TW202000650A

TW202000650A - ４-甲基二氫嘧啶酮化合物及其醫藥用途

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Publication number: TW202000650A
Application number: TW108106799A
Authority: TW
Inventors: 坂井孝行; 池之上拓
Original assignee: 日商日本煙草產業股份有限公司
Priority date: 2018-02-28
Filing date: 2019-02-27
Publication date: 2020-01-01
Also published as: US20190300488A1; EP3760616A1; JP2019151623A; AU2019228915A1; CA3087994A1; CO2020011860A2; CN111741947B; JP7282546B2; CL2020002187A1; WO2019167981A1; PH12020551341A1; CN111741947A; SG11202007117RA; PE20210550A1; AR114270A1; RU2020131402A; MX2020008982A; EP3760616A4; IL276323A; US20210363110A1

Abstract

本發明係有關具有類視黃醇相關的孤兒受體γ(ROR γ)拮抗活性之4-甲基二氫嘧啶酮化合物或其製藥上容許之鹽、含有該化合物之醫藥組成物及其醫藥用途。本發明提供式(1)或式(2)之化合物或其製藥上容許之鹽、含有該化合物之醫藥組成物及其醫藥用途。

Description

4-甲基二氫嘧啶酮化合物及其醫藥用途

本發明係有關具有ROR γ拮抗活性之4-甲基二氫嘧啶酮化合物或其製藥上容許之鹽、含有該化合物之醫藥組成物及該等之醫藥用途。

RORγ(類視色素相關的孤兒受體γ(Retinoid-related Orphan Receptor gamma))於Th17細胞之分化及活化為重要之核內受體。又，作為ROR γ之剪接變體已知有ROR γ t(非專利文獻1)。ROR γ與ROR γ t僅在N末端不同，於配體結合領域及DNA結合領域為共同的。有ROR γ即使於Th17細胞以外之組織亦表現之報告(非專利文獻1)。

藉由ROR γ的抑制，可抑制Th17細胞之分化及活化。又，從Th17細胞產生之IL-17參予種種趨化激素、細胞激素、基質金屬蛋白酶、其他炎症介質之誘導或嗜中性球之遷移，抑制IL-17即可抑制該等之反應(非專利文獻2及3)。已知Th17細胞與自體免疫疾病(風濕性關節炎、乾癬、炎症性腸疾病(克隆氏症(Crohn's disease)、潰瘍性大腸炎等)、多發性硬化症、全身性紅斑狼瘡(SLE)、貝賽特氏症、類肉瘤病、原田氏症、僵直性脊椎炎、葡萄膜炎、風濕性多發性肌痛症、I型糖尿病、移植物對抗宿主疾病、圓形脫毛症、白斑等)、過敏性疾病、乾眼症、纖維症(肺纖維症、原發性膽汁性肝硬化等)及癌(惡性黑色素瘤、前列腺癌等)有關。

脂肪組織中之ROR γ係關於脂肪生成的調控，藉由ROR γ的抑制，可改善胰島素抗性(非專利文獻4)。已知脂肪組織與代謝性疾病(肝脂肪症等)有關。

又，已知IL-17或Th17細胞與缺血、心肌症、高血壓及牙周病有關。

例如，關於風濕性關節炎，有投予抗IL-17抗體改善膠原蛋白誘發關節炎中之腫脹或關節破壞之報告(非專利文獻5)。又，於使用IL-17缺損小鼠之試驗，有改善膠原蛋白誘發關節炎中之腫脹或關節破壞之報告(非專利文獻6)。

關於乾癬，於臨床試驗有藉由投予抗IL-17抗體，於乾癬之有效性之報告(非專利文獻7)。抗IL-17抗體已有以乾癬用途上市(非專利文獻8)。

關於炎症性腸疾病(克隆氏症、潰瘍性大腸炎等)，於藉由移入T細胞誘發之大腸炎模型，於藉由移入源自ROR γ KO小鼠之T細胞，於黏膜中未看到IL-17上昇，大腸炎發症被抑制(非專利文獻9)。又，對於將Th17細胞活化之IL-23之抗體(抗IL-23抗體)，於臨床試驗有於克隆氏症顯示有效性之報告(非專利文獻20)。

關於多發性硬化症，於ROR γ KO小鼠，為多發性硬化症動物模型之小鼠實驗性自體免疫性腦脊髓炎模型之病態受到抑制(非專利文獻10)。又，抗IL-17A抗體於臨床試驗，有於復發緩解型多發性硬化症改善MRI所見之報告(非專利文獻21)。

關於全身性紅斑狼瘡，於RORγt KO小鼠，藉由投予抗IL-17抗體，確認於腎小球腎炎動物模型之GBM腎炎之發症抑制(非專利文獻11)。藉由投予抗IL-17抗體，亦有可抑制於SLE合併腎炎之發症之可能性(非專利文獻12)。

關於僵直性脊椎炎，有藉由投予抗IL-17抗體，於僵直性脊椎炎之有效性之報告(非專利文獻13)。

關於葡萄膜炎，有藉由投予抗IL-17抗體，於將貝賽特氏症候群、類肉瘤病及原田氏症作為疾病背景之葡萄膜炎之有效性之報告(非專利文獻7)。

關於風濕性多發性肌痛症，對於抗IL-17抗體之臨床試驗正在進行中。

關於I型糖尿病，於I型糖尿病模型之NOD小鼠，藉由投予抗IL-17抗體，確認病態進行的抑制(非專利文獻14)。又，對於抗IL-17A抗體之臨床試驗正在進行中(非專利文獻22)。

關於移植物對抗宿主疾病，於小鼠移植模型有藉由移入源自ROR γ KO小鼠之細胞，改善生存率或宿主之排斥反應之報告(非專利文獻19)。

關於圓形脫毛症，對於抗IL-17A抗體之臨床試驗正在進行中(非專利文獻25)。

關於白斑，確認病患血清中之IL-17上昇或於病態組織中之Th17細胞上昇(非專利文獻39)。

關於過敏性疾病(氣喘等)，於OVA(卵白蛋白)致敏模型，於ROR γ KO小鼠確認嗜酸性肺炎症減弱、CD4陽性淋巴球減少、Th2細胞激素/趨化激素水平減少，過敏反應被抑制(非專利文獻15)。於抗IL-17A抗體，對於異位性皮膚炎之臨床試驗正在進行中(非專利文獻23)。又，於抗IL-23抗體，對於氣喘之臨床試驗正在進行中(非專利文獻24)。

關於乾眼症，Th17細胞於乾眼症之動物模型中增加，對於抗IL-17抗體，於將乾眼症病患作為對象之臨床試驗正在進行中(非專利文獻16)。

關於纖維症，於為肺纖維症動物模型之博來黴素(Bleomycin)肺纖維症模型，投予抗IL-17抗體，確認肺中之炎症或纖維化的抑制及動物之生存延長(非專利文獻17)。

關於原發性膽汁性肝硬化，有Th17細胞於病患之病變部位增加之報告，抗IL-23抗體之臨床試驗正在進行中(非專利文獻18)。

關於惡性黑色素瘤，抗IL-17抗體之臨床試驗正在進行中(非專利文獻26及27)。

關於前列腺癌，於Ptem-null小鼠確認藉由抗IL-17抗體，微小侵襲性前列腺癌之形成的減少(非專利文獻33)。

關於胰島素抗性，於ROR γ KO小鼠，藉由高脂肪飲食負荷誘導之胰島素抗性受到抑制(非專利文獻4)。

關於肝脂肪症，於酒精性肝疾病模型，於病理組織上確認藉由抗IL-17抗體改善脂肪症(非專利文獻34)。

關於非酒精性脂肪肝疾病，於藉由高脂肪飲食之非酒精性脂肪肝疾病模型確認藉由抗IL-17抗體改善肝機能、減弱肝脂質蓄積、抑制庫佛氏(Kupffer)細胞活化及降低炎症性細胞激素之水平(非專利文獻35)。

關於缺血及心肌症，有IL-17A藉由調節心肌細胞凋亡及嗜中性球浸潤，有助於心肌缺血/再灌流障礙之報告。藉由抗IL-17A抗體或IL-17A基因剔除，看到梗塞尺寸縮小及改善心機能，確認改善缺血/再灌流損傷(非專利文獻36)。

關於高血壓，有藉由投予血管收縮素II血壓上昇，藉由對於IL-17A或IL-17RA之抗體而降低之報告(非專利文獻37)。

關於牙周病，於實驗性牙周病模型，確認Th17細胞或IL-17上昇。藉由為ROR γ拮抗劑之GSK805或抗IL-17A抗體，本模型骨量之減少受到抑制(非專利文獻38)。

從該等見解認為ROR γ拮抗劑於預防或治療自體免疫疾病、過敏性疾病、乾眼症、纖維症、癌(惡性黑色素瘤、前列腺癌等)、代謝性疾病、缺血、心肌症、高血壓及牙周病為有益。

[先前技術文獻] [非專利文獻]

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本發明係提供具有RORγ拮抗活性之4-甲基二氫嘧啶酮化合物或其製藥上容許之鹽、含有該化合物之醫藥組成物及其醫藥用途。亦即，於某一側面，本發明包含以下例示之態樣。

[項1]

一種式(1)或式(2)之化合物：

或其製藥上容許之鹽。

[項2]

如項1所述之化合物或其製藥上容許之鹽，其中，該化合物為式(1)之化合物：

[項3]

如項1所述之化合物或其製藥上容許之鹽，其中，該化合物為式(2)之化合物：

[項4]

一種醫藥組成物，係含有如項1至項3中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽及製藥上容許之載體。

[項5]

一種ROR γ拮抗劑，係含有如項1至項3中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽。

[項6]

一種選自由自體免疫疾病、過敏性疾病、乾眼症、纖維症、癌、代謝性疾病、缺血、心肌症、高血壓及牙周病構成群組之疾病的治療劑或預防劑，係含有如項1至項3中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽。

[項7]

一種拮抗ROR γ之方法，係包含對哺乳動物投予治療上有效量之如項1至項3中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽。

[項8]

一種治療或預防選自由自體免疫疾病、過敏性疾病、乾眼症、纖維症、癌、代謝性疾病、缺血、心肌症、高血壓及牙周病成之群組之疾病的方法，係包含對哺乳動物投予治療上有效量之如項1至項3中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽。

[項9]

一種項1至項3中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽的使用，用於製造ROR γ拮抗劑。

[項10]

一種項1至項3中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽的用途，用於製造選自由自體免疫疾病、過敏性疾病、乾眼症、纖維症、癌、代謝性疾病、缺血、心肌症、高血壓及牙周病構成群組之疾病之治療劑或預防劑。

[項11]

如項1至項3中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽，係使用作為RORγ之拮抗劑。

[項12]

如第1項至第3項中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽，係用於預防或治療選自由自體免疫疾病、過敏性疾病、乾眼症、纖維症、癌、代謝性疾病、缺血、心肌症、高血壓及牙周病構成之群組之疾病。

[項13]

一種商業包裝，係包含第4項所述之醫藥組成物，及記載有可將該醫藥組成物用於治療或預防選自由自體免疫疾病、過敏性疾病、乾眼症、纖維症、癌、代謝性疾病、缺血、心肌症、高血壓及牙周病構成之群組之疾病之關於該醫藥組成物之記載物。

[項14]

一種套組，係包含第4項所述之醫藥組成物，及記載有可將該醫藥組成物用於治療或預防選自由自體免疫疾病、過敏性疾病、乾眼症、纖維症、癌、代謝性疾病、缺血、心肌症、高血壓及牙周病構成之群組之疾病之關於該醫藥組成物之記載物。

[項15]

一種式(1)化合物之結晶形，係於使用CuK α放射測定之衍射角(2 θ)顯示具有由7.4±0.2°、9.9±0.2°、10.5±0.2°、11.4±0.2°、11.6±0.2°、13.4±0.2°、14.2±0.2°、17.4±0.2°、18.3±0.2°、18.7±0.2°及19.4±0.2°構成群組選擇之任意3個以上之峰之粉末X線衍射模型：

[項16]

式(1)化合物之1水合物：

[項17]

一種式(1)化合物之1水合物結晶形，係於使用CuK α放射測定之衍射角(2 θ)顯示具有由4.2±0.2°、9.7±0.2°、13.7±0.2°、14.0±0.2°、15.2±0.2°、 15.4±0.2°、16.9±0.2°、18.8±0.2°、20.5±0.2°、21.9±0.2°及22.4±0.2°構成群組選擇任意3個以上之峰之粉末X線衍射模型

