TW201831520A - 針對抗pd-l1抗體之個體遺傳型抗體及其使用 - Google Patents
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Abstract
本發明提供針對抗PD-L1抗體之抗個體遺傳型抗體及其使用方法。
Description
本發明係關於抗PD-L1個體遺傳型抗體及其使用方法。
已經發現T細胞功能障礙或無反應性與抑制性受體程式化死亡1多肽(PD-1)之誘導及持續表現同時發生。因此,治療性靶向PD-1及經由與PD-1相互作用傳導信號之其他分子(例如程式化死亡配體1(PD-L1))係強烈令人感興趣之領域。已證實PD-L1信號傳導之抑制作為增強用於治療癌症之T細胞免疫性(例如,腫瘤免疫性)之方式。已研發使用抗PD-1或抗PD-L1抗體之療法且其用於治療不同類型之癌症。參見(例如)美國專利第8,217,149號。
業內需要檢測生物樣品及/或臨床樣品中針對PD-L1之治療性單株抗體,而不亦檢測針對或不針對PD-L1之其他抗體(例如,內源性免疫球蛋白)。本發明提供特異性檢測某些抗PD-L1抗體之抗個體遺傳型抗體。該等抗體可用於(例如)藥物動力學(PK)及藥效學研究以及用於量化及監測患者中之治療性抗PD-L1抗體。
在一態樣中,本發明提供特異性結合至抗PD-L1抗體之分離之抗個體遺傳型抗體。在一些實施例中,抗PD-L1抗體包含:(a)輕鏈可變區,其包含:(i)包含胺基酸序列RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:1)之HVR-L1;(ii)包含胺基酸序列SASFLYS(SEQ ID NO:2)之HVR-L2;及 (iii)包含胺基酸序列QQYLYHPAT(SEQ ID NO:3)之HVR-L3;及(b)重鏈可變區,其包含:(i)包含胺基酸序列GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:4)之HVR-H1;(ii)包含胺基酸序列AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:5)之HVR-H2;及(iii)包含胺基酸序列RHWPGGFDY(SEQ ID NO:6)之HVR-H3。
在一些實施例中,抗PD-L1抗體包括包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列之輕鏈可變區及/或包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列之重鏈可變區。
在一些實施例中,抗PD-L1抗體包括包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列之輕鏈及/或包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列之重鏈。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包含重鏈可變區(VH),其包括包含SEQ ID NO:29之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:30之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列之HVR-H3;及/或輕鏈可變區(VL),其包括包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:32之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:33之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:34之胺基酸序列之HVR-H3;及/或VL,其包括包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:35之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:36之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:34之胺基酸序列之HVR-H3;及/或VL,其包括包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列 之HVR-L2及包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包括包含SEQ ID NO:54之序列之重鏈可變區及/或包含SEQ ID NO:53之序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包括包含SEQ ID NO:60之序列之重鏈及/或包含SEQ ID NO:59之序列之輕鏈。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:37之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:39之胺基酸序列之HVR-H3;及/或VL,其包括包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:40之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:41之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:42之胺基酸序列之HVR-H3;及/或VL,其包括包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:42之胺基酸序列之HVR-H3;及/或VL,其包括包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包括包含SEQ ID NO:56之序列之重鏈可變區及/或包含SEQ ID NO:55之序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包括包含SEQ ID NO:62之序列之重鏈及/或包含SEQ ID NO:61之序列之輕鏈。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列之HVR-H3;及/或VL,其包括包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:25之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:49之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:50之胺基酸序列之HVR-H3;及/或VL,其包括包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:27之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:51之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:52之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:50之胺基酸序列之HVR-H3;及/或VL,其包括包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:27之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包括包含SEQ ID NO:58之序列之重鏈可變區及/或包含SEQ ID NO:57之序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體包括包含SEQ ID NO:64之序列之重鏈及/或包含SEQ ID NO:63之序列之輕鏈。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體特異性結合至抗PD-L1抗體之至少一個HVR。
在一些實施例中,分離之抗個體遺傳型抗體偶聯至異源部分或可檢測部分。在一些實施例中,可檢測部分係標記或生物素。
在另一態樣中,本發明提供包含如本文提供之抗個體遺傳型抗體之 組合物。
在另一態樣中,本發明提供包含如本文提供之組合物之套組。
在另一態樣中,本發明提供編碼特異性結合至抗PD-L1抗體之抗個體遺傳型抗體的分離之核酸,其中抗個體遺傳型抗體包括包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3之重鏈可變區及包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3之輕鏈可變區,其中:(a)HVR-H1包含胺基酸序列SYDMS(SEQ ID NO:35);(b)HVR-H2包含胺基酸序列YISSGGGSTYYPDTVKG(SEQ ID NO:36);(c)HVR-H3包含胺基酸序列LVYYDYDDAMDY(SEQ ID NO:34);(d)HVR-L1包含胺基酸序列SASSSVSYMH;(SEQ ID NO:14);(e)HVR-L2包含胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO:15);且(f)HVR-L3包含胺基酸序列QQRSSYPPTF(SEQ ID NO:16)。
在另一態樣中,本發明提供編碼特異性結合至抗PD-L1抗體之抗個體遺傳型抗體的分離之核酸,其中抗個體遺傳型抗體包括包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3之重鏈可變區及包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3之輕鏈可變區,其中:(a)HVR-H1包含胺基酸序列DYIML(SEQ ID NO:43);(b)HVR-H2包含胺基酸序列NINPYYGSTSYNLKFKG(SEQ ID NO:44);(c)HVR-H3包含胺基酸序列WGGNYEGWFAY(SEQ ID NO:42);(d)HVR-L1包含胺基酸序列HASQGISSNIG;(SEQ ID NO:20);(e)HVR-L2包含胺基酸序列HGTNLED(SEQ ID NO:21);且(f)HVR-L3包含胺基酸序列VQYAQFPLTF(SEQ ID NO:22)。
在另一態樣中,本發明提供編碼特異性結合至抗PD-L1抗體之抗個體遺傳型抗體的分離之核酸,其中抗個體遺傳型抗體包括包含HVR-H1、 HVR-H2及HVR-H3之重鏈可變區及包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3之輕鏈可變區,其中:(a)HVR-H1包含胺基酸序列SYDMS(SEQ ID NO:51);(b)HVR-H2包含胺基酸序列YISSGGGSTYYPDTVKG(SEQ ID NO:52);(c)HVR-H3包含胺基酸序列TIYYGYDDVMDY(SEQ ID NO:50);(d)HVR-L1包含胺基酸序列SASSSVSYMH;(SEQ ID NO:26);(e)HVR-L2包含胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO:27);且(f)HVR-L3包含胺基酸序列QQRSGYPPTF(SEQ ID NO:28)。
在另一態樣中,本發明提供編碼如本文提供之抗個體遺傳型抗體的分離之核酸。
在另一態樣中,本發明提供包含如本文提供之核酸之載體。
在另一態樣中,本發明提供包含如本文提供之載體之宿主細胞。
在一些實施例中,宿主細胞係真核的。在一些實施例中,宿主細胞係哺乳動物。在一些實施例中,宿主細胞係中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。
在一些實施例中,宿主細胞係原核的。在一些實施例中,宿主細胞係大腸桿菌(E.coli)。
在另一態樣中,本發明提供製備抗個體遺傳型抗體之方法,其包含在適於編碼抗個體遺傳型抗體之載體表現之條件下培養如本文提供之宿主細胞以及回收抗個體遺傳型抗體。
在另一態樣中,本發明提供檢測生物樣品中抗PD-L1抗體之方法,其包含:(a)使生物樣品與捕獲劑接觸,藉此形成免疫複合體,其中捕獲劑係包含如本文提供之抗個體遺傳型抗體之組合物;(b)使(a)之免疫複合體與結合至抗PD-L1抗體之可檢測抗體接觸;及 (c)藉由檢測可檢測抗體量測結合至組合物之抗PD-L1抗體之含量。
在另一態樣中,本發明提供檢測生物樣品中抗PD-L1抗體之方法,其包含:(a)使生物樣品與捕獲劑接觸,藉此形成免疫複合體,其中捕獲劑係結合樣品中存在之抗PD-L1抗體之如本文提供之抗個體遺傳型抗體;(b)使(a)之免疫複合體與結合至抗PD-L1抗體之可檢測抗體接觸;及(c)藉由檢測可檢測抗體量測結合至抗個體遺傳型抗體之抗PD-L1抗體之含量。
在一些實施例中,抗個體遺傳型抗體固定至固體載體且方法進一步包含分離生物樣品與結合至抗PD-L1抗體之固定之抗個體遺傳型抗體的步驟。
在一些實施例中,固定之抗個體遺傳型抗體偶聯至生物素並結合至鏈黴抗生物素蛋白塗佈之微量滴定板。
在一些實施例中,可檢測抗體係來自非人類物種之結合至人類或人類化抗體之抗體。
在一些實施例中,可檢測抗體直接可檢測,或偶聯至辣根過氧化物酶,或係藉由螢光或量熱試劑檢測。
在一些實施例中,生物樣品係自人類受試者分離。
在一些實施例中,人類受試者經抗PD-L1抗體治療,該抗PD-L1抗體包含:(a)輕鏈可變區,其包含:(i)包含胺基酸序列RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:1)之HVR-L1;(ii)包含胺基酸序列SASFLYS(SEQ ID NO:2)之HVR-L2;(iii)包含胺基酸序列QQYLYHPAT(SEQ ID NO:3)之HVR-L3;及(b)重鏈可變區,其包含: (i)包含胺基酸序列GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:4)之HVR-H1;(ii)包含胺基酸序列AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:5)之HVR-H2;(iii)包含胺基酸序列RHWPGGFDY(SEQ ID NO:6)之HVR-H3。
在一些實施例中,方法進一步包含使用標準曲線以測定與抗PD-L1抗體之已知含量相比的抗PD-L1抗體之含量。
在一些實施例中,生物樣品係血液、血漿或血清。
在另一態樣中,本發明提供用於特異性檢測生物樣品中之抗PD-L1抗體之免疫分析套組,其包含:(a)如本文提供之抗個體遺傳型抗體或如本文提供之組合物;(b)結合至抗PD-L1抗體之可檢測抗體;及(c)用於檢測該抗PD-L1抗體之說明書。在一些實施例中,套組可用於檢測抗PD-L1抗體之免疫分析。
在另一態樣中,本發明提供檢測生物樣品中之抗PD-L1抗體之方法,其包含:(a)使生物樣品與如本文提供之抗個體遺傳型抗體或如本文提供之組合物在容許抗個體遺傳型抗體與抗PD-L1抗體結合之條件下接觸以形成複合體;(b)藉由免疫固定電泳分析樣品以比較接觸抗個體遺傳型抗體之樣品與尚未接觸抗個體遺傳型抗體之樣品;(c)檢測生物樣品中抗PD-L1抗體之存在;其中接觸抗個體遺傳型抗體之樣品與尚未接觸抗個體遺傳型抗體之樣品之間之遷移差異指示生物樣品中存在抗PD-L1抗體。
在另一態樣中,本發明提供檢測生物樣品中M蛋白之方法,其包含:(a)使生物樣品與如本文提供之抗個體遺傳型抗體或如本文提供之組合物在容許抗個體遺傳型抗體與抗PDL1抗體結合之條件下接觸以形成複合體; (b)藉由免疫固定電泳分析樣品以比較接觸抗個體遺傳型抗體之樣品與尚未接觸抗個體遺傳型抗體之樣品;及(c)檢測生物樣品中M蛋白之存在。在一些實施例中,步驟(b)使得抗PD-L1抗體及抗個體遺傳型抗體之複合體與M蛋白分離。在一些實施例中,在步驟(c)之前,方法進一步包含藉由確定M蛋白之遷移是否受抗個體遺傳型抗體之添加影響來確定帶是否係M蛋白的步驟。在一些實施例中,生物樣品係血液、尿液或血清。
在另一態樣中,本發明提供監測受試者中抗PD-L1抗體治療之有效性的方法,其包含:(a)使生物樣品與如本文提供之抗個體遺傳型抗體或如本文提供之組合物在容許抗個體遺傳型抗體與抗PD-L1抗體結合之條件下接觸以形成複合體;其中生物樣品係來自受試者,且其中受試者患有多發性骨髓瘤且已經抗PD-L1抗體治療;(b)藉由免疫固定電泳分析樣品以比較接觸抗個體遺傳型抗體之樣品與尚未接觸抗個體遺傳型抗體之樣品;(c)檢測生物樣品中抗PD-L1抗體之存在,其中接觸抗個體遺傳型抗體之樣品與尚未接觸抗個體遺傳型抗體之樣品之間之遷移差異指示生物樣品中存在抗PD-L1抗體;及(d)檢測生物樣品中M蛋白之含量;其中生物樣品中M蛋白之含量指示抗PD-L1抗體治療之有效性。在一些實施例中,步驟(b)使得抗PD-L1抗體及抗個體遺傳型抗體之複合體與M蛋白分離。在一些實施例中,在步驟(d)之前,方法進一步包含藉由確定M蛋白之遷移是否受抗個體遺傳型抗體之添加影響來確定帶是否係M蛋白的步驟。在一些實施例中,生物樣品係血液、尿液或血清。
應理解,本文所述各個實施例之一種、一些或所有性質可經組合以 形成本發明之其他實施例。
圖1顯示抗個體遺傳型抗體105D11(SEQ ID NO:54)、43B5(SEQ ID NO:56)及48C1(SEQ ID NO:58)之重鏈可變區(VH)的胺基酸序列比對。指示重鏈contact CDR、Chothia CDR及Kabat CDR序列。
圖2顯示抗個體遺傳型抗體105D11(SEQ ID NO:53)、43B5(SEQ ID NO:55)及48C1(SEQ ID NO:57)之輕鏈可變區(VL)的胺基酸序列比對。指示輕鏈contact CDR、Chothia CDR及Kabat CDR序列。
圖3顯示結合至抗PDL1抗體Fab及抗體YW167B.43(框架對照Fab)之抗體105D11的SPR生成之動力學(ka、kd及KD)。
圖4顯示結合至抗PDL1抗體Fab及抗體YW167B.43(框架對照Fab)之抗體43B5的SPR生成之動力學(ka、kd及KD)。
圖5顯示結合至抗PDL1抗體Fab及抗體YW167B.43(框架對照Fab)之抗體48C1的SPR生成之動力學(ka、kd及KD)。
圖6顯示利用Sebia免疫固定電泳(IFE)分析之抗個體遺傳型抗體之篩選。
圖7顯示利用IFE分析以高解析度檢測之多發性骨髓瘤患者之血清中的IgA/Ig κ M蛋白峰(小圖1、泳道A及泳道K)。在以下條件下將患者『MM5』血清預培育2小時:以1500μg/ml摻入之單獨阿替珠單抗(atezolizumab)抗個體遺傳型小鼠mAB純系48C1(小圖2),以1500μg/ml摻入之單獨阿替珠單抗(小圖3,泳道G及泳道K),及各自以1500μg/ml一起添加之阿替珠單抗+阿替珠單抗抗個體遺傳型純系48C1(小圖4)。
圖8顯示IFE分析中阿替珠單抗血清濃度對抗個體遺傳型抗體改變阿替珠單抗之遷移率之能力的效應。
下文提交之ASCII文件之內容之全文係以引用方式併入本文中:序列表之電腦可讀形式(CRF)(文件名:146392038540SEQLIST.txt,記錄日期:2018年1月16日,大小:40 KB)。
本申請案主張於2017年1月18日提出申請之美國專利申請案第62/447,886號及於2017年1月31日提出申請之美國專利申請案第62/452,934號之優先權益,該等案件中之每一者之揭示內容的全文以引用方式併入本文中。
