TW202015721A - 抗間皮素構築體及其用途 - Google Patents
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Abstract
本申請案係關於抗間皮素構築體(諸如抗間皮素抗體、包含該等抗間皮素構築體之細胞激素融合蛋白)、製備該等抗間皮素構築體之方法及使用該等構築體之方法(例如治療疾病或病況之方法)。本申請案亦關於一種用於治療癌症之組合療法，其包含投與抗間皮素藥劑及細胞激素(諸如IL-21或IL-15)。組合療法可進一步包含投與抗Her2藥劑。
Description
本申請案係關於抗間皮素構築體(諸如抗間皮素抗體、包含抗間皮素構築體之細胞激素融合蛋白)及使用該等構築體之方法(例如治療疾病之方法)。本申請案亦關於用於治療疾病(諸如癌症)之組合療法。
間皮素為存在於腹膜、胸膜及心包體空腔之間皮內襯之細胞表面上的醣蛋白。其最初純化自人類胰臟癌細胞株HPC-Y5且顯示具有巨核細胞增強能力且因此稱為巨核細胞增強因子(MPF)(Yamaguchi等人 (1994) J. Biol. Chem. 269:805-808)。間皮素cDNA選殖於由HPC-Y5細胞株製備之文庫(Kojima等人 (1995) J. Biol. Chem. 270:21984-21990)。cDNA亦使用識別間皮瘤之單株抗體K1選殖(Chang及Pastan (1996) Proc. NatL. A cad. Sci. USA 93:136-40)。結構上，間皮素在細胞表面上表現為60 kDa前驅體多肽，其20蛋白分解加工成31 kDa脫落組分(對應於MPF)及40 kDa膜結合組分(Hassan等人 (2004) Clin. Cancer. Res. 10:3937-3942)。除了表現於正常間皮細胞上以外，間皮素亦過度表現於若干類型之人類腫瘤，包括所有間皮瘤、卵巢癌及胰臟癌，及一些胃癌、肺癌及子宮內膜癌中。舉例而言，間皮素表現於大約70%之所有卵巢癌、大約82%之乳頭狀漿液性腺癌、大約83%之所有胰臟腺癌及大約86%之所有導管胰臟腺癌上。
間皮素與CA125 (亦稱為MUC 16)特異性相互作用，CA125為先前鑑別為卵巢癌抗原的存在於腫瘤細胞表面上之黏蛋白樣醣蛋白。另外，CA1 25結合至膜結合間皮素介導異型細胞黏附且CA1 25及間皮素共表現於晚期卵巢腺癌中(Rump, A.等人 (2004) J.Bio.Chem. 279:9190-9198)。間皮素於腹膜內襯中之表現與卵巢癌之較佳轉移形成位點相關且認為間皮素-CA125結合促進卵巢腫瘤之腹膜轉移(Gubbels, J.A等人 (2006) Mol, Cancer 5:50)。
鑒於前述，對調節間皮素活性之額外藥劑有興趣。
本申請案提供經分離抗間皮素(抗MSLN)構築體，其包含有包含抗MSLN重鏈可變區(VH)之抗體部分，該VH包含：a)重鏈互補決定區(HC-CDR) 1，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 87、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 93、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 99、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 117及SEQ ID NO: 120；b) HC-CDR2，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 85、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 91、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 97、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 109、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 118及SEQ ID NO: 121；及c) HC-CDR3，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 83、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 89、SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 101、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 113、SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122。
本申請案亦提供經分離抗間皮素(抗MSLN)構築體，其包含有包含抗MSLN重鏈可變區(VH)之抗體部分，該VH包含：1)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；2)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；3)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；4)包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；5)包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；6)包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；7)包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；8)包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；9)包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；10)包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；11)包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；12)包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；13)包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；14)包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；15)包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；16)包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；17)包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；18)包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；19)包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；20)包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；21)包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；22)包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；23)包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；24)包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；25)包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；26)包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；27)包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；28)包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 103之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 104之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；29)包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 106之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 107之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；30)包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 109之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；31)包含SEQ ID NO: 111之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；32)包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 116之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；33)包含SEQ ID NO: 117之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 118之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 119之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體；或
34)包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 121之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 122之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5 (諸如4、3、2、1)個胺基酸取代之其變異體。
在根據上文所述之任何構築體之一些實施例中，HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3分別包含以下中之任一者之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列：如表10中所闡述之抗MSLN-1、抗MSLN-2、抗MSLN-3、抗MSLN-4、抗MSLN-5、抗MSLN-6、抗MSLN-7、抗MSLN-8、抗MSLN-9、抗MSLN-10、抗MSLN-11、抗MSLN-12、抗MSLN-13、抗MSLN-14、抗MSLN-15、抗MSLN-16、抗MSLN-17、抗MSLN-18、抗MSLN-19、抗MSLN-20、抗MSLN-21、抗MSLN-22、抗MSLN-23、抗MSLN-24、抗MSLN-25、抗MSLN-26、抗MSLN-27、抗MSLN-28、抗MSLN-29、抗MSLN-30、抗MSLN-31、抗MSLN-32、抗MSLN-33及抗MSLN-34。
本申請案提供經分離抗間皮素(抗MSLN)構築體，其包含有包含抗MSLN重鏈可變區(VH)之抗體部分，該VH包含：HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3，其分別在具有SEQ ID NO: 123-156及285-301中之任一者中所闡述之序列的VH鏈區內包含CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列。
在根據上文所述之任何構築體之一些實施例中，抗體部分為單域(sdAb)部分。在一些實施例中，結合至白蛋白之sdAb部分為駱駝、嵌合、人類、部分人類化或完全人類化的。
在根據上文所述之任何構築體之一些實施例中，抗體部分包含SEQ ID NO: 123-156及285-301中之任一者之胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 123-156及285-301中之任一者具有至少約80%序列一致性之其變異體。
在根據上文所述之任何構築體之一些實施例中，抗體部分包含VHH域，該VHH域包含SEQ ID NO: 123-156及285-301中之任一者之胺基酸序列，或在VHH域中包含至多約3個(諸如3、2、1個)胺基酸取代之其變異體。
在根據上文所述之任何構築體之一些實施例中，抗體部分具有減少之岩藻糖基化。
在根據上文所述之任何構築體之一些實施例中，構築體為進一步包含半衰期延長域之融合蛋白。在一些實施例中，半衰期延長域包含Fc域或白蛋白結合域。
在根據上文所述之任何構築體之一些實施例中，構築體為進一步包含細胞激素之融合蛋白。在一些實施例中，細胞激素為IL-21或IL-15。在一些實施例中，半衰期延長域包含Fc域或白蛋白結合域。在一些實施例中，構築體包含抗MSLN抗體部分與細胞激素之間的連接子。在一些實施例中，連接子包含SEQ ID NO: 66-74、267-282及307-324中之任一者之胺基酸序列。在一些實施例中，連接子為不可裂解的。在一些實施例中，連接子為可裂解的。
在根據上文所述之任何構築體之一些實施例中，構築體為進一步包含a)半衰期延長域；及b)細胞激素之融合蛋白。在一些實施例中，細胞激素為IL-21或IL-15。在一些實施例中，構築體包含抗MSLN抗體部分與細胞激素之間的連接子。在一些實施例中，連接子包含SEQ ID NO: 66-74、267-282及307-324中之任一者之胺基酸序列。在一些實施例中，連接子為不可裂解的。在一些實施例中，連接子為可裂解的。
在一些實施例中，半衰期延長域融合至抗MSLN抗體部分之N端。在一些實施例中，半衰期延長域融合至抗MSLN抗體部分之C端。在一些實施例中，細胞激素融合至抗MSLN抗體部分或半衰期延長域之N端。在一些實施例中，細胞激素融合至抗MSLN抗體部分或半衰期延長域之C端。
本申請案亦提供編碼上文所述之抗MSLN構築體中之任一者的聚核苷酸。
本申請案亦提供核酸構築體，其包含本文所描述之任何聚核苷酸，視情況進一步包含與聚核苷酸有效連接之啟動子。
本申請案亦提供包含上文所述之核酸構築體中之任一者的載體。
本申請案亦提供宿主細胞，其包含上文所述之聚核苷酸、核酸構築體或載體中之任一者。
本申請案亦提供培養基，其包含本文所述之抗MSLN構築體或宿主細胞中之任一者。
本申請案亦提供套組，其包含：a)上文所述之抗MSLN構築體、聚核苷酸、核酸構築體、載體、宿主細胞或培養基中之任一者；及b)說明書。
本申請案亦提供醫藥組合物，其包含上文所述之抗MSLN構築體中之任一者及醫藥學上可接受之載劑。
本申請案亦提供治療個體之疾病或病況之方法，其包含向該個體投與上文所述之抗MSLN構築體中之任一者。
本申請案亦提供治療個體之疾病或病況之方法，其包含投與包含特異性結合於間皮素之抗MSLN抗體部分的抗MSLN構築體，其中抗MSLN抗體部分具有減少之岩藻糖基化。
在根據上文所述之任何方法之一些實施例中，疾病或病況為癌症。在一些實施例中，癌症為間皮素陽性癌症。在一些實施例中，癌症為實體癌症。在一些實施例中，癌症選自由以下組成之群：胃癌、肺癌、卵巢癌、食道癌、胰臟癌、子宮頸癌、間皮瘤及乳癌。在一些實施例中，癌症為胃癌或肺癌。
在根據上文所述之任何方法之一些實施例中，該方法進一步包含向個體投與第二藥劑。在一些實施例中，第二藥劑包含細胞激素。在一些實施例中，細胞激素為IL-21或IL-15。在一些實施例中，IL-21或IL-15呈包含半衰期延長域之融合蛋白的形式。在一些實施例中，IL-21包含在SEQ ID NO: 1之C端缺少1-11個胺基酸之IL-21變異體。
本申請案亦提供治療個體之間皮素陽性癌症之方法，其包含向該個體投與a)抗間皮素藥劑；b)抗Her2藥劑；及c) IL-21。在一些實施例中，IL-21或IL-15呈包含半衰期延長域之融合蛋白的形式。在一些實施例中，IL-21包含在SEQ ID NO: 1之C端缺少1-11個胺基酸之IL-21變異體。在一些實施例中，抗Her2藥劑為賀癌平(Herceptin)。在一些實施例中，抗間皮素藥劑包含有包含抗MSLN重鏈可變區(VH)之抗間皮素抗體部分，該VH包含：HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3，其分別在具有SEQ ID NO: 123-156及285-301中之任一者中所闡述之序列的VH鏈區內包含CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列。
在根據上文所述之任何方法之一些實施例中，該個體為人類。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張2018年6月18日申請之美國臨時申請案序號62/686,481及2019年2月22日申請之美國臨時申請案序號62/809,496之優先權。此等申請案之全部內容出於所有目的以引用之方式併入本文中。
本發明提供包含IL-21或其變異體之新穎融合蛋白。本文提供之融合蛋白包含IL-21或其變異體、白蛋白結合分子及結合至抗原(例如癌症抗原)之結合分子，其中IL-21或其變異體經由第一連接子連接至白蛋白結合分子，且其中白蛋白結合分子經由第二連接子連接至結合分子。圖1說明本文提供之例示性融合蛋白。
本文揭示之融合蛋白提供許多優勢。舉例而言，在一些實施例中，本發明融合蛋白中結合至癌症抗原(例如實體腫瘤癌症抗原，諸如MSLN)之結合分子使得能夠將IL-21局部遞送至癌症附近，導致較低脫靶毒性且增加功效。
本發明融合蛋白由於其三級結構及總體組態設計而提供某些優勢。舉例而言，在一些實施例中，藉由將具有MMP敏感性連接子之IL-21置放於靶向癌症抗原之結合分子及ABD (或抗HSA)之後，IL-21與IL-21R之相互作用經臨時阻斷，因為其相互作用需要IL-21之N端(接近三級結構中之C端)。當IL-21結合至癌症抗原時，其自融合蛋白釋放，因為已知癌細胞分泌各種MMP，該等MMP將裂解IL-21與ABD或抗白蛋白抗體之間的連接子。MMP敏感性連接子確保癌症(其通常具有較高MMP活性)較高地暴露於活性IL-21。因此，可避免IL-21之不必要的毒性及副作用。另外，在此類實施例中，藉由防止外周免疫細胞上IL-21與IL-21Rα之間的相互作用，IL-21融合蛋白之癌症遞送效率可增加。
在某些實施例中，與無白蛋白結合分子之融合蛋白相比，本文提供之融合蛋白中白蛋白結合分子之存在可增加循環半衰期，導致癌症在較長時段內之較高藥物暴露。
在某些實施例中，具有相對較小分子量之sdAb用於本文提供之融合蛋白，該sdAb可有助於增加融合蛋白之癌症滲透，使其更適合於治療某些癌症，例如實體腫瘤癌症。
本申請案提供包含抗MSLN抗體部分之抗間皮素構築體，該抗體部分包含特異性結合至抗間皮素之單域抗體。在一些實施例中，抗間皮素構築體(諸如單域抗MSLN抗體)展現有利效應(諸如殺死腫瘤細胞，諸如治療個體之腫瘤)。在一些實施例中，抗MSLN構築體為單域抗MSLN抗體。在一些實施例中，抗MSLN構築體為包含抗MSLN抗體部分及第二域之融合蛋白。在一些實施例中，第二域為半衰期延長域。在一些實施例中，第二域為細胞激素。在一些實施例中，抗MSLN構築體包含融合蛋白，該融合蛋白包含a)如本文所述之抗MSLN抗體部分，b)第二域(諸如半衰期延長域)，及c)第三域(諸如細胞激素)。
本申請案另外提供治療疾病或病況(諸如癌症)之方法，其藉由向個體投與抗間皮素構築體，諸如本文所述之彼等中之任一者。在一些實施例中，方法進一步包含投與第二藥劑，諸如細胞激素。
本申請案另外提供治療疾病(諸如癌症，諸如間皮素陽性癌症，諸如胃癌)之方法，其包含投與a)抗間皮素構築體，諸如如本文所述之抗MSLN構築體中之任一者，b)細胞激素(諸如IL-21)；c)抗Her2藥劑。在一些實施例中，如以上方法中所述之組合療法展現協同作用。
此外，本發明提供靶向癌症抗原(例如MSLN)之新穎抗體，其在作為本文提供之融合蛋白之部分時允許將IL-21高效遞送至癌症。
在某些實施例中，藉由在本文提供之IL-21融合蛋白中具有多種靶向一或多種癌症抗原之抗體來提供優勢。舉例而言，在一些實施例中，具有兩個各自靶向癌症抗原(例如MSLN)之不同域的sdAb增加癌細胞結合之親合力。
上述及其他特性使得本文提供之融合蛋白成為癌症療法之有利候選物。
定義
本文中描述或提及之技術及程序包括熟習此項技術者使用習知方法，諸如Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第3版 2001)；Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel等人編, 2003)；Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An編 2009)；Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols
(Albitar編 2010)；及Antibody Engineering
第1及2卷(Kontermann and Dübel編, 第2版 2010)中所述之廣泛使用之方法而總體上充分理解及/或通常採用之彼等。
除非本文另外定義，否則用於本說明書中之技術及科學術語具有一般熟習此項技術者通常所理解之含義。出於解釋本說明書之目的，將應用以下術語說明且只要合適，以單數形式使用之術語亦將包括複數且反之亦然。在所列術語之任何描述與以引用之方式併入本文中之任何文獻存在衝突之情況下，以下文闡述之術語描述為準。
術語「結合分子」係指包含結合至目標或抗原之部分(例如一或多個結合區，諸如CDR)及視情況存在之骨架或構架部分(例如一或多個骨架或構架區)之蛋白質，該骨架或構架部分允許結合部分採用促進結合蛋白結合至多肽、片段或抗原決定基之構形。在本發明之上下文中，結合分子例如在解離常數(KD
)為≤10- 6
M時稱為特異性結合或選擇性結合至抗原。在一些實施例中，結合分子可以約10- 6
M至約10- 12
M之KD
特異性結合至抗原。在某些實施例中，結合分子可在KD
≤10- 7
M或KD
≤10- 8
M時以高親和力特異性結合至抗原。在一個實施例中，結合分子可以如藉由OCTET®
所量測之1×10- 8
M至10×10- 8
M之KD
特異性結合至純化人類抗原。在一個實施例中，結合分子可以如藉由OCTET®
所量測之1×10- 9
M至10×10- 9
M之KD
特異性結合至純化人類抗原。在另一實施例中，結合分子以0.1×10- 9
M至10×10- 9
M之KD
特異性結合於細胞上表現之人類抗原。在某些實施例中，結合分子以約0.1×10- 9
M、約0.5×10- 9
M、約1×10- 9
M、約5×10- 9
M、約10×10- 9
M或其任何範圍或區間之KD
特異性結合於細胞上表現之人類抗原。術語「結合分子」包括抗體及衍生自抗體之分子。如本文所用之術語「結合分子」包括與親本完整抗體相比，對抗原具有相對較低親和力之抗體片段(例如單域抗體)。
術語「抗體」、「免疫球蛋白」或「Ig」在本文中可互換使用，且在最廣泛意義上使用且特定涵蓋例如單株抗體(包括促效劑、拮抗劑、中和抗體、全長或完整單株抗體)、具有多抗原決定基或單抗原決定基特異性之抗體組合物、多株或單價抗體、多價抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體，只要其展現所需生物活性)(由至少兩種完整抗體形成)、單鏈抗體及其片段，如下所述。抗體可為人類、人類化、嵌合及/或親和力成熟的，以及來自其他物種，例如小鼠及兔等的抗體。術語「抗體」意欲包括多肽之免疫球蛋白類別內之B細胞的多肽產物，其能夠結合至特異性分子抗原且由兩個相同的多肽鏈對構成，其中各對具有一條重鏈(約50-70 kDa)及一條輕鏈(約25 kDa)，各鏈之各胺基端部分包括約100至約130個或更多個胺基酸之可變區，且各鏈之各羧基端部分包括恆定區。參見例如Antibody Engineering
(Borrebaeck編, 第2版 1995)；及Kuby,Immunology
(第3版 1997)。在特定實施例中，特異性分子抗原可與本文提供之抗體(包括多肽或抗原決定基)結合。抗體亦包括但不限於合成抗體、重組產生之抗體、駱駝化抗體或其人類化變異體、胞內抗體、抗個體基因型(抗Id)抗體，及以上中之任一者之功能片段(例如抗原結合片段)，該等功能片段係指抗體重鏈或輕鏈多肽之一部分，該部分保留衍生該片段之抗體的一些或全部結合活性。功能片段(例如抗原結合片段)之非限制性實例包括單鏈Fv (scFv)(例如包括單特異性、雙特異性等)、Fab片段、F(ab')片段、F(ab)2
片段、F(ab')2
片段、二硫鍵連接的Fv (dsFv)、Fd片段、Fv片段、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體及微型抗體。特定言之，本文所提供之抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，例如含有結合至抗原之抗原結合位點的抗原結合域或分子(例如抗體之一或多個CDR)。此類抗體片段可見於例如Harlow及Lane,Antibodies : A Laboratory Manual
(1989)；Mol . Biology and Biotechnology : A Comprehensive Desk Reference
(Myers編, 1995)；Huston等人, 1993, Cell Biophysics 22:189-224；Plückthun及Skerra, 1989, Meth. Enzymol. 178:497-515；及Day,Advanced Immunochemistry
(第2版 1990)。本文所提供之抗體可屬於免疫球蛋白分子之任何類別(例如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)或任何子類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。抗體可為促效性抗體或拮抗性抗體。
「抗原」為抗體可選擇性結合之結構。靶抗原可為多肽、碳水化合物、核酸、脂質、半抗原或其他天然存在的或合成的化合物。在一些實施例中，目標抗原為多肽。在某些實施例中，抗原與細胞相關，例如在細胞，例如癌細胞(例如實體腫瘤癌細胞)之上或之中。
「完整」抗體為包含抗原結合位點以及CL及至少重鏈恆定區CH1、CH2及CH3之抗體。恆定區可包括人類恆定區或其胺基酸序列變異體。在某些實施例中，完整抗體具有一或多種效應功能。
術語「抗原結合片段」、「抗原結合域」、「抗原結合區」及類似術語係指結合分子之該部分，其包含與抗原相互作用且賦予結合劑針對抗原之特異性及親和力的胺基酸殘基(例如CDR)。如本文所用之「抗原結合片段」包括「抗體片段」，其包含完整抗體之一部分，諸如完整抗體之抗原結合或可變區。抗體片段之實例包括但不限於Fab、Fab'、F(ab')2
及Fv片段；雙功能抗體及二-雙功能抗體(參見例如Holliger等人, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. 90:6444-48；Lu等人, 2005, J. Biol. Chem. 280:19665-72；Hudson等人, 2003, Nat. Med. 9:129-34；WO 93/11161；及美國專利第5,837,242號及第6,492,123號)；單鏈抗體分子(參見例如美國專利第4,946,778號；第5,260,203號；第5,482,858號；及第5,476,786號)；雙可變域抗體(參見例如美國專利第7,612,181號)；單可變域抗體(sdAb)(參見例如Woolven等人, 1999, Immunogenetics 50: 98-101；及Streltsov等人, 2004, Proc Natl Acad Sci USA. 101:12444-49)；及由抗體片段形成之多特異性抗體。
如本文所用之「單域抗體」或「sdAb」係指互補決定區為單域多肽之一部分的抗體。實例包括但不限於重鏈抗體、天然缺乏輕鏈之抗體、源自習知4鏈抗體之單域抗體、經工程改造之抗體及除源自抗體之骨架以外的單域骨架。單域抗體可為此項技術中之任一者，或任何未來的單域抗體。單域抗體可源自任何物種，包括但不限於小鼠、人類、駱駝、駱馬、山羊、兔、牛。根據本發明之一態樣，如本文所用之單域抗體為稱為缺乏輕鏈之重鏈抗體的單域抗體。此類單域抗體揭示於例如WO 9404678中。出於明晰之原因，在某些情況下，源自天然地缺乏輕鏈之重鏈抗體的此可變域在本文中稱為VHH或奈米抗體，以將其與四鏈免疫球蛋白之習知VH區分開。該VHH分子可源自駱駝科物種(例如駱駝、單峰駝、羊駝及栗色駱馬)中產生之抗體。除駱駝科以外的其他物種可產生天然缺乏輕鏈之重鏈抗體；此類VHH在本發明之範疇內。在一些實施例中，本文提供之單域抗體具有結構FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
術語「結合(binds)」或「結合(binding)」係指分子間的相互作用，包括例如形成複合物。相互作用可為例如非共價相互作用，包括氫鍵、離子鍵、疏水相互作用及/或凡得瓦爾相互作用(van der Waals interaction)。複合物亦可包括藉由共價或非共價鍵、相互作用或力保持在一起的兩個或更多個分子之結合。抗體上之單一抗原結合位點與目標分子(諸如抗原)之單一抗原決定基之間的總非共價相互作用強度為抗體或功能片段針對該抗原決定基之親和力。結合分子(例如抗體)與單價抗原之解離速率(koff
)與結合速率(kon
)之比(koff
/kon
)為解離常數KD
，其與親和力負相關。KD
值愈低，抗體親和力愈高。KD
值因抗體與抗原之不同複合物而變化且視kon
及koff
兩者而定。本文所提供之抗體的解離常數KD
可使用本文所提供之任何方法或熟習此項技術者熟知之任何其他方法測定。一個結合位點處之親和力並不始終反映抗體與抗原之間的相互相用的真實強度。當含有多個、重複抗原決定子之複雜抗原(諸如多價抗原)與含有多個結合位點之抗體接觸時，一個位點處抗體與抗原之相互相用將增加第二個位點處的反應機率。多價抗體與抗原之間的此類多重相互作用之強度稱為親合力。
與本文所述之結合分子結合，諸如「結合至」、「特異性結合至」之術語及類似術語亦在本文中可互換使用且係指抗原結合域之結合分子，其特異性結合至抗原，諸如多肽。結合至或特異性結合至抗原之結合分子或抗原結合域可與相關抗原交叉反應。在某些實施例中，結合至或特異性結合至抗原之結合分子或抗原結合域不與其他抗原交叉反應。結合至或特異性結合至抗原之結合分子或抗原結合域可例如藉由免疫分析、Octet®
、Biacore®
或熟習此項技術者已知之其他技術鑑別。在一些實施例中，如使用諸如放射免疫分析(RIA)及酶聯免疫吸附分析(ELISA)之實驗技術測定，當結合分子或抗原結合域以比針對任何交叉反應性抗原更高的親和力結合至抗原時，其結合至或特異性結合至抗原。通常，特異性或選擇性反應將至少為兩倍背景信號或雜訊且可超過10倍背景。關於結合特異性之論述，參見例如Fundamental Immunology
332-36 (Paul編, 第2版, 1989)。在某些實施例中，結合分子或抗原結合域結合至「非目標」蛋白質之程度小於結合分子或抗原結合域結合至其特定目標抗原之約10%，例如如藉由螢光活化細胞分選(FACS)分析或RIA所測定。諸如「特異性結合」、「特異性結合至」或「特異性針對」之術語意謂可量測地不同於非特異性相互作用之結合。特異性結合可例如藉由與對照分子之結合相比測定分子之結合來量測，對照分子通常係不具有結合活性之具有類似結構的分子。舉例而言，可藉由與目標(例如過量的未標記之目標)類似之對照分子之競爭來測定特異性結合。在此情況下，若經標記之目標與探針之結合受過量的未標記目標競爭性抑制，則指示特異性結合。結合至抗原之結合分子或抗原結合域包括能夠以足夠親和力結合抗原，使得結合分子適用作例如靶向抗原之診斷劑的結合分子或抗原結合域。在某些實施例中，結合至抗原之結合分子或抗原結合域的解離常數(KD
)為小於或等於1000 nM、800 nM、500 nM、250 nM、100 nM、50 nM、10 nM、5 nM、4 nM、3 nM、2 nM、1 nM、0.9 nM、0.8 nM、0.7 nM、0.6 nM、0.5 nM、0.4 nM、0.3 nM、0.2 nM或0.1 nM。在某些實施例中，結合分子或抗原結合域結合至抗原之抗原決定基，其在來自不同物種(例如在人類與獼猴物種之間)之抗原中保守。
「結合親和力」通常指分子(例如結合蛋白，諸如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的總非共價相互作用之強度。除非另外指明，否則如本文所用，「結合親和力」係指反映結合對(例如抗體與抗原)成員之間的1:1相互作用之固有結合親和力。結合分子X對其結合搭配物Y之親和力通常可由解離常數(KD
)表示。可藉由此項技術中已知之常用方法(包括本文所描述之彼等方法)來量測親和力。低親和力抗體一般緩慢結合抗原且傾向於容易分解，而高親和力抗體一般較快結合抗原且傾向於較長時間保持結合狀態。此項技術中已知多種量測結合親和力的方法，其中任一者可用於本發明之目的。特定說明性實施例包括以下。在一個實施例中，「KD
」或「KD
值」可藉由此項技術中已知的分析量測，例如藉由結合分析。KD
可用RIA量測，例如使用所關注抗體之Fab型式及其抗原進行(Chen等人, 1999, J. Mol Biol 293:865-81)。KD
或KD
值亦可藉由使用生物層干涉法(BLI)或表面電漿子共振(SPR)分析藉由Octet®，使用例如Octet®Red96系統，或藉由Biacore®，使用例如Biacore®TM-2000或Biacore®TM-3000來量測。「結合速率(on-rate)」或「結合之速率(rate of association)」或「結合速率(association rate)」或「kon」亦可用上述之相同生物層干涉法(BLI)或表面電漿子共振(SPR)技術，使用例如Octet®Red96、Biacore®TM-2000或Biacore®TM-3000系統來測定。
在某些實施例中，結合分子或抗原結合域可包含「嵌合」序列，其中重鏈及/或輕鏈之一部分與衍生自特定物種或屬於特定抗體類別或子類之抗體中之對應序列相同或同源，而鏈之剩餘部分與衍生自另一物種或屬於另一抗體類別或子類之抗體(以及此類抗體之片段，只要其展現所需生物活性)中之對應序列相同或同源(參見美國專利第4,816,567號；及Morrison等人, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-55)。
在某些實施例中，結合分子或抗原結合域可包含非人類(例如鼠類)抗體之「人類化」形式部分，其為包括人類免疫球蛋白之嵌合抗體(例如接受者抗體)，其中原生CDR殘基經來自具有所需特異性、親和力及能力之非人類物種(例如供體抗體)，諸如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物之對應CDR的殘基置換。在一些情況下，人類免疫球蛋白之一或多個FR區殘基由相應的非人類殘基置換。此外，人類化抗體可包含在接受者抗體或供體抗體中未發現之殘基。進行此等修飾以進一步改進抗體效能。人類化抗體重鏈或輕鏈可包含基本上所有至少一或多種可變區，其中所有或基本上所有CDR對應於非人類免疫球蛋白之CDR且所有或基本上所有FR係人類免疫球蛋白序列之FR。在某些實施例中，人類化抗體將包含免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分，通常人類免疫球蛋白之至少一部分。關於其他細節，參見Jones等人, 1986, Nature 321:522-25；Riechmann等人, 1988, Nature 332:323-29；Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-96；Carter等人, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-89；美國專利第6,800,738號；第6,719,971號；第6,639,055號；第6,407,213號；及第6,054,297號。
在某些實施例中，結合分子或抗原結合域可包含「全人類抗體」或「人類抗體」之部分，其中該等術語在本文中可互換使用且係指包含人類可變區及例如人類恆定區之抗體。在特定實施例中，該等術語係指包含人源性可變區及恆定區的抗體。在某些實施例中，「全人類」抗體亦可涵蓋結合多肽且由為人類生殖系免疫球蛋白核酸序列之天然存在之體細胞變異體之核酸序列編碼的抗體。術語「全人類抗體」包括具有對應於人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的抗體，該等人類生殖系免疫球蛋白序列如由Kabat等人所描述(參見Kabat等人 (1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest ,
第五版, U.S. Department of Health and Human Services, NIH公開號91-3242)。「人類抗體」為胺基酸序列對應於由人類產生之抗體之胺基酸序列及/或已使用任何製造人類抗體之技術製得之抗體。人類抗體之此定義特別排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。人類抗體可使用此項技術中已知之各種技術產生，包括噬菌體呈現文庫(Hoogenboom及Winter, 1991, J. Mol. Biol. 227:381；Marks等人, 1991, J. Mol. Biol. 222:581)及酵母呈現文庫(Chao等人, 2006, Nature Protocols 1: 755-68)。Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy
77 (1985)；Boerner等人, 1991, J. Immunol. 147(1):86-95；及van Dijk及van de Winkel, 2001, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74中所述之方法亦可用於製備人類單株抗體。人類抗體可藉由向已經修飾以回應於抗原刺激而產生此類抗體，但其內源性基因座經禁用之轉殖基因動物(例如小鼠)投與抗原來製備(參見例如Jakobovits, 1995, Curr. Opin. Biotechnol. 6(5):561-66；Brüggemann及Taussing, 1997, Curr. Opin. Biotechnol. 8(4):455-58；及美國專利第6,075,181號及第6,150,584號，關於XENOMOUSETM
技術)。關於經由人類B細胞融合瘤技術產生之人類抗體，亦參見例如Li等人, 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-62。
在某些實施例中，結合分子或抗原結合域可包含「重組人類抗體」之部分，其中該片語包括藉由重組方法製備、表現、產生或分離之人類抗體，諸如使用轉染至宿主細胞中之重組表現載體表現之抗體，自重組、組合人類抗體文庫分離之抗體，自對於人類免疫球蛋白基因而言為轉殖基因及/或轉殖染色體之動物(例如小鼠或母牛)分離之抗體(參見例如Taylor, L. D.等人 (1992)Nucl . Acids Res .
