能的標示。在本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物中，亦可附有例如「改善睡眠」、「改善血糖值」及「預防認知機能降低」等中之1種或2種以上機能的標示。 在本發明之一實施態樣中，本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物較佳為附有上述標示之飲食品。此外，上述標示亦可為用於獲得上述機能之內容的標示。

本發明亦含括以下方法及用途。 一種抑制食慾素結合至其受體之方法，其係投予吡咯并喹啉醌或其鹽。 一種吡咯并喹啉醌或其鹽之用途，其係用於抑制食慾素結合至其受體。 上述方法及用途可為治療方法或用途，亦可為非治療方法或用途。若將吡咯并喹啉醌或其鹽投予至對象(或使對象攝取)，則可在對象中抑制食慾素結合至其受體(食慾素受體)。藉由此種作用，可期待改善睡眠、改善血糖值、預防阿茲海默症等效果。在一態樣中，吡咯并喹啉醌或其鹽可藉由抑制食慾素結合至其受體，而使用於預防或改善睡眠障礙。

在上述方法及用途中，吡咯并喹啉醌或其鹽及此等之較佳態樣係與上述之本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物之情況相同。 在上述方法及用途中，只要1日1次以上，例如1日1次～數次(例如2～3次)將吡咯并喹啉醌或其鹽投予至對象即可。 上述用途較佳為人類或非人類哺乳動物，更佳為人類中之用途。

在上述方法及用途中，只要將獲得食慾素受體拮抗抑制作用之量(亦可稱為有效量)的吡咯并喹啉醌或其鹽投予至對象即可。吡咯并喹啉醌或其鹽的較佳投予量、投予對象、投予方法等係與上述之本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物之情況相同。吡咯并喹啉醌或其鹽可依原樣進行投予，亦可以包含吡咯并喹啉醌或其鹽之組成物之形式進行投予。例如，亦可投予上述之本發明之食慾素受體拮抗抑制用組成物。 此外，吡咯并喹啉醌或其鹽可使用於製造為了抑制食慾素結合至其受體而使用之飲食品、醫藥、醫藥部外品、飼料等。在一態樣中，本發明亦含括吡咯并喹啉醌或其鹽之用途，其係用於製造食慾素受體拮抗抑制用組成物。 [實施例]

以下，藉由實施例進一步詳細說明本發明，但並非藉此限定本發明之範圍。

＜實施例1＞ 使用Orexin 2 Receptor Reporter Assay Kit(Cayman Chemical Company)附屬品，測定被驗物質的食慾素受體拮抗劑活性。 在此評估系統中，係使用使食慾素受體表現於細胞表面之細胞。若促效劑(食慾素)結合至此食慾素受體，則會分泌出分泌型鹼性磷酸酶(SEAP)。使所分泌出之SEAP與鹼性磷酸酶基質進行反應，使用光度計測定SEAP的酵素活性。具有食慾素受體拮抗作用(食慾素受體拮抗劑作用)之物質使酵素活性減少。

(1)使用以成為終濃度10%之方式加入胎牛血清(FBS)而得之杜貝卡氏改良依格氏培養基(高葡萄糖)(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium-high glucose, With 4500 mg/L glucose, L-glutamine, sodium pyruvate, and sodium bicarbonate, liquid, sterile-filtered, suitable for cell culture)(Sigma-Aldrich公司)，以HEK293T細胞成為2.5×10⁵ cells/mL之方式進行調製。

(2)將(1)所調製出之包含HEK293T細胞之培養基每200μL接種於Orexin 2 Receptor Reporter Transfection Strip Plate。 (3)在5%CO₂ ，37℃條件下保溫培養16小時。

(4)除去上清液之後，以成為終濃度100μg/mL之方式添加吡咯并喹啉醌二鈉鹽(三菱氣體化學(股))，在5%CO₂ ，37℃條件下保溫培養1小時。使用杜貝卡氏改良依格氏培養基(高葡萄糖)(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium-high glucose, With 4500 mg/L glucose, L-glutamine, sodium pyruvate, and sodium bicarbonate, liquid, sterile-filtered, suitable for cell culture)(Sigma-Aldrich公司)當作溶媒。

