TW201841631A

TW201841631A - 抗炎症劑

Info

Publication number: TW201841631A
Application number: TW107112457A
Authority: TW
Inventors: 二井卓哉; 萩彰文; 坪谷好惠
Original assignee: 日商大塚製藥工廠股份有限公司
Priority date: 2017-04-19
Filing date: 2018-04-11
Publication date: 2018-12-01
Also published as: AU2018256060B2; KR20190123780A; CA3058592C; ES2956040T3; AU2018256060A1; EP3628314A4; CA3058592A1; JPWO2018193904A1; JP6802365B2; EP3628314A1; SG11201908629WA; TWI675658B; WO2018193904A1; CN110494132A; KR102253831B1; RU2738845C1; PH12019550207A1; EP3628314B1; US11229615B2; US20210121417A1

Abstract

本發明的課題是提供一種可用來做為新型抗炎症劑的組合物。藉由使用包含奧蘭西丁（oranexidine）或其藥理學上可接受的鹽的組合物，可以改善及/或預防口內炎、口腔黏膜炎、牙齦炎、肺炎等炎症。本發明的組合物較佳為更包含泊洛沙姆，是由聚氧丙烯鏈（POP）和夾著該POP的兩個聚氧乙烯鏈（POE）所構成的嵌段共聚物。

Description

抗炎症劑

本發明是關於一種包含將奧蘭西丁或其藥理學上可接受的鹽做為有效成分的抗炎症劑。

奧蘭西丁是具有化學名為1-（3,4-二氯芐基）-5-辛基雙胍的高殺菌活性的化合物。其葡萄糖酸鹽，即奧蘭西丁葡萄糖酸鹽具有廣泛的殺菌光譜，在短時間內出現殺菌效果，且其活性長時間持續。此外，奧蘭西丁葡萄糖酸鹽的水溶液具有高穩定性，可以長時間保存，且對皮膚的刺激性與毒性低，在安全性方面也優越。再者，因為奧蘭西丁葡萄糖酸鹽的水溶液在顏色、氣味及味道方面沒有問題，所以容易配製（專利文獻1）。因此，奧蘭西丁葡萄糖酸鹽主要用於手術部位（手術區）的皮膚消毒。

但是，奧蘭西丁或其鹽表示出抗炎症作用，以往並不知道。再者，因為奧蘭西丁葡萄糖酸鹽對黏膜具有刺激性，所以奧蘭西丁葡萄糖酸鹽難以適用於口腔黏膜等黏膜。 [先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1] 特開2005-289959公報

[ 發明所欲解決的問題 ] 本發明的課題在於提供一種可做為嶄新的抗炎症劑來使用的組合物。

[ 解決問題的手段 ] 本案發明人們為了解決前述課題，積極反覆研究，結果意外地發現，奧蘭西丁及其鹽具有抗炎症作用。再者，發現藉由使用包含奧蘭西丁葡萄糖酸鹽以及由聚氧丙烯鏈（POP）與夾著該POP的兩個聚氧乙烯鏈（POE）所構成的嵌段共聚物泊洛沙姆（Poloxamer）的組合物，可將奧蘭西丁葡萄糖酸鹽適用於口腔黏膜等黏膜，而完成本發明。

也就是說，本發明如以下所述。（1）一種用於改善及/或預防炎症的組合物，包含奧蘭西丁（Oranexidine）或其藥理學上可接受的鹽。（2）如上述（1）所述的組合物，其中奧蘭西丁或其藥理學上可接受的鹽為奧蘭西丁葡萄糖酸鹽。（3）如（1）或（2）所述的組合物，更包含泊洛沙姆（Poloxamer），是由聚氧丙烯鏈（POP）與夾著該POP的兩個聚氧乙烯鏈（POE）所構成的嵌段共聚物。（4）如（1）～（3）中任一所述的組合物，炎症是選自口內炎、口腔黏膜炎、牙齦炎及肺炎。（5）如（1）～（4）中任一所述的組合物，其中炎症是因治療癌症導致的口腔黏膜炎；該組合物更包括： 0.01～1.5％（W/V）的奧蘭西丁葡萄糖酸鹽；以及泊洛沙姆（Poloxamer），是由聚氧丙烯鏈（POP）與夾著該POP的兩個聚氧乙烯鏈（POE）所構成的嵌段共聚物。（6）如（3）～（5）中任一所述的組合物，其中泊洛沙姆選自聚氧乙烯（42）聚氧丙烯（67）乙二醇（Pluronic P-123）、聚氧乙烯（54）聚氧丙烯（39）乙二醇（Pluronic P-85）以及聚氧乙烯（196）聚氧丙烯（67）乙二醇（Pluronic F-127）。（7）如（6）所述的組合物，其中泊洛沙姆為聚氧乙烯（42）聚氧丙烯（67）乙二醇（Pluronic P-123）。（8）如（1）～（7）項中任一所述的組合物，其中奧蘭西丁葡萄糖酸鹽的濃度為0.05～0.5％（W/V）。（9）如（3）～（8）中任一所述的組合物，其中泊洛沙姆的濃度為0.1～5.0％（W/V）。（10）如（1）～（9）中任一所述的組合物為液體劑或漱口劑。（11）如（5）～（10）中任一所述的組合物，其中癌症治療為化學療法、放射線治療或同時併用化學療法與放射線治療的療法。

又，做為本發明的另一個實施形態，可舉出藉由對需要改善或預防（治療）炎症的患者施用本發明的用於改善及/或預防的炎症的組合物，來改善或預防（治療）炎症的方法、藉由對需要改善或預防（治療）因癌症治療導致口腔黏膜炎的患者施用本發明的用於改善及/或預防的因癌症治療導致口腔黏膜炎的組合物，來改善或預防（治療）因癌症治療導致口腔黏膜炎的方法、包含用於改善及/或預防的炎症的奧蘭西丁或其藥理學上可接受的鹽的組合物或用於改善或預防（治療）因癌症治療導致口腔黏膜炎的包含0.01～1.5％（W/V）的奧蘭西丁葡萄糖酸鹽以及由聚氧丙烯鏈（POP）與夾著該POP的兩個聚氧乙烯鏈（POE）所構成的嵌段共聚物泊洛沙姆的組合物、用來製備上述本發明的改善及/或預防的炎症的組合物的奧蘭西丁或其藥理學上可接受的鹽、用來製備上述本發明的改善及/或預防的因癌症治療導致口腔黏膜炎的組合物的0.01～1.5％（W/V）的奧蘭西丁葡萄糖酸鹽以及由聚氧丙烯鏈（POP）與夾著該POP的兩個聚氧乙烯鏈（POE）所構成的嵌段共聚物泊洛沙姆的使用。[ 發明效果 ]

本發明提供一種嶄新的用於改善及/或預防炎症的組合物。本發明的組合物可適用於口內炎、口腔黏膜炎、牙齦炎、肺炎等廣泛的炎症。再者，本發明的用於改善及/或預防炎症的組合物（抗炎症劑），可改善及/或預防接受癌症的化學療法、放射線治療或併用化學療法與放射線治療的療法的患者的口腔黏膜炎，此外，可以防止患者的溝通功能的阻礙、睡眠障礙、疼痛、吞嚥障礙（飲食攝取量減少）等QOL的惡化、或防止對化學療法、放射線治療的遵守劑量的阻礙。

本發明的組合物是包含奧蘭西丁或其藥理學上可接受的鹽的用於改善及/或預防炎症的組合物。奧蘭西丁或其藥理學上可接受的鹽，可使用藥理學上已知者，例如鹽酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、檸檬酸鹽、葡萄糖酸鹽、乳酸鹽、醋酸鹽、葡庚糖酸鹽、酒石酸鹽等，但從在水中的溶解性的觀點來看，較佳為奧蘭西丁葡萄糖酸鹽。

在本發明的組合物中，奧蘭西丁也可以包含能表示抗炎症作用的濃度，以奧蘭西丁葡萄糖酸鹽換算為0.001～20％（W/V），較佳為0.005～15％（W/V），更佳為0.01～10％（W/V），再更佳為0.1～5％（W/V）。又，當將本發明的組合物適用於口腔黏膜等黏膜時，奧蘭西丁的濃度以奧蘭西丁葡萄糖酸鹽換算較佳為0.01～1.5％（W/V），更佳為0.05～0.5％（W/V），再更佳為0.1～0.3％（W/V）。再者，在將本發明的組合物適用於口腔黏膜時，若奧蘭西丁葡萄糖酸鹽的濃度低於0.01％（W/V），則不能充分獲得口腔細菌的殺菌效果，若超過1.5％（W/V），因為對口腔黏膜的刺激變得太強，是不佳的。

本發明的組合物為了減少對適用部位的刺激，可以更包含一種或兩種以上的泊洛沙姆。在此泊洛沙姆，包含聚氧丙烯鏈（POP）和夾著該POP的兩個聚氧乙烯鏈（POE）的嵌段共聚物，若能減少對適用部位的刺激，則沒有特別的限制，可例示選自聚氧乙烯（42）聚氧丙烯（67）乙二醇（Pluronic P-123）、聚氧乙烯（54）聚氧丙烯（39）乙二醇（Pluronic P-85）、聚氧乙烯（196）聚氧丙烯（67）乙二醇（Pluronic F-127）的一種或兩種以上的泊洛沙姆為較佳，其中，聚氧乙烯（42）聚氧丙烯（67）乙二醇（Pluronic P-123）、聚氧乙烯（3）聚氧丙烯（17）乙二醇（Pluronic L-31）、聚氧乙烯（20）聚氧丙烯（20）乙二醇（Pluronic L-44）、聚氧乙烯（120）聚氧丙烯（40）乙二醇（Pluronic F-87）、以及聚氧乙烯（160）聚氧丙烯（30）乙二醇（Pluronic F-68）。