第1圖顯示結晶形A之粉末X線衍射模型。縱軸表示衍射強度(cps：counts per second)、橫軸表示衍射角2 θ(°)。

第2圖顯示結晶形A之差示掃描熱量測定(DSC)曲線。縱軸表示熱量(Heat Flow：Watt per gram)、橫軸表示溫度(℃)。

第3圖顯示結晶形B之粉末X線衍射模型。縱軸表示衍射強度(cps：counts per second)、橫軸表示衍射角2 θ(°)。

第4圖顯示結晶形B之DSC曲線。縱軸表示熱量(Heat Flow：Watt per gram)、橫軸表示溫度(℃)。

第5圖顯示結晶形C之粉末X線衍射模型。縱軸表示衍射強度(cps：counts per second)、橫軸表示衍射角2 θ(°)。

第6圖顯示結晶形C之DSC曲線。縱軸表示熱量(Heat Flow：Watt per gram)、橫軸表示溫度(℃)。

第7圖顯示結晶形D之粉末X線衍射模型。縱軸表示衍射強度(cps：counts per second)、橫軸表示衍射角2 θ(°)。

第8圖顯示結晶形D之TG-DTA曲線。縱軸上側表示重量(gram)、縱軸下側表示溫度(℃)、橫軸表示溫度(℃)。

第9圖顯示結晶形D之DSC曲線。縱軸表示熱量(Heat Flow：Watt per gram)、橫軸表示溫度(℃)。

第10圖顯示結晶形E之粉末X線衍射模型。縱軸表示衍射強度(cps：counts per second)、橫軸表示衍射角2 θ(°)。

第11圖顯示結晶形E之TG-DTA曲線。縱軸上側表示重量(gram)、縱軸下側表示溫度(℃)、橫軸表示溫度(℃)。

第12圖顯示結晶形E之DSC曲線。縱軸表示熱量(Heat Flow：Watt per gram)、橫軸表示溫度(℃)。

本說明書中之用語之定義為如下所述。

「式(1)之化合物」及「式(2)之化合物」各個亦稱為「化合物(1)」及「化合物(2)」。「化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽」係指化合物(1)或化合物(2)、或化合物(1)或化合物(2)之製藥上容許之鹽，包含化合物(1)之任意製藥上容許之鹽及化合物(2)之任意製藥上容許之鹽之任一者。

「製藥上容許之鹽」只要是不會伴隨於該技術領域所知之過度毒性之鹽，可為任意之鹽。具體而言，可列舉與無機酸之鹽、與有機酸之鹽、與無機鹼之鹽、與有機鹼之鹽等。種種形態之製藥上容許之鹽於該技術領域為周知，例如記載於以下之參考文獻者：(a) Berge et al., J. Pharm. Sci., 66, p1-19 (1977); (b) Stahl et al., "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002); (c) Paulekuhn et al., J. Med. Chem., 50, p6665-6672 (2007)。

依照公知之方法，將化合物(1)或化合物(2)與無機酸、有機酸、無機鹼或有機鹼進行反應，可各別獲得其製藥上容許之鹽。

與無機酸之鹽可列舉與氟化氫酸、鹽酸、溴化氫酸、碘化氫酸、硝酸、磷酸或硫酸之鹽。較佳可列舉與鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸或溴化氫酸之鹽。

與有機酸之鹽可列舉與乙酸、己二酸、褐藻酸、4-胺基水楊酸、脫水亞甲基檸檬酸、苯甲酸、苯磺酸、樟腦酸、樟腦-10-磺酸、碳酸、檸檬酸、乙二胺四乙酸、乙烷-1,2-二磺酸、十二烷基硫酸、乙烷磺酸、富馬酸、葡萄庚酸、葡糖酸、葡糖醛酸、葡萄庚酸、乙醇醯對胺苯胂酸、羥基萘甲酸、2-羥基-1-乙烷磺酸、乳酸、乳糖酸、蘋果酸、馬來酸、扁桃酸、甲烷磺酸、甲基硫酸、甲基硝酸、亞甲基雙(水楊酸)、半乳糖二酸、萘-2-磺酸、2-萘甲酸、1,5-萘二磺酸、油酸、草酸、撲酸、泛酸、果膠酸、苦味酸、丙酸、聚半乳糖醛酸、水楊酸、硬脂酸、琥珀酸、丹寧酸、酒石酸、茶氯酸、硫氰酸、三氟乙酸、p-甲苯磺酸、十一烷酸、天門冬胺酸或麩胺酸之鹽。較佳可列舉與草酸、馬來酸、檸檬酸、富馬酸、乳酸、蘋果酸、琥珀酸、酒石酸、乙酸、三氟乙酸、苯甲酸、葡糖醛酸、油酸、撲酸、甲烷磺酸、苯磺酸、p-甲苯磺酸或2-羥基-1-乙烷磺酸之鹽。

與無機鹼之鹽可列舉與鋰、鈉、鉀、鎂、鈣、鋇、鋁、鋅、鉍或銨之鹽。較佳可列舉與鈉、鉀、鈣、鎂或鋅之鹽。

與有機鹼之鹽可列舉與檳榔鹼、甜菜鹼、膽鹼、克立咪唑(clemizole)、乙二胺、N-甲基還原葡糖胺、N-苯甲基苯乙胺、三(羥基甲基)甲胺、精胺酸或離胺酸之鹽。較佳可列舉與三(羥基甲基)甲胺、N-甲基還原葡糖胺或離胺酸之鹽。

化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽有作為溶劑合物存在之情況。

「溶劑合物」為於化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽經配位溶劑之分子者，亦包含水合物。溶劑合物較佳為製藥上容許之溶劑合物，可列舉化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽之水合物、乙醇合物、二甲亞碸合物等。

具體而言可列舉化合物(1)或化合物(2)之半水合物、1水合物、2水合物或1乙醇合物、或化合物(1)或化合物(2)鹽酸鹽之1水合物或2鹽酸鹽之2/3乙醇合物等。較佳可列舉化合物(1)之1水合物。該等溶劑化物可依照公知之方法獲得。

化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽亦可以同位素(²H、³H、¹⁴C、³⁵S等)標識。

例如，化合物(1)或化合物(2)中之任意氫包含輕氫¹H(H)、氘²H(D)及氚³H(T)。

化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽，較佳為實質上為純粹之化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽。更佳為具有80%以上純度之化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽。

化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽之較佳結晶形，可列舉於使用CuK α放射測定之衍射角(2 θ)顯示具有7.4±0.2°、9.9±0.2°、10.5±0.2°、11.4±0.2°、11.6±0.2°、13.4±0.2°、14.2±0.2°、17.4±0.2°、18.3±0.2°、18.7±0.2°或19.4±0.2°之至少任意3個(例如至少3、4或5個)峰之粉末X線衍射模型之化合物(1)之結晶形。更佳之化合物(1)之結晶形為顯示於7.4±0.2°、9.9±0.2°及13.4±0.2°之2 θ具有峰之粉末X線衍射模型。更佳之化合物(1)之結晶形為顯示於7.4±0.2°、9.9±0.2°、13.4±0.2°、18.7±0.2°及19.4±0.2°之2 θ具有峰之粉末X線衍射模型。

化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽之其他較佳結晶形，可列舉於使用CuK α放射測定之衍射角(2 θ)顯示具有4.2±0.2°、9.7±0.2°、13.7±0.2°、14.0±0.2°、15.2±0.2°、15.4±0.2°、16.9±0.2°、18.8±0.2°、20.5±0.2°、21.9±0.2°或22.4±0.2°之至少任意3個(例如至少3、4或5個)峰之粉末X線衍射模型之化合物(1)1水合物之結晶形。更佳之化合物(1)之1水合物之結晶形為顯示於4.2±0.2°、9.7±0.2°及16.9±0.2°之2 θ具有峰之粉末X線衍射模型。最佳之化合物(1)之1水合物之結晶形為顯示於4.2±0.2°、9.7±0.2°、13.7±0.2°、15.2±0.2°及16.9±0.2°之2 θ具有峰之粉末X線衍射模型。

粉末X線衍射模型之衍射角(2 θ)之誤差範圍較佳為±0.2°，更佳為±0.1°，最佳為±0.05°。

於本說明書中，醫藥組成物可依照於醫藥製劑技術領域為公知之方法，將化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽與至少1種以上製藥上容許之載體等以適當、適量混合等製造之。該醫藥組成物中化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽之含量(於本說明書中亦稱為「治療上有效量」)依劑型、投予量等而異，例如為組成物全體之0.1至100重量%。

化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽之劑型，可列舉錠劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、口含劑、漿劑、乳劑、懸濁劑等經口劑及外用劑、栓劑、注射劑、點眼劑、經鼻劑、經肺劑等非經口劑。

「製藥上容許之載體」可列舉作為製劑材料常用之各種有機或無機載體物質，於固形製劑可列舉賦形劑、崩解劑、結合劑、流化劑、潤滑劑等，於液狀製劑可列舉溶劑、溶解助劑、懸濁化劑、等張化劑、緩衝劑、無痛化劑等，於半固形製劑可列舉基劑、乳化劑、濕潤劑、安定劑、安定化劑、分散劑、可塑劑、pH調節劑、吸收促進劑、凝膠化劑、防腐劑、填充劑、溶解劑、溶解助劑、懸濁化劑等。再者，必要時亦可使用保存劑、抗氧化劑、著色劑、甜味劑等添加物。

「賦形劑」可列舉乳糖、白糖、D-甘露醇、D-山梨糖醇、玉米澱粉、糊精、微結晶纖維素、結晶纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基澱粉鈉、低取代度羥丙基纖維素、阿拉伯樹膠等。

「崩解劑」可列舉羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、羧甲基澱粉鈉、交聯羧甲基纖維素鈉、交聯聚維酮(crospovidone)、低取代度羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、結晶纖維素等。

「結合劑」可列舉羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚維酮、結晶纖維素、白糖、糊精、澱粉、明膠、羧甲基纖維素鈉、阿拉伯樹膠等。

「流化劑」可列舉輕質無水矽酸、硬脂酸鎂等。

「潤滑劑」可列舉硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石粉等。

「溶劑」可列舉精製水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、芝麻油、玉米油、橄欖油等。

「溶解助劑」可列舉丙二醇、D-甘露醇、苯甲酸苯甲酯、乙醇、三乙醇胺、碳酸鈉、檸檬酸鈉等。

「懸濁化劑」可列舉氯化烷基二甲基苯甲基銨(Benzalkonium chloride)、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素、丙二醇、聚維酮、甲基纖維素、單硬脂酸甘油等。

「等張化劑」可列舉葡萄糖、D-山梨糖醇、氯化鈉、D-甘露醇等。

「緩衝劑」可列舉磷酸氫鈉、乙酸鈉、碳酸鈉、檸檬酸鈉等。

「無痛化劑」可列舉苯甲醇等。

「基劑」可列舉水、動植物油(橄欖油、玉米油、花生油、芝麻油、萞麻油等)、低級醇類(乙醇、丙醇、丙二醇、1,3-丁二醇、苯酚等)、高級脂肪酸及其酯、蠟類、高級醇、多元醇、烴類(白色凡士林、液體石蠟、石蠟等)、親水凡士林、精製羊毛脂、吸水軟膏、含水羊毛脂、親水軟膏、澱粉、普魯蘭(pullulan)、阿拉伯樹膠、黃蓍膠、明膠、葡聚糖、纖維素衍生物(甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素等)、合成高分子(羧乙烯基聚合物、聚丙烯酸鈉、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮等)、丙二醇、聚乙二醇(聚乙二醇200至600等)及該等2種以上之組合等。

「保存劑」可列舉對羥基苯甲酸乙酯、氯丁醇、苯甲醇、脫氫乙酸鈉、山梨酸等。

「抗氧化劑」可列舉亞硫酸鈉、抗壞血酸等。

「著色劑」可列舉食用色素(食用紅色2號或3號、食用黃色4號或5號等)、β-胡蘿蔔素等。

「甜味劑」可列舉糖精鈉、甘草酸二鉀、阿斯巴甜等。

於本說明書，醫藥組成物對於人類以外之哺乳動物(小鼠、大鼠、倉鼠、天竺鼠、兔子、貓、狗、豬、牛、馬、羊、猴等)及人類可經口或非經口(局部、直腸、靜脈投予、肌肉內、皮下等)投予。投予量依投予對象、疾病、症狀、劑型、投予路徑等而異，例如於成人患者經口投予時之投予量，作為有效成分之化合物(1)或化合物(2)，每1日通常為約0.01mg至約1g之範圍。該等量可以1次至分成數次投予。