(5)以成為終濃度50nM之方式添加食慾素A，在5%CO₂ ，37℃條件下保溫培養24小時。 (6)回收上清液。 (7)依照Orexin 2 Receptor Reporter Assay Kit(Cayman Chemical Company)附屬的實驗指南，測定上清液的酵素(SEAP)活性。

(8)在本試驗中，以添加蘇沃雷生1μM來代替吡咯并喹啉醌二鈉鹽之組作為陽性對照，以添加二甲基亞碸(DMSO)來代替吡咯并喹啉醌二鈉鹽之組作為陰性對照。以各組n＝3施行試驗。

作為食慾素受體拮抗劑作用之指標，將以上述方法測定酵素(SEAP)活性而得之結果(平均±標準誤差)示於圖1。圖1為示出陰性對照組(N.C.)、陽性對照組(P.C.)及吡咯并喹啉醌二鈉鹽添加組(PQQ)中之酵素活性之圖表。圖1所示之結果係以將陰性對照組的酵素活性視為1而得之相對值表示。 在此評估系統中，食慾素受體拮抗劑作用越強，酵素活性越降低。 如圖1所示，藉由添加吡咯并喹啉醌二鈉鹽100 μg/mL，而顯示出與蘇沃雷生1μM同等的食慾素受體拮抗劑作用。

＜實施例2＞ 針對實施例1之吡咯并喹啉醌二鈉鹽添加組，使用WST-8 Cell Proliferation Assay Kit(Cayman Chemical Company)，測定吡咯并喹啉醌二鈉鹽添加後之細胞增殖。測定方法係依照附屬的實驗指南。已知脫氫酵素活性係與活細胞的數量成正比。此套組為利用此原理，測定自細胞釋放至培養基中之脫氫酵素活性之套組。針對實施例1之陰性對照組及陽性對照組，亦以相同的方法測定DMSO或蘇沃雷生添加後之細胞增殖。 圖2為示出陰性對照組(N.C.)、陽性對照組(P.C.)及吡咯并喹啉醌二鈉鹽添加組(PQQ)中之脫氫酵素活性之圖表。結果(平均±標準誤差)係以將陰性對照組的脫氫酵素活性視為1而得之相對值表示。

如圖2所示，吡咯并喹啉醌二鈉鹽添加組相較於陽性對照、陰性對照而言，細胞數並未減少。由此，可認為實施例1中所觀察到之添加吡咯并喹啉醌二鈉鹽所引發之酵素活性的降低並非是由細胞死亡所造成，而是由對食慾素受體之拮抗劑作用所造成。

[圖1]圖1為示出陰性對照組(N.C.)、陽性對照組(P.C.)及吡咯并喹啉醌二鈉鹽添加組(PQQ)中之酵素活性之圖表。 [圖2]圖2為示出陰性對照組(N.C.)、陽性對照組(P.C.)及吡咯并喹啉醌二鈉鹽添加組(PQQ)中之脫氫酵素活性之圖表。

Claims (6)

1. 一種食慾素受體拮抗抑制用組成物，其包含吡咯并喹啉醌或其鹽作為有效成分。
2. 如請求項1之食慾素受體拮抗抑制用組成物，其中，吡咯并喹啉醌之鹽為吡咯并喹啉醌之鈉鹽。
3. 如請求項1或2之食慾素受體拮抗抑制用組成物，其係飲食品。
4. 如請求項1至3中任一項之食慾素受體拮抗抑制用組成物，其附有藉由食慾素受體拮抗作用所發揮之機能的標示。
5. 一種抑制食慾素結合至其受體之方法，其係投予吡咯并喹啉醌或其鹽。
6. 一種吡咯并喹啉醌或其鹽之用途，其係用於抑制食慾素結合至其受體。

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