JP6602639B2 - がんの治療による口腔粘膜炎の改善・予防用組成物 - Google Patents
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Description
本発明は、がんの治療によって生じる口腔粘膜炎の、改善用及び／又は予防用組成物に関する。
口腔粘膜炎は、がんの治療における副作用の一つであり、抗がん剤治療を受ける患者の約４０％に生じると報告されており、投与後およそ５〜１０日目頃から出現することが多い。また、口や喉のがんに対して放射線治療併用を行う場合には、放射線による口腔粘膜へのダメージや唾液分泌の抑制により、口腔粘膜炎が重症で長引く傾向がある。かかる口腔粘膜炎は、患者にコミュニケーション機能の阻害、睡眠障害、疼痛、嚥下障害（食事摂取量の減少）などのＱＯＬ（Quality of Life）の低下を招き、化学療法、放射線治療のＤｏｓｅ遵守妨害につながる。これまで、抗がん剤による副作用の大半については、予防的あるいは治療的対策でかなり軽減できるようになっており（Ｇ−ＣＳＦ、制吐剤、鎮痛薬等）、ガイドラインを含め標準的治療法が確立されてきたが、口腔粘膜炎、末梢神経障害、脱毛等に対しては確立した治療法はなく、口腔粘膜炎等の口腔関連有害事象に対しては、予防のための口腔ケアが実施されている。
がんの化学療法、放射線治療によって生じた口腔粘膜炎の治療法としては、（１）消毒薬・殺菌剤を用いて進行を止める、（２）痛みを和らげる、炎症を抑える、（３）粘膜を厚くする薬剤を投与する等による予防、体質の改善が挙げられる。このうち、（１）の消毒薬・殺菌剤として一般的に用いられる含嗽剤としては、ポピドンヨード製剤、塩化ベンゼトニウム製剤、クロルヘキシジン製剤が挙げられる。しかしながら、ポピドンヨード製剤や塩化ベンゼトニウム製剤は、タンパク質との接触による不活化を受けやすいため、失活しやすく持続性がない。また、クロルヘキシジン製剤は、日本においては粘膜禁忌（ショック）のため、粘膜適用濃度に規制がある。（３）の予防、体質の改善用の薬剤としては、特開２０１３−１７０１５６公報に、がんの化学療法を実施している患者に対する、口腔内膜炎の改善又は予防用の固形組成物が開示されている（特許文献１）。
特開２００５−２８９９５９公報には、消毒剤としてオラネキシジングルコン酸塩が開示されている（特許文献２）。オラネキシジングルコン酸塩は、広い殺菌スペクトルを有し、殺菌効果が短時間で現れ、さらにその活性が長時間持続する。さらに、オラネキシジングルコン酸塩の水溶液は、安定性が高く、長期間保存でき、その上、皮膚に対する刺激性や毒性が低く、安全性の面でも優れている。加えて、オラネキシジングルコン酸塩の水溶液は、色、臭い及び味に問題がないため、製剤化しやすい。しかしながら、粘膜は皮膚と比べて敏感であることから、オラネキシジングルコン酸塩は粘膜に対して刺激性を有し、そのためオラネキシジングルコン酸塩の口腔粘膜への適用は困難であった。
本発明の課題は、これまで治療法が確立していなかった、がんの治療によって生じる口腔粘膜炎を改善、予防することのできる組成物を提供することにある。
本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、所定の濃度のオラネキシジングルコン酸塩と、ポリオキシプロピレン鎖（ＰＯＰ）と、それを挟む２個のポリオキシエチレン鎖（ＰＯＥ）からなるブロック共重合体であるポロキサマーとを含む組成物を用いることで、がんの治療によって生じる口腔粘膜炎が改善、予防できることを見いだし、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
（１）０．０１〜１．５％（Ｗ／Ｖ）のオラネキシジングルコン酸塩と、
ポリオキシプロピレン鎖（ＰＯＰ）と、それを挟む２個のポリオキシエチレン鎖（ＰＯＥ）からなるブロック共重合体であるポロキサマーと
を含む、がんの治療による口腔粘膜炎の改善用及び／又は予防用の組成物。
（２）ポロキサマーが、ポリオキシエチレン（４２）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３）、ポリオキシエチレン（５４）ポリオキシプロピレン（３９）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−８５）、及びポリオキシエチレン（１９６）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７）から選択されることを特徴とする上記（１）に記載の組成物。
（３）ポロキサマーが、ポリオキシエチレン（４２）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３）であることを特徴とする上記（２）に記載の組成物。
（４）オラネキシジングルコン酸塩の濃度が、０．１〜０．３％（Ｗ／Ｖ）であることを特徴とする上記（１）〜（３）のいずれかに記載の組成物。
（５）ポロキサマーの濃度が、０．１〜５％（Ｗ／Ｖ）であることを特徴とする上記（１）〜（４）のいずれかに記載の組成物。
（６）液剤又は含嗽剤であることを特徴とする、上記（１）〜（５）のいずれかに記載の組成物。
（７）がんの治療が、化学療法、放射線治療、又は化学療法と放射線治療との同時併用療法であることを特徴とする、上記（１）〜（６）のいずれかに記載の組成物。
（１）０．０１〜１．５％（Ｗ／Ｖ）のオラネキシジングルコン酸塩と、
ポリオキシプロピレン鎖（ＰＯＰ）と、それを挟む２個のポリオキシエチレン鎖（ＰＯＥ）からなるブロック共重合体であるポロキサマーと
を含む、がんの治療による口腔粘膜炎の改善用及び／又は予防用の組成物。
（２）ポロキサマーが、ポリオキシエチレン（４２）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３）、ポリオキシエチレン（５４）ポリオキシプロピレン（３９）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−８５）、及びポリオキシエチレン（１９６）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７）から選択されることを特徴とする上記（１）に記載の組成物。
（３）ポロキサマーが、ポリオキシエチレン（４２）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３）であることを特徴とする上記（２）に記載の組成物。
（４）オラネキシジングルコン酸塩の濃度が、０．１〜０．３％（Ｗ／Ｖ）であることを特徴とする上記（１）〜（３）のいずれかに記載の組成物。
（５）ポロキサマーの濃度が、０．１〜５％（Ｗ／Ｖ）であることを特徴とする上記（１）〜（４）のいずれかに記載の組成物。
（６）液剤又は含嗽剤であることを特徴とする、上記（１）〜（５）のいずれかに記載の組成物。
（７）がんの治療が、化学療法、放射線治療、又は化学療法と放射線治療との同時併用療法であることを特徴とする、上記（１）〜（６）のいずれかに記載の組成物。
また、本発明の実施の他の形態として、上記本発明のがんの治療による口腔粘膜炎の改善用及び／又は予防用組成物を、がんの治療による口腔粘膜炎の改善や予防（治療）を必要とする患者に投与することにより、がんの治療による口腔粘膜炎の改善や予防（治療）する方法や、がんの治療による口腔粘膜炎の改善や予防（治療）に使用するための、０．０１〜０．５％（Ｗ／Ｖ）のオラネキシジングルコン酸塩と、ポリオキシプロピレン鎖（ＰＯＰ）と、それを挟む２個のポリオキシエチレン鎖（ＰＯＥ）からなるブロック共重合体であるポロキサマーとを含む組成物や、上記本発明のがんの治療による口腔粘膜炎の改善用及び／又は予防用組成物を調製するための、０．０１〜０．５％（Ｗ／Ｖ）のオラネキシジングルコン酸塩と、ポリオキシプロピレン鎖（ＰＯＰ）と、それを挟む２個のポリオキシエチレン鎖（ＰＯＥ）からなるブロック共重合体であるポロキサマーの使用を挙げることができる。
本発明の組成物によれば、がんの化学療法、放射線治療、又は化学療法と放射線治療の併用療法を受けている患者の口腔粘膜炎を改善及び／又は予防することができ、ひいては、患者のコミュニケーション機能の阻害、睡眠障害、疼痛、嚥下障害（食事摂取量の減少）などのＱＯＬの低下や、化学療法、放射線治療のＤｏｓｅ遵守妨害を防ぐことができる。
本発明の組成物は、オラネキシジングルコン酸塩と、１種又は２種以上のポロキサマーとを含む、がんの治療による口腔粘膜炎の改善用及び／又は予防用という特定の用途を有する組成物である。ここで、ポロキサマーとしては、ポリオキシプロピレン鎖（ＰＯＰ）と、それを挟む２個のポリオキシエチレン鎖（ＰＯＥ）からなるブロック共重合体であって、口腔粘膜への刺激を低減するものであれば特に制限されないが、ポリオキシエチレン（４２）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３）、ポリオキシエチレン（５４）ポリオキシプロピレン（３９）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−８５）、及びポリオキシエチレン（１９６）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７）から選択される１種又は２種以上のポロキサマーが好ましく、中でもポリオキシエチレン（４２）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３）、ポリオキシエチレン（３）ポリオキシプロピレン（１７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−３１）、ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４）、ポリオキシエチレン（１２０）ポリオキシプロピレン（４０）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−８７）、ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−６８）を例示することができる。
上記ポロキサマーの中でも、ポリオキシエチレン（４２）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３）、ポリオキシエチレン（５４）ポリオキシプロピレン（３９）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−８５）、及びポリオキシエチレン（１９６）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７）から選択される１種又は２種以上のポロキサマーが好ましく、中でもポリオキシエチレン（４２）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３）がより好ましい。
オラネキシジングルコン酸塩の濃度は０．０１〜１．５％（Ｗ／Ｖ）であり、０.０５〜０．５％（Ｗ／Ｖ）がより好ましく、０．１〜０．３％（Ｗ／Ｖ）がさらに好ましい。オラネキシジングルコン酸塩の濃度が０．０１％（Ｗ／Ｖ）より低いと、口腔細菌の殺菌効力が十分に得られず、１．５％（Ｗ／Ｖ）を超えると、口腔粘膜への刺激が強くなりすぎるため望ましくない。
ポロキサマーの濃度としては、特に制限されるものではないが、通常０．１〜５％（Ｗ／Ｖ）が好適に用いられる。また、オラネキシジングルコン酸塩とポロキサマーの濃度比は、１：２〜１：２０が好ましく、１：５〜１：１０であることがより好ましい。オラネキシジングルコン酸塩濃度０．３％（Ｗ／Ｖ）以上の高濃度域では、オラネキシジングルコン酸塩による口腔粘膜への刺激がより強いため、ポロキサマー量をより多くした方が、オラネキシジングルコン酸塩による刺激（角化亢進）を抑えるうえで好ましい。
本発明において、がんの治療としては、がんの化学療法、放射線治療、又は化学療法と放射線治療との同時併用療法を挙げることができる。がんの化学療法とは、抗がん剤によるがんの治療全般を指す。本発明で使用される抗がん剤としては、口内炎を起こしやすいフルオロウラシル（５−ＦＵ）、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム（Ｓ−１）、テガフール・ウラジル（ＵＦＴ）等のフッ化ピリミジン系代謝拮抗剤、メトトレキサート等の葉酸代謝拮抗剤、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、ペプロマイシン、アクチノマイシンＤ等の抗腫瘍性抗生物質、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、エトポシド等の植物アルカロイド、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン等の白金製剤を挙げることができ、特に５−ＦＵ等のフッ化ピリミジン系代謝拮抗剤を好適に例示することができる。これらの抗がん剤は、単独で用いても、２種以上を併用してもよい。