即使在上述泊洛沙姆中，較佳為選自聚氧乙烯（42）聚氧丙烯（67）乙二醇（Pluronic P-123）、聚氧乙烯（54）聚氧丙烯（39）乙二醇（Pluronic P-85）以及聚氧乙烯（196）聚氧丙烯（67）乙二醇（Pluronic F-127）的一種或兩種以上的泊洛沙姆，其中聚氧乙烯（42）聚氧丙烯（67）乙二醇（Pluronic P-123）更佳。

做為泊洛沙姆的濃度沒有特別限制，但為0.1～5.0％（W/V），較佳為0.1～4.0％（W/V），更佳為0.1～3.0（W/V），再更佳為0.1～2.0（W/V），最佳為0.1～1.5％（W/V）。奧蘭西丁葡萄糖酸鹽與泊洛沙姆的濃度比，較佳為1：2～1：20，更佳為1：5～1：10。在將本發明的組合物適用於口腔黏膜時，在奧蘭西丁葡萄糖酸鹽濃度0.3％（W/V）以上的高濃度範圍內，因為奧蘭西丁葡萄糖酸鹽對口腔黏膜的刺激更強，所以較佳為可抑制奧蘭西丁葡萄糖酸鹽的刺激（過度角化）。

在本說明書中，「炎症」是指由於自身免疫性疾病等內部因素，或細菌病毒感染、外傷、物理刺激（熱、冷、輻射、電等）、化學物質等外部因素，產生發紅、熱感、腫脹、疼痛的跡象。做為在本發明中的炎症，若是可適用本發明的組合物的炎症，並沒有特別限制，但可舉出較佳涉及類鐸受體的炎症，更佳為細菌感染導致的炎症。又，做為炎症部位，可舉出大腦、眼睛、氣管、血管、肺、肝、心臟、胰腺、胃、腸、腸繫膜、腎臟、皮膚、鼻黏膜、口腔黏膜、齒齦或關節，具體來說，可舉出腦炎、支氣管炎、血管炎、肺炎、肝炎、心肌炎、胰腺炎、腸炎、胃炎、腹膜炎、腎炎、口腔炎、口腔黏膜炎、齒齦炎、關節炎、因局部缺血後再灌注損傷的炎症，因移植後免疫排斥的炎症、燒傷、因多器官功能衰竭的炎症、手術後產生的炎症、以及因動脈硬化症的炎症等，在其中也可較佳地舉出口腔炎、口腔黏膜炎、牙齦炎及肺炎。在本說明書中的口腔黏膜炎是指因癌症治療產生於口腔黏膜的炎症，口腔炎是指未進行癌症治療下產生於口腔黏膜的炎症。又，雖然本發明的組合物可以是具有用於改善及/或預防因癌症治療導致的口腔黏膜炎的特定用途的組合物，但在一態樣中，本發明排除了具有用於改善及/或預防因癌症治療導致的口腔黏膜炎的特定用途的組合物。

本發明的組合物可以適用於炎症部位的皮膚或口腔黏膜、牙齦、胃腸道、氣管、肺等黏膜。做為施用方法，可舉出注射（靜脈內、肌肉內、皮下、皮內、腹腔內等）、口服、經皮、吸入、口腔內塗佈、塗佈至牙齦、漱口等，可對應這些施用方法適當地製劑化。又，可選擇的劑形，並沒有特別限定，可從例如注射劑（溶液、懸浮液、乳液、使用時溶解用的固體製劑等）、片劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑、液劑、漱口劑、脂化劑、軟膏劑、凝膠劑、外用粉末劑、噴霧劑、吸入粉末劑等廣泛選擇。又，在這些製劑調製中，可使用慣用的賦形劑、穩定劑、結合劑、潤滑劑、乳化劑、滲透壓調節劑、pH調節劑、其它著色劑、崩解劑等通常使用於醫藥的成分。

當本發明的組合物適用於口腔內時，也可以是適用於口腔內的任何劑形，較佳為液劑、漱口劑。又，也可以是甜食類、糖果類、軟糖類、口含錠類、膠類等在口中逐漸溶解或崩解的固體組合物。再者，根據需要，更可以含有以賦予風味或著色目的的各種添加物。做為賦予風味目的的添加物，可舉出例如合成香料、天然香料、阿斯巴甜、乙醯磺胺酸鉀、蔗糖素、阿力甜、紐甜、甘草萃取物（甘草酸苷）、糖精、糖精鈉、甜菊萃取物、甜菊粉末等甜味劑。做為著色目的的添加物，可舉出焦糖、天然著色劑、合成著色劑。又，本發明的組合物，也可以含有乳化劑（甘油脂肪酸酯、脫水山梨醇脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、卵磷脂等）、穩定劑、防腐劑等添加物。這些添加劑可以單獨使用，也可以混合兩種以上使用。

在本發明的組合物做為液劑或漱口劑來給藥時，每次的劑量可以根據炎症產生的部位或嚴重程度來任意決定，但可舉出1～100mL，較佳為2～50mL，更佳為5～40mL，最佳為10～30mL。

做為施用本發明的組合物的時期，可根據炎症產生的部位、嚴重程度或炎症的改善程度來任意決定，但可舉出在餐後、起床後或睡前。或者，可以2～8小時的間隔，較佳為4～6小時的間隔給藥。又，本發明的組合物，藉由對手術前的患者或口腔護理後的患者給藥，可以預防炎症。

做為本發明的組合物的施用期間，可根據炎症的改善程度任意決定，但可列舉為1週～3個月，較佳為1週～2個月，更佳為1週～1個月，最佳為1～2週。

在本發明中，做為癌症治療，可舉出癌症化學療法、放射線治療或同時併用化學療法與放射線治療的療法。癌症化學療法是指以抗癌藥物進行的所有癌症治療。做為使用於本發明的抗癌劑，可舉出易罹患口腔黏膜炎的氟尿嘧啶（5-FU）、Tegafur/Gimeracil/Oteracil（愛斯萬、S-1）、Tegafur/Uracil（友復、UFT）等氟化嘧啶抗代謝物，甲氨蝶呤等葉酸抗代謝物，柔紅黴素、阿黴素、表阿黴素、博萊黴素、培洛黴素、放線菌黴素D等抗腫瘤抗生素，紫杉醇、多西紫杉醇、長春新鹼、依托泊苷等植物生物鹼，順鉑、卡鉑、白藜蘆醇等鉑製劑。特別是，可適當地例示5-FU等氟化嘧啶抗代謝物。這些抗腫瘤劑可以單獨使用，也可以將兩種以上併用。

在本發明中，放射線治療是以放射線照射惡性腫瘤部來抑制癌細胞增殖為目的的治療，做為使用於治療的放射線，列舉X光、電子束等。又，同時併用化學療法與放射線治療的療法是指藉由併用放射線療法（癌症的局部療法）與抗癌劑來增強放射線效果的治療法。放射線治療的對象部位並沒有特別限制，但可以例示頭頸部，特別是對口腔內或咽頭部的放射線治療。

以下，根據實施例更具體地說明本發明，但本發明的技術範圍並不受限於這些例示。[ 實施例 1]

1.使用食蟹猴進行口腔內殺菌效力實驗在本實驗中，併用簡單細菌計數器與培養法，比較、研究實驗物質（做為殺菌消毒劑的0.1％（w/v）奧蘭西丁葡萄糖酸鹽及0.47％聚維酮碘，做為陰性對照藥的生理鹽水）對食蟹猴口腔內細菌的殺菌效力。

1-1 實驗物質受試物質是將1.5％的Olanedine（註冊商標）消毒液（以下稱為「1.5％OPB」等，包含1.508％（w/v）的奧蘭西丁葡萄糖酸鹽的液體，大塚製藥工廠股份有限公司製造）稀釋15倍，製備成0.1％（w/v）的奧蘭西丁葡萄糖酸鹽（0.1％OPB）。將對照物質7％的碘漱口液（以下稱為「7％PVP-I」等，Meiji Seika Pharma Co., Ltd製造）稀釋15倍（0.47％PVP-1），生理食鹽水（Saline，大塚製藥工廠股份有限公司）維持原樣使用。

1-2 實驗動物使用了在使用時年齡為2歲11個月～3歲11個月的食蟹猴（雄性，柬埔寨產，由Eib Bioscience Co., Ltd製造）。

1-2-1 群的結構將每隻動物的口腔內做為實驗部位。因為使用了9隻動物，塗佈0.1％OPB、0.47％PVP-I以及生理食鹽水，所以每群的實驗部位為3處。在塗佈實驗物質前、塗佈10分鐘後、6小時後及24小時後，共採取4次細菌。

1-2-2 動物編號及樣本編號動物編號及樣本編號如下表1所示。此外，測量動物編號1～3中的基線細菌的數量，依照細菌數量的降序以生理食鹽水、0.1％OPB、0.47％PVP-I進行實驗。同樣地，動物編號4～6依照細菌數量的降序以0.1％OPB、0.47％PVP-I、生理食鹽水進行實驗，動物編號7～9依照細菌數量的降序以0.47％PVP-I、生理食鹽水、0.1％OPB進行實驗。

[表1]

1-3 試驗方法

1-3-1 麻醉對於食蟹猴，將氯胺酮（做為50mg/mL氯胺酮，Daiichi Sankyo Propharma Co., Ltd製造）與2％賽拉嗪（2.0g/100mL，做為甲苯噻嗪，由Bayer Pharmaceutical Co., Ltd製造）的2：1的混合液，以體重1kg肌肉注射0.5mL，來全身麻醉。

1-3-2 塗佈 [1]將100mL實驗物質倒入含有兩個小鼠純口腔護理海綿（由川本產業股份有限公司製造）的容器（250mL，由Corning 股份有限公司製造）中。 [2]將海綿內的空氣排掉並充分浸泡。 [3]將其塗佈於口腔約2分鐘。