20:6287-6295)，或藉由涉及將人類免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列之任何其他方法製備、表現、產生或分離之抗體。此類重組人類抗體可具有衍生自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區(參見Kabat, E. A.等人 (1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest
, 第五版, U.S. Department of Health and Human Services, NIH公開號91-3242)。然而，在某些實施例中，該等重組人類抗體可經受活體外突變誘發(或當使用人類Ig序列之動物轉殖基因時，為活體內體細胞突變誘發)，且因此重組抗體之VH及VL區之胺基酸序列雖然衍生自且關於人類生殖系VH及VL序列，但該等胺基酸序列為可不活體內天然存在於人類抗體生殖系抗體庫內之序列。
在某些實施例中，結合分子或抗原結合域可包含「單株抗體」之部分，其中如本文所用之術語係指獲自基本上均質抗體群體之抗體，例如包含該群體之個別抗體為相同的，除了可少量存在的可能的天然存在之突變，且各單株抗體將通常識別抗原上之單一抗原決定基。在特定實施例中，如本文所用之「單株抗體」為由單一融合瘤或其他細胞產生之抗體。術語「單株」不限於用於製造抗體之任何特定方法。舉例而言，適用於本發明之單株抗體可藉由首先由Kohler等人, 1975, Nature 256:495描述之融合瘤方法製備，或可使用重組DNA方法在細菌或真核動物或植物細胞中製得(參見例如美國專利第4,816,567號)。「單株抗體」亦可使用例如Clackson等人, 1991, Nature 352:624-28及Marks等人, 1991, J. Mol. Biol., 222:581-97中所述之技術自噬菌體抗體文庫分離。用於製備純系細胞株及由其表現之單株抗體的其他方法為此項技術中熟知的。參見例如Short Protocols in Molecular Biology
(Ausubel等人編, 第5版. 2002)。
典型4鏈抗體單元係由兩條相同輕(L)鏈及兩條相同重(H)鏈組成的雜四聚醣蛋白。在IgG的情況下，4鏈單元通常係約150,000道爾頓。各L鏈經一個共價二硫鍵連接至H鏈，而兩條H鏈取決於H鏈同型而經一或多個二硫鍵彼此連接。各H鏈及L鏈亦具有有規律間隔之鏈內二硫橋鍵。各Ｈ鏈在N端具有可變域(VH)，接著為各α及γ鏈之三個恆定域(CH)以及μ及ε同型之四個CH域。各L鏈在N端具有可變域(VL)，接著在其另一端為恆定域(CL)。將VL與VH比對，且將CL與重鏈之第一恆定域(CH1)比對。咸信特定胺基酸殘基在輕鏈與重鏈可變域之間形成界面。VH及VL之配對在一起形成單一抗原結合位點。關於不同類別之抗體的結構及特性，參見例如Basic and Clinical Immunology
71 (Stites等人編, 第8版 1994)；及Immunobiology
(Janeway等人編, 第5版 2001)。
術語「Fab」或「Fab區」係指結合至抗原之抗體區。習知IgG通常包含兩個Fab區，各駐留於Y形IgG結構之兩個臂中之一者上。各Fab區通常由重鏈及輕鏈中之每一者之一個可變區及一個恆定區構成。更特定言之，Fab區中之重鏈之可變區及恆定區為VH及CH1區，且Fab區中之輕鏈之可變區及恆定區為VL及CL區。Fab區中之VH、CH1、VL及CL可以各種方式配置以根據本發明賦予抗原結合能力。舉例而言，VH及CH1區可在一個多肽上，且VL及CL區可在獨立多肽上，類似於習知IgG之Fab區。或者，VH、CH1、VL及CL區可全部在相同多肽上且以如以下部分中更詳細描述之不同次序定向。
術語「可變區」、「可變域」、「V區」或「V域」係指抗體之輕鏈或重鏈的一部分，其通常位於輕鏈或重鏈之胺基端且在重鏈中長度為約120至130個胺基酸且在輕鏈中長度為約100至110個胺基酸，且用於各特定抗體對其特定抗原之結合及特異性。重鏈之可變區可稱為「VH」。輕鏈之可變區可稱為「VL」。術語「可變」係指可變區之某些區段在抗體中之序列方面廣泛不同之事實。V區介導抗原結合且定義特定抗體對其特定抗原之特異性。然而，可變性在可變區之110個胺基酸跨距內不均勻分佈。替代地，V區由約15-30個胺基酸之稱作構架區(FR)之較不可變(例如相對恆定)伸長部組成，FR由長度各為約9-12個胺基酸之稱作「高變區」之較大可變性(例如極端可變性)之較短區分離。重鏈及輕鏈之可變區各自包含由三個高變區連接之四個FR，該等FR大部分採用β片層組態，該等高變區形成連接β片層結構之環且在一些情況下形成β片層結構之一部分。各鏈中之高變區藉由FR且與來自其他鏈之高變區緊密結合在一起，促進形成抗體之抗原結合位點(參見例如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest
(第5版 1991))。恆定區不直接涉及抗體與抗原之結合，但呈現多種效應功能，諸如使抗體參與抗體依賴性細胞細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)。可變區在不同抗體之間的序列方面廣泛不同。在特定實施例中，可變區為人類可變區。
術語「根據Kabat之可變區殘基編號」或「如Kabat中之胺基酸位置編號」及其變化形式係指Kabat等人, 前述中用於編譯抗體之重鏈可變區或輕鏈可變區的編號系統。使用此編號系統，實際線性胺基酸序列可含有對應於可變域之FR或CDR之縮短或插入的較少或額外胺基酸。舉例而言，重鏈可變域可包括殘基52之後的單一胺基酸插入(根據Kabat之殘基52a)及殘基82之後的三個插入殘基(例如根據Kabat之殘基82a、82b及82c等)。對於既定抗體，可藉由將抗體序列之同源區與「標準」Kabat編號序列比對來確定殘基之Kabat編號。Kabat編號系統一般在提及可變域中之殘基(大致輕鏈之殘基1-107及重鏈之殘基1-113)時使用(例如Kabat等人, 前述)。「EU編號系統」或「EU指數」一般在提及免疫球蛋白重鏈恆定區中之殘基時使用(例如Kabat等人, 前述中報導之EU指數)。「如Kabat中之EU指數」係指人類IgG1 EU抗體之殘基編號。已藉由例如AbM、Chothia、Contact、IMGT及AHon描述其他編號系統。
當參考抗體使用時，術語「重鏈」係指約50-70 kDa之多肽鏈，其中胺基端部分包括約120至130個或更多個胺基酸之可變區，且羧基端部分包括恆定區。恆定區可為基於重鏈恆定區之胺基酸序列，稱為alpha (α)、delta (δ)、epsilon (ε)、gamma (γ)及mu (µ)之五種不同類型(例如同型)中之一者。不同重鏈之尺寸不同：α、δ及γ含有約450個胺基酸，而µ及ε含有約550個胺基酸。當與輕鏈組合時，此等不同類型之重鏈產生抗體之五種熟知類別(例如同型)，分別為IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，包括IgG之四個子類，亦即IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。
當參考抗體使用時，術語「輕鏈」係指約25 kDa之多肽鏈，其中胺基端部分包括約100至約110個或更多個胺基酸之可變區，且羧基端部分包括恆定區。輕鏈之大致長度為211至217個胺基酸。基於恆定域之胺基酸序列，存在兩種不同類型，稱為kappa (κ)或lambda (λ)。
如本文所用，術語「高變區」、「HVR」、「互補決定區」及「CDR」可互換使用。「CDR」係指免疫球蛋白(Ig或抗體)VH β-片層構架之非構架區內的三個高變區(H1、H2或H3)之一，或抗體VL β-片層構架之非構架區內的三個高變區(L1、L2或L3)之一。因此，CDR為構架區序列內穿插之可變區序列。
CDR區已為熟習此項技術者熟知且已由熟知編號系統定義。舉例而言，Kabat互補決定區(CDR)係基於序列可變性且最常用(參見例如Kabat等人, 前述)。而Chothia涉及結構環之位置(參見例如Chothia及Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-17)。使用Kabat編號規約進行編號時，Chothia CDR-H1環末端在H32與H34之間變化，此視環的長度而定(此原因為Kabat編號方案將插入置於H35A及H35B；若既不存在35A、亦不存在35B，則環末端位於32；若僅存在35A，則環末端位於33；若35A與35B均存在，則環末端位於34)。AbM高變區代表Kabat CDR與Chothia結構環之間的平衡，且被Oxford Molecular的AbM抗體模型化軟體使用(參見例如Antibody Engineering
第2卷 (Kontermann及Dübel編, 第2版, 2010))。「contact」高變區係基於可用複合晶體結構之分析。已開發及廣泛採用之另一通用編號系統為ImMunoGeneTics (IMGT)Information System®
(Lafranc等人, 2003, Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77)。IMGT為專用於人類及其他脊椎動物之免疫球蛋白(IG)、T細胞受體(TCR)及主要組織相容複合體(MHC)的整合式資訊系統。本文中，關於胺基酸序列及輕鏈或重鏈內的位置提及CDR。由於免疫球蛋白可變域結構內之CDR的「位置」在物種之間保守且存在於稱為環的結構中，因此藉由使用根據結構特徵來比對可變域序列的編號系統易於鑑別出CDR及構架殘基。此資訊可用於將來自一個物種之免疫球蛋白之CDR殘基接枝及置換至通常來自人類抗體之受體架構中。Honegger及Plückthun, 2001, J. Mol. Biol. 309: 657-70已開發出另一種編號系統(AHon)。編號系統(包括例如Kabat編號及IMGT獨特編號系統)之間的一致性已為熟習此項技術者熟知(參見例如Kabat, 前述；Chothia及Lesk, 前述；Martin, 前述；Lefranc等人, 前述)。來自此等高變區或CDR中之每一者的殘基標示於下文中。表 1 
給定CDR之邊界可視用於鑑別之方案而變化。因此，除非另外規定，否則術語給定抗體之「CDR」及「互補決定區」或其區，諸如可變區，以及抗體之個別CDR (例如CDR-H1、CDR-H2)或其區應理解為涵蓋如由上文所描述之已知方案中之任一者所定義之互補決定區。在一些情況下，指定用於鑑別一或多個特定CDR之方案，諸如如藉由Kabat、Chothia或Contact方法所定義之CDR。在其他情況下，給出CDR之特定胺基酸序列。
高變區可包含如下「延伸高變區」：VL中之24-36或24-34 (L1)、46-56或50-56 (L2)，及89-97或89-96 (L3)；及VH中的26-35或26-35A (H1)、50-65或49-65 (H2)及93-102、94-102或95-102 (H3)。
術語「恆定區」或「恆定域」係指輕鏈及重鏈之羧基端部分，其不直接涉及抗體與抗原之結合，但展現多種效應功能，諸如與Fc受體之相互相用。該術語係指免疫球蛋白分子之一部分，該部分相對於該免疫球蛋白之含有抗原結合位點的另一部分(可變區)具有更保守胺基酸序列。恆定區可以含有重鏈之CH1、CH2及CH3區以及輕鏈之CL區。
術語「構架」或「FR」係指側接CDR之可變區殘基。FR殘基存在於例如嵌合、人類化、人類、域抗體、雙功能抗體、線形抗體及雙特異性抗體中。FR殘基係除高變區殘基或CDR殘基以外的可變域殘基。
在本文中，術語「Fc區」用於定義免疫球蛋白重鏈之C端區域，包括例如原生序列Fc區、重組型Fc區及變異型Fc區。儘管免疫球蛋白重鏈之Fc區之邊界可變化，但人類IgG重鏈Fc區通常定義為自位置Cys226之胺基酸殘基或自Pro230延伸至其羧基端。可移除Fc區之C端離胺酸(殘基447，根據EU編號系統)，例如在抗體之製備或純化期間，或藉由以重組方式工程改造編碼抗體之重鏈的核酸。因此，完整抗體之組合物可包含所有K447殘基均被移除之抗體群體、K447殘基未移除之抗體群體及含有具有及不具有K447殘基之抗體之混合物的抗體群體。「功能性Fc區」具有原生序列Fc區之「效應功能」。例示性「效應功能」包括C1q結合；CDC；Fc受體結合；ADCC；吞噬作用；下調細胞表面受體(例如B細胞受體)等。此類效應功能一般需要Fc區與結合區或結合域(例如抗體可變區或域)組合且可使用熟習此項技術者已知之各種分析評估。「變異型Fc區」包含藉助於至少一個胺基酸修飾(例如取代、添加或缺失)而與原生序列Fc區之胺基酸序列不同的胺基酸序列。在某些實施例中，相比於原生序列Fc區或相比於親本多肽之Fc區，變異型Fc區在原生序列Fc區中或在親本多肽之Fc區中具有至少一個胺基酸取代，例如約一個至約十個胺基酸取代，或約一個至約五個胺基酸取代。本文中，變異型Fc區可與原生序列Fc區及/或親本多肽之Fc區具有至少約80%同源性，或與其具有至少約90%同源性，例如與其具有至少約95%同源性。
如本文所用，「抗原決定基」為此項技術中之術語且係指結合分子(例如抗體)可特異性結合至之抗原的局部區。抗原決定基可為線性抗原決定基或構形、非線性或不連續之抗原決定基。例如在多肽抗原之情況下，抗原決定基可為多肽之連續胺基酸(「線性」抗原決定基)或抗原決定基可包含多肽之兩個或更多個非連續區的胺基酸(「構形」、「非線性」或「不連續」之抗原決定基)。熟習此項技術者應瞭解，一般而言，線性抗原決定基可或可不依賴於二級、三級或四級結構。舉例而言，在一些實施例中，結合分子結合至一組胺基酸，不管其是否在天然三維蛋白質結構中摺疊。在其他實施例中，結合分子需要構成抗原決定基之胺基酸殘基展現特定構形(例如彎曲、扭轉、轉彎或摺疊)以識別及結合抗原決定基。
關於本文中鑑別之多肽及抗體序列的「胺基酸序列一致性百分比(%)」或「同源性」定義為在序列比對後，在將任何保守取代視為序列一致性之一部分的情況下，候選序列中與所比較多肽中胺基酸殘基一致的胺基酸殘基之百分比。出於測定胺基酸序列一致性百分比目的之比對可以此項技術中之技能範圍內的各種方式達成，例如使用公開可用之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、Megalign (DNASTAR)或MUSCLE軟體。熟習此項技術者可確定用於量測比對之適當參數，包括用於達成所比較序列之全長內之最大比對所需的任何演算法。然而，出於本文之目的，使用序列比較電腦程式MUSCLE產生胺基酸序列一致性%值(Edgar, R.C.,Nucleic Acids Research
32(5):1792-1797, 2004；Edgar, R.C.,BMC Bioinformatics
5(1):113, 2004)。
如本文所用，術語「細胞激素」應理解為意謂任何蛋白質或肽、其類似物或功能片段，其能夠在哺乳動物中刺激或誘導針對預先選擇之細胞類型，例如癌細胞或病毒感染細胞之殺細胞免疫反應。因此，預期多種細胞激素可併入至本申請案中。適用之細胞激素包括例如腫瘤壞死因子(TNFs)、介白素(ILs)、淋巴介質(Ls)、集落刺激因子(CSFs)、干擾素(IFNs)，包括其能夠刺激或誘導此類殺細胞免疫反應之物種變異體、截短類似物。適用之腫瘤壞死因子包括例如TNFα。適用之淋巴介質包括例如LT。適用之集落刺激因子包括例如GM-CSF及M-CSF。適用之介白素包括例如IL-2、IL-4、IL-5、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21、IL22及IL-33。適用之干擾素包括例如IFN-α、IFN-α及IFN-γ。術語「細胞激素」亦理解為涵蓋野生型細胞激素(諸如IL-21、IL-7、IL-15等)之任何變異體，其包含修飾且維持其所需功能中之任一者之至少大部分(諸如至少約50%)。
術語「多肽」及「肽」及「蛋白質」在本文中可互換使用，且係指任何長度之胺基酸之聚合物。聚合物可為直鏈或分支鏈，其可包含經修飾之胺基酸，且其可雜有非胺基酸。該術語亦涵蓋已天然地或藉由干預(例如雙硫鍵形成、糖基化、脂質化、乙醯化、磷酸化或任何其他操縱或修飾)修飾之胺基酸聚合物。該定義內亦包括例如含有胺基酸之一或多種類似物，包括但不限於非天然胺基酸，以及此項技術中已知之其他修飾的多肽。應理解，由於本發明之多肽可基於免疫球蛋白超家族之抗體或其他成員，在某些實施例中，「多肽」可以單鏈形式或以兩個或更多個相關鏈形式出現。
術語「載體」係指用於攜載或包括核酸序列，包括例如編碼如本文所述之結合分子(例如抗體)之核酸序列以將核酸序列引入至宿主細胞中的物質。適用的載體包括例如表現載體、質體、噬菌體載體、病毒載體、游離基因體及人工染色體，其可包括可操作以穩定整合至宿主細胞染色體中之選擇序列或標記。此外，載體可包括一或多個可選標記基因及適合的表現控制序列。可包括之可選標記基因例如提供對抗生素或毒素、補體營養缺陷型缺乏之抗性，或供應不在培養基中之關鍵營養素。表現控制序列可包括此項技術中熟知之組成性及誘導性啟動子、轉錄增強子、轉錄終止子及其類似物。當欲共表現兩個或更多個核酸分子(例如抗體重鏈及輕鏈或抗體VH及VL)時，兩個核酸分子均可插入至例如單一表現載體或獨立表現載體中。就單一載體表現而言，編碼核酸可操作地連接於一個共同表現控制序列，或連接於不同表現控制序列，諸如一個誘導性啟動子及一個構成性啟動子。可使用此項技術中熟知之方法證實將核酸分子引入宿主細胞。此類方法包括例如核酸分析，諸如北方墨點法或mRNA之聚合酶鏈反應(PCR)擴增；或基因產物表現之免疫墨點法，或測試所引入之核酸序列或其相應基因產物之表現的其他適合分析方法。熟習此項技術者應理解，核酸分子係以足以產生所需產物之量表現，且亦應理解，表現量可使用此項技術中熟知之方法最佳化以獲得足夠表現。
如本文所用，術語「宿主」係指動物，諸如哺乳動物(例如人類)。
如本文所使用，術語「宿主細胞」係指可用核酸分子轉染之特定個體細胞及此類細胞之後代或潛在後代。歸因於繼代中可能存在突變或環境影響或核酸分子整合至宿主細胞基因體中，此類細胞之後代可不與用核酸分子轉染之母細胞一致。
「經分離」抗體(或構築體)為已自其產生環境之組分鑑別、分離及/或回收之抗體(或構築體)(例如天然或重組)。較佳地，經分離多肽與來自其產生環境之所有其他組分無關聯。其產生環境之污染物組分(諸如由重組轉染細胞產生的組分)為通常將干擾抗體之研究、診斷或治療用途之物質，且可包括酶、激素及其他蛋白質或非蛋白質溶質。在較佳實施例中，多肽將經純化：(1)至超過95重量%之抗體，如藉由例如勞立法(Lowry method)所測定，且在一些實施例中，至超過99重量%；(2)至足以藉由使用旋杯式定序儀獲得N端或內部胺基酸序列之至少15個殘基的程度；或(3)至均質，如藉由SDS-PAGE在非還原或還原條件下使用庫馬斯藍(Coomassie Blue)或較佳銀染色劑。經分離抗體(或構築體)包括重組細胞內之原位抗體，因為抗體之天然環境的至少一種組分將不存在。然而，通常，經分離多肽、抗體或構築體將藉由至少一個純化步驟來製備。
「經分離核酸」為一種核酸，例如RNA、DNA或混合型核酸，其基本上與天然伴隨原生序列之其他基因組DNA序列以及蛋白質或複合物(諸如核糖體及聚合酶)分離。「經分離」核酸分子為與存在於該核酸分子之天然來源中之其他核酸分子分離的核酸分子。此外，「經分離」核酸分子(諸如cDNA分子)可基本上不含其他細胞材料或培養基(當藉由重組技術製備時)，或基本上不含化學前驅體或其他化學物質(當化學合成時)。在特定實施例中，一或多種編碼如本文所述之抗體之核酸分子經分離或純化。該術語涵蓋自天然存在之環境移出之核酸序列，且包括重組型或經選殖之DNA分離物及化學合成類似物或藉由異源系統生物合成之類似物。基本上純分子可包括分子之經分離形式。
如在本文中可互換使用之「聚核苷酸」或「核酸」係指任何長度的核苷酸聚合物且包括DNA及RNA。核苷酸可為脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾之核苷酸或鹼基及/或其類似物、或可藉由DNA或RNA聚合酶或藉由合成反應併入聚合物中之任何受質。聚核苷酸可包含修飾核苷酸，諸如甲基化核苷酸及其類似物。如本文所用，「寡核苷酸」係指短的、通常單股的合成聚核苷酸，其長度通常(但不一定)少於約200個核苷酸。術語「寡核苷酸」及「聚核苷酸」並非相互排斥。以上關於聚核苷酸之描述同樣且完全適用於寡核苷酸。產生本發明之結合分子的細胞可包括親本融合瘤細胞，以及已向其中引入編碼抗體之核酸的細菌及真核宿主細胞。除非另有說明，否則本文揭示之任何單股聚核苷酸序列之左手端為5'端；雙股聚核苷酸序列之左手方向稱為5'方向。初生RNA轉錄物之5'至3'添加方向稱為轉錄方向；DNA股上具有與RNA轉錄物相同之序列且相對於RNA轉錄物之5'端為5'之序列區域稱為「上游序列」；DNA股上具有與RNA轉錄物相同之序列且相對於RNA轉錄物之3'端為3'之序列區域稱為「下游序列」。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受」意謂經聯邦或州政府之監管機構批准，或列於美國藥典
(U.S. Pharmacopeia)、歐洲藥典
(European Pharmacopia)或其他公認藥典中用於動物，且更特定言之用於人類。
「賦形劑」意謂醫藥學上可接受之材料、組合物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、溶劑或囊封材料。賦形劑包括例如囊封材料或添加劑，諸如吸收加速劑、抗氧化劑、黏合劑、緩衝劑、載劑、包衣劑、著色劑、稀釋劑、崩解劑、乳化劑、增量劑、填充劑、調味劑、保濕劑、潤滑劑、香料、防腐劑、推進劑、釋放劑、滅菌劑、甜味劑、增溶劑、濕潤劑及其混合物。術語「賦形劑」亦可指稀釋劑、佐劑(例如費氏佐劑(Freunds' adjuvant)(完全或不完全)或媒劑。
在一些實施例中，賦形劑為醫藥學上可接受之賦形劑。醫藥學上可接受之賦形劑之實例包括緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(例如低於約10個胺基酸殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖醇，諸如甘露醇或山梨醇；成鹽相對離子，諸如鈉；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEEN™、聚乙二醇(PEG)及PLURONICS™。醫藥學上可接受之賦形劑之其他實例描述於Remington及Gennaro,Remington ' s Pharmaceutical Sciences
(第18版 1990)中。
在一個實施例中，各組分在以下意義上為「醫藥學上可接受的」：與醫藥調配物之其他成分相容且適用於與人類及動物之組織或器官接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應、免疫原性或其他問題或併發症，與合理益處/風險比相稱。參見例如Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005; Handbook of Pharmaceutical Excipients, 第6版; Rowe等人編；The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2009；Handbook of Pharmaceutical Additives, 第3版; Ash及Ash編; Gower Publishing Company: 2007；Pharmaceutical Preformulation and Formulation, 第2版; Gibson編; CRC Press LLC: Boca Raton, FL, 2009。在一些實施例中，醫藥學上可接受之賦形劑在採用之劑量及濃度下對暴露於其之細胞或哺乳動物無毒。在一些實施例中，醫藥學上可接受之賦形劑為pH緩衝水溶液。
在一些實施例中，賦形劑為無菌液體，諸如水及油，包括石油、動物、植物或合成來源之彼等油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及其類似物。當靜脈內投與組合物(例如醫藥組合物)時，水為例示性賦形劑。亦可採用生理鹽水溶液以及右旋糖及甘油水溶液作為液體賦形劑，尤其用於可注射溶液。賦形劑亦可包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻穀、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇及其類似物。若需要，組合物亦可含有少量濕潤劑或乳化劑，或pH值緩衝劑。組合物可呈溶液、懸浮液、乳液、錠劑、丸劑、膠囊、散劑、持續釋放調配物及其類似物之形式。口服組合物(包括調配物)可包括標準賦形劑，諸如醫藥級甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。
組合物(包括醫藥化合物)可含有結合分子(例如抗體)，例如呈分離或純化形式，連同適合量之賦形劑。
如本文所用之術語「有效量」或「治療有效量」係指足以產生所需結果的本文所提供之結合分子(例如抗體)或醫藥組合物的量。
術語「個體」與「患者」可互換使用。如本文所用，在某些實施例中，個體為哺乳動物，諸如非靈長類動物(例如母牛、豬、馬、貓、犬、大鼠等)或靈長類動物(例如猴及人類)。在特定實施例中，個體為人類。在一個實施例中，個體為診斷患有病況或病症之哺乳動物，例如人類。在另一實施例中，個體為處於患上病況或病症之風險下的哺乳動物，例如人類。
「投與(administer/administration)」係指將存在於體外的物質注射或另外物理遞送至患者體內之行為，諸如藉由經黏膜、皮內、靜脈內、肌肉內遞送，及/或本文中所描述或此項技術中已知之任何其他物理遞送方法。
如本文所用，術語「治療(treat/treatment/treating)」係指由投與一或多種療法產生的疾病或病況之進展、嚴重度及/或持續時間的降低或改善。治療可如下確定：評估是否已存在與潛在病症相關之一或多種症狀的減輕、緩解及/或緩和，使得觀測到患者之改良，儘管患者可能仍罹患該潛在病症。術語「治療」包括管理及改善疾病兩者。術語「管理(manage/managing/management)」係指個體得自療法之有利效果，其未必導致疾病治癒。
術語「預防(prevent/preventing/prevention)」係指降低疾病、病症、病況或相關症狀(例如癌症)發作(或復發)的可能性。
術語「癌症」或「癌細胞」在本文中用於指示發現於贅瘤中之組織或細胞，其具有將其與正常組織或組織細胞分化開的特徵。此類特徵中包括但不限於：間變程度、形狀之不規則性、細胞輪廓不清晰、細胞核尺寸、細胞核或細胞質結構的變化、其他表型變化、指示癌性或癌前狀態之細胞蛋白質的存在、增加之有絲分裂數目及轉移能力。關於「癌症」之字語包括癌瘤、肉瘤、腫瘤、上皮瘤、白血病、淋巴瘤、息肉及硬癌、轉化、贅瘤及其類似者。
術語「約」或「大約」意謂在指定值或範圍的20%以內、15%以內、10%以內、9%以內、8%以內、7%以內、6%以內、5%以內、4%以內、3%以內、2%以內、1%以內或更小。
除非上下文另有明確規定，否則如本發明及申請專利範圍中所用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數形式。
應理解，每當在本文中用術語「包含」描述實施例時，亦提供用術語「由……組成」及/或「基本上由……組成」描述之另外類似的實施例。亦應理解，每當在本文中用片語「基本上由……組成」描述實施例時，亦提供用術語「由……組成」描述之另外類似的實施例。
如在諸如「在A與B之間」或「在A-B之間」之片語中所使用的術語「在…之間」係指包括A及B兩者之範圍。
本文中如在諸如「A及/或B」之片語中所使用之術語「及/或」意欲包括A及B；A或B；A (單獨)；及B(單獨)。同樣，如在諸如「A、B及/或C」之片語中所用之術語「及/或」意欲涵蓋以下實施例中之每一者：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A (單獨)；B (單獨)；及C (單獨)。
IL-21融合蛋白 IL-21及其變異體
本文提供之IL-21融合蛋白中之IL-21蛋白可為具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列(參見下文)的人類野生型IL-21蛋白。
在一些實施例中，IL-21變異體可在本文提供之IL-21融合蛋白中。變異可為與人類野生型IL-21蛋白相比，導致胺基酸序列改變的編碼IL-21多肽之一或多個密碼子之取代、缺失或插入。胺基酸取代可為一個胺基酸經具有類似結構及/或化學特性之另一胺基酸置換的結果，諸如白胺酸經絲胺酸置換，例如保守胺基酸置換。熟習此項技術者已知的標準技術可用於將突變引入編碼本文提供之分子的核苷酸序列中，包括例如引起胺基酸取代的定點突變誘發及PCR介導突變誘發。插入或缺失視情況可在約1至10個胺基酸範圍內。在某些實施例中，相對於原始分子，取代、缺失或插入包括少於25個胺基酸取代、少於20個胺基酸取代、少於15個胺基酸取代、少於10個胺基酸取代、少於5個胺基酸取代、少於4個胺基酸取代、少於3個胺基酸取代，或少於2個胺基酸取代。在一個特定實施例中，取代為在一或多個所預測之非必需胺基酸殘基處產生的保守胺基酸取代。允許的變異可藉由在序列中系統地產生胺基酸插入、缺失或取代且測試所得變異體之全長或成熟原生序列所展現的活性來確定。
胺基酸序列插入包括長度在一個殘基或多個殘基範圍內之胺基及/或羧基末端融合，以及單個或多個胺基酸殘基之序列內插入。
「保守胺基酸取代」為胺基酸殘基經具有含有類似電荷之側鏈之胺基酸殘基置換的取代。具有含有類似電荷之側鏈的胺基酸殘基家族已在此項技術中定義。此等家族包括具有鹼性側鏈(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電極性側鏈(例如甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、非極性側鏈(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、β分支鏈側鏈(例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)之胺基酸。或者，突變可沿編碼序列之全部或一部分隨機引入，諸如藉由飽和突變誘發，且可針對生物活性(例如結合至IL-21受體或IL-21R)篩選所得突變體以鑑別保留活性之突變體。突變誘發之後，可表現所編碼蛋白質且可測定蛋白質活性。
可進行保守(例如在具有類似特性及/或側鏈之胺基酸組內)取代，以維持或不顯著改變IL-21蛋白之特性。胺基酸可根據其側鏈特性之類似性分組(參見例如Lehninger,Biochemistry
73-75 (第2版 1975))：(1)非極性：Ala (A)、Val (V)、Leu (L)、Ile (I)、Pro (P)、Phe (F)、Trp (W)、Met (M)；(2)不帶電極性：Gly (G)、Ser (S)、Thr (T)、Cys (C)、Tyr (Y)、Asn (N)、Gln (Q)；(3)酸性：Asp (D)、Glu (E)；及(4)鹼性：Lys (K)、Arg (R)、His (H)。
或者，天然存在之殘基可基於共同的側鏈特性來分組：(1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)鹼性：His、Lys、Arg；(5)影響鏈取向的殘基：Gly、Pro；及(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
因此，在一個實施例中，本文提供之IL-21變異體包含與具有本文所述之SEQ ID NO: 1之IL-21之胺基酸序列具有至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
可使用此項技術中已知之方法產生變異，諸如寡核苷酸介導(定點)突變誘發、丙胺酸掃描及PCR突變誘發。可對選殖DNA進行定點突變誘發(參見例如Carter, 1986, Biochem J. 237:1-7；及Zoller等人, 1982, Nucl. Acids Res. 10:6487-500)、卡匣突變誘發(參見例如Wells等人, 1985, Gene 34:315-23)或其他已知技術以產生多肽。
在一些實施例中，IL-21變異體在C端處在S124及S133之間缺少一或多個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在C端處在S124與S133之間缺少任一胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在C端處在S124及S133之間缺少任何兩個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在C端處在S124及S133之間缺少任何三個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在C端處在S124及S133之間缺少任何四個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在C端處在S124及S133之間缺少任何五個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在C端處在S124及S133之間缺少任何六個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在C端處在S124及S133之間缺少任何七個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在C端處在S124及S133之間缺少任何八個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在C端處在S124及S133之間缺少任何九個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在C端處在S124及S133之間缺少任何十個胺基酸。
在一些實施例中，IL-21變異體在SEQ ID NO: 1之C端處缺少11個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在SEQ ID NO: 1之C端處缺少10個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在SEQ ID NO: 1之C端處缺少9個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在SEQ ID NO: 1之C端處缺少8個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在SEQ ID NO: 1之C端處缺少7個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在SEQ ID NO: 1之C端處缺少6個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在SEQ ID NO: 1之C端處缺少5個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在SEQ ID NO: 1之C端處缺少4個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在SEQ ID NO: 1之C端處缺少3個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在SEQ ID NO: 1之C端處缺少2個胺基酸。在一些實施例中，IL-21變異體在SEQ ID NO: 1之C端處缺少1個胺基酸。
在一特定實施例中，本文提供之IL-21變異體具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列，其在C端處缺少10個胺基酸且表示SEQ ID NO: 1之Q1至L123的序列。
白蛋白結合分子
白蛋白(例如人類血清白蛋白或HSA)已用於增加生物藥物之血清半衰期。參見Dennis等人,The Journal of Biological Cheminstry
, 2002, 277 (38): 35035-35043；Adams等人,MABS
, 2016, 8(7): 1336-1346。舉例而言，已利用人類血清白蛋白(HSA)。HSA為血液中最豐富的蛋白質，且廣泛分佈於組織中且具有非急性功能。其具有19天之半衰期。因此，在一些實施例中，本文中可使用白蛋白(例如HSA)來增加本文提供之融合蛋白的半衰期(以及其他優勢)。白蛋白可以若干方式使用。一種例示性方法為以遺傳方式或以化學方式在本文提供之融合蛋白中直接包括白蛋白域(例如HSA)。另一例示性方法為使用白蛋白結合域(ABD)或抗白蛋白抗體。
在一些實施例中，本文提供之融合蛋白包含白蛋白結合分子。在一些實施例中，本文提供之白蛋白結合分子為白蛋白結合域(ABD)。在一些實施例中，ABD可結合至人類血清白蛋白(HSA)。在其他實施例中，ABD可結合至小鼠血清白蛋白(MSA)。
在一些實施例中，ABD以1-1000 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，ABD以1-900 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，ABD以1-800 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，ABD以1-700 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，ABD以1-600 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，ABD以1-500 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，ABD以1-400 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，ABD以1-300 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，ABD以1-200 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，ABD以1-100 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，ABD以1-50 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，ABD以1-25 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，ABD以0.1-1 nM之間的KD
結合至HSA。在其他實施例中，ABD以10-800 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，ABD以20-500 nM之間的KD
結合至HSA。在其他實施例中，ABD以50-300 nM之間的KD
結合至HSA。在其他實施例中，ABD以100-200 nM之間的KD
結合至HSA。
在一些特定實施例中，ABD具有胺基酸序列LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINNAKTVEGVKALIDEILAALP (SEQ ID NO: 3)，其與HSA之KD
為約1.2 nM。
在一些實施例中，相比於SEQ ID NO: 3之ABD，對HSA具有相對較低親和力之ABD為較佳的。因此，對HSA具有較低親和力之SEQ ID NO: 3之變異體包括於本發明中。
變異可為導致胺基酸序列改變的編碼SEQ ID NO: 3之ABD多肽之一或多個密碼子之取代、缺失或插入。胺基酸取代可為經具有類似或不同結構及/或化學特性之另一胺基酸置換一個胺基酸的結果。熟習此項技術者已知的標準技術可用於將突變引入編碼本文提供之分子的核苷酸序列中，包括例如引起胺基酸取代的定點突變誘發及PCR介導突變誘發。插入或缺失視情況可在約1至15個胺基酸範圍內。在某些實施例中，相對於SEQ ID NO: 3之原始分子，取代、缺失或插入包括少於25個胺基酸取代、少於20個胺基酸取代、少於15個胺基酸取代、少於10個胺基酸取代、少於5個胺基酸取代、少於4個胺基酸取代、少於3個胺基酸取代或少於2個胺基酸取代。允許的變異可藉由在序列中系統地產生胺基酸插入、缺失或取代且測試所得變異體之活性來確定，且在一些實施例中，選擇對HSA具有較低親和力之變異體。某些此類變異體在下文實例1中之表7中例示。
在一些特定實施例中，ABD具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列。在其他特定實施例中，ABD具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列。在其他特定實施例中，ABD具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列。在其他特定實施例中，ABD具有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列。在其他特定實施例中，ABD具有SEQ ID NO: 8之胺基酸序列。在其他特定實施例中，ABD具有SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。在其他特定實施例中，ABD具有SEQ ID NO: 10之胺基酸序列。在其他特定實施例中，ABD具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列。
根據本發明，白蛋白結合分子亦可為抗白蛋白抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗白蛋白抗體或其抗原結合片段為抗HSA抗體或其抗原結合片段。
HSA之一些同功異型物列於下表2中(參見UniProtKB-P02768 (ALBU_HUMAN))表 2 
本文所提供之抗HSA抗體可結合至任何此等同功異型物或其片段。在一些實施例中，本文所提供之抗HSA抗體結合至SEQ ID NO: 260或其片段。在一些實施例中，本文所提供之抗HSA抗體結合至SEQ ID NO: 261或其片段。在其他實施例中，本文所提供之抗HSA抗體結合至SEQ ID NO: 262或其片段。
本文所提供之抗HSA抗體可為但不限於合成抗體、單株抗體、以重組方式產生之抗體、多特異性抗體(包括雙特異性抗體)、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、胞內抗體、單鏈Fv (scFv)(例如包括單特異性、雙特異性等)、駱駝化抗體或其人類化型式、Fab片段、F(ab')片段、二硫鍵連接的Fv (sdFv)、抗個體基因型(抗Id)抗體及以上中之任一者之抗原決定基結合片段。
特定言之，本文所提供之抗HSA抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，亦即，含有免疫特異性結合至HSA之抗原結合位點的分子。本文所提供之免疫球蛋白分子可為免疫球蛋白分子之任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或子類。在一特定實施例中，本文所提供之抗HSA抗體為IgG抗體，諸如IgG1抗體。
包括保留特異性結合至HSA之抗原決定基之能力之抗體片段的抗體變異體及衍生物亦包括於本發明中。例示性片段包括Fab片段(含有抗原結合域且包含藉由雙硫鍵橋連之輕鏈及部分重鏈的抗體片段)；Fab' (含有單一抗結合域之抗體片段，該單一抗結合域包含Fab及貫穿鉸鏈區之重鏈的額外部分)；F(ab')2
(在重鏈之鉸鏈區中藉由鏈間二硫鍵接合之兩個Fab'分子；Fab'分子可針對相同或不同抗原決定基)；雙特異性Fab (具有兩個抗原結合域之Fab分子，該等抗原結合域各自可針對不同抗原決定基)；包含可變區之單鏈Fab鏈，亦稱為sFv (藉由10-25個胺基酸之鏈連接在一起的抗體之單一輕鏈及重鏈之可變、抗原結合決定區)；二硫鍵連接的Fv或dsFv (藉由雙硫鍵連接在一起的抗體之單一輕鏈及重鏈之可變、抗原結合決定區)；駱駝化VH (抗體之單一重鏈的可變、抗原結合決定區，其中VH界面處之一些胺基酸為發現於天然存在之駱駝抗體之重鏈中之彼等)；雙特異性sFv (具有兩個抗原結合域之sFv或dsFv分子，該等抗原結合域各自可針對不同抗原決定基)；雙功能抗體(當第一sFv之VH域與第二sFv之VL域組裝且第一sFv在VL域與第二sFv之VH域組裝時形成之二聚sFv；雙功能抗體之兩個抗原結合區可針對相同或不同抗原決定基)；及三功能抗體(三聚sFv，其以與雙功能抗體類似之方式形成，但其中在單一複合物中產生三個抗原結合域；三個抗原結合域可針對相同或不同抗原決定基)。抗體之衍生物亦包括抗體組合位點之一或多個CDR序列。當存在兩個或更多個CDR序列時，CDR序列可在骨架上連接在一起。在某些實施例中，本文所提供之抗HSA抗體包含單鏈Fv (「scFv」)。scFv為包含抗體之VH及VL域的抗體片段，其中此等域存在於單一多肽鏈中。一般而言，scFv多肽進一步在VH與VL域之間包含多肽連接子，其使得scFv能夠形成用於抗原結合之所要結構。關於scFv之綜述，參見Pluckthun,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies
, 第113卷, Rosenburg及Moore編 Springer-Verlag, New York, 第269-315頁 (1994)。
在某些情形中，使用抗HSA抗體片段有優勢，而全抗體則無。較小尺寸之片段允許快速清除，且可引起改良之細胞、組織或器官之進入。關於某些抗體片段之綜述，參見Hudson等人, 2003, Nature Med. 9:129-34。
已開發出用於產生抗體片段的各種技術。傳統地，此等片段係經由完整抗體之蛋白水解消化而得到(參見例如Morimoto等人, 1992, J. Biochem. Biophys. Methods 24:107-17；及Brennan等人, 1985, Science 229:81-83)。然而，此等片段現可藉由重組型宿主細胞直接產生。Fab、Fv及ScFv抗體片段均可表現於大腸桿菌或酵母細胞中及由其分泌，從而允許便捷地產生大量的此等片段。抗體片段可自上文所論述之抗體噬菌體文庫分離。或者，Fab'-SH片段可自大腸桿菌直接回收且化學偶合以形成F(ab')2
片段(Carter等人, 1992, Bio/Technology 10:163-67)。根據另一方法，F(ab')2
片段可自重組宿主細胞培養物直接分離。具有增加之活體內半衰期、包含救助受體結合抗原決定基殘基之Fab及F(ab')2
片段描述於例如美國專利第5,869,046號中。用於產生抗體片段之其他技術將為熟習此項技術者顯而易見。在某些實施例中，抗體為單鏈Fv片段(scFv)(參見例如WO 93/16185；美國專利第5,571,894號及第5,587,458號)。Fv及scFv具有不含恆定區之完整組合位點；因此，其可適用於活體內使用期間降低之非特異性結合。可構築scFv融合蛋白，以在scFv之胺基或羧基末端產生效應蛋白之融合物(參見例如Borrebaeck編, 前述)。抗體片段亦可為「線抗體」，例如如上文所引用之參考文獻中所述。此類線抗體可為單特異性或多特異性的，諸如雙特異性的。在一特定實施例中，抗體片段為單域抗體。
本文所提供之抗HSA抗體可來自任何動物來源，包括鳥類及哺乳動物(例如人類、鼠類、驢、綿羊、兔、山羊、天竺鼠、駱駝、馬或雞)。在某些實施例中，本文所提供之抗體為人類或人類化單株抗體。如本文所用，「人類」抗體包括具有人類免疫球蛋白之胺基酸序列的抗體且包括自人類免疫球蛋白文庫或自表現來自人類基因之抗體之小鼠中分離的抗體。
在某些實施例中，抗HSA抗體為全人類抗體，諸如免疫特異性結合癌症抗原之全人類抗體。此類全人類抗體將優於全小鼠(或其他完全或部分非人類物種抗體)、人類化抗體或嵌合抗體以使非所需或不需要的副作用，諸如當向個體投與時針對非全人類抗體之免疫反應的產生降至最低。
本文所提供之抗HSA抗體可為單特異性、雙特異性、三特異性或更大多特異性的。多特異性抗體可特異性針對多肽之不同抗原決定基或可特異性針對多肽以及異源抗原決定基，諸如異源多肽或固體載體物質。在一些實施例中，本文所提供之抗體對於多肽之指定抗原決定基具有單特異性且不會免疫特異性結合至其他抗原決定基。
本文所提供之抗HSA抗體可為單株抗體或衍生自單株抗體。單株抗體可使用首先由Kohler等人, 1975, Nature 256:495-97描述之融合瘤方法製得，或可藉由重組DNA方法(參見例如美國專利第4,816,567號)製得。
在融合瘤方法中，如上文所描述使小鼠或其他適合的宿主動物(諸如倉鼠)免疫以引發淋巴細胞，其產生或能夠產生將特異性結合於用於免疫接種之蛋白質的抗體。或者，淋巴細胞可在活體外免疫接種。免疫接種之後，淋巴細胞經分離且接著使用適合的融合劑(諸如聚乙二醇)與骨髓瘤細胞株融合，以形成融合瘤細胞(Goding,Monoclonal Antibodies : Principles and Practice
59-103 (1986))。
由此製備之融合瘤細胞經接種且在適合的培養基中生長，在某些實施例中，該培養基含有一或多種抑制未融合之親本骨髓瘤細胞生長或存活的物質(亦稱為融合搭配物)。舉例而言，若親本骨髓瘤細胞不含酶次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶(HGPRT或HPRT)，則用於融合瘤之選擇性培養基典型地包括次黃嘌呤、胺基蝶呤及胸苷(HAT培養基)，其阻止HGPRT缺失型細胞之生長。
例示性融合搭配物骨髓瘤細胞為有效融合、支持所選產抗體細胞穩定高水準產生抗體且對針對未融合之親本細胞選擇之選擇培養基敏感的細胞。例示性骨髓瘤細胞株為鼠類骨髓瘤株，諸如SP-2及衍生物，例如獲自美國菌種保藏中心(American Type Culture Collection)(Manassas, VA)之X63-Ag8-653細胞，及源自獲自沙克研究所細胞分配中心(Salk Institute Cell Distribution Center)(San Diego, CA)之MOPC-21及MPC-11小鼠腫瘤之彼等細胞。亦已描述用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類融合骨髓瘤細胞株(Kozbor, 1984, Immunol. 133:3001-05；及Brodeur等人,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications
51-63 (1987))。
分析融合瘤細胞生長於其中之培養基中針對抗原之單株抗體的產生情況。融合瘤細胞產生之單株抗體的結合特異性係藉由免疫沈澱或藉由活體外結合分析(諸如RIA或ELISA)來測定。單株抗體之結合親和力可例如藉由Munson等人, 1980, Anal. Biochem., 107:220-39中所述之史卡查分析(Scatchard analysis)測定。
一旦鑑別出產生具有所需特異性、親和力及/或活性之抗HSA抗體的融合瘤細胞，純系便可藉由限制稀釋程序次選殖且藉由標準方法生長(Goding，前述)。適用於此目的之培養基包括例如DMEM或RPMI-1640培養基。此外，融合瘤細胞可在動物中以腹水腫瘤形式活體內生長，例如藉由將細胞腹膜內注射至小鼠中。
藉由習知抗體純化程序(諸如親和層析(例如使用蛋白質A或蛋白質G-瓊脂糖)或離子交換層析、羥磷灰石層析、凝膠電泳、滲析等)自培養基、腹水流體或血清適合地分離由次純系分泌之單株抗體。
編碼單株抗體之DNA易於使用習知程序分離及測序(例如藉由使用能夠特異性結合於編碼鼠類抗體之重鏈及輕鏈之基因的寡核苷酸探針)。融合瘤細胞可充當此類DNA之來源。一旦分離，可將DNA置放於表現載體中，其接著轉染至不以其他方式產生抗體蛋白質之宿主細胞(諸如大腸桿菌細胞、猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary；CHO)細胞或骨髓瘤細胞)中，以實現重組宿主細胞中單株抗體之合成。關於編碼抗體之DNA在細菌中重組表現的論文包括Skerra等人, 1993, Curr. Opinion in Immunol. 5:256-62及Plückthun, 1992, Immunol. Revs. 130:151-88。
在另一個實施例中，可自使用例如Antibody Phage Display : Methods and Protocols
(O'Brien及Aitken編, 2002)中所述之技術產生之抗體噬菌體文庫中分離單株抗體或抗體片段。在噬菌體呈現方法中，功能抗體域呈現於攜帶編碼其之聚核苷酸序列之噬菌體粒子的表面上。可用於製造本文所描述之抗體的噬菌體呈現方法之實例包括揭示於以下中之彼等方法：Brinkman等人, 1995, J. Immunol. Methods 182:41-50；Ames等人, 1995, J. Immunol. Methods 184:177-186；Kettleborough等人, 1994, Eur. J. Immunol. 24:952-958；Persic等人, 1997, Gene 187:9-18；Burton等人, 1994, Advances in Immunology 57:191-280；PCT申請案第PCT/GB91/O1 134號；國際公開案第WO 90/02809號、第WO 91/10737號、第WO 92/01047號、第WO 92/18619號、第WO 93/1 1236號、第WO 95/15982號、第WO 95/20401號及第WO97/13844號；以及美國專利第5,698,426號、第5,223,409號、第5,403,484號、第5,580,717號、第5,427,908號、第5,750,753號、第5,821,047號、第5,571,698號、第5,427,908號、第5,516,637號、第5,780,225號、第5,658,727號、第5,733,743號及第5,969,108號。
原則上，合成抗體純系係藉由篩選噬菌體文庫來選擇，該等噬菌體文庫含有呈現與噬菌體鞘蛋白融合之抗體可變區(Fv)之各種片段的噬菌體。針對所需抗原篩選此類噬菌體文庫。能夠結合至所要抗原的表現Fv片段之純系吸附至抗原且因此與庫中之非結合純系分離。結合純系接著自抗原溶離，且可藉由額外的抗原吸附/溶離循環進一步增濃。
可變域可以單鏈Fv (scFv)片段形式(其中VH與VL經由短可撓性肽共價連接)或Fab片段形式(其中其各自與恆定域融合且非共價地相互作用)功能性地呈現於噬菌體上，如例如Winter等人, 1994, Ann. Rev. Immunol. 12:433-55中所述。
VH及VL基因譜系可藉由PCR分別選殖且在噬菌體文庫中隨機重組，接著可以如Winter等人，前述中所述地搜尋抗原結合純系。來自經免疫來源之文庫向免疫原提供高親和力抗體而無需構築融合瘤。或者，可選殖原始譜系以提供針對廣泛範圍之非自體抗原以及自體抗原之單一人類抗體來源而無需任何免疫接種，如Griffiths等人, 1993, EMBO J 12:725-34所述。最後，亦可以合成方式如下製備原始文庫：自幹細胞選殖未重排V基因區段，且使用含有隨機序列之PCR引子編碼高度可變CDR3區域及實現活體外重排，如Hoogenboom及Winter, 1992, J. Mol. Biol. 227:381-88所述。
可藉由此項技術中已知的多種技術實現文庫之篩選。舉例而言，HSA多肽或其片段可用於塗佈吸附盤之孔、表現於貼附至吸附盤或用於細胞分選之宿主細胞上、與生物素結合以用抗生蛋白鏈菌素塗佈之珠粒捕獲或用於任何其他淘選呈現文庫之方法中。選擇具有緩慢解離動力學(例如良好結合親和力)之抗體可藉由使用長時間洗滌及單價噬菌體呈現來促進(如Bass等人, 1990, Proteins, 8:309-14及WO 92/09690中所述)，及藉由使用抗原之低塗佈密度來促進(如Marks等人, 1992, Biotechnol. 10:779-83中所述)。
抗體可如下獲得：藉由設計適合之抗原篩選程序以選擇所關注之噬菌體純系，接著使用來自所關注之噬菌體純系之VH及/或VL序列(例如Fv序列)或各種來自VH及VL序列之CDR序列及適合之恆定區(例如Fc)序列(Kabat等人, 前述中所述)構築全長抗體純系。
舉例而言，本文所述之抗HSA抗體亦可包括嵌合抗體。嵌合抗體為其中抗體之不同部分源自不同免疫球蛋白分子的分子。舉例而言，嵌合抗體可含有小鼠或大鼠單株抗體之可變區融合於人類抗體之恆定區。用於製造嵌合抗體之方法為此項技術中已知的。參見例如Morrison, 1985, Science 229:1202；Oi等人, 1986, BioTechniques 4:214；Gillies等人, 1989, J. Immunol. Methods 125:191-202；及美國專利第5,807,715號、第4,816,567號、第4,816,397號及第6,331,415號。
使用諸如本文所描述之彼等技術的技術產生之抗HSA抗體或抗原結合片段可使用標準、熟知技術來加以分離。舉例而言，抗體或抗原結合片段可藉由習知免疫球蛋白純化程序(諸如蛋白A-瓊脂糖、羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析或親和層析)來適合地與例如培養基、腹水液、血清、細胞溶解物、合成反應材料或其類似物分離。如本文所用，「經分離」或「經純化」之抗體大體上不含來自得到抗體之細胞或組織源的細胞材料或其他蛋白質，或當以化學方式合成時大體上不含化學前驅體或其他化學品。
在一些更特定實施例中，抗白蛋白抗體或其抗原結合片段為結合至HSA之sdAb。在一些實施例中，sdAb為VH
H單域抗體。
在一些實施例中，sdAb以1-1000 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，sdAb以1-900 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，sdAb以1-800 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，sdAb以1-700 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，sdAb以1-600 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，sdAb以1-500 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，sdAb以1-400 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，sdAb以1-300 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，sdAb以1-200 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，sdAb以1-100 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，sdAb以1-50 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，sdAb以1-25 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，sdAb以0.1-1 nM之間的KD
結合至HSA。在其他實施例中，sdAb以10-800 nM之間的KD
結合至HSA。在一些實施例中，sdAb以20-500 nM之間的KD
結合至HSA。在其他實施例中，sdAb以50-300 nM之間的KD
結合至HSA。在其他實施例中，sdAb以100-200 nM之間的KD
結合至HSA。
癌症抗原結合分子
在一些實施例中，本文提供之融合蛋白中結合至抗原之結合分子可結合至癌症抗原，且因此促進將IL-21或其變異體導引或遞送至癌細胞，例如實體腫瘤癌細胞。
在一些實施例中，結合分子為結合至癌細胞上表現之抗原的抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，癌細胞為實體腫瘤癌細胞。
在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段可免疫特異性結合至多肽、多肽片段或癌細胞上表現之抗原的抗原決定基。在一個實施例中，抗體結合至人類癌症抗原。在一些實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段結合至癌症抗原之細胞外域(ECD)。在某些實施例中，抗體結合至癌症抗原之ECD中之抗原決定基。在一些實施例中，癌症抗原表現於實體腫瘤癌細胞上。
結合至本文提供之癌症抗原之抗體可為但不限於合成抗體、單株抗體、以重組方式產生之抗體、多特異性抗體(包括雙特異性抗體)、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、胞內抗體、單鏈Fv (scFv)(例如包括單特異性、雙特異性等)、駱駝化抗體或其人類化變異體、Fab片段、F(ab')片段、二硫鍵連接的Fv (sdFv)、抗個體基因型(抗Id)抗體及以上中之任一者之抗原決定基結合片段。
特定言之，本文所提供之抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，亦即，含有免疫特異性結合至癌症抗原(例如實體腫瘤癌症抗原)之抗原結合位點的分子。本文所提供之免疫球蛋白分子可為免疫球蛋白分子之任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或子類。在一特定實施例中，本文所提供之抗體為IgG抗體，諸如IgG1抗體。
包括保留特異性結合至癌症抗原之抗原決定基之能力之抗體片段的抗體變異體及衍生物亦包括於本發明中。例示性片段包括Fab片段；Fab'；F(ab')2
；雙特異性Fab；包含可變區的單鏈Fab鏈，亦稱為sFv；二硫鍵連接的Fv，或dsFv；駱駝化VH；雙特異性sFv；雙功能抗體；及三功能抗體。抗體之衍生物亦包括抗體組合位點之一或多個CDR序列。當存在兩個或更多個CDR序列時，CDR序列可在骨架上連接在一起。在某些實施例中，本文所提供之抗體包含單鏈Fv (「scFv」)。已開發用於產生抗體片段之各種技術，如在以上部分中所簡述。
在一些實施例中，結合至癌症抗原之單可變域抗體(sdAbs)為較佳的。某些類型的生物體(駱駝科及軟骨魚)具有固定於Fc等效域結構上之高親和力單一V樣域作為其免疫系統的一部分。(Woolven等人, 1999, Immunogenetics 50: 98-101；及Streltsov等人, 2004, Proc Natl Acad Sci USA. 101:12444-49)。V類域(駱駝中稱為VhH且鯊魚中稱為V-NAR)通常呈現長表面環，其允許穿透目標抗原之空腔。其亦藉由遮罩疏水性表面貼片使經分離之VH域穩定。
此等VhH及V-NAR域已用於工程改造sdAb。已使用自噬菌體文庫選擇及其他產生穩定、高結合VL及VH源性域之方法設計人類V域變異體。在一特定實施例中，結合至癌症抗原之抗體為sdAb。在一個實施例中，sdAb為VH
H單域抗體。
本文所提供之抗體可來自任何動物來源，包括鳥類及哺乳動物(例如人類、鼠類、驢、綿羊、兔、山羊、天竺鼠、駱駝、馬或雞)。在某些實施例中，本文所提供之抗體為人類或人類化單株抗體。如本文所用，「人類」抗體包括具有人類免疫球蛋白之胺基酸序列的抗體且包括自人類免疫球蛋白文庫或自表現來自人類基因之抗體之小鼠中分離的抗體。
在某些實施例中，抗體為全人類抗體，諸如免疫特異性結合癌症抗原之全人類抗體。此類全人類抗體將優於全小鼠(或其他完全或部分非人類物種抗體)、人類化抗體或嵌合抗體以使非所需或不需要的副作用，諸如當向個體投與時針對非全人類抗體之免疫反應的產生降至最低。
本文所提供之抗體可為單特異性、雙特異性、三特異性或更大多特異性的。多特異性抗體可特異性針對多肽之不同抗原決定基或可特異性針對多肽以及異源抗原決定基，諸如異源多肽或固體載體物質。在一些實施例中，本文所提供之抗體對於多肽之指定抗原決定基具有單特異性且不會免疫特異性結合至其他抗原決定基。
結合至本文提供之癌症抗原之抗體可為單株抗體或衍生自單株抗體。單株抗體可使用首先由Kohler等人, 1975, Nature 256:495-97描述之融合瘤方法製得，或可藉由重組DNA方法(參見例如美國專利第4,816,567號)製得。單株抗體之產生在以上部分中簡述。
舉例而言，本文所述之抗體亦可包括嵌合抗體。使用諸如本文所描述之彼等技術的技術產生的抗體或抗原結合片段可使用標準、熟知技術來分離。
在某些實施例中，本文提供之IL-21融合蛋白中之抗原結合分子包含由連接子連接之多個抗體，各抗體(例如sdAb)結合至抗原。在一些實施例中，抗原結合分子包含兩個抗體或其片段。在一些實施例中，抗原結合分子包含兩個sdAb。在一些實施例中，抗原結合分子包含兩個各自結合至抗原之不同抗原決定基的sdAb。
在一些更特定實施例中，抗原結合分子包含兩個各自結合至MSLN之不同抗原決定基的sdAb。舉例而言，在一些實施例中，靶向MSLN之aa 296至aa 359 (N端)的一個sdAb及靶向MSLN之aa 538至aa 622 (C端)的一個sdAb係用於本文提供之IL-21融合蛋白中。可藉由在IL-21融合蛋白中具有一或多種靶向癌症抗原之特定功能域的抗體來提供某些優勢。用sdAb靶向MSLN之N端破壞MSLN-MUC16相互作用且減少癌細胞轉移。用sdAb靶向MSLN之C端減少MSLN自癌細胞表面之脫落。
在一些實施例中，癌症抗原為間皮素(MSLN)。在一些實施例中，結合分子為結合至MSLN之sdAb，諸如本文所述之彼等。
抗間皮素(抗MSLN)構築體
本申請案提供特異性結合至間皮素之抗間皮素構築體。抗間皮素建構包含抗MSLN重鏈可變區(VH)之抗體部分。在一些實施例中，抗MSLN VH結合至包含SEQ ID NO: 283之序列的抗原。在一些實施例中，抗MSLN VH結合至包含SEQ ID NO: 284之序列的抗原。
在一些實施例中，抗間皮素構築體包含抗MSLN抗體部分，其包含如本文所述之單域抗間皮素抗體。
在一些實施例中，本文所述之抗MSLN構築體以N端至C端之次序包含a)抗MSLN抗體部分，b)第二域。在一些實施例中，本文所述之抗MSLN構築體以N端至C端之次序包含a)第二域，b)抗MSLN抗體部分。
在一些實施例中，本文所述之抗MSLN構築體以N端至C端之次序包含a)抗MSLN抗體部分，b)第二域，c)第三域。在一些實施例中，本文所述之抗MSLN構築體以N端至C端之次序包含a)第二域，b)抗MSLN抗體部分，c)第三域。在一些實施例中，本文所述之抗MSLN構築體以N端至C端之次序包含a)第二域，b)第三域，c)抗MSLN抗體部分。
在一些實施例中，第二域或第三域為半衰期延長域。在一些實施例中，第二域或第三域為細胞激素。
在一些實施例中，構築體為進一步包含半衰期延長域(諸如Fc域或白蛋白結合域)之融合蛋白。在一些實施例中，構築體為進一步包含細胞激素(諸如IL-21、IL-15)之融合蛋白。在一些實施例中，構築體為進一步包含a)半衰期延長域；及b)細胞激素之融合蛋白。例示性融合蛋白為本文所述的。
在一些實施例中，半衰期延長域融合至抗MSLN抗體部分之N端或C端。在一些實施例中，細胞激素融合至抗MSLN抗體部分或半衰期延長域之N端。在一些實施例中，半衰期延長域融合至細胞激素之N端或C端。
在一些實施例中，構築體包含抗MSLN抗體部分與第二域或第三域(諸如細胞激素)之間的連接子。例示性連接子為本文所述的。在一些實施例中，連接子包含SEQ ID NO: 66-74及267-282中之任一者的胺基酸序列。在一些實施例中，連接子為不可裂解的。在一些實施例中，連接子為可裂解的。
在一些實施例中，抗MSLN構築體包含SEQ ID NO: 123-156及285-331中之任一者之胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 123-156及285-331中之任一者具有至少約80% (諸如約85%、90%、95%、98%或99%)序列一致性之其變異體。
結合至間皮素(MSLN)之單域抗體
本申請案提供特異性結合至間皮素之單域抗體。在一些實施例中，本文提供之sdAb結合至人類MSLN。人類MSLN之一些同功異型物列於下表3中(參見UniProtKB-Q13421 (MSLN_HUMAN))。SEQ ID NO: 264之同功異型物2為主要人類MSLN同功異型物。
表3 
本文提供之抗MSLN抗體(例如sdAb)可結合至上表中所列之任何同功異型物或其任何片段。在一些實施例中，本文所提供之抗MSLN抗體結合至SEQ ID NO: 263或其片段。在一些實施例中，本文所提供之抗MSLN抗體結合至SEQ ID NO: 264或其片段。在其他實施例中，本文所提供之抗MSLN抗體結合至SEQ ID NO: 265或其片段。在其他實施例中，本文所提供之抗MSLN抗體結合至SEQ ID NO: 266或其片段。在一些實施例中，本文所提供之抗MSLN抗體結合至SEQ ID NO: 283。在一些實施例中，本文所提供之抗MSLN抗體結合至SEQ ID NO: 284。
因此，在一個態樣中，本文提供結合至間皮素(MSLN)之單域抗體(sdAb)，其包含以下結構：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，其中CDR序列選自下表4及表10中之彼等。
更特定言之，本文提供結合至間皮素(MSLN)之單域抗體(sdAb)，其包含以下結構：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，其中：(i) CDR1具有選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 87、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 93、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 99、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 117及SEQ ID NO: 120；(ii) CDR2具有選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 85、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 91、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 97、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 109、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 118及SEQ ID NO: 121；及/或(iii) CDR3具有選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 83、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 89、SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 101、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 113、SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122。
在一些實施例中，本文提供結合至間皮素之單域抗體(抗MSLN sdAb)，其包含VH，該VH包含以下抗體中之任一者的CDR1、CDR2及CDR3：如表9中所闡述之抗MSLN-1、抗MSLN-2、抗MSLN-3、抗MSLN-4、抗MSLN-5、抗MSLN-6、抗MSLN-7、抗MSLN-8、抗MSLN-9、抗MSLN-10、抗MSLN-11、抗MSLN-12、抗MSLN-13、抗MSLN-14、抗MSLN-15、抗MSLN-16、抗MSLN-17、抗MSLN-18、抗MSLN-19、抗MSLN-20、抗MSLN-21、抗MSLN-22、抗MSLN-23、抗MSLN-24、抗MSLN-25、抗MSLN-26、抗MSLN-27、抗MSLN-28、抗MSLN-29、抗MSLN-30、抗MSLN-31、抗MSLN-32、抗MSLN-33及抗MSLN-34。
在一些實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 12，CDR2為SEQ ID NO: 13，且CDR3為SEQ ID NO: 14。
在一些實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 15，CDR2為SEQ ID NO: 16，且CDR3為SEQ ID NO: 17。
在一些實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 18，CDR2為SEQ ID NO: 19，且CDR3為SEQ ID NO: 20。
在一些實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 21，CDR2為SEQ ID NO: 22，且CDR3為SEQ ID NO: 23。
在一些實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 24，CDR2為SEQ ID NO: 25，且CDR3為SEQ ID NO: 26。
在一些實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 27，CDR2為SEQ ID NO: 28，且CDR3為SEQ ID NO: 29。
在一些實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 30，CDR2為SEQ ID NO: 31，且CDR3為SEQ ID NO: 32。
在一些實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 33，CDR2為SEQ ID NO: 34，且CDR3為SEQ ID NO: 35。