包含含有化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽作為有效成分或活性劑之醫藥組成物、該醫藥組成物可用於或應用於治療及/或預防之關於該醫藥組成物之記載物之套件(投予、治療及/或預防套件等)、包裝(包裝物等)及藥劑組(及/或容器)亦有用。該等套件、包裝及藥劑組亦可具備1種以上填充有上述醫藥組成物或為了於上述醫藥組成物使用之1種以上有效成分及其他藥劑或藥物(或成分)之容器。該等套件、包裝及藥劑組之例可列舉適當之對於對象疾病之治療及/或預防之商業用套件、商業用包裝及商業用藥劑組。包含於該等套件、包裝及藥劑組之記載物為經由政府機關規定之管理醫藥或生物學製品之製造、使用或販賣指示之形態之注意書或說明書，可列舉顯示該對於投予於人類相關之製品之製造、使用或販賣之該政府機關所核准之注意書或說明書。上述套件、包裝及藥劑組亦包含經包裝之製品，又，亦可包含為了適當投予步驟(步驟)所構成之構造物，亦可包含可達成包含對象疾病之治療及/或預防之更佳醫學上之治療及/或預防所構成之構造物。

由於化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽具有拮抗ROR γ之作用，可作為ROR γ拮抗劑使用。

「具有ROR γ拮抗活性」、「具有ROR γ拮抗作用」或「拮抗ROR γ」係指拮抗ROR γ之機能(較佳為特異性拮抗)，將其活性消失或減弱，例如係指以後述之試驗例1之條件為基礎，拮抗ROR γ之機能(較佳為特異性拮抗)。

「ROR γ拮抗劑」係指拮抗ROR γ機能之物質，較佳為特異性拮抗ROR γ機能之物質。

「ROR γ」較佳為「人類ROR γ」。

由於化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽具有ROR γ拮抗作用，對於ROR γ之機能參予之疾病可期待有效性。

亦即，化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽可期待可用於由自體免疫疾病、過敏性疾病、乾眼症、纖維症、癌、代謝性疾病、缺血、心肌症、高血壓及牙周病構成之群組選擇之疾病的治療或預防。

「自體免疫疾病」為免疫系對於本身正常之細胞或組織過度反應而加以攻撃所引起症狀造成之疾病的總稱，具體而言可列舉風濕性關節炎、乾癬、炎症性腸疾病(例如克隆氏症、潰瘍性大腸炎等)、多發性硬化症、全身性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus：SLE)、貝塞特氏症候群、類肉瘤病、原田氏症、僵直性脊椎炎、葡萄膜炎、風濕性多發性肌痛症、I型糖尿病、移植物對抗宿主疾病、圓形脫毛症、白斑等。

「過敏性疾病」為源自免疫反應對於特定抗原過度發生之現象之疾病，具體而言可列舉異位性皮膚炎、過敏性鼻炎(花粉症等)、過敏性結膜炎、過敏性胃腸炎、氣喘(支氣管氣喘、小兒氣喘等)、食物過敏、藥物過敏、蕁麻疹等。

「纖維症」為纖維性結合組織增加之狀態，具體而言，可列舉肺纖維症、原發性膽汁性肝硬化等。

「癌」具體而言可列舉惡性黑色素瘤、前列腺癌等。

「代謝性疾病」為包含由於代謝轉換異常引起之疾病或作為構成病因要素之代謝異常之疾病，具體而言可列舉糖尿病(I型糖尿病、II型糖尿病等)、肝脂肪症、非酒精性脂肪肝疾病等。

於本說明書中之「治療」包含改善症狀、防止重症化、維持緩解、防止惡化及防止復發。

於本說明書中之「預防」係指抑制症狀發症。

化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽已證明具有以下之特性：(i)高的代謝安定性(參照試驗例2)；(ii)含有期待之血漿中半衰期(參照試驗例5)之有利藥物動力學曲線；(iii)對於例如CYP3A4等藥物代謝酵素之誘導能小(參照試驗例3)；(iv)期待之高溶解度(參照試驗例4)及(v)持續且/或強力之藥理作用(參照試驗例6及7)。

藉由該等特性，化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽成為特別優勢。例如，化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽：(i)由於藥理作用持續，可以低頻率或長間隔投予，對於患者之遵從性帶來良好之影響，進而有改善總合性治療結果之可能性；(ii)由於難以誘導CYP3A4等藥物代謝酵素，藉由該等酵素代謝之併用藥之代謝有可能變難，患者即使同時服用複數藥劑，本化合物更適合；及(iii)由於溶解度高，可具有良好之經口生體可用率，因此，即使於高投予量，亦顯示用量依存性之血漿中濃度上昇且/或於吸收過程之個體差異小之可能性。

除非於本說明書中揭示之一態樣與本說明書其他地方揭示之態樣有矛盾，將該等任意二種以上組合亦包含於本發明中。

以下述之實施例對化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽之製造方法加以說明。惟，化合物(1)或化合物(2)或其製藥上容許之鹽之製造方法不只限於該等製造方法。

於各步驟獲得之化合物必要時可以蒸餾、再結晶、管柱層析等公知之方法單離及/或精製，惟，根據情況，可不進行單離及/或精製，直接進入下一個步驟。

於本說明書中，室溫係指未控制溫度之狀態，作為一態樣，可列舉1℃至40℃。

[實施例]

¹H-NMR光譜以在CDCl₃或DMSO-d₆中，將四甲基矽烷作為內部標準測定，全δ值以ppm表示。又，光譜值中之記號為以下之意思。

s：單峰(singlet)

d：雙峰(doublet)

t：三峰(triplet)

q：四峰(quartet)

dd：雙雙峰(double doublet)

dq：雙四峰(double quartet)

ddd：雙雙雙峰(double double doublet)

brs：寬單峰(broad singlet)

m：多峰(multiplet)

J：偶合常數(Coupling Constant)

[實施例1]

3-{(S)-4-[4-((1R,2R)-2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-5-異丙基-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸之合成第1步驟 (S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺酸[1-(4-溴-3-氯-苯基)-乙-(E)-亞基]-醯胺

將1-(4-溴-3-氯-苯基)-乙酮(60.0g)及(S)-(-)-2-甲基-丙烷-2-亞磺酸醯胺(37.3g)於環戊基甲醚(257mL)中混合。於反應液中加入原鈦酸四乙酯(70.3g)，將反應液於100℃攪拌5小時。於室溫，於反應液中加入40w/v%乳酸銨水溶液(308mL)，以乙酸乙酯萃取。有機層以水、飽和食鹽水洗淨後以硫酸鎂乾燥。過濾除去硫酸鎂後減壓濃縮之。獲得之殘渣以矽膠管柱層析(乙酸乙酯：正己烷=1：4→2：3)精製。將獲得之殘渣以正己烷/二乙醚固化，濾取析出之固體，獲得標題化合物(70.6g)。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)1.30(s,9H),2.72(s,3H),7.58(dd,J=8.55,2.08Hz,1H),7.66(d,J=8.55Hz,1H),7.91(d,J=2.08Hz,1H)

第2步驟 (R)-3-(4-溴-3-氯-苯基)-2-異丙基-3-((S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺醯基胺基)-丁酸甲酯

於氬氣大氣下將二異丙胺(12.4mL)於四氫呋喃(89.1mL)中混合。於-78℃，於反應液中滴下2.66M正丁基鋰/正己烷溶液(33.5mL)，於冰冷下將反應液攪拌5分鐘。於反應液中滴下將3-甲基-丁酸甲酯(11.7mL)混合於四氫呋喃(44.5mL)之溶液，反應液於-78℃攪拌1小時。於反應液中滴下將(S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺酸[1-(4-溴-3-氯-苯基)-乙-(E)-亞基]-醯胺(15.0g)混合於四氫呋喃(44.5mL)之溶液，將反應液攪拌2小時。於反應液中加入將乙酸(5.1mL)混合於四氫呋喃(25.4mL)之溶液，於室溫下攪拌之。於反應液中加入1M檸檬酸1鈉鹽水溶液(100ml)，分層之。有機層以水(100mL，2次)洗淨。將合併之水層以乙酸乙酯(100mL，2次)萃取。合併之有機層以1M檸檬酸1鈉鹽水溶液(100ml)、水(100mL，2次)、飽和食鹽水洗淨後以硫酸鎂乾燥。過濾除去硫酸鎂後減壓濃縮之。獲得之殘渣以矽膠管柱層析(乙酸乙酯：正己烷=1：4→3：2)精製，獲得標題化合物(18.0g)。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)0.76(d,J=6.94Hz,1.2H),0.93(d,J=6.94Hz,1.8H),0.95(d,J=6.94Hz,1.8H),1.00(d,J=6.94Hz,1.2H),1.26(s,5.4H),1.34(s,3.6H),1.74-1.81(m,0.4H),1.87(s,1.2H),1.88(s,1.8H),2.04-2.13(m,0.6H),2.46(d,J=3.93Hz,0.4H),2.80(d,J=3.93Hz,0.6H),3.60(s,1.8H),3.70(s,1.2H),5.13(s,0.6H),5.42(s,0.4H),7.17-7.21(m,1H),7.54-7.59(m,2H)

第3步驟 (S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺酸[(R)-1-(4-溴-3-氯-苯基)-2-羥基甲基-1,3-二甲基-丁基}醯胺

於氬氣大氣下將(R)-3-(4-溴-3-氯-苯基)-2-異丙基-3-((S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺醯基胺基)-丁酸甲酯(18.0g)混合於甲苯(39.7mL)中。於-78℃，於反應液中滴下1M二異丁基氫化鋁/甲苯溶液(59.1mL)，將反應液於-78℃攪拌2小時，接著慢慢昇溫至0℃後攪拌30分鐘。於-78℃，於反應液中加入甲醇(39mL)。於冰冷下，於反應液中加入30w/v%L-酒石酸水溶液(75mL)及乙酸乙酯(300mL)，分層之。水層以乙酸乙酯(100mL)萃取。將合併之有機層以30w/v%L-酒石酸水溶液(80mL，2次)、水(80mL，2次)、飽和食鹽水洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後減壓濃縮之。將獲得之殘渣以甲苯共沸，獲得粗生成物之標題化合物(18.5g)。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)0.70(d,J=6.94Hz,1.8H),0.76(d,J=6.94Hz,1.8H),0.79(d,J=6.94Hz,1.2H),0.83(d,J=6.94Hz,1.2H),1.15(s,5.4H),1.30(s,3.6H),1.56-1.59(m,0.4H),1.71-1.82(m,1H),1.95(s,1.8H),1.98(s,1.2H),2.04-2.08(m,0.6H),3.86-4.13(m,2H),5.13(s,0.6H),5.99(s,0.4H),7.16-7.21(m,1H),7.54-7.58(m,2H)

第4步驟 (R)-3-胺基-3-(4-溴-3-氯-苯基)-2-異丙基-丁烷-1-醇

將(S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺酸[(R)-1-(4-溴-3-氯-苯基)-2-羥基甲基-1,3-二甲基-丁基}醯胺(18.5g)於甲醇(79.5mL)中混合。於冰冷下，於反應液中滴下2M氯化氫/甲醇溶液(39.8mL)，將反應液攪拌1.5小時。將反應液減壓濃縮，於殘渣中加入10w/v%碳酸鈉水溶液(50.0mL)。將反應液以乙酸乙酯(80mL)萃取。水層以乙酸乙酯(2次)萃取。將合併之有機層以10w/v%碳酸鈉水溶液(50mL)、水(50mL)、飽和食鹽水洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後將經減壓濃縮之有機層以硫酸鎂乾燥。過濾除去硫酸鎂後將濾液減壓濃縮。獲得之殘渣以甲苯共沸，獲得粗生物之標題化合物(15.7g)。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)0.69(d,J=6.94Hz,1.2H),0.83(d,J=6.94Hz,1.8H),0.85(d,J=6.94Hz,1.2H),0.87(d,J=6.94Hz,1.8H),1.36-1.47(m,0.6H),1.59(s,1.2H),1.60(s,1.8H),1.64(ddd,J=5.32,3.24,2.31Hz,0.4H),1.66-1.77(m,0.4H),1.85(ddd,J=8.79,3.47,2.31Hz,0.6H),3.69(dd,J=11.33,3.47Hz,0.6H),3.81(dd,J=11.79,5.32Hz,0.4H),3.91(dd,J=11.33,8.79Hz,0.6H),3.96(dd,J=11.79,3.47Hz,0.4H),7.18-7.20(m,1H),7.50(d,J=2.31Hz,0.6H),7.53(d,J=2.31Hz,0.4H),7.58(d,J=6.70Hz,0.6H),7.60(d,J=6.70Hz,0.4H)

第5步驟 3-{3-[(R)-1-(4-溴-3-氯-苯基)-2-羥基甲基-1,3-二甲基-丁基]脲基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯

於氮氣大氣下將3-(甲氧基羰基)二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸(4.00g)及甲苯(47.0mL)混合，於室溫下加入疊氮磷酸二苯酯(5.58mL)及三乙胺(3.60mL)。將反應液於120℃下攪拌50分鐘。將反應液於冰冷歷時15分鐘滴下(R)-3-胺基-3-(4-溴-3-氯-苯基)-2-異丙基-丁烷-1-醇(9.77g)之四氫呋喃溶液(47.0mL)。反應液於室溫下攪拌1小時。於反應液中加入10w/v% 檸檬酸水溶液(100mL)，分層之。有機層以水(60mL)洗淨。將合併之水層以乙酸乙酯(2次)萃取。將合併之有機層以10w/v%檸檬酸水溶液(60mL)、水(60mL)、10w/v%碳酸鈉水溶液(60mL)、水(60mL)、飽和食鹽水洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後減壓濃縮之。獲得之殘渣以矽膠管柱層析(乙酸乙酯：正己烷=7：13→100：0)精製，獲得標題化合物(8.34g)。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)0.28(d,J=6.94Hz,1.2H),0.79(d,J=6.94Hz,1.8H),0.85(d,J=6.94Hz,1.8H),0.92(d,J=6.94Hz,1.2H),1.52-1.59(m,0.6H),1.79-1.88(m,0.4H),1.84(s,1.8H),1.90(s,1.2H),2.12-2.18(m,0.4H),2.21-2.32(m,0.6H),2.29(s,3.6H),2.29(s,2.4H),3.67(s,3H),3.82-3.75(m,1.4H),3.89-3.94(m,0.6H),4.61(s,0.6H),4.70(s,0.4H),6.92(s,0.4H),7.04(s,0.6H),7.13-7.16(m,1H),7.44(d,J=2.31Hz,0.4H),7.45(d,J=2.08Hz,0.6H),7.53(d,J=8.55Hz,1H)

第6步驟 3-[(S)-4-(4-溴-3-氯-苯基)-5-異丙基-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基]-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯

於氮氣大氣下將3-{3-[(R)-1-(4-溴-3-氯-苯基)-2-羥基甲基-1,3-二甲基-丁基]脲基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(10.0g)及氯仿(68.4mL)混合，於室溫下加入(二乙醯氧基碘)苯(6.06g)及2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基(0.267g)。將反應液於室溫下攪拌3.5小時後於室溫下加入10w/w%亞硫酸鈉水溶液(50mL)，分層之。水層以氯仿(2次)萃取。將合併之有機層以水(50mL)、飽和食鹽水洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後減壓濃縮之。獲得之殘渣以甲苯共沸。將獲得之殘渣與甲苯(213mL)混合，於室溫下加入五氟苯胺三氟甲烷磺酸鹽(0.307g)。將反應液於100℃加溫下攪拌2小時後於室溫下加入亞硫酸鈉(880mg)及10w/v%碳酸鈉水溶液(50mL)，分層之。水層以乙酸乙酯(2次)萃取。將合併之有機層以水(50mL)、飽和食鹽水洗淨後以硫酸鎂乾燥。過濾除去硫酸鎂後減壓濃縮之。獲得之殘渣以矽膠管柱層析(乙酸乙酯：正己烷=1：4→3：2)精製。獲得之殘渣以正己烷固化，濾取析出之固體，獲得標題化合物(6.35g)。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)0.72(d,J=6.94Hz,3H),1.06(d,J=6.94Hz,3H),1.70(s,3H),1.81-1.92(m,1H),2.47(s,6H),3.71(s,3H),4.69(s,1H),5.85(s,1H),7.20(dd,J=8.32,2.31Hz,1H),7.51(d,J=2.31Hz,1H),7.58(d,J=8.32Hz,1H)

第7步驟 3-{(S)-4-[4-(2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-5-異丙基-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯

於氬氣大氣下將3-[(S)-4-(4-溴-3-氯-苯基)-5-異丙基-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基]-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(5.23g)、反式-2-第三丁基-環丙基-三氟硼酸鉀(2.79g)、[1,1’-雙(二-第三丁基膦基)二茂鐵] 二氯化鈀(II)(0.729g)、碳酸銫(10.9g)、甲苯(112mL)及水(11.2mL)混合，於100℃下攪拌2小時。於室溫下，於反應液中加入水(50mL)，分層之。水層以乙酸乙酯(2次)萃取。將合併之有機層以水(50mL，2次)、飽和食鹽水洗淨後以硫酸鎂乾燥。加入活性碳，於室溫下攪拌1小時。過濾除去硫酸鎂及活性碳後減壓濃縮之。獲得之殘渣以矽膠管柱層析(乙酸乙酯：正己烷=1：9→1：1)精製。將獲得之殘渣與甲醇混合，於室溫下加入活性碳。過濾除去活性碳後減壓濃縮之。獲得之殘渣以矽膠管柱層析(乙酸乙酯：正己烷=1：4→1：1)精製，獲得標題化合物之非對映異構體混合物(3.70g)。藉由對掌性製備管柱進行精製，獲得標題化合物(0.344g)。

製備條件如以下所示：

製備機器：再生製備液相層析LC-92XX NEXT SERIES日本分析工業(股)公司製造

管柱：大賽璐CHIRALPAK IA 2.0cm

×25cmL

移動相：正己烷：2-丙醇=93：7

流速：10.0mL/min

檢出：UV(220nm)

使用對掌性管柱進行分析時，獲得之標題化合物之保持時間為8.3分鐘(標題化合物之非對映異構體之保持時間為7.6分鐘)，此時之純度為>99%de。使用對掌性管柱之分析條件為如下所述。

測定機器：HPLC系列島津製作所高速液體層析prominence

管柱：大賽璐CHIRALPAK IA-3 0.46cm

×15cmL

管柱溫度：40℃

移動相：正己烷：2-丙醇=93：7

流速：1.0mL/min

檢出：UV(220nm)

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)0.71(d,J=7.09Hz,3H),0.77-0.83(m,1H),0.90-0.95(m,2H),0.94(s,9H),1.04(d,J=7.09Hz,3H),1.68(s,3H),1.85-1.92(m,1H),2.07-2.12(m,1H),2.48(s,6H),3.71(s,3H),4.56(s,1H),5.83(s,1H),6.86(d,J=8.31Hz,1H),7.22(dd,J=8.31,1.96Hz,1H),7.37(d,J=1.96Hz,1H)

第8步驟 3-{(S)-4-[4-((1R,2R)-2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-5-異丙基-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸

於氮氣大氣下將3-{(S)-4-[4-(2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-5-異丙基-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(49.1g)、四氫呋喃(246mL)及甲醇(246mL)混合，於室溫下加入2N氫氧化鈉水溶液(101mL)。將反應液於室溫下攪拌24小時30分鐘。將反應液減壓濃縮，於殘渣加入水(400mL)及1N鹽酸(250mL)，加入乙酸乙酯(900mL)分層之。水層以乙酸乙酯(100mLx2)萃取，有機層以水(250mL)、飽和食鹽水洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後減壓濃縮之。

將獲得之殘渣與乙腈(1000mL)混合，於85℃加溫下攪拌1小時15分鐘。之後於室溫下攪拌13小時15分鐘後濾取固體，獲得標題化合物之結晶(結晶形A)(44.7g)。

將以相同之操作獲得之標題化合物之結晶(29.7mg)、乙酸乙酯(297μL)及甲醇(891μL)混合。將固體完全溶解後使用旋轉蒸發器將溶劑減壓濃縮，獲得標題化合物之其他結晶(結晶形B)。

將以相同之操作獲得之上述2種結晶(各10.0mg)與乙酸異丁酯(80μL)混合，於室溫下進行泥漿攪拌1週後濾取固體，獲得標題化合物之其他結晶(結晶形C)，作為下述之種晶使用。

將藉由與上述相同之反應獲得之粗結晶(2.00g)與乙酸異丁酯(10mL)混合，於90℃下攪拌。粗結晶完全溶解後於內溫47℃將種晶接種，攪拌1小時。於內溫45℃左右於反應液中加入正庚烷(30mL)，攪拌2小時。於室溫下攪拌24小時。濾取析出之固體，獲得標題化合物(結晶形C)(1.7g)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)0.71(d,J=6.94Hz,3H),0.86-0.94(m,3H),0.90(s,9H),1.04(d,J=6.94Hz,3H),1.60(s,3H),1.93-2.04(m,2H),2.29(s,6H),5.97(s,1H),6.99(d,J=7.86Hz,1H),7.06(s,1H),7.21(dd,J=7.86,1.85Hz,1H),7.32(d,J=1.85Hz,1H),12.44(s,1H)

於標題化合物中之不對稱碳之絕對立體配置可藉由進行單結晶X射線構造解析確認。

(中間體1之合成) 反式-2-第三丁基-環丙基-三氟硼酸鉀

於氮氣大氣下將2-(反式-2-第三丁基-環丙基)-4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜硼雜環戊烷(8.03g)、甲醇(200mL)及水(40mL)混合，於室溫下加入氟化氫鉀(14g)。將反應液於100℃攪拌7小時。於室溫下靜置整晚後減壓濃縮之。將獲得之殘渣以甲苯共沸。將獲得之殘渣與乙腈(120mL)混合，於60℃下攪拌2小時。過濾除去固體後將濾液減壓濃縮。將獲得之殘渣與二乙醚(80mL)混合，於室溫下攪拌。濾取析出之固體，獲得標題化合物(2.86g)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)-0.94--0.87(m,1H),-0.26--0.23(m,2H),0.25-0.30(m,1H),0.73(s,9H)

[實施例1A] 3-{(S)-4-[4-((1R,2R)-2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-5-異丙基-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸藉由其他方法合成第1步驟 (4S,5S)-2-((E)-3,3-二甲基-1-丁烯基)-[1,3,2]二氧雜硼雜環戊烷-4,5-二羧酸雙二甲基醯胺

將2M二溴硼烷二甲基硫醚錯合物/甲苯溶液(1250mL)於甲苯(1169mL)中混合。於水冷下，於反應液中以45分鐘滴下3,3-二甲基-1-丁炔(338mL)。將反應液於水冷下攪拌2.5小時。對於延遲性之發熱於水浴中加入冰，將反應液冷卻。於冰冷下，於將8N氫氧化鉀水溶液(969mL)與水(2922mL)混合之水溶液中以30分鐘滴下反應液。水層中加入甲苯 (1461mL)及四氫呋喃(292mL)，於冰冷下以20分鐘滴下6N鹽酸(417mL)。加入氯化鈉(584g)，將有機層分層。

將有機層與甲苯(1581mL)混合，加入L-酒石酸-N,N,N',N'-四甲基醯胺(562g)。反應液於130℃加溫下攪拌2小時。將有機層分層，減壓濃縮。濾別於濃縮途中析出之固體，將濾液減壓濃縮，獲得粗生成物之標題化合物(599g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-D₆)1.00(s,9H),2.87(s,6H),3.06(s,6H),5.30(d,J=18.24Hz,1H),5.44(s,2H),6.64(d,J=18.24Hz,1H)

第2步驟 (1R,2R)-2-第三丁基環丙基硼酸

於氬氣大氣下將1.1M二乙基鋅/正己烷溶液(1892mL)於甲基第三丁醚(838mL)中混合。於乾冰-丙酮冷卻下，於反應液中以35分鐘滴下氯碘甲烷(301mL)。將反應液於乾冰-丙酮冷卻下攪拌30分鐘。於乾冰-丙酮冷卻下加入L-酒石酸-N,N,N',N'-四甲基醯胺(70.8g)，攪拌20分鐘。於乾冰-丙酮冷卻下以30分鐘於反應液中滴下將(4S,5S)-2-((E)-3,3-二甲基-1-丁烯基)-[1,3,2]二氧雜硼雜環戊烷-4,5-二羧酸雙二甲基醯胺(222g)於甲基第三丁醚(838mL)中混合之溶液。於乾冰-乙腈冷卻下將反應液攪拌4.5小時。於乾冰-乙腈冷卻下以10分鐘加入30w/v%檸檬酸水溶液(1438mL)。於反應液中加入乙酸乙酯(1047mL)及氯化鈉(335g)，有機層以水(1047mL)、

25w/v%氯化鈉水溶液(1047mL)洗淨後以硫酸鎂乾燥。過濾除去硫酸鎂後減壓濃縮，獲得粗生成物(82.6g)。

將獲得之粗生成物(82.6g)於8N氫氧化鉀水溶液(87mL)及水(150mL)中混合。於冰冷下將反應液以1小時滴入6N鹽酸(117mL)中。於冰冷下將反應液攪拌1小時。濾取析出之固體，獲得標題化合物(68.8g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-D₆)-0.46(td,J=5.98,9.27Hz,1H),0.30-0.37(m,2H),0.70-0.82(m,1H),0.79(s,9H),12.94(br s,2H)