1-3-3 採取細菌1 [1]以消毒手套用無菌棉棒，從猴子口腔內採取細菌（口腔內的兩側壁來回摩擦兩次）。 [2]將棉棒放入5mL取樣液（10％（w/v）聚山梨醇酯80、0.04％（w/v）磷酸二氫鉀、0.1％（w/v）Triton X-100、1.01％（w/v）無水磷酸氫鈉、2％（w/v）大豆卵磷脂、5％（w/v）聚氧乙烯（20）十六烷基醚、H7.8-7.9）。

1-3-4 採取細菌2 [1]將測量消耗品（DU-AC02NP-H，由Panasonic Healthcare公司製造）的棉棒安裝到定壓檢體採取器具（DU-AE01NT-H，由Panasonic Healthcare公司製造）。 [2]將棉棒以固定壓力抵住猴子的舌頭上，並以約1厘米的間隔摩擦約三次。

1-3-5 用平板培養法測量口腔內細菌數以新GMP微生物測試方法2），食品衛生檢驗指南3）為參考，進行瓊脂傾注平板法及瓊脂平板表面塗抹法。 [1]劇烈攪拌在1-3-3回收了細菌的取樣液，將其做為回收菌液。 [2]將0.5mL回收菌液稀釋10倍，並以同樣的操作反覆稀釋，以製備10倍稀釋系列（5階段）。 [3]將1mL回收菌液及階段稀釋的稀釋液分別注入培養皿。添加約15mL在約47℃下保存測量培養基（TSA +）至此，來製作傾注平板。又，將100μ L回收菌液及階段稀釋的稀釋液分別注入到血液瓊脂培養基及MS瓊脂培養基，並使用塗抹棒塗抹表面。 [4]在測量培養基（TSA +）固化後，將傾注平板倒置，並培養至可計算菌落數為止。又，將表面塗抹平板倒置，並在厭氧條件下培養至可計算菌落數為止。 [5]使用菌落計數器（DC-3，AS ONE Corporation.）計算在傾注平板及表面塗抹平板上生長的菌落數。菌落數太大而無法區分菌落間的傾注平板，做為TNTC（too numerous to count）而不計數。

1-3-6 以細菌計數器測量口腔內的細菌數 [1]打開細菌計數器（DU-AA 01，由Panasonic Healthcare公司製造）的蓋。 [2]將測量消耗品的感測器晶片安裝到細菌計數器。 [3]將測量消耗品的一次性杯放入細菌計數器中。 [4]將採取細菌的棉棒放在一次性杯的中央。 [5]關閉細菌計數器的蓋。

1-4 結果

1-4-1 用平板培養法測量口腔內細菌數

（1）好氧性培養結果表示在第1圖。基線口腔內細菌數為1.73×10⁵ ～4.20×10⁶ 。塗佈生理食鹽水（saline）後的口腔內細菌數幾乎不變。塗佈實驗物質10分鐘後的生菌數，在生理食鹽水、0.1％OPB及0.47％PVP-I分別為6.48×10⁵ CFU、4.65×10³ CFU及2.35×10⁴ CFU，在塗佈6小時候分別為1.66×10⁶ CFU、1.47×10³ CFU及4.93×10⁵ CFU，24小時後分別為4.67×10⁵ CFU、5.58×10⁴ CFU及1.22×10⁶ CFU。

（2）在鏈球菌選擇培養基中培養結果表示在第2圖。基線口腔內細菌數為2.85×10⁵ ～7.60×10⁷ 。塗佈生理食鹽水後的口腔內細菌數幾乎不變。塗佈實驗物質10分鐘後的生菌數在生理食鹽水、0.1％OPB及0.47％PVP-I分別為1.26×10⁶ CFU、5.97×10³ CFU及7.33×10⁴ CFU，塗佈後6小時分別為5.51×10⁶ CFU、2.79×10⁴ CFU及2.20×10⁶ CFU，24小時後分別為1.71×10⁶ CFU、4.30×10⁵ CFU及7.81×10⁶ CFU。

（3）厭氧性培養結果表示在第3圖。基線口腔內細菌數為2.45×10⁵ ～1.65×10⁷ 。塗佈生理食鹽水後的口腔內細菌數幾乎不變。塗佈實驗物質10分鐘後的生菌數在生理食鹽水、0.1％OPB及0.47％PVP-I分別為2.70×10⁶ CFU、1.33×10⁴ CFU及7.33×10⁴ CFU的鹽水，塗佈6小時後分別為3.22×10⁶ CFU、1.38×10⁴ CFU及1.80×10⁶ CFU，24小時後分別為1.71×10⁶ CFU、3.04×10⁵ CFU及1.40×10⁶ CFU。

1-4-2 以細菌計數器測量口腔內細菌數結果表示在第4圖。基線口腔內細菌計數為1.29×10⁶ ～＞1.00×10⁸ 。塗佈實驗物質10分鐘後的生菌數在生理食鹽水、0.1％OPB及0.47％PVP-I分別為2.84×10⁶ CFU、＜3.49×10⁵ CFU及5.09×10⁵ CFU，塗佈6小時後分別為2.04×10⁷ CFU、5.58×10⁵ CFU及8.98×10⁶ CFU，24小時後分別為4.10×10⁷ CFU、3.14×10⁷ CFU及3.14×10⁷ CFU。

在以平板培養測量細菌計數或以細菌計數器測量細菌數，獲得了類似的結果。也就是說，在0.1％OPB群，塗佈6小時後細菌數保持低值，但在0.47％PVP-I群只在塗佈10分鐘後表示效果。然而，兩群都在24小時後恢復細菌數。0.47％PVP-I群的持續性不被承認是因為PVP-I易於受到口腔內的有機物質影響而滅少活性。口腔內殺菌消毒效果被認為在0.1％OPB具有優越持續性。[ 實施例 2]

2.使用倉鼠的口腔內殺菌實驗1 在本實驗中，目的是將對正常倉鼠口腔內黏膜的漱口劑（殺菌消毒劑）的殺菌效力與其他藥劑比較研究。為了研究殺菌活性的持續性，在以實驗物質漱口後～24小時為止的時間點（前置、緊接著、8小時後、24小時後），使用細菌計數器及培養法計測細菌數。

2-1 實驗物質將測試物質和對照物質合併做為實驗物質。

2-1-1 測試物質1 名稱： 0.1％OPB-1 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-123 1.0 w/v％

2-1-2 測試物質2 名稱： 0.1％OPB-2 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-123 1.0 w/v％ Lipidure（註冊商標） 1.0 w/v％

2-1-3 對照物質1 名稱/縮寫：基劑/Base 成分： Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-123 1.0 w/v％

2-1-4 對照物質2 名稱/縮寫： Peridex（註冊商標）/ 0.12％CHG 成分：葡萄糖酸洛赫西定 0.12 w/v％

2-1-5 對照物質3 名稱/縮寫：碘漱口液0.47％/0.47％PVP-I 組成：碘漱口液7％（7％PVP-I，Meiji Seika Pharma Co., Ltd）的15倍稀釋液

2-2 使用的動物到貨時6週齡的倉鼠，Slc:Syrian，使用雄性，並以各群4隻進行實驗。

2-3 實驗方法

2-3-1 麻醉進行氣體麻醉[引入麻醉：空氣3.0L/min，3％異氟醚（MYLAN PHARMACEUTICAL CO., LTD製造），調整適當濃度持續麻醉]。

2-3-2 實驗物質施用在麻醉下，將倉鼠以仰臥位固定，並將1mL實驗物質注射到一個頰囊中。30秒後，排出實驗物質，用無菌棉棒吸取頰囊內多餘的實驗物質。

2-3-3 採取細菌在施用實驗物質前、0小時、8小時、24小時的共4個時間點，在麻醉下使用無菌棉棒從兩頰囊內採取細菌。採取後，將棉棒浸漬於5mL SCDLP培養基並攪拌，做為用於計算細菌數的樣本。

2-3-4 測量存活細菌數以新GMP微生物測試方法1），食品衛生檢驗指南2）為參考，進行瓊脂傾注平板法。 [1]採取500μ L用於計算細菌數的樣本，並使用4.5mL的稀釋液製作10¹ 倍～10⁶ 倍的10倍稀釋系列。 [2]將用於計算細菌數的樣本原液及1mL各稀釋菌液分別注入無菌培養皿。 [3]向上述培養皿，立即分別注入在設定為約47℃的恆溫槽中保溫的15mL測量培養基（TSA +）。 [4]在測量培養基固化後，將傾注平板在培養箱內倒置，並在35℃培養至可計數菌落為止（約2日）。 [5]培養後，在傾注平板增殖的菌落以目視計算數量。菌落數太大而無法區分菌落間的傾注平板，做為TNTC（too numerous to count）而不計數。 [6]通過將菌落數乘以稀釋倍數來計算存活細菌的數量。

2-4 結果結果表示在第5圖及表2。

[表2] 倉鼠口腔的存活細菌數

施用實驗物質前的口腔內細菌數在各群之間沒有差異。施用實驗物質後的立即殺菌效力為0.1％OPB-1 = 0.1％OPB-2＞0.12％CHG＞0.47％PVP-I＞Base，施用8小時後，0.1％OPB-1 = 0.1％OPB-2 = 0.12％CHG＞ 0.47％PVP-I=Base，24小時後在群間無差異。從上述結果可以看出，口腔內殺菌效力在0.1％OPB與0.12％CHG是相同程度，0.47％PVP-I即效性弱，不認為有持續活性。

在本試驗0.47％PVP-I殺菌活性低的理由被認為與因口腔內蛋白質等導致的失活大幅相關。0.12％CHG被認為是具有與0.1％OPB相同的持續活性的口腔內殺菌消毒劑。[ 實施例 3]

3.使用倉鼠的口腔內殺菌實驗2 在本實驗，目的是研究奧蘭西丁濃度影響對正常倉鼠口腔內黏膜的漱口劑（殺菌消毒劑）的殺菌效力的程度。

3-1 實驗物質將測試物質和對照物質合併做為實驗物質。

3-1-1 測試物質1 名稱： 0.1％OPB-1 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽．．． 0.10 w/v％聚氧乙烯（20）聚氧丙烯（20）乙二醇．．． 0.07 w/v％聚氧乙烯（160）聚氧丙烯（30）乙二醇．．．0.10 w/v％