除非另有定義,否則本文所用技術及科學術語具有如由熟習此項技術者通常所理解之本發明所屬於之相同含義。Singleton等人,Dictionary of Microbiology and Molecular Biology,第2版,J.Wiley & Sons(New York,N.Y.1994),及March,Advanced Organic Chemistry Reactions,Mechanisms and Structure,第4版,John Wiley & Sons(New York,N.Y.1992)為熟習此項技術者提供本申請案中所用之許多術語之一般指導。本文中引用之所有參考文獻(包括專利申請案及出版物)的全文皆以引用方式併入本文中。
出於了解釋本說明書之目的,將應用以下定義,且在適當時,以單數使用之術語亦將包括複數,且反之亦然。應理解,本文使用之術語僅出於闡述特定實施例之目的,而不意欲具有限制性。倘若下文闡述之任何定義與以引用方式併入本文中之任何文件相衝突,則以下文闡述之定義為準。
「親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間之非共價相互作用之總和的強度。除非另有說明,否則如本文所用, 「結合親和力」係指反映結合對成員(例如抗體及抗原)之間之1:1相互作用的固有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力通常可以由解離常數(KD)來表示。親和力可藉由業內已知之常用方法(包括本文所述之彼等方法)來量測。本文闡述用於量測結合親和力之具體闡釋性及實例性實施例。
本文中之術語「抗體」係以最廣泛含義使用且涵蓋各種抗體結構,包括但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如,雙特異性抗體)及抗體片段,只要其展現期望抗原結合活性即可。
「抗體片段」係指完整抗體以外之分子,其包含與完整抗體結合之抗原結合的完整抗體之一部分。抗體片段之實例包括但不限於Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2;雙價抗體;線性抗體;單鏈抗體分子(例如scFv);及自抗體片段形成之多特異性抗體。木瓜酶消化抗體產生兩個相同的抗原結合片段,稱為「Fab」片段,其各自具有單一抗原結合位點;以及殘餘「Fc」片段,其名稱反映了其容易結晶之能力。胃蛋白酶處理產生具有兩個抗原結合位點且仍然能夠使抗原交聯的F(ab')2片段。
如本文所用,術語「單株抗體」係指自實質上同質之抗體群體獲得的抗體,亦即,包含群體之個別抗體係相同的及/或結合相同表位,例如含有天然突變或在單株抗體製劑之產生過程中產生的可能之變體抗體除外,該等變體通常以少量存在。與通常包括針對不同決定子(表位)之不同抗體的多株抗體製劑相比,單株抗體製劑之每一單株抗體針對抗原上之單一決定子。因此,修飾語「單株」指示自實質上同質之抗體群獲得之抗體的特徵,且不應理解為需要藉由任何特定方法產生抗體。例如,根據本發明使用之單株抗體可藉由多種技術來製備,該等技術包括(但不限於)雜交瘤方法、重組DNA方法、噬菌體展示方法及利用含有全部或部分人類免疫球蛋白基因座之轉基因動物之方法,本文闡述製備單株抗體之該等方法及其他實例性方法。
「裸抗體」係指不偶聯至異源部分(例如,細胞毒性部分)或放射標記之抗體。裸抗體可存在於醫藥調配物中。
「天然抗體」係指具有不同結構之天然免疫球蛋白分子。例如,天然IgG抗體係約150,000道爾頓之異四聚體醣蛋白,其由二硫鍵鍵結之兩條相同輕鏈及兩條相同重鏈組成。自N末端至C末端,每一重鏈具有可變區(VH)(亦稱為可變重結構域或重鏈可變結構域),之後為三個恆定結構域(CH1、CH2及CH3)。類似地,自N末端至C末端,每一輕鏈具有可變區(VL)(亦稱為可變輕結構域或輕鏈可變結構域),之後為恆定輕鏈(CL)結構域。基於抗體恆定結構域之胺基酸序列,可將該抗體之輕鏈分配為兩種類型中之一者,稱為卡帕(κ)型及拉姆達(λ)型。
抗體之「類別」係指其重鏈所擁有之恆定結構域或恆定區之類型。有五種主要類別之抗體:IgA、IgD、IgE、IgG及IgM,且該等類別中之若干種可進一步分成子類(同型),例如,IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應於不同類別之免疫球蛋白之重鏈恆定結構域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。
術語「抗PD-L1抗體」、「抗PD-L1」、「PD-L1抗體」或「結合至PD-L1之抗體」係指能夠以足夠親和力結合PD-L1從而使得抗體可用作靶向PD-L1之診斷及/或治療劑的抗體。在一個實施例中,抗PD-L1抗體與無關非-PD-L1蛋白之結合程度小於該抗體與PD-L1之結合的約10%,如藉由(例如)放射免疫分析(RIA)所量測。在某些實施例中,結合至PD-L1之抗體之解離常數(KD)為1μM、100nM、10nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如10-8M或更小,例如10-8M至10-13M,例如10-9M至10-13M)。在某些實施例中,抗PD-L1抗體結合至在來自不同物種之PD-L1間保守的PD-L1表位。
「人類抗體」係具有對應於由人類或人類細胞產生或源自利用人類抗體譜或其他編碼人類抗體之序列之非人類來源的抗體之胺基酸序列的胺基酸 序列者。此人類抗體之定義明確排除包含非人類抗原結合殘基之人類抗體。
術語「嵌合」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分源自特定來源或物種、而重鏈及/或輕鏈之其餘部分源自不同來源或物種的抗體。
「人類共有框架」係代表在選擇人類免疫球蛋白VL或VH框架序列中最普遍存在之胺基酸殘基之框架。通常,人類免疫球蛋白VL或VH序列係來自可變結構域序列之亞組。通常,序列亞組係如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,NIH公開案91-3242,Bethesda MD(1991),第1-3卷中之亞組。在一個實施例中,對於VL而言,亞組係如Kabat等人所述之亞組κI(見上文)。在一個實施例中,對於VH而言,該亞組係如Kabat等人所述之III亞組(見上文)。
「人類化」抗體係指包含來自非人類HVR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施例中,人類化抗體將包含實質上全部之至少一個且通常兩個可變結構域,其中全部或實質上全部之HVR(例如,CDR)對應於非人類抗體之彼等HVR,且全部或實質上全部之FR對應於人類抗體之彼等FR。人類化抗體視情況可包含源自人類抗體之抗體恆定區的至少一部分。抗體(例如非人類抗體)之「人類化形式」係指已經受人類化之抗體。
術語「可變區」或「可變結構域」係指抗體重鏈或輕鏈中參與抗體與抗原結合之結構域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變結構域(分別為VH及VL)通常具有類似結構,其中各結構域包含4個保守框架區(FR)及3個超變區(HVR)。(例如,參見Kindt等人,Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91頁(2007))。單一VH或VL結構域可足以賦予抗原結合特異性。此外,結合特定抗原之抗體可使用來自結合該抗原之抗體之VH或VL結構域分離以分別篩選互補VL或VH結構域文庫。參見(例如)Portolano等人,J.Immunol.150:880-887(1993);Clarkson等人,Nature 352:624-628(1991)。
本文所用術語「超變區」或「HVR」係指抗體可變結構域區域中序列具有超變性及/或形成結構上經界定之環(「超變環」)中的每一者。通常,天然四鏈抗體包含六個HVR;三個位於VH中(H1、H2、H3),且三個位於VL中(L1、L2、L3)。HVR通常包含來自超變環及/或來自「互補決定區」(CDR)之胺基酸殘基,後者具有最高序列可變性及/或參與抗原識別。實例性超變環出現於胺基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)。(Chothia及Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)。)實例性CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)出現於L1之胺基酸殘基24-34、L2之50-56、L3之89-97、H1之31-35B、H2之50-65及H3之95-102。(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)。)除VH中之CDR1外,CDR通常包含形成超變環之胺基酸殘基。CDR亦包含「特異性決定殘基」或「SDR」,其係接觸抗原之殘基。SDR含於CDR中稱為縮短-CDR(abbreviated-CDR)或a-CDR之區內。實例性a-CDR(a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2及a-CDR-H3)出現於L1之胺基酸殘基31-34、L2之50-55、L3之89-96、H1之31-35B、H2之50-58及H3之95-102。(參見Almagro及Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)。)除非另有指示,否則可變結構域中之HVR殘基及其他殘基(例如,FR殘基)在本文中係根據Kabat等人(見上文)編號。
術語「檢測」係以最廣泛含義使用,以包括靶分子之定性及定量量測。在一態樣中,如本文所述之檢測方法用於鑑別生物樣品中所關注抗體之單獨存在。在另一態樣中,該方法用於測試樣品中所關注抗體是否以可檢測之含量存在。在又一個態樣中,該方法可用於量化樣品中所關注抗體之量且進一步比較來自不同樣品之抗體含量。
術語「生物樣品」係指可含有所關注抗體之任何生物物質。樣品可 為生物流體,例如全血或全血組分(包括紅血球、白血球、血小板、血清及血漿)、腹水、玻璃體液、淋巴液、滑液、濾泡液、精液、羊水、乳液、唾液、痰、眼淚、汗液、黏液、腦脊髓液及可能含有所關注抗體之其他身體成分。在各個實施例中,樣品係來自任何動物之身體樣品。在一些實施例中,樣品來自哺乳動物。在一些實施例中,樣品來自人類受試者。在一些實施例中,生物樣品來自臨床患者或經治療性抗PD-L1抗體或抗體治療之患者。在某些實施例中,生物樣品係血清或血漿。在某些實施例中,生物樣品係來自臨床患者之血清。
術語「捕獲試劑」係指與所關注靶標(例如抗體)結合且能夠結合並捕獲生物樣品中之所關注靶標(例如抗體)的試劑(例如抗體)或此類試劑之混合物,使得在適宜條件下,可將捕獲試劑及所關注靶標(例如抗體)之複合體與樣品之其餘部分分離。例如,捕獲試劑可為結合所關注抗體之個體遺傳型且能夠結合並捕獲生物樣品中之所關注抗體的抗個體遺傳型抗體或該等抗體之混合物,使得在適宜條件下,可將捕獲試劑及所關注抗體之複合體與樣品之其餘部分分離。在某些實施例中,捕獲試劑經固定或可固定。
本文所用「抗個體遺傳型抗體」係結合至同源抗體之VH及/或VL結構域的抗體,在此情形下為所關注抗體。通常,該等抗個體遺傳型抗體係藉由以下方式製得:用所關注抗體對哺乳動物(例如小鼠)實施免疫並產生雜交瘤文庫並自源自雜交瘤之抗體組選擇在分析中給出整潔信號之彼等抗體,無論捕獲試劑或可檢測抗體。在某些實施例中,抗個體遺傳型抗體經固定或可固定。在一些實施例中,抗個體遺傳型抗體係單株抗體且可為(例如)囓齒類動物抗體,例如鼠類或大鼠抗體。
本文所用「抗PD-L1個體遺傳型抗體」係以足夠特異性及親和力特異性結合至抗PD-L1單株抗體以用於檢測抗PD-L1抗體者。
術語「可檢測抗體」係指結合所關注抗體且能夠經由由檢測方式擴 增之標記直接檢測或經由(例如)另一經標記之抗體間接檢測的抗體。在一些實施例中,可檢測抗體係來自非人類物種之結合至人類抗體的抗體。在一些實施例中,可檢測抗體係結合所關注抗體之個體遺傳型的抗個體遺傳型抗體或該等抗體之混合物。對於直接標記,抗體通常偶聯至可藉由一些方式檢測之部分。在一些實施例中,可檢測抗體偶聯至辣根過氧化物酶。
術語「檢測方式」係指用於經由接著在本文之分析中讀出之信號報導檢測可檢測抗體之存在的部分或技術。其包括使固定標記(例如捕獲至微量滴定板上之標記)擴增之試劑。
「Fab」片段含有重鏈及輕鏈可變結構域且亦含有輕鏈之恆定結構域及重鏈之第一恆定結構域(CH1)。Fab'片段因在重鏈CH1結構域之羧基末端增加了若干殘基而與Fab片段有所不同,該等殘基包括一或多個來自抗體鉸鏈區之半胱胺酸。本文中Fab'-SH特指恆定結構域之半胱胺酸殘基具有游離硫醇基之Fab'。F(ab)2抗體片段最初產生為之間具有鉸鏈半胱胺酸之Fab'片段之對。亦已知抗體片段之其他化學偶合。
術語「Fc區」在本文中用於定義免疫球蛋白重鏈中含有恆定區之至少一部分的C-末端區。該術語包括天然序列Fc區及變體Fc區。在某些實施例中,人類IgG重鏈Fc區自Cys226或自Pro230延伸至重鏈之羧基末端。然而,Fc區之C末端離胺酸(Lys447)可存在或可不存在。除非在本文中另外指出,否則Fc區或恆定區中胺基酸殘基之編號係根據亦稱為EU索引之EU編號系統,如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述。
「框架」或「FR」係指除超變區(HVR)殘基外之可變結構域殘基。可變結構域之FR通常由四個FR結構域組成:FR1、FR2、FR3及FR4。因此,HVR及FR序列通常以如下序列出現於VH(或VL)中: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用,其係指結構實質上類似於天然抗體結構或具有含有如本文所定義Fc區之重鏈的抗體。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞系」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指已引入外源核酸之細胞,包括該等細胞之子代。宿主細胞包括「轉變體」及「經轉變細胞」,其包括原代經轉變細胞及源自其之子代(與傳代數無關)。子代之核酸含量可與親代細胞並不完全相同,而是可含有突變。本文包括經篩選或選擇用於原始經轉變細胞中之具有相同功能或生物活性的突變體子代。
「免疫偶聯物」係偶聯至一或多個異源分子(包括(但不限於)細胞毒性劑)之抗體。
「個體」或「受試者」係哺乳動物。哺乳動物包括(但不限於)家畜動物(例如,牛、綿羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如,人類及非人類靈長類動物,例如猴)、兔及囓齒類動物(例如,小鼠及大鼠)。在某些實施例中,個體或受試者係人類。
「分離之」抗體係自其天然環境組分分離者。在一些實施例中,將抗體純化至大於95%或99%之純度,如藉由(例如)電泳(例如,SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析(例如,離子交換或反相HPLC)所測定。關於評價抗體純度之方法之綜述,例如,參見Flatman等人,J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。
「分離之」核酸係指已與其天然環境之組分分離之核酸分子。分離之核酸包括含於通常含有核酸分子之細胞中之核酸分子,但該核酸分子存於染色體外或存於與其天然染色體位置不同之染色體位置處。
「編碼抗個體遺傳型抗體之分離之核酸」係指一或多個編碼抗個體遺傳型抗體之重鏈及輕鏈(或其片段)之核酸分子,包括單一載體或多個單獨載體中之該(等)核酸分子及存於宿主細胞中之一或多個位置之該(等)核酸分子。
術語「包裝插頁」用於指通常包括於治療產品之商業包裝內之說明書,其含有關於適應症、用法、劑量、投與、組合療法、禁忌及/或關於該等治療產品之使用之警告的資訊。
相對於參考多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對序列並引入空位(若需要)以達到最大序列一致性百分比後,候選序列中與參考多肽序列中之胺基酸殘基一致之胺基酸殘基之百分比,且任何保守取代皆不被視為序列一致性之一部分。出於確定胺基酸序列一致性百分比之目的,比對可以熟習此項技術者所熟知之各種方式來達成,例如使用可公開獲得之電腦軟體,例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。彼等熟習此項技術者可確定用於比對序列之適當參數,包括在所比較序列之全長範圍內達成最大比對所需要之任何算法。然而,出於本文目的,使用序列比較電腦程式ALIGN-2來生成胺基酸序列一致性%之值。ALIGN-2序列比較電腦程式係由Genentech公司設計,且源代碼已與使用者文件一起編入美國版權局(U.S.Copyright Office),Washington D.C.,20559中,其中其以美國版權註冊號TXU510087註冊。ALIGN-2程式可自Genentech,Inc.,South San Francisco,California公開獲得,或可自源代碼進行編譯。ALIGN-2程式應經編譯用於UNIX操作系統(包括數位UNIX V4.0D)中。所有序列比較參數皆係由ALIGN-2程式設定且不改變。
在採用ALIGN-2進行胺基酸序列比較之情形下,給定胺基酸序列A相對於(to)、與(with)或對(against)給定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性%(另一選擇為可表達為相對於、與或對給定胺基酸序列B具有或包含某一胺基酸序列 一致性%之給定胺基酸序列A)計算如下:100乘以分數X/Y
其中X係在A與B之程式比對中由序列比對程式ALIGN-2評定為一致性匹配之胺基酸殘基數,且其中Y係B中胺基酸殘基之總數。應瞭解,若胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度,則A相對於B之胺基酸序列一致性%將不等於B相對於A之胺基酸序列一致性%。除非另有明確說明,否則本文所用之所有胺基酸序列一致性%的值皆係如前面緊接段落中所述使用ALIGN-2電腦程式獲得。
「治療有效量」係實現特定病症之可量測之改良或預防所需的至少最小濃度。本文中之治療有效量可根據諸如患者之疾病狀態、年齡、性別及體重以及抗體在個體中引起期望反應之能力等因素而變化。治療有效量亦為抗體之治療有益效應大於其任何毒性或有害效應之量。
抗PD-L1抗體之「特徵」係指僅存在於一種抗體同型中之蛋白水解肽(例如胰蛋白酶肽)。
術語「醫藥調配物」或「醫藥組合物」係指如下製劑:其所呈現形式允許其中所含活性成分之生物活性有效,且不含對將投與該調配物之受試者具有不可接受毒性的其他組分。
「醫藥學上可接受之載劑」或「有效量」係指醫藥調配物中對受試者無毒之除活性成分外的成分。醫藥學上可接受之載劑包括(但不限於)緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
本文所用「治療(treatment)」(及其語法變化形式,例如「treat」或「treating」)係指試圖改變所治療個體之自然病程的臨床干預,且可出於預防性目的或在臨床病理學過程期間實施。治療之期望效應包括(但不限於)預防疾病發生或復發、緩和症狀、減弱疾病之任何直接或間接病理結果、降低疾病進展速 率、改善或緩解疾病狀態以及緩解或改良預後。在一些實施例中,使用本發明抗體來延遲疾病發生或減緩疾病進展。
本文所用術語「載體」係指能夠轉運與其連接之另一核酸的核酸分子。該術語包括呈自我複製核酸結構形式之載體,以及納入引入其之宿主細胞基因組中的載體。某些載體能引導與其可操作連接之核酸之表現。此等載體在本文中稱作「表現載體」。
除非另外指示,否則如本文所用單數形式「一」(「a」、「an」)及「該」包括複數個指示物。