また、本発明において、放射線治療とは、悪性腫瘍部に放射線を照射してがん細胞の増殖を抑制することを目的とした治療であり、その治療に使用される放射線としては、Ｘ線、電子線などが挙げられる。また、化学療法と放射線治療との同時併用療法とは、がんの局所療法である放射線療法を抗がん剤と併用することにより、放射線の効果を強める治療法を指す。放射線治療の対象部位は特に制限されるものではないが、頭頸部、特に口腔内や咽頭部への放射線治療を例示することができる。
本発明の組成物は、口腔内に適用するのに適したいかなる剤形であってもよいが、好ましくは液剤、含嗽剤を挙げることができる。また、飴類、キャンディー類、グミ類、トローチ類、ガム類等の、口中で徐々に溶解又は崩壊する固形組成物であってもよい。
本発明の組成物は、必要に応じて、風香味を付与したり、着色したりする目的で用いられる種々の添加物を更に含有することができる。風香味付与を目的とする添加物としては、例えば合成香料、天然香料、アスパルテーム、アセスルファムカリウム、スクラロース、アリテーム、ネオテーム、カンゾウ抽出物（グリチルリチン）、サッカリン、サッカリンナトリウム、ステビア抽出物、ステビア末等の甘味料を挙げることができる。着色を目的とする添加物としては、カラメル、天然着色料、合成着色料を挙げることができる。また、本発明の組成物は、乳化剤（グリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、レシチンなど）、安定剤、防腐剤等の添加物を含有してもよい。これらの添加剤は、単独で使用しても、２種以上組み合わせて使用してもよい。
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
１．カニクイザルを用いた口腔内殺菌効力試験
本試験では簡易細菌カウンタと培養法を併用して、試験物質（殺菌消毒剤として０．１％（ｗ／ｖ）オラネキシジングルコン酸塩及び０．４７％ポビドンヨード、陰性対照薬として生理食塩液）のカニクイザル口腔内細菌に対する殺菌効力を比較、検討した。
本試験では簡易細菌カウンタと培養法を併用して、試験物質（殺菌消毒剤として０．１％（ｗ／ｖ）オラネキシジングルコン酸塩及び０．４７％ポビドンヨード、陰性対照薬として生理食塩液）のカニクイザル口腔内細菌に対する殺菌効力を比較、検討した。
１−１ 試験物質
被験物質はオラネジン（登録商標）消毒液１．５％（１．５％ＯＰＢ、オラネキシジングルコン酸塩として１．５０８％（ｗ／ｖ）を含む液、株式会社大塚製薬工場製）を１５倍希釈し、オラネキシジングルコン酸塩濃度が０．１％（ｗ／ｖ）となるように調製した（０．１％ ＯＰＢ）。対照物質のイソジンガーグル液７％（７％ＰＶＰ−Ｉ、Ｍｅｉｊｉ Ｓｅｉｋａ ファルマ株式会社製）は１５倍希釈し（０．４７％ＰＶＰ−Ｉ）、生理食塩液（Ｓａｌｉｎｅ、株式会社大塚製薬工場製）はそのまま用いた。
被験物質はオラネジン（登録商標）消毒液１．５％（１．５％ＯＰＢ、オラネキシジングルコン酸塩として１．５０８％（ｗ／ｖ）を含む液、株式会社大塚製薬工場製）を１５倍希釈し、オラネキシジングルコン酸塩濃度が０．１％（ｗ／ｖ）となるように調製した（０．１％ ＯＰＢ）。対照物質のイソジンガーグル液７％（７％ＰＶＰ−Ｉ、Ｍｅｉｊｉ Ｓｅｉｋａ ファルマ株式会社製）は１５倍希釈し（０．４７％ＰＶＰ−Ｉ）、生理食塩液（Ｓａｌｉｎｅ、株式会社大塚製薬工場製）はそのまま用いた。
１−２ 試験動物
使用時年齢２歳１１ヶ月〜３歳１１ヶ月齢のカニクイザル（雄、カンボジア産、株式会社イブバイオサイエンス製）を用いた。
使用時年齢２歳１１ヶ月〜３歳１１ヶ月齢のカニクイザル（雄、カンボジア産、株式会社イブバイオサイエンス製）を用いた。
１−２−１ 群構成
各動物の口腔内を試験部位とした。９頭の動物を使用し、０．１％ ＯＰＢ、０．４７％ ＰＶＰ−Ｉ及びＳａｌｉｎｅを塗布するため、１群当たりの試験部位は３箇所とした。試験物質塗布前、塗布１０分後、６時間後及び２４時間後の計４回細菌を採取した。
各動物の口腔内を試験部位とした。９頭の動物を使用し、０．１％ ＯＰＢ、０．４７％ ＰＶＰ−Ｉ及びＳａｌｉｎｅを塗布するため、１群当たりの試験部位は３箇所とした。試験物質塗布前、塗布１０分後、６時間後及び２４時間後の計４回細菌を採取した。
１−２−２ 試料番号
下記の表のように試料番号を割り振った。尚、動物番号１〜３のベースライン細菌数を測定し、細菌数が多い順にｓａｌｉｎｅ、０．１％ ＯＰＢ、０．４７％ ＰＶＰ−Ｉ、動物番号４〜６は順に０．１％ ＯＰＢ、０．４７％ ＰＶＰ−Ｉ、ｓａｌｉｎｅ、動物番号７〜９は順に、０．４７％ ＰＶＰ−Ｉ、ｓａｌｉｎｅ、０．１％ ＯＰＢとした。
下記の表のように試料番号を割り振った。尚、動物番号１〜３のベースライン細菌数を測定し、細菌数が多い順にｓａｌｉｎｅ、０．１％ ＯＰＢ、０．４７％ ＰＶＰ−Ｉ、動物番号４〜６は順に０．１％ ＯＰＢ、０．４７％ ＰＶＰ−Ｉ、ｓａｌｉｎｅ、動物番号７〜９は順に、０．４７％ ＰＶＰ−Ｉ、ｓａｌｉｎｅ、０．１％ ＯＰＢとした。
１−３ 試験方法
１−３−１ 麻酔
カニクイザルにケタラール（ケタミンとして５０ｍｇ／ｍＬ、第一三共プロファーマ株式会社製）とセラクタール２％注射液（キシラジンとして２．０ｇ／１００ｍＬ、バイエル薬品株式会社製）の２：１の混合液を体重１ｋｇ当たり０．５ｍＬを筋注し、全身麻酔した。
カニクイザルにケタラール（ケタミンとして５０ｍｇ／ｍＬ、第一三共プロファーマ株式会社製）とセラクタール２％注射液（キシラジンとして２．０ｇ／１００ｍＬ、バイエル薬品株式会社製）の２：１の混合液を体重１ｋｇ当たり０．５ｍＬを筋注し、全身麻酔した。
１−３−２ 塗布
〔１〕マウスピュア口腔ケアスポンジ（川本産業株式会社製）を２本入れたコンテナ（２５０ｍＬ、コーニング株式会社製）に試験物質１００ｍＬを注いだ。
〔２〕スポンジ内の空気を抜き十分に浸した。
〔３〕口腔内に約２分間塗布した。
〔１〕マウスピュア口腔ケアスポンジ（川本産業株式会社製）を２本入れたコンテナ（２５０ｍＬ、コーニング株式会社製）に試験物質１００ｍＬを注いだ。
〔２〕スポンジ内の空気を抜き十分に浸した。
〔３〕口腔内に約２分間塗布した。
１−３−３ 細菌採取１
〔１〕滅菌済み手袋で滅菌綿棒を用いて、サル口腔内から細菌を採取した（口腔内両側壁を２回ずつ前後にこすり取った）。
〔２〕５ｍＬサンプリング液（１０％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、０．０４％（ｗ／ｖ）リン酸二水素カリウム、０．１％（ｗ／ｖ）ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、１．０１％（ｗ／ｖ）無水リン酸一水素ナトリウム、２％（ｗ／ｖ）大豆レシチン、５％（ｗ／ｖ）ポリオキシエチレン（２０）セチルエーテル、Ｈ７．８〜７．９）の中に綿棒を入れた。
〔１〕滅菌済み手袋で滅菌綿棒を用いて、サル口腔内から細菌を採取した（口腔内両側壁を２回ずつ前後にこすり取った）。
〔２〕５ｍＬサンプリング液（１０％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、０．０４％（ｗ／ｖ）リン酸二水素カリウム、０．１％（ｗ／ｖ）ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、１．０１％（ｗ／ｖ）無水リン酸一水素ナトリウム、２％（ｗ／ｖ）大豆レシチン、５％（ｗ／ｖ）ポリオキシエチレン（２０）セチルエーテル、Ｈ７．８〜７．９）の中に綿棒を入れた。
１−３−４ 細菌採取２
〔１〕定圧検体採取器具（ＤＵ−ＡＥ０１ＮＴ−Ｈ、パナソニックヘルスケア社製）に測定消耗品（ＤＵ−ＡＣ０２ＮＰ−Ｈ、パナソニックヘルスケア社製）の綿棒を取り付けた。
〔２〕サルの舌上に綿棒を定圧で押し当て、約１ｃｍの間隔で３回前後にこすった。
〔１〕定圧検体採取器具（ＤＵ−ＡＥ０１ＮＴ−Ｈ、パナソニックヘルスケア社製）に測定消耗品（ＤＵ−ＡＣ０２ＮＰ−Ｈ、パナソニックヘルスケア社製）の綿棒を取り付けた。
〔２〕サルの舌上に綿棒を定圧で押し当て、約１ｃｍの間隔で３回前後にこすった。
１−３−５ 口腔内細菌数測定１
新ＧＭＰ微生物試験法２）、食品衛生検査指針３）を参考にカンテン平板混釈法及びカンテン平板表面塗沫法を実施した。
〔１〕１−３−３で細菌を回収したサンプリング液を激しく攪拌し、これを回収菌液とした。
〔２〕回収菌液０．５ｍＬを１０倍希釈し、更に同様の操作により希釈を繰り返して１０倍希釈系列（５段階）を作製した。
〔３〕回収菌液及び段階希釈された希釈液を１ｍＬずつシャーレに分注した。これに約４７℃で保存した測定培地（ＴＳＡ＋）を約１５ｍＬ加えて混釈平板を作製した。また、回収菌液及び段階希釈された希釈液を１００μＬずつ血液寒天培地及びＭＳ寒天培地に分注し、コンラージ棒を用いて表面塗沫した。
〔４〕測定培地（ＴＳＡ＋）の固化後、混釈平板を倒置し、コロニー計数が可能となるまで培養した。また、表面塗沫平板は倒置し、コロニー計数が可能となるまで、嫌気性条件下で培養した。
〔５〕混釈平板及び表面塗沫平板で増殖したコロニーをコロニーカウンター（ＤＣ−３、アズワン株式会社）を用いて計数した。コロニー数が多すぎてコロニー間の区別ができない混釈平板は、ＴＮＴＣ（too numerous to count）とし計数しなかった。
新ＧＭＰ微生物試験法２）、食品衛生検査指針３）を参考にカンテン平板混釈法及びカンテン平板表面塗沫法を実施した。
〔１〕１−３−３で細菌を回収したサンプリング液を激しく攪拌し、これを回収菌液とした。
〔２〕回収菌液０．５ｍＬを１０倍希釈し、更に同様の操作により希釈を繰り返して１０倍希釈系列（５段階）を作製した。
〔３〕回収菌液及び段階希釈された希釈液を１ｍＬずつシャーレに分注した。これに約４７℃で保存した測定培地（ＴＳＡ＋）を約１５ｍＬ加えて混釈平板を作製した。また、回収菌液及び段階希釈された希釈液を１００μＬずつ血液寒天培地及びＭＳ寒天培地に分注し、コンラージ棒を用いて表面塗沫した。
〔４〕測定培地（ＴＳＡ＋）の固化後、混釈平板を倒置し、コロニー計数が可能となるまで培養した。また、表面塗沫平板は倒置し、コロニー計数が可能となるまで、嫌気性条件下で培養した。
〔５〕混釈平板及び表面塗沫平板で増殖したコロニーをコロニーカウンター（ＤＣ−３、アズワン株式会社）を用いて計数した。コロニー数が多すぎてコロニー間の区別ができない混釈平板は、ＴＮＴＣ（too numerous to count）とし計数しなかった。
１−３−６ 口腔内細菌数測定２
〔１〕細菌カウンタ（ＤＵ−ＡＡ０１、パナソニックヘルスケア社製）の蓋を開けた。
〔２〕測定消耗品のセンサーチップを細菌カウンタに取り付けた。
〔３〕測定消耗品のディスポーザブルカップを細菌カウンタにセットした。
〔４〕ディスポーザブルカップ中心に、細菌を採取した綿棒をセットした。
〔５〕細菌カウンタの蓋を閉じた。
〔１〕細菌カウンタ（ＤＵ−ＡＡ０１、パナソニックヘルスケア社製）の蓋を開けた。
〔２〕測定消耗品のセンサーチップを細菌カウンタに取り付けた。
〔３〕測定消耗品のディスポーザブルカップを細菌カウンタにセットした。
〔４〕ディスポーザブルカップ中心に、細菌を採取した綿棒をセットした。
〔５〕細菌カウンタの蓋を閉じた。
１−４ 結果
１−４−１ 口腔内細菌数測定１
１−４−１−１ 好気性培養
結果を図１に示す。ベースライン口腔内細菌数は１．７３×１０５〜４．２０×１０６であった。Ｓａｌｉｎｅ塗布後の口腔内細菌数はほぼ一定であった。試験物質塗布１０分後の生菌数は、Ｓａｌｉｎｅ、０．１％ＯＰＢ及び０．４７％ＰＶＰ−Ｉでそれぞれ、６．４８×１０５ＣＦＵ、４．６５×１０３ＣＦＵ及び２．３５×１０４ＣＦＵ、塗布６時間後でそれぞれ、１．６６×１０６ＣＦＵ、１．４７×１０３ＣＦＵ及び４．９３×１０５ＣＦＵ、２４時間後でそれぞれ、４．６７×１０５ＣＦＵ、５．５８×１０４ＣＦＵ及び１．２２×１０６ＣＦＵであった。
結果を図１に示す。ベースライン口腔内細菌数は１．７３×１０５〜４．２０×１０６であった。Ｓａｌｉｎｅ塗布後の口腔内細菌数はほぼ一定であった。試験物質塗布１０分後の生菌数は、Ｓａｌｉｎｅ、０．１％ＯＰＢ及び０．４７％ＰＶＰ−Ｉでそれぞれ、６．４８×１０５ＣＦＵ、４．６５×１０３ＣＦＵ及び２．３５×１０４ＣＦＵ、塗布６時間後でそれぞれ、１．６６×１０６ＣＦＵ、１．４７×１０３ＣＦＵ及び４．９３×１０５ＣＦＵ、２４時間後でそれぞれ、４．６７×１０５ＣＦＵ、５．５８×１０４ＣＦＵ及び１．２２×１０６ＣＦＵであった。
１−４−１−２ レンサ球菌選択培地での培養
結果を図２に示す。ベースライン口腔内細菌数は２．８５×１０５〜７．６０×１０７であった。Ｓａｌｉｎｅ塗布後の口腔内細菌数はほぼ一定であった。試験物質塗布１０分後の生菌数は、Ｓａｌｉｎｅ、０．１％ＯＰＢ及び０．４７％ＰＶＰ−Ｉでそれぞれ、１．２６×１０６ＣＦＵ、５．９７×１０３ＣＦＵ及び７．３３×１０４ＣＦＵ、塗布６時間後でそれぞれ、５．５１×１０６ＣＦＵ、２．７９×１０４ＣＦＵ及び２．２０×１０６ＣＦＵ、２４時間後でそれぞれ、１．７１×１０６ＣＦＵ、４．３０×１０５ＣＦＵ及び７．８１×１０６ＣＦＵであった。