3-1-2 測試物質2 名稱： 0.1％OPB-2 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽．．． 0.10 w/v％聚氧乙烯（20）聚氧丙烯（20）乙二醇．．． 0.07 w/v％聚氧乙烯（160）聚氧丙烯（30）．．． 1.00 w/v％

3-1-3 測試物質3 名稱： 0.5％OPB-3 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽．．． 0.50 w/v％聚氧乙烯（20）聚氧丙烯（20）．．． 0.36 w/v％聚氧乙烯（160）聚氧丙烯（30）．．．5.00 w/v％

3-1-4 測試物質4 名稱： 1％OPB-2 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽．．． 1.00 w/v％聚氧乙烯（20）聚氧丙烯（20）乙二醇．．． 0.72 w/v％聚氧乙烯（160）聚氧丙烯（30）乙二醇．．．10.00 w/v％

3-1-5 對照物質名稱：基劑組成：聚氧乙烯（20）聚氧丙烯（20）乙二醇．．． 0.07 w/v％聚氧乙烯（160）聚氧丙烯（30）乙二醇．．． 0.10 w/v％

3-2 使用的動物到貨時6週齡的倉鼠，Slc:Syrian，使用雄性，並以各群3隻進行實驗。

3-3 實驗方法

3-3-1 麻醉進行氣體麻醉[引入麻醉：空氣3.0L/min，3％異氟醚（MYLAN PHARMACEUTICAL CO., LTD製造），調整適當濃度持續麻醉]。

3-3-2 實驗物質施用在麻醉下，將倉鼠以仰臥位固定，並將1mL實驗物質注射到一個頰囊中。1分鐘後，排出實驗物質，用無菌棉棒吸取頰囊內多餘的實驗物質。

3-3-3 採取細菌在施用實驗物質前、0小時、1小時、3小時、6小時的共5個時間點，在麻醉下使用無菌棉棒從兩頰囊內採取細菌。採取後的棉棒浸漬於5mL SCDLP培養基後攪拌，做為用於計算細菌數的樣本。

3-3-4 測量存活細菌的數量以與2-3-4相同的方法進行測量存活細菌的數量。

3-4 結果結果表示在第6圖。從結果可知，以0.1％OPB可持續（6小時後）抑制細菌數在低值。又，當OPB濃度為0.5w/v％以上時，持續活性更優異。[ 實施例 4]

4. 使用倉鼠的口腔黏膜刺激性實驗1 在本實驗中，將改變0.1％奧蘭西丁葡萄糖酸鹽的基劑組成的研究製劑重複投放至倉鼠的頰囊14天，比較研究刺激性程度。

4-1 測試物質

4-1-1 測試物質1 名稱： 0.1％OPB-1 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％

4-1-2 測試物質2 名稱： 0.1％OPB-2 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic L-31 1.0 w/v％

4-1-3 測試物質3 名稱： 0.1％OPB-3 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-123 1.0 w/v％

4-1-4 測試物質4 名稱： 0.1％OPB-4 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-85 1.0 w/v％

4-1-5 測試物質5 名稱： 0.1％OPB-5 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic F-127 1.0 w/v％

4-1-6 測試物質6 名稱： 0.1％OPB-6 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.14 w/v％ Pluronic F-68 1.0 w/v％

4-1-7 測試物質7 名稱： 0.1％OPB-7 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％海藻糖 5.0 w/v％

4-2 使用的動物到貨時8週齡的倉鼠，Slc:Syrian，使用雄性，並以各群3隻進行實驗。

4-3 實驗方法

4-3-1 測試物質適用方法

（1）適用量將1mL測試物質適用於右頰囊。

（2）適用方法 [1]以氣體麻醉來引入麻醉[引入麻醉：空氣3.0L/min，3％異氟醚（MYLAN PHARMACEUTICAL CO., LTD製造）]。 [2]在維持麻醉下（適當調整濃度）將動物固定在仰臥位，使用棉棒拉出動物的頰囊，用單手輕輕捏住頰囊。 [3]用生理食鹽水及棉棒除去附著在頰囊黏膜的飼料等異物，使清潔後的頰囊回復原狀。 [4]使用1mL注射器及用於口服給藥的探空儀，將測試物質適用於右頰囊，在左頰囊，將安裝於1mL注射器的空的用於口服給藥的探空儀插入拔去。 [5]適用30秒後，將動物翻轉至俯臥位並排出測試物質，使測試物質不會逆流回呼吸道內。使用棉棒除去口腔內的任何多餘的測試物質。 [6]觀察記錄適用部位的頰黏膜的色調，安裝用於倉鼠的顏色到於動物頸部後，將動物返回到它們的籠子。 [7]上述操作每天重複兩次（早晚），持續14天。

4-3-2 檢查及觀察

（1）一般狀態的觀察關於每群中的所有例，在適用期中，適用實驗物質之前及適用結束時進行一般狀態觀察（第1天～第14天）。又，在適用期結束日的第二天（第15天）也進行了觀察。

（2）體重測量關於各群的所有例，在適用期中，適用實驗物質前測量體重（第1天至第14天）。又，試用期結束日的第二天也進行了測量（第15天）。但是，由於體重計故障，第13、14天沒有測量體重。

（3）適用部位的肉眼觀察方法關於各群的所有例的頰囊，在適用期中，在適用實驗物質前及適用結束時，觀察頰囊黏膜的狀態，記錄評分（第1天〜第14天）。又，在適用期結束後的第二天（24±2小時）也進行了觀察（第15天）。觀察部位是各實驗物質的接觸部位頰黏膜。又，肉眼的觀察評估法是根據以下表3（ISO 10993-10，附件 B.3「表B.2 用於口腔與陰莖反應的分級系統」）所記載的觀察基準及評分，對紅斑及結痂形成的程度給予評分（口腔炎等級）。又，也記錄了其他看到的發現。基於所獲得的觀察結果，針對各群實驗物質，合計各動物黏膜的評分，除以觀察次數及動物數量求得平均值（四捨五入到小數點第一位），做為綜合評估的參考資料。

[表3] 表B.2 用於口腔與陰莖反應的分級系統

（4）病理學檢查關於各動物，在適用期結束日的第二天完成肉眼觀察後，在異氟烷麻醉下放血致死，採取左右頰囊袋，用10％中性緩衝福馬林液固定。根據常規方法製備用於HE染色的標本，實施病理學檢查。又，肉眼觀察評估法是根據（ISO 10993-10，附件 B.3「表B.3 用於口腔、陰莖、直腸及陰道組織反應的顯微鏡檢查的分級系統」）所記載的基準，記錄關於各項上皮、白血球浸潤、血管充血及水腫的發現或等級。此外，也記錄了其他被認定的發現。

（5）綜合評價參考觀察期間的一般狀態及體重變化，以頰黏膜的肉眼觀察結果及病理學觀察結果所得到的各實驗物質的反應程度為基礎，綜合評估各實驗物質對口腔黏膜的影響。

4-4 結果

4-4-1 一般狀態沒有任何動物被認定為異常。

4-4-2 體重結果表示在第7圖。在0.1％OPB-5群，體重幾乎沒有變化。在其他群，平均值逐漸增加。

4-4-3 適用部位的肉眼觀察結果表示在第8圖，最後一天各群的頰囊表示在第9圖的照片1～8。在所有製劑中，幾乎沒有被認為有紅斑等刺激性。然而，在0.1％OPB-1、-2、-6、-7及-8，被認為有白斑症狀（過度角化、增厚等）。另一方面，在0.1％OPB-3、-4及-5被認為完全沒有異常。

4-4-4 組織病理學檢查結果表示在第10圖。根據（ISO 10993-10，附件 B.3「表B.3 用於口腔、陰莖、直腸及陰道組織反應的顯微鏡檢查的分級系統」）所記載的評估基準，以上皮（細胞病變、化生及糜爛）、白血球浸潤、血管充血及水腫的賦予等級，算出各個體的炎症指數及各群的炎症指數的平均。此外，也記錄了評估基準以外的發現。結果，平均值在0.1％OPB-3群被認為沒有變化。在包含0.1％OPB-1群的其他群中，被認為上皮的細胞變性及極小～中等程度的白血球浸潤，炎症指數被評估為最小值1～3。在這些群中，做為評估基準以外的發現，認為有輕微的細胞間水腫及輕微至輕度的過度角化。

從上述結果建議，在0.1％OPB-3使用的基劑Pluronic P-123，特別適合做為奧蘭西丁葡萄糖酸鹽的口服黏膜適用製劑的基劑。此外，在0.1％OPB-4及-5使用的Pluronic P-85及Pluronic F-127也沒有以肉眼觀察看到任何異常，建議可使用做為奧蘭西丁葡萄糖酸鹽的口服黏膜適用製劑的基劑。[ 實施例 5]

5.使用倉鼠進行口腔黏膜刺激性實驗2 在實施例4的刺激性實驗中，建議基劑Pluronic P-123可用作奧蘭西丁葡萄糖酸鹽的口服黏膜適用製劑的基劑。因此，在本實驗中，採用Pluronic P-123做為用來製作無刺激製劑的基劑，隨後研究OPB濃度和基劑濃度。實驗系統將重複對倉鼠頰囊施用，並將時間從2週延長至4週。

5-1 測試物質

5-1-1 測試物質1 名稱： 0.1％OPB-1 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-123 0.50 w/v％

5-1-2 測試物質2 名稱： 0.1％OPB-2 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-123 1.0 w/v％

5-1-3 測試物質3 名稱： 0.1％OPB-3 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-123 0.50 w/v％ Lipidure（註冊商標） 1.0 w/v％

5-1-4 測試物質4 名稱： 0.1％OPB-4 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-123 1.0 w/v％ Lipidure（註冊商標） 1.0 w/v％