如本文所用術語「約」係指本技術領域之技術人員容易知曉之各別值的常見誤差範圍。提及「約」一值或參數在本文中包括(並闡述)針對該值或參數本身之實施例。
應理解,本文所述本發明之態樣及實施例包括「包含」態樣及實施例、「由其組成」及「基本上由其組成」。
在一態樣中,本發明提供特異性結合至抗PD-L1單株抗體之抗個體遺傳型抗體。本發明之抗體可用於(例如)檢測及/或量化生物樣品中、例如臨床樣品中之抗PD-L1。在一些實施例中,抗PD-L1抗體係單株、嵌合、人類化或人類抗體。
在某些實施例中,抗個體遺傳型抗體結合至包含以下之抗PD-L1抗體:(a)輕鏈可變區,其包括包含胺基酸序列RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:1)之HVR-L1、包含胺基酸序列SASFLYS(SEQ ID NO:2)之HVR-L2及包含胺基酸序列QQYLYHPAT(SEQ ID NO:3)之HVR-L3;及(b)重鏈可變區,其包括包 含胺基酸序列GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:4)之HVR-H1、包含胺基酸序列AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:5)之HVR-H2及包含胺基酸序列RHWPGGFDY(SEQ ID NO:6)之HVR-H3。
在一些實施例中,抗PD-L1抗體包括包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中,抗PD-L1抗體包含與具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列之輕鏈可變區具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的輕鏈可變區及/或與具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列之重鏈可變區具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的重鏈可變區。
在一些實施例中,抗PD-L1抗體包括包含SEQ D NO:9之胺基酸序列之輕鏈及包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中,抗PD-L1抗體包含與具有SEQ ID NO:9之胺基酸序列之輕鏈具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的輕鏈及與具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列之重鏈具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的重鏈。
在一些實施例中,抗PD-L1抗體係阿替珠單抗(TECENTRIQ®)。
在一些實施例中,抗PD-L1抗體包含阿替珠單抗之HVR。在一些實施例中,抗PD-L1抗體包含阿替珠單抗之重鏈可變區及/或輕鏈可變區。
在一些實施例中,抗PD-L1抗體係單株、嵌合或人類化抗體。
抗PD-L1抗體輕鏈可變區胺基酸序列: (SEQ ID NO:7)
抗PD-L1抗體重鏈可變區胺基酸序列: (SEQ ID NO:8)
抗PD-L1抗體輕鏈胺基酸序列: (SEQ ID NO:9)
抗PD-L1抗體重鏈胺基酸序列: (SEQ ID NO:10)
在一態樣中,本發明提供特異性結合至本文所述抗PD-L1抗體之抗 個體遺傳型抗體。在一些實施例中,抗個體遺傳型抗體結合抗PD-L1抗體,其中該抗PD-L1抗體包含(a)輕鏈可變區,其包括包含胺基酸序列RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:1)之HVR-L1、包含胺基酸序列SASFLYS(SEQ ID NO:2)之HVR-L2及包含胺基酸序列QQYLYHPAT(SEQ ID NO:3)之HVR-L3;及(b)重鏈可變區,其包括包含胺基酸序列GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:4)之HVR-H1、包含胺基酸序列AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:5)之HVR-H2及包含胺基酸序列RHWPGGFDY(SEQ ID NO:6)之HVR-H3。在一些實施例中,抗個體遺傳型抗體特異性結合至抗PD-L1抗體之至少一個、至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個或六個HVR。
在一些實施例中,抗個體遺傳型抗體包含如圖1及2中所示之抗體105D11之一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR(Kabat)。在一些實施例中,抗個體遺傳型抗體包含如圖1及2中所示之抗體105D11之VH及/或VL。
在一些實施例中,抗個體遺傳型抗體包含與SEQ ID NO:54之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中,與SEQ ID NO:54之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如,保守取代)、插入或缺失,但包含該VH序列之抗PD-L1個體遺傳型抗體保留結合至與包含參照序列之抗個體遺傳型抗體相同之抗PD-L1抗體的能力。在某些實施例中,SEQ ID NO:54中總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中,取代、插入或缺失發生在HVR外部之區中(亦即,FR中)。視情況,抗PD-L1個體遺傳型抗體包含SEQ ID NO:54之VH序列,包括該序列之轉譯後修飾。在具體實施例中,VH包含一個、兩個或三個選自以下各項之HVR:(a)包含SEQ ID NO:35之胺基酸序列之HVR-H1,(b)包含SEQ ID NO:36之胺基酸 序列之HVR-H2及(c)包含SEQ ID NO:34之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中,提供抗PD-L1個體遺傳型抗體,其中該抗體包含與SEQ ID NO:53之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中,與SEQ ID NO:53之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如,保守取代)、插入或缺失,但包含該VL序列之抗PD-L1個體遺傳型抗體保留結合至與包含參照序列之抗個體遺傳型抗體相同之抗PD-L1抗體的能力。在某些實施例中,SEQ ID NO:53中總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中,取代、插入或缺失發生在HVR外部之區中(亦即,FR中)。視情況,抗PD-L1個體遺傳型抗體包含SEQ ID NO:53之VL序列,包括該序列之轉譯後修飾。在具體實施例中,VL包含一個、兩個或三個選自以下各項之HVR:(a)包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之HVR-L1;(b)包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之HVR-L2;及(c)包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中,提供抗PD-L1個體遺傳型抗體,其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中,抗體包含SEQ ID NO:54之VH序列及SEQ ID NO:53之VL序列,包括彼等序列之轉譯後修飾。
在一些實施例中,提供抗PD-L1個體遺傳型抗體,其中該抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:29之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:30之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列之HVR-H3;及VL,其包括包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之HVR-L2;及包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中,抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:32之胺基酸序列之 HVR-H1、包含SEQ ID NO:33之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:34之胺基酸序列之HVR-H3;及VL,其包括包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之HVR-L2;及包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中,抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:35之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:36之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:34之胺基酸序列之HVR-H3;及VL,其包括包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中,抗個體遺傳型抗體包含如圖1及2中所示之抗體43B5之一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR(例如,Kabat)。在一些實施例中,抗個體遺傳型抗體包含如圖1及2中所示之抗體43B5之VH及/或VL。
在一些實施例中,抗PD-L1個體遺傳型抗體包含與SEQ ID NO:56之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中,與SEQ ID NO:56之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如,保守取代)、插入或缺失,但包含該VH序列之抗PD-L1個體遺傳型抗體保留結合至與包含參照序列之抗個體遺傳型抗體相同之抗PD-L1抗體的能力。在某些實施例中,SEQ ID NO:56中總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中,取代、插入或缺失發生在HVR外部之區中(亦即,FR中)。視情況,抗PD-L1個體遺傳型抗體包含SEQ ID NO:56之VH序列,包括該序列之轉譯後修飾。在具體實施例中,VH包含一個、兩個或三個選自以下各項之HVR:(a)包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列之HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列之HVR-H2及(c)包含SEQ ID NO:42之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中,提供抗PD-L1個體遺傳型抗體,其中該抗體包含與SEQ ID NO:55之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中,與SEQ ID NO:55之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如,保守取代)、插入或缺失,但包含該VL序列之抗PD-L1個體遺傳型抗體保留結合至與包含參照序列之抗個體遺傳型抗體相同之抗PD-L1抗體的能力。在某些實施例中,SEQ ID NO:55中總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中,取代、插入或缺失發生在HVR外部之區中(亦即,FR中)。視情況,抗PD-L1個體遺傳型抗體包含SEQ ID NO:55之VL序列,包括該序列之轉譯後修飾。在具體實施例中,VL包含一個、兩個或三個選自以下各項之HVR:(a)包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之HVR-L1;(b)包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之HVR-L2;及(c)包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中,提供抗PD-L1個體遺傳型抗體,其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中,該抗體包含分別SEQ ID NO:56及SEQ ID NO:55中之VH及VL序列,包括彼等序列之轉譯後修飾。
在一些實施例中,提供抗PD-L1個體遺傳型抗體,其中該抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:37之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:39之胺基酸序列之HVR-H3;及VL,其包括包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中,抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:40之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:41之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:42之胺基酸序 列之HVR-H3;及VL,其包括包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中,抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:42之胺基酸序列之HVR-H3;及VL,其包括包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列之HVR-L3。
在一些實施例中,抗個體遺傳型抗體包含如圖1及2中所示之抗體48C1之一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR(例如,Kabat)。在一些實施例中,抗個體遺傳型抗體包含如圖1及2中所示之抗體48C1之VH及/或VL。
在一些實施例中,抗PD-L1個體遺傳型抗體包含與SEQ ID NO:58之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施例中,與SEQ ID NO:58之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH序列相對於參照序列含有取代(例如,保守取代)、插入或缺失,但包含該VH序列之抗PD-L1個體遺傳型抗體保留結合至與包含參照序列之抗個體遺傳型抗體相同之抗PD-L1抗體的能力。在某些實施例中,SEQ ID NO:58中總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中,取代、插入或缺失發生在HVR外部之區中(亦即,FR中)。視情況,抗PD-L1個體遺傳型抗體包含SEQ ID NO:58之VH序列,包括該序列之轉譯後修飾。在具體實施例中,VH包含一個、兩個或三個選自以下各項之HVR:(a)包含SEQ ID NO:51之胺基酸序列之HVR-H1、(b)包含SEQ ID NO:52之胺基酸序列之HVR-H2及(c)包含SEQ ID NO:50之胺基酸序列之HVR-H3。
在另一態樣中,提供抗PD-L1個體遺傳型抗體,其中該抗體包含與 SEQ ID NO:57之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施例中,與SEQ ID NO:57之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性之VL序列相對於參照序列含有取代(例如,保守取代)、插入或缺失,但包含該VL序列之抗PD-L1個體遺傳型抗體保留結合至與包含參照序列之抗個體遺傳型抗體相同之抗PD-L1抗體的能力。在某些實施例中,SEQ ID NO:57中總共1至10個胺基酸經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中,取代、插入或缺失發生在HVR外部之區中(亦即,FR中)。視情況,抗PD-L1個體遺傳型抗體包含SEQ ID NO:57之VL序列,包括該序列之轉譯後修飾。在具體實施例中,VL包含一個、兩個或三個選自以下各項之HVR:(a)包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列之HVR-L1;(b)包含SEQ ID NO:27之胺基酸序列之HVR-L2;及(c)包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列之HVR-L3。
在另一態樣中,提供抗PD-L1個體遺傳型抗體,其中該抗體包含如上文所提供任一實施例中之VH及如上文所提供任一實施例中之VL。在一個實施例中,該抗體包含分別SEQ ID NO:58及SEQ ID NO:57中之VH及VL序列,包括彼等序列之轉譯後修飾。
在一些實施例中,提供抗PD-L1個體遺傳型抗體,其中該抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:45之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:46之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:47之胺基酸序列之HVR-H3;及VL,其包括包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:25之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中,抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:48之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:49之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:50之胺基酸序列之HVR-H3;及VL,其包括包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列之HVR-L1、 包含SEQ ID NO:27之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中,抗體包含VH,其包括包含SEQ ID NO:51之胺基酸序列之HVR-H1、包含SEQ ID NO:52之胺基酸序列之HVR-H2及包含SEQ ID NO:50之胺基酸序列之HVR-H3;及VL,其包括包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列之HVR-L1、包含SEQ ID NO:27之胺基酸序列之HVR-L2及包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列之HVR-L3。