結果を図２に示す。ベースライン口腔内細菌数は２．８５×１０５〜７．６０×１０７であった。Ｓａｌｉｎｅ塗布後の口腔内細菌数はほぼ一定であった。試験物質塗布１０分後の生菌数は、Ｓａｌｉｎｅ、０．１％ＯＰＢ及び０．４７％ＰＶＰ−Ｉでそれぞれ、１．２６×１０６ＣＦＵ、５．９７×１０３ＣＦＵ及び７．３３×１０４ＣＦＵ、塗布６時間後でそれぞれ、５．５１×１０６ＣＦＵ、２．７９×１０４ＣＦＵ及び２．２０×１０６ＣＦＵ、２４時間後でそれぞれ、１．７１×１０６ＣＦＵ、４．３０×１０５ＣＦＵ及び７．８１×１０６ＣＦＵであった。
１−４−１−３ 嫌気性培養
結果を図３に示す。ベースライン口腔内細菌数は２．４５×１０５〜１．６５×１０７であった。Ｓａｌｉｎｅ塗布後の口腔内細菌数はほぼ一定であった。試験物質塗布１０分後の生菌数は、Ｓａｌｉｎｅ、０．１％ＯＰＢ及び０．４７％ＰＶＰ−Ｉでそれぞれ、２．７０×１０６ＣＦＵ、１．３３×１０４ＣＦＵ及び７．３３×１０４ＣＦＵ、塗布６時間後でそれぞれ、３．２２×１０６ＣＦＵ、１．３８×１０４ＣＦＵ及び１．８０×１０６ＣＦＵ、２４時間後でそれぞれ、１．７１×１０６ＣＦＵ、３．０４×１０５ＣＦＵ及び１．４０×１０６ＣＦＵであった。
結果を図３に示す。ベースライン口腔内細菌数は２．４５×１０５〜１．６５×１０７であった。Ｓａｌｉｎｅ塗布後の口腔内細菌数はほぼ一定であった。試験物質塗布１０分後の生菌数は、Ｓａｌｉｎｅ、０．１％ＯＰＢ及び０．４７％ＰＶＰ−Ｉでそれぞれ、２．７０×１０６ＣＦＵ、１．３３×１０４ＣＦＵ及び７．３３×１０４ＣＦＵ、塗布６時間後でそれぞれ、３．２２×１０６ＣＦＵ、１．３８×１０４ＣＦＵ及び１．８０×１０６ＣＦＵ、２４時間後でそれぞれ、１．７１×１０６ＣＦＵ、３．０４×１０５ＣＦＵ及び１．４０×１０６ＣＦＵであった。
１−４−２ 口腔内細菌数測定２
結果を図４に示す。ベースライン口腔内細菌数は１．２９×１０６〜＞１．００×１０８であった。試験物質塗布１０分後の生菌数は、Ｓａｌｉｎｅ、０．１％ＯＰＢ及び０．４７％ＰＶＰ−Ｉでそれぞれ、２．８４×１０６ＣＦＵ、＜３．４９×１０５ＣＦＵ及び５．０９×１０５ＣＦＵ、塗布６時間後でそれぞれ、２．０４×１０７ＣＦＵ、５．５８×１０５ＣＦＵ及び８．９８×１０６ＣＦＵ、２４時間後でそれぞれ、４．１０×１０７ＣＦＵ、３．１４×１０７ＣＦＵ及び３．１４×１０７ＣＦＵであった。
結果を図４に示す。ベースライン口腔内細菌数は１．２９×１０６〜＞１．００×１０８であった。試験物質塗布１０分後の生菌数は、Ｓａｌｉｎｅ、０．１％ＯＰＢ及び０．４７％ＰＶＰ−Ｉでそれぞれ、２．８４×１０６ＣＦＵ、＜３．４９×１０５ＣＦＵ及び５．０９×１０５ＣＦＵ、塗布６時間後でそれぞれ、２．０４×１０７ＣＦＵ、５．５８×１０５ＣＦＵ及び８．９８×１０６ＣＦＵ、２４時間後でそれぞれ、４．１０×１０７ＣＦＵ、３．１４×１０７ＣＦＵ及び３．１４×１０７ＣＦＵであった。
細菌測定１及び２において、同様な傾向の結果が得られた。つまり、０．１％ＯＰＢ群は塗布６時間後まで細菌数を低値に保つが、０．４７％ＰＶＰ−Ｉ群は塗布１０分後までしか効果を示さなかった。しかし、両群とも２４時間後には細菌数が回復していた。０．４７％ＰＶＰ−Ｉ群の持続性が認められなかったのは、口腔内の有機物により不活化の影響を受けやすいからだと考えられる。口腔内殺菌消毒効果は、０．１％ＯＰＢの方が持続性を持ち優れていると考えられた。
２．ハムスターを用いた口腔内殺菌試験１
本試験では、正常ハムスター口腔内粘膜に対する含嗽剤（殺菌消毒剤）の殺菌効力を、他剤と比較検討することを目的とした。殺菌活性の持続性を検討するため、試験物質含嗽後〜２４時間まで時点（前置、直後、８時間後、２４時間後）をとり、細菌カウンタ及び培養法を用い細菌数を計測した。
本試験では、正常ハムスター口腔内粘膜に対する含嗽剤（殺菌消毒剤）の殺菌効力を、他剤と比較検討することを目的とした。殺菌活性の持続性を検討するため、試験物質含嗽後〜２４時間まで時点（前置、直後、８時間後、２４時間後）をとり、細菌カウンタ及び培養法を用い細菌数を計測した。
２−１ 試験物質
被験物質と対照物質を合わせて試験物質とした。
被験物質と対照物質を合わせて試験物質とした。
２−１−１ 被験物質１
名称 ：０．１％ＯＰＢ−１
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ−１
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ｗ／ｖ％
２−１−２ 被験物質２
名称 ：０．１％ ＯＰＢ−２
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ｗ／ｖ％
Ｌｉｐｉｄｕｒｅ（登録商標） １．０ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ ＯＰＢ−２
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ｗ／ｖ％
Ｌｉｐｉｄｕｒｅ（登録商標） １．０ｗ／ｖ％
２−１−３ 対照物質１
名称／略称：基剤／Ｂａｓｅ
組成 ：Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ｗ／ｖ％
名称／略称：基剤／Ｂａｓｅ
組成 ：Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ｗ／ｖ％
２−１−４ 対照物質２
名称／略称：Ｐｅｒｉｄｅｘ（登録商標）／０．１２％ＣＨＧ
組成 ：クロルヘキシジングルコン酸塩 ０．１２ｗ／ｖ％
名称／略称：Ｐｅｒｉｄｅｘ（登録商標）／０．１２％ＣＨＧ
組成 ：クロルヘキシジングルコン酸塩 ０．１２ｗ／ｖ％
２−１−５ 対照物質３
名称／略称：イソジンガーグル液０．４７％／０．４７％ＰＶＰ−Ｉ
組成 ：イソジンガーグル液７％（７％ＰＶＰ−Ｉ、Ｍｅｉｊｉ Ｓｅｉｋａファルマ株式会社製）の１５倍希釈液
名称／略称：イソジンガーグル液０．４７％／０．４７％ＰＶＰ−Ｉ
組成 ：イソジンガーグル液７％（７％ＰＶＰ−Ｉ、Ｍｅｉｊｉ Ｓｅｉｋａファルマ株式会社製）の１５倍希釈液
２−２ 使用動物
入荷時６週齢のハムスター、Slc:Syrian、雄を用いた。
入荷時６週齢のハムスター、Slc:Syrian、雄を用いた。
２−３ 試験方法
２−３−１ 麻酔
ガス麻酔［導入麻酔：空気３．０Ｌ／ｍｉｎに３％イソフルラン（マイラン製薬株式会社製）、持続麻酔は適宜濃度を調整］を実施した。
ガス麻酔［導入麻酔：空気３．０Ｌ／ｍｉｎに３％イソフルラン（マイラン製薬株式会社製）、持続麻酔は適宜濃度を調整］を実施した。
２−３−２ 試験物質投与
麻酔下にて、ハムスターを仰臥位に固定し、片頬袋に試験物質を１ｍＬずつ注入した。３０秒後、試験物質を排出し、余分な頬袋内の試験物質を滅菌綿棒で吸い取った。
麻酔下にて、ハムスターを仰臥位に固定し、片頬袋に試験物質を１ｍＬずつ注入した。３０秒後、試験物質を排出し、余分な頬袋内の試験物質を滅菌綿棒で吸い取った。
２−３−３ 細菌採取
試験物質投与前、０ｈｒ、８ｈｒ、２４ｈｒの計４時点に、麻酔下で両頬袋内から滅菌綿棒を用いて細菌を採取した。採取後の綿棒は５ｍＬ ＳＣＤＬＰ培地に浸漬後撹拌し、細菌計数用サンプルとした。
試験物質投与前、０ｈｒ、８ｈｒ、２４ｈｒの計４時点に、麻酔下で両頬袋内から滅菌綿棒を用いて細菌を採取した。採取後の綿棒は５ｍＬ ＳＣＤＬＰ培地に浸漬後撹拌し、細菌計数用サンプルとした。
２−３−４ 生残菌数の測定
新ＧＭＰ微生物試験法１）、食品衛生検査指針２）を参考にカンテン平板混釈法を実施した。
〔１〕細菌計数用サンプル５００μＬを採取し、４．５ｍＬの希釈液を用いて、１０１倍〜１０６倍の１０倍希釈系列を作製した。
〔２〕細菌計数用サンプル原液及び各希釈菌液１ｍＬずつ滅菌シャーレに分注した。
〔３〕上記のシャーレに、速やかに約４７℃に設定した恒温槽で保温した測定培地（ＴＳＡ＋）１５ｍＬを分注した。
〔４〕測定培地の固化後、混釈平板をインキュベーター内に倒置し、コロニーが計数できるまで３５℃で培養した（約２日間）。
〔５〕培養後、混釈平板で増殖したコロニーを目視にて計数した。コロニー数が多すぎてコロニー間の区別ができない混釈平板は、ＴＮＴＣ（too numerous to count）とし計数しなかった。
〔６〕コロニー数に希釈倍率を乗じて、生残菌数を算出した。
新ＧＭＰ微生物試験法１）、食品衛生検査指針２）を参考にカンテン平板混釈法を実施した。
〔１〕細菌計数用サンプル５００μＬを採取し、４．５ｍＬの希釈液を用いて、１０１倍〜１０６倍の１０倍希釈系列を作製した。
〔２〕細菌計数用サンプル原液及び各希釈菌液１ｍＬずつ滅菌シャーレに分注した。
〔３〕上記のシャーレに、速やかに約４７℃に設定した恒温槽で保温した測定培地（ＴＳＡ＋）１５ｍＬを分注した。
〔４〕測定培地の固化後、混釈平板をインキュベーター内に倒置し、コロニーが計数できるまで３５℃で培養した（約２日間）。
〔５〕培養後、混釈平板で増殖したコロニーを目視にて計数した。コロニー数が多すぎてコロニー間の区別ができない混釈平板は、ＴＮＴＣ（too numerous to count）とし計数しなかった。
〔６〕コロニー数に希釈倍率を乗じて、生残菌数を算出した。
２−４ 結果
結果を図５及び表１に示す。
結果を図５及び表１に示す。
試験物質投与前の口腔内細菌数は、群間に差が無かった。試験物質投与直後の殺菌効力は、０．１％ＯＰＢ−１＝０．１％ＯＰＢ−２＞０．１２％ＣＨＧ＞０．４７％ＰＶＰ−Ｉ＞Ｂａｓｅであり、投与８時間後は、０．１％ＯＰＢ−１＝０．１％ＯＰＢ−２＝０．１２％ＣＨＧ＞０．４７％ＰＶＰ−Ｉ＝Ｂａｓｅであり、２４時間後は群間に差は無かった。以上の結果から、口腔内殺菌効力は０．１％ＯＰＢと０．１２％ＣＨＧは同等程度であり、０．４７％ＰＶＰ−Ｉは即効性が弱く持続活性は認められなかった。
本試験で０．４７％ＰＶＰ−Ｉの殺菌活性が低かった理由として、口腔内のたんぱく等による不活化が大きく寄与していると考えられた。０．１２％ＣＨＧは０．１％ＯＰＢと同様に持続活性を有する口腔内殺菌消毒剤であると考えられた。
３．ハムスターを用いた口腔内殺菌試験２
本試験では、正常ハムスター口腔内粘膜に対する含嗽剤（殺菌消毒剤）の殺菌効力に及ぼすオラネキシジン濃度の影響を検討することを目的とした。
本試験では、正常ハムスター口腔内粘膜に対する含嗽剤（殺菌消毒剤）の殺菌効力に及ぼすオラネキシジン濃度の影響を検討することを目的とした。
３−１ 試験物質
被験物質と対照物質を合わせて試験物質とした。
被験物質と対照物質を合わせて試験物質とした。
３−１−１ 被験物質１
名称 ：０．１％ＯＰＢ−１
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール ０．０７ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール ０．１０ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ−１
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール ０．０７ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール ０．１０ｗ／ｖ％
３−１−２ 被験物質２
名称 ：０．１％ＯＰＢ−２
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール
０．０７ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール １．００ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ−２
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール
０．０７ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール １．００ｗ／ｖ％
３−１−３ 被験物質３
名称 ：０．５％ＯＰＢ−３
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．５０ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール ０．３６ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール ５．００ｗ／ｖ％
名称 ：０．５％ＯＰＢ−３
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．５０ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール ０．３６ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール ５．００ｗ／ｖ％
３−１−４ 被験物質４
名称 ：１％ＯＰＢ−２