第3步驟 4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯苯甲酸甲酯

於氬氣大氣下將碳酸鉀(1329g)於水(1600mL)中混合。於反應液中加入甲苯(4800mL)、4-溴-3-氯苯甲酸甲酯(800g)、(1R,2R)-2-第三丁基環丙基硼酸(1454g)及雙(三苯基膦)二氯化鈀(II)(112g)，將反應液於80℃加溫下攪拌4.5小時。使反應液成為室溫。於60℃加溫下於反應液中加入0.5N氫氧化鉀水溶液(3200mL)，攪拌2小時。將有機層分層後，水層以甲苯(1200mL)萃取。將合併之有機層以水(3200mL)洗淨後加入矽藻土(800g)，於室溫下攪拌1小時。過濾除去矽藻土後減壓濃縮。於獲得之殘渣中加入異丙醇(2000mL)，減壓濃縮，獲得粗生成物之標題化合物(1061g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-D₆)0.91(s,9H),1.02-1.07(m,3H),2.13(td,J=8.07,5.68Hz,1H),3.84(s,3H),7.15(d,J=8.37Hz,1H),7.79(dd,J=8.37,1.79Hz,1H),7.89(d,J=1.79Hz,1H)

第4步驟 4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯苯甲酸

將4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯苯甲酸甲酯(1061g)於異丙醇(4600mL)中混合。於反應液中加入2N氫氧化鈉水溶液(4000mL)，將反應液於室溫下攪拌整晚。於反應液中加入活性碳(160g)，攪拌30分鐘。以矽藻土過濾後於冰冷下，於濾液中加入2N鹽酸(4100mL)，以乙酸乙酯(4800mL)萃取。水層以乙酸乙酯(1200mL)萃取，將合併之有機層以飽和氯化鈉水溶液(1600mL)洗淨後以硫酸鎂乾燥。過濾除去硫酸鎂後減壓濃縮。於獲得之殘渣中加入乙腈(1600mL)，減壓濃縮，獲得粗生成物之標題化合物(920g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-D₆)0.92(s,9H),1.00-1.06(m,3H),2.10-2.15(m,1H),7.12(d,J=7.77Hz,1H),7.77(d,J=7.77Hz,1H),7.87(s,1H),13.11(br s,1H)

第5步驟 4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯苯甲酸

將4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯苯甲酸(920g)於乙腈(7200mL)及水(4000mL)中混合。將反應液於內溫67℃加溫下攪拌，確認4-((1R,2R)- 2-第三丁基環丙基)-3-氯苯甲酸完全溶解。加入水(3700mL)，將種晶接種。於60℃加溫下攪拌6小時後邊慢慢冷卻至室溫邊攪拌整晚。濾取析出之固體，獲得標題化合物(518g)。於本步驟為了效率佳的獲得結晶，使用種晶，惟，即使不使用種晶，藉由與本步驟相同之步驟，亦可獲得該結晶。

第6步驟 4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯苯甲酸(S)-苯乙胺鹽

將4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯苯甲酸(790g)於乙酸異丙酯(7900mL)中混合。於內溫87℃加溫下以10分鐘滴下(S)-(-)-苯乙胺(417g)後將種晶接種。於83℃加溫下攪拌2小時後，邊慢慢冷卻至室溫邊攪拌整晚。濾取析出之固體，獲得標題化合物(1087g)。於本步驟為了效率佳的獲得結晶，使用種晶，惟，即使不使用種晶，藉由與本步驟相同之步驟，亦可獲得該結晶。

¹H NMR(400MHz,DMSO-D₆)0.91(s,9H),0.94-1.00(m,3H),1.41(d,J=6.58Hz,3H),2.05-2.09(m,1H),4.25(q,J=6.58Hz,1H),6.98(d,J=8.07Hz,1H),7.27-7.30(m,1H),7.35-7.38(m,2H),7.45-7.47(m,2H),7.70(d,J=8.07Hz,1H),7.81(s,1H)

第7步驟 4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯苯甲酸(S)-苯乙胺鹽

將4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯苯甲酸(S)-苯乙胺鹽(1087g)於乙酸異丙酯(7600mL)中混合。於反應液中加入(S)-(-)-苯乙胺(35.2g)。於83℃加溫下攪拌2小時後，邊慢慢冷卻至室溫邊攪拌整晚。濾取析出之固體，獲得標題化合物(1044g)。

第8步驟 4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯苯甲酸

將4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯苯甲酸(S)-苯乙胺鹽(1044g)於乙腈(5200mL)及水(3800mL)中混合。加入2N鹽酸(1470mL)，於80℃加溫下攪拌2小時後，邊慢慢冷卻至室溫邊攪拌整晚。以1小時滴下水(4200mL)後於室溫下攪拌2小時。濾取析出之固體，獲得標題化合物(697g)。

第9步驟 4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯-N-甲氧基-N-甲基苯甲醯胺

將4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯苯甲酸(1000g)於N-甲基吡咯啶酮(5000mL)中混合。於反應液中加入N,O-二甲基羥胺鹽酸鹽(540g)、1-羥基苯并三唑1水合物(60.6g)及碳酸氫鈉(465g)。於冰冷下加入N-(3-二甲胺基丙基)-N'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(1099g)，攪拌1小時。於室溫下攪拌1小時後加入環戊基甲醚(5000mL)及水(2500mL)。水層以環戊基甲醚(400mL)萃取，將合併之有機層以水(2500mL)、20w/v%氯化鈉水溶液(2500mL)洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後減壓濃縮之。於獲得之殘渣中加入環戊基甲醚(3000mL)，減壓濃縮，獲得粗生成物之標題化合物(1356g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-D₆)0.92(s,9H),0.95-1.04(m,3H),2.07-2.12(m,1H),3.25(s,3H),3.55(s,3H),7.08(d,J=7.77Hz,1H),7.48(d,J=7.77Hz,1H),7.61(s,1H)

第10步驟 1-[4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯-苯基]乙酮

將4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯-N-甲氧基-N-甲基苯甲醯胺(1356g)於四氫呋喃(5900mL)中混合。於冰冷下以2小時，於反應液中滴下3M甲基氯化鎂/四氫呋喃溶液(1700mL)後攪拌1小時。於反應液中加入異丙醇(117mL)後滴下2N鹽酸(5900mL)。加入甲苯(6000mL)，有機層以20w/v%氯化鈉水溶液(6000mL)、水(3600mL)洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後減壓濃縮之。於獲得之殘渣中加入環戊基甲醚(3500mL)，減壓濃縮，獲得粗生成物之標題化合物(1193g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-D₆)0.92(s,9H),1.02-1.07(m,3H),2.11-2.16(m,1H),2.55(s,3H),7.14(d,J=8.07Hz,1H),7.79(d,J=8.07Hz,1H),7.92(s,1H)

第11步驟 (S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺酸{1-[4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯-苯基]-乙-(E)-亞基}-醯胺

將1-[4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯-苯基]乙酮(207g)及(S)-(-)-2-甲基-丙烷-2-亞磺酸醯胺(116g)於環戊基甲醚(1000mL)中混合。於反應液中加入原鈦酸四乙酯(335mL)，反應液於110℃加溫下攪拌3小時。於水冷下，於反應液中加入甲醇(1000mL)，攪拌10分鐘。於內溫30℃以下，以15分鐘滴下將28w/w%氨水溶液(100mL)、L-乳酸(178mL)、水(1000mL) 混合之水溶液。於室溫下攪拌4小時後靜置整晚。於水層中加入環戊基甲醚(1000mL)，將合併之有機層以25w/v%氯化鈉水溶液(1000mL)洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後減壓濃縮之。於殘渣中加入正己烷(400mL)，減壓濃縮。於殘渣中再加入正己烷(400mL)，減壓濃縮後加入二甲亞碸(500mL)，減壓濃縮。於殘渣中加入二甲亞碸(500mL)，於室溫下滴下水(50mL)。於室溫下攪拌30分鐘後滴下水(150mL)。於室溫下攪拌12小時後濾取析出之固體，獲得標題化合物(261g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-D₆)0.91(s,9H),1.01-1.05(m,3H),1.21(s,9H),2.12(td,J=7.63,5.78Hz,1H),2.69(s,3H),7.11(d,J=8.55Hz,1H),7.75(dd,J=8.55,1.62Hz,1H),7.87(d,J=1.62Hz,1H)

第12步驟 (R)-3-[4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯-苯基]-2-異丙基-3-((S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺醯基胺基)-丁酸甲酯

於氮氣氣流下將2M二異丙基胺基鋰/四氫呋喃/正庚烷/乙基苯溶液(740mL)於四氫呋喃(786mL)中混合。於-78℃冷卻下以45分鐘於反應液中滴下將3-甲基-丁酸甲酯(224mL)於四氫呋喃(524mL)中混合之溶液，將反應液於-78℃冷卻下攪拌2小時30分鐘。於反應液中以40分鐘滴下將(S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺酸{1-[4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯-苯基]-乙-(E)-亞基}-胺(261g)於四氫呋喃(393mL)中混合之溶液，將反應液攪拌4小時。於反應液中，於5分鐘以內依序滴下甲醇(131mL)及水(131mL)，於室溫下攪拌14小時。於水冷下，於反應液中加入水(786ml)，分層之。水層以甲苯(1048mL)萃取。將合併之有機層依序以1N硫酸(1309mL)、水(786mL)、5w/v%碳酸氫鈉水溶液(786mL)、25w/v%氯化鈉水溶液(786mL)洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後減壓濃縮之。於獲得之殘渣中加入甲苯(262mL)，減壓濃縮，獲得粗生成物之標題化合物(348g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-D₆)0.76-0.92(m,18H),1.15(s,6.3H),1.20(s,2.7H),1.75(s,0.9H),1.76(s,2.1H),1.93-2.04(m,2H),2.68(d,J=3.59Hz,0.3H),2.93(d,J=3.89Hz,0.7H),3.52(s,2.1H),3.58(s,0.9H),5.15(s,0.7H),5.44(s,0.3H),6.97(d,J=8.37Hz,0.7H),6.98(d,J=8.37Hz,0.3H),7.31(d,J=8.37Hz,1H),7.46(s,0.7H),7.49(s,0.3H)

第13步驟 (S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺酸[(R)-1-[4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯-苯基]-2-羥基甲基-1,3-二甲基-丁基}醯胺

於氮氣氣流下，於-78℃冷卻下以1小時，於1M二異丁基氫化鋁/甲苯溶液(2932mL)中滴下將(R)-3-[4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯-苯基]-2-異丙基-3-((S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺醯基胺基)-丁酸甲酯(348g)於甲苯(1392mL)中混合之溶液。將反應液於-78℃冷卻下攪拌2小時。於冰冷下，於將檸檬酸1水合物(622g)於水(2088mL)中混合之溶液於內溫20℃以下加入反應液。於室溫下攪拌15小時後分層之。水層以甲苯(1044mL)萃取。將合併之有機層依序以水(1740mL)、25w/v%氯化鈉水溶液(1740mL)洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後減壓濃縮，獲得粗生成物之標題化合物(645g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-D₆)0.65(d,J=7.09Hz,2.1H),0.68-0.71(m,3H),0.75(d,J=7.09Hz,0.9H),0.82-0.95(m,12H),1.05(s,6.3H),1.18(s,2.7H),1.73(s,2.1H),1.79(s,0.9H),1.84-1.88(m,0.7H),1.99-2.05(m,1.3H),3.65-3.80(m,2H),5.14(t,J=3.55Hz,0.3H),5.50(t,J=3.91Hz,0.7H),6.03(s,0.3H),6.56(s,0.7H),6.93-6.99(m,1H),7.28-7.34(m,1H),7.38(d,J=1.96Hz,0.7H),7.43(d,J=1.71Hz,0.3H)

第14步驟 (R)-3-胺基-3-[4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯-苯基]-2-異丙基-丁烷-1-醇鹽酸鹽

將(S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺酸[(R)-1-[4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯-苯基]-2-羥基甲基-1,3-二甲基-丁基}醯胺(327g)於甲苯(1309mL)中混合。於冰冷下，於反應液中以20分鐘滴下2M氯化氫/甲醇溶液(740mL)，於水冷下攪拌2小時。將反應液減壓濃縮，於殘渣中加入二異丙醚(250mL)。減壓濃縮後於殘渣中加入二異丙醚(4155mL)，於90℃加溫下攪拌6小時。將反應液一邊慢慢冷卻至室溫一邊攪拌8小時後濾取析出之固體，獲得標題化合物(195g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-D₆)0.64(d,J=6.88Hz,0.9H),0.67(d,J=6.88Hz,2.1H),0.78(d,J=6.88Hz,2.1H),0.91(s,9H),0.94-0.98(m,3H),1.03(d,J=6.88Hz,0.9H),1.33-1.40(m,0.7H),1.66(s,0.9H),1.68(s,2.1H),1.92-2.08(m,2.3H),3.31-3.35(m,0.3H),3.50-3.55(m,0.3H),3.56-3.77(m,1.4H),5.14(br s,0.3H),5.29(br s,0.7H),7.06(d,J=8.37Hz,0.3H),7.08(d,J=8.37Hz,0.7H),7.43(d,J=8.37Hz,0.3H),7.49(d,J=8.37Hz,0.7H),7.60(s,1H),8.31(br s,2.1H),8.49(br s,0.9H)