在本發明之又一態樣中,根據上文任一實施例之抗PD-L1個體遺傳型抗體係單株抗體,包括嵌合、人類化或人類抗體。在一個實施例中,抗PD-L1個體遺傳型抗體係抗體片段,例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙價抗體或F(ab')2片段。在另一實施例中,抗PD-L1個體遺傳型抗體係全長抗體,例如完整IgG1抗體或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
在本發明之又一態樣中,根據上文任一實施例或本文所述之抗PD-L1個體遺傳型抗體偶聯至異源部分或試劑。
在另一態樣中,本文提供包含根據上文任一實施例或本文所述之抗PD-L1個體遺傳型抗體中之一或多者的組合物。本文亦提供編碼本文所述抗個體遺傳型抗體之核酸、包含該核酸之載體及包含該載體之宿主細胞。在一些實施例中,宿主細胞經分離或純化。在一些實施例中,宿主細胞係細胞培養基。
以下說明係關於產生根據本發明使用之抗個體遺傳型抗體的實例性技術。
本發明抗體可包含多株抗體。製備多株抗體之方法為熟習此項技術者所知。可在哺乳動物中,藉由(例如)一或多次注射免疫劑及(若期望)佐劑產生多株抗體。通常,免疫劑及/或佐劑將藉由多次皮下或腹膜內注射注射於哺乳動 物中。免疫劑可包括抗PD-L1、其抗原結合片段或其融合蛋白。將免疫劑與經免疫之哺乳動物中已知具有免疫原性之蛋白質偶聯可為有用的。該等免疫原性蛋白之實例包括(但不限於)鑰孔帽貝血藍蛋白、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白及大豆胰蛋白酶抑制劑。可採用之佐劑之實例包括弗氏完全佐劑(Freund's complete adjuvant)及MPL-TDM佐劑(單磷醯脂質A、合成海藻糖雙白喉菌酸酯)。熟習此項技術者可選擇免疫方案而無需過多實驗。接著可將哺乳動物放血,且分析血清之抗個體遺傳型抗體效價。若期望,可對哺乳動物進行增強免疫直至抗體效價增加或處於平穩狀態。
或者,本發明抗體可為單株抗體。單株抗體可使用首先由Kohler等人,Nature,256:495(1975)闡述之雜交瘤方法製得,或可藉由重組DNA方法(例如,參見美國專利第4,816,567號)製得。
在雜交瘤方法中,如上文所述對小鼠或其他適當宿主動物(例如倉鼠)實施免疫以引發產生或能產生特異性結合至蛋白質之抗體的淋巴球用於免疫。或者,可在活體外對淋巴球實施免疫。在免疫後,分離淋巴球且接著使用適宜融合試劑(例如聚乙二醇)將其與骨髓瘤細胞系融合以形成雜交瘤細胞(Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice,第59-103頁(Academic Press,1986))。
使由此製備之雜交瘤細胞在適宜培養基中接種並生長,該培養基含有一或多種抑制未融合、親代骨髓瘤細胞(亦稱為融合搭配物)之生長或存活的物質。例如,若親代骨髓瘤細胞無酶次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶(HGPRT或HPRT),則雜交瘤之選擇性培養基通常將包括次黃嘌呤、胺喋呤及胸苷(HAT培養基),該等物質防止HGPRT缺陷細胞生長。
融合搭配物骨髓瘤細胞係有效融合、支持藉由所選產生抗體之細胞 之抗體之穩定高程度產生、且對針對未融合親代細胞選擇之選擇性介質敏感的彼等細胞。骨髓瘤細胞系係鼠類骨髓瘤細胞系,例如可自Salk Institute Cell Distribution Center,San Diego,California USA獲得之源自MOPC-21及MPC-11小鼠腫瘤之彼等,以及SP-2及衍生物(例如,可自American Type Culture Collection,Manassas,Virginia,USA獲得之X63-Ag8-653細胞)。人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞系已經闡述用於產生人類單株抗體(Kozbor,J.Irnmunol.,133:3001(1984);及Brodeur等人,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第51-63頁(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987))。
分析雜交瘤細胞生長之培養基用於針對抗原之單株抗體之產生。藉由免疫沈澱或藉由活體外結合分析(例如放射免疫分析(RIA)或酶聯免疫吸附分析(ELISA))測定由雜交瘤細胞產生之單株抗體之結合特異性。可藉由(例如)Munson等人,Anal.Biochem.,107:220(1980)中闡述之Scatchard分析測定單株抗體之結合親和力。
一旦鑑別產生期望特異性、親和力及/或活性之抗體之雜交瘤細胞,可藉由限制稀釋程序亞選殖純系且藉由標準方法(Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice,第59-103頁(Academic Press,1986))使其生長。出於此目的之適宜培養基包括(例如)D-MEM或RPMI-1640培養基。另外,可使雜交瘤細胞作為動物中之腹水腫瘤在活體內生長,例如藉由向小鼠中i.p.注射細胞。
可藉由習用抗體純化程序適宜地將亞純系分泌之單株抗體與培養基、腹水或血清分離,該等抗體純化程序係(例如)親和力層析(例如,使用蛋白A或蛋白G-Sepharose)或離子交換層析、羥基磷灰石層析、凝膠電泳、透析等。
編碼單株抗體之DNA可使用習用程序容易地分離並測序(例如,藉由使用能特異性結合至編碼鼠類抗體之重鏈及輕鏈之基因的寡核苷酸探針)。雜 交瘤細胞用作該DNA之來源。一旦分離,可將DNA放入表現載體中,接著將其轉染至原本不產生抗體蛋白之宿主細胞(例如大腸桿菌細胞、猿猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞)中,以在重組宿主細胞中合成單株抗體。關於編碼抗體之DNA在細菌中之重組表現的綜述文章包括Skerra等人,Curr.Opinion in Immunol.,5:256-262(1993)及Pliickthun,Immunol.Revs.130:151-188(1992)。
在另一實施例中,單株抗體或抗體片段可自使用McCafferty等人Nature,348:552-554(1990)中所述之技術生成之抗體噬菌體文庫分離。Clackson等人,Nature,352:624-628(1991)及Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)分別闡述使用噬菌體文庫分離鼠類及人類抗體。後續出版物闡述藉由鏈改組(Marks等人,Bio/Technology,10:779-783(1992))以及組合感染及活體內重組作為構築極大噬菌體文庫之策略(Waterhouse等人,Nuc.Acids.Res.21:2265-2266(1993))來產生高親和力(nM範圍)人類抗體。因此,該等技術係用於分離單株抗體之傳統單株抗體雜交瘤技術的可行替代方案。
原則上,藉由篩選含有展示融合至噬菌體外殼蛋白之抗體可變區(Fv)之各個片段之噬菌體的噬菌體文庫選擇合成抗體純系。針對期望抗原篩選該等噬菌體文庫。將表現能結合至期望抗原之Fv片段之純系吸附至抗原且由此與文庫中之非結合純系分離。接著將結合純系自抗原溶析且且藉由額外抗原吸附/溶析循環進一步富集。
可變結構域可在噬菌體上功能性展示為單鏈Fv(scFv)片段,其中VH及VL經由短的撓性肽共價連接,或展示為Fab片段,其中其各自融合至恆定結構域且以非共價方式相互作用,如(例如)Winter等人,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)中所述。
VH及VL基因之譜可藉由聚合酶鏈式反應(PCR)單獨選殖且隨機重 組於噬菌體文庫中,接著可搜索該等文庫用於抗原結合純系,如Winter等人,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994).中所述。來自經免疫來源之文庫可向免疫原提供高親和力抗體而無需構築雜交瘤。或者,可選殖天然譜以向各種無任何免疫之非自體抗原亦及自體抗原提供人類抗體之單一來源,如由Griffiths等人,EMBO J,12:725-734(1993)所述。最後,亦可藉由以下方式以合成方式製得天然文庫:選殖來自幹細胞之未重排V-基因片段,且使用含有隨機序列之PCR引物編碼高度可變CDR3區並在活體外達成重排,如由Hoogenboom及Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所述。
文庫之篩選可藉由業內已知之各種技術完成。例如,抗PD-L1可用於塗佈吸附板之孔,在貼附至吸附板之宿主細胞上表現或用於細胞分選,或偶聯至生物素以用鏈黴抗生物素蛋白塗佈之珠粒捕獲,或用於淘選展示文庫之任何其他方法中。
具有緩慢解離動力學(及良好結合親和力)之抗體之選擇可藉由使用如Bass等人Proteins,8:309-314(1990)及WO 92/09690中所述之長洗滌及單價噬菌體展示及如Marks等人Biotechnol.,10:779-783(1992)中所述之低塗佈密度之抗原來促進。
本發明之抗個體遺傳型抗體中之任一者可藉由以下方式獲得:設計適宜抗原篩選程序以選擇所關注噬菌體純系,之後使用所關注噬菌體純系之Fv序列及Kabat等人,Sequences of Proteins of lmmunological Interest,第5版,NIH出版物91-3242,Bethesda MD(1991),第1-3卷中所述之適宜恆定區(Fe)序列構築全長抗個體遺傳型抗體純系。
在某些實施例中,涵蓋本文所提供抗體之胺基酸序列變體。例如,可能期望改良抗體之結合親和力及/或其他生物學性質。抗體之胺基酸序列變體 係藉由向編碼抗體之核苷酸序列中引入適當修飾或藉由肽合成來製備。此等修飾包括(例如)抗體胺基酸序列內殘基之缺失及/或插入及/或取代。可實施缺失、插入及取代之任一組合以達成最終構築體,前提為最終構築體具有期望特性,例如抗原結合性。
在某些實施例中,提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變體。用於取代誘變之所關注位點包括HVR及FR。保守取代示於表1中之「保守取代」之標題下。更多實質性變化提供於表1之「實例性取代」標題下,且如下文參照胺基酸側鏈類別進一步闡述。可將胺基酸取代引入所關注抗體及經篩選具有期望活性之產物中,該期望活性係(例如)保留/改良之抗原結合、降低之免疫原性或改良之ADCC或CDC。
可根據常見側鏈性質對胺基酸進行分組:-疏水性:正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile;-中性親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;-酸性:Asp、Glu;-鹼性:His、Lys、Arg;-影響鏈取向之殘基:Gly、Pro;-芳香族:Trp、Tyr、Phe。
非保守取代需要將該等類別之一的成員交換為另一類別。
一種取代變體類型涉及取代親代抗體(例如人類化或人類抗體)之一或多個超變區殘基。通常,選擇用於進一步研究之所得變體相對於親代抗體在某些生物學性質(例如,增加之親和力、降低之免疫原性)中具有修飾(例如,改良)及/或實質上保留親代抗體之某些生物學性質。實例性取代變體係親和力成熟抗體,其可便利地(例如)使用基於噬菌體展示之親和力成熟技術(例如闡述於本文中之彼等)生成。簡言之,使一或多個HVR殘基突變且將變體抗體展示於噬菌 體上並篩選特定生物學活性(例如結合親和力)。
可對HVR作出變化(例如,取代)以(例如)改良抗體親和力。此等改變可在HVR「熱點」(亦即,由在體細胞成熟過程期間經受高頻率突變之密碼子編碼的殘基)(例如,參見Chowdhury,Methods Afol.Biol.207:179-196(2008))及/或SDR(a-CDR)中進行,其中測試所得變體VH或VL之結合親和力。藉由自二級文庫構築及重新選擇來達成親和力成熟已闡述於(例如)Hoogenboom等人,Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien等人編輯,Human Press,Totowa,NJ,(2001))中。在親和力成熟之一些實施例中,藉由各種方法(例如,易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸引導之誘變)中之任一者將多樣性引入所選用於成熟之可變基因中。接著建立二級文庫。接著篩選文庫以鑑別具有期望親和力之任一抗體變體。引入多樣性之另一方法涉及HVR引導之方法,其中將若干HVR殘基(例如,一次4至6個殘基)隨機化。可(例如)使用丙胺酸掃描誘變或建模特異性鑑別參與抗原結合之HVR殘基。具體而言,通常靶向CDR-H3及CDR-L3。
在某些實施例中,取代、插入或缺失可發生在一或多個HVR內,只要該等改變不顯著降低抗體結合抗原之能力即可。例如,可對HVR作出不會實質上降低結合親和力之保守改變(例如,如本文所提供之保守取代)。此等改變可在HVR「熱點」或SDR外部。在上文所提供之變體VH及VL序列之某些實施例中,每一HVR未經改變,或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。
用於鑑別抗體中可靶向用於誘變之殘基或區的有用方法稱為「丙胺酸掃描誘變」,如Cunningham及Wells(1989)Science,244:1081-1085中所述。在此方法中,已鑑別殘基或靶殘基之群(例如,帶電殘基,例如Arg、Asp、His、Lys及Glu),且由中性或帶負電之胺基酸(例如,丙胺酸或多丙胺酸)替代以確定是否影響抗體與抗原之相互作用。可在對初始取代顯示功能敏感性之胺基酸位置引入其他取代。
或者或另外,抗原-抗體複合體之晶體結構以鑑別抗體與抗原間之接觸點。可靶向該等接觸殘基及相鄰殘基作為取代候選物或將其消除。可篩選變體以確定其是否含有期望性質。
胺基酸序列插入包括胺基-及/或羧基端融合物(長度在一個殘基至含有上百或更多殘基之多肽範圍內)、以及單個或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N-末端甲二磺醯殘基之抗體。抗體分子之其他插入變體包括酶(例如用於ADEPT)或延長抗體血清半衰期之多肽與抗體N末端或C末端之融合物。
可使用重組方法及組合物來產生抗體,例如,如美國專利第4,816,567號中所述。在一個實施例中,提供本文所述之編碼抗個體遺傳型抗體之分離之核酸。此核酸可編碼抗體中包含VL之胺基酸序列及/或包含VH之胺基酸序列(例如,抗體之輕鏈及/或重鏈)。在又一實施例中,提供一或多個包含此核酸之載體(例如,表現載體)。在又一實施例中,提供包含此核酸之宿主細胞。在一個此類實施例中,宿主細胞包含以下物質(例如,已經該等物質轉變):(1)包含如下核酸之載體:其編碼包含抗體之VL之胺基酸序列及包含抗體之VH之胺基酸序列,或(2)包含編碼包含抗體之VL之胺基酸序列之核酸的第一載體,及包含編碼包含抗體之VH之胺基酸序列之核酸的第二載體。在一個實施例中,宿主細胞係真核細胞,例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴樣細胞(例如,YO、NSO、Sp20細胞)。在一個實施例中,提供製備抗PD-L1個體遺傳型抗體之方法,其中該方法包含在適於表現抗體之條件下培養包含編碼如上文所提供抗體之核酸的宿主細胞,及視情況自該宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該抗體。
為重組產生抗PD-L1個體遺傳型抗體,分離編碼抗體(例如,如上文所述)之核酸並插入一或多個載體中以進一步在宿主細胞中選殖及/或表現。此核 酸可使用習用程序容易地分離出來並測序(例如,藉由使用能與編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合的寡核苷酸探針)。
用於選殖或表現編碼抗體之載體之適宜宿主細胞包括本文所述之原核或真核細胞。例如,抗體可在細菌中產生,特定而言在無需醣基化及Fe效應子功能時。關於抗體片段及多肽在細菌中之表現,例如,參見美國專利第5,648,237號、第5,789,199號、及第5,840,523號(亦參見Charlton,Methods in Afolecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo編輯,Humana Press,Totowa,NJ,2003),第245-254頁,其闡述抗體片段在大腸桿菌中之表現)。表現後,可自細菌細胞糊以可溶部分形式分離出抗體且可進一步純化。
除原核生物外,真核微生物(例如絲狀真菌或酵母)亦係用於編碼抗體之載體之適宜選殖或表現宿主,包括醣基化路徑已「人類化」從而產生具有部分或完全人類醣基化模式之抗體的真菌及酵母株。參見Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)及Li等人,Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
用於表現醣基化抗體之適宜宿主細胞亦源自多細胞生物體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已鑑別出可與昆蟲細胞聯合使用之諸多桿狀病毒株,尤其用於轉染草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)細胞。亦可利用植物細胞培養物作為宿主。參見(例如)美國專利第5,959,177號、第6,040,498號、第6,420,548號、第7,125,978號及第6,417,429號(闡述用於在轉基因植物中產生抗體之PLANTIBODIESTM技術)。
亦可使用脊椎動物細胞作為宿主。例如,可使用適於在懸浮液中生長之哺乳動物細胞系。有用之哺乳動物宿主細胞系之其他實例係藉由SV40轉化之猴腎臟CV 1細胞系(COS-7);人類胚腎細胞系(293或293細胞,如Graham等人,J.Gen Virol.36:59(1977)中所述);幼倉鼠腎細胞(BHK);小鼠支持細胞(TM4細胞,如(例如)Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述);猴腎細胞(CV 1); 非洲綠猴腎細胞(VER0-76);人類子宮頸癌細胞(HELA);犬腎細胞(MOCK);布法羅大鼠肝細胞(buffalo rat liver cell)(BRL 3A);人類肺細胞(W138);人類肝細胞(Hep 02);小鼠乳房腫瘤(MMT 060562);TRI細胞,如(例如)Mather等人,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述;MRC 5細胞;及FS4細胞。其他有用哺乳動物宿主細胞系包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞,包括DHFR CHO細胞(Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980));及骨髓瘤細胞系,例如YO、NSO及Sp2/0。關於適於抗體產生之某些哺乳動物宿主細胞系之綜述,例如,參見Yazaki及Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo編輯,Humana Press,Totowa,NJ),第255-268頁(2003)。