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 １．００ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール
０．７２ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール
１０．００ｗ／ｖ％
名称 ：１％ＯＰＢ−２
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 １．００ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール
０．７２ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール
１０．００ｗ／ｖ％
３−１−５ 対照物質
名称 ：基剤
組成 ：ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール
０．０７ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール
０．１０ｗ／ｖ％
名称 ：基剤
組成 ：ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール
０．０７ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール
０．１０ｗ／ｖ％
３−２ 使用動物
入荷時６週齢のハムスター、Slc:Syrian、雄を用い、各群３匹で試験を行った。
入荷時６週齢のハムスター、Slc:Syrian、雄を用い、各群３匹で試験を行った。
３−３ 試験方法
３−３−１ 麻酔
ガス麻酔［導入麻酔：空気３．０Ｌ／ｍｉｎに３％イソフルラン（マイラン製薬株式会社製）、持続麻酔は適宜濃度を調整］を実施した。
ガス麻酔［導入麻酔：空気３．０Ｌ／ｍｉｎに３％イソフルラン（マイラン製薬株式会社製）、持続麻酔は適宜濃度を調整］を実施した。
３−３−２ 試験物質投与
麻酔下にて、ハムスターを仰臥位に固定し、片頬袋に試験物質を１ｍＬずつ注入した。１分後、試験物質を排出し、余分な頬袋内の試験物質を滅菌綿棒で吸い取った。
麻酔下にて、ハムスターを仰臥位に固定し、片頬袋に試験物質を１ｍＬずつ注入した。１分後、試験物質を排出し、余分な頬袋内の試験物質を滅菌綿棒で吸い取った。
３−３−３ 細菌採取
試験物質投与前、０ｈｒ、１ｈｒ、３ｈｒ、６ｈｒの計５時点に、麻酔下で両頬袋内から滅菌綿棒を用いて細菌を採取した。採取後の綿棒は５ｍＬ ＳＣＤＬＰ培地に浸漬後撹拌し、細菌計数用サンプルとした。
試験物質投与前、０ｈｒ、１ｈｒ、３ｈｒ、６ｈｒの計５時点に、麻酔下で両頬袋内から滅菌綿棒を用いて細菌を採取した。採取後の綿棒は５ｍＬ ＳＣＤＬＰ培地に浸漬後撹拌し、細菌計数用サンプルとした。
３−３−４ 生残菌数の測定
生残菌数の測定は、２−３−４と同様の方法で行った。
生残菌数の測定は、２−３−４と同様の方法で行った。
３−４ 結果
結果を図６に示す。結果より、０．１％ＯＰＢで持続的（６時間後）に細菌数を低値に抑えることができることがわかった。また、ＯＰＢ濃度が０．５ｗ／ｖ％以上で、持続活性がより優れていた。
結果を図６に示す。結果より、０．１％ＯＰＢで持続的（６時間後）に細菌数を低値に抑えることができることがわかった。また、ＯＰＢ濃度が０．５ｗ／ｖ％以上で、持続活性がより優れていた。
４．ハムスターを用いた口腔粘膜刺激性試験１
本試験では、０．１％オラネキシジングルコン酸塩の基剤組成を変えた検討製剤をハムスターの頬袋に１４日間反復投与し、刺激性の程度を比較検討した。
本試験では、０．１％オラネキシジングルコン酸塩の基剤組成を変えた検討製剤をハムスターの頬袋に１４日間反復投与し、刺激性の程度を比較検討した。
４−１ 被験物質
４−１−１ 被験物質１
名称 ：０．１％ＯＰＢ−１
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ−１
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
４−１−２ 被験物質２
名称 ：０．１％ＯＰＢ−２
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−３１ １．０ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ−２
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−３１ １．０ｗ／ｖ％
４−１−３ 被験物質３
名称 ：０．１％ＯＰＢ−３
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ−３
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ｗ／ｖ％
４−１−４ 被験物質４
名称 ：０．１％ＯＰＢ−４
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−８５ １．０ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ−４
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−８５ １．０ｗ／ｖ％
４−１−５ 被験物質５
名称 ：０．１％ＯＰＢ−５
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７ １．０ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ−５
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７ １．０ｗ／ｖ％
４−１―６ 被験物質６
名称 ：０．１％ＯＰＢ−６
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．１４ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−６８ １．０ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ−６
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．１４ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−６８ １．０ｗ／ｖ％
４−１−７ 被験物質７
名称 ：０．１％ＯＰＢ−７
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ ５．０ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ−７
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ ５．０ｗ／ｖ％
４−２ 使用動物
入荷時８週齢のハムスター、Slc:Syrian、雄を用い、各群３匹で試験を行った。
入荷時８週齢のハムスター、Slc:Syrian、雄を用い、各群３匹で試験を行った。
４−３ 試験方法
４−３−１ 被験物質適用方法
４−３−１−１ 適用量
右頬袋に被験物質１ｍＬを適用した。
右頬袋に被験物質１ｍＬを適用した。
４−３−１−２ 適用方法
〔１〕ガス麻酔により麻酔を導入した［導入麻酔：空気３．０Ｌ／ｍｉｎに３％イソフルラン（マイラン製薬株式会社製）］。
〔２〕維持麻酔下（濃度は適宜調整）にて動物を仰臥位に固定し、綿棒を用いて動物の頬袋を引き出し、片手で引き出した頬袋を軽くつまんだ。
〔３〕生理食塩液及び綿棒で頬袋粘膜に付着した飼料等の異物を取り除き、清潔にした後頬袋を元に戻した。
〔４〕１ｍＬシリンジ及び経口投与用ゾンデを用いて、右頬袋には被験物質１ｍＬを適用し、左頬袋には１ｍＬシリンジに取り付けた空の経口投与用ゾンデを挿入・抜去した。
〔５〕適用３０秒後、被験物質が気道内へ逆流しないように動物を腹臥位に反転させ排出した。口腔内の余分な被験物質は綿棒を用いて全て除去した。
〔６〕適用部位の頬粘膜の色調等を観察・記録し、動物の頚部にハムスター用カラーを装着した後、動物をケージに戻した。
〔７〕上記の操作を１日２回（朝・夕）、１４日間繰り返した。
〔１〕ガス麻酔により麻酔を導入した［導入麻酔：空気３．０Ｌ／ｍｉｎに３％イソフルラン（マイラン製薬株式会社製）］。
〔２〕維持麻酔下（濃度は適宜調整）にて動物を仰臥位に固定し、綿棒を用いて動物の頬袋を引き出し、片手で引き出した頬袋を軽くつまんだ。
〔３〕生理食塩液及び綿棒で頬袋粘膜に付着した飼料等の異物を取り除き、清潔にした後頬袋を元に戻した。
〔４〕１ｍＬシリンジ及び経口投与用ゾンデを用いて、右頬袋には被験物質１ｍＬを適用し、左頬袋には１ｍＬシリンジに取り付けた空の経口投与用ゾンデを挿入・抜去した。
〔５〕適用３０秒後、被験物質が気道内へ逆流しないように動物を腹臥位に反転させ排出した。口腔内の余分な被験物質は綿棒を用いて全て除去した。
〔６〕適用部位の頬粘膜の色調等を観察・記録し、動物の頚部にハムスター用カラーを装着した後、動物をケージに戻した。
〔７〕上記の操作を１日２回（朝・夕）、１４日間繰り返した。
４−３−２ 検査及び観察
４−３−２−１ 一般状態の観察
各群の全例について、適用期間中の適用前、適用終了時及び適用期間終了日の翌日に一般状態観察を行った。また、適用開始日の適用前にも観察を行った。
各群の全例について、適用期間中の適用前、適用終了時及び適用期間終了日の翌日に一般状態観察を行った。また、適用開始日の適用前にも観察を行った。
４−３−２−２ 体重測定
各群の全例において、適用期間中の適用前、適用期間終了日の翌日に体重を測定した。また、適用開始日の適用前にも測定を行った。ただし、体重計の故障のためｄａｙ１３、１４は体重を測定しなかった。
各群の全例において、適用期間中の適用前、適用期間終了日の翌日に体重を測定した。また、適用開始日の適用前にも測定を行った。ただし、体重計の故障のためｄａｙ１３、１４は体重を測定しなかった。
４−３−２−３ 適用部位の肉眼的観察方法
各群の全例の頬袋について、適用期間中の適用前、適用終了時及び適用終了日の翌日（２４±２時間）に頬袋粘膜の状態を観察し、評点化を記録した。また、適用開始日の適用前にも観察を行った。観察部位は各試験物質の接触部位頬粘膜とした。なお、肉眼的観察の評価法は下記の表（ISO 10993-10, Annex B.3「Table B.2 Grading system for oral and penile reactions」）に記載されている観察基準及び評価点に従って、紅斑及び痂皮形成の程度に評価点（口内炎ｇｒａｄｅ）をつけた。また、その他に見られた所見についても記録した。得られた観察結果をもとに、各群について試験物質ごとに、各動物の粘膜における評価点を合計し、観察数及び動物数で除して平均値（小数第一位四捨五入）を求め、総合評価の参考資料とした。
各群の全例の頬袋について、適用期間中の適用前、適用終了時及び適用終了日の翌日（２４±２時間）に頬袋粘膜の状態を観察し、評点化を記録した。また、適用開始日の適用前にも観察を行った。観察部位は各試験物質の接触部位頬粘膜とした。なお、肉眼的観察の評価法は下記の表（ISO 10993-10, Annex B.3「Table B.2 Grading system for oral and penile reactions」）に記載されている観察基準及び評価点に従って、紅斑及び痂皮形成の程度に評価点（口内炎ｇｒａｄｅ）をつけた。また、その他に見られた所見についても記録した。得られた観察結果をもとに、各群について試験物質ごとに、各動物の粘膜における評価点を合計し、観察数及び動物数で除して平均値（小数第一位四捨五入）を求め、総合評価の参考資料とした。
４−３−２−４ 病理学的検査
各動物について、適用期間終了日の翌日の肉眼的観察の終了後、イソフルラン麻酔下で放血致死させ、左右頬袋を採取し、１０％中性緩衝ホルマリン液で固定した。常法に従いＨＥ染色の標本を作製し、病理学的検査を実施した。なお、肉眼的観察の評価法はISO 10993-10, Annex B.3 「Table B.3 Grading system for microscopic examination for oral, penile, rectal and vaginal tissue reaction」に記載されている基準に従って、上皮、白血球浸潤、血管充血及び浮腫の各項目について所見又はグレードを記録した。また、その他に認められた所見についても記録した。
各動物について、適用期間終了日の翌日の肉眼的観察の終了後、イソフルラン麻酔下で放血致死させ、左右頬袋を採取し、１０％中性緩衝ホルマリン液で固定した。常法に従いＨＥ染色の標本を作製し、病理学的検査を実施した。なお、肉眼的観察の評価法はISO 10993-10, Annex B.3 「Table B.3 Grading system for microscopic examination for oral, penile, rectal and vaginal tissue reaction」に記載されている基準に従って、上皮、白血球浸潤、血管充血及び浮腫の各項目について所見又はグレードを記録した。また、その他に認められた所見についても記録した。