在一些實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 36，CDR2為SEQ ID NO: 37，且CDR3為SEQ ID NO: 38。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 39，CDR2為SEQ ID NO: 40，且CDR3為SEQ ID NO: 41。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 42，CDR2為SEQ ID NO: 43，且CDR3為SEQ ID NO: 44。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 45，CDR2為SEQ ID NO: 46，且CDR3為SEQ ID NO: 47。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 48，CDR2為SEQ ID NO: 49，且CDR3為SEQ ID NO: 50。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 51，CDR2為SEQ ID NO: 52，且CDR3為SEQ ID NO: 53。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 54，CDR2為SEQ ID NO: 55，且CDR3為SEQ ID NO: 56。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 57，CDR2為SEQ ID NO: 58，且CDR3為SEQ ID NO: 59。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 60，CDR2為SEQ ID NO: 61，且CDR3為SEQ ID NO: 62。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 63，CDR2為SEQ ID NO: 64，且CDR3為SEQ ID NO: 65。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 75，CDR2為SEQ ID NO: 76，且CDR3為SEQ ID NO: 77。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 78，CDR2為SEQ ID NO: 79，且CDR3為SEQ ID NO: 80。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 81，CDR2為SEQ ID NO: 82，且CDR3為SEQ ID NO: 83。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 84，CDR2為SEQ ID NO: 85，且CDR3為SEQ ID NO: 86。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 87，CDR2為SEQ ID NO: 88，且CDR3為SEQ ID NO: 89。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 90，CDR2為SEQ ID NO: 91，且CDR3為SEQ ID NO: 92。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 93，CDR2為SEQ ID NO: 94，且CDR3為SEQ ID NO: 95。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 96，CDR2為SEQ ID NO: 97，且CDR3為SEQ ID NO: 98。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 99，CDR2為SEQ ID NO: 100，且CDR3為SEQ ID NO: 101。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 102，CDR2為SEQ ID NO: 103，且CDR3為SEQ ID NO: 104。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 105，CDR2為SEQ ID NO: 106，且CDR3為SEQ ID NO: 107。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 108，CDR2為SEQ ID NO: 109，且CDR3為SEQ ID NO: 110。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 111，CDR2為SEQ ID NO: 112，且CDR3為SEQ ID NO: 113。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 114，CDR2為SEQ ID NO: 115，且CDR3為SEQ ID NO: 116。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 117，CDR2為SEQ ID NO: 118，且CDR3為SEQ ID NO: 119。
在其他實施例中，CDR1為SEQ ID NO: 120，CDR2為SEQ ID NO: 121，且CDR3為SEQ ID NO: 122。表 4 
在一些實施例中，本文提供結合至間皮素之單域抗體(抗MSLN sdAb)，其包含來自以下抗體中之任一者的一或多個CDR區：如表9中所闡述之抗MSLN-1、抗MSLN-2、抗MSLN-3、抗MSLN-4、抗MSLN-5、抗MSLN-6、抗MSLN-7、抗MSLN-8、抗MSLN-9、抗MSLN-10、抗MSLN-11、抗MSLN-12、抗MSLN-13、抗MSLN-14、抗MSLN-15、抗MSLN-16、抗MSLN-17、抗MSLN-18、抗MSLN-19、抗MSLN-20、抗MSLN-21、抗MSLN-22、抗MSLN-23、抗MSLN-24、抗MSLN-25、抗MSLN-26、抗MSLN-27、抗MSLN-28、抗MSLN-29、抗MSLN-30、抗MSLN-31、抗MSLN-32、抗MSLN-33及抗MSLN-34。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-1之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。如上文所述，CDR區已為熟習此項技術者所熟知且已由熟知編號系統定義。來自此等高變區或CDR中之每一者之殘基在上表1中指出。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 12之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 13之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 14之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 12之CDR1及SEQ ID NO: 13之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 12之CDR1及SEQ ID NO: 14之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 13之CDR2及SEQ ID NO: 14之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 12之CDR1、SEQ ID NO: 13之CDR2及SEQ ID NO: 14之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-2之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 15之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 16之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 17之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 15之CDR1及SEQ ID NO: 16之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 15之CDR1及SEQ ID NO: 17之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 16之CDR2及SEQ ID NO: 17之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 15之CDR1、SEQ ID NO: 16之CDR2及SEQ ID NO: 17之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-3之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 18之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 19之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 20之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 18之CDR1及SEQ ID NO: 19之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 18之CDR1及SEQ ID NO: 20之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 19之CDR2及SEQ ID NO: 20之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 18之CDR1、SEQ ID NO: 19之CDR2及SEQ ID NO: 20之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-4之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 21之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 22之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 23之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 21之CDR1及SEQ ID NO: 22之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 21之CDR1及SEQ ID NO: 23之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 22之CDR2及SEQ ID NO: 23之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 21之CDR1、SEQ ID NO: 22之CDR2及SEQ ID NO: 23之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-5之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 24之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 25之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 26之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 24之CDR1及SEQ ID NO: 25之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 24之CDR1及SEQ ID NO: 26之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 25之CDR2及SEQ ID NO: 26之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 24之CDR1、SEQ ID NO: 25之CDR2及SEQ ID NO: 26之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-6之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 27之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 28之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 29之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 27之CDR1及SEQ ID NO: 28之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 27之CDR1及SEQ ID NO: 29之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 28之CDR2及SEQ ID NO: 29之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 27之CDR1、SEQ ID NO: 28之CDR2及SEQ ID NO: 29之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-7之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 30之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 31之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 32之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 30之CDR1及SEQ ID NO: 31之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 30之CDR1及SEQ ID NO: 32之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 31之CDR2及SEQ ID NO: 32之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 30之CDR1、SEQ ID NO: 31之CDR2及SEQ ID NO: 32之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-8之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 33之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 34之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 35之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 33之CDR1及SEQ ID NO: 34之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 33之CDR1及SEQ ID NO: 35之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 34之CDR2及SEQ ID NO: 35之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 33之CDR1、SEQ ID NO: 34之CDR2及SEQ ID NO: 35之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-9之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 36之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 37之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 38之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 36之CDR1及SEQ ID NO: 37之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 36之CDR1及SEQ ID NO: 38之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 37之CDR2及SEQ ID NO: 38之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 36之CDR1、SEQ ID NO: 37之CDR2及SEQ ID NO: 38之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-10之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 39之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 40之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 41之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 39之CDR1及SEQ ID NO: 40之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 39之CDR1及SEQ ID NO: 41之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 40之CDR2及SEQ ID NO: 41之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 39之CDR1、SEQ ID NO: 40之CDR2及SEQ ID NO: 41之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-11之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 42之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 43之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 44之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 42之CDR1及SEQ ID NO: 43之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 42之CDR1及SEQ ID NO: 44之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 43之CDR2及SEQ ID NO: 44之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 42之CDR1、SEQ ID NO: 43之CDR2及SEQ ID NO: 44之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-12之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 45之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 46之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 47之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 45之CDR1及SEQ ID NO: 46之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 45之CDR1及SEQ ID NO: 47之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 46之CDR2及SEQ ID NO: 47之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 45之CDR1、SEQ ID NO: 46之CDR2及SEQ ID NO: 47之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-13之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 48之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 49之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 50之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 48之CDR1及SEQ ID NO: 49之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 48之CDR1及SEQ ID NO: 50之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 49之CDR2及SEQ ID NO: 50之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 48之CDR1、SEQ ID NO: 49之CDR2及SEQ ID NO: 50之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-14之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 51之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 52之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 53之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 51之CDR1及SEQ ID NO: 52之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 51之CDR1及SEQ ID NO: 53之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 52之CDR2及SEQ ID NO: 53之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 51之CDR1、SEQ ID NO: 52之CDR2及SEQ ID NO: 53之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-15之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 54之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 55之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 56之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 54之CDR1及SEQ ID NO: 55之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 54之CDR1及SEQ ID NO: 56之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 55之CDR2及SEQ ID NO: 56之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 54之CDR1、SEQ ID NO: 55之CDR2及SEQ ID NO: 56之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-16之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 57之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 58之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 59之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 57之CDR1及SEQ ID NO: 58之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 57之CDR1及SEQ ID NO: 59之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 58之CDR2及SEQ ID NO: 59之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 57之CDR1、SEQ ID NO: 58之CDR2及SEQ ID NO: 59之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-17之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 60之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 61之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 62之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 60之CDR1及SEQ ID NO: 61之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 60之CDR1及SEQ ID NO: 62之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 61之CDR2及SEQ ID NO: 62之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 60之CDR1、SEQ ID NO: 61之CDR2及SEQ ID NO: 62之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-18之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 63之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 64之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 65之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 63之CDR1及SEQ ID NO: 64之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 63之CDR1及SEQ ID NO: 65之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 64之CDR2及SEQ ID NO: 65之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 63之CDR1、SEQ ID NO: 64之CDR2及SEQ ID NO: 65之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-19之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 75之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 76之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 77之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 75之CDR1及SEQ ID NO: 76之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 75之CDR1及SEQ ID NO: 77之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 76之CDR2及SEQ ID NO: 77之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 75之CDR1、SEQ ID NO: 76之CDR2及SEQ ID NO: 77之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-20之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 78之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 79之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 80之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 78之CDR1及SEQ ID NO: 79之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 78之CDR1及SEQ ID NO: 80之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 79之CDR2及SEQ ID NO: 80之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 78之CDR1、SEQ ID NO: 79之CDR2及SEQ ID NO: 80之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-21之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 81之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 82之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 83之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 81之CDR1及SEQ ID NO: 82之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 81之CDR1及SEQ ID NO: 83之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 82之CDR2及SEQ ID NO: 83之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 81之CDR1、SEQ ID NO: 82之CDR2及SEQ ID NO: 83之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-22之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 84之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 85之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 86之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 84之CDR1及SEQ ID NO: 85之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 84之CDR1及SEQ ID NO: 86之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 85之CDR2及SEQ ID NO: 86之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 84之CDR1、SEQ ID NO: 85之CDR2及SEQ ID NO: 86之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-23之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 87之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 88之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 89之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 87之CDR1及SEQ ID NO: 88之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 87之CDR1及SEQ ID NO: 89之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 88之CDR2及SEQ ID NO: 89之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 87之CDR1、SEQ ID NO: 88之CDR2及SEQ ID NO: 89之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-24之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 90之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 91之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 92之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 90之CDR1及SEQ ID NO: 91之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 90之CDR1及SEQ ID NO: 92之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 91之CDR2及SEQ ID NO: 92之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 90之CDR1、SEQ ID NO: 91之CDR2及SEQ ID NO: 92之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-25之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 93之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 94之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 95之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 93之CDR1及SEQ ID NO: 94之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 93之CDR1及SEQ ID NO: 95之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 94之CDR2及SEQ ID NO: 95之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 93之CDR1、SEQ ID NO: 94之CDR2及SEQ ID NO: 95之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-26之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 96之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 97之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 98之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 96之CDR1及SEQ ID NO: 97之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 96之CDR1及SEQ ID NO: 98之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 97之CDR2及SEQ ID NO: 98之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 96之CDR1、SEQ ID NO: 97之CDR2及SEQ ID NO: 98之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-27之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 99之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 100之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 101之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 99之CDR1及SEQ ID NO: 100之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 99之CDR1及SEQ ID NO: 101之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 100之CDR2及SEQ ID NO: 101之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 99之CDR1、SEQ ID NO: 100之CDR2及SEQ ID NO: 101之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-28之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 102之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 103之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 104之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 102之CDR1及SEQ ID NO: 103之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 102之CDR1及SEQ ID NO: 104之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 103之CDR2及SEQ ID NO: 104之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 102之CDR1、SEQ ID NO: 103之CDR2及SEQ ID NO: 104之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-29之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 105之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 106之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 107之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 105之CDR1及SEQ ID NO: 106之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 105之CDR1及SEQ ID NO: 107之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 106之CDR2及SEQ ID NO: 107之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 105之CDR1、SEQ ID NO: 106之CDR2及SEQ ID NO: 107之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-30之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 108之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 109之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 110之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 108之CDR1及SEQ ID NO: 109之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 108之CDR1及SEQ ID NO: 110之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 109之CDR2及SEQ ID NO: 110之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 108之CDR1、SEQ ID NO: 109之CDR2及SEQ ID NO: 110之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-31之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 111之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 112之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 113之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 111之CDR1及SEQ ID NO: 112之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 111之CDR1及SEQ ID NO: 113之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 112之CDR2及SEQ ID NO: 113之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 111之CDR1、SEQ ID NO: 112之CDR2及SEQ ID NO: 113之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-32之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 114之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 115之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 116之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 114之CDR1及SEQ ID NO: 115之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 114之CDR1及SEQ ID NO: 116之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 115之CDR2及SEQ ID NO: 116之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 114之CDR1、SEQ ID NO: 115之CDR2及SEQ ID NO: 116之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-33之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統測定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 117之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 118之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 119之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 117之CDR1及SEQ ID NO: 118之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 117之CDR1及SEQ ID NO: 119之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 118之CDR2及SEQ ID NO: 119之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 117之CDR1、SEQ ID NO: 118之CDR2及SEQ ID NO: 119之CDR3。
在一些實施例中，本文提供之抗MSLN sdAb具有一或多個來自抗MSLN-34之CDR區。
在一些實施例中，sdAb具有CDR1，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之CDR1的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之CDR2的胺基酸序列。在其他實施例中，sdAb具有CDR3，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR2，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之CDR1及CDR2的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之CDR1及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之CDR2及CDR3的胺基酸序列。在一些實施例中，sdAb具有CDR1、CDR2及CDR3，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列。CDR序列可根據熟知編號系統決定。在一些實施例中，CDR係根據Kabat編號。在一些實施例中，CDR係根據AbM編號。在其他實施例中，CDR係根據Chothia編號。在其他實施例中，CDR係根據Contact編號。在一些實施例中，CDR係根據IMGT編號。
在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 120之CDR1。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 121之CDR2。在其他實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 122之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 120之CDR1及SEQ ID NO: 121之CDR2。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 120之CDR1及SEQ ID NO: 122之CDR3。在一些實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 121之CDR2及SEQ ID NO: 122之CDR3。在一特定實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 120之CDR1、SEQ ID NO: 121之CDR2及SEQ ID NO: 122之CDR3。
在結合至本文提供之MSLN之各種sdAb之一些實施例中，sdAb進一步包含以下抗體之一或多個FR序列：如表9中所闡述之抗MSLN-1、抗MSLN-2、抗MSLN-3、抗MSLN-4、抗MSLN-5、抗MSLN-6、抗MSLN-7、抗MSLN-8、抗MSLN-9、抗MSLN-10、抗MSLN-11、抗MSLN-12、抗MSLN-13、抗MSLN-14、抗MSLN-15、抗MSLN-16、抗MSLN-17、抗MSLN-18、抗MSLN-19、抗MSLN-20、抗MSLN-21、抗MSLN-22、抗MSLN-23、抗MSLN-24、抗MSLN-25、抗MSLN-26、抗MSLN-27、抗MSLN-28、抗MSLN-29、抗MSLN-30、抗MSLN-31、抗MSLN-32、抗MSLN-33及抗MSLN-34。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 123中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 124中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 125中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 126中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 127中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 128中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 129中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 130中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 131中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 132中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 133中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 134中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 135中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 136中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 137中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 138中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 139中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 140中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 141中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 142中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 143中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 144中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 145中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 146中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 147中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 148中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 149中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 150中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 151中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 152中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 153中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 154中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 155中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR1的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR4，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR2，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR1及FR2的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR3，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR1及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1及FR4，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR1及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR3，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR1、FR2及FR3的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2及FR4，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR1、FR2及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR1、FR3及FR4的胺基酸序列。在一些實施例中，本文提供之sdAb包含FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。在一特定實施例中，本文提供之sdAb包含FR1、FR2、FR3及FR4，其具有如SEQ ID NO: 156中所闡述之FR1、FR2、FR3及FR4的胺基酸序列。
在一些實施例中，本文提供之sdAb為包含一或多個表11中之人類化FR序列的人類化sdAb。本文提供之人類化sdAb之更詳細描述提供於下文。
基於CDR編號系統之邊界確定本文所描述之構架區。換言之，若CDR係藉由例如Kabat、IMGT或Chothia測定，則構架區為可變區中之CDR周圍的胺基酸殘基，其自N端至C端呈以下型式：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。舉例而言，FR1定義為在CDR1胺基酸殘基之N端的胺基酸殘基，如由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統或Chothia編號系統所定義，FR2定義為在CDR1與CDR2胺基酸殘基之間的胺基酸殘基，如由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統或Chothia編號系統所定義，FR3定義為在CDR2與CDR3胺基酸殘基之間的胺基酸殘基，如由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統或Chothia編號系統所定義，且FR4定義為在CDR3胺基酸殘基之C端的胺基酸殘基，如由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統或Chothia編號系統所定義。
在某些更特定實施例中，sdAb包含如以下實例中之表9中所闡述之VH (或VHH)序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 123之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 124之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 125之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 126之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 131之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 133之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 134之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 135之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 136之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 137之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 139之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 140之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 150之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 151之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 155之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 156之胺基酸序列。
在一些實施例中，sdAb以0.01-100 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，sdAb以0.1-100 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，sdAb以1-100 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，sdAb以1-90 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，sdAb以1-80 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，sdAb以1-70 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，sdAb以1-60 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，sdAb以1-50 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，sdAb以1-40 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，sdAb以1-30 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，sdAb以1-20 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，sdAb以1-10 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，sdAb以0.1-1 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，sdAb以0.01-1 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，sdAb以0.01-0.1 nM之間的KD
結合至MSLN。
在一些實施例中，結合至癌症抗原之結合分子包含兩個各自結合至癌細胞上表現之抗原的抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，癌細胞為實體腫瘤癌細胞。在一些實施例中，兩個抗體或其抗原結合片段為兩個sdAb。在一些實施例中，兩個sdAb為VH
H單域抗體。在一些實施例中，兩個sdAb各自結合至MSLN之兩個不同抗原決定基。在一些實施例中，一個抗原決定基在MSLN之N端上且另一抗原決定基在MSLN之C端上。
在一些實施例中，兩個sdAb中之每一者以0.01-100 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，兩個sdAb中之每一者以0.1-100 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，兩個sdAb中之每一者以1-100 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，兩個sdAb中之每一者以1-90 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，兩個sdAb中之每一者以1-80 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，兩個sdAb中之每一者以1-70 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，兩個sdAb中之每一者以1-60 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，兩個sdAb中之每一者以1-50 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，兩個sdAb中之每一者以1-40 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，兩個sdAb中之每一者以1-30 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，兩個sdAb中之每一者以1-20 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，兩個sdAb中之每一者以1-10 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，兩個sdAb中之每一者以0.1-1 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，兩個sdAb中之每一者以0.01-0.1 nM之間的KD
結合至MSLN。
在其他實施例中，兩個抗體或其抗原結合片段係由第三連接子連接。
在另一態樣中，本文提供與單域抗體中之一者競爭結合至上文所述之MSLN的抗體。此類抗體亦可結合至與上文所提及之單域抗體中之一者相同的抗原決定基，或重疊抗原決定基。預期與上文所提及之抗體競爭或結合至相同抗原決定基之抗體及片段展示類似功能特性。例示性抗原結合蛋白及片段包括具有本文中提供之VH區及CDR (包括表5及7中之VH區及CDR)的抗原結合蛋白及片段。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含相對於以下抗體中之任一者具有一定百分比一致性的胺基酸序列：如表9中所闡述之抗MSLN-1、抗MSLN-2、抗MSLN-3、抗MSLN-4、抗MSLN-5、抗MSLN-6、抗MSLN-7、抗MSLN-8、抗MSLN-9、抗MSLN-10、抗MSLN-11、抗MSLN-12、抗MSLN-13、抗MSLN-14、抗MSLN-15、抗MSLN-16、抗MSLN-17、抗MSLN-18、抗MSLN-19、抗MSLN-20、抗MSLN-21、抗MSLN-22、抗MSLN-23、抗MSLN-24、抗MSLN-25、抗MSLN-26、抗MSLN-27、抗MSLN-28、抗MSLN-29、抗MSLN-30、抗MSLN-31、抗MSLN-32、抗MSLN-33及抗MSLN-34。
測定兩個序列(例如胺基酸序列或核酸序列)之間的百分比一致性可使用數學算法來實現。用於比較兩個序列之數學算法的較佳非限制性實例為Karlin及Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87:2264 2268之算法，如在Karlin及Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873 5877中所修改。將此類算法併入至Altschul等人, 1990, J. Mol. Biol. 215:403之NBLAST及XBLAST程式中。可用NBLAST核苷酸程式參數設定(例如對於評分=100，字長=12)進行BLAST核苷酸檢索，以獲得與本文所描述之核酸分子同源的核苷酸序列。可用XBLAST程式參數設定(例如對於評分50，字長=3)進行BLAST蛋白質檢索，以獲得與本文所描述之蛋白質分子同源的胺基酸序列。為獲得間隙比對以達成比較目的，可如Altschul等人, 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389 3402中所描述利用間隙式BLAST。或者，PSI BLAST可用於進行迭代檢索，其偵測分子間之遠距離關係(Id.)。當利用BLAST、間隙式BLAST及PSI Blast程式時，可使用相應方案(例如，XBLAST及NBLAST)之默認參數(參見例如，全球資訊網上之國家生物技術資訊中心(NCBI)，ncbi.nlm.nih.gov)。用於比較序列之數學算法的另一較佳非限制性實例為Myers及Miller, 1988, CABIOS 4:11 17之算法。此類算法併入於ALIGN程式(2.0版)中，該ALIGN程式為GCG序列比對套裝軟體之一部分。當利用ALIGN程式來比較胺基酸序列時，可使用PAM120權重殘基表、空隙長度罰分12及空隙罰分4。
兩個序列之間的一致性百分比可在允許有空隙或不允許有空隙的情況下，使用與上文所描述類似的技術來測定。在計算一致性百分比時，通常僅對精確匹配進行計數。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 125之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 126之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 127之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 128之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 129之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 130之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 131之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 132之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 133之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 134之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 135之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 136之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 137之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 138之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 139之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 140之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 141之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 142之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 143之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 144之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 145之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 146之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 147之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 148之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 149之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 150之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 151之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 152之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 153之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 154之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 155之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 123之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-1之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 124之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-2之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 125之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-3之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 126之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-4之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 127之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-5之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 128之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-6之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 129之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-7之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 130之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-8之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 131之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-9之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 132之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-10之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 133之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-11之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 134之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-12之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 135之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-13之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 136之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-14之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 137之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-15之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 138之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-16之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 139之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-17之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 140之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-18之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 141之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-19之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 142之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-20之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 143之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-21之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 144之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-22之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 145之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-23之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 146之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-24之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 147之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-25之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 148之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-26之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 149之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-27之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 150之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-28之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 151之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-29之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 152之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-30之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 153之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-31之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 154之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-32之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 155之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-33之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含VH域，該VH域包含與SEQ ID NO: 156之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區，其中該抗體免疫特異性結合至MSLN。在特定實施例中，此類抗體包含與抗體抗MSLN-34之CDR (例如VH CDR 1-3)相同的CDR (例如VH CDR 1-3)。