第15步驟 3-{3-[(R)-1-[4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯-苯基]-2-羥基甲基-1,3-二甲基-丁基]脲基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯

於氬氣氣流下將3-(甲氧基羰基)二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸(63.8g)於甲苯(761mL)中混合，於水冷下歷時5分鐘以上滴下三乙胺(57.5mL)。於水冷下歷時7分鐘以上滴下疊氮磷酸二苯酯(89mL)以上，攪拌30分鐘。於100℃加溫下攪拌1小時30分鐘。將反應液於冰冷下以37分鐘滴入將(R)-3-胺基-3-[4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯-苯基]-2-異丙基-丁烷-1-醇鹽酸鹽(117g)與四氫呋喃(819mL)混合後於水冷下歷時5分鐘以下滴下三乙胺(47.9mL)之懸濁液。於冰冷下攪拌30分鐘後於室溫下攪拌1小時30 分鐘。於冰冷下歷時15分鐘以上滴下1N鹽酸(1170mL)後分層之。有機層依序以水(585mL)、5w/v%碳酸氫鈉水溶液(585mL，2次)、水(585mL)、25w/v%氯化鈉水溶液(585mL)洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後減壓濃縮之。於獲得之殘渣中加入環戊基甲醚，重複操作減壓濃縮2次，獲得粗生成物之標題化合物(192g)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)0.27(d,J=6.94Hz,0.9H),0.73-0.79(m,1H),0.82(d,J=6.94Hz,2.1H),0.86-0.99(m,2.9H),0.89(d,J=6.94Hz,2.1H),0.93(s,2.7H),0.94(s,6.3H),1.49-1.55(m,1H),1.84(s,2.1H),1.89(s,0.9H),2.07(dt,J=8.79,5.09Hz,1H),2.27(s,4.2H),2.28(s,1.8H),2.36-2.29(m,1H),3.66(s,2.1H),3.69(s,0.9H),3.73-3.82(m,1.3H),3.91(dd,J=10.98,7.51Hz,0.7H),4.52(s,0.7H),4.59(s,0.3H),6.71(s,0.3H),6.82-6.85(m,1H),6.92(s,0.7H),7.14-7.18(m,1H),7.30-7.31(m,1H)

第16步驟 3-{(S)-4-[4-((1R,2R)-2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-5-異丙基-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯

於氮氣氣流下將(二乙醯氧基碘)苯(111g)及2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基(2.44g)於乙酸(632mL)中混合，於室溫下以20分鐘滴下將3-{3-[(R)-1-[4-((1R,2R)-2-第三丁基環丙基)-3-氯-苯基]-2-羥基甲基-1,3-二甲基-丁基]脲基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(158g)及2,2,6,6-四甲基哌啶- 1-氧自由基(2.44g)於環戊基甲醚(632mL)中混合之溶液。將反應液於室溫下攪拌17小時後於水冷下以9分鐘滴下三氟乙酸(94mL)。將反應液於室溫下攪拌3小時30分鐘後於水冷下加入10w/w%亞硫酸鈉水溶液(474mL)，攪拌45分鐘。加入正庚烷(790mL)，分層之。水層以正庚烷(474mL)萃取。將合併之有機層以水(790mL，2次)洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後減壓濃縮之。於獲得之殘渣中加入甲苯，重複操作減壓濃縮2次。於獲得之殘渣中加入異丙醇，重複操作減壓濃縮3次，獲得粗生成物之標題化合物(197g)。

第17步驟 3-{(S)-4-[4-((1R,2R)-2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-5-異丙基-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸

於氮氣氣流下將3-{(S)-4-[4-((1R,2R)-2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-5-異丙基-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(197g)於異丙醇(437mL)中混合，於水冷下以12分鐘滴下2N 氫氧化鈉水溶液(376mL)。將反應液於室溫下攪拌3小時後加入正庚烷(730mL)，分層之。水層以正庚烷(730mL)洗淨。將水層於甲基第三丁醚(730mL)中混合，於冰冷下滴下2N鹽酸(584mL)後分層之。有機層以水(438mL，2次)洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後減壓濃縮之。於獲得之殘渣中加入乙腈，減壓濃縮，獲得粗生成物之標題化合物(152g)。

於氮氣氣流下將獲得之粗生成物於乙腈(2127mL)中混合，於90℃加溫下攪拌6小時。將反應液一邊慢慢冷卻至室溫一邊攪拌17小時後濾取析出之固體，獲得標題化合物之結晶形A(110g)。

將獲得之粗結晶於乙酸異丁酯(659mL)中混合，於105℃加溫下攪拌。粗結晶完全溶解後熱時過濾，以乙酸異丁酯(200mL)洗淨，將濾液於105℃加溫下攪拌至析出之固體完全溶解。將反應液於50℃加溫下一邊慢慢冷卻一邊攪拌3小時後將種晶接種。將反應液於45℃加溫下一邊慢慢冷卻一邊攪拌1小時50分鐘。於55℃加溫下，以56分鐘將正庚烷(2601mL)滴入反應液中後攪拌2小時。將反應液一邊慢慢冷卻至室溫一邊攪拌18小時後濾取析出之固體，獲得標題化合物之結晶形C(153g)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-D₆)0.71(d,J=6.94Hz,3H),0.86-0.94(m,3H),0.90(s,9H),1.04(d,J=6.94Hz,3H),1.60(s,3H),1.93-2.04(m,2H),2.29(s,6H),5.97(s,1H),6.99(d,J=7.86Hz,1H),7.06(s,1H),7.21(dd,J=7.86,1.85Hz,1H),7.32(d,J=1.85Hz,1H),12.44(s,1H)

將3-{(S)-4-[4-((1R,2R)-2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-5-異丙基-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸(50.0mg)於甲苯(0.1mL)及正庚烷(0.1mL)中混合，於80℃加溫下攪拌至固體完全溶解。將種晶接種，將反應液一邊慢慢冷卻至室溫一邊攪拌6小時後濾取析出之固體，獲得標題化合物之結晶形B(45.0mg)。

將3-{(S)-4-[4-((1R,2R)-2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-5-異丙基-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸(9.71g)於丙酮(87.5mL)及水(29mL)中混合，於70℃加溫攪拌2小時至固體完全溶解。將反應液於42.5℃加溫下一邊慢慢冷卻一邊攪拌2小時。將反應液一邊慢慢冷卻至室溫一邊攪拌15小時後濾取析出之固體，獲得標題化合物之結晶形D(7.52g)。

將標題化合物之結晶(結晶形D)(50.0mg)於丙酮(0.375mL)及水(0.125mL)中混合，於58℃加溫下攪拌至固體完全溶解。將反應液一邊慢慢冷卻至室溫一邊攪拌8日後濾取固體，獲得標題化合物之另一結晶(結晶形E)(18.6mg)，作為種晶使用。

將3-{(S)-4-[4-((1R,2R)-2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-5-異丙基-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸(500mg)於丙酮(3.6mL)及水(0.9mL)中混合，於70℃加溫下攪拌至固體完全溶解。於50℃加溫下於反應液中將種晶接種，攪拌1小時。於50℃加溫下加入水(3mL)，攪拌2小時。將反應液一邊慢慢冷卻至室溫一邊攪拌3小時後濾取析出之固體，獲得標題化合物之結晶形E(483mg)。

[實施例2] 3-{(S)-5-((S)-第二丁基)-4-[4-(2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸之合成第1步驟 (S)-2-[(R)-1-(4-溴-3-氯-苯基)-1-((S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺醯基胺基)-乙基]-3-甲基戊酸乙酯

於氬氣大氣下將2M二異丙基胺基鋰/四氫呋喃/正庚烷/乙基苯溶液(45mL)於四氫呋喃(45mL)中混合。於-78℃冷卻下，於反應液中滴下將(S)-3-甲基-戊酸乙酯(12.9g)於四氫呋喃(30mL)中混合之溶液，將反應液於-78℃冷卻下攪拌2小時。於反應液中滴下將(S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺酸[1-(4-溴-3-氯-苯基)-乙-(E)-亞基]-醯胺(15.0g)於四氫呋喃(40mL)中混合之溶液，將反應液於-78℃冷卻下攪拌2小時。於反應液中加入飽和鹽化銨水溶液，於室溫下攪拌。將反應液分層，水層以乙酸乙酯(2次)萃取。將合併之有機層以飽和食鹽水洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後將濾液減壓濃縮。獲得之殘渣以矽膠管柱層析(甲苯：乙酸乙酯=4：1)精製，獲得非對映異構體混合物之標題化合物(8.9g)。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)0.66(t,J=7.17Hz,2.4H),0.87(t,J=7.17Hz,0.6H),0.92(d,J=6.94Hz,0.6H),1.00(d,J=6.94Hz,2.4H),1.05-1.13(m,1.6H),1.19(t,J=7.17Hz,0.6H),1.24(s,1.8H),1.27(t,J=7.17Hz,2.4H),1.32-1.35(m,7.6H),1.42-1.52(m,0.8H),1.67-1.73(m,0.2H),1.88(s,0.6H),1.90(s,2.4H),2.52(d,J=3.01Hz,0.8H),2.82(d,J=3.70Hz,0.2H),4.07(q,J=7.17Hz,0.4H),4.18(q,J=7.17Hz,1.6H),5.04(s,0.2H),5.49(s,0.8H),7.18-7.21(m,1H),7.55-7.59(m,2H)

第2步驟 (S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺酸[(1R,3S)-1-(4-溴-3-氯-苯基)-2-羥基甲基-1,3-二甲基-戊基}醯胺

於氬氣大氣下，於-78℃冷卻下，於1M二異丁基氫化鋁/甲苯溶液(202mL)中滴下將(S)-2-[(R)-1-(4-溴-3-氯-苯基)-1-((S)-2-甲基-丙烷-2-亞磺醯基胺基)-乙基]-3-甲基戊酸乙酯(24.3g)於甲苯(100mL)中混合之溶液。將反應液於-78℃冷卻下攪拌2小時25分鐘。於-78℃冷卻下，於反應液中加入甲醇(24.5mL)。於-78℃冷卻下，於反應液中加入飽和(+)-酒石酸鈉鉀水溶液(250mL)，於室溫下攪拌2小時。將反應液分層，水層以甲苯(300mL)萃取。將合併之有機層以飽和(+)-酒石酸鈉鉀水溶液(200mL)、水(200mL)、飽和食鹽水(200mL)洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後將濾液減壓濃縮。獲得之殘渣以甲苯共沸，獲得非對映異構體混合物之標題化合物(24.7g)之粗生成物。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)0.67-0.95(m,6H),1.14(s,3.6H),1.20-1.27(m,2H),1.29(s,5.4H),1.35-1.50(m,1H),1.80-1.82(m,0.6H),1.92(s,1.2H),1.94(s,1.8H),2.02-2.05(m,0.4H),2.73-2.80(m,0.6H),3.18-3.26(m,0.4H),3.78-4.08(m,2H),5.35(s,0.6H),6.23(s,0.4H),7.16-7.20(m,1H),7.52-7.62(m,2H)

第3步驟 (S)-2-[(R)-1-胺基-1-(4-溴-3-氯-苯基)-乙基]-3-甲基-戊烷-1-醇

將2-甲基-丙烷-2-亞磺酸[(1R,3S)-1-(4-溴-3-氯-苯基)-2-羥基甲基-1,3-二甲基-戊基}醯胺(24.7g)於甲苯(124mL)中混合。於冰冷下，於反應液中滴下2M氯化氫/甲醇溶液(50.4mL)，將反應液於水浴下攪拌3小時。於冰冷下，於反應液中加入4N氫氧化鈉水溶液(25mL)。於冰冷下，於反應液中加入2N氫氧化鈉水溶液，將pH值調整為12。將反應液分層，水層以甲苯(200mL)萃取。將合併之有機層以飽和食鹽水洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後將濾液減壓濃縮。獲得之殘渣以甲苯共沸，獲得非對映異構體混合物之標題化合物(19.5g)之粗生成物。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)0.55(d,J=6.94Hz,1.8H),0.75(t,J=7.28Hz,1.2H),0.79(t,J=7.17Hz,1.8H),0.84(d,J=7.51Hz,1.2H),0.86-1.07(m,1H),1.20-1.29(m,1H),1.35-1.45(m,1H),1.59(s,1.2H),1.62(s,1.8H),1.72-1.74(m,0.6H),1.87-1.90(m,0.4H),3.69(dd,J=12.02,3.47Hz,0.4H),3.75(dd,J=11.56,6.24Hz,0.6H),3.85(dd,J=12.02,3.47Hz,0.6H),3.92(dd,J=11.56,8.90Hz,0.4H),7.18(dd,J=8.55,2.31Hz,0.4H),7.22(dd,J=8.55,2.31Hz,0.6H),7.50(d,J=2.31Hz,0.4H),7.56(d,J=2.31Hz,0.6H),7.59(d,J=8.55Hz,0.6H),7.60(d,J=8.55Hz,0.4H)