４−３−２−５ 総合評価
観察期間中の一般状態及び体重推移を参考にし、頬粘膜の肉眼的観察結果及び病理学的観察結果から得られた各試験物質の反応程度をもとにして、各試験物質の口腔粘膜への影響を総合的に評価した。
観察期間中の一般状態及び体重推移を参考にし、頬粘膜の肉眼的観察結果及び病理学的観察結果から得られた各試験物質の反応程度をもとにして、各試験物質の口腔粘膜への影響を総合的に評価した。
４−４ 結果
４−４−１ 一般状態
いずれの動物にも異常は認められなかった。
いずれの動物にも異常は認められなかった。
４−４−２ 体重
結果を図７に示した。０．１％ＯＰＢ−５群は体重がほとんど変化しなかった。他の群は平均値は徐々に増加した。
結果を図７に示した。０．１％ＯＰＢ−５群は体重がほとんど変化しなかった。他の群は平均値は徐々に増加した。
４−４−３ 適用部位の肉眼的観察
結果を図８に示し、最終日の各群の頬袋を図９のＰｈｏｔｏ１〜８に示した。全ての製剤で紅斑等の刺激性がほとんど認められなかった。しかし、０．１％ＯＰＢ−１、−２、−６、−７及び−８では、白板様症状（角化亢進、肥厚）が認められた。一方、０．１％ＯＰＢ−３、−４及び−５では全く異常が認められなかった。
結果を図８に示し、最終日の各群の頬袋を図９のＰｈｏｔｏ１〜８に示した。全ての製剤で紅斑等の刺激性がほとんど認められなかった。しかし、０．１％ＯＰＢ−１、−２、−６、−７及び−８では、白板様症状（角化亢進、肥厚）が認められた。一方、０．１％ＯＰＢ−３、−４及び−５では全く異常が認められなかった。
４−４−４ 病理組織学的検査
結果を図１０に示した。ISO 10993-10、Annex B.3「Table B.3 Grading system for microscopic examination for oral, penile, rectal and vaginal tissue reaction」に記載されている評価基準に従って、上皮（細胞変性、化生及び康澗）、白血球浸潤、血管充血及び浮腫のグレード付けにより、個体毎の炎症指数及び群毎の炎症指数の平均を算出した。また、評価基準以外の所見についても記録した。その結果、平均値は０．１％ＯＰＢ−３群では変化は認められなかった。０．１％ＯＰＢ−１群を含む他の群では、上皮の細胞変性及び極小〜中等度の白血球浸潤が認められ、炎症指数は１〜３の極小と評価された。これらの群では、評価基準以外の所見として、軽微な細胞間浮腫及び軽微から軽度の過角化が認められた。
結果を図１０に示した。ISO 10993-10、Annex B.3「Table B.3 Grading system for microscopic examination for oral, penile, rectal and vaginal tissue reaction」に記載されている評価基準に従って、上皮（細胞変性、化生及び康澗）、白血球浸潤、血管充血及び浮腫のグレード付けにより、個体毎の炎症指数及び群毎の炎症指数の平均を算出した。また、評価基準以外の所見についても記録した。その結果、平均値は０．１％ＯＰＢ−３群では変化は認められなかった。０．１％ＯＰＢ−１群を含む他の群では、上皮の細胞変性及び極小〜中等度の白血球浸潤が認められ、炎症指数は１〜３の極小と評価された。これらの群では、評価基準以外の所見として、軽微な細胞間浮腫及び軽微から軽度の過角化が認められた。
以上の結果から、０．１％ＯＰＢ−３で使用した基剤Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３は、オラネキシジングルコン酸塩の口腔粘膜適用製剤の基剤として特に有用であることが示唆された。また、肉眼的観察で全く異常が見られなかった０．１％ＯＰＢ−４及び−５で使用したＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−８５及びＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７も、オラネキシジングルコン酸塩の口腔粘膜適用製剤の基剤として使用しうることが示唆された。
５．ハムスターを用いた口腔粘膜刺激性試験２
実施例４の刺激性試験において、基剤Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３が、オラネキシジングルコン酸塩の口腔粘膜適用製剤の基剤として有用であることが示唆された。そこで、本試験では該基剤を用い、ＯＰＢ濃度及び基剤濃度を振って刺激のない製剤を引き続き検討した。試験系は、ハムスター頬袋への反復投与とし、期間を２週間から４週間に延ばし実施した。
実施例４の刺激性試験において、基剤Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３が、オラネキシジングルコン酸塩の口腔粘膜適用製剤の基剤として有用であることが示唆された。そこで、本試験では該基剤を用い、ＯＰＢ濃度及び基剤濃度を振って刺激のない製剤を引き続き検討した。試験系は、ハムスター頬袋への反復投与とし、期間を２週間から４週間に延ばし実施した。
５−１ 被験物質
５−１−１ 被験物質１
名称 ：０．１％ＯＰＢ−１
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ ０．５０ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ−１
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ ０．５０ｗ／ｖ％
５−１−２ 被験物質２
名称 ：０．１％ＯＰＢ−２
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ−２
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ ｗ／ｖ％
５−１−３ 被験物質３
名称 ：０．１％ＯＰＢ−３
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ ０．５０ｗ／ｖ％
Ｌｉｐｉｄｕｒｅ（登録商標） １．０ ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ−３
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ ０．５０ｗ／ｖ％
Ｌｉｐｉｄｕｒｅ（登録商標） １．０ ｗ／ｖ％
５−１−４ 被験物質４
名称 ：０．１％ＯＰＢ−４
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ ｗ／ｖ％
Ｌｉｐｉｄｕｒｅ（登録商標） １．０ ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ−４
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ ｗ／ｖ％
Ｌｉｐｉｄｕｒｅ（登録商標） １．０ ｗ／ｖ％
５−１−５ 被験物質５
名称 ：０．３％ＯＰＢ−１
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．３０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．２２ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．５０ｗ／ｖ％
名称 ：０．３％ＯＰＢ−１
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．３０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．２２ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．５０ｗ／ｖ％
５−１−６ 被験物質６
名称 ：０．３％ＯＰＢ−２
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．３０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．２２ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ ３．０ ｗ／ｖ％
名称 ：０．３％ＯＰＢ−２
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．３０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．２２ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ ３．０ ｗ／ｖ％
５−１−７ 被験物質７
名称 ：０．３％ＯＰＢ−３
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．３０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．２２ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−８５ １．５０ｗ／ｖ％
名称 ：０．３％ＯＰＢ−３
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．３０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．２２ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−８５ １．５０ｗ／ｖ％
５−１−８ 被験物質８
名称 ：０．３％ＯＰＢ−４
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．３０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．２２ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−８５ ３．０ ｗ／ｖ％
名称 ：０．３％ＯＰＢ−４
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．３０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．２２ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−８５ ３．０ ｗ／ｖ％
５−１−９ 被験物質９
名称 ：０．５％ＯＰＢ−１
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．５０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．３６ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ ２．５０ｗ／ｖ％
名称 ：０．５％ＯＰＢ−１
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．５０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．３６ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ ２．５０ｗ／ｖ％
５−１−１０ 被験物質１０
名称 ：０．５％ＯＰＢ−２
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．５０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．３６ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ ５．０ ｗ／ｖ％
名称 ：０．５％ＯＰＢ−２
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．５０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．３６ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ ５．０ ｗ／ｖ％
５−１−１１ 被験物質１１
名称 ：０．５％ＯＰＢ−３
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．５０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．３６ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ ２．５０ｗ／ｖ％