人類化單域抗體
本文所述之單域抗體可包括人類化單域抗體。
人類化抗體可使用此項技術中已知之多種技術產生，包括但不限於CDR-移植(歐洲專利第EP 239,400號；國際公開案第WO 91/09967號；及美國專利第5,225,539號、第5,530,101號及第5,585,089號)、鑲飾或表面重塑(歐洲專利第EP 592,106號及第EP 519,596號；Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498；Studnicka等人, 1994, Protein Engineering 7(6):805-814；及Roguska等人, 1994, PNAS 91:969-973)、鏈改組(美國專利第5,565,332號)，及例如以下各者中所揭示之技術：美國專利第6,407,213號；美國專利第5,766,886號；WO 9317105；Tan等人, J. Immunol. 169:1119 25 (2002)；Caldas等人, Protein Eng. 13(5):353-60 (2000)；Morea等人, Methods 20(3):267 79 (2000)；Baca等人, J. Biol. Chem. 272(16):10678-84 (1997)；Roguska等人, Protein Eng. 9(10):895 904 (1996)；Couto等人, Cancer Res. 55 (23增刊):5973s- 5977s (1995)；Couto等人, Cancer Res. 55(8):1717-22 (1995)；Sandhu JS, Gene 150(2):409-10 (1994)及Pedersen等人, J. Mol. Biol. 235(3):959-73 (1994)。亦參見美國專利公開案第US 2005/0042664 A1號(2005年2月24日)，各文獻以全文引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，本文所提供之抗體可為結合MSLN (包括人類MSLN)之人類化抗體。舉例而言，本發明之人類化抗體可包含如表4及表10中所示之一或多個CDR。用於人類化非人類抗體之各種方法為此項技術中已知的。舉例而言，人類化抗體可具有自非人類來源引入其中之一或多個胺基酸殘基。此等非人類胺基酸殘基通常稱為「輸入」殘基，其通常取自「輸入」可變域。人類化可例如遵循Jones等人, 1986, Nature 321:522-25；Riechmann等人, 1988, Nature 332:323-27；及Verhoeyen等人, 1988, Science 239:1534-36)之方法，藉由用高變區序列取代人類抗體之相應序列來進行。
在一些情況下，人類化抗體係藉由CDR移植構築，其中親本非人類抗體之CDR之胺基酸序列係移植至人類抗體構架上。舉例而言，Padlan等人測定CDR中僅約三分之一的殘基實際上接觸抗原，且將此等殘基稱為「特異性決定殘基」或SDR (Padlan等人, 1995, FASEB J. 9:133-39)。在SDR移植技術中，僅將SDR殘基移植至人類抗體構架上(參見例如Kashmiri等人, 2005, Methods 36:25-34)。
用於製造人類化抗體之人類可變域的選擇可能對於降低抗原性而言重要。舉例而言，根據所謂的「最佳擬合」方法，非人類抗體之可變域的序列係針對已知人類可變域序列之整個文庫篩選。可選擇最接近非人類抗體之人類序列作為人類化抗體之人類構架(Sims等人, 1993, J. Immunol. 151:2296-308；及Chothia等人, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-17)。另一方法使用衍生自輕鏈或重鏈之特定子組的所有人類抗體之共同序列的特定構架。相同構架可用於若干不同人類化抗體(Carter等人, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-89；及Presta等人, 1993, J. Immunol. 151:2623-32)。在一些情況下，構架衍生自最豐富人類子類，VL
6子組I (VL
6I)及VH
子組III (VH
III)之共同序列。在另一方法中，使用人類生殖系基因作為構架區來源。
在基於CDR之比較之替代性範例(稱為超人類化)中，FR同源性無關。該方法由比較非人類序列與功能性人類生殖系基因基因譜組成。接著選擇此等編碼與鼠類序列相同或緊密相關標準結構之基因。接著，在與非人類抗體共有標準結構之基因內，選擇在CDR內具有最高同源性之基因作為FR供體。最後，將非人類CDR移植至此等FR上(參見例如Tan等人, 2002, J. Immunol. 169:1119-25)。
通常進一步需要抗體經人類化而保持其對抗原之親和力及其他有利生物特性。為了達成此目標，根據一種方法，人類化抗體係藉由一種使用親本及人類化序列的三維模型分析親本序列及各種概念性人類化產品的方法製備。三維免疫球蛋白模型通常可獲得，且為熟習此項技術者所熟悉。可利用說明且呈現所選候選免疫球蛋白序列之可能三維構形結構的電腦程式。此等電腦程式包括例如WAM (Whitelegg及Rees, 2000, Protein Eng. 13:819-24)、Modeller (Sali及Blundell, 1993, J. Mol. Biol. 234:779-815)，及Swiss PDB Viewer (Guex及Peitsch, 1997, Electrophoresis 18:2714-23)。檢查此等呈現准許分析殘基在候選免疫球蛋白序列之功能中的可能作用，例如分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原之能力的殘基。以此方式，可自接受者及輸入序列選擇及組合FR殘基，以達成所需抗體特徵，諸如增加的針對目標抗原之親和力。一般而言，高變區殘基直接且最實質性涉及影響抗原結合。
另一種用於抗體人類化之方法係基於稱為人類鏈帶含量(HSC)之抗體人類化量度。此方法比較小鼠序列與人類生殖系基因譜系，且以HSC形式對差異進行評分。接著藉由最大化目標序列之HSC而非使用總體一致性量度來使靶序列發生人類化，以產生多種不同人類化變異體(Lazar等人, 2007, Mol. Immunol. 44:1986-98)。
除上述方法以外，可使用經驗方法產生及選擇人類化抗體。此等方法包括使用富集技術或高輸送量篩選技術之基於人類化變異體之大型文庫之產生及最佳純系之選擇的方法。抗體變異體可自噬菌體、核糖體及酵母呈現文庫分離以及藉由細菌菌落篩選分離(參見例如Hoogenboom, 2005, Nat. Biotechnol. 23:1105-16；Dufner等人, 2006, Trends Biotechnol. 24:523-29；Feldhaus等人, 2003, Nat. Biotechnol. 21:163-70；及Schlapschy等人, 2004, Protein Eng. Des. Sel. 17:847-60)。
在FR文庫方法中，在FR中之特定位置引入一組殘基變異體，隨後篩選文庫以選擇最佳支持所移植CDR之FR。待取代之殘基可包括鑑別為潛在地促成CDR結構之「Vernier」殘基中之一些或全部(參見例如Foote及Winter, 1992, J. Mol. Biol. 224:487-99)，或來自藉由Baca等人 (1997, J. Biol. Chem. 272:10678-84)鑑別之目標殘基之更有限集合。
在FR改組中，將整個FR與非人類CDR組合，而非產生所選殘基變異體之組合文庫(參見例如Dall'Acqua等人, 2005, Methods 36:43-60)。可使用單步FR改組方法。已顯示此類方法為高效的，因為所得抗體展現改良之生物化學及物理化學特性，包括增強之表現、增加之親和力及熱穩定性(參見例如Damschroder等人, 2007, Mol. Immunol. 44:3049-60)。
「人類化」方法係基於基本最小特異性決定子(MSD)之實驗鑑別且係基於非人類片段依序置換至人類FR之文庫中且評估結合。此方法通常引起抗原決定基保留及自具有不同人類V區段CDR之多個子類中鑑別抗體。
「人類工程化」方法涉及藉由對抗體之胺基酸序列作出特定改變來更改非人類抗體或抗體片段，以產生在人體中具有降低之免疫原性的經修飾抗體，其仍保留原始非人類抗體之所需結合特性。通常，該技術涉及將非人類抗體之胺基酸殘基分類為「低風險」、「中等風險」或「高風險」殘基。分類係使用總體風險/獎勵計算來執行，其針對取代將影響所產生抗體摺疊的風險來評估產生特定取代的預測益處(例如針對人體中的免疫原性)。非人類抗體序列之給定位置處待取代之特定人類胺基酸殘基(例如低風險或中等風險)可藉由比對來自非人類抗體之可變區的胺基酸序列與特定或共同人類抗體序列之對應區來選擇。根據比對，非人類序列中低風險或中等風險位置處之胺基酸殘基可取代人類抗體序列中之相應殘基。製造人類工程化蛋白質之技術更詳細地描述於Studnicka等人, 1994, Protein Engineering 7:805-14；美國專利第5,766,886號；第5,770,196號；第5,821,123號；及第5,869,619號；以及PCT公開案WO 93/11794中。
複合人類抗體可使用例如Composite Human Antibody™技術(Antitope Ltd., Cambridge, United Kingdom)來產生。為產生複合人類抗體，以避免T細胞抗原決定基的方式由多個人類抗體可變區序列之片段設計可變區序列，藉此使所得抗體之免疫原性最小化。
脫免疫型抗體為其中已移除T細胞抗原決定基之抗體。已描述用於製造脫免疫型抗體之方法。參見例如，Jones等人, Methods Mol Biol. 2009;525:405-23, xiv及De Groot等人, Cell. Immunol. 244:148-153(2006))。脫免疫型抗體包含去除T細胞抗原決定基之可變區及人類恆定區。簡言之，抗體之可變區經選殖且T細胞抗原決定基隨後藉由在T細胞增殖分析中測試衍生自該抗體之可變區的重疊肽來鑑別。經由計算機模擬方法鑑別T細胞抗原決定基以鑑別結合於人類II類MHC之肽。在可變區中引入突變以消除與人類II類MHC之結合。突變可變區接著用於產生脫免疫型抗體。
在一特定實施例中，本文提供之單域抗體為根據以下實例3中所述之方法產生之人類化單域抗體。在一些實施例中，本文提供之單域抗體為包含以下實例3中之表11中所列之一或多個FR序列的人類化單域抗體。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-1之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 157之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 158之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 159之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 157之FR1及SEQ ID NO: 158之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 157之FR1及SEQ ID NO: 159之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 157之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 158之FR2及SEQ ID NO: 159之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 158之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 159之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 157之FR1、SEQ ID NO: 158之FR2及SEQ ID NO: 159之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 157之FR1、SEQ ID NO: 158之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 157之FR1、SEQ ID NO: 159之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 158之FR2、SEQ ID NO: 159之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 157之FR1、SEQ ID NO: 158之FR2、SEQ ID NO: 159之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 12之CDR1、SEQ ID NO: 13之CDR2、SEQ ID NO: 14之CDR3、SEQ ID NO: 157之FR1、SEQ ID NO: 158之FR2、SEQ ID NO: 159之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-2之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 161之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 162之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 163之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 161之FR1及SEQ ID NO: 162之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 161之FR1及SEQ ID NO: 163之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 161之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 162之FR2及SEQ ID NO: 163之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 162之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 163之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 161之FR1、SEQ ID NO: 162之FR2及SEQ ID NO: 163之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 161之FR1、SEQ ID NO: 162之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 161之FR1、SEQ ID NO: 163之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 162之FR2、SEQ ID NO: 163之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 161之FR1、SEQ ID NO: 162之FR2、SEQ ID NO: 163之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 15之CDR1、SEQ ID NO: 16之CDR2、SEQ ID NO: 17之CDR3、SEQ ID NO: 161之FR1、SEQ ID NO: 162之FR2、SEQ ID NO: 163之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-3之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 164之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 165之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 166之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 164之FR1及SEQ ID NO: 165之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 164之FR1及SEQ ID NO: 166之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 164之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 165之FR2及SEQ ID NO: 166之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 165之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 166之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 164之FR1、SEQ ID NO: 165之FR2及SEQ ID NO: 166之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 164之FR1、SEQ ID NO: 165之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 164之FR1、SEQ ID NO: 166之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 165之FR2、SEQ ID NO: 166之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 164之FR1、SEQ ID NO: 165之FR2、SEQ ID NO: 166之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 18之CDR1、SEQ ID NO: 19之CDR2、SEQ ID NO: 20之CDR3、SEQ ID NO: 164之FR1、SEQ ID NO: 165之FR2、SEQ ID NO: 166之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-4之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 167之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 168之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 169之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 167之FR1及SEQ ID NO: 168之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 167之FR1及SEQ ID NO: 169之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 167之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 168之FR2及SEQ ID NO: 169之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 168之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 169之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 167之FR1、SEQ ID NO: 168之FR2及SEQ ID NO: 169之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 167之FR1、SEQ ID NO: 168之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 167之FR1、SEQ ID NO: 169之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 168之FR2、SEQ ID NO: 169之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 167之FR1、SEQ ID NO: 168之FR2、SEQ ID NO: 169之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 21之CDR1、SEQ ID NO: 22之CDR2、SEQ ID NO: 23之CDR3、SEQ ID NO: 167之FR1、SEQ ID NO: 168之FR2、SEQ ID NO: 169之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-5之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 170之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 171之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 172之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 170之FR1及SEQ ID NO: 171之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 170之FR1及SEQ ID NO: 172之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 170之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 171之FR2及SEQ ID NO: 172之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 171之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 172之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 170之FR1、SEQ ID NO: 171之FR2及SEQ ID NO: 172之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 170之FR1、SEQ ID NO: 171之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 170之FR1、SEQ ID NO: 172之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 171之FR2、SEQ ID NO: 172之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 170之FR1、SEQ ID NO: 171之FR2、SEQ ID NO: 172之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 24之CDR1、SEQ ID NO: 25之CDR2、SEQ ID NO: 26之CDR3、SEQ ID NO: 170之FR1、SEQ ID NO: 171之FR2、SEQ ID NO: 172之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-6之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 173之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 174之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 175之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 173之FR1及SEQ ID NO: 174之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 173之FR1及SEQ ID NO: 175之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 173之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 174之FR2及SEQ ID NO: 175之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 174之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 175之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 173之FR1、SEQ ID NO: 174之FR2及SEQ ID NO: 175之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 173之FR1、SEQ ID NO: 174之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 173之FR1、SEQ ID NO: 175之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 174之FR2、SEQ ID NO: 175之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 173之FR1、SEQ ID NO: 174之FR2、SEQ ID NO: 175之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 27之CDR1、SEQ ID NO: 28之CDR2、SEQ ID NO: 29之CDR3、SEQ ID NO: 173之FR1、SEQ ID NO: 174之FR2、SEQ ID NO: 175之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-7之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 176之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 177之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 178之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 176之FR1及SEQ ID NO: 177之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 176之FR1及SEQ ID NO: 178之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 176之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 177之FR2及SEQ ID NO: 178之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 177之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 178之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 176之FR1、SEQ ID NO: 177之FR2及SEQ ID NO: 178之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 176之FR1、SEQ ID NO: 177之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 176之FR1、SEQ ID NO: 178之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 177之FR2、SEQ ID NO: 178之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 176之FR1、SEQ ID NO: 177之FR2、SEQ ID NO: 178之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 30之CDR1、SEQ ID NO: 31之CDR2、SEQ ID NO: 32之CDR3、SEQ ID NO: 176之FR1、SEQ ID NO: 177之FR2、SEQ ID NO: 178之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-8之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 179之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 180之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 181之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 179之FR1及SEQ ID NO: 180之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 179之FR1及SEQ ID NO: 181之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 179之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 180之FR2及SEQ ID NO: 181之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 180之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 181之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 179之FR1、SEQ ID NO: 180之FR2及SEQ ID NO: 181之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 179之FR1、SEQ ID NO: 180之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 179之FR1、SEQ ID NO: 181之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 180之FR2、SEQ ID NO: 181之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 179之FR1、SEQ ID NO: 180之FR2、SEQ ID NO: 181之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 33之CDR1、SEQ ID NO: 34之CDR2、SEQ ID NO: 35之CDR3、SEQ ID NO: 179之FR1、SEQ ID NO: 180之FR2、SEQ ID NO: 181之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-9之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 182之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 183之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 184之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 182之FR1及SEQ ID NO: 183之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 182之FR1及SEQ ID NO: 184之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 182之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 183之FR2及SEQ ID NO: 184之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 183之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 184之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 182之FR1、SEQ ID NO: 183之FR2及SEQ ID NO: 184之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 182之FR1、SEQ ID NO: 183之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 182之FR1、SEQ ID NO: 184之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 183之FR2、SEQ ID NO: 184之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 182之FR1、SEQ ID NO: 183之FR2、SEQ ID NO: 184之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 36之CDR1、SEQ ID NO: 37之CDR2、SEQ ID NO: 38之CDR3、SEQ ID NO: 182之FR1、SEQ ID NO: 183之FR2、SEQ ID NO: 184之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-10之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 185之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 186之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 187之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 185之FR1及SEQ ID NO: 186之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 185之FR1及SEQ ID NO: 187之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 185之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 186之FR2及SEQ ID NO: 187之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 186之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 187之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 185之FR1、SEQ ID NO: 186之FR2及SEQ ID NO: 187之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 185之FR1、SEQ ID NO: 186之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 185之FR1、SEQ ID NO: 187之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 186之FR2、SEQ ID NO: 187之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 185之FR1、SEQ ID NO: 186之FR2、SEQ ID NO: 187之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 39之CDR1、SEQ ID NO: 40之CDR2、SEQ ID NO: 41之CDR3、SEQ ID NO: 185之FR1、SEQ ID NO: 186之FR2、SEQ ID NO: 187之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-11之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 188之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 189之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 190之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 188之FR1及SEQ ID NO: 189之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 188之FR1及SEQ ID NO: 190之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 188之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 189之FR2及SEQ ID NO: 190之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 189之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 190之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 188之FR1、SEQ ID NO: 189之FR2及SEQ ID NO: 190之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 188之FR1、SEQ ID NO: 189之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 188之FR1、SEQ ID NO: 190之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 189之FR2、SEQ ID NO: 190之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 188之FR1、SEQ ID NO: 189之FR2、SEQ ID NO: 190之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 42之CDR1、SEQ ID NO: 43之CDR2、SEQ ID NO: 44之CDR3、SEQ ID NO: 188之FR1、SEQ ID NO: 189之FR2、SEQ ID NO: 190之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-12之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 191之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 192之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 193之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 191之FR1及SEQ ID NO: 192之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 191之FR1及SEQ ID NO: 193之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 191之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 192之FR2及SEQ ID NO: 193之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 192之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 193之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 191之FR1、SEQ ID NO: 192之FR2及SEQ ID NO: 193之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 191之FR1、SEQ ID NO: 192之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 191之FR1、SEQ ID NO: 193之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 192之FR2、SEQ ID NO: 193之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 191之FR1、SEQ ID NO: 192之FR2、SEQ ID NO: 193之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 45之CDR1、SEQ ID NO: 46之CDR2、SEQ ID NO: 47之CDR3、SEQ ID NO: 191之FR1、SEQ ID NO: 192之FR2、SEQ ID NO: 193之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-13之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 194之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 195之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 196之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 194之FR1及SEQ ID NO: 195之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 194之FR1及SEQ ID NO: 196之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 194之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 195之FR2及SEQ ID NO: 196之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 195之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 196之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 194之FR1、SEQ ID NO: 195之FR2及SEQ ID NO: 196之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 194之FR1、SEQ ID NO: 195之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 194之FR1、SEQ ID NO: 196之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 195之FR2、SEQ ID NO: 196之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 194之FR1、SEQ ID NO: 195之FR2、SEQ ID NO: 196之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 48之CDR1、SEQ ID NO: 49之CDR2、SEQ ID NO: 50之CDR3、SEQ ID NO: 194之FR1、SEQ ID NO: 195之FR2、SEQ ID NO: 196之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-14之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 197之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 198之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 199之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 197之FR1及SEQ ID NO: 198之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 197之FR1及SEQ ID NO: 199之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 197之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 198之FR2及SEQ ID NO: 199之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 198之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 199之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 197之FR1、SEQ ID NO: 198之FR2及SEQ ID NO: 199之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 197之FR1、SEQ ID NO: 198之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 197之FR1、SEQ ID NO: 199之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 198之FR2、SEQ ID NO: 199之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 197之FR1、SEQ ID NO: 198之FR2、SEQ ID NO: 199之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 51之CDR1、SEQ ID NO: 52之CDR2、SEQ ID NO: 53之CDR3、SEQ ID NO: 197之FR1、SEQ ID NO: 198之FR2、SEQ ID NO: 199之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-15之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 200之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 201之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 202之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 200之FR1及SEQ ID NO: 201之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 200之FR1及SEQ ID NO: 202之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 200之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 201之FR2及SEQ ID NO: 202之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 201之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 202之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 200之FR1、SEQ ID NO: 201之FR2及SEQ ID NO: 202之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 200之FR1、SEQ ID NO: 201之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 200之FR1、SEQ ID NO: 202之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 201之FR2、SEQ ID NO: 202之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 200之FR1、SEQ ID NO: 201之FR2、SEQ ID NO: 202之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 54之CDR1、SEQ ID NO: 55之CDR2、SEQ ID NO: 56之CDR3、SEQ ID NO: 200之FR1、SEQ ID NO: 201之FR2、SEQ ID NO: 202之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-16之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 203之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 204之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 205之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 203之FR1及SEQ ID NO: 204之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 203之FR1及SEQ ID NO: 205之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 203之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 204之FR2及SEQ ID NO: 205之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 204之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 205之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 203之FR1、SEQ ID NO: 204之FR2及SEQ ID NO: 205之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 203之FR1、SEQ ID NO: 204之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 203之FR1、SEQ ID NO: 205之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 204之FR2、SEQ ID NO: 205之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 203之FR1、SEQ ID NO: 204之FR2、SEQ ID NO: 205之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 57之CDR1、SEQ ID NO: 58之CDR2、SEQ ID NO: 59之CDR3、SEQ ID NO: 203之FR1、SEQ ID NO: 204之FR2、SEQ ID NO: 205之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-17之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 206之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 207之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 208之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 206之FR1及SEQ ID NO: 207之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 206之FR1及SEQ ID NO: 208之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 206之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 207之FR2及SEQ ID NO: 208之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 207之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 208之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 206之FR1、SEQ ID NO: 207之FR2及SEQ ID NO: 208之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 206之FR1、SEQ ID NO: 207之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 206之FR1、SEQ ID NO: 208之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 207之FR2、SEQ ID NO: 208之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 206之FR1、SEQ ID NO: 207之FR2、SEQ ID NO: 208之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 60之CDR1、SEQ ID NO: 61之CDR2、SEQ ID NO: 62之CDR3、SEQ ID NO: 206之FR1、SEQ ID NO: 207之FR2、SEQ ID NO: 208之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-18之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 209之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 210之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 211之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 209之FR1及SEQ ID NO: 210之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 209之FR1及SEQ ID NO: 211之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 209之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 210之FR2及SEQ ID NO: 211之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 210之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 211之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 209之FR1、SEQ ID NO: 210之FR2及SEQ ID NO: 211之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 209之FR1、SEQ ID NO: 210之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 209之FR1、SEQ ID NO: 211之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 210之FR2、SEQ ID NO: 211之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 209之FR1、SEQ ID NO: 210之FR2、SEQ ID NO: 211之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 63之CDR1、SEQ ID NO: 64之CDR2、SEQ ID NO: 65之CDR3、SEQ ID NO: 209之FR1、SEQ ID NO: 210之FR2、SEQ ID NO: 211之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-19之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 212之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 213之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 214之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 212之FR1及SEQ ID NO: 213之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 212之FR1及SEQ ID NO: 214之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 212之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 213之FR2及SEQ ID NO: 214之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 213之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 214之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 212之FR1、SEQ ID NO: 213之FR2及SEQ ID NO: 214之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 212之FR1、SEQ ID NO: 213之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 212之FR1、SEQ ID NO: 214之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 213之FR2、SEQ ID NO: 214之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 212之FR1、SEQ ID NO: 213之FR2、SEQ ID NO: 214之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 75之CDR1、SEQ ID NO: 76之CDR2、SEQ ID NO: 77之CDR3、SEQ ID NO: 212之FR1、SEQ ID NO: 213之FR2、SEQ ID NO: 214之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-20之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 215之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 216之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 217之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 215之FR1及SEQ ID NO: 216之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 215之FR1及SEQ ID NO: 217之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 215之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 216之FR2及SEQ ID NO: 217之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 216之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 217之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 215之FR1、SEQ ID NO: 216之FR2及SEQ ID NO: 217之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 215之FR1、SEQ ID NO: 216之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 215之FR1、SEQ ID NO: 217之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 216之FR2、SEQ ID NO: 217之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 215之FR1、SEQ ID NO: 216之FR2、SEQ ID NO: 217之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 78之CDR1、SEQ ID NO: 79之CDR2、SEQ ID NO: 80之CDR3、SEQ ID NO: 215之FR1、SEQ ID NO: 216之FR2、SEQ ID NO: 217之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-21之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 218之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 219之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 220之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 218之FR1及SEQ ID NO: 219之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 218之FR1及SEQ ID NO: 220之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 218之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 219之FR2及SEQ ID NO: 220之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 219之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 220之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 218之FR1、SEQ ID NO: 219之FR2及SEQ ID NO: 220之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 218之FR1、SEQ ID NO: 219之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 218之FR1、SEQ ID NO: 220之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 219之FR2、SEQ ID NO: 220之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 218之FR1、SEQ ID NO: 219之FR2、SEQ ID NO: 220之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 81之CDR1、SEQ ID NO: 82之CDR2、SEQ ID NO: 83之CDR3、SEQ ID NO: 218之FR1、SEQ ID NO: 219之FR2、SEQ ID NO: 220之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-22之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 221之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 222之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 223之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 221之FR1及SEQ ID NO: 222之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 221之FR1及SEQ ID NO: 223之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 221之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 222之FR2及SEQ ID NO: 223之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 222之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 223之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 221之FR1、SEQ ID NO: 222之FR2及SEQ ID NO: 223之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 221之FR1、SEQ ID NO: 222之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 221之FR1、SEQ ID NO: 223之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 222之FR2、SEQ ID NO: 223之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 221之FR1、SEQ ID NO: 222之FR2、SEQ ID NO: 223之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 84之CDR1、SEQ ID NO: 85之CDR2、SEQ ID NO: 