可藉由業內已知之多種分析來鑑別本文所提供之抗PD-L1個體遺傳型抗體,針對其物理/化學性質及/或生物活性進行篩選或表徵。
在一態樣中,例如,藉由已知方法(例如ELISA、西方墨點法等)測試本發明抗體之抗原結合活性。可藉由業內已知之常見方法量測結合親和力。在一個實施例中,抗體之KD係如以下分析所述藉由利用抗體及抗原分子之Fab型式來實施之放射標記之抗原結合分析(RIA)來量測:該分析藉由在滴定系列之未標記抗原之存在下用最低濃度之(125I)標記之抗原平衡Fab、接著用抗Fab抗體塗佈之板捕獲所結合抗原量測Fab對抗原之溶液結合親和力(Chen,等人,(1999)J.Mol.Biol 293:865-881)。為建立用於分析之條件,將微量滴定板(Dynex)用50mM碳酸鈉(pH 9.6)中之5ug/ml之捕獲抗-Fab抗體(Cappel Labs)塗佈過夜,且隨後在室溫(約23℃)下用PBS中之2%(w/v)牛血清白蛋白封阻2至5小時。在非吸附性板(Nunc 269620號)中,將100pM或26pM[125I]-抗原與所關注Fab之連續稀釋物混合(與Presta等人,(1997)Cancer Res.57:4593-4599中對抗-VEGF抗體 (Fab-12)之評價一致)。接著將所關注Fab培育過夜;然而,可繼續培育更長時段(例如,65小時)以確保達到平衡。其後,將混合物轉移至捕獲板以在室溫下培育1小時。接著移除溶液並用PBS中之0.1% Tween-20將板洗滌8次。在已乾燥板時,添加150ul/孔之閃爍體(MicroScint-20;Packard),且將板在Topcount γ計數器(Packard)上計數10分鐘。選擇每一Fab產生低於或等於最大結合之20%之濃度用於競爭性結合分析。
根據另一實施例,在25℃下,藉由使用表面電漿共振分析使用BIACORE®-2000或BIACORE®-3000儀器(BIAcore公司,Piscataway,NJ)以10個反應單位(RU)之固定之抗原CM5晶片來量測KD。簡言之,根據供應商說明書,用N-乙基-N’-(3-二甲基胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)來活化羧甲基化葡聚糖生物感測器晶片(CM5,BIAcore公司)。用10mM乙酸鈉(pH 4.8)將抗原稀釋至5μg/ml(約0.2μM),之後以5μL/分鐘之流速注射以獲得約10個反應單位(RU)之偶聯蛋白。在抗原注射後,注射1M乙醇胺以封阻未反應基團。對於動力學量測,在25℃下以約25μL/min之流速注射Fab於含有0.05% TWEEN 20TM表面活性劑之PBS(PBST)中之兩倍連續稀釋物(0.78nM至500nM)。締合速率(kon)及解離速率(koff)係使用簡單一對一Langmuir結合模型(BIAcore®評估軟體3.2版)藉由同時擬合結合及解離感測圖來計算。平衡解離常數(KD)計算為比率koff/kon。參見(例如)Chen等人,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。若藉由上文表面電漿共振分析獲得之締合速率(on-rate)超過106M-1 s-1,則該締合速率可藉由使用螢光淬滅技術來測定,該技術在25℃下在濃度遞增之抗原存在下量測PBS(pH 7.2)中之20nM抗-抗原抗體(Fab形式)之螢光發射強度(激發=295nm;發射=340nm,16nm帶通)之升高或降低,如在具有攪拌比色管之光譜儀(例如配備有停流設備之光譜儀(Aviv Instruments)或8000系列SLM-AMINCOTM分光光度計(ThermoSpectronic))中所量測。
在另一態樣中,競爭分析可用於鑑別與本文所述抗PD-L1個體遺傳型抗體中之任一者競爭結合抗PD-L1抗體的另一抗個體遺傳型抗體。在某些實施例中,此一競爭抗體結合至抗PD-L1抗體之相同表位(例如,線性或構象表位)。用於定位抗體所結合表位之詳細實例性方法提供於Morris(1996)「Epitope Mapping Protocols」,Afethods in Afolecular Biology vol.Humana Press,Totowa,NJ)中。
在實例性競爭分析中,將固定之抗PD-L1抗體在分別包含結合至抗PD-L1抗體之第一標記之抗體(例如,第一標記之抗PD-L1個體遺傳型抗體)及測試與第一抗體競爭結合至抗PD-L1抗體之能力的第二未標記之抗體(例如,第二未標記之抗PD-L1個體遺傳型抗體)的溶液中培育。第二抗體可存於雜交瘤上清液中。作為對照,在包含第一標記之抗體但不包含第二未標記之抗體之溶液中培育固定之抗PD-L1抗體。在允許第一抗體結合抗PD-L1抗體之條件下培育之後,去除過量之未結合抗體,且量測與固定之抗PD-L1抗體締合之標記的量。若與固定之抗PD-L1抗體締合之標記之量相對於對照樣品在測試樣品中實質上減少,則此指示第二抗體與第一抗體競爭結合至抗PD-L1抗體。參見Harlow and Lane(1988)Antibodies:A Laboratory A lanual ch.14(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。競爭分析亦可以用上述使用經抗PD-L1抗體轉染且在細胞表面表現之細胞的FACS之方式實施。另外,利用抗PD-L1抗體之ELISA亦可用於競爭分析。
在另一態樣中,可使用凝膠遷移分析以鑑別本發明之抗個體遺傳型抗體與靶抗體(例如抗PD-L1抗體)之間之相互作用。
在實例性凝膠遷移分析中,將抗PD-L1抗體與抗個體遺傳型抗體一起預培育。使預培育之抗PD-L1抗體及未與抗個體遺傳型抗體一起預培育之對照抗PD-L1抗體經受凝膠電泳並探測二級抗體(例如,IgG/Ig κ抗PD-L1抗體之 IgG及Ig κ二級抗體)。比較預培育之抗PD-L1抗體及對照抗PD-L1抗體之遷移率,其中預培育之抗PD-L1抗體及對照抗PD-L1抗體之遷移率差異指示抗PD-L1抗體與抗個體遺傳型抗體之間之相互作用。
在某些實施例中,如本文提供之任何抗個體遺傳型抗體或包含該等抗體之組合物可用於檢測生物樣品中抗PD-L1抗體之存在。在某些實施例中,如本文提供之任何抗PD-L1個體遺傳型抗體或包含該等抗體之組合物可用於量化樣品中之抗PD-L1抗體。在某些實施例中,生物樣品係生物流體,例如全血或全血組分(包括紅血球、白血球、血小板、血清及血漿)、腹水、玻璃體液、淋巴液、滑液、濾泡液、精液、羊水、乳液、唾液、痰、眼淚、汗液、黏液、腦脊髓液、尿液及可能含有所關注抗體之其他身體成分。在各個實施例中,樣品係來自任何動物之身體樣品。在各個實施例中,樣品係來自人類之樣品。
在某些實施例中,如本文提供之任何抗個體遺傳型抗體或包含該等抗體之組合物可用於檢測免疫分析中抗PD-L1之存在,而不影響其結合至另一分子(例如,結合至抗PD-L1抗體之Fc區之抗體)的能力。
抗PD-L1個體遺傳型抗體或包含該等抗體之組合物可用於多種不同分析中,包括(但不限於)ELISA、基於珠粒之免疫分析及質譜。
在一些實施例中,如本文提供之任何結合至抗PD-L1抗體之抗個體遺傳型抗體或包含該等抗體之組合物可用於自患者樣品消耗、檢測或區分抗PD-L1抗體以降低其對分析之干擾。
在一些實施例中,樣品來自哺乳動物。在一些實施例中,樣品來自人類受試者,例如在量測臨床樣品中之抗體(例如人類化抗體)時。在一些實施例中,生物樣品來自臨床患者或經治療性抗PD-L1抗體(例如,阿替珠單抗)治療之 患者。在某些實施例中,生物樣品係血清或血漿。在某些實施例中,生物樣品係來自臨床患者之血清。在某些實施例中,生物樣品係尿液。在某些實施例中,生物樣品係來自臨床患者之尿液。
在某些實施例中,提供包含標記之抗PD-L1個體遺傳型抗體的組合物。標記包括(但不限於)直接檢測之標記或部分(例如螢光標記、發色標記、電子緻密標記、化學發光標記及放射性標記)以及經由(例如)酶促反應或分子相互作用間接檢測之部分(例如酶或配體)。實例性標記包括(但不限於)放射性同位素32P、14C、125I、3H及131I、螢光團(例如稀土螯合物或螢光黃(fluorescein)及其衍生物)、玫瑰紅(rhodamine)及其衍生物、丹磺醯(dansyl)、傘形酮(umbelliferone)、螢光素酶(例如,螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶,美國專利第4,737,456號)、螢光素、2,3-二氫酞嗪二酮、山葵過氧化酶(HRP)、鹼性磷酸酶、J3-半乳糖苷酶、葡萄糖澱粉酶、溶菌酶、醣氧化酶(例如,葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸去氫酶)、雜環氧化酶(例如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶,其與諸如HRP、乳過氧化物酶或微過氧化酶等採用過氧化氫來氧化染料前體之酶偶合)、生物素/抗生物素蛋白、自旋標記、噬菌體標記、穩定自由基及諸如此類。
在一些實施例中,抗PD-L1個體遺傳型抗體用於ELISA分析中。本文所述分析係利用抗PD-L1個體遺傳型抗體作為所關注抗體之捕獲試劑的ELISA。在分析之第一步驟中,使懷疑含有或含有所關注抗體之生物樣品與捕獲(或外殼)抗體接觸並一起培育,使得捕獲抗體捕獲或結合至所關注抗體以使其可在檢測步驟中被檢測到。檢測步驟涉及使用可檢測抗體,其在與任何結合之所關注抗體接觸時結合至所關注抗體(若存在)。使用檢測方式來檢測抗體上之標記且因此檢測所關注抗體之存在或存在之量。
在某些實施例中,分析利用以下步驟。
在本文分析之第一步驟中,使懷疑含有或含有如本文定義之所關注抗體的生物樣品與固定之捕獲(或外殼)試劑接觸並一起培育,該等固定之捕獲(或外殼)試劑係針對所關注抗體之抗個體遺傳型抗體。在一些實施例中,該等抗個體遺傳型抗體係單株抗體,且可來自任何物種。在一些實施例中,該等抗個體遺傳型抗體係囓齒類動物抗體,在其他實施例中係鼠類或大鼠,且在其他實施例中係鼠類抗體。
在各個實施例中,抗個體遺傳型係本文揭示之任何抗個體遺傳型抗體。在某些實施例中,抗個體遺傳型抗體係包含三個重鏈超變區(HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3)及三個輕鏈超變區(HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3)之抗體,其中:(a)HVR-H1包含SEQ ID NO:35之胺基酸序列;(b)HVR-H2包含SEQ ID NO:36之胺基酸序列;(c)HVR-H3包含SEQ ID NO:34之胺基酸序列;(d)HVR-L1包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列;(e)HVR-L2包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列且(f)HVR-L3包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列。在一些實施例中,抗個體遺傳型抗體包含SEQ ID NO:54之重鏈可變區序列及SEQ ID NO:53之輕鏈可變區序列。
根據另一實施例中,抗個體遺傳型抗體係包含三個重鏈超變區(HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3)及三個輕鏈超變區(HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3)之抗體,其中:(a)HVR-H1包含SEQ ID NO:43之胺基酸序列;(b)HVR-H2包含SEQ ID NO:44之胺基酸序列;(c)HVR-H3包含SEQ ID NO:42之胺基酸序列;(d)HVR-L1包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列;(e)HVR-L2包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列且(f)HVR-L3包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列。在一些實施例中,抗個體遺傳型抗體包含SEQ ID NO:56之重鏈可變區序列及SEQ ID NO:55之輕 鏈可變區序列。
根據另一實施例中,抗個體遺傳型抗體係包含三個重鏈超變區(HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3)及三個輕鏈超變區(HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3)之抗體,其中:(a)HVR-H1包含SEQ ID NO:51之胺基酸序列;(b)HVR-H2包含SEQ ID NO:52之胺基酸序列;(c)HVR-H3包含SEQ ID NO:50之胺基酸序列;(d)HVR-L1包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列;(e)HVR-L2包含SEQ ID NO:27之胺基酸序列且(f)HVR-L3包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列。在一些實施例中,抗個體遺傳型抗體包含SEQ ID NO:58之重鏈可變區序列及SEQ ID NO:57之輕鏈可變區序列。
習用固定係藉由以下方式完成:在分析程序之前,藉由吸附至水不溶性基質或表面(美國專利第3,720,760號)或非共價或共價偶合(例如使用戊二醛或碳二亞胺交聯,先前用(例如)硝酸及還原劑活化或不活化載體,如美國專利第3,645,852號或Rotmans等人,J.Immunol.Methods,57:87-98(1983)中所述);或之後,例如藉由免疫沈澱。在一些實施例中,捕獲抗體偶聯至生物素且結合至鏈黴抗生物素蛋白塗佈之表面。在其他實施例中,捕獲抗體偶聯至蛋白質標識(例如His標識或GST),且結合至適宜表面,例如鎳或銅塗佈之表面或麩胱甘肽塗佈之表面。
用於固定之固相可為任何惰性載體或載劑,其基本上不溶於水,且可用於免疫測定分析,包括呈(例如)表面、顆粒、多孔基質等形式之載體。常用載體之實例包括小片、SEPHADEX®凝膠、聚氯乙烯、塑膠珠粒、以及由聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯及諸如此類製成之分析板或試管,包括96孔微量滴定板,以及諸如濾紙、瓊脂糖、交聯聚葡萄糖及其他多醣等微粒材料。或者,反應性水不溶性基質(例如溴化氰活化之碳水化合物)及美國專利美國專利第3,969,287號、第3,691,016號、第4,195,128號、第4,247,642號、第4,229,537號及第4,330,440 號中闡述之反應性受質適宜地用於捕獲試劑固定。在一些實施例中,固定之捕獲試劑塗佈於微量滴定板上。在一些實施例中,所用固相係可用於一次分析若干樣品之多孔微量滴定板,例如以(例如)NUNC MAXISORBTM或IMMULONTTM銷售之MICROTESTTM或MAXISORPTM 96孔ELISA板。
將固相用如上定義之捕獲試劑塗佈,該等捕獲試劑可視需要藉由非共價或共價相互作用或物理鍵聯而連接。附接技術包括美國專利第4,376,110號及其中引用之參考文件中所述之彼等技術。若係共價,則在業內熟知之條件下,例如在室溫下,將板或其他固相與交聯劑以及捕捉劑一起培育1小時。
用於將捕獲試劑附接至固相受質之常用交聯劑包括(例如)1,1-雙(重氮乙醯基)-2-苯基乙烷、戊二醛、N-羥基琥珀醯亞胺酯(例如與4-疊氮基柳酸之酯)、同雙官能亞胺酸酯(包括二琥珀醯亞胺基酯,例如3,3'-二硫基雙(琥珀醯亞胺基丙酸酯))及雙官能馬來醯亞胺(例如雙-N-馬來醯亞胺基-1,8-辛烷)。諸如3-((對-疊氮基苯基)-二硫基)丙醯亞胺酸甲酯等衍生劑產生能在光存在下形成交聯之光可活化中間體。
若利用96孔板,則可藉由培育至少約10小時將其用通常稀釋於緩衝劑(例如0.05M碳酸鈉)中之捕獲試劑的混合物塗佈。在一些實施例中,在約4-20℃或約4-8℃之溫度下及約8-12、約9-10或約9.6之pH下至少培育過夜。若期望較短之塗佈時間(1-2小時),則可於37℃下使用具有硝化纖維素過濾底部(Millipore MULTISCREENTM)或外殼之96孔板。可在自身分析之前提前一長段時間堆疊及塗佈板,且接著可以手動、半自動或自動方式(例如藉由使用機器人)對若干樣品同時實施分析。
接著通常用封阻劑處理塗佈之板,該封阻劑非特異性地結合至結合位點並使其飽和以防止游離配體與板之孔上之過量位點的不期望之結合。用於此目的之適當封阻劑的實例包括(例如)明膠、牛血清白蛋白、卵白蛋白、酪蛋白 及脫脂乳。封阻處理通常在環境溫度條件下進行約1-4小時或約1.5-3小時。
塗佈及封阻後,向固定相中添加經適當稀釋之標樣(所關注純化抗體)或欲分析之生物樣品。在某些實施例中,稀釋率為約5-15體積%或約10體積%。為了此目的可用於稀釋之緩衝劑包括(a)含有0.5% BSA、0.05% TWEEN 20TM清潔劑(P20)、0.05% PROCLINTM 300抗生素、5mM EDTA、0.25% 3-((3-膽醯胺基丙基)二甲基銨基)-1-丙烷磺酸酯(CHAPS)表面活性劑、0.2% β-γ球蛋白及0.35M NaCl之磷酸鹽緩衝鹽水(PBS);(b)含有0.5%牛血清白蛋白(BSA)、0.05% P20及0.05% PROCLINTM 300之PBS,pH 7;(c)含有0.5% BSA、0.05% P20、0.05% PROCLINTM 300、5mM EDTA及0.35M NaCl之PBS,pH 6.35;(d)含有0.5% BSA、0.05% P20、0.05% PROCLINTM 300、5mM EDTA、0.2% β-γ球蛋白及0.35M NaCl之PBS;及(e)含有0.5% BSA、0.05% P20、0.05% PROCLINTM 300、5mM EDTA、0.25% CHAPS及0.35M NaCl之PBS。PROCLINTM 300用作防腐劑,且TWEEN 20TM用作清潔劑以消除非特異性結合。
與標樣相比,所採用之捕獲試劑之量足夠大以產生良好信號,但與樣品中所關注抗體之最大預期含量相比不會莫耳過量。在某些實施例中,所添加之生物樣品之量使得固定之捕獲試劑在樣品適當稀釋後生物樣品中預期之所關注游離抗體的最大莫耳濃度莫耳過量。此預期含量主要取決於所分析之特定生物樣品中所關注游離抗體的濃度值與患者之臨床病況之間的任何已知相關性。因此,例如,成年患者可能在其血清中具有相當高之所關注游離抗體的最大預期濃度,而兒童之血清中基於給定劑量預期具有較低含量之所關注游離抗體。
捕獲試劑之濃度可由所關注抗體之所關注濃度範圍來確定,考慮到生物樣品之任何必要之稀釋。捕獲試劑之最終濃度亦可根據經驗確定,以使在所關注範圍內分析之靈敏度最大化。通常,在任何適當稀釋樣品之後,莫耳過量適宜地小於生物樣品中所關注抗體之最大預期莫耳濃度的約十倍。
選擇樣品及固定之捕獲試劑之培育條件以最大化分析之靈敏度並最小化解離,並確保存在於樣品中之任何所關注抗體結合至固定之捕獲試劑。在介於約0℃至約40℃範圍內之相當恆定溫度下、例如於室溫或大約室溫下完成培育。培育時間一般不大於約10小時。在各個實施例中,於室溫或大約室溫下之培育時間係約0.5至3小時或約1.5-3小時,以最大化所關注抗體與捕獲試劑之結合。若添加蛋白酶抑制劑以防止生物流體中之蛋白酶降解所關注抗體,則培育之持續時間可能更長。
在此階段,培育混合物之pH通常在約4-9.5之範圍內,或在約6-9或約7-8之範圍內。選擇培育緩衝劑之pH以維持捕獲試劑與被捕獲之所關注抗體之特異性結合的顯著程度。在此步驟期間可採用各種緩衝劑以達成並維持期望pH,包括硼酸鹽、磷酸鹽、碳酸鹽、TRIS-HCl或TRIS-磷酸鹽、乙酸鹽、巴比妥(barbital)及諸如此類。所採用之特定緩衝劑對於本發明並不重要,但是在個別分析中,一種緩衝劑可能優於另一種。