第4步驟 3-{3-[(1R,3S)-1-(4-溴-3-氯-苯基)-2-羥基甲基-1,3-二甲基-戊基]脲基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯

於氬氣大氣下將3-(甲氧基羰基)二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸(5.2g)及甲苯(50mL)混合，於室溫下加入疊氮磷酸二苯酯(7.2mL)及三乙胺(4.6mL)。將反應液於110℃加溫下攪拌1小時。將反應液於冰冷下，歷時10分鐘滴入(S)-2-[(R)-1-胺基-1-(4-溴-3-氯-苯基)-乙基]-3-甲基-戊烷-1-醇(9.8g)之四氫呋喃溶液(50mL)中。將反應液於室溫下攪拌4小時。於反應液中加入N,N,N'-三甲基乙二胺(1.0mL)，減壓濃縮之。於獲得之殘渣中加入10%檸檬酸水溶液，以乙酸乙酯(2次)萃取。將合併之有機層以飽和食鹽水洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後將濾液減壓濃縮。獲得之殘渣以矽膠管柱層析(乙酸乙酯：正己烷=1：1)精製，獲得標題化合物(10.4g)。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)0.18(d,J=6.94Hz,1.8H),0.76(d,J=6.94Hz,1.2H),0.80(t,J=7.17Hz,1.2H),0.87(t,J=7.17Hz,1.8H),1.23-1.28(m,1H),1.48-1.77(m,3H),1.84(s,1.2H),1.91(s,1.8H),2.29(s,2.4H),2.29(s,3.6H),3.67(s,3H),3.67-3.70(m,0.6H),3.77-3.85(m,1H),3.97(dd,J=11.33,8.32Hz,0.4H),4.60(brs,1H),7.09-7.16(m,1H),7.40-7.46(m,1H),7.53(d,J=8.32Hz,1H)

第5步驟 3-[(S)-4-(4-溴-3-氯-苯基)-5-((S)-第二丁基)-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基]-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯

於氬氣大氣下將3-{3-[(1R,3S)-1-(4-溴-3-氯-苯基)-2-羥基甲基-1,3-二甲基-戊基]脲基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(10.4g)及二氯甲烷 (100mL)混合，於室溫下加入(二乙醯氧基碘)苯(7.3g)及2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基(0.323g)。將反應液於室溫下攪拌16.5小時。於冰冷下加入硫代硫酸鈉(0.954g)與水(40mL)之混合液及飽和碳酸氫鈉水溶液。將反應液分層，水層以氯仿(2次)萃取。將合併之有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和食鹽水洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後將濾液減壓濃縮。獲得之殘渣以甲苯共沸。將獲得之殘渣與甲苯(100mL)混合，於室溫下加入五氟苯胺三氟甲烷磺酸鹽(0.345g)。將反應液於110℃加溫下攪拌3小時。將反應液減壓濃縮。獲得之殘渣以矽膠管柱層析(乙酸乙酯：正己烷=1：2)精製，獲得標題化合物(4.6g)。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)0.64(d,J=6.70Hz,3H),0.86(t,J=7.28Hz,3H),1.25-1.36(m,1H),1.40-1.51(m,1H),1.53-1.63(m,1H),1.67(s,3H),2.47(s,6H),3.71(s,3H),4.61(s,1H),5.77(s,1H),7.21(dd,J=8.44,2.31Hz,1H),7.52(d,J=2.31Hz,1H),7.58(d,J=8.44Hz,1H)

第6步驟 3-{(S)-5-((S)-第二丁基)-4-[4-(2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯

於氬氣大氣下將3-[(S)-4-(4-溴-3-氯-苯基)-5-((S)-第二丁基)-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基]-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(4.6g)、反式-2-第三丁基-環丙基-三氟硼酸鉀(2.4g)、[1,1’-雙(二-第三丁基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)(0.62g)、碳酸銫(9.4g)、甲苯(50mL)及水(5mL)混合。將反應液於100℃加溫下攪拌3.5小時。於水浴下，於反應液中加入1-吡咯啶二硫代羧酸銨(0.69g)，攪拌50分鐘。於室溫下，於反應液中追加1-吡咯啶二硫代羧酸銨(0.69g)，再攪拌20分鐘。不溶物以矽藻土過濾。將濾液分層，水層以乙酸乙酯(2次)萃取。將合併之有機層以飽和食鹽水洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後將濾液減壓濃縮。獲得之殘渣以矽膠管柱層析(乙酸乙酯：正己烷=1：2)精製，獲得非對映異構體混合物(3.5g)。獲得之非對映異構體混合物(0.84g)以對掌性製備管柱精製，獲得標題化合物(0.29g)。

製備條件如以下所示。

製備機器：再生製備液相層析LC-9225 NEXT SERIES日本分析工業(股)公司製造

管柱：大賽璐CHIRALPAK IA 2.0cm

×25cm

移動相：己烷：2-丙醇=93：7

流速：10.0mL/min

檢出：UV(220nm)

使用對掌性管柱進行分析時，獲得之標題化合物之保持時間為10.0分鐘(標題化合物之非對映異構體之保持時間為9.4分鐘)，此時之純度為99.0%de。使用對掌性管柱之分析條件如以下所述。

測定機器：HPLC系列島津製作所高速液體層析prominence

管柱：大賽璐CHIRALPAK IA-3 0.46cm

×15cm

管柱溫度：40℃

移動相：己烷：2-丙醇=95：5

流速：1.0mL/min

檢出：UV(220nm)

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)0.63(d,J=6.70Hz,3H),0.83-0.77(m,1H),0.85(t,J=7.28Hz,3H),0.88-0.94(m,11H),1.25-1.34(m,1H),1.41-1.50(m,1H),1.58-1.63(m,1H),1.66(s,3H),2.08-2.12(m,1H),2.47(s,6H),3.71(s,3H),4.55(s,1H),5.75(s,1H),6.86(d,J=8.09Hz,1H),7.24(dd,J=8.09,2.08Hz,1H),7.37(d,J=2.08Hz,1H)

第7步驟 3-{(S)-5-((S)-第二丁基)-4-[4-((1R,2R)-2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸

將3-{(S)-5-((S)-第二丁基)-4-[4-(2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(0.287g)、四氫呋喃(2mL)及甲醇(2mL)混合，於室溫下加入2N氫氧化鈉水溶液(0.58mL)。將反應液於室溫下攪拌18小時。將反應液濃縮，於獲得之殘渣中加入1N鹽酸及水，以乙酸乙酯(2次)萃取。將合併之有機層以飽和食鹽水洗淨後以硫酸鈉乾燥。過濾除去硫酸鈉後將濾液減壓濃縮。於室溫下，於獲得之殘渣中加入乙腈(1.5mL)、水(10mL)，攪拌之。濾取析出之固體，獲得標題化合物(0.268g)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-D₆)0.61(d,J=6.70Hz,3H),0.81(t,J=7.40Hz,3H),0.86-0.91(m,12H),1.22-1.32(m,1H),1.39-1.49(m,1H),1.56 (s,3H),1.63-1.71(m,1H),1.98-2.04(m,1H),2.27(s,6H),5.87(s,1H),6.98(d,J=8.20Hz,1H),7.04(s,1H),7.20(dd,J=8.21,2.20Hz,1H),7.30(d,J=2.20Hz,1H),12.42(brs,1H)

標題化合物中不對稱碳之絕對立體配置藉由進行單結晶X射線構造解析確認。

[實施例3] 3-{(S)-4-[4-((1R,2R)-2-第三丁基-環丙基)-3-氯-苯基]-5-異丙基-4-甲基-2-側氧基-3,4-二氫-2H-嘧啶-1-基}-二環[1.1.1]戊烷-1-羧酸之結晶多形

對於標題化合物之結晶形A至E進行粉末X射線衍射測定(XRD)、熱重差示熱分析(TG-DTA)及差示掃描熱量測定(DSC)。各測定法之測定裝置及測定條件如以下所示。

粉末X射線衍射法：

測定機器：X’pert-PRO-MPD(史貝克斯(Spectris)公司製造)

測定條件：X射線Cu/45kV/40mA，以透過法分析

熱重差示熱分析：

測定機器：TGA/SDTA851^e/SF(美特拉‧特德(Mettler Tolede)公司製造)

測定條件：昇溫速度5℃/分鐘

差示掃描熱量測定：

測定機器：差示掃描熱量測定裝置DSC Q2000型(日本TA儀器公司 (TAInstruments)製造)

測定條件：昇溫速度10℃/分鐘

對於各結晶形之各測定結果如以下所述。

A. 結晶形A

XRD值：表示於第1圖。各峰之衍射角2 θ及衍射強度如以下所述。

DSC值：表示於第2圖。DSC曲線上吸熱峰之焓為68.5J/g，吸熱溫度為195℃，外推起始溫度為193℃。

B. 結晶形B

XRD值：表示於第3圖。各峰之衍射角2 θ及衍射強度如以下所述。

DSC值：表示於第4圖。DSC曲線上吸熱峰之焓為76.0J/g，吸熱溫度為230.2℃，外推起始溫度為229.6℃。

C. 結晶形C

XRD值：表示於第5圖。各峰之衍射角2 θ及衍射強度如以下所述。

DSC值：表示於第6圖。

D. 結晶形D

XRD值：表示於第7圖。各峰之衍射角2 θ及衍射強度如以下所述。

TG-DTA值：表示於第8圖。脫水時之重量減少率為3.6%。由於該數值相當於標題化合物1水合物之理論水量，認為結晶形D為標題化合物之1水合物。

DSC值：表示於第9圖。DSC曲線上吸熱峰之焓為118.4J/g，吸熱溫度為128.0℃，外推起始溫度為118.9℃。

E. 結晶形E

XRD值：表示於第10圖。各峰之衍射角2 θ及衍射強度如以下所述。

TG-DTA值：表示於第11圖。融解時之重量減少率為3.9%。由於該數值相當於標題化合物1水合物之理論水量，認為結晶形E為標題化合物之1水合物。

DSC值：表示於第12圖。DSC曲線上吸熱峰之焓為138.1J/g，吸熱溫度為125.9℃，外推起始溫度為115.0℃。

[試驗例1] 測定於體外之ROR γ轉錄活性阻礙

使用以下之報導基因分析評估被驗物質之ROR γ轉錄活性阻礙作用。

以人類ROR γ(基因庫(Genbank)登錄編號NM_005060.3)及小鼠ROR γ(基因庫(Genbank)登錄編號NM_011281.2)之序列情報為基礎，取得相當於人類及小鼠ROR γ之配體結合區(Ligand Binding Domain(LBD))之cDNA(LBD序列：於人類ROR γ之情況，為從編號第253號之絲胺酸殘基至編號第518號之離胺酸殘基為止；於小鼠ROR γ之情況，為從編號第251號之異白胺酸殘基至編號第516號之離胺酸殘基為止)。

將人類及小鼠ROR γ之LBD cDNA插入為GAL4 DNA結合區融合蛋白質表現載體之pFA-CMV載體(Agilent Technologies公司製造)。以後，構築之質體各個稱為pFA/hROR γ質體、pFA/mROR γ質體。

於中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞)將pFA/hROR γ質體或pFA/mROR γ質體與為表現GAL4依存性螢火蟲螢光素酶之報導質體之pG5-Luc(Promega公司製造)共同一時性的導入。

使用TransIT(登錄商標)CHO Transfection Kit(Mirus公司製造)將質體導入CHO細胞中。於試驗前日將CHO細胞懸濁於含有10%(v/v)牛胎兒血清之HAM F-12 Nutrient培養基，以每5.5×10⁶細胞播種於225cm²細胞培養用燒瓶。2mL試管內將72μL之TransIT(登錄商標)-CHO Reagent加入1.55mL之Opti-MEM中。將該溶液充分混和，於室溫保溫10分鐘。於此加入含有300ng之pFA/hROR γ質體、12000ng之pG5-Luc質體、11700ng之pcDNA3.1質體之質體溶液50.4μL，平穩的混合。又，進行小鼠分析時，以含有300ng之pFA/mROR γ質體、12000ng之pG5-Luc質體、11700ng之pcDNA3.1質體之質體溶液替代，添加之。將混合液於室溫保溫10分鐘。於各試管各添加CHO Mojo Reagent 12μL，平穩的混合。將試管於室溫保溫10分鐘。於細胞中添加製作之轉染試藥溶液。於37℃、5%CO₂培養4小時後藉由胰蛋白酶處理，將質體導入CHO細胞回收。將細胞於培養基中懸濁，以8,000cells/35μL/孔播種於384孔白色盤。將盤於室溫靜置1小時後再於37℃、5%CO₂培養3小時。被驗物質以10mM之濃度溶解於二甲亞碸(DMSO)中。將該溶液以DMSO系列稀釋後再於要使用前以培養基稀釋，作成任意之6用量，添加於細胞中。最終之DMSO濃度作成0.2%(v/v)。被驗物質添加後將細胞於37℃、5%CO₂培養2日。