86之CDR3、SEQ ID NO: 221之FR1、SEQ ID NO: 222之FR2、SEQ ID NO: 223之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-23之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 224之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 225之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 226之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 224之FR1及SEQ ID NO: 225之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 224之FR1及SEQ ID NO: 226之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 224之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 225之FR2及SEQ ID NO: 226之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 225之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 226之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 224之FR1、SEQ ID NO: 225之FR2及SEQ ID NO: 226之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 224之FR1、SEQ ID NO: 225之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 224之FR1、SEQ ID NO: 226之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 225之FR2、SEQ ID NO: 226之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 224之FR1、SEQ ID NO: 225之FR2、SEQ ID NO: 226之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 87之CDR1、SEQ ID NO: 88之CDR2、SEQ ID NO: 89之CDR3、SEQ ID NO: 224之FR1、SEQ ID NO: 225之FR2、SEQ ID NO: 226之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-24之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 227之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 228之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 229之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 227之FR1及SEQ ID NO: 228之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 227之FR1及SEQ ID NO: 229之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 227之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 228之FR2及SEQ ID NO: 229之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 228之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 229之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 227之FR1、SEQ ID NO: 228之FR2及SEQ ID NO: 229之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 227之FR1、SEQ ID NO: 228之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 227之FR1、SEQ ID NO: 229之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 228之FR2、SEQ ID NO: 229之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 227之FR1、SEQ ID NO: 228之FR2、SEQ ID NO: 229之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 90之CDR1、SEQ ID NO: 91之CDR2、SEQ ID NO: 92之CDR3、SEQ ID NO: 227之FR1、SEQ ID NO: 228之FR2、SEQ ID NO: 229之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-25之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 230之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 231之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 232之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 230之FR1及SEQ ID NO: 231之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 230之FR1及SEQ ID NO: 232之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 230之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 231之FR2及SEQ ID NO: 232之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 231之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 232之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 230之FR1、SEQ ID NO: 231之FR2及SEQ ID NO: 232之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 230之FR1、SEQ ID NO: 231之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 230之FR1、SEQ ID NO: 232之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 231之FR2、SEQ ID NO: 232之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 230之FR1、SEQ ID NO: 231之FR2、SEQ ID NO: 232之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 93之CDR1、SEQ ID NO: 94之CDR2、SEQ ID NO: 95之CDR3、SEQ ID NO: 230之FR1、SEQ ID NO: 231之FR2、SEQ ID NO: 232之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-26之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 233之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 234之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 235之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 233之FR1及SEQ ID NO: 234之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 233之FR1及SEQ ID NO: 235之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 233之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 234之FR2及SEQ ID NO: 235之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 234之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 235之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 233之FR1、SEQ ID NO: 234之FR2及SEQ ID NO: 235之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 233之FR1、SEQ ID NO: 234之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 233之FR1、SEQ ID NO: 235之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 234之FR2、SEQ ID NO: 235之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 233之FR1、SEQ ID NO: 234之FR2、SEQ ID NO: 235之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 96之CDR1、SEQ ID NO: 97之CDR2、SEQ ID NO: 98之CDR3、SEQ ID NO: 233之FR1、SEQ ID NO: 234之FR2、SEQ ID NO: 235之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-27之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 236之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 237之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 238之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 236之FR1及SEQ ID NO: 237之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 236之FR1及SEQ ID NO: 238之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 236之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 237之FR2及SEQ ID NO: 238之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 237之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 238之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 236之FR1、SEQ ID NO: 237之FR2及SEQ ID NO: 238之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 236之FR1、SEQ ID NO: 237之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 236之FR1、SEQ ID NO: 238之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 237之FR2、SEQ ID NO: 238之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 236之FR1、SEQ ID NO: 237之FR2、SEQ ID NO: 238之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 99之CDR1、SEQ ID NO: 100之CDR2、SEQ ID NO: 101之CDR3、SEQ ID NO: 236之FR1、SEQ ID NO: 237之FR2、SEQ ID NO: 238之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-28之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 239之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 240之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 241之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 239之FR1及SEQ ID NO: 240之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 239之FR1及SEQ ID NO: 241之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 239之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 240之FR2及SEQ ID NO: 241之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 240之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 241之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 239之FR1、SEQ ID NO: 240之FR2及SEQ ID NO: 241之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 239之FR1、SEQ ID NO: 240之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 239之FR1、SEQ ID NO: 241之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 240之FR2、SEQ ID NO: 241之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 239之FR1、SEQ ID NO: 240之FR2、SEQ ID NO: 241之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 102之CDR1、SEQ ID NO: 103之CDR2、SEQ ID NO: 104之CDR3、SEQ ID NO: 239之FR1、SEQ ID NO: 240之FR2、SEQ ID NO: 241之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-29之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 242之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 243之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 244之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 242之FR1及SEQ ID NO: 243之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 242之FR1及SEQ ID NO: 244之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 242之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 243之FR2及SEQ ID NO: 244之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 243之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 244之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 242之FR1、SEQ ID NO: 243之FR2及SEQ ID NO: 244之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 242之FR1、SEQ ID NO: 243之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 242之FR1、SEQ ID NO: 244之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 243之FR2、SEQ ID NO: 244之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 242之FR1、SEQ ID NO: 243之FR2、SEQ ID NO: 244之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 105之CDR1、SEQ ID NO: 106之CDR2、SEQ ID NO: 107之CDR3、SEQ ID NO: 242之FR1、SEQ ID NO: 243之FR2、SEQ ID NO: 244之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-30之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 245之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 246之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 247之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 245之FR1及SEQ ID NO: 246之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 245之FR1及SEQ ID NO: 247之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 245之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 246之FR2及SEQ ID NO: 247之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 246之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 247之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 245之FR1、SEQ ID NO: 246之FR2及SEQ ID NO: 247之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 245之FR1、SEQ ID NO: 246之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 245之FR1、SEQ ID NO: 247之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 246之FR2、SEQ ID NO: 247之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 245之FR1、SEQ ID NO: 246之FR2、SEQ ID NO: 247之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 108之CDR1、SEQ ID NO: 109之CDR2、SEQ ID NO: 110之CDR3、SEQ ID NO: 245之FR1、SEQ ID NO: 246之FR2、SEQ ID NO: 247之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-31之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 248之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 249之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 250之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 248之FR1及SEQ ID NO: 249之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 248之FR1及SEQ ID NO: 250之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 248之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 249之FR2及SEQ ID NO: 250之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 249之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 250之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 248之FR1、SEQ ID NO: 249之FR2及SEQ ID NO: 250之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 248之FR1、SEQ ID NO: 249之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 248之FR1、SEQ ID NO: 250之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 249之FR2、SEQ ID NO: 250之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 248之FR1、SEQ ID NO: 249之FR2、SEQ ID NO: 250之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 111之CDR1、SEQ ID NO: 112之CDR2、SEQ ID NO: 113之CDR3、SEQ ID NO: 248之FR1、SEQ ID NO: 249之FR2、SEQ ID NO: 250之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-32之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 251之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 252之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 253之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 251之FR1及SEQ ID NO: 252之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 251之FR1及SEQ ID NO: 253之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 251之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 252之FR2及SEQ ID NO: 253之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 252之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 253之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 251之FR1、SEQ ID NO: 252之FR2及SEQ ID NO: 253之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 251之FR1、SEQ ID NO: 252之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 251之FR1、SEQ ID NO: 253之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 252之FR2、SEQ ID NO: 253之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 251之FR1、SEQ ID NO: 252之FR2、SEQ ID NO: 253之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 114之CDR1、SEQ ID NO: 115之CDR2、SEQ ID NO: 116之CDR3、SEQ ID NO: 251之FR1、SEQ ID NO: 252之FR2、SEQ ID NO: 253之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-33之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 254之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 255之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 256之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 254之FR1及SEQ ID NO: 255之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 254之FR1及SEQ ID NO: 256之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 254之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 255之FR2及SEQ ID NO: 256之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 255之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 256之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 254之FR1、SEQ ID NO: 255之FR2及SEQ ID NO: 256之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 254之FR1、SEQ ID NO: 255之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 254之FR1、SEQ ID NO: 256之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 255之FR2、SEQ ID NO: 256之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 254之FR1、SEQ ID NO: 255之FR2、SEQ ID NO: 256之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 117之CDR1、SEQ ID NO: 118之CDR2、SEQ ID NO: 119之CDR3、SEQ ID NO: 254之FR1、SEQ ID NO: 255之FR2、SEQ ID NO: 256之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，sdAb具有人類化抗MSLN-34之一或多個FR序列。
在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 257之FR1。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 258之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 259之FR3。在其他實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 257之FR1及SEQ ID NO: 258之FR2。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 257之FR1及SEQ ID NO: 259之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 257之FR1及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 258之FR2及SEQ ID NO: 259之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 258之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 259之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 257之FR1、SEQ ID NO: 258之FR2及SEQ ID NO: 259之FR3。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 257之FR1、SEQ ID NO: 258之FR2及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 257之FR1、SEQ ID NO: 259之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 258之FR2、SEQ ID NO: 259之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。在一些實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 257之FR1、SEQ ID NO: 258之FR2、SEQ ID NO: 259之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一特定實施例中，人類化sdAb具有SEQ ID NO: 120之CDR1、SEQ ID NO: 121之CDR2、SEQ ID NO: 122之CDR3、SEQ ID NO: 257之FR1、SEQ ID NO: 258之FR2、SEQ ID NO: 259之FR3及SEQ ID NO: 160之FR4。
在一些實施例中，人類化sdAb以0.01-100 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，人類化sdAb以0.1-100 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，人類化sdAb以1-100 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，人類化sdAb以1-90 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，人類化sdAb以1-80 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，人類化sdAb以1-70 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，人類化sdAb以1-60 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，人類化sdAb以1-50 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，人類化sdAb以1-40 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，人類化sdAb以1-30 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，人類化sdAb以1-20 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，人類化sdAb以1-10 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，人類化sdAb以0.1-1 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，人類化sdAb以0.01-1 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，人類化sdAb以0.01-0.1 nM之間的KD
結合至MSLN。
在一些實施例中，結合至癌症抗原之結合分子包含多個人類化sdAb，例如由連接子連接的兩個結合至MSLN之sdAb。
在一些實施例中，兩個人類化sdAb中之每一者以0.01-100 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，兩個人類化sdAb中之每一者以0.1-100 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，兩個人類化sdAb中之每一者以1-100 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，兩個人類化sdAb中之每一者以1-90 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，兩個人類化sdAb中之每一者以1-80 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，兩個人類化sdAb中之每一者以1-70 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，兩個人類化sdAb中之每一者以1-60 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，兩個人類化sdAb中之每一者以1-50 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，兩個人類化sdAb中之每一者以1-40 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，兩個人類化sdAb中之每一者以1-30 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，兩個人類化sdAb中之每一者以1-20 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，兩個人類化sdAb中之每一者以1-10 nM之間的KD
結合至MSLN。在其他實施例中，兩個人類化sdAb中之每一者以0.1-1 nM之間的KD
結合至MSLN。在一些實施例中，兩個人類化sdAb中之每一者以0.01-0.1 nM之間的KD
結合至MSLN。
單域抗體變異體
在一些實施例中，預期結合至本文所述之MSLN之單域抗體的胺基酸序列修飾。舉例而言，可能需要最佳化抗體之結合親和力及/或其他生物特性，包括但不限於特異性、熱穩定性、表現量、效應功能、糖基化、降低之免疫原性或溶解性。因此，除本文所述之抗MSLN抗體以外，預期可製備抗MSLN抗體變異體。舉例而言，抗MSLN抗體變異體可藉由在編碼DNA中引入適當核苷酸變化及/或藉由合成所需抗體或多肽來製備。瞭解胺基酸變化之熟習此項技術者可改變抗MSLN抗體之轉譯後過程，諸如改變糖基化位點之數目或位置或改變膜錨定特徵。
在一些實施例中，本文提供之單域抗體經化學修飾，例如藉由將任何類型之分子共價連接至該抗體。抗體衍生物可包括已經化學修飾之抗體，例如藉由糖基化、乙醯化、PEG化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護/阻隔基進行之衍生化、蛋白質裂解、與細胞配位體或其他蛋白質之連接等。許多化學修飾中之任一者可藉由包括但不限於特異性化學裂解、乙醯化、調配、衣黴素之代謝合成等已知技術來進行。另外，該抗體可含有一或多種非典型胺基酸。
變異可為與原始抗體或多肽相比，導致胺基酸序列改變的編碼單域抗體或多肽之一或多個密碼子之取代、缺失或插入。胺基酸取代可為一個胺基酸經具有類似結構及/或化學特性之另一胺基酸置換的結果，諸如白胺酸經絲胺酸置換，例如保守胺基酸置換。熟習此項技術者已知的標準技術可用於將突變引入編碼本文提供之分子的核苷酸序列中，包括例如引起胺基酸取代的定點突變誘發及PCR介導突變誘發。插入或缺失視情況可在約1至5個胺基酸範圍內。在某些實施例中，相對於原始分子，取代、缺失或插入包括少於25個胺基酸取代、少於20個胺基酸取代、少於15個胺基酸取代、少於10個胺基酸取代、少於5個胺基酸取代、少於4個胺基酸取代、少於3個胺基酸取代，或少於2個胺基酸取代。在一個特定實施例中，取代為在一或多個所預測之非必需胺基酸殘基處產生的保守胺基酸取代。允許的變異可藉由在序列中系統地產生胺基酸插入、缺失或取代且測試所得變異體之親本抗MSLN抗體所展現的活性來確定。
胺基酸序列插入包括長度在一個殘基至含有多個殘基之多肽範圍內的胺基及/或羧基末端融合，以及單個或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N末端甲硫胺醯基殘基之抗體。
藉由保守胺基酸取代產生之抗體包括於本發明中。在保守胺基酸取代中，胺基酸殘基經具有含有類似電荷之側鏈的胺基酸殘基置換。如上文所述，具有含有類似電荷之側鏈的胺基酸殘基家族已在此項技術中定義。此等家族包括具有鹼性側鏈(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電極性側鏈(例如甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、非極性側鏈(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、β分支鏈側鏈(例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)之胺基酸。或者，突變可沿編碼序列之全部或一部分隨機引入，諸如藉由飽和突變誘發，且可針對生物活性篩選所得突變體以鑑別保留活性之突變體。突變誘發之後，可表現所編碼蛋白質且可測定蛋白質活性。可進行保守(例如在具有類似特性及/或側鏈之胺基酸組內)取代，以維持或不顯著改變特性。
胺基酸可根據其側鏈特性之類似性分組(參見例如Lehninger,Biochemistry
73-75 (第2版 1975))：(1)非極性：Ala (A)、Val (V)、Leu (L)、Ile (I)、Pro (P)、Phe (F)、Trp (W)、Met (M)；(2)不帶電極性：Gly (G)、Ser (S)、Thr (T)、Cys (C)、Tyr (Y)、Asn (N)、Gln (Q)；(3)酸性：Asp (D)、Glu (E)；及(4)鹼性：Lys (K)、Arg (R)、His (H)。或者，天然存在之殘基可基於共同的側鏈特性來分組：(1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)鹼性：His、Lys、Arg；(5)影響鏈取向的殘基：Gly、Pro；及(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
舉例而言，不涉及維持抗MSLN抗體之適當構形的任何半胱胺酸殘基亦可用例如另一胺基酸(諸如丙胺酸或絲胺酸)取代，以改良分子之氧化穩定性及防止異常交聯。
可使用此項技術中已知之方法產生變異，諸如寡核苷酸介導(定點)突變誘發、丙胺酸掃描及PCR突變誘發。可對選殖DNA進行定點突變誘發(參見例如Carter, 1986, Biochem J. 237:1-7；及Zoller等人, 1982, Nucl. Acids Res. 10:6487-500)、卡匣突變誘發(參見例如Wells等人, 1985, Gene 34:315-23)或其他已知技術以產生抗MSLN抗體變異體DNA。
活體外親和力成熟
在一些實施例中，可藉由活體外親和力成熟來製備相較於親本抗體具有改良之特性(諸如親和力、穩定性或表現量)的抗體變異體。如同天然原型，活體外親和力成熟係基於突變及選擇之原理。抗體文庫呈現於生物體(例如噬菌體、細菌、酵母或哺乳動物細胞)表面上或與其編碼mRNA或DNA結合(例如共價或非共價)。所呈現抗體之親和力選擇允許分離攜帶編碼抗體之遺傳資訊的生物體或複合物。使用呈現方法(諸如噬菌體呈現)之兩或三輪突變及選擇通常產生親和力在低奈莫耳濃度範圍內之抗體片段。親和力成熟抗體可對目標抗原具有奈莫耳濃度或甚至皮莫耳濃度之親和力。
噬菌體呈現為廣泛用於呈現及選擇抗體的方法。抗體作為與細菌噬菌體外殼蛋白的融合物呈現於Fd或M13噬菌體表面上。選擇涉及暴露於抗原以允許噬菌體所呈現的抗體結合其目標，一種稱為「淘選」的過程。回收結合至抗原之噬菌體且用於感染細菌，以產生噬菌體供另外多輪選擇。關於綜述，參見例如Hoogenboom, 2002, Methods. Mol. Biol. 178:1-37；及Bradbury及Marks, 2004, J. Immunol. Methods 290:29-49。
在酵母呈現系統(參見例如Boder等人, 1997, Nat. Biotech. 15:553-57；及Chao等人, 2006, Nat. Protocols 1:755-68)中，抗體可融合至酵母凝集素蛋白Aga2p之黏附次單位，Aga2p經由與Aga1p之二硫鍵連接至酵母細胞壁。蛋白質經由Aga2p呈現使該蛋白質突出而遠離細胞表面，從而使與酵母細胞壁上的其他分子之潛在相互作用最小化。使用磁性分離及流式細胞測量術篩選文庫，以選擇親和力或穩定性改良的抗體。與所關注之可溶抗原的結合係藉由用經生物素標記之抗原及第二試劑(諸如與螢光團結合的抗生蛋白鏈菌素)標記酵母來測定。抗體之表面表現的變化可經由側接scFv之紅血球凝集素或c-Myc抗原決定基標籤之免疫螢光標記來量測。已顯示表現與所呈現蛋白質之穩定性相關，且因此可針對改良之穩定性以及親和力選擇抗體(參見例如Shusta等人, 1999, J. Mol. Biol. 292:949-56)。酵母呈現之另一優勢為所呈現之蛋白質在真核酵母細胞之內質網中摺疊，從而利用內質網伴隨蛋白及品質控制機構。一旦完全成熟，則可在呈現於酵母表面上時方便地「滴定」抗體親和力，從而消除表現及純化各純系的需要。酵母表面呈現之理論侷限性為功能文庫尺寸潛在地比其他呈現方法小；然而，最新方法使用酵母細胞匹配系統產生大小經估算為1014
的組合多樣性(參見例如美國專利公開案2003/0186374；及Blaise等人, 2004, Gene 342:211-18)。
在核糖體呈現中，產生抗體-核糖體-mRNA (ARM)複合物以便在無細胞系統中選擇。使編碼特定抗體文庫的DNA文庫與缺少終止密碼子的間隔序列進行基因融合。此間隔序列在轉譯時仍連接至肽基tRNA且佔據核糖體隧道，且從而允許所關注之蛋白質自核糖體突出且摺疊。mRNA、核糖體及蛋白質之所得複合物可結合至表面結合配位體，從而允許經由配位體之親和力捕捉來同時分離抗體及其編碼mRNA。接著使核糖體結合的mRNA逆轉錄回cDNA，cDNA接著可經歷突變誘發且用於下一輪選擇(參見例如Fukuda等人, 2006, Nucleic Acids Res. 34:e127)。在mRNA呈現中，抗體與mRNA之間的共價鍵係使用嘌呤黴素作為承接分子來建立(Wilson等人, 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:3750-55)。
由於此等方法完全在活體外進行，因此其提供優於其他選擇技術的兩個主要優勢。首先，文庫多樣性不受細菌細胞轉型效率限制，而僅受存在於試管中之核糖體及不同mRNA分子的數目限制。其次，在每輪選擇(例如藉由非校正聚合酶)之後，可容易地引入隨機突變，因為無文庫必須在任何多樣化步驟之後轉型。
在一些實施例中，可使用哺乳動物呈現系統。
多樣性亦可以靶向方式或經由隨機引入而引入至抗體文庫之CDR中。先前方法包括經由高量或低量之突變誘發依序靶向抗體之所有CDR或靶向分離之體細胞超突變熱點(參見例如Ho等人, 2005, J. Biol. Chem. 280:607-17)或在實驗基礎上或出於結構原因而懷疑影響親和力的殘基。多樣性亦可藉由經由DNA改組或類似技術置換天然地多樣之區域而引入(參見例如Lu等人, 2003, J. Biol. Chem. 278:43496-507；美國專利第5,565,332號及第6,989,250號)。替代技術採用CDR中之環缺失及插入或使用基於雜交之多樣化(參見例如美國專利公開案第2004/0005709號)靶向延伸至構架區殘基中之高變環(參見例如Bond等人, 2005, J. Mol. Biol. 348:699-709)。產生CDR中之多樣性之額外方法揭示於例如美國專利第7,985,840號中。可用於產生抗體文庫及/或抗體親和力成熟之其他方法揭示於例如美國專利第8,685,897號及第8,603,930號，及美國公開案第2014/0170705號、第2014/0094392號、第2012/0028301號、第2011/0183855號及第2009/0075378號中，其各自以引用的方式併入本文中。
可藉由此項技術中已知的多種技術實現文庫之篩選。舉例而言，抗MSLN抗體可固定至固體載體、管柱、銷釘或纖維素/聚(偏二氟乙烯)膜/其他過濾器上，表現於貼附至吸附盤或用於細胞分選之宿主細胞上，或與生物素結合以用抗生蛋白鏈菌素塗佈之珠粒捕獲或用於任何其他淘選呈現文庫之方法中。
關於活體外親和力成熟方法之綜述，參見例如Hoogenboom, 2005, Nature Biotechnology 23:1105-16；Quiroz及Sinclair, 2010, Revista Ingeneria Biomedia 4:39-51；及其中的參考文獻。
抗MSLN單域抗體之修飾
抗MSLN抗體之共價修飾包括於本發明之範疇內. 共價修飾包括使抗MSLN抗體之靶向胺基酸殘基與有機衍生劑反應，該有機衍生劑能夠與抗MSLN抗體之所選側鏈或N端或C端殘基反應。其他修飾包括麩醯胺醯基及天冬醯胺醯基殘基分別去醯胺化為對應麩胺醯基及天冬胺醯基殘基；脯胺酸及離胺酸之羥基化；絲胺醯基或蘇胺醯基殘基之羥基磷酸化；離胺酸、精胺酸及組胺酸側鏈之α-胺基之甲基化(參見例如Creighton,Proteins : Structure and Molecular Properties
79-86 (1983))；N端胺之乙醯化；及任何C端羧基之醯胺化。
本發明之範疇內包括之抗MSLN抗體之其他類型之共價修飾包括更改抗體或多肽之天然糖基化模式(參見例如Beck等人, 2008, Curr. Pharm. Biotechnol. 9:482-501；及Walsh, 2010, Drug Discov. Today 15:773-80)，及以例如美國專利第4,640,835號；第4,496,689號；第4,301,144號；第4,670,417號；第4,791,192號；第4,179,337號中所闡述之方式將抗體連接至多種非蛋白質聚合物中之一者，例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧化烯。
本發明之抗MSLN抗體亦可經修飾以形成嵌合分子，其包含抗MSLN抗體，該序列融合至另一異源多肽或胺基酸序列，例如抗原決定基標籤(參見例如Terpe, 2003, Appl. Microbiol. Biotechnol. 60:523-33)或IgG分子之Fc區(參見例如Aruffo,Antibody Fusion Proteins
221-42 (Chamow及Ashkenazi編, 1999))。
本文亦提供融合蛋白，其包含結合至MSLN抗原及異源多肽的本文所提供之抗體。在一些實施例中，抗體融合至之異源多肽適用於將抗體靶向至具有細胞表面表現之MSLN的細胞。
本文亦提供結合至MSLN抗原之抗體組。在特定實施例中，抗體組對MSLN抗原具有不同結合速率、不同解離速率、不同親和力，及/或對MSLN抗原具有不同特異性。在一些實施例中，抗體組包含或由約10、約25、約50、約75、約100、約125、約150、約175、約200、約250、約300、約350、約400、約450、約500、約550、約600、約650、約700、約750、約800、約850、約900、約950或約1000種或更多種抗體組成。抗體組可用於例如96孔或384孔盤中，供諸如ELISA之分析用。
製備抗MSLN單域抗體
本文提供之抗MSLN單域抗體可由培養經含有抗MSLN抗體編碼核酸之載體轉型或轉染的細胞產生。編碼本發明抗體之多肽組分的聚核苷酸序列可使用標準重組技術獲得。所需聚核苷酸序列可自產抗體細胞(諸如融合瘤細胞)中分離及測序。或者，可使用核苷酸合成儀或PCR技術合成聚核苷酸。編碼多肽之序列一經獲得，即插入至能夠在宿主細胞中複製及表現異源聚核苷酸之重組載體中。此項技術中可獲得且已知的許多載體可用於本發明之目的。選擇適當載體主要視插入至載體中之核酸的尺寸及經載體轉型之特定宿主細胞而定。適用於表現本發明抗體之宿主細胞包括原核生物，諸如太古細菌及真細菌，包括革蘭氏陰性(Gram-negative)或革蘭氏陽性生物體；真核微生物，諸如絲狀真菌或酵母；無脊椎動物細胞，諸如昆蟲或植物細胞；及脊椎動物細胞，諸如哺乳動物宿主細胞株。宿主細胞用上述表現載體轉型且在適當時經調節之習知營養物培養基中培養以便誘導啟動子、選擇轉型體或擴增編碼所要序列的基因。由宿主細胞產生之抗體係使用此項技術中已知之標準蛋白質純化方法純化。
包括載體構築、表現及純化之用於抗體產生之方法另外描述於Plückthun等人,Antibody Engineering : Producing antibodies in Escherichia coli : From PCR to fermentation
203-52 (McCafferty等人編, 1996)；Kwong及Rader,E . coli Expression and Purification of Fab Antibody Fragments
,Current Protocols in Protein Science
(2009)；Tachibana及Takekoshi,Production of Antibody Fab Fragments in Escherischia coli
,Antibody Expression and Production
(Al-Rubeai編, 2011)；及Therapeutic Monoclonal Antibodies : From Bench to Clinic
(An編, 2009)中。
當然，預期此項技術中熟知之替代方法可用於製備抗MSLN抗體。舉例而言，適當胺基酸序列，或其部分可由使用固相技術之直接肽合成產生(參見例如Stewart等人,Solid - Phase Peptide Synthesis
(1969)；及Merrifield, 1963, J. Am. Chem. Soc. 85:2149-54)。活體外蛋白質合成可使用人工技術或自動化進行。抗MSLN抗體之各種部分可以化學方式分別合成且使用化學或酶方法組合以產生所需抗MSLN抗體。或者，抗體可自經工程化以表現抗體之轉殖基因動物之細胞或體液(諸如乳汁)純化，如例如在美國專利第5,545,807號及第5,827,690號中所揭示。
免疫結合物
本發明亦提供結合物，其包含藉由合成連接子共價結合至一或多種非抗體藥劑的本發明之抗MSLN抗體中之任一者。
在一些實施例中，本文所提供之抗體與例如診斷或可偵測分子結合或重組融合。結合或重組融合之抗體可適用於例如監測或預後MSLN介導疾病之發作、發展、進展及/或嚴重程度。
此類診斷及偵測可例如藉由使抗體與可偵測物質偶合來完成，該等可偵測物質包括但不限於各種酶，諸如但不限於辣根過氧化酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶；輔基，諸如但不限於抗生蛋白鏈菌素/生物素或抗生物素蛋白/生物素；螢光物質，諸如但不限於傘酮、螢光素、異硫氰酸螢光素、若丹明(rhodamine)、二氯三嗪基胺螢光素、丹磺醯氯或藻紅素；發光物質，諸如但不限於魯米諾(luminol)；生物發光物質，諸如但不限於螢光素酶、螢光素或水母素；化學發光物質，諸如但不限於基於吖錠之化合物或HALOTAG；放射性物質，諸如但不限於碘(131I、125I、123I及121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、銦(115In、113In、112In及111In)、鎝(99Tc)、鉈(201Ti)、鎵(68Ga及67Ga)、鈀(103Pd)、鉬(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn或117Sn；各種正電子發射斷層攝影使用的正電子發射金屬；及非放射性順磁金屬離子。
本文亦提供與異源蛋白質或多肽(或其片段，例如與約10、約20、約30、約40、約50、約60、約70、約80、約90或約100個胺基酸之多肽)重組融合或化學結合(共價或非共價結合)以產生融合蛋白之抗體；以及其用途。特定言之，本文提供融合蛋白，其包含本文所提供之抗體之抗原結合片段(例如CDR1、CDR2及/或CDR3)及異源蛋白質、多肽或肽。在一個實施例中，抗體融合至之異源蛋白質、多肽或肽適用於將抗體靶向至特定細胞類型，諸如表現MSLN之細胞。舉例而言，結合至由特定細胞類型表現之細胞表面受體的抗體可融合或結合於本文所提供之經修飾抗體。
此外，本文所提供之抗體可與標記或「標籤」序列(諸如肽)融合，以促進純化。在特定實施例中，標記或標籤胺基酸序列為六組胺酸肽，諸如尤其為提供於pQE載體(參見例如QIAGEN, Inc.)中之標籤，其中之許多為市售的。舉例而言，如Gentz等人, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-24中所述，六組胺酸為融合蛋白之純化提供方便。適用於純化之其他肽標籤包括但不限於血球凝集素(「HA」)標籤，其對應於源自流感紅血球凝集素蛋白之抗原決定基(Wilson等人, 1984, Cell 37:767-78)，及「FLAG」標籤。
將部分(包括多肽)融合或結合至抗體之方法為吾人所知(參見例如Arnon等人, Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 243-56 (Reisfeld等人編, 1985)；Hellstrom等人, Antibodies for Drug Delivery, Controlled Drug Delivery 623-53 (Robinson等人編, 第2版 1987)；Thorpe, Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review, Monoclonal Antibodies: Biological and Clinical Applications 475-506 (Pinchera等人編, 1985)；Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy, Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy 303-16 (Baldwin等人編, 1985)；Thorpe等人, 1982, Immunol. Rev. 62:119-58；美國專利第5,336,603號；第5,622,929號；第5,359,046號；第5,349,053號；第5,447,851號；第5,723,125號；第5,783,181號；第5,908,626號；第5,844,095號；及第5,112,946號；EP 307,434；EP 367,166；EP 394,827；PCT公開案WO 91/06570、WO 96/04388、WO 96/22024、WO 97/34631及WO 99/04813；Ashkenazi等人, 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10535-39；Traunecker等人, 1988, Nature, 331:84-86；Zheng等人, 1995, J. Immunol. 154:5590-600；及Vil等人, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:11337-41)。
融合蛋白可經由例如基因改組、基元改組、外顯子改組及/或密碼子改組(統稱為「DNA改組」)之技術產生。DNA改組可用於改變如本文所提供之抗MSLN抗體，包括例如具有較高親和力及較低解離速率之抗體的活性(參見例如美國專利第5,605,793號；第5,811,238號；第5,830,721號；第5,834,252號；及第5,837,458號；Patten等人, 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33；Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82；Hansson等人, 1999, J. Mol. Biol. 287:265-76；及Lorenzo及Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308-13)。抗體或編碼抗體在重組之前可藉由進行易錯PCR之隨機突變誘發、隨機核苷酸插入或其他方法來改變。編碼本文所提供之抗體的聚核苷酸可與一或多種異源分子之一或多種組分、基元、區段、部分、域、片段等重組。
本文所提供之抗體(例如sdAb)亦可與第二抗體結合以形成抗體異結合物，如例如美國專利第4,676,980號中所述。
如本文所提供之結合至MSLN之抗體亦可連接至特別適用於免疫分析或純化目標抗原之固體載體。此類固體載體包括但不限於玻璃、纖維素、聚丙烯醯胺、耐綸、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。
連接子可為促進結合劑在細胞中釋放之「可裂解連接子」，但本文中亦涵蓋不可裂解連接子。用於本發明之結合物中的連接子包括但不限於酸不穩定連接子(例如腙連接子)、含二硫鍵連接子、肽酶敏感性連接子(例如包含胺基酸(例如纈胺酸及/或瓜胺酸，諸如瓜胺酸-纈胺酸或苯丙胺酸-離胺酸)的肽連接子)、光不穩定性連接子、二甲基連接子(參見例如Chari等人, 1992, Cancer Res. 52:127-31；及美國專利第5,208,020號)、硫醚連接子，或經設計以規避多藥轉運體介導耐藥性的親水性連接子(參見例如Kovtun等人, 2010, Cancer Res. 70:2528-37)。
抗體與藥劑之結合物可使用多種雙官能蛋白質偶合劑製備，雙官能蛋白質偶合劑諸如BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB及SVSB (丁二醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯)。本發明進一步預期抗體與藥劑之結合物可使用如此項技術中所揭示之任何適合方法製備(參見例如Bioconjugate Techniques (Hermanson編, 第2版, 2008))。
抗體與藥劑之習知結合策略已基於涉及Lys殘基之ε-胺基或Cys殘基之硫醇基的隨機結合化學反應，從而產生異質結合物。最近開發的技術允許與抗體定點結合，從而產生均質負載且避免結合物亞群的抗原結合或藥物動力學發生改變。此等技術包括「thiomab」之工程化，其包含重鏈及輕鏈上之位置處的半胱胺酸取代，該等半胱胺酸取代提供反應性硫醇基且不破壞免疫球蛋白摺疊及組裝或改變抗原結合(參見例如Junutula等人, 2008, J. Immunol. Meth. 332: 41-52；及Junutula等人, 2008, Nature Biotechnol. 26:925-32)。在另一種方法中，硒半胱胺酸藉由將終止密碼子UGA自終止重編碼至硒半胱胺酸插入而共轉譯地插入至抗體序列中，從而允許在其他天然胺基酸存在下在硒半胱胺酸之親核性硒醇基團處之位點特異性共價結合(參見例如Hofer等人, 2008, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105:12451-56；及Hofer等人, 2009, Biochemistry 48(50):12047-57)。
抗間皮素Fc融合蛋白 在一些實施例中，抗MSLN構築體(諸如經分離抗MSLN構築體)為Fc融合蛋白(下文中稱為「抗MSLN-Fc融合蛋白」)，其包含與Fc片段(諸如IgG1 Fc片段)融合之本文所述的抗MSLN抗體部分。在一些實施例中，抗MSLN抗體部分經由連接子(諸如肽連接子)與Fc片段融合。在一些實施例中，抗MSLN-Fc融合蛋白包含有包含Fc片段之抗體。在一些實施例中，抗MSLN-Fc融合蛋白為全長抗體。「抗MSLN抗體部分章節」中所述之任一種抗MSLN抗體部分可用於抗MSLN Fc融合蛋白中。
Fc片段
術語「Fc區」、「Fc域」或「Fc」係指含有恆定區之至少一部分的免疫球蛋白重鏈之C端非抗原結合區。該術語包括原生Fc區及變異型Fc區。在一些實施例中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226延伸至重鏈之羧基端。然而，Fc區之C端離胺酸(Lys447)可或可不存在，而不影響Fc區之結構或穩定性。除非本文中另外規定，否則IgG或Fc區中之胺基酸殘基的編號係根據用於抗體之EU編號系統，亦稱為EU指數，如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 美國公共衛生署(Public Health Service), 美國國家衛生研究院(National Institutes of Health), Bethesda, Md., 1991中所述。
在一些實施例中，Fc片段包含有包含鉸鏈區(始於Cys226)、IgG CH2域及CH3域的免疫球蛋白IgG重鏈恆定區。如本文所用，術語「鉸鏈區」或「鉸鏈序列」係指位於連接子與CH2域之間的胺基酸序列。在一些實施例中，融合蛋白包含有包含鉸鏈區之Fc片段。在一些實施例中，鉸鏈區包含胺基酸序列CPPCP (SEQ ID NO: 345)(發現於原生IgG1鉸鏈區中之一種序列)，以促進二聚合。在一些實施例中，融合蛋白之Fc片段始於鉸鏈區且延伸至IgG重鏈之C端。在一些實施例中，融合蛋白包含不包含鉸鏈區之Fc片段。
在一些實施例中，融合蛋白包含選自由來自以下之Fc片段組成之群的Fc片段：IgG、IgA、IgD、IgE、IgM，及其組合及混合物。在一些實施例中，Fc片段源自人類IgG。在一些實施例中，Fc片段包含人類IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，或組合或混合IgG之Fc區。在一些實施例中，Fc片段為IgG1 Fc片段。在一些實施例中，Fc片段包含IgG1之CH2及CH3域。在一些實施例中，Fc片段為IgG4 Fc片段。在一些實施例中，Fc片段包含IgG4之CH2及CH3域。已知IgG4 Fc展現小於IgG1 Fc的效應活性，且因此可為一些應用所需的。在一些實施例中，Fc片段源自小鼠免疫球蛋白。
在一些實施例中，IgG CH2域始於Ala231。在一些實施例中，CH3域始於Gly341。應理解，人類IgG之C端Lys殘基可視情況不存在。亦應理解，本發明之範疇內涵蓋不影響Fc之所需結構及/或穩定性的Fc區保守胺基酸取代。
另外，涵蓋包含下述任一種Fc變異體或其組合的抗MSLN-Fc融合蛋白。在一些實施例中，Fc片段包含已改變或以其他方式變化的序列，以使其具有增強之抗體依賴性細胞毒性(ADCC)或補體依賴性細胞毒性(CDC)效應功能。
在一些實施例中，Fc片段中之每條鏈與相同實體融合。在一些實施例中，抗MSLN-Fc融合蛋白包含兩個相同的本文所述之抗MSLN抗體部分(特異性識別間皮素)，其各自與Fc片段之一條鏈融合。在一些實施例中，Fc片段之兩條鏈相同。在一些實施例中，包含Fc片段之抗MSLN-Fc融合蛋白(包括包含抗體之抗MSLN-Fc融合蛋白)為同二聚體。
在一些實施例中，Fc片段中之每條鏈與不同實體融合。在一些實施例中，融合蛋白包含兩個不同的抗MSLN抗體部分，其各自與Fc片段之一條鏈融合。在一些實施例中，兩個抗MSLN抗體部分不同，但均特異性識別間皮素。在一些實施例中，兩個抗MSLN抗體部分不同，但均特異性識別間皮素。在一些實施例中，抗MSLN-Fc融合蛋白為單價的，亦即，僅一個抗MSLN抗體部分融合至Fc片段之一條鏈，且Fc片段之第二鏈不融合至抗MSLN抗體部分。在一些實施例中，包含Fc片段之抗MSLN-Fc融合蛋白(包括包含抗體之抗MSLN-Fc融合蛋白)為雜二聚體。
抗MSLN-Fc融合蛋白中之不相同多肽之雜二聚化可藉由此項技術中已知之方法促進，包括但不限於藉由杵-臼技術進行雜二聚化。杵-臼技術之結構及組裝方法可見於例如以全文引用之方式併入本文中之US5,821,333、US7,642,228、US 201 1/0287009及PCT/US2012/059810中。此技術係藉由在一個Fc之CH3域中用大胺基酸殘基置換小胺基酸殘基來引入「杵」(或隆凸)，且在另一個Fc之CH3域中用較小胺基酸殘基置換一或多個大胺基酸殘基來引入「臼」(或空腔)而開發。在一些實施例中，融合蛋白中之Fc片段之一條鏈包含杵，且Fc片段之第二鏈包含臼。
用於形成杵之較佳殘基通常為天然存在之胺基酸殘基且較佳選自精胺酸(R)、苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)及色胺酸(W)。最佳為色胺酸及酪胺酸。在一個實施例中，用於形成杵之原始殘基具有小側鏈體積，諸如丙胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸或纈胺酸。用於形成杵之CH3域中的例示性胺基酸取代包括但不限於T366W、T366Y或F405W取代。
用於形成臼之較佳殘基通常為天然存在之胺基酸殘基且較佳選自丙胺酸(A)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)及纈胺酸(V)。在一個實施例中，用於形成臼之原始殘基具有大側鏈體積，諸如酪胺酸、精胺酸、苯丙胺酸或色胺酸。用於產生臼之CH3域中的例示性胺基酸取代包括但不限於T366S、L368A、F405A、Y407A、Y407T及Y407V取代。在某些實施例中，杵包含T366W取代，且臼包含T366S/L368A/Y 407V取代。應理解，本申請案亦預期且涵蓋此項技術中已知促進雜二聚化之針對Fc區的其他修飾。
預期其他抗MSLN Fc融合蛋白變異體(諸如經分離抗MSLN-Fc融合蛋白之變異體，例如全長抗MSLN抗體變異體)，包含本文所述之任一種變異體(例如Fc變異體、效應功能變異體、糖基化變異體、半胱胺酸工程化變異體)或其組合。關於抗MSLN Fc融合蛋白之所有可適用變化形式(例如全長抗MSLN抗體)，參見「抗MSLN變異體」部分。
減少之岩藻糖基化
在一些實施例中，抗間皮素構築體包含a)抗間皮素抗體部分，及b)融合至抗間皮素抗體部分之Fc片段，其中Fc片段具有減少之岩藻糖基化。在一些實施例中，Fc為選自由來自以下之Fc片段組成之群的片段：IgG、IgA、IgD、IgE、IgM，及其組合及混合物。在一些實施例中，Fc片段源自人類IgG。在一些實施例中，Fc片段包含人類IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，或組合或混合IgG之Fc區。在一些實施例中，Fc片段為IgG1 Fc片段。在一些實施例中，Fc片段之岩藻糖基化比對應野生型Fc片段少至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。
在一些實施例中，抗間皮素構築體包含a)抗間皮素抗體，其包含i)抗間皮素抗體部分，ii)融合至該抗間皮素抗體部分之Fc片段，及b)融合至該抗間皮素抗體之細胞激素(諸如包含IL-21及半衰期延長域(例如結合至白蛋白之抗體)之細胞激素融合蛋白)。在一些實施例中，細胞激素融合至抗間皮素抗體部分之N端。在一些實施例中，細胞激素經由連接子(諸如肽連接子)融合至抗間皮素抗體。在一些實施例中，肽連接子為穩定連接子，其不可藉由蛋白酶(諸如藉由基質金屬蛋白酶(MMP))裂解。
多特異性抗間皮素構築體
在一些實施例中，抗間皮素構築體包含多特異性(例如雙特異性)抗間皮素分子，該分子包含根據本文所述之抗間皮素抗體部分中之任一者的抗間皮素抗體部分，及特異性識別第二抗原之第二結合部分(諸如第二抗體部分)。在一些實施例中，多特異性抗間皮素分子包含抗間皮素抗體部分及特異性識別第二抗原之第二抗體部分。
多特異性分子為對於至少兩種不同抗原或抗原決定基具有結合特異性的分子(例如雙特異性抗體對兩種抗原或抗原決定基具有結合特異性)。亦涵蓋具有超過兩個價及/或特異性之多特異性分子。舉例而言，可以製備三特異性抗體(Tutt等人,J . Immunol .
147: 60 (1991))。應瞭解，熟習此項技術者可選擇本文所述之個別多特異性分子之適當特徵以彼此組合而形成本申請案之多特異性抗間皮素分子。
在一些實施例中，多特異性抗間皮素構築體為例如雙功能抗體(Db)、單鏈雙功能抗體(scDb)、串聯scDb(Tandab)、線性二聚scDb (LD-scDb)、圓形二聚scDb(CD-scDb)、二-雙功能抗體、串聯scFv、串聯二-scFv (例如雙特異性T細胞接合分子)、串聯三-scFv、三功能抗體、雙特異性Fab2、二-微型抗體、四功能抗體、scFv-Fc-scFv融合體、雙親和力再靶向(DART)抗體、雙可變域(DVD)抗體、IgG-scFab、scFab-ds-scFv、Fv2-Fc、IgG-scFv融合體、塢鎖(dock and lock；DNL)抗體、杵-臼(knob-into-hole；KiH)抗體(藉由KiH技術製備之雙特異性IgG)、DuoBody (藉由Duobody技術製備之雙特異性IgG)、雜多聚體抗體或異結合物抗體。在一些實施例中，多特異性抗間皮素分子為串聯scFv (例如串聯二-scFv，諸如雙特異性T細胞接合子)。
第二抗原
在一些實施例中，抗MSLN構築體包含多特異性(例如雙特異性)抗MSLN分子，其包含抗MSLN抗體部分及特異性識別第二抗原之第二抗體部分(例如scFv)。在一些實施例中，第二抗原亦為間皮素，但包含與藉由抗MSLN抗體部分所識別之抗原決定基相比不同的抗原決定基。在一些實施例中，第二抗原不為間皮素。在一些實施例中，第二抗原為腫瘤抗原。在一些實施例中，第二抗原為CD3 (例如人類CD3)。
在一些實施例中，本文所述之多特異性(例如雙特異性)抗MSLN構築體可經工程化以促進藉由將效應細胞(諸如細胞毒性T細胞)導引(或募集)至腫瘤位點而殺死(例如細胞毒性溶解或吞噬作用)腫瘤細胞。在一些實施例中，腫瘤細胞毒性可利用LDH細胞毒性分析加以測試。在一些實施例中，多特異性(例如雙特異性)抗MSLN分子可有效地將效應細胞(例如T細胞、NK細胞、CAR-T細胞、caTCR-T細胞)導引至免疫抑制環境(諸如免疫抑制腫瘤環境)中之目標細胞。
例示性效應細胞包括但不限於T細胞、B細胞、自然殺手(NK)細胞、樹突狀細胞(DC)、巨噬細胞、單核球、嗜中性白血球、自然殺手T (NKT)細胞、抗體依賴性細胞毒性細胞、嵌合抗原受體(CAR)效應細胞(例如CAR-T)、嵌合抗體-T細胞受體(TCR)構築體(caTCR)效應細胞(參見下文caTCR部分)，或其類似者。在一些實施例中，效應細胞為T細胞(例如細胞毒性T細胞、輔助T細胞或NKT細胞)。在一些實施例中，效應細胞為細胞毒性T細胞。在一些實施例中，效應細胞為同種異體的。在一些實施例中，效應細胞為自體的。
誘導性表現
在一些實施例中，可誘導多特異性(例如雙特異性)抗MSLN分子(例如抗MSLN×CD3串聯二-scFvT細胞接合子)之表現。在一些實施例中，效應細胞(例如T細胞、CAR-T細胞、caTCR T細胞)包含編碼多特異性(例如雙特異性)抗MSLN分子(例如抗MSLN×CD3雙特異性T細胞接合子)之核酸序列，其可操作地連接於誘導性啟動子，包括本文所述之任何誘導性啟動子(例如參見「核酸」部分)。在一些實施例中，在經由效應細胞上之信號傳導受體(例如TCR、CAR、caTCR)進行信號傳導後，可誘導效應細胞(例如T細胞、CAR-T細胞、caTCR T細胞)中多特異性(例如雙特異性)抗MSLN分子(例如抗MSLN×CD3串聯二-scFv T細胞接合體)之表現。在一些此等實施例中，CAR-T細胞包含編碼多特異性(例如雙特異性)抗MSLN分子(例如抗MSLN×CD3串聯二-scFv T細胞接合子)之核酸序列，其可操作地連接於對經由CAR之信號傳導有反應的啟動子或調節元件。在一些此等實施例中，caTCR-T細胞包含編碼多特異性(例如雙特異性)抗MSLN分子(例如抗MSLN×CD3串聯二-scFv T細胞接合子)之核酸序列，其可操作地連接於對經由caTCR之信號傳導有反應的啟動子或調節元件。在一些實施例中，編碼多特異性(例如雙特異性)抗MSLN分子(例如抗MSLN×CD3串聯二-scFv T細胞接合子)之核酸序列可操作地連接於活化T細胞(NFAT)源性啟動子之核因子。在一些實施例中，NFAT源性啟動子為NFAT源性最小啟動子(參見例如Durand, D等人,Molec . Cell . Biol .