5-1-5 測試物質5 名稱： 0.3％OPB-1 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.30 w/v％ Pluronic L-44 0.22 w/v％ Pluronic P-123 1.50 w/v％

5-1-6 測試物質6 名稱： 0.3％OPB-2 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.30 w/v％ Pluronic L-44 0.22 w/v％ Pluronic P-123 3.0 w/v％

5-1-7 測試物質7 名稱： 0.3％OPB-3 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.30 w/v％ Pluronic L-44 0.22 w/v％ Pluronic P-85 1.50 w/v％

5-1-8 測試物質8 名稱： 0.3％OPB-4 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.30 w/v％ Pluronic L-44 0.22 w/v％ Pluronic P-85 3.0 w/v％

5-1-9 測試物質9 名稱： 0.5％OPB-1 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.50 w/v％ Pluronic L-44 0.36 w/v％ Pluronic P-123 2.50 w/v％

5-1-10 測試物質10 名稱： 0.5％OPB-2 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.50 w/v％ Pluronic L-44 0.36 w/v％ Pluronic P-123 5.0 w/v％

5-1-11 測試物質11 名稱： 0.5％OPB-3 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.50 w/v％ Pluronic L-44 0.36 w/v％ Pluronic P-123 2.50 w/v％ Lipidure（註冊商標） 1.0 w/v％

5-1-12 測試物質12 名稱： 0.5％OPB-4 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.50 w/v％ Pluronic L-44 0.36 w/v％ Pluronic P-123 5.0 w/v％ Lipidure（註冊商標） 1.0 w/v％

5-2 使用的動物到貨時8週齡的倉鼠，Slc:Syrian，使用雄性，並以各群3隻進行實驗。

5-3 實驗方法

5-3-1 測試物質適用方法

（1）適用量將1mL測試物質適用於左頰囊。

（2）適用方法 [1]以氣體麻醉來引入麻醉[引入麻醉：空氣3.0L/min，3％異氟醚（MYLAN PHARMACEUTICAL CO., LTD製造）]。 [2]在維持麻醉下（適當調整濃度）將動物固定在仰臥位，使用棉棒拉出動物的頰囊，用單手輕輕捏住頰囊。 [3]用生理食鹽水及棉棒除去附著在頰囊黏膜的飼料等異物，使清潔後的頰囊回復原狀。 [4]使用1mL注射器及用於口服給藥的探空儀，將1mL測試物質適用於左頰囊，在右頰囊，將安裝於1mL注射器的空的用於口服給藥的探空儀插入拔去。 [5]適用30秒後，將動物翻轉至俯臥位並排出測試物質，使測試物質不會逆流回呼吸道內。使用棉棒除去口腔內的任何多餘的測試物質。 [6]觀察記錄適用部位的頰黏膜的色調，將動物返回到它們的籠子。 [7]上述操作每天重複兩次（早晚），持續28天。

5-3-2 檢查及觀察

（1）一般狀態的觀察關於每群中的所有例，在適用期中，適用實驗物質之前及適用結束時進行一般狀態觀察（第1天～第28天）。又，在適用期結束日的第二天（第29天）也進行了觀察。

（2）體重測量關於各群的所有例，在適用期中，適用實驗物質前測量體重（第1天～第28天）。又，試用期結束日的第二天也進行了測量（第29天）。

（3）適用部位的肉眼觀察方法關於各群的所有例的頰囊，在適用期中，在適用實驗物質前，觀察頰囊黏膜的狀態，記錄評分（第1天〜第28天）。又，在適用期結束後的第二天（24±2小時）也進行了觀察（第29天）。觀察部位是各實驗物質的接觸部位頰黏膜。又，肉眼的觀察評估法是根據以下表3（ISO 10993-10，附件 B.3「表B.2 用於口腔與陰莖反應的分級系統」）所記載的觀察基準及評分，對紅斑及結痂形成的程度給予評分（口腔炎等級）。又，也記錄了其他看到的發現。基於所獲得的觀察結果，針對各群實驗物質，合計各動物黏膜的評分，除以觀察次數及動物數量求得平均值（四捨五入到小數點第一位），做為綜合評估的參考資料。

5-4 結果

5-4-1 一般狀態沒有任何動物被認定為異常。

5-4-2 體重在所有群，體重隨著時間增加，在群間幾乎沒有差異。

5-4-3 適用部位的肉眼觀察結果表示在第11圖。在所有製劑，沒有被認為有紅斑等刺激性。然而，在0.3％濃度以上的OPB，被認為有白斑症狀（過度角化、增厚等）。另一方面，在0.1％濃度的OPB被認為完全沒有異常。

5-4-4組織病理學檢查結果表示在第12圖。根據（ISO 10993-10，附件 B.3「表B.3 用於口腔、陰莖、直腸及陰道組織反應的顯微鏡檢查的分級系統」）所記載的評估基準，以上皮（細胞病變、化生及糜爛）、白血球浸潤、血管充血及水腫的賦予等級，算出各個體的炎症指數及各群的炎症指數的平均。此外，也記錄了評估基準以外的發現。結果，在0.1％OPB的各群，被認為沒有炎症性反應。在0.3％濃度以上的OPB各群，被認為有上皮的細胞變性及極小～中等程度的白血球浸潤，炎症指數1～3皆為極小反應。做為評估基準以外的發現，在0.1％OPB的各群中，一部份的個體被認為有輕微～輕度的過度角化，0.3％濃度以上的OPB各群，被認為有輕微～中程度的過度角化及輕微的棘狀細胞增生。在其他控制群（右頰囊：Sham-ope側）所認為有的表皮內微小膿腫被認為是自然發症性病變。[ 實施例 6]

6.5-FU誘發的倉鼠口腔炎模型的效力實驗1 在本實驗中，實驗了在5-FU誘發的口腔炎模型中OPB製劑的效力。具體來說，在5-FU誘發的口腔炎模型中，以0.1％OPB在口腔內漱口時，進行隨著時間測量口腔內細菌數及口腔炎的評估。

6-1 實驗物質將測試物質和對照物質合併做為實驗物質。

6-1-1 測試物質名稱： 0.1％OPB 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽．．．0.10 w/v％聚氧乙烯（20）聚氧丙烯（20）乙二醇．．． 0.14 w/v％聚氧乙烯（160）聚氧丙烯（30）乙二醇．．． 0.10 w/v％

6-1-2 對照物質名稱：基劑組成：聚氧乙烯（20）聚氧丙烯（20）乙二醇．．． 0.07 w/v％聚氧乙烯（160）聚氧丙烯（30）乙二醇．．． 0.10 w/v％

6-2 使用的動物到貨時6週齡的倉鼠，Slc:Syrian，使用雄性，並以各群5隻進行實驗。

6-3 實驗方法

6-3-1 麻醉實施氣體麻醉[引入麻醉：空氣3.0L/min，3％異氟醚（MYLAN PHARMACEUTICAL CO., LTD製造），調整適當濃度持續麻醉]。

6-3-2 口腔炎模型的製作在麻醉下，以60mg/kg將5-FU施用於倉鼠腹腔內。在第0天、第2天總共進行兩次施用。

在第4天的麻醉下，取出倉鼠的頰囊。取出在頰囊中累積的餌與實驗動物用墊料，並用含有生理食鹽水的切棉輕輕擦拭。用精密鋼絲刷（φ 2.34mm，由SUNFLEX 股份有限公司製造）刷洗頰囊的表層（角質層）。刷洗後，將頰囊放回口腔內。

6-3-3 實驗物質施用在麻醉下，將倉鼠以仰臥位固定，並將1mL實驗物質注射到一個頰囊中。30秒後，排出實驗物質，用無菌棉棒吸取頰囊內多餘的實驗物質。以此漱口操作進行每天兩次施用。在口腔炎症的障礙達到頂峰後，不進行施用。

6-3-4 採取細菌在第0天、第4天、第7天、第10天及第17天，在第一次施用實驗物質前、0小時、6小時後共4個時間點，在麻醉下使用無菌棉棒從兩頰囊內採取細菌。但是，當在第10天與第17天沒有適用實驗物質時，僅採取一次。採取後的棉棒浸漬於5mL SCDLP培養基後攪拌，做為用於計算細菌數的樣本。

6-3-5 測量存活細菌數以新GMP微生物測試方法1），食品衛生檢驗指南2）為參考，進行瓊脂傾注平板法。 [1]採取500μ L用於計算細菌數的樣本，並使用4.5mL的稀釋液製作10¹ 倍～10⁴ 倍的10倍稀釋系列。 [2]將用於計算細菌數的樣本原液及1mL各稀釋菌液分別注入無菌培養皿。 [3]向上述培養皿，立即分別注入在設定為約47℃的恆溫槽中保溫的15mL測量培養基（TSA +）。 [4]在測量培養基固化後，將傾注平板在培養箱內倒置，並在35℃培養至可計數菌落為止（約2日）。 [5]培養後，在傾注平板增殖的菌落以目視計算數量。菌落數太大而無法區分菌落間的傾注平板，做為TNTC（too numerous to count）而不計數。

6-3-6 算出存活細菌數量根據6-3-5採用的菌落數乘以稀釋倍數以求得存活細菌的數量（CFU/mL）。採用菌落數以四捨五入到小數點後第二位來表示。以下式來計算存活菌數（CFU/swab）。 A：採用的菌落數存活細菌數（CFU/swab）= A×稀釋倍數×樣本液量（5mL）

此外，通過下式從存活細菌數的對數值求得對數下降值（Log reduction）。對數下降值四捨五入到小數點後三位。將存活細菌數1以下的對數值設定為0。 B：基線的生菌數對數值 C：塗佈實驗物質後的生菌數對數值對數下降值= B－C

6-3-7 統計學的分析求得各群的生菌數（CFU/swab）與其對數值的平均值及標準差。生菌數四捨五入到小數點後第一位並以整數表示。生菌數的對數值四捨五入到小數點後三位來表示。當生菌數為0時，將生菌數的對數值做為0。此外，因為是探索實驗，所以沒有進行檢定。