Ｌｉｐｉｄｕｒｅ（登録商標） １．０ ｗ／ｖ％
名称 ：０．５％ＯＰＢ−３
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．５０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．３６ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ ２．５０ｗ／ｖ％
Ｌｉｐｉｄｕｒｅ（登録商標） １．０ ｗ／ｖ％
５−１−１２ 被験物質１２
名称 ：０．５％ＯＰＢ−４
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．５０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．３６ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ ５．０ ｗ／ｖ％
Ｌｉｐｉｄｕｒｅ（登録商標） １．０ ｗ／ｖ％
名称 ：０．５％ＯＰＢ−４
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．５０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．３６ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ ５．０ ｗ／ｖ％
Ｌｉｐｉｄｕｒｅ（登録商標） １．０ ｗ／ｖ％
５−２ 使用動物
入荷時８週齢のハムスター、Slc:Syrian、雄を用い、各群３匹で試験を行った。
入荷時８週齢のハムスター、Slc:Syrian、雄を用い、各群３匹で試験を行った。
５−３ 試験方法
５−３−１ 被験物質適用方法
５−３−１−１ 適用量
左頬袋に被験物質１ｍＬを適用した。
左頬袋に被験物質１ｍＬを適用した。
５−３−１−２ 適用方法
〔１〕ガス麻酔により麻酔を導入した［導入麻酔：空気３．０Ｌ／ｍｉｎに３％イソフルラン（マイラン製薬株式会社製）］。
〔２〕維持麻酔下（濃度は適宜調整）にて動物を仰臥位に固定し、綿棒を用いて動物の頬袋を引き出し、片手で引き出した頬袋を軽くつまんだ。
〔３〕生理食塩液及び綿棒で頬袋粘膜に付着した飼料等の異物を取り除き、清潔にした後頬袋を元に戻した。
〔４〕１ｍＬシリンジ及び経口投与用ゾンデを用いて、左頬袋には被験物質１ｍＬを適用し、右頬袋には１ｍＬシリンジに取り付けた空の経口投与用ゾンデを挿入・抜去した。
〔５〕適用３０秒後、被験物質が気道内へ逆流しないように動物を腹臥位に反転させ排出した。口腔内の余分な被験物質は綿棒を用いて全て除去した。
〔６〕適用部位の頬粘膜の色調等を観察・記録し、動物をケージに戻した。
〔７〕上記の操作を１日２回（朝・夕）、２８日間繰り返した。
〔１〕ガス麻酔により麻酔を導入した［導入麻酔：空気３．０Ｌ／ｍｉｎに３％イソフルラン（マイラン製薬株式会社製）］。
〔２〕維持麻酔下（濃度は適宜調整）にて動物を仰臥位に固定し、綿棒を用いて動物の頬袋を引き出し、片手で引き出した頬袋を軽くつまんだ。
〔３〕生理食塩液及び綿棒で頬袋粘膜に付着した飼料等の異物を取り除き、清潔にした後頬袋を元に戻した。
〔４〕１ｍＬシリンジ及び経口投与用ゾンデを用いて、左頬袋には被験物質１ｍＬを適用し、右頬袋には１ｍＬシリンジに取り付けた空の経口投与用ゾンデを挿入・抜去した。
〔５〕適用３０秒後、被験物質が気道内へ逆流しないように動物を腹臥位に反転させ排出した。口腔内の余分な被験物質は綿棒を用いて全て除去した。
〔６〕適用部位の頬粘膜の色調等を観察・記録し、動物をケージに戻した。
〔７〕上記の操作を１日２回（朝・夕）、２８日間繰り返した。
５−３−２ 検査及び観察
５−３−２−１ 一般状態の観察
各群の全例について、適用期間中の適用前、適用終了時及び適用期間終了日の翌日に一般状態観察を行った。また、適用開始日の適用前にも観察を行った。
各群の全例について、適用期間中の適用前、適用終了時及び適用期間終了日の翌日に一般状態観察を行った。また、適用開始日の適用前にも観察を行った。
５−３−２−２ 体重測定
各群の全例において、適用期間中の適用前、適用期間終了日の翌日に体重を測定した。また、適用開始日の適用前にも２〜３日おきに測定を行った。
各群の全例において、適用期間中の適用前、適用期間終了日の翌日に体重を測定した。また、適用開始日の適用前にも２〜３日おきに測定を行った。
５−３−２−３ 適用部位の肉眼的観察方法
各群の全例の頬袋について、適用期間中の適用前、適用終了時及び適用終了日の翌日（２４±２時間）に頬袋粘膜の状態を観察し、評点化を記録した。また、適用開始日の適用前にも観察を行った。観察部位は各試験物質の接触部位頬粘膜とした。なお、肉眼的観察の評価法は下記の表（ISO 10993-10, Annex B.3「Table B.2 Grading system for oral and penile reactions」）に記載されている観察基準及び評価点に従って、紅斑及び痂皮形成の程度に評価点（口内炎ｇｒａｄｅ）をつけた。また、その他に見られた所見についても記録した。得られた観察結果をもとに、各群について試験物質ごとに、各動物の粘膜における評価点を合計し、観察数及び動物数で除して平均値（小数第一位四捨五入）を求め、総合評価の参考資料とした。
各群の全例の頬袋について、適用期間中の適用前、適用終了時及び適用終了日の翌日（２４±２時間）に頬袋粘膜の状態を観察し、評点化を記録した。また、適用開始日の適用前にも観察を行った。観察部位は各試験物質の接触部位頬粘膜とした。なお、肉眼的観察の評価法は下記の表（ISO 10993-10, Annex B.3「Table B.2 Grading system for oral and penile reactions」）に記載されている観察基準及び評価点に従って、紅斑及び痂皮形成の程度に評価点（口内炎ｇｒａｄｅ）をつけた。また、その他に見られた所見についても記録した。得られた観察結果をもとに、各群について試験物質ごとに、各動物の粘膜における評価点を合計し、観察数及び動物数で除して平均値（小数第一位四捨五入）を求め、総合評価の参考資料とした。
５−３−２−４ 病理学的検査
各動物について、適用期間終了日の翌日の肉眼的観察の終了後、イソフルラン麻酔下で放血致死させ、左右頬袋を採取し、１０％中性緩衝ホルマリン液で固定した。常法に従いＨＥ染色の標本を作製し、病理学的検査を実施した。なお、肉眼的観察の評価法はISO 10993-10, Annex B.3 「Table B.3 Grading system for microscopic examination for oral, penile, rectal and vaginal tissue reaction」に記載されている基準に従って、上皮、白血球浸潤、血管充血及び浮腫の各項目について所見又はグレードを記録した。また、その他に認められた所見についても記録した。
各動物について、適用期間終了日の翌日の肉眼的観察の終了後、イソフルラン麻酔下で放血致死させ、左右頬袋を採取し、１０％中性緩衝ホルマリン液で固定した。常法に従いＨＥ染色の標本を作製し、病理学的検査を実施した。なお、肉眼的観察の評価法はISO 10993-10, Annex B.3 「Table B.3 Grading system for microscopic examination for oral, penile, rectal and vaginal tissue reaction」に記載されている基準に従って、上皮、白血球浸潤、血管充血及び浮腫の各項目について所見又はグレードを記録した。また、その他に認められた所見についても記録した。
５−３−２−５ 総合評価
観察期間中の一般状態及び体重推移を参考にし、頬粘膜の肉眼的観察結果及び病理学的観察結果から得られた各試験物質の反応程度をもとにして、各試験物質の口腔粘膜への影響を総合的に評価した。
観察期間中の一般状態及び体重推移を参考にし、頬粘膜の肉眼的観察結果及び病理学的観察結果から得られた各試験物質の反応程度をもとにして、各試験物質の口腔粘膜への影響を総合的に評価した。
５−４ 結果
５−４−１ 一般状態
いずれの動物にも異常は認められなかった。
いずれの動物にも異常は認められなかった。
５−４−２ 体重
すべての群で経時的に体重が増加し、群間による差はほとんど無かった。
すべての群で経時的に体重が増加し、群間による差はほとんど無かった。
５−４−３ 適用部位の肉眼的観察
結果を図１１に示した。全ての製剤で紅斑等の刺激性が認められなかった（評価点０）。しかし、０．３％濃度以上のＯＰＢでは、白板様症状（角化亢進、肥厚）が認められた。一方、０．１％濃度のＯＰＢでは全く異常が認められなかった。
結果を図１１に示した。全ての製剤で紅斑等の刺激性が認められなかった（評価点０）。しかし、０．３％濃度以上のＯＰＢでは、白板様症状（角化亢進、肥厚）が認められた。一方、０．１％濃度のＯＰＢでは全く異常が認められなかった。
５−４−４ 病理組織学的検査
結果を図１２に示した。ISO 10993-10、Annex B.3「Table B.3 Grading system for microscopic examination for oral, penile, rectal and vaginal tissue reaction」に記載されている評価基準に従って、上皮（細胞変性、化生及び康澗）、白血球浸潤、血管充血及び浮腫のグレード付けにより、個体毎の炎症指数及び群毎の炎症指数の平均を算出した。また、評価基準以外の所見についても記録した。その結果、０．１％ＯＰＢの各群では炎症性の反応は認められなかった。０．３％濃度以上のＯＰＢ各群では、上皮の変性及び白血球浸潤が認められ、炎症指数は１〜３でいずれも極小の反応であった。評価基準以外の所見として、０．１％ＯＰＢ群では一部の個体に軽微〜軽度の過角化が認められ、０．３％濃度以上のＯＰＢ各群では、軽微〜中程度の過角化及び軽微な棘細胞増生が認められた。その他コントロール群（右頬袋：Sham-ope側）で認められた表皮内微小膿瘍は自然発症性の病変と考えられた。
結果を図１２に示した。ISO 10993-10、Annex B.3「Table B.3 Grading system for microscopic examination for oral, penile, rectal and vaginal tissue reaction」に記載されている評価基準に従って、上皮（細胞変性、化生及び康澗）、白血球浸潤、血管充血及び浮腫のグレード付けにより、個体毎の炎症指数及び群毎の炎症指数の平均を算出した。また、評価基準以外の所見についても記録した。その結果、０．１％ＯＰＢの各群では炎症性の反応は認められなかった。０．３％濃度以上のＯＰＢ各群では、上皮の変性及び白血球浸潤が認められ、炎症指数は１〜３でいずれも極小の反応であった。評価基準以外の所見として、０．１％ＯＰＢ群では一部の個体に軽微〜軽度の過角化が認められ、０．３％濃度以上のＯＰＢ各群では、軽微〜中程度の過角化及び軽微な棘細胞増生が認められた。その他コントロール群（右頬袋：Sham-ope側）で認められた表皮内微小膿瘍は自然発症性の病変と考えられた。
６．５−ＦＵ誘発ハムスター口内炎モデルにおける効力試験１
本試験では、５−ＦＵ誘発口内炎モデルにおけるＯＰＢ製剤の効力を試験した。具体的には、５−ＦＵ誘発口内炎モデルにおいて、０．１％ＯＰＢで口腔内を含嗽した際の口腔内細菌数の経時的な測定及び口内炎評価を行った。
本試験では、５−ＦＵ誘発口内炎モデルにおけるＯＰＢ製剤の効力を試験した。具体的には、５−ＦＵ誘発口内炎モデルにおいて、０．１％ＯＰＢで口腔内を含嗽した際の口腔内細菌数の経時的な測定及び口内炎評価を行った。
６−１ 試験物質
被験物質と対照物質を合わせて試験物質とした。
被験物質と対照物質を合わせて試験物質とした。
６−１−１ 被験物質
名称 ：０．１％ＯＰＢ
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール
０．１４ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール
０．１０ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール
０．１４ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール
０．１０ｗ／ｖ％
６−１−２ 対照物質
名称 ：基剤
組成 ：ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール
０．０７ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール
０．１０ｗ／ｖ％
名称 ：基剤
組成 ：ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール
０．０７ｗ／ｖ％
ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール
０．１０ｗ／ｖ％
６−２ 使用動物
入荷時６週齢のハムスター、Slc:Syrian、雄を用いた。
入荷時６週齢のハムスター、Slc:Syrian、雄を用いた。
６−３ 試験方法
６−３−１ 麻酔
ガス麻酔［導入麻酔：空気３．０Ｌ／ｍｉｎに３％イソフルラン（マイラン製薬株式会社製）、持続麻酔は適宜濃度を調整］を実施した。
ガス麻酔［導入麻酔：空気３．０Ｌ／ｍｉｎに３％イソフルラン（マイラン製薬株式会社製）、持続麻酔は適宜濃度を調整］を実施した。
６−３−２ 口内炎モデル作製
麻酔下にて、５−ＦＵを６０ｍｇ／ｋｇとなるようにハムスターの腹腔内に投与した。投与はｄａｙ０、ｄａｙ２の計２回とした。
麻酔下にて、５−ＦＵを６０ｍｇ／ｋｇとなるようにハムスターの腹腔内に投与した。投与はｄａｙ０、ｄａｙ２の計２回とした。
Ｄａｙ４に麻酔下にて、ハムスターの頬袋を摘出した。頬袋に溜まっている餌・実験動物用床敷を取り除き、生理食塩液を含ませたカット綿で軽く拭き取った。精密ワイヤーブラシ（φ２．３４ｍｍ、サンフレックス株式会社製）で頬袋の表層（角質層）をブラッシングした。ブラッシング後、頬袋を口腔内に戻した。
６−３−３ 試験物質投与
麻酔下にて、ハムスターを仰臥位に固定し、片頬袋に試験物質を１ｍＬずつ注入した。３０秒後、試験物質を排出し、余分な頬袋内の試験物質を滅菌綿棒で吸い取った。この含嗽操作による投与は１日２回とした。投与は口内炎の障害がピークに達した後は実施しなかった。
麻酔下にて、ハムスターを仰臥位に固定し、片頬袋に試験物質を１ｍＬずつ注入した。３０秒後、試験物質を排出し、余分な頬袋内の試験物質を滅菌綿棒で吸い取った。この含嗽操作による投与は１日２回とした。投与は口内炎の障害がピークに達した後は実施しなかった。
６−３−４ 細菌採取
Ｄａｙ０、４、７、１０、１７において、１回目の試験物質投与前、０ｈｒ、６ｈｒ後の計４時点に、麻酔下で両頬袋内から滅菌綿棒を用いて細菌を採取した。但し、ｄａｙ１０、１７において試験物質適用しなかった場合は、１回のみの採取とした。採取後の綿棒は５ｍＬ ＳＣＤＬＰ培地に浸漬後撹拌し、細菌計数用サンプルとした。
Ｄａｙ０、４、７、１０、１７において、１回目の試験物質投与前、０ｈｒ、６ｈｒ後の計４時点に、麻酔下で両頬袋内から滅菌綿棒を用いて細菌を採取した。但し、ｄａｙ１０、１７において試験物質適用しなかった場合は、１回のみの採取とした。採取後の綿棒は５ｍＬ ＳＣＤＬＰ培地に浸漬後撹拌し、細菌計数用サンプルとした。
６−３−５ 生残菌数の測定
新ＧＭＰ微生物試験法１）、食品衛生検査指針２）を参考にカンテン平板混釈法を実施した。
〔１〕細菌計数用サンプル５００μＬを採取し、４．５ｍＬの希釈液を用いて、１０１倍〜１０４倍の１０倍希釈系列を作製した。
〔２〕細菌計数用サンプル原液及び各希釈菌液１ｍＬずつ滅菌シャーレに分注した。
〔３〕上記のシャーレに、速やかに約４７℃に設定した恒温槽で保温した測定培地（ＴＳＡ＋）１５ｍＬを分注した。
〔４〕測定培地の固化後、混釈平板をインキュベーター内に倒置し、コロニーが計数できるまで３５℃で培養した（約２日間）。
〔５〕培養後、混釈平板で増殖したコロニーを目視にて計数した。コロニー数が多すぎてコロニー間の区別ができない混釈平板は、ＴＮＴＣ（too numerous to count）とし計数しなかった。
新ＧＭＰ微生物試験法１）、食品衛生検査指針２）を参考にカンテン平板混釈法を実施した。
〔１〕細菌計数用サンプル５００μＬを採取し、４．５ｍＬの希釈液を用いて、１０１倍〜１０４倍の１０倍希釈系列を作製した。
〔２〕細菌計数用サンプル原液及び各希釈菌液１ｍＬずつ滅菌シャーレに分注した。
〔３〕上記のシャーレに、速やかに約４７℃に設定した恒温槽で保温した測定培地（ＴＳＡ＋）１５ｍＬを分注した。
〔４〕測定培地の固化後、混釈平板をインキュベーター内に倒置し、コロニーが計数できるまで３５℃で培養した（約２日間）。
〔５〕培養後、混釈平板で増殖したコロニーを目視にて計数した。コロニー数が多すぎてコロニー間の区別ができない混釈平板は、ＴＮＴＣ（too numerous to count）とし計数しなかった。
６−３−６ 生残菌数の算出
６−３−５の項に基づいて採用したコロニー数に希釈倍数を乗じ生残菌数（ＣＦＵ／ｍＬ）を求めた。採用コロニー数は小数点以下第２位を四捨五入して表示した。下式により生残菌数（ＣＦＵ／ｓｗａｂ）を計算した。
Ａ：採用コロニー数
生残菌数（ＣＦＵ／ｓｗａｂ）＝Ａ×希釈倍数×サンプル液量（５ｍＬ）
６−３−５の項に基づいて採用したコロニー数に希釈倍数を乗じ生残菌数（ＣＦＵ／ｍＬ）を求めた。採用コロニー数は小数点以下第２位を四捨五入して表示した。下式により生残菌数（ＣＦＵ／ｓｗａｂ）を計算した。
Ａ：採用コロニー数
生残菌数（ＣＦＵ／ｓｗａｂ）＝Ａ×希釈倍数×サンプル液量（５ｍＬ）
さらに、生残菌数の対数値よりＬｏｇ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎを次式で求めた。Ｌｏｇ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎは小数点以下第３位を四捨五入して表示した。生残菌数１以下の対数値は０とした。
Ｂ：ベースラインの生菌数対数値
Ｃ：試験物質塗布後の生菌数対数値
Ｌｏｇ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ＝Ｂ−Ｃ
Ｂ：ベースラインの生菌数対数値
Ｃ：試験物質塗布後の生菌数対数値
Ｌｏｇ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ＝Ｂ−Ｃ
６−３−７ 統計学的解析
各群の生菌数（ＣＦＵ／ｓｗａｂ）とその対数値の平均値及び標準偏差を求めた。生菌数は小数点以下第１位を四捨五入して整数で表示した。生菌数の対数値は小数点以下第３位を四捨五入して表示した。なお、生菌数が０の場合は生菌数の対数値は０とした。また、探索試験のため検定は行わなかった。
各群の生菌数（ＣＦＵ／ｓｗａｂ）とその対数値の平均値及び標準偏差を求めた。生菌数は小数点以下第１位を四捨五入して整数で表示した。生菌数の対数値は小数点以下第３位を四捨五入して表示した。なお、生菌数が０の場合は生菌数の対数値は０とした。また、探索試験のため検定は行わなかった。
６−３−８ 口内炎評価
下記の表に基づき、口内炎ｇｒａｄｅを評価した。
下記の表に基づき、口内炎ｇｒａｄｅを評価した。
６−４ 結果
６−４−１ 細菌数
結果を表２及び図１３に示す。Ｄａｙ０、４、１０においては、０．１％ＯＰＢ群で投与後の細菌数減少が顕著であったが、口内炎の重症化が顕著であったｄａｙ７では、細菌数減少値が微量であった。
結果を表２及び図１３に示す。Ｄａｙ０、４、１０においては、０．１％ＯＰＢ群で投与後の細菌数減少が顕著であったが、口内炎の重症化が顕著であったｄａｙ７では、細菌数減少値が微量であった。
６−４−２ 口内炎ｇｒａｄｅ
結果を図１４に示した。０．１％ＯＰＢ群において、口内炎ｇｒａｄｅが顕著に低かった。
結果を図１４に示した。０．１％ＯＰＢ群において、口内炎ｇｒａｄｅが顕著に低かった。
本試験において、０．１％ＯＰＢ群のｄａｙ７の細菌数減少値が低かった原因として、細菌採取方法若しくは浸出液過多による殺菌活性の低下が考えられた。本試験において、０．１％ＯＰＢを投与し口腔内を清潔に保つことが口内炎重症化を軽減させることが示唆された。
７．５−ＦＵ誘発ハムスター口内炎モデルにおける効力試験２
本試験では、５−ＦＵ誘発ハムスター口内炎モデルにおいて、０．１％オラネキシジングルコン酸塩と０．１％ＣＨＧの口内炎軽減効果を比較検討した。
本試験では、５−ＦＵ誘発ハムスター口内炎モデルにおいて、０．１％オラネキシジングルコン酸塩と０．１％ＣＨＧの口内炎軽減効果を比較検討した。
７−１ 試験物質
被験物質と対照物質を合わせて試験物質とした。
被験物質と対照物質を合わせて試験物質とした。
７−１−１ 被験物質１
名称 ：０．１％ＯＰＢ
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
名称 ：０．１％ＯＰＢ
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
７−１−２ 被験物質２
名称 ：Ｐｅｒｉｄｅｘ（登録商標）／０．１％ＣＨＧ
製造元 ：3M ESPE Dental Products
組成 ：クロルヘキシジングルコン酸塩 ０．１２ｗ／ｖ％
名称 ：Ｐｅｒｉｄｅｘ（登録商標）／０．１％ＣＨＧ
製造元 ：3M ESPE Dental Products
組成 ：クロルヘキシジングルコン酸塩 ０．１２ｗ／ｖ％
７−１−３ 対照物質
名称 ：基剤
組成 ：ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール
０．０７ｗ／ｖ％
名称 ：基剤
組成 ：ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール
０．０７ｗ／ｖ％
７−２ 使用細菌
本試験には、口腔内の常在菌であるスタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus、ＡＴＣＣ番号：６５３８、Microbiologics, Inc.社製）を用いた。
本試験には、口腔内の常在菌であるスタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus、ＡＴＣＣ番号：６５３８、Microbiologics, Inc.社製）を用いた。
７−３ 使用動物
入荷時６週齢のハムスター、Slc:Syrian、雄を用い、各群５匹で試験を行った。
入荷時６週齢のハムスター、Slc:Syrian、雄を用い、各群５匹で試験を行った。
７−４ 試験方法
７−４−１ 試験菌液の調製
〔１〕保管されている細菌ペレットの入ったバイアルを取り出し室温に戻した。
〔２〕バイアルから細菌ペレットを１個取り出し、滅菌チューブに移した。
〔３〕０．５ｍＬの生理食塩液を加えた。
〔４〕滅菌綿棒で細菌ペレットを押しつぶし、菌懸濁液とした。
〔５〕ＴＳＡ平板に菌懸濁液を滅菌綿棒で直径約２ｃｍの円形エリアに接種し、白金耳を用いて接種エリアから画線接種した。
〔６〕画線接種されたＴＳＡ平板を倒置し、コロニーを形成するまで培養した。
〔７〕形成されたコロニーの中から単一のコロニーを選び、白金線で採取してカジトン培地に穿刺した。
〔８〕穿刺したカジトン培地を、菌の増殖が確認できるまで培養した。
〔９〕菌の増殖を確認後、冷蔵保管した（設定値２〜８℃）。
〔１０〕カジトン培地で冷蔵保管された試験菌の一部を白金線で採取し、ＭＨＢ培地５ｍＬを入れた１４ｍＬ滅菌チューブに移し、菌が増殖するまで静置培養した。
〔１１〕培養後、培養液１０μＬを滅菌チップで採取し、再度ＭＨＢ培地５ｍＬを入れた１４ｍＬ滅菌チューブに移し、菌が増殖するまで静置培養した。
〔１２〕培養後、ＭＨＢ培地で継代培養した試験菌培養液約５ｍＬを１５ｍＬコニカルチューブに回収し、生理食塩液を８ｍＬ添加した後、緩やかに攪拌した。
〔１３〕３０００ｒｐｍ、１０分間、２３℃で遠心（冷却遠心機５８００、ロータＲＳ−７２０、株式会社久保田製作所製）し、上清を廃棄した。
〔１４〕沈殿している試験菌に蒸留水（大塚蒸留水、株式会社大塚製薬工場製）１ｍＬを添加し、懸濁した。
〔１５〕菌懸濁液を１４ｍＬ滅菌チューブに移し、濁度をＭｃＦａｒｌａｎｄ Ｓｔａｎｄａｒｄ（品番７０９００、シスメックス・ビオメリュー株式会社製）を用いて判定した。ＭｃＦａｒｌａｎｄ ５となるように、生理食塩液を加え、菌液濃度を調節した。
〔１６〕ＭｃＦａｒｌａｎｄ ５とした菌懸濁液を、試験菌液とした。
〔１〕保管されている細菌ペレットの入ったバイアルを取り出し室温に戻した。
〔２〕バイアルから細菌ペレットを１個取り出し、滅菌チューブに移した。
〔３〕０．５ｍＬの生理食塩液を加えた。
〔４〕滅菌綿棒で細菌ペレットを押しつぶし、菌懸濁液とした。
〔５〕ＴＳＡ平板に菌懸濁液を滅菌綿棒で直径約２ｃｍの円形エリアに接種し、白金耳を用いて接種エリアから画線接種した。
〔６〕画線接種されたＴＳＡ平板を倒置し、コロニーを形成するまで培養した。
〔７〕形成されたコロニーの中から単一のコロニーを選び、白金線で採取してカジトン培地に穿刺した。
〔８〕穿刺したカジトン培地を、菌の増殖が確認できるまで培養した。
〔９〕菌の増殖を確認後、冷蔵保管した（設定値２〜８℃）。
〔１０〕カジトン培地で冷蔵保管された試験菌の一部を白金線で採取し、ＭＨＢ培地５ｍＬを入れた１４ｍＬ滅菌チューブに移し、菌が増殖するまで静置培養した。
〔１１〕培養後、培養液１０μＬを滅菌チップで採取し、再度ＭＨＢ培地５ｍＬを入れた１４ｍＬ滅菌チューブに移し、菌が増殖するまで静置培養した。
〔１２〕培養後、ＭＨＢ培地で継代培養した試験菌培養液約５ｍＬを１５ｍＬコニカルチューブに回収し、生理食塩液を８ｍＬ添加した後、緩やかに攪拌した。
〔１３〕３０００ｒｐｍ、１０分間、２３℃で遠心（冷却遠心機５８００、ロータＲＳ−７２０、株式会社久保田製作所製）し、上清を廃棄した。
〔１４〕沈殿している試験菌に蒸留水（大塚蒸留水、株式会社大塚製薬工場製）１ｍＬを添加し、懸濁した。