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357(6380): 695-7；Chmielewski, M.等人.Cancer research
71.17 (2011): 5697-5706；及Zhang, L.等人.Molecular therapy
19.4 (2011): 751-759)。NFAT轉錄因子家族為T細胞活化之重要調節因子。在一些實施例中，編碼多特異性(例如雙特異性)抗MSLN分子(例如抗MSLN×CD3串聯二-scFv T細胞接合子)之核酸序列可操作地連接於IL-2啟動子。
嵌合抗原受體(CAR)及CAR效應細胞
抗MSLN構築體在一些實施例中為包含抗MSLN抗體部分之CAR (在本文中亦稱為「抗MSLN CAR」)。本文所述之抗MSLN抗體部分中之任一者可用於抗MSLN CAR中。亦提供包含有包含抗MSLN抗體部分之CAR的CAR效應細胞(例如T細胞)(在本文中亦稱為「抗MSLN CAR效應細胞」，例如，「抗MSLN CAR T細胞」)。在一些實施例中，抗MSLN CAR包含特異性識別細胞表面結合MSLN之抗MSLN抗體部分。
抗MSLN CAR包含a)包含特異性結合於MSLN之抗MSLN抗體部分的細胞外域，及b)胞內信號傳導域。跨膜域可存在於細胞外域與細胞內域之間。
在抗MSLN CAR之細胞外域與跨膜域之間，或在抗MSLN CAR之細胞內域與跨膜域之間，可存在間隔域。間隔域可為用於將多肽鏈中之跨膜域連接至細胞外域或細胞內域之任何寡肽或多肽。間隔域可包含至多約300個胺基酸，包括例如約10至約100，或約25至約50個胺基酸。
跨膜域可源自天然來源或合成來源。在來源為天然時，該域可源自任何膜結合蛋白或跨膜蛋白。特別適用於本發明之跨膜區可衍生自T細胞受體CD28、CD3ε、CD3ζ、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137或CD154之α、β、δ或γ鏈(亦即至少包含其跨膜區)。在一些實施例中，跨膜域可為合成的，在此情況下，其可主要包含疏水性殘基，諸如白胺酸及纈胺酸。在一些實施例中，在合成跨膜域之各端可發現苯丙胺酸、色胺酸及纈胺酸之三聯體。在一些實施例中，具有例如長度在約2與約10 (如約2、3、4、5、6、7、8、9或10中之任一者)個胺基酸之間的長度之短寡肽或多肽連接子可在抗MSLN CAR之跨膜域與胞內信號傳導域之間形成鍵。在一些實施例中，連接子為甘胺酸-絲胺酸二聯體。
在一些實施例中，使用天然地與抗MSLN CAR之細胞內域中之序列中之一者相關的跨膜域(例如若抗MSLN CAR細胞內域包含CD28協同刺激序列，則抗MSLN CAR之跨膜域衍生自CD28跨膜域)。在一些實施例中，跨膜域可藉由胺基酸取代選擇或修飾以避免此類域與相同或不同表面膜蛋白質之跨膜域結合以使得與受體複合體之其他成員之相互作用最小化。
抗MSLN CAR之胞內信號傳導域造成免疫細胞(其中已置入抗MSLN CAR)之正常效應功能中之至少一者之激活。T細胞之效應功能例如可為細胞溶解活性或輔助活性,包括分泌細胞因子。因此，術語「胞內信號傳導域」係指轉導效應功能信號及引導細胞執行特異性功能之蛋白質部分。儘管通常可採用全部胞內信號傳導域，但在多數情況下，不必使用整條鏈。至於使用胞內信號傳導域之截短部分的程度，此類截短部分只要轉導效應功能信號即可用於替代完整鏈。術語「胞內信號傳導序列」因此意欲包括足以轉導效應功能信號之胞內信號傳導域之任何截短部分。
用於本發明之抗MSLN CAR中之胞內信號傳導域之實例包括共同起在抗原受體接合之後起始信號轉導作用之TCR及共受體之細胞質序列，以及此等序列之任何衍生物或變異體及具有相同功能能力之任何合成序列。
已知經由單獨的TCR產生之信號不足以完全活化T細胞且亦需要二級或協同刺激信號。因此，T細胞活化可稱為藉由兩種相異類別之胞內信號傳導序列介導：經由TCR起始抗原依賴性一級活化之彼等(一級信號傳導序列)及以抗原獨立方式起作用以提供二級或協同刺激信號之彼等(協同刺激信號傳導序列)。
一級信號傳導序列以刺激方式或抑制方式調節TCR複合體之一級活化。以刺激方式起作用之一級信號傳導序列可含有信號傳導基元，稱為基於免疫受體酪胺酸之活化基元或ITAM。在一些實施例中，抗MSLN CAR構築體包含一或多種ITAM。
特定用於本發明中之含有ITAM之一級信號傳導序列之實例包括衍生自TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b及CD66d之彼等。
在一些實施例中，抗MSLN CAR包含衍生自CD3ζ之一級信號傳導序列。舉例而言，CAR之胞內信號傳導域可包含CD3ζ胞內信號傳導序列本身或與適用於本發明之抗MSLN CAR之情形下之任何其他所需胞內信號傳導序列組合。舉例而言，抗MSLN CAR之細胞內域可包含CD3ζ胞內信號傳導序列及協同刺激信號傳導序列。協同刺激信號傳導序列可為協同刺激分子之細胞內域的一部分，該協同刺激分子包括例如CD27、CD28、4-1BB (CD137)、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴細胞功能相關抗原-1 (LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、特異性結合CD83之配位體及其類似物。
在一些實施例中，抗MSLN CAR之胞內信號傳導域包含CD3ζ之胞內信號傳導序列及CD28之胞內信號傳導序列。在一些實施例中，抗MSLN CAR之胞內信號傳導域包含CD3ζ之胞內信號傳導序列及4-1BB之胞內信號傳導序列。在一些實施例中，抗MSLN CAR之胞內信號傳導域包含CD3ζ之胞內信號傳導序列及CD28及4-1BB之胞內信號傳導序列。
在一些實施例中，提供一種抗MSLN CAR，其包含a)包含特異性結合於MSLN之抗MSLN抗體部分之細胞外域，該抗體部分包含抗MSLN重鏈可變區(VH)，該VH包含：HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3，其分別在具有SEQ ID NO: 123-156及285-301中之任一者中所闡述之序列的VH
鏈區內包含CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列；b)跨膜域；及c)胞內信號傳導域。在一些實施例中，胞內信號傳導域能夠活化免疫細胞。在一些實施例中，胞內信號傳導域包含一級信號傳導序列及協同刺激信號傳導序列。在一些實施例中，一級信號傳導序列包含CD3ζ胞內信號傳導序列。在一些實施例中，協同刺激信號傳導序列包含CD28胞內信號傳導序列。在一些實施例中，細胞內域包含CD3ζ胞內信號傳導序列及CD28胞內信號傳導序列。在一些實施例中，抗體部分包含SEQ ID NO: 123-156及285-301中之任一者之胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 123-156及285-301中之任一者具有至少約80% (諸如約85%、90%、95%、98%或99%)序列一致性之其變異體。
亦提供產生表現抗MSLN CAR之效應細胞之方法，該方法包含將包含編碼抗MSLN CAR之核酸之載體引入至效應細胞中。在一些實施例中，將載體引入至效應細胞中包含藉由載體轉導效應細胞。在一些實施例中，將載體引入至效應細胞中包含藉由載體轉染效應細胞。載體轉導或轉染至效應細胞中可使用此項技術中已知之任何方法進行。
在一些實施例中，提供一種抗MSLN CAR效應細胞(諸如淋巴細胞，例如T細胞)，其包含可操作地連接於誘導性啟動子之編碼本文所述之多特異性(例如雙特異性)抗MSLN分子(例如抗MSLN×CD3雙特異性T細胞接合子)的核酸序列。在一些實施例中，在經由抗MSLN CAR信號傳導後可誘導多特異性(例如雙特異性)抗MSLN構築體於抗MSLN CAR效應細胞中之表現。在一些實施例中，編碼多特異性(例如雙特異性)抗MSLN構築體之核酸序列可操作地連接於NFAT源性啟動子。在一些實施例中，NFAT源性啟動子為NFAT源性最小啟動子。在一些實施例中，編碼多特異性(例如雙特異性)抗MSLN分子之核酸序列可操作地連接於IL-2啟動子。
連接子
在一些實施例中，融合蛋白或抗間皮素構築體包含兩個域之間(諸如抗間皮素抗體部分與第二域(諸如細胞激素、Fc域等)之間)的連接子。連接子可為在下文描述為「第一連接子」或「第二連接子」之連接子中之任一者。
在一些實施例中，包含IL-21之融合蛋白在IL-21或其變異體與白蛋白結合分子之間包含第一連接子且在白蛋白結合分子與結合至抗原之結合分子之間包含第二連接子。在一些實施例中，第一連接子及/或第二連接子可獨立地為剛性連接子或可撓性連接子。
在一些實施例中，連接子(例如第一連接子、第二連接子)為非肽連接子。在一些實施例中，連接子(例如第一連接子、第二連接子)為肽連接子。
非肽連接子
本文所述之任一或所有連接子可藉由任何將結合兩個分子之化學反應實現，只要組分或片段保留其各別活性，例如結合至目標間皮素、結合至FcR或ADCC/CDC。此連接可包括許多化學機制，例如共價結合、親和力結合、插入、配位結合及錯合。在一些實施例中，結合為共價結合。共價結合可藉由現有側鏈之直接縮合或藉由併入外部橋連分子實現。許多二價或多價連接劑適用於偶合蛋白分子，諸如將Fc片段與本發明之抗間皮素抗體部分偶合。舉例而言，代表性偶合劑可包括有機化合物，諸如硫酯、碳化二亞胺、丁二醯亞胺酯、二異氰酸酯、戊二醛、重氮苯及六亞甲基二胺。此清單不意欲窮舉此項技術中已知之偶合劑的各種類別，而是例示更常用偶合劑(參見Killen及Lindstrom, Jour. Immun. 133:1335-2549 (1984)；Jansen等人, Immunological Reviews 62:185-216 (1982)；及Vitetta等人, Science 238:1098 (1987))。
可適用於本申請案中之連接子描述於文獻中(參見例如Ramakrishnan, S.等人, Cancer Res. 44:201-208 (1984)，其描述MBS (M-順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基丁二醯亞胺酯)之用途)。在一些實施例中，本文所用之非肽連接子包括：(i) EDC (1-乙基-3-(3-二甲胺基-丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽；(ii) SMPT (4-丁二醯亞胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫基)-甲苯(Pierce Chem.Co.，目錄號(21558G)；(iii) SPDP (丁二醯亞胺基-6[3-(2-吡啶基二硫基)丙醯胺基]己酸酯(Pierce Chem.Co.，目錄號21651G)；(iv)磺基-LC-SPDP (磺基丁二醯亞胺基6[3-(2-吡啶基二硫基)-丙醯胺]己酸酯(Pierce Chem. Co.，目錄號2165-G)；及(v)與EDC結合之磺基-NHS (N-羥基磺基-丁二醯亞胺：Pierce Chem. Co.，目錄號24510)。
上述連接子含有具有不同屬性的組分，從而產生具有不同物理化學特性之抗間皮素構築體。舉例而言，烷基羧酸之磺基-NHS酯的穩定性大於芳族羧酸之磺基-NHS酯。含有NHS-酯之連接子溶解性低於磺基-NHS酯。另外，連接子SMPT含有位阻二硫鍵，且可形成穩定性增強之融合蛋白。二硫鍵之穩定性一般小於其他鍵，因為二硫鍵在活體外裂解，使得融合蛋白可用性較差。特定言之，磺基-NHS可增強碳化二亞胺偶合之穩定性。碳化二亞胺偶合(諸如EDC)當結合磺基-NHS使用時，形成的酯對水解之抗性大於單獨碳化二亞胺偶合反應。
肽連接子
本文所述之任一種或全部連接子可為肽連接子。肽連接子可具有天然存在之序列或非天然存在之序列。舉例而言，源自僅重鏈抗體之鉸鏈區的序列可用作連接子。參見例如WO1996/34103。在一些實施例中，肽連接子包含胺基酸序列CPPCP (SEQ ID NO: 345)，一種發現於原生IgG1鉸鏈區中的序列。
肽連接子可具有任何適合之長度。在一些實施例中，肽連接子之長度為以下中之任一者：至少約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100個或更多個胺基酸(aa)。在一些實施例中，肽連接子之長度為以下中之任一者：不超過約100、75、50、40、35、30、25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5個或更少個胺基酸。在一些實施例中，肽連接子長度為約1 aa至約10 aa、約1 aa至約20 aa、約1 aa至約30 aa、約5 aa至約15 aa、約10 aa至約25 aa、約5 aa至約30 aa、約10 aa至約30 aa、約30 aa至約50 aa、約50 aa至約100 aa或約1 aa至約100 aa中之任一者。
此類肽連接子之基本技術特徵為該肽連接子不包含任何聚合活性。肽連接子之特徵(其包含不存在二級結構之促進)在此項技術中已知且例如描述於Dall'Acqua等人 (Biochem. (1998) 37, 9266-9273)；Cheadle等人 (Mol Immunol (1992) 29, 21-30)及Raag及Whitlow (FASEB (1995) 9(1), 73-80)中。在「肽連接子」之情形下，尤佳胺基酸為Gly。此外，亦不促進任何二級結構之肽連接子為較佳的。分子彼此間的連接可藉由例如基因工程化來提供。製備融合及可操作連接之抗體構築體及在哺乳動物細胞或細菌中表現其之方法為此項技術中熟知的(例如WO 99/54440，Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N. Y. 1989及1994或Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y., 2001)。
在一些實施例中，肽連接子為穩定連接子，其不可藉由蛋白酶(諸如藉由基質金屬蛋白酶(MMP))裂解。
在一些實施例中，肽連接子趨向於不採用剛性三維結構，而是向多肽(例如第一及/或第二組分)提供可撓性，諸如在抗間皮素抗體部分與Fc片段之間提供可撓性。在一些實施例中，肽連接子為可撓性連接子。例示性可撓性連接子包括甘胺酸聚合物(G)n
、甘胺酸-絲胺酸聚合物(包括例如(GS)n
(SEQ ID NO: 337)、(GSGGS)n
(SEQ ID NO: 338)、(GGGGS)n
(SEQ ID NO: 339)及(GGGS)n
(SEQ ID NO: 340)，其中n為至少1之整數)、甘胺酸-丙胺酸聚合物、丙胺酸-絲胺酸聚合物及此項技術中已知之其他可撓性連接子。甘胺酸及甘胺酸-絲胺酸聚合物係相對非結構化的，且因此能夠充當各組分之間的中性繫鏈。甘胺酸甚至比丙胺酸進入顯著更多的φ-ψ空間，且所受限制比具有較長側鏈之殘基少得多(參見Scheraga, Rev. Computational Chem. 11 173-142 (1992))。一般熟習此項技術者應認識到，抗間皮素構築體之設計可包括完全或部分可撓的連接子，使得連接子可包括可撓性連接子部分以及一或多個賦予較小可撓性之結構的部分，以得到所需融合蛋白結構。
在一些實施例中，本文所述之任何抗MSLN構築體之兩個域(諸如抗MSLN抗體部分及半衰期延長域或細胞激素)係藉由具有足夠長度之連接子連接在一起，以使得抗MSLN構築體能夠以准許結合至目標MSLN及其他所需抗原之方式摺疊。在一些實施例中，連接子包含胺基酸序列SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA (SEQ ID NO: 341)。在一些實施例中，連接子為或包含(GGGGS)n
序列(SEQ ID NO: 339)，其中n等於1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大。在一些實施例中，連接子包含胺基酸序列TSGGGGS (SEQ ID NO: 342)。在一些實施例中，連接子包含胺基酸序列GEGTSTGSGGSGGSGGAD (SEQ ID NO: 343)。
天然連接子之二級結構採用各種構形，諸如螺旋形、β股、捲曲螺旋/彎曲及轉彎，以發揮其功能。α-螺旋結構中之連接子可充當有效分隔蛋白域之剛性間隔子，從而減少其不利相互作用。具有富含Pro之序列的非螺旋形連接子可增強連接子剛性且在減少域間干擾中起作用。在一些實施例中，抗MSLN構築體中之兩個域(諸如抗MSLN抗體部分及半衰期延長域或細胞激素)係藉由具有胺基酸序列A(EAAAK)4
A (SEQ ID NO: 344)之α-螺旋形連接子連接在一起。
在某些實施例中，第一連接子為基質金屬蛋白酶(MMP)敏感性連接子。在某些實施例中，第二連接子為MMP敏感性連接子。在某些實施例中，第一及第二連接子均為MMP敏感性連接子。
在某些實施例中，MMP敏感性連接子為可藉由MMP (例如MMP-7、MMP-9或MMP-13)裂解之連接子。在腫瘤細胞外基質(ECM)、腫瘤細胞及腫瘤血管結構中最豐富的MMP與腫瘤進展及轉移緊密相關。在一些實施例中，第一連接子對MMP-7敏感。在一些實施例中，第一連接子對MMP-9敏感。在一些實施例中，第一連接子對MMP-13敏感。在一些實施例中，第二連接子對MMP-7敏感。在一些實施例中，第二連接子對MMP-9敏感。在一些實施例中，第二連接子對MMP-13敏感。
在一些實施例中，MMP可裂解連接子由具有以下結構之部分組成或包含該部分：
P5-P4-Pro-P2-P1-P1'-P2'-P3'-P4'。
在一些實施例中，P5可為除Pro以外之任何胺基酸且較佳為具有小脂族側鏈之胺基酸。
在一些實施例中，P4可為除Pro以外之任何胺基酸且較佳為Gly。
在一些實施例中，P2可選自由Gln、Ala、Ser、Arg及Lys組成之群。
在一些實施例中，P1可選自由Ser、Thr及Gly組成之群。
在一些實施例中，P1'可為Leu或Ile，或任何疏水性胺基酸，諸如Phe、Ala、Val或Met。
在一些實施例中，P2'可為具有疏水性側鏈之胺基酸。
在一些實施例中，P3'可為具有小脂族側鏈之胺基酸且較佳為Gly。
在一些實施例中，P4'可為具有疏水性側鏈之胺基酸且較佳為Gln。
在一些實施例中，P5為除Pro以外之任何胺基酸且較佳為具有小脂族側鏈之胺基酸；P4為除Pro以外之任何胺基酸且較佳為Gly；P2係選自由Gln、Ala、Ser、Arg及Lys組成之群；P1係選自由Ser、Thr及Gly組成之群；P1'為Leu或Ile，或任何疏水性胺基酸，諸如Phe、Ala、Val或Met；P2'為具有疏水性側鏈之胺基酸；P3'為具有小脂族側鏈之胺基酸且較佳為Gly；且P4'為具有疏水性側鏈之胺基酸且較佳為Gln。
在一些實施例中，第一連接子及/或第二連接子包含選自下表5之序列。
表5 
在一些實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 267之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 268之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 269之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 270之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 270之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 271之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 272之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 273之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 274之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 275之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 276之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 277之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 278之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 279之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 280之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 281之序列。在其他實施例中，第一連接子包含SEQ ID NO: 282之序列。
在一些實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 267之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 268之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 269之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 270之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 270之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 271之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 272之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 273之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 274之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 275之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 276之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 277之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 278之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 279之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 280之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 281之序列。在其他實施例中，第二連接子包含SEQ ID NO: 282之序列。
在一些實施例中，第一連接子及第二連接子各自獨立地選自由以下組成之群：如以下實例中之表8中所闡述之SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 71、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 73及SEQ ID NO: 74。
在一些實施例中，第一連接子具有SEQ ID NO: 66。在一些實施例中，第一連接子具有SEQ ID NO: 67。在一些實施例中，第一連接子具有SEQ ID NO: 68。在一些實施例中，第一連接子具有SEQ ID NO: 69。在其他實施例中，第一連接子具有SEQ ID NO: 70。在其他實施例中，第一連接子具有SEQ ID NO: 71。在其他實施例中，第一連接子具有SEQ ID NO: 72。在其他實施例中，第一連接子具有SEQ ID NO: 73。在其他實施例中，第一連接子具有SEQ ID NO: 74。
在一些實施例中，第二連接子具有SEQ ID NO: 66。在一些實施例中，第二連接子具有SEQ ID NO: 67。在一些實施例中，第二連接子具有SEQ ID NO: 68。在一些實施例中，第二連接子具有SEQ ID NO: 69。在其他實施例中，第二連接子具有SEQ ID NO: 70。在其他實施例中，第二連接子具有SEQ ID NO: 71。在其他實施例中，第二連接子具有SEQ ID NO: 72。在其他實施例中，第二連接子具有SEQ ID NO: 73。在其他實施例中，第二連接子具有SEQ ID NO: 74。
在某些本文提供之IL-21融合蛋白中，結合至抗原之結合分子包含兩個或更多個抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，結合至抗原之結合分子包含兩個抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，兩個抗體或抗原結合片段與第三連接子連接。舉例而言，如以下實例中所述，IL-21-αHSA-抗MSLN之抗MSLN功能模組(結合至MSLN之結合分子)包含兩個靶向間皮素之不同域的單域抗體(sdAb)，及兩個由第三連接子連接之sdAb。
在一些實施例中，第三連接子為MMP敏感性連接子。
在一些實施例中，第三連接子係選自由以下組成之群：如下表8中所闡述之SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 69及SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，第三連接子具有SEQ ID NO: 66。在一些實施例中，第三連接子具有SEQ ID NO: 67。在一些實施例中，第三連接子具有SEQ ID NO: 68。在其他實施例中，第三連接子具有SEQ ID NO: 69。在其他實施例中，第三連接子具有SEQ ID NO: 70。
在一些實施例中，第一連接子在S123至S132處連接至IL-21或其變異體之C端。在其他實施例中，第一連接子在IL-21或其變異體之胺基酸123至132內之胺基酸處連接至IL-21或其變異體。在其他實施例中，第一連接子在IL-21或其變異體之C端的最後10個胺基酸處連接至IL-21或其變異體。
在一個實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之胺基酸123。在一個實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之胺基酸124。在一個實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之胺基酸125。在一個實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之胺基酸126。在一個實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之胺基酸127。在一個實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之胺基酸128。在一個實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之胺基酸129。在一個實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之胺基酸130。在一個實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之胺基酸131。在一個實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之胺基酸132。
在其他實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之L123。
在一些實施例中，第一連接子在Q1至D4處連接至IL-21或其變異體之N端。在一些實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之胺基酸1。在一些實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之胺基酸2。在一些實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之胺基酸3。在一些實施例中，第一連接子連接至IL-21或其變異體之胺基酸4。
在一些實施例中，第二連接子連接至白蛋白結合分子之C端。在其他實施例中，第二連接子連接至白蛋白結合分子之N端。
在一些實施例中，第二連接子連接至與抗原結合之結合分子的N端。在一些實施例中，第二連接子連接至與抗原結合之結合分子的C端。
聚核苷酸
在某些實施例中，本發明涵蓋編碼本文所述之融合蛋白的聚核苷酸。術語「編碼多肽之聚核苷酸」涵蓋僅包括多肽編碼序列之聚核苷酸以及包括其他編碼序列及/或非編碼序列之聚核苷酸。本發明之聚核苷酸可呈RNA形式或DNA形式。DNA包括cDNA、基因組DNA及合成DNA；且可為雙股或單股，且若為單股，則可為編碼股或非編碼(反義)股。
在某些實施例中，聚核苷酸包含編碼序列，該編碼序列針對在相同閱讀框架中融合至有助於例如自宿主細胞表現及分泌多肽之聚核苷酸(例如充當分泌序列以控制多肽轉運之前導序列)的多肽。多肽可使前導序列藉由宿主細胞裂解以形成多肽之「成熟」形式。
在某些實施例中，聚核苷酸包含編碼序列，該編碼序列針對在相同閱讀框架中融合至標記或標籤序列的多肽。舉例而言，在一些實施例中，標記序列為由載體供應之六組胺酸標籤，其允許在細菌宿主之情況下高效純化融合至標記之多肽。在一些實施例中，標記係與其他親和標籤結合使用。
本發明另外係關於本文所述之聚核苷酸之變異體，其中該變異體編碼例如多肽之片段、類似物及/或衍生物。在某些實施例中，本發明提供聚核苷酸，其包含具有核苷酸序列之聚核苷酸，該核苷酸序列與編碼包含本文所述之結合分子之多肽的聚核苷酸至少約80%性、至少約85%一致、至少約90%一致、至少約95%一致，且在一些實施例中，至少約96%、97%、98%或99%一致。
如本文所用，片語「具有與參考核苷酸序列至少例如95%「一致」之核苷酸序列的聚核苷酸」欲意謂聚核苷酸之核苷酸序列與參考序列相同，除了聚核苷酸序列在參考核苷酸序列之各100個核苷酸可包括至多5個點突變。換言之，為了獲得核苷酸序列與參考核苷酸序列至少95%一致的聚核苷酸，參考序列中至多5%的核苷酸可缺失或經另一核苷酸取代，或參考序列中可插入佔參考序列核苷酸總數至多5%的多個核苷酸。參考序列之此等突變可發生於參考核苷酸序列之5'或3'端位置或彼等末端位置之間的任何位置，該等位置個別地穿插於參考序列之核苷酸中或參考序列內的一或多個鄰接基團中。
聚核苷酸變異體可含有編碼區、非編碼區或兩者中之變化。在一些實施例中，聚核苷酸變異體含有產生沉默取代、添加或缺失，但不改變編碼多肽之特性或活性的改變。在一些實施例中，聚核苷酸變異體包含不導致多肽之胺基酸序列改變(由於基因密碼簡併)的沉默取代。聚核苷酸變異體可出於多種原因產生，例如使特定宿主之密碼子表現最佳化(亦即，將人類mRNA中之密碼子改變為諸如大腸桿菌之細菌宿主偏好的密碼子)。在一些實施例中，聚核苷酸變異體在序列之非編碼區或編碼區中包含至少一個沉默突變。
在一些實施例中，產生聚核苷酸變異體以調節或改變編碼多肽之表現(或表現量)。在一些實施例中，產生聚核苷酸變異體以提高編碼多肽之表現。在一些實施例中，產生聚核苷酸變異體以降低編碼多肽之表現。在一些實施例中，相比於親本聚核苷酸序列，聚核苷酸變異體具有提高的編碼多肽表現。在一些實施例中，相比於親本聚核苷酸序列，聚核苷酸變異體具有降低的編碼多肽表現。
在某些實施例中，聚核苷酸經分離。在某些實施例中，聚核苷酸為基本上純的。
亦提供包含本文所述之聚核苷酸的載體及細胞。在一些實施例中，表現載體包含聚核苷酸分子。在一些實施例中，宿主細胞包含有包含聚核苷酸分子之表現載體。在一些實施例中，宿主細胞包含一或多個包含聚核苷酸分子之表現載體。在一些實施例中，宿主細胞包含聚核苷酸分子。在一些實施例中，宿主細胞包含一或多個聚核苷酸分子。本文提供之載體之結構例示於以下實例中。
製造抗間皮素構築體或融合蛋白之方法
在另一態樣中，本文提供製造本文提供之各種抗間皮素構築體或融合蛋白之方法。
本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白之重組表現可能需要構築含有編碼抗MSLN構築體或融合蛋白或其片段之聚核苷酸的表現載體。一旦獲得編碼本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白或其片段之聚核苷酸，用於產生結合分子之載體可藉由重組DNA技術使用此項技術中熟知的技術產生。因此，本文描述藉由表現含有編碼核苷因此，本文描述藉由表現含有編碼核苷酸序列的聚核苷酸來製備蛋白質之方法。可使用熟習此項技術者熟知之方法構築含有編碼序列及適當轉錄及轉譯控制信號之表現載體。此等方法包括例如活體外重組DNA技術、合成技術及活體內基因重組。亦提供可複製載體，其包含可操作地連接於啟動子的編碼本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白，或其片段，或CDR之核苷酸序列。
表現載體可藉由習知技術轉移至宿主細胞且經轉染細胞接著藉由習知技術培養以產生本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白。因此，本文亦提供宿主細胞，其含有可操作地連接於異源啟動子的編碼本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白或其片段之聚核苷酸。
多種宿主表現載體系統可用於表現本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白(參見例如美國專利第5,807,715號)。此類宿主表現系統表示可產生且隨後純化所關注之編碼序列的媒劑，但亦表示可在經適當核苷酸編碼序列轉型或轉染時原位表現本文提供之融合蛋白的細胞。此等系統包括但不限於經含有編碼序列之重組細菌噬菌體DNA、質體DNA或黏質體DNA表現載體轉型的微生物，諸如細菌(例如大腸桿菌(E . coli
)及枯草芽孢桿菌(B . subtilis
))；經含有編碼序列之重組酵母表現載體轉型的酵母(例如畢赤酵母(Saccharomyces Pichia
))；經含有編碼序列之重組病毒表現載體(例如桿狀病毒)感染的昆蟲細胞系統；經重組病毒表現載體(例如花椰菜嵌紋病毒(cauliflower mosaic virus，CaMV)、菸草花葉病毒(tobacco mosaic virus，TMV))感染或經含有編碼序列之重組質體表現載體(例如Ti質體)轉型的植物細胞系統；或具有含有源自哺乳動物細胞基因組之啟動子(例如金屬硫蛋白啟動子)或源自哺乳動物病毒之啟動子(例如腺病毒晚期啟動子；痘瘡病毒7.5K啟動子)之重組表現構築體的哺乳動物細胞系統(例如COS、CHO、BHK、293、NS0及3T3細胞)。細菌細胞(諸如大腸桿菌)或真核細胞(尤其用於表現整個重組抗體分子)可用於表現重組抗MSLN構築體或融合蛋白。舉例而言，與載體(諸如來自人類細胞巨大病毒之主要中間早期基因啟動子元件)結合之哺乳動物細胞(諸如中國倉鼠卵巢細胞(CHO))為抗體或其變異體之有效表現系統(Foecking等人, 1986, Gene 45:101；及Cockett等人, 1990, Bio/Technology 8:2)。在一些實施例中，本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白產生於CHO細胞中。在一特定實施例中，編碼本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白之核苷酸序列的表現係藉由組成性啟動子、誘導性啟動子或組織特異性啟動子調節。
在細菌系統中，可取決於所表現之抗MSLN構築體或融合蛋白之預期用途有利地選擇多種表現載體。舉例而言，當欲產生大量的此類抗MSLN構築體或融合蛋白用於產生抗MSLN構築體或融合蛋白之醫藥組合物時，可能需要導引易於純化之抗MSLN構築體或融合蛋白產物之高量表現的載體。此類載體包括但不限於大腸桿菌表現載體pUR278 (Ruther等人, 1983, EMBO 12:1791)，其中可將編碼序列個別地接合至載體中，與lac Z編碼區同框以產生抗MSLN構築體或融合蛋白；pIN載體(Inouye及Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109；Van Heeke及Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24:5503-5509)；及其類似載體。pGEX載體亦可用於將外源多肽表現為具有麩胱甘肽5-轉移酶(GST)之抗MSLN構築體或融合蛋白。一般而言，此類抗MSLN構築體或融合蛋白為可溶的且可藉由吸附及結合至基質麩胱甘肽瓊脂糖珠粒，接著在游離麩胱甘肽存在下溶離而容易地自溶解細胞純化。pGEX載體被設計成包括凝血酶或Xa因子蛋白酶裂解位點以便使得可自GST部分釋放選殖目標基因產物。
在昆蟲系統中，使用苜蓿銀紋夜蛾(Autographa californica
)核多角體病毒(AcNPV)作為載體來表現外源基因。病毒生長於草地黏蟲(Spodoptera frugiperda)細胞中。可將編碼序列單獨選殖至病毒之非必需區(例如多角體蛋白基因)中且置於AcNPV啟動子(例如多角體蛋白啟動子)之控制下。
在哺乳動物宿主細胞中，可利用多種基於病毒之表現系統。在其中腺病毒用作表現載體之情況下，所關注之編碼序列可接合至腺病毒轉錄/轉譯控制複合物，例如晚期啟動子及三聯前導序列。此嵌合基因可隨後藉由活體外或活體內重組而插入腺病毒基因組中。在病毒基因組之非必需區(例如區E1或E3)中插入將產生可存活且能夠在感染之宿主中表現抗MSLN構築體或融合蛋白的重組病毒(例如參見Logan及Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8 1:355-359)。亦可需要特定起始信號以高效轉譯所插入之編碼序列。此等信號包括ATG起始密碼子及相鄰序列。此外，起始密碼子必須與所要之編碼序列的閱讀框架同相，以確保完整插入物之轉譯。此等外源性轉譯控制信號及起始密碼子可為多種來源，天然及合成兩者。表現效率可藉由包括適當轉錄增強子元件、轉錄終止子等而增強。(參見例如Bittner等人, 1987, Methods in Enzymol. 153:51-544)。
另外，可選擇調節插入序列之表現或以所需特定方式修飾及處理基因產物的宿主細胞品系。蛋白質產物之此類修飾(例如糖基化)及處理(例如裂解)對該蛋白質之功能而言可為重要的。不同宿主細胞具有蛋白質及基因產物之轉譯後處理及修飾的特徵及特定機制。可選擇適合細胞株或宿主系統以確保所表現之外源蛋白質之正確修飾及處理。為此目的，可使用具有恰當處理基因產物之初級轉錄物、糖基化及磷酸化的細胞機制之真核宿主細胞。此類哺乳動物宿主細胞包括但不限於CHO、VERY、BHK、Hela、COS、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O及T47D、NS0 (不內源性產生任何免疫球蛋白鏈之鼠類骨髓瘤細胞株)、CRL7O3O及HsS78Bst細胞。
為長期高產率產生重組蛋白，可利用穩定表現。舉例而言，穩定表現抗MSLN構築體或融合蛋白之細胞株可經工程化。宿主細胞可用由適當表現控制元件(例如啟動子、增強子、序列、轉錄終止子、聚腺苷酸化位點等)控制之DNA及可選標記轉型，而非使用含有病毒複製起點之表現載體。引入外源DNA之後，可使經工程改造之細胞在富集培養基中生長1-2天，且隨後換成選擇性培養基。重組質體中之可選標記賦予選擇抗性，且允許細胞將質體穩定地整合至其染色體中且生長形成變異區(foci)，該變異區繼而可選殖及擴增至細胞株中。此方法可有利地用於工程改造表現抗MSLN構築體或融合蛋白之細胞株。此類工程化細胞株可特別適用於篩選及評估與結合分子直接或間接相互作用之組合物。
可使用多種選擇系統，包括但不限於單純疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等人, 1977, Cell 11:223)、次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(Szybalska及Szybalski, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:202)及腺嘌呤磷酸核糖轉移酶(Lowy等人, 1980, Cell 22:8-17)基因，其分別可在tk-細胞、hgprt-細胞或aprt-細胞中使用。另外，抗代謝物抗性可用作對以下基因進行選擇之基礎：dhfr
，其賦予針對甲胺喋呤之抗性(Wigler等人, 1980, Natl. Acad. Sci. USA 77:357；O'Hare等人, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527)；gpt
，其賦予針對黴酚酸之抗性(Mulligan及Berg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072)；neo，其賦予針對胺基醣苷G-418之抗性(Wu及Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95；Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596；Mulligan, 1993, Science 260:926-932；及Morgan及Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217；May, 1993, TIB TECH 11(5):l55-2 15)；及hygro
，其賦予針對潮黴素之抗性(Santerre等人, 1984, Gene 30:147)。重組DNA技術中通常已知之方法可常規地應用於選擇所需重組純系，且此類方法描述於例如Ausubel等人(編),Current Protocols in Molecular Biology
, John Wiley & Sons, NY (1993)；Kriegler,Gene Transfer and Expression
, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990)；及Dracopoli等人(編),Current Protocols in Human Genetics
第12章及第13章, John Wiley & Sons, NY (1994)；Colberre-Garapin等人, 1981, J. Mol. Biol., 150:1中，該等文獻以全文引用的方式併入本文中。
抗MSLN構築體或融合蛋白之表現量可藉由載體擴增來增加(關於綜述，參見Bebbington及Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells, DNA cloning, 第3卷 (Academic Press, New York, 1987))。當表現抗MSLN構築體或融合蛋白之載體系統中的標記可擴增時，存在於宿主細胞培養物中之抑制劑的含量之增加將使標記基因之複本數目增加。由於擴增區與抗MSLN構築體或融合蛋白基因相關聯，抗MSLN構築體或融合蛋白之產量亦將增加(Crouse等人, 1983, Mol. Cell. Biol. 3:257)。
宿主細胞可經多個本文提供之表現載體共轉染。載體可含有相同可選標記，其使得能夠相同地表現各別編碼多肽。或者，可使用單一載體，其編碼且能夠表現多個多肽。編碼序列可包含cDNA或基因組DNA。
一旦由重組表現產生本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白，其可藉由此項技術中已知用於純化多肽(例如免疫球蛋白分子)之任何方法純化，例如藉由層析(例如離子交換、親和力(尤其藉由針對蛋白A之後的特定抗原之親和力)、篩分管柱層析法及κ選擇親和層析)、離心、差異性溶解度或藉由任何其他用於純化蛋白質之標準技術。另外，本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白分子可融合至本文所述或此項技術中另外已知之異源多肽序列以促進純化。
以下實例例示製造本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白的方法。
醫藥組合物
在一個態樣中，本發明另外提供包含至少一種本發明之抗MSLN構築體或融合蛋白的醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含治療有效量的本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白及醫藥學上可接受之賦形劑。
藉由將具有所需純度之抗MSLN構築體或融合蛋白與視情況存在之生理學上可接受之賦形劑(參見例如Remington,Remington ' s Pharmaceutical Sciences
(第18版 1980))(呈水溶液或凍乾或其他乾燥形式)混合來製備包含抗MSLN構築體或融合蛋白之醫藥組合物供儲存。
本發明之抗MSLN構築體或融合蛋白可以任何適合於遞送至目標細胞/組織之形式調配，例如調配為微膠囊或巨乳液(Remington, 前述；Park等人, 2005, Molecules 10:146-61；Malik等人, 2007, Curr. Drug. Deliv. 4:141-51)、持續釋放調配物(Putney及Burke, 1998, Nature Biotechnol. 16:153-57)，或在脂質體中(Maclean等人, 1997, Int. J. Oncol. 11:325-32；Kontermann, 2006, Curr. Opin. Mol. Ther. 8:39-45)。
亦可將本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白截留於例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合製備的微膠囊(例如分別為羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊))中、截留於膠狀藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米顆粒及奈米膠囊)中或截留於巨乳液中。此類技術揭示於例如Remington, 前述中。
各種組合物及遞送系統為吾人所知且可與如本文所述之抗MSLN構築體或融合蛋白一起使用，包括但不限於囊封於脂質體、微粒、微膠囊中，能夠表現抗MSLN構築體或融合蛋白之重組細胞，受體介導之內飲作用(參見例如Wu及Wu, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-32)，構築核酸作為反轉錄病毒或其他載體之部分等。在另一實施例中，組合物可以控制釋放或持續釋放系統形式提供。在一個實施例中，可使用泵來達成控制釋放或持續釋放(參見例如Langer, 前述；Sefton, 1987, Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201-40；Buchwald等人, 1980, Surgery 88:507-16；及Saudek等人, 1989, N. Engl. J. Med. 321:569-74)。在另一實施例中，聚合材料可用於達成本文提供之預防劑或治療劑(例如如本文所述之融合蛋白)或組合物之控制釋放或持續釋放(參見例如Medical Applications of Controlled Release
(Langer及Wise編, 1974)；Controlled Drug Bioavailability , Drug Product Design and Performance
(Smolen及Ball編, 1984)；Ranger及Peppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61-126；Levy等人, 1985, Science 228:190-92；During等人, 1989, Ann. Neurol. 25:351-56；Howard等人, 1989, J. Neurosurg. 71:105-12；美國專利第5,679,377號；第5,916,597號；第5,912,015號；第5,989,463號；及第5,128,326號；PCT公開案第WO 99/15154號及第WO 99/20253號)。持續釋放調配物中所用之聚合物之實例包括但不限於聚(甲基丙烯酸2-羥乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酸酐、聚(N-乙烯吡咯啶酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯醯胺、聚(乙二醇)、聚乳酸交酯(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)及聚原酸酯。在一個實施例中，用於持續釋放調配物之聚合物為惰性、不含可濾出雜質、儲存穩定、無菌及可生物降解的。
在另一實施例中，控制釋放或持續釋放系統可置放於特定目標組織，例如鼻腔通道或肺附近，因此僅需要全身劑量之一部分(參見例如Goodson,Medical Applications of Controlled Release
第2卷, 115-38 (1984))。控制釋放系統論述於例如Langer, 1990, Science 249:1527-33中。熟習此項技術者已知之任何技術可用於產生包含一或多種如本文所述之抗MSLN構築體或融合蛋白的持續釋放調配物(參見例如美國專利第4,526,938號，PCT公開案第WO 91/05548號及第WO 96/20698號，Ning等人, 1996, Radiotherapy & Oncology 39:179-89；Song等人, 1995, PDA J. of Pharma. Sci. & Tech. 50:372-97；Cleek等人, 1997, Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-54；及Lam等人, 1997, Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-60)。
使用方法
在一特定實施例中，本文提供用於預防及/或治療疾病或病況之組合物，其包含本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白。在一個實施例中，本文提供用於預防疾病或病況之組合物，其中該組合物包含本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白。在一個實施例中，本文提供用於治療疾病或病況之組合物，其中該組合物包含本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白。在一些實施例中，疾病或病況為癌症。在一些實施例中，癌症為實體腫瘤癌症。在某些實施例中，個體為有需要之個體。在一些實施例中，個體患有疾病或病況。在其他實施例中，個體處於患有疾病或病況之風險下。在一些實施例中，投藥導致疾病或病況之預防、管理、治療或改善。
在一個實施例中，本文提供用於預防及/或治療疾病或病況之症狀的組合物，其中該組合物包含本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白。在一個實施例中，本文提供用於預防疾病或病況之症狀的組合物，其中該組合物包含本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白。在一個實施例中，本文提供用於治療疾病或病況之症狀的組合物，其中該組合物包含本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白。在一個實施例中，該疾病為癌症。在某些實施例中，個體為有需要之個體。在一些實施例中，個體患有疾病或病況。在其他實施例中，個體處於患有疾病或病況之風險下。在一些實施例中，投藥導致疾病或病況之症狀的預防或治療。
在另一實施例中，本文提供預防及/或治療個體之疾病或病況之方法，其包含投與有效量的本文提供之抗間皮素構築體或融合蛋白。在一個實施例中，本文提供預防個體之疾病或病況之方法，其包含投與有效量的本文提供之抗間皮素構築體或融合蛋白。在一個實施例中，本文提供治療個體之疾病或病況之方法，其包含投與有效量的本文提供之抗間皮素構築體或融合蛋白。在一個實施例中，疾病或病況為癌症。在某些實施例中，個體為有需要之個體。在一些實施例中，個體患有疾病或病況。在其他實施例中，個體處於患有疾病或病況之風險下。在一些實施例中，投藥導致疾病或病況之預防或治療。
在另一實施例中，本文提供預防及/或治療個體之疾病或病況之症狀的方法，其包含投與有效量的本文提供之抗間皮素構築體或融合蛋白。在一個實施例中，本文提供預防個體之疾病或病況之症狀的方法，其包含投與有效量的本文提供之抗間皮素構築體或融合蛋白。在一個實施例中，本文提供治療個體之疾病或病況之症狀的方法，其包含投與有效量的本文提供之抗間皮素構築體或融合蛋白。在一個實施例中，疾病或病況為癌症。在某些實施例中，個體為有需要之個體。在一些實施例中，個體患有疾病或病況。在其他實施例中，個體處於患有疾病或病況之風險下。在一些實施例中，投藥導致疾病或病況之症狀的預防或治療。
本文亦提供預防及/或治療疾病或病況之方法，其藉由向個體投與有效量的本文提供之抗間皮素構築體或融合蛋白，或包含本文提供之抗MSLN構築體或融合蛋白的醫藥組合物。在一個態樣中，融合蛋白為基本上純的(亦即，基本上不含限制其作用或產生非所需副作用之物質)。投與療法的個體可為哺乳動物，諸如非靈長類動物(例如母牛、豬、馬、貓、狗、大鼠等)或靈長類動物(例如猴，諸如食蟹獼猴，或人類)。在一個實施例中，個體為人類。在另一實施例中，個體為患有疾病或病況，例如癌症(包括實體腫瘤癌症)之人類。
本文亦提供預防及/或治療疾病或病況之方法，其藉由向個體投與有效量的包含特異性結合於間皮素之抗MSLN抗體部分的抗間皮素構築體，其中抗MSLN抗體部分具有減少之岩藻糖基化。
疾病或病況
本文所描述之方法可用於治療疾病或病況。在一些實施例中，疾病或病況為癌症。在一些實施例中，癌症為間皮素陽性癌症。在一些實施例中，癌症為實體癌症。在一些實施例中，癌症係選自由以下組成之群：胃癌、肺癌(諸如非小細胞肺癌)、卵巢癌(諸如上皮卵巢癌)、食道癌、胰臟癌、子宮頸癌、間皮瘤(諸如惡性間皮瘤、惡性上皮胸膜間皮瘤、晚期復發性上皮樣間皮瘤)、胃癌、子宮內膜癌、導管胰臟腺癌及乳癌。
組合療法
在一些實施例中，本文所述之方法進一步包含投與第二藥劑。在一些實施例中，第二藥劑包含細胞激素。在一些實施例中，細胞激素為IL-21或IL-15。在一些實施例中，IL-21或IL-15呈包含半衰期延長域之融合蛋白的形式。在一些實施例中，半衰期延長域為Fc域或白蛋白結合域。在一些實施例中，抗間皮素構築體及細胞激素係同時投與。
在一些實施例中，提供一種治療個體之胃癌的方法，其包含向該個體投與a)抗間皮素藥劑；b)抗Her2藥劑；及c) IL-21。在一些實施例中，IL-21呈包含半衰期延長域之融合蛋白的形式。在一些實施例中，抗Her2藥劑為賀癌平。在一些實施例中，抗間皮素藥劑包含如本文所述之抗間皮素構築體。在一些實施例中，抗間皮素藥劑包含有包含抗MSLN重鏈可變區(VH)之抗間皮素抗體部分，該VH包含：HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3，其分別在具有SEQ ID NO: 123-156及285-301中之任一者中所闡述之序列的VH
鏈區內包含CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列。在一些實施例中，抗間皮素構築體、抗Her2藥劑及IL-21係同時投與。
給藥方案
抗間皮素構築體及/或第二藥劑可使用任何適合之劑量及投與途徑向個體投與。在一些實施例中，抗間皮素構築體及/或第二藥劑係非經腸投與至個體。投與途徑係根據已知及可接受方法，諸如藉由以適合之方式，例如藉由皮下、靜脈內、腹膜內、肌肉內、動脈內、病灶內、關節內、瘤內或經口途徑注射或輸注而在一段時間內單次或多次快速注射或輸注。
在一些實施例中，抗間皮素構築體及第二藥劑係同時、並行或依序投與至個體。
確定適當劑量或投與途徑完全在一般熟習此項技術者之技能內。動物實驗為確定用於人類診斷應用之有效劑量提供可靠指導。有效劑量之種間按比例調整可遵循由Mordenti, J.及Chappell, W. 「The Use of Interspecies Scaling in Toxicokinetics」,Toxicokinetics and New Drug Development
, Yacobi等人編, Pergamon Press, New York 1989, 第42-46頁主張之原理來進行。
在一些實施例中，抗MSLN構築體係以約一週一次至約一週兩次之頻率投與。在一些實施例中，抗MSLN構築體係以至少約一週一次之頻率投與。在一些實施例中，抗MSLN構築體係以不超過約一週兩次之頻率投與。在一些實施例中，抗MSLN構築體在各治療週期投與至少約1、2、3、4或5週。
在一些實施例中，每次向人類投與之抗MSLN構築體的量為等效於針對小鼠之約5 mg/kg之劑量的量。在一些實施例中，每次向人類投與之抗MSLN構築體的量為等效於針對小鼠之約100 µg之劑量的量。參見Nair, A. B., & Jacob, S. (2016). A simple practice guide for dose conversion between animals and human. Journal of basic and clinical pharmacy, 7(2), 27。
在一些實施例中，第二藥劑包含細胞激素(諸如細胞激素融合蛋白，諸如IL-21-抗HSA融合蛋白)。在一些實施例中，細胞激素係以約一週兩次之頻率投與。在一些實施例中，細胞激素在各治療週期投與至少約一週、兩週或兩週半。在一些實施例中，每次向人類投與之細胞激素的量為等效於針對小鼠之約5 µg至約25 µg之劑量的量。
在一些實施例中，第二藥劑包含抗Her2藥劑(諸如賀癌平)。在一些實施例中，抗Her2藥劑係以約一週兩次之頻率投與。在一些實施例中，細胞激素在各治療週期投與至少約一週、兩週或兩週半。在一些實施例中，每次向人類投與之細胞激素的量為等效於針對小鼠之約20 µg之劑量的量。
各種遞送系統為吾人所知且可用於投與預防劑或治療劑(例如本文提供之融合蛋白)，包括但不限於囊封於脂質體、微粒、微膠囊中，能夠表現抗MSLN構築體或融合蛋白之重組細胞，受體介導之內飲作用(參見例如Wu及Wu, J. Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987))，構築核酸作為反轉錄病毒或其他載體之部分等。投與預防劑或治療劑(例如本文提供之融合蛋白)或醫藥組合物之方法包括但不限於非經腸投與(例如皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內及皮下)、硬膜外及經黏膜(例如鼻內及經口途徑)。在一特定實施例中，預防劑或治療劑(例如本文提供之融合蛋白)或醫藥組合物係鼻內、肌肉內、靜脈內或皮下投與。預防劑或治療劑或組合物可藉由任何便利途徑投與，例如藉由輸注或快速注射、藉由經上皮或黏膜皮膚內層(例如口腔黏膜、鼻內黏膜、直腸及腸黏膜等)吸收，且可與其他生物學活性劑一起投與。可全身性或局部投與。另外，亦可採用經肺投與，例如使用吸入器或噴霧器，及具有氣霧劑之調配物。參見例如美國專利第6,019,968號、第5,985,320號、第5,985,309號、第5,934,272號、第5,874,064號、第5,855,913號、第5,290,540號及第4,880,078號；及PCT公開案第WO 92/19244號、第WO 97/32572號、第WO 97/44013號、第WO 98/31346號及第WO 99/66903號，其各自以全文引用的方式併入本文中。
在一特定實施例中，可能需要向需要治療之區域局部投與本文提供之預防劑或治療劑，或醫藥組合物。此可例如而非作為限制地如下達成：藉由局部輸注、藉由局部投藥(例如藉由鼻內噴霧)、藉由注射，或藉助於植入物，該植入物為多孔、無孔或膠狀材料，包括膜，諸如矽橡膠膜，或纖維。在一些實施例中，當投與本文提供之融合蛋白時，必須注意使用不吸收融合蛋白之材料。