在分析方法之可選第二步驟中,自固定之捕獲試劑分離(例如藉由洗滌)生物樣品以移除未捕獲之所關注抗體。用於洗滌之溶液通常係緩衝劑(「洗滌緩衝劑」),其中pH係使用上文針對培育步驟所述之考慮因素及緩衝劑來確定,pH範圍為約6-9。洗滌可以進行三次或更多次。洗滌之溫度通常係自冰箱至中等溫度,在分析時段期間維持恆定溫度,通常為約0-40℃或約4-30℃。例如,可在洗滌之前將洗滌緩衝劑於4℃下置於儲存器中之冰中,且洗板機可用於此步驟。若存在捕獲之所關注抗體可能在隨後的步驟中在一定程度上解離之任何問題,亦可在此階段添加交聯劑或其他適宜試劑以容許現在結合之所關注抗體與捕獲試劑共價附接。
在下一步驟中,在約20-40℃或約36-38℃之溫度下使存在任何結合之所關注抗體的固定之捕獲試劑與可檢測抗體接觸,二者接觸之精確溫度及時間主要取決於所採用之檢測方式。例如,在使用4-甲基傘形酮基-β-半乳糖苷(MUG)、鏈黴抗生物素蛋白-HRP或鏈黴抗生物素蛋白-β-半乳糖苷酶作為檢測方式時,接觸可實施過夜(例如約15-17小時或更多)以將信號放大至最大。儘管可檢測抗體可為多株或單株抗體,其較佳係單株抗體,以降低背景噪音。在一些實施例中,在分析中使用相同抗個體遺傳型抗體進行塗佈及檢測。在其他實施例中,可使用不同抗個體遺傳型抗體進行塗佈及檢測,其經選擇以最小化背景噪音。
在一些實施例中,可檢測抗體係來自非人類物種之結合至人類抗體的抗體。在一些實施例中,可檢測抗體係抗huIgG Fc抗體。在一些實施例中,可檢測抗體係小鼠抗huIgG Fcγ抗體。在一些實施例中,可檢測抗體可直接檢測。在某些實施例中,使可檢測抗體生物素化。在該等情形下,生物素化標記之檢測方式可為抗生物素蛋白或鏈黴抗生物素蛋白-HRP,且檢測方式之讀出可為螢光或比色的。在一些實施例中,使抗體偶聯至HRP,且檢測方式係比色的。
相對於預期(如上所述)所關注游離抗體之最大濃度,將莫耳過量之可檢測抗體在板洗滌後添加至其中。此抗體(其可直接或間接檢測)係單株抗體,但可採用任何抗體。可檢測抗體之親和力必須足夠高以致於可檢測到少量所關注游離抗體,但不能過高以致於導致所關注抗體自捕獲試劑中拉出。
在分析方法之最後步驟中,使用可檢測抗體之檢測方式量測來自樣品之現結合至捕獲試劑的任何所關注游離抗體。若生物樣品來自臨床患者,則量測步驟包含將由於上述三個步驟而發生之反應與標準曲線進行比較,以確定與已知量相比所關注抗體的含量。
添加至固定之捕獲試劑中之抗體將直接被標記,或藉由在洗掉過量第一抗體後添加莫耳過量之針對第一抗體之動物物種之IgG的第二經標記之抗體間接檢測。在後者、即間接分析中,向樣品中添加針對第一抗體之標記之抗血清以便原位產生標記之抗體。
用於第一或第二抗體之標記係不干擾所關注游離抗體與抗個體遺傳型抗體結合的任何可檢測之官能基。
適宜標記之實例係已知用於免疫分析之彼等眾多標記,包括可直接檢測之部分(例如螢光染料、化學發光及放射性標記),以及必須反應或衍生以被檢測之部分(例如酶)。該等標記之實例包括放射性同位素32P、14C、125I、3H及131I、螢光團(例如稀土螯合物或螢光黃及其衍生物)、玫瑰紅及其衍生物、丹磺醯、傘形酮、螢光素酶(例如,螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶,美國專利第4,737,456號)、螢光素、2,3-二氫酞嗪二酮、HRP、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖澱粉酶、溶菌酶、醣氧化酶(例如,葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸去氫酶)、雜環氧化酶(例如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶,其與諸如HRP、乳過氧化物酶或微過氧化酶等採用過氧化氫來氧化染料前體之酶偶合)、生物素(可由例如抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白-HRP及具有MUG之鏈黴抗生物素蛋白-β-半乳糖苷酶檢測)、自旋標記、噬菌體標記、穩定自由基及諸如此類。
習用方法可用於將該等標記共價結合至蛋白質或多肽。例如,可使用偶合劑(例如二醛、碳二亞胺、二馬來醯亞胺、雙亞胺酸酯、雙重氮化聯苯胺及諸如此類)以用上述螢光標記、化學發光及酶標記標識抗體。參見(例如)美國專利第3,940,475號(螢光測定法)及美國專利第3,645,090號(酶);Hunter等人,Nature,144:945(1962);David等人,Biochemistry,13:1014-1021(1974);Pain等人,J.Immunol.Methods,40:219-230(1981);及Nygren,J.Histochem.及Cytochem., 30:407-412(1982)。
該等標記(包括酶)與抗體之偶聯係免疫分析技術中之熟練人員之標準操作步驟。參見(例如)O'Sullivan等人,「Methods for the Preparation of Enzyme-antibody Conjugates for Use in Enzyme Immunoassay」,Methods in Enzymology,J.J.Langone及H.Van Vunakis編輯,第73卷(Academic Press,New York,New York,1981),第147-166頁。亦可使用適宜市售之經標記抗體。
在添加最後標記之抗體後,藉由洗滌移除過量未結合之標記之抗體且接著使用適合於標記之檢測方法量測附接之標記的量並使所量測量與生物樣品中所關注抗體之量相關來測定結合之抗體的量。例如,在酶之情形下,顯色及量測之顏色量將為存在之所關注抗體之量的直接量度。具體而言,若HRP係標記,則可使用受質TMD使用450nm讀取波長及620nm或630nm參考波長來檢測顏色。
在一個實例中,在自固定相洗滌針對第一未標記之抗體的酶標記之第二抗體之後,藉由將固定之捕獲試劑與酶之受質一起培育來顯色並量測顏色或化學發光。接著藉由與平行運行之所關注標準抗體所產生之顏色或化學發光進行比較來計算所關注抗體的濃度。
在一些實施例中,抗PD-L1個體遺傳型抗體用於抗PD-L1抗體之質譜分析。本文闡述之分析利用抗PD-L1個體遺傳型抗體用於免疫親和力捕獲來自生物樣品之抗PD-L1抗體。在藉由質譜術量化抗PD-L1抗體之前,可使用分離技術(例如層析)進一步處理樣品。在一些實施例中,藉由蛋白分解產生特徵性肽片段,且選擇之特徵性肽量測為抗PD-L1抗體之替代分析物。在某些實施例中,使用HPLC藉由串聯質譜術(MS/MS)檢測來量化替代肽。
將抗PD-L1抗體投與哺乳動物(例如人類),或與選自組織、細胞培養物、血漿或血清之生物來源接觸。已知血清及血漿樣品之分析由於其高的蛋白質組學背景(亦即許多蛋白質及其他分析物)而成為問題。投與後數分鐘、數小時、數天範圍內之一段時間後,收集包含抗PD-L1抗體或其片段之生物樣品。生物樣品可藉由任何方式(包括藉由注射器或套管抽出流體)來收集。生物樣品可為血液或血液產品,例如血清、血漿或諸如此類,或含有所關注抗體之其他體液。
藉由習用程序處理生物樣品以形成分析樣品,該等習用程序包括:調配、固定、離心、分離、消化、誘導或防止血球凝結、水解或純化。處理之生物樣品用於移除雜質且降低樣品異質性,此可能妨礙樣品成分之分離或模糊數據收集或分析。或者,或除此之外,處理簡化樣品操作,防止降解,最小化樣品體積,或選擇質譜分析中所關注樣品成分(分析物)。或者,或除此之外,處理將生物樣品轉化成代謝物、片段或衍生物,其在測定藥物代謝或藥物動力學效應方面令人感興趣。
將抗體捕獲於免疫親和力珠粒上,其中珠粒具有對投與之抗PD-L1抗體具有特異性的固定之抗個體遺傳型抗體。在各個實施例中,抗個體遺傳型係本文揭示之任何抗個體遺傳型抗體。可使用業內已知之任何適宜方法將對投與之抗PD-L1抗體具有特異性之抗個體遺傳型抗體偶聯至免疫親和力珠粒。在一些實施例中,將對投與之抗PD-L1抗體具有特異性之抗個體遺傳型生物素化,並經由強的生物素-鏈黴抗生物素蛋白相互作用(KD=10-15M)使其結合至鏈黴抗生物素蛋白塗佈之順磁性珠粒。使用鏈黴抗生物素蛋白塗佈之順磁性珠粒之原理包括:(i)強的鏈黴抗生物素蛋白-生物素相互作用(KD=10-15M),(ii)固定之鏈黴抗生物素蛋白/生物素化分析物係被證實之方法,(iii)高結合能力(完整蛋白之 足夠材料),(iv)低非特異性結合,(v)用質譜相容性溶劑溶析樣品,(vi)自珠粒之良好樣品回收率,及(vii)易於使用且適於自動化。
免疫親和力珠粒可包含多孔聚合物整料且可構形於與收集儲存器流體連通之流通通道中。珠粒可包含於流通容器(例如管柱或漏斗)中,其中在一端或孔口引入生物來源之樣品,且自另一端或孔口溶析樣品。免疫親和力珠粒可分佈於多個流通容器中,每個流通容器與單獨的收集儲存器連通。容器及儲存器可構形成12×8列及行之96微量滴定孔格式,或24×16列及行之384微量滴定孔格式,用於結果之自動化及再現性。
藉由手動移液或自動化機器人分配將來自接受抗PD-L1抗體之哺乳動物(生物來源)的血漿或血清樣品施加至珠粒。
珠粒可構形於孔或其他容器中,或構形於管柱或其他流通裝置中,其中在一端或孔口引入樣品,且自另一端或孔口溶析洗滌流出物或溶析之樣品。使對珠粒結合之抗個體遺傳型抗體具有特異性之樣品成分結合。洗滌珠粒以沖洗非特異性蛋白及其他非特異性樣品成分。可在珠子上利用(例如)PNGaseF使結合之抗體去醣基化。可利用分離之接收容器或孔將結合之樣品成分溶析至樣品板中。接著可藉由手動移液或機器人轉移來處理溶析之樣品,且藉由反相層析分離,且藉由質譜分析分離之樣品成分。
在一些實施例中,生物樣品可用蛋白酶消化。藉由蛋白分解產生特徵性肽片段,且選擇之特徵性肽量測為抗PD-L1抗體之替代分析物。在實例性實施例中,生物樣品可用胰蛋白酶消化來消化。對於胰蛋白酶消化,樣品可用DTT還原,用碘乙酸鈉S-羧甲基化,且接著用胰蛋白酶消化。消化之樣品可藉由分離方法分析,例如反相HPLC,例如Nucleosil C18管柱;尺寸排除層析(SEC),例如TSK 3000SW×L管柱;或使用TSK硼酸鹽管柱之硼酸鹽親和層析。
為了形成分析樣品,可將生物樣品應用於分離介質以實現一種以上樣品成分之分離。分離方法包括親和力、層析及電泳方法。親和力方法包括親和層析、吸附及固定之親和基質。層析方法包括HPLC、疏水相互作用(HIC)、陰離子交換、陽離子交換、反相、正相、離子對反相、薄層、毛細管流動及尺寸排除。電泳方法包括單維、平板凝膠、毛細管、聚丙烯醯胺、變性、天然、自由溶液、紙、二維、等電聚焦及梯度電壓。其他分離方法包括:透析、離心、沈降、漂浮、沈澱、免疫沈澱及凝膠過濾。
分離方法可藉由一或多種物理化學性質(包括但不限於溶析時間、疏水性、親水性、遷移時間、速率、速度、層析滯留時間、溶解度、分子體積或大小、淨電荷、電荷狀態、離子電荷、等電點、解離常數(pKa)、抗體親和力、電泳遷移率、電離電位、偶極矩、氫鍵能力及於氣相中之離子遷移率)來實現生物樣品之成分之分離。
藉由毛細管流注入至質譜入口裝置中之低流速有助於質量檢測之靈敏度,溶析檢測及表徵更低濃度之分析物及更高分子量物質(例如完整蛋白質及抗體)。
用於質譜分析之樣品之製備通常可根據已知技術執行。參見:「Modem Protein Chemistry:Practical Aspects」,Howard,G.C.及Brown,W.E.編輯(2002)CRC Press,Boca Raton,Florida。
本發明之方法適用於分析源自生物樣品之抗體混合物,其中首先藉由一或多種方法(包括親和力或層析)分開、分離或部分分離混合物之不同化學成分,該等方法使成分依序或以分批方式溶析,或藉由質譜法直接檢測。可自質譜分析闡明抗體之各種結構特徵及性質,包括:片段化、去醯胺化、醣化、氧化、部分序列資訊,例如N-末端及C-末端、二聚體及聚集狀態。由於投與之抗 PD-L1抗體具有已知之序列、結構及分子量,故可藉由量測其準確質量以高度特異性方式表徵生物樣品中之一或多種化學成分。
能夠具有高質量準確度、高靈敏度及高解析度之各種質譜系統為業內已知且可用於本發明方法中。該等質譜儀之質量分析儀包括(但不限於)四極桿(Q)、飛行時間(TOF)、離子阱、扇形磁場或FT-ICR或其組合。質譜儀之離子源應主要產生樣品分子離子或偽分子離子及某些可表徵之碎體離子。該等離子源之實例包括大氣壓離子源,例如電噴霧電離(ESI)及大氣壓化學電離(APCI)及基質輔助雷射解吸電離(MALDI)。ESI及MALDI係兩種最常用之電離蛋白質用於質譜分析的方法。ESI及APCI係藉由LC/MS分析小分子之最常用之離子源技術(Lee,M.「LC/MS Applications in Drug Development」(2002)J.Wiley & Sons,New York)。
表面增強雷射解吸電離(SELDI)係容許高通量質譜之基於表面之電離技術的實例(美國專利第6,020,208號)。通常,SELDI用於分析蛋白質及其他生物分子之複雜混合物。SELDI採用化學反應性表面(例如「蛋白質晶片」)以與溶液中之分析物(例如蛋白質)相互作用。該等表面選擇性地與分析物相互作用並將其固定在其上。因此,本發明之分析物可在晶片上經部分純化,且接著在質譜儀中經快速分析。藉由在基底表面之不同位置提供多個反應性部分,可提高通量。
在功能系統中,質譜儀將所關注化學物質之質量準確地量測至其精確或計算質量之20ppm內,且通常在其精確或計算質量之5ppm或更小內。市售質量分析儀可同時採樣及記錄整個質譜,且其頻率容許混合物中之多個成分獲得足夠譜,以確保質譜信號強度或峰面積在數量上具有代表性。此亦將確保所有質量觀察到之溶析時間不會被質量分析儀修改或扭曲,且將有助於確保定量量測不會因需要量測多個瞬態信號而受到損害。
可藉由使用具有與靶分析物類似之物理化學性質之內標準品(IS)校正分析可變性。(Mesmin等人(2011)Bioanalysis 3:477-480)。在一些實施例中,在將特徵肽作為抗PD-L1抗體之替代分析物進行量測時,可將對應於特徵肽之穩定同位素標記(SIL)之肽用作內標準品。(Hagman等人(2008)Anal.Chem.80:1290-1296;Mesmin等人(2010)Rapid Commun.Mass Spectrom.24:2875-2884)。
由於分析物電離效率之提高,在較低流速下獲得較高靈敏度(Gale等人(1993)Rapid Commun.Mass Spectrom.7:1017)。因此,藉由以奈升/分鐘範圍之流速實施含有樣品之流體的電噴霧注射,在適當校正之後提供準確定量,且當與質譜組合時,提供流體內所含分析物之高靈敏度。已報導包括具有親和力層析吸附劑之小型化及鞏固之微柱及微柱陣列的系統及裝置,其提供高選擇性及高靈敏度,以及作為MS之前端之準確定性分析(美國專利第6,811,689號;美國專利第6,020,208號;美國專利第6,579,719號)。
諸如抗體等相對高分子量化合物之質量可以由大多數質譜儀容易測定之質荷比(m/z)(典型m/z範圍高達2000至3000)檢測。電噴霧電離質譜ESI-MS特別適用於帶電、極性或鹼性化合物且適用於分析具有優良檢測限值之帶有多個電荷之化合物。ESI因此容許檢測及表徵大生物分子,例如分子量(MW)為150,000或更高之抗體及抗體-藥物偶聯物。對於高質量離子,通常會觀察到一系列帶有多個電荷之分子離子。藉由將量測之m/z比乘以電荷數(n)減去陽離子之質量(C+)乘以該離子上之電荷數(n)來測定正離子之分子量。
ESI方法容許藉由控制界面透鏡電位來控制片段化之存在或不存在。電噴霧電離(ESI)與液體分離方法(前端)以及質譜檢測方法(後端)相容(「Electrospray Ionization Mass Spectrometry:Fundamentals,Instrumentation,and Applications」,Cole,R.B.編輯,(1997)Wiley,New York。
可藉由將多個掃描平均在一起並平滑數據以提供良好峰強度及形狀來獲取ESI-MS數據。對於低質量化合物,觀察到之最豐富之峰通常係正離子模式中之[M+H]+離子及負離子模式中之[M-H]-。亦可觀察到雙電荷及三電荷離子以及二聚體。將在質量(MW+2C+)/2下觀察到雙電荷正離子,其中MW係分子量且C+係電離陽離子,例如H+、Na+或NH4+。除極低質量之化合物外,檢測之離子將帶有多個電荷。由於ESI之軟(低電離電位)條件,通常僅觀察到分子離子。由於離子具有不同數量之電荷,ESI譜可能具有若干質荷比不同之分子離子峰。
可經由皮下注射針緩慢泵送樣品(例如ADC或其他生物分子)之稀釋溶液用於ESI-MS分析。可經由流動注射或LC/MS引入樣品。典型流量範圍為小於1微升(μl)/分鐘高達約1毫升(ml)/分鐘。ESI特別適用於原本難以蒸發或電離之大的生物分子。針保持在高電壓下,且針末端之強電場使霧化溶液帶電,並產生帶電液滴。帶電液滴蒸發水以最終產生穿過小孔口進入真空室之分子離子。在溶劑蒸發過程期間,非共價結合之複合體自溶液轉移至氣相。(Hu等人(1994))。
通常需要溫和之去溶劑化條件來維持完整氣相複合體。可加熱孔口以確保離子完全去溶劑化。一些MS系統可能採用逆流加熱氣體。帶電液滴自皮下注射針發射,並在其蒸發溶劑時收縮,之後進入真空室。熱量及氣體流量可用於幫助去溶劑化。ESI量測所需之樣品量可藉由使用小型毛細管電噴霧發射器、尖端、稱為奈米電噴霧之過程來減少流體流量而減少。對於1μl樣品,奈米電噴霧方法可產生約10-30分鐘之恆定信號。已經顯示低流量增加離子效率並減少離子抑制。奈米電噴霧方法經常用於MS/MS蛋白質研究(Komer等人(1996)J.Am.Soc.Mass Spectrom.7:150-156;Mann,M.及Wilm,M.(1996)Anal.Chem.68:1-8。
蛋白質之ESI產生帶有多個電荷之離子,隨著分子量增加,電荷數往往增加。給定離子物質上之電荷量可以藉由以下方法測定:例如(i)比較相差 一個電荷之兩個電荷狀態並求解聯立方程;(ii)尋找具有相同電荷但不同加成物質量之物質;及(iii)檢查解析之同位素簇之質荷比。ESI及ESI-MS之方法以及執行該等方法所需之參數為業內所熟知。電噴霧電離過程之溫和性容許藉由質譜法直接檢測完整抗體偶聯物。
在一個實施例中,蛋白質、抗體、抗體片段或抗體-偶聯物(大分子)之Q1質譜作為方法之一部分運行。可獲得大分子之適宜品質之Q1質譜。由於蛋白質包膜有可能轉移,故所有用於層析之溶劑皆係新鮮製得,且將酸添加至溶析溶劑中以將譜包膜定位在觀察範圍內。對於大於100,000質量單位之蛋白質,可在溶析溶劑(例如溶劑A(水)及B(乙腈)兩者)中以約0.1%(體積)使用酸(例如甲酸)。對於小於100,000質量單位之蛋白質,A及B溶劑二者皆可使用更強之酸,例如三氟乙酸(TFA),0.05%(體積)TFA。隨著甲酸之量減少,完整之醣基化抗體曲妥珠單抗(trastuzumab)獲得更多電荷,將包膜進一步向左側移動至m/z之觀察範圍(1800-3000m/z)內。當去簇電位(DP)電壓自約30-120V增加至約70-190V時,抗體上之電荷甚至進一步增加。因此,所施加電壓、溶劑組成及離子配對劑係需要考慮及調節之因素。可增加(斜升)去簇電位(DP),以獲得足夠解析度以選擇最佳之電荷離子範圍。可在寬範圍之m/z內獲得線性。抗體之去醣基化有助於完整抗體或重鏈、片段或ADC之定量。醣基化有助於降低電離效率,且由此降低靈敏度。當定量抗體或抗體片段偶聯物時,抗體之去醣基化可降低質譜之異質性、提高靈敏度且因此簡化分析。
使用解卷積表以測定欲定量之每種物質的精確質荷比(m/z)。解卷積軟體應用(例如Analyst.TM.QS(Applied Biosystems,Foster City,Calif.)有市售及/或提供有質譜儀。解卷積軟體通常為使用者提供解卷積質量表以及用於計算該等質量之m/z離子之子表。