使用藉由CellTiter-Glo(Promega公司製造)之發光法測定細胞生存率。於添加被驗物質2日後於384孔盤各添加CellTiter-Glo 40μL。添加10分鐘後使用微盤式判讀儀，測定各孔之發光。又，被驗物質處理後之細胞生存率以將只以0.2%DMSO處理之細胞之發光計數作為100%之對照之%(%-of-control)表現。於顯示70%以下細胞生存率之情況，判斷被驗物質具有毒性。

ROR γ轉錄活性使用SteadyLite HTS報導基因分析系統(SteadyLite HTS Reporter Gene Assay System(Perkin Elmer公司製造))，將細胞中之螢光素酶活性為指標測定之。將StedyLite試藥以延伸(Extension)緩衝液((10mM三(羥甲基)甲基甘胺酸(Tricine)、0.2%(w/v)牛血清白蛋白、0.02%(v/v)聚山梨醇酯20(Tween 20))稀釋2.5倍，製作螢光素酶基質溶液。於添加被驗物質2日後於384孔盤各添加螢光素酶基質溶液40μL。於室溫保溫10分鐘後使用微盤式判讀儀。測定各孔之發光。將只以0.2%DMSO處理之溶劑對照洞之發光計數作為100%，將被驗物質處理後之螢光素酶活性作為對照之%算出。被驗物質之EC₅₀值以曲線適插法算出。又，將於具有細胞毒性之濃度之發光計數從值解析除去。

結果表示於以下之表。

[試驗例2] 測定體外代謝安定性 A.於肝微粒體之代謝安定性 (1)調製添加之溶液

添加溶液為將被驗物質之10mM DMSO溶液以乙腈稀釋100倍，調製之。

(2)使用肝微粒體之代謝安定性試驗

使用磷酸鉀緩衝液(pH7.4)調製人類及動物種之肝微粒體(SEKISUI XENOTECH；Human(H2610),Rat(R1000),Mouse(M1000),Monkey(P2000),Dog(D1000))使於反應系中成為0.2mg/mL。接著，將調製之被驗物質之添加溶液於反應系中添加1%。再添加NADPH生成系(以非專利文獻28記載之方法調製)，開始代謝反應。於規定之時間添加0.1%甲酸乙腈/水(3：1)，將反應停止。

(3)藉由LC/MS之分析

將反應停止後之試樣進行離心分離(1400g,20min)後將上清液以LC/MS(UPLC-SQD(waters))測定，算出未變化體之殘存率。

B.於肝細胞之代謝安定性 (1)調製添加溶液

添加溶液為將被驗物質之10mM DMSO溶液以乙腈稀釋20倍調製之。

(2)使用肝細胞之代謝安定性試驗

使用William's Medium E(SIGMA；W1878)，將人類及動物種之凍結保存肝細胞(BIOIVT；Human(IVT-X008000),Rat(IVT-M00005),Monkey(IVT-M00305),Dog(IVT-M00205))作成細胞懸濁液使成為1x10⁶cells/mL，添加於96孔盤。接著，將調製之被驗物質之添加溶液於反應系中添加1%，開始代謝反應。於規定之時間添加0.1%甲酸乙腈，將反應停止。

(3)藉由LC/MS之分析

結果表示於以下之表。

[試驗例3] 測定CYP3A4誘導能力

CYP3A4誘導能力為使用Nuclear Receptor Activation Kits(PURACYP；DPX2-96-002)，依照附帶之計劃書進行評估。

以下之實驗為使用附帶於Nuclear Receptor Activation Kits(PURACYP；DPX2-96-002)者。

具體之測定方法為如下所述。將DPX2細胞播種於96孔盤，於CO₂保溫箱培養24小時。於添加培養基中添加試驗化合物(1,3,10mM)及為陽性對照之立汎黴素(Rifampicin)(10mM)之DMSO溶液0.1%，調製化合物添加培養基。從播種起24小時後以抽氣器吸引除去96孔盤之培養基，添加調製之化合物添加培養基。從添加化合物起48小時後添加CellTiter-Fluor，於CO₂保溫箱保溫1小時後藉由螢光測定，測定細胞生存率。再者，添加ONE-Glo，於CO₂保溫箱保溫5分鐘後藉由發光測定，測定報導活性。以獲得之報導活性為基礎，藉由與DMSO對照試樣比較，算出誘導倍率。又，陽性對照之%值以下述之公式算出。

結果表示於以下之表。

[試驗例4] 測定溶解度

於96孔盤添加被驗物質之10mM DMSO溶液10μL後使用離心蒸發器(Genevac；HT-4X)使濃縮乾固。於乾固後之孔中添加各種溶劑(JP1,JP2,FaSSIF,FeSSIF)(參照非專利文獻29及30)200μL，於室溫，以2500rpm振盪4小時。之後，從使用多螢幕PCF過濾器(MERCK Millipore；MSSLBPC)分二次過濾(50,100μL)之試樣中之第2次過濾之試樣採取40μL，添加乙腈300μL後進行離心分離(4000g,5min)，將上清液之一部分以LC-UV/MS(UPLC-Premier(waters))測定。

結果表示於以下之表。

[試驗例5] 大鼠藥物動力學(PK)試驗及血漿中濃度之測定 (1)大鼠PK試驗

於雄性大鼠(7週齡)投予被驗物質(0.3mg/kg)之DMSO溶液(0.1mL/kg)，於規定之時間(5,10,15,30分鐘，1,2,4,8,25小時)進行採血。將採血後之試樣藉由離心分離(11000g,5min)採取血漿。

(2)血漿中濃度測定

對於(1)中獲得之血漿試樣添加2倍量之乙腈/水混液(9：1)，除蛋白質萃取。將萃取後之試樣離心分離(11000g,5min)，將上清液以LC/MSMS(Nexera(Shimadzu)-QTrap5500(AB SCIEX))測定。同時亦測定檢量線，算出血漿中濃度。

從血漿中濃度推移中消失相之2時點算出消失速度定數(Kel)，使用消失速度定數計算半衰期(T1/2)。

Kel=-(ln Conc1-ln Conc2)/(t1-t2)

T1/2=0.693/Kel

結果表示於以下之表。

[試驗例6] 化合物對於抗原致敏小鼠中血漿中IL-17產生之作用

使用抗原致敏小鼠，評估藉由化合物對於血漿中IL-17產生之作用。抗原致敏以非專利文獻31為基準實施。實驗動物使用9週齡之雌性C57BL/6J小鼠(日本Charles River(股)公司製造)。

於小鼠，將3mg/mL之髓鞘少突膠質細胞糖蛋白肽(MOG；ANASPEC公司製造)及4mg/mL之完全弗氏佐劑(Complete Freund's adjuvant)(CFA；Chondrex公司製造)以等比混合之乳劑以50μL/site之投予量於兩側腹部皮下投予(第1日)。將1μg/mL之百日咳毒素(PTX；List Biological Laboratories公司製造)以200μL/隻之投予量腹腔內投予(第1日及第3日)。於第8日實施採血。

投予為從乳劑投予日起1日1次，投予7日(第1至7日)，於Normal群(正常小鼠)及載劑(Vehicle)群(抗原致敏小鼠)，將0.5%(w/v)甲基纖維素(MC)於化合物投予群以懸濁於0.5%(w/v)MC 0.03mg/mL或0.1mg/mL之化合物各個以10mL/kg之投予量經口投予。

將血液離心分離後使用Quantikine(註冊商標)Mouse IL-17 ELISA Kit(R&D systems,Inc.)測定血漿中IL-17濃度。

將Normal群及載體群之IL-17濃度分別作成0%及100%，藉由以下之數式算出化合物投予群IL-17濃度之比(對照之%)。

[數2]對照之%=(a-b)/(c-b)×100

a：化合物投予群之IL-17濃度

b：Normal群之IL-17濃度

c：載劑群之IL-17濃度

之後，藉由以下之數式算出使IL-17濃度降低50%之化合物用量(ED₅₀值)。

[數3]ED₅₀值=10^{{log(A/B)×(50-D)/(C-D)+log(B)}}；惟，於D=50之情況，ED₅₀=B，於D>50之情況，ED₅₀>B。

A：低用量群之用量(亦即，0.3mg/kg)

B：高用量群之用量(亦即，1mg/kg)

C：低用量群之對照之%

D：高用量群之對照之%

其結果表示於以下之表。

[試驗例7] 化合物對於正常小鼠中藉由細胞激素刺激，血漿中產生IL-17之作用

使用正常小鼠，評估藉由化合物對於血漿中IL-17產生之作用。評估以非專利文獻32為基準實施。實驗動物使用9週齡之雌性C57BL/6J小鼠(日本Charles River(股)公司製造)。

所有之群將最終濃度各個調製成1.5μg/mL之Recombinant Mouse IL-1 beta/IL-1F2 Protein(R&D systems,INC.)及Recombinant Mouse IL-23 Protein(R&D systems,INC.)混合溶液以200μL/隻之投予量尾靜脈內投予。採血於細胞激素溶液投予2小時後實施。

投予為於細胞激素溶液投予之28小時前，於載體群將0.5%(w/v)甲基纖維素(MC)、於化合物投予群將懸濁於0.5%(w/v)MC之0.1mg/mL之化合物各個以0.2mL/隻之投予量單次經口投予。

將血液離心分離後使用Quantikine(登錄商標)Mouse IL-17 ELISA Kit(R&D systems,Inc.)測定血漿中IL-17濃度。

將載體群之IL-17濃度作為100%，藉由以下之數式算出化合物投予群對於載體群之IL-17濃度比。其結果表示於以下之表。

[數4]%=a/b×100

a：化合物投予群之IL-17濃度

b：載體群之IL-17濃度

[製劑例]

本發明之製劑例可列舉例如下述之製劑處方。惟，本發明不只限於該等製劑例。

製劑例1：膠囊之製造

將成分1)、2)、3)及4)混合，填充於明膠膠囊中。

製劑例2：錠劑之製造

將成分1)、2)及3)全量及30g之4)以水練合，真空乾燥後進行整粒。將14g之4)及1g之5)混合於該整粒粉末中，藉由打錠機進行打錠。經由該等操作，獲得每1錠含有實施例1之化合物10mg之錠劑1000錠。

[產業上之利用可能性]

式(1)或式(2)之化合物或其製藥上容許之鹽期待可用於治療或預防自體免疫疾病、過敏性疾病、乾眼症、纖維症、癌、代謝性疾病、缺血、心肌症、高血壓及牙周病。

Claims

一種式(1)或式(2)之化合物或其製藥上容許之鹽，
如申請專利範圍第1項所述之化合物或其製藥上容許之鹽，其中，該化合物為式(1)之化合物：
如申請專利範圍第1項所述之化合物或其製藥上容許之鹽，其中，該化合物為式(2)之化合物：
一種醫藥組成物，係含有如申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽及製藥上容許之載體。
一種ROR γ拮抗劑，係含有如申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽。
一種治療劑或預防劑，係含有如申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽，且為治療或預防由自體免疫疾病、過敏性疾病、乾眼症、纖維症、癌、代謝性疾病、缺血、心肌症、高血壓及牙周病構成之群組選擇之疾病者。
一種ROR γ拮抗之方法，係包含對哺乳動物投予治療上有效量之如申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽。
一種預防或治療之方法，係包含對哺乳動物投予治療上有效量之如申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽，且為治療或預防由自體免疫疾病、過敏性疾病、乾眼症、纖維症、癌、代謝性疾病、缺血、心肌症、高血壓及牙周病構成群組選擇之疾病者。
一種申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽的用途，其用於製造ROR γ拮抗劑。
一種申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽的用途，其用於製造由自體免疫疾病、過敏性疾病、乾眼症、纖維症、癌、代謝性疾病、缺血、心肌症、高血壓及牙周病構成之群組選擇之疾病之治療劑或預防劑。
如申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽，其使用作為ROR γ拮抗劑。
如申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述之化合物或其製藥上容許之鹽，其使用作為由自體免疫疾病、過敏性疾病、乾眼症、纖維症、癌、代謝性疾病、缺血、心肌症、高血壓及牙周病構成群組選擇之疾病之治療劑或預防劑。