〔１５〕菌懸濁液を１４ｍＬ滅菌チューブに移し、濁度をＭｃＦａｒｌａｎｄ Ｓｔａｎｄａｒｄ（品番７０９００、シスメックス・ビオメリュー株式会社製）を用いて判定した。ＭｃＦａｒｌａｎｄ ５となるように、生理食塩液を加え、菌液濃度を調節した。
〔１６〕ＭｃＦａｒｌａｎｄ ５とした菌懸濁液を、試験菌液とした。
７−４−２ 麻酔
ガス麻酔［導入麻酔：空気３．０Ｌ／ｍｉｎに３％イソフルラン（マイラン製薬株式会社）、持続麻酔は適宜濃度を調整］を実施した。
ガス麻酔［導入麻酔：空気３．０Ｌ／ｍｉｎに３％イソフルラン（マイラン製薬株式会社）、持続麻酔は適宜濃度を調整］を実施した。
７−４−３ 口内炎モデル作製
麻酔下にて、５−ＦＵを６０ｍｇ／ｋｇとなるようにハムスターの腹腔内に投与した。投与はｄａｙ０、ｄａｙ２の計２回とした。Ｄａｙ４に麻酔下にて、ハムスターの頬袋を摘出した。頬袋に溜まっている餌・実験動物用床敷を取り除き、生理食塩液を含ませたカット綿で軽く拭き取った。精密ワイヤーブラシ（φ２．３４ｍｍ、サンフレックス株式会社製）で頬袋の表層（角質層）をブラッシングした。ブラッシング後、頬袋を口腔内に戻した。
麻酔下にて、５−ＦＵを６０ｍｇ／ｋｇとなるようにハムスターの腹腔内に投与した。投与はｄａｙ０、ｄａｙ２の計２回とした。Ｄａｙ４に麻酔下にて、ハムスターの頬袋を摘出した。頬袋に溜まっている餌・実験動物用床敷を取り除き、生理食塩液を含ませたカット綿で軽く拭き取った。精密ワイヤーブラシ（φ２．３４ｍｍ、サンフレックス株式会社製）で頬袋の表層（角質層）をブラッシングした。ブラッシング後、頬袋を口腔内に戻した。
７−４−４ 試験物質投与
麻酔下にて、ハムスター頬袋に綿棒を用いて１日２回塗布（群分け日から４日間）した。ただし、４日目は午前のみの１回投与とした。
麻酔下にて、ハムスター頬袋に綿棒を用いて１日２回塗布（群分け日から４日間）した。ただし、４日目は午前のみの１回投与とした。
７−４−５ 試験菌液塗布
麻酔下にて、７−４−１で調製した試験菌液を、午前の試験物質投与前にハムスター頬袋に白金耳を用いて１日１回塗布（群分け日から５日間）した。
麻酔下にて、７−４−１で調製した試験菌液を、午前の試験物質投与前にハムスター頬袋に白金耳を用いて１日１回塗布（群分け日から５日間）した。
７−４−６ 口内炎評価
下記の表に基づき、口内炎ｇｒａｄｅを評価した。
下記の表に基づき、口内炎ｇｒａｄｅを評価した。
７−４−７ 統計学的解析
各群のｇｒａｄｅの平均値及び標準偏差を求め、平均値のみでグラフを作成した。探索的な解析のため検定は行わなかった。
各群のｇｒａｄｅの平均値及び標準偏差を求め、平均値のみでグラフを作成した。探索的な解析のため検定は行わなかった。
７−５ 結果
結果を図１５に示した。０．１％ＯＰＢ群は基剤及び０．１％ＣＨＧ群と比較して口内炎重症化を軽減する傾向であった。基剤群と０．１％ＣＨＧ群はほとんど同じｇｒａｄｅであり差は無かった。口内炎の重症化軽減効果から、０．１％ＯＰＢの方が、０．１％ＣＨＧと比較して塗布した細菌若しくは頬袋粘膜の常在菌に対する殺菌効力が優れていることが考えられた。
結果を図１５に示した。０．１％ＯＰＢ群は基剤及び０．１％ＣＨＧ群と比較して口内炎重症化を軽減する傾向であった。基剤群と０．１％ＣＨＧ群はほとんど同じｇｒａｄｅであり差は無かった。口内炎の重症化軽減効果から、０．１％ＯＰＢの方が、０．１％ＣＨＧと比較して塗布した細菌若しくは頬袋粘膜の常在菌に対する殺菌効力が優れていることが考えられた。
８．５−ＦＵ・放射線照射併用により誘発されたハムスター口内炎モデルにおける効力試験
本試験では、５−ＦＵ・放射線照射併用により誘発されたハムスター口内炎モデルにおいて、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３を基剤とした０．１％ＯＰＢ製剤を含嗽法により適用し、口内炎軽減効果を比較検討した。
本試験では、５−ＦＵ・放射線照射併用により誘発されたハムスター口内炎モデルにおいて、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３を基剤とした０．１％ＯＰＢ製剤を含嗽法により適用し、口内炎軽減効果を比較検討した。
８−１ 試験物質
被験物質と対照物質を合わせて試験物質とした。
被験物質と対照物質を合わせて試験物質とした。
８−１−１ 被験物質
名称 ：ＯＰＢ
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ ｗ／ｖ％
名称 ：ＯＰＢ
組成 ：オラネキシジングルコン酸塩 ０．１０ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ ｗ／ｖ％
８−１−２ 対照物質
名称／略称：基剤／Ｂａｓｅ
組成 ：Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ ｗ／ｖ％
名称／略称：基剤／Ｂａｓｅ
組成 ：Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ−４４ ０．０７ｗ／ｖ％
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３ １．０ ｗ／ｖ％
８−２ 使用動物
入荷時６週齢のハムスター、Slc:Syrian、雄を用い、各群８匹で試験を行った。
入荷時６週齢のハムスター、Slc:Syrian、雄を用い、各群８匹で試験を行った。
８−３ 試験方法
８−３−１ 麻酔
８−３−１−１ 放射線照射時
ソムノペンチル（登録商標）（共立製薬株式会社製）を４０ｍｇ／ｋｇとなるように腹腔内に投与した。
ソムノペンチル（登録商標）（共立製薬株式会社製）を４０ｍｇ／ｋｇとなるように腹腔内に投与した。
８−３−１−２ 口内炎評価及び試験物質投与時
ガス麻酔［導入麻酔：空気３．０Ｌ／ｍｉｎに３％イソフルラン（マイラン製薬株式会社製）、持続麻酔は適宜濃度を調整］を実施した。
ガス麻酔［導入麻酔：空気３．０Ｌ／ｍｉｎに３％イソフルラン（マイラン製薬株式会社製）、持続麻酔は適宜濃度を調整］を実施した。
８−３−２ 口内炎モデル作製
８−３−２−１ 放射線照射
Ｄａｙ０にて、麻酔下でハムスターの頬袋を綿棒で摘出した。頬袋に溜まっている餌・実験動物用床敷を取り除き、生理食塩水を含ませたカット綿で軽く拭き取った。成型したアクリル板上に体、頬袋を共に固定し、照射部位の頬袋以外を鉛で覆い、［棚板距離：１２．５ｃｍ、管電圧：１６０ ｋＶ、管電流：６．２ ｍＡ］の条件で放射線を照射（４０Ｇｙ）した。但し、照射は１個体に付き片頬袋とし、各群左頬袋と右頬袋に４匹ずつとなるように振り分けた。
Ｄａｙ０にて、麻酔下でハムスターの頬袋を綿棒で摘出した。頬袋に溜まっている餌・実験動物用床敷を取り除き、生理食塩水を含ませたカット綿で軽く拭き取った。成型したアクリル板上に体、頬袋を共に固定し、照射部位の頬袋以外を鉛で覆い、［棚板距離：１２．５ｃｍ、管電圧：１６０ ｋＶ、管電流：６．２ ｍＡ］の条件で放射線を照射（４０Ｇｙ）した。但し、照射は１個体に付き片頬袋とし、各群左頬袋と右頬袋に４匹ずつとなるように振り分けた。
８−３−２−２ ５−ＦＵ投与
Ｄａｙ０、５、１０の計３回、５−ＦＵを６０ｍｇ／ｋｇとなるようにハムスターの腹腔内に投与した。
Ｄａｙ０、５、１０の計３回、５−ＦＵを６０ｍｇ／ｋｇとなるようにハムスターの腹腔内に投与した。
８−４−３ 試験物質投与
麻酔下にて、ハムスターを仰臥位に固定し、片頬袋に試験物質を１ｍＬずつ注入した。３０秒後、試験物質を排出し、余分な頬袋内の試験物質を滅菌綿棒で吸い取った。この含嗽操作による投与は１日２回とした。投与は口内炎の障害がピークに達した後は実施しなかった。
麻酔下にて、ハムスターを仰臥位に固定し、片頬袋に試験物質を１ｍＬずつ注入した。３０秒後、試験物質を排出し、余分な頬袋内の試験物質を滅菌綿棒で吸い取った。この含嗽操作による投与は１日２回とした。投与は口内炎の障害がピークに達した後は実施しなかった。
８−４−４ 口内炎評価
下記の表に基づき、口内炎ｇｒａｄｅを評価した。
下記の表に基づき、口内炎ｇｒａｄｅを評価した。
８−４−５ 統計学的解析
各群の口内炎ｇｒａｄｅの平均値及び標準偏差を求めグラフを作成した。探索的な解析のため検定は行わなかった。
各群の口内炎ｇｒａｄｅの平均値及び標準偏差を求めグラフを作成した。探索的な解析のため検定は行わなかった。
８−５ 結果
結果を図１６に示した。口内炎ｇｒａｄｅの最大値はｂａｓｅ群が４．９、ＯＰＢ群が４．３であり、さらに立ち上がりもｂａｓｅ群の方が早かった。モデルの強度が強かった影響も有り、ｄａｙ４０においても潰瘍が治らない個体もいたため完全に全例治癒はしなかったが、ＯＰＢ群の方が明らかに治癒が早かった。
結果を図１６に示した。口内炎ｇｒａｄｅの最大値はｂａｓｅ群が４．９、ＯＰＢ群が４．３であり、さらに立ち上がりもｂａｓｅ群の方が早かった。モデルの強度が強かった影響も有り、ｄａｙ４０においても潰瘍が治らない個体もいたため完全に全例治癒はしなかったが、ＯＰＢ群の方が明らかに治癒が早かった。
本発明の組成物を用いることで、化学療法、放射線治療を受けている患者のコミュニケーション機能の阻害、睡眠障害、疼痛、嚥下障害（食事摂取量の減少）などのＱＯＬの低下や、化学療法、放射線治療のＤｏｓｅ遵守妨害を防ぐことができるため、産業上の有用性は高い。
Claims (7)
- ０．０１〜１．５％（Ｗ／Ｖ）のオラネキシジングルコン酸塩と、
ポリオキシプロピレン鎖（ＰＯＰ）と、それを挟む２個のポリオキシエチレン鎖（ＰＯＥ）からなるブロック共重合体であるポロキサマーと
を含む、がんの治療による口腔粘膜炎の改善用及び／又は予防用の組成物。 - ポロキサマーが、ポリオキシエチレン（４２）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３）、ポリオキシエチレン（５４）ポリオキシプロピレン（３９）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−８５）、及びポリオキシエチレン（１９６）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７）から選択されることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
- ポロキサマーが、ポリオキシエチレン（４２）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ−１２３）であることを特徴とする請求項２に記載の組成物。
- オラネキシジングルコン酸塩の濃度が、０．１〜０．３％（Ｗ／Ｖ）であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
- ポロキサマーの濃度が、０．１〜５％（Ｗ／Ｖ）であることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
- 液剤又は含嗽剤であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
- がんの治療が、化学療法、放射線治療、又は化学療法と放射線治療との同時併用療法であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015207549A JP6602639B2 (ja) | 2015-10-21 | 2015-10-21 | がんの治療による口腔粘膜炎の改善・予防用組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|---|---|
| JP2015207549A JP6602639B2 (ja) | 2015-10-21 | 2015-10-21 | がんの治療による口腔粘膜炎の改善・予防用組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2017078046A JP2017078046A (ja) | 2017-04-27 |
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| JP2015207549A Active JP6602639B2 (ja) | 2015-10-21 | 2015-10-21 | がんの治療による口腔粘膜炎の改善・予防用組成物 |
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| ES2956040T3 (es) | 2017-04-19 | 2023-12-12 | Otsuka Pharma Factory Inc | Olanexidina como agente antiinflamatorio |
-
2015
- 2015-10-21 JP JP2015207549A patent/JP6602639B2/ja active Active
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