6-3-8 評估口腔炎根據下表4，評估了口腔炎等級。

[表4]

6-4 結果

6-4-1 細菌數結果表示在表5及第13圖。在第0天、第4天、第10天，在0.1％OPB組中給藥後的細菌數減少是顯著的，但是在口腔炎重症化顯著的第7天，細菌數減少值是微量的。

[表5] 倉鼠口腔的存活細菌數

6-4-2 口腔炎等級結果表示在第14圖。在0.1％OPB群中，口腔炎等級顯著低。

在本實驗中，0.1％OPB群的第7天的細菌數減少值降低的原因，被認為是細菌採取方法或滲濾液過量導致殺菌活性降低。在本實驗中，發現施用0.1％OPB，保持口腔內清潔，使重症化口腔炎減輕。[ 實施例 7]

7.5-FU誘發的倉鼠口腔炎模型的效力實驗2 在本實驗中，在5-FU誘發的倉鼠口腔炎模型中，比較研究了0.1％奧蘭西丁葡萄糖酸鹽與0.1％CHG的口腔炎減輕效果。

7-1 實驗物質將測試物質和對照物質合併做為實驗物質。

7-1-1 測試物質1 名稱： 0.1％OPB 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％

7-1-2 測試物質2 名稱： Peridex（註冊商標）/0.1％CHG 製造商： 3M ESPE牙科產品成分：葡萄糖酸洛赫西定 0.12 w/v％

7-1-3 對照物質名稱：基劑組成：聚氧乙烯（20）聚氧丙烯（20）乙二醇．．．0.07 w/v％

7-2 使用細菌在本實驗中，使用口腔內的固有細菌M，即金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus、ATCC No. 6538，由Microbiologics, Inc.公司製造）。

7-3 使用的動物到貨時6週齡的倉鼠，Slc:Syrian，使用雄性，並以各群5隻進行實驗。

7-4 實驗方法

7-4-1 實驗菌液的製備 [1]取出已放入保存的細菌沉澱物的小瓶，恢復至室溫。 [2]從小瓶中取出細菌沉澱物，移到無菌管。 [3]加入0.5mL生理食鹽水。 [4]用無菌棉棒壓碎細菌沉澱物，做為細菌懸浮液。 [5]在TSA平板上，以無菌棉棒將細菌懸浮液接種至約2cm直徑的圓形區域，用鉑環從接種區域劃線接種。 [6]將劃線接種的TSA平板倒置，培養至形成菌落為止。 [7]從形成的菌落中選擇單一菌落，並用鉑絲採取並刺入Casitone培養基中。 [8]將已刺入的Casitone培養基，培養到可確認細菌的增殖為止。 [9]確認細菌的增殖後，冷藏保管（設定值2～8℃）。 [10]用鉑絲採取以Casitone培養基冷凍保管的一部分實驗菌，移到含有5mL MHB培養基的14mL無菌管中，靜置培養到細菌增殖為止。 [11]培養後，用無菌片收集10μ L培養液，再次移到含有5mL MHB培養基的14mL無菌管中，靜置培養到細菌增殖為止。 [12]培養後，將約5mL的在MHB培養基中繼代培養的實驗細菌培養液回收到15mL圓錐形管中，加入8mL生理食鹽水，並輕輕攪拌。 [13]在23℃下以3000rpm離心（冷卻離心機5800，轉子RS-720，久保田製作所股份有限公司製造）10分鐘，廢棄上清液。 [14]將1mL蒸餾水（大塚蒸餾水，大塚製藥工廠股份有限公司製造）加入沈澱的實驗細菌中並懸浮。 [15]將細菌懸浮液移至14mL無菌管中，並使用McFarland Standard（產品編號70900，Sysmex·BioMérieux股份有限公司製造）來判斷濁度。加入生理食鹽水，調節菌液濃度，以成為McFarland 5。 [16]將做為McFarland 5的細菌懸浮液，當作實驗菌液。

7-4-2 麻醉實施氣體麻醉[引入麻醉：空氣3.0L/min，3％異氟醚（MYLAN PHARMACEUTICAL CO., LTD製造），調整適當濃度持續麻醉]。

7-4-3 口腔炎模型的製作在麻醉下，以60mg/kg將5-FU施用於倉鼠腹腔內。在第0天、第2天總共進行兩次施用。在第4天的麻醉下，取出倉鼠的頰囊。取出在頰囊中累積的餌與實驗動物用墊料，並用含有生理食鹽水的切棉輕輕擦拭。用精密鋼絲刷（φ 2.34mm，由SUNFLEX 股份有限公司製造）刷洗頰囊的表層（角質層）。刷洗後，將頰囊放回口腔內。

7-4-4 實驗物質施用在麻醉下，用棉棒每天兩次塗佈於倉鼠頰囊（離分群日4日間）。然而，在第四天，僅在上午施用一次。

7-4-5 塗佈實驗菌液在麻醉下，在上午施用實驗物質前，將在7-4-1中製備的實驗菌液，使用鉑環每天一次（從分群日起5日間）塗佈至倉鼠頰囊。

7-4-6 口腔炎評估基於前述表4，評估口腔炎等級。

7-4-7 統計學分析求得各群等級的平均值及標準差，繪製只有平均值的圖表。因為是探索分析，所以沒有進行檢定。

7-5 結果結果表示在第15圖。0.1％OPB群，相較於基劑及0.1％CHG群，傾向於減輕口腔炎重症化。基劑群與0.1％CHG群幾乎相同等級，沒有差異。從口腔炎重症化的減輕效果來看，與0.1％CHG相比，0.1％OPB被認為對塗佈的細菌或頰囊黏膜的固有菌具有更優越的殺菌效力。[ 實施例 8]

8.以5-FU、放射線併用誘發倉鼠口腔炎模型的效力實驗在本實驗，以5-FU、放射線併用誘發倉鼠口腔炎模型中，以漱口法施用將Pluronic P-123做為基劑的0.1％OPB製劑，比較研究口腔炎減輕效果。

8-1 實驗物質將測試物質和對照物質合併做為實驗物質。

8-1-1 測試物質名稱： OPB 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-123 1.0 w/v％

8-1-2 對照物質名稱/縮寫：基劑/Base 成分： Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-123 1.0 w/v％

8-2 使用的動物到貨時6週齡的倉鼠，Slc:Syrian，使用雄性，並以各群8隻進行實驗。

8-3 實驗方法

8-3-1 麻醉

（1）放射線照射時將Somnopentyl（註冊商標）（由共立製藥股份有限公司製造）以40mg/kg供給至腹腔內。

（2）口腔炎評估及實驗物質施用時實施氣體麻醉[引入麻醉：空氣3.0L/min，3％異氟醚（MYLAN PHARMACEUTICAL CO., LTD製造），調整適當濃度持續麻醉]。

8-3-2 口腔炎模型的製作

（1）放射線照射在第0天，在麻醉下，用棉棒取出倉鼠的頰囊。取出在頰囊中累積的餌與實驗動物用墊料，並用含有生理食鹽水的切棉輕輕擦拭。在成型的壓克力板上固定軀體與頰囊，以鉛覆蓋照射部位以外的頰囊，在[擱板距離：12.5cm，管電壓：160kV，管電流：6.2mA]的條件下，照射放射線（40Gy）。但是照射是一個體一頰囊，每群左頰囊與右頰囊分為各四隻。

（2）施用5-FU 在第0、5及10天共3次，以60mg/kg施用5-FU至倉鼠腹腔內。

8-4-3 實驗物質施用在麻醉下，將倉鼠以仰臥位固定，並將1mL實驗物質注射到一個頰囊中。30秒後，排出實驗物質，用無菌棉棒吸取頰囊內多餘的實驗物質。以此漱口操作進行每天兩次施用。在口腔炎症的障礙達到頂峰後，不進行施用。

8-4-4 口腔炎的評估基於前述表4，評估口腔炎等級。

8-4-5 統計學分析求得各群口腔炎等級的平均值及標準差，製作圖表。因為是探索分析，所以沒有進行檢定。

8-5 結果結果表示在第16圖。base群的口腔炎等級最大值為4.9，OPB群為4.3，base群的上升速度也較快。還有模型的強度較強的影響，即使在第40天也沒有消除潰瘍的個體，所以並沒有完全治癒所有例，但OPB群明顯較早治愈。[ 實施例 9]

9.大鼠牙齦炎模型的效力實驗在本實驗中，在大鼠牙齦炎模型中研究了0.1％奧蘭西丁葡萄糖酸鹽對牙齦炎的治療效果。

9-1 實驗物質將測試物質和對照物質合併做為實驗物質。

9-1-1 測試物質名稱： OPB 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-123 1.0 w/v％

9-1-2 對照物質名稱/縮寫：基劑/Base 成分： Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-123 1.0 w/v％

9-2 使用的細菌在本實驗中，使用牙齦炎致病細菌，即牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis，ATCC No. 33277，Microbiologics, Inc.製造）。

9-2 使用的動物到貨時5週齡的大鼠，Jcl:Wistar，使用雄性，並以各群5隻進行實驗。

9-4 實驗方法

9-4-1 實驗菌的製備（除保存外的所有操作均在厭氧室內進行） [1]取出已放入保存的細菌沉澱物的小瓶，放入厭氧室。 [2]從小瓶中取出細菌沉澱物，移到無菌管中。 [3]加入0.5mL的製備的TSB培養基。 [4]用無菌棉棒壓碎細菌沉澱物，做為細菌懸浮液。 [5]將細菌懸浮液接種在用於CDC厭氧細菌的綿羊血瓊脂培養基上。 [6]在厭氧條件（37℃）下培養3～4天。 [7]從形成的菌落中選擇單一菌落，並再次接種在用於CDC厭氧細菌的綿羊血瓊脂培養基上。 [8]在確認細菌增殖後，加入3mL製備的TSB培養基並以塗佈機懸浮，以製作甘油存料。 [9]冷凍保存上述存料。 [10]從存料接種用於CDC厭氧細菌的羊血瓊脂培養基，並在厭氧條件下培養。 [11]確認細菌增殖後，以適量製備的TSB培養基懸浮，取出一部分，將濁度用McFarland Standard做為McFarland 5。計算稀釋倍率，並從剩餘的懸浮液調節細菌濃度成為1×10¹⁰ CFU/mL。 [12]將上述做為實驗菌液。