在另一實施例中，本文提供之預防劑或治療劑或組合物可在小泡，尤其脂質體中遞送(參見Langer, 1990, Science 249:1527-1533；Treat等人, Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein及Fidler (編), Liss, New York, 第353- 365頁 (1989)；Lopez-Berestein, 同上, 第317-327頁；一般參見同上)。
在另一實施例中，本文提供之預防劑或治療劑或組合物可在控制釋放或持續釋放系統中遞送。在一個實施例中，可使用泵來達成控制釋放或持續釋放(參見Langer, 前述；Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20；Buchwald等人, 1980, Surgery 88:507；Saudek等人, 1989, N. Engl. J. Med. 321:574)。在另一實施例中，聚合物材料可以用於達成本文提供之預防劑或治療劑(例如本文提供之抗體)或組合物之控制釋放或持續釋放(參見例如Medical Applications of Controlled Release, Langer及Wise (編), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974)；Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen及Ball (編), Wiley, New York (1984)；Ranger及Peppas, 1983, J., Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61；亦參見Levy等人, 1985, Science 228:190；During等人, 1989, Ann. Neurol. 25:351；Howard等人, 1989, J. Neurosurg. 7 1:105)；美國專利第5,679,377號；美國專利第5,916,597號；美國專利第5,912,015號；美國專利第5,989,463號；美國專利第5,128,326號；PCT公開案第WO 99/15154號；及PCT公開案第WO 99/20253號。持續釋放調配物中所用之聚合物之實例包括但不限於聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酸酐、聚(N-乙烯吡咯啶酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯醯胺、聚(乙二醇)、聚乳酸交酯(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)及聚原酸酯。在一個實施例中，用於持續釋放調配物之聚合物為惰性、不含可濾出雜質、儲存穩定、無菌及可生物降解的。在另一實施例中，控釋釋放或持續釋放系統可置放於治療目標，亦即鼻腔通道或肺附近，從而僅需要全身劑量之一部分(參見例如Goodson, Medical Applications of Controlled Release, 前述, 第2卷, 第115-138頁 (1984))。控制釋放系統論述於Langer之綜述(1990, Science 249:1527-1533)中。熟習此項技術者已知之任何技術可用於產生包含一或多種本文提供之融合蛋白的持續釋放調配物。參見例如美國專利第4,526,938號，PCT公開案WO 91/05548，PCT公開案WO 96/20698，Ning等人, 1996, 「Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel」, Radiotherapy & Oncology 39:179- 189，Song等人, 1995, 「Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions」, PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397，Cleek等人, 1997, 「Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application」, Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854，及Lam等人, 1997, 「Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery」, Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760，各文獻以全文引用的方式併入本文中。
在一特定實施例中，其中本文提供之組合物為編碼預防劑或治療劑(例如本文提供之融合蛋白)之核酸，可活體內投與核酸以促進其編碼預防劑或治療劑的表現，此係藉由將其構築為適當核酸表現載體之一部分且將其投與，以使得其變成胞內，例如藉由使用逆轉錄病毒載體(參見美國專利第4,980,286號)，或藉由直接注射，或藉由使用微粒轟擊(例如基因槍；Biolistic, Dupont)，或用脂質或細胞表面受體或轉染劑塗佈，或藉由將其與已知進入核內之同源盒樣肽連接來投與(參見例如Joliot等人, 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868)等。或者，核酸可藉由同源重組引入細胞內且併入宿主細胞DNA內用於表現。
在一特定實施例中，本文所提供之組合物包含一種、兩種或更多種本文提供之融合蛋白。在另一實施例中，本文所提供之組合物包含一種、兩種或更多種本文提供之融合蛋白及除本文提供之融合蛋白以外的預防劑或治療劑。在一個實施例中，已知藥劑適用於或已用於或當前正用於預防、管理、治療及/或改善疾病或病況。除預防劑或治療劑之外，本文所提供之組合物亦可包含賦形劑。
本文所提供之組合物包括適用於製造可用於製備單位劑型之醫藥組合物(例如適合於向個體或患者投與之組合物)的原料藥組合物。在一個實施例中，本文所提供之組合物為醫藥組合物。此類組合物包含預防或治療有效量的一或多種預防劑或治療劑(例如本文提供之融合蛋白或其他預防劑或治療劑)，及醫藥學上可接受之賦形劑。可調配醫藥組合物以適於個體投藥途徑。
在一特定實施例中，術語「賦形劑」亦可指稀釋劑、佐劑(例如費氏佐劑(完全或不完全)或媒劑。醫藥賦形劑可為無菌液體，諸如水及油，包括石油、動物、植物或合成來源之油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及其類似物。當靜脈內投與醫藥組合物時，水為例示性賦形劑。亦可採用生理鹽水溶液以及右旋糖及甘油水溶液作為液體賦形劑，尤其用於可注射溶液。適合之醫藥賦形劑包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻穀、粉末、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、丙三醇單硬脂酸酯、滑石、氯化鈉、脫脂乳粉、丙三醇、丙烯、二醇、水、乙醇及其類似物。若需要，組合物亦可含有少量濕潤劑或乳化劑，或pH值緩衝劑。該等組合物可呈溶液、懸浮液、乳液、錠劑、丸劑、膠囊、散劑、持續釋放調配物及其類似物之形式。經口調配物可包括標準賦形劑，諸如醫藥級甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。適合之醫藥賦形劑之實例描述於Remington ' s Pharmaceutical Sciences
(1990) Mack Publishing Co., Easton, PA中。此類組合物將含有預防或治療有效量的本文提供之融合蛋白，諸如呈純化形式，連同適合量之賦形劑，以提供向患者適當投與之形式。調配物應適合投藥模式。
在一個實施例中，根據常規程序將組合物調配成適於靜脈內投與至人類之醫藥組合物。通常，用於靜脈內投與之組合物為於無菌等張水性緩衝劑中之溶液。必要時，組合物亦可包括增溶劑及諸如利多卡因(lignocamne)之局部麻醉劑以減輕注射部位之疼痛。然而，此類組合物可藉由除靜脈內之外的途徑投與。
一般而言，本文所提供之組合物之成分係單獨提供或以單位劑型混合在一起，例如呈在指示活性劑之量的氣密密封式容器(諸如安瓿或藥囊)中的乾燥凍乾粉末或無水濃縮物形式。當意圖藉由輸注投與組合物時，其可用含有無菌醫藥級水或生理鹽水之輸液瓶來施配。當藉由注射投與組合物時，可提供具有注射用無菌水或生理鹽水之安瓿，以使該等成分可在投與前混合。
本文提供之融合蛋白可封裝於指示抗體之量的氣密密封式容器(諸如安瓿或藥囊)中。在一個實施例中，融合蛋白係以乾燥無菌凍乾粉末或無水濃縮物形式在氣密密封式容器中供應且可以用例如水或生理鹽水復原至適當濃度以向個體投與。凍乾融合蛋白可在其原始容器中儲存於2℃與8℃之間且融合蛋白可在復原之後的12小時內，諸如6小時內、5小時內、3小時內或1小時內投與。在一替代實施例中，本文提供之融合蛋白以液體形式在指示抗體之量及濃度的氣密密封式容器中供應。
本文所提供之組合物可調配為中性或鹽形式。醫藥學上可接受之鹽包括與陰離子形成之鹽，諸如衍生自鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等之鹽；及與陽離子形成之鹽，諸如衍生自氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙基胺基乙醇、組胺酸、普魯卡因等之鹽。
將在預防及/或治療疾病或病況中有效的本文提供之預防劑或治療劑(例如本文提供之融合蛋白)或組合物的量可藉由標準臨床技術測定。另外，活體外分析可視情況用於幫助鑑別最佳劑量範圍。待用於調配物中之精確劑量亦將視投藥途徑及疾病或病況之嚴重性而定，且應根據醫師之判斷及各患者之情況來決定。
可自源自活體外或動物模型測試系統之劑量反應曲線外推出有效劑量。
在某些實施例中，向患者投與一劑本文提供之融合蛋白的途徑為鼻內、肌肉內、靜脈內或其組合，但本文所述之其他途徑亦可接受。各劑量可或可不藉由相同投藥途徑投與。在一些實施例中，本文提供之融合蛋白可與本文提供之相同或不同融合蛋白之其他劑量同時或隨後經由多種投與途徑投與。
在某些實施例中，本文提供之融合蛋白係預防性或治療性地向個體投與。本文提供之融合蛋白可預防性或治療性地向個體投與以預防、減輕或改善疾病或其症狀。
為了簡潔起見，本文中使用某些縮寫。一個實例為表示胺基酸殘基之單字母縮寫。胺基酸及其對應的三字母及單字母縮寫如下： 
本文中藉由使用肯定的語言描述多個實施例來大體揭示本發明。本發明亦特別包括其中完全或部分排除特定標的物之實施例，諸如物質或材料、方法步驟及條件、方案、程序、分析法或分析。因此，儘管本文中未依本發明不包括的內容來大體表述本發明，但本文揭示了未明確包括於本發明中的態樣。
已描述多個本發明之多個實施例。儘管如此，應理解可在不背離本發明的精神及範疇的情況下進行各種修改。因此，以下實例旨在說明而非限制申請專利範圍中所述之本發明範疇。
製品及套組
在本發明之一些實施例中，提供含有適用於治療個體之疾病或病況(諸如癌症，諸如間皮素陽性癌症)之材料的製品，用於向該個體投與抗MSLN構築體。該製品可包含容器及容器上或容器隨附之標籤或藥品說明書。適合之容器包括例如瓶子、小瓶、注射器等。容器可由各種材料形成，諸如玻璃或塑膠。一般而言，容器容納對於治療本文所述之疾病或病症有效之組合物，且可具有無菌出入端口(例如容器可為靜脈內溶液袋或具有可藉由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶)。組合物中之至少一種活性劑為本文所述之抗MSLN構築體。標籤或藥品說明書指示該組合物用於治療特定病況。標籤或藥品說明書將另外包含關於向患者投與抗MSLN構築體之說明書。亦涵蓋包含本文中描述之組合療法的製品及套組。
藥品說明書係指市售治療產品封裝中通常所包括之含有關於適應症、使用、劑量、投與、與此類治療產品之使用有關之禁忌之資訊及/或警告的說明書。在一些實施例中，藥品說明書指示組合物用於治療疾病或病況(諸如癌症，諸如間皮素陽性癌症)。
另外，製品可進一步包含第二容器，其包含醫藥學上可接受之緩衝液，諸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)及右旋糖溶液。其可進一步包括就商業及使用者觀點而言所需之其他物質，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。
亦提供適用於各種目的，例如用於治療本文所述之疾病或病況(諸如癌症，諸如間皮素陽性癌症)、用於向個體投與抗MSLN構築體(視情況與製品組合)之套組。本發明之套組包括一或多個容器，其包含抗MSLN構築體組合物(或單位劑型及/或製品)，且在一些實施例中，另外包含根據本文所描述之方法中的任一者之另一藥劑(如本文所述之藥劑)及/或使用說明書。套組可進一步包含選擇適合於治療之個體的說明。本發明套組中供應之說明書為通常在標籤或藥品說明書(例如，套組中包括之紙片)上之書面說明書，但機器可讀說明書(例如，磁化或光學儲存盤上載有的說明書)亦為可接受的。
舉例而言，在一些實施例中，套組包含有包含抗MSLN構築體之組合物。在一些實施例中，套組包含a)包含抗MSLN構築體之組合物，及b)有效量的至少一種其他如本文所述之藥劑。在一些實施例中，套組包含a)包含抗MSLN構築體之組合物，及b)關於向個體投與抗MSLN構築體組合物以用於治療之說明書。在一些實施例中，套組包含a)包含抗MSLN構築體之組合物，b)有效量的至少一種其他如本文所述之藥劑，及c)關於向個體投與抗MSLN構築體組合物及其他藥劑以用於治療之說明書。抗MSLN構築體及其他藥劑可存在於獨立容器或單一容器中。舉例而言，套組可包含一種相異的組合物或兩種或兩種以上組合物，其中一種組合物包含抗MSLN構築體且另一組合物包含另一藥劑。
本發明之套組係在適合的包裝中。適合的包裝包括但不限於小瓶、瓶子、罐、可撓性包裝(例如密封Mylar或塑膠袋)及其類似物。套組可視情況提供諸如緩衝劑之額外組分及說明性資訊。本申請案因此亦提供製品，其包括小瓶(諸如密封小瓶)、瓶子、罐、可撓性包裝及其類似者。
與抗MSLN構築體組合物之使用相關的說明書大體上包括關於所期望治療之劑量、給藥時程及投與途徑之資訊。容器可為單位劑量、散裝(例如，多劑量包裝)或次單位劑量。舉例而言，可提供套組，其含有足夠劑量的如本文所揭示之抗MSLN構築體，以持續長時段，諸如一週、8天、9天、10天、11天、12天、13天、2週、3週、4週、6週、8週、3個月、4個月、5個月、7個月、8個月、9個月或更長時間中之任一者向個體提供有效治療。套組亦可包括多個單位劑量之抗MSLN構築體及醫藥組合物及使用說明書且以對於在藥房，例如醫院藥房及配藥房中儲存及使用而言足夠之量包裝。
熟習此項技術者應認識到，在本申請案之範疇及精神內，若干實施例為可能的。現將參照以下非限制性實例來更詳細地描述本發明。以下實例進一步說明本發明，但當然不應解釋為以任何方式限制其範疇。
例示性實施例
1. 一種融合蛋白，其包含：(a)介白素21 (IL-21)或其變異體；(b)白蛋白結合分子；及(c)結合至抗原之結合分子，其中IL-21或其變異體經由第一連接子連接至白蛋白結合分子，且其中白蛋白結合分子經由第二連接子連接至結合分子。
2. 如技術方案1之融合蛋白，其中該IL-21或其變異體包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列。
3. 如技術方案1之融合蛋白，其中該IL-21或其變異體包含SEQ ID NO: 1內之一或多個缺失。
4. 如技術方案1之融合蛋白，其中該IL-21或其變異體包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列。
5. 如技術方案1之融合蛋白，其中該IL-21或其變異體包含與SEQ ID NO: 1具有大於80%一致性之胺基酸序列。
6. 如技術方案1之融合蛋白，其中該IL-21或其變異體包含與SEQ ID NO: 1具有大於90%一致性之胺基酸序列。
7. 如技術方案1之融合蛋白，其中該IL-21或其變異體包含與SEQ ID NO: 1具有大於95%一致性之胺基酸序列。
8. 如技術方案1至7中任一項之融合蛋白，其中該白蛋白結合分子為白蛋白結合域(ABD)。
9. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD結合至人類血清白蛋白(HSA)。
10. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD結合至小鼠血清白蛋白(MSA)。
11. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD以1-1000 nM之間的KD
結合至HSA。
12. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD以10-500 nM之間的KD
結合至HSA。
13. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD以20-200 nM之間的KD
結合至HSA。
14. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD以50-100 nM之間的KD
結合至HSA。
15. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列。
16. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列。
17. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列。
18. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列。
19. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列。
20. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列。
21. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列。
22. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列。
23. 如技術方案8之融合蛋白，其中該ABD包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列。
24. 如技術方案1至7中任一項之融合蛋白，其中該白蛋白結合分子為抗白蛋白抗體或其抗原結合片段。
25. 如技術方案24之融合蛋白，其中該抗白蛋白抗體或其抗原結合片段為結合至HSA之sdAb。
26. 如技術方案25之融合蛋白，其中該sdAb為VH
H單域抗體。
27. 如技術方案25或26之融合蛋白，其中該sdAb以1-1000 nM之間的KD
結合至HSA。
28. 如技術方案25或26之融合蛋白，其中該sdAb以10-500 nM之間的KD
結合至HSA。
29. 如技術方案25或26之融合蛋白，其中該sdAb以20-200 nM之間的KD
結合至HSA。
30. 如技術方案25或26之融合蛋白，其中該sdAb以50-100 nM之間的KD
結合至HSA。
31. 如技術方案1之融合蛋白，其中結合分子為結合至癌細胞上表現之抗原的抗體或其抗原結合片段，其中癌細胞視情況為實體腫瘤癌細胞。
32. 如技術方案31之融合蛋白，其中該結合分子為sdAb。
33. 如技術方案32之融合蛋白，其中該sdAb為VH
H單域抗體。
34. 如技術方案33之融合蛋白，其中該sdAb結合至間皮素(MSLN)。
35. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含重鏈可變區(VH)，該VH包含(i)互補決定區1 (CDR1)，其具有選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 87、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 93、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 99、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 117及SEQ ID NO: 120；(ii)互補決定區2 (CDR2)，其具有選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 85、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 91、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 97、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 109、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 118及SEQ ID NO: 121；及(iii)互補決定區3 (CDR3)，其具有選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 83、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 89、SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 101、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 113、SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122。
36. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 12之CDR1、SEQ ID NO: 13之CDR2及SEQ ID NO: 14之CDR3。
37. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 15之CDR1、SEQ ID NO: 16之CDR2及SEQ ID NO: 17之CDR3。
38. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 18之CDR1、SEQ ID NO: 19之CDR2及SEQ ID NO: 20之CDR3。
39. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 21之CDR1、SEQ ID NO: 22之CDR2及SEQ ID NO: 23之CDR3。
40. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 24之CDR1、SEQ ID NO: 25之CDR2及SEQ ID NO: 26之CDR3。
41. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 27之CDR1、SEQ ID NO: 28之CDR2及SEQ ID NO: 29之CDR3。
42. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 30之CDR1、SEQ ID NO: 31之CDR2及SEQ ID NO: 32之CDR3。
43. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 33之CDR1、SEQ ID NO: 34之CDR2及SEQ ID NO: 35之CDR3。
44. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 36之CDR1、SEQ ID NO: 37之CDR2及SEQ ID NO: 38之CDR3。
45. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 39之CDR1、SEQ ID NO: 40之CDR2及SEQ ID NO: 41之CDR3。
46. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 42之CDR1、SEQ ID NO: 43之CDR2及SEQ ID NO: 44之CDR3。
47. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 45之CDR1、SEQ ID NO: 46之CDR2及SEQ ID NO: 47之CDR3。
48. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 48之CDR1、SEQ ID NO: 49之CDR2及SEQ ID NO: 50之CDR3。
49. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 51之CDR1、SEQ ID NO: 52之CDR2及SEQ ID NO: 53之CDR3。
50. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 54之CDR1、SEQ ID NO: 55之CDR2及SEQ ID NO: 56之CDR3。
51. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 57之CDR1、SEQ ID NO: 58之CDR2及SEQ ID NO: 59之CDR3。
52. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 60之CDR1、SEQ ID NO: 61之CDR2及SEQ ID NO: 62之CDR3。
53. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 63之CDR1、SEQ ID NO: 64之CDR2及SEQ ID NO: 65之CDR3。
54. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 75之CDR1、SEQ ID NO: 76之CDR2及SEQ ID NO: 77之CDR3。
55. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 78之CDR1、SEQ ID NO: 79之CDR2及SEQ ID NO: 80之CDR3。
56. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 81之CDR1、SEQ ID NO: 82之CDR2及SEQ ID NO: 83之CDR3。
57. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 84之CDR1、SEQ ID NO: 85之CDR2及SEQ ID NO: 86之CDR3。
58. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 87之CDR1、SEQ ID NO: 88之CDR2及SEQ ID NO: 89之CDR3。
59. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 90之CDR1、SEQ ID NO: 91之CDR2及SEQ ID NO: 92之CDR3。
60. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 93之CDR1、SEQ ID NO: 94之CDR2及SEQ ID NO: 95之CDR3。
61. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 96之CDR1、SEQ ID NO: 97之CDR2及SEQ ID NO: 98之CDR3。
62. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 99之CDR1、SEQ ID NO: 100之CDR2及SEQ ID NO: 101之CDR3。
63. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 102之CDR1、SEQ ID NO: 103之CDR2及SEQ ID NO: 104之CDR3。
64. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 105之CDR1、SEQ ID NO: 106之CDR2及SEQ ID NO: 107之CDR3。
65. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 108之CDR1、SEQ ID NO: 109之CDR2及SEQ ID NO: 110之CDR3。
66. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 111之CDR1、SEQ ID NO: 112之CDR2及SEQ ID NO: 113之CDR3。
67. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 114之CDR1、SEQ ID NO: 115之CDR2及SEQ ID NO: 116之CDR3。
68. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 117之CDR1、SEQ ID NO: 118之CDR2及SEQ ID NO: 119之CDR3。
69. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含VH，該VH包含SEQ ID NO: 120之CDR1、SEQ ID NO: 121之CDR2及SEQ ID NO: 122之CDR3。
70. 如技術方案34至69中任一項之融合蛋白，其中該sdAb進一步包含以下抗體之一或多個FR序列：如表9中所闡述之抗MSLN-1、抗MSLN-2、抗MSLN-3、抗MSLN-4、抗MSLN-5、抗MSLN-6、抗MSLN-7、抗MSLN-8、抗MSLN-9、抗MSLN-10、抗MSLN-11、抗MSLN-12、抗MSLN-13、抗MSLN-14、抗MSLN-15、抗MSLN-16、抗MSLN-17、抗MSLN-18、抗MSLN-19、抗MSLN-20、抗MSLN-21、抗MSLN-22、抗MSLN-23、抗MSLN-24、抗MSLN-25、抗MSLN-26、抗MSLN-27、抗MSLN-28、抗MSLN-29、抗MSLN-30、抗MSLN-31、抗MSLN-32、抗MSLN-33或抗MSLN-34。
71. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 123之胺基酸序列。
72. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 124之胺基酸序列。
73. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 125之胺基酸序列。
74. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 126之胺基酸序列。
75. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列。
76. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列。
77. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列。
78. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列。
79. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 131之胺基酸序列。
80. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列。
81. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 133之胺基酸序列。
82. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 134之胺基酸序列。
83. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 135之胺基酸序列。
84. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 136之胺基酸序列。
85. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 137之胺基酸序列。
86. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列。
87. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 139之胺基酸序列。
88. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 140之胺基酸序列。
89. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 141之胺基酸序列。
90. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 142之胺基酸序列。
91. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 143之胺基酸序列。
92. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 144之胺基酸序列。
93. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列。
94. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列。
95. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列。
96. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列。
97. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 149之胺基酸序列。
98. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 150之胺基酸序列。
99. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 151之胺基酸序列。
100. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列。
101. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列。
102. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列。
103. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 155之胺基酸序列。
104. 如技術方案34之融合蛋白，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 156之胺基酸序列。
105. 如技術方案34至69中任一項之融合蛋白，其中該sdAb進一步包含如表11中所闡述之一或多個人類化FR序列。
106. 如技術方案105之融合蛋白，其中該sdAb以1-100 nM之間的KD
結合至MSLN。
107. 如技術方案105之融合蛋白，其中該sdAb以1-80 nM之間的KD
結合至MSLN。
108. 如技術方案105之融合蛋白，其中該sdAb以1-70 nM之間的KD
結合至MSLN。
109. 如技術方案105之融合蛋白，其中該sdAb以1-60 nM之間的KD
結合至MSLN。
110. 如技術方案105之融合蛋白，其中該sdAb以1-50 nM之間的KD
結合至MSLN。
111. 如技術方案1之融合蛋白，其中該結合分子包含兩個各自結合至癌細胞上表現之抗原的抗體或其抗原結合片段，其中癌細胞視情況為實體腫瘤癌細胞，且其中兩個抗體或其抗原結合片段係由第三連接子連接。
112. 如技術方案111之融合蛋白，其中兩個抗體或其抗原結合片段為兩個sdAb。
113. 如技術方案112之融合蛋白，其中兩個sdAb為VHH單域抗體。
114. 如技術方案112之融合蛋白，其中兩個sdAb結合至MSLN之兩個不同抗原決定基。
115. 如技術方案114之融合蛋白，其中一個抗原決定基在MSLN之N端上且另一抗原決定基在MSLN之C端上。
116. 如技術方案112至115中任一項之融合蛋白，其中各sdAb以0.1-100 nM之間的KD
結合至MSLN。
117. 如技術方案112至115中任一項之融合蛋白，其中各sdAb以1-100 nM之間的KD
結合至MSLN。
118. 如技術方案112至115中任一項之融合蛋白，其中各sdAb以1-80 nM之間的KD
結合至MSLN。
119. 如技術方案112至115中任一項之融合蛋白，其中各sdAb以1-70 nM之間的KD
結合至MSLN。
120. 如技術方案112至115中任一項之融合蛋白，其中各sdAb以1-60 nM之間的KD
結合至MSLN。
121. 如技術方案112至115中任一項之融合蛋白，其中各sdAb以1-50 nM之間的KD
結合至MSLN。
122. 如技術方案1至121中任一項之融合蛋白，其中第一連接子及第二連接子各自獨立地選自由以下組成之群：SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 71、SEQ ID NO: 72、SEQ ID NO: 73及SEQ ID NO: 74。
123. 如技術方案121之融合蛋白，其中第三連接子選自由以下組成之群：SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 69及SEQ ID NO: 70。
124. 如技術方案1之融合蛋白，其中第一連接子連接至IL-21或其變異體之C端。
125. 如技術方案1之融合蛋白，其中第一連接子在IL-21或其變異體之胺基酸123至132內之胺基酸處連接至IL-21或其變異體。
126. 如技術方案1之融合蛋白，其中第一連接子在IL-21或其變異體之C端之最後10個胺基酸中之一者處連接至IL-21或其變異體。
127. 如技術方案1或4之融合蛋白，其中第一連接子連接至IL-21或其變異體之L123。
128. 如技術方案1之融合蛋白，其中第一連接子在Q1至D4處連接至IL-21或其變異體之N端。
129. 一種醫藥組合物，其包含如技術方案1至128中任一項之融合蛋白及醫藥學上可接受之賦形劑。
130. 一種治療癌症之方法，其包含向個體投與治療有效量之如技術方案1至128中任一項之融合蛋白。
131. 如技術方案130之方法，其中該癌症為實體腫瘤癌症。
132. 如技術方案131之方法，其中該個體為人類個體。
133. 一種聚核苷酸，其包含編碼如技術方案1至128中任一項之融合蛋白的核苷酸序列。
134. 一種載體，其包含如技術方案133之聚核苷酸。
135. 一種細胞，其包含如技術方案133之聚核苷酸。
136. 一種細胞，其包含如技術方案134之載體。
137. 一種製造融合蛋白之方法，其包含培養如技術方案135或136之細胞以表現融合蛋白。
138. 一種結合至間皮素(MSLN)之單域抗體，其包含以下結構：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，其中(i) CDR1包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 87、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 93、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 99、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 117及SEQ ID NO: 120；(ii) CDR2包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 85、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 91、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 97、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 109、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 118及SEQ ID NO: 121；及(iii) CDR3包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 83、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 89、SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 101、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 113、SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122。
139. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 12，CDR2為SEQ ID NO: 13，且CDR3為SEQ ID NO: 14。
140. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 15，CDR2為SEQ ID NO: 16，且CDR3為SEQ ID NO: 17。
141. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 18，CDR2為SEQ ID NO: 19，且CDR3為SEQ ID NO: 20。
142. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 21，CDR2為SEQ ID NO: 22，且CDR3為SEQ ID NO: 23。
143. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 24，CDR2為SEQ ID NO: 25，且CDR3為SEQ ID NO: 26。
144. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 27，CDR2為SEQ ID NO: 28，且CDR3為SEQ ID NO: 29。
145. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 30，CDR2為SEQ ID NO: 31，且CDR3為SEQ ID NO: 32。
146. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 33，CDR2為SEQ ID NO: 34，且CDR3為SEQ ID NO: 35。
147. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 36，CDR2為SEQ ID NO: 37，且CDR3為SEQ ID NO: 38。
148. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 39，CDR2為SEQ ID NO: 40，且CDR3為SEQ ID NO: 41。
149. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 42，CDR2為SEQ ID NO: 43，且CDR3為SEQ ID NO: 44。
150. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 45，CDR2為SEQ ID NO: 46，且CDR3為SEQ ID NO: 47。
151. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 48，CDR2為SEQ ID NO: 49，且CDR3為SEQ ID NO: 50。
152. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 51，CDR2為SEQ ID NO: 52，且CDR3為SEQ ID NO: 53。
153. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 54，CDR2為SEQ ID NO: 55，且CDR3為SEQ ID NO: 56。
154. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 57，CDR2為SEQ ID NO: 58，且CDR3為SEQ ID NO: 59。
155. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 60，CDR2為SEQ ID NO: 61，且CDR3為SEQ ID NO: 62。
156. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 63，CDR2為SEQ ID NO: 64，且CDR3為SEQ ID NO: 65。
157. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 75，CDR2為SEQ ID NO: 76，且CDR3為SEQ ID NO: 77。
158. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 78，CDR2為SEQ ID NO: 79，且CDR3為SEQ ID NO: 80。
159. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 81，CDR2為SEQ ID NO: 82，且CDR3為SEQ ID NO: 83。
160. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 84，CDR2為SEQ ID NO: 85，且CDR3為SEQ ID NO: 86。
161. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 87，CDR2為SEQ ID NO: 88，且CDR3為SEQ ID NO: 89。
162. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 90，CDR2為SEQ ID NO: 91，且CDR3為SEQ ID NO: 92。
163. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 93，CDR2為SEQ ID NO: 94，且CDR3為SEQ ID NO: 95。
164. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 96，CDR2為SEQ ID NO: 97，且CDR3為SEQ ID NO: 98。
165. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 99，CDR2為SEQ ID NO: 100，且CDR3為SEQ ID NO: 101。
166. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 102，CDR2為SEQ ID NO: 103，且CDR3為SEQ ID NO: 104。
167. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 105，CDR2為SEQ ID NO: 106，且CDR3為SEQ ID NO: 107。
168. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 108，CDR2為SEQ ID NO: 109，且CDR3為SEQ ID NO: 110。
169. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 111，CDR2為SEQ ID NO: 112，且CDR3為SEQ ID NO: 113。
170. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 114，CDR2為SEQ ID NO: 115，且CDR3為SEQ ID NO: 116。
171. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 117，CDR2為SEQ ID NO: 118，且CDR3為SEQ ID NO: 119。
172. 如技術方案138之單域抗體，其中CDR1為SEQ ID NO: 120，CDR2為SEQ ID NO: 121，且CDR3為SEQ ID NO: 122。
173. 如技術方案138至172中任一項之單域抗體，其中該sdAb進一步包含以下抗體之一或多個FR序列：如表9中所闡述之抗MSLN-1、抗MSLN-2、抗MSLN-3、抗MSLN-4、抗MSLN-5、抗MSLN-6、抗MSLN-7、抗MSLN-8、抗MSLN-9、抗MSLN-10、抗MSLN-11、抗MSLN-12、抗MSLN-13、抗MSLN-14、抗MSLN-15、抗MSLN-16、抗MSLN-17、抗MSLN-18、抗MSLN-19、抗MSLN-20、抗MSLN-21、抗MSLN-22、抗MSLN-23、抗MSLN-24、抗MSLN-25、抗MSLN-26、抗MSLN-27、抗MSLN-28、抗MSLN-29、抗MSLN-30、抗MSLN-31、抗MSLN-32、抗MSLN-33或抗MSLN-34。
174. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 123之胺基酸序列。
175. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 124之胺基酸序列。
176. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 125之胺基酸序列。
177. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 126之胺基酸序列。
178. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列。
179. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列。
180. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列。
181. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列。
182. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 131之胺基酸序列。
183. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列。
184. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 133之胺基酸序列。
185. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 134之胺基酸序列。
186. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 135之胺基酸序列。
187. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 136之胺基酸序列。
188. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 137之胺基酸序列。
189. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 138之胺基酸序列。
190. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 139之胺基酸序列。
191. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 140之胺基酸序列。
192. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 141之胺基酸序列。
193. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 142之胺基酸序列。
194. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 143之胺基酸序列。
195. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 144之胺基酸序列。
196. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列。
197. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列。
198. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列。
199. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列。
200. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 149之胺基酸序列。
201. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 150之胺基酸序列。
202. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 151之胺基酸序列。
203. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 152之胺基酸序列。
204. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 153之胺基酸序列。
205. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 154之胺基酸序列。
206. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 155之胺基酸序列。
207. 如技術方案138之單域抗體，其中該sdAb包含SEQ ID NO: 156之胺基酸序列。
208. 如技術方案138至172中任一項之單域抗體，其中該sdAb進一步包含如表11中所闡述之一或多個人類化FR序列。
實例
以下為用於研究之各種方法及材料的描述，且經提出以向一般熟習此項技術者提供如何製造及使用本發明之完全揭示及描述，且不意欲限制本發明人視為其發明內容之內容的範疇，且其亦不意欲表示以下實驗已進行且為所有可進行之實驗。應理解，以現在時態書寫之例示性描述未必進行，而是可進行該等描述以產生與本發明之教示相關之資料及其類似物。已努力確保關於所用數目(例如量、百分比等)的精確性，但應考慮存在一些實驗誤差及偏差。
實例1：例示性IL-21融合蛋白
此實例說明本文提供之某些例示性IL-21融合蛋白。應理解，此實例中所述之例示性IL-21融合蛋白不意欲表示本發明之完整範疇。
IL-21-(HSA結合分子)-(抗MSLN)在本文中用於展示某些例示性IL-融合蛋白，其包含1) IL-21或其變異體，例如截短IL-21；2)結合至人類血清白蛋白(HSA)之肽(例如ABD或sdAb)；3)一或多種靶向腫瘤抗原間皮素(MSLN)之抗體或其抗原結合片段；4)由4-20個胺基酸構成之第一連接子(L1)，其連接IL-21之C端及αHSA之N端；及5)由4-20個胺基酸構成之第二連接子(L2)，其連接αHSA之C端及抗MSLN之N端。
IL-21可具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列(參見下表6)。或者，IL-21可為截短人類IL-21，其具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列(參見下表6)。表 6 
下表7列出HSA結合肽之一些選擇(SEQ ID NO: 3至SEQ ID NO: 11)。表 7 
在此等例示性融合蛋白中，融合蛋白之抗MSLN部分可選自實例2中所述之34種抗MSLN sdAb及其人類化型式中之任一者。
L1及L2連接子各自可獨立地選自下表8中所列之連接子，以及表5中所列之可裂解連接子。表 8 
在某些例示性IL-21融合蛋白中，抗MSLN功能模組包含兩個靶向間皮素之不同域的單域抗體(sdAb)，及兩個由第三連接子(L3)連接之sdAb，該第三連接子由4-20個胺基酸構成。L3連接子可選自上表8中之SEQ ID NO: 66至70。
本發明實例之例示性IL-21融合蛋白之設計涵蓋上文所述之IL-21融合蛋白之各種組分的所有可能組合。
實例2：產生抗MSLN單域抗體
兩種不同抗原肽用於對駱馬免疫接種以產生抗MSLN單域抗體(VHH抗體)。第一抗原肽(MSLN抗原1)表示細胞膜錨定MSLN。第二抗原肽(MSLN抗原2)表示細胞膜錨定MSLN之C端。此兩種肽之序列為如下：
MSLN抗原1 (MSLN裂解形式)
；
MSLN抗原2 (MSLN C端)
。
在免疫接種之後，外周單核細胞(PBMC)經分離以用於RNA提取。用編碼抗體基因之mRNA/cDNA構築VHH抗體噬菌體呈現文庫。構築之噬菌體呈現文庫係經由與抗原之多輪親和力結合進行篩選。陽性純系係經由ELISA鑑別。陽性純系之抗體基因經定序且選殖至UCOE載體(EMD Millipore)中用於CHO細胞表現。
下表9列出根據上文所述之方法產生之34種例示性新穎抗MSLN單域(VHH)抗體(亦即，抗MSLN-1至抗MSLN-34)。此34種例示性新穎VHH抗體之CDR序列在下表10中列出。在34種抗體中，31種抗體(抗MSLN-1至抗MSLN-31)係使用第一MSLN抗原(MSLN抗原1)產生，且3種抗體(抗MSLN-32至抗MSLN-34)係使用第二MSLN抗原(MSLN抗原2)產生。表 9 
表 10 
上述sdAb中之任一者可用於本文提供之IL-21融合蛋白中。
實例3：產生人類化抗MSLN單域抗體
以上34種sdAb之各駱馬序列係針對IMGT資料庫進行blast處理，以鑑別最匹配之人類IGHV3生殖系。當多個生殖系具有類似同源性時，FR2之位置52 (根據IGMT編號系統)處之胺基酸之類似性用於確定採用何種生殖系作為人類化骨架。來自所選生殖系之FR1及FR3接著以「人類化」FR1及FR3形式採用。對於FR2，大部分人類序列，除了位置42及52，其中保留各別駱馬序列。
下表11顯示34種抗體中之每一者的例示性人類FR區序列。表 11 
此等人類化抗MSLN sdAb中之任一者可用於本文提供之抗間皮素構築體中之任一者(諸如IL-21融合蛋白中之任一者)。表12列出例示性抗MSLN構築體之序列。表 12. 