多發性骨髓瘤(MM)係骨髓中漿細胞之癌症。多發性骨髓瘤在血液、尿液及器官中引起高含量之蛋白質,包括但不限於M蛋白及其他免疫球蛋白(抗體)及β-2-微球蛋白。M蛋白(單株蛋白之縮寫,亦稱為副蛋白)係由骨髓瘤漿細胞產生,且可在幾乎所有患有多發性骨髓瘤之患者的血液或尿液中發現。
免疫調節藥物(例如雷利竇邁(lenalidomide)(Revlimid®))已經成為治療新近診斷患者、化學療法或移植失敗之患有晚期疾病之患者以及復發性或難治性多發性骨髓瘤患者之骨髓瘤的重要選項。另一強效免疫調節劑係4-(胺基)-2-(2,6-二側氧基(3-六氫吡啶基))-異吲哚啉-1,3-二酮(泊馬竇邁(pomalidomide),Actimid®)。在一些情形下,該等藥劑與標準化學療法藥劑組合使用。例如,雷利竇邁與地塞米松(dexamethasone)之組合最近被批准用於治療已經接受至少一種先前療法之多發性骨髓瘤患者。泊馬竇邁亦可與地塞米松組合投與。阿替珠單抗(Tecentriq®)與其他治療之組合正在多個臨床試驗中作為多發性骨髓瘤療法進行測試。
國際骨髓瘤工作組(IMWG)已經建立了對MM治療之臨床反應的準則,其包括藉由血清蛋白電泳(SPE)及免疫固定電泳(IFE)之血清/尿液M蛋白含量變化、骨髓漿細胞百分比及游離輕鏈(FLC)比率。對於根據IMWG準則被分類為完全反應(CR)之患者,如藉由IFE及SPE所測定,血清及尿液必須為M蛋白陰性,且骨髓漿細胞必須<5%。隨著治療性單株抗體之引入,MM之治療正在發展。由於SPE及IFE分別用於量化及表徵免疫球蛋白之純系性質,故該等分析受到治療期間使用之單株抗體的干擾。在用於檢測M蛋白之臨床分析期間,本發明之抗個體遺傳型抗體可使生物樣品中之抗PD-L1抗體移位。
免疫固定電泳(IFE)為業內已知且係在第一階段中使用瓊脂糖凝膠蛋白質電泳及在第二階段中使用免疫沈澱之兩階段程序。樣本可為任何生物樣品。 在較佳實施例中,標本係血清、尿液或腦脊液。在一個實施例中,IFE包含以下步驟:(a)藉由在瓊脂糖凝膠上電泳分離蛋白質;(b)對電泳蛋白質實施免疫固定(免疫沈澱),其中適當電泳遷移軌道經個別抗血清覆蓋,抗血清擴散至凝膠中且使相應抗原(在存在時)沈澱,且參照軌道中之蛋白質經固定劑固定;(c)藉由印跡及洗滌自凝膠去除未沈澱之可溶性蛋白質,其中將抗原-抗體複合體之沈澱素捕獲於凝膠基質內;及(d)藉由染色使沈澱之蛋白質可視化。在一些實施例中,免疫固定電泳過程包含:(a)將樣品施加至電泳凝膠上之至少兩個施加區;(b)使凝膠電泳;(c)將模板對準至電泳之凝膠上,模板具有對應於每一電泳區域之模板槽;(d)將能夠將原位固定蛋白質之組合物施加至少一個模板槽及將能夠與一種蛋白質反應之抗血清施加至其餘模板槽中之至少一者;(e)培育步驟(d)之所得產物;(f)自培育之電泳凝膠去除模板;(g)洗滌步驟(f)之培育之電泳凝膠;(h)乾燥步驟(g)之洗滌之凝膠;(i)對步驟(h)之乾燥凝膠進行染色;(j)使步驟(i)之染色之凝膠脫色;(k)乾燥步驟(j)之脫色之凝膠;及(l)分析步驟(k)之乾燥凝膠。
在一些實施例中,該方法用於檢測生物樣品中之抗PD-L1抗體。在一些實施例中,方法包含(a)使生物樣品與如本文所述之抗個體遺傳型抗體或組合物在容許抗個體遺傳型抗體與抗PD-L1抗體結合之條件下接觸以形成複合體;(b)加載電泳凝膠且藉由免疫固定電泳比較已接觸抗個體遺傳型抗體之生物樣品與尚未接觸抗個體遺傳型抗體之生物樣品中蛋白質之遷移;其中接觸抗個體遺傳型抗體之樣品與尚未接觸抗個體遺傳型抗體之樣品之間之帶之遷移差異指示生物樣品中存在抗PD-L1抗體。
在一些實施例中,該方法用於檢測生物樣品中之M蛋白。在一些實施例中,方法包含(a)使生物樣品與如本文所述之抗個體遺傳型抗體或組合物在容許抗個體遺傳型抗體與抗PD-L1抗體結合之條件下接觸以形成複合體;(b)加載電泳凝膠且藉由免疫固定電泳比較已接觸抗個體遺傳型抗體之生物樣品與尚 未接觸抗個體遺傳型抗體之生物樣品中蛋白質之遷移。在一些實施例中,若接觸抗個體遺傳型抗體之樣品與尚未接觸抗個體遺傳型抗體之樣品之間之帶之遷移無差異,則檢測到M蛋白。在一些實施例中,若接觸抗個體遺傳型抗體之樣品與尚未接觸抗個體遺傳型抗體之樣品之間之帶之遷移存在部分偏移,則檢測到M蛋白。在一些實施例中,若接觸抗個體遺傳型抗體之樣品與尚未接觸抗個體遺傳型抗體之樣品之間之帶之遷移存在差異,則未檢測到M蛋白。
幾家公司提供了聯合該等步驟中之一或多者之自動化選項。可根據使免疫固定電泳分析商業化之公司提供之說明書實施分析。例如,可如http://www.ilexmedical.com/files/Sebia%20inserts/IF_Standard_mask_Hydrasis.pdf中所述實施分析。
本發明之分析方法可以套組形式提供。在一個實施例中,該套組包含抗個體遺傳型抗體或包含如本文所述抗個體遺傳型抗體之組合物。在一些實施例中,該套組係包裝之組合,其包括以下基本要素:包括針對所關注抗體之抗個體遺傳型抗體的捕獲試劑;結合至所關注抗體之可檢測(標記或未標記之)抗體;及關於如何使用該等試劑實施分析方法之說明書。該等基本要素在上文中定義。
套組可進一步包含用於捕獲試劑之固體載體,其可作為單獨元件提供,或捕獲試劑已經固定於其上。
因此,套組中之捕獲抗體可固定於固體載體上,或其可固定於套組中包括或與套組分開提供之載體上。在一些實施例中,捕獲試劑塗佈或附接至固體材料(例如,微量滴定板、珠粒或梳)上。可檢測抗體可為直接檢測之經標記抗體或由針對在不同物種中產生之未經標記抗體的經標記之抗體檢測的未標記之抗體。在標記為酶之情況下,套組通常包括酶所需之受質及輔因子;其中標 記係螢光團,即提供可檢測發色團之染料前體;且在標記係生物素之情況下,抗生物素蛋白(例如抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白或鏈黴抗生物素蛋白)偶聯至HRP或具有MUG之β-半乳糖苷酶。
在各個實施例中,抗個體遺傳型抗體係本文揭示之抗個體遺傳型抗體中之任一或多者。在一些實施例中,抗個體遺傳型抗體係選自(a)抗個體遺傳型抗體,其包含SEQ ID NO:54之重鏈可變區序列及SEQ ID NO:53之輕鏈可變區序列;(b)抗個體遺傳型抗體,其包含SEQ ID NO:56之重鏈可變區序列及SEQ ID NO:55之輕鏈可變區序列;(c)抗個體遺傳型抗體,其包含SEQ ID NO:58之重鏈可變區序列及SEQ ID NO:57之輕鏈可變區序列及(d)其組合。
套組通常亦含有所關注抗體作為標準品以及其他添加劑(例如穩定劑、洗滌及培育緩衝劑及諸如此類)。
套組之組分將以預定比率提供,其中各種試劑之相對量適當地變化以使得試劑溶液中之濃度實質上最大化分析之靈敏度。具體而言,試劑可以乾粉形式提供,通常經凍乾,包括賦形劑,其在溶解時將提供具有適合於與欲測試之樣品組合之濃度的試劑溶液。
在各個實施例中,包含如本文所述抗個體遺傳型抗體之套組用於如本文所述方法中(例如,用於檢測M蛋白之方法中)。在一些實施例中,套組進一步包含塗佈或附接至梳用於檢測M蛋白之方法中的抗個體遺傳型抗體。
藉由參照以下實例將更充分地理解本發明。然而,其不應理解為限制本發明之範疇。應理解,本文闡述之實例及實施例僅用於說明目的,且鑒於其之各種修改或改變將為熟習此項技術者所建議,且將包括於本申請案之精神及範圍以及隨附申請專利範圍之範疇內。
利用含有可代謝角鯊烯、Tween 80、海藻糖6,6-二黴菌酸值及單磷醯脂質A(所有組分皆係自Sigma Aldrich,USA獲得)之佐劑中的抗PDL1抗體阿替珠單抗對5隻Balb/c小鼠(Charles River Laboratories International公司,Wilmington,MA,USA)在每一後足墊中且經腹膜內以3-4天間隔進行超免疫。在11次加強後,藉由標準酶聯免疫吸附分析(ELISA)評估血清效價以鑑別對抗PDL1抗體呈陽性血清效價的小鼠。藉由電融合(Hybrimune-Hybridoma Production System;Harvard Apparatus公司,Holliston,MA,USA)使來自脾及膕淋巴結之B細胞與小鼠骨髓瘤細胞(X63.Ag8.653或P3X63Ag.U1;美國模式培養物保藏所,Manassas,VA,USA)融合。10-14天後,收穫雜交瘤上清液且藉由ELISA篩選CDR特異性抗體產生。
為了選殖出用於重組抗體產生之雜交瘤細胞的抗體序列,使用自培養之雜交瘤細胞分離之總RNA來生成cDNA,即用於抗體可變區擴增之PCR模板。用於PCR之寡核苷酸係基於小鼠V-基因及J-基因種系序列。為了將PCR產物直接亞選殖至哺乳動物表現載體,將側翼載體序列分別附加在正向及反向引子之5'-端及3'-端。將重鏈及輕鏈之可變區分別利用彙集之種系寡核苷酸擴增,使PCR產物在DNA凝膠上可視化以確認預期大小之單一帶(重鏈為400bps且輕鏈為350bps)。
將純化之重鏈及輕鏈PCR產物用(融合入)In-Fusion(Clontech)套組分別亞選殖至pRK5P-小鼠IgG2a及pRK5P-小鼠κ載體中。連接產物轉變後,挑取幾個單菌落進行DNA測序。將DNA序列與IMGT種系資料庫進行比對;選擇具有共有序列之純系並放大進行蛋白質表現。
為了確認重組抗體序列,將重鏈及輕鏈質體瞬時共轉染至HEK293T 細胞中。表徵純化之重組IgG並與自雜交瘤培養物分離之IgG比較結合活性及親和力。
如圖1及2中所示測定單株抗體105D11、43B5及48C1之重鏈及輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
使用BIAcoreTM-T2000儀器藉由表面電漿共振(SPR)量測抗PDL1抗ID抗體之結合親和力。藉由塗佈於CM5生物感測器晶片上之抗小鼠-Fc抗體捕獲抗個體遺傳型抗體以實現約200個反應單元(RU)。對於動力學量測而言,於25℃下將500nM抗PDL1 Fab或框架對照Fab(YW167B.43)(Genentech,South San Francisco,CA)以30μl/min之流速注射於HBS-P+緩衝劑(0.1M HEPES、1.5M NaCl、0.5%表面活性劑P20-GE Life Science)中。使用簡單的一對一Langmuir結合模型(BIAcore評估軟體3.2版)計算締合速率(ka)及解離速率(kd)。平衡解離常數(KD)計算為比率k off/k on。參見 表2。 亦參見 圖3-5。
在Sebia IFE平台上執行針對阿替珠單抗之抗個體遺傳型(抗ID)抗體的篩選以鑑別與阿替珠單抗結合且在Sebia IFE平台上產清晰之『凝膠遷移』之抗ID抗體。參見圖6。
簡言之,根據用於凝膠電泳之血清之操作、儲存及製備的標準實驗室程序設定樣品。根據製造商之指南設定HYDRASYS儀器。根據製造商指定之 方案進行遷移方案及凝膠處理設定。
將阿替珠單抗(1500μg/mL)重新懸浮於PBS中且於室溫下在具有各別抗ID抗體或假對照(僅PBS)之振盪平台上預培育2小時。使用在Maxikit Hydragel 41F或91F(Sebia,Norcross,GA,USA)在半自動Hydrasys或Hydrasys 2上實施之電泳分離樣品。接著根據製造商說明書使用二級抗體(例如IgG、Ig κ、Ig λ、IgA及/或IgM)根據Sebia IFE方案實施凝膠之免疫固定(IFE)。結果說明,在臨床測定平台上可檢測到阿替珠單抗,且阿替珠單抗加上抗ID之特異性複合體可與單獨阿替珠單抗分開。因此,在添加抗阿替珠單抗(抗ID)抗體後IgG/Ig κ抗體之電泳遷移率變化提供抗體之屬性(identity)的證據,即阿替珠單抗。參見圖6。基於圖6中所示之數據,選擇抗體48C1、105D11及43B5,此乃因阿替珠單抗與該等抗體中之一者之複合體在Sebia IFE平台上展現清晰之凝膠遷移。
當血清中阿替珠單抗之濃度增加時,抗ID抗體改變阿替珠單抗之電泳遷移率的能力取決於抗ID抗體之濃度及培育時間。參見圖8。當血清中阿替珠單抗之濃度係500μg/ml且培育時間係2小時時,在阿替珠單抗:抗ID抗體之1:1比率下觀察到阿替珠單抗之完全凝膠遷移。然而,當血清中阿替珠單抗之濃度增加至1000μg/ml時,需要1:4比率之阿替珠單抗:抗ID抗體以產生阿替珠單抗之完全凝膠遷移。參見圖8。
使用來自多發性骨髓瘤患者之人類血清樣品。患者之樣品在IFE後在血清中顯示可檢測之IgA/Ig κ M蛋白峰(圖7之小圖1之泳道A及泳道K)。在以下條件下將患者之血清預培育30分鐘至2小時:1500μg/ml之單獨阿替珠單抗抗ID抗體48C1(圖7之小圖2)、以1500μg/ml摻入之單獨阿替珠單抗(圖7之小圖3)及各自1500μg/ml之阿替珠單抗+阿替珠單抗ID抗體48C1(圖7之小圖4)。使用Maxikit Hydragel 41F或91F(Sebia,Norcross,GA,USA)在半自動 Hydrasys 2上實施免疫固定(IFE)分析。根據製造商說明書實施IFE分析。分析數據以確定在通常用於多發性骨髓瘤患者之臨床反應評價的IFE分析中阿替珠單抗抗ID抗體使阿替珠單抗帶移位的有效性。
在圖7之小圖2中,將患者血清樣品與阿替珠單抗抗ID抗體一起預培育。小圖1與小圖2之比較顯示血清與阿替珠單抗抗ID抗體之預培育不干擾患者之可檢測M蛋白的結果。
在圖7之小圖3中,將患者血清樣品與1500μg/ml之阿替珠單抗一起預培育。圖1與圖3之比較顯示在圖3中增加可檢測之微小帶(箭號泳道G及K)。此確認大的生物藥物(例如阿替珠單抗,其係IgG/Ig κ人類mAB)係可檢測的且可干擾通常用於多發性骨髓瘤患者之臨床反應評價之IFE分析的結果。
在圖7之小圖4中,將患者血清樣品與阿替珠單抗及阿替珠單抗抗個體遺傳型小鼠mAB純系第48C1號二者一起預培育。比較小圖3與小圖4(圖7)顯示,將阿替珠單抗抗個體遺傳型小鼠單株抗體添加至摻有阿替珠單抗之血清樣品中,產生抗個體遺傳型單株抗體與阿替珠單抗之結合複合體,藉此導致在IFE凝膠上自較低至較高分子量之阿替珠單抗IgG及Ig κ之可檢測IgG及Ig κ位移(圖7之小圖4,泳道G及K)。
儘管已出於清楚理解之目的藉助闡釋及實例詳細闡述了前述發明,但說明及實例不應解釋為限制本發明之範疇。本文引用之所有專利及科學文獻之揭示案的全文以引用方式明確併入。
抗個體遺傳型抗PD-L1抗體105D11輕鏈可變區胺基酸序列: (SEQ ID NO:53)
抗個體遺傳型抗PD-L1抗體105D11重鏈可變區胺基酸序列: (SEQ ID NO:54)
抗個體遺傳型抗PD-L1抗體43B5輕鏈可變區胺基酸序列: (SEQ ID NO:55)
抗個體遺傳型抗PD-L1抗體43B5重鏈可變區胺基酸序列: (SEQ ID NO:56)
抗個體遺傳型抗PD-L1抗體48C1輕鏈可變區胺基酸序列: (SEQ ID NO:57)
抗個體遺傳型抗PD-L1抗體48C1重鏈可變區胺基酸序列: (SEQ ID NO:58)
抗個體遺傳型抗PD-L1抗體105D11輕鏈胺基酸序列: (SEQ ID NO:59)
抗個體遺傳型抗PD-L1抗體105D11重鏈胺基酸序列: (SEQ ID NO:60)
抗個體遺傳型抗PD-L1抗體43B5輕鏈胺基酸序列: (SEQ ID NO:61)
抗個體遺傳型抗PD-L1抗體43B5重鏈胺基酸序列: (SEQ ID NO:62)
抗個體遺傳型抗PD-L1抗體48C1輕鏈胺基酸序列: (SEQ ID NO:63)
抗個體遺傳型抗PD-L1抗體48C1重鏈胺基酸序列: (SEQ ID NO:64)
<110> 美商建南德克公司
<120> 針對抗PD-L1抗體之個體遺傳型抗體及其使用
<130> 146392038540
<140> 107101891
<141> 2018-01-18
<150> US 62/447,886
<151> 2017-01-18
<150> US 62/452,934
<151> 2017-01-31
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<170> Windows 4.0版之FastSEQ
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<212> PRT
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<212> PRT
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
<400> 64
Claims (47)
- 一種經分離抗個體遺傳型抗體,其特異性結合至抗PD-L1抗體,其中該抗PD-L1抗體包含:(a)輕鏈可變區,其包含:(i)包含胺基酸序列RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:1)之HVR-L1;(ii)包含胺基酸序列SASFLYS(SEQ ID NO:2)之HVR-L2;及(iii)包含胺基酸序列QQYLYHPAT(SEQ ID NO:3)之HVR-L3;及(b)重鏈可變區,其包含:(i)包含胺基酸序列GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:4)之HVR-H1;(i)包含胺基酸序列AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:5)之HVR-H2;及(iii)包含胺基酸序列RHWPGGFDY(SEQ ID NO:6)之HVR-H3。
- 如申請專利範圍第1項之經分離抗個體遺傳型抗體,其中該抗PD-L1抗體包括:輕鏈可變區,其包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列,及/或重鏈可變區,其包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列。
- 如申請專利範圍第2項之經分離抗個體遺傳型抗體,其中該抗PD-L1抗體包括:輕鏈,其包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列,及/或重鏈,其包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列。
- 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之經分離抗個體遺傳型抗體,其中該經分離抗個體遺傳型抗體包括重鏈可變區,其包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3,及輕鏈可變區,其包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3,其中: (a)HVR-H1包含胺基酸序列SYDMS(SEQ ID NO:35);(b)HVR-H2包含胺基酸序列YISSGGGSTYYPDTVKG(SEQ ID NO:36);(c)HVR-H3包含胺基酸序列LVYYDYDDAMDY(SEQ ID NO:34);(d)HVR-L1包含胺基酸序列SASSSVSYMH(SEQ ID NO:14);(e)HVR-L2包含胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO:15);且(f)HVR-L3包含胺基酸序列QQRSSYPPTF(SEQ ID NO:16)。
- 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之經分離抗個體遺傳型抗體,其中該經分離抗個體遺傳型抗體包括:重鏈可變區,其包含SEQ ID NO:54之序列,及/或輕鏈可變區,其包含SEQ ID NO:53之序列。