9-4-2 麻醉

（1）棉線插入、屍體解剖將戊巴比妥鈉水溶液以40mg/kg施用於腹腔內。

（2）細菌接種、實驗物質施用實施氣體麻醉[引入麻醉：空氣1.0L/min，5％異氟醚（MYLAN PHARMACEUTICAL CO., LTD製造），調整適當濃度持續麻醉]。

9-4-3 插入棉線麻醉後，以背位固定在專用台，抬起下頷，並在上頷右第一臼齒與第二臼齒之間插入棉線。

9-4-4 細菌接種麻醉後，將0.2mL實驗菌液接種到棉線插入部位。此操作每兩小時實施一次。

9-4-5 實驗物質施用麻醉後，洗滌施用1mL實驗物質至口腔內。此操作每天進行兩次。

9-4-6 觀察及檢查

（1）一般狀態從棉線的插入日到屍體解剖日為止一天實施一次。

（2）重量測量從棉線插入日到屍體解剖時，實施了兩次。

（3）屍體解剖在麻醉下，切斷腹主動脈使其放血死亡，進行屍體解剖。

（4）組織病理學檢查將切除的上頜用10v/v％中性緩衝福爾馬林溶液固定，脫脂、脫灰後，製作HE染色標本。對各標本進行關於炎症變化的病理學檢查。

9-4-7 統計學分析計算各群體重的平均值及標準差。不進行檢定。

9-5 結果在一般狀態下未發現異常，群間體重沒有差異。病理學檢查結果表示在第17圖。此外，HE染色標本的顯微照片表示在第18圖。在OPB施用群，牙齦多層扁平皮膜的嗜中性白血球的浸潤為8/10例，細胞間水腫為1/10例及潰瘍1/10例都被認為輕微。牙齦固有層的嗜中性白血球的浸潤為8/10例及出血為1/10例也被認為輕微。另一方面，在base施用群，牙齦多層扁平皮膜的嗜中性白血球的浸潤被認為輕微8/10例及輕度2/10例。細胞間水腫為2/10例，過度角化為2/10例，表皮增厚為2/10例及潰瘍1/10例，都被認為輕微。牙齦固有層的嗜中性白血球的浸潤被認為輕微6/10例及輕度3/10例。出血及水腫皆為1/10例被認為輕微。

9-6 查驗牙齦多層扁平皮膜的嗜中性白血球的浸潤、細胞間水腫、過度角化、表皮增厚及和固有層的嗜中性白血球的浸潤都是關聯於炎症的變化，認為是因治療而產生。這些變化也與base施用群相比較，OPB施用群的這些變化在頻率及程度上都處於較低傾向，所以認為OPB施用導致炎症減輕效果。[ 實施例 10]

10. 大鼠肺炎模型的效力實驗在本實驗，在大鼠吸入性肺炎模型中，研究了0.1％奧蘭西丁葡萄糖酸鹽對肺炎的治療效果。

10-1 實驗物質將測試物質和對照物質合併做為實驗物質。

10-1-1 測試物質名稱： OPB 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 0.10 w/v％ Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-123 1.0 w/v％

10-1-2 對照物質名稱/縮寫：基劑/Base 成分： Pluronic L-44 0.07 w/v％ Pluronic P-123 1.0 w/v％

10-2 使用的動物到貨時7週齡的大鼠，Crl:CD(SD)，使用雄性進行實驗。

10-3 群結構在氣管內施用日的早晨測量體重，並藉由分層隨機分配，分至下表6所示的四群（1-4群）。未分配的6隻藉由分層隨機分配，分至下表6所示的2群（5、6群），做為唾液採取個體。

[表6]

10-4 實驗方法

10-4-1 麻醉

（1）口腔內洗淨，採取唾液將Somnopentyl以40mg/kg施用至腹腔內。

（2）氣管內施用時，採取支氣管肺泡清洗液（BALF）實施氣體麻醉[引入麻醉：空氣3.0L/min，3％異氟醚（MYLAN PHARMACEUTICAL CO., LTD製造），調整適當濃度持續麻醉]。

10-4-2 口腔內洗淨在麻醉下，將實驗物質浸漬於無菌棉棒中並充分塗佈於口腔內。

10-4-3 唾液採取在麻醉下，對腹腔內施用0.1％鹽酸毛果芸香鹼（5mg/kg）。回收過量分泌的唾液。將回收的唾液加入含中和劑的營養培養基中並靜置。此後，進行離心（r.t.，3000rpm，10分鐘），並用等量的生理食鹽液將沉澱物懸浮，做為氣管內施用液。

10-4-4 氣管內施用採取唾液後，在麻醉下使用咽喉鏡，將施用用管留置在氣管內，並施用0.1mL的唾液或生理鹽水。

10-4-5 BALF採取在氣管內施用6及24小時後，在麻醉下正中切開，藉由腹主動脈切開來放血，使其安樂死。之後，使肺露出，將導管插入支氣管的起始部。從該線，以含有8mL、0.1％BSA、0.05mM的EDTA-2Na的PBS溶液（下文稱為PBS）進行3次洗淨（每次重複注入回收兩次），並採取洗淨液（BALF）。將BALF離心（200g，4℃，10分鐘），並將上清液放在另一個保存管，用做測量LDH濃度與測量細胞介素類（ELISA）。以1mL PBS懸浮沉澱物，用做血液學檢查。

10-4-6 唾液採取用動物的處理在氣管內施用結束後，將唾液採取用動物在過度麻醉下放血，使其安樂死。

10-4-7 測量細胞介素（TNF-α，IL-6）濃度根據套組附帶的準則來測量。

10-4-8 血液學檢查使用多項目自動血球計數器對懸浮的沉積物來實施血液學分析。

10-4-9 生化學檢查使用自動分析裝置7180（日立先端科技股份有限公司），對採取的BALF上清液，測量LDH濃度。

10-4-10 統計學分析因為是探索分析，所以沒有進行檢定。

10-5 結果血液學檢查及生化檢查的結果表示在第19圖。從血液學檢查來看，兩群間沒有差異。關於IL-6，OPB群在24小時值下是低2.5倍左右的值。關於TNF-α，OPB群在兩個時間點具有較低的值。因此，口腔內以OPB處理，因誤吞嚥唾液引起的肺炎症反應較低。[ 實施例 11]

11.使用TLR報導基因轉染細胞株的奧蘭西丁的抗炎症作用的研究從實施例6-10，奧蘭西丁表示了對口腔炎、牙齦炎、肺炎具有抗炎症作用。炎症已知是與經由類鐸受體4（TLR-4）、類鐸受體2（TLR-2）的免疫應答有關聯（ChemMedChem. 2016 Jan 19;11(2):154-65、Biotechnol Adv. 2012 Jan-Feb; 30(1):251-60、J Dent Res. 2016 Jul; 95(7):725-33）。奧蘭西丁藉由對TLR-4及TLR-2的拮抗（類似）作用，有抑制炎症的可能性。因此，為了在本實驗明瞭此事，藉由使用了穩定表現TLR-4、TLR-2或報導基因（SEAP）的人類細胞的報告基因檢測，確認奧蘭西丁的對TLR-4及TLR-2的拮抗（類似）作用。

11-1 測試物質名稱： 1.5％OPB 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 1.5 w/v％

11-2 細胞使用下表7所記載的細胞。

[表7] *應需要添加。 †選擇試劑

11-3 實驗方法

11-3-1 研究奧蘭西丁對TLR-4的拮抗（類似）作用

－使用的細胞：HEK 293-TLR4表達細胞－使用的培養基預培養：DMEM＋FBS（最終濃度10％）＋青黴素（最終濃度100單位/mL）+鏈黴素（最終濃度100μ g/mL）施用樣本，施用後培養：DMEM＋FBS（最終濃度5％）－活性測量：SEAP檢測套組（Novus Biologicals公司製造）－蛋白質量的測定：BCA蛋白質檢測（Funakoshi Co., Ltd製造）

[1]以10％FBS DMEM調節，灑在96孔盤上（膠原蛋白處理），培養40小時（37℃，5％CO₂ ），使細胞成為1.0×10⁵ 細胞/孔/100μ L。 [2]將1.5％OPB，用5％FBS稀釋至下表8所示的濃度。

[表8]

[3]使用5％FBS製備成20ng/mL（最終濃度10ng/mL）的LPS。 [4]去除培養基後，以50μ L的OPB培養基、50μ L的LPS培養基的順序添加培養基，培養8小時（37°C，5％CO₂ ）。 [5]培養後，將上清液移到50μ L的另一個96孔盤，進行SEAP檢測。 [6]在除去了剩餘上清液的96孔盤，加入0.1％SDS-O與50μ L的1N NaOH，徹夜冷凍（-20℃）。解凍後，進行BCA蛋白質檢測。 [7]以蛋白質濃度校正做為報導基因的SEAP的表達量，並算出每種OPB濃度的阻礙率。

11-3-2 研究奧蘭西丁對TLR-2的拮抗（類似）作用

－使用的細胞：HEK 293-TLR2表達細胞－使用的培養基預培養：DMEM＋FBS（最終濃度10％）＋青黴素（最終濃度100單位/mL）+鏈黴素（最終濃度100μ g/mL）施用樣本，施用後培養：DMEM＋FBS（最終濃度1％）－活性測量：SEAP檢測套組（Novus Biologicals公司製造）－蛋白質量的測定：BCA蛋白質檢測（Funakoshi Co., Ltd製造）