實例4：IL-21融合蛋白之分子選殖 寡核苷酸合成
例示性寡核苷酸合成程序描述於下文。編碼人類IL-21全長(SEQ ID NO: 1)、人類IL-21截短(SEQ ID NO: 2)、G148-ABD-wt (SEQ ID NO: 3)、低免疫原性G148-ABD變異體(SEQ ID NO: 4-11)、靶向HSA之人類化sdAb及靶向MSLN之人類化sdAb (例如表12中所列之彼等)之cDNA序列係藉由使用GeneArt Gene Synthesis (ThermoFisher Scientific)或gBlocks Gene Fragments (Integrated DNA Technologies)之基因合成獲得，其中將NgoMIV限制酶位點及Kozak序列添加至5'且將SalI限制酶位點添加至3'。此等基因之密碼子使用針對表現於中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中最佳化。合成寡核苷酸係藉由NgoMIV/SalI消化-連接方法插入至UCOE表現載體CET1019-AS-Puro (CS221284，Millipore Sigma)中。
構築IL-21融合蛋白表現載體
IL-21融合蛋白表現載體之構築例示於本文中。IL-21之C端係經由肽連接子(L1)融合至白蛋白結合域或白蛋白結合sdAb (αHSA)之N端，且白蛋白結合域或白蛋白結合sdAb之C端係經由第二肽連接子(L2)與間皮素結合sdAb (抗MSLN)融合。編碼此等多肽之DNA序列可藉由Gibson Assembly (Synthetic Genomics)或類似活體外重組方法無縫組裝在一起。為了產生用於Gibson Assembly反應的與其相鄰片段具有重疊序列之DNA片段，在引物之5'端引入編碼L1或L2連接肽之20-40個鹼基對(bp)之重疊序列或CET1019-AS-Puro載體序列(參見圖2，步驟1)。在擴增之後，藉由使用PureLink凝膠提取套組(ThermoFisher Scientific)之凝膠提取來純化及收穫PCR產物。所需基因-連接子-載體組合之純化DNA片段係藉由Gibson Assembly Master Mix (New England BioLabs)或NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix (New England BioLabs)根據製造商之方案混合及組裝在一起(參見圖2，步驟2)。
類似地，圖3說明當白蛋白結合分子為ABD時，本文提供之例示性IL-21融合蛋白之構築。
6His標籤可視情況融合至抗MSLN sdAb之C端。在此類狀況下，編碼6His之DNA序列係用作重疊序列以設計用於擴增抗MSLN之反向引物及擴增CET1019 AS-puro載體主鏈之正向引物。
在組裝反應之後，2 µl組裝產物用於根據製造商之方案轉型NEB 5-α勝任大腸桿菌細胞(New England BioLabs)。收集來自Amp選擇盤之菌落以使用PureLink Quick Plasmid Miniprep套組(ThermoFisher Scientific)及DNA定序驗證(ELIM Biopharmaceuticals)進行後續小規模製備。
實例5：IL-21融合蛋白之表現及純化
編碼IL-21融合蛋白之DNA序列暫時表現於ExpiCHO細胞中。簡言之，在第-1天，在125 ml無擋板燒瓶中將CHO細胞以3-4×10e6個細胞/毫升接種於25 ml瞬時轉染培養基(BalanCD® Transfectory™ CHO，Irvine Scientific，#91147)中，加上4 mM麩醯胺酸。在第0天，將22.5 µg質體DNA與112.5 µg PEI在1.5 ml瞬時轉染培養基中混合且在室溫下培育7分鐘。接著將混合物緩慢添加至細胞。在第1天向細胞餵飼1) 0.5 mM丙戊酸(50 μl至25ml)，2) 10% post-TF補充物(Irvine Scientific #91148)，3) 1.5 ml葡萄糖儲備液(200 g/L)，及4)具有50 g/L TC Yeastolyte之5% IS Feed。在第8天收集CHO細胞用於親和管柱純化。
實例6：活體外NK細胞增殖分析
人類NK細胞係使用陰性選擇套組-Kit II分離(所有珠粒獲自Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach, Germany)。純化係手動或用AutoMACS (Miltenyi)進行。細胞之純度始終受螢光活化細胞分選(FACS)控制且大於90%。經分離NK細胞用本文提供之融合蛋白(包括上文實例1中所述之彼等)處理。使用FACS分析用CD69信號監測NK細胞之增殖。
實例7：活體外細胞毒性分析
將人類肺癌細胞A549與新近分離之人類PBMC混合且與0、5、10及50 ng/mL之純化IL-21融合蛋白一起培育。在使用MMP可裂解連接子之情況下，藉由添加MMP9以活化IL-21來建立平行實驗組。混合培養物培育至多72小時且MTS方法用於測定研究中裂解目標細胞之百分比。
實例8：活體內功效研究
在第0天向Neu小鼠植入A549癌細胞。在腫瘤生長至大致50-100 mm3
之後，小鼠經隨機分組且每隔一天用本文提供之IL-融合蛋白及對照(例如含同型對照抗體之PBS)治療。預期當相比於IL-21組合研究(用IL-21及第二藥劑組合治療的研究)時，本文提供之IL-21融合蛋白在相同劑量下顯示較好功效或在低得多的劑量下達成類似功效。
腫瘤尺寸及體重係在給藥之前的基線處量測。在治療後每週量測腫瘤尺寸及體重3次，持續兩週。收集末梢血樣品用於PK/PD分析。
實例9：抗MSLN抗體與人類或猴間皮素(MSLN)之結合
Octet RED96 (ForteBio)用於表徵相互作用。簡言之，將抗MSLN-hgG1 Fc融合蛋白裝載至蛋白A生物感測器上且浸入100 nM、50 nM或25 nM濃度之人類或猴MSLN中。原始實驗資料係藉由全局擬合分析以測定KD
。相比於原始駱馬抗體(圖4A)，人類化抗MSLN抗體(亦即，人類化R3C7、人類化R2G12及人類化R3D5)保留與人類及猴MSLN兩者之結合親和力(圖4B)。
實例10：抗MSLN抗體與細胞表面之結合
已知表現間皮素之四種癌細胞株NCI-H226、OVCAR3、NCI-N87及AsPC-1係與抗MSLN抗體R2G12、R3C7或對照抗體MORAb-009一起在4C下培育20分鐘。在洗滌之後，細胞與Alexa Fluor 488結合之二級抗體(抗人類IgG，Life Technologies)一起在4C下培育20分鐘。細胞經洗滌且接著藉由流式細胞測量術定量細胞之螢光強度。如圖5中所示地針對不同濃度之抗體標繪螢光強度值。抗間皮素抗體全部以類似效力結合至細胞表面間皮素。
實例11：抗間皮素抗體之細胞毒性A 部分 .
將NCI-H226癌細胞株維持於含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。在第0天，將5,000個NCI-H226細胞/孔塗鋪於96孔平底盤中之培養基中。在第1天，NK細胞使用RosetteSep NK分離套組(Stemcell Technologies)自人類白血球層分離，且將100,000個NK細胞/孔連同指定治療劑添加至癌細胞。將盤在37C、5% CO2
下培育48小時，且細胞接著用4%三聚甲醛固定且用Sytox Orange進行細胞核染色。剩餘癌細胞之數目係藉由使用Cytation 1 (Biotek)計數各孔中剩餘之癌細胞核之數目來計算。較低細胞計數指示較好NK介導之細胞殺滅。(MORAb-009-參考抗間皮素抗體；R2G12、R3C7、R3D5，如實例2中所示之抗間皮素抗體)。
如圖5A中所示，相比於對照抗體MORAb-009，R2G12、R3C7及R3D5產生較好抗體依賴性細胞毒性。此外，相比於3 ng/ml劑量之R3D5，R3C7及R2G12顯示較好ADCC。
B部分.
將NCI-H226、OVCAR3、NCI-N87及AsPC-1細胞維持於含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。在第0天，將10,000個細胞/孔塗鋪於96孔平底盤中之培養基中。在第1天，NK細胞使用RosetteSep NK分離套組(Stemcell Technologies)自人類白血球層分離，且將100,000個NK細胞/孔連同指定治療劑添加至癌細胞。將盤在37C、5% CO2
下培育48小時，且細胞接著用4%三聚甲醛固定且用Sytox Orange進行細胞核染色。剩餘癌細胞之數目係藉由使用Cytation 1 (Biotek)計數各孔中剩餘之癌細胞核之數目來計算。較低細胞計數指示較好NK介導之細胞殺滅。
如圖6B-6E中所示，R2G12及R3C7引發針對所有四種癌細胞株之抗體依賴性細胞毒性。
將NCI-N87癌細胞株維持於含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。在第0天，將10,000個NCI-N87細胞/孔塗鋪於96孔平底盤中之培養基中。在第1天，NK細胞使用RosetteSep NK分離套組(Stemcell Technologies)自人類白血球層分離，且將100,000個NK細胞/孔連同指定治療劑添加至癌細胞。將盤在37C、5% CO2
下培育48小時，且細胞接著用4%三聚甲醛固定且用Sytox Orange進行細胞核染色。剩餘癌細胞之數目係藉由使用Cytation 1 (Biotek)計數各孔中剩餘之癌細胞核之數目來計算。較低細胞計數指示較好NK介導之細胞殺滅。(MORAb-009-參考抗間皮素抗體；P303 (亦即，R3C7)，如實例2中所論述之抗間皮素抗體；P303F (亦即，R3C7F)，具有減少之岩藻糖的R303)
如圖7中所示，相比於參考抗體MORAb-009，P303及P303F產生較好ADCC活性。此外，相比於P303，具有減少之岩藻糖的P303F產生較好ADCC。
D部分.
將NCI-N87及NCI-H226人類癌細胞株維持於含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。將經穩定轉染以表現人類間皮素蛋白質之CT26/MSLN小鼠癌細胞株維持於含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。在第0天，將10,000個NCI-N87、5,000個NCI-H226及5,000個CT26/MSLN細胞/孔塗鋪於96孔平底盤中之培養基中。在第1天，NK細胞使用RosetteSep NK分離套組(Stemcell Technologies)自人類白血球層分離，且將100,000個NK細胞/孔連同指定治療劑添加至癌細胞。將盤在37C、5% CO2
下培育48小時，且細胞接著用4%三聚甲醛固定且用Sytox Orange進行細胞核染色。剩餘癌細胞之數目係藉由使用Cytation 1 (Biotek)計數各孔中剩餘之癌細胞核之數目來計算。較低細胞計數指示較好NK介導之細胞殺滅。(P303 (亦即，R3C7)及P197 (亦即，R2G12)-如實例2中所論述之抗間皮素抗體；P303F (亦即，R3C7F)及P197F (亦即，R2G12F)-分別為具有減少之岩藻糖的R303及P197)。
如圖8A-8C中所示，藉由在抗體產生期間抑制岩藻糖基化而減少抗體岩藻糖含量增強針對抗體R3C7及R2G12之抗間皮素抗體ADCC活性。特定言之，P303F (R3C7F)在使用CT26/MSLN細胞株時展現最佳ADCC活性。
實例12：用於治療腫瘤之抗間皮素抗體 A部分.
將NCI-N87細胞培養及維持於補充有10% FBS+glutamax+青黴素/鏈黴素之RPMI培養基中。細胞經胰蛋白酶處理、用培養基洗滌且計數。細胞接著用PBS洗滌，且使用18標準尺寸的針將3×106
個細胞(於100 μl PBS中)皮下注射至經麻醉SCID小鼠(Taconic)中。儲備研究藥物(MORAb-009、P303F、P303、P197F及P197)在給藥當天於PBS中稀釋至適當濃度，且每週兩次地向動物腹膜內(IP)投配含5 mg/kg之各研究藥物的100 μl PBS，持續總共5個劑量。使用數位卡尺每週兩次地收集腫瘤量測值(長度(L)及寬度(W))，且計算腫瘤體積(L×W×W)/2。
如圖9A中所示，相對於PBS對照組，所有抗間皮素抗體降低SCID小鼠模型中之腫瘤生長。P303F (R3C7F)治療產生比MORAb-009、P197、P197F及P303更好的腫瘤生長抑制。
B部分.
將NCI-N87細胞培養及維持於補充有10% FBS+glutamax+青黴素/鏈黴素之RPMI培養基中。細胞經胰蛋白酶處理、用培養基洗滌且計數。細胞接著用PBS洗滌，且使用23標準尺寸的針將3×106
個細胞(於100 μl PBS中)皮下注射至經麻醉NSG小鼠(Jackson)中。在6天之後，將10×106
個人類PBMC在100 μL PBS中注射至每隻小鼠之尾部靜脈中。儲備研究藥物P197在給藥當天於PBS中稀釋至適當濃度，且每週兩次地向動物腹膜內投配5 mg/kg (100 μl)研究藥物，持續總共5個劑量。使用數位卡尺每週兩次地收集腫瘤量測值(長度(L)及寬度(W))，且計算腫瘤體積(L×W×W)/2。
如圖9B中所示，抗間皮素抗體P197 (R2G12)降低具有人類化免疫系統之NSG小鼠中之腫瘤生長。
C部分.
將經人類間皮素轉染之CT26小鼠細胞(CT26/MSLN)培養及維持於補充有10% FBS+glutamax+青黴素/鏈黴素之RPMI培養基中。細胞經胰蛋白酶處理、用培養基洗滌且計數。細胞接著用PBS洗滌，且使用23標準尺寸的針將1×106
個細胞(於100 μl PBS中)皮下注射至經麻醉BALB/C小鼠中。儲備研究藥物在給藥當天於PBS中稀釋至適當濃度，且每週兩次地向動物腹膜內投配5 mg/kg (100 μl)研究藥物，持續總共5個劑量。使用數位卡尺每週兩次地收集腫瘤量測值(長度(L)及寬度(W))，且計算腫瘤體積(L×W×W)/2。
如圖9C中所示，具有減少之岩藻糖基化P303F (R3C7F)之抗間皮素抗體相對於同基因型CT26小鼠模型中之PBS對照降低腫瘤生長。
實例13.抗HSA抗體
白蛋白為人類血清中最豐富之蛋白質且其具有三週之半衰期。血清白蛋白之長半衰期在很大程度上歸因於新生兒Fc受體(FcRn)之保護。血清白蛋白可經由稱為流體相胞飲之過程經體細胞吸收。胞飲小泡隨後與內體區室融合，其中pH在4.5-6.5範圍內。若小泡中之蛋白質自其受體釋放，則其將針對溶酶體降解進一步分選。血清白蛋白與FcRn之間的結合僅在酸性pH (＜6.5)下出現，允許FcRn自核內體解救白蛋白且將其再循環回血清中(Grevys等人, 2018)。因此，作為白蛋白依賴性半衰期延長部分，抗HSA抗體需要保留其在中性及酸性pH兩者下之結合親和力。
例示性抗HSA抗體(P367)與pH 7.4及pH 5.5下之人類及猴血清白蛋白相互作用。結合係使用Octet RED96 (ForteBio)來量測且KD
係藉由使用Octet Data Analysis HT軟體之全局擬合測定。將P367-hgG1 Fc融合蛋白裝載至蛋白A生物感測器上且浸入pH 7.4 (左圖)或pH 5.5 (右圖)下之人類或猴血清白蛋白中。表13顯示P367於pH 5.5及pH 7.4下之計算KD。P367顯示與pH 5.5下之人類血清白蛋白之結合親和力的增加。
表13 
Octet RED96 (ForteBio)用於表徵抗HSA抗體AWT-P367或其人類化型式AWT-P494與人類、猴或小鼠白蛋白之間的相互作用。簡言之，AWT-P367或AWT-P494係裝載至AHC生物感測器上且浸入200 nM濃度之人類、猴或小鼠血清白蛋白中。原始實驗資料係藉由全局擬合分析以測定KD
。如圖10A-10B中所示，人類化抗HSA抗體AWT-P494之結合親和力與其原始純系AWT-P367類似。
例示性抗白蛋白抗體之序列列於下表14中。表 14 
實例14：用於抑制癌細胞之抗間皮素抗體、細胞激素或細胞激素融合蛋白
將NCI-N87癌細胞株維持於含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。在第0天，將10,000個NCI-N87細胞/孔塗鋪於96孔平底盤中之培養基中。在第1天，NK細胞使用RosetteSep NK分離套組(Stemcell Technologies)自人類白血球層分離，且將100,000個NK細胞/孔連同指定治療劑添加至癌細胞。將盤在37C、5% CO2
下培育48小時，且細胞接著用4%三聚甲醛固定且用Sytox Orange進行細胞核染色。剩餘癌細胞之數目係藉由使用Cytation 1 (Biotek)計數各孔中剩餘之癌細胞核之數目來計算。較低細胞計數指示較好NK介導之細胞殺滅。(P303-R3C7抗MSLN抗體、具有減少之岩藻糖基化之P303F-R3C7抗間皮素抗體、P394-人類IL-21-抗HSA、P390-小鼠IL-21-抗HSA、P431/435-人類IL-21-抗HSA-IgG1-R3C7、P479-抗HSA-人類-IL-15 RA Sushi/IL-15、P480-抗HSA-人類-IL-15 RA Sushi/IL-15、rhIL-21-重組人類IL-21、rhIL-15-重組人類IL-15)
如圖11中所示，相比於單獨的P303，rhIL-21、mIL-21 (P390)及hIL-21 (P394)抗HSA融合蛋白在與抗MSLN抗體P303 (R3C7)組合時在類似程度上增強NK細胞ADCC活性。此外，相比於單獨的P303，rhIL-15及hIL-15/IL-15RA抗HSA融合蛋白(P479及P480)在與抗MSLN抗體P303 (R3C7)組合時在類似程度上增強NK細胞ADCC活性。細胞激素-抗HSA融合蛋白相比於等效重組細胞激素維持完全ADCC活性。
實例15：用於抑制癌細胞之單獨或與賀癌平組合之抗間皮素抗體
將NCI-N87癌細胞株維持於含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。在第0天，將10,000個NCI-N87細胞/孔塗鋪於96孔平底盤中之培養基中。在第1天，NK細胞使用RosetteSep NK分離套組(Stemcell Technologies)自人類白血球層分離，且將100,000個NK細胞/孔連同指定治療劑添加至癌細胞。將盤在37C、5% CO2
下培育48小時，且細胞接著用4%三聚甲醛固定且用Sytox Orange進行細胞核染色。剩餘癌細胞之數目係藉由使用Cytation 1 (Biotek)計數各孔中剩餘之癌細胞核之數目來計算。較低細胞計數指示較好NK介導之細胞殺滅。(P303F-具有減少之岩藻糖基化的抗間皮素抗體，P380-人類IL-33-抗HSA，P394-人類IL-21-抗HSA)
如圖12中所示，P303F (R3C7抗間皮素抗體)比賀癌平在NK細胞ADCC中更強力且P303F及賀癌平之組合與單獨的P303F類似。添加P394 (人類IL-21-抗HSA)至P303F及賀癌平產生顯著改良之ADCC功能及改良之效能。
實例16：用於抑制癌細胞之單獨或與細胞激素融合蛋白組合之抗間皮素抗體
將NCI-N87癌細胞株維持於含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。在第0天，將10,000個NCI-N87細胞/孔塗鋪於96孔平底盤中之培養基中。在第1天，NK細胞使用RosetteSep NK分離套組(Stemcell Technologies)自人類白血球層分離，且將100,000個NK細胞/孔連同指定治療劑添加至癌細胞。將盤在37C、5% CO2
下培育24小時，且細胞接著用4%三聚甲醛固定且用Sytox Orange進行細胞核染色。剩餘癌細胞之數目係藉由使用Cytation 1 (Biotek)計數各孔中剩餘之癌細胞核之數目來計算。較低細胞計數指示較好NK介導之細胞殺滅。(P303F-具有減少之岩藻糖基化的抗間皮素IgG1抗體R3C7，P480-抗HSA-人類-IL-15 RA Sushi/IL-15，rhIL-21-重組人類IL-21，rhIL-15-重組人類IL-15)
如圖13中所示，相比於P303F及P303F與rhIL-21，rhIL-15及IL-15-抗HSA (P480)在與抗MSLN抗體P303F組合時更好地增強NK細胞ADCC活性。P480 (IL-15/IL-15R sushi-抗HSA)以相比於rhIL-15類似的效能及量值增強NK介導之ADCC，表明在抗體融合蛋白中保留完全IL-15活性。
實例17：用於抑制癌細胞之細胞激素融合蛋白
將NCI-N87癌細胞株維持於含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。在第0天，將10,000個NCI-N87細胞/孔塗鋪於96孔平底盤中之培養基中。在第1天，NK細胞使用RosetteSep NK分離套組(Stemcell Technologies)自人類白血球層分離，且將100,000個NK細胞/孔連同指定治療劑添加至癌細胞。將盤在37C、5% CO2下培育24小時，且細胞接著用4%三聚甲醛固定且用Sytox Orange進行細胞核染色。剩餘癌細胞之數目係藉由使用Cytation 1 (Biotek)計數各孔中剩餘之癌細胞核之數目來計算。較低細胞計數指示較好NK介導之細胞殺滅。(P303F-具有減少之岩藻糖基化的抗間皮素IgG1抗體R3C7，P431/P435-人類IL-21-抗HSA-IgG1-R3C7，P545/P435-人類IL-21-抗HSA-可裂解連接子-IgG1-R3CF7，rhIL-21-重組人類IL-21)
如圖14中所示，相比於P303F加上rhIL-21，IL-21-抗HSA-IgG1-R3C7F融合蛋白具有類似NK細胞ADCC活性，除了不具有減少之岩藻糖基化的P431/P435 (人類IL-21-抗HSA-IgG1-R3C7)。
實例18：用於抑制癌細胞之IL-15-抗HSA融合蛋白
將NCI-N87癌細胞株維持於含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。在第0天，將10,000個NCI-N87細胞/孔塗鋪於96孔平底盤中之培養基中。在第1天，NK細胞使用RosetteSep NK分離套組(Stemcell Technologies)自人類白血球層分離，且將100,000個NK細胞/孔連同指定治療劑添加至癌細胞。將盤在37C、5% CO2下培育48小時，且細胞接著用4%三聚甲醛固定且用Sytox Orange進行細胞核染色。剩餘癌細胞之數目係藉由使用Cytation 1 (Biotek)計數各孔中剩餘之癌細胞核之數目來計算。較低細胞計數指示較好NK介導之細胞殺滅。(P303-抗間皮素抗體R3C7，P480-抗HSA-人類-IL-15 RA Sushi/IL-15，P597-抗HSA-人類-IL-15 RA Sushi-肽連接子-IL-15，rhIL-15-重組人類IL-15)
如圖15中所示，在IL-15R sushi與IL-15之間具有肽連接子之抗HSA融合蛋白P597相比於P480 (一種在IL-15R sushi與IL-15之間無連接子之抗HSA融合蛋白)改良ADCC活性。P597之ADCC效能與rhIL-15類似，表明在融合蛋白中保留完全IL-15活性。
實例19：用於抑制癌細胞之IL-21融合蛋白
將NCI-N87及H226癌細胞株維持於含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。在第0天，將10,000個NCI-N87細胞/孔、5000個H226細胞/孔塗鋪於96孔平底盤中之培養基中。在第1天，NK細胞使用RosetteSep NK分離套組(Stemcell Technologies)自人類白血球層分離，且將100,000個NK細胞/孔連同指定治療劑添加至癌細胞。將盤在37C、5% CO2下培育48小時，且細胞接著用4%三聚甲醛固定且用Sytox Orange進行細胞核染色。剩餘癌細胞之數目係藉由使用Cytation 1 (Biotek)計數各孔中剩餘之癌細胞核之數目來計算。較低細胞計數指示較好NK介導之細胞殺滅。(P129-抗間皮素抗體R2G12，P126-人類IL-21-R2G12-IgG1融合物，P107-人類IL-21-IgG1融合物，P325-人類IL-21-R2D2融合物，P286/288-人類IL-21-R3C7-IgG1-R2G12融合物)。
如圖16中所示，較低濃度之IL-21-Fc融合蛋白(P107、P126、P288/286)在與抗MSLN抗體P129 (亦即，R2G12)組合時增強NK細胞ADCC活性。然而，在較高濃度(＞100nM)下，IL-21-Fc融合蛋白(P107、P126、P288/286)在與抗MSLN抗體P129 (R2G12)組合時抑制NK細胞ADCC活性。未針對無Fc域之IL-21或IL-21融合蛋白(P325)觀測到此抑制。
實例20：用於抑制癌細胞之IL-21-抗HSA融合蛋白與抗間皮素抗體之組合
將NCI-N87癌細胞維持於含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。在第0天，將10,000個NCI-N87細胞/孔塗鋪於96孔平底盤中之培養基中。在第1天，NK細胞使用RosetteSep NK分離套組(Stemcell Technologies)自人類白血球層分離，且將100,000個NK細胞/孔連同指定治療劑添加至癌細胞。將盤在37C、5% CO2
下培育48小時，且細胞接著用4%三聚甲醛固定且用Sytox Orange進行細胞核染色。剩餘癌細胞之數目係藉由使用Cytation 1 (Biotek)計數各孔中剩餘之癌細胞核之數目來計算。較低細胞計數指示較好NK介導之細胞殺滅。(P197-抗間皮素抗體R2G12，P390-小鼠IL-21-抗HSA，P394-人類IL-21-抗HSA)
如圖17中所示，小鼠及人類IL-21-抗HSA融合蛋白(P390及P394)均在與抗MSLN抗體P197 (R2G12)組合時有力地增強NK細胞ADCC活性。
實例21：用於治療癌症之抗間皮素抗體及/或IL-21-抗HSA融合蛋白
將NCI-N87細胞培養及維持於補充有10% FBS+glutamax+青黴素/鏈黴素之RPMI培養基中。細胞經胰蛋白酶處理、用培養基洗滌且計數。細胞接著用PBS洗滌，且使用23標準尺寸的針將3×106
個細胞(於100 μl PBS中)皮下注射至經麻醉NSG小鼠(Jackson)中。在6天之後，將10×106
個人類PBMC在100 μL PBS中注射至每隻小鼠之尾部靜脈中。儲備研究藥物在給藥當天於PBS中稀釋至適當濃度，且每週兩次地向動物腹膜內投配100 μg P303F (抗間皮素抗體)、25 μg P394 (人類IL-21-抗HSA)或100 μg P303F與25 μg或5 μg P394之組合，持續總共5個劑量。使用數位卡尺每週兩次地收集腫瘤量測值(長度(L)及寬度(W))，且計算腫瘤體積(L×W×W)/2。
如圖18中所示，P303F相對於對照降低腫瘤生長。相對於PBS對照或單獨的P303F，所有接受單獨或與P303F組合之P394之小鼠的腫瘤生長顯著降低。
實例22：用於治療癌症之抗間皮素抗體及/或IL-21-抗HSA融合蛋白
將NCI-N87細胞培養及維持於補充有10% FBS+glutamax+青黴素/鏈黴素之RPMI培養基中。細胞經胰蛋白酶處理、用培養基洗滌且計數。細胞接著用PBS洗滌，且使用18標準尺寸的針將3×106
個細胞(於100 μl PBS中)皮下注射至經麻醉SCID小鼠(Taconic)中。儲備研究藥物在給藥當天於PBS中稀釋至適當濃度，且每週兩次地向動物腹膜內投配含100 μg P303F (抗間皮素抗體)或P303F與25 μg P390 (小鼠IL-21-抗HSA)、5 μg P390或2.5 μg重組小鼠IL-21 (等效於5 μg P390劑量之莫耳濃度)之組合之100 μl PBS，持續總共5個劑量。使用數位卡尺每週兩次地收集腫瘤量測值(長度(L)及寬度(W))，且計算腫瘤體積(L×W×W)/2。
如圖19中所示，相比於PBS對照、P303F單一療法及P303F與rmIL-21之組合，P303F及25 μg或5 μg P390之組合產生顯著降低之腫瘤生長。P303F與2.5 μg rmIL-21顯示與P303F類似之腫瘤生長，表明重組IL-21在此劑量下無效。相比於P303F與2.5 μg rmIL-21，P303F與5 μg P390之組合顯示顯著降低之腫瘤生長，突出半衰期延長IL-21相比於重組細胞激素改良之功效。
圖1描繪本文提供之例示性IL-21融合蛋白。
圖2描繪例示性IL-21融合蛋白表現載體之組裝，其中白蛋白結合分子為抗HSA抗體。
圖3描繪例示性IL-21融合蛋白表現載體之組裝，其中白蛋白結合分子為結合至HSA之ABD。
圖4A-4B描繪抗MSLN抗體與人類或猴間皮素(MSLN)之結合。
圖5A-5D描繪抗MSLN抗體-IgG1 Fc融合蛋白與癌細胞株NCI-H226、OVCAR3、NCI-N87及AsPC-1之細胞表面的劑量依賴性結合。
圖6A描繪在用單獨或與抗間皮素抗體MORAb-009、R2G12、R3C7或R3D5組合之NK細胞處理之後剩餘的腫瘤細胞數目。圖6B (NCI-H226)、6C (OVCAR3)、6D (NCI-N87)及6E (AsPC-1)描繪抗MSLN抗體R2G12及R3C7針對四種人類癌細胞株之NK細胞介導之抗體依賴性細胞毒性劑量-反應曲線。
圖7描繪在用單獨或與抗間皮素抗體P303、P303F或MORAb-009組合之NK細胞處理之後剩餘的腫瘤細胞數目。
圖8A-8C描繪在NK細胞與抗間皮素抗體P303、P303F、P197及P197F之組合之48小時處理之後，N87細胞(圖8A)、H226細胞(圖8B)及CT26/MSLN細胞(圖8C)之剩餘細胞數目。
圖9A描繪在用抗間皮素抗體MORAb、P303F、P303、P197F或P197治療後，具有N87腫瘤之SCID小鼠動物模型中之腫瘤體積的變化。圖9B描繪在用抗間皮素抗體P197治療後，具有N87腫瘤之NSG小鼠動物模型中之腫瘤體積的變化。圖9C描繪在用抗間皮素抗體P303F治療後，具有CT26/MSLN腫瘤之BALB/c小鼠動物模型中之腫瘤體積的變化。
圖10A描繪抗HSA抗體AWT-P367 (亦即，P367)及其人類化抗AWT-P494 (亦即，P494)與人類、猴或小鼠白蛋白之結合。圖10B描繪AWT-P367或AWT-494與人類、猴或小鼠白蛋白之結合的KD
。
圖11描繪在用單獨或與如圖中所示之研究藥物組合之NK細胞處理後，N87細胞之剩餘細胞數目。
圖12描繪在用單獨或與a)單獨的賀癌平、b)單獨的P303F、c)賀癌平及P303F或d)賀癌平、P303F及IL-21-抗HSA融合蛋白P394組合之NK細胞處理後，N87細胞之剩餘細胞數目。
圖13描繪在用與a) P303F、b) P303F及重組人類IL-21 (亦即，rhIL-21)、c) P303F及P480或d) P303F及重組人類IL-15 (亦即，rhIL-15)組合之NK細胞處理後，N87細胞之剩餘細胞數目。
圖14描繪在用與a) P303F、b) P303F及重組人類IL-21 (亦即，rhIL-21)、c) P431/P435或d) P545/P435組合之NK細胞處理後，N87細胞之剩餘細胞數目。
圖15描繪在用與a) P480、b) P597或c) rIL-15組合之NK細胞處理後，N87細胞之剩餘細胞數目(上圖)及三種藥物之IC50 (下圖)。
圖16描繪在用與a)抗間皮素抗體P129 (亦即，R2G12)及P126 (亦即，人類IL-21-R2G12-IgG1融合物)、b) P129及IL-21、c) P129及P107 (人類IL-21-IgG1融合物)、d) P129及P325 (人類IL-21-R2D2融合物)或e) P129及P286/288 (人類IL-21-R3C7-IgG1-R2G12)組合之NK細胞處理後，H226細胞之剩餘細胞數目。
圖17描繪在用與a) P197及P390；或b) P197及P394組合之NK細胞處理後，N87細胞之剩餘細胞數目。
圖18描繪在用a) 25 µg P394、b) 100 µg P303F、c) 100 µg P303F及25 µg P394或d) 100 µg P303F及5 µg P394治療後，具有N87腫瘤之NSG小鼠動物模型中之腫瘤體積的變化。
圖19描繪在用單獨或與a) 25 µg P390、b) 5 µg P390或c) 2.5 µg rmIL-21組合之100 µg P303F治療後，具有N87腫瘤之SCID小鼠動物模型中之腫瘤體積的變化。
Claims (45)
- 一種經分離抗間皮素(抗MSLN)構築體，其包含有包含抗MSLN重鏈可變區(VH)之抗體部分，該VH包含： a) 重鏈互補決定區(HC-CDR)1，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 87、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 93、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 99、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 117及SEQ ID NO: 120； b) HC-CDR2，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 85、SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 91、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 97、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 109、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 118及SEQ ID NO: 121；及 c) HC-CDR3，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 83、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 89、SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 101、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 113、SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 119及SEQ ID NO: 122。
- 一種經分離抗間皮素(抗MSLN)構築體，其包含有包含抗MSLN重鏈可變區(VH)之抗體部分，該VH包含： 1) 包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 2) 包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 3) 包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 4) 包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 5) 包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 6) 包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 7) 包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 8) 包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 9) 包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 10) 包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 11) 包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 12) 包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 13) 包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 14) 包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 15) 包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 16) 包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 17) 包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 18) 包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 19) 包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 20) 包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 21) 包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 22) 包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 23) 包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 24) 包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 25) 包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 26) 包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 97之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 98之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 27) 包含SEQ ID NO: 99之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 100之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 101之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 28) 包含SEQ ID NO: 102之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 103之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 104之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 29) 包含SEQ ID NO: 105之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 106之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 107之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 30) 包含SEQ ID NO: 108之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 109之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 31) 包含SEQ ID NO: 111之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 32) 包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 115之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 116之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體； 33) 包含SEQ ID NO: 117之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 118之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 119之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體；或 34) 包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列之HC-CDR1、包含SEQ ID NO: 121之胺基酸序列之HC-CDR2及包含SEQ ID NO: 122之胺基酸序列之HC-CDR3，或包含至多約5個胺基酸取代之其變異體。
- 如請求項1或2之抗MSLN構築體，其中該HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3分別包含以下中之任一者之CDR1、CDR2及CDR3的胺基酸序列：如表10中所闡述之抗MSLN-1、抗MSLN-2、抗MSLN-3、抗MSLN-4、抗MSLN-5、抗MSLN-6、抗MSLN-7、抗MSLN-8、抗MSLN-9、抗MSLN-10、抗MSLN-11、抗MSLN-12、抗MSLN-13、抗MSLN-14、抗MSLN-15、抗MSLN-16、抗MSLN-17、抗MSLN-18、抗MSLN-19、抗MSLN-20、抗MSLN-21、抗MSLN-22、抗MSLN-23、抗MSLN-24、抗MSLN-25、抗MSLN-26、抗MSLN-27、抗MSLN-28、抗MSLN-29、抗MSLN-30、抗MSLN-31、抗MSLN-32、抗MSLN-33及抗MSLN-34。
- 一種經分離抗間皮素(抗MSLN)構築體，其包含有包含抗MSLN重鏈可變區(VH)之抗體部分，該VH包含： HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3，其分別在具有SEQ ID NO: 123-156及285-301中之任一者中所闡述之序列的VH 鏈區內包含CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列。
- 如請求項1至4中任一項之抗MSLN構築體，其中該抗體部分為單域(sdAb)部分。
- 如請求項1至5中任一項之抗MSLN構築體，其中該抗體部分包含SEQ ID NO: 123-156及285-301中之任一者之胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 123-156及285-301中之任一者具有至少約80%序列一致性之其變異體。
- 如請求項6之抗MSLN構築體，其中該抗體部分包含VH H域，該VH H域包含SEQ ID NO: 123-156及285-301中之任一者之胺基酸序列，或在該VH H域中包含至多約3個胺基酸取代之其變異體。
- 如請求項5至7中任一項之抗MSLN構築體，其中結合至間皮素之該sdAb部分為駱駝、嵌合、人類、部分人類化或完全人類化的。
- 如請求項1至8中任一項之抗MSLN構築體，其中該構築體為進一步包含半衰期延長域之融合蛋白。
- 如請求項9之抗MSLN構築體，其中該半衰期延長域包含Fc域。
- 如請求項10之抗MSLN構築體，其中該Fc域包含人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
- 如請求項11之抗MSLN構築體，其中該Fc域包含人類IgG1。
- 如請求項11或12之抗MSLN構築體，其中該Fc域具有減少之岩藻糖基化。
- 如請求項10至13中任一項之抗MSLN構築體，其中該融合蛋白包含融合至IgG1 Fc域之抗MSLN VHH域，該IgG1 Fc域包含SEQ ID NO: 302-306中之任一者之胺基酸序列。
- 如請求項10至14中任一項之抗MSLN構築體，其中該半衰期延長域融合至該抗MSLN抗體部分之N端。
- 如請求項10至14中任一項之抗MSLN構築體，其中該半衰期延長域融合至該抗MSLN抗體部分之C端。
- 如請求項10至16中任一項之抗MSLN構築體，其中該構築體包含該抗MSLN抗體部分與該半衰期延長域之間的第一連接子。
- 如請求項17之抗MSLN構築體，其中該第一連接子包含SEQ ID NO: 66-74、267-282及307-324中之任一者之胺基酸序列。
- 如請求項17或18之抗MSLN構築體，其中該連接子為不可裂解的。
- 如請求項17或18之抗MSLN構築體，其中該連接子為可裂解的。
- 如請求項1至20中任一項之抗MSLN構築體，其中該抗MSLN構築體為進一步包含細胞激素之融合蛋白。
- 如請求項21之抗MSLN構築體，其中該細胞激素為IL-21、IL-15、結合至IL-15Rα之IL-15或IL-33。
- 如請求項21或22之抗MSLN構築體，其中該細胞激素係融合至該抗MSLN抗體部分或該半衰期延長域之N端。
- 如請求項21或22之抗MSLN構築體，其中該細胞激素係融合至該抗MSLN抗體部分或該半衰期延長域之C端。
- 如請求項1至24中任一項之抗MSLN構築體，其中該構築體包含SEQ ID NO: 123-156及285-331中之任一者之胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 123-156及285-331中之任一者具有至少約80%序列一致性之其變異體。
- 一種聚核苷酸，其編碼如請求項1至25中任一項之抗MSLN構築體。
- 一種套組，其包含： a)如請求項1至25中任一項之抗MSLN構築體，或如請求項25之聚核苷酸，及 b)說明書。
- 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至24中任一項之抗MSLN構築體及醫藥學上可接受之載劑。
- 一種治療個體之疾病或病況之方法，其包含向該個體投與如請求項1至24中任一項之抗MSLN構築體或如請求項28之醫藥組合物。
- 如請求項29之方法，其中該方法進一步包含向該個體投與第二藥劑。
- 如請求項30之方法，其中該第二藥劑包含細胞激素。
- 一種治療個體之疾病或病況之方法，其包含向該個體投與a)抗間皮素藥劑；b)包含細胞激素之第二藥劑。
- 如請求項31或32之方法，其中該細胞激素選自由以下組成之群：IL-21、IL-15或結合至IL-15Rα之IL-15，及IL-33。
- 如請求項31至33中任一項之方法，其中該細胞激素為進一步包含融合至該細胞激素之半衰期延長域的細胞激素融合蛋白。
- 如請求項29至34中任一項之方法，其進一步包含向該個體投與抗Her2藥劑。
- 如請求項29至35中任一項之方法，其中該疾病或病況為癌症。
- 如請求項36之方法，其中該癌症為間皮素陽性癌症。
- 如請求項36或37之方法，其中該癌症為實體癌症。
- 如請求項36至38中任一項之方法，其中該癌症係選自由以下組成之群：胃癌、肺癌、卵巢癌、食道癌、胰臟癌、子宮頸癌、間皮瘤及乳癌。
- 如請求項39之方法，其中該癌症為胃癌或肺癌。
- 如請求項31至40中任一項之方法，其中該細胞激素為IL-21。
- 如請求項41之方法，其中IL-21包含在SEQ ID NO: 1之C端處缺少1-11個胺基酸之IL-21變異體。
- 如請求項34至42中任一項之方法，其中該抗Her2藥劑為賀癌平(Herceptin)。
- 如請求項29至43中任一項之方法，其中該抗間皮素藥劑包含有包含抗MSLN重鏈可變區(VH)之抗間皮素抗體部分，該VH包含： HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3，其分別在具有SEQ ID NO: 123-156及285-301中之任一者中所闡述之序列的VH 鏈區內包含CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列。
- 如請求項29至44中任一項之方法，其中該個體為人類。
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