- 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之經分離抗個體遺傳型抗體,其中該經分離抗個體遺傳型抗體包括重鏈可變區,其包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3,及輕鏈可變區,其包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3,其中:(a)HVR-H1包含胺基酸序列DYIML(SEQ ID NO:43);(b)HVR-H2包含胺基酸序列NINPYYGSTSYNLKFKG(SEQ ID NO:44);(c)HVR-H3包含胺基酸序列WGGNYEGWFAY(SEQ ID NO:42);(d)HVR-L1包含胺基酸序列HASQGISSNIG(SEQ ID NO:20);(e)HVR-L2包含胺基酸序列HGTNLED(SEQ ID NO:21);且(f)HVR-L3包含胺基酸序列VQYAQFPLTF(SEQ ID NO:22)。
- 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之經分離抗個體遺傳型抗體,其中該經分離抗個體遺傳型抗體包括: 重鏈可變區,其包含SEQ ID NO:56之序列及/或,輕鏈可變區,其包含SEQ ID NO:55之序列。
- 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之經分離抗個體遺傳型抗體,其中該經分離抗個體遺傳型抗體包括重鏈可變區,其包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3,及輕鏈可變區,其包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3,其中:(a)HVR-H1包含胺基酸序列SYDMS(SEQ ID NO:51);(b)HVR-H2包含胺基酸序列YISSGGGSTYYPDTVKG(SEQ ID NO:52);(c)HVR-H3包含胺基酸序列TIYYGYDDVMDY(SEQ ID NO:50);(d)HVR-L1包含胺基酸序列SASSSVSYMH(SEQ ID NO:26);(e)HVR-L2包含胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO:27);且(f)HVR-L3包含胺基酸序列QQRSGYPPTF(SEQ ID NO:28)。
- 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之經分離抗個體遺傳型抗體,其中該經分離抗個體遺傳型抗體包括:重鏈可變區,其包含SEQ ID NO:58之序列,及/或輕鏈可變區,其包含SEQ ID NO:57之序列。
- 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之經分離抗個體遺傳型抗體,其中該經分離抗個體遺傳型抗體特異性結合至該抗PD-L1抗體之至少一個HVR。
- 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之經分離抗個體遺傳型抗體,其中該經分離抗個體遺傳型抗體偶聯至異源部分或可檢測部分。
- 如申請專利範圍第11項之經分離抗個體遺傳型抗體,其中該可檢測部分係標記或生物素。
- 一種組合物,其包含如申請專利範圍第1項至第12項中任一項之抗個體遺傳型抗體。
- 一種套組,其包含如申請專利範圍第13項之組合物。
- 一種經分離核酸,其編碼特異性結合至抗PD-L1抗體之抗個體遺傳型抗體,其中該抗個體遺傳型抗體包括:重鏈可變區,其包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3,及輕鏈可變區,其包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3,其中:(a)HVR-H1包含胺基酸序列SYDMS(SEQ ID NO:35);(b)HVR-H2包含胺基酸序列YISSGGGSTYYPDTVKG(SEQ ID NO:36);(c)HVR-H3包含胺基酸序列LVYYDYDDAMDY(SEQ ID NO:34);(d)HVR-L1包含胺基酸序列SASSSVSYMH(SEQ ID NO:14);(e)HVR-L2包含胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO:15);且(f)HVR-L3包含胺基酸序列QQRSSYPPTF(SEQ ID NO:16)。
- 一種經分離核酸,其編碼特異性結合至抗PD-L1抗體之抗個體遺傳型抗體,其中該抗個體遺傳型抗體包括:重鏈可變區,其包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3,及輕鏈可變區,其包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3,其中:(a)HVR-H1包含胺基酸序列DYIML(SEQ ID NO:43);(b)HVR-H2包含胺基酸序列NINPYYGSTSYNLKFKG(SEQ ID NO:44);(c)HVR-H3包含胺基酸序列WGGNYEGWFAY(SEQ ID NO:42);(d)HVR-L1包含胺基酸序列HASQGISSNIG(SEQ ID NO:20);(e)HVR-L2包含胺基酸序列HGTNLED(SEQ ID NO:21);且 (f)HVR-L3包含胺基酸序列VQYAQFPLTF(SEQ ID NO:22)。
- 一種經分離核酸,其編碼特異性結合至抗PD-L1抗體之抗個體遺傳型抗體,其中該抗個體遺傳型抗體包括:重鏈可變區,其包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3,及輕鏈可變區,其包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3,其中:(a)HVR-H1包含胺基酸序列SYDMS(SEQ ID NO:51);(b)HVR-H2包含胺基酸序列YISSGGGSTYYPDTVKG(SEQ ID NO:52);(c)HVR-H3包含胺基酸序列TIYYGYDDVMDY(SEQ ID NO:50);(d)HVR-L1包含胺基酸序列SASSSVSYMH(SEQ ID NO:26);(e)HVR-L2包含胺基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO:27);且(f)HVR-L3包含胺基酸序列QQRSGYPPTF(SEQ ID NO:28)。
- 一種經分離核酸,其編碼如申請專利範圍第1項至第10項中任一項之抗個體遺傳型抗體。
- 一種載體,其包含如申請專利範圍第15項至第18項中任一項之核酸。
- 一種宿主細胞,其包含如申請專利範圍第19項之載體。
- 如申請專利範圍第20項之宿主細胞,其係真核的。
- 如申請專利範圍第21項之宿主細胞,其係哺乳動物的。
- 如申請專利範圍第22項之宿主細胞,其係中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。
- 如申請專利範圍第20項之宿主細胞,其係原核的。
- 如申請專利範圍第24項之宿主細胞,其係大腸桿菌( E.coli)。
- 一種製備抗個體遺傳型抗體之方法,其包含在適於編碼該抗個體遺傳型抗體之載體表現之條件下培養如申請專利範圍第20項至第25項中任一項之宿主細胞以及回收該抗個體遺傳型抗體。
- 一種檢測生物樣品中抗PD-L1抗體之方法,其包含:(a)使該生物樣品與捕獲劑接觸,藉此形成免疫複合體,其中該捕獲劑係如申請專利範圍第13項之組合物;(b)使(a)之該免疫複合體與結合至該抗PD-L1抗體之可檢測抗體接觸;及(c)藉由檢測該可檢測抗體量測結合至該組合物之該抗PD-L1抗體之含量。
- 一種檢測生物樣品中抗PD-L1抗體之方法,其包含:(a)使該生物樣品與捕獲劑接觸,藉此形成免疫複合體,其中該捕獲劑係如申請專利範圍第1項至第12項中任一項之抗個體遺傳型抗體,其結合存在於該樣品中之該抗PD-L1抗體;(b)使(a)之該免疫複合體與可檢測抗體接觸,該可檢測抗體結合至該抗PD-L1抗體;及(c)藉由檢測該可檢測抗體量測結合至該抗個體遺傳型抗體之該抗PD-L1抗體的含量。
- 如申請專利範圍第28項之方法,其中該抗個體遺傳型抗體係固定至固體載體,且該方法進一步包含分離該生物樣品與結合至該抗PD-L1抗體之該固定之抗個體遺傳型抗體的步驟。
- 如申請專利範圍第29項之方法,其中該固定之抗個體遺傳型抗體係偶聯至生物素,且結合至經鏈黴抗生物素蛋白塗佈之微量滴定板。
- 如申請專利範圍第28項之方法,其中該可檢測抗體係來自非人類物種之抗體,其結合至人類或人類化抗體。
- 如申請專利範圍第28項之方法,其中該可檢測抗體可經直接檢測,或偶聯至辣根過氧化物酶,或係藉由螢光或量熱試劑來檢測。
- 如申請專利範圍第27項至第32項中任一項之方法,其中該生物樣品係自人類受試者分離。
- 如申請專利範圍第33項之方法,其中該人類受試者已經抗PD-L1抗體治療,該抗PD-L1抗體包含:(a)輕鏈可變區,其包含:(i)包含胺基酸序列RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:1)之HVR-L1;(ii)包含胺基酸序列SASFLYS(SEQ ID NO:2)之HVR-L2;(iii)包含胺基酸序列QQYLYHPAT(SEQ ID NO:3)之HVR-L3;及(b)重鏈可變區,其包含:(i)包含胺基酸序列GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:4)之HVR-H1;(ii)包含胺基酸序列AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:5)之HVR-H2;(iii)包含胺基酸序列RHWPGGFDY(SEQ ID NO:6)之HVR-H3。
- 如申請專利範圍第28項之方法,其中該方法進一步包含使用標準曲線來測定與已知含量之該抗PD-L1抗體相比的該抗PD-L1抗體之含量。
- 如申請專利範圍第27項至第32項及第35項中任一項之方法,其中該生物樣品係血液、血漿或血清。
- 一種免疫分析套組,其用於特異性檢測生物樣品中之抗PD-L1抗體,該套組包含: (a)如申請專利範圍第1項至第12項中任一項之抗個體遺傳型抗體或如申請專利範圍第13項之組合物;(b)結合至該抗PD-L1抗體之可檢測抗體;及(c)檢測該抗PD-L1抗體之說明書。
- 如申請專利範圍第37項之套組,其中該套組可用於免疫分析,以檢測該抗PD-L1抗體。
- 一種檢測生物樣品中之抗PD-L1抗體之方法,其包含:(a)使該生物樣品與如申請專利範圍第1項至第12項中任一項之抗個體遺傳型抗體或如申請專利範圍第13項之組合物在容許該抗個體遺傳型抗體與該抗PD-L1抗體結合之條件下接觸以形成複合體;(b)藉由免疫固定電泳分析該樣品,以比較接觸該抗個體遺傳型抗體之該樣品與尚未接觸該抗個體遺傳型抗體之該樣品;(c)檢測該生物樣品中該抗PD-L1抗體之存在,其中接觸該抗個體遺傳型抗體之該樣品與尚未接觸該抗個體遺傳型抗體之該樣品之間之遷移差異指示該生物樣品中存在該抗PD-L1抗體。
- 一種檢測生物樣品中之M蛋白之方法,其包含:(a)使該生物樣品與如申請專利範圍第1項至第12項中任一項之抗個體遺傳型抗體或如申請專利範圍第13項之組合物在容許該抗個體遺傳型抗體與該抗PDL1抗體結合之條件下接觸以形成複合體;(b)藉由免疫固定電泳分析該樣品,以比較接觸該抗個體遺傳型抗體之該樣品與尚未接觸該抗個體遺傳型抗體之該樣品;及(c)檢測該生物樣品中該M蛋白之存在。
- 如申請專利範圍第40項之方法,其中步驟(b)使得該抗PD-L1抗體及該抗個體遺傳型抗體之複合體與該M蛋白分離。
- 如申請專利範圍第40項至第41項中任一項之方法,其中在步驟(c)之前,該方法進一步包含,藉由確定M蛋白之遷移是否受該抗個體遺傳型抗體之添加影響,以確定泳帶是否係M蛋白的步驟。
- 如申請專利範圍第39項至第41項中任一項之方法,其中該生物樣品係血液、尿液或血清。
- 一種監測抗PD-L1抗體治療在受試者中之有效性的方法,其包含:(a)使生物樣品與如申請專利範圍第1項至第12項中任一項之抗個體遺傳型抗體或如申請專利範圍第13項之組合物在容許該抗個體遺傳型抗體與該抗PD-L1抗體結合之條件下接觸以形成複合體;其中該生物樣品係來自該受試者,且其中該受試者患有多發性骨髓瘤且已經該抗PD-L1抗體治療;(b)藉由免疫固定電泳分析該樣品,以比較接觸該抗個體遺傳型抗體之該樣品與尚未接觸該抗個體遺傳型抗體之該樣品;(c)檢測該生物樣品中該抗PD-L1抗體之存在,其中接觸該抗個體遺傳型抗體之該樣品與尚未接觸該抗個體遺傳型抗體之該樣品之間之遷移差異指示該生物樣品中存在該抗PD-L1抗體;及(d)檢測該生物樣品中該M蛋白之含量;其中該生物樣品中該M蛋白之含量指示該抗PD-L1抗體治療之有效性。
- 如申請專利範圍第44項之方法,其中步驟(b)使得該抗PD-L1抗體及該抗個體遺傳型抗體之複合體與該M蛋白分離。
- 如申請專利範圍第44項至第45項中任一項之方法,其中在步驟(d)之前,該方法進一步包含,藉由確定M蛋白之遷移是否受該抗個體遺傳型抗體之添加影響,以確定泳帶是否係M蛋白的步驟。
- 如申請專利範圍第44項至第45項中任一項之方法,其中該生物樣品係血液、尿液或血清。
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US5959177A (en) | 1989-10-27 | 1999-09-28 | The Scripps Research Institute | Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies |
ATE164395T1 (de) | 1990-12-03 | 1998-04-15 | Genentech Inc | Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften |
WO1993006217A1 (en) | 1991-09-19 | 1993-04-01 | Genentech, Inc. | EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab')2 ANTIBODIES |
US6020208A (en) | 1994-05-27 | 2000-02-01 | Baylor College Of Medicine | Systems for surface-enhanced affinity capture for desorption and detection of analytes |
US5789199A (en) | 1994-11-03 | 1998-08-04 | Genentech, Inc. | Process for bacterial production of polypeptides |
US5840523A (en) | 1995-03-01 | 1998-11-24 | Genetech, Inc. | Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides |
NZ516848A (en) | 1997-06-20 | 2004-03-26 | Ciphergen Biosystems Inc | Retentate chromatography apparatus with applications in biology and medicine |
US6040498A (en) | 1998-08-11 | 2000-03-21 | North Caroline State University | Genetically engineered duckweed |
US7125978B1 (en) | 1999-10-04 | 2006-10-24 | Medicago Inc. | Promoter for regulating expression of foreign genes |
ATE303445T1 (de) | 1999-10-04 | 2005-09-15 | Medicago Inc | Verfahren zur regulation der transkription von fremden genen in gegenwart von stickstoff |
EP1363714B1 (en) | 2001-02-20 | 2012-10-10 | Advion BioSystems, Inc. | A microchip electrospray device and column with affinity adsorbents and use of the same |
KR20210060670A (ko) * | 2008-12-09 | 2021-05-26 | 제넨테크, 인크. | 항-pd-l1 항체 및 t 세포 기능을 향상시키기 위한 그의 용도 |
KR101970025B1 (ko) * | 2011-04-20 | 2019-04-17 | 메디뮨 엘엘씨 | B7-h1 및 pd-1과 결합하는 항체 및 다른 분자들 |
RU2014143251A (ru) * | 2012-03-28 | 2016-05-20 | Дженентек, Инк. | Антиидиотипические антитела к hcmv и их применение |
EP4356960A2 (en) | 2013-03-15 | 2024-04-24 | F. Hoffmann-La Roche AG | Biomarkers and methods of treating pd-1 and pd-l1 related conditions |
PT3021869T (pt) | 2013-07-16 | 2020-09-10 | Hoffmann La Roche | Métodos de tratamento do cancro com antagonistas da ligação ao eixo pd-1 e inibidores do tigit |
RU2016128726A (ru) * | 2013-12-17 | 2018-01-23 | Дженентек, Инк. | Способы лечения злокачественных опухолей с использованием антагонистов связывания по оси pd-1 и антитела против cd20 |
TWI680138B (zh) | 2014-01-23 | 2019-12-21 | 美商再生元醫藥公司 | 抗pd-l1之人類抗體 |
PT3294770T (pt) * | 2015-05-12 | 2020-12-04 | Hoffmann La Roche | Métodos terapêuticos e diagnósticos para o cancro |
WO2016205551A2 (en) * | 2015-06-16 | 2016-12-22 | The Regents Of The University Of California | Fzd7 specific antibodies and vaccines to treat cancer and control stem cell function |
WO2016205566A1 (en) * | 2015-06-16 | 2016-12-22 | The Regents Of The University Of California | Fzd7 specific antibodies and vaccines to treat cancer and control stem cell function |
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