[1]以10％FBS DMEM調節，灑在96孔盤上（膠原蛋白處理），培養36小時（37℃，5％CO₂ ），使細胞成為1.0×10⁵ 細胞/孔/100μ L。 [2]將1.5％OPB，用1％FBS稀釋至前述表8所示的濃度。 [3]用1％FBS製備2μ g/mL（最終濃度1μ g/mL）的LTA。 [4]去除培養基後，以50μ L的OPB培養基、50μ L的LTA培養基的順序添加培養基，培養12小時（37°C，5％CO₂ ）。 [5]培養後，將上清液移到50μ L的另一個96孔盤，進行SEAP檢測。 [6]在除去了剩餘上清液的96孔盤，加入0.1％SDS-O與50μ L的1N NaOH，徹夜冷凍（-20℃）。解凍後，進行BCA蛋白質檢測。 [7]以蛋白質濃度校正做為報導基因的SEAP的表達量，並算出每種OPB濃度的阻礙率。

11-4 結果結果如第20圖所示。明顯看出隨著OPB濃度的增加，SEAP的阻礙率提高（IC₅₀ ：約10μ g/mL），且OPB對TLR4與TLR2具有拮抗（類似）作用。此結果表示OPB藉由阻礙經由TLR4與TLR2的免疫應答而具有抗炎症作用。[ 實施例 12]

12.用小鼠巨噬細胞類似細胞株RAW264.7的奧蘭西丁的抗炎症作用研究當用LPS或LTA刺激小鼠巨噬細胞類似細胞株RAW264.7時，經由識別它們的受體啟動免疫應答，進行發炎介質（NO）的產生。因此，使用來自RAW264.7細胞的NO產生做為指標來確認奧蘭西丁是否具有對於LPS刺激導致的炎症的抗炎症作用。

12-1 測試物質名稱： 1.5％OPB 成分：奧蘭西丁葡萄糖酸鹽 1.5 w/v％

12-2 細胞使用下表9所記載的細胞。

[表9] *應需要添加。

12-3 實驗方法

12-3-1 研究奧蘭西丁對LPS刺激導致的抗炎作用

－使用的細胞：RAW264.7 －使用的培養基預培養：DMEM＋FBS（最終濃度10％）＋青黴素（最終濃度100單位/mL）＋鏈黴素（最終濃度100μ g/mL）施用樣本，施用後培養：DMEM＋FBS（最終濃度5％）－活性測量：硝酸鹽/亞硝酸鹽比色檢測套組（Griess Reagents公司製造）－蛋白質量的測定：細胞難以染色，數值不穩定，所以無法測量。

[1]以10％FBS DMEM調節，灑在96孔盤上（無處理），培養24小時（37℃，5％CO₂ ），使細胞成為1.0×10⁵ 細胞/孔/100μ L。 [2]將1.5％OPB，用5％FBS稀釋至前述表8所示的濃度。 [3]用5％FBS製備200ng/mL（最終濃度100ng/mL）的LPS。 [4]去除培養基後，以50μ L的OPB培養基、50μ L的LPS培養基的順序添加培養基，培養8小時（37°C，5％CO₂ ）。 [5]培養後，將上清液移到50μ L的另一個96孔盤，進行硝酸鹽/亞硝酸鹽比色檢測。

12-3-2 研究奧蘭西丁對大腸菌（LPS產生菌）刺激導致的抗炎作用

－使用的細胞：RAW264.7 －使用的培養基預培養：DMEM＋FBS（最終濃度10％）＋青黴素（最終濃度100單位/mL）＋鏈黴素（最終濃度100μ g/mL）施用樣本，施用後培養：DMEM＋FBS（最終濃度1％）－活性測量：硝酸鹽/亞硝酸鹽比色檢測套組（Griess Reagents公司製造）－蛋白質量的測定：細胞難以染色，數值不穩定，所以無法測量。

[1]以10％FBS DMEM調節，灑在96孔盤上（無處理），培養24小時（37℃，5％CO₂ ），使細胞成為1.0×10⁵ 細胞/孔/100μ L。 [2]將1.5％OPB，用1％FBS稀釋至前述表8所示的濃度。 [3]去除培養基後，添加50μ L的OPB培養基，在37°C，5％CO₂ 下靜置。 [4]在MHB中徹夜培養的大腸桿菌，製備為McF 1，並用5％DMEM稀釋300倍。再者，添加安比西林（ampicillin）至最終濃度為50μ g/mL。 [5]將製備的50μ L細菌培養基，進一步加到已添加OPB培養基的孔盤，並密閉培養24小時（37℃，5％CO₂ ）。 [6]培養後，將上清液移到50μ L的另一個96孔盤，進行硝酸鹽/亞硝酸鹽比色檢測。

12-4 結果結果表示在第21圖。明顯看出隨著OPB濃度增加，NO的產生減少，且OPB表示NO產生阻礙作用（IC₅₀ ：約10μ g/mL）。此結果表示OPB具有抗炎症作用。[ 產業利用性 ]

根據本發明，提供了一種用於改善及/或預防炎症的組合物，可適用於廣泛的炎症性疾患。此外，藉由使用本發明的組合物做為用於改善及/或預防治療癌症導致的口腔黏膜炎的組合物，可以防止接受化學療法、放射線療法的患者的溝通功能阻礙、睡眠障礙、疼痛、吞嚥障礙（飲食攝取量減少）等QOL的降低，或防止對化學療法、放射線治療的遵從劑量的阻礙，所以產業利用性高。

Base‧‧‧基劑

BALF‧‧‧支氣管肺泡清洗液

OPB‧‧‧消毒液

PVP-I‧‧‧碘漱口液

TLR‧‧‧類鐸受體

第1圖表示實施例1的好氧培養的口腔內細菌數的測量結果圖。縱軸的細菌數是以對數值表示。第2圖表示實施例1的在鏈球菌選擇培養基中培養的口腔內細菌數的測量結果。縱軸的細菌數是以對數值表示。第3圖表示實施例1的厭氧培養的口腔內細菌數的測量結果圖。縱軸的細菌數是以對數值表示。第4圖表示實施例1的細菌計數器的口腔內細菌數的測量結果圖。縱軸的細菌數是以對數值表示。第5圖表示實施例2的Oranesin（註冊商標）消毒液（OPB）與其他藥劑的比較實驗結果圖。縱軸的細菌數是以對數值表示。第6圖表示研究實施例3的奧蘭西丁濃度對殺菌效力的影響的結果圖。縱軸的細菌數是以對數值表示。第7圖表示實施例4的各群的體重變化圖。第8圖表示實施例4的肉眼觀察結果表。表中的數值表示口腔炎等級，網點表示呈白斑症狀（過度角化、增厚等）的群。第9圖是實施例4的最後一天的各群的頰囊的照片。第10圖表示實施例4的組織病理學檢查結果表。第11圖表示實施例5的肉眼觀察結果表。表中的數值表示口腔炎等級，網點表示呈白斑症狀（過度角化、增厚等）的群。第12圖表示實施例5的組織病理學檢查結果表。第13圖表示實施例6的倉鼠口腔中存活細菌數的圖。縱軸的細菌數是以對數值表示。第14圖表示實施例6的口腔炎等級的圖。口腔炎等級顯示在縱軸上。第15圖表示實施例7的口腔炎等級的圖。口腔炎等級顯示在縱軸上。第16圖表示實施例8的口腔炎等級的圖。口腔炎等級顯示在縱軸上。第17圖表示實施例9的病理檢查結果圖。第18圖是實施例9的HE染色標本的顯微鏡照片。第19圖表示實施例10的血液學檢查和生化檢查的結果圖。第20圖表示實施例11的Oranesin（註冊商標）消毒劑（OPB）對SEAP表達的抑制率。第21圖表示實施例12的Oranesin（註冊商標）消毒劑（OPB）對NO產生的抑制。

Claims

一種用於改善及/或預防炎症的組合物，包含奧蘭西丁（Oranexidine）或其藥理學上可接受的鹽。
如申請專利範圍第1項所述的組合物，其中奧蘭西丁或其藥理學上可接受的鹽為奧蘭西丁葡萄糖酸鹽。
如申請專利範圍第1項或第2項所述的組合物，更包含泊洛沙姆（Poloxamer），是由聚氧丙烯鏈（POP）與夾著該POP的兩個聚氧乙烯鏈（POE）所構成的嵌段共聚物。
如申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述的組合物，炎症是選自口內炎、口腔黏膜炎、牙齦炎及肺炎。
如申請專利範圍第1項至第4項中任一項所述的組合物，其中炎症是因治療癌症導致的口腔黏膜炎；該組合物更包括： 0.01～1.5％（W/V）的奧蘭西丁葡萄糖酸鹽；以及泊洛沙姆（Poloxamer），是由聚氧丙烯鏈（POP）與夾著該POP的兩個聚氧乙烯鏈（POE）所構成的嵌段共聚物。
如申請專利範圍第3項至第5項中任一項所述的組合物，其中泊洛沙姆選自聚氧乙烯（42）聚氧丙烯（67）乙二醇（Pluronic P-123）、聚氧乙烯（54）聚氧丙烯（39）乙二醇（Pluronic P-85）以及聚氧乙烯（196）聚氧丙烯（67）乙二醇（Pluronic F-127）。
如申請專利範圍第6項所述的組合物，其中泊洛沙姆為聚氧乙烯（42）聚氧丙烯（67）乙二醇（Pluronic P-123）。
如申請專利範圍第1項至第7項中任一項所述的組合物，其中奧蘭西丁葡萄糖酸鹽的濃度為0.05～0.5％（W/V）。
如申請專利範圍第3項至第8項中任一項所述的組合物，其中泊洛沙姆的濃度為0.1～5.0％（W/V）。
如申請專利範圍第1項至第9項中任一項所述的組合物為液體劑或漱口劑。
如申請專利範圍第5項至第10項中任一項所述的組合物，其中癌症治療為化學療法、放射線治療或同時併用化學療法與放射線治療的療法。